CN101215538B - 一株地衣芽孢杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株地衣芽孢杆菌及其应用。该地衣芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277。本发明的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BL57可利用含纤维素的工农业废弃物为原料，如植物秸秆、叶片、其它农业废弃组织、酒糟等，将这些原料其中的纤维素转化为还原糖，大大提高了废弃物的利用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一株地衣芽孢杆菌及其应用。
背景技术
纤维素、半纤维素和木质素等植物纤维类物质，普遍存在于植物当中，由于它们本身的特性，如果作为饲料，其被吸收利用的比率非常低，因此常被当作垃圾而遭废弃。
仅拿一年生禾本科玉蜀黍属植物玉米为例，该作物的生命力非常顽强，除极端沙土和黏土外，均可栽培。调查表明，每生产100公斤的玉米，会产生17.5公斤的玉米耳(玉米包皮)及玉米须，100公斤的玉米秆和41公斤的玉米芯。计算可知，玉米秆和玉米芯等副产品的总量为主产量的158.5％，是相当惊人的一个数字。但一般情况下，由于玉米秆和玉米芯的成分很难被利用，因此它们往往被当作了废弃物，其价值仅为主产物的3.4％。
目前，由于玉米与黄豆等粮食产品的价格不断提高，有人提出，将一些富含纤维素的植物加工副产品添加到动物饲料当中。但是，其效果并不理想。因为，在饲料中直接添加富含纤维素的植物加工副产品，虽然饲料的成本可以得到降低，但由于动物对这些植物加工副产品的消化利用率较低，致使饲养成本并没有得到相应的同步降低，其直接导致的后果就是幼小动物育成率下降，肥育期禽畜的增肥效果较差，因此使用量受到了很大限制。当前仅少部分用于与苜蓿混合在一起，制成块，供给牛、羊、马等牲畜食用。
世界能源短缺使应用酵母菌或其它特殊微生物将高淀粉谷物转化成酒精等来提供能源的技术方案应运而生，相应的，其带来的副产品怎样加以利用也成为了刻不容缓需要解决的问题。对于盛产玉米、高粱、水稻、小麦、大麦、树薯的国家来说，富含植物纤维的副产品非常繁多，如稻秆、玉米秆、高粱秸秆、麦秆及林业加工厂的木屑等废弃物，其原料成本较低，且不受粮食供应及价格影响，具有非常大的开发价值。
如何提高高纤维谷物-玉米秸秆等废弃物的利用价值将是未来的一大商机，而提高植物纤维的消化率，首先要将其转化成寡糖或单糖。
微生物是自然界分解植物纤维素的酶最大的来源，目前工业用酶生产所用的材料一般均来自微生物。
发明内容
本发明的目的是一株地衣芽孢杆菌及其应用。
本发明所提供的地衣芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277。
所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277为会产生芽胞之革兰氏阳性杆菌，菌落大小6-8mm，菌落形状不规则，白色，最适合生长之条件：温度为45℃、pH 6.5。该菌株为环境微生物。
所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277，已于2007年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管委理员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市海淀区中关村北一条13号)，保藏号为CGMCC №.2277。
本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57可发酵产生高效力之纤维素水解酶、蛋白酶、淀粉酶，在小型的发酵试验中已收取良好成效。该菌株产生的纤维素水解酶具有在高温下稳定的特性，符合目前工业生产的使用条件。
本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57可利用含纤维素的工农业废弃物为原料，如植物秸秆、叶片、其它农业废弃组织、酒糟等，将这些原料其中的纤维素转化为还原糖，大大提高了废弃物的利用价值。
本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57由于可产生纤维素水解酶、蛋白酶、淀粉酶，因此也可以利用该菌株发酵生产纤维素水解酶、蛋白酶、淀粉酶，在工业生产上具有很高的价值。
附图说明
图1为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57各个温度培养18小时后的OD590值
图2为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57各个pH值培养18小时后的OD590值
图3为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57发酵液的不同pH值的羧甲基纤维素酶活性
图4为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57的纤维素分解酶活性菌落检测结果照片
图5为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57的蛋白酶活性菌落检测法照片
图6为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57淀粉分解酶活性菌落检测结果照片
具体实施方式
下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。
下述实施例中的百分含量，如无特别说明，均为质量百分含量。
实施例1、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277的获得及其培养条件检测
1、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277的筛选与鉴定
1)地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277的获得
自台湾省台中县土壤样本三处不同位置各取一克土壤，分别加入10mlTrypticaseTM Soy Broth(TSB培养液)(每升含有胰蛋白胨(Tryptose)20.0g，葡萄糖(Dextrose)1.0g，磷酸氢二钠(Disodium Phosphate)2.0g，硝酸钾(PotassiumNitrate)1.0g)中震荡混合均匀后，分别用Mandels-Reese培养基(每升含有蛋白胨(Peptone)1.0g，羧甲基纤维素(CMC，Carboxymethyl cellulose)10.0g，(NH4)2SO41.4g，Urea 0.3g，K2HPO4 2.0g，CaCl2.H2O 0.4g，MgSO4.7H2O 0.3g，FeSO4.7H2O 5.0mg，MnSO4.H2O 1.6mg，ZnSO4.7H2O 1.4mg，CoCl2.7H2O 2.0mg，将pH调至7.0，固态培养基则加入1.5％Agar)进行10倍梯度稀释至10-10分别分装入4支稀释管中，将每个梯度稀释液分别培养于30℃、40℃、50℃不同温度培养24小时，进行具有纤维酶活性菌的初步增菌筛选。再自各稀释管取100μl至TSA(Tryptic soy agar，Difco，Sparks，U.S.A.)平板上，并以L型玻棒涂抹均匀，同样分别置回30℃、40℃、50℃培养24小时后，再以随机选取方式挑取单一菌落至一新的TSA上，并以三步法划开，重复纯化继代三次以后，于40℃平板上获得一株具有纤维酶活性和蛋白酶活性的菌株，将其命名为BL57。
2)菌种生化鉴定
观察BL57纯化的菌落外观型态，并进行革兰氏及芽胞染色，确认细菌染色形态。结果表明，菌落外观型态，革兰氏及芽胞染色，确认细菌染色形态的结果如表1所示。
将步骤1)筛选并纯化得到的BL57菌接种于BUGM培养基中培养18～24小时，装18～20ml灭菌的生理食盐水至透明玻璃管，放入浊度计(Turbidimeter，Biolog，Hayward，California，U.S.A.)内，将O.D.值调到100％，放入浊度标准管(turbiditystandards high and low limits，Biolog，Hayward，California，U.S.A.)，革兰氏阳性菌范围在35％～42％，菌量约为4.5×108/ml。接着使用灭菌棉花棒自培养基上钓取菌落，再涂于玻璃管壁上，务必使O.D.值介于高值至低值(35％～42％)之间，完成后倒入干净的培养皿内，利用八管吸取器(8Channel Pipetman，Biolog，Hayward，California，U.S.A.)吸取菌液，注意必须将第一次吸取量放回培养皿，定量(150μl)放入BiologMicroPlate(Biolog，Hayward，California，U.S.A.)内，以上之动作必须在10分钟内完成，将完成之Biolog MicroPlate放入培养箱内，作用4、6、16～24小时后，透过对95种三碳糖、胺基酸或脂肪酸的代谢性，放入Biolog MicroStation机器自动判读代谢结果。其结果如表1所示。
表1.BL57及地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)MTCC429之生化性状比较
| BL57 | MTCC429* | BL57 | MTCC429* | ||
| 菌落大小(mm) | 6-8 | 5-7 | 代谢物质 | ||
| 菌落形状 | 不规则 | 不规则 | 植物蜜糖 | + | - |
| 颜色 | 白 | 白 | 山梨糖醇 | + | - |
| 革兰氏染色 | + | + | 海藻糖 | (+) | - |
| 培养时扩散 | - | ND | 麦芽糖 | + | + |
| 硝酸盐还原 | + | ND | 熊果叶素 | - | ND |
| 过氧化氢酵素 | + | + | 龙胆乙醣 | + | ND |
| 生长 | 葡萄糖 | + | + |
| BL57 | MTCC429* | BL57 | MTCC429* | ||
| 50℃ | + | - | 半乳糖 | - | ND |
| 5％NaCl | + | + | 乳糖 | - | ND |
| 代谢物质 | 蔗糖 | + | ND | ||
| 糊精 | (+) | ND | 柳醇 | + | ND |
| 肝醣 | (+) | ND | 木糖 | - | ND |
| 乙酰胺基葡萄糖 | - | + | 苹果酸 | - | ND |
| 阿拉伯胶糖 | - | - | 甘油 | - | ND |
| 纤维双糖 | (+) | + | 丙胺酸 | - | - |
| 菊糖 | - | - | 丝胺酸 | - | ND |
表1中，-：阴性；+：阳性；(+)：弱阳性；ND：未鉴定；
*资料来源：Shivaji S，Chaturvedi P，Suresh K，Reddy GS，Dutt CB，Wainwright M，Narlikar JV，Bhargava PM.Bacillus aerius sp.nov.，Bacillus aerophilus sp.nov.，Bacillusstratosphericus sp.nov.and Bacillus altitudinis sp.nov.，isolated from cryogenic tubes used forcollecting air samples from high altitudes.International Journal of Systematic and EvolutionaryMicrobiology(2006)，56，1465-1473.
3)菌种基因型分析鉴定-依据已知细菌的16S rDNA序列保留性区域设计四个引物，正向引物27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’、530F：
5’-GTGCCAGCAGCCGCGG-3’；反向引物907R：
5’-CCGTCAATTCCTTTGAGTTT-3’、1492R：
5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’。并分别标定700及800nm红外线吸收波长之染剂(IRD700标定引物27F、530F，IRD800标定907R、1492R)。PCR扩增以27F及1492R引物，测序以530F及907R引物，反应采用SequiTherm ExcelTM II DNAsequencing Kit(Epicentre Technologies，Madison，Wisconsin，U.S.A.)及Perkin-ElmerkGeneAmp 9600PCR system。测序条件为先92℃ 2分钟后，然后92℃ 30秒、55℃ 15秒、70℃ 15秒共30个循环，最后4℃保存；反应结束后于各微量离心管分别加入3μl Stop solution，置于92℃加热3分钟，测序产物以5.5％KB plus gel(LI-COR，Inc.，Lincoln，Nebraska，U.S.A.)及LI-COR测序系统(LI-COR，Inc.，Lincoln，Nebraska，U.S.A.)进行分析。利用Base ImageIR(LI-COR，Inc.，Lincoln，Nebraska，U.S.A.)软件撷取电泳之序列，将数据送入GeneBase(Applied Maths，Belgium)进行排列，构筑得到BL57菌株完整16S rDNA序列，该16S rDNA序列具有序列表中序列1的核苷酸序列，将BL57菌株完整16S rDNA序列与GenBank进行菌种比对，比对结果与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis ATCC14580)(GENBANK号为CP000002.3)有100％相似性，将序列比对的结果结合上述形态和生理生化特征，表明BL57菌株属于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，即地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57。
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57，已于2007年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管委理员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市海淀区中关村北一条13号)，保藏号为CGMCC №.2277。
2、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277的最适生长温度的测定
将步骤1获得的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277，按照106cfu/L的浓度接种于TSB培养液中，分成五份，分别置于30℃、40℃、45℃、50℃、60℃条件下，摇培，取菌液测定测OD590(以TSB培养液为空白对照)，确定菌种之最适生长温度。
结果表明，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277最适生长温度为45℃。各培养温度条件下培养18小时后的OD590值如图1所示，说明地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277在45℃增值效果最好。
3、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277的最适生长pH值的测定
将步骤1获得的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277，按照106cfu/L的浓度接种于TSB培养液中，分成5组，分别调节pH值为6、6.5、7、7.5、8，然后置于45℃摇培，摇培过程中每隔30分钟取菌液测定测OD590(以TSB为空白对照)，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277的各培养pH值条件下培养18小时后的OD590值如图2所示，结果表明，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277在pH值为6.5条件下增值效果最好。
实施例2、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277的产生的酶活性检测
1、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277的羧甲基纤维素酶活性鉴定，及其酶作用最适pH值确认
1)地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277产生的酶液样本的制备
将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277按照109cfu/L的接种量接种于Mendels-Reese培养液中，于45℃培养24小时后，将培养得到的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277发酵菌液于4℃12,000rpm离心10分钟后，将上清用滤径为0.45μm过滤膜过滤，得到酶液(发酵液上清液)，保存于-20℃。
2)地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277产生的酶液的羧甲基纤维素酶鉴定，及其酶作用最适pH值的确认
将18ml Mandels-Reese培养基分别调整pH值至试验条件(pH5.5、pH6.0、pH6.5、pH7.0、pH7.5、pH8.0或pH8.5)后，与2ml上述步骤1)得到的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BL57酶液混合均匀后，在酶最适温度45℃培养1小时后，以DNS还原糖测定法测定糖生成量，并以葡萄糖制备标准曲线进行比对。纤维素酶相对活性计算，以最高活性pH6.5之活性量为100％进行换算比较。
结果如图3所示，结果表明，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57的发酵液在pH 6-8均有良好的羧甲基纤维素酶活性，但以pH 6.5为最佳。
2、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277的纤维素分解酶活性检测
将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277菌分别以穿刺针接种TSA平板中间，分别在培养基表面平铺3.5ml含质量百分含量为1％的羧甲基纤维素(CMC)和质量百分含量为0.7％的琼脂糖的培养基(用于检测葡聚糖内切酶活性)，将培养皿放在45℃隔夜(约18-24小时)培养。在培养后的培养基表面分别加10～15ml的质量百分浓度为0.1％刚果红溶液。作用约10～15分钟后，倒去多余的溶液，以10～15ml之1MNaCl冲洗两次。在红色背景中，有葡聚糖内切酶活性(即培养基中的纤维素被降解)的菌落周围会呈现白色或粉红色。上述实验重复三次。
结果表明在含有铺入含质量百分含量为1％的羧甲基纤维素和质量百分含量为0.7％的琼脂糖的培养基的平板的菌落周围呈现淡粉红(结果如图4所示)，结果表明地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57对羧甲基纤维素具有水解作用，即具有内切型纤维素分解酶。
3、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277的蛋白水解酶活性检测
蛋白水解酶活性检测采用蛋白水解的菌落检测法，以含脱脂乳(skin milk)基质的培养基，检测菌种蛋白酶(proteinase)活性，具体方法如下所述：
配置含质量百分含量为1.5％脱脂乳(基质)和质量百分含量为1％的琼脂粉的培养基，倒在培养皿中，制成平板。
将20μl地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277菌液接种在上述制备的平板中间，并将培养皿放在45℃做隔夜(约18-24小时)培养。在平板乳白色背景中，有酶活性的菌落周围会呈现透明的水解圈，透过比对透明水解圈的大小，可知其活性差异。
结果如图5所示，结果表明，在上述菌落检测法中则可发现地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277蛋白酶活性很强，隔夜培养即可水解1/2以上含脱脂乳基质的培养基(图5)。图5中，透明处为酶水解圈。
4、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277的淀粉酶活性检测
将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277接种到含有质量百分含量为1％的淀粉和质量百分含量为1％的琼脂粉的培养基平板上，培养隔夜(约18-24小时)后，用质量百分浓度为1％的碘溶液进行染色后，淀粉被染成棕黑色，如果菌落产生淀粉酶，菌落周围的淀粉即被降解，而不能被染色。
结果如图6所示，结果表明地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC№.2277接种到含有淀粉基质的培养基培养隔夜后，以碘溶液进行染色后，在淀粉未分解的棕黑色背景中，可见一个淡黄透明之酶黄色水解圈，表明地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277有很强的淀粉酶活性。
实施例3、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277在利用含植物纤维的原料生产饲料中的应用
本实施例利用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277，以葵花盘粉、麦杆、绿豆杆粉、谷子杆粉、向日葵杆粉、玉米芯粉、玉米杆或酒糟为原料，进行发酵生产饲料，具体方法如下所述：
用500ml烧杯装原料，分别秤10g葵花盘粉、麦杆、绿豆杆粉、谷子杆粉、向日葵杆粉、玉米芯粉、玉米杆或酒糟为原料，分别向各个烧杯中加入106cfu/g原料的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL57CGMCC №.2277，并加入50ml去离子水，混合均匀后，调节pH值为6.5，静置于45℃恒温箱，发酵24小时。
将发酵后的葵花盘粉、麦杆、绿豆杆粉、谷子杆粉、向日葵杆粉、玉米芯粉、玉米杆或酒糟平铺在不锈钢盘上，厚度愈薄愈好，置60℃烘箱吹风烘干，至水分含量为8％以下。用电动粉碎机粉碎即为饲料的原料，可用于猪鸡牛羊全价料中取代玉米粉(淀粉)原料。
发酵前后，分别按照下述方法测定原料发酵前后成分：
(1)粗蛋白含量的分析
将样品粉末精称0.5克，放入分解管中，并加入15ml浓硫酸(8mol/L)及1颗催化剂(Kjeltab catalyst)，以粗蛋白测定仪(B-435，Büchi，Switzerland)加热消化分解2小时，至溶液澄清为止。冷却后，加入50ml蒸馏水，以粗蛋白蒸馏装置(B-316，Büchi，Switzerland)蒸馏消化液，并以50ml的质量百分浓度为4％硼酸溶液加入2滴混合指示剂(methyl red∶methyl blue＝3∶2)做为接收液，蒸馏时间为5分钟，再以0.1mol/L HCl溶液滴定接收液，当颜色由翠绿色变为淡粉红色时即为滴定终点。纪录HCl溶液滴定量，并以下面公式计算粗蛋白含量(％)。实验重复性：每个试样取两平行样进行测定，以其算术平均值为结果；当粗蛋白质质量含量在25％以上，允许相对偏差为1％；当粗蛋白质质量含量在10-25％，允许相对偏差为2％；当粗蛋白质质量含量在10％以下，允许相对偏差为3％。
式I中，a：以0.1mol/L HCl溶液滴定样品所用的毫升数；b：以0.1mol/L HCl滴定空白所用的毫升数；6.25：含氮系数；0.0014：1ml 0.1mol/L HCl溶液相当于0.0014g的氮量；HCl标定浓度/0.1：0.1mol/L HCl溶液的力价。
(2)粗脂肪含量的分析
将样品粉末精称1克，包裹入已恒重的滤纸(Whatman No.1)，再放入Soxhlet装置的回流冷凝管中，以无水乙醚以回流萃取8小时后，取出滤纸，置于抽气柜中使乙醚挥发，再以红外线水分测定仪(IR-200，Derner Instrument Company，USA)快速将滤纸干燥至恒重并记录重量，最后以下面公式计算粗脂肪含量(％)。
(3)水分含量测定
秤取试样约5公克置于秤量瓶内，在105℃至110℃干燥箱内烘干，至恒量后秤量，其减量即为水分。
水分(％)＝(A/B)×100
A＝烘干减量(g)，B＝试样重量(g)
或以红外线水分测定仪(IR-200，Denver Instrument Company，USA)测定其水分含量，并将24小时的数据平均后，得到粪便的水分含量(％)。
(4)粗纤维含量测定
秤取试样2g，以乙醚抽取后与石棉0.5g同置一烧瓶中，加200ml硫酸液(烧瓶与冷却器直接)随即加热，须1分钟内使瓶中溶液沸腾，每隔5分钟转动烧瓶一次，俾瓶内溶液能够充分混合，并须注意瓶内液面上，不可粘有试样。吹入空气以除泡沫，煮沸30分钟后以置石棉薄层的古氏坩埚滤之，用沸水冲洗，至不含酸性为止，次用氢氧化钠溶液200ml，将沉淀物及石棉洗回烧瓶中，与冷却器连接后煮沸30分钟移开烧瓶，再用原来之古氏坩埚过滤，用沸水冲洗至不含酸性为止，再用95％酒精15ml，然后用乙醚10ml洗涤之。置古氏坩埚及其内容于烘箱中以温度110±2℃烘干，待冷却后秤之。再移于烧灰炉上烧约至红烧约20分钟以除去碳，冷却后再秤之，计算所损失之重量，即为粗纤维量。
粗纤维(％)＝(A/B)×100
A＝灰分减量(g)，B＝试样重量(g)
(5)粗灰分测定
秤量试样5至10g于瓷坩埚中，于600℃温度灼热至恒重，所残留之量即为粗灰分。
粗灰分(％)＝(A/B)×100
A＝残留物重量(g)，B＝试样重量(g)
(6)发酵后糖类生成分析
测定方法以Miller，1959所开发之DNS还原糖测定法测定，并以葡萄糖制备标准曲线进行比对。侦测的总还原糖量为1克原料所含还原糖量，经公式换算求得酶作用释放的还原糖量(释放还原糖量＝实验组(发酵后原料)还原糖量-对照组(未发酵原料)还原糖量)，并以各原料原始还原糖量作为对照，以计算其利用率和作用效力。
葵花盘粉、麦杆、绿豆杆粉、谷子杆粉、向日葵杆粉、玉米芯粉、玉米杆或酒糟原料主要成份，纤维含量分析结果如下表2所示：
表2.原料发酵前成分
| 种类 | 粗蛋白质％ | 粗脂肪％ | 粗灰分％ | 粗纤维％ |
| 玉米杆 | 6.2 | 2.3 | 5.3 | 23.4 |
| 玉米芯 | 4.2 | 2.8 | 1.8 | 23.8 |
| 种类 | 粗蛋白质％ | 粗脂肪％ | 粗灰分％ | 粗纤维％ |
| 酒糟 | 25.3 | 5.3 | 3.4 | 56.8 |
| 葵花盘粉 | 7.45 | 3.32 | 8.66 | 15.43 |
| 麦杆 | 1.67 | 1.04 | 5.94 | 38.80 |
| 绿豆杆粉 | 7.09 | 0.68 | 12.56 | 33.16 |
| 谷子杆粉 | 5.4 | 1.28 | 5.12 | 28.28 |
| 向日葵杆粉 | 2.42 | 0.78 | 4.09 | 40.92 |
利用步骤(6)检测的不同原料处理后还原糖产生量如表3所示，表3中的还原糖增长率计算公式为：
表3.不同原料经发酵处理后得到的饲料的还原糖产生量
| 不同原料 | 作用前1g原料总还原糖量(mg) | 1g原料作用后总还原糖量(mg)b | 还原糖增长率(％) | 作用效力(％)* |
| 葵花盘粉 | 80 | 98.3 | 22.9 | 79.9 |
| 麦杆 | 42.5 | 67.3 | 58.3 | 54.7 |
| 绿豆杆粉 | 51.5 | 77.4 | 50.3 | 62.9 |
| 谷子杆粉 | 58.3 | 83.1 | 42.5 | 67.6 |
| 向日葵杆粉 | 38 | 66.5 | 75.0 | 54.1 |
| 玉米芯 | 69.2 | 100.7 | 45.5 | 81.9 |
| 玉米杆 | 46.5 | 86.4 | 85.8 | 70.2 |
| 酒糟 | 14.9 | 41.4 | 177.6 | 33.7 |
*作用效力以玉米粉原始还原糖量为100％，将原料发酵作用后总还原糖量除以玉米粉还原糖量(123mg)即得。
序列表
<160>1
<210>1
<211>413
<212>DNA
<213>地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)
<400>1
gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttgt ccggaattat tgggcgtaaa 60
gcgcgcgcag gcggtttctt aagtctgatg tgaaagcccc cggctcaacc ggggagggtc 120
attggaaact ggggaacttg agtgcagaag aggagagtgg aattccacgt gtagcggtga 180
aatgcgtaga gatgtggagg aacaccagtg gcgaaggcga ctctctggtc tgtaactgac 240
gctgaggcgc gaaagcgtgg ggagcgaaca ggattagata ccctggtagt ccacgccgta 300
aacgatgagt gctaagtgtt agagggtttc cgccctttag tgctgcagca aacgcattaa 360
gcactccgcc tggggagtac ggtcgcaaga ctgaaactca aaggaattga cgg 413
Claims (9)
1.一种地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，其特征在于：该地衣芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌BL57，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏编号为CGMCC.№.2277。
2.权利要求1所述地衣芽孢杆菌BL57在降解含植物纤维素的物质中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述含植物纤维素的物质为农业废弃植物组织和/或工业原料废弃物。
4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于：所述降解含植物纤维素的物质中的应用是在含有纤维素的物质中接种权利要求1所述地衣芽孢杆菌BL57，进行发酵培养。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述发酵培养的温度条件为30-50℃；所述发酵培养的pH值为6-8。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述发酵培养的温度条件为45℃；所述发酵培养的pH值为6.5。
7.权利要求1所述地衣芽孢杆菌BL57在分解羧甲基纤维素中的应用。
8.权利要求1所述地衣芽孢杆菌BL57在分解蛋白中的应用。
9.权利要求1所述地衣芽孢杆菌BL57在分解淀粉中的应用。
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