CN101157683A

CN101157683A - 硫酸酯酶抑制剂

Info

Publication number: CN101157683A
Application number: CNA2006101399993A
Authority: CN
Inventors: 让·拉斐; 贝努伊特·龙多特; 丹尼斯·卡尼亚托; 葆拉·邦尼特; 蒂里·克拉克; 杰奎琳·希尔兹; 艾戈尔·达克; 埃里克·杜兰蒂
Original assignee: Laboratoire Theramex SAM
Current assignee: Laboratoire Theramex SAM
Priority date: 2006-10-08
Filing date: 2006-10-08
Publication date: 2008-04-09

Abstract

本发明涉及式(Ia)或(Ib)的氨基磺酸苯并噻吩酯化合物，其中R₁，R₂，R'₂，R₃，m和n如说明书中所定义。本发明还涉及含有这些化合物的药物组合物和使用它们的方法。

Description

硫酸酯酶抑制剂

发明领域

本发明一般涉及类固醇激素，更具体地涉及新氨基磺酸苯并噻吩酯衍生物，它们是酶类固醇硫酸酯酶的抑制剂。本发明还涉及含有这些衍生物的药物组合物和使用它们的方法。

发明背景

酶类固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2.，STS)催化硫酸雌酮水解成雌酮，硫酸DHEA水解成DHEA(Dibbelt L，Biol.Chem，Hoppe-Seyler，1991，372，173-185和Stein C，J.Biol.Chem.，1989，264，13865-13872)。

类固醇硫酸酯酶途径近来在乳腺癌方面成为感兴趣的焦点，与由硫酸雌酮(E₁S)的大量循环汇集的雌激素局部组织内形成有关(Pasqualini JR，J.Steroid Biochem.Mol.Biol.，1999，69，287-292和Purohit A，Mol.Cell.Endocrinol.，2001，171，129-135)。

这种酶的抑制将阻止E₁S产生游离雌酮(E₁)，它随后可通过酶还原转变成雌二醇(E₂)。除雌酮硫酸酯酶途径外，人们现在认为由在DHEA-S水解后的DHEA得到的另一种有效的雄烯二醇(adiol)可能是在支持激素依赖的乳腺癌的生长和发展中的另一种重要途径。

在人体中雌激素的形成在附图1中示意说明。

在患有激素依赖性癌症的患者中，目前将芳化酶抑制剂用于预防雌激素合成，然而，临床试验显示对雌激素受体阳性肿瘤的患者相对缺乏效力(Castiglione-Gertsch M，Eur.J.Cancer，1996，32A，393-395 and Jonat W，Eur.J.Cancer，1996，32A，404-412)。作为解释，类固醇硫酸酯酶途径可能是乳腺肿瘤中雌激素形成的另一种重要途径。

EMATE(Ahmed S，Curr.Med.Chem.，2002，9，2，263-273)，雌酮-3-氨基磺酸酯是过去的标准类固醇硫酸酯酶抑制剂，但由于其抑制机理，具有雌激素的主要缺点：在酶失活过程中氨基磺酸部分断裂，没有由E₁S而是由EMATE本身释放E₁(Ahmed S，J.Steroid Biochem.Mol.Biol.，2002，80，429-440)。

其它释放没有雌激素性质的衍生物的非类固醇氨基磺酸酯化合物作为可接受的候选药物提出，尤其是6，6，7-COUMATE，一种文献中的标准非雌激素硫酸酯酶抑制剂(Purohit A，Cancer Res.，2000，60，3394-3396)。

因此，从治疗特定雌激素依赖性疾病的角度考虑，需要类固醇硫酸酯酶抑制剂。

发明概述

本发明的目的是提供氨基磺酸苯并噻吩酯(sulfamate benzothiophene)衍生物，它们是有效的硫酸酯酶抑制剂。

本发明的另一目的是提供含有作为活性成分的如上所述的氨基磺酸苯并噻吩酯衍生物的药物组合物。

本发明的另一目的是提供氨基磺酸苯并噻吩酯衍生物在制备用于治疗或预防各种疾病和用于在女性、男性以及雌性和雄性野生或家畜中控制生殖功能的药物中的用途。

本发明的氨基磺酸苯并噻吩酯衍生物可用如下通式(Ia)或(Ib)表示：

其中：

-R₁是H、(C₁-C₆)烷基、(C₂-C₆)烯基、(C₃-C₁₂)环烷基或(C₃-C₁₂)环烯基，其中环烷基和环烯基任选被(C₁-C₄)烷基单-或二取代；

-R₂是H；

-R’₂是(C₁-C₆)烷基或(C₃-C₁₂)环烷基；

-R₃是H、(C₁-C₆)烷氧基或卤素；

-m是0、1、2；

-n是0、1、2；

-当m是0时，R₁和R₂还可一起形成基团-(CH₂)_p-，其中p是3、4或5；-虚线表示氨基磺酸基团在苯并噻吩环的5-或6位。

在式(Ia)或(Ib)化合物中，尤其优选满足至少如下条件之一的化合物：

-R₁是氢、(C₁-C₆)烷基或任选被(C₁-C₄)烷基单-或二取代的(C₃-C₁₂)环烷基，优选R₁是任选被(C₁-C₄)烷基单-或二取代的(C₃-C₁₀)环烷基；

-m是0或1；

-R₃是氢；

-n是0或2；

-氨基磺酸基团在苯并噻吩环的6位。

在说明书和所附的权利要求中，(C₁-C₄)或(C₁-C₆)烷基被理解为表示分别含有1-4或1-6个碳原子的直链或支链饱和烃链。该烷基是例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基或己基。

(C₁-C₆)烷氧基理解为表示基团-OR，其中R是如上定义的(C₁-C₆)烷基。

(C₃-C₁₂)环烷基被理解为表示含有3-12个碳原子的饱和单-或二环烃基。(C₃-C₁₂)环烷基是例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环癸基或金刚烷基。

卤素被理解为表示氯、溴、氟或碘原子。

(C₂-C₆)烯基被理解为表示含有2-6个碳原子的直链或支链不饱和烃链。(C₂-C₆)烯基是例如乙烯或丙烯、丁烯、戊烯或己烯基。

(C₃-C₁₂)环烯基被理解为表示含有3-12个碳原子的不饱和单-或二环烃。(C₃-C₁₂)环烯基是例如环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环辛烯基、环癸烯基或金刚烯基。

考虑它们抑制类固醇硫酸酯酶的能力，与芳化酶抑制剂相比，为了排除(dry out)其它来源的内在雌激素，本发明的化合物可单独地或与一种或多种其它性内分泌治疗药物，例如抗雌激素，SERM(选择性雌激素受体调节剂)、抗芳化酶、抗雄激素、裂解酶抑制剂、孕酮或LH-RH激动剂或拮抗剂联合用于治疗或预防雌激素依赖性疾病或病症。本发明的化合物还可单独或与一种或多种其它治疗药物，例如LH-RH激动剂或拮抗剂、雌孕酮避孕药、孕酮、抗孕酮或前列腺素联合用于在人体或野生动物或家畜种类中控制或操纵雌激素调节的生殖功能，例如雄性或雌性生育力、怀孕、流产或分娩。

乳房是雌激素刺激的增殖和/或分化的敏感目标，本发明的化合物可用于在男人或女人或在雄性或雌性家畜中治疗或预防女性良性乳房疾病、男子女性型乳房和良性或转移或非转移的恶性乳腺肿瘤。本发明的化合物还可用于治疗或预防子宫或卵巢的良性或恶性疾病。在每种情况下，本发明的化合物单独地或与一种或多种其它性内分泌治疗药物，如上述的那些联合使用。

由于酶类固醇硫酸酯酶将硫酸DHEA转变为DHEA，一种活性雄激素(睾丸酮和二氢睾丸酮)的前体，本发明的化合物可单独或与一种或多种其它性内分泌治疗药物，例如抗雄激素、抗雌激素，SERM、抗芳化酶、孕酮、裂解酶抑制剂或LH-RH激动剂或拮抗剂联合用于治疗或预防雄激素依赖性疾病，例如雄激素性脱发(男性类型脱发)(Hoffman R等，J.Invest.Dermatol.，2001，117，1342-1348)或痤疮(Billich A等，1999，WO 9952890)、前列腺或睾丸的良性或恶性疾病(Reed MJ，Rev.Endocr.Relat.Cancer，1993，45，51-62)。

类固醇硫酸酯酶抑制剂还有效地包含在认识功能障碍治疗中，因为它们能够提高大鼠的学习和空间记忆(Johnson DA，Brain Res，2000，865，286-290)。硫酸DHEA作为神经类固醇影响许多神经递质系统，包括那些包含乙酰胆碱、谷氨酸酯和GABA的系统，导致增加的神经元兴奋性(Wolf OT，Brain Res.Rev，1999，30，264-288)。

此外，雌激素包含在Th₁和Th₂主要免疫功能间平衡的调节中，因此可用于治疗或预防性依赖性自身免疫疾病，例如狼疮、多发性硬化、风湿性关节炎等(Daynes RA，J.Exp.Med，1990，171，979-996)。类固醇硫酸酯酶抑制在啮齿动物的接触过敏和胶原诱导的关节炎模型中显示是被保护的(SuittersAJ，Immunology，1997，91，314-321)。

使用 2-MeOEMATE的研究显示类固醇硫酸酯酶抑制剂具有有效的雌二醇非依赖性生长抑制效果(MacCARTHY-MOOROGH L，Cancer Research，2000，60，5441-5450)。用本发明的具有低肿瘤类固醇硫酸酯酶抑制作用的化合物出乎意料地观察到肿瘤体积的减小。据此，本发明的化合物由于该新化学实体和无论组织，包括乳房、子宫内膜、卵巢、前列腺、睾丸或由其产生的转移的癌细胞内微管网络间的大量相互作用导致细胞分裂下降，因此，本发明的化合物可用于治疗非雌激素依赖性癌症。

因此，本发明的另一目的是提供治疗上述疾病或病症，尤其是雌激素依赖性疾病或病症，即雌激素诱导或雌激素刺激的疾病或病症的方法(GOLOB T，Bioorg.Med.Chem.，2002，10，3941-3953)。该方法包括向需要的患者(人或动物)给药治疗有效量的式(I)化合物。

含有活性成分的药物组合物可以是适合口服使用的形式，例如片剂、锭剂、糖锭、水或油悬浮液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊、或糖浆或酏剂。用于口服使用的组合物可根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法制备，该组合物可含有一种或多种附加剂，其选自增甜剂、调味剂、着色剂和防腐剂，以提供可药用的精致和可口的制剂。片剂含有与适用于制备片剂的无毒可药用赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒和崩解剂，例如玉米淀粉或褐藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯树胶和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣的或它们可用已知技术包衣以在胃肠道中延迟崩解和吸收，从而提供在较长时间内的持续作用。例如可采用时间延迟材料，例如甘油基硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。片剂可以用在US4,256,108、4,166,452或4,265,874中描述的技术包衣以形成用于控制释放的渗透性治疗片剂。

用于口服使用的制剂还可作为硬明胶胶囊存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或作为软明胶胶囊存在，其中活性成分与水或油介质，例如花生油、液体石蜡或橄栏油混合。

含水悬浮液含有与适用于制备含水洗悬浮的赋形剂混合的活性成分。该赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、黄芪胶和阿拉伯胶；分散剂或增湿剂，例如天然磷脂，例如卵磷脂或氧化烯与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，例如十七乙烯氧基十六烷醇或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇得到的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯。含水悬浮液还可含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙基或正丙基酯、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂和一种或多种增甜剂，例如蔗糖、糖精或天冬氨酰苯丙氨酸甲酯。

含油悬浮液可通过将活性成分悬浮在植物油，例如落花生油、橄栏油、芝麻油或椰子油、或在矿物油，例如液体石蜡中配制。含油悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。增甜剂，例如上述的物质，和调味剂可加入以提供可口口服制剂。这些组合物可通过加入抗氧化剂，例如抗坏血酸防腐。

适用于通过加入水制备含水悬浮液的可分散粉末和颗粒提供与分散剂或增湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或增湿剂和悬浮剂由上面已提到的物质举例说明的。还可存在附加的赋形剂，例如增甜剂、调味剂和着色剂。本发明的药物组合物还可以是水包油乳液形式。油相可以是植物油，例如橄栏油或落花生油或矿物油，例如液体石蜡或它们的混合物。合适的乳化剂可以是天然磷酯，例如大豆、卵磷脂和由脂肪酸和己糖醇酐得到的酯或偏酯，例如脱水山梨糖醇单油酸酯和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳液还可含有增甜剂和调味剂。

本发明的药物组合物可以是无菌可注射含水或含油悬浮液形式。悬浮液可根据已知方法配制，使用上面提及的合适的分散剂或增湿剂和悬浮液。无菌可注射制剂还可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮剂，例如在1，3-丁二醇中的溶液。在可使用的可接受的赋形剂和溶剂中，可提及水、Ringer溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发油按常规用作溶剂或悬浮介质。为此，可使用任何刺激性少的不挥发油，包括合成单-或二甘油酯，此外，脂肪酸，例如油酸发现用于制备注射剂。

本发明的化合物可以每天每公斤体重约0.0001mg-约10mg的剂量水平用于治疗上述疾病或病症，或者每个患者每天约0.01mg-约100mg。

可与载体物质混合以制备单一剂量形式的活性成分的数量将根据所治疗的宿主和给药的具体方式变化。

然而，应理解对于任何特定患者，具体剂量水平将取决于各种因素，包括年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、药物联用和所治疗的具体疾病的严重程度。

式(I)的氨基磺酸苯并噻吩酯衍生物可根据如下一般图解1制备。

图解1

根据图解1，3-甲氧基苯硫酚(1)与2-溴-1，1-二乙氧基乙烷缩合，硫-化合物中间体(2)用不同的酸：多磷酸(Bioor.Med.Chem.Lett，1999，9，759-64)或甲磺酸环化得到6-甲氧基-苯并噻吩(3)。该化合物还可通过使路易斯酸，三氟硼烷与化合物(2)使用S.Graham描述的条件(J.Med.Chem，1989，32，2548-54)反应制备。

6-甲氧基-苯并噻吩(3)用N-溴琥珀酰亚胺和APTS采用Y.Fort描述的条件(Tetrahedron.1994，50，11893-902)转化为溴衍生物(4)。(4)转变成有机镁溴化物，随后采用标准条件与酮或醛缩合以得到单取代的苯并噻吩(5)。

二取代的苯并噻吩(9)可用Kano.S描述的条件(Heterocycles，1982，19，6，1033-37)通过单取代的化合物(5)的烷基化制备。

其中R₁和R₂一起形成基团-(CH₂)_p-的化合物，例如7-甲氧基-1，2，3，4-四氢二苯并噻吩(p＝4)可用Oliveira.M描述的条件(Tetrahedron，2002，58，1709-18)制备。

单取代的(5)或二取代的(9)甲氧基苯并噻吩用三氟硼烷用McOmie.J.F.W描述的条件(Tetrahedron，1968，24，2289-92)脱保护得到羟基化合物(6)和(10)。这些化合物通过用氢化钠处理，用酰氨基氯磺酸处理(Nussbaumer.P，J Med Chem，2002，45，4310-20)或与氨基磺酰氯在二甲基乙酰胺(DMAc)中反应(Makoto.O，Tetrahedron letters，2000，41，7047-51)转变为相应的氨基磺酸酯(7)和(11)。

(7)和(11)用过氧化氢在三氟乙酸中用GRIVAS S.和RONNE E.描述的条件(Acta Chemica Scandinavia，1995，49，225-229)氧化得到最终苯并噻吩(8)和(12)。

其中氨基磺酸酯基团在苯并噻吩环的5位上的式(I)化合物可以用相同方法，但用4-甲氧基硫代噻吩为原料制备。

附图说明

图1示意说明在人体中雌激素的形成。

如下实施例用于举例说明，但不限制本发明的范围。

3-溴-6-甲氧基苯并噻吩(4)的制备

实施例1：6-甲氧基苯并噻吩(3)

将溴乙醛二乙基缩醛(16.50ml，0.11mol)在室温下滴加到在丙酮(150ml)中的间甲氧基苯硫酚(1)(15ml，0.12mol)和K₂CO₃(16.60g，0.12mol)的混合物中。反应混合物搅拌16小时，随后过滤。固体用丙酮洗涤，合并的滤液真空浓缩。残余物用水洗涤，用Et₂O萃取。有机相用0.5M KOH、水和盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤和真空浓缩得到27.40g化合物(2)暗黄色油。

¹H-NMR(CDCl₃)：1.18(t，6H)，3.13(d，2H)，3.43-3.73(m，4H)，3.77(s，3H)，4.67(t，1H)，6.60-7.27(m，4H)。

在氮气气氛和室温下，将(2)(13.00g，0.051mol)在CH₂Cl₂(100ml)中的溶液滴加到BF₃.Et₂O(6.70ml，0.054mol)在CH₂Cl₂(1000ml)中的溶液中。水解后，反应混合物搅拌直至两相变成透明。分离CH₂Cl₂层，水层用CH₂Cl₂萃取，合并的有机相用Na₂SO₄干燥，过滤和真空浓缩得到8.68g的4和6-甲氧基苯并噻吩(3)的1∶10混合物暗棕色油。粗产物无需纯化而使用。

主要异构体(3)¹H-NMR(CDCl₃)：3.85(s，3H)，6.98(dd，1H)，7.23(s，2H)，7.35(d，1H)，7.68(d，1H)。

实施例2：2-溴-6-甲氧基苯并噻吩(4)

将N-溴琥珀酰亚胺(14.70g，82.59mmol)和对甲苯磺酸(2.70g，15.68mmol)加入苯并噻吩(3)(15.10g，92.07mmol)在1，2-二氯乙烷(300ml)中的溶液中。混合物保持在70℃35分钟，在冰浴中冷却，过滤除去琥珀酰亚胺。溶液用饱和碳酸氢钠溶液萃取，用Na₂SO₄干燥，过滤和真空浓缩得到22.00g油。由戊烷结晶得到白色固体(16.50g，74％)，熔点62℃。

¹H-NMR(CDCl₃)：3.85(s，3H)，6.9(dd，1H)，7.50(m，2H)，7.65(d，1H)

单取代的苯并噻吩(5)的制备

实施例3：2-环己基-6-甲氧基苯并噻吩

在氩气氛下向在Et₂O(20ml)中的Mg(0.22g，9.05mmol)中滴加溴化物(4)(2.00g，8.23mmol)在Et₂O(20ml)中的溶液。混合物回流2小时，加入环己酮(1.00ml，9.87mmol)在Et₂O(5ml)中的溶液。混合物回流，倒入水中。溶液用乙酸乙酯萃取，用Na₂SO₄干燥，过滤和真空浓缩得到8.00g油。由二异丙基醚中研制得到2-(1-羟基环己基)-6-甲氧基苯并噻吩白色粉末(0.90g，65％)。

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.20-2.00(m，10H)，3.80(s，3H)，5.30(s，1H)，6.93(dd，1H)，7.10(s，1H)，7.42(d，1H)，7.60(d，1H)。

在氩气氛下向在二氯甲烷(10ml)中的2-(1-羟基环己基)-6-甲氧基苯并噻吩(0.30g，1.14mmol)中滴加三乙基甲硅烷(0.22ml，1.37mmol)。随后溶液在0℃搅拌，加入三氟乙酸(5.00ml，67.31mmol)。在室温下2小时后，将混合物倾入饱和NaHCO₃水溶液和冰中，用乙酸乙酯萃取，用Na₂SO₄干燥，过滤和真空浓缩得到0.30g油(100％)。由二异丙基醚中结晶得到白色结晶(0.20g，70％)。

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.00-2.20(m，11H)，2.72(m，1H)，3.75(s，3H)，6.93(dd，1H)，7.01(s，1H)，7.43(d，1H)，7.58(d，1H)。

用相同的方法，但用如下化合物代替环己酮：

-环戊酮

-环庚酮

-环辛酮

-环癸酮

-4-甲基环己酮

-2-甲基环己酮

2，2-二甲基环戊酮

2-金刚烷酮

-丙醛

-己醛

-环己烷甲醛

-环庚烷甲醛(根据J.G. Traynham等，Tetrahedron，7，1959，165-72制备)，

分别得到如下化合物：

实施例4：2-环戊基-6-甲氧基苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.40-2.20(m，8H)，2.72(m，1H)，3.80(s，3H)，6.94(dd，1H)，7.13(s，1H)，7.45(d，1H)，7.64(d，1H)。

实施例5：2-环庚基-6-甲氧基苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.40-2.20(m，12H)，3.05(m，1H)，3.80(s，3H)，6.90(dd，1H)，7.00(s，1H)，7.41(d，1H)，7.57(d，1H)。

实施例6：2-环辛基-6-甲氧基苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.20-2.15(m，14H)，3.10(m，1H)，3.77(s，3H)，6.92(dd，1H)，7.01(s，1H)，7.41(d，1H)，7.58(d，1H)。

实施例7：2-环癸基-6-甲氧基苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.20-2.15(m，18H)，3.12(m，1H)，3.75(s，3H)，6.92(dd，1H)，7.01(s，1H)，7.40(d，1H)，7.55(d，1H).

实施例8：2-(4-甲基环己基)-6-甲氧基苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.70-2.15(m，12H)，2.72(m，0.5H，非对映异构体)，2.99(m，0.5H，非对映异构体)，3.76(s，3H)，6.92(dd，1H)，7.02(s，1H)，7.41(d，1H)，7.58(d，1H)。

实施例9：2-(2-甲基环己基)-6-甲氧基苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.70-2.20(m，12H)，2.70(m，0.5H，非对映异构体)，3.02(m，0.5H，非对映异构体)，3.75(s，3H)，6.92(dd，1H)，7.02(s，1H)，7.40(d，1H)，7.55(d，1H)。

实施例10：2-(2，2-二甲基环戊基)-6-甲氧基苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.70(s，3H)，1.10(s，3H)，1.45-2.20(m，6H)，2.93(m，1H)，3.78(s，3H)，7.02(dd，1H)，7.04(s，1H)，7.43(d，1H)，7.60(d，1H)。

实施例11：2-(2-金刚烷基)-6-甲氧基苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.40-2.40(m，14H)，3.19(br s，1H)，3.79(s，3H)，6.92(dd，1H)，7.08(s，1H)，7.43(d，1H)，7.60(d，1H)。

实施例12：2-丙基-6-甲氧基苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.95(t，3H)，1.68(m，2H)，2.78(t，2H)，3.79(s，3H)，6.92(dd，1H)，7.00(s，1H)，7.43(d，1H)，7.58(d，1H)。

实施例13：2-己基-6-甲氧基苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.85(t，3H)，1.10-1.80(m，8H)，2.82(t，2H)，3.79(s，3H)，6.92(dd，1H)，7.01(s，1H)，7.45(d，1H)，7.58(d，1H)。

实施例14：2-环己基甲基-6-甲氧基苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.75-1.85(m，11H)，2.70(d，2H)，3.80(s，3H)，6.92(dd，1H)，7.00(s，1H)，7.42(d，1H)，7.59(d，1H)。

实施例15：2-环庚基甲基-6-甲氧基苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.00-1.90(m，13H)，2.71(d，2H)，3.80(s，3H)，6.93(dd，1H)，7.00(s，1H)，7.42(d，1H)，7.59(d，1H)。

单取代的苯并噻吩(6)的制备

实施例16：2-环己基-苯并噻吩-6-醇

将2-环己基-6-甲氧基苯并噻吩(4.00g，16.0mmol)在40ml二氯甲烷中的溶液在室温下加入到三溴化硼溶液(24ml，24mmol)中。在室温下2小时后，混合物用饱和NaHCO₃水溶液水解，用二氯甲烷萃取，用Na₂SO₄干燥，过滤和真空浓缩得到醇(3.60g油，97％)。

¹H-NMR(CDCl₃)：1.10-2.10(m，10H)，2.80(m，1H)，6.78(dd，1H)，6.94(s，1H)，7.17(d，1H)，7.48(d，1H)，9.42(s，1H，OH)。

采用相同的方法，但用如下化合物代替2-环己基-6-甲氧基苯并噻吩：

-2-环戊基-6-甲氧基苯并噻吩

-2-环庚基-6-甲氧基苯并噻吩

-2-环辛基-6-甲氧基苯并噻吩

-2-环癸基-6-甲氧基苯并噻吩

-2-(4-甲基环己基)-6-甲氧基苯并噻吩

-2-(2-甲基环己基)-6-甲氧基苯并噻吩

-2-(2，2-二甲基环戊基)-6-甲氧基苯并噻吩

-2-(2-金刚烷基)-6-甲氧基苯并噻吩

-2-丙基-6-甲氧基苯并噻吩

-2-己基-6-甲氧基苯并噻吩

-2-环己基甲基-6-甲氧基苯并噻吩

-2-环庚基甲基-6-甲氧基苯并噻吩，

分别得到如下化合物：

实施例17：2-环戊基-苯并噻吩-6-醇

熔点11 6℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.45-2.20(m，8H)，3.25(m，1H)，6.78(dd，1H)，6.96(s，1H)，7.15(d，1H)，7.47(d，1H)，9,45(s，1H，OH)。

实施例18：2-环庚基-苯并噻吩-6-醇

熔点 140℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.35-2.15(m，12H)，3.00(m，1H)，6.79(dd，1H)，6.94(s，1H)，7.17(d，1H)，7.48(d，1H)，9,45(s，1H，OH)。

实施例19：2-环辛基-苯并噻吩-6-醇

熔点 100℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.35-2.10(m，14H)，3.07(m，1H)，6.78(dd，1H)，6.95(s，1H)，7.15(d，1H)，7.47(d，1H)，9，42(s，1H，OH)。

实施例20：2-环癸基-苯并噻吩-6-醇

熔点 108℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.30-2.10(m，18H)，3.22(m，1H)，6.79(dd，1H)，6.99(s，1H)，7.15(d，1H)，7.48(d，1H)，9，42(s，1H，OH)。

实施例21：2-(4-甲基环己基)-苯并噻吩-6-醇

熔点 132℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.70-2.10(m，12H)，2.70(m，1H)，6.80(dd，1H)，6.92(s，1H)，7.15(d，1H)，7.48(d，1H)，9，42(s，1H，OH)。

实施例22：2-(2-甲基环己基)-苯并噻吩-6-醇

熔点 125℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.60-2.20(m，12H)，3.05(m，1H)，6.80(dd，1H)，6.90(s，1H)，7.16(d，1H)，7.50(d，1H)，9，45(s，1H，OH)。

实施例23：2-(2，2-二甲基环戊基)-苯并噻吩-6-醇

熔点 90℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.70(s，3H)，1.09(s，3H)，1.45-2.20(m，6H)，2.92(dd，1H)，6.80(dd，1H)，6.99(s，1H)，7.17(d，1H)，7.51(d，1H)，9.45(s，1H，OH)。

实施例24：2-(2-金刚烷基)-苯并噻吩-6-醇

熔点 184℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.40-2.40(m，14H)，3.16(br s，1H)，6.80(dd，1H)，7.00(s，1H)，7.17(d，1H)，7.50(d，1H)，9，43(s，1H，OH)。

实施例25：2-丙基-苯并噻吩-6-醇

熔点 56℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.97(t，3H)，1.68(m，2H)，2.79(t，2H)，6.80(dd，1H)，6.96(s，1H)，7.17(d，1H)，7.50(d，1H)，9.46(s，1H，OH)。

实施例26：2-己基-苯并噻吩-6-醇

熔点 68℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.85(t，3H)，1.10-1.80(m，8H)，2.78(t，2H)，6.79(dd，1H)，6.95(s，1H)，7.16(d，1H)，7.48(d，1H)，9.45(s，1H，OH)。

实施例27：2-环己基甲基-苯并噻吩-6-醇

熔点 97℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.75-1.80(m，11H)，2.68(d，2H)，6.78(dd，1H)，6.91(s，1H)，7.16(d，1H)，7.49(d，1H)，9.45(s，1H，OH)。

实施例28：2-环庚基甲基-苯并噻吩-6-醇

熔点 82℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.00-1.90(m，13H)，2.72(d，2H)，6.80(dd，1H)，6.92(s，1H)，7.18(d，1H)，7.49(s，1H)，9.48(s，1H，OH)。

制备氨基磺酸单取代苯并噻吩酯(7)

实施例29：氨基磺酸，2-环己基-苯并噻吩-6-基酯

在0℃将氢化钠(0.60g，24.8mmol)小心地加入2-环己基-苯并噻吩-6-醇(3.60g，15.50mmol)在无水DMF(36ml)中的溶液中，在室温下搅拌30分钟和在50℃搅拌30分钟后，将混合物冷却(冰/水)，加入酰氨基氯磺酸(4.45g，38.00mmol)。在室温下3小时后，混合物用饱和NH₄Cl水溶液水解，用乙酸乙酯萃取，用Na₂SO₄干燥，过滤和真空浓缩得到粗产物(4.80g油)。经硅胶快速色谱法(甲苯/1，4-二噁烷，8/2)纯化得到透明的油，其由乙醇结晶得到标题产物(0.50g，10％，熔点128℃)。

¹H-NMR(CDCl₃)：1.15-2.20(m，10H)，2.90(m，1H)，7.18(s，1H)，7.24(dd，1H)，7.30(d，1H)，7.32(s，1H)，7.98(s，2H，NH₂)。

采用相同的方法但用如下化合物代替2-环己基苯并噻吩-6-醇：

-2-环戊基-苯并噻吩-6-醇

-2-环庚基-苯并噻吩-6-醇

-2-环辛基-苯并噻吩-6-醇

-2-环癸基-苯并噻吩-6-醇

-2-(4-甲基环己基)-苯并噻吩-6-醇

-2-(2-甲基环己基)-苯并噻吩-6-醇

-2-(2，2-二甲基环戊基)-苯并噻吩-6-醇

-2-(2-金刚烷基)-苯并噻吩-6-醇

-2-丙基-苯并噻吩-6-醇

-2-己基-苯并噻吩-6-醇

-2-环己基甲基-苯并噻吩-6-醇

-2-环庚基甲基-苯并噻吩-6-醇，

分别得到如下化合物：

实施例30：氨基磺酸，2-环戊基-苯并噻吩-6-基酯

熔点 110℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.50-2.30(m，8H)，3.39(m，1H)，7.20(s，1H)，7.72(dd，1H)，7.78(d，1H)，7.95(s，2H，NH₂)。

实施例31：氨基磺酸，2-环庚基-苯并噻吩-6-基酯

熔点 132℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.35-2.20(m，12H)，3.12(m，1H)，7.19(s，1H)，7.24(dd，1H)，7.75(d，1H)，7.80(d，1H)，7.95(s，2H，NH₂)。

实施例32：氨基磺酸，2-环辛基-苯并噻吩-6-基酯

熔点 126℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.90-2.20(m，14H)，3.18(m，1H)，7.17(s，1H)，7.23(dd，1H)，7.76(d，1H)，7.80(d，1H)，7.95(s，2H，NH₂)。

实施例33：氨基磺酸，2-环癸基-苯并噻吩-6-基酯

熔点 98℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.30-2.10(m，18H)，3.31(m，1H)，7.20(s，1H)，7.23(dd，1H)，7.76(d，1H)，7.79(d，1H)，7.96(s，2H，NH₂)。

实施例34：氨基磺酸，2-(4-甲基环己基)-苯并噻吩-6-基酯

熔点 132℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.75-2.15(m，12H)，2.55(m，1H)，7.25(s，1H)，7.55(dd，1H)，7.60(d，1H)，7.70(d，1H)，8.25(s，2H，NH₂)。

实施例35：氨基磺酸，2-(2-甲基环己基)-苯并噻吩-6-基酯

熔点 110℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.65-2.30(m，12H)，3.15(m，1H)，7.05-7.35(m，2H)，7.70-7.89(m，2H)，7.97(s，2H，NH₂)。

实施例36：氨基磺酸，2-(2，2-二甲基环戊基)-苯并噻吩-6-基酯

熔点 72℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.70(s，3H)，1.10(s，3H)，1.45-2.30(m，6H)，3.02(dd，1H)，7.20(s，1H)，7.23(dd，1H)，7.78(d，1H)，7.80(s，1H)，7.96(s，2H，NH₂)。

实施例37：氨基磺酸，2-(2-金刚烷基)-苯并噻吩-6-基酯

熔点 185℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.50-2.40(m，12H)，3.37(br s，1H)，7.24(m，2H)，7.80(d，1H)，7.82(s，1H)，7.97(s，2H，NH₂)。

实施例38：氨基磺酸，2-丙基-苯并噻吩-6-基酯

熔点 112℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.96(t，3H)，1.70(m，2H)，2.88(t，2H)，7.19(s，1H)，7.24(dd，1H)，7.78(d，1H)，7.80(s，1H)，7.97(s，2H，NH₂)。

实施例39：氨基磺酸，2-己基-苯并噻吩-6-基酯

熔点 125℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.95(t，3H)，1.10-1.80(m，8H)，2.88(t，2H)，7.19(s，1H)，7.22(dd，1H)，7.77(d，1H)，7.79(s，1H)，7.96(s，2H，NH₂)。

实施例40：氨基磺酸，2-环己基甲基-苯并噻吩-6-基酯

熔点 115℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.80-1.80(m，11H)，2.78(d，2H)，7.16(s，1H)，7.24(dd，1H)，7.77(d，1H)，7.79(s，1H)，7.97(s，2H，NH₂)。

实施例41：氨基磺酸，2-环庚基甲基-苯并噻吩-6-基酯

熔点 90℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.00-2.00(m，13H)，2.82(d，2H)，7.18(s，1H)，7.22(dd，1H)，7.78(d，1H)，7.80(s，1H)，7.97(s，2H，NH₂)。

单或二氧化的单取代的化合物(8)的制备

实施例42：氨基磺酸，2-环己基-苯并噻吩-6-基-1-氧化物酯

向在二氯甲烷(20ml)和三氟乙酸(5ml)中的氨基磺酸，2-环己基-苯并噻吩-6-基酯(1.00g，3.21mmol)溶液中加入35％过氧化氢水溶液(0.35ml，3.42mmol，1.05当量)。在50℃2小时后，混合物用饱和NaHCO₃水溶液水解，用二氯甲烷萃取，用Na₂SO₄干燥，过滤和真空浓缩得到粗产物。经硅胶快速色谱法纯化(甲苯/1，4-二噁烷：6/4)得到透明油，其由乙醇结晶得到标题产物(0.25g，24％，熔点 110℃)。

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.10-2.15(m，10H)，2.72(m，1H)，7.10(s，1H)，7.45(dd，1H)，7.64(d，1H)，7.84(d，1H)，8.16(s，2H，NH₂)。

用相同的方法，但用氨基磺酸，2-环癸基-苯并噻吩-6-基酯代替氨基磺酸，2-环己基-苯并噻吩-6-基酯，

得到如下化合物：

实施例43：氨基磺酸，2-环癸基-苯并噻吩-6-基酯-1-氧化物

熔点 146℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.35-2.10(m，18H)，3.12(m，1H)，7.15(s，1H)，7.45(dd，1H)，7.62(d，1H)，7.83(d，1H)，8.15(s，2H，NH₂)。

用实施例42的方法，但用2.2当量过氧化氢，得到如下化合物：

实施例44：氨基磺酸，2-环己基-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 180℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.15-2.15(m，10H)，2.52(m，1H)，7.30(s，1H)，7.53(dd，1H)，7.63(d，1H)，7.71(d，1H)，8.25(s，2H，NH₂)。

用相同的方法，但用如下化合物代替氨基磺酸，2-环己基-苯并噻吩-6-基酯：

-氨基磺酸，2-环庚基-苯并噻吩-6-基酯

-氨基磺酸，2-环辛基-苯并噻吩-6-基酯

-氨基磺酸，2-环癸基-苯并噻吩-6-基酯

-氨基磺酸，2-(4-甲基环己基)-苯并噻吩-6-基酯

-氨基磺酸，2-(2-甲基环己基)-苯并噻吩-6-基酯

-氨基磺酸，2-(2，2-二甲基环戊基)-苯并噻吩-6-基酯

-氨基磺酸，2-(2-金刚烷基)-苯并噻吩-6-基酯

-氨基磺酸，2-丙基-苯并噻吩-6-基酯

-氨基磺酸，2-己基-苯并噻吩-6-基酯

-氨基磺酸，2-环己基甲基-苯并噻吩-6-基酯

-氨基磺酸，2-环庚基甲基-苯并噻吩-6-基酯，

分别得到如下化合物：

实施例45：氨基磺酸，2-环庚基-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 137℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.35-2.15(m，12H)，2.75(m，1H)，7.32(s，1H)，7.52(dd，1H)，7.61(d，1H)，7.70(d，1H)，8.25(s，2H，NH₂)。

实施例46：氨基磺酸，2-环辛基-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 122℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.35-2.10(m，14H)，2.81(m，1H)，7.32(s，1H)，7.52(dd，1H)，7.61(d，1H)，7.70(d，1H)，8.22(s，2H，NH₂)。

实施例47：氨基磺酸，2-环癸基-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 102℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.35-2.10(m，18H)，2.97(m，1H)，7.38(s，1H)，7.52(dd，1H)，7.60(d，1H)，7.70(d，1H)，8.22(s，2H，NH₂)。

实施例48：氨基磺酸，2-(4-甲基环己基)-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 170℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.75-2.20(m，12H)，2.83(m，1H)，7.18(s，1H)，7.22(dd，1H)，7.78(d，1H)，7.80(d，1H)，7.95(s，2H，NH₂)。

实施例49：氨基磺酸，2-(2-甲基环己基)-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 92℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.70-2.45(m，12H)，2.85(m，1H)，7.25(s，1H)，7.52(m，3H)，8.25(s，2H，NH₂)。

实施例50：氨基磺酸，2-(2，2-二甲基环戊基)-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 172℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.90(s，3H)，1.16(s，3H)，1.50-2.15(m，6H)，2.66(t，1H)，7.49(s，1H)，7.52(dd，1H)，7.61(d，1H)，7.70(d，1H)，8.24(s，2H，NH₂)。

实施例51：氨基磺酸，2-(2-金刚烷基)-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 230℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.45-2.45(m，14H)，3.04(br s，1H)，7.38(s，1H)，7.53(d，1H)，7.64(d，1H)，7.70(d，1H)，8.25(s，2H，NH₂)。

实施例52：氨基磺酸，2-丙基-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 159℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.99(t，3H)，1.70(m，2H)，2.49(t，2H)，7.29(s，1H)，7.52(dd，1H)，7.63(d，1H)，7.73(d，1H)，8.50(s，2H，NH₂)。

实施例53：氨基磺酸，2-己基-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 98℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.85(t，3H)，1.10-1.80(m，8H)，2.50(t，2H)，7.30(s，1H)，7.52(dd，1H)，7.62(d，1H)，7.73(d，1H)，8.27(s，2H，NH₂)。

实施例54：氨基磺酸，2-环己基甲基-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 132℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.80-1.95(m，11H)，2.40(d，2H)，7.30(s，1H)，7.53(dd，1H)，7.62(d，1H)，7.72(d，1H)，8.25(s，2H，NH₂).

实施例55：氨基磺酸，2-环庚基甲基-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 135℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.00-2.15(m，13H)，2.45(d，2H)，7.29(s，1H)，7.53(dd，1H)，7.62(d，1H)，7.73(d，1H)，8.25(s，2H，NH₂)。

制备二取代的6-甲氧基-苯并噻吩(9)

实施例56：2-环庚基-6-甲氧基-2-甲基-苯并噻吩

在-70℃向在无水THF(20ml)中的2-环庚基-6-甲氧基-苯并噻吩(2.00g，7.69mmol)溶液中滴加2.5M正丁基锂在己烷(5ml，12.16mmol)中的溶液。随后，将混合物在10分钟内温热到-30℃，冷却到-70℃，加入碘甲烷(1.0ml，15.38mmol)。将混合物温热到室温过夜，用饱和NH₄Cl水溶液水解，用乙酸乙酯萃取，干燥(Na₂SO₄)，过滤和真空浓缩得到2.1g油。经硅胶快速色谱法纯化(庚烷/乙酸乙酯：1/1)得到透明油(1.50g，72％)，它无需提纯而使用。

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.35-2.15(m，12H)，2.29(s，3H)，3.00(m，1H)，3.80(s，3H)，7.00(s，1H)，7.04(d，1H)，7.49(d，1H)。

用相同的方法，但用溴丁烷代替碘甲烷，得到如下化合物：

实施例57：2-环庚基-6-甲氧基-3-丁基-苯并噻吩

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.90(t，3H)，1.10-2.20(m，16H)，2.75(t，2H)，3.04(m，1H)，3.80(s，3H)，7.00(s，1H)，7.05(d，1H)，7.51(d，1H)。

二取代的苯并噻吩-醇(10)的制备

按照用于单取代的化合物的方法，但用如下化合物代替2-环己基-6-甲氧基-苯并噻吩：

-2-环庚基-3-甲基-6-甲氧基-苯并噻吩

-2-环庚基-6-甲氧基-3-丁基-苯并噻吩

-7-甲氧基-1，2，3，4-四氢-二苯并噻吩，

分别得到如下化合物：

实施例59：2-环庚基-3-甲基-苯并噻吩-6-醇

熔点 96℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.30-2.15(m，12H)，2.44(s，3H)，3.01(m，1H)，6.87(d，1H)，6.97(s，1H)，7.34(d，1H)，9.3 1(s，1H，OH)。

实施例60：2-环庚基-3-丁基-苯并噻吩-6-醇

透明油

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.92(t，3H)，1.15-2.20(m，16H)，2.80(t，2H)，3.02(m，1H)，6.85(d，1H)，6.95(s，1H)，7.32(d，1H)，9.22(s，1H，OH)。

氨基磺酸二取代的苯并噻吩酯(11)的制备

按照用于单取代的化合物的方法，但用如下化合物代替2-环己基-苯并噻吩-6-醇：

-2-环庚基-3-甲基-苯并噻吩-6-醇

-2-环庚基-3-丁基-苯并噻吩-6-醇

-1，2，3，4-四氢-二苯并噻吩-7-醇，

分别得到如下化合物：

实施例62：氨基磺酸，2-环庚基-3-甲基-苯并噻吩-6-基酯

熔点 107℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.40-2.20(m，12H)，2.46(s，3H)，3.14(m，1H)，7.20(s，1H)，7.30(dd，1H)，7.60(d，1H)，8.00(s，2H，NH₂)。

实施例63：氨基磺酸，2-环庚基-3-丁基-苯并噻吩-6-基酯

透明油

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.91(t，3H)，1.15-2.20(m，16H)，2.77(t，2H)，3.11(m，1H)，7.15(s，1H)，7.32(d，1H)，7.59(d，1H)，8.04(s，2H，NH₂)。

二氧化二取代的化合物(12)的制备

按照用于单取代的化合物的方法，但用如下化合物代替氨基磺酸，2-环庚基-苯并噻吩-6-醇酯：

-氨基磺酸，2-环庚基-3-甲基-苯并噻吩-6-醇酯

-氨基磺酸，2-环庚基-3-丁基-苯并噻吩-6-醇酯

-氨基磺酸，1，2，3，4-四氢-二苯并噻吩-7-醇酯，

分别得到如下化合物：

实施例65：氨基磺酸，2-环庚基-3-甲基-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

熔点 90℃

¹H-NMR(DMSOd₆)：1.30-2.20(m，12H)，2.48(s，3H)，2.76(m，1H)，7.28(s，1H)，7.41(d，1H)，7.52(d，1H)，8.27(s，2H，NH₂)。

实施例66：氨基磺酸，2-环庚基-3-丁基-苯并噻吩-6-基酯-1，1-二氧化物

透明油

¹H-NMR(DMSOd₆)：0.91(t，3H)，1.15-2.15(m，16H)，2.75(m，1H)，2.90(t，2H)，7.25(s，1H)，7.40(d，1H)，7.56(d，1H)，8.3 1(s，2H，NH₂)。

生物学试验结果

类固醇硫酸酯酶的体外抑制

硫酸雌酮(E₁S)是主要的循环血浆雌激素，它由类固醇硫酸酯酶转化为雌酮(E₁)，它随后通过酶促还原转化为雌二醇(E₂)。类固醇硫酸酯酶活性存在于大多数组织(子宫、肝、乳房等)中，在恶性时明显高于正常乳腺组织。雌激素与促进乳腺癌生长和发展的紧密关系长期被人们认识，因此，类固醇硫酸酯酶似乎是就地抑制雌激素形成的潜在靶。

已合成了含有被认为涉及类固醇硫酸酯酶的不可逆抑制的氨基磺酸酯部分的该酶的有效抑制剂。至今，最具活性的化合物是EMATE，雌酮-3-氨基磺酸酯，但它的雌激素活性使得该化合物不适合用于治疗激素依赖性肿瘤。已报导了许多结构变化的类固醇硫酸酯酶抑制剂，其中6，6，7-COUMATE显示为标准非类固醇抑制剂，其缺乏雌激素性质。

体外结果

使用两种全细胞的体外模型。由人胎盘绒毛膜癌得到的JEG-3细胞系自然非常富集人体雌酮硫酸酯酶，因此，是有用的实际生物学体系以在96孔微滴板格式筛选大量化合物和评价推定的体外类固醇硫酸酯酶抑制剂。尽管在类固醇硫酸酯酶活性中含量较低，但MCF-7细胞构成另一种合适模型以测试对人体乳腺癌细胞的类固醇硫酸酯酶抑制剂。而且，这些细胞用于激素依赖诱导的异种移植物的体内模型。

雌酮硫酸酯酶细胞试验

全细胞试验如Duncan等(Cancer Res.，1993，53：298-303)最初描述的用完整MCF-7细胞单层进行。试验在96-孔(JEG-3)或24-孔(MCF-7)微滴板上用对数生长期的细胞进行。在研究前24小时(JEG-3)或72小时(MCF-7)，细胞在去补体的补加胎牛血清(dFCS)培养基中接种。随后除去接种培养基，细胞用PBS漂洗以除去任何痕量的dFCS。然后，加入³H-E₁S，接着加入10^-12M-10^-5M的试验化合物。处理4h(JEG-3)或20h(MCF-7)后，培养基转移到96-深孔微滴板(JEG-3)或塑料管(MCF-7)中，在甲苯萃取前以200xg离心10分钟以使细胞沉淀。培养基部分用于甲苯萃取以分离共轭的底物和未共轭的产物，在甲苯相中的放射性用液体闪烁计数(LSC)测量。最后，雌酮硫酸酯酶活性用每4或20小时每μgDNA形成的pmole的³H-E₁+³H-E₂和以没有抑制剂的对照活性的百分数表示的雌酮硫酸酯酶抑制作用表示。用％抑制作用对抑制剂浓度的非线性拟合分析(GraphPad Prism Software)确定50％抑制浓度(IC₅₀)：最低IC₅₀相应于最有效的抑制剂(表1)。

表1：全细胞试验中雌酮硫酸酯酶的抑制作用

在试验化合物中，实施例42、实施例44、实施例48、实施例49、实施例50、实施例54和实施例55显示在JEG-3细胞中人体雌酮硫酸酯酶活性的强抑制作用(IC₅₀约10nM)。在典型向子宫试验中通过口服途径向青春期前的雌性大鼠中给药3天后检测这些化合物的体内残留雌激素活性。

类固醇硫酸酯酶体内抑制作用

体内残留雌激素活性

青春期前雌性大鼠以1mg/大鼠/天口服处理3天，在最后处理的当天，摘除子宫，记录湿重。

结果用与对照组比较的子宫重量刺激％表示。

表2：残留雌激素活性

抗向子宫/抗硫酸酯酶活性

改进由Purohit方法得到的短模型用于体内评价非雌激素类固醇硫酸酯酶抑制剂。

将Wistar雌性大鼠卵巢切除，放置4周，在处理前，用阴道涂片检测不存在周期性。

将动物补加50μg/kg/天s.c的硫酸雌酮(E₁S)，单独或与口服给药1mg/kg/天有效硫酸酯酶抑制剂联用，持续4天，摘除子宫，剥离相邻组织，湿称重。

结果用E₁S诱导刺激的抑制％表示。

表3：抗向子宫活性

实施例55选择用作类固醇硫酸酯酶活性的有效抑制剂，这是因为缺乏动情性和E₁S刺激的子宫重量的明显抑制。这些体内结果与在JEG-3和MCF-7全细胞试验中得到的体外结果相当一致。

实施例55的效力评价

评价实施例55对E₁S刺激的子宫重量的活性与0.03mg/kg/天-1mg/kg/天p.o的标准抑制剂6，6，7 COUMATE关系。

在该研究中，最后的给药在E₁S和E₂血清含量试验的尸体解剖前24小时进行。摘除子宫，剥离相邻组织，湿称重，立即深度冷冻直至测定硫酸酯酶活性。

·E ₁ S刺激的子宫重量的抑制作用

表4

·在子宫内雌酮硫酸酯酶活性的测量

雌酮硫酸酯酶活性根据Purohit等描述的方法，稍加改进测定。简单地说，解冻子宫，称重，均化。上清液等分样品用右旋糖苷涂覆的活性炭处理，测试硫酸酯酶。在用5nM³H-E₁S和20μM未标记的E₁S作为基质培养30分钟后评价E₁S活性。放射性用LSC测量。

雌酮硫酸酯酶活性用pmol/h/mg蛋白质表示，以对E₁S的抑制百分数表示。

表5

·血清雌激素含量

E₁S和E₂含量根据供应商的标准方法测定(DSL，Webster，TX，USA)。

表6：E₁S含量(ng/ml)

表7：E₂含量(pg/ml)

激素依赖诱导的异种移植物

将由人体乳腺腺癌得到的MCF-7细胞皮下注射到切除卵巢的无胸腺裸小鼠，其补充雌酮硫酸酯(颗粒0.5mg/90天释放)。每周测量异种移植物体积一次，当肿瘤体积达到明显增加时，以0.1mg/kg/天口服给药6，6，7COUMATE和实施例55共6周。

测量异种移植物，摘除，称重，深度冷冻直至测量类固醇硫酸酯酶活性。

表8：异种移植物体积(mm³)

在以0.1mg/kg/天口服给药6周后，6，6，7 COUMATE不抑制E₁S诱导的刺激。相反，在相同剂量水平下，实施例55得到18％抑制。

表9：异种移植物重量(mg)

6，6，7 COUMATE不抑制异种移植物重量，而用实施例55得到35％的抑制。

表10：异种移植物类固醇硫酸酯酶活性(pmol/h/mg蛋白质)

用实施例55肿瘤内类固醇硫酸酯酶活性的抑制(84％)高于6，6，7COUMATE(67％)。

Claims

1.式(Ia)或(Ib)的化合物：

其中：

-R₂是H；

-R’₂是(C₁-C₆)烷基或(C₃-C₁₂)环烷基；

-R₃是H、(C₁-C₆)烷氧基或卤素；

-m是0、1、2；

-n是0、1、2；

-当m是0时，R₁和R₂还可一起形成基团-(CH₂)_p-，其中p是3、4或5；

-虚线表示氨基磺酸基团在苯并噻吩环的5-或6位。

2.根据权利要求1的化合物，其中R₁是氢、(C₁-C₆)烷基或任选被(C₁-C₄)烷基单-或二取代的(C₃-C₁₂)环烷基。

3.根据权利要求2的化合物，其中R₁是任选被(C₁-C₄)烷基单-或二取代的(C₃-C₁₀)环烷基。

4.根据权利要求1-3之一的化合物，其中m是0或1。

5.根据权利要求1-3之一的化合物，其中R₃是氢。

6.根据权利要求1-3之一的化合物，其中n是0或2。

7.根据权利要求1-3之一的化合物，其中氨基磺酸基团在苯并噻吩环的6位。

8.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环己基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝m＝0。

9.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环己基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝1；

-m＝0。

10.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环癸基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝m＝0。

11.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环癸基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-m＝0，n＝1。

12.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环己基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-m＝0，n＝2。

13.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环庚基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝m＝0。

14.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环庚基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-m＝0，n＝2。

15.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环辛基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝m＝0。

16.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环辛基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-m＝0，n＝2。

17.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环癸基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-m＝0，n＝2。

18.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是4-甲基环己基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝0，m＝0。

19.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是4-甲基环己基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-m＝0，n＝2。

20.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是2-甲基环己基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝0，m＝0。

21.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是2-甲基环己基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝2，m＝0。

22.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是2，2-二甲基环戊基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝0，m＝0。

23.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是2，2-二甲基环戊基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝2，m＝0。

24.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是2-金刚烷基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝0，m＝0。

25.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是2-金刚烷基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝2，m＝0。

26.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是丙基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝0，m＝0。

27.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是丙基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝2，m＝0。

28.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是己基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝0，m＝0。

29.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是己基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝2，m＝0。

30.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环己基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝0，m＝1。

31.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环己基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝2，m＝1。

32.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环庚基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝0，m＝1。

33.根据权利要求1的式(Ia)化合物，其中

-R₁是环庚基；

-R₂是H；

-R₃是H；

-n＝2，m＝1。

34.根据权利要求1的式(Ib)化合物，其中

-R₁是环庚基；

-R’₂是甲基；

-R₃是H；

-n＝0，m＝0。

35.根据权利要求1的式(Ib)化合物，其中

-R₁是环庚基；

-R’₂是甲基；

-R₃是H；

-n＝2，m＝0。

36.根据权利要求1的式(Ib)化合物，其中

-R₁是环庚基；

-R’₂是丁基；

-R₃是H；

-n＝0，m＝0。

37.根据权利要求1的式(Ib)化合物，其中

-R₁是环庚基；

-R’₂是丁基；

-R₃是H；

-n＝2，m＝0。

38.根据权利要求1的式(Ib)化合物，其中

-R₁是环戊基；

-R’₂是H；

-R₃是H；

-n＝0，m＝0。