CN100478442C - 全血质控物细胞生物活性保护剂及其制法 - Google Patents
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Abstract
本发明利用多种细胞活性保护剂的组合效应，包括A液和B液，A液为全血细胞活性保养液、B液为全血细胞活性保护剂，一方面，A液提供了维持血细胞正常生理活性所需要的营养成分进行无氧酵解；另一方面，B液中含有较低浓度的细胞膜及细胞质固定物质，能够缓慢地渗透细胞膜作用于细胞质，有效地与细胞成分-蛋白质、酶、脂类等生物分子牢固结合从而使白细胞、红细胞、血小板不同程度地得到固定及有效保护；使血细胞保持其表观形态特征。本发明采用健康人全血细胞，有良好的稳定性，不仅可以细胞染色及显微镜计数，而且有效期较临床现有质控物或校准品长。
Description
技术领域
本发明涉及全血细胞生物活性保护剂配方及其血细胞分析仪质控物制备技术。
背景技术
全血细胞质控物或校准品是血细胞分析仪溯源性必备计量物质；作为血细胞分析仪室内外质量控制，评价与确保临床实验结果准确性唯一依据。国内外全血质控物或校准品大多数采用动物(如禽类)血细胞或高分子材料(塑料粒子)作为替代品较广泛的应用于临床检验。正在临床上使用的全血细胞质控物或校准品2～8℃保存有效期为3～6个月不等，开瓶后为一周。
发明内容
本发明利用多种细胞活性保护剂的组合效应，包括A液和B液，A液为全血细胞活性保养液、B液为全血细胞稳定剂。
1.配方组成
①全血细胞活性保养液(A液)按以下组分和浓度范围制成：原料为分析纯，氯化钠5.8～9.0g/L、硼酸1.0～4.0g/L、硼酸钠0.2～2.0g/L、海藻糖5.0～30.0g/L、海藻酸钠0.5～3.0g/L、葡萄糖1.0～5.0g/L、环状糊精0.2～1.00g/L、小牛血清0.2～2.0g/L。
②全血细胞稳定剂(B液)按以下组分和浓度范围制成：原料为分析纯，其浓度范围分别为：甲醇0.5～3.0g/L、丙三醇1.0～6.0g/L、多聚甲醛0.01～0.20g/L、聚蔗糖0.4～2.00g/L、聚乙二醇1.0～3.50g/L、丙二醇1.0～3.50g/L、戊二醛0.2～1.50g/L、迭氮钠0.5～1.50g/L。
③细胞储存液即C液配制：临用时取A液、B液按1∶1的比例缓慢混合置2～8℃静止8～12小时过滤(ф2μ)或取上清液使用。
2.全血质控物细胞活性保护剂配制工艺
(1)血液来源：省级中心血站健康人义务献血。
(2)质量要求：RBC、MCV、HGB、PLT和WBC及其分类值在正常范围；生物源性病原体如乙型肝炎病毒(HBsAg)、抗-HCV、抗-HIV等传染性指标均为阴性。
(3)离心分离：购买健康人献血者新鲜抗凝全血(“O”、“A”、“B”血型)400ml，置水平离心机3000转离心30分钟使血细胞成分与血浆分离，缓慢吸取血浆，计其体积X ml(X为150～200ml)，剩余血液体积为(400ml-X)待用。
(4)全血细胞处理：先缓慢加入Xml A液，轻轻摇匀置2～8℃过夜保存；再缓慢加入Xml B液，轻轻摇匀置2～8℃过夜保存。
(5)全血细胞保存：吸取处理好的全血细胞上清液2Xml。缓慢加入储存液(C液)Xml血袋中，边加边轻轻摇匀，充分混匀后密封置2～8℃保存，过24小时再轻轻颠倒4～6次使其充分混匀，待留样观察结果可行后按规定量分装使用。
(6)注意事项：所有实验器具必需洁净并高压消毒灭菌；实验全过程必需无菌操作；加入A、B液应缓慢、混匀时不可用力振摇。
3.质量监测：
①对照(1～3号)管：取血液分离前轻轻混匀血液吸取血液1ml×3支；
②实验(4～6号)管：吸取离心血液与全血细胞活性保养液(A液)和全血细胞活性保护剂(B液)等量混合液(C液)2ml×3支作为留样观察；
③1～6号血样分别在标化好的血细胞分析仪(如TEK、Kx-21等)上隔2～3日连续测定10次分析其结果，观察细胞变化过程，待全血细胞形态稳定后，进行定量分装，冲入氮气加盖密闭后置2～8℃保存有限期为一年，开瓶使用室温(25℃以下)可保存一周。该产品经过生物溯源性链接及赋值；在有效期内全血质控物或校准品，可作为血细胞分析仪的质控品或校准物。
本发明采用具有对组织细胞保护及蛋白质、酶和脂类缓慢固定的化学物质，使健康献血员(“O”、“A”、“B”、“AB”血型)新鲜全血细胞离体后，全血细胞在较长时间内仍然保持代谢生理活性。血液离心分离获得血细胞成分，在等量体积的细胞保养液(A液)和细胞稳定剂(B液)作用下，一方面，A液提供了维持血细胞正常生理活性所需要的营养成分进行无氧酵解；另一方面，B液中含有较低浓度的细胞膜及细胞质固定物质，利用多种细胞活性保护剂的组合效应，能够缓慢地渗透细胞膜作用于细胞质，有效地与细胞成分-蛋白质、酶、脂类等生物分子牢固结合从而使白细胞、红细胞、血小板不同程度地得到固定及有效保护；使血细胞保持其表观形态特征。因此，处理好的血细胞，经过生物溯源性链接及赋值；在有效期内全血质控物或校准品，可作为血细胞分析仪的质控品或校准物，当加入仪器配套试剂溶血剂和稀释液时，质控物中的红细胞能迅速溶解，而白细胞在受溶血剂中表面活性剂的作用下表观体积及内部结构发生明显变化，满足血细胞分析仪计数及达到分类之效果。
本发明研制的全血细胞质控物或校准品粘稠度低，容易混匀；加盖密闭后置2～8℃保存有限期为一年，开瓶使用室温(25℃以下)可保存一周，可用于显微镜计数及细胞染色。
本发明采用健康人全血细胞，利用多种细胞活性保护剂的组合效应，经技术处理好的全血细胞质控物或校准品有良好的稳定性，不仅可以细胞染色及显微镜计数，而且有效期较临床现有质控物或校准品长。
具体实施例
实施例1
本发明利用多种细胞活性保护剂的组合效应，包括A液和B液，A液为全血细胞活性保养液、B液为全血细胞活性保护剂，
3.配方组成
①全血细胞活性保养液(A液)按以下组分和浓度范围制成：原料为分析纯，氯化钠7g/L、硼酸3.0g/L、硼酸钠0.5g/L、海藻糖20.0g/L、海藻酸钠0.8g/L、葡萄糖3.0g/L、环状糊精0.6g/L、小牛血清0.6g/L。
②全血细胞稳定剂(B液)按以下组分和浓度范围制成：原料为分析纯，其浓度范围分别为：甲醇0.6g/L、丙三醇2.0g/L、多聚甲醛0.01g/L、聚蔗糖2.00g/L、聚乙二醇3.50g/L、丙二醇3.50g/L、戊二醛1.50g/L、迭氮钠1.50g/L。
③细胞储存液即C液配制：临用时取A液、B液按1∶1的比例缓慢混合置2～8℃静止8～12小时过滤(ф2μ)或取上清液使用。
上述全血质控物细胞活性保护剂配制工艺如下：
(1)血液来源：省级中心血站健康人义务献血。
(2)质量要求：RBC、MCV、HGB、PLT和WBC及其分类值在正常范围；生物源性病原体如乙型肝炎病毒(HBsAg)、抗-HCV、抗-HIV等传染性指标均为阴性。
(3)离心分离：购买健康人献血者新鲜抗凝全血(“O”、“A”、“B”血型)400ml，置水平离心机3000转离心30分钟使血细胞成分与血浆分离，缓慢吸取血浆，计其体积160ml)，剩余血液体积为240ml待用。
(4)全血细胞处理：先缓慢加入160ml A液，轻轻摇匀置2～8℃过夜保存；再缓慢加入160ml B液，轻轻摇匀置2～8℃过夜保存。
(5)全血细胞保存：吸取处理好的全血细胞上清液2Xml。缓慢加入储存液(C液)160ml血袋中，边加边轻轻摇匀，充分混匀后密封置2～8℃保存，过24小时再轻轻颠倒4～6次使其充分混匀，待留样观察结果可行后按规定量分装使用。
(6)注意事项：所有实验器具必需洁净并高压消毒灭菌；实验全过程必需无菌操作；加入A、B液应缓慢、混匀时不可用力振摇。
实施例2
包括A液和B液，A液为全血细胞活性保养液、B液为全血细胞活性保护剂，
4.配方组成
①全血细胞活性保养液(A液)按以下组分和浓度范围制成：原料为分析纯，氯化钠8.0g/L、硼酸4.0g/L、硼酸钠1.5g/L、海藻糖10.0g/L、海藻酸钠2.0g/L、葡萄糖3.0g/L、环状糊精0.3g/L、小牛血清0.9g/L。
②全血细胞稳定剂(B液)按以下组分和浓度范围制成：原料为分析纯，其浓度范围分别为：甲醇2.5g/L、丙三醇3.0g/L、多聚甲醛0.08g/L、聚蔗糖1.00g/L、聚乙二醇2.50g/L、丙二醇2.80g/L、戊二醛1.20g/L、迭氮钠0.9g/L。
③细胞储存液即C液配制：临用时取A液、B液按1∶1的比例缓慢混合置8℃静止10小时过滤(ф2μ)。
上述全血质控物细胞活性保护剂配制工艺如下：
1.取健康人献血者新鲜抗凝全血(“O”、血型)200ml，置水平离心机3000转离心30分钟使血细胞成分与血浆分离，缓慢吸取血浆，计其体积90ml，剩余血液体积为110ml待用。
2.先缓慢加入90ml A液，轻轻摇匀置8℃过夜保存；再缓慢加入90ml B液，轻轻摇匀置7℃过夜保存。
3.吸取处理好的全血细胞上清液180ml。缓慢加入储存液(C液)90ml血袋中，边加边轻轻摇匀，充分混匀后密封置7℃保存，过24小时再轻轻颠倒4～6次使其充分混匀，待留样观察结果可行后按规定量分装使用。
Claims (1)
1、一种全血质控物细胞生物活性保护剂，其特征在于：利用多种细胞活性保护剂的组合效应，包括A液和B液，A液为全血细胞活性保养液、B液为全血细胞稳定剂，
(1)、全血细胞活性保养液按以下组分和浓度范围制成：氯化钠5.8～9.0g/L、硼酸1.0～4.0g/L、硼酸钠0.2～2.0g/L、海藻糖5.0～30.0g/L、海藻酸钠0.5～3.0g/L、葡萄糖1.0～5.0g/L、环状糊精0.2～1.00g/L、小牛血清0.2～2.0g/L；
(2)、全血细胞稳定剂按以下组分和浓度范围制成：甲醇0.5～3.0g/L、丙三醇1.0～5.0g/L、多聚甲醛0.01～0.20g/L、聚蔗糖0.4～2.00g/L、聚乙二醇1.0～3.50g/L、丙二醇1.0～3.50g/L、戊二醛0.2～1.50g/L、迭氮钠0.5～1.50g/L。
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| 外周血造血干细胞简化冷藏保存的研究. 侯著法等.湖北民族学院学报 医学版，第17卷第1期. 2000 |
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