CN101173275B

CN101173275B - 抑制sars冠状病毒m蛋白基因表达的小干扰rna及其编码基因与应用

Info

Publication number: CN101173275B
Application number: CN2006101141680A
Authority: CN
Inventors: 王颖; 刘力; 王树蕙; 张云
Original assignee: Institute of Basic Medical Sciences of CAMS
Current assignee: Institute of Basic Medical Sciences of AMMS; Institute of Basic Medical Sciences of CAMS
Priority date: 2006-10-31
Filing date: 2006-10-31
Publication date: 2011-07-27
Anticipated expiration: 2026-10-31
Also published as: CN101173275A

Abstract

本发明公开了抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA及其编码基因与应用。该抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA，是下述1)和2)中的至少一个双链RNA序列：1)正义链具有序列表中序列1的核苷酸序列，反义链具有序列表中序列2的核苷酸序列；2)正义链具有序列表中序列3的核苷酸序列，反义链具有序列表中序列4的核苷酸序列。本发明将在制备以抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA或携带所述抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA编码基因的表达载体为活性成分的药物中发挥重要作用。

Description

抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及小干扰RNA及其编码基因与应用，特别是涉及抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA及其编码基因与其在制备SARS治疗性药物中的应用。

背景技术

严重急性呼吸道综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)是一种严重威胁人类健康甚至生命的传染性疾病。引起SARS的病原体SARS-CoV为一种新型的冠状病毒，具有棘突蛋白S(spike)，基质蛋白M(matrix)，包膜蛋白E(Envelope)和核蛋白N(Nuclear protein)等数种主要结构蛋白(Holmes KV.SARS-associatedcoronavirus.N Engl J Med，2003，348(20)：1948-51.)。其中，M蛋白是包膜中的主要结构蛋白，可能与病毒的组装和细胞内出芽有关，在病毒感染中起到重要作用。目前，尚未有直接而有效的治疗SARS-CoV的方法。

RNA干扰技术(RNA interference，简称RNAi)是在小双链RNA(dsRNA)分子的介导下特异性降解靶基因的生物技术，能使基因表达沉默，达到拮抗靶基因功能的作用，因而，具有很好的生物(基因)治疗潜力。长度为21-22nt的小干扰RNA(siRNA，small interfering RNA)介导特异性干扰反应，只降解与其长度互补的特定基因的mRNA(Elbashir，S.M.，Harborth，J.，Lendeckel，W.et al.，Duplexes of21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells，Nature，2001，411(6836)：494)。RNAi技术因其在疾病治疗方面具有巨大潜力而备受关注。RNA干扰技术为系统地抑制RNA分子合成蛋白提供了快速而相对简便的途径，从而为疾病的防治提供了重要思路。迄今为止，有关siRNA可诱导产生针对SARS病毒基因RNA的干扰效应，从而使该病毒的复制和蛋白表达受到抑制，对细胞形成保护作用的报道已有多篇，但针对SARS-CoV M蛋白基因设计的利用载体发挥作用的siRNA却少有报道。

发明内容

本发明的目的是提供载体靶向的抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA。

本发明所提供的抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA，是下述双链RNA序列之一：

1)正义链为序列表中的序列1，反义链为序列表中的序列2的双链RNA序列；

2)正义链为序列表中的序列3，反义链为序列表中的序列4的双链RNA序列。

将具有1)的双链RNA序列命名为siRNA-M1，其反义链与SARS-CoV M mRNA(GenBank号：52100973)的220-241位置序列5’-gggugacuggcgggauugcgau-3’互补。序列表中序列1由22个碱基组成，序列的方向从左至右为5′端→3′端；序列表中序列2由22个碱基组成，序列的方向从左至右为5′端→3′端。

将具有2)的双链RNA序列命名为siRNA-M2，其反义链与SARS-CoV M mRNA的460-480位置序列5’-gggcgcugugacauuaaggac-3’互补。序列表中序列3由21个碱基组成，序列的方向从左至右为5′端→3′端；序列表中序列4由21个碱基组成，序列的方向从左至右为5′端→3′端。

上述抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的小干扰RNA分子的编码基因可具有下述1)和2)中至少一个双链核苷酸序列：

1)有义链(正义链)(不做模板的DNA链)具有序列表中序列5的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中序列5限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；反义链(做模板的DNA链)具有序列表中序列6的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中序列6限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；

2)有义链(正义链)(不做模板的DNA链)具有序列表中序列7的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中序列7限定的DNA序列杂交的核苷酸序列；反义链(做模板的DNA链)具有序列表中序列8的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中序列8限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。

所述高严谨条件可为在0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液中，在65℃下杂交并洗膜。

将具有1)的双链寡核苷酸序列编码基因命名为siDNA1，编码siRNA-M1。序列表中序列5由56个碱基组成，序列的方向从左至右为5′端→3′端；序列表中序列6由60个碱基组成，序列的方向从左至右为3′端→5′端。

将具有2)的双链寡核苷酸序列编码基因命名为siDNA2，编码siRNA-M2。序列表中序列7由54个碱基组成，序列的方向从左至右为5′端→3′端；序列表中序列8由58个碱基组成，序列的方向从左至右为3′端→5′端。

含有上述抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的小干扰RNA编码基因的表达载体及由此产生的siRNA，转基因动物、细胞系和宿主菌均属于本发明的保护范围。

本发明提供的小干扰RNA可对SARS冠状病毒M蛋白基因的表达产生干扰效应，干扰效率可达70％以上，且随着含有siRNA-M1(或siRNA-M2)编码基因的RNAi干扰载体的转染量的增加，SARS-CoV M蛋白的表达量逐渐下降，表明针对SARS-CoV M蛋白设计的siRNA可显著抑制SARS-CoV M蛋白的表达，并具有剂量效应，从而为SARS冠状病毒M蛋白的功能研究奠定了基础，为进一步研究SARS-CoV M蛋白在SARS-CoV的致病机制中的作用提供了新的平台，对于揭示SARS的致病机制具有重要意义，同时也为预防和治疗SARS及其相关疾病提供了新的思路和方法。本发明将在SARS的特异性预防和治疗中具有潜在的应用价值，特别是在制备以抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA或携带所述抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA编码基因的表达载体为活性成分的药物中将发挥重要作用。

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。

附图说明

图1为抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的小干扰RNA靶向序列在SARS-CoV M基因序列中的位置示意图

图2为抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的RNAi干扰载体的工作原理示意图

图3A为siRNA-M1对SARS-CoV M蛋白基因mRNA表达水平抑制作用剂量效应的RT-PCR检测结果

图3B为siRNA-M1对SARS-CoV M蛋白基因mRNA表达水平抑制作用剂量效应的半定量分析结果

图4A为siRNA-M2对SARS-CoV M蛋白基因mRNA表达水平抑制作用剂量效应的RT-PCR检测结果

图4B为siRNA-M2对SARS-CoV M蛋白基因mRNA表达水平抑制作用剂量效应的半定量分析结果

图5为siRNA-M1转染组的荧光强度检测结果

图6为siRNA-M2转染组的荧光强度检测结果

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，具体步骤可参见：《Molecular Cloning：A Laboratory Manual》(Sambrook，J.，Russell，David W.，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，3^rd edition，2001，NY，Cold SpringHarbor)。所用引物及DNA序列均由上海生工合成。

实施例1、抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的小干扰RNA的设计和RNAi干扰载体的构建

一、抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的小干扰RNA的设计

按下述方法设计抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的小干扰RNA：

根据SARS-CoV M基因mRNA序列(GenBank号：52100973)，以及pBS/U6载体(SuiGC et al.PNAS.2002April；99(8)：5515-5520)中U6启动子的特殊要求，选取位于SARS-CoV M基因mRNA序列转录起始位点aug下游220和460bp处的两段长度分别为22bp和21bp的序列(靶向序列在SARS-CoV M基因序列中的位置示意图见图1)，避开了不同病毒株之间的突变点，同时，所选取的这两段序列均以GGG起始，GC含量为63.6％和57.1％，并将选取的序列进行了同源性比对分析以保证所筛选的抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的siRNA序列同除SARS-CoV外的其它种属序列无同源性，将用上述方法获得的两对抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的小干扰RNA分别命名为siRNA-M1(序列表中序列1和序列2)和siRNA-M2(序列表中序列3和序列4)，siRNA-M1作用于SARS-CoV M mRNA的220-241位置序列5’-gggugacuggcgggauugcgau-3’，siRNA-M2作用于SARS-CoV M mRNA的460-480位置序列

5’-gggcgcugugacauuaaggac-3’。

二、抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的RNAi干扰载体的构建

1、根据siRNA-M1和siRNA-M2所作用的靶序列以及载体pBS/U6的使用要求，设计能够产生siRNA-M1和siRNA-M2的siDNA序列，分别命名为siDNA1和siDNA2，具体序列如下(下划线碱基序列为针对SARS-CoV M mRNA的靶序列)：

siDNA1正义链：

5’-gggtgactggcgggattgcgata agcttatcgcaatcccgccagtcaccctttttg-3’(序列5)

siDNA1反义链：

3’-cccactgaccgccctaacgctattcga atagcgttagggcggtcagtgggaaaaacttaa-5’(序列6)siDNA2正义链：

5’-gggcgctgtgacattaaggaca agcttgtccttaatgtcacagcgccctttttg-3’(序列7)siDNA2反义链：

3’-cccgcgacactgtaattcctgttcga acaggaattacagtgtcgcgggaaaaacttaa-5’(序列8)

2、根据所设计的siDNA1和siDNA2序列合成8条寡核苷酸，序列如下：

1a:5’-gggtgactggcgggattgcgata-3’

1b:3’-cccactgaccgccctaacgctattcga-5’

2a：5’-agcttatcgcaatcccgccagtcaccctttttg-3’

2b：3’-atagcgttagggcggtcagtgggaaaaacttaa-5’；

1a’：5’-gggcgctgtgacattaaggaca-3’

1b’：3’-cccgcgacactgtaattcctgttcga-5’

2a’：5’-agcttgtccttaatgtcacagcgccctttttg-3’

2b’：3’-acaggaattacagtgtcgcgggaaaaacttaa-5’

将上述8条两两互补的寡核苷酸片断经煮沸5分钟后自然冷却使之缓慢退火得到1a1b和2a2b，1a’1b’和2a’2b’两对双链dsDNA(即四条双链dsDNA)。对含有U6启动子的载体pBS/U6进行以下操作：用限制性内切酶Apa I和Kpn I分别进行双酶切，将退火后的寡核苷酸双链1a1b克隆入经酶切回收的载体pBS/U6中，将含有1a1b的载体命名为pBS/U6+1a1b，将含有1a’1b’的载体命名为pBS/U6+1a’1b’。再将2a2b克隆入分别经限制性内切酶Hind III和EcoR I进行双酶切后的载体pBS/U6+1a1b中，得到以5’-gggugacuggcgggauugcgau-3’为靶序列的SARS-CoV M蛋白基因的RNAi载体，将其命名为pBS/U6-sim1；将2a’2b’用同样方法克隆入载体pBS/U6+1a’1b’中，得到以5’-gggcgcugugacauuaaggac-3’为靶序列的SARS-CoV M蛋白基因的RNAi载体，将其命名为pBS/U6-sim2。对pBS/U6-sim1和pBS/U6-sim2分别用限制性内切酶Xho I和EoR V进行酶切鉴定(以空载体pBS/U6为对照)，结果空载体pBS/U6经双酶切可以释放长度约为3200bp左右的DNA片段，而构建的载体pBS/U6-sim1和pBS/U6-sim2因插入dsDNA使限制酶切位点缺失而不能释放该长度约为3200bp左右的DNA片段，与预期结果相符，表明正确构建了分别含有siDNA1和siDNA2抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的RNAi干扰载体，其工作原理示意图如图2所示(A)为线性化的pBS/U6-sim：pBS/U6-sim以U6作为启动子，启动子之后紧接着GGG作为小RNA的转录起始位点；B)为插入到pBS/U6-sim中的寡核苷酸双链1a1b和2a2b；C)为寡核苷酸片段1a和2a被转录后形成发夹状结构的siRNA，对目的基因发挥干扰效应。U6：U6启动子；Ampr：氨苄青霉素抗性基因；Pamp1和Pamp2：Amp^r扩增引物)。

实施例2、检测siRNA-M1和siRNA-M2对SARS-CoV M蛋白基因表达抑制的剂量效应

一、含有SARS-CoV M蛋白基因的表达载体pCMV—Myc—M的构建

以SARS-CoV M蛋白基因为模板，在引物P1：5’-tatagaattctggcaacggtactatt-3’和P2：5’-tataggtaccgtcacttactgtactagcaaagc-3’的引导下PCR扩增SARS-CoV M蛋白基因的cds区(编码序列)，并在序列两端分别添加上限制性内切酶HindIII和BamHI识别位点，反应结束后对PCR扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳检测，结果得到了大小约为670bp的DNA片段，回收并纯化该目的片段，然后用限制性内切酶Hind III和BamHI对该目的片段进行双酶切后与经相同酶双酶切的真核表达载体pCMV-Myc(购自BDBiosciences公司)进行连接，得到SARS-CoV M蛋白基因的亚克隆载体，命名为pCMV-Myc-M。

二、检测siRNA-M1和siRNA-M2对SARS-CoV M蛋白基因表达抑制的剂量效应

1、人胚肾细胞系293的培养

将人胚肾细胞系293培养于添加有体积百分浓度为10％的经热灭活的胎牛血清(FBS)的Modified Eagle’s medium(MEM)培养基中，然后将293细胞以2×10⁵/孔的密度培养于6孔板中，将细胞置于37℃，含5％CO₂的培养箱中进行培养至细胞密度达80％。

2、共转染

将实施例1构建的抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的RNAi干扰载体pBS/U6-sim1和pBS/U6-sim2以不同剂量(pCMV-Myc-M与干扰载体的质量比分别为：1：1、1：2、1：4、1：8)分别与步骤一构建的SARS-CoV M蛋白基因的表达载体pCMV-Myc-M用磷酸钙法瞬时共转染步骤1培养的293细胞，对照组不加干扰载体，再将转染细胞培养48小时。

3、siRNA-M1和siRNA-M2对SARS-CoV M蛋白基因表达抑制剂量效应的RT-PCR检测及半定量分析

收集293细胞，用RT-PCR的方法检测siRNA-M1、siRNA-M2对SARS-CoV M蛋白基因表达抑制的剂量效应，具体方法为：利用Trizol(Invitrogen)提取转染细胞的总RNA，然后取提取的2μg总RNA为模板用AMV反转录酶(Promage公司)反转录合成其cDNA，再以该cDNA为模板，在引物P3：5’-tatagaattctggcagacaacggtactatt-3’和P4：5’-tataggtaccgtcacttactgtactagcaaagc-3’的引导下PCR扩增SARS-CoV M蛋白基因，PCR反应条件为：先94℃变性30秒，然后56℃退火1分钟，最后72℃延伸1分30秒。同时以三磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)片段作为PCR反应的内参，所用引物序列为：P5(上游引物)：5’-ggcaaagtggacattgtcgc-3’和P6(下游引物)：5’-agaagcagggatgatgttctgg-3’，反应条件不变。反应结束后，对PCR扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳检测并对SARS-CoV M蛋白基因的表达水平进行半定量鉴定。

siRNA-M1对SARS-CoV M蛋白基因表达水平干扰剂量效应的RT-PCR检测检测结果如图3A所示，内参GAPDH基因的转录水平基本一致，实验组SARS-CoV M蛋白基因的表达量与对照组相比明显降低，且随着干扰载体pBS/U6-sim1转染剂量的增大(从左至右)，SARS-CoV M蛋白基因的mRNA表达水平逐渐降低。siRNA-M1对SARS-CoV M蛋白基因表达水平干扰剂量效应半定量分析结果如图3B所示(横轴：质粒pCMV-Myc-M与pBS/U6-sim1的质量比，5个点分别为无干扰，1:1，1:2，1:4，1:8；纵轴：各组RT-PCR跑胶后用紫外分光光度仪分析各条带亮度得到的数值)，siRNA-M1干扰组亮度数值分别为82200(对照)，72026(1：1)，63724(1：2)，52656(1：4)，32776(1：8)，而各组相应的内参亮度数值分别为72026，72213，74067，78409，76652。上述检测结果表明与对照组相比，本发明的siRNA-M1对SARS-CoV M蛋白基因在细胞中的表达具有较显著的抑制作用，其干扰效应可达70％以上，且随着siRNA-M1转染量的提高，抑制作用也更加显著，呈现出明显的剂量效应，同时本发明的小干扰RNA对细胞的生长无影响，证明无毒性作用。

siRNA-M2对SARS-CoV M蛋白基因表达水平干扰剂量效应的RT-PCR检测检测结果如图4A所示，内参GAPDH基因的转录水平基本一致，实验组SARS-CoV M蛋白基因的表达量与对照组相比明显降低，且随着干扰载体pBS/U6-sim2转染剂量的增大(从左至右)，SARS-CoV M蛋白基因的mRNA表达水平逐渐降低。siRNA-M2对SARS-CoV M蛋白基因表达水平干扰剂量效应半定量分析结果如图4B所示(横轴：质粒pCMV-Myc-M与pBS/U6-sim2的质量比，5个点分别为无干扰，1:1，1:2，1:4，1:8；纵轴：各组RT-PCR跑胶后用紫外分光光度仪分析各条带亮度得到的数值)，siRNA-M2干扰组亮度数值分别为75682(对照)，62784(1：1)，61754(1：2)，43016(1：4)，7732(1：8)，而各组相应的内参亮度数值分别为97578，91032，98567，102981，83904。上述检测结果表明与对照组相比，本发明的siRNA-M2对SARS-CoV M蛋白基因在细胞中的表达也具有较显著的抑制作用，其干扰效应可达70％以上，且随着siRNA-M2转染量的提高，抑制作用也更加显著，呈现出明显的剂量效应，同时本发明的小干扰RNA对细胞的生长无影响，证明无毒性作用。

实施例3、检测siRNA-M1和siRNA-M2对SARS-CoV M蛋白基因表达抑制的特异性

一、含有SARS-CoV M蛋白基因的表达载体pCMV—Myc—M的构建

用与实施例2相同的方法PCR扩增SARS-CoV M蛋白基因的cds区，并在序列两端分别添加上限制性内切酶Hind III和BamH I识别位点，反应结束后对PCR扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳检测，结果得到了大小约为670bp的DNA片段，回收并纯化该目的片段，然后用限制性内切酶Hind III和BamH I对该目的片段进行双酶切后与经相同酶双酶切的含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)基因的真核表达载体pEGFP-N1(购自BD Biosciences公司)进行连接，得到SARS-CoV M蛋白基因的亚克隆载体，命名为pEGFP-N1-M。

二、检测siRNA-M1和siRNA-M2对SARS-CoV M蛋白基因表达抑制的特异性

1、人胚肾细胞系293的培养

用与实施例1相同的方法对人胚肾细胞系293进行培养。

2、共转染

将实施例1构建的抑制SARS-CoV M蛋白基因表达的RNAi干扰载体pBS/U6-sim1和pBS/U6-sim2按质量比1：4分别与步骤一构建的SARS-CoV M蛋白基因的表达载体pEGFP-N1-M用磷酸钙法瞬时共转染步骤1培养的293细胞，对照组共转染有仅含红色荧光蛋白(green fluorescent protein，RFP)基因的载体pDsRed-N1(购自BDBiosciences公司)和pBS/U6-sim1(或pBS/U6-sim2，质量比仍为1：4)，同时以pEGFP-N1-M转染组作为SARS-CoV M蛋白基因表达量的参照，以含红色荧光蛋白RFP基因的载体转染组作为RFP基因表达量的参照，再将转染细胞培养48小时。

3、siRNA-M1和siRNA-M2对SARS-CoV M蛋白基因表达抑制的特异性检测

将SARS-CoV M蛋白基因克隆到pEGFP-N1中，可表达SARS-CoV M蛋白与GFP形成的融合蛋白，该融合蛋白因为携带有GFP而发出绿色荧光，因此将构建的融合蛋白表达载体pEGFP-N1-M与pBS/U6-sim1(或pBS/U6-sim2)共转染293细胞后，若干扰载体携带的小干扰RNA对SARS-CoV M蛋白基因的表达具有抑制作用，则绿色荧光蛋白GFP基因的表达将受到抑制，荧光强度将会降低。

siRNA-M1转染组的荧光强度检测结果如图5所示(图a)为pEGFP-N1-M转染组的观察结果；图b)为pEGFP-N1-M与pBS/U6-sim1共转染组的观察结果；c)红色荧光蛋白RFP基因表达载体转染组：d)红色荧光蛋白RFP基因表达载体与pBS/U6-sim1共转染组)，与pEGFP-N1-M转染组相比，pEGFP-N1-M与pBS/U6-sim1共转染组的绿色荧光强度显著降低，而红色荧光强度组间无明显差别，表明pBS/U6-sim1所携带的siRNA-M1对转入的外源SARS-CoV M蛋白基因表达具有显著，而且特异性地抑制作用，可用于制备SARS的治疗性药物的研究。

siRNA-M2转染组的荧光强度检测结果如图6所示(图a)为pEGFP-N1-M转染组的观察结果；图b)为pEGFP-N1-M与pBS/U6-sim2共转染组的观察结果；c)红色荧光蛋白RFP基因表达载体转染组：d)红色荧光蛋白RFP基因表达载体与pBS/U6-sim2共转染组)，与pEGFP-N1-M转染组相比，pEGFP-N1-M与pBS/U6-sim2共转染组的绿色荧光强度显著降低，而红色荧光强度组间无明显差别，表明pBS/U6-sim2所携带的siRNA-M2对转入的外源SARS-CoV M蛋白基因表达也具有显著，而且特异性地抑制作用，同样可用于制备SARS的治疗性药物。

序列表

<160>8

<210>1

<211>22

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>1

<210>2

<211>22

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>2

<210>3

<211>21

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>3

<210>4

<211>21

<212>RNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>4

<210>5

<211>56

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>5

<210>6

<211>60

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>6

<210>7

<211>54

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>7

<210>8

<211>58

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>

<400>8

Claims

1.抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA，是一个双链RNA，正义链为序列表中序列1表示的核苷酸序列，反义链为序列表中序列2表示的核苷酸序列。

2.权利要求1所述的抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA的编码基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于：所述抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA的编码基因是一个双链核苷酸，其有义链为序列表中序列5表示的核苷酸序列，反义链是序列表中序列6表示的核苷酸序列。

4.含有权利要求2或3所述的抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA编码基因的表达载体。

5.含有权利要求2或3所述的抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA编码基因的细胞系。

6.含有权利要求2或3所述的抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA编码基因的宿主菌。

7.权利要求1所述的抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA或携带权利要求2或3所述抑制SARS冠状病毒M蛋白基因表达的小干扰RNA编码基因的表达载体在制备SARS治疗性药物中的应用。