CN101117638A - 一种提高植物抗逆性的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高植物抗逆性的方法。该方法是将UDP－葡萄糖－4－差向异构酶基因通过植物表达载体转入植物中，筛选得到抗逆性提高的植物。本发明方法，提高植物中棉籽糖的含量，从而提高了植物对低温、干旱以及盐胁迫的抗性，同时又不影响转基因植物的正常发育。

Description

一种提高植物抗逆性的方法

技术领域

本发明涉及一种提高植物抗逆性的方法。

背景技术

干旱、高盐、低温等环境因子影响植物生长发育，也对作物产量造成威胁(Dubouzet et al.，2003，Plant J，33：751-763)。研究植物对各种非生物胁迫的响应机理，以提高农作物对于环境胁迫的抵抗能力、提高粮食作物的产量一直是生理学、遗传学以及分子生物学研究的热点。

植物在非生物胁迫下，许多基因的表达受到诱导(Ingram and Bartels，1996，Plant Mol Biol，47，377-403；Shinozaki and Yamaguchi-Shinozaki；2000，CurOpin Plant Biol，3：217-223；Thomashow，1999，Plant Mol Biol，50，571-599)，这些基因的表达产物不仅与胁迫的耐受性有关，而且参与了胁迫的信号传导及信号的网络调控过程(Shinozaki et al.，2003，Cur Opin Plant Biol，6：410-17)。人们利用芯片技术在双子叶模式植物拟南芥及单子叶模式植物水稻中均已发现大量对胁迫环境响应的基因，这些基因在一些胁迫条件下的表达既有共同的作用途径，又有各自独立的响应机制。有的基因既受干旱的诱导又受高盐的诱导，有的基因既受干旱的诱导又受低温的诱导，表明干旱胁迫、低温胁迫和高盐胁迫之间存在交叉途径，植物基因对各种胁迫环境的响应是交叉的网络状途径(Thomashow，1999，Plant Mol Biol，50，571-599；Shinozaki and Yamaguchi-Shinozaki，2000，3：217-223，Cur Opin Plant Biol；Fowler and Thomashow，2002，Plant cell，14：1675-1690；Dubouzet et al.，2003，Plant J，33：751-763；Zhu，2002，AnnRevPlant Biol，53：247-7；Shinozaki et al.，2003，Cur Opin Plant Biol，6：410-17)。根据目前研究结果，把这些基因大致分成两类(Kreps et al.，2002，PlantPhysiol，130：2129-2141；Fowler and Thomashow，2002，Plant cell，14：1675-1690；Seki et al.，2002，Plant J，31：279-292)：第一类主要是指编码一些功能蛋白的基因，这些蛋白有分子伴侣、LEA蛋白、抗冻蛋白、mRNA结合蛋白、关键性的渗透调节分子的合成酶(如水通道蛋白、蔗糖、脯氨酸和甜菜碱)、保护大分子以及膜蛋白结构和功能的保护蛋白、蛋白转换酶以及解毒蛋白酶类等。过量表达这类蛋白能够提高植物的抗逆性(Holmberg and Bulow，1998，TrendsPlant Sci，3，61-66；Cushman and Bohnert，2000，Cur Opin Plant Biol，3：117-24)。这类蛋白分子直接参与植物对胁迫的环境的应答反应和修复过程，是直接保护植物细胞免受胁迫环境伤害的效应分子。第二大类是编码调节蛋白的基因，这些调节蛋白包括激酶、转录因子、磷脂酶等，这类蛋白是通过参与植物胁迫信号传导途径或通过调节其它效应分子表达活性而起作用的(Seki et al.，2003，CurOpin Biotech，14，194-99)。

近年来已经发现多种生物分子的代谢途径对环境胁迫的响应，如脯氨酸、寡糖类物质如棉籽糖等合成途径的关键酶基因P5CS(1-吡咯啉-5-羧酸合成酶)、AtGolS(半乳糖醇合成酶)均受环境胁迫诱导表达，而且这些基因都受DREB(干旱应答元件结合蛋白质)转录因子的调控(Fowler and Thomashow，2002，Plant cell，14：1675-1690；Cook et al.，2004，Proc Natl Acad Sci USA，101：15243-15248)，这类基因高水平表达后导致细胞中积累高浓度的代谢物，从而增强植物对胁迫的抗性。因此利用转基因手段通过导入外源基因能够大大提高植物的抗逆性(Vannini etal.，2004，Plant J，37，115-127；Mukhopadhyay et al.，2004，Proc Natl AcadSci USA，101：6309-6314；Dubouzet et al.，2003，Plant J，33：751-763)。

目前有关植物UGE基因家族的功能主要是在拟南芥中报道的较多，它参与了拟南芥细胞壁多糖的生物合成，该基因编码UDP-葡萄糖4-差向异构酶，催化植物中UDP-葡萄糖和UDP-半乳糖之间的可逆转换反应，而这两种核苷糖可作为底物，广泛参与植物体内多种碳水化合物、糖蛋白、糖脂等的生物合成(Drmann and Benning，1998，Plant J，13，641-652；Seifert et al.，2002，Curr Biol，12，1840-1845)。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高植物抗逆性的方法。

本发明所提供的提高植物抗逆性的方法，是将UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因(OsUGE-1)通过植物表达载体转入植物中，筛选得到抗逆性提高的植物。

所述方法中，所述UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因(OsUGE-1)的编码序列是自GENBANK号为AB087745的5′端第5′端第87-1151位的核苷酸序列。

所述UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因可通过表达载体pSN1301导入植物中。

所述抗逆性为抗盐性和/或抗寒性和/或抗旱性。

本发明的方法既可提高单子叶植物，也可提高双子叶植物的抗逆性，如：拟南芥、番茄、水稻、小麦、玉米、黄瓜、杨树、草坪草或苜宿等。携带有UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因(OsUGE-1)的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织，并将转化的植物经组织培育成植株，获得抗逆性提高的植株。

本发明的方法利用水稻OsUGE-1基因在植物中的表达，提高植物中棉籽糖的含量，从而提高了植物对低温、干旱以及盐胁迫的抗性，同时又不影响转基因植物的正常发育。

实验证明，本发明的方法获得的含有UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因(OsUGE-1)的转基因拟南芥，在逆境条件下，均比野生型拟南芥具有较强的抗逆性，表现为具有较强的抗盐性、抗寒性和抗旱性。

附图说明

图1为OsUGE-1 cDNA的PCR扩增片段电泳图

图2为表达载体pSN1301-OsUGE图谱

图3为转pSN1301-OsUGE拟南芥对逆境胁迫的抗性实验结果

图4为转pSN1301-OsUGE拟南芥中可溶性糖的含量分析

具体实施方式

下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。

实施例1、转OsUGE-1植物的获得及其功能验证

1、OsUGE-1基因的获得及表达载体的构建

根据在GenBank提交的水稻基因序列，找到编码UDP-葡萄糖-4-差向异构酶(OsUGE-1)基因，其完整读码框序列GenBank号为AB087745，据此设计正反向引物5′-CAA ACC CCA CAC ACG CAC AC-3′和5′-GGA CCC CTA CAA GCC CCC TA-3′，从水稻cDNA中扩增到1297bp片段。具体方法如下：

1)水稻总RNA的提取

收集两周龄的水稻(中花10号)幼苗，在液氮中研磨50-100mg材料，研碎后加入到含1ml Trizol试剂的1.5ml离心管中，充分混匀；室温25℃放置5min；每管中加入0.2ml新鲜氯仿，剧烈振摇15sec，25℃温育2-3min；然后2,000rpm，4℃，离心15min；把上方无色的水相转移到一个新的1.5ml离心管中，用0.5ml异丙醇沉淀RNA，室温放置10min；12,000rpm，4℃，离心10min；去上清，将RNA沉淀用1ml 75％乙醇清洗1次，超净台吹干溶于无Rnase无菌水中，-70冰箱保存。

2)第一链cDNA的合成

按照Promega RT-PCR试剂盒说明书进行。取2μg步骤1)提取的水稻总RNA，与Oligo dT引物以0.5μg primer/μg total RNA的比例混合，体积不超过11μl，70℃ 5min，冰上冷却。加入下述各种反转录试剂混合：10×reverse transcriptbuffer 2.5μl；RNase Inhibitor 0.5μl；dNTP Mixture 2μl；Reverse Transcriptase1μl；RNase free Water补足25ul。混匀后，在42℃ 1小时，75℃ 10min，反应得到水稻第一链cDNA。

3)PCR合成cDNA

取步骤2)制备的第一链cDNA产物为模板，在正向引物(5′-CAA ACC CCA CACACG CAC AC-3′)和反向引物(5′-GGA CCC CTA CAA GCC CCC TA-3′)引导下进行PCR扩增得到OsUGE-1的cDNA。PCR反应体系为：LA taq(TaKaRa公司)0.5μL、2×GC缓冲液(TaKaRa公司)25μL、dNTP 1μL、5’端引物(10μM/L)1μL、3’端引物(10μM/L)1μL、模板1μL(共10ng)、加双蒸水补充反应体系至50μL。PCR反应条件为：先94℃ 4分钟；再94℃ 30秒，57℃ 30秒，72℃ 1分钟，共30个循环；最后72℃10分钟。

反应结束后，对PCR产物进行0.8％琼脂糖凝胶电泳检测，检测结果如图1所示(泳道M为DNA标准分子量DL2000，条带大小自上而下依次为2kb，1kb，750bp，500bp，250bp，100bp；泳道1为OsUGE-1 RT-PCR产物)，得到分子量约为1.3kb(1297bp)的片段，经测序表明该片段是具有自GenBank号为AB087745的5′端第35-1151位核苷酸序列的片段。该cDNA全长1297个核苷酸，包括OsUGE-1基因的全长编码框(自ATG到TGA)1065个核苷酸(自GenBank号为AB087745的5′端第87-1151位核苷酸)，编码354个氨基酸(GenBank号为AB087745)，含有UDP-葡萄糖-4-异构酶所特有的异构酶保守结构域。

4)OsUGE-1超表达载体构建

将步骤3)得到的OsUGE-1基因cDNA片段，用琼脂糖凝胶回收试剂盒(北京天为时代公司)回收该片段，然后将该回收片段与载体pGEM-T Easy载体(购自Promega公司)进行连接，连接体系为：T₄ DNA连接酶(3u/μL)、2×连接酶缓冲液5μL、pGEM-TEasy(50ng/μL)0.5μL和回收PCR产物3.5μL，4℃反应12-24小时。参照Cohen等的方法(Proc Natl Acad Sci，69：2110)，将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，根据pGEM-T Easy载体上的羧卞青霉素抗性标记筛选阳性克隆，得到含有回收OsUGE-1基因cDNA片段的重组质粒，并对插入片段的序列进行测序鉴定，重组质粒的提取方法(碱裂解法)如下所述：挑取含有上述重组质粒的大肠杆菌单菌落于LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜；取1.5ml菌液，12,000rpm离心30sec收集菌体；加入100μl溶液I，重悬菌体，置于冰上；加入新配制的溶液II 200μl混匀后，置于冰上3min；加入预冷的溶液III 150μl，混匀后置于冰上5min；4℃ 12,000rpm离心5min；取上清，用等量酚/氯仿抽提一次，上清加入两倍体积的无水乙醇，4℃放置10-30min；12,000rpm离心5min沉淀DNA；将DNA沉淀用70％乙醇清洗1-2次，干燥；加入含RNase 0.01μg/μl的ddH₂O 30μl，37℃温育2h。其中，溶液I为含有50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM

EDTA(pH8.0)的溶液；溶液II为含有0.2M NaOH和1％(质量百分含量)SDS的溶液。溶液III为含有60ml 5M乙酸钾、11.5ml乙酸和28.5ml水的溶液。将提取得到的质粒测序鉴定，将测序表明含有OsUGE-1基因cDNA片段的重组载体命名为pGEM-OsUGE。

根据OsUGE-1的开放阅读框cDNA序列设计5’端引物5’-CGGGATCC ATG GTTTCG GCC TTG TTG C-3’(下划线序列为BamHI位点)，3’端引物5’-GGGGTACC TCAGTT GCT ACT GTC CGG CGA-3’(下划线序列为KpnI位点)，以pGEM-OsUGE为模板，进行PCR扩增，得到带有KpnI和BamHI酶切位点的OsUGE-1的cDNA，PCR反应体系为：LA taq(TaKaRa公司)0.5μL、2×GC缓冲液(TaKaRa公司)25μL、dNTP1μL、5’端引物(10μM/L)1μL、3’端引物(10μM/L)1μL、100×稀释的质粒模板1μL(1ng)、加双蒸水补充反应体系至50μL。PCR反应条件为：先94℃4分钟；再94℃30秒，57℃30秒，72℃1分钟，共30个循环；最后72℃10分钟。回收该片段，经KpnI和BamHI双酶切消化，双酶切反应条件：0.5×K buffer，KpnI(7.5U)和BamHI各0.5μL(7.5U)，加回收片段(3ug)，反应体系30μL，37℃反应6小时后回收酶切产物。同样反应条件双酶切pSN1301载体(pSN1301按照文献(Li，et al.，2006，Functional Plant Biology，2006，33，381-390)所述的方法制备)并回收酶切产物。将回收的载体和OsUGE-1片段连接，以正向插入到pSN1301载体相应位置，连接反应体系：T₄ DNA连接酶1μL、10×连接酶缓冲液3μL、回收的载体10μL，OsUGE-1片段16μL，16℃水浴反应过夜，将连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，根据载体上的卡那抗性标记筛选阳性克隆，得到含有回收片段的重组质粒。用PCR以及相应的限制性内切酶对重组质粒进行鉴定，并对插入片段的序列进行测序。将鉴定结果表明含有正向插入的OsUGE-1基因cDNA片段的重组载体命名为pSN1301-OsUGE(pSN1301-OsUGE结构图谱如图2所示)。

实施例2、OsUGE-1超表达拟南芥(转pSN1301-OsUGE拟南芥)的获得及其鉴定

1、OsUGE-1超表达质粒pSN1301-OsUGE转化拟南芥

用EasyJecT Plus电激仪(英国EquiBio公司)并参照说明书进行操作，将质粒pSN1301-OsUGE用电激法转化农杆菌C58，经含卡那霉素的抗性平板筛选阳性克隆得到含有pSN1301-OsUGE的农杆菌；再按照Clough等的方法(Clough and Bent，1998Plant J 16：735-43)，在上述含有pSN1301-OsUGE的农杆菌的介导下，将pSN1301-OsUGE转化拟南芥(野生型拟南芥，哥论比亚生态型，wild-type A.thalianaColumbia(Col-0))。在含25mg/L潮霉素的MS平板上筛选得到转pSN1301-OsUGE拟南芥，收集转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₀代种子，备用。

含有表达载体的农杆菌浸泡转化的植株所结种子以及由该种子长成的植株用T₀代表，T₁代表示T₀代自交产生的种子及由它所长成的植株，T₂代表示T₁代自交产生的种子及由它所长成的植株，依次类推。

2、转pSN1301-OsUGE拟南芥阳性苗的抗菌素筛选

将步骤1)收获的转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₀代种子用0.2％TritonX-100浸泡10分钟；再用10％的次氯酸钠表面消毒，12分钟；灭菌水洗涤五次，每2分钟一次；用水将种子铺在含25mg/L潮霉素的MS平板上，用锡箔纸包裹，在4℃、黑暗条件下放置2天，取出后于23℃的培养室中暗培养3-4天；3-4天后，长势最高的为初筛到的阳性转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₁代转化苗，在避光条件下取出，光下再培养3天，然后将转基因阳性苗移至花盆中培养，收集种子，得到200粒转pSN1301-OsUGE拟南芥T₁代种子。

3、转OsUGE-1基因拟南芥(转pSN1301-OsUGE拟南芥)的组织化学鉴定

取的转pSN1301-OsUGE拟南芥T₁代种子，置于1/2 MS培养基上培养3周，得到转pSN1301-OsUGE拟南芥T₁代阳性幼苗，取叶片尖部2-3mm材料置于GUS染色液(100mmol/L磷酸盐pH 7.0，0.1％Triton X-100，10mmol/L EDTA，0.5mmol/L铁氰化钾，X-Glue 1mg/mL)37℃温育12小时，再用75％酒精脱色，叶片呈蓝色的为阳性植株，共获得28株转pSN1301-OsUGE拟南芥T₁代阳性植株。

4、转基因植株的PCR鉴定

基因组DNA的提取：取一片GUS染色阳性的植株的叶片放入1.5mL Eppendorf管中，加入液氮，用组织研磨杵研磨10秒钟，磨碎；加入400μL Edwards提取缓冲液，轻轻研磨(洗去杵上组织)；振荡5秒钟，离心1分钟，转移300μL的上清液到新管中，加入300μL异丙醇，混合，于室温放置2分钟；离心、弃上清，风干沉淀，溶于100μL水中，得到转基因材料的基因组DNA。

采用PCR的方法对所有步骤3)得到的T₁代转pSN1301-OsUGE拟南芥幼苗进行了分子鉴定。取T₁代转pSN1301-OsUGE拟南芥幼苗或野生型拟南芥(野生型拟南芥，哥论比亚生态型，wild-type A.thaliana Columbia(Col-0))的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，反应程序如下：94℃30sec，57℃30sec，72℃1min，30个循环。72℃延伸10min。利用超表达载体构建时5’端引物5’-CGG GAT CCA TGGTTT CGG CCT TGT TGC-3’(下划线序列为BamHI位点)，3’端引物5’-GGGGTACCTCA GTT GCT ACT GTC CGG CGA-3’，在野生拟南芥中扩增不到OsUGE-1基因，而在所有的转pSN1301-OsUGE拟南芥T₁代株系GUS染色阳性植株中都能扩增到含OsUGE-1 cDNA的片段。

实施例3、转pSN1301-OsUGE拟南芥的抗逆境胁迫功能鉴定

1.转pSN1301-OsUGE拟南芥的抗盐性鉴定：

将实施例2获得的阳性转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系(L4和L7)种子的消毒处理(按照实施例2中步骤2的方法进行)，将消毒后的转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代(L4和L7)种子铺在1/2MS培养基中，4℃黑暗培养两天，转入室温连续暗培养2天，种子萌发后，转入22℃16hr光照培养，继续在1/2MS培养基上生长2天，挑选生长状况一致的幼苗分别转移到含有0、100mM、150mM NaCl的1/2MS培养基上胁迫生长两周(14天)并观察，以相同条件培养的野生型拟南芥(WT)(野生型拟南芥，哥论比亚生态型，wild-type A.thaliana Columbia(Col-0))为对照。

结果发现在添加NaCl的培养基中，转pSN1301-OsUGE拟南芥株系和野生型拟南芥(WT)的生长都受到抑制，但转pSN1301-OsUGE拟南芥株系长势较好，在100mM和150mM NaCl的培养基上，转pSN1301-OsUGE拟南芥根系明显比野生型长(图3中A)，说明转基因株系比野生型更耐盐胁迫。图3中A为转pSN1301-OsUGE拟南芥株系(L4和L7)和野生型拟南芥(WT)对盐胁迫的抗性鉴定实验照片。

2.转pSN1301-OsUGE拟南芥的抗寒性鉴定：

将四周龄阳性转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系(L4和L7)幼苗或野生型拟南芥(WT)(野生型拟南芥，哥论比亚生态型，wild-type A.thaliana Columbia(Col-0))分别转入-5℃、-7℃低温处理6小时，然后放置22℃恢复培养，10天后统计存活率。

统计存活率结果表明，在温度降至-7℃时，野生型拟南芥(WT)的存活率为30-40％，而转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系的存活率超过60％(经过低温(-7℃)处理后在22℃恢复培养10天后各植株存活情况照片如图3中B所示、经过低温(-5℃、-7℃)处理后在22℃恢复培养10天后植株存活率统计柱形图如图3中C所示)，结果表明转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系对低温胁迫有一定的抗性。

3.转pSN1301-OsUGE拟南芥的抗旱性鉴定：

将四周龄阳性转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系(L4和L7)幼苗或野生型拟南芥(WT)(野生型拟南芥，哥论比亚生态型，wild-type A.thaliana Columbia(Col-0))分别停止浇水三周进行干旱胁迫，然后恢复浇水观察一周。

停止浇水三周后的幼苗生长明显减缓，而且叶片发褐干枯，恢复浇水后大部分野生型拟南芥(WT)不能恢复生长，而转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系幼苗很快能恢复正常(经干旱处理3周后恢复浇水转pSN1301-OsUGE拟南芥和野生型拟南芥的生长状况照片如图3中D所示)。对照的存活率仅达30％，而转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系植株的存活率在80％以上(经干旱处理3周后恢复浇水转pSN1301-OsUGE拟南芥和野生型拟南芥的存活率柱形图如图3中E所示)，结果表明转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系比野生型拟南芥更耐旱。

实施例4、转pSN1301-OsUGE拟南芥的可溶性碳水化合物含量的分析

1、拟南芥中可溶性碳水化合物的提取

分别提取生长四周龄阳性转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系(L4和L7)幼苗或野生型拟南芥(WT)(野生型拟南芥，哥论比亚生态型，wild-type A.thalianaColumbia(Col-0))的可溶性碳水化合物，具体方法如下所述：

a.将150-200mg转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系(L4和L7)幼苗或野生型拟南芥(WT)叶片材料，分别洗净后吸干水分，迅速放入液N₂中研磨；

b.将液N₂研磨的干粉转移到1ml 80％甲醇中，沸水浴2min；

c.13,000rpm离心5min，收集上清转移至另一干净管中；

d.用500μl，20％的甲醇洗沉淀，煮2min；

e.13,000rpm离心5min，收集上清，与前述上清合并；

f.室温下将上清中液体蒸发干，样品溶于500μl ddH₂O中，13,000rpm离心3min，0.2μm微孔滤膜过滤得到转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系(L4和L7)幼苗或野生型拟南芥(WT)的可溶性碳水化合物。

2、HPLC测定转pSN1301-OsUGE拟南芥中可溶性糖的含量

用HPLC测定转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系(L4和L7)幼苗或野生型拟南芥(WT)的可溶性糖的含量。HPLC分离使用高效阴离子-交换柱(Carbo Pac PA1；Dionex，Sunnyvale，CA)，将步骤1得到的转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系(L4和L7)幼苗或野生型拟南芥(WT)的可溶性碳水化合物过高效阴离子-交换柱(Carbo Pac PA1；Dionex，Sunnyvale，CA)，用62mM NaOH洗脱，离子泵(PED-300；Biometra，Gttingen，Germany)。高效液相系统为被准组件：pump 420，autosampler 460(Kontron，Eching，Germany)，操作软件Kroma System 2000software(Bio-Tek，Winooski，VT).各种糖的确定都根据标准品(Sigma，Aldrich)。

对转pSN1301-OsUGE拟南芥的T₃代株系(L4和L7)体内的可溶性糖的定量分析，结果表明几种常见的可溶糖如葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖等的含量在野生型拟南芥(WT)和转pSN1301-OsUGE拟南芥中的含量差异不大，其中，海藻糖野生型拟南芥(WT)和转pSN1301-OsUGE拟南芥中的含量均很低；而棉籽糖在正常生长条件下的野生型拟南芥(WT，对照)中含量极低，几乎检测不到，但在转pSN1301-OsUGE拟南芥T₃代株系中含量却明显升高(图4)。推测由于转基因植物中OsUGE-1的过量表达，使得以UDP-D-半乳糖为底物合成的棉籽糖含量升高，达到约157ug/g叶片鲜重(L4)、142ug/g叶片鲜重(L7)，而棉籽糖的积累可显著增强植物的胁迫抗性。

Claims (5)

1.一种提高植物抗逆性的方法，是将UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因通过植物表达载体共同转入植物中，筛选得到抗逆性提高的植物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因的编码序列是自GENBANK号为AB087745的5′端第87-1151位核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因是通过植物表达载体pSN1301转入植物中的。

4.根据权利要求1至3中任意一项所述的方法，其特征在于：所述抗逆性为抗盐性和/或抗寒性和/或抗旱性。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述植物为拟南芥。

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