CN101094674A - N－去甲基氯氮平治疗人神经精神疾病的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了治疗神经精神疾病，包括精神病、情感障碍、痴呆、神经性疼痛和青光眼的方法。通过对患有神经精神疾病的患者给予治疗有效量的N－去甲基氯氮平来进行治疗。

Description

N-去甲基氯氮平治疗人神经精神疾病的用途

发明领域

本发明涉及二苯并二氮杂化合物N-去甲基氯氮平，8-氯-11-(1-哌嗪基)-5H-二苯并[b，e][1，4]二氮杂的有效的毒蕈碱受体激动剂特性的发现，其支持该药物作为优异治疗剂对于治疗疼痛、青光眼、痴呆、情感性疾病和精神病的临床用途。

发明背景

激素/神经递质乙酰胆碱的生理作用部分地通过毒蕈碱乙酰胆碱受体介导。毒蕈碱受体包括一族5种(M1-M5)跨膜蛋白，它们在表达这些基因的细胞和组织中介导缓慢的、调节性的信号传导。毒蕈碱受体是许多治疗有效试剂的靶点(1，2)。在外周，毒蕈碱受体介导乙酰胆碱在副交感神经系统中的作用。外周作用的毒蕈碱受体激动剂对降低青光眼患者的眼内压在治疗上是有用的(3)。增强乙酰胆碱中枢作用的化合物以及中枢作用的毒蕈碱受体激动剂都已经都被证明在治疗多种神经精神疾病中有临床效用(1，2，4-7)。

乙酰胆碱的作用通过该分子被乙酰胆碱酯酶降解而中止。在中枢神经系统内抑制这些酶导致在各毒蕈碱受体处乙酰胆碱的浓度增加。已经开发了许多乙酰胆碱酯酶抑制剂并且在常规的临床应用中将它们作为用于痴呆症的认知增强剂(4)。

许多中枢作用的毒蕈碱激动剂已经成为临床试验的主题。这些激动剂之一的呫诺美林，已经显示在控制精神病和在阿耳茨海默氏病患者中观察到的相关行为障碍方面具备有效性(5)。此外，最近已经证明呫诺美林用于治疗精神分裂症是有效的(6)。有趣的是，它对阳性和阴性症状均显示有效，而且在精神分裂症患者的早期临床研究中没有诱发不良的运动影响。这些数据提示具有毒蕈碱受体激动剂特性的化合物可能在治疗诸如阿耳茨海默氏病等神经变性疾病常有的行为障碍方面以及作为抗精神病药治疗人精神疾病是有效的，但仅在这些患者群对它们耐受的情况之下。此外，毒蕈碱受体激动剂已经在神经性疼痛状态的临床前模型中显示了活性(7)。

发明概述

本发明公开了治疗精神病的方法，其包括：鉴别出患有一种或多种精神病症状的个体；并使该个体接触治疗有效量的N-去甲基氯氮平；从而改善该一种或多种精神病症状。在一个实施方案中，所述个体是人。在一些实施方案中，将所述治疗有效量的N-去甲基氯氮平以单次剂量给药。在其它实施方案中，将所述治疗有效量的N-去甲基氯氮平以多次剂量给药。在一实施方案中，所述方法还包括令所述个体接触其它治疗剂。在一个实施方案中，所述个体在与N-去甲基氯氮平接触后再与所述其它治疗剂接触。在另一实施方案中，所述个体在与N-去甲基氯氮平接触前先与所述其它治疗剂接触。在又一实施方案中，所述个体基本上同时与所述其它治疗剂和N-去甲基氯氮平接触。在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自单胺重摄取抑制剂、选择性5-羟色胺重摄取抑制剂、去甲肾上腺素重摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取双重抑制剂、多巴胺激动剂、抗精神病剂、反向5-羟色胺激动剂、5-羟色胺拮抗剂、5-羟色胺2反向激动剂、5-羟色胺2拮抗剂、5-羟色胺1A激动剂、抗癫痫剂和作用于外周的毒蕈碱拮抗剂。

本发明还公开了治疗情感障碍的方法，其包括：鉴别出患有一种或多种情感障碍症状的个体；并且给予该个体治疗有效量的N-去甲基氯氮平，从而改善该一种或多种情感障碍症状。在一实施方案中，所述个体是人。在一实施方案中，所述情感障碍是抑郁症。在另一实施方案中，所述情感障碍是躁狂。在一些实施方案中，将所述治疗有效量的N-去甲基氯氮平以单次剂量给药。在其它实施方案中，将所述治疗有效量的N-去甲基氯氮平以多次剂量给药。在一实施方案中，所述方法还包括给予所述个体其它治疗剂。在一实施方案中，所述个体在与N-去甲基氯氮平接触后再与所述其它治疗剂接触。在另一实施方案中，所述个体在与N-去甲基氯氮平接触前先与所述其它治疗剂接触。  在又一实施方案中，所述个体基本上同时与所述其它治疗剂和N-去甲基氯氮平接触。在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自单胺重摄取抑制剂、选择性5-羟色胺重摄取抑制剂、去甲肾上腺素重摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取双重抑制剂、多巴胺激动剂、抗精神病剂、反向5-羟色胺激动剂、5-羟色胺拮抗剂、5-羟色胺2反向激动剂、5-羟色胺2拮抗剂、5-羟色胺1A激动剂、抗癫痫剂和作用于外周的毒蕈碱拮抗剂。

本发明还公开了治疗痴呆的方法，其包括：鉴别出患有一种或多种痴呆症状的个体；并且给予该个体治疗有效量的N-去甲基氯氮平，从而产生所希望的临床效果。在一个实施方案中，该个体是人。在一些实施方案中，将所述治疗有效量的N-去甲基氯氮平以单次剂量给药。在另一些实施方案中，将所述治疗有效量的N-去甲基氯氮平以多次剂量给药。在一实施方案中，所述痴呆显现为认知障碍。在另一实施方案中，所述痴呆显现为行为障碍。在一实施方案中，所述方法还包括给予所述个体其它治疗剂。在一实施方案中，所述个体在与N-去甲基氯氮平接触后再与所述其它的治疗剂接触。在另一实施方案中，所述个体在与N-去甲基氯氮平接触前先与所述其它治疗剂接触。  在又一实施方案中，所述个体基本上同时与所述其它治疗剂和N-去甲基氯氮平接触。在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自单胺重摄取抑制剂、选择性5-羟色胺重摄取抑制剂、去甲肾上腺素重摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取双重抑制剂、多巴胺激动剂、抗精神病剂、反向5-羟色胺激动剂、5-羟色胺拮抗剂、5-羟色胺2反向激动剂、5-羟色胺2拮抗剂、5-羟色胺1A激动剂、抗癫痫剂和作用于外周的毒蕈碱拮抗剂。

本发明还公开了治疗神经性疼痛的方法，其包括：鉴别出患有一种或多种神经性疼痛症状的个体；并使该个体接触治疗有效量的N-去甲基氯氮平，从而减轻所述神经性疼痛症状。在一实施方案中，所述个体是人。在一些实施方案中，将所述治疗有效量的N-去甲基氯氮平以单次剂量给药。在另一些实施方案中，将所述治疗有效量的N-去甲基氯氮平以多次剂量给药。在一个实施方案中，所述方法还包括使个体接触其它治疗剂。在一实施方案中，所述个体在与N-去甲基氯氮平接触后再与所述其它治疗剂接触。在另一实施方案中，所述个体在与N-去甲基氯氮平接触前先与所述其它治疗剂接触。在又一实施方案中，所述个体基本上同时与所述其它治疗剂和N-去甲基氯氮平接触。在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自单胺重摄取抑制剂、选择性5-羟色胺重摄取抑制剂、去甲肾上腺素重摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取双重抑制剂、多巴胺激动剂、抗精神病剂、反向5-羟色胺激动剂、5-羟色胺拮抗剂、5-羟色胺2反向激动剂、5-羟色胺2拮抗剂、5-羟色胺1A激动剂、抗癫痫剂和作用于外周的毒蕈碱拮抗剂。

本发明还公开了治疗青光眼的方法，其包括：鉴别出患有一种或多种青光眼症状的个体；并使该个体接触治疗有效量的N-去甲基氯氮平，从而减轻所述青光眼症状。在一实施方案中，所述个体是人。在一些实施方案中，将治疗有效量的N-去甲基氯氮平以单次剂量给药。在另一些实施方案中，将治疗有效量的N-去甲基氯氮平以多次剂量给药。在一些实施方案中，所述青光眼的症状选自眼内压升高、视神经损伤和视野缩小。在一个实施方案中，所述方法还包括使所述个体接触其它治疗剂。在一实施方案中，所述个体在与N-去甲基氯氮平接触后再与所述其它治疗剂接触。在另一实施方案中，所述个体在与N-去甲基氯氮平接触前先与所述其它治疗剂接触。在又一实施方案中，所述个体基本上同时与所述其它治疗剂和N-去甲基氯氮平接触。在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自单胺重摄取抑制剂、选择性5-羟色胺重摄取抑制剂、去甲肾上腺素重摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取双重抑制剂、多巴胺激动剂、抗精神病剂、反向5-羟色胺激动剂、5-羟色胺拮抗剂、5-羟色胺2反向激动剂、5-羟色胺2拮抗剂、5-羟色胺1A激动剂、抗癫痫剂、前列腺素类(prostenoids)以及α和β肾上腺素能(adrenergic)激动剂。

本发明还公开了包含药物有效量的N-去甲基氯氮平和其它治疗剂的药物组合物。在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自单胺重摄取抑制剂、选择性5-羟色胺重摄取抑制剂、去甲肾上腺素重摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取双重抑制剂、多巴胺激动剂、抗精神病剂、反向5-羟色胺激动剂、5-羟色胺拮抗剂、5-羟色胺2反向激动剂、5-羟色胺2拮抗剂、5-羟色胺1A激动剂、抗癫痫剂和作用于外周的毒蕈碱拮抗剂。在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自吩噻嗪、苯基丁基胡椒二酮碱(phenylbutylpiperadine)、脱苯扎平(debenzapine)、benzisoxidil和锂盐。在一些实施方案中，所述其它治疗剂选自氯丙嗪(Thorazine)、美索达嗪(Serentil)、丙氯拉嗪(Compazine)、硫利达嗪(Mellaril)、氟哌啶醇(Haldol)、匹莫齐特(Orap)、氯氮平(Clozaril)、洛沙平(Loxitane)、奥氮平(Zyprexa)、喹硫平(Seroquel)、利培酮(Risperidal)、齐拉西酮(Geodon)、碳酸锂、阿立哌唑(Abilify)、氯氮平、氯氮平片剂(Clozaril)、丙氯拉嗪(Compazine)、依曲方(Etrafon)、齐拉西酮(Geodon)、氟哌啶醇(Haldol)、氟哌利多(Inapsine)、洛沙平(Loxitane)、琉利达嗪(Mellaril)、吗茚酮(Moban)、替沃噻吨(Navane)、奥氮平(再普乐)、匹莫齐特(Orap)、盐酸氟奋乃静(Permitil)、氟奋乃静(Prolixin)、非那根(Phenergan)、喹硫平(思瑞康)、甲氧氯普胺(Reglan)、维思通(Risperdal)、美索达嗪(Serentil)、思瑞康(Seroquel)、三氟拉嗪(Stelazine)、氯普噻吨(Taractan)、氯丙嗪(Thorazine)、奋乃静-阿米替林复合物(Triavil)、奋乃静(Trilafon)、再普乐(Zyprexa)及它们的药物可接受盐。在一些实施方案中，所述选择性5-羟色胺重摄取抑制剂选自氟西汀、氟伏沙明、舍曲林、帕罗西汀、西酞普兰、依他普仑(escitalopram)、西布曲明、度洛西汀、文拉法辛以及它们的药物可接受盐和前药。在一些实施方案中，所述去甲肾上腺素重摄取抑制剂选自硫代尼索西汀(thionisoxetine)和瑞波西汀。在一些实施方案中，所述5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取双重抑制剂选自度洛西汀、米那普仑(milnacripran)和氟伏沙明。在一些实施方案中，所述多巴胺激动剂选自卡麦角林、金刚烷胺、麦角乙脲、培高利特、罗匹尼罗、普拉克索、L-DOPA和溴隐亭。在一实施方案中，所述反向5-羟色胺激动剂选自N-(1-甲基哌啶-4-基)-N-(4-氟苯基甲基)-N’-(4-(2-甲基丙氧基)苯基甲基)碳酰胺、MDL100,907、SR-43694B(依利色林)、凯坦色林、酮色林、米安色林、辛那色林、米氮平、赛庚啶和桂利嗪的组。

本发明的一个实施方案包括治疗认知障碍的方法，其包括鉴别需要改善认知能力的个体并且给予该个体一定量的N-去甲基氯氮平，该量对改善所述个体的认知能力是在治疗上有效的。

在所述实施方案的一些方面，所述个体是人。在所述实施方案的一些方面，将治疗有效量的N-去甲基氯氮平以单次剂量给药。在所述实施方案的其它方面，将治疗有效量的N-去甲基氯氮平以多次剂量给药。

在所述实施方案的其它方面，所述方法还包含使所述个体接触其它治疗剂。例如，所述个体可在所述与N-去甲基氯氮平接触之后与所述其它治疗剂接触。或者，所述个体可在所述与N-去甲基氯氮平接触之前先与所述其它治疗剂接触。

在一些情况中，所述个体基本上同时与所述其它治疗剂和N-去甲基氯氮平接触。在一些情况中，所述其它治疗剂选自单胺重摄取抑制剂、选择性5-羟色胺重摄取抑制剂、去甲肾上腺素重摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取双重抑制剂、多巴胺激动剂、抗精神病剂、反向5-羟色胺激动剂、5-羟色胺拮抗剂、5-羟色胺2反向激动剂、5-羟色胺2拮抗剂、5-羟色胺1A激动剂、抗癫痫剂和作用于外周的毒蕈碱拮抗剂。在所述实施方案的一些方面，所述个体患有选自幻觉、妄想、思维紊乱、行为障碍、攻击、自杀、躁狂、快感缺失、情感平淡、情感障碍、抑郁、躁狂、痴呆、神经性疼痛、青光眼的疾病状态以及两种或更多种任何上述的疾病状态。

本发明的另一个实施方案包括改善疾病状态的至少一个症状的方法，其中增加M1毒蕈碱受体的活性水平是有益的，所述方法包括确定能够从增加的M1毒蕈碱受体的活性水平受益的个体，以及给予该个体一定量的N-去甲基氯氮平，该量对增加所述M1毒蕈碱受体的活性水平和改善该个体的所述至少一种症状在治疗上是有效的。在所述实施方案的一些方面，将治疗有效量的N-去甲基氯氮平以单次剂量给药。在所述实施方案的另一些方面，将治疗有效量的N-去甲基氯氮平以多次剂量给药。在所述实施方案的其它方面，所述方法还包含使所述个体接触其它治疗剂。例如，所述个体可以在与N-去甲基氯氮平接触后与所述其它治疗剂接触。或者，所述个体可以在与N-去甲基氯氮平接触前先与所述其它治疗剂接触。在一些情况中，所述个体基本上同时与所述其它治疗剂和N-去甲基氯氮平接触。在一些情况中，所述其它治疗剂选自单胺重摄取抑制剂、选择性5-羟色胺重摄取抑制剂、去甲肾上腺素重摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取双重抑制剂、多巴胺激动剂、抗精神病剂、反向5-羟色胺激动剂、5-羟色胺拮抗剂、5-羟色胺2反向激动剂、5-羟色胺2拮抗剂、5-羟色胺1A激动剂、抗癫痫剂和作用于外周的毒蕈碱拮抗剂。在所述实施方案的一些方面，所述个体患有选自包括幻觉、妄想、思维紊乱、行为障碍、攻击、自杀、躁狂、快感缺失、情感平淡、情感障碍、抑郁、躁狂、痴呆、神经性疼痛、青光眼的疾病状态以及两种或更多种任何上述的疾病状态。

本发明的另一方面是改善一种或多种精神病症状的方法，其包含对表现出一种或多种精神病症状的个体给予治疗有效量的基本上不含氯氮平的N-去甲基氯氮平。一实施方案还包含鉴别表现出一种或多种精神病症状的个体。在一实施方案中，通过将所述个体暴露于一种或多种药物而诱导精神病。在一实施方案中，所述个体是人。在一实施方案中，将N-去甲基氯氮平以单次每日剂量给药或以分次剂量给药。在一个实施方案中，每日给予N-去甲基氯氮平2、3或4次。

本发明的另一个方面是改善情感障碍的一种或多种症状的方法，其包含对表现出一种或多种情感障碍症状的个体给予治疗有效量的基本上不含氯氮平的N-去甲基氯氮平。一实施方案还包含鉴别表现出一种或多种情感障碍症状的个体。在一实施方案中，所述情感障碍是抑郁症。在一实施方案中，所述情感障碍是躁狂。

本发明的另一个方面是改善一种或多种痴呆症状的方法，其包含对表现出一种或多种痴呆症状的个体给予治疗有效量的基本上不含氯氮平的N-去甲基氯氮平。一实施方案还包括鉴别表现出一种或多种痴呆症状的个体。在一实施方案中，所述痴呆包括认知障碍。在一实施方案中，所述痴呆包括行为障碍。

本发明的另一方面是改善一种或多种神经性疼痛症状的方法，包含对表现出一种或多种神经性疼痛症状的个体给予治疗有效量的基本上不含氯氮平的N-去甲基氯氮平。一实施方案还包括鉴别表现出一种或多种神经性疼痛症状的个体。

本发明的另一方面是改善一种或多种青光眼症状的方法，包括对表现出一种或多种青光眼症状的个体给予治疗有效量的基本上不含氯氮平的N-去甲基氯氮平。一实施方案还包括鉴别表现出一种或多种青光眼症状的个体。

本发明的另一方面是改善一种或多种精神病症状的方法，包括将N-去甲基氯氮平与另一种抗精神病剂联合对个体给药，其中至少一部分N-去甲基氯氮平是通过直接向该个体引入N-去甲基氯氮平而给药。在一实施方案中，对该个体直接引入N-去甲基氯氮平包括将N-去甲基氯氮平口服给药。在一实施方案中，对该个体直接引入N-去甲基氯氮平包括静脉内注射N-去甲基氯氮平。在一实施方案中，所述另一个抗精神病剂选自吩噻嗪、苯基丁基胡椒二酮碱、脱苯扎平、benzisoxidil、和锂盐。在一实施方案中，所述吩噻嗪选自氯丙嗪(Thorazine)、美索达嗪(Serentil)、丙氯拉嗪(Compazine)、硫利达嗪(Mellaril)。在一实施方案中，所述苯基丁基胡椒二酮碱选自氟哌啶醇(Haldol)和匹莫齐特(Orap)。在一个实施方案中，所述脱苯扎平选自氯氮平(Clozaril)、洛沙平(Loxitane)、奥氮平(Zyprexa)和喹硫平(Seroquel)。在一实施方案中，所述benzisoxidil选自利哌酮(Resperidal)和齐拉西酮(Geodon)。在一实施方案中，所述锂盐是碳酸锂。在一实施方案中，所述抗精神病剂选自阿立哌唑(Abilify)、氯氮平、氯氮平片剂(Clozaril)、丙氯拉嗪(Compazine)、依曲方、齐拉西酮(Geodon)、氟哌啶醇(Haldol)、氟哌利多(Inapsine)、洛沙平(Loxitane)、琉利达嗪(Mellaril)、吗茚酮(Moban)、替沃噻吨(Navane)、奥氮平(再普乐)、匹莫齐特(Orap)、盐酸氟奋乃静(Permitil)、氟奋乃静(Prolixin)、非那根(Phenergan)、喹硫平(思瑞康)、甲氧氯普胺(Reglan)、维思通、美索达嗪(Serentil)、思瑞康、三氟拉嗪(Stelazine)、氯普噻吨(Taractan)、氯丙嗪(Thorazine)、奋乃静-阿米替林复合物(Triavil)、奋乃静(Trilafon)、再普乐和它们的药物可接受盐。本发明的另一方面是改善一种或多种精神病症状的方法，包括对表现出一种或多种精神病症状的个体给予治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含N-去甲基氯氮平和药物可接受的赋形剂或稀释剂，其中所给予的任何氯氮平的量足够低使得N-去甲基氯氮平和氯氮平的组合产生对毒蕈碱受体的净激动作用。

本发明的另一方面是改善一种或多种情感障碍症状的方法，包括对表现出一种或多种情感障碍症状的个体给予治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含N-去甲基氯氮平和药物可接受的赋形剂或稀释剂，其中所给予的任何氯氮平的量足够低使得N-去甲基氯氮平和氯氮平的组合产生对毒蕈碱受体的净激动作用。

本发明的另一方面是改善一种或多种痴呆症状的方法，包括对表现出一种或多种痴呆症状的个体给予治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含N-去甲基氯氮平和药物可接受的赋形剂或稀释剂，其中所给予的任何氯氮平的量足够低使得N-去甲基氯氮平和氯氮平的组合产生对毒蕈碱受体的净激动作用。

本发明的另一方面是改善一种或多种神经性疼痛症状的方法，包括对表现出一种或多种神经性疼痛症状的个体给予治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含N-去甲基氯氮平和药物可接受的赋形剂或稀释剂，其中所给予的任何氯氮平的量足够低使得N-去甲基氯氮平和氯氮平的组合产生对毒蕈碱受体的净激动作用。

本发明的另一方面是改善一种或多种青光眼症状的方法，包括对表现出一种或多种青光眼症状的个体给予治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含N-去甲基氯氮平和药物可接受的赋形剂或稀释剂，其中所给予的任何氯氮平的量足够低使得N-去甲基氯氮平和氯氮平的组合产生对毒蕈碱受体的净激动作用。

附图简要说明

图1是显示在R-SAT分析中N-去甲基氯氮平对M1毒蕈碱乙酰胆碱受体的激动活性的结果的曲线图。

图2是显示在磷脂酰肌醇分析中N-去甲基氯氮平对M1毒蕈碱乙酰胆碱受体的激动活性的结果的曲线图。

图3显示将N-去甲基氯氮平肠胃外给药后在大鼠海马组织中MAP激酶激活的照片。

图4A显示通过R-SAT分析所确定的462种化合物的毒蕈碱M1受体激动剂活性的图。所显示的M1受体效能数据是由1微摩尔浓度的化合物得出，并且按照相对于所观测到的饱和的40-微摩尔浓度的卡巴胆碱(100％)的最大反应值的效能百分比进行报告。图4B-D显示PI水解数据的曲线图，这些数据使用稳定地转染了人M1受体基因的中国仓鼠卵巢细胞。图B描述了以相对于观察到的卡巴胆碱反应的百分比报告的激动剂反应。所描述的药物是卡巴胆碱(方形)、氯氮平(三角形)和N-去甲基氯氮平(圆形)，所观察到的效能(pEC₅₀)为：卡巴胆碱(5.7)，N-去甲基氯氮平(6.7)，和氯氮平(无反应)。图C描述了在3-微摩尔浓度的卡巴胆碱存在下所得到的竞争性拮抗剂反应，并且以观察到的阿托品(100％)反应的百分比进行报告。所描述的药物是阿托品(方形)、氯氮平(三角形)、和N-去甲基氯氮平(圆形)，所观察到的效能(pKi)为：阿托品(8.5)，N-去甲基氯氮平(无反应)，和氯氮平(7.1)。图D描述了在0.15-微摩尔浓度的N-去甲基氯氮平存在下所得到的竞争性拮抗剂反应，以所观察到的阿托品(100％)反应的百分比进行报告。所描述的药物是阿托品(方形)、氯氮平(三角形)，所观察到的效能(pKi)为：阿托品(8.4)，和氯氮平(7.6)。

图5显示在小鼠海马组织中N-去甲基氯氮平的M1毒蕈碱受体激动剂活性。示出在给予赋形剂(A)、氯氮平30mg/kg(B)、N-去甲基氯氮平10(C)、30(D)、100(E)、或N-去甲基氯氮平(30mg/kg)和东莨菪碱(0.3mg/kg，i.p.)(F)后细胞体中的磷酸-MAPK免疫反应性和CA1锥体细胞的近端树突(由箭头标出)。

图6显示在小鼠海马组织中N-去甲基氯氮平的M1毒蕈碱受体激动剂活性的定量测定。磷酸-MAPK免疫反应性的定量测定通过计算机对4只小鼠的海马CA1区的光密度测量值进行计算，其中(^*)表示其与赋形剂治疗相比有显著差异，所述比较采用单因素ANOVA post-hoc Dunnett′s检验(F_(5，23)＝10.88：P＜0.0001)。

图7显示使用150nM NDMC和不同浓度氯氮平的组合的R-SAT分析的结果。

图8显示使用150nM NDMC和不同浓度氯氮平的组合的PI水解分析的结果。

优选实施方案的详细描述

定义

N-去甲基氯氮平，8-氯-11-(1-哌嗪基)-5H-二苯并[b，e][1，4]二氮杂，也称为NDMC，被定义为具有式(I)所示分子结构的化合物。

“激动剂”被定义为增加受体基础活性(即由该受体介导的信号转导)的化合物。

“拮抗剂”被定义为与激动剂或反向激动剂竞争结合受体、从而阻止该激动剂或反向激动剂对该受体的作用的化合物。但是，拮抗剂(也称为“中立”拮抗剂)对组成型受体活性没有影响。

部分激动剂被定义为表现出有限的、或低于完全活性的激动剂，以致于该激动剂不能在体外激活受体，且在体内作为拮抗剂。

术语“个体”指动物，优选哺乳动物，最优选人，该个体是治疗、观察或试验的对象。

术语“治疗有效量”被用来表示引起所指明的生物或医药反应的活性化合物或药剂的量。所述反应可能发生组织、系统、动物或人中，其正是研究者、兽医、医生或其他临床医生所追求的，并且所述反应包括减轻正被治疗的疾病的症状。

在某些实施方案中，本发明公开的方法包括为了治疗精神病的目的对个体给予治疗有效量的NDMC。

在某些实施方案中，上述治疗精神病的方法包括鉴别患有一种或多种精神病症状的个体；并且使该个体接触治疗有效量的N-去甲基氯氮平；从而改善所述的精神病的一种或多种症状。

在一些实施方案中，所述症状是与精神病有关的认知障碍。在其它实施方案中，患有精神病的个体显示有一种以上的精神病症状。在某些实施方案中，所述症状之一是认知障碍而其它症状是幻觉、妄想、思维紊乱、行为障碍、攻击、自杀、躁狂、快感缺失、或情感平淡中的一种或多种。

在其它实施方案中，所述方法包括出于治疗抑郁或躁狂的目的对个体给予治疗有效量的NDMC。

在其它实施方案中，所述方法包括对个体给予治疗有效量的NDMC，目的是治疗精神病的和其它的行为障碍，所述其它的行为障碍是任何原因的痴呆或认知障碍的特征。

在其它实施方案中，所述方法包括对个体给予治疗有效量的NDMC，目的是治疗神经性疼痛。

本发明的发明人已对用于治疗人类疾病的一大系列药物对五种人毒蕈碱受体亚型的功能活性进行了特征分析。除已知的毒蕈碱药物外，仅有两种被研究的试剂(选自500多种之中)显示了毒蕈碱受体激动剂活性。一种是非典型的抗精神病氯氮平(8)。在体外，已经显示该化合物对毒蕈碱M1，M2，和M4受体具有微弱的部分激动剂/拮抗剂活性(9，10)，而通常认为其在体内显示毒蕈碱受体拮抗剂特性。另一种是其相关化合物N-去甲基氯氮平。

将氯氮平给予人类个体导致形成两种主要的代谢物N-去甲基氯氮平(NDMC)和氯氮平-N-氧化物(11)。然而，氯氮平-N-氧化物是一种极性代谢物，它被迅速排泄并且可能对其母体化合物的生物活性没有作用。在给予个体的氯氮平剂量和总氯氮平部分的血清浓度之间存在关联性，而NDMC的水平在单个个体之间可能有很大变化(12)。通常，NDMC在人动力学稳态期间构成总血清氯氮平浓度的40-75％(13)。关于NDMC穿透血脑屏障并且损害中枢调节活性(14，15)的能力存在互相冲突的数据。这些观察表明NDMC已经被常规地给予人类个体，并且耐受良好。关于NDMC的分子特性少有数据存在。已经显示NDMC具有对5HT_2C和D2受体(16)的拮抗剂活性，但是有关与毒蕈碱受体相互作用的数据尚未有报道。

出人意料地，并且与紧密关联的化合物氯氮平不同，已经发现化合物N-去甲基氯氮平(NDMC)具有迄今未被意识到的作为毒蕈碱受体激动剂的功能活性。离体试验已经显示在大鼠中NDMC穿过血脑屏障并且作为中枢毒蕈碱受体的激动剂。这些观察具有实际的应用，它们支持将NDMC用作抗精神病药、抗躁狂剂、抗痴呆剂、以及作为治疗剂用于治疗青光眼和神经性疼痛。这样，一方面，本发明公开了激动毒蕈碱受体活性的方法，其包括用有效量的NDMC接触受体。另一方面，本发明公开了对患有毒蕈碱受体相关障碍的个体进行治疗的方法，其包括鉴别需要所述方法的个体并对该个体给予治疗有效量的NDMC。

“毒蕈碱相关障碍”是指通过激动毒蕈碱受体而改善其症状的障碍。

另一方面，本发明公开了改善个体的与精神分裂症或精神病相关的一种或多种症状的方法，该精神分裂症或精神病可以是任何原因造成的，所述方法包括对所述个体给予治疗有效量的NDMC。在一些实施方案中，所述方法包括使个体接触药物活性剂量的NDMC，目的是控制精神分裂症或相关精神病的阳性(幻觉和妄想)和阴性(冷漠，社交回避，快感缺失)症状。在一实施方案中，为了改善与精神分裂症或精神病相关的一种或多种症状而给予的NDMC基本上不含氯氮平。“基本上不含氯氮平”指在所述个体的血流中可以检测到NDMC的同时，在该个体的血流中无法检测到可测量数量的氯氮平。在一实施方案中，与NDMC一起给予的任何氯氮平的量足够低，使得所给予的NDMC和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。在一实施方案中，给予一定量的氯氮平，但是其给药量足够低使得所给予的NDMC和氯氮平对毒蕈碱受体的组合产生净激动作用。在一实施方案中，NDMC对氯氮平的比率足够高并且由于对毒蕈碱受体的净激动作用而具有有益的效果。在不同的实施方案中，NDMC相对氯氮平的比例至少大约是100∶1、50∶1、10∶1、9∶1、7∶1、5∶1或3∶1。

另一方面，本发明公开了改善个体的与情感障碍相关的一种或多种症状的方法，所述情感障碍包括重性抑郁症、躁狂、躁郁症和自杀，所述方法包括对个体给予治疗有效量的NDMC。在一些实施方案中，所述方法包括使个体接触药物活性剂量的NDMC，目的是在观察到重性抑郁症或躁狂性抑郁期间控制症状。在一实施方案中，为了改善与情感障碍相关的一个或多个症状所给予的NDMC基本上不含氯氮平。在一实施方案中，与NDMC一起给予的任何氯氮平的量足够低，使得所给予的NDMC和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。在一实施方案中，给予一定量的氯氮平，但所给予的量足够低，使得所给予的NDMC和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。

另一方面，本发明公开了改善个体的与阿耳茨海默氏病以及神经退行性病变相关的一种或多种症状的方法，该方法包括对所述个体给予治疗有效量的NDMC。在一些实施方案中，所述方法包括使个体接触药物活性剂量的NDMC，目的是对在退行性痴呆中观察到的认知缺陷进行改善，并且对相关的行为异常进行控制。在一实施方案中，为了改善与痴呆相关的一种或多种症状而给予的NDMC基本上不含氯氮平。在一实施方案中，与NDMC一起给予的任何氯氮平的量足够低，使得所给予的NDMC和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。在一实施方案中，给予了一定量的氯氮平，但所给予的量足够低使得所给予的NDMC和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。

另一方面，本发明公开了改善个体的与神经性疼痛有关的一种或多种的症状的方法，其包括鉴别对其有需要的个体并且给予该个体治疗有效量的NDMC。在一些实施方案中，所述方法包括使所述个体接触药物活性剂量的NDMC，目的是控制在无论其病因如何的神经性疼痛状态中观察到的刺激不适感(dysthesthetic)，痛觉过敏，以及其它被改变的感受伤害的症状。在一实施方案中，为改善与神经性疼痛有关的一种或多种症状而给予的NDMC基本上不含氯氮平。在一实施方案中，与NDMC一起给予的任何氯氮平的量足够低，使得所给予的NDMC和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。在一实施方案中，给予了一定量的氯氮平，但所给予的量足够低，使得所给予的NDMC和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。

另一方面，本发明公开了改善个体的与青光眼有关的一种或多种症状的方法，其包括对该个体给予治疗有效量的NDMC。在一些实施方案中，所述方法包括使个体接触药物活性剂量的NDMC，目的是控制在无论病因如何的青光眼病中观察到的升高的眼内压。在一实施方案中，为改善与青光眼有关的一种或多种症状而给予NDMC基本上不含氯氮平。在一实施方案中，与NDMC一起给予的任何氯氮平的量足够低，使得所给予的NDMC和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。在一实施方案中，给予了一定量的氯氮平，但所给予的量足够低，，使得所给予的NDMC和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。

出人意料地，NDMC对人毒蕈碱受体具有有效的激动剂活性。本发明还公开了NDMC能穿过血脑屏障，并通过在大鼠海马中激活MAP激酶活性而测出其在体内作为毒蕈碱受体激动剂起作用。由本发明的方法所确定的NDMC分子活性与具有类似分子药理学特征的化合物的已知临床有效性相结合表明了NDMC能够被用于减轻或治疗与人精神病、情感性疾病、退化性痴呆、青光眼和神经性疼痛有关的障碍或病状。

另一方面，本发明公开了激活M1毒蕈碱受体的方法，其包括使该受体接触N-去甲基氯氮平。

另一方面，本发明公开了改善病状的至少一种症状的方法，其中在该病状中增加M1毒蕈碱受体的活性水平是有益的，所述方法包括将N-去甲基氯氮平给予对其有需要的个体。

N-去甲基氯氮平(NDMC)的制备

N-去甲基氯氮平(NDMC)具有式(I)的结构。

按照以前的描述制备NDMC(17)。将二苯并-二氮杂-内酰胺前体(II)用五硫化二磷转化成硫代内酰胺(III)，随后用例如硫酸二甲酯进行烷化产生亚胺基硫醚(IV)。用过量的哌嗪进行硫醚的氨解以产生所希望的N-去甲基氯氮平(I)。或者，二苯并-二氮杂-内酰胺(II)可以通过用诸如五氯化磷等卤化剂处理被转化成偕氯代亚胺(V)并且该产物V通过与哌嗪反应被转化成N-去甲基氯氮平(I)。

可以将NDMC组方在包含NDMC连同药物可接受的稀释剂或赋形剂的药物组合物中。这些组合物可以以适当的方式并按照被接受的惯例进行配制，例如在Remington’s Pharmaceutical Sciences(雷明顿药物科学)，Gennaro，Ed.，Mack Publishing Co.，Easton PA，1990中所公开的。在一些实施方案中，提供包含NDMC的药物组合物，该药物组合物基本上不含氯氮平。

有利的是，NDMC可以每日单次剂量的方式给药，或者每日的总剂量可作为多次剂量给药(例如，分成每日2次，3次或4次剂量)。此外，可通过局部使用的适宜的鼻内载体以鼻内形式，或通过经皮途径，或通过局部使用的眼用制剂，或者使用本领域普通技术人员所熟知的那些经皮的皮肤贴片形式给予用于本发明的化合物。

可根据不同因素选择NDMC的给药方案。所述因素包括患者的类型、种属、年龄、体重、性别和医疗状况；需治疗的病状的严重程度；给药途径；患者的肾脏和肝脏功能；以及所使用的特定化合物。普通医生能够容易地确定并且开出为了预防、对抗或阻止被治疗的疾病或障碍的进程所要求的该药物的有效量。

所述产品的每日剂量能够在从每名成人每日0.01到1000mg的很宽的范围内变化。通常以每日约0.0001mg/kg至约25mg/kg体重的剂量水平供应所述药物的有效量。优选地，该范围从每日约0.001至10mg/kg体重，特别是从每日约0.001mg/kg至1mg/kg体重。所述化合物可以按每日1至4次的方案给药。

为了得到最佳的药理效果，可以以通过常规试验确定的合适剂量单独使用NDMC，同时使任何潜在的毒性或其它不期望的效果最小化。此外，相信NDMC能用作已知药物的辅助治疗以降低这些常用药物的所需剂量，并从而减少它们的副作用。

在一些实施方案中，NDMC与一种或多种其它治疗剂联合给药。所述其它治疗剂可包括但不限于神经精神病试剂。如本文中所用，“神经精神病试剂”指化合物或化合物的组合，其直接地或者间接地影响脑中的神经元，或者影响传递至脑中神经元的信号。因此，神经精神病试剂可以影响一个人的精神，例如这个人的情绪、知觉、伤害感受、认知、机警、记忆等等。在某些实施方案中，所述神经精神试剂可以选自单胺重摄取抑制剂、选择性5-羟色胺重摄取抑制剂、去甲肾上腺素重摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取双重抑制剂、多巴胺激动剂、抗精神病剂、反向5-羟色胺激动剂、5-羟色胺拮抗剂、5-羟色胺2反向激动剂、5-羟色胺2拮抗剂、5-羟色胺1A激动剂、抗癫痫剂和作用于外周的毒蕈碱拮抗剂。

在一些实施方案中，所述抗精神病剂可以选自吩噻嗪、苯基丁基胡椒二酮碱、脱苯扎平、benzisoxidil和锂盐。该吩噻嗪组的化合物可以选自氯丙嗪(Thorazine)、美索达嗪(Serentil)、丙氯拉嗪(Compazine)和硫利达嗪(Mellaril)。该苯基丁基胡椒二酮碱组的化合物可以选自氟哌啶醇(Haldol)和匹莫齐特(Orap)。该脱苯扎平组的化合物可以选自氯氮平(Clozaril)、洛沙平(Loxitane)、奥氮平(Zyprexa)和喹硫平(Seroquel)。该benzisoxidil组的化合物可以选自利哌酮(Resperidal)和齐拉西酮(Geodon)。该锂盐可以是碳酸锂。在一些实施方案中，所述抗精神病剂可以选自包括阿立哌唑(Abilify)、氯氮平、氯氮平片剂(Clozaril)、丙氯拉嗪(Compazine)、依曲方、齐拉西酮(Geodon)、氟哌啶醇(Haldol)、氟哌立多(Inapsine)、洛沙平(Loxitane)、琉利达嗪(Mellaril)、吗茚酮(Moban)、替沃噻吨(Navane)、奥氮平(再普乐)、匹莫齐特(Orap)、盐酸氟奋乃静(Permitil)、氟奋乃静(Prolixin)、非那根(Phenergan)、喹硫平(思瑞康)、甲氧氯普胺(Reglan)、维思通、美索达嗪(Serentil)、思瑞康、三氟拉嗪(Stelazine)、氯普噻吨(Taractan)、氯丙嗪(Thorazine)、奋乃静-阿米替林复合物(Triavil)、奋乃静(Trilafon)和再普乐，或它们的药物可接受盐。在某些实施方案中，所述选择性5-羟色胺重摄取抑制剂选自氟西汀、氟伏沙明、舍曲林、帕罗西汀、西酞普兰、依他普仑、西布曲明、度洛西汀、和文拉法辛，以及它们的药物可接受的盐或前药。

在其它实施方案中，所述去甲肾上腺素重摄取抑制剂选自硫代尼索西汀(thionisoxetine)和瑞波西汀。

在其它实施方案中，所述多巴胺激动剂选自卡麦角林、金刚烷胺、麦角乙脲、培高利特、罗匹尼罗、普拉克索和溴隐亭。

在另一实施方案中，所述反向5-羟色胺2A激动剂选自N-(1-甲基哌啶-4-基)-N-(4-氟苯基甲基)-N’-(4-(2-甲基丙氧基)苯基甲基)碳酰胺、MDL100,907、SR-43694B(依利色林)、凯坦色林、酮色林、米安色林、辛那色林、米氮平、赛庚啶和桂利嗪。

另一方面，本公开贯注于治疗患者的神经精神病障碍的方法，其包括鉴别对其有需要的患者以及对所述患者给予治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含式(I)的化合物和神经精神试剂。在又一方面，本公开贯注于治疗患者的神经精神病障碍的方法，其包括鉴别对其有需要的患者以及对所述患者给予治疗有效量的式(I)的化合物和治疗有效量的神经精神试剂。

在一些实施方案中，NDMC和其它治疗剂是近乎同时给药。这些实施方案包括那些其中各化合物是存在于同一可给药的组合物中，即，包含这些化合物的单一的片剂、丸剂、或胶囊、或用于静脉内注射的单一的溶液、或单一的可饮用溶液、或单一的糖衣丸或贴片。所述实施方案还包括其中每种化合物是分别存在于可给药的组合物中，但指导患者几乎同时地使用这些不同的组合物，即，一种丸剂是紧接在另一种之后立即服用或一种化合物的注射是紧接在另一种化合物的注射之后，等等。

在其它实施方案中，首先给予NDMC和其它治疗化合物中的一个，然后给予NDMC和其它治疗化合物中的另一个。在这些实施方案中，可能对所述患者给予包含所述化合物之一的组合物，然后，在几分钟或几小时后的某一时间，给予包含所述化合物中的另一个的另一组合物。这些实施方案还包括以下情况：常规或连续地给予患者包括所述化合物之一的组合物，同时偶尔地给予患者包括另一化合物的组合物。

在联合给药的一些实施方案中，NDMC是与另一种治疗剂联合给药，其中至少一部分NDMC是通过将NDMC直接引入个体来给药。因此，例如，氯氮平可以与NDMC联合给药，其中氯氮平和NDMC都被直接给予个体。给予该个体的一部分NDMC来自于氯氮平的代谢。然而，另一部分的NDMC来自于NDMC的直接给药。在一实施方案中，向个体直接引入NDMC可以通过该个体经口摄入NDMC而完成。在一实施方案中，向个体直接引入NDMC可以通过给该个体静脉注射NDMC而完成。

可以通过多种方法学确定NDMC在指定受体的功能性药理学活性。一种目前受赞成的分析是在美国专利第5,707,798号中公开的受体选择和扩增技术(R-SAT)分析，通过引证将美国专利第5,707,798号的全部内容包括于此。

可以通过多种方法学确定NDMC在指定受体的功能性药理学活性。另一种目前受赞成的分析是PI水解分析(18)。

可以通过多种方法学确定NDMC穿透血脑屏障并且引起有意义的生物反应的能力。一种目前被大多数人所选择的分析是海马的MAP激酶激活分析(19)。

本发明在以下实施例中被进一步公开，这些实施例并非旨在以任何方式限制本发明权利要求的范围。

实施例

实施例1：受体选择和扩增技术

所述功能性受体分析-受体选择和扩增技术(R-SAT)，被用于(基本上如美国专利第5,707,798号中所公开，通过引证将其全部内容包括于此)研究已知药物的功能性药理学特性，该已知药物包括很多它们的代谢物。这些实验已经提供了这些试剂中每一种的分子特征分析，或者指纹。在所有这些被检测的药剂中，只有一种，NDMC，显示了有效的M1乙酰胆碱受体激动剂活性。图1显示氯氮平(实心的三角形)和N-去甲基氯氮平(实心的圆形)对于激活人M1毒蕈碱受体的浓度反应关系。数据得自之前描述的R-SAT分析(20)。数据按照相对于完全毒蕈碱受体激动剂卡巴胆碱的活化百分率对比药物浓度来作图。Veh表示赋形剂。

如图1所示，氯氮平对人M1受体显示了高效能(pEC₅₀为7.2)但内在的有效性有限(相对有效性＜25％)。因此氯氮平被定义为弱的部分激动剂。部分激动剂缺乏足够的内在激动剂活性来以与完全激动剂相似的方式刺激受体。因此它们在体内表现为拮抗剂。与之对照，NDMC也对人M1受体显示了高效能(pEC₅₀为7.2)，它还对M1受体显示了显著更强的内在激动剂活性(对于卡巴胆碱的相对有效性为65％)，在R-SAT分析中表现为强力激动剂。该增加的有效性表明NDMC在体内会作为激动剂，其区别于在氯氮平中所观察到的功能特征分析。

为了确认NDMC对M1受体显示出增强的激动剂有效性这一观察结果，进行了PI水解测试，图2和表1公开了其结果。从(18)中描述的PI测试中得出图2中的数据。图2显示了卡巴胆碱(实心方形)、氯氮平(实心三角形)、和N-去甲基氯氮平(实心圆形)对激活人M1毒蕈碱受体的浓度反应关系。按照所测定的放射性强度的每分钟计数对比药物浓度来描记数据。

表1

化合物	有效性％	M1pEC50	n
				卡巴胆碱氯氮平N-去甲基氯氮平	100％65±10	6.04±0.05无活性7.01±0.06	55

在表1中，以pEC₅₀值报告效能而以完全激动剂卡巴胆碱的相对值报告有效性，均有+/-标准偏差。“n”表示试验测定的次数。NDMC在此系统中作为M1激动剂显示高效能(pEC₅₀＝7.0)，具有全有效性(＞65％相对于卡巴胆碱的有效性)。因此，两种不同的功能分析证实NDMC对人M1毒蕈碱乙酰胆碱受体具有以前未意识到的效能和全效的激动剂活性。NDMC的这种显著更大的阳性的内在活性表明它在体内表现为一种M1受体激动剂。

测试了氯氮平和NDMC对其余的毒蕈碱受体亚型的作用。表2公开了这些数据。从之前描述的R-SAT测试(20)中得出表2中的数据。以pEC₅₀值报告效能而以完全激动剂卡巴胆碱的相对值报告有效性，均有+/-标准偏差。“N”表示试验测定的次数。

表2

化合物	M1有效性 pEC50	M2有效性 pEC50	M3有效性  pEC50
				氯氮平	24±3  7.63±0.37	65±8  6.23±0.14	无反应
N-去甲基氯氮平	72±5  7.26±0.07	106±196.47±0.21	27±4  6.49±0.18
				奥氮平	无反应	无反应	无反应
N-去甲基奥氮平	无反应	无反应	无反应
				呫诺美林	121±6 7.20±0.08	106±9 6.30±0.23	66±6  6.63±0.21
卡巴胆碱	101±2 6.11±0.03	101±5 6.23±0.09	102±3 6.53±0.04

化合物	M4有效性  pEC50	M5有效性  pEC50
			氯氮平	57±5  7.35±0.10	无反应
N-去甲基氯氮平	87±8  6.87±0.17	48±6  7.63±0.25
			奥氮平	无反应	无反应
N-去甲基奥氮平	无反应	无反应
			呫诺美林	116±9 7.46±0.14	86±12 6.59±0.22
卡巴胆碱	96±3  6.53±0.05	105±3 6.76±0.12

与氯氮平相比NDMC对全部五种毒蕈碱受体亚型都显示了增强的内在活性。NDMC对人毒蕈碱受体的特征分析与在研究试剂呫诺美林中观察到的特征分析最为相似，但有一个重要差别，NDMC对人M3受体具有显著较低的有效性。

为在体内证实所述分子特征分析的诸方面，并且评价NDMC进入中枢神经系统的能力，将NDMC以肠道外途径给予大鼠，并且确定M1受体介导的海马MAP激酶(MAPK)活性的激活，结果公开在图3中。NDMC处理在CA1锥体神经元中激活了MAPK。C57BL6小鼠以图3中描述的剂量经皮下接受赋形剂、N-去甲基氯氮平、氯氮平、或者NDMC和东莨菪碱(腹腔注射)，然后通过免疫组织化学进行标记。与赋形剂或氯氮平处理相比，NDMC处理使CA1锥体神经元的细胞体和近端树突显示了增加的磷酸-MAPK免疫反应性。此外，东茛菪碱降低了NDMC诱导的在CA1区内的MAPK活化，预示毒蕈碱受体介导的机制理。在30mg/kg的剂量观察到了强活化。这证实了NDMC穿过血脑屏障，并且在体内为毒蕈碱受体激动剂起作用。

实施例2：NDMC的非临床药理学

在大部分已知的生物胺G蛋白偶联受体(GPCR)上对几乎所有已知的抗精神病药以及很多它们的代谢物的广泛的功能性的药理学筛选将NDMC识别为在药理学上是独特的。NDMC是D₂多巴胺受体的拮抗剂和5HT_2A受体的有效的反向激动剂。但是，不同于任何其它被测试的化合物，NDMC是有效的和有效的毒蕈碱受体激动剂。确切地说，NDMC是M₁(K_i＝50nM)和M₅受体(K_i＝25nM)的有效的部分激动剂。NDMC也显示对M₂、M₃和M₄受体的激动作用，但比之与其它亚型的相互作用，这种相互作用的效能低10倍并且确实，在生理条件下NDMC能够竞争性地拮抗M₃受体。相比较而言，氯氮平是M₁、M₃和M₅受体的有效的竞争性拮抗剂，M₂受体的弱激动剂，和M₄受体的有效的部分激动剂。此外，奥氮平，一种在结构上与NDMC和氯氮平相关的抗精神病药，是全部5种毒蕈碱亚型的拮抗剂。在高达1μM的浓度，氟哌啶醇、利培酮、和齐拉西酮不与这些受体中的任何一种相互作用。因此，NDMC对毒蕈碱受体，尤其对M₁和M₅受体的激动剂活性在抗精神病药物中是独特的。

除了其对D₂、5HT_2A和毒蕈碱受体的活性之外，NDMC在配体结合分析中对α₁、α₂、D₁、H₁、δ₂、5HT_1A、5HT_1B、5HT₃、5HT₆和5HT₇受体以及Ca²⁺通道有亲和力。功能上NDMC是5HT_2C、H₁和α_1A受体的有效的竞争性拮抗剂以及5HT_6A和5HT_7A受体的反向激动剂。

NDMC在被认为预示抗精神病活性的两种模型中具有口服活性。与氯氮平一样，在低于或相似于减少自发活动的剂量下NDMC减弱MK-801-诱导的和安非他明-诱导的小鼠的活动过强。与氯氮平和氟哌啶醇不同，NDMC不减弱阿扑吗啡-诱导的小鼠攀缘活动。这可能反映了与那些其它的抗精神病药相比NDMC对D₂受体的亲和力较低。NDMC给药导致在海马CA1区中促细胞分裂原-激活的蛋白激酶(MAPK)的剂量依赖性激活，并且该激活可以被非选择性毒蕈碱拮抗剂东莨菪碱所阻滞。鉴于M₁受体是负责海马CA1区中MAPK激活的主要毒蕈碱受体亚型，所述发现支持NDMC对M₁受体的体内激动作用。氯氮平给药不导致MAPK激活。NDMC药理学活性的更多证据来自于以下观察：NDMC给药增加了cFOS在额前叶皮质和伏隔核中的表达，但在纹状体中其表达没有增加。在纹状体中缺乏cFOS表达提示NDMC不太可能产生锥体束外副作用。

实施例3：NDMC的非临床药代动力学和代谢

在大鼠和犬中对NDMC和氯氮平的药代动力学进行了研究。在两个物种中，单次剂量的NDMC经口(10mg/kg)或经静脉(1mg/kg)给药，并在给药后以规则的时间间隔采集血样。数据显示NDMC的口服生物利用度在大鼠和犬体内分别为25％和44％。与之相比，氯氮平的口服生物利用度在大鼠和犬体内分别为1.5％和7％。因此，这些数据表明NDMC相对于氯氮平具有优越的口服生物利用度。

在接受氯氮平的动物中，检测到可测量水平的NDMC。在大鼠中，在C_max处的NDMC水平大约是氯氮平在其C_max处水平的20倍。在犬中，NDMC的峰值水平大约是氯氮平峰值水平的16％。这些数据证实了已发表的研究中所证明的在包括小鼠、兔、犬、猪、猴和人的几个物种中氯氮平代谢成为NDMC。

在大鼠中计算了脑NDMC对血浆NDMC的比率。在口服给予NDMC240分钟后该比率是1.0，口服给予氯氮平240分钟后该比率是2.6。与文献提供的数据一起，这些结果显示NDMC散布进入CNS。

实施例4：NDMC的体外药理学

在单一高剂量(10μM)评价了NDMC对50种受体、离子通道和转运载体的亲和力。这一筛选识别出NDMC造成90％或更强的结合抑制的16个位点，这些位点是α₁、α₂、D₁、D_2S、H₁、M₁、M₂、M₃、δ₂、5HT_1A、5HT_1B、5HT_2A、5HT₃、5HT₆和5HT₇受体，以及Ca²⁺通道。在这些分析中配体结合的抑制作用提供了有关NDMC与这些受体结合的信息，但没有指出相互作用的性质。

实施例5：抗多个G蛋白偶联受体(GPCRs)的NDMC的功能筛选

在使用专有的受体选择和扩增技术(R-SAT；2，3)的大范围功能性GPCR分析中，对NDMC的药理学特征进行了详尽的研究。表3报告了NDMC以及主要的典型和非典型抗精神病药对部分人单胺受体的功能性药理学活性，这些药物对所述受体表现出最高效能。

表3 NDMC以及参照抗精神病药在R-SAT分析中的拮抗剂和反向激动剂活性

化合物	NDMC	氯氮平	奥氮平	氟哌啶醇	利培酮	齐拉西酮
								竞争性拮抗剂
受体	pKi	pKi	pKi	pKi	pKi	pKi
							D2	7.2±0.1	7.7±0.1	8.4±0.2	10.0±0.1	9.3±0.1	8.3±0.3
5-HT2A	8.3±0.2	8.3±0.2	8.6±0.1	7.3±0.1	9.7±0.1	8.6±0.1
							5-HT1A	nr1	nr	nr	nr	nr	nr*2
5-HT2C	7.8±0.2	7.4±0.2	7.4±0.1	nr	7.2±0.3	7.4±0.2
							H1	8.2±0.2	9.5±0.2	8.4±0.1	nr	7.0±0.2	nr
M1	nr*	7.8±0.2	7.2±0.2	nr	nr	nr
							M2	nr*	nr*	6.9±0.1	nr	nr	nr
M3	6.8±0.7	8.2±0.2	6.7±0.5	nr	nr	nr
							M4	nr*	nr*	7.4±0.3	nr	nr	nr
M5	nr*	7.5±0.3	7.2±0.2	nr	nr	nr
							D3	nr	6.3±0.1	7.6±0.4	9.7±0.1	7.9±0.4	7.5±0.3
α1A	7.3±0.1	8.1±0.1	7.4±0.2	7.4±0.1	8.5±0.1	7.4±0.2
							α2A	nr	nr	nr	nr	7.7±0.1	nr
	反向激动剂
								pEC50	pEC50	pEC50	pEC50	pEC50	pEC50
5HT2A	8.0±0.3	8.0±0.3	7.8±0.1	6.8±0.1	9.0±0.3	8.8±0.3
							5HT6A	6.9±0.1	7.0±0.2	7.4±0.2	nr	nr	nr
5HT7A	7.3±0.1	7.4±0.1	nr	nr	9.1±0.2	7.3±0.1

¹nr＝在高达1μM时没有显著的拮抗剂或反向激动剂活性。

²nr^*＝在高达1μM时没有显著的拮抗剂或反向激动剂活性；显著的激动剂活性(参见表2)。

NDMC的药理学活性与现有的临床有效的非典型抗精神病药相似。像所有非典型的抗精神病药一样，NDMC对5-HT_2A受体显示了高效能、竞争性拮抗剂和反向激动剂活性。NDMC作为多巴胺D₂受体拮抗剂与氯氮平相比显示较低的效能，并且因此具有较高的5-HT_2A/D₂受体效能比率。NDMC作为H₁和α_1A受体拮抗剂与氯氮平相比也显示较低的效能，表明它可能具有较低的倾向诱导临床不良反应，包括由这些受体亚型介导的镇静和直立性低血压。与这些数据一致，已发表的报道证实了在体外NDMC对D₂和5-HT_2C受体的有效的竞争性拮抗剂活性(KouppamkiM，Syvlahti E and Hietala J(1993).Clozapine and N-desmethylclozapine arepotent 5-HT_1C receptor antagonists(氯氮平和N-去甲基氯氮平是有效的5-HT_1C受体拮抗剂).Eur J Pharm，245：179-182)，对组胺H₃受体缺乏有效的活性(Alves-Rodriques A，Leurs R，Willems E and Timmerman H(1996).Binding of clozapine metabolites and analogues to the histamine H₃ receptorin rat brain cortex(在大鼠脑皮质中氯氮平代谢物及类似物对组胺H₃受体的结合).Arch Pharm Pharm Med Chem，329：413-416；Schlicker E and MarrI(1996).The moderate affinityof clozapine at H₃ receptors is not shared byits two major metabolites and by structurally related and unrelated atypicalneuroleptics(氯氮平的两种主要代谢物以及结构上相关或不相关的非典型安定药不分享氯氮平对H₃受体的中度亲和力).Naunyn-Sch ArchPharmacol，353：290-294)，以及仅与GABA_A受体有较低效能的相互作用(Wong G，Kuoppamki M，Hietala J，Lüddens H，Syvlahti E and Korpi ER(1996).Effects of clozapine metabolites and chronic clozapine treatment onrat brain GABA_A receptors(氯氮平代谢物和长期氯氮平治疗对大鼠脑GABA_A受体的影响).Eur J Pharm，314：319-323)。

在筛选的抗精神病药中，只有NDMC和氯氮平具有毒蕈碱受体激动剂特性(表2；Sur C，Mallorga PJ，Wittmann M，Jacobsen MA，Pascarella D，Williams JB，Brandish PE，Pettibone DJ，Scolnick EM and Conn PJ(2003).N-desmethylclozapine，an allosteric agonist at muscarinic 1 receptor，potentiates N-methyl-D-aspartate receptor activity(N-去甲基氯氮平，一种毒蕈碱1受体的变构激动剂，加强N-甲基-D-天冬氨酸受体活性.PNAS，100：13674-13679)。NDMC是人M₁和M₅受体的有效的部分激动剂以及人M₂和M₄受体的不很有效的完全激动剂(表2)；在相似的条件下它缺乏对这些受体的拮抗剂活性(表1)。M₂和M₅激动在精神分裂症中的生理学重要性是未知的。但是，M₁和M₄受体的激动与抗精神病活性相关(BymasterFP，Felder C，Ahmned S and McKinzie D(2002).Muscarinic Receptors as aTarget for Drugs Treating Schizophrenia(毒蕈碱受体作为药物治疗精神分裂症的靶).Curr Drug Targ CNS Neurol Dis，1：163-181；Felder CC，Bymaster FP，Ward J and DeLapp N(2000).Therapeutic Opportunities forMuscarinic Receptors in the Central Nervous System(在中枢神经系统中毒蕈碱受体的治疗机会).J Med Chem，43：4333-4353)。此外，M₁受体的激动可以赋予NDMC认知增强活性(Bymaster FP，Felder C，Ahmned S andMcKinzie D(2002).Muscarinic Receptors as a Target for Drugs TreatingSchizophrenia(毒蕈碱受体作为药物治疗精神分裂症的靶).Curr DrugTarg CNSNeurol Dis，1：163-181)。NDMC显示对M₃受体的最小的、低效能的激动剂活性并且在这一位点处表现为拮抗剂(表3和4)。毒蕈碱M₃受体是介导人副交感神经激活的胆碱能效应的主要受体亚型，因此显著的激动剂活性可能会导致限制治疗的副交感神经副作用，包括出汗、眼的和胃肠的功能障碍。NDMC对M₃的拮抗剂活性表明在临床试验中将不会观察到严重的类副交感神经效应。NDMC对毒蕈碱受体的药理活性已经被其他人观察到(Sur et al.PNAS 2003)。

表4二苯并二氮杂抗精神病药物的毒蕈碱受体激动剂活性

	M1		M2		M3		M4		M5
											化合物	有效性	pEC50	有效性	pEC50	有效性	pEC50	有效性	pEC50	有效性	pEC50
NDMC	72±52	7.3±0.1	106±19	6.5±0.2	27±4	6.5±0.2	87±8	6.9±0.2	48±6	7.6±0.3
											氯氮平	24±3	7.3±0.4	65±8	6.5±0.1	nr		57±5	7.4±0.1	nr
奥氮平	nr		nr		nr		nr		nr
											卡巴胆碱	101±2	6.1±0.1	101±5	63v0.1	102±3	6.5±0.1	96±3	6.5±0.1	105±3	6.8±0.1

¹有效性是受体的卡巴胆碱激活％

²数据为平均值±S.E.M.

³nr＝在高达10μM时无显著激动剂活性

NDMC对毒蕈碱受体的药理学特征不同于氯氮平。氯氮平显示对M₁受体的有效的激动剂活性，但是这种相互作用的有效性是非常低的(表4)并且在相似的条件下氯氮平是M₁受体激活的有效拮抗剂(表3)。同样与NDMC相反，氯氮平显示有效的M₃和M₅拮抗作用。对M₂和M₄受体氯氮平显示部分激动作用。这些数据预示，尽管NDMC可能在体内会表现为M₁激动剂，氯氮平却很可能作为M₁拮抗剂。

实施例6：NDMC对Non-Swiss Albino小鼠的自发运动和逆转MK-801- 诱导的活动过强的作用

对雄性成年Non-Swiss Albino(NSA)小鼠以1，10，或30mg/kg经皮下(s.c.)或经口(p.o.)给予NDMC。以s.c.和p.o.两种给药方式，10和30mg/kg的NDMC显著降低了自发运动。在10mg/kg s.c.，在给药30分钟后达到最大程度的降低并且在试验期间维持，120分钟。NDMC的这种作用与氯氮平中所见相似，其在3和10mg/kg s.c.和p.o.降低了自发运动。

临床有效的抗精神病药物能阻滞诸如MK-801等非竞争性N-甲基-D-天冬氨酸激动剂的行为作用。在雄性成年NSA小鼠中评价了NDMC减弱MK-801-诱导的活动过强的能力，并且将其在此测试中的活性与氯氮平的活性相对比。NDMC减弱了MK-801-诱导的活动过强，其最小有效剂量为1mg/kg s.c.和10mg/kg p.o.，此结果与抗精神病样效力一致。这些剂量低于或相似于那些降低自发运动的剂量，表明该抗精神病样作用可区别于普通的自发运动的中断。相似地，氯氮平以1mg/kg s.c.和3mg/kg p.o.的最小有效剂量减弱了MK-801-诱导的活动过强。

实施例7：NDMC对逆转安非他明-诱导的Non-Swiss Albino小鼠运动行 为的作用

与减弱N-甲基-D-天冬氨酸激动剂诱导的活动过强相似，临床有效的抗精神病药还在啮齿类动物中减弱多巴胺-介导的活动过强。因此，小鼠中安非他明-诱导的活动过强常被用于分析体内抗精神病样活性。在10mg/kg s.c.或p.o.给药后，在雄性成年NSA小鼠中NDMC减弱了安非他明诱导的活动过强。氯氮平也降低安非他明诱导的活动过强，其最小有效剂量为3mg/kg p.o.。这些结果预示了在人类中的抗精神病样效力。

实施例8：NDMC对逆转阿扑吗啡一诱导的Non-Swiss Albino小鼠攀缘活 动的作用

另一种在啮齿类动物中对阻滞多巴胺介导的行为进行评估的方法是阿扑吗啡诱导的小鼠攀缘活动的减弱。直接的D₂受体拮抗剂最有效地阻滞由多巴胺受体激动剂阿扑吗啡所诱导的攀缘活动。氟哌啶醇，一种对多巴胺D₂受体具有高亲和力的典型精神抑制类抗精神病药，经0.1mg/kgs.c.在雄性成年NSA小鼠中完全减弱了阿扑吗啡诱导的攀缘活动。氯氮平也以剂量依赖方式减弱阿扑吗啡诱导的攀缘活动，其最小有效剂量为10mg/kg s.c.。相反，NDMC在剂量高达100mg/kg s.c.时仍没有减弱阿扑吗啡诱导的攀缘活动。这可能反映了与氯氮平和氟哌啶醇相比NDMC对D2受体的亲和力较弱。

实施例9：NDMC对C57BL/6小鼠脑中MAPK激活的作用

在为证实NDMC在体内的毒蕈碱激动剂性质的努力中，测定了海马CA1区域中促细胞分裂原-激活的蛋白激酶(MAPK)的激活。对C57BL/6小鼠s.c.给予3、10、30和100mg/kg剂量的NDMC。2小时后处死试验动物；摘除全脑并且在海马中进行MAPK活性的免疫检测。NDMC给药以剂量依赖的方式在所有剂量下均导致对MAPK活性的刺激。相反，氯氮平在30mg/kg不导致脑CA1区内MAPK的激活。NDMC诱导的MAPK活性的刺激可被非选择性毒蕈碱受体拮抗剂东茛菪碱(0.3mg/kg，i.p.)阻断，证实NDMC在体内作为毒蕈碱受体激动剂起作用。体外试验已经证明M1受体是负责前脑中MAPK激活的毒蕈碱受体的主要亚型(HamiltonSE and Nathanson NM(2001).The M₁ Receptor is required for MuscarinicActivation of Mitogen-activated Protein(MAP)Kinase in Murine CerebralCortical Neurons(M₁受体对于鼠大脑皮质神经元中促细胞分裂原-激活的蛋白(MAP)激酶的毒蕈碱激活是必需的).J Biol Chem，276：15850-15853；Berkeley JL，Gomeza J，Wess J，Hamilton SE，Nathanson NM and Levey AI(2001).M₁ Muscarinic Acetylcholine Receptors Activate ExtracellularSignal-Regulated Kinase in CA1 Pyramidal Neurons in Mouse HippocampalSlices(在小鼠海马切片中M1毒蕈碱乙酰胆碱受体激活CA1锥状神经元中细胞外信号调节的激酶).Mol Cell Neurosci，18：512-524；Berkeley JLand Levey AI(2003).Cell-Specific Extracellular Signal-regulated KinaseActivation by Multiple G Protein-coupled receptor Families in Hippocampus(在海马中通过多体G蛋白-偶联受体家族激活细胞特异性细胞外信号调节的激酶).Mol Pharm，63：128-135)。因此这些数据支持NDMC在体内对毒蕈碱M₁受体的激动作用。

实施例10：去甲基氯氮平对前脑中Fos蛋白表达的作用：氯氮平代谢物 在体内的生物活性

NDMC(去甲基氯氮平)药理活性的第一个体内证明是在大鼠脑中即早期基因cFOS表达的依赖剂量式诱导(Young CD，Meltzer HY and DeutchAY(1997).Effects of desmethylclozapine on Fos protein expression in theforebrain：In vivo biological activity of the clozapine metabolite(去甲基氯氮平对前脑中Fos蛋白表达的影响：氯氮平代谢物的体内生物活性).Neuropsychopharm，19：99-103)。将NDMC以7.5和30.0mg/kg的剂量s.c.给予成年雄性Sprague-Dawley大鼠；2小时后处死这些试验动物，并使用蛋白质印迹法对从各不同脑区得到的匀化组织进行cFOS的免疫检测。NDMC诱导cFOS在额前叶皮质和伏隔核中的表达，但未在纹状体中诱导cFOS的表达，并且这些影响在程度和区域选择方面类似于在氯氮平中所观察到的情况。在经NDMC处理的动物的纹状体中缺乏cFOS表达可能表明NDMC导致EPS的较低倾向性。

实施例11：在对清醒Sprague Dawlev大鼠进行单次剂量静脉给药后或经 口给药后对氯氮平和N-去甲基氯氮平的药代动力学评价

对大鼠静脉(i.v.)和口服(p.o.)给药后对氯氮平和N-去甲基氯氮平(NDMC)的药代动力学进行评价。对p.o.给药后的C_max，T_max和生物利用度以及i.v.给药后的分布容积(Vss)、终血浆半衰期(T1/2)和清除率(CLs)进行了测定。还测定了静脉给药后和口服给药后NDMC的脑-血浆比率。总共18只雄性Sprague-Dawley大鼠被给予氯氮平p.o.(N＝6，10mg/kg)，NDMCp.o.(N＝6，10mg/kg)，氯氮平i.v.(N＝6，1mg/kg)，或NDMC i.v.(N＝6，1mg/kg)，并且以规律的间隔在给药后0和240分钟之间取得用于生物分析的血清样本。使这些动物安乐死并且根据测试组不同在给药后60或240分钟取得血浆样本。测定每个样本中的NDMC和氯氮平的水平。表5-8显示了NDMC的药代动力学数据。

表5NDMC给药²后大鼠体内NDMC的血浆浓度(ng/mL¹)

测定的化合物(给药途径)	时间(分钟)
								10	30	60	120	180	240
NDMC(p.o.)	305±101	582±265	481±181	227±75	170±26	122±54
							NDMC(p.o.)	277±57	576±161	614±60	NS3	NS	NS
NDMC(i.v.)	540±46	276±30	126±38	33.7±11.4	11.7±3.8	5.3±0.3

¹平均值±标准差；²口服给药的剂量是10mg/kg并且静脉给药的剂量是1mg/kg；

³NS＝由于研究在60分钟时终止而没有取得样本

表6氯氮平给药后²大鼠体内NDMC和氯氮平的血浆浓度(ng/mL¹)

测定的化合物(给药途径)	时间(分钟)
								10	30	60	120	180	240
氯氮平(p.o.)	3.8±1.5	10.2±5.2	10.8±6.0	5.2±2.0	2.8±0.8	2.2±0.3
							氯氮平(p.o.)	4.9±1.7	35.8±30.8	38.0±39.0	NS3	NS	NS
氯氮平(i.v.)	1124	75.1±6.3	44.5±4.0	24.8±1.8	13.6±2.6	9.5±1.5
							NDMC(p.o.)	77.1±88.7	194±161	147±86.6	42.5±15.1	13.4±2.54	7.1±0.5
NDMC(p.o.)	241±21.3	576±135	510±247	NS	NS	NS
							NDMC(i.v.)	3.54	2.8±1.2	4.0±1.5	2.3±1.0	0.7±0.1	0.8±0.6

¹平均值±标准差；²经口给药的剂量是10mg/kg并且静脉给药的剂量是1mg/kg；

³NS＝由于研究在60分钟时终止而没有取得样本；⁴N＝2

表7NDMC给药后大鼠体内NDMC的药代动力学参数¹

测定的化合物(给药途径)	平均AUC(分钟.ng-1.mL-1)	Cmax(ng/mL)	Tmax(分钟)	T1/2(分钟)	BA2(％)	Vss(L/kg)	CLs(mL.分钟-1.kg-1)
								NDMC(i.v.)	27331	756	0	39.3	-	1.47	36.2
NDMC(p.o.)	68227	582	60	ND3	25.0±7.5	ND	ND

¹平均值±标准差；²BA＝口服生物利用度；³ND＝没有测定

表8氯氮平给药后大鼠体内NDMC和氯氮平的药代动力学参数¹

测定的化合物(给药途径)	平均AUC(分钟.ng/mL)	Cmax(ng/mL)	Tmax(分钟)	T1/2(分钟)	BA2(％)	Vss(L/kg)	CLs(mL.分钟-1.kg-1)
								NDMC(i.v.)	489.7	3.99	60	-	-	-	-
NDMC(p.o)	16199	194	30	-	-	-	-
								氯氮平(i.v.)	8836	137	0	79.4	-	9.88	101
氯氮平(p.o.)	1347	10.8	60	ND3	1.5±0.6	ND	ND

¹平均值±标准差；²BA＝口服生物利用度；³ND＝没有测定

这些数据证明NDMC在口服给药后被迅速地从胃肠道吸收；在30分钟时达到C_max，其为582ng/mL。NDMC具有从循环中清除的低清除率，低分布容积，和大约25％的口服生物利用度。氯氮平在经口给药后所达到的峰药物浓度要低得多(10.8ng/mL；NDMC的五十分之一)，具有较高的清除率和较差的生物利用度(1.5％)。这些数据表明经口给药后NDMC在人体内可能具有可接受的药代动力学特性，并且与氯氮平相比可能确实具有改进的药代动力学特性。

口服给予氯氮平后观察到NDMC的高血浆水平，并且NDMC的峰值血浆水平高于在氯氮平中所观察到的近20倍(194ng/mL对10.8ng/mL)。其他人也以经得到类似的观察(Weigmann H，Hrter S，Fischer V，Dahmen N and Hiemke C(1999).Distribution of clozapine anddesmethylclozapine between blood and brain in rats(大鼠中氯氮平和去甲基氯氮平在血液和脑之间的分配).Eur Neuropsychopharm，9：253-256；Baldessarini RJ，Centorrino F，Flood JG，Volpicelli SA，Huston-Lyons D andCohen BM(1993).Tissue concentrations of clozapine and its metabolite inthe rat(大鼠中氯氮平及其代谢物的组织浓度).Neuropsychopharm，9：117-124)。Weigmann等人(Eur Neuropsychopharm 1999)表明在以1.5小时的间隔对雄性Sprague-Dawley大鼠经口给予5剂(20mg/kg)的氯氮平之后，NDMC的血浆浓度高于氯氮平达2.2倍。在另一项研究中，在经腹腔注射(i.p.)给予Sprague-Dawley大鼠不同剂量(1-60mg/kg)的氯氮平后，观察到了高水平的循环NDMC(Baldessarini et al；Neuropsychopharm1993)。因此，NDMC是在对大鼠口服给予氯氮平后所形成的主要化学部分。在体外也已经显示NDMC是通过大鼠肝微粒体形成的主要氯氮平代谢物(Bun H，Disdier B，Aubert C and Catalin J(1999).Interspeciesvariability and drug interactions of clozapine metabolism by microsomes(微粒体氯氮平代谢的物种间不同以及药物相互作用).Fund Clin Pharm，13：577-581)。

上述药代动力学研究包括对NDMC向脑内散布的最初评估。在对Sprague-Dawley大鼠经口给予10mg/kg的NDMC之后60分钟时，NDMC的脑-血浆水平的比率是0.36±0.16，在给药后240分钟时，该比率是1.0±0.4。此外，在经口给予氯氮平之后60分钟时，NDMC的脑-血浆水平的比率是0.26±0.07，在给药后240分钟时，该比率是2.6±0.8。该后一结果证实了以前已发表的一些发现，显示对雄性Sprague-Dawley大鼠经口给予氯氮平导致了脑中NDMC的水平高于血清中观测值达3.9倍(Baldessarini et al.；Neuropsychopharm 1993)，并且对Sprague-Dawley大鼠腹腔给予20、30和60mg/kg的氯氮平导致在脑中检测到NDMC(Bun et al.；Fund Clin Pharm 1999)。这些体内试验的数据总体清楚地证明了经口给药后NDMC向CNS内散布。

实施例12：在雄性Beagle犬中氯氮平和N-去甲基氯氮平的生物利用度评 估

对犬经静脉(i.v.)和经口(p.o.)给药后对氯氮平和N-去甲基氯氮平(NDMC)的药代动力学进行评价。测定p.o.给药后的C_max、T_max和生物利用度以及i.v.给药后的分布容积(Vss)、终血浆半衰期(T_1/2)和清除率(CLs)。对总共6只小猎犬给予氯氮平p.o.(N＝3，10mg/kg)，NDMC p.o.(N＝3，10mg/kg)，氯氮平i.v.(N＝3，1mg/kg)，或NDMC i.v.(N＝3，1mg/kg)。在给药前和经口给药后10分钟、30分钟、1、2、3、4和6小时，以及在给药前和经静脉给药后2、5、10、30分钟、1、2、3和4小时取得用于生物分析的血清样本。测定每个样本中的NDMC和氯氮平的水平。表9-12显示NDMC的药代动力学数据。

表9NDMC给药后²犬体内的NDMC血浆浓度(ng/mL¹)

测定的化合物(给药途径)	时间(分钟)
										-	10	30	60	120	180	240	360
NDMC(p.o.)	-	1.0	14±122	67±37	155±95	249±44	274±44	261
										2	5	10	30	60	120	180	240
NDMC(i.v.)	182.5±90	73±22	50±10	35±2	32±6	28±4	27±7	27±4

¹平均值±标准差；²口服给药剂量为10mg/kg以及静脉给药剂量为1mg/kg。

表10将氯氮平口服或静脉给药后²犬体内的NDMC和氯氮平的血浆浓度(ng/mL¹)

测定的化合物(给药途径)	时间(分钟)
										-	10	30	60	120	180	240	360
NDMC(p.o.)	-	0	2.45	25.4	5.8	10.29	19.23	46.7
									氯氮平(p.o.)		0.46	9.53	61.8±103	35±20	57±16	100±33	213±91
	2	5	10	30	60	120	180	240
									NDMC(i.v.)	0.54±0.12	0.47±0.06	0.64±0.26	1.72±0.75	3.55±1.03	4.31±1.34	4.89±1.41	4.44±1.31
氯氮平(i.v.)	166±28	136±40	98±24	75±10	76±7	61±8	58±11	41±6

¹平均值±标准差；²口服给药剂量为10mg/kg以及静脉给药剂量为1mg/kg。

表11将NDMC和氯氮平口服或静脉给药后犬体内NDMC的药代动力学参数¹

测定的化合物(给药途径)	AUC平均值(分钟.ng-1.mL-1)	Cmax(ng/mL)	Tmax(分钟)	T1/2(分钟)	BA2(％)	Vss(L/kg)	CLs(mL.分钟-1.kg-1)
								NDMC(i.v.)	134.8±21.3	353.2±242	-	13.2±7.0	-	28202.1±4919.8	1850±1060.4
NDMC(p.o.)	597.6±111.8	286.3±25	3.3±1.2	ND	44.3	ND	ND
								氯氮平(i.v.)	15.0±3.9	5.3±1.2	2.7±0.58
氯氮平(p.o.)	32.1±24.0	19.2±7.2	4.0±0.0

¹平均值±标准差；²BA＝口服生物利用度

表12氯氮平给药后犬体内氯氮平的药代动力学参数¹

测定的化合物(给药途径)	AUC平均值(分钟.ng-1.mL-1)	Cmax(ng/mL)	Tmax(分钟)	T1/2(分钟)	BA2(％)	Vss(L/kg)	CLs(mL.分钟-1.kg-1)
								氯氮平(i.v.)	266±33	189±18	-	3.3±0.63	-	10335±1636	2190±295.9
氯氮平(p.o.)	186±109.5	124.9±58.3	3.0±1.7	ND	7.0	ND	ND

¹平均值±标准差；²BA＝口服生物利用度

口服给药后NDMC被从胃肠道吸收，在3.3小时达到C_max 286.3ng/mL。NDMC具有从循环中清除的低清除率，低分布容积，和约44％的口服生物利用度。氯氮平具有较差的口服生物利用度(7％)。这些数据表明在人体中NDMC在口服给药后可能具有可接受的药代动力学特性，并且与氯氮平相比可能确实具有改善的药代动力学特性。

静脉内和口服给予氯氮平后，在血浆中均容易地检测到NDMC。NDMC/氯氮平AUC比率的平均值在i.v.给予氯氮平后是0.056，并且在口服给药后为0.161(i.e.，16％)。这些数据证实了最近的一些研究所证明的在犬中氯氮平被代谢为N-去甲基氯氮平，所述研究包括体外试验(Bunet al.Fund Clin Pharm 1999)和体内试验(Mosier KE，Song J，McKay G，Hubbard JW and Fang J(2003).Determination of clozapine，and itsmetabolites，N-desmethylclozapine and clozapine N-oxide in dog plasmausing high-performance liquid chromatography(使用高效液相色谱在犬血浆中确定氯氮平及其代谢物N-去甲基氯氮平和氯氮平N-氧化物).JChromat B，783：377-382)。Mosier和他的同事们表明对犬口服给予氯氮平后，去甲基氯氮平的C_max约为氯氮平的20％(即，NDMC/氯氮平的比率约为0.2)。在一项早期研究中，在口服给药后未在犬体内检出N-去甲基氯氮平(Gauch R and Michaelis W(1970)).The metabolism of8-chloro-11-(4-mehtyl-1-piperazinyl)-5H-dibenzo[b，e][1，4]diazepine(Clozapine)in mice，dogs，and human subjects(在小鼠、犬和人中8-氯-11-(4-甲基-1-哌嗪基)-5H-二苯并[b，e][1，4]二氮杂(氯氮平)的代谢).IlFarmaco，26：667-681)；但是这可能是由于分析技术不敏感。

实施例13：在氯氮平的独特临床效应中N-去甲基氯氮平激动M1毒蕈碱 受体的作用

方法

使用受体选择和扩增技术(R-SAT)分析对除了多巴胺D₄、5-羟色胺5_A和组胺H₄受体之外的所有已知的单胺能受体亚型进行了临床相关药物的分子特征分析。简要地说，按照制造商方案中的描述使用Polyfect试剂(Qiagen Inc.)，用不同的受体cDNA转染生长为70-80％融合单层的NIH/3T3细胞(在96孔板中，10-100ng受体和20ng β-Gal报道基因/孔)。转染后1天，将配体加入到Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基中，其中补充有青霉素(100U/ml)、链霉素(100μg/ml)和2％的Cyto-SF3。4到6天后，吸出培养基，将细胞溶解，加入邻-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)并且以分光光度计测定所造成的吸收。根据重复进行两次的八个点的浓度反应试验完成浓度反应曲线，其中最大的抗精神病药物浓度在10-25微摩尔的范围内变化，并利用Excel拟合和Graph Pad Prism对数据进行分析。所报告的EC₅₀值代表在其它配体不存在的情况下产生来自受体的最大反应值的一半时的配体浓度，而IC₅₀值代表抑制激动剂诱导活性的一半时的配体浓度。使用等式Ki＝IC₅₀/{1+[激动剂]/EC₅₀激动剂}对竞争性拮抗剂IC₅₀数据进行调整计算激动剂的占用。以负对数值(EC₅₀和pK_i)报告数据。Weiner等人(2001)和Wellendorph等人(2002)描述了此项研究中所使用的药物的来源，但N-去甲基氯氮平除外，其得自Sigma，Inc.，以及N-去甲基奥氮平，其由ACADIA制药公司合成。可在补充信息中找到所筛选化合物的清单。

如Spalding等人的描述(2002)，在稳定转染了人M1毒蕈碱受体cDNA的中国仓鼠卵巢细胞上进行PI水解分析，并且从重复进行两次的六个或八个点浓度反应实验中得出数据。

MAP激酶分析利用了经皮下给予赋形剂，氯氮平，或者有或没有东茛菪碱的N-去甲基氯氮平的C57BL6小鼠，2小时后处死小鼠，并按Berkeley等人的描述(2001)进行磷酸-MAPK免疫反应性分析。简要地说，在于60分钟时s.c.给药处理之后，先用100ml 4％的多聚甲醛然后用100ml 10％的蔗糖对这些小鼠进行灌注。摘除脑并将其冷冻保护在30％的蔗糖中在4℃下过夜。第二天，用滑动式切片机切成50μm切片。漂洗切片，用3％H₂O₂在室温下处理10分钟并且再次漂洗。在含有10μg/ml的抗生物素蛋白(Vector Laboratories Burlingame，CA)、0.1％曲拉通-X和4％的正常山羊血清(NGS)的PBS中封闭切片1小时。漂洗切片，并且在含有50μg/ml生物素(Vector Laboratories Burlingame，CA)、2％NGS和浓度为1∶250的磷酸-ERK1/2抗体(Cell signal Technologies，Beverly，MA)的PBS中在4℃下孵育过夜。第二天，漂洗切片，并且将其放置在含有2％NGS和浓度为1∶100的生物素化的山羊抗兔(Vector LaboratoriesBurlingame，CA)中，在4℃下放置1小时。漂洗切片，并将其放置在辣根过氧化物酶-结合的抗生物素蛋白-生物素复合体中(Vector LaboratoriesBurlingame，CA)，在4℃下放置1小时。漂洗切片，并且在TSA荧光素酪胺中在室温下孵育10分钟。用10mM CuSO₄处理切片30分钟，用Vectashield封片剂(Vector Laboratories Burlingame，CA)将切片封片到载玻片上。通过荧光显微镜观察切片，并且用Scion图像分析软件(ScionCorp.Frederick，MD)进行数字图像的分析。

逐步多元回归分析，包括依赖测量、剂量、年龄和性别，被用于评价在精神分裂症个体中NDMC对治疗反应的贡献(Hasegawa et al 1993and Lee et al 1999)。因为剂量不固定，根据症状严重度的基线水平、年龄和剂量，对该分析进行调整。在治疗开始6周和6个月后取得用于分析的血浆样本，并与取得样本时得到的临床测量值进行关联，并且在最后一剂氯氮平之后12小时抽取血浆样本。所述分析中只包括每天接受至少100mg氯氮平的个体，并且无法获得这些个体在某些时间点的数据。关于与抗胆碱能试剂的共同治疗，此例中仅有两名个体接受了苯扎托品的治疗。当来自这两名个体的数据被省略时结果并无不同(数据没有显示)。最后，这项研究中有10名患者在氯氮平和NDMC的水平被测定的时候接受了苯二氮治疗。苯二氮 尚未被报道过影响氯氮平的代谢。

经筛选的、根据临床类别分组的药物包括：

抗精神病药：阿莫沙平，氨磺必利(Amisulpiride)，安哌齐特，溴哌利多，布他拉莫，氯丙沙嗪，氯丙嗪，氯普噻吨，顺式-氟哌噻吨，氯噻平，氯氮平，氟哌利多，法南色林，氟奋乃静，氟司必林(Fluspiriline)，氟派啶醇，洛沙平，马扎哌汀，M100907，美哌隆，美索达嗪，吗茚酮，N-去甲基氯氮平，N-去甲基奥氮平，奥卡哌酮，氯替平(Octoclothepin)，奥氮平，培拉嗪，哌拉平，匹莫齐特，Pimpamperone，丙嗪，丙硫喷地(Prothypendyl)，喹硫平，瑞莫必利，利培酮，舍吲哚，螺哌隆，舒必利(Sulpride)，舒托必利，替氟达嗪(Telfludazine)，硫利达嗪，替沃噻吨，硫必利，莫哌隆，替螺酮，反式-氟哌噻吨，三氟拉嗪，三氟哌多(Trifluoperidol)，三氟丙嗪，和齐拉西酮。

抗抑郁药/抗焦虑药：乙酰色氨酸，乙酰色氨酰胺，阿拉丙酯(Alaprocate)，阿普唑仑，阿米替林，巴比妥，溴西泮，丁氨苯丙酮(Buproprion)，丁螺环酮，水合氯醛，氯巴占，氯硝西泮，氯米帕明，氯吉兰，氯氮杂(Chlordiazepoxide)，氯美扎酮，Continine，丙氯拉嗪(Compazine)，地昔帕明，丙炔苯丙胺，去甲安定，二氮嗪，多塞平，氟马西尼，氟硝西泮，氟西汀，氟西泮，氟伏沙明，丙米嗪，茚达曲林，异丙烟肼，马普替林，甲丙氨酯，米那普仑，米那普令，米氮平(Mirtazepine)，莫达非尼，硝西泮，诺米芬辛，去甲替林，奥沙西泮，帕吉林，苯乙肼，普拉西泮，Protripytline，咯利普兰，曲卡唑酯，反苯环丙胺，三唑酮(Trazadone)，三唑仑，苯海索(Trihexaphendyl)，曲米帕明，维洛沙秦，齐美利定，唑吡坦，和佐匹克隆。

CNS杂项：3PPP，5-氨基戊酸(Aminopentanoic Acid)，5-羟基MDA，5-甲氧基DMT，5-甲氧色胺，对乙酰氨基酚，乙酰水杨酸，阿普洛尔，金刚烷胺，胺碘酮，AMPA，阿朴可待因，阿扑吗啡，阿托品，巴氯芬，Balperione，苄托品，荷包牡丹碱，缓激肽，溴苄胺，  BRL 37344，溴隐亭，大麻二酚，Carbemazepine，卡比多巴，赛庚啶，西拉唑啉，D-苯丙胺，(D-血清2)-亮氨酸脑啡肽-苏氨酸，(亮氨酸5)脑啡肽，D-苯丙氨酸，地布卡因，双氯芬酸，双氢麦角胺，DOI，多潘立酮，艾巴佐坦，滕喜隆，麻黄碱，依托度酸，乙琥胺(Ethosuxamide)，非尔氨酯，芬布芬，GABA，Gabaxadol，氢溴酸加兰他敏，γ-乙烯基GABA，加巴喷丁，(-)GMC III，(+)GMC III，海洛因，喜巴辛，I-4-AA，ICI 204448，吲哚布洛芬，异去甲槟榔次碱，氯胺酮，Ketaprofen，拉贝洛尔，拉莫三嗪，左洛啡烷，利多卡因，麦角乙脲，L-745-870，褪黑激素，Metoclopromide，美金刚，麦斯卡林，萘哌地尔，纳布啡，N-烯丙基SKF 38393，纳洛酮，纳曲酮，纳曲吲哚(Naltrindole)，新斯的明，尼古丁，哌啶酸，N-甲基ICI118-551，N-甲基多巴胺，N，N-二甲基MDA，降阿朴吗啡，去甲可待因，去甲芬氟拉明(Norfenfulramine)，去甲佐辛(Normetazocine)，羟乙卡因，匹莫林，培高利特，PCP，法克罗芬，非那西丁，芬特明，酚苄明，苯妥英，毒扁豆碱，P-Iodoclonidine，哌仑西平，丙胺卡因，Primodone，普鲁卡因，丙氯拉嗪，普萘洛尔，伪麻黄碱，喹吡罗，雷氯必利，异育亨宾碱，利血平，林卡唑，RO-05-3663，RS 100329，RX 821002，Saclofen，水杨酰胺，SCH 12679，SCH 23390，东莨菪碱，SKF 81297，SKF 38393，SKF82948，SKF 82957，SKF 83566，SR 141716A，SR 144528，氯化琥珀胆碱，替诺昔康，特麦角脲，丁卡因，妥拉唑林，托吡卡胺，UK 14304，丙戊酸盐，氨己烯酸，WIN 55212-2，赛拉嗪，育亨宾，和佐美酸。

单胺能的：7-OH-DPAT，8-0H-DPAT，α-甲基5-羟色胺，槟榔碱，阿司咪唑，Bethanacol，卡巴胆碱，CGS 12066A，辛那色林，氯苯那敏，西咪替丁，Clobenpropit，CPP，双氢麦角汀，Dimaprit，苯海拉明，多西拉敏，依托拉嗪，法莫替丁，组胺，Imetit，异麦芽糖酶，酮色林，洛哌丁胺，L-色氨酸，LY 53857，mCPP，美舒麦角，甲麦角林，甲基麦角新碱，美赛西平，美西麦角，5-甲氧(基)色胺，米安色林，MK 212，美吡拉敏，非尼拉敏，苯双胍，匹美噻吨，哌嗪，Pirenpirone，哌唑嗪，异丙嗪，马来酸吡拉明，Quiapazine，雷尼替丁，凯坦色林，SB 204741，SB 206553，5-羟色胺，螺沙群，Sumitriptan，噻普酰胺，Tripellenamine，曲普利啶，和WB 4101.

心血管的：乙酰唑胺，阿糖腺苷，沙丁胺醇，阿替洛尔，阿米洛利，氨力农，苄普地尔，咖啡因，巯甲丙脯氨酸，CGS-15943，CGS-21680，CGP-12177A，氯噻嗪，可乐定，胍喹啶，洋地黄毒苷，地高辛，地尔硫，双嘧达莫，丙吡胺，多巴酚丁胺，多沙唑嗪，DPCPX，肾上腺素，依那普利，氟桂利嗪，呋塞米，胍那苄，胍乙啶，肼屈嗪，氢氯噻嗪，异丙肾上腺素，异山梨醇，利多卡因，Linisopril，间羟异丙肾上腺素，甲氧明，腺苷地尔，美托拉宗，美托洛尔，米多君，米诺地尔，N-Acethylpocainamide，尼卡地平，硝苯地平，尼莫地平，尼群地平，去甲肾上腺素，苄丙酚胺，羟甲唑啉，副黄嘌呤，己酮可可碱，酚妥拉明，吡那地尔，吲哚洛尔，普鲁卡因胺，普萘洛尔，奎尼丁，螺内酯，茶碱，Theoyphylline 1-3，噻吗洛尔，氨苯蝶啶，乌拉地尔，维拉帕米，和华法林。

全身性杂项：阿昔洛韦，Adephenine，Allupurinol，阿莫地喹，，6-溴-APB，青蒿素，硫唑嘌呤，阿奇霉素，樟脑，辣椒碱，托可拉斯，卡立普多，头孢噻肟，金鸡尼丁，氯霉素，氯喹，氯磺丙脲，氯唑沙宗，克拉霉素，氯非铵，克霉唑，  环苯扎林，D-环丝氨酸，达那唑，丹曲林，右美沙芬，二甲双酮，羟丙哌嗪，E-辣椒碱，依度尿苷，Ethinimate，非哌西特，氟康唑，膦甲酸，加拉明(Gallamine)，格列本脲，格列吡嗪，金丝桃素，布洛芬，艾芬地尔，吲哚美辛，异丁甲基黄嘌呤，卡英酸，酮康唑，左啡诺，Linopiridine，马吲哚，美克洛嗪，美非沙胺，甲氟喹，美芬新，Mesbeverine，美索巴莫，甲氧氯普胺，甲硝唑，MK 801，N-氨己基-5-氯萘-1-氨基亚磺酰，N-甲基-D-天冬氨酸，NCS 382，Neophesperidin，Nixoxetine，那可丁(Nocapine)，奥克巴胺，奥美拉唑，奥芬那君，羟基保泰松，帕帕非林，青霉胺，喷他脒，苯乙酰脲，印防己毒素，吡拉西平(Pitrazepine)，吡拉西坦，吡罗昔康，伯氨喹，丙磺舒，乙胺嘧啶，奎宁，利托君，糖精，舒林酸，苏拉明，SB 218795，沙立度胺，替洛隆，阿利马嗪，妥拉磺脲，甲苯磺丁脲，托哌酮，尿嘧啶核苷，阿糖腺苷，扎来普隆，和齐多夫定。

结果和讨论

使用以哺乳动物细胞为基础的功能分析受体选择和扩增技术(R-SAT)，对462种临床相关药物对于36个已知人单胺能G蛋白偶联受体之中的33个的功能活性进行了特征分析。表13显示代表性抗精神病剂作用于受体的数据，其中在该受体观察到所述试剂的最有效的活性。显示了对五种代表性抗精神病药和氯氮平代谢物N-去甲基氯氮平(NDMC)对13种人单胺受体亚型的效能数据。对于竞争性拮抗剂研究，效能数据以pKi值进行报告，而反向激动剂数据以pEC₅₀值进行报告，二者都是从3到8个独立的测定值+/-标准误差中导出。星号(*)表示存在激动剂活性，毒蕈碱受体激动剂效能在表14中报告。齐拉西酮对人5-HT_1A受体显示有限的但可检测到的激动剂效力(＜30％相对于8-OH-DPAT)，并且作为竞争性拮抗剂测试时Ki＞1微摩尔。所使用的缩写：NDMC-N-去甲基氯氮平，5-HT-5-羟色胺，H-组胺，M-毒蕈碱，D-多巴胺，和Alpha-α肾上腺素能，以及nr-无反应，该无反应被定义为在浓度高达1微摩尔时无显著的拮抗剂或反向激动剂活性。

表13抗精神病药在人单胺受体上的药理学活性

	氟哌啶醇	利培酮	齐拉西酮	奥氮平	氯氮平	NDMC
							竞争性拮抗剂
	受体	pKi	pKi	pKi	pKi	pKi							pKi
D25-HT2A5-HT1A5-HT2CH1M1M2M3M4M5D3Alpha 1AAlpha 2A							10.0+/-0.17.3+/-0.1nrnrnrnrnrnrnrnr9.7+/-0.17.4+/-0.1nr	9.3+/-0.19.7+/-0.1nr7.2+/-0.37.0+/-0.2nrnrnrnrnr7.9+/-0.48.5+/-0.17.7+/-0.1	8.3+/-1.38.6+/-0.1nr*7.4+/-0.2nrnrnrnrnrnr7.5+/-0.37.4+/-0.2nr	8.4+/-0.28.6+/-0.1nr7.4+/-0.18.4+/-0.17.2+/-0.26.9+/-0.16.7+/-0.57.4+/-0.37.2+/-0.27.6+/-0.47.4+/-0.2nr	7.7+/-0.18.3+/-0.2nr7.4+/-0.29.5+/-0.27.8+/-0.2nr*8.2+/-0.2nr*7.5+/-0.36.3+/-0.18.1+/-0.1nr	7.2+/-0.18.3+/-0.2nr7.8+/-0.28.2+/-0.2nr*nr*6.8+/-0.7nr*nr*nr7.3+/-0.1nr
		反向激动剂
受体								pEC50	pEC50	pEC50	pEC50	pEC50	pEC50
	5-HT2A5-HT6A5-HT7A	6.8+/-0.1nrnr	9.0+/-0.3nr9.1+/-0.2	8.8+/-0.3nr7.3+/-0.1	7.8+/-0.17.4+/-0.2nr	8.0+/-0.37.0+/-0.27.4+/-0.1	8.0+/-0.36.9+/-0.17.3+/-0.1

D₂受体的竞争性拮抗和5-HT_2A受体的反向激动在整个这一类中几乎是一致的，以典型试剂表现出低5HT_2A/D₂比率，而非典型试剂表现出高比率(Meltzer et al 1989 and Weiner et al 2001)。经常观察到H₁受体的反向激动，其中氯氮平和奥氮平显示了尤其高的效能(Weiner et al 2001)。很多化合物对α₁肾上腺素能受体显示拮抗剂活性，较少试剂显示有力的5-HT₆活性，而很多，尤其利培酮，对5-HT₇受体显示有效的反激动剂活性。氯氮平、奥氮平和许多典型试剂(例如硫利达嗪，数据未显示)被发现具有有效的毒蕈碱受体拮抗剂特性。重要的是，没有一个拮抗剂活性将氯氮平区别于所有其它试剂。

与这些化合物广泛的拮抗剂活性相反，很少试剂具有激动剂活性。图4A报告了在人M1毒蕈碱乙酰胆碱受体上对此化合物库的有功能激动剂筛选的结果。仅识别出4种化合物：已知的毒蕈碱受体激动剂槟榔碱和卡巴胆碱、莫哌隆和氯氮平的主要代谢物N-去甲基氯氮平(NDMC)(Gauch and Michaelis 1971)。莫哌隆仅显示非常低效能的(EC₅₀＞1-微摩尔)相互作用。相反，在此项研究中NDMC显示EC₅₀为100nM，且具有80％的效能(相对于卡巴胆碱)。此结果在第二个功能分析-PI水解中被进一步证实。如图4B所示，在此分析中氯氮平显示了有限的激动剂效能，无法准确地确定效能，而NDMC显示出高效能(93+/-22nM，n＝3)和相对于卡巴胆碱更高的激动剂效能(56+/-8％，n＝3)。事实上，在对比卡巴胆碱进行竞争性拮抗剂活性分析时，氯氮平表现为拮抗剂，而NDMC仅部分逆转卡巴胆碱诱导的PI水解(图4C)，与在R-SAT中当NDMC在M1受体上作为竞争性拮抗剂进行分析时所观察到的缺乏拮抗剂反应相一致(表13)。最后，阿托品和氯氮平均阻断NDMC的激动剂活性(图4D)。这些结果证实NDMC是有力的、具备有效性的M1受体激动剂，它区别于氯氮平的M1受体拮抗剂特性。

在多项体外功能分析中已经证明了NDMC在人M1受体上的激动剂活性，于是我们使用R-SAT对卡巴胆碱、氯氮平、NDMC、奥氮平、奥氮平主要代谢物N-去甲基奥氮平和毒蕈碱激动剂呫诺美林(Shannon et al1994)在所有5种人毒蕈碱受体亚型上进行了特征描记(表14)。

表14抗精神病药物的毒蕈碱乙酰胆碱受体激动剂活性

使用R-SAT按此前的描述(Spalding et al 2002)确定氯氮平、N-去甲基氯氮平、奥氮平、N-去甲基奥氮平、呫诺美林和卡巴胆碱的毒蕈碱受体(M1-M5)激动剂活性。对3次或更多次重复测定报告平均有效性(相对于卡巴胆碱的百分率)和效能(pEC₅₀)+/-标准误差。无反应表示在高达10-微摩尔的浓度缺乏激动剂活性。

化合物	M1有效性 pEC50	M2有效性   pEC50	M3有效性  pEC50
				氯氮平	24±3   7.63±0.37	65±8    6.23±0.14	无反应
N-去甲基氯氮平	72±5   7.26±0.07	106±19  6.47±0.21	27±4   6.49±0.18
				奥氮平	无反应	无反应	无反应
N-去甲基奥氮平	无反应	无反应	无反应
				呫诺美林	121±6  7.20±0.08	106±9   6.30±0.23	66±6   6.63±0.21
卡巴胆碱	101±2  6.11±0.03	101±5   6.23±0.09	102±3  6.53±0.04

化合物	M4有效性  pEC50	M5有效性  pEC50
			氯氮平	57±5   7.35±0.10	无反应
N-去甲基氯氮平	87±8   6.87±0.17	48±6   7.63±0.25
			奥氮平	无反应	无反应
N-去甲基奥氮平	无反应	无反应
			呫诺美林	116±9  7.46±0.14	86±12  6.59±0.22
卡巴胆碱	96±3   6.53±0.05	105±3  6.76±0.12

发现氯氮平在M1受体上是非常弱的部分激动剂，在M2和M4受体上是更有效的激动剂，并且在M3和M5受体上缺乏激动剂活性。NDMC对所有5种人毒蕈碱受体的也均显示高效能相互作用，但是与氯氮平相比在Ml、M4和M5受体上具有增加的激动剂有效性(表14)。相反，在结构上均与氯氮平和NDMC相关的奥氮平和N-去甲基奥氮平在人毒蕈碱受体上缺乏激动剂活性。有趣的是，呫诺美林显示了与在NDMC中观察到的相似的毒蕈碱受体特征，值得注意的例外是其在M3受体上具有更高的激动剂有效性。氯氮平、NDMC和呫诺美林在人毒蕈碱受体亚型上的激动剂活性在所有已经测试过的神经精神病药物中(图4，以及表13和14)是独特的。

本发明的发明人公开了使用氯氮平的药物治疗期间可以在体内实现尤其是NDMC的毒蕈碱激动作用和M1受体激动作用。测试氯氮平和NDMC在小鼠海马的CA1区中增加促细胞分裂原-激活的蛋白激酶(MAP激酶)的磷酸化的能力，已经证明MAP激酶的磷酸化是反映M1受体激活的反应(Berkeley et al 2001)。如图5所示，皮下给予单独的赋形剂(图5A)、氯氮平(图5B)或东莨菪碱(数据未显示)不能刺激海马MAP激酶的磷酸化。相反，NDMC以剂量依赖方式诱导海马神经元中MAP激酶的磷酸化(图5C、5D和E)，该作用被东茛菪碱预处理所阻断(图5F)。在NDMC剂量为30mg/kg或更高时，量化所述作用显示了统计学显著的M1受体的激活(图6)。在这些试验条件下氯氮平未能表现为激动剂，这可能反映了或者在对小鼠紧急给药后没有代谢成足量的NDMC，或者是如体外研究所证明的在M1受体上的直接拮抗剂作用。这些数据证实在体内NDMC穿过血脑屏障并且激活海马M1受体。

早已认识到中枢毒蕈碱受体的拮抗作用可以减弱由抗精神病药诱导的EPS(Miller and Hiley 1974)。抗精神病药的抗毒蕈碱特性的最初研究确定了在啮齿类动物大脑中氯氮平对这些受体的高效能，并且阐明了毒蕈碱受体拮抗作用和诱导EPS倾向之间的负相关性(Snyder et al 1974)。在阐明了5种毒蕈碱乙酰胆碱受体亚型后(Bonner et al 1987)，氯氮平被描述为有力的竞争性拮抗剂(Bolden et al 1991)。随后在不同细胞株中的功能研究证明了氯氮平对M2和M4受体具有显著的激动剂活性，以及对M1受体具有较低的激动剂有效性(Zorn et al 1994 and Olianas et al 1999)，与本文中报告的结果一致。在人体内，氯氮平有两个主要的代谢物，NDMC和氯氮平-N-氧化物(Gauch and Michaelis 1971)。在剂量稳态后，NDMC代表全部可检测部分的大部分，浓度范围是所观察到的氯氮平浓度的20-150％，平均值为60-80％(Bondesson and Lindstrom 1988 and Perry et al1991)。目前的数据、以及先前报道记载的D₁、D₂和5-HT_2c受体竞争性拮抗剂活性(Kuoppamaki et al 1993)和近期报道的M1受体激动剂活性(Sur et al 2003)支持NDMC是活性代谢物。相反，另一个主要的氯氮平代谢物-氯氮平-N-氧化物对人单胺能受体仅显示出非常低的效能(pKI’s＜6.0)的功能活性(数据未显示)。而NDMC的不同程度的脑渗透已经在啮齿类动物中有报道(Baldessarini et al 1993 and Weigmann et al1999)，目前的这些结果：观察到的NDMC全身性给药在啮齿动物脑中激活cFOS表达(Young et al 1998)，以及肠道外给予氯氮平后在人脑脊液中检测到NDMC(Nordin et al 1995)，证明了NDMC渗透入脑并且在具有中枢活性。

本发明的发明人已经发现氯氮平通过其主要代谢物NDMC在体内发挥直接作用于毒蕈碱受体的激动剂的功能。在用氯氮平进行药物治疗期间，NDMC的激动剂作用被母体化合物的拮抗剂作用减弱。因此，高NDMC水平，并且特别是高NDMC/氯氮平比率，增加了对毒蕈碱受体的激动剂有效性，如同通过总体作用(mass action)研究和通过激动剂/拮抗剂混合研究所预测的(Brauner-Osbome et al 1996)。临床数据支持这种观念。氯氮平治疗不仅通常没有传统的抗胆碱能副作用如口干，视力模糊，和对典型的毒蕈碱拮抗剂来说常见的尿潴留，其具有经常产生流涎的独特能力(Baldessarini and Frankenburg 1991)，流涎产生能够被毒蕈碱拮抗剂哌仑西平所阻断(Fritze and Elliger 1995)。因此，NDMC的毒蕈碱受体激动剂活性有可能介导这种外周作用，而对此负责的毒蕈碱受体亚型仍旧是未知的，暗示了除M3之外的受体亚型(Bymaster et al 2003)。

本发明报告的NDMC的毒蕈碱激动剂特性构成了用氯氮平治疗的一些独特的中枢作用的基础。多个系列的证据支持增进中枢胆碱能神经传递的有助于认知的作用，包括乙酰胆碱酯酶抑制剂和直接作用的毒蕈碱受体激动剂(Davis et al 1993)的临床作用。在顽固性精神分裂症治疗中，高剂量氯氮平治疗的可能的实际作用是升高NDMC的脑水平以达到中枢毒蕈碱受体激动剂活性，尤其使M1受体兴奋，而并非是补充氯氮平和NDMC所具有的、额外的较低效能的受体相互作用(表13)。因此，NDMC/氯氮平的比率与绝对的氯氮平水平相比是对氯氮平的治疗反应的更好的预测，尤其是对于认知力。

再次分析了氯氮平和NDMC血浆水平以及临床反应的数据，该数据作为包括59名神经安定剂耐受的患者(Hasegawa et al 1993)和33名神经安定剂敏感的精神分裂症患者(Lee et al 1999)的两个临床试验的部分而被前瞻性地收集。患者按照标准指标被分类为有或无治疗耐受性(Kane etal 1988)，并且由经过训练但不知道血浆药物水平的评估人来得出临床评级和神经心理测验评分。表15A报告了在6周和6个月的治疗后，氯氮平的平均每日剂量、以及氯氮平和NDMC的血清水平、以及NDMC/氯氮平比率。

表15在精神分裂症中血清N-去甲基氯氮平水平和临床反应

对于一组92名用氯氮平治疗的精神分裂症患者，报告了氯氮平和N-去甲基氯氮平(NDMC)的血清水平和临床结果之间相关性的统计分析。表15A报告了所有治疗耐受(TR)个体、反应者、不反应者、以及所有个体在6周和6个月的氯氮平剂量、氯氮平水平、NDMC水平、和NDMC/氯氮平的比率。P*报告了反应者和不反应者之间的统计学的显著差异。表15B报告了所关注的用于预测NDMC对氯氮平治疗反应所作贡献的主要关系，包括生活质量、阴性症状、和认知力，通过多元线形回归进行分析。R^2**指应用的模型。所使用的缩略语包括：NS-不显著；BPRS-简明精神病评定量表，SANS-阴性症状评定量表，SAPS-阳性症状评定量表，WISC-威斯康辛卡分类测验(Wisconsin Card Sorting Test)。

表15A

药物测量	所有TR个体(59)	反应者(26)	不反应者(25)	P*
					剂量(mg/day)NDMC水平(ng/ml)氯氮平水平(ng/ml)NDMC/氯氮平	468+/-190260+/-203393+/-3010.75+/-0.36	485+/-205308+/-243453+/-3280.70+/-0.22	433+/-178171+/-123268+/-2070.81+/-0.48	NS0.010.02NS
药物测量	所有个体在6周时(86)		所有个体在6个月时(92)
					剂量(mg/day)NDMC水平(ng/ml)氯氮平水平(ng/ml)NDMC/氯氮平	369+/-169194+/-136287+/-1900.83+/-1.08		417+/-197235+/-190365+/-2850.71+/-0.30

表15B

临床测量	Beta	F	P	r2**	df
						因变量：6周BPRS-退缩/迟缓SANS注意力损伤SAPS总体妄想生活质量量表：总分生活质量量表：目的和活动生活质量量表：仪器的作用WISC-R迷宫因变量：6个月Petersen’s辅音三字铭测验WISC-形成分类	-0.52-0.28-1.0017.502.9113.802.277.451.35	3.735.653.875.207.1014.844.106.753.67	0.060.020.050.030.010.010.050.010.06	0.320.260.600.500.430.540.750.470.47	3.733.653.552.402.402.394.334.473.48

在两个时间点均进行了分析，因为用氯氮平改善精神病理学和认知力可能需要6个月或更长时间(Hagger et al 1993)。92名患者中的13名患者(14.1％)具有NDMC/氯氮平比率＞/＝1。在这些13名患者中，最高的比率是1.77而中位数是1.05。氯氮平和NDMC水平之间的Spearman等级相关在6周和6个月分别是0.82和0.89(P＝0.0001)。6周时NDMC/氯氮平比率和6个月时NDMC/氯氮平比率之间的相关性是0.92(P＝0.0001)，表明在这些个体中NDMC/氯氮平比率的显著稳定。重要的是，在神经安定剂耐受的或神经安定剂反应的患者中，在任一时间点上剂量和NDMC/氯氮平比率都不显著相关(rho＜0.10)。

使用逐步多元回归从每一项测量中确定结果的最佳预测项，所述测量包括依赖测量、剂量、年龄、和性别的基线水平，因为已经显示所有这些因素都显著地预示对氯氮平的反应(表15B)。

在所有经测试的模型中，因变测量的基线水平预测了该模型中最大部分的变化。NDMC/氯氮平的比率是反应的第二经常的预测项；在24个模型的8个中(8/24，33.3％)，该比率显著地预测了反应，全部在期望的方向中：比率越高，结果越好。这个结果与单独的氯氮平水平、单独的NDMC水平、或它们之和所缺乏的预测力形成对照。例外是越高的单一NDMC水平预测了在生活质量分级中两个亚级中越大的改善(Heinrichset al 1984)(数据未显示)。如表15B中所示，更高的NDMC/氯氮平比率预测了在认知力多项测量中的改善以及阴性症状评价量表-注意力亚量表的改善，已有提示比起与阴性症状，该注意力亚量表与认知力更相关。该比率还预测了在生命质量总评分方面的改善，包括仪器作用功能因子和阴性症状，已经显示仪器作用功能因子依赖于认知状态(Green 1996)，而阴性症状与认知力相关。该比率也预测了用氯氮平治疗对妄想方面，但不是幻觉，的改善。剂量对于表15B中任何模型的预测都没有作用。剂量与氯氮平和NDMC的血浆水平显著相关(P＝0.01-0.001)但是，如上所述，与NDMC/氯氮平比率不相关。这提供了进一步的证据：氯氮平和NDMC的绝对水平尽管在识别反应者和不反应者方面(Fabrazzo et al 2002)是重要的，当因变测量的基线水平被包括在模型中时，该绝对水平并不像它们的比率那样重要。虽然在更大组中的更多分析是必要的，本分析以及近来的报道(Frazier et al 2003 and Mauri et al 2003)都表明NDMC/氯氮平比率与单独的氯氮平水平相比是对氯氮平临床反应的更好的预测，并且支持NDMC是氯氮平作用的关键介导剂的假设。

NDMC的毒蕈碱受体激动剂特性也对氯氮平治疗阳性症状的有效性有贡献。不仅如以上提到的高NDMC/氯氮平比率预测了对妄想的反应，更多的支持还来自于毒蕈碱受体激动剂和多巴胺D₂受体拮抗剂的中枢作用之间具有几个相似方面的观察(Pfeiffer and Jenney 1957 and Mirza et al2003)。例如，用具有将五种毒蕈碱受体亚型中的每一种靶向删除的小鼠进行的行为药理学试验已经显示M1受体在DA-介导的行为中起中心作用(Gerber et al 2001)。此外，呫诺美林(其显示了对M1和M4受体的一些选择性)抑制安非他明诱导的运动(Shannon et al 2000)。临床上发现呫诺美林在阿耳茨海默氏(Alzheimer’s)病患者中减少了幻觉症和攻击性(Bodick et al 1997)，并且在一项最近的小型精神分裂症2期研究中已经表明呫诺美林对阳性和阴性症状均显示出活性(Schekhar et al，未发表的数据)。

众所周知中枢多巴胺能和毒蕈碱胆碱能系统在功能上是相关的。(Miller and Hiley 1974)。氯氮平的毒蕈碱拮抗剂特性被认为对其较低的引起EPS的倾向有作用，而氯氮平的抗EPS作用要强于那些通过辅助使用抗胆碱能剂如苯海索(trihexyphenidyl)所获得的作用，并且一些产生EPS的抗精神病药，例如硫利达嗪，也具备有效的毒蕈碱受体拮抗剂特性。这些观察结果表明尽管中枢毒蕈碱受体的拮抗作用能产生抗-EPS作用，D2受体阻断的运动效果的胆碱能调节比以前所认识到的更为复杂。本数据显示了在关键性的基底神经核结构内表达的特定毒蕈碱受体亚型的激动作用，而不是拮抗作用(Weiner et al 1990)，是减少这些不利运动作用的更有效的机制。此外，根据本数据由NDMC的中枢毒蕈碱受体激动剂特性所产生的有益于认知的益处，应当重新评价对辅助性抗胆碱能类药物的广泛使用。

总之，治疗上有用的神经精神药物的功能表征已经显示了NDMC的有力的、有效的毒蕈碱受体激动剂活性。已发现这种活性作为神经精神剂中的一类是独特的。已经证明NDMC在体内能穿透血脑屏障并且起到M1受体激动剂的作用。考虑到NDMC对改善接受氯氮平治疗的患者的认知力和生活质量的贡献，其显示NDMC介导治疗反应的临床相关方面，该治疗反应使氯氮平区别于其他用于治疗精神分裂症的药物。这些发现显示毒蕈碱受体激动作用介导了氯氮平的独特临床特性，并且M1毒蕈碱受体激动剂(Spalding et al 2002)，包括NDMC本身，可能是有效的非典型抗精神病剂。

实施例14：N-去甲基氯氮平/氯氮平混合物的净激动作用

利用R-SAT测试按以上描述来评价氯氮平和N-去甲基氯氮平的混合物的作用。将150nM的N-去甲基氯氮平和不同浓度的氯氮平一起提供。图7描述了作为氯氮平浓度的函数的R-SAT分析结果。如图7中虚线所示，在氯氮平浓度为约100nM及以下时观测到了净激动活性。因此，NDMC对氯氮平的比率为约1.5或者更大时提供净激动作用。

用PI水解测试按以上描述证实了R-SAT分析结果。将150nM的N-去甲基氯氮平和不同浓度的氯氮平一起提供。图8描述了作为氯氮平浓度的函数的分析结果。图8中的虚线表明观察到净激动作用的氯氮平的最大浓度。与R-SAT分析结果相似，在氯氮平浓度为约100nM及以下时观察到了净激动活性，因此证实NDMC对氯氮平的比率为约1.5及更大时提供净激动作用。

实施例15：对精神分裂症患者给予单次剂量的NDMC

在连续的两组患者中进行了单一中心的、住院患者的、随机的、双盲的、安慰剂对照的、单次剂量的研究。对各有6名患者的两个不同组进行了登记。第一组中的每一名患者以随机顺序依次接受单次剂量的安慰剂、25mg NDMC和50mg NDMC。第二组中的每一名患者以随机顺序依次接受单次剂量的安慰剂、75mg NDMC和100mg NDMC。NDMC和安慰剂以粉末的形式装在胶囊中口服给药。该项研究选择了年龄20到50岁的男性或女性患者，他们具有精神分裂症史或分裂情感障碍史，但在其它方面健康状况良好。这些患者没有经历严重精神病的急性加重，其定义为阳性和阴性症状分级(PANSS)的评分大于75。

在研究开始前为期4-7天的导入期中，对患者撤销了所有中枢活性的药物，所述研究从研究第-1天开始。在研究第1天，患者按照NDMC：安慰剂为2∶1的方案随机分配。在研究第1天上午，患者口服接受研究药物或安慰剂，并且采集系列血液样本直到给药后24小时。通过连续的导程II ECG监测在给药后对患者进行8小时的监测。临床评价、临床分级量表、和频繁的安全评价包括生命迹象、心电图、临床实验室检测、和不利事件的记录贯穿整个研究日周期性地进行。研究第2天和第3天没有给予研究药物。在研究第4天上午，患者再次口服接受研究药物或安慰剂，并且采集系列血液样本直到给药后24小时。通过连续的导程IIECG监测在给药后对患者进行8小时的监测。临床评价、临床分级标准、和频繁的安全评价包括生命迹象、心电图、临床实验室检测、和不利事件的记录贯穿整个研究第4天周期性地进行。研究第5天和第6天没有给予研究药物。在研究第8天上午，患者口服接受研究药物或安慰剂，并且采集系列血液样本直到给药后24小时。通过连续的导程II ECG监测在给药后对患者进行8小时的监测。临床评价、临床分级标准、和频繁的安全评价包括生命迹象、心电图、临床实验室检测、和不利事件的记录贯穿整个研究第8天周期性地进行。在研究第8天后3-5天进行了研究结束的最后评价，并且进行了临床评价、给予临床分级量表和安全性评价。

在研究结束的评价之后和组2的随机分组之前，对从组1得到的安全性变量和药代动力学数据进行了期中分析。通过PI来复查安全性变量以便确定组2的给药剂量。如果在组1期间的NDMC给药被认为是安全的，对第二个患者组进行筛选、随机分配和登记。如果组2的NDMC剂量高于组1的给药剂量，那么，在导入期内对每名个体给予25mg NDMC的预适应剂量。此试验剂量被用来识别任何可能对高剂量NDMC特别敏感的患者，并且在第-1天前至少3天给药。除了NDMC的剂量外，组2的研究相关程序与组1完全相同。

药代动力学分析

分析血浆样本的NDMC浓度。所计算的药代动力学参数包括C_max(最大血浆浓度)，t_max(达到最大血浆浓度的时间)，AUC_0-z(从时间0到最后可以计量的时间点的血浆浓度时间曲线下的面积，通过线性对数梯形累计来计算)，AUC_0-∞(从时间0到无穷大血浆浓度时间曲线下的面积，通过线性对数梯形累计并外推到无穷大来计算，外推到无穷大的计算是通过加入最后可以计量的血浆浓度除以消除速率常数λ_Z)，λ_Z(消除速率常数，通过对数线性的血浆浓度-时间曲线的末端点的线性回归来确定)，t_1/2(末端半衰期，由1n(2)/λ_Z确定)，以及CL_po(表观口服清除率，以剂量/AUC(0-∞来计算)。

耐受性

通过测量锥体束外(EPS)运动作用确定NDMC的耐受性，该锥体束外(EPS)运动作用的测量使用Simpson和Angus量表(SAS)以及Barnes静坐不能量表(BAS)。在基线值(研究第-1天)，在研究第1天、第4天和第8天的给药3-5小时后，以及在研究结束的评价时给予这些量表。

抗精神病的有效性

使用PANSS和临床整体印象量表-精神分裂症(CGI-S)测量来测量抗精神病的有效性。在基线值(研究第-1天)，在研究第1天、第4天和第8天，以及在研究结束的评价时给予这些量表。

安全性

除了在筛选和研究后程序中，通过测量生命征象评价安全性，所述生命征象包括3种体位的血压和脉搏数(5分钟仰卧，1分钟坐姿，3分钟站姿)、呼吸速率和口腔温度。

记录12-导程心电图和测量标准的心电图参数，包括QRS、PR、QT和QTc间隔。此外，在第1，4，和8天的每次NDMC或安慰剂给药后的第一个8小时进行连续的导程II ECG监测。

通过临床负责医生在门诊进行神经学筛选。该神经学筛选包括末端肌肉紧张度的定性评价、震颤的存在、肌束震颤(fasiculations)和眼球震颤、以及各种小脑协调测试(手指鼻子测试、轮替动作障碍、踵-胫测试和步态)。

在研究第1天、第4天和第8天禁食至少8小时后，以及在研究结束的评价时，进行临床实验室检测，并且包括以下项目：

红细胞：RBC计数、红细胞压积、血红蛋白、红细胞平均血红蛋白量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、红平均细胞体积(MCV)、RDW和网织红细胞计数。

白细胞：WBC计数和分类(嗜碱性白细胞、嗜酸性白细胞、淋巴细胞、单核细胞、中性白细胞)，以绝对值报告。

凝血：血小板计数、以INR表示的PT和aPTT。

肝脏：碱性磷酸酶、ALT(血清谷-丙转氨酶[SGPT])、AST(血清谷-草转氨酶[SGOT])、胆红素(总的，直接的，间接的)、γ-谷氨酰基转移酶(GGTP)、肌酸磷酸激酶(CPK)和LDH。

肾脏：血液尿素氮(BUN)、肌酐和尿酸。

电解质：二氧化碳、氯化物、镁、钾和钠。

综合：白蛋白、钙、葡萄糖(禁食)磷酸和蛋白质(总的)。

内分泌：催乳素。

脂质：胆固醇(总的)、HDL胆固醇、LDL胆固醇和甘油三酯。

宏观尿检验：pH、比重、葡萄糖、酮、白血球酯酶、亚硝酸盐、潜血和蛋白质。

微观尿检验：RBC/高倍视野、WBC/高倍视野、细菌、管型(castes)、上皮细胞、黏液丝和晶体。

实施例16：对精神分裂症患者给予多次剂量的NDMC

在连续的两组患者中进行了单一中心的、住院患者的、随机的、双盲的、安慰剂对照的、多次剂量的研究。十二名患者在两个不同的六名患者的组中进行了登记。在五天中每名患者每天接受或者安慰剂或者NDMC。NDMC和安慰剂以粉末的形式装在胶囊中口服给药。该项研究选择了年龄20到50岁的男性或女性患者，具有精神分裂症史或分裂情感障碍史，在其他方面健康状况良好。这些患者没有经历严重精神病的急性加重，其定义为阳性和阴性症状量表(PANSS)的评分大于75。

在研究开始前为期4-7天的导入期中，对患者撤销了所有中枢活性的药物，所述研究从研究第-1天开始。如果按照实施例14的单次剂量研究所确定的NDMC的安全性特征分析表明剂量逐渐增加是准许的，并且如果NDMC的药代动力学特性证明t_1/2少于8小时，那么在所述研究中登记的患者在研究第-1天之前接受预适应剂量的NDMC。如果指明，个体在研究的导入部分期间接受计划剂量25％的单次剂量的NDMC，在随后一天接受第二剂量，其为计划剂量的50％。如果这些剂量被证明是安全的，那么在研究第-1天将个体随机分到NDMC或安慰剂。根据在实施例14的单次剂量安全性研究期间观察到的安全性和药代动力学，确定NDMC的剂量和给药频率(每日1次(QD)或每日2次(BID))。

在研究第1天，患者口服接受研究药物或安慰剂，并且采集系列血液样本直至给药后24小时。通过连续的导程II ECG监测对患者进行给药后8小时的监测。临床评价、临床分级量表、和频繁的安全评价包括生命迹象、心电图、临床实验室检测和不利事件的记录贯穿整个研究第1天周期性地进行。

在接下来的四天中患者每天接受研究药物或安慰剂。在研究第2天，第3天，和第4天，取得用于药代动力学分析的给药前血清样本，并且通过连续的导程II ECG监测对患者们进行给药后8小时的监测。临床评价、临床分级量表、和频繁的安全评价包括生命迹象、心电图、临床实验室检测和不利事件的记录贯穿整个研究第2-4天周期性地进行。

在研究第5天，获得给药前血清样本连同直至研究药物或安慰剂给药后24小时所收集的系列血样用于药代动力学分析，并且通过连续的导程II ECG监测对患者们进行给药后8小时的监测。临床评价、临床分级量表、和频繁的安全评价包括生命迹象、心电图、临床实验室检测和不利事件的记录贯穿整个研究第5天周期性地进行。

在研究第5天停止给药，5-7天后进行最后的研究结束评价。在这个临床评价期间进行安全性评估，包括生命征象、心电图、临床实验室检测、NDMC的血清检测和不利事件记录。在NDMC的给药中止后对所有患者作为住院患者进行临床跟踪，只要表明有必要。

在研究结束的评价之后和组2的随机分组之前，对来自从组1的安全性变量和药代动力学数据进行了期中分析。通过PI来复查安全变量以便确定组2的给药剂量。如果在组1期间的NDMC给药被认为是安全的，对第二个患者组进行筛选、随机分配、和登记。除了NDMC的剂量和/或给药频率外，对组2的与研究相关的程序与组1完全相同。

药代动力学分析

分析血浆样本的NDMC浓度。在第1天单剂给药之后所计算的药代动力学参数包括C_max(最大血浆浓度)，t_max(达到最大血浆浓度的时间)，AUC_0-z(从时间0到最后可以计量的时间点血浆浓度时间曲线下的面积，通过线性对数梯形累计来计算)，AUC_0-∞(从时间0到无穷大血浆浓度时间曲线下的面积，通过线性对数梯形累计并外推到无穷大来计算，外推到无穷大的计算是通过加入最后可以计量的血浆浓度除以消除速率常数λ_Z)，λ_Z(消除速率常数，通过对数线性的血浆浓度-时间曲线的末端点的线性回归来确定)，t_1/2(末端半衰期，由1n(2)/λ_Z确定)，以及CL_po(表观经口清除率，以剂量/AUC(0-∞来计算)。

在第5天最后一剂之后，所计算的药代动力学参数包括C_max，ss(最大稳态血浆浓度)，C_min，ss(最小稳态血浆浓度)，C_avg，ss(平均稳态血浆浓度，以AUC(0-τ)_ss除以给药间隔时间τ来计算)，t_max，ss(达到最大稳态血浆浓度的时间)，t_min，ss(达到最小稳态血浆浓度的时间)，AUC_0-z(从时间0到最后可以计量的时间点血浆浓度时间曲线下的面积，通过线性对数梯形累计来计算)，AUC_0-τss(从时间0到稳态给药间隔结束血浆浓度时间曲线下的面积，通过线性-对数梯形累计来计算)，λ_Z，ss(稳态消除速率常数，通过对数-线性的血浆浓度-时间曲线的末端点线性回归来确定)，t_1/2，ss(稳态末端半衰期，由1n(2)/λ_Z，ss确定)，以及CL_po，ss(表观口服清除率，由剂量/AUC(0-τ)_ss来计算)。

耐受性

NDMC的耐受性是用Simpson和Angus量表(SAS)和Barnes静坐不能量表(BAS)通过测量锥体束外的(EPS)运动作用来确定。在基线值(研究第-1天)、在研究第1-5天的给药后6小时、以及在研究结束的评价时给予这些量表。

抗精神病的有效性

用PANSS和临床整体印象量表-精神分裂症(CGI-S)测量来测量抗精神病的有效性。在基线值(研究第-1天)、在研究第1天、第5天、以及在研究结束的评价时给予这些量表。

安全性

通过测量生命征象评价安全性，生命征象包括3个体位的血压和脉搏数(5分钟仰卧，1分钟坐姿，3分钟站姿)、呼吸速率和口腔温度，除了在筛选和研究后程序中。

记录12-导程心电图和测量标准的心电图参数，包括QRS、PR、QT和QTc间隔。此外，在第1-5天的每次NDMC或安慰剂给药后的第一个8小时进行连续的导程II ECG监测。

通过临床负责的医生在门诊进行神经学筛选。这种神经学筛选包括末端肌肉紧张度的定性评价、震颤的存在、肌束震颤(fasiculations)、和眼球震颤、以及各种小脑协调的测试(手指鼻子测试、轮替动作障碍、踵-胫测试和步态)。

在至少8小时的禁食之后进行临床实验室检测，并且包括以下项目：

红细胞：RBC计数，红细胞压积，血红蛋白，红细胞平均血红蛋白量(MCH)，红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)，平均细胞容积(MCV)，RDW，和网织红细胞计数。

白细胞：WBC计数和分类(嗜碱性白细胞，嗜酸性白细胞，淋巴细胞，单核细胞，中性白细胞)，以绝对值报告。

凝血：血小板计数、以INR表示的PT和aPTT。

肝脏：碱性磷酸酶，ALT(血清谷-丙转氨酶[SGPT])，AST(血清谷-草转氨酶[SGOT])，胆红素(总的，直接的，间接的)，γ-谷氨酰基转移酶(GGTP)，肌酸磷酸激酶(CPK)和LDH。

肾脏：血液尿素氮(BUN)，肌酐，和尿酸。

电解质：二氧化碳，氯化物，镁，钾，和钠。

综合：白蛋白，钙，葡萄糖(禁食)磷酸，和蛋白质(总的)。

内分泌：催乳素。

脂质：胆固醇(总的)，HDL胆固醇，LDL胆固醇，和甘油三酯。

宏观尿检验：pH，比重，葡萄糖，酮，白血球酯酶，亚硝酸盐，潜血，和蛋白质。

微观尿检验：RBC/高倍视野，WBC/高倍视野，细菌，管型(castes)，上皮细胞，黏液丝和晶体。

参考文献

通过引用并入以下每一参考文献的全部内容，包括任何附图。

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Claims (47)

1.N-去甲基氯氮平在制备治疗认知障碍的基本上不含氯氮平的药物中的用途。

2.N-去甲基氯氮平在制备治疗精神病的基本上不含氯氮平的药物中的用途。

3.N-去甲基氯氮平在制备治疗情感障碍的基本上不含氯氮平的药物中的用途。

4.N-去甲基氯氮平在制备治疗痴呆的基本上不含氯氮平的药物中的用途。

5.N-去甲基氯氮平在制备治疗神经性疼痛的基本上不含氯氮平的药物中的用途。

6.N-去甲基氯氮平在制备治疗青光眼的基本上不含氯氮平的药物中的用途。

7.N-去甲基氯氮平在制备治疗疾病状态的基本上不含氯氮平的药物中的用途，其中在所述疾病状态中提高M1毒蕈碱受体的活性水平是有益的。

8.治疗认知障碍的方法，其包括对显示出一种或多种认知障碍症状的个体给予治疗有效量的基本上不含氯氮平的N-去甲基氯氮平。

9.如权利要求8所述的方法，其还包括鉴定需要改善认知的个体。

10.如权利要求8所述的方法，其还包括使所述个体接触其它治疗剂。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述其它治疗剂选自单胺重摄取抑制剂、选择性5-羟色胺重摄取抑制剂、去甲肾上腺素重摄取抑制剂、5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取双重抑制剂、多巴胺激动剂、抗精神病剂、5-羟色胺反向激动剂、5-羟色胺拮抗剂、5-羟色胺2反向激动剂、5-羟色胺2拮抗剂、5-羟色胺1A激动剂、抗癫痫剂和作用于外周的毒蕈碱拮抗剂。

12.如权利要求8所述的方法，其中所述个体患有选自幻觉、妄想、思维紊乱、行为障碍、攻击、自杀、躁狂、快感缺失、情感平淡、情感障碍、抑郁、躁狂、痴呆、神经性疼痛和青光眼的疾病状态或者两种或更多种任何上述的疾病状态。

13.改善一种或多种精神病症状的方法，其包括对显示出一种或多种精神病症状的个体给予治疗有效量的基本上不含氯氮平的N-去甲基氯氮平。

14.如权利要求13所述的方法，其还包括鉴定显示出一种或多种精神病症状的个体。

15.如权利要求13所述的方法，其中所述精神病是由于将个体暴露于一种或多种药物而诱导的。

16.改善一种或多种情感障碍症状的方法，其包括对显示出一种或多种情感障碍症状的个体给予治疗有效量的基本上不含氯氮平的N-去甲基氯氮平。

17.如权利要求16所述的方法，其还包括鉴定显示出一种或多种情感障碍症状的个体。

18.如权利要求16所述的方法，其中所述情感障碍是抑郁症。

19.如权利要求16所述的方法，其中所述情感障碍是躁狂症。

20.改善一种或多种痴呆症状的方法，其包括对显示出一种或多种痴呆症状的个体给予治疗有效量的基本上不含氯氮平的N-去甲基氯氮平。

21.如权利要求20所述的方法，其还包括鉴定显示出一种或多种痴呆症状的个体。

22.如权利要求20所述的方法，其中所述痴呆包括认知障碍。

23.如权利要求20所述的方法，其中所述痴呆包括行为障碍。

24.改善一种或多种神经性疼痛症状的方法，其包括对显示出一种或多种神经性疼痛症状的个体给予治疗有效量的基本上不含氯氮平的N-去甲基氯氮平。

25.如权利要求24所述的方法，其还包括鉴定显示出一种或多种神经性疼痛症状的个体。

26.改善一种或多种青光眼症状的方法，其包括对显示出一种或多种青光眼症状的个体给予治疗有效量的基本上不含氯氮平的N-去甲基氯氮平。

27.如权利要求26所述的方法，其还包括鉴定显示出一种或多种青光眼症状的个体。

28.如权利要求8、13、16、20、24或26所述的方法，其中所述个体是人。

29.如权利要求8、13、16、20、24或26所述的方法，其中以单次日剂量给予或者以分次剂量给予所述的N-去甲基氯氮平。

30.如权利要求8、13、16、20、24或26所述的方法，其中每日给予2、3或4次所述的N-去甲基氯氮平。

31.改善一种或多种精神病症状的方法，其包括对个体将N-去甲基氯氮平和另一抗精神病剂联合给药，其中至少一部分N-去甲基氯氮平是通过向所述个体直接引入N-去甲基氯氮平而给予的。

32.如权利要求31所述的方法，其中向所述个体直接引入N-去甲基氯氮平包括口服给予N-去甲基氯氮平。

33.如权利要求31所述的方法，其中向所述个体直接引入N-去甲基氯氮平包括静脉内注射N-去甲基氯氮平。

34.如权利要求31所述的方法，其中所述的另一抗精神病剂选自吩噻嗪、苯基丁基胡椒二酮碱、脱苯扎平、benzisoxidil和锂盐。

35.如权利要求34所述的方法，其中吩噻嗪选自氯丙嗪(Thorazine)、美索达嗪(Serentil)、丙氯拉嗪(Compazine)和硫利达嗪(Mellaril)。

36.如权利要求34所述的方法，其中苯基丁基胡椒二酮碱选自氟哌啶醇(Haldol)和匹莫齐特(Orap)。

37.如权利要求34所述的方法，其中脱苯扎平选自氯氮平(Clozaril)、洛沙平(Loxitane)、奥氮平(Zyprexa)和喹硫平(Seroquel)。

38.如权利要求34所述的方法，其中benzisoxidil选自利哌酮(Resperidal)和齐拉西酮(Geodon)。

39.如权利要求34所述的方法，其中锂盐是碳酸锂。

40.如权利要求31所述的方法，其中所述抗精神病剂选自阿立哌唑(Abilify)、氯氮平、氯氮平片剂(Clozaril)、丙氯拉嗪(Compazine)、依曲方(Etrafon)、齐拉西酮(Geodon)、氟哌啶醇(Haldol)、氟哌利多(Inapsine)、洛沙平(Loxitane)、硫利达嗪(Mellaril)、吗茚酮(Moban)、替沃噻吨(Navane)、奥氮平(再普乐)、匹莫齐特(Orap)、盐酸氟奋乃静(Permitil)、氟奋乃静(Prolixin)、非那根(Phenergan)、喹硫平(思瑞康)、甲氧氯普胺(Reglan)、维思通、美索达嗪(Serentil)、思瑞康、三氟拉嗪(Stelazine)、氯普噻吨(Taractan)、氯丙嗪(Thorazine)、奋乃静-阿米替林复合物(Triavil)、奋乃静(Trilafon)、再普乐及上述的药物可接受的盐。

41.改善一种或多种精神病症状的方法，其包括对显示出一种或多种精神病症状的个体给予治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含N-去甲基氯氮平和药物可接受的赋形剂或稀释剂，其中所给予的任何氯氮平的量足够低，使得N-去甲基氯氮平和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。

42.改善一种或多种情感障碍症状的方法，其包括对显示出一种或多种情感障碍症状的个体给予治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含N-去甲基氯氮平和药物可接受的赋形剂或稀释剂，其中所给予的任何氯氮平的量足够低，使得N-去甲基氯氮平和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。

43.改善一种或多种痴呆症症状的方法，其包括对显示出一种或多种痴呆症症状的个体给予治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含N-去甲基氯氮平和药物可接受的赋形剂或稀释剂，其中所给予的任何氯氮平的量足够低，使得N-去甲基氯氮平和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。

44.改善一种或多种神经性疼痛症状的方法，其包括对显示出一种或多种神经性疼痛症状的个体给予治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含N-去甲基氯氮平和药物可接受的赋形剂或稀释剂，其中所给予的任何氯氮平的量足够低，使得N-去甲基氯氮平和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。

45.改善一种或多种青光眼症状的方法，其包括对显示出一种或多种青光眼症状的个体给予治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含N-去甲基氯氮平和药物可接受的赋形剂或稀释剂，其中所给予的任何氯氮平的量足够低，使得N-去甲基氯氮平和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。

46.改善一种或多种认知障碍症状的方法，其包括对显示出一种或多种认知障碍症状的个体给予治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含N-去甲基氯氮平和药物可接受的赋形剂或稀释剂，其中所给予的任何氯氮平的量足够低，使得N-去甲基氯氮平和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。

47.改善疾病状态的至少一种症状的方法，在所述疾病状态中提高M1毒蕈碱受体的活性水平是有益的，所述方法包括：

确定个体可以从提高的M1毒蕈碱受体的活性水平中受益；并且

给予一定量的N-去甲基氯氮平，所述的一定量治疗有效地增强所述M1毒蕈碱受体的活性水平并且对所述个体改善所述至少一种症状，其中所给予的任何氯氮平的量足够低，使得N-去甲基氯氮平和氯氮平的组合对毒蕈碱受体产生净激动作用。

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