CN100526309C - 二聚化合物及其作为抗病毒剂的应用 - Google Patents

二聚化合物及其作为抗病毒剂的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN100526309C
CN100526309C CNB028222482A CN02822248A CN100526309C CN 100526309 C CN100526309 C CN 100526309C CN B028222482 A CNB028222482 A CN B028222482A CN 02822248 A CN02822248 A CN 02822248A CN 100526309 C CN100526309 C CN 100526309C
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
formula
virus
preparation
acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CNB028222482A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1585766A (zh
Inventor
贝蒂·吉恩
西蒙·J.·F.·麦克唐纳
达里尔·麦康奈尔
范·T.·T.·阮
斯蒂芬·E.·沙纳汉
文-洋·吴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Biota Scientific Management Pty Ltd
Original Assignee
Biota Scientific Management Pty Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biota Scientific Management Pty Ltd filed Critical Biota Scientific Management Pty Ltd
Publication of CN1585766A publication Critical patent/CN1585766A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100526309C publication Critical patent/CN100526309C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
    • C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
    • C07D407/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/351—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom not condensed with another ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/7056—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing five-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
    • C07D309/16—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D309/28—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明涉及通式(I)的化合物或其药物学上可接受的盐：其中：R是氨基或胍基；R2是乙酰基或三氟乙酰基；X是CONH、NHCO或O；n是2-6的整数；以及Y是C2-8烷基、C3-8环烷基、C1-4烷氧基烷基、氨基酸或二肽。本发明还涉及所述化合物的制备方法、包含该化合物的药物制剂或其在预防或治疗病毒感染中的应用。

Description

二聚化合物及其作为抗病毒剂的应用
技术领域
本发明涉及新的化合物及其在药物中的应用。具体而言，本发明涉及新的二聚化合物、其制备方法、包含该化合物的药物制剂以及它们作为抗病毒剂的应用。
背景技术
能够由其他糖类中断裂N-乙酰基神经氨酸(NANA)(也称为唾液酸)的酶存在于许多微生物中。这些微生物包括细菌，如Vibrio cholera、Clostridium perfringens、Streptococcus pneumoniae和Arthrobactersialophilus，以及病毒，如流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、新城疫病毒和仙台病毒。这些病毒中的大多数属于正粘病毒或副粘病毒族，而且在病毒颗粒的表面上携带神经氨酸酶活性。许多这些具有神经氨酸酶的生物是人和/或动物的主要病原体，而且其中一些病毒，如流感病毒和新城疫病毒，可导致重大的疾病发生。
长久以来人们都认为神经氨酸酶的抑制剂可预防由携带神经氨酸酶的病毒导致的感染。大多数已知的神经氨酸酶抑制剂是神经氨酸的类似物，如2-脱氧-2，3-脱氢-N-乙酰基神经氨酸(DANA)及其一些衍生物(Meindl等人，Virology，1974，58，457)。我们的国际专利申请公开WO91/16320描述了许多的DANA类似物，它们对于对抗病毒神经氨酸酶具有活性，而且已具体地证实4-胍基-2-脱氧-2，3-脱氢-N-乙酰基神经氨酸(化合物(A)，编码GG167)可用于治疗甲型和乙型流感(N.Engl.J.Med.，1997，337，874-880)。其他专利申请描述了各种非常相关的唾液酸衍生物(例如PCT申请公开WO 95/18800、WO 95/20583和WO98/06712)，而且还有人描述了GG167的抗病毒大分子结合物(国际专利申请PCT/AU97/00771)
Figure C02822248D00061
化合物(A)
Ac代表乙酰基
国际专利申请公开WO 00/55149描述了一种二聚化合物，该化合物包含两个结合神经氨酸酶的分子，例如化合物(A)，该分子连接在长度最高为100个原子的普通间隔基或者连接基上。
我们已经发现一类新的化合物，该化合物落在国际专利申请公开WO00/55149的总范围内，但没有被具体公开，而且表现出非常优异的抗流感活性状态，这包括长的肺部停留时间以及高效力。
不希望囿于任何理论的限制，在肺部长的停留时间的基础被认为是由于化合物的尺寸和分子量阻止了通过紧密连接进入呼吸上皮中，而且化合物的极性使得由细胞膜中通过不能充分地进行。另一种理论是化合物本身与细胞膜中的磷脂或者呼吸上皮中的其他组分相互作用并且增加了在肺部的停留时间。
发明内容
在第一个方面中，本发明提供通式(I)的化合物或其药物学上可接受的衍生物：
Figure C02822248D00071
其中
R是氨基或胍基，
R2是乙酰基或三氟乙酰基，
X是CONH、NHCO或O，
n是2—6的整数，以及
Y是C2-8亚烷基、C3-8亚环烷基、C1-4亚烷氧基烷基、氨基酸或二肽。
R优选是胍基。
R2优选是乙酰基。
在此所用术语“C2-8烷基”是指包含2—8个碳原子的直链或支链烃基。此等烷基的代表性例子是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基、庚基和辛基。
在此所用术语“C3-8环烷基”是指包含3—8个碳原子的脂环基。此等环烷基的代表性例子是环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
在此所用术语“C1-4烷氧基烷基”是指包含1—4个碳原子的直链或支链烷氧基。此等烷氧基的代表性例子是甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
在此所用术语“氨基酸”包括其最广泛的含义，并指α-氨基取代的羧酸，它们是蛋白的构建块，例如在Albert L Lehninger的“Principles ofBiochemistry”(Worth Publishers，Inc.1982)第96页中所列出的20种标准氨基酸。
在此所用术语“二肽”包括其最广泛的含义，并指通过肽键(也称为酰胺键)连接的两个氨基酸。其例子包括谷氨酸—甘氨酸、甘氨酸—甘氨酸、或者天冬氨酸—甘氨酸。
本领域技术人员应认识到，式(I)的化合物可在式(I)化合物的一个或者多个官能团上进行改性以提供其药物学上可接受的衍生物。其中特别重要的此等衍生物是在羧基官能团、羟基官能团或氨基处进行改性的化合物。这些重要的化合物包括烷基酯，如甲基、乙基、丙基或异丙基酯，芳基酯，如苯基、苯甲酰基酯，以及式(I)化合物的乙酰基酯。
术语“药物学上可接受的衍生物”是指式(I)化合物或者在给药时能够提供式(I)化合物或其具有抗病毒活性的代谢物或残留物的任何其他化合物的任意药物学上可接受的盐、醚、酯或者所述酯的盐。特别令人感兴趣的衍生物是在唾液酸羧基或甘油羟基或者在氨基和胍基处改性的化合物。
式(I)化合物之药物学上可接受的盐包括那些衍生于药物学上可接受的无机和有机酸和碱的盐。合适的酸的例子包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富马酸、马来酸、磷酸、甘醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘—2—磺酸和苯磺酸。诸如草酸的其他酸，虽然它们本身不是药物学上可接受的，但也可用于制备作为中间体的盐，该作为中间体的盐则可用于得到本发明的化合物及其药物学上可接受的酸加成盐。
衍生于合适碱的盐包括碱金属(如钠)、碱土金属(如镁)、铵以及NR4 +(其中R是C1-4烷基)盐。
本发明的化合物通过在此描述的方法来制备。对于本领域技术人员显而易见的是，在将单体连接至烷基间隔基上期间，必须使用保护基来保护结合神经氨酸酶的分子的一个或者多个官能团。例如参见：“Protective Groups in Organic Synthesis”，T.W.绿色和P.G.M.Nuts(John Wiley & Sons，1991)。式(I)化合物之药物学上可接受的盐可根据已知的方法来制备。
为易于处理和制备，式(I)的化合物优选为结晶形式。
因此，本发明还提供制备如上所定义的式(I)化合物的方法，当X是CONH或NHCO时，其包括以下步骤：
(a)使式(II)化合物
其中R2和n如以上所定义，P1是羧酸保护基，而X1是NH2或CO2H；
与式(III)的化合物偶联，
X2—Y—X2              (III)
其中Y如以上所定义，而X2是NH2或CO2H，但不与X1相同，形成式(IV)的化合物，
(b)使式(IV)的化合物脱保护。
式(I)化合物具有抗病毒活性。具体而言，这些化合物是正粘病毒和副粘病毒的病毒神经氨酸酶的抑制剂，例如甲型和乙型流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒和新城疫病毒的病毒神经氨酸酶。
因此，在本发明的第二方面中，其提供式(I)化合物及其药物学上可接受的衍生物在治疗病毒感染、例如正粘病毒和副粘病毒感染中作为活性治疗剂的用途。
在本发明的第三方面中，其提供用于预防或者治疗病毒感染的方法，其包括向需要治疗的患者给药式(I)化合物或其药物学上可接受的盐或衍生物的步骤。
优选地，所述病毒感染是正粘病毒或副粘病毒感染。更优选地，所述病毒感染是甲型或乙型流感感染
优选地，所述患者是动物如哺乳动物，更优选是人，或者是马属中的一员，例如马、驴或骡子。最优选的哺乳动物是人。
在第四方面中，本发明提供本发明的化合物在制备用于治疗病毒感染的药物中的应用。
在此所用术语“有效量”是指式I化合物的量能够有效地预防或者治疗病毒感染以产生所希望的治疗应答，例如，为克服或者缓解病毒感染的作用。
术语“治疗有效量”是指式I化合物的量产生所希望的治疗应答，例如治疗或者预防病毒感染。
显然，特定的“治疗有效量”将随以下因素而变化：具体待治疗的病毒感染、或者的身体状况、待治疗的动物的类型、治疗的时间长短、共同治疗(如果有的话)的性质、以及所采用的具体制剂和化合物或其衍生物的结构。
通常情况下，术语“治疗”在本发明中是指影响患者、组织或细胞以得到所希望的药理学和/或生理学作用。所述作用可以是预防性的，即、完全或者部分地预防病毒感染或其病征或症状，和/或可以是治疗性的，即、部分或者完全治愈病毒感染。在此所用术语“治疗”覆盖了在脊椎动物、哺乳动物、特别是人中治疗或预防病毒感染，而且包括(a)预防易染病毒感染但尚未被诊断患有病毒感染的患者中发生病毒感染；(b)抑制病毒感染，即、使其发展停止；或者(c)缓解或改善病毒感染的作用，即、使其症状消退。
本发明的化合物还可用于诊断方法中，特别是用于检测流感病毒的方法中。在用于此等方法时，有利的是将本发明的化合物连接在标记物上，如放射性、荧光或化学发光标记物。
适用于本发明化合物的诊断方法例如描述在我们早期的申请PCT/AU97/00109和PCT/AU97/00771中。
在本发明的第五方面中，其提供一种用于检测病毒感染的方法，该方法包括使本发明的化合物与怀疑包含病毒的样品相互接触的步骤。
应进一步地认识到，用于治疗所需的本发明的化合物的数量不仅随所选择的特定化合物而变，还随给药途径、治疗症状的性质、患者的年龄和症状而变，并最终由值班医师或兽医斟酌决定。但是一般地，适宜的剂量范围为大约0.001—100mg/kg体重/天，优选范围为0.01—10mg/kg/天，最优选范围为0.1—1mg/kg/天。
治疗优选在感染前和感染时开始，并持续至病毒不再存在于呼吸道中。但是所述化合物如果在感染后例如在确定的症状出现之后给予也是有效的。
适宜地，治疗进行一次或两次，优选治疗仅进行一次，而对于预防优选每周进行一次。
化合物可方便地以单位剂量剂型给药，例如每单位剂量剂型包含1—100mg、更方便为1—20mg的活性成分。
尽管在治疗应用中，本发明的化合物可以以原化学药品形式给药，但优选以药物制剂的活性组分形式存在。
因此在第六方面中，本发明提供包含式(I)化合物或其药物学上可接受的盐或衍生物和一种或多种药物学上可接受的载体、以及任选其它治疗和/或预防组分的药物组合物。所述载体必须是“可接受的”，意思是与制剂中的其它组分相容的并且对受者无害。
本发明的化合物也可以与其它治疗和/或预防剂例如抗感染剂组合使用。具体而言，本发明的化合物可以与其它抗病毒剂一起使用。因此在第七方面中，本发明提供包含式(I)化合物或其药物学上可接受的盐或衍生物与另一种活性治疗和/或预防剂、特别是抗病毒剂的组合。
上述组合可以方便地以药物制剂的形式存在而被使用，因此包含如上定义的组合与药物学上可接受的载体的制剂构成本发明的另一方面。
在所述组合中使用的合适的治疗和/或预防剂包括其它抗感染剂，特别是诸如那些用于治疗呼吸道感染的抗细菌和抗病毒剂。例如，所述组合中可包含其它有效地抗流感病毒的化合物或疫苗，例如上述唾液酸类似物，如扎那米韦、奥塞米韦、金刚烷胺、金刚乙胺和利巴韦林和FluVax。
该组合中的单个组分可以单独或者组合药物制剂的形式单独、顺序或者同时给药。
当本发明的化合物与第二种治疗和/或预防剂一起使用对抗相同的病毒时，各化合物的剂量可以与各化合物单独使用时的剂量相同或不同。合适的剂量是本领域技术人员很容易掌握的。
药物制剂包括那些适用于口服、直肠、经鼻、局部(包括口腔和舌下)、阴道或非胃肠(包括肌内、皮下和静脉内)给药的制剂，或者那些适用于呼吸道(包括鼻通道)给药的制剂，例如通过吸入或吹入给药的制剂。如果需要，所述制剂可以方便地以离散的剂量单位剂型存在，并且可以通过制药领域公知的任何方法制备。这些方法包括以下步骤：将活性化合物与液体载体或细粉固体载体或二者混合，然后如果需要，将产品成形为所需制剂。
适用于口服给药的药物制剂可以方便地以离散单位如各自含预定量活性组分的胶囊剂、扁囊剂或片剂形式存在；以粉剂或颗粒剂形式存在；以溶液剂、混悬剂或乳剂形式存在。活性组分也可以制备成大丸剂、干药糖剂或糊剂形式存在。口服给药的片剂和胶囊剂可以包含常规赋形剂如粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂或润湿剂。片剂可按照本领域公知的方法包衣。例如，口服液体制剂可以是水或油悬浮剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂或酏剂的形式，或者可以干产品的形式存在，在使用前与水或其它适宜的载体混合。此等液体制剂可以包含常规添加剂如悬浮剂、乳化剂、包括食用油的非水载体、或防腐剂。
本发明的化合物也可以配制成用于通过注射，例如快速浓注，或连续输注的非胃肠给药，并且可以是在安瓿、预填充注射器、小体积输注或多剂量容器中的加有防腐剂的单位剂量剂型存在。组合物可以为在油或水载体中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可含有赋形剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性组分可以是在使用前与合适的载体如无菌无热原水混合的粉末形式，粉末通过无菌分离灭菌固体或通过冷冻干燥溶液来获得。
为了局部给药于表皮，本发明的化合物可配制成油膏剂、乳膏剂或洗剂，或者是透皮贴剂。油膏和乳膏例如可用水性或油性基质并加入合适的增稠剂和/或凝胶剂来配方。洗剂可用水性或油性基质来配制，并且通常还含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。
适于局部给药于口腔的制剂包括锭剂，其包含在香味基质中的活性组分，香味基质通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄耆胶；软锭剂，其包含在惰性基质中的活性组分，惰性基质例如是明胶或者蔗糖和阿拉伯胶；和漱口剂，其包含在合适的液体载体中的活性组分。
其中载体为固体的适于直肠给药的药物制剂最优选为单位剂量的栓剂。合适的载体包括可可脂和本领域常用的其它材料，并且栓剂可如下方便地制备：将活性化合物与软化的或熔化的载体混合并冷却，然后在模具中成型。
适于阴道给药的制剂可以是阴道栓、塞子、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾剂，其中除含有活性组分之外还含有本领域已知的合适载体。
在给药于呼吸道时，包括鼻腔内给药，神经氨酸酶抑制剂可通过本领域用于呼吸道给药的任何方法和制剂来给药。
因此，化合物通常以溶液或悬浮液形式或干粉形式来给药。
溶液或悬浮液通常是水性的，如单独由水制备的(例如无菌或无热原水)或水和生理可接受的共溶剂(例如乙醇、丙二醇或聚乙二醇如PEG 400)。
这些溶液或悬浮液可另外含有其它赋形剂例如防腐剂(如苯扎氯铵)、增溶剂/表面活性剂如聚山梨醇酯(例如吐温80、司盘80、苯扎氯铵)、缓冲剂、等渗调节剂(例如氯化钠)、吸收促进剂和增稠剂。混悬剂还可另外含有悬浮剂(例如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠)。
通过常规方式将溶液剂或混悬剂直接用于鼻腔，例如通过滴管、吸管或喷雾器。制剂可以单剂量或多剂量形式提供。后者需要提供定量装置。使用滴管或吸管时，这可通过给予合适的预定体积的溶液或悬浮液由病人完成。用喷雾器给药时，例如可通过定量雾化喷雾泵的方式来完成。
也可通过气雾剂的方式来给药于呼吸道，在该制剂中化合物在有合适喷射剂的加压包中，并带有喷射剂如氯氟烃(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。气雾剂通常也可含有表面活性剂如卵磷脂。药物的剂量可通过设置定量阀来控制。
或者，本发明的化合物可以以干粉的形式提供，例如化合物在合适粉末基质中的粉末混合物，粉末基质例如是乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。粉末载体将在鼻腔中适宜地形成凝胶。粉末组合物可以是单剂量剂型，例如由明胶制成的胶囊或药筒，或水泡包装，其中的粉末可通过吸入器来给药。
在打算用于呼吸道给药的制剂中，包括鼻腔内给药的制剂，化合物通常具有小的粒度，例如5微米或更小的程度。可通过本领域已知的方法来获得这样的粒度，例如通过微粉化。
需要时，可采用适于活性组分缓释的制剂。
优选本发明的化合物通过吸入、吹入或鼻内给药或它们的组合而给药于呼吸道。
“Relenza”是通过“Diskhaler”(GlaxoSmithKline公司集团的商标)用口吸入自由流动粉末而给药的。类似的制剂将适于本发明。
因此，在第八方面中，本发明提供一种包含上述配方的吸入器。
本领域技术人员可以理解，吸入器还可以是定量气溶胶吸入器的形式。
为本发明的目的，可以清楚地理解术语“包含”是指“包括但不限于”，并且“包括”一词具有同样的意思。
在此引入所有的出版物，包括但不限于本说明书引用的专利和专利申请作为参考，如同具体而单独地显示各单独的出版物以在此如其充分描述的那样引入作为参考。
具体实施方式
本发明现在仅通过参考下列非限制性实施例的方式详细描述。
表1
Figure C02822248D00161
其中
R2是乙酰基，R是胍。
 
化合物号 Y x n
1 (CH<sub>2</sub>)<sub>8</sub> CONH 6
2 (CH<sub>2</sub>)<sub>4</sub> CONH 6
3 (CH<sub>2</sub>)<sub>2</sub> CONH 6
4 CH<sub>2</sub>OCH<sub>2</sub> CONH 6
5 (CH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> CONH 6
6 (CH<sub>2</sub>)<sub>5</sub> CONH 6
7 (CH<sub>2</sub>)<sub>6</sub> CONH 6
8 (CH<sub>2</sub>)<sub>7</sub> CONH 6
9 (CH<sub>2</sub>)<sub>2</sub> CONH 3
10 5-降冰片烯-2，3-二酸 CONH 6
11 (CH<sub>2</sub>)<sub>s</sub> CONH 3
12 CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>CH(NH<sub>2</sub>)CONHCH<sub>2</sub>谷氨酸-甘氨酸 CONH 3
13 CH(NH<sub>2</sub>)CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>谷氨酸 CONH 3
14 CH(NH<sub>2</sub>)CH<sub>2</sub>天冬氨酸 CONH 3
15 (CH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> NHCO 2
16 CH<sub>2</sub>CH<sub>2</sub>OCH<sub>2</sub> CH<sub>2</sub> NHCO 2
17 (CH<sub>2</sub>)<sub>2</sub> NHCO 2
18 (CH<sub>2</sub>)<sub>6</sub> NHCO 2
19 (CH<sub>2</sub>)<sub>4</sub> NHCO 1
20 (CH<sub>2</sub>)<sub>6</sub> NHCO 1
21 (CH<sub>2</sub>)<sub>4</sub> CONH 3
22 (CH<sub>2</sub>)<sub>5</sub> CONH 3
23 (CH<sub>2</sub>)<sub>6</sub> CONH 3
24 (CH<sub>2</sub>)<sub>7</sub> CONH 3
25 (CH<sub>2</sub>)<sub>8</sub> CONH 3
机器方法
绿色方法(LC/MS)
Micromass Platform II质谱仪，在正离子电喷雾模式下运行，质量范围为100—1000amu。
柱：3.3cm×4.6mm ID，3μm ABZ+PLUS
流速：3ml/min
注射体积：5μl
溶剂A：95％乙腈+0.05％甲酸
溶剂B：0.1％甲酸+10mMol乙酸铵
梯度：0％ A/0.7分钟，0—100％ A/3.5分钟，100％ A/1.1分钟，100—0％ A/0.2分钟
紫色方法(质量相关的自动制备HPLC)
所用的制备柱是Supelcosil ABZplus(10cm×2.12cm)
UV波长：200—320nM
流速：20ml/min
注射体积：1ml
溶剂A：0.1％甲酸
溶剂B：95％乙腈+5％甲酸
梯度：100％ A/1分钟，100—80％ A/9分钟，80—1％ A/3.5分钟，1％ A/1.4分钟，1—100％ A/0.1分钟
青绿色方法(自动制备HPLC)
所用的制备柱是Supelcosil ABZplus(10cm×2.12cm)
UV波长：230nm
流速：4ml/min
注射体积：2ml
溶剂A：乙腈+0.05％TFA
溶剂B：水+0.1％TFA
方法A(LC/MS)
Micromass Platform II质谱仪，在正离子电喷雾模式下运行，质量范围为100—1000amu。
柱：3.3cm×4.6mm ID，3μm ABZ+PLUS
流速：3ml/min
注射体积：5μl
溶剂A：95％乙腈+0.05％甲酸
溶剂B：0.1％甲酸+10mMol乙酸铵
梯度：0％ A/0.7分钟，0—100％ A/3.5分钟，100％ A/1.1分钟，100—0％ A/0.2分钟
方法B(LC/MS)
Waters ZQ质谱仪，在正离子电喷雾模式下运行，质量范围为100—1000amu。
柱：3.3cm×4.6mm ID，3μm ABZ+PLUS
流速：3ml/min
注射体积：5μl
溶剂A：95％乙腈+0.05％甲酸
溶剂B：0.1％甲酸+10mMol乙酸铵
梯度：0％ A/0.7分钟，0—100％ A/3.5分钟，100％ A/1.1分钟，100—0％ A/0.2分钟
方法C(自动制备HPLC)
所用的制备柱是Supelcosil ABZplus(10cm×2.12cm)
UV波长：230nm
流速：4ml/min
注射体积：2ml
溶剂A：乙腈+0.05％TFA
溶剂B：水+0.1％TFA
梯度：0—40％ A/20分钟，40％ A/20分钟，40—100％ A/0.3分钟，100％ A/15分钟，100—0％A/3分钟
方法D(质量相关的自动制备HPLC)
所用的制备柱是Supelcosil ABZplus(10cm×2.12cm)
UV波长：200—320nM
流速：20ml/min
注射体积：1ml
溶剂A：0.1％甲酸
溶剂B：95％乙腈+5％甲酸
梯度：100％ A/1分钟，100—80％ A/9分钟，80—1％ A/3.5分钟，1％ A/1.4分钟，1—100％ A/0.1分钟
缩写
EtOAc：乙酸乙酯
MeOH：甲醇
HPLC：高压液相色谱
SPE：固相提取
LC/MS：液相色谱/质谱
DMF：N，N-二甲基甲酰胺
WSCDI：1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺甲碘化物
HOBt：1-羟基苯并三唑
DIPEA：N，N-二异丙基乙基胺
MeCN：乙腈
RT：室温
EtOAc：乙酸乙酯
MgSO4：硫酸镁
DMF：二甲基甲酰胺
实施例1：制备化合物1
中间体1
Figure C02822248D00201
由无水甲苯中共沸3次，由此干燥(4S，5R，6R)-5-乙酰基氨基-4-叠氮基-6-[(S)4-硝基苯氧基羰基氧基]-(2-氧代-[1，3]二氧戊环-4R-基)-甲基]-5，6-二氢-4H-吡喃-2-羧酸甲基酯(参见：Eur.J.Med.Chem.1999，34，563-574)(2.00g，3.8mmol)，然后溶解在无水乙腈(20ml)中并同时添加一些3埃分子筛颗粒。溶液在搅拌下用N-叔丁氧基羰基1，4-二氨基丁烷(0.72g，3.8mmol)和三乙胺(0.43g，4.2mmol)处理。混合物在氮气氛下搅拌16小时。真空除去挥发性成分以得到黄色残留物。该残留物重新溶解在EtOAc(50ml)中，用0.5M HCl(30ml)、然后盐水(30ml)洗涤。干燥溶液(Na2SO4)，然后真空蒸发溶剂以得到乳色泡沫。用Biotage快速色谱做进一步纯制，洗脱剂初始为EtOAc：环己烷(1：1)、然后用EtOAc。真空蒸发溶剂产生中间体1(1.26g，58％产率)白色固体的。LC/MS(方法B)显示MH+＝571，TRET＝2.87分钟。
中间体2
Figure C02822248D00211
将中间体1(0.76g，1.33mmol)溶解在乙醇(24ml)中，然后在Lindlar催化剂(0.095g)上进行催化氢化16小时。通过过滤除去催化剂，然后真空蒸发溶剂，得到乳色泡沫状的中间体2(0.72g，99％产率)。LC/MS(方法A)显示MH+＝545，TRET＝2.24分钟。
中间体3
Figure C02822248D00212
将中间体2(0.72g，1.32mmol)溶解在四氢呋喃(7ml)中，然后用处理N，N′-二-(叔丁氧基羰基)-1-脒基吡唑(0.45g，1.45mmol)处理。在氮气氛下搅拌混合物16小时。真空除去挥发性成分以产生固体残留物，该残留物通过Biotage快速色谱纯制，洗脱剂初始为EtOAc：环己烷(1：1)，然后为EtOAc：环己烷(5：3)。真空蒸发溶剂得到白色固体的中间体3(0.48g，46％产率)。LC/MS(方法A)显示MH+＝787，TRET＝3.64分钟。
中间体4
Figure C02822248D00221
将中间体3(0.48g，0.61mmol)溶解在二氯甲烷(19ml)中。溶液在冰浴中冷却，然后在5分钟的时间内分批添加三氟乙酸(19ml)。在氮气氛下搅拌混合物1小时，然后温热至室温，并继续搅拌16小时。真空除去挥发性成分，由甲苯中共沸蒸馏残留物以除去残余的三氟乙酸。用乙醚(20ml)研磨得到白色固体并进行分离，产生中间体4(0.50g)。LC/MS(方法B)显示(M-H)-＝485，TRET＝0.52分钟。
中间体6
Figure C02822248D00222
(4S，5R，6R)-5-乙酰基氨基-4-叠氮基-6-[(S)-4-硝基苯氧基羰基氧基]-(2-氧代-[1，3]二氧戊环-4R-基)-甲基-5，6-二氢-4H-吡喃-2-羧酸甲基酯(参见：Eur.J.Med.Chem.1999，34，563-574)(4.0g)与甲苯(50mL)共沸并溶解在MeCN(40mL)和三乙胺(1.12mL)中，然后添加3-氨基丙酸叔丁基酯盐酸盐(1.396g)。室温下3天后，除去溶剂，残留物用EtOAc(150mL)稀释。该溶液用5％柠檬酸溶液(2×50mL)洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩。通过Biotage纯制，其中用1：1环己烷：EtOAc、然后60：40和65：35环己烷：EtOAc洗脱，得到无色泡沫状的中间体(3.45g)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ 6.72(d，1H)，5.97(d，1H)，5.53(t，1H)，5.40(t，1H)，5.03-4.95(m，2H)，4.92(dd，1H)，4.74-4.64(m，2H)，3.83(s，3H)，3.64-3.54(m，1H)，3.38-3.27(m，2H)，2.65-2.56(m，1H)，2.52-2.43(m，1H)，2.06(s，3H)，1.70(s，1H)，1.48(s，9H)
中间体7
Figure C02822248D00231
类似于中间体2由中间体6进行制备。LC/MS(绿色方法)MH+ 504，TRET＝2.22分钟
中间体8
类似于中间体3由中间体7制备中间体8。LC/MS(绿色方法)MH-744，TRET＝3.66分钟
中间体9
Figure C02822248D00241
在室温下搅拌中间体8(1.44g)、三氟乙酸(20mL)、二氯甲烷(20mL)和茴香醚(2mL)3小时，之后真空除去挥发性成分。残留物用Et2O(2×25mL)研磨，然后真空干燥，得到白色固体的中间体9(1.22g)。LC/MS(绿色方法)MH+488，TRET＝1.25分钟
实施例5：通过中间体5与琥珀酸的反应制备化合物9
Figure C02822248D00242
按照类似于实施例1中对氨基丁基中间体4的描述步骤顺序制备氨基丙基中间体5。
将琥珀酸(4.21mg，0.0357mmol)、中间体5(50mg，0.071mmol)和苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)六氟磷酸鏻(BOP)(37.7mg，0.0852mmol)溶解在DMF(2ml)中，然后向其中添加二异丙基乙基胺(DIPEA，91.8mg，0.71mmol)。所得混合物在室温下搅拌5小时。反应混合物通过使用WatersSymmetry C18柱(5微米19×100mm)的反相HPLC进行纯制，而梯度洗脱如以下表中所示，得到经保护的二聚物(12.8mg，35％)，MS 1027.4(M+H)+。
 
时间(分钟) A％ B％ 流速(ml/min)
0 100 0 6
2 100 0 6
22 40 60 6
32 40 60 6
35 100 0 6
42 100 0 6
A＝包含0.1％三氟乙酸的水
B＝包含0.06％三氟乙酸的乙腈
将经保护的二聚化合物(12.5mg，0.0121mmol)溶解在比例为4：4：1水/甲醇/三乙基胺的混合物(1.5ml)中，然后在室温下搅拌1小时，接着减压蒸发至干。重复添加水并在减压下蒸发，由此除去剩余的三乙胺。残留物通过使用Waters Symmetry C18柱(5微米19×100mm)的反相HPLC进行纯制，而梯度洗脱如以下表中所示，在冻干后得到白色固体的二聚物9(7.5mg，65％)。
 
时间(分钟) A％ B％ 流速(ml/min)
0 100 0 6
2 100 0 6
22 40 60 6
32 40 60 6
35 100 0 6
42 100 0 6
A＝包含0.1％三氟乙酸的水
B＝包含0.06％三氟乙酸的乙腈
MS 474.4(M+2H)2+，946.8(M+H)+
1H-NMR(D2O)δ(ppm)：1.64(br，4H)；1.94(s，6H)；3.06(br，4H)；3.17(m，6H)；3.48(dd，2H)；3.63(dd，2H)；4.05(m，2H)；4.10(dd，2H)；4.39(dd，2H)；4.49(dd，2H)；4.91(dd，2H)；5.82(d，2H)
实施例2
在类似于实施例1中所述的条件下，使正确的氨基烷基化合物(如中间体4或5)与合适的二羧酸偶联，由此制备表1中的化合物1—8、10—14和21—25。
实施例3
在类似于实施例1中所述的条件下，使羧基中间体9与合适的二胺偶联，然后脱保护，由此制备表1中的化合物15—18。表1中的化合物19和20是通过中间体9的甘氨酸羧基类似物与合适二胺偶联而制得的。
实施例4：式(I)化合物的评价—对流感病毒复制的抑制
基本上如Watanabe等人(J.Virological Methods，1994 48 257)所述进行细胞病变效应(CPE)分析。在本发明化合物的连续稀释液存在下，用确定的病毒接种体(通过实验确定为足以在72小时后产生足够的CPE并易于将化合物控制在认为与公开的标准一致的浓度的最小量)感染MDCK细胞。将培养物于37℃和5％CO2气氛下培养至多72小时。根据公开的方法(例如参见Watanabe等人，1994)，通过病毒染料3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物(MTT)测定CPE的程度及其导致的病毒复制。使用用于曲线拟合的计算机程序计算CPE抑制50％时的化合物浓度(ID50)。分析流感A/Sydney/5/97和B/Harbin/7/95病毒，结果如表1所示。关于WO 00/55149中具体公开的化合物和化合物A的参照数据也示于表1中。
表1
 
ID<sub>50</sub>μg/ml ID<sub>50</sub>μg/ml
描述 A/Sydney/5/97+ B/Harbin/7/95
化合物A 0.023+/-0.024 0.013+/-0.011
化合物1 0.0007 0.009
化合物2 0.0003 0.003
化合物3 0.0003 0.002
化合物4 0.0003 0.001
化合物5 0.0005 0.0009
化合物6 0.0008 0.005
化合物7 0.0003 0.001
化合物8 0.0004 0.001
化合物9 0.0003 0.0003
化合物10 0.0006 0.0007
化合物11 0.0003 0.0003
化合物12 0.0005 0.0002
化合物13 0.0003 0.0002
化合物14 0.0003 0.0002
化合物15 >0.1 0.0002
化合物16 0.0005 0.0003
化合物17 >0.1 0.0004
化合物18 0.0003 0.0003
化合物19 >0.1 0.0002
化合物20 >0.1 0.00005
化合物21 0.0002 0.0003
化合物22 0.0002 0.0003
化合物23 0.0002 0.0003
化合物24 0.0002 0.0007
化合物25 0.0001 0.0003
化合物8* 0.0007，0.0005 0.007+/-0.01
化合物10* 0.057 >0.1
＊参考WO 00/55149
实施例5：式(I)化合物的评价—对流感病毒复制的抑制
基本上如Watanabe等人(J.Virological Methods，1994 48 257)所述进行细胞病变效应(CPE)分析。在本发明化合物的连续稀释液存在下，用确定的病毒接种体(通过实验确定为足以在72小时后产生足够的CPE并易于将化合物控制在认为与公开的标准一致的浓度的最小量)感染MDCK细胞。将培养物于37℃和5％CO2气氛下培养至多72小时。根据公开的方法(例如参见Watanabe等人，1994)，通过病毒染料3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物(MTT)测定CPE的程度及其导致的病毒复制。使用用于曲线拟合的计算机程序计算CPE抑制50％时的化合物浓度(ID50)。分析流感A/Sydney/5/97和B/Harbin/7/95病毒，结果如表2所示。关于WO00/55149中具体公开的化合物和化合物A的参照数据也示于表2中。
表2
 
ID<sub>50</sub>μg/ml ID<sub>50</sub>M ID<sub>50</sub>μg/ml ID<sub>50</sub>M
描述 A/Sydney/5/97+ A/Sydney/5/97+ B/Harbin/7/95 B/Harbin/7/95
化合物A 0.023+/-0.024 69 0.013+/-0.011 39
化合物8* 0.0007，0.0005 0.58，0.75 0.007+/-0.01 5.8
化合物10* 0.057 66 >0.1 >115
＊参考WO00/55149
表2中的数据表明，除效力大大高于高活性的化合物A外，化合物E1—E5比WO 00/55149的化合物8和10对A/Sydney/5/97具有甚至更高的效力，而且对最近的流感病毒B分离体B/Harbin/7/95具有大大高于后者的效力。
实施例6：空斑减少试验
将Madin Darby犬肾(MDCK)细胞接种到六孔组织培养板上，并通过标准方法使其生长至融合。用最小体积的补充0.2％牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲盐水稀释流感病毒以得到每孔50—100空斑形成单位(pfu)的估计滴度。在37℃和5％CO2大气下在MDCK上吸附一小时后，吸入病毒接种物，并用含有充足的琼脂或琼脂糖(一般1—2％)的病毒生长培养基(补充最佳浓度的BSA、胰蛋白酶和胰岛素/铁传递蛋白/硒的最低Eagle培养基)代替，以使培养基在室温和37℃及5％CO2气氛下胶凝至空斑形成(一般2—4天)。在计数前采用适宜的染色(例如在甲醛生理盐水中的0.4％结晶紫)使空斑可视。抗病毒效力表示为将未治疗的对照值(EC50)的空斑数减少50％的试验物的浓度。
Figure C02822248D00301
Figure C02822248D0030141654QIETU
Figure C02822248D00302
Figure C02822248D0030141726QIETU
实施例7：长期作用的评估
将啮齿动物麻醉，并通过气管内途径使其服用剂量体积为0.8ml/kg的令人感兴趣的化合物。然后将啮齿动物保持在垂直位置，直至获得完全恢得。在不同的时间点，例如给药后2、8、24和48小时，通过分析方法评价肺中化合物的水平。可以使用任何适于检测这种类型化合物的分析方法。化合物水平下降至分析鉴定技术的灵敏度以下的时间决定化合物在肺组织中的停留时间。
关于所选择的化合物在大鼠肺中的停留数据如下所示。请注意，所有的实验包括共同给药的内标，即国际专利公开WO 02/20514的化合物3，以进行比较。数据表示为相对于此化合物的比率，此化合物的结构如以下所示。
为比较目的纳入化合物A的数据。如果将停留表示成化合物浓度与标准浓度的比率，则本发明的化合物在7天的停留明显大于化合物A。
Figure C02822248D00321
实施例12：肺长期作用和效力的可选择的评价
用于感染小鼠的方案已在前面描述(1—4)。将流感病毒接种到适度麻醉的小鼠的外鼻孔。
治疗方法和方案
在确定的时间点对单一剂量的化合物进行给药，直至感染前第10天，优选感染前4—7天，或者感染之后给药，优选在感染后立即给药直至感染后48小时。在大部分的实验中，使用非致命的流感株，并由肺病毒滴度的减小来评价效力。对于在感染前给予化合物的小鼠，在感染后取出肺，可以在感染后一天或数天内取出，优选在感染后1—4天取出。使用确定的方法分析均化的肺样品的病毒，评价病毒负载的滴度，并与未治疗小鼠的肺病毒的滴度作比较。
在使用小鼠适应的致命流感病毒株的实验中，通过与未治疗的小鼠相比的存活率和/或存活者数的增加来评价效力。
参考文献
1.Ryan，D.M.，J.Ticehurst，M.H.Dempsey，和C.R.Penn，1994.GG167(4-胍基-2，4-二脱氧-2，3-脱氢-N-乙酰神经氨酸)对小鼠流感病毒复制的抑制作用与病毒神经氨酸酶(唾液酸酶)的细胞外活性一致(Inhibition of influenza virus replication in mice by GG167(4-guanidino-2，4-dideoxy-2，3-dehydro-N-acetylneuraminic acid)is consistent withextracellular activity of viral neuraminidase(sialidase))。Antimicrob.Agentsand Chemother.38(10)：2270-2275.
2.von Itzstein M.，W.-Y.Wu，G.B.Kok，M.S.Pegg，J.C.Dyason，B.Jin，T.V.Phan，M.L.Smythe，H.F.White，S.W.Oliver，P.M.Colman，J.N.Varghese，D.M.Ryan，J.M.Woods，R.C.Bethell，V.J.Hogham，J.M.Cameron，and C.R.Penn.1993.Rational design of potent sialidase-based inhibitors of influenza virus replication.Nature(London)363：418-423.
3.Woods，J.M.，R.C.Bethell，J.A.V.Coates，N.Healey，S.A.Hiscox，B.A.Pearson，D.M.Ryan，J.Ticehurst，J.Tilling，S.A.Walcott，和C.R.Penn.1993.4-胍基-2，4-二脱氧-2，3-脱氢-N-乙酰神经氨酸在体外是唾液酸酶(神经氨酸酶)和宽范围的甲型和乙型流感病毒生长的高度有效的抑制剂(4-guanidino-2，4-dideoxy-2，3-dehydro-N-acetylneuraminic acid is a highly effective inhibitor both of the sialidase(neuraminidase)and of growth of a wide range of influenza A and B virusesin vitro)，Antimicrob.Agents Chemother.37：1473-1479.
4.Robert J Fenton，Peter J Morley，Ian J Owens，David Gower，Simon Parry，Lee Crossman and Tony Wong(1999).用单一剂量的扎那米韦化学预防甲型流感病毒感染证明扎那米韦在呼吸道缓慢地分解(Chemoprophylaxis of influenza A virus infections，with single doses ofzanamivir，demonstrates that zanamivir is cleared slowly from the respiratorytract)，Antimicrob.Agents and Chemother.43，11，2642-2647.

Claims (12)

1、通式(I)的化合物或其药物学上可接受的盐：
Figure C02822248C00021
其中：
R是氨基或胍基；
R2是乙酰基或三氟乙酰基；
X是CONH、NHCO或O；
n是2—6的整数；以及
Y是C2-8亚烷基、C3-8亚环烷基、C1-4烷氧基亚烷基、氨基酸或二肽；
其条件是：当R是胍基，R2是乙酰基，X是O且n是2时，Y不是C2亚烷基。
2、如权利要求1所述的化合物，其中R是胍基。
3、如权利要求1所述的化合物，其中R2是乙酰基。
4、制备如权利要求1—3之一所述的式(I)化合物的方法，当X是CONH或NHCO时，其包括以下步骤：
(a)使式(II)化合物
Figure C02822248C00031
其中R2和n如权利要求1中所定义，P1是羧酸保护基，而X1是NH2或CO2H；
与式(III)的化合物偶联，
X2—Y—X2          (III)
其中Y如权利要求1中所定义，而X2是NH2或CO2H，但不与X1相同，形成式(IV)的化合物，
Figure C02822248C00032
(b)使式(IV)的化合物脱保护。
5、一种药物制剂，其包括如权利要求1—3之一所述的式(I)化合物或其药物学上可接受的盐以及一种或多种药物学上可接受的载体。
6、一种包含如权利要求1—3之一所述的化合物或如权利要求5所述的制剂的吸入器。
7、如权利要求6所述的吸入器，其适于作为自由流动粉末口服。
8、如权利要求6所述的吸入器，其是定量气溶胶吸入器。
9、如权利要求1—3之一所述的式(I)化合物在制备用于预防或治疗病毒感染的药物中的应用。
10、如权利要求9所述的应用，其中所述病毒感染是正粘病毒或副粘病毒感染。
11、如权利要求9的应用，其中所述病毒感染是甲型或乙型流感病毒感染、副流感病毒、腮腺炎或新城疫病毒。
12、如权利要求9—11之一所述的应用，其中所述药物是适合通过吸入、吹入或鼻内或它们的组合对呼吸道进行给药的形式。
CNB028222482A 2001-11-09 2002-11-08 二聚化合物及其作为抗病毒剂的应用 Expired - Fee Related CN100526309C (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AUPR8794 2001-11-09
AUPR8794A AUPR879401A0 (en) 2001-11-09 2001-11-09 Novel chemical compounds and their use

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1585766A CN1585766A (zh) 2005-02-23
CN100526309C true CN100526309C (zh) 2009-08-12

Family

ID=3832613

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB028222482A Expired - Fee Related CN100526309C (zh) 2001-11-09 2002-11-08 二聚化合物及其作为抗病毒剂的应用

Country Status (14)

Country Link
US (2) US7223790B2 (zh)
EP (1) EP1451181B1 (zh)
JP (2) JP2005508989A (zh)
KR (1) KR101002794B1 (zh)
CN (1) CN100526309C (zh)
AT (1) ATE399780T1 (zh)
AU (1) AUPR879401A0 (zh)
CA (1) CA2463865C (zh)
DE (1) DE60227409D1 (zh)
DK (1) DK1451181T3 (zh)
ES (1) ES2307793T3 (zh)
HK (1) HK1068347A1 (zh)
PT (1) PT1451181E (zh)
WO (1) WO2003040137A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4535713B2 (ja) * 2003-10-30 2010-09-01 株式会社ヤクルト本社 抗ヒトサイトメガロウイルス剤
US20070094334A1 (en) * 2005-10-21 2007-04-26 Microsoft Corporation Service/client synchronization

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9516276D0 (en) * 1995-08-08 1995-10-11 Biota Scient Management Chemical compounds
KR19990087449A (ko) * 1996-03-01 1999-12-27 리차드 웨드레이 인플루엔자 바이러스의 검출방법 및 이에 이용되는 화합물
JP3691075B2 (ja) * 1996-11-14 2005-08-31 バイオタ、サイアンティフィック、マネージメント、プロプライエタリ、リミテッド 新規化合物およびその使用方法
AUPP913999A0 (en) * 1999-03-12 1999-04-01 Biota Scientific Management Pty Ltd Novel chemical compounds and their use
AUPR001000A0 (en) 2000-09-08 2000-10-05 Biota Scientific Management Pty Ltd Novel chemical compounds and their use

Also Published As

Publication number Publication date
US7223790B2 (en) 2007-05-29
EP1451181A4 (en) 2005-02-02
US20050054719A1 (en) 2005-03-10
KR20050044340A (ko) 2005-05-12
CN1585766A (zh) 2005-02-23
WO2003040137A1 (en) 2003-05-15
JP2011016804A (ja) 2011-01-27
CA2463865A1 (en) 2003-05-15
EP1451181A1 (en) 2004-09-01
US20070225358A1 (en) 2007-09-27
DE60227409D1 (de) 2008-08-14
HK1068347A1 (en) 2005-04-29
EP1451181B1 (en) 2008-07-02
PT1451181E (pt) 2008-10-01
CA2463865C (en) 2011-09-27
KR101002794B1 (ko) 2010-12-21
ES2307793T3 (es) 2008-12-01
DK1451181T3 (da) 2008-11-03
AUPR879401A0 (en) 2001-12-06
US7468388B2 (en) 2008-12-23
ATE399780T1 (de) 2008-07-15
JP2005508989A (ja) 2005-04-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6548476B1 (en) Dimeric inhibitors of influenza neuraminidase
KR20030046406A (ko) 다가의 뉴라미니다제 억제제 공액체
US20070293564A1 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
CA2463835C (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
CN100526309C (zh) 二聚化合物及其作为抗病毒剂的应用
AU2002340634A1 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
US7795301B2 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
AU2002336823B2 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
AU2002340635B2 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
AU2002336823A1 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
AU2002340632B2 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents
AU2002340635A1 (en) Dimeric compounds and their use as anti-viral agents

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20090812

Termination date: 20121108