CN101052421A

CN101052421A - 磷脂酶Cγ调控以及将它用于控制疼痛和伤害性感受的用途

Info

Publication number: CN101052421A
Application number: CN200580015416.XA
Authority: CN
Inventors: 杰佛里A·M·库尔; 伊薇思·德科宁克
Original assignee: Universite Laval
Current assignee: Universite Laval
Priority date: 2004-05-14
Filing date: 2005-05-13
Publication date: 2007-10-10

Abstract

本发明提供了通过调节，例如，抑制对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达预防和治疗疼痛的方法。本发明还涉及鉴定能够调节PLC_γ的活性和/或表达，或能够调节结合配偶体与PLC_γ的结合的制剂的方法，以及将其用于预防和/或治疗疼痛的用途。另一方面，本发明提供了用于诊断或预测疼痛的方法，包括确定相对相应的对照是否存在PLC_γ的活性和/或表达的调控。

Description

磷脂酶Cγ调控以及将它用于控制疼痛和伤害性感受的用途

技术领域

本发明涉及对象体内磷脂酶C_γ(PLC_γ)的活性、表达和/或功能的调控以及它的用途，如用于治疗和预防疼痛。

背景技术

对用于治疗疼痛的新的和改进方法和制剂的需要是医学领域突出的一直存在的问题。急性疼痛，例如，与损伤或疾病相关的疼痛，可能是严重的，并且对患者的恢复具有关键作用。更引人关注的是慢性疼痛，它影响着较大的人群，不仅导致明显的不舒服，而且可能导致自尊心低下，抑郁，愤怒，并且可能干扰或完全妨碍进行正常的日常活动。

尽管业已在本领域进行了多项研究，与痛觉相关的很多机制和途径仍然了解不够。一直需要提供进行疼痛治疗的治疗性干预的新方法。

发明内容

本发明涉及治疗和/或预防患者疼痛的方法。本发明还涉及调节(例如，抑制)对象体内磷脂酶C_γ(PLC_γ)的活性、表达和/或功能的方法。

根据本发明的一个方面，提供了治疗或预防患者疼痛的方法，该方法包括调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达。

根据本发明的另一方面，提供了治疗或预防患者疼痛的方法，该方法包括给所述对象服用能够调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达的制剂。

根据本发明的另一方面，提供了治疗或预防患者疼痛的方法，包括给所述对象服用组合物，包括：能够调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达的制剂；和可以药用的载体。

根据本发明的另一方面，提供了预防和/或治疗对象疼痛的组合物，包括：能够调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达的制剂；和可以药用的载体。

根据本发明的另一方面，提供了包装，包括能够调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达的制剂，以及将它用于治疗或预防疼痛的说明书。

根据本发明的另一方面，提供了包括组合物的包装，包括：能够调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达的制剂；和可以药用的载体，以及将它用于治疗或预防疼痛的说明书。

根据本发明的另一方面，提供了将用于能够调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达的制剂治疗或预防疼痛的用途。

根据本发明的另一方面，提供了将能够调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达的制剂用于制备用于治疗或预防疼痛的药品的用途。

根据本发明的另一方面，提供了用于治疗或预防疼痛的组合物，包括：能够调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达的制剂；和可以药用的载体。

根据本发明的另一方面，提供了鉴定或表征治疗或预防疼痛的制剂的方法，包括在存在测试制剂的条件下确定PLC_γ活性、功能和/或表达。在一种实施方案中，所述方法包括让所述测试制剂与PLC_γ或具有PLC_γ的活性、功能和/或表达的细胞接触；和在存在所述制剂的条件下确定是否存在PLC_γ的活性、功能和/或表达的调控(例如，抑制作用)；其中，所述调控是所述制剂可用于治疗或预防疼痛的指标。

本发明还提供了一种鉴定或表征用于治疗或预防疼痛的化合物的方法，所述方法包括：(a)让测试化合物与包括第一种核酸的细胞接触，所述核酸包括正常情况下与PLC_γ基因结合的转录调控因子，可操作地与第二种核酸连接，第二种核酸包括能够编码报道蛋白的报道基因；和(b)在存在所述测试化合物的条件下测定报道基因表达或报道蛋白活性是否减弱；其中，所述报道基因表达或报道蛋白活性的减弱是所述测试化合物可用于治疗或预防疼痛的指标。

本发明还提供了一种鉴定或表征治疗或预防疼痛的制剂的方法，包括：

让所述制剂和PLC_γ配体与包括PLC_γ的细胞接触；和

在存在所述制剂的条件下，确定是否存在配体与PLC_γ结合的减弱；

其中，所述减弱是所述制剂可用于治疗或预防疼痛的指标。

让所述制剂和PLC_γ配体与PLC_γ接触；和

确定是否存在减弱配体与PLC_γ结合在存在所述制剂的条件下；

其中，所述减弱是所述制剂可用于治疗或预防疼痛的指标。

根据本发明的另一方面，提供了减轻对象伤害性感受的方法，包括调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达。

根据本发明的另一方面，提供了减轻对象伤害性感受的方法，包括给所述对象服用能够调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达的制剂。

根据本发明的另一方面，提供了减轻对象伤害性感受的方法，包括给所述对象服用组合物，包括：能够调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达的制剂；和可以药用的载体。

在一种实施方案中，上述PLC_γ活性、功能和/或表达的调控是PLC_γ活性或表达的抑制。在一种实施方案中，上述能够调节PLC_γ活性、功能和/或表达的制剂是能够抑制PLC_γ活性、功能和/或表达的制剂。

在一种实施方案中，本文所述制剂可以是PLC_γ抑制剂，抗-PLC_γ抗体，反义分子，siRNA，siRNA-样分子，或结合配偶体与PLC_γ的结合的抑制剂。例如，所述PLC_γ抑制剂可以是三环癸烷-9-基-黄原酸盐，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸胆碱，硫酸新霉素，精胺四氢氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，或1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。

在一种实施方案中，所述反义分子是大体上互补于编码PLC_γ的一部分mRNA的核酸。在一种实施方案中，所述反义分子是大体上互补于包括能够编码具有选自SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的核酸的核酸。在其他实施方案中，所述反义分子是大体上互补于包括选自SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：3的核苷酸序列的核酸的核酸。在一种实施方案中，上述部分mRNA包括至少5个连续的碱基。

在一种实施方案中，所述siRNA或siRNA-样分子大体上与编码PLC_γ的mRNA的一部分相同。在一种实施方案中，所述siRNA或siRNA-样分子大体上与相当于能够编码具有选自SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的多肽的DNA序列的一部分mRNA相同。在其他实施方案中，所述siRNA或siRNA-样分子大体上与相当于选自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3的DNA序列的一部分mRNA相同。在一种实施方案中，所述siRNA或siRNA-样分子包括少于大约30个核苷酸，在其他实施方案中，为大约21-23个核苷酸。

在实施方案中，所述疼痛是与神经性疼痛和/或CNS功能失调相关的疼痛。

在其他实施方案中，疼痛可以是神经性疼痛，肉体或内脏疼痛。例如，所述神经性疼痛可能与神经或神经束损伤相关。在另一种实施方案中，疼痛可以是慢性炎性疼痛，与关节炎相关的疼痛，纤维肌痛，后背疼痛，与癌症疼痛，与消化系统疾病相关的疼痛，与克罗恩氏病相关的疼痛，与自身免疫性疾病相关的疼痛，与内分泌病相关的疼痛，与糖尿病神经病变相关的疼痛，幻肢疼痛，自发痛，慢性手术后疼痛，慢性颞下颌疼痛，灼痛，疱疹后神经痛，AIDS-相关的疼痛，I型和II型复杂区域性疼痛综合症，三叉神经痛，慢性后背疼痛，与脊髓损伤相关的疼痛或复发性急性痛。

附图说明

图1：用三环癸烷-9-基-黄原酸盐(O)和媒介物(D)处理的大鼠之间的疼痛过敏50％的消退限度的比较。

图2：人类磷脂酶Cγ1的DNA(SEQ ID NO：1)和多肽(SEQ ID NO：2)序列(PLCG1；保藏号NM 002660和NP 002651)。编码序列被确定为DNA序列的122-3997号位置。

图3：人类磷脂酶Cγ2(PLCG2；保藏号NM 002661和NP 002652)的DNA(SEQ ID NO：3)和多肽(SEQ ID NO：4)序列。编码序列是由DNA序列的153-3911号位置确定的。

具体实施方式

本发明提供了预防和/或治疗对象疼痛的方法。在实施方案中，所述对象可以是脊椎动物或哺乳动物。在一种实施方案中，所述对象是哺乳动物，例如人类。所述方法包括抑制或减弱对象体内磷脂酶C_γ(PLC_γ)的活性、功能和/或表达，例如，在所述对象的细胞或组织中，例如，中枢神经系统(CNS)神经细胞或组织。所述方法可以包括给所述对象服用，系统性或局部服用能够调节，例如，抑制PLC_γ的活性、表达和/或功能的制剂，作为减轻疼痛的手段。所述制剂可以是在疼痛发作之前，大体上同时或之后服用。

在一种实施方案中，要调节其中的PLC_γ活性、功能和/或表达的CNS神经细胞可以位于表面背角或脊髓中。另外，所述细胞还可以是外周神经细胞或感觉纤维的跨突触的，疼痛信号可能就来自这里。

本发明还涉及治疗急性和慢性疼痛，更具体地讲，涉及治疗神经性疼痛。在本文中，″神经性疼痛″表示与神经损伤相关的慢性疼痛(例如，在神经受到压迫横切或压缩之后或在因为疾病导致神经退化之后)。神经性疼痛可能与神经或神经束损伤相关。另外，所述神经性疼痛可以是与内脏和/或肉体疼痛相关。

在一种实施方案中，所述疼痛可以与选自下列一组的症状相关：慢性炎性疼痛，与关节炎相关的疼痛，纤维肌痛，后背疼痛，与癌症疼痛，与消化系统疾病相关的疼痛，与克罗恩氏病相关的疼痛，与自身免疫性疾病相关的疼痛，与内分泌病相关的疼痛，与糖尿病神经病变相关的疼痛，幻肢疼痛，自发痛，慢性手术后疼痛，慢性颞下颌疼痛，灼痛，疱疹后神经痛，AIDS-相关的疼痛，I型和II型复杂区域性疼痛综合症，三叉神经痛，慢性后背疼痛，与脊髓损伤相关的疼痛，复发性急性痛，和/或上述任意组合。

本发明还提供了减轻对象伤害性感受的方法。所述方法包括调节对象体内PLC_γ的活性、功能和/或表达，以便减轻伤害性感受。在本文中，″伤害性感受″表示疼痛的感觉成分。疼痛可以是各种刺激的结果，包括，但不局限于压力，损伤，热刺激或化学(例如，离子)刺激。

所述制剂包括，但不局限于能直接或间接改变蛋白活性的制剂，以及能调节所述蛋白的生产和/或稳定性的制剂(例如，转录，翻译，成熟，翻译后修饰，磷酸化和降解水平)。例如，所述制剂可以是PLC_γ抑制剂。在一种实施方案中，所述抑制剂可以是肽或肽型化合物(例如，肽模拟物)。在其他实施方案中，所述制剂可以是抗-PLC_γ抗体，它能够调节PLC_γ的结合和/或催化活性。抗-PLC_γ抗体的例子可以参见，例如，Lee等(2002，Mo1.Vis.，8：17-25)和Buckley等(2004，J.Biol.Chem.，279：41807-14)。在其他实施方案中，所述制剂可以是与编码PLC_γ的mRNA的全部或一部分互补的反义分子。在其他实施方案中，所述制剂可以是siRNA或siRNA-样分子。

在其他实施方案中，上述抑制作用是通过抑制PLC_γ的结合结构域实现的。在这种场合下，所述制剂是结合配偶体与PLC_γ的结合的抑制剂。例如，有丝分裂原-激活的蛋白激酶[例如，细胞外信号相关的激酶(ERK1和ERK2)]与PLC_γ的结合(例如，与D-结构域的结合)可以被抑制。正如Buckley等，2004，J.Biol.Chem.，279：41807-41814所证实的，ERK和磷酸-ERK(它们与PLC_γ类似，是通过BDNF结合TrkB激活的)能结合PLC_γ的D结构域，并且诱导这种同工酶磷酸化。

在一种实施方案中，所述能够调节PLC_γ的活性和/或表达的制剂是PLC_γ抑制剂。PLC_γ抑制剂的例子包括，但不局限于，三环癸烷-9-基-黄原酸盐，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸胆碱，硫酸新霉素，精胺四氢氯化物，1-[6-((17β3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，or1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。披露了三环癸烷-9-基-黄原酸盐(又被称作D609)对PLC_γ的抑制作用的参考文献包括：Monick，M.M.et al.，1999，J.Immunol.162，3005；Maragoudakis，M.E.et al.，1993，Kidney Int.43，147；Schutze，S.et al.，1992，Cell 71，765；Muller-Decker，K.，1989，Biochem.Biophys.Res.Commun.162，198；Sauer，G.et al.，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81，3263。上述PLC_γ抑制剂可以从EMD Biosciences(Calbiochem的分公司)获得。

在另一种实施方案中，所述能够调节PLC_γ的活性和/或表达制剂是抗-PLC_γ抗体。抗-PLC_γ抗体的例子可以参见，例如，Lee等(2002，MoI.Vis.，8：17-25)和Buckley等(2004，J.Biol.Chem.，279：41807-14)。为了制备抗-PLC_γ抗体，PLC_γ或它的片段，同系物，和/或变体可以被用于对小型动物进行免疫，例如小鼠或兔子，以便产生能识别PLC_γ的抗体。抗-PLC_γ抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体。生产多克隆或单克隆抗体的方法为本领域所熟知。为了进行回顾，可以参见Harlow和Lane(1988)Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY和Yelton et al.(1981)Ann.Rev.Blochem.50：657-690，这两份文献都被收作本文参考。对于单克隆抗体来说，参见Kohler和Milstein(1975)Nature 256：495-497，被收作本文参考。

″PLC gamma″或″PLCγ″表示具有能够裂解磷脂酰肌醇4，5二磷酸盐以便产生二脂酰甘油和肌醇1，4，5-三磷酸盐的活性的多肽。在实施方案中，所述PLC_γ选自PLCγ1和PLCγ2异构型。编码人PLC_γ多肽的基因可以参见，例如，NCBI保藏号M34667，NM 002660，NM 002661和NM 182811。编码人PLC_γ多肽的基因的例子以及它们所编码的多肽可以参见图2和3以及SEQ ID NOs：1-4。为了回顾PLC_γ活性，可以参见Carpenter和Ji(1999，Experimental Cell Research，253：15-24)。PLC_γ活性可以通过，例如，电泳迁移率移动分析(Noh et al.，1998，AnticancerResearch，18：2643-8)和肌醇1，4，5-三磷酸radioceptor分析(Shu et al.，2002，J.Biol.Chem.，277：18447-18453)进行测定。

如上文所述，保留了活性的PLC_γ的片段，同系物和/或变体还可用于本发明的方法中。同系物包括大体上与PLC_γ的氨基酸序列相同的蛋白序列，与PLC_γ具有显著的结构和功能同源性。变体包括，但不局限于，通过任何修饰和/或氨基酸取代，缺失和添加而与PLC_γ不同的蛋白或肽。修饰可以在任何地方进行，包括多肽主链(即，所述氨基酸序列)，氨基酸侧链和氨基末端或羧基末端。所述取代，缺失或添加可能涉及一个或多个氨基酸。片段包括PLC_γ的片段或一部分或PLC_γ的同系物或变体的片段或一部分。

抗体可以是重组的，例如嵌合的(例如，由来源于鼠类的可变区与人类恒定区结合构成)人源化的(人免疫球蛋白恒定主链与动物，例如，来自鼠类的高变区一起构成)，和/或单链。多克隆和单克隆抗体还可以是免疫球蛋白片段形式的，例如，F(ab)′₂，Fab或Fab′片段。所述抗体可以是任何同种型的，例如，IgG或IgA，并且多克隆抗体是单一同种型或混合同种型。抗-PLC_γ抗体可以使用标准免疫学测定方法生产和鉴定，例如，Western印迹分析，斑点印迹分析，或ELISA。

可用于限制PLC_γ表达的另一种类型的化合物是能降低PLC_γ转录物含量的化合物。这样一来，这些化合物限制了可以生产的PLC_γ多肽的数量，并因此可用于治疗或预防疼痛。这些化合物包括，但不局限于，dsRNA，siRNA，siRNA-样分子，反义寡核苷酸或核糖酶。

在一种实施方案中，编码感兴趣的多肽的核酸或它的片段的表达可以使用RNA干扰(RNAi)技术抑制或阻止，这种技术是一种类型的转录后基因沉默。可以将RNAi用于产生假″剔除″，即这样的系统，其中，由感兴趣的基因或编码区编码的产物的表达减弱了，导致该系统中所述编码产物的活性的总的降低。这样，可以进行RNAi，以便靶定感兴趣的核酸或它的片段或变体，从而减弱它的表达和它所编码的产物的活性水平。这样的系统可用于所述产物的功能性研究，以及用于治疗与所述产物的活性相关的疾病。例如，RNAi披露于以下文献中：Hammond et al.(2001)，Sharp(2001)，Caplen et al.(2001)，Sedlak(2000)和公开的美国专利申请20020173478(Gewirtz；公开日为2002年11月21日)和20020132788(Lewiset al.；公开日为2002年11月7日)。用于进行RNAi的制剂和试剂盒可以通过商业渠道获得，例如，从Ambion有限公司(Austin，TX，USA)和New England Biolabs有限公司(Beverly，MA，USA)购买。

在某些系统中，用于RNAi的某些起始制剂被认为是相对于靶核酸的dsRNA分子。然后所述dsRNA被认为裂解成短的干扰RNAs(siRNAs)，它的长度为21-23个核苷酸(19-21bp的双链体，各自具有两个核苷酸的3′突出末端)。被认为能实施该裂解步骤的酶被称作″Dicer″，并且被归类为dsRNA-双链体核糖核酸酶的RNaseIII家族的成员。另外，RNAi可以通过直接导入细胞实现，或者通过将所述siRNA或siRNA-样分子的合适的前体(例如，编码前体的载体等)导入细胞在细胞内产生。SiRNA随后可以与其他细胞内成分结合，以便形成RNA-诱导的沉默复合物(RISC)。由此形成的RISC随后可以通过它的siRNA部分和目标转录物之间的，由于同源性引起的碱基配对相互作用靶定感兴趣的转录物，导致从所述siRNA的3′末端裂解目标转录物的大约12个核苷酸。因此，裂解了目标mRNA，并且降低了它所编码的蛋白产物的含量。

RNAi可以通过将合适的体外合成的siRNA或siRNA-样分子导入细胞实现。例如，RNAi可以使用化学合成的RNA进行(Brown et al.，2002)。另外，可以将合适的表达载体用于在体外或体内转录所述RNA。在正义和反义链(由出现在相同载体或出现在不同载体上的序列编码)的体外转录可以使用，例如T7 RNA聚合酶进行，在这种场合下，所述载体可以包括可操作地与T7启动子连接的合适的编码序列。在实施方案中，所述体外转录的RNA可以在体外加工(例如，使用大肠杆菌RNase III)到能进行RNAi的大小。将正义和反义转录物结合在一起，以便形成RNA双链体。将双链体导入感兴趣的靶细胞。可以使用其他载体，这些载体能表达小的发夹RNAs(shRNAs)，可以将它加工siRNA-样分子。例如，各种基于载体的方法披露于以下文献中：Brummelkamp et al.(2002)，Lee et al.(2002)，Miyagashi和Taira(2002)，Paddison et al.(2002)Paul et al.(2002)Sui et al.(2002)和Yuet al.(2002)。用于将所述载体导入细胞的各种体外或体内方法(例如，基因治疗)为本领域所公知。

因此，在一种实施方案中，编码PLC_γ的核酸，或它的片段的表达可以将相当于编码感兴趣的多肽的核酸或它的片段，或相当于与它同源的核酸的siRNA或siRNA-样分子导入细胞或在细胞内产生进行抑制。″siRNA-样分子″表示类似于siRNA的核酸分子(例如，在大小和结构方面类似)，并且能够产生siRNA活性，即实现RNAi-介导的表达抑制作用。在各种实施方案中，这种方法使得可以将所述siRNA或siRNA-样分子直接使用到细胞中，或者使用所述基于载体的方法。在一种实施方案中，所述siRNA或siRNA-样分子长度为小于大约30个核苷酸。在其他实施方案中，所述siRNA或siRNA-样分子长度为大约21-23个核苷酸。在一种实施方案中，siRNA或siRNA-样分子包括19-21bp的双链体部分，每一股链具有2个核苷酸的3′突出末端。在实施方案中，所述siRNA或siRNA-样分子大体上与编码PLC_γ的核酸，或它的片段或变体(或变体的片段)相同。所述变体能够编码具有类似于PLC_γ的活性的蛋白。在实施方案中，所述siRNA或siRNA-样分子的正义链大体上与SEQ ID NOs：1或3，或它的片段(RNA在所述DNA序列的T残基的位置上具有U)相同。

在另一种实施方案中，用反义构建体转化的细胞可用于抑制PLC_γ表达。反义构建体是核酸分子，它可以转录以便提供大体上互补于编码PLC_γ的mRNA的全部或一部分的反义分子，以便反义构建体的表达受到PLC_γ的表达的干扰。在一种实施方案中，上述反义分子相对编码PLC_γ的DNA序列是反义的，在一种实施方案中，是人PLC_γ。在某些实施方案中，本发明的反义构建体因此能够编码五个或更多个连续的核酸残基，这些残基大体上互补于编码PLC_γ核酸序列的连续部分。

在其他实施方案中，大体上与本文所述多肽相同的多肽和核苷酸可用于本发明中。

″同源性″和″同源的″表示两个肽或两个核酸分子之间的序列相似性。同源性可以通过比较比对序列上的每一个位置确定，核酸序列之间或氨基酸序列之间的同源性程度是所述序列所共同拥有的位置上相同或匹配的核苷酸或氨基酸数量的函数。本文在使用所述术语时，如果两个序列大体上相同并且所述序列的功能性活性是保守性的，这样的核酸序列就是与其他序列″同源的″(在本文中，术语′同源的′不表示进化上的关系)。当进行最佳比对(省略缺口)时，如果两个核酸序列具有至少大约50％的序列相似性或相同性，或者如果所述序列拥有特定的功能性基序，就认为这两个序列是大体上相同的。在其他实施方案中，在最佳比对中大体上相同的序列的序列相似性可以为至少60％，70％，75％，80％，85％，90％或95％。在本文中，序列之间特定的同源性百分比，是最佳比对序列上的序列相同性程度。″不相关的″或″不同源的″序列与SEQ ID NOs 1-4中任意一个拥有低于40％的相同性，不过，优选拥有低于大约25％的相同性。

大体上互补的核酸是这样的核酸，其中，一个分子的″互补体″大体上与另一个分子相同。为了比较相同性而进行的序列的最佳比对可以使用各种算法进行，如Smith和Waterman的局部同源性算法，1981，Adv.Appl.Math 2：482，Needleman和Wunsch的同源性比对算法，1970，J.MoI.Biol.48：443，Pearson和Lipman的检索相似性方法，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：2444，以及上述算法的计算机化工序(如Wisconsin Genetics软件包中的GAP，BESTFIT，FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group，Madison，WI，U.S.A.)。序列相同性还可以使用BLAST算法测定，参见Altschul et al.，1990，J.MoI.Biol.215：403-10(使用公开的设置默认值)。用于进行BLAST分析的软件可以从National Center for BiotechnologyInformation获得(通过互联网获得，网址为http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)。BLAST算法涉及首先确定高得分序列对(HSPs)，包括在查询序列上确定短字长W，在它与数据库序列中的相同的字长进行比对时吻合或满足某些正的阈值得分T。T被称作相邻的字得分阈值。将最初的相邻字命中用作开始检索的种子，以便发现正常的HSPs。将所述字的命中沿每一个序列的两个方向延长到尽可能地短，以便能够增加累计比对得分。当满足以下参数时，沿每一个方向的字命中的延长终止：累计比对得分减少到从它的最大获得值中减少了数量X；由于一个或多个不得分残基比对的积累，累计得分接近于0或以下。或者到达任意一个序列的末端。BLAST算法的参数W，T和X决定了比对的灵敏度和速度。BLAST程序可用于预设为11的字长(W)，BLOSUM62评分矩阵(Henikoff and Henikoff，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915-10919)比对(B)为50，预期值(E)为10(或1或0.1或0.01或0.001或0.0001)，M＝5，N＝4，并且比较两股链。利用BLAST算法在两个序列之间进行的统计学相似性的测定是最小总和可能性(P(N))，它提供了两个核苷酸或氨基酸序列之间偶尔出现的匹配的可能性的指标。在本发明的其他实施方案中，如果在实验序列的比较中最小组合可能性低于大约1，优选低于大约0.1，更优选低于大约0.01，最优选低于大约0.001的相关核苷酸或氨基酸序列就被认为是大体上相同的。

表明两种核酸序列大体上互补的其他指标是，这两种序列彼此能在中等严格或优选严格条件下杂交。例如，滤膜结合的序列在中等严格条件下的杂交，可以在65℃下，在0.5M NaHPO₄，7％十二烷基硫酸钠(SDS)，1mM EDTA中进行，并且在42℃下用0.2×SSC/0.1％SDS洗涤(参见Ausubel，et al.(eds)，1989，CurrentProtocols in Molecular Biology，Vol.1，Green Publishing Associates，Inc.，和John Wiley& Sons，Inc.，New York，at p.2.10.3)。另外，滤膜结合的序列在严格条件下的杂交，例如，可以在0.5M NaHPO₄，7％SDS，1mM EDTA中进行，并且在68℃下用0.1×SSC/0.1％SDS洗涤(参见Ausubel，et al.(eds)，1989，同上)。杂交条件可以根据感兴趣的序列按照已知方法进行改进(参见Tijssen，1993，LaboratoryTechniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic AcidProbes，Part I，Chapter 2″Overview of principles of hybridization and the strategy ofnucleic acid probe assays″，Elsevier，New York)。一般，严格条件选择为比在特定离子长度和pH条件下特定序列的热熔点低大约5℃。

在其他实施方案中，本发明提供了用于外源使用的反义分子和核糖酶，以便结合，降解和/或抑制PLC_γmRNA的翻译。被收作本文参考的治疗性反义寡核苷酸应用的例子，包括：美国专利号5,135,917，授权日为1992年8月4日；美国专利号5,098,890，授权日为1992年3月24日；美国专利号5,087,617，授权日为1992年2月11日；美国专利号5,166,195，授权日为1992年11月24日；美国专利号5,004,810，授权日为1991年4月2日；美国专利号5,194,428，授权日为1993年3月16日；美国专利号4,806,463，授权日为1989年2月21日；美国专利号5,286,717授权日为1994年2月15日；美国专利号5,276,019和美国专利号5,264,423；BioWorld Today，1994年4月29日，p.3。

优选的是，在反义分子上，存在与PLC_γmRNA足够的互补程度，以便避免反义分子与非靶序列在需要专一性结合的条件下的非-双链体结合，如在进行体内实验或治疗性处理的生理学条件下，或在进行体外分析时，进行分析的条件下。用于反义结合的靶mRNA可能不仅包括编码蛋白的信息，而且还包括相关的核糖核苷酸，例如，它形成了5′-非翻译区，3′-非翻译区，5′帽子区和内显子/外显子接合核糖核苷酸。筛选可用于提供所述分子作为本发明抑制剂的反义和核糖酶核酸的方法披露于美国专利号5,932,435中(被收作本文参考)。

本发明的反义分子(寡核苷酸)可以包括这样的分子，它包括糖间主链键，如磷酸三酯，膦酸甲酯，短链烷基或环烷基糖间键或短链杂原子或杂环糖间键，硫逐磷酸酯和具有CH₂--NH--O--CH₂，CH₂--N(CH₃)--O--CH₂(被称作亚甲基(甲基亚胺)或MMI主链)，CH₂--O--N(CH₃)--CH₂，CH₂--N(CH₃)--CH₂和O--N(CH₃)--CH₂--CH₂主链(其中，磷酸二酯是O--P--O--CH₂)的分子。还可以使用具有吗啉代主链结构的寡核苷酸(美国专利号5,034,506)。在其他实施方案中，反义寡核苷酸可以具有肽核酸(PNA，有时被称作″蛋白核酸″)主链，其中，所述寡核苷酸的磷酸二酯主链可以用聚酰胺主链取代，其中，核苷碱基直接或间接与聚酰胺主链上的氮杂氮原子或亚甲基(Nielsen et al.，1991，Science 254：1497和美国专利号5,539,082)结合。磷酸二酯可以用手性或对映体特异性结构取代。本领域普通技术人员能够选择其他连键用于实施本发明。

寡核苷酸还可以包括这样的类型：它包括至少一个修饰过的核苷酸碱基。因此，可以使用天然存在以外的嘌呤和嘧啶。类似地，还可以对核苷酸亚基的戊呋喃糖基部分进行修饰。这种修饰的例子是2′-O-烷基-和2′-卤-取代的核苷酸。可用于本发明的2′位置上的修饰的某些具体例子包括OH，SH，SCH₃，F，OCN，O(CH₂)_nNH₂或O(CH₂)_nCH₃，其中，n为1-大约10；C₁-C₁₀低级烷基，取代过的低级烷基，烷芳基或芳烷基；Cl；Br；CN；CF₃；OCF₃；O-，S-，或N-烷基；O-，S-，或N-烯基；SOCH₃；SO₂ CH₃；ONO₂；NO₂；N₃；NH₂；杂环烷基；杂环烷芳基；氨基烷基氨基；聚烷基氨基；取代过的甲硅烷基；RNA裂解基团；报导基团；插入基团；用于改善寡核苷酸的药物动力学特征的基团；或用于改善寡核苷酸的药物动力学特征的基团或其他具有类似特征的取代基团。一个或多个戊呋喃糖基可以被另一个糖，被糖模拟物，如环丁基取代，或被代替糖的其他部分取代。

在某些实施方案中，本发明的反义寡核苷酸可以包括大约5-大约100个核苷酸单位。正如可以理解的，核苷酸单位是碱基-糖组合(或类似结构)，通过磷酸二酯或其他键与相邻的核苷酸单位适当地结合，形成主链结构。

本发明还提供了药用组合物(药品)，包括能够调节PLC_γ的活性和/或表达的制剂，和可以药用的载体。在一种实施方案中，所述组合物包括治疗或预防有效量的制剂，以便治疗或缓解疼痛，和可以药用的载体。

″治疗有效量″表示在服用时能在必要的时间内有效获得需要的治疗效果的用量，如减轻疼痛。能够调节PLC_γ的活性和/或表达的制剂的治疗有效量可以根据诸如疾病状态，年龄，性别和个体体重，以及所述制剂在个体内诱导需要的反应的能力的因素改变。可以对用药方案进行调节，以便提供最佳治疗反应。治疗有效量还可以是这样的用量，其中，所述制剂的任何毒性或有害作用都被治疗效果所抵消。

″预防有效量″表示在服用之后的必要时间内能有效获得需要的预防效果的用量，如预防或抑制疼痛发作或疼痛严重程度的加重。预防有效量可以按照上述治疗有效量的确定方法确定。对于任何具体对象来说，特殊的用药方案可以随时根据个体需要和管理或监督所述组合物使用的人员的专业判断进行调整。

在本文中，″可以药用的载体″或″赋形剂″包括任何和所有溶剂，分散介质，包衣剂，抗细菌剂和抗真菌剂，等渗和吸收延缓制剂，以及生理学上兼容的制剂等。在一种实施方案中，所述载体是适合肠胃外服用的。另外，所述载体可适用于静脉内，腹膜内，肌内，头颅内，鞘内，舌下，或口服。可以药用的载体包括无菌水溶液或分散液，和无菌粉末，用于临时制备无菌注射溶液或分散液。上述介质和制剂用作药理学活性物质的用途为本领域所熟知。除非任何常规介质或制剂与所述活性制剂不兼容，它们都可用于本发明的药用组合物中。还可以将辅助活性化合物添加到所述组合物中。

在生产和储存条件下，治疗组合物通常必须是无菌的和稳定的。所述组合物可以制备成溶液，微型乳剂，脂质体，或适合高药物浓度的其他有序结构。所述载体可以是溶剂或分散介质，例如，水，乙醇，多元醇(例如，甘油，丙二醇，和液体聚乙二醇等)的，以及它们的合适的混合物。可以保持适当的流动性，例如，通过使用诸如卵磷脂的包衣剂，对于分散液来说通过保持需要的粒度，以及通过使用表面活性剂。在很多场合下，所述组合物优选包括等渗剂，例如，糖，多元醇，如甘露糖醇，山梨糖醇，或氯化钠。通过在所述组合物中添加能延缓吸收的制剂，例如，一硬脂酸盐和明胶可以延长所述注射组合物的吸收时间。另外，所述能够调节PLC_γ的活性和/或表达的制剂能够以延时释放制剂的形式服用，例如，存在于组合物中，它包括缓式聚合物。所述活性化合物可以用能防止化合物迅速释放的载体制备，如控释制剂，包括植入物和微型胶囊化输送系统。可以使用生物可降解的，生物兼容性聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯，聚酐，聚乙醇酸，胶原，聚原酸酯，聚乳酸和聚乳酸，聚乙醇酸共聚物(PLG)。制备所述制剂的很多方法都申请过专利或为本领域技术人员所普遍公知。

无菌注射溶液可以通过以下方法制备：将需要数量的活性剂(例如，能够调节PLC_γ的活性和/或表达的制剂)掺入合适的溶剂，根据需要掺入一种上面所列举的成分或上述成分的组合，然后进行过滤消毒。一般来说，分散液是通过将活性剂掺入无菌媒介物制备的，媒介物中包含基本分散介质和上文所列举的其他必要的成分。对于用于制备无菌注射溶液的无菌粉末来说，制备的优选方法是真空干燥和冷冻干燥。由此得到了活性成分的粉末和来自前面的消毒过滤溶液的任何其他需要的成分。根据本发明的另一方面，能够调节对象体内PLC_γ的活性和/或表达的制剂可以用能增强它的溶解度的一种或多种其他化合物配制。

在另一种实施方案中，服用本发明的制剂，以便它与CNS组织或CNS神经元接触。在本文中，″中枢神经系统″或CNS是神经系统中包括大脑和脊髓(例如，位于腰部)的部分。相反，″外周神经系统″或PNS是神经系统的除了大脑和脊髓以外的部分。在其他实施方案中，CNS组织是表面背角，在其他实施方案中，是薄层I神经元。因此，在实施方案中，本发明的制剂可用于在体内处理CNS细胞，通过直接的颅内或鞘内注射或注射到脑脊髓液中。另外，所述制剂可以以能够穿过血脑屏障并且进入CNS的形式系统性服用(例如，静脉内，或口服)。″神经的″和″神经元的″在本文中可以交换使用，并且二者都与神经元和神经系统相关。

在本发明的另一种实施方案中，本发明的治疗组合物包括能够减弱/抑制CNS细胞中PLC_γ的活性和/或表达的制剂，它能够以试剂盒/容器或包装形式提供(例如，商业化包装)，该包装还包括有关将它们用于治疗疼痛的说明书。类似地，本发明提供了一种包装，它包括能够减弱/抑制PLC_γ的活性和/或表达的制剂，以及用于预防和/或治疗疼痛的说明。

本发明还提供了将能够减弱/抑制PLC_γ的活性和/或表达的制剂或包括能够减弱/抑制PLC_γ的活性和/或表达的制剂的组合物用于预防和/或治疗疼痛的用途，或用于制备用于预防和/或治疗疼痛的药品的用途。

另一方面，本发明涉及将PLC_γ用作筛选方法目标的用途，该方法可用于鉴定和表征能够减弱/抑制PLC_γ的活性和/或表达的制剂。因此，本发明还提供了确定候选制剂是否能够调节对象体内PLC_γ的活性和/或表达的方法，并且反过来将它用于预防和治疗疼痛。在一种实施方案中，所述方法包括让细胞(例如，CNS-衍生的细胞)与候选制剂接触，并且确定在存在测试制剂的条件下，PLC_γ的活性是否业已减弱或受到抑制。在其他实施方案中，所述分析方法可以用无细胞系统进行，包括提供活性PLC_γ的合适的制剂或样品，让PLC_γ与候选制剂接触，并且同样确定在存在所述测试化合物的条件下，它的活性是否受到抑制或减弱。在其他实施方案中，所述分析方法可以包括评估候选化合物是否能抑制结合配偶体或配体与PLC_γ结合。在这种场合下，所述方法包括让PLC_γ或包括PLC_γ的细胞与候选制剂和结合配偶体或配体接触，并且确定在存在候选或测试化合物的条件下，所述结合配偶体或配体与PLC_γ的结合是否减弱。在实施方案中，所述结合配偶体或配体但是有丝分裂原-激活的蛋白激酶或它的同系物或片段(如ERK1或ERK2，或它的同系物或片段)。在一种实施方案中，确定了PLC_γ的D-结构域的结合。

PLC_γ活性或上述结合的抑制或减弱，是所述测试制剂可用于治疗或预防疼痛的指标。

在本文中，″CNS-衍生的细胞″是从CNS组织中分离或衍生的细胞，并且在实施方案中，包括原始神经元培养物，永生化神经元细胞系，以及得到认可的体外神经元模型系统(例如，在体外分化成神经元的细胞)。在一种实施方案中，上述细胞具有PLC_γ活性。

上述方法可以用一种测试制剂或多种或测试制剂的文库(例如，组合文库)进行。在后一种场合下，还可以鉴定并且表征由组合制剂提供的协同效应。上述制剂可用于预防和/或治疗疼痛，或可用作开发和测试具有改进的专一性，效力和/或药理学(例如，药物动力学)特性的其他制剂的前导制剂。在一种实施方案中，所述制剂可以是前体药物，它能在合适的作用位点，例如，在CNS组织中(例如，在脊髓中)转变成它的活性形式。在某些实施方案中，本发明筛选/实验方法的一个或多个步骤可以自动化。

本发明还涉及用于鉴定和表征能够减弱/抑制PLC_γ基因表达的制剂。所述方法可以包括在存在测试制剂的条件下测定PLC_γ基因表达。所述基因表达可以通过检测相应的RNA或蛋白，或通过使用合适的报导构建体确定，所述构建体包括正常情况下与所述PLC_γ基因结合的转录调控因子，可操作地与报道基因连接。当第一个核酸序列处在与第二个核酸序列成功能性关系的位置上时，第一个核酸序列就是与第二个核酸序列″可操作地连接的″。例如，如果启动子能影响编码序列的或表达的话，该启动子就是可操作地与编码序列连接的。一般来说，可操作地连接的DNA序列，并且如果必要的话，在读框内连接两个蛋白编码区。不过，由于，例如增强子一般是在与启动子间隔几千个碱基的情况下起作用，并且内含子序列可以具有不同的长度，某些多核苷酸因子可以是可操作地连接的，但是不是连续的。″转录调控因子″是表示DNA序列的通称，如起始和终止信号，增强子和启动子，剪接信号，能诱导或控制蛋白编码序列转录的聚腺苷酸化信号，这些因子是与编码序列可操作地连接的。所述报道基因的表达可以在转录或翻译水平上衡量，例如，通过所产生的RNA或蛋白的数量衡量。RNA可以通过，例如，Northern分析或通过逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测(例如，参见Sambrook et al(1989)MolecularCloning：A Laboratory Manual(second edition)，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York，USA)。蛋白含量可以使用亲和制剂(例如抗体或它的片段[例如，有关方法可以参见Harlow，E.and Lane，D(1988)Antibodies：ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY]；能结合蛋白的配体)直接检测，或通过其他特性(例如，对于绿色荧光蛋白来说利用荧光)或通过测定蛋白活性检测，它能体现产生可检测产物的酶促活性(例如，具有改变了的分光镜检查特性)或可检测的表型(例如，细胞生长的改变)。合适的报道基因包括，但不局限于氯霉素乙酰转移酶，β-D半乳糖苷酶，荧光素酶，或绿色荧光蛋白。

本发明还提供了用于诊断或预测与CNS功能失调相关的疼痛的方法。在一种实施方案中，所述与诸如CNS功能失调相关的疼痛是神经性疼痛。在一种实施方案中，所述方法包括确定在CNS神经细胞中是否存在PLC_γ的活性和/或表达相对相应的对照PLC_γ的活性和/或表达的调节。在该特定方法中，测试水平相对对照水平的差异是所述对象正经历与CNS功能失调相关的疼痛的指标。在一种实施方案中，所述方法包括确定PLC_γ活性和/或表达是否相对对照活性和/或表达得到了调节。在另一种实施方案中，所述PLC_γ活性和/或表达可选自建立的标准，如早先在对象体内测定的相应的PLC_γ活性和/或表达水平；在所述对象经历较小的疼痛(相对上述现有的痛觉而言)或基本上没有疼痛时在所述对象体内特定的相应的PLC_γ活性和/或表达水平；或在经历较小疼痛(相对上述测试对象体内的现有痛觉而言)或基本上没有疼痛的对照对象体内测定的相应的PLC_γ活性和/或表达水平。在一种实施方案中，经历较少疼痛或基本上没有疼痛的对象或对照对象，它的中枢神经或外周神经系统不存在损伤的明显证据(例如，神经性疼痛)或持续性疼痛。

例如，PLC_γ活性和/或表达可以通过给对象服用指示化合物(如能指示PLC_γ的活性和/或表达的化合物)测定，该化合物能够接触所述对象的CNS神经细胞。在服用所述指示化合物之后，可以对与这些指示化合物相关的体内信号进行评估。在一种实施方案中，可以使用这样的指示化合物，如免疫检测型制剂(例如，针对PLC_γ多肽的抗体，单链抗体或Fab片段)或能够在PLC_γ活性的作用下产生可检测产物的合适的底物。在注射所述指示化合物之后，可以实施成像技术以便评估与所述指示化合物相关的体内信号。所述成像技术能够评估所述指示化合物的体内信号。

在一种实施方案中，上述诊断/预测方法可以与上述治疗/预防方法组合进行，用于预防或治疗对象的疼痛。因此，所述方法包括诊断或预测疼痛，以及调节对象体内的PLC_γ的活性和/或表达，以便预防或治疗疼痛。

尽管本文披露了本发明的各种实施方案，在本发明的范围内，按照本领域技术人员的普通知识可以进行各种调整和改变。这些改变包括已知等同物对本发明任何方面的替代，以便随后以大体上相同的方式获得相同的结构。数字范围是确定所述范围的包含端点值的数字。在权利要求书中，单词″comprising″被用作开放式术语，大体上等同于短语″包括，但不局限于″。以下实施例是用于说明本发明的各个方面的，并且不限定本文所披露的本发明的广义的范围。

实施例

例1：

十一只成年Sprague-Dawley大鼠的坐骨神经接受了实验性慢性压缩损伤(Mosconi & Kruger，1996，Pain 64：37-57)。在两周时间内，疼痛过敏，神经性疼痛的表现逐渐加强，并且使用Von Frey技术(Chaplan et al.，1994，J.Neurosci.Methods 53：55-63)进行监测。在形成allodynia之后)表现出50％消退限度(WD₅₀)≤2.0g)，通过鞘内导管给大鼠服用500ng三环癸烷-9-基-黄原酸盐，三环癸烷-9-基-黄原酸盐是用含有10％v/v二甲亚砜的盐水溶液(0.9％NaCl)制备的。三环癸烷-9-基-黄原酸盐可以从EMD Biosciences(Calbiochem的分公司)购买。将含有10％v/v二甲亚砜的盐溶液(0.9％NaCl)作为媒介物注射到对照体内。所服用的媒介物的体积与PLC_γ抑制剂溶液相同。

七只痛觉超敏大鼠接受了一次鞘内注射的媒介物，而四只大鼠接受了一次注射的三环癸烷-9-基-黄原酸盐；在注射之前这两个组的平均WD₅₀为1.9±0.2g。在注射之后仅仅4小时，服用三环癸烷-9-基-黄原酸盐的大鼠的WD₅₀与接受媒介物的大鼠的WD₅₀存在显著差别(三环癸烷-9-基-黄原酸盐，8.8±2.1g与媒介物，4.1±0.7g；p＜0.05)，并且与注射之前的原始WD₅₀存在明显差别(p＜0.05，混合设计ANOVA)。这种疼痛过敏的显著减弱持续超过6小时。

在本说明书中，各份参考文献用于更全面地说明本发明所属领域的现状。这些文献的内容被收作本说明书的参考。

序列表

<110>

LAVALCOULL，Jeffrey A.M.DE KONINCK，Yves

<120>磷脂酶C_γ调节及其用途

<130>85409-49

<150>PCT/CA2004/000726

<151>2004-05-14

<150>US 60/627,174

<151>2004-11-15

<160>4

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>5205

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>CDS

<222>(122)..(3997)

<400>1

gagccgccgc cgggtcccgc tcgtctgccg cctcagcctc agccccaacc tcagccgccg 60

ccgttgcgct tgctcccggg cggtcctggc ctgtgccgcc gccgccccca gcgtcggagc 120

c atg gcg ggc gcc gcg tcc cct tgc gcc aac ggc tgc ggg ccc ggc gcg 169

Met Ala Gly Ala Ala Ser Pro Cys Ala Asn Gly Cys Gly Pro Gly Ala

1 5 10 15

ccc tcg gac gcc gag gtg ctg cac ctc tgc cgc agc ctc gag gtg ggc 217

Pro Ser Asp Ala Glu Val Leu His Leu Cys Arg Ser Leu Glu Val Gly

20 25 30

acc gtc atg act ttg ttc tac tcc aag aag tcg cag cga ccc gag cgg 265

Thr Val Met Thr Leu Phe Tyr Ser Lys Lys Ser Gln Arg Pro Glu Arg

35 40 45

aag acc ttc cag gtc aag ctg gag acg cgc cag atc acg tgg agc cgg 313

Lys Thr Phe Gln Val Lys Leu Glu Thr Arg Gln Ile Thr Trp Ser Arg

50 55 60

ggc gcc gac aag atc gag ggg gcc att gac att cgt gaa att aag gag 361

Gly Ala Asp Lys Ile Glu Gly Ala Ile Asp Ile Arg Glu Ile Lys Glu

65 70 75 80

atc cgc cca ggg aag acc tca cgg gac ttt gat cgc tat caa gag gac 409

Ile Arg Pro Gly Lys Thr Ser Arg Asp Phe Asp Arg Tyr Gln Glu Asp

85 90 95

cca gct ttc cgg ccg gac cag tca cat tgc ttt gtc att ctc tat gga 457

Pro Ala Phe Arg Pro Asp Gln Ser His Cys Phe Val Ile Leu Tyr Gly

100 105 110

atg gaa ttt cgc ctg aaa acg ctg agc ctg caa gcc aca tct gag gat 505

Met Glu Phe Arg Leu Lys Thr Leu Ser Leu Gln Ala Thr Ser Glu Asp

115 120 125

gaa gtg aac atg tgg atc aag ggc tta act tgg ctg atg gag gat aca 553

Glu Val Asn Met Trp Ile Lys Gly Leu Thr Trp Leu Met Glu Asp Thr

130 135 140

ttg cag gca ccc aca ccc ctg cag att gag agg tgg ctc cgg aag cag 601

Leu Gln Ala Pro Thr Pro Leu Gln Ile Glu Arg Trp Leu Arg Lys Gln

145 150 155 160

ttt tac tca gtg gat cgg aat cgt gag gat cgt ata tca gcc aag gac 649

Phe Tyr Ser Val Asp Arg Asn Arg Glu Asp Arg Ile Ser Ala Lys Asp

165 170 175

ctg aag aac atg ctg tcc cag gtc aac tac cgg gtc ccc aac atg cgc 697

Leu Lys Asn Met Leu Ser Gln Val Asn Tyr Arg Val Pro Asn Met Arg

180 185 190

ttc ctc cga gag cgg ctg acg gac ctg gag cag cgc agc ggg gac atc 745

Phe Leu Arg Glu Arg Leu Thr Asp Leu Glu Gln Arg Ser Gly Asp Ile

195 200 205

acc tac ggg cag ttt gct cag ctg tac cgc agc ctc atg tac agc gcc 793

Thr Tyr Gly Gln Phe Ala Gln Leu Tyr Arg Ser Leu Met Tyr Ser Ala

210 215 220

cag aag acg atg gac ctc ccc ttc ttg gaa gcc agt act ctg agg gct 841

Gln Lys Thr Met Asp Leu Pro Phe Leu Glu Ala Ser Thr Leu Arg Ala

225 230 235 240

ggg gag cgg ccg gag ctt tgc cga gtg tcc ctt cct gag ttc cag cag 889

Gly Glu Arg Pro Glu Leu Cys Arg Val Ser Leu Pro Glu Phe Gln Gln

245 250 255

ttc ctt ctt gac tac cag ggg gag ctg tgg gct gtt gat cgc ctc cag 937

Phe Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Glu Leu Trp Ala Val Asp Arg Leu Gln

260 265 270

gtg cag gag ttc atg ctc agc ttc ctc cga gac ccc tta cga gag atc 985

Val Gln Glu Phe Met Leu Ser Phe Leu Arg Asp Pro Leu Arg Glu Ile

275 280 285

gag gag cca tac ttc ttc ctg gat gag ttt gtc acc ttc ctg ttc tcc 1033

Glu Glu Pro Tyr Phe Phe Leu Asp Glu Phe Val Thr Phe Leu Phe Ser

290 295 300

aaa gag aac agt gtg tgg aac tcg cag ctg gat gca gta tgc ccg gac 1081

Lys Glu Asn Ser Val Trp Asn Ser Gln Leu Asp Ala Val Cys Pro Asp

305 310 315 320

acc atg aac aac cct ctt tcc cac tac tgg atc tcc tcc tcg cac aac 1129

Thr Met Asn Asn Pro Leu Ser His Tyr Trp Ile Ser Ser Ser His Asn

325 330 335

acg tac ctg acc ggg gac cag ttc tcc agt gag tcc tcc ttg gaa gcc 1177

Thr Tyr Leu Thr Gly Asp Gln Phe Ser Ser Glu Ser Ser Leu Glu Ala

340 345 350

tat gct cgc tgc ctg cgg atg ggc tgt cgc tgc att gag ttg gac tgc 1225

Tyr Ala Arg Cys Leu Arg Met Gly Cys Arg Cys Ile Glu Leu Asp Cys

355 360 365

tgg gac ggc ccg gat ggg atg cca gtt att tac cat ggg cac acc ctt 1273

Trp Asp Gly Pro Asp Gly Met Pro Val Ile Tyr His Gly His Thr Leu

370 375 380

acc acc aag atc aag ttc tca gat gtc ctg cac acc atc aag gag cat 1321

Thr Thr Lys Ile Lys Phe Ser Asp Val Leu His Thr Ile Lys Glu His

385 390 395 400

gcc ttt gtg gcc tca gag tac cca gtc atc ctg tcc att gag gac cac 1369

Ala Phe Val Ala Ser Glu Tyr Pro Val Ile Leu Ser Ile Glu Asp His

405 410 415

tgc agc att gcc cag cag aga aac atg gcc caa tac ttc aag aag gtg 1417

Cys Ser Ile Ala Gln Gln Arg Asn Met Ala Gln Tyr Phe Lys Lys Val

420 425 430

ctg ggg gac aca ctc ctc acc aag ccc gtg gag atc tct gcc gac ggg 1465

Leu Gly Asp Thr Leu Leu Thr Lys Pro Val Glu Ile Ser Ala Asp Gly

435 440 445

ctc ccc tca ccc aac cag ctt aag agg aag atc ctc atc aag cac aag 1513

Leu Pro Ser Pro Asn Gln Leu Lys Arg Lys Ile Leu Ile Lys His Lys

450 455 460

aag ctg gct gag ggc agt gcc tac gag gag gtg cct aca tcc atg atg 1561

Lys Leu Ala Glu Gly Ser Ala Tyr Glu Glu Val Pro Thr Ser Met Met

465 470 475 480

tac tct gag aac gac atc agc aac tct atc aag aat ggc atc ctc tac 1609

Tyr Ser Glu Asn Asp Ile Ser Asn Ser Ile Lys Asn Gly Ile Leu Tyr

485 490 495

ctg gag gac cct gtg aac cac gaa tgg tat ccc cac tac ttt gtt ctg 1657

Leu Glu Asp Pro Val Asn His Glu Trp Tyr Pro His Tyr Phe Val Leu

500 505 510

acc agc agc aag atc tac tac tct gag gag acc agc agt gac cag ggc 1705

Thr Ser Ser Lys Ile Tyr Tyr Ser Glu Glu Thr Ser Ser Asp Gln Gly

515 520 525

aac gag gat gag gag gag ccc aag gag gtc agc agc agc aca gag ctg 1753

Asn Glu Asp Glu Glu Glu Pro Lys Glu Val Ser Ser Ser Thr Glu Leu

530 535 540

cac tcc aat gag aag tgg ttc cat ggg aag cta ggg gca ggg cgt gac 1801

His Ser Asn Glu Lys Trp Phe His Gly Lys Leu Gly Ala Gly Arg Asp

545 550 555 560

ggg cgt cac atc gct gag cgc ctg ctt act gag tac tgc atc gag acc 1849

Gly Arg His Ile Ala Glu Arg Leu Leu Thr Glu Tyr Cys Ile Glu Thr

565 570 575

gga gcc cct gac ggc tcc ttc ctc gtg cga gag agt gag acc ttc gtg 1897

Gly Ala Pro Asp Gly Ser Phe Leu Val Arg Glu Ser Glu Thr Phe Val

580 585 590

ggc gac tac acg ctc tct ttc tgg cgg aac ggg aaa gtc cag cac tgc 1945

Gly Asp Tyr Thr Leu Ser Phe Trp Arg Asn Gly Lys Val Gln His Cys

595 600 605

cgt atc cac tcc cgg caa gat gct ggg acc ccc aag ttc ttc ttg aca 1993

Arg Ile His Ser Arg Gln Asp Ala Gly Thr Pro Lys Phe Phe Leu Thr

610 615 620

gac aac ctc gtc ttt gac tcc ctc tat gac ctc atc acg cac tac cag 2041

Asp Asn Leu Val Phe Asp Ser Leu Tyr Asp Leu Ile Thr His Tyr Gln

625 630 635 640

cag gtg ccc ctg cgc tgt aat gag ttt gag atg cga ctt tca gag cct 2089

Gln Val Pro Leu Arg Cys Asn Glu Phe Glu Met Arg Leu Ser Glu Pro

645 650 655

gtc cca cag acc aac gcc cac gag agc aaa gag tgg tac cac gcg agc 2137

Val Pro Gln Thr Asn Ala His Glu Ser Lys Glu Trp Tyr His Ala Ser

660 665 670

ctg acc aga gca cag gct gag cac atg cta atg cgc gtc cct cgt gat 2185

Leu Thr Arg Ala Gln Ala Glu His Met Leu Met Arg Val Pro Arg Asp

675 680 685

ggg gcc ttc ctg gtg cgg aag cgg aat gaa ccc aac tca tat gcc atc 2233

Gly Ala Phe Leu Val Arg Lys Arg Asn Glu Pro Asn Ser Tyr Ala Ile

690 695 700

tct ttc cgg gct gag ggc aag atc aag cat tgc cgt gtc cag caa gag 228l

Ser Phe Arg Ala Glu Gly Lys Ile Lys His Cys Arg Val Gln Gln Glu

705 710 715 720

ggc cag aca gtg atg cta ggg aac tcg gag ttc gac agc ctt gtt gac 2329

Gly Gln Thr Val Met Leu Gly Asn Ser Glu Phe Asp Ser Leu Val Asp

725 730 735

ctc atc agc tac tat gag aaa cac ccg cta tac cgc aag atg aag ctg 2377

Leu Ile Ser Tyr Tyr Glu Lys His Pro Leu Tyr Arg Lys Met Lys Leu

740 745 750

cgc tat ccc atc aac gag gag gca ctg gag aag att ggc aca gct gag 2425

Arg Tyr Pro Ile Asn Glu Glu Ala Leu Glu Lys Ile Gly Thr Ala Glu

755 760 765

cct gac tac ggg gcc ctg tat gag gga cgc aac cct ggc ttc tat gta 2473

Pro Asp Tyr Gly Ala Leu Tyr Glu Gly Arg Asn Pro Gly Phe Tyr Val

770 775 780

gag gca aac cct atg cca act ttc aag tgt gca gtc aaa gcc ctc ttt 2521

Glu Ala Asn Pro Met Pro Thr Phe Lys Cys Ala Val Lys Ala Leu Phe

785 790 795 800

gac tac aag gcc cag agg gag gac gag ctg acc ttc atc aag agc gcc 2569

Asp Tyr Lys Ala Gln Arg Glu Asp Glu Leu Thr Phe Ile Lys Ser Ala

805 810 815

atc atc cag aat gtg gag aag caa gag gga ggc tgg tgg cga ggg gac 2617

Ile Ile Gln Asn Val Glu Lys Gln Glu Gly Gly Trp Trp Arg Gly Asp

820 825 830

tac gga ggg aag aag cag ctg tgg ttc cca tca aac tac gtg gaa gag 2665

Tyr Gly Gly Lys Lys Gln Leu Trp Phe Pro Ser Asn Tyr Val Glu Glu

835 840 845

atg gtc aac ccc gtg gcc ctg gag ccg gag agg gag cac ttg gac gag 2713

Met Val Asn Pro Val Ala Leu Glu Pro Glu Arg Glu His Leu Asp Glu

850 855 860

aac agc ccc cta ggg gac ttg ctg cgg ggg gtc ttg gat gtg ccg gct 2761

Asn Ser Pro Leu Gly Asp Leu Leu Arg Gly Val Leu Asp Val Pro Ala

865 870 875 880

tgt cag att gcc atc cgt cct gag ggc aag aac aac cgg ctc ttc gtc 2809

Cys Gln Ile Ala Ile Arg Pro Glu Gly Lys Asn Asn Arg Leu Phe Val

885 890 895

ttc tcc atc agc atg gcg tcg gtg gcc cac tgg tcc ctg gat gtt gct 2857

Phe Ser Ile Ser Met Ala Ser Val Ala His Trp Ser Leu Asp Val Ala

900 905 910

gcc gac tca cag gag gag ctg cag gac tgg gtg aaa aag atc cgt gaa 2905

Ala Asp Ser Gln Glu Glu Leu Gln Asp Trp Val Lys Lys Ile Arg Glu

915 920 925

gtg gcc cag aca gca gac gcc agg ctc act gaa ggg aag ata atg gaa 2953

Val Ala Gln Thr Ala Asp Ala Arg Leu Thr Glu Gly Lys Ile Met Glu

930 935 940

cgg agg aag aag att gcc ctg gag ctc tct gaa ctt gtc gtc tac tgc 3001

Arg Arg Lys Lys Ile Ala Leu Glu Len Ser Glu Leu Val Val Tyr Cys

945 950 955 960

cgg cct gtt ccc ttt gat gaa gag aag att ggc aca gaa cgt gct tgc 3049

Arg Pro Val Pro Phe Asp Glu Glu Lys Ile Gly Thr Glu Arg Ala Cys

965 970 975

tac cgg gac atg tca tcc ttc ccg gaa acc aag gct gag aaa tac gtg 3097

Tyr Arg Asp Met Ser Ser Phe Pro Glu Thr Lys Ala Glu Lys Tyr Val

980 985 990

aac aag gcc aaa ggc aag aag ttc ctt cag tac aat cga ctg cag ctc 3145

Asn Lys Ala Lys Gly Lys Lys Phe Leu Gln Tyr Asn Arg Leu Gln Leu

995 1000 1005

tcc cgc atc tac ccc aag ggc cag cga ctg gat tcc tcc aac tac 3190

Ser Arg Ile Tyr Pro Lys Gly Gln Arg Leu Asp Ser Ser Asn Tyr

1010 1015 1020

gat cct ttg ccc atg tgg atc tgt ggc agt cag ctt gtg gcc ctc 3235

Asp Pro Leu Pro Met Trp Ile Cys Gly Ser Gln Leu Val Ala Leu

1025 1030 1035

aac ttc cag acc cct gac aag cct atg cag atg aac cag gcc ctc 3280

Asn Phe Gln Thr Pro Asp Lys Pro Met Gln Met Asn Gln Ala Leu

1040 1045 1050

ttc atg acg ggc agg cac tgt ggc tac gtg ctg cag cca agc acc 3325

Phe Met Thr Gly Arg His Cys Gly Tyr Val Leu Gln Pro Ser Thr

1055 1060 1065

atg cgg gat gag gcc ttc gac ccc ttt gac aag agc agc ctc cgc 3370

Met Arg Asp Glu Ala Phe Asp Pro Phe Asp Lys Ser Ser Leu Arg

1070 1075 1080

ggg ctg gag cca tgt gcc atc tct att gag gtg ctg ggg gcc cga 3415

Gly Leu Glu Pro Cys Ala Ile Ser Ile Glu Val Leu Gly Ala Arg

1085 1090 1095

cat ctg cca aag aat ggc cga ggc att gtg tgt cct ttt gtg gag 3460

His Leu Pro Lys Asn Gly Arg Gly Ile Val Cys Pro Phe Val Glu

1100 1105 1110

att gag gtg gct gga gct gag tat gac agc acc aag cag aag aca 3505

Ile Glu Val Ala Gly Ala Glu Tyr Asp Ser Thr Lys Gln Lys Thr

1115 1120 1125

gag ttt gtg gtg gac aat gga ctc aac cct gta tgg cca gcc aag 3550

Glu Phe Val Val Asp Asn Gly Leu Asn Pro Val Trp Pro Ala Lys

1130 1135 1140

ccc ttc cac ttc cag atc agt aac cct gaa ttt gcc ttt ctg cgc 3595

Pro Phe His Phe Gln Ile Ser Asn Pro Glu Phe Ala Phe Leu Arg

1145 1150 1155

ttc gtg gtg tat gag gaa gac atg ttt agt gac cag aat ttc ctg 3640

Phe Val Val Tyr Glu Glu Asp Met Phe Ser Asp Gln Asn Phe Leu

1160 1165 1170

gct cag gct act ttc cca gta aaa ggc ctg aag aca gga tac aga 3685

Ala Gln Ala Thr Phe Pro Val Lys Gly Leu Lys Thr Gly Tyr Arg

1175 1180 1185

gca gtg cct ttg aag aac aac tac agt gag gac ctg gag ttg gcc 3730

Ala Val Pro Leu Lys Asn Asn Tyr Ser Glu Asp Leu Glu Leu Ala

1190 1195 1200

tcc ctg ctg atc aag att gac att ttc cct gcc aag cag gag aat 3775

Ser Leu Leu Ile Lys Ile Asp Ile Phe Pro Ala Lys Gln Glu Asn

1205 1210 1215

ggt gac ctc agt ccc ttc agt ggt acg tcc ctg cgg gag cgg ggc 3820

Gly Asp Leu Ser Pro Phe Ser Gly Thr Ser Leu Arg Glu Arg Gly

1220 1225 1230

tca gat gcc tca ggc cag ctg ttt cat ggc cga gcc cgg gaa ggc 3865

Ser Asp Ala Ser Gly Gln Leu Phe His Gly Arg Ala Arg Glu Gly

1235 1240 1245

tcc ttt gaa tcc cgc tac cag cag ccg ttt gag gac ttc cgc atc 3910

Ser Phe Glu Ser Arg Tyr Gln Gln Pro Phe Glu Asp Phe Arg Ile

1250 1255 1260

tcc cag gag cat ctc gca gac cat ttt gac agt cga gaa cga agg 3955

Ser Gln Glu His Leu Ala Asp His Phe Asp Ser Arg Glu Arg Arg

1265 1270 1275

gcc cca aga agg act cgg gtc aat gga gac aac cgc ctc tag 3997

Ala Pro Arg Arg Thr Arg Val Asn Gly Asp Asn Arg Leu

1280 1285 1290

ttgtacccca gcctcgttgg agagcagcag gtgctgtgcg ccttgtagaa tgccgcgaac 4057

tgggttcttt ggaagcagcc ccctgtggcg gccttccggg tctcgcagcc tgaagcctgg 4117

attccagcag tgaatgctag acagaaacca agccattaat gagatgttat tactgttttg 4177

ggcctccatg ccccagctct ggatgaaggc aaaaactgta ctgtgtttcg cattaagcac 4237

acacatctgg ccctgacttc tggagatgga tccttccatc ttgtggggcc aggaccatgg 4297

ccgaagcccc ttggagagag aggctgcctc agccagtggc acaggagact ccaaggagct 4357

actgacattc ctaagagtgg aggaggagga ggagccttgc tgggccaggg aaacaaagtt 4417

tacattgtcc tgtagcttta aaaccacagc tgggcagggt gagaagctag atgcccctgc 4477

agtttggccc tggagccagg gcagaggaat gtagggcctg catggagaag ggttctgccc 4537

tgcctgagga ggaggacaca gcacaagggc acattgccca tggctgggaa catgacccag 4597

cctgaaagat acaggggatc atgttaaaaa tagcagtatt atttttcgtc tcaatggtat 4657

tgtaactaag ttatttactc ctcctgctcc tcacccctgt agggaaacct tggagaggag 4717

agtggcaggt gggctgcctg ctgtgttaag aggacttagt ttgtgatgta aggcactgtc 4777

aggaatgggg ggcgggccag ggtgggaaga gaagaaatag cagagcctat tttggtgagg 4837

ttttttgttt ttaagtcaaa gaagactcag tatgctttcc ctgaggaatg aaaaagggat 4897

tgaggagttg cctgactcct gggtgggtgg ggtacaggca gttaggtgct gaatgaagct 4957

gccatccttg ctgcagcttc taactggtaa aaagatccag ggatggagat gggaaggtta 5017

gaaaggcagc cctcacctct gaggacagag gccggggtcc aggcccgtgg gcgcaaaggt 5077

gcctcatagc atagccagca ttcagcacac acaaacctac tgcccacatt tgggctcagg 5137

gttggccatt tgctagttct gctgccctct taagatctga ctgccaaata aatcatcctc 5197

atgtcctt 5205

<210>2

<211>1291

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>2

Met Ala Gly Ala Ala Ser Pro Cys Ala Asn Gly Cys Gly Pro Gly Ala

1 5 10 15

Pro Ser Asp Ala Glu Val Leu His Leu Cys Arg Ser Leu Glu Val Gly

20 25 30

Thr Val Met Thr Leu Phe Tyr Ser Lys Lys Ser Gln Arg Pro Glu Arg

35 40 45

Lys Thr Phe Gln Val Lys Leu Glu Thr Arg Gln Ile Thr Trp Ser Arg

50 55 60

Gly Ala Asp Lys Ile Glu Gly Ala Ile Asp Ile Arg Glu Ile Lys Glu

65 70 75 80

Ile Arg Pro Gly Lys Thr Ser Arg Asp Phe Asp Arg Tyr Gln Glu Asp

85 90 95

Pro Ala Phe Arg Pro Asp Gln Ser His Cys Phe Val Ile Leu Tyr Gly

100 105 110

Met Glu Phe Arg Leu Lys Thr Leu Ser Leu Gln Ala Thr Ser Glu Asp

115 120 125

Glu Val Asn Met Trp Ile Lys Gly Leu Thr Trp Leu Met Glu Asp Thr

130 135 140

Leu Gln Ala Pro Thr Pro Leu Gln Ile Glu Arg Trp Leu Arg Lys Gln

145 150 155 160

Phe Tyr Ser Val Asp Arg Asn Arg Glu Asp Arg Ile Ser Ala Lys Asp

165 170 175

Leu Lys Asn Met Leu Ser Gln Val Asn Tyr Arg Val Pro Asn Met Arg

180 185 190

Phe Leu Arg Glu Arg Leu Thr Asp Leu Glu Gln Arg Ser Gly Asp Ile

195 200 205

Thr Tyr Gly Gln Phe Ala Gln Leu Tyr Arg Ser Leu Met Tyr Ser Ala

210 215 220

Gln Lys Thr Met Asp Leu Pro Phe Leu Glu Ala Ser Thr Leu Arg Ala

225 230 235 240

Gly Glu Arg Pro Glu Leu Cys Arg Val Ser Leu Pro Glu Phe Gln Gln

245 250 255

Phe Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Glu Leu Trp Ala Val Asp Arg Leu Gln

260 265 270

Val Gln Glu Phe Met Leu Ser Phe Leu Arg Asp Pro Leu Arg Glu Ile

275 280 285

Glu Glu Pro Tyr Phe Phe Leu Asp Glu Phe Val Thr Phe Leu Phe Ser

290 295 300

Lys Glu Asn Ser Val Trp Asn Ser Gln Leu Asp Ala Val Cys Pro Asp

305 310 315 320

Thr Met Asn Asn Pro Leu Ser His Tyr Trp Ile Ser Ser Ser His Asn

325 330 335

Thr Tyr Leu Thr GlY Asp Gln Phe Ser Ser Glu Ser Ser Leu Glu Ala

340 345 350

Tyr Ala Arg Cys Leu Arg Met Gly Cys Arg Cys Ile Glu Leu Asp Cys

355 360 365

Trp Asp Gly Pro Asp Gly Met Pro Val Ile Tyr His Gly His Thr Leu

370 375 380

Thr Thr Lys Ile Lys Phe Ser Asp Val Leu His Thr Ile Lys Glu His

385 390 395 400

Ala Phe Val Ala Ser Glu Tyr Pro Val Ile Leu Ser Ile Glu Asp His

405 410 415

Cys Ser Ile Ala Gln Gln Arg Asn Met Ala Gln Tyr Phe Lys Lys Val

420 425 430

Leu Gly Asp Thr Leu Leu Thr Lys Pro Val Glu Ile Ser Ala Asp Gly

435 440 445

Leu Pro Ser Pro Asn Gln Leu Lys Arg Lys Ile Leu Ile Lys His Lys

450 455 460

Lys Leu Ala Glu Gly Ser Ala Tyr Glu Glu Val Pro Thr Ser Met Met

465 470 475 480

Tyr Ser Glu Asn Asp Ile Ser Asn Ser Ile Lys Asn Gly Ile Leu Tyr

485 490 495

Leu Glu Asp Pro Val Asn His Glu Trp Tyr Pro His Tyr Phe Val Leu

500 505 510

Thr Ser Ser Lys Ile Tyr Tyr Ser Glu Glu Thr Ser Ser Asp Gln Gly

515 520 525

Asn Glu Asp Glu Glu Glu Pro Lys Glu Val Ser Ser Ser Thr Glu Leu

530 535 540

His Ser Asn Glu Lys Trp Phe His Gly Lys Leu Gly Ala Gly Arg Asp

545 550 555 560

Gly Arg His Ile Ala Glu Arg Leu Leu Thr Glu Tyr Cys Ile Glu Thr

565 570 575

Gly Ala Pro Asp Gly Ser Phe Leu Val Arg Glu Ser Glu Thr Phe Val

580 585 590

Gly Asp Tyr Thr Leu Ser Phe Trp Arg Asn Gly Lys Val Gln His Cys

595 600 605

Arg Ile His Ser Arg Gln Asp Ala Gly Thr Pro Lys Phe Phe Leu Thr

610 615 620

Asp Asn Leu Val Phe Asp Ser Leu Tyr Asp Leu Ile Thr His Tyr Gln

625 630 635 640

Gln Val Pro Leu Arg Cys Asn Glu Phe Glu Met Arg Leu Ser Glu Pro

645 650 655

Val Pro Gln Thr Asn Ala His Glu Ser Lys Glu Trp Tyr His Ala Ser

660 665 670

Leu Thr Arg Ala Gln Ala Glu His Met Leu Met Arg Val Pro Arg Asp

675 680 685

Gly Ala Phe Leu Val Arg Lys Arg Asn Glu Pro Asn Ser Tyr Ala Ile

690 695 700

Ser Phe Arg Ala Glu Gly Lys Ile Lys His Cys Arg Val Gln Gln Glu

705 710 715 720

Gly Gln Thr Val Met Leu Gly Asn Ser Glu Phe Asp Ser Leu Val Asp

725 730 735

Leu Ile Ser Tyr Tyr Glu Lys His Pro Leu Tyr Arg Lys Met Lys Leu

740 745 750

Arg Tyr Pro Ile Asn Glu Glu Ala Leu Glu Lys Ile Gly Thr Ala Glu

755 760 765

Pro Asp Tyr Gly Ala Leu Tyr Glu Gly Arg Asn Pro Gly Phe Tyr Val

770 775 780

Glu Ala Asn Pro Met Pro Thr Phe Lys Cys Ala Val Lys Ala Leu Phe

785 790 795 800

Asp Tyr Lys Ala Gln Arg Glu Asp Glu Leu Thr Phe Ile Lys Ser Ala

805 810 815

Ile Ile Gln Asn Val Glu Lys Gln Glu Gly Gly Trp Trp Arg Gly Asp

820 825 830

Tyr Gly Gly Lys Lys Gln Leu Trp Phe Pro Ser Asn Tyr Val Glu Glu

835 840 845

Met Val Asn Pro Val Ala Leu Glu Pro Glu Arg Glu His Leu Asp Glu

850 855 860

Asn Ser Pro Leu Gly Asp Leu Leu Arg Gly Val Leu Asp Val Pro Ala

865 870 875 880

Cys Gln Ile Ala Ile Arg Pro Glu Gly Lys Asn Asn Arg Leu Phe Val

885 890 895

Phe Ser Ile Ser Met Ala Ser Val Ala His Trp Ser Leu Asp Val Ala

900 905 910

Ala Asp Ser Gln Glu Glu Leu Gln Asp Trp Val Lys Lys Ile Arg Glu

915 920 925

Val Ala Gln Thr Ala Asp Ala Arg Leu Thr Glu Gly Lys Ile Met Glu

930 935 940

Arg Arg Lys Lys Ile Ala Leu Glu Leu Ser Glu Leu Val Val Tyr Cys

945 950 955 960

Arg Pro Val Pro Phe Asp Glu Glu Lys Ile Gly Thr Glu Arg Ala Cys

965 970 975

Tyr Arg Asp Met Ser Ser Phe Pro Glu Thr Lys Ala Glu Lys Tyr Val

980 985 990

Asn Lys Ala Lys Gly Lys Lys Phe Leu Gln Tyr Asn Arg Leu Gln Leu

995 1000 1005

Ser Arg Ile Tyr Pro Lys Gly Gln Arg Leu Asp Ser Ser Asn Tyr

1010 1015 1020

Asp Pro Leu Pro Met Trp Ile Cys Gly Ser Gln Leu Val Ala Leu

1025 1030 1035

Asn Phe Gln Thr Pro Asp Lys Pro Met Gln Met Asn Gln Ala Leu

1040 1045 1050

Phe Met Thr Gly Arg His Cys Gly Tyr Val Leu Gln Pro Ser Thr

1055 1060 1065

Met Arg Asp Glu Ala Phe Asp Pro Phe Asp Lys Ser Ser Leu Arg

1070 1075 1080

Gly Leu Glu Pro Cys Ala Ile Ser Ile Glu Val Leu Gly Ala Arg

1085 1090 1095

His Leu Pro Lys Asn Gly Arg Gly Ile Val Cys Pro Phe Val Glu

1100 1105 1110

Ile Glu Val Ala Gly Ala Glu Tyr Asp Ser Thr Lys Gln Lys Thr

1115 1120 1125

Glu Phe Val Val Asp Asn Gly Leu Asn Pro Val Trp Pro Ala Lys

1130 1135 1140

Pro Phe His Phe Gln Ile Ser Asn Pro Glu Phe Ala Phe Leu Arg

1145 1150 1155

Phe Val Val Tyr Glu Glu Asp Met Phe Ser Asp Gln Asn Phe Leu

1160 1165 1170

Ala Gln Ala Thr Phe Pro Val Lys Gly Leu Lys Thr Gly Tyr Arg

1175 1180 1185

Ala Val Pro Leu Lys Asn Asn Tyr Ser Glu Asp Leu Glu Leu Ala

1190 1195 1200

Ser Leu Leu Ile Lys Ile Asp Ile Phe Pro Ala Lys Gln Glu Asn

1205 1210 1215

Gly Asp Leu Ser Pro Phe Ser Gly Thr Ser Leu Arg Glu Arg Gly

1220 1225 1230

Ser Asp Ala Ser Gly Gln Leu Phe His Gly Arg Ala Arg Glu Gly

1235 1240 1245

Ser Phe Glu Ser Arg Tyr Gln Gln Pro Phe Glu Asp Phe Arg Ile

1250 1255 1260

Ser Gln Glu His Leu Ala Asp His Phe Asp Ser Arg Glu Arg Arg

1265 1270 1275

Ala Pro Arg Arg Thr Arg Val Asn Gly Asp Asn Arg Leu

1280 1285 1290

<210>3

<211>4242

<212>DNA

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>CDS

<222>(153)..(3911)

<400>3

gaattcggcg ctgagtgacc cgagtcggga cgcgggctgc gcgcgcggga ccccggagcc 60

caaacccggg gcaggcgggc agctgtgccc gggcggcacg gccagcttcc tgatttctcc 120

cgattccttc cttctccctg gagcggccga ca atg tcc acc acg gtc aat gta 173

Met Ser Thr Thr Val Asn Val

1 5

gat tcc ctt gcg gaa tat gag aag agc cag atc aag aga gcc ctg gag 221

Asp Ser Leu Ala Glu Tyr Glu Lys Ser Gln Ile Lys Arg Ala Leu Glu

10 15 20

ctg ggg acg gtg atg act gtg ttc agc ttc cgc aag tcc acc ccc gag 269

Leu Gly Thr Val Met Thr Val Phe Ser Phe Arg Lys Ser Thr Pro Glu

25 30 35

cgg aga acc gtc cag gtg atc atg gag acg cgg cag gtg gcc tgg agc 317

Arg Arg Thr Val Gln Val Ile Met Glu Thr Arg Gln Val Ala Trp Ser

40 45 50 55

aag acc gcc gac aag atc gag ggc ttc ttg gat atc atg gaa ata aaa 365

Lys Thr Ala Asp Lys Ile Glu Gly Phe Leu Asp Ile Met Glu Ile Lys

60 65 70

gaa atc cgc cca ggg aag aac tcc aaa gat ttc gag cga gca aaa gca 413

Glu Ile Arg Pro Gly Lys Asn Ser Lys Asp Phe Glu Arg Ala Lys Ala

75 80 85

gtt cgc cag aaa gaa gac tgc tgc ttc acc atc cta tat ggc act cag 461

Val Arg Gln Lys Glu Asp Cys Cys Phe Thr Ile Leu Tyr Gly Thr Gln

90 95 100

ttc gtc ctc agc acg ctc agc ttg gca gct gac tct aaa gag gat gca 509

Phe Val Leu Ser Thr Leu Ser Leu Ala Ala Asp Ser Lys Glu Asp Ala

105 110 115

gtt aac tgg ctc tct ggc ttg aaa atc tta cac cag gaa gcg atg aat 557

Val Asn Trp Leu Ser Gly Leu Lys Ile Leu His Gln Glu Ala Met Asn

120 125 130 135

gcg tcc acg ccc acc att atc gag agt tgg ctg aga aag cag ata tat 605

Ala Ser Thr Pro Thr Ile Ile Glu Ser Trp Leu Arg Lys Gln Ile Tyr

140 145 150

tct gtg gat caa acc aga aga aac agc atc agt ctc cga gag ttg aag 653

Ser Val Asp Gln Thr Arg Arg Asn Ser Ile Ser Leu Arg Glu Leu Lys

155 160 165

acc atc ttg ccc ctg atc aac ttt aaa gtg agc agt gcc aag ttc ctt 701

Thr Ile Leu Pro Leu Ile Asn Phe Lys Val Ser Ser Ala Lys Phe Leu

170 175 180

aaa gat aag ttt gtg gaa ata gga gca cac aaa gat gag ctc agc ttt 749

Lys Asp Lys Phe Val Glu Ile Gly Ala His Lys Asp Glu Leu Ser Phe

185 190 195

gaa cag ttc cat ctc ttc tat aaa aaa ctt atg ttt gaa cag caa aaa 797

Glu Gln Phe His Leu Phe Tyr Lys Lys Leu Met Phe Glu Gln Gln Lys

200 205 210 215

tcg att ctc gat gaa ttc aaa aag gat tcg tcc gtg ttc atc ctg ggg 845

Ser Ile Leu Asp Glu Phe Lys Lys Asp Ser Ser Val Phe Ile Leu Gly

220 225 230

aac sct gac agg ccg gat gcc tct gct gtt tac ctg cat gac ttc cag 893

Asn Thr Asp Arg Pro Asp Ala Ser Ala Val Tyr Leu His Asp Phe Gln

235 240 245

agg ttt ctc ata cat gaa cag cag gag cat tgg gct cag gat ctg aac 941

Arg Phe Leu Ile His Glu Gln Gln Glu His Trp Ala Gln Asp Leu Asn

250 255 260

aaa gtc cgt gag cgg atg aca aag ttc att gat gac acc atg cgt gaa 989

Lys Val Arg Glu Arg Met Thr Lys Phe Ile Asp Asp Thr Met Arg Glu

265 270 275

act gct gag cct ttc ttg ttt gtg gat gag ttc ctc acg tac ctg ttt 1037

Thr Ala Glu Pro Phe Lau Phe Val Asp Glu Phe Leu Thr Tyr Leu Phe

280 285 290 295

tca cga gaa aac agc atc tgg gat gag aag tat gac gcg gtg gac atg 1085

Ser Arg Glu Asn Ser Ile Trp Asp Glu Lys Tyr Asp Ala Val Asp Met

300 305 310

cag gac atg aac aac ccc ctg tct cat tac tgg atc tcc tcg tca cat 1133

Gln Asp Met Asn Asn Pro Leu Ser His Tyr Trp Ile Ser Ser Ser His

315 320 325

aac acg tac ctt aca ggt gac cag ctg cgg agc gag tcg tcc cca gaa 1181

Asn Thr Tyr Leu Thr Gly Asp Gln Leu Arg Ser Glu Ser Ser Pro Glu

330 335 340

gct tac atc cgc tgc ctg cgc atg ggc tgt cgc tgc att gaa ctg gac 1229

Ala Tyr Ile Arg Cys Leu Arg Met Gly Cys Arg Cys Ile Glu Leu Asp

345 350 355

tgc tgg gac ggg ccc gat ggg aag ccg gtc atc tac cat ggc tgg acg 1277

Cys Trp Asp Gly Pro Asp Gly Lys Pro Val Ile Tyr His Gly Trp Thr

360 365 370 375

cgg act acc aag atc aag ttt gat gac gtc gtg cag gcc atc aaa gac 1325

Arg Thr Thr Lys Ile Lys Phe Asp Asp Val Val Gln Ala Ile Lys Asp

380 385 390

cac gcc ttt gtt acc tcg agc ttc cca gtg atc ctg tcc atc gag gag 1373

His Ala Phe Val Thr Ser Ser Phe Pro Val Ile Leu Ser Ile Glu Glu

395 400 405

cac tgc agc gtg gag caa cag cgt cac atg gcc aag gcc ttc aag gaa 1421

His Cys Ser Val Glu Gln Gln Arg His Met Ala Lys Ala Phe Lys Glu

410 415 420

gta ttt ggc gac ctg ctg ttg acg aag ccc acg gag gcc agt gct gac 1469

Val Phe Gly Asp Leu Leu Leu Thr Lys Pro Thr Glu Ala Ser Ala Asp

425 430 435

cag ctg ccc tcg ccc agc cag ctg cgg gag aag atc atc atc aag cat 1517

Gln Leu Pro Ser Pro Ser Gln Leu Arg Glu Lys Ile Ile Ile Lys His

440 445 450 455

aag aag ctg ggc ccc cga ggc gat gtg gat gtc aac atg gag gac aag 1565

Lys Lys Leu Gly Pro Arg Gly Asp Val Asp Val Asn Met Glu Asp Lys

460 465 470

aag gac gaa cac aag caa cag ggg gag ctg tac atg tgg gat tcc att 1613

Lys Asp Glu His Lys Gln Gln Gly Glu Leu Tyr Met Trp Asp Ser Ile

475 480 485

gac cag aaa tgg act cgg cac tsc tgc gcc att gct gat gcc aag ctg 1661

Asp Gln Lys Trp Thr Arg His Tyr Cys Ala Ile Ala Asp Ala Lys Leu

490 495 500

tcc ttc agt gat gac att gaa cag act atg gag gag gaa gtg ccc cag 1709

Ser Phe Ser Asp Asp Ile Glu Gln Thr Met Glu Glu Glu Val Pro Gln

505 510 515

gat ata ccc cct aca gaa cta cat ttt ggg gag aaa tgg ttc cac aag 1757

Asp Ile Pro Pro Thr Glu Leu His Phe Gly Glu Lys Trp Phe His Lys

520 525 530 535

aag gtg gag aag agg acg agt gcc gag aag ttg ctg cag gaa tac tgc 1805

Lys Val Glu Lys Arg Thr Ser Ala Glu Lys Leu Leu Gln Glu Tyr Cys

540 545 550

atg gag acg ggg ggc aag gat ggc acc ttc ctg gtt cgg gag agc gag 1853

Met Glu Thr Gly Gly Lys Asp Gly Thr Phe Leu Val Arg Glu Ser Glu

555 560 565

acc ttc ccc aat gac tac acc ctg tcc ttc tgg cgg tca ggc cgg gtc 1901

Thr Phe Pro Asn Asp Tyr Thr Leu Ser Phe Trp Arg Ser Gly Arg Val

570 575 580

cag cac tgc cgg atc cgc tcc acc atg gag ggc ggg acc ctg aaa tac 1949

Gln His Cys Arg Ile Arg Ser Thr Met Glu Gly Gly Thr Leu Lys Tyr

585 590 595

tac ttg act gac aac ctg agg ttc agg agg atg tat gcc ctc atc cag 1997

Tyr Leu Thr Asp Asn Leu Arg Phe Arg Arg Met Tyr Ala Leu Ile Gln

600 605 610 615

cac tac cgc gag acg cac ctg ccg tgc gcc gag ttc gag ctg cgg ctc 2045

His Tyr Arg Glu Thr His Leu Pro Cys Ala Glu Phe Glu Leu Arg Leu

620 625 630

acg gac cct gtg ccc aac ccc aac ccc cac gag tcc aag ccg tgg tac 2093

Thr Asp Pro Val Pro Asn Pro Asn Pro His Glu Ser Lys Pro Trp Tyr

635 640 645

tat gac agc ctg agc cgc gga gag gca gag gac atg ctg atg agg att 2141

Tyr Asp Ser Leu Ser Arg Gly Glu Ala Glu Asp Met Leu Met Arg Ile

650 655 660

ccc cgg gac ggg gcc ttc ctg atc cgg aag cga gag ggg agc gac tcc 2189

Pro Arg Asp Gly Ala Phe Leu Ile Arg Lys Arg Glu Gly Ser Asp Ser

665 670 675

tat gcc atc acc ttc agg gct agg ggc aag gta aag cat tgt cgc atc 2237

Tyr Ala Ile Thr Phe Arg Ala Arg Gly Lys Val Lys His Cys Arg Ile

680 685 690 695

aac cgg gac ggc cgg cac ttt gtg ctg ggg acc tcc gcc tat ttt gag 2285

Asn Arg Asp Gly Arg His Phe Val Leu Gly Thr Ser Ala Tyr Phe Glu

700 705 710

agt ctg gtg gag ctc gtc agt tac tac gag aag cat tca ctc tac cga 2333

Ser Leu Val Glu Leu Val Ser Tyr Tyr Glu Lys His Ser Leu Tyr Arg

715 720 725

aag atg aga ctg cgc tac ccc gtg acc ccc gag ctc ctg gag cgc tac 2381

Lys Met Arg Leu Arg Tyr Pro Val Thr Pro Glu Leu Leu Glu Arg Tyr

730 735 740

aat acg gaa aga gat ata aac tcc ctc tac gac gtc agc aga atg tat 2429

Asn Thr Glu Arg Asp Ile Asn Ser Leu Tyr Asp Val Ser Arg Met Tyr

745 750 755

gtg gat ccc agt gaa atc aat ccg tcc atg cct cag aga acc gtg aaa 2477

Val Asp Pro Ser Glu Ile Asn Pro Ser Met Pro Gln Arg Thr Val Lys

760 765 770 775

gct ctg tat gac tac aaa gcc aag cga agc gat gag ctg agc ttc tgc 2525

Ala Leu Tyr Asp Tyr Lys Ala Lys Arg Ser Asp Glu Leu Ser Phe Cys

780 785 790

cgt ggt gcc ctc atc cac aat gtc tcc aag gag ccc ggg ggc tgg tgg 2573

Arg Gly Ala Leu Ile His Asn Val Ser Lys Glu Pro Gly Gly Trp Trp

795 800 805

aaa gga gac tat gga acc agg atc cag cag tac ttc cca tcc aac tac 2621

Lys Gly Asp Tyr Gly Thr Arg Ile Gln Gln Tyr Phe Pro Ser Asn Tyr

810 815 820

gtc gag gac atc tca act gca gac ttc gag gag cta gaa aag cag att 2669

Val Glu Asp Ile Ser Thr Ala Asp Phe Glu Glu Leu Glu Lys Gln Ile

825 830 835

att gaa gac aat ccc tta ggg tct ctt tgc aga gga ata ttg gac ctc 2717

Ile Glu Asp Asn Pro Leu Gly Ser Leu Cys Arg Gly Ile Leu Asp Leu

840 845 850 855

aat acc tat aac gtc gtg aaa gcc cct cag gga aaa aac cag aag tcc 2765

Asn Thr Tyr Asn Val Val Lys Ala Pro Gln Gly Lys Asn Gln Lys Ser

860 865 870

ttt gtc ttc atc ctg gag ccc aag gag cag ggc gat cct ccg gtg gag 2813

Phe Val Phe Ile Leu Glu Pro Lys Glu Gln Gly Asp Pro Pro Val Glu

875 880 885

ttt gcc aca gac agg gtg gag gag ctc ttt gag tgg ttt cag agc atc 286l

Phe Ala Thr Asp Arg Val Glu Glu Leu Phe Glu Trp Phe Gln Ser Ile

890 895 900

cga gag atc acg tgg aag att gac agc aag gag aac aac atg aag tac 2909

Arg Glu Ile Thr Trp Lys Ile Asp Ser Lys Glu Asn Asn Met Lys Tyr

905 910 915

tgg gag aag aac cag tcc atc gcc atc gag ctc tct gac ctg gtt gtc 2957

Trp Glu Lys Asn Gln Ser Ile Ala Ile Glu Leu Ser Asp Leu Val Val

920 925 930 935

tac tgc aaa cca acc agc aaa acc aag gac aac tta gaa aat cct gac 3005

Tyr Cys Lys Pro Thr Ser Lys Thr Lys Asp Asn Leu Glu Asn Pro Asp

940 945 950

ttc cga gaa atc cgc tcc ttt gtg gag acg aag gct gac agc atc atc 3053

Phe Arg Glu Ile Arg Ser Phe Val Glu Thr Lys Ala Asp Ser Ile Ile

955 960 965

aga cag aag ccc gtc gac ctc ctg aag tac aat caa aag ggc ctg acc 3101

Arg Gln Lys Pro Val Asp Leu Leu Lys Tyr Asn Gln Lys Gly Leu Thr

970 975 980

cgc gtc tac cca aag gga caa aga gtt gac tct tca aac tac gac ccc 3149

Arg Val Tyr Pro Lys Gly Gln Arg Val Asp Ser Ser Asn Tyr Asp Pro

985 990 995

ttc cgc ctc tgg ctg tgc ggt tct cag atg gtg gca ctc aat ttc 3194

Phe Arg Leu Trp Leu Cys Gly Ser Gln Met Val Ala Leu Asn Phe

1000 1005 1010

cag acg gca gat aag tac atg cag atg aat cac gca ttg ttt tct 3239

Gln Thr Ala Asp Lys Tyr Met Gln Met Asn His Ala Leu Phe Ser

1015 1020 1025

ctc aac ggg cgc acg ggc tac gtt ctg cag cct gag agc atg agg 3284

Leu Asn Gly Arg Thr Gly Tyr Val Leu Gln Pro Glu Ser Met Arg

1030 1035 1040

aca gag aaa tat gac ccg atg cca ccc gag tcc cag agg aag atc 3329

Thr Glu Lys Tyr Asp Pro Met Pro Pro Glu Ser Gln Arg Lys Ile

1045 1050 1055

ctg atg acg ctg aca gtc aag gtt ctc ggt gct cgc cat ctc ccc 3374

Leu Met Thr Leu Thr Val Lys Val Leu Gly Ala Arg His Leu Pro

1060 1065 1070

aaa ctt gga cga agt att gcc tgt ccc ttt gta gaa gtg gag atc 3419

Lys Leu Gly Arg Ser Ile Ala Cys Pro Phe Val Glu Val Glu Ile

1075 1080 1085

tgt gga gcc gag tat ggc aac aac aag ttc aag acg acg gtt gtg 3464

Cys Gly Ala Glu Tyr Gly Asn Asn Lys Phe Lys Thr Thr Val Val

1090 1095 1100

aat gat aat ggc ctc agc cct atc tgg gct cca aca cag gag aag 3509

Asn Asp Asn Gly Leu Ser Pro Ile Trp Ala Pro Thr Gln Glu Lys

1105 1110 1115

gtg aca ttt gaa att tat gac cca aac ctg gca ttt ctg cgc ttt 3554

Val Thr Phe Glu Ile Tyr Asp Pro Asn Leu Ala Phe Leu Arg Phe

1120 1125 1130

gtg gtt tat gaa gaa gat atg ttc agc gat ccc aac ttt ctt gct 3599

Val Val Tyr Glu Glu Asp Met Phe Ser Asp Pro Asn Phe Leu Ala

1135 1140 1145

cat gcc act tac ccc att aaa gca gtc aaa tca gga ttc agg tcc 3644

His Ala Thr Tyr Pro Ile Lys Ala Val Lys Ser Gly Phe Arg Ser

1150 1155 1160

gtt cct ctg aag aat ggg tac agc gag gac ata gag ctg gct tcc 3689

Val Pro Leu Lys Asn Gly Tyr Ser Glu Asp Ile Glu Leu Ala Ser

1165 1170 1175

ctc ctg gtt ttc tgt gag atg cgg cca gtc ctg gag agc gaa gag 3734

Leu Leu Val Phe Cys Glu Met Arg Pro Val Leu Glu Ser Glu Glu

1180 1185 1190

gaa ctt tac tcc tcc tgt cgc cag ctg agg agg cgg caa gaa gaa 3779

Glu Leu Tyr Ser Ser Cys Arg Gln Leu Arg Arg Arg Gln Glu Glu

1195 1200 1205

ctg aac aac cag ctc ttt ctg tat gac aca cac cag aac ttg cgc 3824

Leu Asn Asn Gln Leu Phe Leu Tyr Asp Thr His Gln Asn Leu Arg

1210 1215 1220

aat gcc aac cgg gat gcc ctg gtt aaa gag ttc agt gtt aat gag 3869

Asn Ala Asn Arg Asp Ala Leu Val Lys Glu Phe Ser Val Asn Glu

1225 1230 1235

aac cac tcc agc tgt acc agg aga aat gca aca aga ggt taa 3911

Asn His Ser Ser Cys Thr Arg Arg Asn Ala Thr Arg Gly

1240 1245 1250

gagagaagag agtcagcaac agcaagtttt actcatagaa gctggggtat gtgtgtaagg 3971

gtattgtgtg tgtgcgcatg tgtgtttgca tgtaggagaa cgtgccctat tcacactctg 4031

ggaagacgct aatctgtgac atcttttctt caagcctgcc atcaaggaca tttcttaaga 4091

cccaactggc atgagttggg gtaatttcct attattttca tcttggacaa cttctaactt 4151

atatctttat agaggattcc ccaaaatgtg ctcctcattt ttggcctctc atgttccaaa 4211

cctcattgaa taaaaagcaa tgaaaacctt g 4242

<210>4

<21l>1252

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<400>4

Met Ser Thr Thr Val Asn Val Asp Ser Leu Ala Glu Tyr Glu Lys Ser

1 5 10 15

Gln Ile Lys Arg Ala Leu Glu Leu Gly Thr Val Met Thr Val Phe Ser

20 25 30

Phe Arg Lys Ser Thr Pro Glu Arg Arg Thr Val Gln Val Ile Met Glu

35 40 45

Thr Arg Gln Val Ala Trp Ser Lys Thr Ala Asp Lys Ile Glu Gly Phe

50 55 60

Leu Asp Ile Met Glu Ile Lys Glu Ile Arg Pro Gly Lys Asn Ser Lys

65 70 75 80

Asp Phe Glu Arg Ala Lys Ala Val Arg Gln Lys Glu Asp Cys Cys Phe

85 90 95

Thr Ile Leu Tyr Gly Thr Gln Phe Val Leu Ser Thr Leu Ser Leu Ala

100 105 110

Ala Asp Ser Lys Glu Asp Ala Val Asn Trp Leu Ser Gly Leu Lys Ile

115 120 125

Leu His Gln Glu Ala Met Asn Ala Ser Thr Pro Thr Ile Ile Glu Ser

130 135 140

Trp Leu Arg Lys Gln Ile Tyr Ser Val Asp Gln Thr Arg Arg Asn Ser

145 150 155 160

Ile Ser Leu Arg Glu Leu Lys Thr Ile Leu Pro Leu Ile Asn Phe Lys

165 170 175

Val Ser Ser Ala Lys Phe Leu Lys Asp Lys Phe Val Glu Ile Gly Ala

180 185 190

His Lys Asp Glu Leu Ser Phe Glu Gln Phe His Leu Phe Tyr Lys Lys

195 200 205

Leu Met Phe Glu Gln Gln Lys Ser Ile Leu Asp Glu Phe Lys Lys Asp

210 215 220

Ser Ser Val Phe Ile Leu Gly Asn Thr Asp Arg Pro Asp Ala Ser Ala

225 230 235 240

Val Tyr Leu His Asp Phe Gln Arg Phe Leu Ile His Glu Gln Gln Glu

245 250 255

His Trp Ala Gln Asp Leu Asn Lys Val Arg Glu Arg Met Thr Lys Phe

260 265 270

Ile Asp Asp Thr Met Arg Glu Thr Ala Glu Pro Phe Leu Phe Val Asp

275 280 285

Glu Phe Leu Thr Tyr Leu Phe Ser Arg Glu Asn Ser Ile Trp Asp Glu

290 295 300

Lys Tyr Asp Ala Val Asp Met Gln Asp Met Asn Asn Pro Leu Ser His

305 310 315 320

Tyr Trp Ile Ser Ser Ser His Asn Thr Tyr Leu Thr Gly Asp Gln Leu

325 330 335

Arg Ser Glu Ser Ser Pro Glu Ala Tyr Ile Arg Cys Leu Arg Met Gly

340 345 350

Cys Arg Cys Ile Glu Leu Asp Cys Trp Asp Gly Pro Asp Gly Lys Pro

355 360 365

Val Ile Tyr His Gly Trp Thr Arg Thr Thr Lys Ile Lys Phe Asp Asp

370 375 380

Val Val Gln Ala Ile Lys Asp His Ala Phe Val Thr Ser Ser Phe Pro

385 390 395 400

Val Ile Leu Ser Ile Glu Glu His Cys Ser Val Glu Gln Gln Arg His

405 410 415

Met Ala Lys Ala Phe Lys Glu Val Phe Gly Asp Leu Leu Leu Thr Lys

420 425 430

Pro Thr Glu Ala Ser Ala Asp Gln Leu Pro Ser Pro Ser Gln Leu Arg

435 440 445

Glu Lys Ile Ile Ile Lys His Lys Lys Leu Gly Pro Arg Gly Asp Val

450 455 460

Asp Val Asn Met Glu Asp Lys Lys Asp Glu His Lys Gln Gln Gly Glu

465 470 475 480

Leu Tyr Met Trp Asp Ser Ile Asp Gln Lys Trp Thr Arg His Tyr Cys

485 490 495

Ala Ile Ala Asp Ala Lys Leu Ser Phe Ser Asp Asp Ile Glu Gln Thr

500 505 510

Met Glu Glu Glu Val Pro Gln Asp Ile Pro Pro Thr Glu Leu His Phe

515 520 525

Gly Glu Lys Trp Phe His Lys Lys Val Glu Lys Arg Thr Ser Ala Glu

530 535 540

Lys Leu Leu Gln Glu Tyr Cys Met Glu Thr Gly Gly Lys Asp Gly Thr

545 550 555 560

Phe Leu Val Arg Glu Ser Glu Thr Phe Pro Asn Asp Tyr Thr Leu Ser

565 570 575

Phe Trp Arg Ser Gly Arg Val Gln His Cys Arg Ile Arg Ser Thr Met

580 585 590

Glu Gly Gly Thr Leu Lys Tyr Tyr Leu Thr Asp Asn Leu Arg Phe Arg

595 600 605

Arg Met Tyr Ala Leu Ile Gln His Tyr Arg Glu Thr His Leu Pro Cys

610 615 620

Ala Glu Phe Glu Leu Arg Leu Thr Asp Pro Val Pro Asn Pro Asn Pro

625 630 635 640

His Glu Ser Lys Pro Trp Tyr Tyr Asp Ser Leu Ser Arg Gly Glu Ala

645 650 655

Glu Asp Met Leu Met Arg Ile Pro Arg Asp Gly Ala Phe Leu Ile Arg

660 665 670

Lys Arg Glu Gly Ser Asp Ser Tyr Ala Ile Thr Phe Arg Ala Arg Gly

675 680 685

Lys Val Lys His Cys Arg Ile Asn Arg Asp Gly Arg His Phe Val Leu

690 695 700

Gly Thr Ser Ala Tyr Phe Glu Ser Leu Val Glu Leu Val Ser Tyr Tyr

705 710 715 720

Glu Lys His Ser Leu Tyr Arg Lys Met Arg Leu Arg Tyr Pro Val Thr

725 730 735

Pro Glu Leu Leu Glu Arg Tyr Asn Thr Glu Arg Asp Ile Asn Ser Leu

740 745 750

Tyr Asp Val Ser Arg Met Tyr Val Asp Pro Ser Glu Ile Asn Pro Ser

755 760 765

Met Pro Gln Arg Thr Val Lys Ala Leu Tyr Asp Tyr Lys Ala Lys Arg

770 775 780

Ser Asp Glu Leu Ser Phe Cys Arg Gly Ala Leu Ile His Asn Val Ser

785 790 795 800

Lys Glu Pro Gly Gly Trp Trp Lys Gly Asp Tyr Gly Thr Arg Ile Gln

805 810 815

Gln Tyr Phe Pro Ser Asn Tyr Val Glu Asp Ile Ser Thr Ala Asp Phe

820 825 830

Glu Glu Leu Glu Lys Gln Ile Ile Glu Asp Asn Pro Leu Gly Ser Leu

835 840 845

Cys Arg Gly Ile Leu Asp Leu Asn Thr Tyr Asn Val Val Lys Ala Pro

850 855 860

Gln Gly Lys Asn Gln Lys Ser Phe Val Phe Ile Leu Glu Pro Lys Glu

865 870 875 880

Gln Gly Asp Pro Pro Val Glu Phe Ala Thr Asp Arg Val Glu Glu Leu

885 890 895

Phe Glu Trp Phe Gln Ser Ile Arg Glu Ile Thr Trp Lys Ile Asp Ser

900 905 910

Lys Glu Asn Asn Met Lys Tyr Trp Glu Lys Asn Gln Ser Ile Ala Ile

915 920 925

Glu Leu Ser Asp Leu Val Val Tyr Cys Lys Pro Thr Ser Lys Thr Lys

930 935 940

Asp Asn Leu Glu Asn Pro Asp Phe Arg Glu Ile Arg Ser Phe Val Glu

945 950 955 960

Thr Lys Ala Asp Ser Ile Ile Arg Gln Lys Pro Val Asp Leu Leu Lys

965 970 975

Tyr Asn Gln Lys Gly Leu Thr Arg Val Tyr Pro Lys Gly Gln Arg Val

980 985 990

Asp Ser Ser Asn Tyr Asp Pro Phe Arg Leu Trp Leu Cys Gly Ser Gln

995 1000 1005

Met Val Ala Leu Asn Phe Gln Thr Ala Asp Lys Tyr Met Gln Met

1010 1015 1020

ASn His Ala Leu Phe Ser Leu Asn Gly Arg Thr Gly Tyr Val Leu

1025 1030 1035

Gln Pro Glu Ser Met Arg Thr Glu Lys Tyr Asp Pro Met Pro Pro

1040 1045 1050

Glu Ser Gln Arg Lys Ile Leu Met Thr Leu Thr Val Lys Val Leu

1055 1060 1065

Gly Ala Arg His Leu Pro Lys Leu Gly Arg Ser Ile Ala Cys Pro

1070 1075 1080

Phe Val Glu Val Glu Ile Cys Gly Ala Glu Tyr Gly Asn Asr Lys

1085 1090 1095

Phe Lys Thr Thr Val Val Asn Asp Asn Gly Leu Ser Pro Ile Trp

1100 1105 1110

Ala Pro Thr Gln Glu Lys Val Thr Phe Glu Ile Tyr Asp Pro Asn

1115 1120 1125

Leu Ala Phe Leu Arg Phe Val Val Tyr Glu Glu Asp Met Phe Ser

1130 1135 1140

Asp Pro Asn Phe Leu Ala His Ala Thr Tyr Pro Ile Lys Ala Val

1145 1150 1155

Lys Ser Gly Phe Arg Ser Val Pro Leu Lys Asn Gly Tyr Ser Glu

1160 1165 1170

Asp Ile Glu Leu Ala Ser Leu Leu Val Phe Cys Glu Met Arg Pro

1175 1180 1185

Val Leu Glu Ser Glu Glu Glu Leu Tyr Ser Ser Cys Arg Gln Leu

1190 1195 1200

Arg Arg Arg Gln Glu Glu Leu Asn Asn Gln Leu Phe Leu Tyr Asp

1205 1210 1215

Thr His Gln Asn Leu Arg Asn Ala Asn Arg Asp Ala Leu Val Lys

1220 1225 1230

Glu Phe Ser Val Asn Glu Asn His Ser Ser Cys Thr Arg Arg Asn

1235 1240 1245

Ala Thr Arg Gly

1250

Claims

1.治疗或预防患者疼痛的方法，该方法包括抑制对象体内的磷脂酶C_γ(PLC_γ)活性或表达。

2.如权利要求1的方法，其中，所述对象是人。

3.如权利要求1的方法，其中，所述方法包括调节中枢神经系统(CNS)细胞或组织中PLC_γ的活性或表达。

4.如权利要求3的方法，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

5.如权利要求3的方法，其中，疼痛信号源自外周神经系统(PNS)细胞或通向CNS细胞的感觉纤维跨突触。

6.如权利要求1的方法，其中，所述疼痛是神经性疼痛。

7.如权利要求6的方法，其中，所述神经性疼痛与神经或导管损伤。

8.如权利要求6的方法，其中，所述神经性疼痛选自下列一组：躯体和内脏疼痛。

9.如权利要求1的方法，其中，所述疼痛选自下列一组：慢性炎性疼痛，与关节炎相关的疼痛，纤维肌痛，后背疼痛，与癌症疼痛，与消化系统疾病相关的疼痛，与克罗恩氏病相关的疼痛，与自身免疫性疾病相关的疼痛，与内分泌病相关的疼痛，与糖尿病神经病变相关的疼痛，幻肢疼痛，自发痛，慢性手术后疼痛，慢性颞下颌疼痛，灼痛，疱疹后神经痛，AIDS-相关的疼痛，I型和II型复杂区域性疼痛综合症，三叉神经痛，慢性后背疼痛，与脊髓损伤相关的疼痛和复发性急性痛。

10.治疗或预防患者疼痛的方法，该方法包括给所述对象服用能够抑制对象体内PLC_γ的活性或表达的制剂。

11.如权利要求10的方法，其中，所述制剂是PLC_γ抑制剂。

12.如权利要求11的方法，其中，所述PLC_γ抑制剂选自下列一组：三环癸烷-9-基-黄原酸盐，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸胆碱，硫酸新霉素，精胺四氢氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。

13.如权利要求11的方法，其中，所述PLC_γ抑制剂是三环癸烷-9-基-黄原酸盐。

14.如权利要求10的方法，其中，所述制剂是抗-PLC_γ抗体。

15.如权利要求10的方法，其中，所述制剂选自反义分子，核糖酶，siRNA，siRNA-样分子，和配体与PLC_γ结合的抑制剂。

16.如权利要求15的方法，其中，所述反义分子是大体上互补于编码PLC_γ的mRNA的一部分的核酸。

17.如权利要求16的方法，其中，所述反义分子是大体上互补于包括能够编码具有选自SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的核酸的核酸。

18.如权利要求16的方法，其中，所述反义分子是大体上互补于包括选自SEQID NO：1和SEQ ID NO：3的核苷酸序列的核酸的核酸。

19.如权利要求16的方法，其中，所述部分mRNA包括至少5个连续的碱基。

20.如权利要求16的方法，其中，所述其中，所述siRNA或siRNA-样分子大体上与编码PLC_γ的mRNA的一部分相同。

21.如权利要求20的方法，其中，所述siRNA或siRNA-样分子大体上与相当于能够编码具有选自SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的多肽的DNA序列的一部分mRNA相同。

22.如权利要求20的方法，其中，所述siRNA或siRNA-样分子大体上与相当于选自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3的DNA序列的一部分mRNA相同。

23.如权利要求10的方法，其中，所述方法包括调节CNS细胞或组织中PLC_γ的活性或表达。

24.如权利要求23的方法，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

25.如权利要求23的方法，其中，疼痛信号源自PNS细胞或通向CNS细胞的感觉纤维跨突触。

26.如权利要求10的方法，其中，所述疼痛是神经性疼痛。

27.如权利要求26的方法，其中，所述神经性疼痛与神经或导管损伤。

28.如权利要求26的方法，其中，所述神经性疼痛选自下列一组：躯体和内脏疼痛。

29.如权利要求10的方法，其中，所述疼痛选自下列一组：慢性炎性疼痛，与关节炎相关的疼痛，纤维肌痛，后背疼痛，与癌症疼痛，与消化系统疾病相关的疼痛，与克罗恩氏病相关的疼痛，与自身免疫性疾病相关的疼痛，与内分泌病相关的疼痛，与糖尿病神经病变相关的疼痛，幻肢疼痛，自发痛，慢性手术后疼痛，慢性颞下颌疼痛，灼痛，疱疹后神经痛，AIDS-相关的疼痛，I型和II型复杂区域性疼痛综合症，三叉神经痛，慢性后背疼痛，与脊髓损伤相关的疼痛和复发性急性痛。

30.治疗或预防患者疼痛的方法，包括给所述对象服用组合物，包括：

能够抑制对象体内PLC_γ的活性或表达的制剂；和

可以药用的载体。

31.如权利要求30的方法，其中，所述制剂是PLC_γ抑制剂。

32.如权利要求31的方法，其中，所述PLC_γ抑制剂选自下列一组：三环癸烷-9-基-黄原酸盐，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸胆碱，硫酸新霉素，精胺四氢氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。

33.如权利要求31的方法，其中，所述PLC_γ抑制剂是三环癸烷-9-基-黄原酸盐。

34.如权利要求30的方法，其中，所述制剂是抗-PLC_γ抗体。

35.如权利要求30的方法，其中，所述制剂选自反义分子，核糖酶，siRNA，siRNA-样分子和配体与PLC_γ结合的抑制剂。

36.如权利要求35的方法，其中，所述反义分子是大体上互补于编码PLC_γ的mRNA的一部分的核酸。

37.如权利要求30的方法，其中，所述方法包括调节CNS细胞或组织中PLC_γ的活性或表达。

38.如权利要求37的方法，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

39.如权利要求38的方法，其中，疼痛信号源自PNS细胞或通向CNS细胞的感觉纤维跨突触。

40.如权利要求30的方法，其中，所述疼痛是神经性疼痛。

41.如权利要求40的方法，其中，所述神经性疼痛与神经或导管损伤。

42.如权利要求40的方法，其中，所述神经性疼痛选自下列一组：躯体和内脏疼痛。

43.如权利要求30的方法，其中，所述疼痛选自下列一组：慢性炎性疼痛，与关节炎相关的疼痛，纤维肌痛，后背疼痛，与癌症疼痛，与消化系统疾病相关的疼痛，与克罗恩氏病相关的疼痛，与自身免疫性疾病相关的疼痛，与内分泌病相关的疼痛，与糖尿病神经病变相关的疼痛，幻肢疼痛，自发痛，慢性手术后疼痛，慢性颞下颌疼痛，灼痛，疱疹后神经痛，AIDS-相关的疼痛，I型和II型复杂区域性疼痛综合症，三叉神经痛，慢性后背疼痛，与脊髓损伤相关的疼痛和复发性急性痛。

44.预防和/或治疗对象疼痛的组合物，包括：

能够抑制对象体内PLC_γ的活性或表达制剂；和

可以药用的载体。

45.如权利要求44的组合物，其中，所述制剂是PLC_γ抑制剂。

46.如权利要求45的组合物，其中，所述PLC_γ抑制剂选自下列一组：三环癸烷-9-基-黄原酸盐，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸胆碱，硫酸新霉素，精胺四氢氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。

47.如权利要求45的组合物，其中，所述PLC_γ抑制剂是三环癸烷-9-基-黄原酸盐。

48.如权利要求46的组合物，其中，所述制剂是抗-PLC_γ抗体。

49.如权利要求46的组合物，其中，所述制剂选自反义分子，核糖酶，siRNA，siRNA-样分子，和配体与PLC_γ结合的抑制剂。

50.如权利要求49的组合物，其中，所述反义分子大体上互补于编码PLC_γ的mRNA的一部分的核酸。

51.如权利要求44的组合物，其中，所述方法包括调节CNS细胞或组织中PLC_γ的活性或表达。

52.如权利要求51的组合物，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

53.如权利要求51的组合物，其中，疼痛信号源自PNS细胞或通向CNS细胞的感觉纤维跨突触。

54.如权利要求44的组合物，其中，所述疼痛是神经性疼痛。

55.如权利要求54的组合物，其中，所述神经性疼痛与神经或导管损伤。

56.如权利要求54的组合物，其中，所述神经性疼痛选自下列一组：躯体和内脏疼痛。

57.如权利要求44的组合物，其中，所述疼痛选自下列一组：慢性炎性疼痛，与关节炎相关的疼痛，纤维肌痛，后背疼痛，与癌症疼痛，与消化系统疾病相关的疼痛，与克罗恩氏病相关的疼痛，与自身免疫性疾病相关的疼痛，与内分泌病相关的疼痛，与糖尿病神经病变相关的疼痛，幻肢疼痛，自发痛，慢性手术后疼痛，慢性颞下颌疼痛，灼痛，疱疹后神经痛，AIDS-相关的疼痛，I型和II型复杂区域性疼痛综合症，三叉神经痛，慢性后背疼痛，与脊髓损伤相关的疼痛和复发性急性痛。

58.一种包装，包括能够抑制对象体内PLC_γ的活性或表达的制剂，以及将它用于治疗或预防疼痛的说明书。

59.如权利要求58的包装，其中，所述制剂是PLC_γ抑制剂。

60.如权利要求59的包装，其中，所述PLC_γ抑制剂选自下列一组：三环癸烷-9-基-黄原酸盐，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸胆碱，硫酸新霉素，精胺四氢氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。

61.如权利要求59的包装，其中，所述PLC_γ抑制剂是三环癸烷-9-基-黄原酸盐。

62.如权利要求59的包装，其中，所述制剂是抗-PLC_γ抗体。

63.如权利要求59的包装，其中，所述制剂选自反义分子，核糖酶，siRNA，siRNA-样分子，和配体与PLC_γ结合的抑制剂。

64.如权利要求63的包装，其中，所述反义分子是大体上互补于编码PLC_γ的mRNA的一部分的核酸。

65.如权利要求59的包装，其中，所述方法包括调节CNS细胞或组织中PLC_γ的活性或表达。

66.如权利要求65的包装，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

67.如权利要求65的包装，其中，疼痛信号源自PNS细胞或通向CNS细胞的感觉纤维跨突触。

68.如权利要求59的包装，其中，所述疼痛是神经性疼痛。

69.如权利要求68的包装，其中，所述神经性疼痛与神经或导管损伤。

70.如权利要求68的包装，其中，所述神经性疼痛选自下列一组：躯体和内脏疼痛。

71.如权利要求58的包装，其中，所述疼痛选自下列一组：慢性炎性疼痛，与关节炎相关的疼痛，纤维肌痛，后背疼痛，与癌症疼痛，与消化系统疾病相关的疼痛，与克罗恩氏病相关的疼痛，与自身免疫性疾病相关的疼痛，与内分泌病相关的疼痛，与糖尿病神经病变相关的疼痛，幻肢疼痛，自发痛，慢性手术后疼痛，慢性颞下颌疼痛，灼痛，疱疹后神经痛，AIDS-相关的疼痛，I型和II型复杂区域性疼痛综合症，三叉神经痛，慢性后背疼痛，与脊髓损伤相关的疼痛和复发性急性痛。

72.一种包装，包括：

组合物，包括能够抑制对象体内PLC_γ的活性或表达的制剂和可以药用的载体；和

将所述组合物用于治疗或预防疼痛的说明书。

73.如权利要求72的包装，其中，所述制剂是PLC_γ抑制剂。

74.如权利要求73的包装，其中，所述PLC_γ抑制剂选自下列一组：三环癸烷-9-基-黄原酸盐，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸胆碱，硫酸新霉素，精胺四氢氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[β-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。

75.如权利要求73的包装，其中，所述PLC_γ抑制剂是三环癸烷-9-基-黄原酸盐。

76.如权利要求72的包装，其中，所述制剂是抗-PLC_γ抗体。

77.如权利要求72的包装，其中，所述制剂选自反义分子，核糖酶，siRNA，siRNA-样分子，和配体与PLC_γ结合的抑制剂。

78.如权利要求77的包装，其中，所述反义分子是大体上互补于编码PLC_γ的mRNA的一部分的核酸。

79.如权利要求72的包装，其中，所述方法包括调节CNS细胞或组织中PLC_γ的活性或表达。

80.如权利要求79的包装，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

81.如权利要求79的包装，其中，疼痛信号源自PNS细胞或通向CNS细胞的感觉纤维跨突触。

82.如权利要求72的包装，其中，所述疼痛是神经性疼痛。

83.如权利要求82的包装，其中，所述神经性疼痛与神经或导管损伤。

84.如权利要求82的包装，其中，所述神经性疼痛选自下列一组：躯体和内脏疼痛。

85.如权利要求72的包装，其中，所述疼痛选自下列一组：慢性炎性疼痛，与关节炎相关的疼痛，纤维肌痛，后背疼痛，与癌症疼痛，与消化系统疾病相关的疼痛，与克罗恩氏病相关的疼痛，与自身免疫性疾病相关的疼痛，与内分泌病相关的疼痛，与糖尿病神经病变相关的疼痛，幻肢疼痛，自发痛，慢性手术后疼痛，慢性颞下颌疼痛，灼痛，疱疹后神经痛，AIDS-相关的疼痛，I型和II型复杂区域性疼痛综合症，三叉神经痛，慢性后背疼痛，与脊髓损伤相关的疼痛和复发性急性痛。

86.将能够抑制对象体内PLC_γ的活性或表达的制剂用于治疗或预防疼痛的用途。

87.如权利要求86的用途，其中，所述制剂是PLC_γ抑制剂。

88.如权利要求87的用途，其中，所述PLC_γ抑制剂选自下列一组：三环癸烷-9-基-黄原酸盐，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸胆碱，硫酸新霉素，精胺四氢氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。

89.如权利要求87的用途，其中，所述PLC_γ抑制剂是三环癸烷-9-基-黄原酸盐。

90.如权利要求86的用途，其中，所述制剂是抗-PLC_γ抗体。

91.如权利要求86的用途，其中，所述制剂选自反义分子，核糖酶，siRNA，siRNA-样分子，和配体与PLC_γ结合的抑制剂。

92.如权利要求91的用途，其中，所述反义分子是大体上互补于编码PLC_γ的mRNA的一部分的核酸。

93.如权利要求86的用途，其中，所述方法包括调节CNS细胞或组织中PLC_γ的活性或表达。

94.如权利要求93的用途，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

95.如权利要求93的用途，其中，疼痛信号源自PNS细胞或通向CNS细胞的感觉纤维跨突触。

96.如权利要求86的用途，其中，所述疼痛是神经性疼痛。

97.如权利要求96的用途，其中，所述神经性疼痛与神经或导管损伤。

98.′如权利要求96的用途，其中，所述神经性疼痛选自下列一组：躯体和内脏疼痛。

99.如权利要求86的用途，其中，所述疼痛选自下列一组：慢性炎性疼痛，与关节炎相关的疼痛，纤维肌痛，后背疼痛，与癌症疼痛，与消化系统疾病相关的疼痛，与克罗恩氏病相关的疼痛，与自身免疫性疾病相关的疼痛，与内分泌病相关的疼痛，与糖尿病神经病变相关的疼痛，幻肢疼痛，自发痛，慢性手术后疼痛，慢性颞下颌疼痛，灼痛，疱疹后神经痛，AIDS-相关的疼痛，I型和II型复杂区域性疼痛综合症，三叉神经痛，慢性后背疼痛，与脊髓损伤相关的疼痛和复发性急性痛。

100.将能够抑制对象体内PLC_γ的活性或表达的制剂用于制备用于治疗或预防疼痛的药品的用途。

101.如权利要求100的用途，其中，所述制剂是PLC_γ抑制剂。

102.如权利要求101的用途，其中，所述PLC_γ抑制剂选自下列一组：三环癸烷-9-基-黄原酸盐，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸胆碱，硫酸新霉素，精胺四氢氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。

103.如权利要求101的用途，其中，所述PLC_γ抑制剂是三环癸烷-9-基-黄原酸盐。

104.如权利要求102的用途，其中，所述制剂是抗-PLC_γ抗体。

105.如权利要求104的用途，其中，所述制剂选自反义分子，核糖酶，siRNA，siRNA-样分子，和配体与PLC_γ结合的抑制剂。

106.如权利要求105的用途，其中，所述反义分子是大体上互补于编码PLC_γ的mRNA的一部分的核酸。

107.如权利要求100的用途，其中，所述方法包括调节CNS细胞或组织中PLC_γ的活性或表达。

108.如权利要求107的用途，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

109.如权利要求107的用途，其中，疼痛信号源自PNS细胞或通向CNS细胞的感觉纤维跨突触。

110.如权利要求100的用途，其中，所述疼痛是神经性疼痛。

111.如权利要求110的用途，其中，所述神经性疼痛与神经或导管损伤。

112.如权利要求110的用途，其中，所述神经性疼痛选自下列一组：躯体和内脏疼痛。

113.如权利要求100的用途，其中，所述疼痛选自下列一组：慢性炎性疼痛，与关节炎相关的疼痛，纤维肌痛，后背疼痛，与癌症疼痛，与消化系统疾病相关的疼痛，与克罗恩氏病相关的疼痛，与自身免疫性疾病相关的疼痛，与内分泌病相关的疼痛，与糖尿病神经病变相关的疼痛，幻肢疼痛，自发痛，慢性手术后疼痛，慢性颞下颌疼痛，灼痛，疱疹后神经痛，AIDS-相关的疼痛，I型和II型复杂区域性疼痛综合症，三叉神经痛，慢性后背疼痛，与脊髓损伤相关的疼痛和复发性急性痛。

114.用于治疗或预防疼痛的组合物，包括：

能够调节对象体内PLC_γ的活性或表达的制剂；和

可以药用的载体。

115.如权利要求114的用途，其中，所述制剂是PLC_γ抑制剂。

116.如权利要求115的用途，其中，所述PLC_γ抑制剂选自下列一组：三环癸烷-9-基-黄原酸盐，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸胆碱，硫酸新霉素，精胺四氢氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。

117.如权利要求115的用途，其中，所述PLC_γ抑制剂是三环癸烷-9-基-黄原酸盐。

118.如权利要求114的用途，其中，所述制剂是抗-PLC_γ抗体。

119.如权利要求114的用途，其中，所述制剂选自反义分子，核糖酶，siRNA，siRNA-样分子，和配体与PLC_γ结合的抑制剂。

120.如权利要求119的用途，其中，所述反义分子是大体上互补于编码PLC_γ的mRNA的一部分的核酸。

121.如权利要求114的用途，其中，所述方法包括调节CNS细胞或组织中PLC_γ的活性或表达。

122.如权利要求121的用途，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

123.如权利要求121的用途，其中，疼痛信号源自PNS细胞或通向CNS细胞的感觉纤维跨突触。

124.如权利要求114的用途，其中，所述疼痛是神经性疼痛。

125.如权利要求124的用途，其中，所述神经性疼痛与神经或导管损伤。

126.如权利要求124的用途，其中，所述神经性疼痛选自下列一组：躯体和内脏疼痛。

127.如权利要求114的用途，其中，所述疼痛选自下列一组：慢性炎性疼痛，与关节炎相关的疼痛，纤维肌痛，后背疼痛，与癌症疼痛，与消化系统疾病相关的疼痛，与克罗恩氏病相关的疼痛，与自身免疫性疾病相关的疼痛，与内分泌病相关的疼痛，与糖尿病神经病变相关的疼痛，幻肢疼痛，自发痛，慢性手术后疼痛，慢性颞下颌疼痛，灼痛，疱疹后神经痛，AIDS-相关的疼痛，I型和II型复杂区域性疼痛综合症，三叉神经痛，慢性后背疼痛，与脊髓损伤相关的疼痛和复发性急性痛。

128.一种鉴定或表征治疗或预防疼痛的制剂的方法，包括：

让所述制剂与具有PLC_γ的活性或表达的细胞接触；和

在存在所述制剂的条件下，确定是否存在PLCγ的活性或表达的抑制作用；

其中，所述所述抑制作用是所述制剂可用于治疗或预防疼痛的指标。

129.一种鉴定或表征治疗或预防疼痛的制剂的方法，包括：

让所述制剂与PLC_γ接触；和

确定在存在所述制剂的条件下是否存在对PLC_γ活性的抑制作用；

130.如权利要求128的方法，其中，所述方法包括确定是否存在CNS细胞或组织中PLC_γ的活性或表达的抑制作用。

131.如权利要求130的方法，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

132.如权利要求130的方法，其中，疼痛信号源自PNS细胞或通向CNS细胞的感觉纤维跨突触。

133.如权利要求128的方法，其中，所述疼痛是神经性疼痛。

134.如权利要求133的方法，其中，所述神经性疼痛与神经或导管损伤。

135.如权利要求133的方法，其中，所述神经性疼痛选自下列一组：躯体和内脏疼痛。

136.如权利要求128的方法，其中，所述疼痛选自下列一组：慢性炎性疼痛，与关节炎相关的疼痛，纤维肌痛，后背疼痛，与癌症疼痛，与消化系统疾病相关的疼痛，与克罗恩氏病相关的疼痛，与自身免疫性疾病相关的疼痛，与内分泌病相关的疼痛，与糖尿病神经病变相关的疼痛，幻肢疼痛，自发痛，慢性手术后疼痛，慢性颞下颌疼痛，灼痛，疱疹后神经痛，AIDS-相关的疼痛，I型和II型复杂区域性疼痛综合症，三叉神经痛，慢性后背疼痛，与脊髓损伤相关的疼痛和复发性急性痛。

137.A减轻对象伤害性感受的方法，包括抑制对象体内PLC_γ的活性或表达。

138.如权利要求137的方法，其中，所述对象是人。

139.如权利要求137的方法，其中，所述方法包括抑制CNS细胞或组织中PLC_γ的活性或表达。

140.如权利要求139的方法，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

141.A减轻对象伤害性感受的方法，包括给所述对象服用能够抑制对象体内PLCγ的活性或表达的制剂。

142.如权利要求141的方法，其中，所述制剂是PLC_γ抑制剂。

143.如权利要求142的方法，其中，所述PLC_γ抑制剂选自下列一组：三环癸烷-9-基-黄原酸盐，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸胆碱，硫酸新霉素，精胺四氢氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。

144.如权利要求142的方法，其中，所述PLC_γ抑制剂是三环癸烷-9-基-黄原酸盐。

145.如权利要求142的方法，其中，所述制剂是抗-PLC_γ抗体。

146.如权利要求142的方法，其中，所述制剂选自反义分子，核糖酶，siRNA，siRNA-样分子，和配体与PLC_γ结合的抑制剂。

147.如权利要求146的方法，其中，所述反义分子是大体上互补于编码PLC_γ的mRNA的一部分的核酸。

148.如权利要求141的方法，其中，所述方法包括抑制CNS细胞或组织中PLC_γ的活性或表达。

149.如权利要求148的方法，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

150.A减轻对象伤害性感受的方法，包括给所述对象服用组合物，包括：

能够抑制对象体内PLCγ的活性或表达的制剂；和

可以药用的载体。

151.如权利要求150的方法，其中，所述制剂是PLC_γ抑制剂。

152.如权利要求151的方法，其中，所述PLC_γ抑制剂选自下列一组：三环癸烷-9-基-黄原酸盐，1-O-十八烷基-2-O-甲基-射碳-丙三基-3-磷酸胆碱，硫酸新霉素，精胺四氢氯化物，1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-1H-吡咯-2，5-二酮，和1-[6-((17β-3-甲氧基雌甾-1，3，5(10)-三亚乙基四胺-17-基)氨基)己基]-2，5-吡咯烷二酮。

153.如权利要求151的方法，其中，所述PLC_γ抑制剂是三环癸烷-9-基-黄原酸盐。

154.如权利要求150的方法，其中，所述制剂是抗-PLC_γ抗体。

155.如权利要求150的方法，其中，所述制剂选自反义分子，核糖酶，siRNA，siRNA-样分子，和配体与PLC_γ结合的抑制剂。

156.如权利要求155的方法，其中，所述反义分子是大体上互补于编码PLC_γ的mRNA的一部分的核酸。

157.如权利要求150的方法，其中，所述方法包括抑制PLC_γ的活性或表达CNS细胞或组织中。

158.如权利要求157的方法，其中，所述CNS细胞或组织是脊髓细胞或组织。

159.一种鉴定或表征用于治疗或预防疼痛的化合物的方法，所述方法包括：

(a)让测试化合物与细胞接触，细胞包括第一种核酸，所述核酸包括正常情况下与PLC_γ基因结合的转录调控因子，并且可结合地与第二种核酸连接，第二种核酸包括一个能编码报道蛋白的报道基因；和

(b)确定在存在所述测试化合物的条件下，报道基因表达或报道蛋白活性是否减弱；

其中，所述报道基因表达或报道蛋白活性的减弱是所述测试化合物可用于治疗或预防疼痛的指标。

160.如权利要求159的方法，其中，所述细胞是CNS-衍生的细胞。

161.一种鉴定或表征治疗或预防疼痛的制剂的方法，包括：

让所述制剂和PLC_γ配体与包括PLC_γ的细胞接触；和

其中，所述减弱是所述制剂可用于治疗或预防疼痛的指标。

162.如权利要求161的方法，其中，所述细胞是CNS-衍生的细胞

163.一种鉴定或表征治疗或预防疼痛的制剂的方法，包括：

包括让所述制剂和PLC_γ配体与PLC_γ接触；和

其中，所述减弱是所述制剂可用于治疗或预防疼痛的指标。

164.如权利要求15，35，146，155，161和163中任意一项的方法，其中，所述配体是有丝分裂原-激活的蛋白激酶或它的同系物或片段。

165.如权利要求164的方法，其中，所述有丝分裂原-激活的蛋白激酶是细胞外信号相关的激酶。

166.如权利要求165的方法，其中，所述细胞外信号相关的激酶是ERK1或ERK2。

167.如权利要求15，35，146，155，161和163-166中任意一项的方法，其中，所述结合是与所述PLC_γ的D-结构域的结合。

168.如权利要求49的组合物，其中，所述配体是有丝分裂原-激活的蛋白激酶或它的同系物或片段。

169.如权利要求168的组合物，其中，所述有丝分裂原-激活的蛋白激酶是细胞外信号相关的激酶。

170.如权利要求169的组合物，其中，所述细胞外信号相关的激酶是ERK1或ERK2。

171.如权利要求168的组合物，其中，所述结合是与所述PLC_γ的D-结构域的结合。

172.如权利要求49或6，3的包装，其中，所述配体是有丝分裂原-激活的蛋白激酶或它的同系物或片段。

173.如权利要求172的包装，其中，所述有丝分裂原-激活的蛋白激酶是细胞外信号相关的激酶。

174.如权利要求173的包装，其中，所述细胞外信号相关的激酶是ERK1或ERK2。

175.如权利要求174的包装，其中，所述结合是与所述PLC_γ的D-结构域的结合。

176.如权利要求91，105和119中任意一项的用途，其中，所述配体是有丝分裂原-激活的蛋白激酶或它的同系物或片段。

177.如权利要求176的用途，其中，所述有丝分裂原-激活的蛋白激酶是细胞外信号相关的激酶。

178.如权利要求177的用途，其中，所述细胞外信号相关的激酶是ERK1或ERK2。

179.如权利要求179的用途，其中，所述结合是与所述PLC_γ的D-结构域的结合。