CN100594910C

CN100594910C - 具有生理活性的复方人参三醇皂苷及其制剂及用途

Info

Publication number: CN100594910C
Application number: CN200410022715A
Authority: CN
Inventors: 杨兆祥; 艾黎
Original assignee: XIANGGEXIMA BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd KUNMING
Current assignee: XIANGGEXIMA BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd KUNMING
Priority date: 2004-06-03
Filing date: 2004-06-03
Publication date: 2010-03-24
Anticipated expiration: 2024-06-03
Also published as: CN1608629A

Abstract

本发明涉及一种具有生理活性的复方人参三醇皂苷，含有：人参三醇皂苷组(含PTG 51～98%)、银杏提取物(含银杏黄酮＞24%、银杏内酯＞6%)、茶氨酸，添加辅料可制成各种制剂。本发明复方能改善脑动脉硬化症、老年性痴呆等，对脑细胞活力和脑神经细胞活力有正性的加强作用，能迅速改善大脑供氧供血状况，降低头昏、头痛、精力不集中等肌体反应，有良好的改善记忆功能、抗缺氧功能，稳定性较好，可用于治疗或改善因血液系统或神经系统弱化而引起的脑供血、供氧不足及神经活动减弱的疾病或功能失调等。

Description

具有生理活性的复方人参三醇皂苷及其制剂及用途

所属技术领域

本发明涉及一种具有生理活性的复方人参三醇皂苷及其制剂及用途。

背景技术

人参(高丽参)、西洋参和三七(又名参三七、田七、南方人参)均是五加科人参属植物，其根、叶、花等均具有药用价值，主要含有人参皂甙及其它物质。根据研究资料证实从各种植物中提取的人参皂苷、西洋参皂苷和三七总皂苷主要由以Rb₁为主的人参二醇型皂苷和以Rg₁为主的人参三醇型皂苷组成。二醇型皂苷和三醇型皂苷既有相似之处，又有区别，在神经系统的作用上甚至相反。两者在改善血液循环的血流动力学，降低血液粘度，降低血脂等方面作用相似。目前，对各单有效提取部分均有一些研究报告，但未见与本发明专利申请相同的复方研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有生理活性的复方人参三醇皂苷及其制剂及用途，该复方具有互补增强的改善记忆和抗缺氧的效果，可用于治疗或改善因血液系统或神经系统弱化而引起的脑供血、供氧不足及神经活动减弱的疾病或功能失调。

本发明的目的是这样实现的：这种具有生理活性的复方人参三醇皂苷含有以下成分：人参三醇皂苷组(含PTG 51～98％)、银杏提取物(含银杏黄酮＞24％、银杏内酯＞6％)、茶氨酸。

这种具有生理活性的复方人参三醇皂苷，复方中各有效成分的配比(重量)为：

人参三醇皂苷组(含PT651～98％) 10％～68％

银杏提取物(含银杏黄酮＞24％、银杏内酯＞6％) 5％～49％

茶氨酸 20％～75％

这种具有生理活性的复方人参三醇皂苷，复方中还可含有以下活性成分：B族维生素(B₁、B₂、B₆等)。

人参三醇皂苷组(含PTG 51～98％)： 10％～55％

银杏提取物(含银杏黄酮＞24％、银杏内酯＞6％) 5％～40％

茶氨酸 20％～70％

维生素B₁ 1％～5％

维生素B₂ 1％～5％

维生素B₆ 1％～5％

这种具有生理活性的复方人参三醇皂苷，人参三醇组中人参皂苷Rg₁在其中的含量为45％～99％，其余为Re、Rf、Rg₂、Rh₁等。

这种具有生理活性的复方人参三醇皂苷制剂，其复方制剂中各成分的配比(重量)为：

上面所述的复方人参三醇皂苷 5％～85％

辅料 15％～95％

辅料为药用或食用辅料中的一种或几种，制成医药或食品上可以接受的制剂。

本发明所述的医药用的辅料为甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、卡波姆934、黄原胶、明胶、Syloid204、氨基酸及其衍生物、NaCl、CaCl₂、CaCO₃等有机或无机物；食品用的辅料为大豆油、精炼植物油、花生油、聚乙二醇(PEG)、面粉、骨胶、果胶、茶叶、蜂蜜等。

这种具有生理活性的复方人参三醇皂苷的用途，可用于对脑细胞活力和脑神经细胞活力正性的加强作用。

这种具有生理活性的复方人参三醇皂苷的用途，还可用于治疗或改善因血液系统或神经系统弱化而引起的脑供血、供氧不足及神经活动减弱的疾病或功能失调。

这种具有生理活性的复方人参三醇皂苷的用途，可制成医疗上可接受的各种新药及功能食品，如：粉针剂、滴剂、口服剂的口腔粘膜给药的舌下含片、速溶片、咀嚼片和普通的口服剂及各种食品饼干、糖果、饮料、果冻等。

本发明的复方人参三醇型皂苷主要由人参三醇型皂苷、银杏提取物、茶氨酸等有效成分经加工精制而成，银杏，又名白果，为银杏科落叶乔木，银杏叶是传统止咳平喘的重要中药材，其有效成分包括：银杏黄酮、银杏内酯，目前成熟的市场上可购买到的银杏叶提取物为一银杏提取物(标准提取物Egb761)；茶氨酸是茶叶中的一个重要活性成分，属于酰胺类化合物，具有促进大脑功能、神经生长等功效。本发明的复方有改善冠状循环和脑循环作用，可改善脑动脉硬化症及其所引起的脑供血不足、脑力衰退、老年性痴呆等，对脑细胞活力和脑神经细胞活力有正性的加强作用，能迅速改善大脑供氧供血状况，降低头昏、头痛、精力不集中等肌体反应，有良好的改善记忆功能、抗缺氧功能，稳定性较好，可用于治疗或改善因血液系统或神经系统弱化而引起的脑供血、供氧不足及神经活动减弱的疾病或功能失调等。

附图说明

图1是本发明辅助改善记忆试验中受试样品对正常小鼠记忆的影响图。

图2是本发明辅助改善记忆试验无意义图形再认中无意义图形背面的数字表示。

具体实施方式

Rg₁、Rg₁＞45％的生产方法

1、Rg₁＞45％的生产

取三七总皂苷(＞95％)100g，溶于90％的乙醇500ml中，在搅拌下加入2000ml丙酮，充分搅拌后，置于5～15℃下8h以上，过滤，取滤液，减压浓缩至近干，上一短的氧化铝柱，用无水乙醇溶剂洗脱，收集2000ml，浓缩收集液，低温干燥或喷雾干燥即得含量在Rg₁＞45％的成品约12g(收率～12％)。

2、Rg₁的生产

取上述Rg₁＞45％的产品，用硅胶柱层析法，用CHCl₃∶CH₃OH＝7∶3溶剂洗脱，收集Rg₁组分。反复数次即得含量在90％以上的Rg₁成品。

具体实施方式

实施例1：复方人参三醇型皂苷颗粒

配方：

PTG(Rg₁＝55.4％)： 155g

银杏提取物 100g

茶氨酸 70g

维生素B₁ 5g

维生素B₂ 4g

维生素B₆ 4g

蔗糖 2500g

糊精 300g

环糊精 55g

乙醇适量

按普通制粒法制粒，分装成1000袋(每袋约3.1g)。每次食用一袋，每日1～2次。

实施例2、复方人参三醇型皂苷胶丸

配方：

PTG(Rg₁＝65.1％)： 29g

银杏提取物 24g

茶氨酸 25g

维生素B₁ 1.7g

维生素B₂ 1.6g

维生素B₆ 1.5g

大豆油 400g

将原料混合，超细化(过2000目以上)，按普通胶丸剂制备方法制备胶皮。药液的制备：将超细化的复方药加入溶剂基质中，充分搅拌、溶解、过滤、脱气，送至填充机上方的罐内，待用；同时准备好软胶囊充填机上方保温明胶罐中的胶皮用的明胶溶液，待用；在10万级、21℃～25℃、RH％：39～41％的条件下，开动旋转模压机压丸，把制成的软胶囊洗净，在28±2℃下干燥19～27小时，分装、包装即得成品。每粒内容物重约500±4mg，可得1000粒。

实施例3：复方人参三醇型皂苷滴丸

配方：

PTG(Rg₁＝65.1％)： 32g

银杏提取物 18g

茶氨酸 12g

PEG-6000 300g

按普通滴丸剂制备方法制备，即将药物有效成分混合，加入基质PEG-6000中，加热融化成液体状，在保温下滴入液体石蜡冷凝液中，控制一定的速度，使其固化成圆整的球型。即得滴丸，测定每丸含量，以每次服用Rg₁计应为20mg来确定服用量。

实施例4、复方人参三醇型皂苷冻干粉针

配方：

PTG(Rg₁＝89％)： 52g

银杏提取物 10g

茶氨酸 17g

甘露醇 100g

工艺：

在1万级的条件下，将合格的药物和辅料一起溶于注射用水中，经脱色等处理后，加入注射用水稀释至所需体积。过滤，滤液经过滤纸及0.4μm的滤膜粗滤等处理后，在100级的条件下，用0.2μm以下的滤膜过滤。精滤液送入分装机，按每支1～2ml分装，盖上带槽的盖子，送入冷冻真空干燥机，快速冷至-30℃～-35℃，2～3小时，逐步缓慢升温至35℃～45℃(约需10小时)。塞紧盖子，取出制品，扎盖、包装、检验、合格的药用粉针1000支成品。

实施例5：复方人参三醇型皂苷口服液

配方：

PTG(Rg₁＝45％) 25g

银杏提取物 43g

茶氨酸 60g

维生素B₁ 1.8g

维生素B₂ 2.0g

维生素B₆ 2.1g

蜂蜜 1000g

蒸馏水加至10kg

按普通口服液制备方法制备，可得1000支(每支约重11g)的口服液。

实施例6、复方人参三醇型皂苷口含片

配方：

PTG(Rg₁＝55％) 15g

银杏提取物 8g

茶氨酸 10g

维生素B₁ 0.5g

维生素B₂ 0.5g

维生素B₆ 0.8g

乳糖 255g

甘露糖 98g

17％淀粉浆～45g

十二烷基硫酸钠～1g

按常规含片制造方法制造，可得1000片普通的复方人参三醇型皂苷口含片。

实施例7、复方人参三醇型皂苷咀嚼片

配方：

PTG(Rg₁＝88％) 13g

银杏提取物 10g

茶氨酸 36g

维生素B₁ 0.8g

维生素B₂ 0.5g

维生素B₆ 1.1g

β-CD 30g

甘露醇 60g

蔗糖 7g

甲基纤维素 2g

阿司巴糖 0.3g

薄荷醇 0.3g

Syloid204 0.9g

硬脂酸镁 1.0g

制法：

先将PTG等有效成分和β-CD混合研磨，制成包合物备用。按配方量将蔗糖、甘露醇和阿司巴糖混合后，经40目筛过3次，再加入甲基纤维素和前述备用包合物，过12目筛过3次混匀。用10％阿拉伯胶浆为黏合剂制成湿料，过10目筛。湿颗粒经80℃烘箱干燥8h。干颗粒用12目筛整粒。喷入薄荷香精后加入Syloid204和硬脂酸镁，压片即得1000片复方人参三醇型皂苷咀嚼片。

以上实施例仅为了对本发明做进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。

本发明的功效及药学研究结果如下：

一、复方人参三醇型皂苷胶丸对衰老动物模型的促智作用研究

实验目的

复方人参三醇型皂苷胶丸主要由三七中人参三醇型皂苷、银杏提取物、茶氨酸等有效成分经加工精制而成，药理研究发现有改善冠状循环和脑循环作用。可改善脑动脉硬化症及其所引起的脑供血不足、脑力衰退、老年性痴呆等，现为进一步观察复方人参三醇型皂苷胶丸对大脑功能的影响，本实验选择其促智和抗衰老作用进行研究，以便为临床应用提供实验依据。现将研究结果简报如下。

1材料

1.1实验动物ICR小鼠，体重20±2g，雌雄各半。

1.2药物及试剂

1.1.2.1供试品复方人参三醇型皂苷胶丸，昆明香格喜玛生物技术有限公司，批号：20031116。临用时，用1％羧甲纤维素钠配制成5％、10％和20％的混悬液。

1.1.2.2对照品脑得生胶囊，江西生产，批号：20030402，临用时，用1％的羧甲纤维钠配制成5％的混悬液。

1.2实验方法和结果

先将小鼠分为空白对照组和衰老模型组。衰老模型组小鼠每天眼球后注射D-半乳糖0.12mg/g，连续一月^[1]。小鼠造型后根据需要再分若干小组。实验时小鼠随机作如下分组：(1)空白对照组(动物不造型)，灌胃N.S。(2)造型对照组(动物造型)，灌胃N.S。(3)阳性药对照组，动物造型、灌胃脑得生胶囊溶液(0.5g/kg，为临床二倍成人剂量)。(4)-(6)组复方人参三醇型皂苷胶丸为低、中、高剂量组，分别灌胃5％、10％和20％的复方人参三醇型皂苷胶丸溶液(用药量分别为临床2、5和10倍的成人剂量)。各组小鼠灌胃容积均为10ml/kg，每日一次，连续两周。于末次给药后作下列各项指标测定。

1.2.1复方人参三醇型皂苷胶丸对衰老模型小鼠的学习和记忆维持的影响

1.2.1.1跳台试验仿文献方法^[2]，先将小鼠放入跳台反应箱内适应环境3分钟，然后给反应箱底的铜栅通以36V交流电，动物受到电击后，往往会跳至平台，以避伤害性刺激。由于平台窄小，不便停留，迫使其再次或多次跳至铜栅，但受到电击后又会迅速地跳回平台，如此训练5分钟，记录每鼠受到电击的次数，以此作为该鼠的学习成绩。24小时后重作测试。试验时，先将小鼠放在平台上，记录小鼠第一次跳下平台的时间(潜伏期)和3分钟内因跳下平台而受电击的次数(即错误次数)，以此作为记忆维持的指标。结果见表1。

表1复方人参三醇型皂苷胶丸对衰老模型小鼠学习记忆的影响(跳台法)x±SD，n＝20

注：与造型对照组比较：^*：P＜0.05 ^**：P＜0.01。

与空白对照组比较：^△：P＜0.05； ^△△：P＜0.01

以上结果显示，复方人参三醇型皂苷胶丸显著延长小鼠跳台潜伏期，同时明显减少跳台的错误次数(P＜0.01)。

1.2.1.2矩型迷宫试验取造型合格小鼠一批，按上述试验进行分组及给药(或N.S)。给药至第11天，禁食12小时后作迷宫取食训练。小鼠放入起步区，经矩形迷宫到达目标区。途中走错，帮助其纠正。达目标区后让其进食5分钟。每天如此练习10次，连续三天。第四天(即给药的第十四天)正式实验。各组选取灵活性较一致的小鼠20只，记录小鼠从起步区到达目标区的时间以及中途走错的次数^[3]。连续作两次，两次数据合并取平均值作为小鼠的学习成绩。动物继续给药，一周后重复上述试验，所得数据即表示记忆的维持，结果见表2：

表2复方人参三醇型皂苷胶丸对衰老模型小鼠学习记忆的改善作用(迷宫法)x±SD n＝20

注：与造型对照组比较：^*：P＜0.05 ^**：P＜0.01。

与空白对照组比较：^△：P＜0.05； ^△△：P＜0.01

以上结果显示，复方人参三醇型皂苷胶丸明显提高衰老模型小鼠走迷宫的学习成绩，减少记忆维持期走迷宫发生的错误次数，即增强小鼠对记忆的保持效应。

二、本品对脑缺血的改善作用

脑力工作者长时间工作、体弱多病者、激烈运动时、血液粘稠者等会导致脑缺血和缺氧。用脑缺血模型、小鼠常压下耐缺氧试验及小鼠断头后张口实验模型做实验，结果如下：

样品对大鼠脑缺血后脑梗死范围的影响

小鼠常压下耐缺氧时间及小鼠断头后张口呼吸时间的影响

结果表明样品具有良好的抗脑缺血作用、延长小鼠常压下耐缺氧时间及小鼠断头后张口呼吸时间，证明本品有供血供氧的作用。

三、本产品提高脑力工作者工作效率和改善大脑供血供氧的试验

选一家软件开发公司，在充分了解试验内容及可能对人体产生的作用的基础上，筛选年龄在24～44岁的软件开发工作者68名，男女均可，随机分为两组。一组为空白对照组，给予不含有药物的空白安慰剂；另一组为试验组，给予实施例2制得的软胶囊的试验药物。使用方法为每天刚上班时口服一片，试验周期为30天。有3例因工作调动未完成试验，实验结果如下：

实验结果表明，使用本品能迅速改善大脑供氧供血状况，降低头昏、头痛、精力不集中等肌体反应，从而提高生活质量和工作效率。

四、复方人参三醇型皂苷型软胶囊辅助改善记忆试验

1动物实验

1.1跳台实验

1.1.1原理

反应箱底铺有通36v电的铜栅，动物受到电击，其正常反应是跳上箱内绝缘的平台以避免伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台，如此训练5min，并记录每鼠受到电击的次数或叫错误次数，以此作为学习成绩。24h或48h重作测验，此即记忆保持测验。记录受电击的动物数、第一次跳下平台的潜伏期和3min内的错误总数。停止训练5天后(也可以在训练后的一周、两周或其它时间点)进行记忆消退实验。

1.1.2仪器与试剂

跳台仪：该装置为10×10×60cm³的被动回避条件反射箱，用黑色塑料板分隔成5间。底面铺以铜栅，间距为0.5cm，可以通电，电压强度由一变压器控制。每间左后角置一高和直径均为4.5cm的绝缘平台。

试剂：樟柳碱、环己酰亚胺、乙醇。

1.1.3实验方法

1.1.3.1实验动物推荐使用近交系小鼠。断乳鼠，体重10g左右；或成年鼠，体重18-22g。用于改善老年人记忆的产品必须采用成年鼠。雌雄均可，单一性别每组不少于10只。

1.1.3.2剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组和一个空白对照组，以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二各剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间原则上不少于30天，必要时可适当延长。

1.1.3.3实验方法及步骤

1.1.3.3.1受试样品对正常小鼠记忆的影响

末次给样后次日(或一次给样后1h)开始训练。将动物放入反应箱内(台上、台下)适应环境3min，然后将动物放置反应箱内的铜栅上，立即通以36v的交流电。动物受到电击，其正常反应是跳回平台(绝缘体)，以躲避伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台上。训练一次后，将动物放在反应箱内的平台上，记录5min内各鼠跳下平台的错误次数和第一次跳下平台的潜伏期，以此作为学习成绩(记忆获得)。24或48h后进行重测验，将小鼠放在平台上，记录各鼠第一次跳下平台的潜伏期、各鼠3min内电击次数和受电击的动物数总数，同时计算出现错误反应的动物的百分率(受电击的动物数占该组动物总数的百分率)(记忆巩固)。停止训练5天后(包括第5天)可以在不同的时间进行一次或多次记忆消退实验(记忆再现，方法同重测验)。

1.1.3.3.2受试样品对记忆障碍模型小鼠的影响

1.1.3.3.21模型制造

记忆获得障碍模型制造：训练前10min腹腔注射樟柳碱或东莨菪碱5mg/kg体重；

记忆巩固障碍模型制造：训练前10min腹腔注射环己酰亚胺120mg/kg体重；

记忆再现障碍模型制造：重测验前30min灌胃30％的乙醇0.1mL/10g体重。

1.1.3.3.2.2记忆测试的操作方法：同1.1.3.3.1。

1.1.4数据处理及结果判定

潜伏期结果为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

错误次数和3min内跳下平台的动物数均为记数资料，可用X²检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。

若受试样品组与对照组比较，潜伏期明显延长，错误次数或跳下平台的动物数明显少于对照组，差异有显著性，以上三项指标中，任一阶段(记忆获得、记忆巩固和记忆再现)的任一项指标阳性，均可判定该项实验阳性。

1.1.5注意事项

1.1.5.1动物在24h内有其活动周期，不同时相处于不同的觉醒水平，故每次实验应选择同一时相(上午8-12点或下午1-4点)，前后2d的实验要在同一时间内完成。

1.1.5.2实验应在隔音，光强度和温、湿度适宜且保持一致的行为实验室进行。

1.1.5.3推荐使用纯系动物，实验前数天将动物移至实验室以适应周围环境。

1.1.5.4实验者必须每天与动物接触，如：喂水、喂食和抚摸动物。

1.1.5.5减少非特异性干扰，如：情绪、注意、动机、觉醒、运动活动水平、应激和内分泌等因素。

1.1.5.6考虑动物种属差异。

1.2.避暗法

1.2.1原理

利用小鼠嗜暗的习性设计一个装置，一半是暗室，一半是明室，中间有一小洞相连。暗室底部铺有通电的铜栅，并与一计时器相连，计时器可自动记录潜伏期的时间。小鼠进入暗室即受到电击，计时自动停止。

1.2.2仪器和试剂

避暗仪：该装置分明暗两室。明室大小为12cm×4.5cm，其上方约20cm处悬-40w钨灯丝。暗室较大，大小为17cm×4.5cm，两室之间有一直径约3cm的圆洞。两室底部均铺以铜栅。暗室底部中间位置的铜栅可以通电，电击强度可在一旋钮上任意选择。一般采用40v电压。暗室与一计时器相连，计时器可自动记录潜伏期的时间。

试剂：樟柳碱、环己酰亚胺、乙醇。

1.2.3实验方法

1.2.3.1实验动物同1.1.3.1

1.2.3.2剂量设计和分组同1.1.3.2

1.2.3.3实验方法及步骤

1.2.3.3.1受试样品对正常小鼠记忆的影响

末次给样后次日(或一次给样后1h)开始训练。实验时将小鼠面部背向洞口放入明室，同时启动计时器。动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时器自动停止，取出小鼠，记录每鼠从放入明室至进入暗室遭电击所需的时间，此即潜伏期，训练5min，并记录5min内电击次数(记忆获得)。24h或48h后重作测验，记录每只动物进入暗室的潜伏期和5min内的电击次数，并计算5min内进入暗室(错误反应)的动物百分率(记忆巩固)。停止训练5天后可以在不同的时间进行一次或多次记忆消退实验(记忆再现)。

1.2.3.3.2受试样品对记忆障碍模型小鼠的影响：

1.2.3.3.2.1模型制造：方法同1.1.3.3.2.1

1.2.3.3.2.2操作方法：同1.2.3.3.1

1.2.4数据处理及结果判定

潜伏期时间为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

5min内进入暗室的次数和5min内进入暗室的动物数均为计数资料，可用X²检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。

若受试样品组小鼠进入暗室的潜伏期明显长于对照组，5min内进入暗室的错误次数或5min内进入暗室的动物数少于对照组，且差异有显著性，以上三项指标中任一阶段(记忆获得、记忆巩固和记忆再现)的任一项指标阳性，均可判定该项实验阳性。

1.2.5注意事项：同1.1.5

1.3穿梭箱实验(双向回避实验)

1.3.1原理：条件反射

1.3.2仪器与试剂

仪器：大鼠穿梭箱。该装置由实验箱和自动记录打印装置组成。实验箱大小为50cm×16cm×18cm。箱底部格栅为可以通电的不锈钢棒，箱底中央部有一高1.2Cm挡板，将箱底部分隔成左右两侧。实验箱顶部有光源和蜂鸣音控制器，自动记录打印装置可连续自动记录动物对电刺激(灯光或/和蜂鸣器)的反应和潜伏期，并将结果打印出来。

试剂：樟柳碱，环己酰亚胺，乙醇

1.3.3实验方法

1.3.3.1实验动物Wistar或SD大鼠，断乳鼠或成年鼠，雄、雌均可。

1.3.3.2剂量设计和分组同1.1.3.2。

1.3.3.3实验方法及步骤

1.3.3.3.1受试样品对正常大鼠条件反射建立的影响

将大鼠放入箱内任何一侧，20s后开始呈现灯光或蜂鸣音，持续20s，后10s内同时给以电刺激(100V，0.2mA，50Hz，AC)。大鼠在遭电击后即逃避，必须跑到对侧顶端，挡住光电管后才可中断电击，此为被动回避反应，在每次电击前给予条件刺激，反复强化后，大鼠在接受条件刺激后即跳向对侧并挡住光电管而逃避电击，此为主动回避反应，每隔天训练一回，每回50次，连续训练4-5回后，动物的主动回避反应率可达80-90％以上。根据打印结果分析如下指标：动物反应次数，动物主动回避时间，动物被动回避时间，动物主动回避率。停止训练5-50d内，分2-3次测定其记忆消退情况。

1.3.3.3.2受试样品对记忆障碍模型大鼠条件反射建立的影响

1.3.3.3.2.1模型制造：同1.1.3.3.2.1

1.3.3.3.2.2操作方法：同1.3.3.3.1。

1.3.4数据处理及结果判定

动物主动回避时间和被动回避时间为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

若实验组主动和/或被动回避时间明显短于对照组，差异有显著性，可判定为该指标阳性。

1.3.5注意事项同1.1.5。

1.4水迷宫实验

1.4.1原理

动物都有一种“探索”和“更替”倾向，当离开一个臂时，总是跑向“久”未跑过的“新”臂。小鼠不愿在水中，因而寻找能爬出水面的阶梯，训练后，小鼠能记住找到阶梯的路线。

1.4.2仪器与试剂

水迷宫自动记录仪。该仪器是由迷宫游泳箱和自动记录仪两部分组成。迷宫游泳箱由聚乙烯塑料制成，长100cm、宽100cm、高30cm；内径长90cm、宽90cm、高30cm，泳道宽12cm，泳道走向固定。见附图。

1.4.3实验方法

1.4.3.1实验动物推荐使用纯系小鼠，断乳鼠或成年鼠，雌雄均可。

1.4.3.2剂量设置、给样途径和期限均同1.1.3.2。

1.4.3.3实验方法

1.4.3.3.1受试样品对正常小鼠记忆的影响

见图1

连续给样30天，末次给样次日开始训练。训练期间继续给样，每天一次。迷宫泳道水深9cm，水温约20℃(≮15℃)。将小鼠训练时间限定为120s，在120s内未到达终点的小鼠均记为120s。

第一次训练前将小鼠放在梯子附近，使其自动爬上3次。以后每次训练前将小鼠放在梯子附近，背朝楼梯，使其自动爬上1次。实验分阶段进行，视动物学习成绩逐步加长路程。第一次训练时用一挡板在A处档死，从A处开始训练，记录从A点到达终点的时间。第二次训练加长路程，从B处开始，此路程约训练3次，至动物数80％以上在2min内达到终点后再延长路程，分别记录各鼠每次从B点到达终点所需的时间和发生错误的次数(进入任何一个盲端一次均算一次错误)。末次测试从起点进行，将小鼠放在起点，记录从起点到达终点所需的时间和发生错误的次数。每次训练时，对2min内未达到终点的小鼠，应引导其到达终点，从终点的楼梯上来，达到训练的目的。每次训练或测验时均将头朝起始点。最后计算各组动物5次训练和测试的总错误次数，到达终点的总时间及2min内到达终点的总动物数(百分率)，(包括了记忆获得和记忆巩固两个阶段的成绩)。停止训练5天后可在不同的时间从起点进行消退实验(记忆再现)。

1.4.3.3.2受试样品对记忆障碍模型小鼠的影响

1.4.3.3.2.1模型制造方法：同1.1.3.3.2.1

1.4.3.3.2.2操作方法：同1.4.3.3.1。

1.4.4数据处理及结果判定

到达终点的时间属计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

错误次数和到达终点的动物数(百分率)两指标为计数资料，可用x²检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。

试验组与对照组比，试验组到达终点所用的时间或到达终点前的错误次数明显少于对照组，或2min内到达终点的动物数明显多于对照组，且经统计学检验差异有显著性。其中记忆获得、记忆巩固和记忆再现任意阶段的任一项指标为阳性，可判为该项实验阳性。

1.4.5注意事项

1.4.5.1训练时在目标区(终点)停留的时间不能太短，否则失去强化效果。

1.4.5.2每天训练结束后，要对实验箱进行清洗，以清除动物留下的气味。

1.4.5.3实验前可对动物进行初筛，经训练后，2min内仍不能游至终点者淘汰。

1.4.5.4其余同1.1.5。

记忆测试指标一览表

1.5结果判定

跳台实验、避暗实验、穿梭箱实验、水迷宫实验四项实验中任二项实验结果阳性。且重复实验结果一致(所重复的同一项实验两次结果均为阳性)，可以判定该受试样品辅助改善记忆动物实验结果阳性。

2人体试食试验

2.1改善记忆的保健食品人体试食试验的一般原则

2.1.1受试样品进行人体试食试验，受试样品必须有其来源、组成、加工工艺和卫生条件的详细说明，必须先经毒理学安全性评价，证明安全无毒，也不存在任何潜在的危险因素；经动物功效实验已证明有效，或者虽然动物实验无效，但有大量背景资料证明确有改善人体记忆作用，在此基础上，才能进行人体试食试验。

2.1.2受试者：参加人体试食试验的受试者应本着自觉自愿的原则。

2.1.3主试者：本试验的主试人员应以保障受试者的健康为前提，对受试者高度负责。

主试人员必须经过专门的培训，取得结业证书后方可进行该项实验。

2.2选择受试者的原则

2.2.1从比较集中、各方面影响因素大致相同的群体中挑选受试者，比如学校、部队或其它群体。参加人体试食试验的受试者应本着自觉自愿的原则。

2.2.2文化程度基本一致。

2.2.3属同一年龄组，如不在同一年龄组，则应对量表分进行校正。

2.2.4未接受过类似测试

2.2.5排除短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断。

2.3受试样品的剂量和使用方法：按照生产厂家推荐的服用量和服用方法服用。

2.4试验设计和分组

2.4.1试验原则：对照、双盲、随机

2.4.2对照：记忆测试是一种心理测试，易受迁移学习和心理暗示的影响，第二次测验的记忆商一般比第一次高，有时对照组前后两次测试的记忆商差异有显著性，因此，不能仅以服样前后自身比较的结果下结论，必须设置平行对照。

2.4.3双盲：对照组必须服用安慰剂(不含有效成分，但其剂型、色泽、外观、口感、包装等均与受试样品相同)，以消除心理暗示的影响；主试者在施测时不知道谁服样品，谁服安慰剂，以消除主试者主观偏向的影响，保证测试结果客观可靠。

2.4.4同一受试者前后两次测试由同一主试者进行，

2.4.5施测顺序一般是先听觉测验后视觉测验。具体测验顺序是：(1)指向记忆，(2)联想学习，(3)无意义图形再认，(4)图象自由回忆，(5)人像特点联系回忆。

2.4.6分组方法：服样前对受试者进行第一次记忆商测试后，然后按记忆商随机分为试食组和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如文化水平、年龄等，进行均衡性检验，以保证组间可比性。每组受试者不少于50例。

2.4.7受试样品的剂量和使用方法：试食组按样品的推荐剂量和方法服用受试样品，对照组服用安慰剂或阴性对照。观察时间不少于30天，必要时可以延长。

2.5观察指标：各项指标于试验开始及结束时各检测一次。

2.5.1安全性指标

2.5.1.1一般状况包括精神、睡眠、饮食、大小便、心率等(儿童只要求进行心肺听诊、肝脾触诊等一般体格检查)

2.5.1.2血、尿常规检查

2.5.1.3肝、肾功能检查(成人受试者测定此项)

2.5.1.4胸透、心电图、腹部B超检查(成人受试者测定此项且仅试验前检查一次)

2.5.2功效指标：使用临床记忆量表。用测试后的各分测验原始分查量表分，各分测验量表分相加得总量表分，用总量表分查记忆商。

2.5.2.1指向记忆量表分

2.5.22联想学习量表分

2.5.2.3图象自由回忆量表分

2.5.2.4无意义图形再认量表分

2.5.2.5人像特点联系回忆量表分

2.5.2.6记忆商

2.6试验材料

2.6.1录有指向记忆和联想学习的指导语和刺激词的磁带。

2.6.2图片材料(分甲、乙两套)

2.6.2.1无意义图形再认备第一次呈现用目标刺激图片20张，备第二次再认时呈现用目标刺激和混入刺激图片各20张，共40张，合计60张图片。

2.6.2.2图象自由回忆物象图片两组各15张，共30张。

2.6.2.3人像特点联系回忆备第一次呈现用的黑白勾画人面像6张，备回忆时呈现的人面像6张，两者内容相同，顺序不同，共计12张；每张人像图片背面标有该人像的姓氏、职业、爱好、特点。

2.6.3录音机、秒表、记录纸。

2.7测试内容及方法：统一使用临床记忆量表，具体方法参见临床记忆量表。

临床记忆量表有五项测试内容：

指向记忆

联想学习

图象自由回忆

无意义图形再认

人像特点联系回忆

临床记忆量表的特点是备有有文化和无文化两个部分的正常值，便于检测无文化者。临床记忆量表共包括5个分量表。各分测验的测试顺序(如图象自由回忆的图片呈现顺序)在所有受试者中应一致。

2.7.1指向记忆：包括两组内容，每组24个词，每词由2-3个字组成，以1秒的速度读出，两个词之间间隔2s，其中有12个词属于同一类别，即为指向词；另12个混在其中相类似的词，为非指向词。(例如甲套第一组词中有12个词属于水果类，混杂的词有粽子、年糕、冰糖等12个食品类词；第二组词中有12个词属于动物类，混杂的词有皮肤、尾巴、眼睛、耳朵等身体器官类词12个。)要求受试者记忆指定的同类别词(如水果)。24个词随机排列，用录音机放送，每组词全部放送完毕后，要求受试者者立即回忆，说出要求记忆的一类词(不一定要按放送的顺序回忆)。主试者按受试者者回忆的顺序，将所说出的内容在记录纸上按顺序用数字记在相应词下面的方格内，并记录总的反应时间，如果受试者说出的不是放送的词内容(称为“添加性错误”)，则写在记录纸上该组词后面空格内。如果说的是混杂进去的不需记忆的词，则记在下面非指向栏内相应词下，亦算错误。反应时间从主试者说：“现在请您回答”算起，直到回忆结束。允许回忆时间不超过2min。

当第一组词受试者回忆结束后，间隔5s，再重复一遍指导语，然后放送第二组同，方法同前。在第二组词回忆完毕后，询问受试者“除了要求您记的动物(或穿戴)这类词以外，您还记得别的词吗？”这就是“非指向记忆”结果，可记录在表内混杂词下面的方格内。这里要注意在第一组词回忆完毕时，不要做这样的询问，否则将引起受试者在识记第二组词时把注意力指向识记包括指向和非指向在内的所有词，那就不符合这项测验的原意了。最后询问受试者“用什么方法记忆”。

指导语：“我念一些词，您要注意听，里面有的是水果名字(或动物名字、蔬菜名字、穿戴的东西)，有的不是，要求您记住水果名字(或动物名字一天上飞的、地下跑的、爬的，大的、小的都算；蔬菜名字、穿戴的东西)。我念完以后，您要把听过的水果(或动物、蔬菜、穿戴)的名字说出来，不一定按照我念的顺序说，记得什么就先说什么，听明白了吗？现在注意听”。如果指导语没听明白，可以重复口述一遍。口头重复时，指导语不得任意更改，例如，“要求记住水果(或其它)名字”不得改成“只要记住水果名字或光记(或就记)水果名字”，或者甚至加上“不记其它的东两”就更不对了，这会导致不同的结果，是不允许的。计分：以两组指向记忆刺激词的正确回忆数之和来计分，并记录添加性错误的词或其它错误备分析研究用。(满分24分)。

甲套指向记忆词呈现顺序为：

1.橘子香蕉粽子石榴桃子粉条年糕西瓜葡萄冰糖鸭蛋柿子茶叶豆腐苹果白酒牛奶李子饼干杏花椒香瓜木耳鸭梨

2.乌鸦公鸡耳朵蜜蜂兔子指甲皮肤狐狸麻雀眼睛肩膀青蛙牙齿肝脏苍蝇翅膀心脏老虎头发猴子尾巴蜻蜓鼻子蚂蚁

乙套指向记忆词呈现顺序为：

1.萝卜茄子大麦韭菜黄瓜玉米松树扁豆冬瓜梅花稻子辣椒荷花杨树白菜桃花棉花菠菜芝麻西红柿菊花芹菜柳树豆芽菜

2.围巾球鞋牙膏裙子手套筷子板凳短裤雨衣铁锅剪刀大衣闹钟电灯袜子火柴缝纫机皮袄刷子衬衫扁担毛裤扫帚草帽

2.7.2联想学习：每套有12对2个字组成的词构成量表，其中容易的(成对联想词间有逻辑联系)与困难的(成对联想词间无逻辑联系)成对词各6对，容易联想包括反义词(如困难--容易)、同类词(如太阳--月亮)和从属词(如牲口--牛马)各两对；困难联想包括具体--具体(如西瓜--衣服)、抽象--具体(如勇敢--电灯)和抽象-抽象(如光明--服从)成对词各两对。用以检查对不同成对词的记忆情况。以每对词3s的速度读出，两对词之间间隔2s，12对词随机排列，用录音机放送，共放送三遍，即受试者有三次学习机会，但每遍词放送的顺序不同。每放送一遍后，主试者念每对词的前面一个词(即刺激词)，要求受试者者答出后面一个词来(即反应词)，主试者将结果记录在相应格内。如果回答正确，打“√”号，如果错误，则记录错答之词，没答出来，则以“0”表示。每对词允许回忆时间5s。最后询问受试者“用什么方法记忆”。

指导语：“我给您念12对词，您要注意听，要求您记住哪两个词是连在一起的一对，比如我念‘桌子--马车’，表示‘桌子’和‘马车’是联在一起的一对词。我念完12对词以后，就念每对词中的前面一个词，要求您答出和它一对的后面一个词来，比如我念‘桌子’，您就回答(停顿一下，让受试者回忆)‘马车’，听明白了吗？”如果没听明白，可以重复口述一遍。

计分：分为容易、困难以及两者之和三种分数。每遍放送后，对容易的词每答对一个计0.5分，6对共3分；困难的词每答对一个计1分，6对共6分，6对容易和6对困难词之和为9分，三遍的满分为27分。

2.7.3图象自由回忆：包括2组画有物体的图片材料，每组15张，所画的物体都是人们常见的、熟悉的和易于辨认的东西，如日用品、交通工具等。每张图片呈现4s、图片间间隔2s，图片顺序随机排列。15张图片呈现完毕后，要求受试者者立即回忆说出所记得的图片内容(不一定要按刺激呈现的顺序回忆)。主试者按受试者者回忆的顺序，将所记得的图片在记录纸上按顺序用数字记在相应图片名称下的方格内，并记录总的反应时间。如果受试者说出的是图片中没有的内容(称为添加性错误)，则写在记录纸上该图片系列后面的空格内。反应时从主试者说“现在请您回答”算起，直到回忆结束。允许回忆时间不超过2min。当第一组图片受试者回忆结束后，间隔5s，再重复一遍指导语，然后呈现第二组图片，方法同前。最后询问受试者“用什么方法记忆”。

口述指导语：“我给您看一些图片，您要仔细看，并记住它们是什么，有看不清的可以问，等全部看完后，立即说出您看到的是些什么东西，不一定按照我念的顺序说，记得什么就先说什么，听明白了吗？现在注意看”如果没听明白，可以重复口述一遍，直到受试者理解为止。

计分以两组图片的正确回忆数之和计分(满分30分)，并记录添加性错误。

2.7.4无意义图形再认：包括20张目标刺激图片，40张再认刺激图片(其中与呈现图片相同目标刺激图片20张，相似混同刺激图片20张)。目标刺激为5种形式的无意义图形，即曲线封闭、直线封闭、曲线直线、曲线不封闭、直线不封闭。每种各4张，共20张。

测验时，先给受试者分别呈现20张目标刺激图片，每张呈现3s，相隔3s，要求受试者记住这些目标刺激。然后，随机呈现40张再认刺激图片(包括目标刺激图片和混同刺激图片)，图片随机排列，要求受试者将与目标刺激图片完全相同的图片辨认出来，即每张图片呈现时，回答“看过”或“没看过”，每张允许回忆时间为5s。如果对目标刺激回答“看过”，则按图片中央Z号(从1-20)在记录纸目标刺激一项相应格内打“√”号，如答“没看过”，则打“×”号。如果对混入刺激回答“没看过”，则按图片中央Z号(从21-40)在记录纸混入刺激一项相应格内打“√”号，如答“没看过”，则打“×”号。最后询问受试者“用什么方法记忆”。

口述指导语：“我给您看一些由简单的曲线和直线构成的图形，看的时间比较短，您要仔细看，并记住它们的特点，有看不清的可以问，等看完后，我再给您看另一些图片，其中有您看过的，也有您没看过的，它们都很相似，要求您认出哪些是看过的，哪些是没看过的，听明白了吗？现在注意看”。如果没听明白，可以重复口述一遍，直到受试者理解为止。

无意义图形背面的数字表示见图2。

计分再认分＝(正确再认目标刺激-错误混入刺激数)×2(满分40分)，

即再认分＝(击中-虚报)×2

对目标刺激回答“看过”，称为“击中”，对没看过的混入刺激也回答“看过”，称为“虚报”。

2.7.5人像特点联系回忆：包括6张黑白人面像图片。按随机顺序排列每张人像分别呈现9s，间隔3s，在呈现的同时，告诉被测验者每张图片上的人像的姓名、职业和爱好等特点，重复2遍，并要求被测验者记住人像及特点之间的联系。然后再以另一顺序呈现这些图片，让被测验者立即说出人像的姓名、职业和爱好等特点。如果回答正确，主试者在记录纸相应格内打“√”号，回答错误，则记下说错的内容，每张人像允许回忆时间30s。

口述指导语：“我给您看一些画的人像，在给您看每张人像的同时，向您介绍他姓什么、职业和爱好特点，请您一边注意看人像，一边注意听介绍，且要把人像和他的三个特点联系起来记忆。看完全部人像后，当我再给您看每一张人像时，要求您立即说出他的三个特点，不一定按我说的顺序回答，记得什么先说什么，听明白了吗？”，如果没听明白，可以重复口述一遍，直到受试者理解为止。

计分分别记录回忆出的姓名、职业和爱好的数目，每个姓名记2分，每项职业和爱好各记1分，然后以三项总和计分。(满分24分)

临床记忆量表的5个分量表都有各自的记分方法，各分量表得出的分数均为原始分。根据这些原始分，换算量表分的等价值表，查出各分量表的量表分，计算出总量表分；然后按照不同的年龄组的总量表分的等值记忆商数换算表，即可查得记忆商数(MQ)。这就作为衡量人的记忆水平的指标。

2.8数据处理及结果判定

此试验数据为计量资料，对两组各分测验量表分和记忆商可用t检验进行分析。自身对照可以采用配对t检验，组间平行比较采用两样本均数的t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t’检验或秩和检验；但变异系数太大(如CV＞50％)的资料应用秩和检验。

结果判定：在试验前两组记忆商均衡的前提下，试食后试食组的记忆商高于对照组，且差异有显著性，同时试食组试验后的记忆商高于其试验前的记忆商，且差异有显著性，可以判定该受试样品具有辅助改善记忆的作用。

2.9注意事项

2.9.1心理测验必须由受过训练的人员进行，否则影响试验结果。

2.9.2测试应当在一个安静的房间内进行。除受试者和主试者外，尽量避免有其它人在场。

2.9.3本量表内有三项和视觉有关的分测验，室内光线必须保证能看得清楚刺激图片。尽量排除因听力或视力不佳而影响记忆成绩。

2.9.4必须注意受试者受测时的精神状态，测验需在受试者情绪正常、不反对接受测试、注意力比较集中的情况下进行。受试者是否疲倦，注意力是否集中，是否配合、对测试是否紧张，是否有信心等均需记录在记录纸的首页上。

2.9.5同一受试者的测试要求一次做完。在用年龄量表分比较分测验成绩时，必须注意不同分测验是否在相同的精神状态下进行的。

2.9.6填写记录必须认真，字迹清楚。填写时注意以下几点：

2.9.6.1首页必须逐项填写，即受试者的姓名、性别和年龄，以及检查日期和时间。

2.9.6.2填写文化程度和职业作为了解受试者接受测验的背景材料。

2.9.6.3填写健康状况或诊断，前一夜睡眠情况或当时疲倦与否。

2.9.6.4对表明当时精神状况的各项，如配合程度、注意力、紧张状态、信心等也要填写清楚。

2.9.6.5除记录受试者记忆回答的正误外，应当记下错误回答的具体内容，以备分析研究用。

2.9.6.6是否应用记忆方法以及使用什么方法对记忆研究是有益的。在用此量表进行研究时应当记录此项。

2.9.6.7各项分测验成绩的原始分记入首页总结表中，要先经复查，复查无误方可填入原始分项内。

结果表明，样品对动物和人体试验都具有良好的改善记忆功能。

五、复方人参三醇型皂苷型软胶囊提高缺氧耐受力检验方法

1常压耐缺氧实验

1.1原理

缺氧对机体是一种紧张性刺激，影响机体各种代谢，特别是影响机体的氧化供能，最终会导致机体的心、脑等主要器官缺氧供能不足而死亡。

1.2材料

250mL磨口瓶、秒表、凡士林、钠石灰(或等量氢氧化钠和碳酸钙)。

1.3实验动物

成年健康小鼠，单一性别，18-22g，每组10-15只。

1.4剂量分组及受试样品给予时间

1.5实验步骤

各剂量组经口连续给予不同浓度受试样品，对照组给予同等容量溶剂，于末次灌胃后1小时，将各组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250mL磨口瓶内(每瓶1只)，用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。

1.6统计方法及结果判定

缺氧时间为计量数据，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

受试样品组与对照组比较，存活时间延长，并具有统计学意义，则判定该实验结果阳性。

1.7注意事项：

1.7.1每个磨口瓶内最好只放1只小鼠，以防互相干扰影响耐缺氧能力的测定。

1.7.2磨口瓶一定要密闭封严，以防漏气，否则会影响实验结果。

1.7.3磨口瓶必须等容量(误差±1mL)，实验前先用水加以校正。

1.7.4每批实验动物的体重应尽量保持一致。

2亚硝酸钠中毒存活实验

2.1原理

亚硝酸钠使正常二价铁血红蛋白转变为三价铁血红蛋白，破坏血红蛋白携氧能力，造成组织缺氧死亡。

2.2材料

亚硝酸钠秒表 1mL注射器

2.3实验动物

健康成年小鼠，单一性别，18-20g，每组10-15只。

2.4剂量分组

同1.4

2.5实验步骤

各剂量组经口连续给予不同浓度受试样品，对照组给予同等容量溶剂，于末次灌胃后1小时，各组动物按200-240mg/kgBW剂量腹腔注射亚硝酸钠(注射量为0.1mL/10g)，立即计时，记录动物存活时间。

2.6统计方法及结果判定

存活时间为计量数据，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

3急性脑缺血性缺氧实验

3.1原理

动物断头后，由于脑供血终止，在短时间内脑中原有的血液和营养物质尚能使脑功能维持短暂时间，显示出有规律地张口喘气，以喘气时间为指标，可观察受试样品对脑缺血性缺氧的保护作用，凡能使脑耗氧降低的受试样品，均能延长动物喘气时间。

3.2材料

剪刀秒表

3.3实验动物

同2.3

3.4剂量分组

同1.4

3.5实验步骤

各剂量组经口连续给予不同浓度受试样品，对照组给予同等容量溶剂，于末次灌胃后1小时，各组动物(在乙醚浅麻醉下)自颈部逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。

3.6统计方法及结果判定

喘气停止时间为计量数据，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

受试样品组与对照组比较，喘气时间延长，并具有统计学意义，则判定该实验结果阳性。

3.7结果判定

常压耐缺氧实验、亚硝酸钠中毒存活实验、急性脑缺血性缺氧实验三项实验中至少二项实验结果阳性，可判定该受试样品具有提高缺氧耐受力的作用。

3.8注意事项

3.81断头用的大剪刀必须锋利，断头时操作要敏捷，捉拿小鼠不宜反复多次或捉拿时间过长。

3.8.2断头部位在小鼠耳根后部，切勿损伤延脑，否则断头后小鼠不显现喘气活动。

结果表明，样品对动物具有良好的抗缺氧功能。

六、本发明的药学研究

1、本发明的稳定性

实施例七个样品在室温下避光保管，放置1、2、3、6、12个月，按时检查，外观基本不变，有效成分经检验也未发生变化。因此，初步认为各种处方制得的产品均可达到1年左右的保质期。

2、粉针剂和输液剂的刺激性试验

取健康家兔4只，W：2.0～2.2kg，雌雄各半，分为两组，分别在其左右腿股四头肌上注射黄芪输液1m1，药后48h处死兔子，剖检股四头肌，纵向切开观察注射局部肌肉刺激反应，并按下表换算出相应的反应级。

局部肌肉刺激反应级表：

结果：

粉针剂和输液的刺激性均为0级，表明注射剂无刺激性。

Claims

1、一种具有生理活性的复方人参三醇皂苷，其特征在于复方中各有效成分的重量配比为：

含PTG 51～98％的人参三醇皂苷组 10％～68％

含银杏黄酮＞24％、银杏内酯＞6％的银杏提取物 5％～49％

茶氨酸 20％～75％。

2、根据权利要求1所述的具有生理活性的复方人参三醇皂苷，其特征在于复方中还含有以下活性成分：维生素B₁、B₂、B₆。

3、根据权利要求2所述的具有生理活性的复方人参三醇皂苷，其特征在于复方中各有效成分的重量配比为：

含PTG 51～98％的人参三醇皂苷组 10％～55％

含银杏黄酮＞24％、银杏内酯＞6％的银杏提取物 5％～40％

茶氨酸 20％～70％

维生素B₁ 1％～5％

维生素B₂ 1％～5％

维生素B₆ 1％～5％。

4、根据权利要求1所述的具有生理活性的复方人参三醇皂苷，其特征在于：人参三醇皂苷组中人参皂苷Rg₁在其中的含量为45％～99％，其余为Re、Rf、Rg₂、Rh₁。

5、一种具有生理活性的复方人参三醇皂苷制剂，其特征在于制剂中各成分的重量配比为：权利要求1所述的复方人参三醇皂苷5％～85％、辅料15％～95％，辅料为药用或食用辅料中的一种或几种，制成医药或食品上可以接受的制剂。

6、权利要求1所述的复方人参三醇皂苷在制备对脑细胞活力和脑神经细胞活力具有正性的加强作用的药物中的应用。

7、权利要求1所述的复方人参三醇皂苷在制备治疗或改善因血液系统或神经系统弱化而引起的脑供血、供氧不足及神经活动减弱的疾病或功能失调的药物中的应用。

8、根据权利要求1所述的复方人参三醇皂苷的用途，其特征在于制成医疗上可接受的各种新药及功能食品。

9、根据权利要求1所述的复方人参三醇皂苷的用途，其特征在于制成粉针剂、滴剂、舌下含片、速溶片、咀嚼片和普通的口服剂及各种食品饼干、糖果、饮料、果冻。