CN101123986A - 葡糖脑苷脂治疗疾病 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种在哺乳动物对象中治疗免疫介导或免疫相关疾病或紊乱、感染性疾病、代谢紊乱和癌症的方法。该方法包括给予所述哺乳动物对象天然产生的哺乳动物中间代谢产物或T细胞受体配体，优选是葡糖神经酰胺。在优选的实施方式中，这种哺乳动物对象是人。

Description

葡糖脑苷脂治疗疾病
相关专利申请的参考
本申请是2003年2月27日提交的题为“通过控制中间代谢产物水平调节免疫反应(Regulation of Immune Responses by Manipulation ofIntermediaryMetabolite Levels)”的美国专利申请号10/375,906的部分延续。上述专利申请的内容全部被纳入本文作为参考。
发明领域
本申请涉及未天然产生的哺乳动物中间代谢产物或T细胞受体配体，优选葡糖脑苷脂，在哺乳动物对象中治疗免疫介导或免疫相关疾病或紊乱、感染性疾病、代谢紊乱和癌症中的应用。
所有专利、专利申请、专利出版物、科学论文等的纳入被纳入本文作为参考，以更全面地描述本发明所属领域的状态。
发明背景
已描述了各种在哺乳动物对象中治疗免疫相关或免疫介导紊乱或疾病、感染性疾病、代谢紊乱和丙酮类型的癌症的方法。这些方法之一涉及调节对象的免疫反应。这包括使用能产生和应用一种称为选择性免疫下调(SIDR)的新型且意想不到的免疫调节方法或方法组合以下调免疫应答系统。免疫调节是对象的免疫系统中响应试剂、操作和方法的引入人工诱导的变异体。这些方法已在1997年2月28日提交的美国专利申请号08/808,629、2003年3月4日提交的美国专利申请号10/377,628、2003年3月4日提交的美国专利申请号10/377,603、1997年2月28日提交的美国专利申请号09/447,704、2001年5月9日提交的美国专利申请号10/385,440和1999年7月16日提交的美国专利申请号09/356,294中详细描述。所有上述专利的全部内容被纳入本申请作为参考，还可与本发明联用。
其它方法描述了驯化或处理细胞在治疗多种疾病中的应用。具体地说，这些方法涉及操纵对象中的NKT细胞群，以调节Th1/Th2平衡转向抗炎和致炎细胞因子产生细胞。这些方法的详细描述已在Yaron llan等，2003年6月25日提交的题为“驯化的NKT细胞及其在治疗免疫相关疾病中的应用”的美国专利申请(尚未给予申请号)、2001年12月24日提交的PCT申请号IL01/01197和2003年2月27日提交的美国专利申请号10/375,906中描述。所有上述专利的全部内容被纳入本申请作为参考，还可与本发明联用。
本发明提供一种在哺乳动物对象、优选人类对象中治疗免疫相关或免疫介导紊乱或疾病、感染性疾病、代谢紊乱和不同类型的癌症的的新型方法。该方法涉及给予对象一种中间代谢产物或T细胞受体配体。本文所述其它方法与纳入本文作为参考的现有专利申请中公开的其它方法一起应用该给药步骤。这些方法如下详细所述。
本发明使用中间代谢产物或T细胞受体配体治疗疾病。中间代谢产物或T细胞受体配体可包括脂质或缀合的生物分子。缀合的生物分子包括除抗体、细胞因子或激素外的糖脂、脂蛋白、载脂蛋白或糖蛋白。糖脂可包括单糖神经酰胺。单糖神经酰胺可包括葡糖神经酰胺或半乳糖神经酰胺。
葡糖神经酰胺是一种未天然来源的糖脂，包含结合葡萄糖的神经酰胺。作为鞘氨醇和脂肪酸，神经酰胺是所有鞘脂都具有结构单元。鞘脂具有多种细胞功能。这包括膜结构成分和参与细胞信号转导(Sullard等，2000 Journal ofMass Spectrometry 35：347-353)。葡糖神经酰胺由葡糖神经酰胺合酶制得，两分子结合在一起(见图1和图2)。葡糖神经酰胺的例子包括葡糖脑苷脂、或葡糖脑苷脂类似物或衍生物。
遗传性疾病高歇氏病的特征是葡糖神经酰胺的累积。在通过适当的酶疗法治疗该疾病的过程中，过量的葡糖神经酰胺降解。在治疗过程中，与丙型肝炎病毒感染相关的慢性活动性肝炎加剧。另外，某些患者(患前驱性糖尿病)的糖尿病发展，发生II型糖尿病。这些观察还直接证实，在人对象中，葡糖神经酰胺水平调节免疫介导或免疫调节紊乱或疾病的发生。
发明概述
本发明涉及使用一种未天然来源的哺乳动物中间代谢产物或T细胞受体配体在哺乳动物对象中治疗免疫介导或免疫相关疾病或紊乱、感染性疾病、代谢紊乱和癌症。在优选的实施方式中，这些哺乳动物对象是人类。
本发明提供一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，该方法包括给予对象有效量的哺乳动物中间代谢产物。
本发明还提供一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，该方法包括给予所述对象有效量的T细胞受体配体。
本发明还提供一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，该方法包括给予所述对象有效量的葡糖脑苷脂。
本发明的另一方面提供用于哺乳动物对象中治疗疾病的方法，该方法包括离体处理或驯化从哺乳动物对象获得的细胞。用有效量的中间代谢产物处理或驯化这些细胞。然后再将处理或驯化的细胞给予对象。
本发明的另一方面提供用于在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，该方法包括离体处理或驯化从哺乳动物对象获得的细胞。用有效量的T细胞受体配体处理或驯化这些细胞。然后再将处理或驯化的细胞给予对象。
本发明的再一方面提供用于在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，该方法包括离体处理或驯化从哺乳动物对象获得的细胞。用有效量的葡糖脑苷脂处理或驯化这些细胞。然后再将处理或驯化的细胞给予对象。
本发明还涉及在哺乳动物对象中治疗疾病，包括再给予对象处理或驯化的细胞，和直接给予所述对象有效量的中间代谢产物。
本发明提供在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，该方法包括再给予对象处理或驯化的细胞，和直接给予所述对象有效量的T细胞受体配体。
本发明提供在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，该方法包括再给予对象处理或驯化的细胞，和直接给予所述对象有效量的葡糖脑苷脂。
下面将详细描述本发明的许多其它方面和实施方式。
附图简要说明
图1说明葡糖脑苷脂的化学结构。
图2说明葡糖神经酰胺的合成途径。
图3说明葡糖脑苷脂对肝脏酶类的作用。
图4显示从小鼠制备的肝组织切片。
图5说明葡糖脑苷脂对血清IFNγ的作用。
图6说明葡糖脑苷脂对血清IL2的作用。
图7说明葡糖脑苷脂对血清IL12的作用。
图8说明葡糖脑苷脂对血清IL-4的作用。
图9说明葡糖脑苷脂对血清IL10的作用。
图10说明葡糖脑苷脂对肝NKT细胞的作用。
图11说明葡糖脑苷脂对脾NKT细胞的作用。
图12说明葡糖脑苷脂对NKT细胞体外增殖的影响。
图13显示从结肠制备的组织切片。
图14说明葡糖脑苷脂对目测结肠炎评分的影响。
图15说明葡糖脑苷脂对显微镜结肠炎评分的影响。
图16说明葡糖脑苷脂对脾CD4/CD8比率的影响。
图17说明葡糖脑苷脂对肝CD4/CD8比率的影响。
图18说明葡糖脑苷脂对血清细胞因子水平的影响。
图19显示葡糖脑苷脂治疗的葡萄糖耐量试验。
图20显示葡糖脑苷脂治疗的葡萄糖耐量试验。
图21显示葡糖脑苷脂对肿瘤大小的作用。
发明详述
本发明提供在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，该方法包括给予对象有效量的中间代谢产物。中间代谢产物包括但不限于：T细胞受体配体、脂质、极性脂质、缀合的生物分子、糖脂、脂蛋白、载脂蛋白、糖蛋白、单糖或多糖、神经酰胺、葡糖神经酰胺、半乳糖神经酰胺、葡糖脑苷脂、葡糖脑苷脂类似物或衍生物、鞘氨醇、鞘脂或神经酰胺。在本发明一个优选的实施方式中，哺乳动物对象是人。
本发明提供治疗疾病的方法，该方法包括离体驯化或处理从待治疗的对象或从其它对象获得的调节、免疫调节或NKT细胞。在中间代谢产物、抗原或表位、抗原呈递细胞或其任意组合的存在下，处理或驯化细胞。然后再给予对象处理或驯化的细胞。可通过过继转移给予对象这些细胞。
除上述涉及离体处理或驯化细胞的方法外，本发明还提供一种方法，该方法通过由多种途径直接给予待治疗对象有效量的中间代谢产物、抗原呈递细胞、抗原或表位或其任意组合完成离体处理或驯化。也可通过仅直接给予有效量的中间代谢产物、抗原呈递细胞、抗原或表位或其任意组合来治疗疾病。
用于治疗疾病的治疗组合物可包含有效量的中间代谢产物、抗原呈递细胞、抗原或表位或其任意组合。
上述任何方法治疗疾病可导致调节、免疫调节或NKT细胞的数量或功能改变。这种改变包括减少、抑制、或降低细胞的数量或功能。抑制可通过CD1d分子活化因子的竞争性取代引起。改变还包括刺激或升高行不得数量或功能。刺激可通过CD1d分散活化因子的结合增加而引起。
疾病的治疗还可导致细胞因子应答的改变。这些反应中可涉及免疫系统中的任何细胞因子。改变可导致致炎或抗炎反应。由于一些细胞因子增加的同时另一些细胞因子降低，也可同时存在致炎和抗炎反应。
治疗疾病的另一种结果是对象中调节、免疫调节或NKT细胞分布的改变。这种改变也可通过外周/肝内T细胞比率的改变而实现。另一种结果还包括肝内CD8+T细胞俘获的改变。肝内俘获可增加或降低。结果还包括脾内T细胞俘获的改变，所述改变可增加或降低。
本发明还提供两个体外筛选试验，用于筛选给予对象以治疗疾病的中间代谢产物的类似物或衍生物。第一个试验包括体外提供来自待治疗对象或其它对象的调节、免疫调节或NKT细胞，抗原呈递细胞及中间代谢产物的类似物或衍生物。如果鉴定到调节、免疫调节或NKT细胞增殖降低，那么该特定类似物或衍生物可治疗疾病。
第二个试验包括在第一试管中提供调节、免疫调节或NKT细胞和BSA；第二试管中，调节、免疫调节或NKT细胞及中间代谢产物的类似物或衍生物；第三试管中，调节、免疫调节或NKT细胞、抗原呈递细胞和BSA；第四试管中，调节、免疫调节或NKT细胞、抗原呈递细胞和中间代谢产物的类似物或衍生物。如果在第四试管中发现最少量的调节、免疫调节或NKT细胞增殖，那么该特定类似物或衍生物可治疗疾病。
下面描述了实施本发明的方法，支持的实验结果和结果的进一步解释。
实施例1
1葡糖脑苷脂治疗伴刀豆球蛋白-A肝炎
材料和方法
试剂
伴刀豆球蛋白A购自美国Worthington生物化学公司。
动物
试验5组雄性Balb/C小鼠(n＝6/组)。
血清转氨酶测定
通过自动市售试剂盒(Kodak SMA)测定血清ALT和AST血浆活性。
肝组织学检查
研究小鼠肝脏组织切片，以确定肝损伤水平。将每只小鼠的各肝片段固定在10％缓冲甲醛并包埋在石蜡中用于组织学分析。用苏木精/伊红染色切片，并进行组织学评价。
测定细胞因子水平
对所有组的小鼠取血，14,000rpm下离心。用Genzyme诊断试剂盒(Genzyme Diagnostics，MA)通过“夹心”ELISA法测定血清IFNγ、IL2、IL4、IL10和IL-12水平。
脾和肝淋巴细胞分离
按照前述分离脾细胞并除去红血球[Vicari，A.P.等，Immunology Today17(2)：71(1996)]。在该项研究结束时，按照前述稍有改进的方法从所有组的小鼠中分离肝内淋巴细胞[Vicari等，(1996)，同前；Bleicher，P.A.等，Science250：679-682(1990)]。隔膜上方切割下腔静脉并用5ml冷的PBS冲洗肝脏直至其变为苍白色。除去结缔组织和胆囊，将肝脏置于10ml装有冷无菌PBS的平皿中。肝脏和脾脏经无锈筛网(尺寸60，Sigma Chemical Co.，St.Louis MO)碾碎。细胞悬浮液置于50ml试管3分钟并在冷的PBS(1,250×rpm，10分钟)中洗涤两次，弃去碎片。细胞重悬于PBS中，细胞悬浮液过预浸渍在PBS中的尼龙筛网并收集未结合的细胞。细胞在45ml PBS(1,250×rpm，室温)中洗涤两次。为分离肝脏和脾脏淋巴细胞，将20ml的histopague 1077(SigmaDiagnostics，St.Louis，MO)缓慢地置于在50ml试管中悬浮于7ml PBS中的细胞下面。试管于室温以1,640rpm离心15分钟。收集位于界面处的细胞，稀释入50ml试管并用冰冷却的PBS洗涤两次(1,250rpm，10分钟)。每个小鼠肝脏约回收1×106个细胞。台盼蓝染色的存活率大于95％。分离了所有实验组所有动物的脾细胞和肝脏相关淋巴细胞。
用于测定外周血中NKT淋巴细胞的流式细胞术分析
肝内和脾内淋巴细胞分离后立即以三复管2-5×104个细胞/500μl PBS放入Falcon 2052试管中，与4ml 1％PBS孵育10分钟，1400rpm离心5分钟。细胞重悬于10μl具有抗NK1.1和抗CD3抗体的FCS(Pharmingen，USA)中并每隔10分钟搅拌30分钟。细胞在1％BSA中洗涤两次并保持在4℃直至读数。对照组仅加入5μl 1％BSA。使用荧光激活的细胞分选仪(FACSTAR plus，Becton Dickinson)对各组的1×104个细胞进行分析细胞分选。仅计数活细胞，非抗体处理的淋巴细胞的背景荧光从获得的水平中扣除。闸门设置为正向-和侧面散射以排除死细胞和红细胞。用Consort 30双色轮廓图程序(BectonDickinson，Oxnard，CA)或CELLQuest程序分析数据。
实施例1
通过抑制NKT调节淋巴细胞，葡糖脑苷脂对伴刀豆球蛋白-A肝炎的改善
为评价葡糖脑苷脂对伴刀豆球蛋白-A(Con-A)诱导的肝炎的免疫调节作用，研究了5组Balb/C小鼠，每组6只。分别在静脉内给予500μg Con-A之前2小时和之后2小时，用1μg葡糖脑苷脂腹膜内处理组A和组B。组C小鼠只接受500μg Con-A，不给予葡糖脑苷脂。组D小鼠用1μg葡糖脑苷脂处理，无Con-A。组E小鼠为原初(naive)对照。总结在表1中。
表1
试验组和对照组
组 ConA(iv 500μg) 葡糖脑苷脂ALT(ip 1μg)
A + +(ConA前2小时)
B + +(ConA后2小时)
C + -
D - +
E - -
用葡糖脑苷脂处理可明显改善Con-A诱导的肝炎，如图3中血清AST和ALT水平显著降低所显示。组A的ALT水平为57IU。组B和组C的ALT水平分别为420IU和801IU。组A的AST水平为143IU。组B和组C的AST水平分别为559IU和600IU。仅给予葡糖脑苷脂的组D中未显示AST或ALT水平与组E原初对照组相比的显著性降低。
如表2所示，组A中在给予Con-A之前2显示用葡糖脑苷脂处理，几乎所有的活检中得到正常结果。组B和组C小鼠显示局部缺血、坏死和凋亡。如图4所示，与组C的肝脏组织切片相比，组A和组B的肝脏组织切片显示损伤明显改善，而组C中存在大量肝细胞损伤和特征性凋亡相关改变。
表2
葡糖脑苷脂对肝脏病理学的作用
A 几乎所有活检中正常
B 缺血、坏死、凋亡
C 缺血、坏死、凋亡
D 正常
E 正常
图5显示葡糖脑苷脂处理可显著降低IFNY水平。组A约为3,725pg/ml，组C为5,620pg/ml。图6显示，葡糖脑苷脂处理的血清IL2水平增加：组A约为602pg/ml，组C为206pg/ml。如图7所示，葡糖脑苷脂处理的血清IL12水平也增加：组A约为22,250pg/ml，组C为10,100pg/ml，如图8和9分别所示，葡糖脑苷脂处理使血清IL4和IL10水平增加。根据图8，组A的血清IL4水平约为31pg/ml，组C为37pg/ml。根据图9，组A的血清IL10水平约为8pg/ml，组C为26pg/ml。
如图10所示，葡糖脑苷脂对免疫介导给予的作用与肝内NKT淋巴细胞显著降低有关。脾内NKT淋巴细胞不发生这种降低(见图11)。
在图12中，体外研究含各种成分的NKT细胞的增殖。组A含NKT细胞和BSA；组B含NKT细胞和葡糖脑苷脂；组C含NKT细胞、树突细胞和BSA；组D含NKT细胞、树突细胞和葡糖脑苷脂。刺激因子从组A到组D降低。这包埋NKT细胞增殖整体降低。葡糖脑苷脂和树突细胞的存在是NKT细胞减少所必需的。
给予葡糖脑苷脂可明显缓解Con-A肝炎。这种作用伴随着IFNY响应的显著降低。这些结果提示，葡糖脑苷脂的作用通过竞争性取代CD1d分子的活化因子，与抑制肝内NKT细胞有关。
II.葡糖脑苷脂处理结肠炎
材料和方法
动物
正常喂养的2-4月龄Balb/c雄性小鼠获自美国Jackson实验室并保存在Hadassah-Hebrew大学医学院的动物中心。用标准实验室饲料和12-小时白天/黑夜循环保存小鼠。
诱导结肠炎
通过直肠滴注溶解在100ml 50％的乙醇中的TNBS，1mg/小鼠，诱导2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)-结肠炎[Collins，C.等，Eur.J.Immunol.26：3114-3118(1996)]。
评价葡糖脑苷脂对实验结肠炎的作用
通过检测以下结肠炎参数评价葡糖脑苷脂：
结肠炎的临床评价：
整个研究中每天观察腹泻。
结肠炎的目测评分
诱导结肠炎后用标准参数进行14天的结肠炎评价[Madsen，K.L.等，Gastroenterology 113：151-159(1997)；Trop，S.等，Hepatology 27：746-755(1999)]。
测定四个目测参数，即：腹泻；结肠溃疡程度；肠和腹膜粘连；以及壁厚度。由两位有经验的检查人员对所有参数从0(完全正常)到3(最严重)进行双盲打分。
组织损伤级别
为进行炎症的组织学评价，切除远端结肠组织(最后的10cm)并固定在10％甲醛中。每只小鼠5个石蜡切片，然后通过标准技术用苏木精-伊红染色。显微镜下对结肠横断面炎症程度半定量评分，从0到4[Madsen等，(1997)同前.；Trop等，Hepatology 27：746-755(1999)]。0分：正常，没有炎症表现；1分：非常低水平的白细胞浸润；2分：低水平白细胞浸润；和3分：高水平浸润，伴随高血管密度和肠壁变厚；4分：透壁浸润，伴随杯形细胞损失、高血管密度、壁变厚和正常肠结构断裂。由两位有经验的检查人员进行双盲评分。
脾和肝淋巴细胞的分离
按照前述述分离脾细胞和除去红细胞[Vicari，A.P.等，Immunology Today17(2)：71(1996)]。在该项研究结束时，按照前述稍有改进的方法从所有组的小鼠中分离肝内淋巴细胞[Vicari等，(1996)，同前；Bleicher，P.A.等，Science250：679-682(1990)]。切割隔膜上方的下腔静脉割并用5ml冷的PBS冲洗肝脏直至其变为苍白色。除去结缔组织和胆囊，将肝脏置于10ml装有冷的无菌PBS的平皿中。肝脏和脾脏经无锈筛网(规格60，Sigma Chemical Co.，St.LouisMO)碾碎。细胞悬浮液置于50ml试管3分钟并在冷的PBS(1,250×rpm，10分钟)中洗涤两次，弃去碎片。细胞重悬于PBS中，细胞悬浮液过预浸渍在PBS中的尼龙筛网并收集未结合的细胞。细胞在45ml PBS(1,250×rpm，室温)中洗涤两次。为分离肝脏和脾脏淋巴细胞，将20ml的histopague 1077(SigmaDiagnostics，St.Louis，MO)缓慢地置于在50ml试管中悬浮于7ml PBS中的细胞下。试管于室温以1,640rpm离心15分钟。收集位于界面处的细胞，稀释入50ml试管并用冰冷却的PBS洗涤两次(1,250rpm，10分钟)。每个小鼠肝脏约回收1×106个细胞。台盼蓝染色的存活率大于95％。分离了所有实验组所有动物的脾细胞和肝脏相关淋巴细胞。
肝内和脾内淋巴细胞的FACS分析NKT、CD4和CD8标记
肝内和脾内淋巴细胞分离后立即以三复管2-5×104个细胞/500μl PBS放入Falcon 2052试管中，与4ml 1％PBS孵育10分钟，1400rpm离心5分钟。使用抗NK1.1、抗CD3、抗CD4和抗CD8的抗体进行淋巴细胞亚群的分析。细胞在1％BSA中洗涤两次并保持在4℃直至读数。对照组仅加入5μl 1％BSA。使用荧光激活的细胞分选仪(FACSTAR plus，Becton Dickinson)对各组的1×104个细胞进行分析细胞分选。仅计数活细胞，非抗体处理的淋巴细胞的背景荧光从获得的水平中扣除。闸门设置为正向-和侧面散射以排除死细胞和红细胞。用Consort 30双色轮廓图程序(Becton Dickinson，Oxnard，CA)或CELLQuest程序分析数据。
测定细胞因子水平
对所有组的小鼠取血，14,000rpm下离心。用Genzyme诊断试剂盒(Genzyme Diagnostics，MA)通过“夹心”ELISA法测定血清IFNY、IL2、IL4、IL10和IL-12水平。
实施例1
葡糖脑苷脂改善实验性结肠炎
为评价葡糖脑苷脂在实验性结肠炎的鼠模型中的免疫调节作用，研究了四组Balb/c小鼠，每组10只小鼠。组A和组B小鼠给予直肠TNBS，组C和组D给予正常盐水。组B和组D小鼠腹膜内每天给予1.5μg葡糖脑苷脂，持续9天。总结如表3所示。
表3
实验组和对照组
组 TNBS 葡糖脑苷脂(ip 1.5μg)
A + -
B + +
C - -
D - +
如图14所示，用葡糖脑苷脂处理显示腹泻的目测结肠炎评分改善。组A的评分约为0.22，组B评分约为0.5。对结肠溃疡程度的评分也改善，组A约为0.11，组B约为0.2。对壁厚度的目测评分也有少许改善，组A和组B分别约为2.44和2.56。然而，组A和组B的肠和腹膜粘连增加，评分分别约为2.56和1.4。
如图13和图15所示，组A(不接受葡糖脑苷脂)具有最高的显微镜结肠炎评分，约为3.6，表明炎症程度最高。组B、C和D具有实际正常的活组织检查(较低的显微镜评分)。
组A小鼠与组B小鼠相比目测和显微镜结肠炎评分显著改善表明，这说明给予葡糖脑苷脂可明显改善结肠炎。
葡糖脑苷脂对组C和组D小鼠的作用显示，脾CD4/CD8比率分别约为3.0和1.89。葡糖脑苷脂对组C和D小鼠的作用显示，肝CD4/CD8比率分别约为8.8和3.4。组C小鼠(未处理动物)与组D小鼠(葡糖脑苷脂处理的小鼠)上述比率之比分别为0.34和0.65。这些结果表明，外周和肝中NKT细胞减少，外周和肝中CD4/CD8比率降低。因此，葡糖脑苷脂的作用是更多的肝内CD8俘获。这些结果在图16和图17中显示。
葡糖脑苷脂对组A和组B小鼠的作用显示，脾CD4/CD8比率分别为1.89和3.33。葡糖脑苷脂对组A和组B小鼠的作用显示，肝CD4/CD8比率分别为5.0和5.24。组A小鼠(没有用葡糖脑苷脂处理的患结肠炎的动物)与组B小鼠(用葡糖脑苷脂处理的结肠炎动物)上述比率之比分别为0.34和0.65。这些结果显示外周中NKT细胞增加，而肝中NKT细胞不变。外周CD4/CD8比率增加，肝CD4/CD8比率适当增加。这些结果也在图16和图17中显示。葡糖脑苷脂处理导致更多的肝内CD8俘获。
图18显示葡糖脑苷脂对血清细胞因子水平的作用。葡糖脑苷脂处理的血清IFNY水平增加。组A约为8.3pg/ml，组B约为27.1pg/ml。葡糖脑苷脂处理的血清TNFY水平也增加：组A约为75pg/ml，组B约为103.6pg/ml。葡糖脑苷脂处理的血清IL4水平也增加：组A约为5.7pg/ml，组B约为9.1pg/ml。然而，葡糖脑苷脂处理的血清IL10水平降低。组A血清IL10水平约为42.1pg/ml，组B约为21.4pg/ml。
葡糖脑苷脂处理缓解结肠炎伴随着肝内CD8+T细胞俘获明显增加。组A葡糖脑苷脂处理的小鼠与组B未处理小鼠相比，外周/肝内CD4+/CD8+比率增加85％。给予原初动物葡糖脑苷脂观察到类似作用：组C葡糖脑苷脂处理的小鼠与原初动物相比，外周/肝内CD4+/CD8+比率增加61％。虽然葡糖脑苷脂处理可使原初小鼠的外周/肝内NKT细胞比率增加108％，葡糖脑苷脂对TNBS结肠炎的有益作用与该比率的相对降低有关。
口服给予15μg葡糖脑苷脂进行相同的实验，可得到类似的结果。组A葡糖脑苷脂处理小鼠与未处理组B小鼠相比，目测和显微镜结肠炎评分的明显改善，说明显著缓解了结肠炎，如表4所示。
表4
口服给予葡糖脑苷脂治疗结肠炎显微镜和目测结果。
显微镜
小鼠编号        A(TNBS)     B(TNBS+15μgGC)     C(原初)          D(原初+150μgGC)
    1     3     0.5     0.5     1
    2     3.5     1.5     1.5     1
    3     0.5     0.5
    4     2     0.5     2
    5     4     1.5     1.5     0
    6     2     1.5     0.5     0
    7     2.5     0     0.5     0.5
    8     4     1     0
    9     2     0.5     0
    10     2     1
目测
  小鼠编号       A(TNBS)        B(TNBS+15μgGC)        C(原初)          D(原初+150μgGC)
    1     0     0.5     0     0.5
    2     0.5     0     0     0.5
    3     1     0.5     0     0
    4     1.5     0.5     0     0
    5     1.5     0.5     0     0
    6     3.5     0.5     0     0
    7     2.5     0.5     0     0
    8     0     0     0
    9     0     0     0
    10     0     0     0
III.葡糖脑苷脂处理非酗酒型脂肪肝
材料和方法
动物
十周龄雄性瘦蛋白缺陷型C57BL/6J小鼠和消瘦的C57BL/6小鼠购自Harlan实验室并维持在Hadassah-Hebrew大学医学院动物中心。用标准实验室饲料和12-小时白天/黑夜循环保存小鼠。
葡萄糖耐量试验
口服给予葡萄糖(1克/公斤体重)进行葡萄糖耐量试验。0’、15’、30’、60’、90’、120’和180’时尾静脉取血，测定葡萄糖。用Elite葡萄糖测试带和葡萄糖计检测葡萄糖水平。
脂肪含量的肝MRI检测
使用双重-回波化学位移梯度-回波磁共振成像(MRI)序列检测肝脂肪含量，单次探测获得同相和反相图像以评价/定量小鼠肝脏中的脂肪。T1-加权反相MRI技术(T1-weighted opposed-phase MRI technique)可灵敏地检测组织中较少量的脂肪。所有MRI用1.5-T系统(Signa LX；GE，Milwaukee，USA)进行。双重回波MR成像以1 25毫秒的重复时间(TR)、4和6.5毫秒的双重回波时间(TE)、80°的脉冲角(flip angle)进行。成像参数包括3mm的截面厚度、13-cm的视野、256*160的矩阵并且获得了一种信号；使用的是拐点线圈(knee coil)。在肝脏水平获得横向(轴向)和冠状图像，截面厚度3mm且无交叉缺口。同相和反相图像之间信号强度变化的SI检测的定量评价按照以前报道所述的方法计算(Mitchell DG等，Invest.Radiol 26：1041-1052(1991)；Tomohiro N等，Radiology 218：642-646(2001))。SI指数按照下式计算：SI指数＝(SIip-SIop)/SIip，其中SIip是同相图像上的SI，SIop是反相图像上的SI。SI指数反映与同相图像上的SI相比，反性图像上的SI损失的部分。
实施例1
葡糖脑苷脂对糖尿病的作用
为评价葡糖脑苷脂对NASH模型的各种代谢和免疫成分的作用，研究了四组C57bl小鼠，每组12只小鼠。如表5所示，组A和组B小鼠是ob/ob小鼠，组C和组D小鼠不是。组A和组C小鼠每隔一天腹膜内注射100μl PBS中的1.5μg，持续14天。组B和组D分别是未处理的原初ob/ob小鼠和C57bl小鼠。
表5
实验组和对照组
A组 注射葡糖脑苷脂的OB/OB小鼠每隔一天ip给予每只小鼠100μl PBS中的1.5μg
B组 未处理的原初OB/OB小鼠
C组 注射葡糖脑苷脂的C57bl小鼠每隔一天ip给予每只小鼠100μl PBS中的1.5μg
D组 未处理的原初C57bl小鼠
第14天，对每组中的6只进行葡萄糖耐量试验。如图19所示，葡糖脑苷脂处理的组A小鼠比未处理的原初ob/ob小鼠具有更高的葡萄糖耐量。这就提示，注射葡糖脑苷脂改变了ob/ob小鼠的代谢特征，改善其葡萄糖耐量结果，缓解糖尿病状况。
实施例2
口服给予葡糖脑苷脂对NASH的作用
为评价葡糖脑苷脂对NASH模型各种代谢和免疫成分的作用，研究了四组C57bl小鼠，每组12只小鼠。如表6所示，组A和组B小鼠是ob/ob小鼠，组C和组D小鼠不是。组A和组C小鼠每隔一天腹膜内注射100μl PBS中的1.5μg，持续14天。组B和组D分别是未处理的原初ob/ob小鼠和C57bl小鼠。
表6
实验组和对照组
A组 喂食葡糖脑苷脂的OB/OB小鼠每隔一天给予每只小鼠100μl PBS中的15μg
B组 未处理的原初OB/OB小鼠
C组 喂食葡糖脑苷脂的C57bl小鼠每隔一天给予每只小鼠100μl PBS中的15μg
D组 未处理的原初C57bl小鼠
第14天，对每组中的6只进行葡萄糖耐量试验。如图20所示，葡糖脑苷脂处理的组A小鼠比未处理的原初ob/ob小鼠具有更高的葡萄糖耐量。这就提示，通过口服免疫调节诱导的免疫调节改变了ob/ob小鼠的代谢特征，改善其葡萄糖耐量结果，缓解糖尿病状况。
实施例3
葡糖脑苷脂对肝脂肪含量的作用
为测定葡糖脑苷脂对NASH模型各种代谢和免疫成分的作用，研究了四组C57bl小鼠，每组12只小鼠。如表7所示，组A和组B小鼠是ob/ob小鼠，组C和组D小鼠不是。组A和组C小鼠每隔一天腹膜内注射100μl PBS中的1.5μg，持续14天。组B和组D分别是未处理的原初ob/ob小鼠和C57bl小鼠。
表7
实验组和对照组
A组 注射葡糖脑苷脂的OB/OB小鼠每隔一天ip给予每只小鼠100μl PBS中的1.5μg
B组 未处理的原初OB/OB小鼠
C组 注射葡糖脑苷脂的C57bl小鼠每隔一天ip给予每只小鼠100μl PBS中的1.5μg
D组 未处理的原初C57bl小鼠
为测定肝脂肪含量，试验第14天对所有组的小鼠进行腹部MRI(表8)。测定肝脂肪含量并记为SI指数(IP-OP/IP)。也测定了以面积表示的肝大小。结果表明葡糖脑苷脂处理使肝脂肪含量降低。葡糖脑苷脂处理的组A小鼠SI指数为0.46，而组B的SI指数为0.54。葡糖脑苷脂处理还可降低肝脏大小。葡糖脑苷脂处理的组A小鼠肝脏面积为20.14，而组B的肝脏面积为24.2。
表8
6组小鼠的MRI肝脂肪含量的计算值
同相图像 反相图像   脂肪含量(IP-OP)     SI指数(IP-OP/IP) 面积
脂纺 536 351 185 0.35 25
    603     293     310     0.51     16
    575     251     324     0.56     20.5
    554     234     320     0.58     23.5
    520     202     378     0.61     30.5
    560     201     359     0.64     28.5
  平均值     0.54     24.2
同相图像 反相图像   脂肪含量(IP-OP)     SI指数(IP-OP/IP) 面积
脂肪+Tx     514     279     235     0.46     13.5
    527     256     271     0.51     20
    574     305     269     0.47     26
    561     344     217     0.39     18.5
    462     283     179     0.39     21.5
    579     309     270     0.47     27.5
    1132     502     629     0.56     14
  平均值     0.464286     20.14286
同相图像 反相图像     脂肪含量(IP-OP)     SI指数(IP-OP/IP) 面积
消瘦 518 423 95 0.18 10.5
    517     434     83     0.16     11.5
476 397 79 0.17 11.5
1040 813 227 0.22 10
    892     731     161     0.18     10
    平均值     0.18     10.7
同相图像 反相图像   脂肪含量(IP-OP)     SI指数(IP-OP/IP) 面积
消瘦+Tx 547 479 68 0.12 16.5
    443     424     19     0.04     14
    472     409     63     0.13     8
    507     440     67     0.13     16.5
    532     438     94     0.18     5.5
534 481 53 0.1 10
    987     871     117     0.12     15
974 839 135 0.14 13.5
    930     870     60     0.06     9
    302     787     115     0.13     8
    927     889     40     0.04     15
    910     887     23     0.03     10
平均值 0.1 11.75
这些结果表明葡糖脑苷脂改变了代谢特征，使脂肪俘获速率降低并在易感哺乳动物肝中降低NASH。
IV.葡糖脑苷脂治疗黑色素瘤
材料和方法
动物
研究四组C57bl小鼠。
组织学检查
检查小鼠肺组织切片，以确定肺损伤程度。将每只小鼠的单个肺切片固定在10％缓冲甲醛中并包埋在石蜡中，用于组织学分析。用苏木精/伊红染色切片，并进行组织学评价。
实施例1
葡糖脑苷脂对治疗黑色素瘤的作用
为评价葡糖脑苷脂对黑色素瘤的作用，研究了四组C57bl小鼠，每组8只小鼠。组A和组B皮下给予1×106细胞的B16黑色素瘤细胞，组C和组D静脉内给予1×105细胞的B16黑色素瘤细胞，以诱导黑色素瘤。从第一周的第二天开始，跳过每星期的最后两天，每天对组A和组C小鼠腹膜内给予1μg葡糖脑苷脂。组B和组D小鼠只给予盐水。结果总结在表9中。
表9
实验组和对照组
 组 黑色素瘤
 A GC处理 sc
 B 盐水 sc
 C GC处理 iv
 D 盐水 iv
葡糖脑苷脂处理可明显改善肿瘤大小。切除肿瘤，然后测定。组a的平均瘤重为1.63±0.82g，组B平均瘤重为2.89±0.01g。肿瘤大小的差异如图21所示。
葡糖脑苷脂处理还可减小肺转移。固定组C和组D的肺细胞用于组织学分析。组C中肺转移的平均数为3±1/肺，组D肺转移的平均数为8±3/肺。

Claims (115)

1.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物。
2.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的T细胞配体。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，结果包括所述对象代谢特征的改变。
4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，结果包括葡萄糖耐量增加。
5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，结果包括肝脏脂肪含量降低。
6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，结果包括细胞因子应答改变。
7.一种对给予哺乳动物对象以治疗疾病的中间代谢产物的类似物或衍生物进行体外筛选试验的方法，所述方法包括：
a)体外提供：
(i)来自所述对象或其它对象的调节、免疫调节或NKT细胞；
(ii)抗原呈递细胞；
(iii)所述中间代谢产物的类似物或衍生物；和
b)鉴定所述调节、免疫调节或NKT细胞增殖的降低。
8.一种对给予哺乳动物对象以治疗疾病的中间代谢产物的类似物或衍生物进行体外筛选试验的方法，所述方法包括：
a)体外提供：
(i)第一试管中的调节、免疫调节或NKT细胞和BSA；
(ii)第二试管中的调节、免疫调节或NKT细胞及中间代谢产物的所述类似物或衍生物；
(iii)第三试管中的调节、免疫调节或NKT细胞、抗原呈递细胞和BSA；
(iv)第四试管中的调节、免疫调节或NKT细胞、抗原呈递细胞和所述中间代谢产物的类似物或衍生物；
b)测定每个所述试管中调节、免疫调节或NKT细胞增殖的量；和
c)鉴定所述第四试管中调节、免疫调节或NKT细胞增殖的最少量。
9.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括：
a)从所述对象或其它对象获得细胞，所述细胞包含调节、免疫调节或NKT细胞；
b)在以下成分的存在下，离体处理或驯化所述细胞：
(i)中间代谢产物；
(ii)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；
(iii)抗原呈递细胞；或
(iv)上述成分的任意组合；和
b)再给予所述对象所述处理或驯化的细胞。
10.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括：
a)从所述对象或其它对象获得细胞，所述细胞包含调节、免疫调节或NKT细胞；
b)在以下成分的存在下，离体处理或驯化所述细胞：
(i)中间代谢产物；
(ii)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；
(iii)抗原呈递细胞；或
(iv)上述成分的任意组合；和
c)再给予所述对象所述处理或驯化的细胞；和
d)给予所述对象：
(i)有效量的中间代谢产物；
(ii)抗原呈递细胞；
(iii)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；或
(iv)上述成分的任意组合。
11.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象以下成分：
a)有效量的中间代谢产物；
b)抗原呈递细胞；
c)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；或
d)上述成分的任意组合。
12.一种用于在哺乳动物对象中治疗疾病的治疗组合物，所述组合物包含：
a)中间代谢产物；
b)抗原呈递细胞；
c)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；或
d)上述成分的任意组合。
13.如权利要求1或3-12中任一项所述的方法，其特征在于，所述中间代谢产物包括脂质或缀合的生物分子。
14.如权利要求1或3-12中任一项所述的方法，其特征在于，所述中间代谢产物包括任何极性脂质。
15.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述缀合的生物分子包括除抗体、细胞因子或激素外的糖脂、脂蛋白、载脂蛋白或糖蛋白。
16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述糖脂包括单糖神经酰胺。
17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述单糖神经酰胺包括葡糖神经酰胺或半乳糖神经酰胺。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述葡糖神经酰胺包括葡糖脑苷脂。
19.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述葡糖神经酰胺包括葡糖脑苷脂类似物或衍生物。
20.如权利要求9-19中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗原包括：从患有所述免疫相关或免疫介导紊乱或疾病的供体获得的同种异体抗原、异种抗原、合成抗原、自体抗原、非自体抗原、重组制备的抗原、或它们的任意组合。
21.如权利要求7-20中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗原呈递细胞包括树突细胞或呈递CD1d受体的树突细胞。
22.一种体外筛选T细胞受体配体的类似物或衍生物的方法，所述方法包括：
a)体外提供：
(i)来自所述对象或其它对象的调节、免疫调节或NKT细胞；
(ii)抗原呈递细胞；
(iii)所述T细胞受体配体的类似物或衍生物；
b)鉴定所述调节、免疫调节或NKT细胞增殖的降低。
23.一种对给予哺乳动物对象以治疗疾病的T细胞受体配体类似物或衍生物进行体外筛选试验的方法，所述方法包括：
a)体外提供：
(i)第一试管中的调节、免疫调节或NKT细胞和BSA；
(ii)第二试管中的调节、免疫调节或NKT细胞及T细胞受体配体的所述类似物或衍生物；
(iii)第三试管中的调节、免疫调节或NKT细胞、抗原呈递细胞和BSA；
(iv)第四试管中的调节、免疫调节或NKT细胞、抗原呈递细胞和所述T细胞受体配体的类似物或衍生物；
b)测定每个所述试管中调节、免疫调节或NKT细胞增殖的量；和
c)鉴定所述第四试管中调节、免疫调节或NKT细胞增殖的最少量。
24.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括：
a)从所述对象或其它对象获得细胞，所述细胞包含调节、免疫调节或NKT细胞；
b)在以下成分的存在下，离体处理或驯化所述细胞：
(i)T细胞受体配体；
(ii)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；和
(iii)抗原呈递细胞；或
(iv)上述成分的任意组合；和
b)再给予所述对象所述处理或驯化的细胞。
25.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括：
a)从所述对象或其它对象获得细胞，所述细胞包含调节、免疫调节或NKT细胞；
b)在以下成分的存在下，离体处理或驯化所述细胞：
(i)T细胞受体配体；
(ii)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；
(iii)抗原呈递细胞；或
(iv)上述成分的任意组合；和
c)再给予所述对象所述处理或驯化的细胞；和
d)给予所述对象：
(i)有效量的T细胞受体配体；
(ii)抗原呈递细胞；
(iii)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；或
(iv)上述成分的任意组合。
26.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象以下成分：
a)有效量的T细胞受体配体；
b)抗原呈递细胞；
c)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；或
d)上述成分的任意组合。
27.一种用于在哺乳动物对象中治疗疾病的治疗组合物，所述组合物包含：
a)T细胞受体配体；
b)抗原呈递细胞；
c)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；或
d)上述成分的任意组合。
28.如权利要求2-6或22-27中任一项所述的方法，其特征在于，所述T细胞受体配体包括脂质或缀合的生物分子。
29.如权利要求2-6或22-27中任一项所述的方法，其特征在于，所述T细胞受体配体包括任何极性脂质。
30.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述缀合的生物分子包括除抗体、细胞因子或激素外的糖脂、脂蛋白、载脂蛋白或糖蛋白。
31.如权利要求30所述的方法，其特征在于，所述糖脂包括单糖神经酰胺。
32.如权利要求31所述的方法，其特征在于，所述单糖神经酰胺包括葡糖神经酰胺或半乳糖神经酰胺。
33.如权利要求32所述的方法，其特征在于，所述葡糖神经酰胺包括葡糖脑苷脂。
34.如权利要求32所述的方法，其特征在于，所述葡糖神经酰胺包括葡糖脑苷脂类似物或衍生物。
35.如权利要求24-34中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗原包括：从患有所述免疫相关或免疫介导紊乱或疾病的供体获得的同种异体抗原、异种抗原、合成抗原、自体抗原、非自体抗原、重组制备的抗原、或它们的任意组合。
36.如权利要求24-34中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗原呈递细胞包括树突细胞或呈递CD1d受体的树突细胞。
37.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其特征在于，所述给药步骤包括：口服、静脉内、腹膜内、肌内、胃肠外、经皮、阴道内、鼻内、粘膜、舌下、局部、直肠或皮下给药，或它们的任意组合。
38.如权利要求1-37中任一项所述的方法，其特征在于，所述疾病包括Con-A肝炎、任何类型的病毒介导或免疫药物介导的肝炎、细菌感染、病毒感染、真菌感染或寄生虫感染。
39.如权利要求38所述的方法，其特征在于，所述病毒感染包括HBV、HCV或HIV。
40.如权利要求1-37中任一项所述的方法，其特征在于，所述疾病包括结肠炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、全身性红斑狼疮、骨质疏松症、非酗酒型脂肪肝、糖尿病、葡萄糖耐受不良、肥胖症、代谢综合征、移植物抗宿主病、多发性硬化、类风湿性关节炎、JRA、眼病、Uvitis、皮肤病、肾病、血液病、ITP、PA、自身免疫肝病、其它风湿病、内分泌疾病、脉管炎、硬皮病、CREST、神经病、肺病、肌炎、耳病、重症肌无力、非-HIV性AIDS、(全身性)红斑狼疮、幼年型类风湿关节炎、特发性血小板减少性紫癜、硬皮病、雷诺现象、混合结缔组织紊乱、乳糜泻、CREST综合征(皮肤钙质沉着症、雷诺现象、指趾硬皮病及毛细血管扩张综合征、指端硬化和毛细管扩张)或任何其它免疫相关或免疫介导的紊乱或疾病。
41.如权利要求1-37中任一项所述的方法，其特征在于，所述疾病包括：高脂血症、动脉粥样硬化、原发性肺动脉高压和所有其它类型的高血压、任何类型的缺血性心脏病、哮喘、结节病、慢性肺病、爱尔茨海默病、任何类型的神经变性疾病、脑血管疾病、或任何其它类型的代谢紊乱。
42.如权利要求1-37中任一项所述的方法，其特征在于，所述疾病包括：黑色素瘤、任何类型的肿瘤性疾病、任何肿瘤生长、恶性或非恶性肿瘤、实体瘤、非实体瘤、肝细胞癌、白血病、淋巴瘤、或任何其它类型的癌症。
43.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物，所述给予的结果包括调节、免疫调节或N KT细胞数量或功能的改变。
44.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物，所述给予的结果包括调节、免疫调节或NKT细胞数量或功能的减少、抑制或降低。
45.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物，所述给予的结果包括调节、免疫调节或NKT细胞数量或功能的刺激或增加。
46.如权利要求44或45所述的方法，其特征在于，所述调节、免疫调节或NKT细胞是肝内NKT细胞。
47.如权利要求44所述的方法，其特征在于，所述抑制包括竞争性取代CD1d分子的活化因子。
48.如权利要求45所述的方法，其特征在于，所述刺激包括增加CD1d分子活化因子的结合。
49.如权利要求43、44或45所述的方法，其特征在于，所述结果还包括细胞因子应答的改变。
50.如权利要求49所述的方法，其特征在于，所述细胞因子包括IFNγ、IL2、IL4、IL10或IL12。
51.如权利要求49所述的方法，其特征在于，所述细胞因子应答包括促炎反应、抗炎反应、或促炎和抗炎反应并行。
52.如权利要求43、44或45所述的方法，其特征在于，所述结果还包括所述对象免疫系统中Th1/Th2平衡的改变。
53.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物和抗原呈递细胞，所述给予的结果包括调节、免疫调节或NKT细胞增殖的降低。
54.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物和抗原呈递细胞，所述给予的结果包括调节、免疫调节或NKT细胞增殖的增加。
55.一种对给予哺乳动物对象导致调节、免疫调节或NKT细胞数量改变以治疗疾病的中间代谢产物的类似物或衍生物进行体外筛选试验的方法，所述筛选方法包括：
a)体外提供：
(i)来自所述对象或其它对象的调节、免疫调节或NKT细胞；
(ii)抗原呈递细胞；
(iii)所述中间代谢产物的类似物或衍生物；和
b)鉴定所述调节、免疫调节或NKT细胞增殖的降低。
56.一种对给予哺乳动物对象导致调节、免疫调节或NKT细胞数量改变以治疗疾病的中间代谢产物的类似物或衍生物进行体外筛选试验的方法，所述筛选方法包括：
a)体外提供：
(i)第一试管中的调节、免疫调节或NKT细胞和BSA；
(ii)第二试管中的调节、免疫调节或NKT细胞及中间代谢产物的所述类似物或衍生物；
(iii)第三试管中的调节、免疫调节或NKT细胞、抗原呈递细胞和BSA；
(iv)第四试管中的调节、免疫调节或NKT细胞、抗原呈递细胞和所述中间代谢产物的类似物或衍生物；
b)测定每个所述试管中调节、免疫调节或NKT细胞增殖的量；和
c)鉴定所述第四试管中调节、免疫调节或NKT细胞增殖的最少量。
57.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括：
a)从所述对象或其它对象获得细胞，所述细胞包含调节、免疫调节或NKT细胞；
b)在以下成分的存在下，离体处理或驯化所述细胞：
(i)中间代谢产物；
(ii)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；
(iii)抗原呈递细胞；或
(iv)上述成分的任意组合；和
b)再给予所述对象所述处理或驯化的细胞，所述给予的结果包括所述细胞数量的改变。
58.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括：
a)从所述对象或其它对象获得细胞，所述细胞包含调节、免疫调节或NKT细胞；
b)在以下成分的存在下，离体处理或驯化所述细胞：
(i)中间代谢产物；
(ii)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；
(iii)抗原呈递细胞；或
(iv)上述成分的任意组合；和
c)再给予所述对象所述处理或驯化的细胞；和
d)给予所述对象：
(i)有效量的中间代谢产物；
(ii)抗原呈递细胞；
(iii)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；或
(iv)上述成分的任意组合。
e)所述给予的结果包括调节细胞、免疫调节细胞或NKT细胞数量的改变。
59.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象以下成分：
a)有效量的中间代谢产物；
b)抗原呈递细胞；
c)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；或
d)上述成分的任意组合；
e)所述给予的结果包括调节细胞、免疫调节细胞或NKT细胞数量的改变。
60.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物，以调节或改变所述对象免疫系统中至少一种成分。
61.一种用于在哺乳动物对象中治疗疾病的治疗组合物，给予所述组合物可导致调节、免疫调节或NKT细胞的数量改变，所述组合物包含：
a)中间代谢产物；
b)抗原呈递细胞；
c)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；或
d)上述成分的任意组合。
62.如权利要求61所述的组合物，其特征在于，所述结果包括所述细胞数量或功能的减少、抑制或降低。
63.如权利要求61所述的组合物，其特征在于，所述结果包括所述细胞数量或功能刺激或增加。
64.一种中间代谢产物在制造用于操纵患病哺乳动物对象的调节、免疫调节或NKT细胞的组合物中的应用。
65.如权利要求64所述的方法，其特征在于，所述操纵包括所述细胞数量或功能的改变。
66.如权利要求65所述的方法，其特征在于，所述改变包括所述细胞数量或功能的减少、抑制或降低。
67.如权利要求所述的方法，其特征在于，所述改变包括所述细胞数量或功能的刺激或增加。
68.如权利要求43-67中任一项所述的方法，其特征在于，所述中间代谢产物包括脂质或缀合的生物分子。
69.如权利要求43-67中任一项所述的方法，其特征在于，所述中间代谢产物包括任何极性脂质。
70.如权利要求68所述的方法，其特征在于，所述缀合的生物分子包括除抗体、细胞因子或激素外的糖脂、脂蛋白、载脂蛋白或糖蛋白。
71.如权利要求70所述的方法，其特征在于，所述糖脂包括单糖神经酰胺。
72.如权利要求71所述的方法，其特征在于，所述单糖神经酰胺包括葡糖神经酰胺或半乳糖神经酰胺。
73.如权利要求72所述的方法，其特征在于，所述葡糖神经酰胺包括葡糖脑苷脂。
74.如权利要求72所述的方法，其特征在于，所述葡糖神经酰胺包括葡糖脑苷脂类似物或衍生物。
75.如权利要求57、58、59、61或62中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗原包括：从患有所述免疫相关或免疫介导紊乱或疾病的供体获得的同种异体抗原、异种抗原、合成抗原、自体抗原、非自体抗原、重组制备的抗原、或它们的任意组合。
76.如权利要求55-62中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗原呈递细胞包括树突细胞或呈递CD1受体的树突细胞。
77.如权利要求43-76中任一项所述的方法，其特征在于，所述疾病是Con-A肝炎。
78.如权利要求43-76中任一项所述的方法，其特征在于，所述疾病包括任何类型的病毒介导或免疫药物介导的肝炎、细菌感染、病毒感染、真菌感染或寄生虫感染。
79.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述病毒感染包括HBV、HCV或HIV。
80.如权利要求43-76所述的方法，其特征在于，所述给药步骤包括：口服、静脉内、腹膜内、肌内、胃肠外、经皮、阴道内、鼻内、粘膜、舌下、局部、直肠或皮下给药，或它们的任意组合。
81.一种在哺乳动物对象中治疗免疫介导或免疫相关紊乱或疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物，所述给予的结果包括所述对象中调节、免疫调节或NKT细胞分布的改变。
82.一种在哺乳动物对象中治疗免疫介导或免疫相关紊乱或疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物，所述给予的结果包括所述对象中调节、免疫调节或NKT细胞分布的改变和/或外周/肝内T细胞比率的改变。
83.如权利要求82所述的方法，其特征在于，所述外周/肝内T细胞比率的改变包括所述比率的增加。
84.一种在哺乳动物对象中治疗免疫介导或免疫相关紊乱或疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物，所述给予的结果包括所述对象中调节、免疫调节或NKT细胞分布的改变和/或肝内CD8+T细胞俘获的改变。
85.如权利要求84所述的方法，其特征在于，所述肝内CD8+T细胞俘获的改变包括所述俘获的增加。
86.如权利要求81-85中任一项所述的方法，其特征在于，所述调节、免疫调节或NKT细胞包括肝内或脾内NKT细胞。
87.如权利要求81-85中任一项所述的方法，其特征在于，所述结果还包括细胞因子应答的改变。
88.如权利要求87所述的方法，其特征在于，所述细胞因子包括IFNγ、TNFα、IL4或IL10。
89.如权利要求87所述的方法，其特征在于，所述细胞因子应答包括促炎反应、抗炎反应、或致炎和抗炎反应并行。
90.如权利要求81-85中任一项所述的方法，其特征在于，所述结果还包括所述对象免疫系统中Th1/Th2平衡的改变。
91.一种在哺乳动物对象中治疗免疫介导或免疫调节紊乱或疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物和/或抗原呈递细胞，所述给予的结果包括调节、免疫调节或NKT细胞分布的改变。
92.一种在哺乳动物对象中治疗免疫介导或免疫调节紊乱或疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物和/或抗原呈递细胞，所述给予的结果包括调节、免疫调节或NKT细胞分布功能的改变。
93.一种对给予哺乳动物对象导致调节、免疫调节或NKT细胞分布改变以治疗疾病的中间代谢产物的类似物或衍生物进行体外筛选试验的方法，所述筛选方法包括：
a)体外提供：
(i)来自所述对象或其它对象的调节、免疫调节或NKT细胞；
(ii)抗原呈递细胞；
(iii)所述中间代谢产物的类似物或衍生物；
b)鉴定所述调节、免疫调节或NKT细胞增殖的降低。
94.一种对给予哺乳动物对象导致调节、免疫调节或NKT细胞分布改变以治疗疾病的中间代谢产物的类似物或衍生物进行体外筛选试验的方法，所述筛选方法包括：
a)体外提供：
(i)第一试管中的调节、免疫调节或NKT细胞和BSA；
(ii)第二试管中的调节、免疫调节或NKT细胞及中间代谢产物的所述类似物或衍生物；
(iii)第三试管中的调节、免疫调节或NKT细胞、抗原呈递细胞和BSA；
(iv)第四试管中的调节、免疫调节或NKT细胞、抗原呈递细胞和所述中间代谢产物的类似物或衍生物；
b)测定每个所述试管中调节、免疫调节或NKT细胞增殖的量；和
c)鉴定所述第四试管中调节、免疫调节或NKT细胞增殖的最少量。
95.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括：
a)从所述对象或其它对象获得细胞，所述细胞包含调节、免疫调节或NKT细胞；
b)在以下成分的存在下，离体处理或驯化所述细胞：
(i)中间代谢产物；
(ii)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；
(iii)抗原呈递细胞；或
(iv)上述成分的任意组合；和
b)再给予所述对象所述处理或驯化的细胞，所述给予的结果包括所述细胞分布的改变。
96.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括：
a)从所述对象或其它对象获得细胞，所述细胞包含调节、免疫调节或NKT细胞；
b)在以下成分的存在下，离体处理或驯化所述细胞：
(i)中间代谢产物；
(ii)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；
(iii)抗原呈递细胞；或
(iv)上述成分的任意组合；和
c)再给予所述对象所述处理或驯化的细胞；和
d)给予所述对象：
(i)有效量的中间代谢产物；
(ii)抗原呈递细胞；
(iii)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；或
(iv)上述成分的任意组合。
e)所述给予的结果包括调节细胞、免疫调节细胞或NKT细胞分布的改变。
97.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象以下成分：
a)有效量的中间代谢产物；
b)抗原呈递细胞；
c)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；或
d)上述成分的任意组合；
e)所述给予的结果包括调节细胞、免疫调节细胞或NKT细胞分布的改变。
98.一种在哺乳动物对象中治疗疾病的方法，所述方法包括给予所述对象有效量的中间代谢产物，以调节或改变所述对象免疫系统中至少一种成分。
99.一种用于在哺乳动物对象中治疗疾病的治疗组合物，给予所述组合物可导致调节、免疫调节或NKT细胞的分布改变，所述组合物包含：
a)中间代谢产物；
b)抗原呈递细胞；
c)与所述疾病相关的抗原或表位，或与免疫介导的炎症反应相关的抗原或表位；或
d)上述成分的任意组合。
100.一种中间代谢产物在制造用于操纵患免疫相关或免疫介导紊乱或疾病的哺乳动物对象中的调节、免疫调节或NKT细胞的组合物中的应用。
101.如权利要求100所述的方法，其特征在于，所述操纵包括所述对象中所述细胞分布的改变。
102.如权利要求81-101中任一项所述的方法，其特征在于，所述中间代谢产物包括脂质或缀合的生物分子。
103.如权利要求81-101中任一项所述的方法，其特征在于，所述中间代谢产物包括任何极性脂质。
104.如权利要求102所述的方法，其特征在于，所述缀合的生物分子包括除抗体、细胞因子或激素外的糖脂、脂蛋白、载脂蛋白或糖蛋白。
105.如权利要求104所述的方法，其特征在于，所述糖脂包括单糖神经酰胺。
106.如权利要求105所述的方法，其特征在于，所述单糖神经酰胺包括葡糖神经酰胺或半乳糖神经酰胺。
107.如权利要求106所述的方法，其特征在于，所述葡糖神经酰胺包括葡糖脑苷脂。
108.如权利要求106所述的方法，其特征在于，所述葡糖神经酰胺包括葡糖脑苷脂类似物或衍生物。
109.如权利要求95、96、97或99中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗原包括：从患有所述免疫相关或免疫介导紊乱或疾病的供体获得的同种异体抗原、异种抗原、合成抗原、自体抗原、非自体抗原、重组制备的抗原、或它们的任意组合。
110.如权利要求93、94、95、96、97或99中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗原呈递细胞包括树突细胞或呈递CD1d受体的树突细胞。
111.如权利要求81-110中任一项所述的方法，其特征在于，所述免疫介导或免疫相关疾病或紊乱包括结肠炎。
112.如权利要求81-110中任一项所述的方法，其特征在于，所述疾病包括炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、全身性红斑狼疮、骨质疏松症、非酗酒型脂肪肝、糖尿病、葡萄糖耐受不良、肥胖症、代谢综合征、移植物抗宿主病、多发性硬化、类风湿性关节炎、JRA、眼病、Uvitis、皮肤病、肾病、血液病、ITP、PA、自身免疫肝病、其它风湿病、内分泌疾病、脉管炎、硬皮病、CREST、神经病、肺病、肌炎、耳病、重症肌无力、非-HIV性AIDS、(全身性)红斑狼疮、幼年型类风湿关节炎、特发性血小板减少性紫癜、硬皮病、雷诺现象、混合结缔组织紊乱、乳糜泻、Crest综合征(皮肤钙质沉着症、雷诺现象、指硬皮病及毛细血管扩张综合征、指/趾端硬化和毛细管扩张)或任何其它免疫相关或免疫介导的紊乱或疾病。
113.如权利要求81-110中任一项所述的方法，其特征在于，所述给药步骤包括：口服、静脉内、腹膜内、肌内、胃肠外、经皮、阴道内、鼻内、粘膜、舌下、局部、直肠或皮下给药，或它们的任意组合。
114.如权利要求1-6、9-11、13-21、24-26、28-54、57-60、64-92、95-98和100-113所述的方法，其特征在于，在所述给药、治疗或操纵之前，所述哺乳动物对象被禁食和/或禁水最少12小时。
115.如权利要求1-6、9-11、13-21、24-26、28-54、57-60、64-92、95-98和100-113所述的方法，其特征在于，在所述给药、治疗或操纵之前，所述哺乳动物对象被禁食最少12小时。
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