CN101122591B - 一种检测蛋壳成份沉积规律的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种检测鸟类蛋壳成份沉积规律的方法。该方法是将蛋壳进行由外向内分层溶解，依次检测各层蛋壳溶解液中的蛋壳各种成份含量和溶解掉的蛋壳重量，通过计算各个蛋壳层中各种成份的含量来检测蛋壳中各种成份在不同蛋壳层中的分布规律，即得到蛋壳形成过程中各种成份的沉积规律。本发明的方法是利用蛋壳分层溶解与蛋壳沉积是对应的逆过程的原理，测定蛋壳成份在不同蛋壳层中的分布，得到蛋壳形成过程中各种成份的沉积规律，既不会对动物造成应激，又可降低检测成本，且操作方便。

Description

一种检测蛋壳成份沉积规律的方法
技术领域
本发明涉及一种检测蛋壳成份沉积规律的方法。
背景技术
蛋壳品质对于禽蛋的运输、贮藏与加工具有重要的意义，而蛋壳颜色作为蛋壳品质的一个重要方面，长期以来影响了人们对于禽蛋的购买，比如中国人大多喜欢购买褐壳蛋和粉壳蛋，而近年来大力发展的绿壳蛋由于其独特的蛋壳颜色和潜在的保健价值，倍受消费者推崇，价格也远远高于其它颜色的蛋。蛋壳颜色是鸟类外部形态的一个特征性状，是最直观的品种特征。野生鸟类的蛋壳颜色具有丰富的多样性，而家禽由于受到人工选择，蛋壳颜色较为单一，研究人员发现，无论是野生鸟类还是家禽，其蛋壳色素的主要成分均为原卟啉IX、胆绿素IX以及胆绿素IX的锌螯合物。
鸡蛋作为人类优质廉价的动物蛋白的最主要来源，对于人们生活有重要影响，长期以来消费者对于蛋壳颜色的偏好，使得不同蛋壳颜色的鸡蛋具有较大差异的市场售价，尤其近几年绿壳鸡蛋备受青睐，售价较高。另外，胆绿素IX和原卟啉IX都是名贵的制药和生化原料，以往这两种物质都是从胆汁和血液中提取，成本较高。
以前对于蛋壳色素沉积规律的研究一般是采用在产蛋周期的不同阶段提取蛋壳腺组织和蛋壳腺液的方法，而采集蛋壳腺组织和蛋壳腺液的方法无法排除手术和其它刺激对实验动物的影响，因为应激会影响实验动物很多激素分泌水平的变化，而激素水平可能会对蛋壳色素的沉积产生影响。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测蛋壳成份沉积规律的方法。
本发明所提供的检测蛋壳成份沉积规律的方法，是将蛋壳进行由外向内分层溶解，依次检测各层蛋壳溶解液中的蛋壳各种成分含量和溶解掉的蛋壳重量，通过比较各蛋壳层中各种成份的含量就可以知道各种成份在不同蛋壳层中的分布，因为蛋壳层由外而内的溶解过程与蛋壳层由内而外的沉积过程相互对应，所以这样便可得到蛋壳形成过程中各种成份的沉积规律。
所述方法中，所述分层溶解用的溶解液为体积比为3∶2-3∶1的甲醇和浓盐酸的混合液；所述浓盐酸的质量百分浓度为36-38％；甲醇和浓盐酸均为分析纯。
所述方法中，所述分层溶解的方法，是将蛋在所述溶解液中浸没溶解1-3分钟，取出，用3升去离子水漂洗，重复以上步骤，依次类推，直到蛋壳完全溶解为止，得到由外向内分层溶解的蛋壳层溶解液。所述浸没蛋所用的所述溶解液，在可以浸没蛋的条件下，其体积应尽量小。所述浸没蛋的时间优选为2分钟。
所述溶解液优选为体积比为2∶1的甲醇和浓盐酸的混合液。
所述方法中，所述蛋壳成分为蛋壳色素成分。
所述方法中，所述溶解液中蛋壳成分含量用液相色谱或紫外分光光度计检测。
所述方法中，所述蛋壳色素成分为胆绿素IX和/或胆绿素IX的锌螯合物和/或原卟啉IX。
所述方法中，所述溶解液中蛋壳成分含量的检测方法为将溶解了各个蛋壳层的溶解液避光静置12小时，之后使用紫外分光光度计在670nm处测定胆绿素IX的含量，在412nm处测定原卟啉IX的含量。
上述方法，所述蛋壳为鸟类或家禽蛋壳。
实验证明，以本发明的方法检测蛋壳中的胆绿素IX和原卟啉IX的沉积规律为例，得出了胆绿素IX和原卟啉IX具有同样沉积模式，都是先慢后快，在蛋壳形成的最后阶段均达到了最快的沉积速度，两种色素都是在蛋壳表层含量最高，胆绿素IX和原卟啉IX的含量在各个蛋壳层中呈现显著的正相关，即同时增加同时减少，提示胆绿素IX和原卟啉IX的沉积可能受同样因素的影响，利用本发明的方法得到的这个结论对进一步研究蛋壳颜色形成的生理学、生态学和遗传学机制，对于改良地方鸡种和外来鸡种的蛋壳颜色具有重要意义。本发明的方法对于蛋壳中胆绿素IX和原卟啉IX的回收利用，增加养禽业的附加值也具有潜在的价值。
利用本发明的方法也可以研究蛋壳中其他成分的沉积规律，对于研究蛋壳形成的遗传学和生理学机制都具有重要的意义。
本发明的方法利用蛋壳分层溶解与蛋壳沉积是对应的逆过程的原理，测定蛋壳成份在不同蛋壳层中的分布，便可得到蛋壳形成过程中各种成份的沉积规律，既不会对动物造成应激，又可降低检测成本，且操作方便。
附图说明
图1为绿壳蛋和褐壳蛋各个蛋壳层中原卟啉IX浓度变化的趋势图
图2为绿壳蛋和褐壳蛋各个蛋壳层中胆绿素IX浓度变化的趋势图
具体实施方式
下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。
下述实施例中所述的百分含量，如无特别说明，均为质量百分含量。
实施例1、鸡蛋壳色素沉积规律的检测
1、实验材料
东乡绿壳蛋鸡(一种中国的土著鸡种，产绿壳蛋)30只(购自中国农业大学种鸡场)，寿光鸡(一种中国的土著鸡种，产的褐壳蛋)30只(购自中国农业大学种鸡场)，实验动物的饲养管理条件完全一致(一鸡一笼，自由饮水与采食)，每只鸡取蛋1枚，共60枚。
2、鸡蛋壳色素沉积规律的检测
将上述得到的鸡蛋分别进行下述步骤的操作：
1)将鸡蛋简单清洗后，在80℃烘箱中放置3分钟烘干蛋壳表面水分，微量天平称重，记为W0
2)将定时器设置为2分钟，将步骤1)处理后的鸡蛋放入100毫升的烧杯中，迅速倒入45毫升(溶解液的多少要随着鸡蛋体积的大小而变化，务必保证鸡蛋完全浸没于溶解液中)溶解液(甲醇与浓盐酸(质量百分浓度为37％)按2∶1的比例混合而成)，同时按下定时器。2分钟时间到，迅速将鸡蛋取出，得到溶解液C1，将其转移于50ml离心管中，然后大量去离子水冲洗鸡蛋，80℃烘箱中放置3分钟烘干蛋壳表面水分，称重，记为W1，并做好标记。
3)将步骤2)得到的溶解后剩余的同一枚鸡蛋再放入另一只干净的100毫升烧杯中，按照步骤2)所述的方法再将该鸡蛋用45毫升的溶解液溶解一次得到溶解液C2，80℃烘箱中放置3分钟烘干蛋壳表面水分，并测量溶解后剩余鸡蛋的重量，记为W2，依此类推，重复步骤2)，得到溶解液C3、测量溶解后剩余鸡蛋的重量W3……直到蛋壳溶解完全。
4)将上述得到的溶解液分别静置12小时，取溶解液5ml于10ml离心管中，以3500转/分钟的速度离心45分钟，然后取2毫升上清液于比色杯中，用紫外分光光度计在412nm和670nm处测定上清液的吸收值。
按照下述方法计算溶解的蛋壳层(自外向内第1、2、……n层)中胆绿素IX与原卟啉IX的浓度：
第n个蛋壳层中原卟啉IX的浓度(Cpn)＝第n次溶解得到的溶解液(Cn)在412nm处的吸收值(An)/第n次溶解掉的蛋壳层重量(ΔWn)；
第n个蛋壳层中胆绿素IX的浓度(Cbn)＝第n次溶解得到的溶解液(Cn)在670nm处的吸收值(An)/第n次溶解掉的溶解的蛋壳层重量(ΔWn)；
第n个蛋壳层重量(ΔWn)＝上次溶解后称得的蛋重(Wn-1)-本次溶解后称得的蛋重(Wn)；
上述公式中的n为取值相同的整数，表示自蛋壳由外向内溶解的蛋壳层的计数。
以上述计算的蛋壳层中胆绿素IX或原卟啉IX的浓度分别为纵坐标，以自外向内溶解的蛋壳层的计数为横坐标，作图表示胆绿素IX或原卟啉IX在各个蛋壳层中浓度的变化趋势，并将数据使用SAS8.2软件进行相关性分析。
30枚东乡绿壳蛋鸡产的绿壳蛋中胆绿素IX或原卟啉IX在各个蛋壳层中浓度的变化趋势无差异，30枚寿光鸡产的褐壳蛋中胆绿素IX或原卟啉IX在各个蛋壳层中浓度的变化趋势也无差异，所以这里仅展示了一枚绿壳蛋和一枚褐壳蛋的检测分析结果。
一枚绿壳蛋和一枚褐壳蛋各个蛋壳层中原卟啉IX的浓度检测结果如图1所示，从图1可以看出，绿壳蛋和褐壳蛋中原卟啉IX的浓度均以表层为最高，即绿壳蛋和褐壳蛋中原卟啉IX都是在蛋壳形成的最后阶段达到了最大的分泌速率。一枚绿壳蛋和一枚褐壳蛋的中胆绿素IX的浓度检测结果如图2所示，从图2中可以看出，绿壳蛋和褐壳蛋中胆绿素IX的浓度也是在表层最高，也就是说胆绿素IX和原卟啉IX都是在蛋壳形成的最后阶段达到了最大的分泌速率，表明蛋壳中的胆绿素IX和原卟啉IX具有相似的分泌模式(图1和图2中的蛋壳层号为自外向内层依次编号，图1和图2中胆绿素表示此处的胆绿素IX，原卟啉表示此处的原卟啉IX)。
绿壳蛋或褐壳蛋中的胆绿素IX和原卟啉IX在各个蛋壳层中含量的相关性分析结果如表1所示，结果表明，绿壳蛋或褐壳蛋中各个蛋壳层中的色素含量与其对应的蛋壳层重量之间都没有发现显著相关，而在绿色蛋壳蛋壳层中，胆绿素IX含量与原卟啉IX含量之间发现极显著的正相关(p＜0.01)相关系数为0.97195，在褐色蛋壳蛋壳层中也是这样，相关系数为0.91878，即无论是绿壳蛋还是褐壳蛋，胆绿素IX和原卟啉IX含量在不同的蛋壳层中均同时增加同时减少，由于蛋壳溶解与蛋壳沉积是对应的逆过程，所以在蛋壳沉积过程中，胆绿素IX和原卟啉IX的沉积速度也是同时增加或减少的，提示蛋壳胆绿素IX与原卟啉IX的沉积可能受同样的因素调控。
表1.各个蛋壳层中胆绿素IX含量、原卟啉IX含量与蛋壳层重量的之间的相关性分析结果
Figure S071C0349920070906D000041
＊＊表示p＜0.01

Claims (7)

1.一种检测鸟类蛋壳成份沉积规律的方法，是将蛋壳进行由外向内分层溶解，依次检测各层蛋壳溶解液中的蛋壳各种成分含量和溶解掉的蛋壳重量，通过计算各层蛋壳中各种成份的含量来检测蛋壳中各种成份在不同蛋壳层中的分布，即得到蛋壳形成过程中各种成份的沉积规律；
所述分层溶解用的溶解液为体积比为3∶2-3∶1的甲醇和浓盐酸的混合液；所述浓盐酸的质量百分浓度为36-38％；
所述分层溶解的方法，是将蛋在所述溶解液中浸没溶解1-3分钟，取出，重复用所述溶解液浸没溶解1-3分钟，依次类推，直到蛋壳完全溶解为止，得到由外向内分层溶解的蛋壳层溶解液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分层溶解用的溶解液为体积比为2∶1的甲醇和浓盐酸的混合液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述蛋壳成份为蛋壳色素成份。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述溶解液中蛋壳成份含量用液相色谱或紫外分光光度计检测。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述蛋壳色素成分为胆绿素IX和/或胆绿素IX的锌螯合物和/或原卟啉IX。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述溶解液中蛋壳成分含量的检测方法为将溶解了各个蛋壳层的溶解液避光静置12小时，之后使用紫外分光光度计在670nm处测定胆绿素IX的含量，在412nm处测定原卟啉IX的含量。
7.根据权利要求1-6中任意一项所述的方法，其特征在于：所述蛋壳为鸟类或家禽的蛋壳。
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