CN103045592B - 与流感病毒复制相关的长链非编码核酸片段以及它们的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了与流感病毒复制相关的长链非编码核酸片段以及它们的应用。本发明提供的shRNA，其生成siRNA，所述siRNA为双链RNA，如序列表的序列11或序列13所示。所述shRNA具体可如序列表的序列12或序列14所示。本发明的发明人发现人肺癌细胞表达的一种长链非编码RNA(IVDN8)可作为防治流感的新型药物靶标，干扰IVDN8的表达时，病毒的复制水平则降低。因此，通过药物干扰或抑制IVDN8表达，从而抑制或降低流感病毒或其它病毒的复制水平，可预防性地保护机体与细胞，促进人体对病毒的清除。这种以IVDN8为靶标的抗病毒新机制和新方法将有助于降低流感的感染率、减轻症状或缩短病程。
Description
技术领域
本发明涉及与流感病毒复制相关的长链非编码核酸片段以及它们的应用。
背景技术
长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是指长200nt以上的不编码蛋白质的RNA。转录组计划完成后，人们发现哺乳动物细胞中4/5的转录产物并不编码蛋白质，其中不少是lncRNA。最初以为这些转录产物只是“噪音”，但近年的研究表明，lncRNA在细胞生命活动中发挥着重要而广泛的作用。
流感病毒是正粘病毒科的单链RNA病毒，因其基因变异迅速，大流行不断发生。在全球范围，流感每年导致几十万人死亡，预防接种及治疗费用亦十分高昂。由于部分流感病毒毒株对金刚烷胺和金刚乙胺有耐药性，目前有效的抗病毒药物为神经胺酸酶抑制剂达菲和扎那米韦，但价格昂贵，而且副作用及耐药毒株亦有报道。研制新型抗病毒药物的任务仍然艰巨。
发明内容
本发明的目的是提供与流感病毒复制相关的长链非编码核酸片段以及它们的应用。
本发明提供了一种shRNA(shRNA1)，其生成siRNA，所述siRNA为反向互补的双链RNA，其中的一条链如序列表的序列11所示。所述shRNA1具体可如序列表的序列12所示。
编码所述shRNA1的DNA分子(DNA分子1)也属于本发明的保护范围。
含有所述DNA分子1的重组载体(重组载体1)1也属于本发明的保护范围。所述重组载体1可为重组质粒(重组质粒1)或重组病毒(重组病毒1)。所述重组质粒1具体可为在pSIH-H1-copGFP慢病毒表达载体的BamHI和EcoRI酶切位点之间插入序列表的序列2自5’末端第6至64位核苷酸所示双链DNA得到的重组质粒。所述重组病毒1具体可为将将所述重组质粒1、pPACKH1-GAG质粒、pPACKH1-REV质粒和pVSV-G质粒共转染哺乳动物细胞(如293T细胞)得到的重组病毒。重组质粒1、pPACKH1-GAG质粒、pPACKH1-REV质粒和pVSV-G质粒的质量配比优选为1∶1∶1∶1。
本发明还提供了另一种shRNA(shRNA2)，其生成siRNA，所述siRNA为反向互补的双链RNA，其中的一条链如序列表的序列13所示。所述shRNA2具体可如序列表的序列14所示。
编码所述shRNA2的DNA分子(DNA分子2)也属于本发明的保护范围。
含有所述DNA分子2的重组载体(重组载体2)也属于本发明的保护范围。所述重组载体2可为重组质粒(重组质粒2)或重组病毒(重组病毒2)。所述重组质粒2具体可为在pSIH-H1-copGFP慢病毒表达载体的BamHI和EcoRI酶切位点之间插入序列表的序列4自5’末端第6至64位核苷酸所示双链DNA得到的重组质粒。所述重组病毒2具体可为将将所述重组质粒2、pPACKH1-GAG质粒、pPACKH1-REV质粒和pVSV-G质粒共转染哺乳动物细胞(如293T细胞)得到的重组病毒。重组质粒1、pPACKH1-GAG质粒、pPACKH1-REV质粒和pVSV-G质粒的质量配比优选为1∶1∶1∶1。
本发明还保护抑制IVDN8表达的产品在制备药物中的应用；所述药物的作用为如下(a)和/或(b)和/或(c)：(a)抑制流感病毒；(b)抑制流感病毒在细胞中的复制和/或释放；(c)治疗和/或预防流感。所述细胞具体可为A549细胞。所述流感病毒具体可为流感病毒WSN毒株。IVDN8为一种长链非编码RNA，由序列表的序列1至序列5中任一所示DNA分子编码。所述抑制IVDN8表达的产品为所述shRNA1、所述DNA分子1、所述重组质粒1、所述重组病毒1、所述shRNA2、所述DNA分子2、所述重组质粒2和所述重组病毒2中的至少一种。
本发明还保护一种药物，它的活性成分为抑制IVDN8表达的产品；所述药物的作用为如下(a)和/或(b)和/或(c)：(a)抑制流感病毒；(b)抑制流感病毒在细胞中的复制和/或释放；(c)治疗和/或预防流感。所述细胞具体可为A549细胞。所述流感病毒具体可为流感病毒WSN毒株。IVDN8为一种长链非编码RNA，由序列表的序列1至序列5中任一所示DNA分子编码。所述抑制IVDN8表达的产品为所述shRNA1、所述DNA分子1、所述重组质粒1、所述重组病毒1、所述shRNA2、所述DNA分子2、所述重组质粒2和所述重组病毒2中的至少一种。
本发明还保护序列表的序列1所示的DNA片段。
本发明还保护序列表的序列1所示的DNA片段编码的RNA。
含有序列表的序列1所示的DNA片段的重组载体(重组载体3)也属于本发明的保护范围。所述重组载体可为重组质粒(重组质粒3)或重组病毒(重组病毒3)。所述重组质粒3具体可为在pMIG逆转录病毒表达载体的BglII和EcoRI酶切位点之间插入序列表的序列1所示双链DNA得到的重组质粒。所述重组病毒3具体可为将所述重组质粒3、pCL-Eco质粒和pCMV-VSV-G质粒共转染哺乳动物细胞(如293T细胞)得到的重组病毒。重组质粒1、pCL-Eco质粒和pCMV-VSV-G质粒的质量配比优选为1∶1∶1。
序列表的序列1所示的DNA片段、序列表的序列1所示的DNA片段编码的RNA、重组质粒3或重组病毒3均可用于制备产品；所述产品的作用为促进流感病毒在细胞中的复制和/或释放。所述细胞具体可为A549细胞。所述流感病毒具体可为流感病毒WSN毒株。
本发明还保护IVDN8作为靶点在开发治疗和/或预防流感的药物中的应用。IVDN8为一种长链非编码RNA，由序列表的序列1至序列5中任一所示DNA分子编码。所述流感病毒具体可为流感病毒WSN毒株。
本发明的发明人发现人肺癌细胞表达的一种长链非编码RNA(IVDN8)可作为防治流感的新型药物靶标。IVDN8在细胞中呈组成型表达，参与流感病毒的感染复制过程。在细胞中人为过表达IVDN8时，流感病毒的复制水平略有增高；而干扰IVDN8的表达时，病毒的复制水平则降低。可见IVDN8被流感病毒利用以促进自身的复制。感染了流感病毒的细胞中，细胞保护性机制下调IVDN8的表达水平。因此，通过药物干扰或抑制IVDN8表达，从而抑制或降低流感病毒或其它病毒的复制水平，可预防性地保护机体与细胞，促进人体对病毒的清除。这种以IVDN8为靶标的抗病毒新机制和新方法将有助于降低流感的感染率、减轻症状或缩短病程。
附图说明
图1为感染流感病毒的A549细胞内IVDN8表达水平降低；采用肌动蛋白mRNA作为内参；1：A549细胞；2：感染流感病毒的A549细胞。
图2为病毒感染复制过程与IVDN8丰度降低相关(实验一)；采用肌动蛋白mRNA作为内参；1：A549细胞，转染A549细胞的RNA；2：A549细胞，转染感染病毒的A549细胞的RNA混合物；3：A549细胞，转染CIAP处理过的RNA混合物。
图3为病毒感染复制过程与IVDN8丰度降低相关(实验二)；采用肌动蛋白mRNA作为内参；1：A549细胞；2：感染WSN毒株的A549细胞；3：感染部分灭活病毒的A549细胞。
图4为Northern印迹鉴定IVDN8的主要表达形式；1：Riboruler RNA标准分子量；2：A549细胞RNA(30微克)；3：感染WSN毒株12小时后的A549细胞RNA(30微克)。
图5为IVDN8的干扰对病毒复制的影响实验中重组细胞和对照细胞中的IVDN8水平；采用肌动蛋白mRNA作为内参；1：对照细胞(pSIH)；2：重组细胞甲(IVDN8sh1)；3：重组细胞乙(IVDN8sh2)。
图6为IVDN8干扰对病毒复制的影响实验的HA滴度结果。
图7为IVDN8的过表达对病毒复制的影响实验中重组细胞丙(pMIG-IVDN8A)和对照细胞(pMIG)中的IVDN8水平；采用肌动蛋白mRNA作为内参。
图8为IVDN8过表达对病毒复制的影响实验的HA滴度结果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。MOI＝每个细胞感染病毒的病毒颗粒数量。感染液为含2mg/mL胰蛋白酶的DMEM培养液。
A549细胞(人肺癌细胞系)：美国标准生物品收藏中心(American type culturecollection，ATCC)，编号为CCL-185。
流感病毒WSN毒株：美国标准生物品收藏中心(American type culturecollection，ATCC)，编号为VR-825。
实施例2中所用的包装质粒为pPACKH1质粒混合物(由如下三种质粒组成：pPACKH1-GAG质粒，pPACKH1-REV质粒，pVSV-G质粒)：Lentivector PackagingKit，System Biosciences，编号LV100A-1。
实施例3中所用的包装质粒为pCL-Eco质粒和pCMV-VSV-G质粒：两个质粒均为Addgene产品，编号分别为12371和8454。
293T细胞：美国标准生物品收藏中心(American type culture collection，ATCC)，编号为CRL-11268。
实施例1、流感病毒感染与细胞内IVDN8表达相关性的发现以及相关性的具体分析
一、流感病毒感染与细胞内IVDN8表达相关性的发现
使用生物芯片技术发现A549细胞在感染流感病毒后，胞内一些长链非编码RNA的表达水平发生了显著变化，其中IVDN8的表达水平被下调。IVDN8的转录产物序列有多种：IVDN8A(见序列表的序列6，1194bp，基因位置为chr12：119413206-119418111)、IVDN8B(见序列表的序列7，3587bp，基因位置为chr12：119409495-119418132)、IVDN8C(见序列表的序列8，1207bp，基因位置为chr12：119413212-119418096)、IVDN8D(见序列表的序列9，1209bp，基因位置为chr12：119413206-119418095)、IVDN8E(见序列表的序列10，1910bp，基因位置为chr12：119412514-119418111)等等。IVDN8A和IVDN8B是具有代表性的剪接异构体。
二、感染流感病毒的A549细胞内IVDN8表达水平降低
1、A549细胞使用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养于37℃，5％CO2恒温培养箱。
2、吸弃步骤1的细胞培养上清，加入感染液和WSN毒株(MOI＝3)，孵育1小时；设置不用WSN毒株感染的平行对照。
3、将步骤2的细胞换用新感染液，继续培养12小时。
4、收集完成步骤3的细胞并提取RNA，然后反转录为cDNA。
5、以cDNA为模板，用DN8M-F和DN8M-R组成的引物对(靶序列为IVDN8基因片段)进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
DN8M-F：5’-ATTCCTCCGCAACAGACACC-3’；
DN8M-R：5’-CATGGCTTAGTAGGGACAGAT-3’。
6、将步骤5的PCR扩增产物进行1.5％琼脂糖电泳分析，见图1。结果表明，感染WSN毒株后A549细胞内的IVDN8表达水平明显下降。
三、病毒感染复制过程与IVDN8丰度降低相关
(一)实验一
1、A549细胞使用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养于37℃，5％CO2恒温培养箱。
2、吸弃步骤1的细胞培养上清，加入感染液和WSN毒株(MOI＝3)孵育1小时；设置不用WSN毒株感染的平行对照。
3、将步骤2的细胞换用新感染液，继续培养12小时。
4、收集染毒细胞并提取RNA(包含细胞RNA及流感病毒感染复制过程中产生的RNA混合物)。同样收集未感染WSN毒株的细胞，并提取RNA作为平行对照。
5、取适量步骤4中染毒细胞的RNA，用CIAP(Takara，大连)进行去磷酸化处理，以切掉病毒RNA5’端特有的三磷酸根，即去除病毒RNA上的病原相关分子模式(PAMP)，作为对照(CIAP处理过的RNA混合物)。
6、将步骤4的染毒细胞RNA、步骤4的对照细胞RNA和步骤5的CIAP-RNA分别进行如下操作：将2μg RNA和5μL转染试剂lipofectamine2000(Invitrogen)混合，按照说明书方法，加入6孔板上新培养的A549细胞中，刺激细胞4小时。
7、收集完成步骤6的细胞并提取RNA，然后反转录为cDNA。
8、以cDNA为模板，用DN8M-F和DN8M-R组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
9、将步骤8的PCR扩增产物进行1.5％琼脂糖电泳分析，见图2。
染毒细胞的RNA混合物可引起IVDN8表达下降，对照细胞的RNA和CIAP处理过的RNA混合物均未引起IVDN8丰度的明显变化。结果表明，病毒复制过程中产生的RNA是导致IVDN8表达下调的主要成分。
(二)实验二
1、A549细胞使用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养于37℃，5％CO2恒温培养箱。
2、将WSN毒株在56℃水浴中处理30min，得到部分灭活病毒(56℃灭活的病毒可感染细胞，但无法包装或释放出完整毒粒)。
3、吸弃步骤1的细胞培养上清，加入感染液和WSN毒株(或步骤2得到的部分灭活病毒)，MOI＝5，孵育1小时；设置不用任何毒株感染的平行对照。
4、将步骤3的细胞换用新感染液，继续培养15小时。
5、收集完成步骤4的细胞并提取RNA，然后反转录为cDNA。
6、以cDNA为模板，用DN8M-F和DN8M-R组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
7、将步骤6的PCR扩增产物进行1.5％琼脂糖电泳分析，见图3。相比未经处理的WSN毒株引起的IVDN8丰度下降，56℃灭活的病毒可引起IVDN8丰度降低，但程度较轻。IVDN8丰度降低可能与病毒感染有关，而程度的减轻可能是由于缺少病毒复制过程形成的病原相关分子模式的刺激作用。结果表明，病毒的感染及复制过程均与IVDN8的表达下调相关。
四、IVDN8在细胞内的主要表达形式
回收实施例1步骤二的5的PCR扩增产物(长793bp)，进行生物素标记(Invitrogen)，通过Northern印迹方法(Invitrogen)检测A549细胞的RNA，观察未感染WSN毒株的细胞中，以及感染WSN毒株12小时后，IVDN8在胞内的主要表达形式及其长度。
结果见图4。A549细胞中IVDN8以长度约为1400nt的剪接形式(类似IVDN8A)为主，长约3800nt的RNA形式(类似IVDN8B)次之，量较少。当A549细胞感染病毒后，长的IVDN8条带未见明显变化，相比之下，短的IVDN8表达水平下降，此外还出现第三种长约1800nt的RNA，表达量比1400ntRNA略少。
实施例2、IVDN8A干扰表达实验
一、重组质粒的构建
(一)重组质粒甲的构建
1、合成序列表的序列2所示的单链DNA和序列表的序列3所示的单链DNA(在两个单链DNA的两端直接引入酶切位点的粘性末端)，并退火得到双链DNA。
2、用限制性内切酶BamHI和EcoRI酶切pSIH-H1-copGFP慢病毒表达载体(SystemBiosciences)，回收载体骨架(约7200bp)。
3、将步骤1的双链DNA和步骤2的载体骨架连接，得到重组质粒甲。根据测序结果，对重组质粒甲进行结构描述如下：在pSIH-H1-copGFP慢病毒表达载体的BamHI和EcoRI酶切位点之间插入序列表的序列2自5’末端第6至64位核苷酸所示双链DNA得到的重组质粒。序列表的序列2自5’末端第6至64位核苷酸所示双链DNA表达序列表的序列12所示的shRNA(shRNA1)。序列12所示的shRNA中，自5’末端第1至21位核苷酸和第34至54位核苷酸为反向互补序列，第12至33位核苷酸为间隔序列。序列12所示的shRNA在细胞内生成siRNA，其中一条链如序列12自5’末端第1至21位核苷酸所示(序列表的序列11)，另一条链如序列12自5’末端第34至54位核苷酸所示。
(二)重组质粒乙的构建
1、合成序列表的序列4所示的单链DNA和序列表的序列5所示的单链DNA，并退火得到双链DNA。
2、用限制性内切酶BamHI和EcoRI酶切pSIH-H1-copGFP慢病毒表达载体(SystemBiosciences，编号SI501A-1)，回收载体骨架(约7200bp)。
3、将步骤1的双链DNA和步骤2的载体骨架连接，得到重组质粒乙。根据测序结果，对重组质粒乙进行结构描述如下：在pSIH-H1-copGFP慢病毒表达载体的BamHI和EcoRI酶切位点之间插入序列表的序列4自5’末端第6至64位核苷酸所示双链DNA得到的重组质粒。序列表的序列4自5’末端第6至64位核苷酸所示双链DNA表达序列表的序列14所示的shRNA(shRNA2)。序列14所示的shRNA中，自5’末端第1至21位核苷酸和第34至54位核苷酸为反向互补序列，第12至33位核苷酸为间隔序列。序列14所示的shRNA在细胞内生成siRNA，其中一条链如序列14自5’末端第1至21位核苷酸所示(序列表的序列13)，另一条链如序列14自5’末端第34至54位核苷酸所示。
(三)对照质粒
对照质粒的名称为pSIH-荧光素酶shRNA，荧光素酶shRNA模板购自SystemBiosciences，按照说明构建；对照质粒的结构：在pSIH-H1慢病毒表达载体的BamHI和EcoRI酶切位点之间插入了荧光素酶shRNA的编码基因。
二、IVDN8干扰对病毒复制的影响
(一)重组细胞和对照细胞的获得
按照说明书(System Biosciences)，将重组质粒甲与包装质粒共转染293T细胞，包装出携带shRNA1编码DNA的假病毒颗粒，然后将所述假病毒颗粒感染A549细胞，得到重组细胞甲(IVDN8sh1细胞株)。
按照说明书(System Biosciences)，将重组质粒乙与包装质粒共转染293T细胞，包装出携带shRNA2编码DNA的假病毒颗粒，然后将所述假病毒颗粒感染A549细胞，得到重组细胞乙(IVDN8sh2细胞株)。
按照说明书(System Biosciences)，将对照质粒与包装质粒共转染293T细胞，包装出携带荧光素酶shRNA编码DNA的假病毒颗粒，然后将所述假病毒颗粒感染A549细胞，得到对照细胞甲(pSIH细胞株)。
步骤(一)制备重组细胞(或对照细胞)的过程中，重组质粒(或对照质粒)与三个包装质粒的质量比1∶1∶1∶1。
(二)重组细胞和对照细胞中IVDN8表达水平的鉴定
提取重组细胞甲、重组细胞乙或对照细胞甲的RNA，并反转录为cDNA。以cDNA为模板，用DN8M-F和DN8M-R组成的引物对进行PCR鉴定(靶序列约为793bp)。
结果见图5。与对照细胞甲相比，表达shRNA1的细胞株(IVDN8sh1)中IVDN8表达水平降低70％-90％，表达shRNA2的细胞株(IVDN8sh2)中IVDN8表达水平降低约30％-50％。
(三)IVDN8干扰对病毒复制的影响
将重组细胞甲、重组细胞乙或对照细胞甲分别进行如下实验：
1、细胞使用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养于37℃，5％CO2恒温培养箱。
2、吸弃步骤1的细胞培养上清，加入感染液和WSN毒株(MOI＝0.3)，孵育1小时。
3、将步骤2的细胞换用新感染液，继续培养24小时。
4、不同时间(感染后10h-24h)取步骤3的细胞培养上清，通过血凝试验观察病毒复制水平。
血凝试验具体步骤如下：在96孔U型平板上，将细胞培养上清用PBS缓冲液进行系列2倍稀释，获得2、4、8、16、32、64、128、256、512、1024、2048倍稀释液各25μL，每孔加入25μL 0.5％鸡血红细胞，室温放置30min，记录发生血凝的最大稀释度(即HA滴度)。
结果见图6。干扰IVDN8表达的细胞株释放的病毒毒粒低于对照细胞。结果提示，通过干扰IVDN8表达的方法，可减少细胞内的病毒复制或毒粒释放。
实施例3、IVDN8A过表达实验
一、重组质粒丙的构建
1、提取A549细胞的RNA并反转录为cDNA。
2、以步骤1的cDNA为模板，用IVDN8A-F和IVDN8A-R组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
IVDN8A-F：5’-tttgagatctacggcgtcggttg-3’；
IVDN8A-R：5’-tggtgaattcgagaggtggactcac-3’。
3、用限制性内切酶BglII和EcoRI酶切步骤2的PCR扩增产物，得到酶切产物。
4、用限制性内切酶BglII和EcoRI酶切pMIG逆转录病毒表达载体(Addgene公司)，回收载体骨架(约6000bp)。
5、将步骤3的酶切产物和步骤4的载体骨架连接，得到重组质粒丙。根据测序结果，对重组质粒丙进行结构描述如下：在pMIG逆转录病毒表达载体的BglII和EcoRI酶切位点之间插入序列表的序列1所示双链DNA得到的重组质粒。
二、IVDN8过表达对病毒复制的影响
(一)重组细胞和对照细胞的获得
将重组质粒丙与包装质粒共转染293T细胞，包装出携带IVDN8A片段编码DNA的假病毒颗粒，然后将所述假病毒颗粒感染A549细胞，得到重组细胞丙(pMIG-IVDN8A细胞株)。重组质粒丙、pCL-Eco质粒和pCMV-VSV-G质粒的质量比1∶1∶1。
按照以上方法，将pMIG逆转录病毒表达载体与包装质粒共转染293T细胞，包装出假病毒颗粒，然后将所述假病毒颗粒感染A549细胞，得到对照细胞乙(pMIG细胞株)。pMIG逆转录病毒表达载体、pCL-Eco质粒和pCMV-VSV-G质粒的质量比1∶1∶1。
(二)重组细胞和对照细胞中IVDN8表达水平的鉴定
提取重组细胞丙或对照细胞乙的RNA，并反转录为cDNA。以cDNA为模板，用DN8M-F和DN8M-R组成的引物对进行PCR鉴定(靶序列约为793bp)。
结果见图7。pMIG-IVDN8A细胞株中IVDN8的表达量显著高于pMIG细胞株。
(三)IVDN8过表达对病毒复制的影响
将IVDN8A细胞株和pMIG细胞株分别进行如下实验：
1、细胞使用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养于37℃，5％CO2恒温培养箱。
2、吸弃步骤1的细胞培养上清，加入感染液和WSN毒株(MOI＝0.8)，孵育1小时。
3、将步骤2的细胞换用新感染液，继续培养24小时。
4、不同时间(感染后10h-24h)取步骤3的细胞培养上清，通过血凝试验观察病毒复制水平。血凝试验具体步骤同实施例3的步骤三的4。
结果见图8。过表达细胞株(pMIG-IVDN8A)释放至上清中的病毒高于对照细胞(pMIG)。这表明IVDN8的功能活性是参与并促进流感病毒的感染复制过程。
Claims (10)
1.一种shRNA，其生成siRNA，所述siRNA为反向互补的双链RNA，其中的一条链如序列表的序列11所示。
2.一种shRNA，其生成siRNA，所述siRNA为反向互补的双链RNA，其中的一条链如序列表的序列13所示。
3.编码权利要求1或2所述shRNA的DNA分子。
4.含有权利要求3所述DNA分子的重组载体。
5.抑制IVDN8表达的产品在制备药物中的应用；所述药物的作用为如下（a）和/或（b）和/或（c）：（a）抑制流感病毒；（b）抑制流感病毒在细胞中的复制和/或释放；（c）治疗和/或预防流感；IVDN8为一种长链非编码RNA，由序列表的序列1至序列5中任一所示DNA分子编码。
6.一种药物，它的活性成分为抑制IVDN8表达的产品；所述药物的作用为如下（a）和/或（b）和/或（c）：（a）抑制流感病毒；（b）抑制流感病毒在细胞中的复制和/或释放；（c）治疗和/或预防流感；IVDN8为一种长链非编码RNA，由序列表的序列1至序列5中任一所示DNA分子编码。
7.序列表的序列1所示的DNA片段或序列表的序列1所示的DNA片段编码的RNA。
8.含有权利要求7所述DNA片段的重组质粒。
9.权利要求7所述DNA、权利要求7所述RNA或权利要求8所述重组质粒在制备产品中的应用；所述产品的作用为促进流感病毒在细胞中的复制和/或释放。
10.IVDN8作为靶点在开发治疗和/或预防流感的药物中的应用；IVDN8为一种长链非编码RNA，由序列表的序列1至序列5中任一所示DNA分子编码。
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| Alexander Karlas et al.Genome-wide RNAi screen identifies human host factors crucial for influenza virus replication.《nature》.2010,第463卷 |
| Diversification of transcriptional modulation Large-scale identification and characterization of putative alternative promoters of human genes;Kouichi Kimura et al;《Genome Res》;20061231;55-65 * |
| Genome-wide RNAi screen identifies human host factors crucial for influenza virus replication;Alexander Karlas et al;《nature》;20100211;第463卷;818-824 * |
| Human host factors required for influenza virus replication;Renate Ko¨nig et al;《nature》;20100211;第463卷;813-817 * |
| Inhibition of influenza virus production in virus-infected mice by RNA interference;Qing Ge et al;《PNAS》;20040608;第101卷(第23期);8676–8681 * |
| Kouichi Kimura et al.Diversification of transcriptional modulation Large-scale identification and characterization of putative alternative promoters of human genes.《Genome Res》.2006, |
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| 刘振龙等.宿主BST_2_抗甲型流感病毒_IAV_药物的新靶点.《2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集》.2011, |
| 宿主BST_2_抗甲型流感病毒_IAV_药物的新靶点;刘振龙等;《2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集》;20111231;1-14 * |
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