CN101244100B

CN101244100B - 一种扁担杆皮的提取物制备方法及其抗肿瘤用途

Info

Publication number: CN101244100B
Application number: CN 200810070691
Authority: CN
Inventors: 刘建群; 吴继梅; 寇晓莉; 洪沁
Original assignee: Jiangxi Institute Of Chinese Medicine
Current assignee: Jiangxi Institute Of Chinese Medicine; Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2008-02-27
Filing date: 2008-02-27
Publication date: 2010-12-15
Anticipated expiration: 2028-02-27
Also published as: CN101244100A

Abstract

本发明公开了一种扁担杆皮的提取物制备方法及其抗肿瘤用途，它将洗净晾干后的扁担杆根皮或茎皮先进行干燥，再粉碎得到粉末，然后在粉末中加入0％～100％的乙醇水溶液，加热回流提取1-3次，合并提取液，浓缩，干燥，得提取物。本发明通过多种实验证实了扁担杆皮的提取物具有明显的抗肿瘤作用。

Description

一种扁担杆皮的提取物制备方法及其抗肿瘤用途

技术领域

本发明涉及天然药物领域，尤其是涉及一种扁担杆皮(根皮和茎皮)的提取物制备方法及其抗肿瘤用途。

技术背景

扁担杆(Grewia biloba G.Don)为椴树科(Tiliaceae)扁担杆属(Grewia)植物，该属植物全世界约有150种，为灌木或小乔木。据中国植物志记载我国有27种和1存疑种，主要分布于云南、广西、广东和江西等省。在非洲和亚洲一些国家地区，部分扁担杆属植物被作为民间草药使用，多具有抗菌消炎作用。如南非的Grewia occidentalis和巴基斯坦的Grewia erythraea在民间作为传统草药治疗伤口细菌感染(D.S.Grierson，A.J.Afolayan.Antibacterialactivity of some indigenous plants used for the treatment of wounds inthe Eastern Cape，South Africa.Journal of Ethnopharmacology.1999，66(1)：103-106；Mudassir A.Zaidi，Sidney A.Crow.Biologically activetraditional medicinal herbs from Balochistan，Pakistan.Journal ofEthnopharmacology.2005，96(1)：331-334)。Grewia bicolor在苏丹作为传统草药治疗皮肤脓胞疮，还有镇静作用(M.W.Jaspers，A.K.Bashir，J.H.Zwaving.Investigation of Grewia bicolor juss. Journal ofEthnopharmacology.1986，17(3)：205-211)。《新修本草》记载小花扁担杆枝叶煮汁可治小儿蛔虫病，《开宝本草》称其可“主三虫，下气消谷”(唐慎微.重修政和经史证类备急本草.北京：人民卫生出版社，1975，354)，《中药大辞典》记载其全株和枝叶能祛风除湿，理气消痞，可治小儿因虫疳积，大人气痞，脾虚食少，妇女崩带，风湿(江苏新医学院编，中药大辞典.科技出版社出版，1986，1747)。我国部分地区民间亦用扁担杆的根皮治疗皮肤脓胞疮等细菌感染。但未见有扁担杆根皮和茎皮的水—乙醇提取物抗肿瘤作用报道。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种扁担杆皮的提取物的制备方法。

本发明的第二个目的是提供扁担杆皮的提取物的新用途，即扁担杆皮的提取物在制备抗肿瘤药中的应用。

本发明的第一个目的是这样实现的：将洗净晾干后的扁担杆根皮或茎皮先进行干燥，再粉碎得到粉末，然后在粉末中加入0％～100％的乙醇水溶液，加热回流提取1-3次，合并提取液，浓缩，干燥，得提取物。

扁担杆皮的提取物可直接药用，也可通过加入药用辅料制成片剂、胶囊、口服液、软膏、注射剂或乳剂等合适剂型使用。

本发明的第二个目的是这样实现的：扁担杆皮的提取物在制备抗肿瘤药中的应用，抗肿瘤药包括抗宫颈癌、肉瘤、白血病、皮肤癌、胃癌、肺癌、肝癌、食管癌和乳腺癌药。

下面是扁担杆根皮和茎皮的提取物(GE)抗肿瘤作用的药理学实验和数据：

1.扁担杆根皮的乙醇水溶液(0％～100％)提取物GE(0％～100％)对小鼠宫颈癌U14和小鼠S180肉瘤的影响

按无菌操作程序，从接种后7～9d肿瘤生长及动物健康程度较好的瘤源动物中抽取腹水，用生理盐水稀释成2.5～3×10⁷/ml瘤细胞悬液。取昆明种小鼠50只(宫颈癌U14实验小鼠为雌性；S180肉瘤实验小鼠雌雄各半)，体重20g±2g，于每只小鼠右腋皮下接种0.2ml。随机分成生理盐水(NS)组、环磷酰胺(CTX)组、高中低剂量给药组，每组各10只。接种24h后开始灌胃给药，NS组给予0.2ml生理盐水、CTX组给予CTX 25mg/kg，给药组给予提取物100、250、500mg/kg，每天1次，连续10天。于末次给药24h后处死动物，称体重，完整剥离瘤块，用滤纸吸干后称重，求抑瘤率。统计方法采用方差分析。

抑瘤率(％)＝(NS组平均瘤重-实验组平均瘤重)/NS组平均瘤重×100％

表1扁担杆根皮的乙醇水溶液(0％～100％)提取物GE(0％～100％)对小鼠宫颈癌U14和小鼠S180肉瘤的抑制作用(μ±s，n＝10)

组别	剂量(mg/kg.d)	瘤重(g)		抑瘤率
						U14	S180	U14	S180
		NS	-	1.207±0.413	1.549±0.498					-	-
CTX	25					0.574±0.173	0.722±0.238	52.44％	53.39％
		GE(0％)	100	0.854±0.236	1.224±0.412					29.25％	20.98％
250	0.729±0.240					0.987±0.282	39.60％	36.28％
			500	0.552±0.238	0.802±0.258				54.27％	48.22％
GE(10％)	100					0.825±0.312	1.302±0.510	31.65％			15.94％
		250	0.739±0.216	1.034±0.307	38.77％				33.25％
	500					0.601±0.228	0.853±0.306	50.21％		44.93％
		GE(30％)	100	0.884±0.219	1.339±0.487				26.76％		13.56％
250	0.802±0.234					1.204±0.376	33.55％	22.27％
			500	0.658±0.187	0.905±0.289				45.48％	41.57％
GE(50％)	100					0.868±0.321	1.303±0.458	28.09％			15.88％
		250	0.792±0.278	1.189±0.342	34.38％				23.24％
	500					0.632±0.156	0.918±0.256	47.64％		40.74％
		GE(70％)	100	0.889±0.247	1.287±0.356				26.35％		16.91％
250	0.810±0.303					1.125±0.360	32.89％	27.37％
			500	0.659±0.136	0.903±0.198				45.40％	41.70％
GE(90％)	100					0.909±0.257	1.152±0.383	24.69％			25.63％
		250	0.785±0.229	0.958±0.313	34.96％				38.15％
	500					0.687±0.223	0.823±0.327	43.08％		46.87％

GE(100％)	100	0.920±0.231	1.101±0.364	23.78％	28.92％
						250	0.801±0.243	0.962±0.287	33.64％	37.90％
	500	0.696±0.301	0.819±0.289	42.34％	47.13％

注：给药组瘤重与NS组比P＜0.01

由表1可以看出，扁担杆根皮的不同浓度乙醇提取物(GE)以剂量依赖方式抑制小鼠宫颈癌U14和S180肉瘤实体瘤的瘤重，抑瘤率均超过30％，即有明显的抗肿瘤作用。

2.扁担杆根皮的乙醇水溶液(0％～100％)提取物GE(0％～100％)对人肿瘤细胞生长的抑制作用

细胞株：人早幼粒白血病细胞HL-60，人表皮鳞癌细胞A431，人低分化胃癌细胞BGC-823，人肺癌细胞A549，人肝癌细胞SMMC-7721，人食管癌细胞Eca109，人宫颈癌细胞Hela，人乳腺癌细胞MCF-7。

药物及配制：提取物GE采用培养液配制，实验终浓度为1、3、10、30和100μg/ml；阳性对照药5-氟尿嘧啶(5Fu)采用培养液配制；阴性对照为培养液。

实验方法：采用MTT法对所选的8种细胞株进行实验。取处于对数生长期、状态良好的肿瘤细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1640培养液将细胞浓度调整为2×10⁵/ml，接种于96孔板中，加入各相应浓度药物，于37℃，5％CO2培养箱中培养，各种药物每浓度设6个平行孔。培养48小时后，每孔加入MTT溶液10μl，使其终浓度为5mg/ml。继续培养4小时后，吸去各孔中上清液，加入DMSO 200μl，平板摇床上震摇5分钟，用酶联免疫检测仪在570nm波长下测定各孔的吸光值。按下式计算细胞生长的抑制率：细胞生长抑制率(％)＝(对照组吸光值-实验组吸光值)/对照组吸光值×100％；并用回归法求出受试药物对各种肿瘤细胞的半数杀伤浓度(IC₅₀)。

实验结果：根皮提取物GE对以上8个肿瘤细胞株的半数杀伤浓度(IC₅₀)均小于20μg/ml，特别是对人早幼粒白血病细胞HL-60抑制作用优于阳性对照5-氟尿嘧啶(见表)，说明GE均有明显的抗肿瘤作用。

表2受试药物对8个肿瘤细胞株的半数杀伤浓度(IC₅₀)

细胞株	IC₅₀(μg/ml)
									GE(0％)	GE(10％)	GE(30％)	GE(50％)	GE(70％)	GE(90％)	GE(100％)	5Fu
	HL-60	0.053	0.047	0.068	0.039	0.042	0.041	0.12									0.87
A431									7.35	7.18	9.22	9.56	12.12	12.36	14.78	2.35
	BGC-823	12.76	13.45	17.87	18.12	17.09	18.17	19.04									2.10
A549									14.28	14.69	12.07	14.34	15.09	17.98	15.34	5.38
	SMMC-7721	7.97	9.18	11.38	8.27	9.65	9.76	12.47									1.98
Eca 109									5.08	5.15	11.83	8.27	12.84	15.04	14.57	12.03
	Hela	4.64	4.83	4.09	7.54	7.70	7.89	9.45									3.86
MCF-7									11.97	12.07	12.58	10.06	15.39	19.52	19.02	5.13

高效液相色谱和抗肿瘤实验研究还表明：扁担杆茎皮不同浓度乙醇水溶液提取物与相对应的根皮提取物的化学成分和抗肿瘤效果基本一致。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但应理解本发明的范围非仅限于这些实施例的范围。

实施例1：

扁担杆根皮提取物的制备：

将洗净晾干后的扁担杆根皮1kg先进行干燥，再粉碎得到粉末，然后用水或不同浓度的乙醇水溶液(见表3)将粉末在室温下浸泡12h后，加热回流提取3次，每次2h，滤过，合并滤液，减压蒸干得扁担杆根皮提取物干膏(GE)，产量见表3。

表3扁担杆根皮不同浓度乙醇水溶液提取物产量

乙醇水溶液浓度(％)	0	10	30	50	70	90	100
								GE(根皮)(g)	110	120	140	160	150	91	80

实施例2：

扁担杆茎皮提取物的制备：

将洗净晾干后的扁担杆茎皮1kg先进行干燥，再粉碎得到粉末，然后用水或不同浓度的乙醇水溶液(见表4)将粉末在室温下浸泡12h后加热回流提取3次，每次2h，滤过，合并滤液，减压蒸干得扁担杆茎皮提取物干膏(GE)，产量见表4。

表4扁担杆茎皮不同浓度乙醇水溶液提取物产量

乙醇水溶液浓度(％)	0	10	30	50	70	90	100
								GE(茎皮)(g)	101	108	125	146	135	84	73

实施例3：

用本技术领域公知的方法，以扁担杆根皮提取物干膏(GE)为原料，制成抗宫颈癌乳剂。

实施例4：

用本技术领域公知的方法，以扁担杆茎皮提取物干膏(GE)为原料，制成抗乳腺癌片。

实施例5：

用本技术领域公知的方法，以扁担杆茎皮提取物干膏(GE)为原料，制成抗食管癌注射液。

实施例6：

用本技术领域公知的方法，以扁担杆根皮提取物干膏(GE)为原料，制成抗白血病胶囊。

实施例7：

用本技术领域公知的方法，以扁担杆根皮提取物干膏(GE)为原料，制成抗胃癌口服液。

实施例8：

用本技术领域公知的方法，以扁担杆根皮提取物干膏(GE)为原料，制成抗皮肤癌软膏。

实施例9：

用本技术领域公知的方法，以扁担杆茎皮提取物干膏(GE)为原料，制成抗肝癌胶囊。

实施例10：

用本技术领域公知的方法，以扁担杆根皮提取物干膏(GE)为原料，制成抗肺癌口服液。

Claims

1.扁担杆皮的0％～100％的乙醇水溶液提取物在制备抗肿瘤药中的应用。

2.如权利要求2所述的扁担杆皮提取物在制备抗肿瘤药中的应用，其特征在于：抗肿瘤药包括抗宫颈癌、肉瘤、白血病、皮肤癌、胃癌、肺癌、肝癌、食管癌和乳腺癌药。