CN101156904A - 一种治疗骨质增生的外用中药制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗骨质增生的外用中药制剂及其制备方法，它是由秦艽、威灵仙、乳香、没药、木鳖子、蓖麻子和麻油制备而成。将秦艽经水煎煮提取浓缩得清膏。威灵仙用麻油先浸渍，所得的药油再浸渍木鳖子和蓖麻子，浸渍后的木鳖子和蓖麻子打成浆状物，而所得的药油加入蜂蜡使之熔化。乳香和没药粉碎成细粉，然后将细粉、清膏、浆状物和药油混合均匀，按照常规制剂工艺制成各种剂型。与现有技术相比，本发明以常见的中草药为原料，且所用到的原料药种类少，产品质量较易控制，原料药经提取得到其有效成分使其更易吸收而发挥药效，为患者提供了一种用药成本低、疗效好的治疗骨质增生的外用药物。

Description

一种治疗骨质增生的外用中药制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗骨质增生的制剂及其制备方法，特别是涉及一种治疗骨质增生的外用中药制剂及其制备方法。

背景技术

骨质增生是指椎骨边缘或关节边缘、关节面及骨突处骨小梁增多和骨密度增高。因有时其形状象口唇或象鸟嘴，故叫做唇状突起或骨赘，也叫骨刺，现代医学称为增生性骨关节病，是骨科的一种常见病和多发病。骨质增生虽然不至于要人命，但是患者必需长期忍受各种麻痛的感觉，是令人非常痛苦的一种疾病。同时该症也可以说是一种正常的生理现象，因为随着年龄的增长，关节的软骨逐渐退化，细胞的弹性减小，骨关节在不知不觉中被磨损，尤其是活动量较大的颈、腰、膝关节、足跟、损伤的关节软骨在没有血管供给营养时就很难修复，这时在关节软骨的周围血液循环比较旺盛，就会出现代偿性软骨增长，此即为骨质增生的前身。时间久了增生的软骨又被钙化，这就是骨质增生。所以骨质增生是中老年人的常见病、多发病，轻者可使患者肢体发生功能性障碍，重者可致畸或致瘫。

骨性关节炎起病隐袭，发展可致关节畸形，及关节功能障碍，严重影响患者的生活质量。早期及时诊治，可阻止或延缓病情进展，改善关节功能，可解除患者痛苦，提高生活质量。目前尚无治疗骨性关节炎的特效药物或疗法，尤其缺乏快速、安全、有效的缓解疼痛症状的药物。

发明内容

本发明提供了一种治疗骨质增生的外用中药制剂及其制备方法，该中药制剂所用到的原料药种类少，产品质量较易控制，原料药经提取得到其有效成分使其更易吸收而发挥药效，更好的提高本发明药物的治疗效果，从而提供一种能更加有效的治疗骨质增生的外用中药制剂。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

按照重量份计算，本发明治疗骨质增生的外用中药制剂是由赤芍15～17份、威灵仙23～25份、乳香27～29份、没药27～29份、木鳖子12～14份、蓖麻子13～15份和麻油30～35份制备而成。

优选地，选用如下的重量份配比：赤芍16份、威灵仙24份、乳香28份、没药28份、木鳖子13份、蓖麻子14份和麻油32份。

上述治疗骨质增生的外用中药制剂的制备方法：按比例称取取乳香和没药粉碎成细粉，混合均匀，得A品备用；取赤芍加水煎煮三次，合并三次煎煮液，滤过，滤渣弃去不用，滤液减压浓缩至80℃相对密度为1.20～1.25的清膏，得B品备用；取威灵仙放入80～100℃的麻油中，浸渍2.5～4小时后过滤，滤渣弃去不用，在滤液中加入木鳖子和蓖麻子于80～100℃浸渍2.5～4小时后再次过滤，滤渣打浆制成油质浆状物，得C品备用，滤液于80～100℃条件下加入蜂蜡并使之熔化，然后加入A品、B品和C品搅拌均匀，冷至室温后按常规制剂工艺制成各种外用剂型。

本发明外用贴剂是这样制备的：取乳香和没药粉碎成粒度为100目的细粉，混合均匀，得A品备用；取赤芍断为1～3厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，第三次加6倍量水煎煮1小时，合并三次煎煮液，滤过，滤渣弃去不用，滤液减压浓缩至80℃相对密度为1.20～1.25的清膏，得B品备用；取威灵仙放入90℃的麻油中，浸渍3小时后过滤，滤渣弃去不用，在滤液中加入木鳖子和蓖麻子于90℃浸渍3小时后再次过滤，滤渣打浆制成油质浆状物，得C品备用，滤液于90℃条件下加入蜂蜡并使之熔化，然后加入A品、B品和C品搅拌均匀，冷至室温后用制片机制成厚薄均匀的圆形膏片，置于医用透气胶带内，制得外用贴剂。

本发明配方选用赤芍、威灵仙、乳香、没药、木鳖子、蓖麻子和麻油进行组合，将这些药物组合在一起使各药物协同增效，共奏软坚散结、通络定痛之功效，从而有效治疗由于骨性关节炎引起的膝关节增生、颈椎增生、雄椎增生、腰椎增生、骶骨增生、足跟增生等各种骨质增生所致的疼痛、僵硬、活动受阻等症。本发明选用赤芍是因为赤芍味苦，性微寒，归肝经，清热凉血，散瘀止痛，用于温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，症瘕腹痛，跌扑损伤，痈肿疮疡。威灵仙味辛、咸，性温，归膀胱经，祛风除湿，通络止痛。用于风湿痹痛，肢体麻木，筋脉拘挛，屈伸不利，骨哽咽喉。乳香味辛、苦，性温。活血止痛，用于心腹诸痛，筋脉拘挛，跌打损伤，疮痈肿痛；外用消肿生肌。没药味苦，辛，性平，入肝、脾、心、肾经，散血去瘀，消肿定痛，用于治跌打损伤、金疮、筋骨、心腹诸痛、症瘕、经闭、痈疽肿痛、痔漏、目障。木鳖子，味苦微甘，性温，有毒，入肝、脾、胃经，散结，祛毒，治痈肿、疔疮、瘰疬、痔疮、无名肿毒、癣疮，风湿痹痛，筋脉拘挛。蓖麻子味甘辛，性平，有小毒，入大肠经，消肿拔毒，泻下通滞，治痈疽肿毒，瘰疬，喉痹，疥癞癣疮，水肿腹满，大便燥结。麻油性味甘、凉，具有润肠通便、解毒生肌之功效，临床还用麻油来煎熬膏药，有生肌肉、止疼痛、消痈肿、补皮裂的作用，外用作为软膏及硬膏基质。

为了确保本发明药物的有效性和用药安全，申请人进行了有效性、安全性等动物实验。

一、主要药效学研究

1、材料来源

1.1药膏的制备

取乳香和没药粉碎成粒度为100目的细粉，将其混合均匀，得A品备用；取赤芍断为2厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，第三次加6倍量水煎煮1小时，合并三次煎煮液，用300目滤布滤过，滤渣弃去不用，所得滤液减压浓缩至80℃相对密度为1.20～1.25的清膏，清膏为B品备用；取威灵仙粉碎为最粗粉，放入90℃的麻油中，浸渍3小时后用100目不锈钢筛网过滤，滤渣弃去不用，在滤液中加入捣碎的木鳖子和蓖麻子于90℃浸渍3小时后再次过滤，滤渣(浸渍后的木鳖子和蓖麻子)送入打浆机内打浆并经100目不锈钢筛网过滤制成油质浆状物，油质浆状物为C品备用，滤液即为药油。称取适量蜂蜡使之熔于90℃的药油中，然后加入A品、B品和C品后搅拌均匀，冷至室温后即得膏块，通过压片机压制成圆形外用膏片。

1.2实验动物来源

Wister/SD大鼠，雌雄各半，体重160±10g，购自中国医学科学院实验动物研究中心，合格证号SCXK11-00-0006。昆明/ICR种小鼠，雌雄各半，体重21±1g，由北京维通利华试验动物技术研究所提供，许可证号：SCXK(京)-2002-0003。

2、剂量设计60kg人一日用量为2.3g药膏，则0.04g/kg/d，按人与动物等效剂量折算，试验中大鼠用量为0.4、0.2、0.1g/kg/d、小鼠为0.8、0.4、0.2g/kg/d，均分别相当于人用量的2倍、等倍及1/2倍。各剂量组均采用药膏按等体积不等浓度皮肤涂抹给药。药物用赋形剂(麻油)调制成同体积。赋形剂组麻油的剂量采用调制小剂量时所采用的量。

3、方法及结果

3.1、对小鼠骨质增生模型的影响

原理：rh-BMP-2的主要生物学作用是诱导未分化的间质细胞分化成软骨或骨组织，而且这一作用无种属特异性。不同组织的间质细胞分化成骨或软骨的能力差异很大，最理想的组织是肌肉、筋膜、骨髓和骨膜处，这些组织中血管周围的间质细胞分化能力很强，对BMP的反应最为敏感，是研究成骨作用的理想部位。目前不少的试验研究证明，rh-BMP-2在大鼠、小鼠、家兔模型上均有明显诱导成骨的作用。试验研究显示：小鼠股部肌肉内植入BMP18-21天后，植入部位有明显骨组织团块形成，外层为白色骨皮质，中心为红色骨髓。植入附近的股骨干增粗、重量增加，病理观察可见不规则的骨基质形成和骨髓腔(1、2、3)。

试验方法：取小鼠60只，乙醚麻醉后，左后腿外侧部脱毛、消毒，顺股部外侧肌肉切开皮肤，切口为1cm，分离股部肌肉间隙隐窝，在肌肉内靠近骨膜处埋置rh-BMP-2冻干粉，0.5mg/只，空白对照组植入牛血清白蛋白(BSA)，植入后缝合切口。然后将植入rh-BMP-2的动物随机分为5组，分别为模型对照组、阳性药对照组(通络阹痛膏)、本发明药膏大、中、小剂量组，每5只一笼饲养在清洁环境中。植入1周后各给药组在植入处皮肤涂抹给药，对照组涂抹水，连续1周。试验结束后处死动物，剥离出植入后形成的骨组织称重、取股骨干称重，结果采用组间比较T检验进行统计学处理。结果见表1。

表1本发明药膏对小鼠骨质增生模型的影响

组别	剂量/kg/d	动物数	异位骨组织重量(mg)	股骨干重量(mg)
					空白对照组	-	10		69.99±7.25
模型对照组	-	10	0.64±0.05	81.04±4.32##
					阳性对照组	18.2cm2	10	0.55±0.09*	73.64±4.59**
大剂量组	0.8g	10	0.49±0.10**	75.36±4.64**
					中剂量组	0.4g	10	0.45±0.08**	70.83±4.84**
小剂量组	0.2g	10	0.54±0.07**	78.54±4.89

与空白对照组比较##P＜0.01

与模型对照组比较*P＜0.05  **P＜0.01

表1结果显示：小鼠左侧股部肌肉内植入rh-BMP-2冻干粉2周后，局部有明显的异位股组织形成，且股骨干重量明显增加；本发明药膏三个剂量组异位骨组织重量和左侧股骨干的重量明显减轻，与模型对照组比较有显著性差异(P＜0.05  P＜0.01)。

一般情况观察：埋置手术第7天局部可触及小团块，稍硬，以后逐渐增大，变硬，与周围组织界线不清。

3.2、对正常大鼠血液流变学的影响：

实验方法：取健康Wister大鼠60只，雌雄兼用。背部脱毛，脱毛面积约为4*5cm²。然后将动物随机分成6组：空白对照组、赋形剂对照组、阳性药组(通络阹痛膏)、本发明药膏大剂量组、中剂量组和小剂量组，每组10只。各给药组脱毛皮肤处涂抹给药，空白对照组涂抹水，赋形剂组给麻油，连续7天。给药第7天傍晚禁食。第8天耳缘静脉采血，采用LG-R-80系列血液黏度测试仪和LG-B-190型细胞流变学测定仪测定血液流变学相关指标，结果采用组间比较T检验进行统计学处理，见表2。

表2本发明药膏对大鼠血液流变学的影响

组别	空白对照组	赋形剂组	阳性药组	大剂量组	中剂量组	小剂量组
							剂量(/kg/d)	-	-	12.6cm2	0.4g	0.2g	0.1g
动物数	10	10	10	10	10	10
							全血黏度	15.25±1.44	15.56±1.72	15.47±3.00	15.28±1.98	15.31±1.79	15.60±1.62
血浆黏度	1.34±0.05	1.34±0.05	1.33±0.07	1.37±0.08	1.35±0.06	1.39±0.16
							还原黏度	34.94±4.60	34.49±3.85	33.69±6.39	33.25±4.53	34.00±4.12	34.78±3.00
血球压积	41.00±3.01	42.20±1.87	42.90±2.99	42.90±2.76	42.10±0.99	41.90±1.85
							聚集指数	1.84±0.24	1.86±0.27	1.71±0.41	1.04±0.33**	1.09±0.31**	1.00±0.16**
聚集指数积分面积	360.30±54.00	365.90±54.51	331.90±84.17	211.50±66.03**	225.70±65.16**	206.50±34.08**
							变形指数	0.43±0.04	0.43±0.04	0.44±0.03	0.43±0.03	0.47±0.01	0.44±0.01
变形指数积分面积	214.80±22.69	223.50±19.73	223.30±17.93	214.60±22.00	238.60±10.97	219.50±9.55

表2结果显示：本发明药膏所试三个剂量组对大鼠的全血黏度、血浆黏度、还原黏度无明显影响。本发明药膏三个剂量组均对大鼠的血球压积无明显影响(与空白对照组比较**P＜0.01)。本发明药膏三个剂量组的大鼠血液的聚集指数及聚集指数积分面积明显降低，与空白对照组比较有显著性差别(P＜0.01  P＜0.05)，说明本发明药膏对大鼠血液聚集性有明显的抑制作用。本发明药膏三个剂量对大鼠血细胞的变形指数和变形指数积分面积无明显影响。

3.3、骨质增生帖对正常小鼠耳廓微循环的影响

取健康昆明种小鼠50只，雌雄兼用。随机分为5组，空白对照组、阳性药组(通络阹痛膏)、本发明药膏大、中、小剂量组。各组动物按2％戊巴比妥钠4mg/kg腹腔注射麻醉后，显微录象系统下观察右耳前面同一部位微循环情况。然后开始给药，右耳背面涂抹药物，每日1次，连续3天。第4天用温水去除药物后，立即再观察右耳同一部位微循环变化情况。在监视器下放大150倍测量小动脉、小静脉口径。各项指标采用组间比较差值T检验进行统计学处理，见表3

表3本发明药膏对小鼠耳廓微循环的影响(小血管口径及变化值)

与对照组比较*P＜0.05  **P＜0.01    单位：cm

表3结果显示：本发明药膏三个剂量组有明显扩张小鼠耳廓小动脉及小静脉的作用，其给药前后动静、脉口径的变化值与对照组比较有显著性差别(P＜0.05  P＜0.01)。

3.4、对小鼠醋酸疼痛模型的影响

取小鼠60只，背部皮肤脱毛(面积为2×3cm²)，然后按体重随机分为6组：模型对照组、赋形剂组、阳性药对照组(通络阹痛膏)、本发明药膏大、中、小剂量组，各给药组脱毛处皮肤涂抹给药，模型对照组涂抹水、赋形剂(麻油)组涂抹麻油，每日一次，连续4天，第4天涂抹后1小时，各动物腹腔注射0.5％的醋酸0.2ml/只，观察20分钟内各小鼠出现典型扭体的次数，结果采用组间比较t检验进行统计学处理，见表4。

表4本发明药膏对醋酸所致小鼠疼痛模型的影响

与模型对照组比较**P＜0.01

表4结果显示：注射醋酸后本发明药膏大、中、小剂量组小鼠的扭体次数明显少于模型对照组，与模型对照组比较有显著性差别(P＜0.01)，说明本发明药膏对醋酸所致小鼠疼痛有明显的止痛作用。

5.5、抗炎作用：

5.5.1对大鼠棉球肉芽肿形成的影响

取大鼠60只，背部脱毛(面积为4*5cm²)。乙醚浅麻醉后无菌条件下作背部剪一小切口，然后向两侧皮下植入20mg的灭菌棉球。术后随机分组为6组，模型对照组、赋形剂组、阳性药组(通络阹痛膏)、本发明药膏大、中、小剂量组。手术当天开始脱毛处皮肤涂抹给药，模型对照组涂抹水、赋形剂组涂抹麻油，每天一次，连续7天，第8天先称体重，药后1小时将大鼠断头处死，剥离并取出棉球肉芽组织。于60℃烘箱内干燥12小时后称重，即为肉芽肿干重，比较各组肉芽肿重量，同时取出大鼠的胸腺和脾脏测定脏器指数，结果采用组间比较t检验进行统计学处理，见表5。

表5本发明药膏对大鼠棉球肉芽肿形成的影响

与模型对照组比较*P＜0.05  **P＜0.01

表5结果显示：本发明药膏三个剂量组可明显抑制大鼠棉球肉芽肿的形成，与模型对照组比较有显著性差异(P＜0.05  P＜0.01)。本发明药膏三个剂量组对大鼠棉球肉芽肿实验脾脏和胸腺脏器指数无明显影响。

5.5.2对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响

取小鼠60只，背部皮肤脱毛(面积为2*3cm²)，然后按体重随机分为6组：模型对照组、赋形剂组、阳性药对照组(通络阹痛膏)、本发明药膏大、中、小剂量组，各给药组脱毛处皮肤涂抹给药，模型对照组涂抹水、赋形剂组涂抹赋形剂，每日一次，连续3天，第4天用温水去除药物后，各鼠尾静脉注射0.5％伊文思兰液体0.1ml/10g，随即皮肤上滴加二甲苯40ul，15分钟后处死动物，取兰染皮肤剪碎，放于蒸馏水∶丙酮(3∶7)溶液2ml中，3000rpm离心15分钟，取上清液于波长590nm处测定光密度值。结果采用组间比较t检验进行统计学处理，见表6。

表6本发明药膏对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响

组别	剂量g/kg/d	动物数	OD值	抑制率
					模型对照组	-	10	0.37±0.04
赋形剂组	-	10	0.37±0.02	-0.85
					阳性对照组	18.2cm2	10	0.33±0.04*	11.20
大剂量组	0.8	10	0.32±0.03*	12.37
					中剂量组	0.4	10	0.33±0.03*	10.85
小剂量组	0.2	10	0.35±0.04	4.47

与模型对照组比较：**P＜0.01

表6结果显示：本发明药膏大、中二个剂量组能显著抑制二甲苯引起的小鼠皮肤毛细血管通透性的增高，与对照组比较有显著性差异(P＜0.05)。

结论：本实验从骨质增生形成的机理、血液流变学、改善微循环、炎症、止痛5个方面探讨了本发明药膏的药效学作用，结果显示：本发明药膏三个剂量组均可抑制小鼠异位骨组织的形成和抑制股骨干的骨质增生；可明显降低大鼠血液的聚集性；扩张小鼠耳部小动、静脉；对醋酸引发的小鼠疼痛有明显的止痛作用；对小鼠皮肤毛细血管通透性有明显抑制；对大鼠棉球性肉芽肿形成有明显抑制作用且不影响胸腺和脾脏指数。通过本实验为本发明药膏在临床的进一步应用提供了实验依据。

二、急性毒性实验

1、材料来源

1.1药膏的制备

如实验一、主要药效学研究中1.1药膏的制备方法。

1.2实验动物来源

新西兰家兔，体重2.0～2.5kg，一级，雌雄各半。由北京市海淀区通利实验动物养殖场提供，合格证号为scxk(京)2000-0018。

2、方法和结果

2.1、动物皮肤的准备：各动物于给药前24小时背部脊柱两侧去毛(先用剪刀，然后用脱毛剂)，去毛面积为身体的10％，24小时后检查皮肤的情况是否正常。破损皮肤组用砂纸轻擦至渗血为度。

2.2、将家兔按上述设计分组，各给药组在脱毛部位均匀涂抹药物，空白对照组涂抹蒸馏水，赋形剂组涂抹赋形剂。6小时一次，共涂抹2次，涂药部位用特制的胶布固定。给药24小时后用温水洗去残留的药物。连续观察7天。

2.3、观察指标：

观察记录给药后动物一般活动、皮肤毛发、眼和黏膜的变化，皮肤所产生的刺激反应，按表7评分标准来判断其刺激强度。每天观察呼吸、中枢神经系统、四肢活动等方面的中毒表现。每天记录动物的体重。

表7皮肤刺激反应评分标准

2.4、试验结果：

①接受本发明药膏的家兔在观察期间，一般活动正常，皮毛有光泽，摄食、大小便正常。

②呼吸、中枢神经系统、四肢活动未表现出明显急性毒性反应。

③观察期内未发现家兔死亡。

④局部皮肤所见：对照组动物完整皮肤、破损皮肤均未见红斑或水肿；本发明药膏三个剂量组动物完整皮肤、破损皮肤均未见红斑或水肿，结果见表8。

表8本发明药膏对家兔皮肤急性毒性试验(皮肤观察)

⑤各给药组体重增长采用组间比较t检验进行统计学处理，结果显示和空白对照组比较无显著性差异，结果见表9。

表9本发明药膏对家兔皮肤急性毒性试验(体重观察)

结论：将本发明药膏1g、2g、4g分别涂抹于家兔背部去毛后完整皮肤或破损皮肤，一日内2次给药，动物的一般状态、体重、皮肤毛发、眼及粘膜、呼吸、中枢神经系统、四肢活动未表现出明显急性毒性反应，对局部皮肤也无明显刺激作用，因此认为本发明药膏皮肤用药是安全的。

三、长期毒性实验

1、材料来源

1.1药膏的制备

如实验一、主要药效学研究中1.1药膏的制备方法。

1.2实验动物来源

健康新西兰家兔，体重2.0～2.5kg，雌雄各半。雌雄分笼饲养，每笼2只，自由取食及摄水。饲育在室温20～22℃的环境下。由北京通力试验动物养殖场提供，动物合格证号：SCXK(京)2000-0018。

2、方法和结果

2.1、试验周期根据临床试验疗程7天，长期毒性取其3倍以上，故定为连续给药4周，停药后恢复期2周。

2.2、剂量及分组：

剂量	动物数	完整皮肤	破损皮肤
				水	6	空白对照	空白对照
与大剂量组相当的赋形剂	6	赋形剂对照	赋形剂对照
				4g药膏	10	大剂量组	大剂量组
2g药膏	10	中剂量组	中剂量组
				1g药膏	10	小剂量组	小剂量组

2.3、动物皮肤的准备：各动物于给药前24小时背部脊柱两侧去毛(先用剪刀，然后用脱毛剂)，去毛面积为身体的10％，24小时后检查皮肤的情况是否正常。破损皮肤组用砂纸轻擦至渗血为度。

2.4、将家兔按2.2的设计分组，各组动物雌雄各半，给药组在脱毛部位均匀涂抹药物，空白对照组涂抹水，赋形剂组涂抹赋形剂。每日一次，涂药部位用一次性胶布固定，每次涂抹24小时后用温水洗去残留的药物后再涂抹。连续4周，停药后解剖1/2动物，继续观察2周后解剖1/2动物。

观察指标

①一般情况：给药期间，观察记录动物的精神、活动、毛发、粪便等情况。

②每日观察动物皮肤、粘膜的反应，按表7判断皮肤的刺激反应强度和过敏程度。

③每周称体重。

④外周血象：测外周血象，作白细胞分类。

⑤生化指标：测血清丙氨酸氨基转换酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(T-CHO)、葡萄糖(GLU)、总胆红素(T-BIL)。

⑥重要脏器重量指数

⑦重要脏器病理组织学检查结果采用组间比较t检验进行统计学处理。

2.5、试验结果

2.5.1、给药期间，三个剂量组家兔一般活动、精神状态、毛发、粪便等均未见明显异常。

2.5.2、体重增长与空白对照组比较无明显差异(表10)；

表10本发明药膏对家兔长期毒性试验体重的影响

2.5.3、外周血象，包括红细胞、白细胞、血红蛋白、红细胞压积、血小板、白细胞分类均在正常范围内波动(表11、12)；

表11本发明药膏对家兔长期毒性试验血象的影响(药后1个月)

表12本发明药膏对家兔长期毒性试验血象的影响(恢复期)

2.5.4、生化指标包括ALT、AST、BUN、Crea、ALP、TP、ALB、T-CHO、GLU、T-BIL均在正常范围内波动(表13、14)；

表13本发明药膏对家兔长期毒性生化指标的影响(药后1个月)

表14本发明药膏对家兔长期毒性生化指标的影响(恢复期)

2.5.5、重要脏器包括心、肝、脾、肺、肾、胸腺、肾上腺、脑、子宫、卵巢、睾丸、副睾、前列腺的重量系数与空白对照组相比无显著性差异(表15、表16)。

表15本发明药膏对家兔长期毒性脏器指数的影响(药后1个月)

表16本发明药膏对家兔长期毒性脏器指数的影响(恢复期)

2.5.6、完整皮肤的对照组和本发明药膏三个剂量组给药期间皮肤无明显红肿、脱屑等表现；破损皮肤的对照组和本发明药膏三个剂量组给药期间个别动物的皮肤轻微发红，无明显水肿，主要发生在皮肤用砂纸摩擦后，通常在2-3天后好转，并非药物引起(见表17、表18)。

表17本发明药膏家兔长期毒性试验皮肤情况(完整皮肤组)

表18本发明药膏家兔长期毒性试验皮肤情况(破损皮肤组)

2.5.7、各主要脏器肉眼检查未见明显肿大、充血、粘连、坏死等病理变化。用药部位皮肤光滑，无红肿，无斑丘疹、脱屑、粗糙、无色素沉着；

2.5.8、病理组织学检查，未发现有由于药物引起的病理形态学方面的改变。

结论

本发明药膏三个剂量组涂抹家兔完整皮肤和破损皮肤，连续1个月，对家兔体重、外周血象、十项生化指标、脏器指数及皮肤粘膜无明显影响；家兔主要脏器无明显由药物引起的病理改变，说明本发明药膏在所试剂量范围内无明显毒副反应，是比较安全的。

四、家兔皮肤刺激实验及豚鼠过敏实验

1、材料来源

1.1药膏的制备

如实验一、主要药效学研究中1.1药膏的制备方法。

1.2实验动物来源

新西兰家兔，体重2.0～2.5kg，一级，雌雄各半。豚鼠，一级，体重250～300g，均由北京市海淀区通利实验动物养殖场提供，合格证号为scxk(京)2000-0018。

2、方法和结果

2.1、对家兔一次给药皮肤刺激性试验

试验方法：

动物皮肤的准备：各动物于给药前24小时背部脊柱两侧去毛(先用剪刀，然后用脱毛剂)，去毛面积为身体的10％，24小时后检查皮肤的情况。破损皮肤组用砂纸轻擦至渗血为度。

试验采用同体左右侧自身对比，分完整皮肤组及破损皮肤组。每组家兔8只，去毛处左侧涂本发明药膏1g，右侧涂赋形剂作为对照，每只动物分笼饲养。涂抹24小时后用温水洗去残留药物，分别记录1、24、48、72小时涂抹部位皮肤情况。

试验结果：观察期间完整皮肤组动物对照侧和给药侧均未见红斑或水肿；破损皮肤组对照侧和给药侧去除药物后1小时内轻微发红，，24小时内消失。结果见表19

表19本发明药膏对家兔皮肤刺激试验(一次给药)

2.2、对家兔多次给药皮肤刺激性试验

试验方法：步骤同一次给药。连续涂抹给药7天，停药后观察一周，除观察并记录每日的红斑及水肿情况进行评分外，还观察涂抹部位是否有色素沉着、出血点，皮肤粗糙等情况。

试验结果：完整皮肤组接受本发明药膏的家兔在整个观察期间对照侧和给药侧均未见红斑或水肿；破损皮肤组动物从给药第3天开始对照侧和给药侧在划痕处可见轻度的发红，停药后逐日减轻，至停药第7天观察结束时所有动物均已恢复，提示此反应为机械擦伤皮肤后所引起的反应，与受试药物无关；所有动物涂抹部位皮肤未见色素沉着，出血点、皮肤粗糙等现象。结果见表20

表20本发明药膏对家兔皮肤刺激试验(多次给药)

2.3、本发明药膏对豚鼠皮肤过敏试验

试验方法：

2.3.1.皮肤准备：各动物于给药前24小时背部脊柱两侧去毛(先用剪刀，然后用脱毛剂)，去毛面积为身体的10％(9cm2)，24小时后检查皮肤的情况。

2.3.2.分组：将豚鼠按体重随机分成3组，每组10只，雌雄各半，第一组为本发明药膏组，第二组为赋形剂对照组，第三组为致敏剂对照组。

2.3.3.致敏接触：取受试物0.2g涂抹在豚鼠左侧脱毛区，特制胶布固定保持6小时。第7天、第14天再涂抹一次，共计3次，阳性致敏物组涂抹1％2，4-二硝基氯苯，赋形剂对照组在同等情况下涂抹赋形剂。

2.3.4.激发接触：于末次给药致敏后14天，将受试物0.2g涂抹豚鼠背部右侧脱毛区，阳性对照用0.1％2，4-二硝基氯苯，6小时后去除药物即刻观察，然后于24、48、72小时再次观察皮肤过敏反应情况，按表7评分标准及致敏发生率推断致敏性，致敏发生率的计算为：将出现皮肤红斑、水肿或全身性过敏反应的动物例数(不论程度轻重)，除以受试动物总数，即致敏发生率。

实验结果：

实验期间动物活动自如，大小便正常，无站立不稳，哮喘、休克等全身症状。

局部皮肤所见：本发明药膏和水对照组豚鼠均无一例发生皮肤过敏反应，而阳性对照药2，4-二硝基氯苯组的10只豚鼠出现不同程度的致敏，致敏率为100％，72小时基本恢复正常。结果见表21

对豚鼠皮肤过敏试验体重无明显影响，结果见表22

表21本发明药膏对豚鼠皮肤的过敏试验

表22本发明药膏对豚鼠皮肤的过敏试验(体重)

结论：将本发明药膏1g一次涂抹或多次涂抹家兔完整皮肤和破损皮肤后均不引起明显的刺激作用。本发明药膏涂抹于豚鼠皮肤后不引起明显的过敏反应。

与现有技术相比，本发明是以常见的天然动植物药为原料组成，产品配方来源于苗医世代相传的秘方，经苗家特殊工艺精心制成。产品配方构成比较简单，产品质量较易控制，原料药经提取得到其有效成分使其更易吸收而发挥药效，更好的提高本发明药物的治疗效果，从而提供一种能更加有效的治疗肩周炎的外用中药制剂。本发明中药制剂的制备方法简单，产品质量稳定，无毒副作用，无刺激性，非致敏性，临床可长期使用，为患者提供了一种用药成本低、疗效好的治疗骨质增生的外用药物。

具体实施方式

取乳香280g和没药280g粉碎成粒度为100目的细粉，将其混合均匀，得A品备用；取赤芍160g断为2厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，第三次加6倍量水煎煮1小时，合并三次煎煮液，用300目滤布滤过，滤渣弃去不用，所得滤液减压浓缩至80℃相对密度为1.20～1.25的清膏，清膏为B品备用；取威灵仙240g粉碎为最粗粉，放入90℃的麻油320g中，浸渍3小时后用100目不锈钢筛网过滤，滤渣弃去不用，在滤液中加入捣碎的木鳖子130g和蓖麻子140g于90℃浸渍3小时后再次过滤，滤渣(浸渍后的木鳖子和蓖麻子)送入打浆机内打浆并经100目不锈钢筛网过滤制成油质浆状物，油质浆状物为C品备用，滤液即为药油。称取适量蜂蜡(蜂蜡、A品、B品、C品和药油的总重量为2300g)使之熔于90℃的药油中，然后加入A品、B品和C品后搅拌均匀，冷至室温后用制片机制成厚薄均匀的圆形膏片，置于医用透气胶带内，分装，即制得本发明的外用贴剂。

性状：本品为黑色圆形膏片，油润细腻，无飞边缺口，气微香。

功能主治：软坚散结、通络定痛。用于骨性关节炎引起的膝关节增生、颈椎增生、雄椎增生、腰椎增生、骶骨增生、足跟增生等各种骨质增生所致的疼痛、僵硬、活动受阻等症。

用法用量：外用，伤处洗净擦干，将铁膏与隔离纸分开，然后对准痛处贴牢，24小时换药膏一次，7天为一疗程。

注意事项：过敏者慎用，孕妇忌用，禁止内服。

规格：2.3g/片。

储藏：密封，置干燥处。

有效期：暂定24个月。

实施例2：本发明外用膏药的制备方法

取乳香270g和没药270g粉碎成细粉，混合均匀，得A品备用；取赤芍150g粉碎为1厘米的小段，加水煎煮三次，加水量以没过药材为宜，合并三次煎煮液，滤过，滤渣弃去不用，滤液减压浓缩至80℃相对密度为1.20～1.25的清膏，得B品备用；取威灵仙250g放入80℃的麻油350g中，浸渍4小时后过滤，滤渣弃去不用，在滤液中加入木鳖子140g和蓖麻子150g于80℃浸渍4小时后再次过滤，滤渣打浆制成油质浆状物，得C品备用，滤液即为药油。称取适量蜂蜡(蜂蜡、A品、B品、C品和药油的总重量为2300g)使之熔于80℃的药油中，然后加入A品、B品和C品搅拌均匀，冷至室温后按常规制剂工艺制成膏剂。

实施例3：本发明外用贴剂的制备方法

取乳香290g和没药290g粉碎成粒度为100目的细粉，将其混合均匀，得A品备用；取赤芍170g断为3厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，第三次加6倍量水煎煮1小时，合并三次煎煮液，用300目滤布滤过，滤渣弃去不用，所得滤液减压浓缩至80℃相对密度为1.20～1.25的清膏，清膏为B品备用；取威灵仙230g粉碎为最粗粉，放入100℃的麻油300g中，浸渍2.5小时后用100目不锈钢筛网过滤，滤渣弃去不用，在滤液中加入捣碎的木鳖子120g和蓖麻子130g于100℃浸渍2.5小时后再次过滤，滤渣(浸渍后的木鳖子和蓖麻子)送入打浆机内打浆并经100目不锈钢筛网过滤制成油质浆状物，油质浆状物为C品备用，滤液即为药油。称取适量蜂蜡(蜂蜡、A品、B品、C品和药油的总重量为2300g)使之熔于100℃的药油中，然后加入A品、B品和C品后搅拌均匀，冷至室温后用制片机制成厚薄均匀的圆形膏片，置于医用透气胶带内，分装，即制得本发明的外用贴剂。

Claims (4)

1.一种治疗骨质增生的外用中药制剂，其特征在于：按照重量份计算，它是由赤芍15～17份、威灵仙23～25份、乳香27～29份、没药27～29份、木鳖子12～14份、蓖麻子13～15份和麻油30～35份制备而成。

2.按照权利要求1所述治疗骨质增生的外用中药制剂，其特征在于：按照重量份计算，它是由赤芍16份、威灵仙24份、乳香28份、没药28份、木鳖子13份、蓖麻子14份和麻油32份制备而成。

3.如权利要求1或2所述的治疗骨质增生的外用中药制剂的制备方法，其特征在于：取乳香和没药粉碎成细粉，混合均匀，得A品备用；取赤芍加水煎煮三次，合并三次煎煮液，滤过，滤渣弃去不用，滤液减压浓缩至80℃相对密度为1.20～1.25的清膏，得B品备用；取威灵仙放入80～100℃的麻油中，浸渍2.5～4小时后过滤，滤渣弃去不用，在滤液中加入木鳖子和蓖麻子于80～100℃浸渍2.5～4小时后再次过滤，滤渣打浆制成油质浆状物，得C品备用，滤液于80～100℃条件下加入蜂蜡并使之熔化，然后加入A品、B品和C品搅拌均匀，冷至室温后按常规制剂工艺制成各种外用剂型。

4.按照权利要求3所述的治疗骨质增生的外用中药制剂的制备方法，其特征在于：取乳香和没药粉碎成粒度为100目的细粉，混合均匀，得A品备用；取赤芍断为1～3厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，第三次加6倍量水煎煮1小时，合并三次煎煮液，滤过，滤渣弃去不用，滤液减压浓缩至80℃相对密度为1.20～1.25的清膏，得B品备用；取威灵仙放入90℃的麻油中，浸渍3小时后过滤，滤渣弃去不用，在滤液中加入木鳖子和蓖麻子于90℃浸渍3小时后再次过滤，滤渣打浆制成油质浆状物，得C品备用，滤液于90℃条件下加入蜂蜡并使之熔化，然后加入A品、B品和C品搅拌均匀，冷至室温后用制片机制成厚薄均匀的圆形膏片，置于医用透气胶带内，制得外用贴剂。