CN101289460B - 有机硼酸类化合物及其作为荧光探针的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及有机硼酸类化合物及其作为荧光探针的应用。它具有通式(I)：该化合物对肿瘤细胞表面特异性寡糖唾液酸化Lewis A和唾液酸化Lewis X体现出显著的选择性，可用于该类肿瘤诊断试剂的开发。本发明还涉及该化合物药学上可接受的盐以及溶剂合物。本发明还涉该化合物的药物组合物及其制药用途。

Description

有机硼酸类化合物及其作为荧光探针的应用

技术领域

本发明涉及一种有机硼酸类荧光探针化合物，特别是一种具有PBAQA结构的有机硼酸类荧光探针化合物及其应用。

背景技术

1、糖类肿瘤标志物

癌症是当今死亡率最高的疾病之一，其早期诊断和干预是决定能否战胜癌症的一个重要因素。在恶性肿瘤细胞中可发生多种类型的糖基改变。已发现常见的糖链结构的变化有：某些结构的表达丧失或表达过度，不完全的或截短的结构的持续表达，前体的堆积，以及较少见的出现新的结构。

肿瘤标志物(tumor marker)是肿瘤侵袭和转移过程中产生的，可以反映肿瘤自身存在的化学物质。这些物质存在于肿瘤细胞的细胞核、细胞质和细胞膜上或分泌在体液中；不存在于正常成人组织而见于胚胎组织中，或在肿瘤组织中其含量超过正常含量，它们的存在或含量的变化可以提示肿瘤的性质并有助于了解肿瘤组织起源和细胞分化，从而可以帮助肿瘤的病理诊断、组织学分类、判断预后及指导临床治疗。

20世纪90年代初，人们发现癌细胞表面的唾液酸化路易斯X(sialyl Lewis X，sLex)和唾液酸化路易斯A(sialyl Lewis A，sLea)可作为内皮E-选择素的配基。sLea在下游消化器官，比如结肠、直肠、胰腺和胆管的肿瘤细胞向内皮粘附过程中起显著作用。而sLex决定子显示与胸腺、卵巢及肺的肿瘤细胞粘附过程关系密切。这些细胞的生物学效果立刻增大了癌细胞通过E-选择素向内皮细胞转移的概率，而特异性的糖配体参与了癌细胞的血源性转移过程。原发性肿瘤损伤部位的肿瘤细胞首先侵入血流中，然后随着血流流动。在此期间这些肿瘤细胞与粒细胞及血小板等各类血细胞相互作用，最终粘附于外围血管壁上的内皮细胞上，完成肿瘤转移。细胞粘附过程受内皮细胞上的E-选择素与肿瘤细胞上的唾液酸化Lewis X/A相互作用所介导。

研究发现，正常细胞表面在癌变过程中会发生糖链的改变。细胞表面糖链结构的改变直接与恶性肿瘤的增大、侵袭、转移相关。根据恶性肿瘤细胞表面糖链结构的异常特征进行癌症的诊断，是近十多年来发展的新技术，目前已有多个糖类标志物应用临床。其中唾液酸化路易斯A和唾液酸化路易斯X都是含唾液酸(NeuAc)、半乳糖(Gal)、岩藻糖(Fuc)和乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)的糖类标志物。监测这两种寡糖的表达并联合其它诊断方法，将为胰腺癌、胃癌、结肠癌等转移性恶性肿瘤的早期诊断、手术方式选择、术后治疗及预测提供重要的参考依据。

2、有机硼酸类荧光探针

有机硼酸能够与1，2-二羟基化合物或1，3-二羟基化合物在水溶液中可逆性地共价结合，形成五元或六元环状酯。糖环结构中的顺式邻二羟基与硼酸的结合能力比简单链状邻二羟基化合物(如乙二醇)更强，因此硼酸可以作为糖的识别位点。

化学家在研究苯基硼酸类化合物时发现，硼酸基团易与1，2-二羟基化合物或1，3-二羟基化合物相互作用，在水溶液中形成五元环或六元环的硼酸酯(如上图)。处于糖环结构中的顺式二羟基(cis-diol)与苯基硼酸的结合力更高。这种强烈的相互作用在水溶液中具有可逆性，因此苯基硼酸可以作为糖类化合物理想的识别位点。如果在苯基硼酸的结构中引入荧光团，导致硼酸化合物与糖结合后产生荧光变化，这样的有机硼酸就可以作为识别糖类化合物的荧光探针。由于硼酸类荧光探针与各种糖类化合物的结合能力不同，因此可以应用荧光法测定两者的结合常数，从而准确地研究硼酸类荧光探针对不同糖类化合物的选择性。

3、新一代水溶性荧光探针PBAQA

PBAQA(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-羧酸)是近年发现的新型硼酸类荧光分子探针(参见Yang W，Lin L，Wang B.Heterocycl Commun，2004，8：383～388.)。该探针具有以下特点：1)喹啉(荧光团)不直接与硼酸基团相连；2)结构中有一个游离羧基可与其它官能团反应以完成探针的修饰改造；3)与糖结合后荧光强度改变大。结果发现在生理pH下，所有测验的糖都可以引起显著的荧光强度的改变。在25mM浓度下，果糖引起荧光强度的改变最大，大约25倍。葡萄糖在较高浓度0.2M，引起荧光强度增大最高可达6倍。更重要的是4)PBAQA水溶性好，性状稳定，产生的荧光不受温度、溶剂等外界因素的干扰，是识别糖类化合物的理想工具。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种具有PBAQA结构的有机硼酸类化合物及其作为荧光探针的应用。

本发明的技术方案如下：

具有通式(I)的有机硼酸类化合物，以及其光学异构体、非对映异构体和消旋体混合物，其药学上可接受的盐或溶剂合物：

式中，R₁为天然氨基酸衍生物，C1-12的脂肪链氨基酸，芳香氨基酸，芳基烷基氨基酸， 杂芳基氨基酸，杂芳基烷基胺，烷基二胺，芳基二胺，芳基烷基二胺，杂芳基二胺或氢；

其中，芳基是指芳族碳环基团，优选的芳环含有6-10个碳原子；杂芳基是芳族杂环，可以是单环或双环基团。

式中，L为酰胺基、氨基酰基，亚甲基或氨基；

式中，PA为苯基硼酸，PBAQA，含有卤素、硝基和/或氰基取代基的苯基硼酸，或者含有卤素、硝基和/或氰基取代基的PBAQA。

优选的，所述的有机硼酸化合物(I)具体包括如下化合物：

3-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸

4-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸

3-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)苯基硼酸

4-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)苯基硼酸

3-(2-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)乙酰胺基)苯基硼酸

4-(2-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)乙酰胺基)苯基硼酸

3-(6-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)己酰氨基)苯基硼酸

4-(6-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)己酰氨基)苯基硼酸

3-(3-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)苯甲酰胺)苯基硼酸

4-(3-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)苯甲酰胺)苯基硼酸

3-(12-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)十二酰胺基)苯基硼酸

4，4′-(4，4′-(乙烷-1，2-二基二(氮烷二基))二(氧代甲撑)二(喹啉-4，2-二基))二(4，1-次苯基)二硼酸

4，4′-(4，4′-(己烷-1，2-二基二(氮烷二基))二(氧代甲撑)二(喹啉-4，2-二基))二(4，1-次苯基)二硼酸。

本发明的有机硼酸类化合物的应用，该化合物作为荧光探针，用于肿瘤细胞表面特异性糖或其它糖的检测试剂。

所述的表面特异性糖包括：唾液酸化路易斯X，唾液酸化路易斯A(LewisA)，路易斯X(LewisX)或路易斯Y(LewisY)等。

所述的其它糖包括：果糖，葡萄糖，半乳糖，阿拉伯糖或山梨醇等。

本发明的有机硼酸类化合物与糖结合后能引起荧光强度的改变，可作为新型荧光探针识别肿瘤细胞表面特异性的寡糖。为肿瘤高危人群的筛查、恶性肿瘤的早期诊断、预后观察以及肿瘤复发、转移评价等提供可靠的依据，可用作具有临床应用价值的肿瘤诊断试剂的开发。也可与其它糖结合后引起荧光强度改变，用于这些糖的检测及诊断这些糖相关的疾病。

一种药物组合物，包含(1)上述任一项的化合物，和(2)一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。

此外，本发明还还提供适于口服给予哺乳动物的药物组合物，包含(1)上述任一项的化合物，和(2)药学上可接受载体，任选包含(3)一种或多种药学上可接受的赋形剂。

本发明同样还提供适于胃肠外给予哺乳动物的药物组合物，包含(1))上述任一项的硼酸化合物，和(2)药学上可接受载体，任选包含(3)一种或多种药学上可接受的赋形剂。

发明详述

所用的定义和术语

本文中所用的术语和定义含义如下：

“芳基”是指芳族碳环基团。优选的芳环含有6-10个碳原子。

“杂芳基”是芳族杂环，可以是单环或双环基团。较佳的杂芳基包括，例如噻吩基，呋喃基、吡咯基、吡啶基、吡嗪基、噻唑基、嘧啶基、喹啉基、以及四氮唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、吲哚基等。

“药学上可接受的盐”是指式(I)化合物具有疗效且无毒的盐形式。其可由任一酸性基团(如羧基)形成阴离子盐，或由任一碱性基团(如氨基)形成阳离子盐。本领域已知许多这样的盐。在任何酸性基团(如羧基)上形成的阳离子盐，或是在任何碱性基团(如氨基)上形成的阴离子盐。这些盐由许多式本领域已知的，如阳离子盐包括碱金属(如钠和钾)和碱土金属(如镁和钙)的盐以及有机盐(如铵盐)。还可通过使用相应的酸处理碱性形式的(I)方便地获得阴离子盐，这样的酸包括无机酸如硫酸、硝酸、磷酸等；或有机酸如乙酸、丙酸、羟基乙酸、2-羟基丙酸、2-氧代丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、2-羟基-1，2，3-丙三酸、甲磺酸、乙磺酸、苯甲磺酸、4-甲基苯磺酸、环己基亚磺酸、2-羟基苯甲酸、4-氨基-2-羟基苯甲酸等。这些盐是熟练技术人员熟知的，熟练的技术人员可制备本领域知识所提供的任何盐。此外，熟练技术人员可根据溶解度、稳定性、容易制剂等取某种盐而舍另一种盐。这些盐的测定和最优化在熟练技术人员的经验范围内。

“溶剂合物”是溶质(如PBAQA类荧光探针分子)和溶剂(如水)组合形成的配合物。本发明采用的药学上可接受的溶剂包括不干扰荧光探针的生物活性的那些溶剂，优选水、乙醇、乙酸、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜以及该领域技术人员所知的或容易确定的溶剂。

式(I)化合物还可以其它被保护的形式或衍生物的形式存在，这些形式对本领域技术人员而言是显而易见的，均应该包含于本发明的范围内。

如上所述的取代基自身还可被一个或多个取代基取代。这样的取代基包括在C.Hansch和A.Leo，Substituent Constants for Correlation Analysis in Chemistry and Biology(1979)中列出的那些取代基。优选的取代基包括，例如烷基，烯基，烷氧基，羟基，氧基，硝基，氨基，氨基烷基(如氨甲基等)，氰基，卤，羧基，羰基烷氧基(如羰基乙氧基等)，硫基，芳基，环烷基，杂芳基，杂环烷基(如哌啶基，吗啉基，吡咯基等)，亚氨基，羟烷基，芳基氧基，芳基烷基，及其结合。

合成

方法一：上述通式(I)的有机硼酸类化合物的制备方法，以对溴苯乙酮和靛红为起始原料，首先合成制备2-(4-溴代苯基)喹啉-4-羧酸，在此基础上通过酰胺缩合、点击化学(clickchemistry)反应，形成二溴代中间体化合物，再经钯催化反应转化为目标化合物。

方法二：上述通式(I)的有机硼酸类化合物的制备方法，以对溴苯乙酮和靛红为起始原料，先引入硼酸官能团，再通过一步或数步酰胺缩合、“点击化学”反应合成二硼酸目标化合物。

总之，通过引入不同结构、不同长度的骨架，提高对肿瘤细胞表面特异性糖的亲和力和选择性。具体合成路线根据所要制备的某种具体的化合物结合本领域的现有技术进行设计。

下面以两种PBAQA结构的二硼酸化合物为例，说明部分该类化合物的合成路线及制备方法。

路线1

试剂：a.N-溴代丁二酰亚胺(NBS)，光照；b.叠氮钠，乙腈；c.氢氧化钾，乙醇；d.N，N’-二环己基碳化二亚胺(DCC)，丙炔胺；e.硫酸铜，抗坏血酸钠；f.i)联硼酸频那醇酯，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物，醋酸钾ii)高碘酸钠，醋酸钾，盐酸。

对溴苯乙酮和靛红合成的2-(4-溴代苯基)喹啉-4-羧酸与丙炔胺缩合后，与用间(对)溴甲苯经苄位溴代、叠氮化后的中间体经过“点击化学”反应合成制备二溴代物中间体后，经钯催化反应合成目标化合物。

路线2

试剂：g.溴代苯胺，DDC，1-羟基苯并三唑(HOBt)，4-二甲氨基吡啶(DMAP)；h.i)联硼酸频那醇酯，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物，醋酸钾ii)高碘酸钠，盐酸i.DCC，HOBt，DMAP，三乙醇胺(TEA)，j.氢氧化钠k.溴代苯胺，DCC，HOBt，DMAP，TEA i.i)联硼酸频那醇酯，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物，醋酸钾ii)高碘酸钠，盐酸

本领域技术人员可以对上述步骤进行变动以提高收率，他们可据本领域的基本知识确定合成的路线，如选择反应物，溶剂和温度以避免副反应的发生从而提高收率。

荧光增敏实验及对糖结合选择性实验的方法描述于Yang W，Fang H，Gao X，et al.Chem Biol，2004，11(4)：439～448.；Yang W，Lin L，Wang B，et al.Heterocycl Commun，2004，8：383～388。应用荧光分光光度计检测低浓度寡糖sLea、sLex及常见糖(葡萄糖、果糖等)与目标化合物溶液混合后是否有明显的荧光变化以及变化强度。用荧光法测定初筛有效化合物与寡糖以及常见单糖的结合常数，证实初筛有效化合物对特定寡糖的选择性。

本发明的PBAQA衍生物在空间上与肿瘤细胞表面特异性糖的活性位点相匹配，因此在显示了较高的生物活性。

本发明的PBAQA衍生物可以游离形式或以盐形式存在。本领域熟练人员已知许多化合物类型的药学上可接受的盐及其制备方法。药学上可接受的盐包括常规的无毒性的盐，包括这样的化合物碱与无机或有机酸形成的季铵盐。

本发明的化合物可形成水合物或溶剂合物。本领域熟练人员已知将化合物与水一起冻干时所形成的水合物或在溶液中与合适的有机溶剂浓缩时形成溶剂合物的方法。

本发明包含含有治疗量本发明化合物的药物，和一种或多种药学上可接受载体和/或赋形剂的药物组合物。载体包括如盐水，缓冲盐水，葡萄糖，水，甘油，乙醇和它们的结合物，下文更详细地论述。如果需要，该组合物还可以包含较小量的润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。该组合物可以是液体，悬浮液，乳剂，片剂，丸剂，胶囊，持续释放制剂或粉末。该组合物可以用传统的黏合剂和载体如三酸甘油酯配制成栓剂。口服制剂可以包括标准载体如药物品级的甘露糖醇，乳糖，淀粉，硬脂酸镁，糖精钠，纤维素和碳酸镁等等。视需要制剂而定，配制可以设计混合，制粒和压缩或溶解成分。在另一个途径中，该组合物可以配制成纳米颗粒。

使用的药物载体可以为，例如，固体或者液体。

典型的固体载体包括乳糖，石膏粉，蔗糖，滑石，凝胶，琼脂，果胶，阿拉伯胶，硬脂酸镁，硬脂酸等等。固体载体可以包括一种或多种可能同时作为增香剂，润滑剂，增溶剂，悬浮剂，填料，助流剂，压缩助剂，粘合剂或片剂-崩解剂的物质；它还可以是包封材料。在粉末中，载体为精细粉碎的固体，它与精细粉碎的活性成分的混合。在片剂中，火星成分与具有必要的压缩性质的载体以合适的比例混合，以需要的形状和大小压缩。粉末和片剂优选包含至多99％活性成分。合适的固体载体包括，例如，磷酸钙，硬脂酸镁，滑石，糖，乳糖，糊精，淀粉，凝胶，纤维素，甲基纤维素，羧甲基纤维素钠盐，聚乙烯吡咯烷酮烷酮，低熔点蜡和离子交换树脂。

典型的液体载体包括糖浆，花生油，橄榄油，水，等等。液体载体用于制备溶液，悬浮液，乳剂，糖浆，酊剂和密封的组合物。活性成分可以溶解或悬浮于药学上可接受的液体载体如水，有机溶剂，二者的混合物或药学上可接受的油类或脂肪。液体载体可以包含其他合适的药物添加剂如增溶剂，乳化剂，缓冲剂，防腐剂，增甜剂，增香剂，悬浮剂，增稠剂，颜料，粘度调节剂，稳定形或渗透压-调节剂。用于口服和肠胃外给药的液体载体的合适的例子包括水(部分地包含如同上述的添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠盐溶液)，醇(包括一元醇和多元醇，例如乙二醇)和它们的衍生物，和油类(例如分馏椰子油和花生油)。用于肠胃外给药的载体还可以为油脂如油酸乙酯和异丙基肉豆蔻酸盐。无菌的液体载体用于肠胃外给药的无菌的液态组合物。用于加压组合物的液体载体可以为卤代烃或其他药学上可接受的推进剂。无菌溶液或悬浮溶液液体药物组合物可以用来，例如，静脉内，肌内，腹膜内或皮下注射。注射时可单次推入或逐渐注入，入30分钟的经脉内灌注。该化合物还可以以液体或者固体组合物的形式口服给药。

载体或赋形剂可以包括本领域已知的时间延迟材料，如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，还可包括蜡，乙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，异丁烯酸甲酯等等。当制剂用于口服时，公认PHOSALPG-50(phospholipid与1，2-丙二醇浓缩，A.Nattermann&Cie.GmbH)中的0.01％吐温80用于其他化合物的可接受的口服制剂的配制，可以适应于本发明各种化合物的配制。

给予本发明化合物时可以使用各式各样的药物形式。如果使用固体载体，制剂可以为片剂，被放入硬胶囊中的粉末或小药丸形式或锭剂或糖锭形式。固体载体的量在很大程度上变化，但是优选从约25mg到约1.0g。如果使用液体载体，制剂可以为糖浆，乳剂，软胶囊，在安瓿或小瓶或非水的液体悬浮液中的无菌注射溶液或悬浮液。

为了获得稳定的水溶性的剂型，可以将化合物或其药学上可接受的盐溶于有机或无机酸的水溶液，0.3M琥珀酸或柠檬酸溶液。选择性地，酸性的衍生物可以溶于合适的碱性溶液。如果得不到可溶形式，可将化合物溶于合适的共溶剂或它们的结合。这样的合适的共溶剂的例子包括，但是不局限于，浓度范围从0-60％总体积的乙醇，丙二醇，聚乙二醇300，聚山梨酸酯80，甘油，聚氧乙烯脂肪酸酯，脂肪醇或甘油羟脂肪酸酯等等。

各种释放系统是已知的并且可以用于化合物或其他各种制剂的给药，这些制剂包括片剂，胶囊，可注射的溶液，脂质体中的胶囊，微粒，微胶囊，等等。引入的方法包括但是不局限于皮肤的，皮内，肌内，腹膜内的，静脉内的，皮下的，鼻腔内的，肺的，硬膜外的，眼睛的和(通常优选的)口服途径。化合物可以通过任何方便的或者其它适当的途径给药， 例如通过注入或快速浓注，通过上皮的或粘膜线路(例如，口腔粘膜，直肠和肠粘膜，等等)吸收或通过负载药物的支架以及可以于其他生物活性剂一起给药。可以全身或局部给药。用于鼻，支气管或肺疾病的治疗或预防时，优选的给药途径为口服，鼻给药或支气管烟雾剂或喷雾器。

附图说明

图1是3-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸与不同浓度sLea结合后荧光强度变化；图2是3-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸与不同浓度sLex结合后荧光强度变化；其中，横坐标均为波长，纵坐标均为荧光强度。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。

实施例1：化合物的合成

1)1-溴-3-(溴甲基)苯(2)间溴甲苯(20g，117mmol)，NBS(24.9g，140mmol)混悬于120mL四氯化碳中，光照下回流24小时至反应完全。反应液冷却，滤除反应产生的丁二酰亚胺副产物。滤液浓缩得棕色油状物，乙醇重结晶得苍白色针状结晶。

2)1-(叠氮甲基)-3-溴代苯(3)将间溴溴苄(10g，40mmol)，叠氮钠(5.2g，80mmol)加入60mL乙腈中室温搅拌过夜，TLC监测反应完全。减压蒸出乙腈，反应瓶中加入20mL水，乙酸乙酯萃取。有机相干燥，浓缩得7.7g棕色油状物。产品未经纯化，进入下一步反应。

3)2-(4-溴代苯基)喹啉-4-羧酸(6)对溴苯乙酮(24g，0.12mol)，靛红(15g，0.102mol)放入反应瓶中，然后依次加入乙醇122mL和33％的KOH溶液60mL。搅拌回流8小时后减压蒸出乙醇，用盐酸调溶液pH至3，过滤水洗，冰醋酸重结晶得浅棕色结晶(收率70％)。熔点240～241℃(lit.239～240℃)。

4)2-(4-溴代苯基)-N-(丙-2-炔基)喹啉-4-甲酰胺(7)化合物5(5.0g，15.2mmol)加入20mL氯化亚砜，升温回流3小时，减压蒸除二氯亚砜得黄色固体。将所得固体溶于50mL CH₂Cl₂，在冰浴下滴入炔丙胺(1g，18.1mmol)，搅拌下逐渐升至室温。反应混合物用柠檬酸、碳酸氢钠、饱和食盐水洗，干燥，浓缩。柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯，4∶1)得白色固体2.0g(收率36％)。¹H-NMR(DMSO-d6，ppm)：δ12.34(s，1H)，8.88(d，1H)，7.17(s，2H)，4.53(m，1H)，4.42(s，2H)，3.83(s，6H)，3.71(s，3H)，2.18(dt，2H)，2.11(dt，2H)；ESI-MS m/z[M+1]⁺ 381.3。

5)N-((1-(3-溴代苯基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)-2-(4-溴代苯基)喹啉-4-甲酰胺)(8)

化合物7(1.5g，4.11mmol)，化合物3(1.05g，4.93mmol)，0.16g抗坏血酸钠(0.882mmol)以及CuSO₄·5H₂O(0.3mg，0.0441mmol)加入40mlL DMSO，反应搅拌过夜。加100mL水，乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩。柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯，1∶1)得白色固体粉末。(收率39％)ESI-MS：m/s 576.5/578.6/580.5(M+1)¹H-NMR(CD₃OD)：4.77(s，2H)；5.65(s，2H)；7.31～8.15(14H，m，ArH)ppm。

6)3-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸(9)氮气保护下，化合物8(0.60g，1.04mmol)，联硼酸频那醇酯(0.79g，3.12mmol)，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(85mg，0.104mmol)以及醋酸钾(0.60g， 6.14mmol)加入10mL DMSO，80℃下搅拌反应过夜。反应液用乙酸乙酯萃取，水洗，干燥浓缩后溶于THF/H₂O(4∶1，10mL)，并加入高碘酸钠(1.31g，6.14mmol)，室温搅拌溶解后加入2N HCl(2mL)室温搅拌过夜。反应液用乙酸乙酯萃取(30mL×4)。有机相经水洗，干燥，浓缩。柱层析纯化(MeOH/CH₂Cl₂：1/10)得棕黄色粉末(收率38％)。ESI-MS：m/z 508.4(M+1)IR(KBr，cm^-1)v_NH 3385，v^as _CH 2923，V^s _CH2854，v_C＝O1649 ¹H-NMR(CD₃OD)δ8.09-8.20(m，4H)，8.09(s，1H)，8.06(m，1H)，7.79-7.84(m，3H)，7.57-7.62(m，2H)，7.39-7.41(m，2H)，5.65(s，2H)，4.76(s，2H)。

实施例2.荧光增敏实验

目标化合物在1×10^-5M浓度下溶于0.1M的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)。寡糖浓度溶于0.1M的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)，配制溶液浓度为10μM。60μL待测荧光探针分子溶液与40μL寡糖溶液混合。20分钟后，取80μL混合液转入微量比色池，记录荧光强度改变。空白对照组(不加糖)以相同方法测定。3-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸的实验结果见图1，图2。

实施例3.与糖结合常数测试

目标化合物在0.1M磷酸盐缓冲液(pH＝7.40)中配成1×10^-5M浓度溶液。同时用0.1M磷酸盐缓冲液(pH＝7.40)与测定的糖配成不同浓度溶液。将目标化合物的溶液与不同浓度的糖溶液等体积混合，静置20分钟后，记录荧光强度(I_f)。通过(1/ΔI_f)与(1/C-sugar)作图，计算结合常数K_a。3-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸的实验结果见表一。

表一目标化合物与各种糖的结合常数

Claims (7)

1.一种有机硼酸化合物，其特征在于，该有机硼酸化合物为：

3-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸。

2.权利要求1所述的有机硼酸化合物作为荧光探针应用于肿瘤细胞表面特异性糖或其它糖的检测试剂。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的表面特异性糖包括唾液酸化路易斯X，唾液酸化路易斯A，路易斯X，或路易斯Y。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的其它糖包括果糖，葡萄糖，半乳糖，阿拉伯糖或山梨醇。

5.一种药物组合物，包含(1)权利要求1所述的有机硼酸化合物，和(2)一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。

6.一种适于口服给予哺乳动物的药物组合物，包含(1)权利要求1所述的有机硼酸化合物，和(2)药学上可接受载体，任选包含(3)一种或多种药学上可接受的赋形剂。

7.一种适于胃肠外给予哺乳动物的药物组合物，包含(1)权利要求1所述的有机硼酸化合物，和(2)药学上可接受载体，任选包含(3)一种或多种药学上可接受的赋形剂。

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