CN100451033C

CN100451033C - 抑制人体转录因子ap-1的基因及其编码多肽和用途

Info

Publication number: CN100451033C
Application number: CNB2005100111490A
Authority: CN
Inventors: 石太平; 邓唯唯; 高霞; 郭金海; 王欣宇; 史贵彬; 程华玲; 童郁蓉; 高鹏; 马进京; 马大龙
Original assignee: Sinogenomax Co Ltd
Current assignee: Sinogenomax Co Ltd
Priority date: 2005-01-11
Filing date: 2005-01-11
Publication date: 2009-01-14
Anticipated expiration: 2025-01-11
Also published as: CN1803833A

Abstract

本发明涉及抑制人体转录因子活化蛋白-1(AP-1)活化的基因，该类基因的制备方法，含有该类基因的表达载体，其编码的多肽，多肽的抗体，以及所述多肽、抗体在制备预防和治疗与人体转录因子AP-1相关的疾病，尤其与细胞增殖、凋亡、存活、分化、癌变等相关疾病的药物开发上的用途。

Description

抑制人体转录因子AP-1的基因及其编码多肽和用途

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及了基因表达调控领域，具体是涉及抑制人体转录因子活化蛋白-1(AP-1)活化的基因，该类基因的制备方法，含有该类基因的表达载体，其编码的多肽，多肽的抗体，以及所述多肽、抗体在制备预防和治疗与人体转录因子AP-1相关的疾病，尤其与细胞增殖、凋亡、存活、分化、癌变等相关疾病的药物开发上的用途。

背景技术

激活蛋白-1(AP-1)是最早被鉴定的细胞转录因子，是多种细胞信号传导通路在细胞核内的交汇点(Karin etal.，1997)。AP-1属于碱性亮氨酸拉链类超家族成员，由bZIP类蛋白组成异源或同源二聚体发挥功能。在哺乳动物中，这类bZIP蛋白主要包括Jun、Fos、Maf和ATF四类亚家族。AP-1通常是由fos和jun互相结合形成异二聚体。AP-1识别TPA应答元件(TRE)或cAMP应答元件(CRE)。TPA是一个强的肿瘤启动子，可通过活化PKC而诱导AP-1并与AP-1结合位点结合。

AP-1活性受到严谨、动态的调控，多种生理刺激、环境因素和胞内的调节蛋白都可以调控AP-1的活性。包括血清、生长因子、佛波醇酯和癌基因、细胞因子、神经递质、多肽激素、细胞-基质相互作用、细菌和病毒感染以及许多物理和化学应激都可诱导AP-1的活性。这些刺激可以激活MAPK级联反应，进而通过磷酸化特异亚基来激活AP-1的转录活性。另外，基因抑制也可调节AP-1的一些生物效应。

AP-1是人体最重要的转录因子之一，作为细胞内信号转导途径的枢纽，它参与了人体多种生理与病理过程，如凋亡，学习过程，胚胎发育，药物引发的行为反应，骨的生长与分化。它参与诱导多种多样的细胞及病毒化基因的表达，在多种类型细胞的基因表达调节中起多效性作用，特别对于增殖和细胞周期中多种基因的表达都起作用。这些基因对细胞增殖、凋亡、存活、分化、癌变信号进行应答而被激活，其中包括许多细胞因子、生长因子、神经递质、多肽激素等。

AP-1参与了肿瘤侵袭/转移的多个环节。多种癌基因如Ras，通过活化AP-1而参与肿瘤的转化和转移。AP-1也能与其他转移因子协同参与转移，研究发现AP-1家族成员与ATF/CREB家族成员的bZIP基序结合，形成杂合二聚体，在人黑色素瘤细胞转移中起重要作用[Xie S，Price J E，Luca M，et al.Oncogene，1997，15(17)：2069-2075]；AP-1还可影响瘤细胞运动，如用JNk显性负性突变体阻断AP-1活化，能显著抑制细胞迁移能力；AP-1也与粘附分子表达密切相关；AP-1的活化参与血管生成介质的异常表达。基于AP-1在转移相关基因表达调控中的重要正性作用，抑制AP-1可能有防治肿瘤转移的意义：如肝素能抑制AP-1相关的转移通路而抑制血管生成，抑制MMPs等多种基质降解酶的激活。

另外，AP-1对于病毒性肝炎的发病机制研究有重要意义，病毒性肝炎的病毒蛋白通过与AP-1的相互作用可以部分解释病毒感染发病的分子生物学机制。Lee et al研究发现乙型肝炎病毒(HBV)基因增强子1(Enh I)上有特异的AP-1结合位点。病毒蛋白和一些其他的激活因子可通过与AP-1结合位点的作用调控HBV的转录与表达。与Jun和Fos家族的相互作用也是影响AP-1功能的重要方式；Tsutsumi et al研究发现在HCV感染相关HCC中，c-Jun氨基末端激酶，AP-1的活性及下游的效应因子活性均升高，因此，体内细胞因子的表达伴随AP-1的激活和核心蛋白的表达可能在持续HCV感染的肝细胞恶性转化中有重要作用。

此外，AP-1在心肌纤维化过程中起了重要作用，慢性酗酒者中常存在维生素A不平衡，并可引起肝视黄酸水平下降，阻碍视黄醇信号的传递，增强AP-1，故可引起肝星状细胞的增殖和活化；AP-1也可以促使激活的HSC产生更多的基质金属蛋白酶抑制剂-1，抑制胶原分解，诱导并加剧肝纤维化的产生。还有，诱导细胞凋亡或抗滑膜增生的AP-1、增生细胞核抗原(PCNA)等又是类风湿关节炎基因治疗的靶基因。而最近日本国立遗传学研究所和捷克南波希米亚大学的研究人员发现了AP-1蛋白可调控生物体的防御系统，并受MBF1蛋白而免于被氧化。常染色体显性遗传多囊性肾病(ADP-KD发病至少与PKD1、PKD2和PKD3三个基因有关。PKD1和PKD2基因突变导致AP-1活化障碍，肾小管上皮细胞不能发育成熟，从而形成ADPKD[ArnuldT，Sellin L，Benzing T，et al.Mol Cell Biol，1999；1946(8)]。感觉神经释放的神经肽(P物质)对伤口愈合的质量和速度有重要影响，原癌基因c-fos、c-jun可能是P物质调控内源性生长因子表达的又一核转录因子。AP-1调控NFAT介导的IL-2基因启动子转录活性对于阐明引起脓毒症免疫功能障碍的详细发病机制，明确机体所处的免疫状态提供新思路。Vallian等发现早幼粒细胞白血病PML的转录调节活性与AP-1复合体有关。PML生长抑制作用可能是通过作用于AP-1的组成成分或调控生长的相关因子激活AP-1所致。而AP-1在药物产生渴求效应中也有一定作用。

鉴于AP-1在调节人体生理功能，以及在多种疾病的发生、发展中所起的重要作用，AP-1的抑制剂和抑制基因在炎性疾病和肿瘤性疾病的治疗中必将有着重要应用。目前AP-1活化调节领域已经成为基础医学、临床医学研究以及药物开发的一个焦点，针对AP-1相关疾病或涉及到AP-1转录调控的药物研究愈来愈成为人们关注的重点。比如，中医药海威抗癌合剂所含成份Bufotanine(羟基它里宁)通过活化MAPK的活性来活化了AP-1的转录活性，可以诱导肿瘤细胞凋亡。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的复合物，有强烈抗氧化、清除自由基的作用，能诱导肿瘤细胞凋亡。另外，EGCG还有阻止亚硝基化反应、抗突变、放射防护、抑菌、提高免疫力、抗老化、降压、降脂、抗菌素血栓和体外杀精等作用。而EGCG正是抑制了肿瘤促进剂诱导的AP-1活性的升高，从而抑制了TPA-或EGF-诱导的细胞转化。芳香维A酸类药物他扎罗汀，能有效地用于治疗银屑病、痤疮，并用于角化异常性疾病、毛囊皮脂腺疾病、皮肤癌前期病变，临床开发应用前景广阔。而这是通过活化的他扎罗汀酸-受体复合物与核转录因子蛋白AP-1等结合，负向调节(间接作用)这些因子在多种增生和炎症性疾病中上调，此类药物对基因直接、间接作用是其抗增生和抗炎症的主要作用机理。姜黄素是从姜科姜黄属植物姜黄的根茎中提取的一种酚类色素，主要药理作用包括抗炎、抗氧化、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤、抗HIV病毒等，且毒性很低。姜黄素是AP-1和核因子NF-kB的抑制剂，姜黄素具有抑制AP-1和NF-B的活性，从而起到抗癌作用[Chen YR，Tan TH.Oncogene，1998，17：173-178]。而在急性胰腺炎的基础研究中，仍以炎症因子(NF-κB、AP-1)在急性胰腺炎发生发展中作用及在急性呼吸紧迫综合症(ARDS)发生中作用研究为多。加州的Gukovsky等报道一种肿瘤预防药物(curcumin)能抑制AP-1、NF-kB的表达，进而对急性胰腺炎的治疗起作用。维甲酸类药物可以被认为是调节增殖和分化过程的药物，而这种效用则是通过调控一系列癌基因，包括转录调控因子AP-1、细胞增殖因子及其受体基因(EGFR)、酶及细胞结构蛋白的基因表达实现的。无嘌呤嘧啶核酸内切酶(APE)是DNA修复酶家族中的一员，主要通过碱基切除修复的方式切除DNA上大量的无嘌呤嘧啶位点而保持遗传物质的稳定性。APE为一多功能蛋白，它能活化众多转录因子如AP-1、NF-κB以及抑癌蛋白P53的DNA结合活性而调节基因的表达。糖皮质激素(GCS)，肾上腺皮质激素类药物，由束状带合成和分泌，有氢化可的松和可的松等，主要影响物质代谢过程，超生理剂量的糖皮质激素则还有抗炎、抗免疫等药理作用。GCS可通过将活化转录因子AP-1等的活化调节逆转，或通过直接与AP-1相互作用，可抑制各种炎性因子的合成，而对抗细胞因子的效应。高表达的糖皮质激素受体(GR)能显著抑制核因子NF-κB和AP-1，为治疗激素抵抗性哮喘提供了新的方向。而严重创伤后GR的表达和功能下调可能部分与JNK1、AP-1的活性增加有关。

尽管对于AP-1的生理功能已愈来愈清楚，但介导这些功能的靶基因并不明了。而且，针对AP-1相关疾病的传统的治疗药物，其作用缺乏特异性，可产生很多毒副作用。同时，绝大部分生物治疗需要高度纯化的蛋白质，价格昂贵；而且蛋白质口服活性差，在体内又会很快被清除，需要反复注射。因此，有必要进一步探索抑制AP-1活化的新的调控基因，并研究其在细胞内的表达对AP-1活化的调节功能，从而为开发治疗炎症和肿瘤的药物、尤其与细胞增殖、凋亡、存活、分化、癌变等相关疾病的药物开发提供必要的依据。

发明内容

针对现有技术及现有药物或试剂的不足，本发明的目的是提供抑制人体细胞转录因子AP-1活化的人类新基因AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，这10个基因具有抑制AP-1转录活化的共同特点，其表达产物导入细胞后具有抑制AP-1活化的功能，且抑制AP-1活化的作用非常明显、稳定。

本发明的另一目的是提供这些人类新基因AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10编码的人蛋白多肽及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一目的是提供生产这些基因以及其编码的多肽的方法以及该基因和编码的多肽制备预防和治疗与人体转录因子AP-1相关的疾病如炎症与肿瘤的药物组合物中的用途。尤其与细胞增殖、凋亡、存活、分化、癌变等相关疾病的药物开发上的用途以及基础研究。

本发明的技术方案包括以下内容：

1、提供新的分离的具有抑制AP-1活化的基因编码的多肽，其氨基酸序列包含具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ IDNO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ IDNO.18、SEQ ID NO.20；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽：SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20。

2、编码以上项1的多肽的基因，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性：(a)编码以上项1蛋白多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。

较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO.2、SEQID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ IDNO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20。

更佳地，该多核苷酸的序列选自下组：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.5、SEQ ID NO.7、SEQ-ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19的编码区序列或全长序列。

3、以上项2的基因，特征在于具有下组核苷酸序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ-ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19或其片段，或同源性70％以上，尤其85％以上的序列。

4、含有以上项2或3的基因或其片段的表达载体。

5、制备以上项1的多肽的方法，包括将以上项4的基因AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10或其片段的表达载体转化宿主细胞，培养，从培养物中分离出所述的多肽。

6、一种遗传工程宿主细胞，其特征在于它是用以上项2或3所述的基因或其片段直接转化或转导的宿主细胞，或用以上项4所述的载体转化或转导的宿主细胞。

7、以上项1的多肽或项2或3所述的基因或其片段在制备预防和/或治疗与人体细胞转录因子AP-1有关的疾病的药物中的用途。

8、根据以上项7的用途，其中所述疾病尤其与细胞增殖、凋亡、存活、分化、癌变等相关。

9、含有以上项1的多肽和药学上可接受的载体的药物组合物。

10、一种能与以上项1的多肽特异结合的抗体。

11、一种炎症性疾病或肿瘤的体外检测方法，特征在于利用以上项10的抗体检测来自宿主样品中的多肽的存在或水平。

AP1IF1(NSS30-111)的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，长度：416bp。其编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，长度：111个氨基酸。起始密码子：357 ATG；终止密码子：692 TGA；蛋白质分子量：12396.91。蛋白的Blastp结果如下：

gi|30580364|sp|Q9BV73|CEP2 HUMAN Centrosomal protein 2(CentrosomalNek2-associated protein 1)(C-NAP1)(Centrosome protein 250)(Centrosomeassociated protein CEP250)

Length＝2442

Score＝63.9bits(154)，Expect＝8e-11

Identities＝38/81(46％)，Positives＝49/81(60％)

Query：1

MLQAEKTEVAEALTKAEAGRMELELSVTKLRAEEASLQDSLSKLSALNESLAQDKLDLNC 60

+L+ E+TEV AL+AE EL S L+ E A L+ + KLSALNE+LA DK+ LN

Sbjct：558

LLRQEQTEVTAALARAEQS IAELSSSENTLKTEVADLRAAAVKLSALNEALALDKVGLNQ 617

Query：61 LVTQLEEEKAMLQGRQRQAEQ 81

+ QLEEE + R AEQ

Sbjct：618 QLLQLEEENQSVCSRMEAAEQ 638

gi|127751|sp|P02567|MYSD CAEEL Myosin heavy chain D(MHC D)

Length＝1938

Score＝39.7bits(91)，Expect＝0.002

Identities＝24/86(27％)，Positives＝48/86(55％)，Gaps＝4/86(4％)

Query：2

LQAEKTEVAEALTKAEAGRMELELSVTKLRAEEASLQDSLSKLSAL----NESLAQDKLD 57

L+ E+ EA+ + + R E E S K+ E Q+++ +LSA+ + SL + +

D

Sbjct：1034

LEQTLDEMEEAVEREKRIRAETEKSKRKVEGELKGAQETIDELSAIKLETDASLKKKEAD 1093

Query：58 LNCLVTQLEEEKAMLQGRQRQAEQEA 83

++L ++E+E+A+ RQ+++A

Sbjct：1094 IHALGVRIEDEQALANRLTRQSKENA 1119

AP1IF2(NS307-253)的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，长度：902bp。

其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，长度：253个氨基酸。起始密码子：416ATG；终止密码子：1177 TGA；蛋白质分子量：27759.29。

AP11F3(NSS21-176)的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，长度：709bp。其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，长度：176个氨基酸。起始密码子：152 ATG；终止密码子：682 TAG；蛋白质分子量：19667.88。

AP1IF4(NM156-380)的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，长度：1170bp。其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，长度：380个氨基酸。起始密码子：269 ATG；终止密码子：1411 TGA；蛋白质分子量：43279.37。示意结构图如图5所示。

结构域分析：

gnl|CDD|17522，pfam04727，DUF609，蛋白功能未知。这个家族包括真核蛋白中一个普遍存在的保守区域，包括CED-12，ELMO I和ELMO II。ELMO I是调节吞噬作用和细胞迁移的细胞传导通路的组成成分，是线虫基因ced-12在哺乳动物细胞中的同种异型基因(orthologue即在进化过程中与该基因相关的基因)。CED-12在濒死细胞和细胞迁移的卷吞作用中是必需的。在哺乳动物细胞中，ELMO-I与Dock180相互作用，作为CrkII/Dock180/Rac通路的一部分，在吞噬作用和细胞迁移中起作用。ELMO I可被普遍表达，但在富含免疫细胞的器官脾中表达量最高。ELMO I的C端含有一个PH结构域和一个多聚脯氨酸序列模式，这些在序列比对中并未出现。

CD-Length＝159 residues，95.0％ aligned

Score＝135bits(342)，Expect＝8e-33

AP1IF5(NM402-351)的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，长度：1132bp。

其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，长度：351个氨基酸。起始密码子：89ATG；终止密码子：1144TGA；蛋白质分子量：39499.10。示意结构图如图6所示。

结构域分析：

gnl|CDD|27970，cd01406，类SIR2：原核生物中类似Sir-2的未分类蛋白，这类蛋白缺少一定的、主要的催化残基和保守锌结合半胱氨酸，是SIR2蛋白大家族中的成员(SIR2--silent information regulator2，催化NAD+-依赖蛋白/组蛋白的脱乙酰作用)。

CD-Length＝242 residues，93.8％ aligned

Score＝63.9bits(155)，Expect＝3e-11

Blastp结果

gi|20139827|sp|Q9PL95|RMUC CHLMU DNA recombination protein rmuChomolog

Length＝425

Score＝33.1bits(74)，Expect＝1.1

Identities＝31/106(29％)，Positives＝46/106(43％)，Gaps＝14/106(13％)

Query：94

LHEDKNLVHVAHD-------LIQKLSPRTSNVRSTFFKDCLYEVFDDLESKMEDSGKQLL 146

L DK ++ ++ D LI++ S + ++V F +D E + K Q

+

Sbjct：49

LEHDKAILQMSLDARRNQEQLIEEFSHKLTSVSQAFARDIKTESQEFFSEKT-----QAI 103

Query：147 QSVLHLMENGALVLTTNFDNLLELYAADQGKQLESLD--LTDEKKV 190

SVL M N V N +N A D+G E L LT EKK+

Sbjct：104 HSVLAPMHNTLSVFKQNLENFETKQAEDRGALREQLSQLLTAEKKL 149

AP1IF6(NM359-438)的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，长度：1401bp。

其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，长度：438个氨基酸。起始密码子：166ATG；终止密码子：1482 TGA；蛋白质分子量：49470.14。示意结构如图7所示。

结构域分析

gnl|CDD|8972，smart00349，KRAB，krueppel associated box；

CD-Length＝61 residues，100.0％aligned

Score＝81.4bits(201)，Expect＝2e-16

gnl|CDD|14178，COG5048，COG5048，FOG：Zn-finger[General functionprediction only]

CD-Length＝467residues，only 24.4％aligned

Score＝35.9bits(81)，Expect＝0.009

AP1IF7(NS421-251)的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，长度：818bp。其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示，长度：251个氨基酸。起始密码子：271ATG；终止密码子：1026 TGA；蛋白质分子量：29262.40。

AP1IF8(NM321-403)的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，长度：1273bp。其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示，长度：403个氨基酸。起始密码子：323 ATG；终止密码子：1534 TAG；蛋白质分子量：46587.92

AP1IF9(CB25-239)的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，长度：821bp。其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示，长度：239个氨基酸。起始密码子：94 ATG；终止密码子：813 TAA；蛋白质分子量：25805.84。

AP1IF10(NS291-207)的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，长度：1125bp。其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示，长度：207个氨基酸。起始密码子：126ATG；终止密码子：746 TAA；蛋白质分子量：22452.67。

本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽等，优选是重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。本发明的多肽可以是糖基化或可以是非糖基化。本发明的多肽可以包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。

本发明还包括具有抑制AP-1活化基因编码的人蛋白多肽的片段、衍生物和类似物。这些是指基本上保持本发明的天然具有抑制AP-1活化功能的人蛋白多肽相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物和类似物可以是：(a)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优先保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(b)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(c)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物)融合所形成的多肽，或(d)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。

本发明的多核苷酸序列片段包括其互补链可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链或双链的。DNA可以是编码链或非编码链。或上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。

本发明还涉及包括本发明的多核苷酸的载体，用本发明的载体制造的遗传工程宿主细胞和用重组技术生产的本发明的多肽产品及方法。本发明的多核苷酸序列可以包括在用于表达多肽的众多表达载体的任意一种中。适宜的载体例如包括细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒，腺相关病毒、逆转录病毒或其它载体。本发明中适用的表达载体可以是原核或真核表达载体，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。含有本发明的基因序列的载体可以用来转化或转导适当宿主细胞以使宿主表达此多肽。

宿主细胞可以是高等真核细胞，如哺乳动物细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或者是原核细胞，例如大肠杆菌等细菌细胞。

利用常规的基因重组技术，可利用本发明的多聚核苷酸序列用来表达或生产重组的具有抑制AP-1活化的基因编码的蛋白多肽。包含：(1)用本发明的具有抑制AP-1活化的基因(或变异体)，或者含有该基因的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；(2)在合适的培养基中培养的宿主细胞；(3)从培养物包括培养基或培养的细胞中分离、纯化蛋白质。从而可以大量生产本发明的多肽。

本发明的多肽具有抑制人体细胞转录因子AP-1活化的作用，人体细胞转录因子AP-1活化与炎症、肿瘤等多种疾病相关，尤其与细胞增殖、凋亡、存活、分化、癌变等密切相关。

本发明的多肽可以单独或与合适的药用载体组合使用。这种组合物可以包含治疗有效量的多肽或拮抗剂以及药学可接受的载体或赋型剂，这样的载体包括但不限于：盐水，缓冲盐水，葡萄糖，水，甘醇，乙醇，或混合物，这些制剂应适合给药方式。

本发明的药物组合物可以以适当的方式给药，如通过局部、静脉内、腹腔内、肌内、皮下等途径给药。给药于患者的用量取决于许多因素，如给药方式，待治疗者的身体条件和诊断医生的判断。

本发明的多肽也可以通过在活体表达这些多肽来使用。例如患者的细胞可以通过在体外用编码本发明多肽的基因AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10进行基因工程操作，然后将工程细胞提供给患者，使工程细胞在体内高表达这种多肽，从而达到治疗的目的。

本发明的多肽，或保守变异多肽或片段、衍生物、类似物，或表达它们的细胞可以作为抗原用来产生抗体，在临床上用于炎症性疾病、过敏性疾病、自身免疫病以及肿瘤的临床诊断、治疗、疗效评价等，还可用于AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10抑制AP-1活化分子机制的研究。所述抗体可以是单克隆抗体，或多克隆抗体，还包括嵌和、单链和人源化的抗体以及Fab片段，或Fab表达文库的产物。本发明多肽的单克隆和多克隆抗体的制备方法在本领域中是公知的，并且描述在众多文献中。本发明多肽的多克隆抗体的生产可用具有抑制AP-1活化功能的基因编码蛋白或多肽免疫动物，如家兔、小鼠、大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等；本发明多肽的单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature，1975，256：495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrisonet al，PNAS，1985，81：6851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.Pat No.4946778)也可用于生产抗具有抑制AP-1活化功能的基因编码蛋白的单链抗体。该抗体可以用于检测本发明多肽的存在或水平，或用于检测基因。在炎症或肿瘤疾病中，通过检测该多肽的水平或存在，可以用于诊断这些疾病。或者该抗体直接用于炎症或肿瘤疾病的相关治疗中。

AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因在实验中所有用到的正常组织、胎儿组织、肿瘤组织都有表达，说明其为人体自身重要的AP-1调控分子；在不同的组织中表达量高低有差别，说明其在不同的组织中发挥功能的程度不同。

附图说明

图1pGEM-T Easy载体克隆AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因编码区cDNA示意图。其中的三角图标为插入AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因编码区cDNA片段处。

图2真核表达载体pcDNA3.1B-AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10的构建示意图。其中的三角图标为插入AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因编码区cDNA片段处。

图3AP-1-luc荧光素酶基因报告质粒(上图)及pRL-SV40荧光素酶基因对照报告质粒(下图)的结构图。

图4AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10抑制AP-1活化及P+I诱导的AP-1活化。用pcDNA3.1B和AP-1-luc共转染293T细胞、无刺激时的荧光素酶活性比值(萤火虫荧光素酶活性/水母荧光素酶活性)设定为1。

图4的数据为三次重复试验所得的结果。

图5为AP1IF4编码的蛋白的结构示意图。

图6为AP1IF5编码的蛋白的结构示意图。

图7为AP1IF6编码的蛋白的结构示意图。

以下对本发明的实施方案进一步详细说明。

1、从人体组织分离出AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因的cDNA，测定其核苷酸序列，并进一步推测得到其编码的氨基酸序列。

本发明通过对NCBI的nr数据库进行人功能未知预测基因检索，获得人未知功能基因序列，进一步利用Human_est数据库通过BLASTn方法进行序列校正，校正后得到的序列如下组序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ-ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19。此类基因分别被命名为AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10。

根据AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因序列，设计AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因特异引物，从混合人组织cDNA文库(脑、肺、结肠、睾丸等，Clometech，K14201-1、K1241-1)中通过PCR扩增得到AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因编码区cDNA片段。PCR扩增中采用TagDNA聚合酶，得到含有3’突出碱基A的扩增产物，经电泳鉴定后将其回收、纯化后插入含有3’突出碱基T的线性pGEM-T Easy载体(Promega，A1360)，转化大肠杆菌DH5α，提取质粒，用ABI PRISM 3700DNA分析仪(Perkin-Elmer/applied Biosystem)测序，获得AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因cDNA片段。序列测定结果证实序列正确，测序结果如下组序列：SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ-ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19所示。

pGEM-T Easy载体克隆AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因编码区cDNA的PCR扩增片段的示意图如图1所示。

根据测序结果分析出AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因编码蛋白质的氨基酸序列如下组序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQID NO.20所示。

2、真核表达载体的构建

为了检测AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10对AP-1活化的抑制功能，首先构建含有AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10cDNA的真核表达载体pcDNA3.1B-AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10(以下缩写为pcDB-AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10)。本发明采用真核表达载体pcDNA3.1/Myc HisB(-)(Invitrogen，V85520，以下缩写为pcDB)与AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因重组构建真核表达载体。pcDB是设计用于重组蛋白在哺乳类动物细胞系中高表达的载体，它含有人巨细胞病毒CMV启动子，可在哺乳类动物细胞系中实现高表达。用EcoRI将上述插入pGEM-T Easy载体的AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10cDNA切下，同时EcoRI酶切pcDB，两者连接后转化大肠杆菌DH5α，挑选转化子提取质粒，通过测序挑选正确的正向插入克隆，即得到含有AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10cDNA的真核表达载体pcDB-AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，图2为构建该真核表达载体的示意图。

3、检测AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因抑制AP-1活化的功能的方法

用pcDB-AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10和AP-1-luc(Stratagane，219077)，pRL-SV40(Promega，E2231)共转染人胚胎肾293T细胞(ATCC Number：CRL-11268)，采用双荧光素酶报告基因法，测定AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10cDNA在293T细胞中的表达产物对PMA(Sigma)+离子霉素(Calbiochem)诱导的AP-1活化的抑制作用。

本发明采用双荧光素酶报告基因法检测AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因对AP-1活化的抑制功能，该方法采用的是体内信号转导途径顺式报导系统，其中所用的AP-1-luc报告质粒载有萤火虫荧光素酶基因，该基因的表达由合成的启动子所调控，其中包含基本的启动子元件(TATAbox)，以及转录因子AP-1的结合位点，AP-1-luc报告质粒的结构图如图3所示。当细胞内的AP-1通过某种信号转导途径而被活化时，AP-1便会结合于报告质粒AP-1-1uc的增强子元件，从而启动报告基因萤火虫荧光素酶基因的转录，进一步胞内翻译成荧光素酶，导致细胞内荧光素酶数量增加，活性增强；相反，当细胞内的AP-1活化受到抑制的时候，荧光素酶的表达量及活性就低。所以，通过检测荧光素酶的活性，便可以反映不同刺激物以及共转染的目的基因对细胞内AP-1是否具有增强活化或者抑制活化的功能。pRL-SV40报告质粒载体如图3所示，含有水母荧光素酶基因，该基因的表达由猿猴病毒40(SV40)增强子/启动子所调控，转染哺乳动物细胞后可以产生较强的基本水平的水母荧光素酶的表达，且表达的活性不受AP-1活化与否的调节，所以在实验中用作内对照报告基因。

质粒pcDB-AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10和AP-1-luc，pRL-SV40共转染293T细胞，转染后24小时，用PMA+离子霉素激活293T细胞，8小时后，裂解细胞，检测荧光素酶的活性。测得结果表明AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因在293T细胞内的表达产物对AP-1的活化有抑制作用。说明AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10对AP-1有负调节作用。

本发明的优点：

1、提供了人类新基因AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10的cDNA序列及其编码多肽，并首次发现该类基因具有抑制AP-1活化的功能；

2、AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10具有抑制AP-1活化的作用，并且高效、稳定，表明AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10在细胞内有比较高的亲和力和效力；

3、AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10在机体多数正常细胞表达，说明其为自身重要的AP-1调控分子。

4、基于上述的3个优点，本发明为进一步研究AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10与AP-1之间的调控关系，以及开发治疗炎症、和肿瘤以及调节细胞增殖、凋亡、存活、分化、癌变等的新药物，为开创新的临床诊断、疗效评价及预后指标奠定必要的基础。

具体实施方案

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1、AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因cDNA的克隆

对NCBI的nr数据库进行人功能未知预测基因检索，获得人未知功能基因序列，并利用Human_est数据库通过BLASTn方法进行序列校正，最终得到的序列设定为下组序列：SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19。根据此类序列设计AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因特异引物：

用上述引物，以混合人组织cDNA文库(Clonetech K1420-1，K1241-1)为模板进行PCR扩增反应，反应条件如下：

反应体积50μl，其中含有：

混合人组织cDNA模板 2μl

引物 5’引物、3’引物终浓度各0.2μM

dNTP 终浓度各200μM

Taq DNA聚合酶 2.5U

10x Taq DNA聚合酶缓冲液 5μl

用双蒸水补足至50μl体积。

反应温度、时间：94℃，5分钟变性，94℃变性30秒，63℃退火30秒，72℃延伸80秒，扩增30个循环，最后在72℃下延伸7分钟。

扩增产物为3’有碱基A的3’突出粘端片段，用QIA快速胶回收试剂盒(Qiagen，028704)按产品说明书进行纯化，然后与3’有碱基T的线性pGEM-T EASY载体(Promega，A1360)在16℃下连接过夜，使用2mm电极杯，2500V转化大肠杆菌DH5α，转化物在含氨苄青霉素的LB平板培养基上生长，挑选克隆，提取质粒，使用AbI PRISM 3700DNA分析仪(Perkin-Elmer/Applied Biosystem)测序，获得AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因的cDNA，序列如下组：SEQ ID NO.1、SEQID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ-ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ IDNO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19所示。

实施例2、RT-PCR法检测AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因在人体组织中的转录产物

用AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因的特异引物：

分别以12种人体正常组织(心、胰、睾丸、卵巢、前列腺、结肠、小肠、骨骼肌、胸腺、淋巴结、扁桃体、白细胞)；6种人肿瘤组织(肺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌、乳腺癌)；和8种胎儿组积(胎肺、胎心、胎肝、胎脾、胎肾、胎脑、胎骨骼肌、胎胸腺)的cDNA文库(Clonetch，Kl420-1，1241-1)为模板进行PCR扩增。

PCR扩增条件如下：

反应体积50μl，其中含有：

混合人组织cDNA模板 2μl(其中脑、肺、结肠、睾丸各0.5μl)

引物 5’引物、3’引物终浓度各0.2μM

dNTP 终浓度各200μM

Taq DNA聚合酶 2.5u

10x Taq DNA聚合酶缓冲液 5μl

用双蒸水补足至50μl体积。

反应条件：

94℃，5分钟变性后，94℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸30秒，扩增30个循环，最后在72℃下延伸7分钟。另外，用管家基因特异引物：5’引物：5’-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3’，3’引物：5’-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’分别用上述同样的模板进行PCR扩增，作为内对照。PCR反应体系同前，反应条件如下：94℃，5分钟变性后，94℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸30秒，扩增25个循环，最后在72℃下延伸7分钟。PCR反应结果如图2所示，扩增的结果表明，这些组织的细胞中都存在AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因的cDNA(参照图2)，说明AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10在这些组织的细胞中都产生了AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因的转录产物，有较广的表达图譜，在多种组织中参与转录因子的调节。

实施例3、AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因真核表达载体的构建

用EcoRI(Promega)将AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10基因的cDNA片段从pGEM-T Easy载体(Promega，A1360)上切下，同时用EcoRI酶切真核表达载体pcDNA3.1/mycHis(-)B(Invitrogen，V85520)，按照J.Sambrook等，分子克隆实验指南第二版所述方法，将酶切后的AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10与载体在16℃下连接过夜，转化大肠杆菌DH5α，转化物在含氨苄青霉素的LB平板培养基上生长，挑选生长的菌落，提取质粒，用EcoRI酶切，酶切产物用琼脂糖凝胶电泳鉴定，挑选有插入片段的阳性克隆，通过测序(使用ABI PRISM 3700DNA分析仪，同上)，选出正确的正向插入克隆，各自命名为pcDNA 3.1B-AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10。

同时收集培养液，用SDS-PAGE分析沉淀蛋白，获得AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10多肽。

AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10蛋白分析结果显示：AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10蛋白序列如下组序列：SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ IDNO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ IDNO.18、SEQ ID NO.20所示。

实施例4、双荧光素酶报告基因法测定AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10对PMA+离子霉素诱导AP-1活化的抑制作用。

用目的基因pcDB-AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10和报告基因AP-1-luc，pRL-SV40共转染人胚胎肾293T细胞，通过分别检测两种荧光素酶活性来测定AP-1的活性。共转染的方法为脂质体转染法，采用LipfectanineTM2000(Invitrogen，11668027)，按产品说明书所述进行。

转染操作步骤如下：

(1)细胞培养：将293T细胞(ATCC Number：CRL-11268)(2.0×104)用含10％胎牛血清的DMEM(Dulbecco′s modified Eagle′s medium)培养基(Hyclone，SH0022.02)铺在96孔细胞培养板(Costar，3599)上，在5％CO₂，37℃的培养箱中培养16小时。

(2)制备DNA-LipfectamineTM2000复合物：用25μl不含血清的DMEM培养基稀释20ng AP-1-luc，2ng pRL-SV40和20ng pcDB-AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，缓慢混合均匀；同样用25μl DMEM培养基稀释适当量的Lipfectamin^TM2000，缓慢混合均匀，在室温下保温5分钟后，与稀释的DNA缓慢混合，室温放置20分钟，以形成DNA-Lipofectamine 2000复合物。

(3)转染：将DNA-Lipofectamine 2000复合物缓慢滴入细胞培养板(50μl/孔)，轻微摇匀。5％CO₂，37℃的培养箱中培养24小时。

24小时后用PMA(十四酸佛波酯，Calbiochem，524400，终浓度50ng/m1)+离子霉素(Calbiochem，407950，终浓度1μM)刺激细胞，或不加刺激物；8小时后弃去培养基，加入Reporter Lysis Buffer(Promega，E4030)，在-80℃下放置30分钟，取出后在室温自然融化，使细胞裂解，然后将细胞裂解液移入荧光板(Gronier，655075)，用Dual-Luciferase Reporter Assay System 10-Pack(Promaga，E1960)，通过GENios Pro(TECAN)检测荧光素酶活性。

设定转染pcDB空载体、不加刺激物时细胞内的荧光素酶活性比值(萤火虫荧光素酶荧光强度/水母荧光素酶荧光强度表示)为1，其他条件下细胞内的荧光素酶活性比值以此为标准，用相对值表示。

结果：

(1)AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10对PMA+离子霉素诱导AP-1活化的抑制作用

参照图4，分别用20ng pcDNA3.1B-AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10和20ngAP-1-luc共转染293T细胞，用PMA+离子霉素刺激的293T细胞中荧光素酶的活性明显地迅速下降，而未用PMA+离子霉素刺激的293T细胞中荧光素酶的活性下降较为缓慢，表明AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10在293T细胞中的表达产物对PMA+离子霉素诱导AP-1活化有强的抑制作用。

根据以上实验结果，可以确定，当AP-1的活化引起与某些疾病相关基因的转录表达活化时，AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10对AP-1活化的抑制作用可以阻止该疾病的发生和发展。因此，本发明可以用于制备预防和治疗治疗炎症、和肿瘤以及调节细胞增殖、凋亡、存活、分化、癌变等的新药物，为开创新的临床诊断、疗效评价及预后指标奠定必要的基础。

实施例7、抗体制备

抗原选用原核细胞或真核细胞表达的NFIF1蛋白全长或部分肽段，也可以合成多肽作为抗原。

多克隆抗体的制备：免疫动物选用成年雄性新西兰兔或BALb/c小鼠，初次免疫用200ug(新西兰兔)或20ug(BALb/c小鼠)抗原与等体积弗氏完全佐剂(FCA)充分乳化后，于背部皮下多点注射。初次免疫后21、42、63天，用弗氏不完全佐剂(FIA)完全乳化的抗原蛋白，各加强免疫1次，用量同前。每次免疫后7～10天，ELISA方法检测血清效价，达到1×10-4时，放血分离血清.Western blot鉴定抗体特异性。

单克隆抗体制备：免疫BALb/c小鼠同前，取脾脏制成B细胞悬液，与对数生长期的骨髓瘤细胞SP2/0融合，通过HAT(H，次黄嘌呤；A，氨基喋呤；T，胸腺嘧啶核苷)选择性培养，获得杂交细胞系，再通过ELISA方法检测抗体效价，筛选出特定的杂交瘤细胞系，并得到单克隆抗体。

AP1IF1，2，3，4，5，6，7，8，9，10抗体在临床上可以用于与炎症、和肿瘤以及细胞增殖、凋亡、存活、分化、癌变等相关性疾病的临床诊断、治疗、疗效评价等。

序列表.txt

SEQUENCE LISTING

<110>北京诺赛基因组研究中心有限公司

<120>抑制人体转录因子AP-1的基因及其编码多肽和用途

<130>

<160>20

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>416

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(18)..(350)

<223>

<400>1

ccacgctgca acgggac atg ctg cag gcc gag aag acc gag gtg gcc gag 50

Met Leu Gln Ala Glu Lys Thr Glu Val Ala Glu

1 5 10

gcg ctg acc aag gct gag gct ggc cgc atg gag ctc gag ctc tcc gtg 98

Ala Leu Thr Lys Ala Glu Ala Gly Arg Met Glu Leu Glu Leu Ser Val

15 20 25

acc aag ctg agg gca gag gag gcc tcc ctg cag gac tcc ctg tcc aag 146

Thr Lys Leu Arg Ala Glu Glu Ala Ser Leu Gln Asp Ser Leu Ser Lys

30 35 40

ctg agc gcc ctc aac gag agc ctt gct cag gac aag ttg gat ctg aac 194

Leu Ser Ala Leu Asn Glu Ser Leu Ala Gln Asp Lys Leu Asp Leu Asn

45 50 55

tgc ctt gtc acc cag ctg gag gaa gaa aag gcc atg ctg cag ggc cgg 242

Cys Leu Val Thr Gln Leu Glu Glu Glu Lys Ala Met Leu Gln Gly Arg

60 65 70 75

cag cgg cag gcg gag cag gag gcc aca gtg gcg ccg gca gag cag gag 290

Gln Arg Gln Ala Glu Gln Glu Ala Thr Val Ala Pro Ala Glu Gln Glu

80 85 90

tgg ctg gag gag ctg tgg ttg gag cag gag gtg gca cgg cag ggc ctg 338

Trp Leu Glu Glu Leu Trp Leu Glu Gln Glu Val Ala Arg Gln Gly Leu

95 100 105

gag ggc tcc cta tgagtggcgg agcaggccca ggaggcgctg gagcaacagc 390

Glu Gly Ser Leu

110

tccccacact gcaccatgag ctcagt 416

<210>2

<211>111

<212>PRT

<213>人

<400>2

Met Leu Gln Ala Glu Lys Thr Glu Val Ala Glu Ala Leu Thr Lys Ala

1 5 10 15

Glu Ala Gly Arg Met Glu Leu Glu Leu Ser Val Thr Lys Leu Arg Ala

20 25 30

Glu Glu Ala Ser Leu Gln Asp Ser Leu Ser Lys Leu Ser Ala Leu Asn

35 40 45

Glu Ser Leu Ala Gln Asp Lys Leu Asp Leu Asn Cys Leu Val Thr Gln

50 55 60

Leu Glu Glu Glu Lys Ala Met Leu Gln Gly Arg Gln Arg Gln Ala Glu

65 70 75 80

Gln Glu Ala Thr Val Ala Pro Ala Glu Gln Glu Trp Leu Glu Glu Leu

85 90 95

Trp Leu Glu Gln Glu Val Ala Arg Gln Gly Leu Glu Gly Ser Leu

100 105 110

<210>3

<211>902

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(105)..(863)

<223>

<400>3

cgagagattt tgtggagcgc atttaagggg tttttgttgt gactgctgcc ttgtatatat 60

ttattttctt tcttggaact gggcctcgcc ctcctcccac tgac atg atg gcc cag 116

Met Met Ala Gln

1

tcc aag gcc aat ggc tcg cac tat gcg ctg acc gcc atc ggc ctg ggg 164

Ser Lys Ala Asn Gly Ser His Tyr Ala Leu Thr Ala Ile Gly Leu Gly

5 10 15 20

atg ctg gtc ctt ggg gtg atc atg gcc atg tgg aac ctg gta ccc ggc 212

Met Leu Val Leu Gly Val Ile Met Ala Met Trp Asn Leu Val Pro Gly

25 30 35

ttc agc gcg gcc gag aag cca aca gct cag ggc agc aac aag acc gag 260

Phe Ser Ala Ala Glu Lys Pro Thr Ala Gln Gly Ser Asn Lys Thr Glu

40 45 50

gtg ggt ggc ggc atc ctc aag agc aag acc ttc tct gtg gcc tac gtg 308

Val Gly Gly Gly Ile Leu Lys Ser Lys Thr Phe Ser Val Ala Tyr Val

55 60 65

ctg gtc ggg gcc ggg gtg atg ctg ctg ctg ctt tct atc tgc ctg agt 356

Leu Val Gly Ala Gly Val Met Leu Leu Leu Leu Ser Ile Cys Leu Ser

70 75 80

atc agg gat aag agg aag cag cgg cag ggc gag gac ctg gcc cat gtc 404

Ile Arg Asp Lys Arg Lys Gln Arg Gln Gly Glu Asp Leu Ala His Val

85 90 95 100

cag cac ccg aca ggc gct ggg cct cac gcc cag gag gaa gac agc cag 452

Gln His Pro Thr Gly Ala Gly Pro His Ala Gln Glu Glu Asp Ser Gln

105 110 115

gag gaa gaa gag gag gat gag gag gct gcc tca agg tac tat gtt ccc 500

Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Ala Ala Ser Arg Tyr Tyr Val Pro

120 125 130

agc tac gag gaa gtg atg aac aca aac tac tca gaa gca agg gga gag 548

Ser Tyr Glu Glu Val Met Asn Thr Asn Tyr Ser Glu Ala Arg Gly Glu

135 140 145

gag cag aac ccg agg ttg agc atc tct ctc ccg tcc tat gag tca ctg 596

Glu Gln Asn Pro Arg Leu Ser Ile Ser Leu Pro Ser Tyr Glu Ser Leu

150 155 160

acg ggg ctc gac gag acc acc ccc aca tcc acc agg gct gac gtg gag 644

Thr Gly Leu Asp Glu Thr Thr Pro Thr Ser Thr Arg Ala Asp Val Glu

165 170 175 180

gcc agc cct ggg aac ccc cct gac agg cag aac tct aag ttg gcc aaa 692

Ala Ser Pro Gly Asn Pro Pro Asp Arg Gln Asn Ser Lys Leu Ala Lys

185 190 195

cga ctg aaa ccg ctg aaa gtt cga agg att aaa tct gaa aag ctt cac 740

Arg Leu Lys Pro Leu Lys Val Arg Arg Ile Lys Ser Glu Lys Leu His

200 205 210

ctc aaa gac ttt agg atc aac ctc cca gac aaa aac gtc cct cct ccc 788

Leu Lys Asp Phe Arg Ile Asn Leu Pro Asp Lys Asn Val Pro Pro Pro

215 220 225

tcg ata gag cct ttg act cct cca ccg cag tat gat gaa gtc cag gag 836

Ser Ile Glu Pro Leu Thr Pro Pro Pro Gln Tyr Asp Glu Val Gln Glu

230 235 240

aag gcc ccc gac acc cgg ccg ccc gac tgaatggccc cacttgagcc 883

Lys Ala Pro Asp Thr Arg Pro Pro Asp

245 250

acgctccctc ctgtctctc 902

<210>4

<211>253

<212>PRT

<213>人

<400>4

Met Met Ala Gln Ser Lys Ala Asn Gly Ser His Tyr Ala Leu Thr Ala

1 5 10 15

Ile Gly Leu Gly Met Leu Val Leu Gly Val Ile Met Ala Met Trp Asn

20 25 30

Leu Val Pro Gly Phe Ser Ala Ala Glu Lys Pro Thr Ala Gln Gly Ser

35 40 45

Asn Lys Thr Glu Val Gly Gly Gly lle Leu Lys Ser Lys Thr Phe Ser

50 55 60

Val Ala Tyr Val Leu Val Gly Ala Gly Val Met Leu Leu Leu Leu Ser

65 70 75 80

Ile Cys Leu Ser Ile Arg Asp Lys Arg Lys Gln Arg Gln Gly Glu Asp

85 90 95

Leu Ala His Val Gln His Pro Thr Gly Ala Gly Pro His Ala Gln Glu

100 105 110

Glu Asp Ser Gln Glu Glu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Ala Ala Ser Arg

115 120 125

Tyr Tyr Val Pro Ser Tyr Glu Glu Val Met Asn Thr Asn Tyr Ser Glu

130 135 140

Ala Arg Gly Glu Glu Gln Asn Pro Arg Leu Ser Ile Ser Leu Pro Ser

145 150 155 160

Tyr Glu Ser Leu Thr Gly Leu Asp Glu Thr Thr Pro Thr Ser Thr Arg

165 170 175

Ala Asp Val Glu Ala Ser Pro Gly Asn Pro Pro Asp Arg Gln Asn Ser

180 185 190

Lys Leu Ala Lys Arg Leu Lys Pro Leu Lys Val Arg Arg Ile Lys Ser

195 200 205

Glu Lys Leu His Leu Lys Asp Phe Arg Ile Asn Leu Pro Asp Lys Asn

210 215 220

Val Pro Pro Pro Ser Ile Glu Pro Leu Thr Pro Pro Pro Gln Tyr Asp

225 230 235 240

Glu Val Gln Glu Lys Ala Pro Asp Thr Arg Pro Pro Asp

245 250

<210>5

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<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

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<223>

<400>5

atcggtgcgt ggtgacgttt cgccggcgcg ggcgccatcc cggaagcgcg agcaaggccg 60

ccagatgtgc aggcagcgga ggaggagaaa gag atg gac ctc ccg gac tcg gcc 114

Met Asp Leu Pro Asp Ser Ala

1 5

tcg agg gtc ttc tgc ggc cgc atc ctg agc atg gtg aac aca gat gat 162

Ser Arg Val Phe Cys Gly Arg Ile Leu Ser Met Val Asn Thr Asp Asp

10 15 20

gtc aac gcc atc atc ctg gcc cag aag aac atg ctg gac cgc ttt gag 210

Val Asn Ala Ile Ile Leu Ala Gln Lys Asn Met Leu Asp Arg Phe Glu

25 30 35

aag acc aat gag atg ctg ctc aac ttc aac aac ctg tcc agt gcc cgc 258

Lys Thr Asn Glu Met Leu Leu Asn Phe Asn Asn Leu Ser Ser Ala Arg

40 45 50 55

ctg cag cag atg agc gaa cgc ttc ctg cac cac acg agg acc cta gta 306

Leu Gln Gln Met Ser Glu Arg Phe Leu His His Thr Arg Thr Leu Val

60 65 70

gag atg aaa cgg gac ctg gac agc atc ttc cgc cgt atc agg acg ctg 354

Glu Met Lys Arg Asp Leu Asp Ser Ile Phe Arg Arg Ile Arg Thr Leu

75 80 85

aaa ggg aaa ctg gcc agg cag cac cca gag gcc ttc agc cat atc cca 402

Lys Gly Lys Leu Ala Arg Gln His Pro Glu Ala Phe Ser His Ile Pro

90 95 100

gag gca tcc ttc ctg gag gaa gag gat gaa gac ccc atc cca ccc agc 450

Glu Ala Ser Phe Leu Glu Glu Glu Asp Glu Asp Pro Ile Pro Pro Ser

105 110 115

acc acg acc acc att gcc acc tca gaa cag agc acg ggc tca tgt gac 498

Thr Thr Thr Thr Ile Ala Thr Ser Glu Gln Ser Thr Gly Ser Cys Asp

120 125 130 135

acc agc ccc gac acc gtc tcg ccc tcc ctg agc ccc ggc ttc gag gac 546

Thr Ser Pro Asp Thr Val Ser Pro Ser Leu Ser Pro Gly Phe Glu Asp

140 145 150

ctg tcc cat gtc cag cct ggc tcc cca gcc atc aac ggc cgc agc cag 594

Leu Ser His Val Gln Pro Gly Ser Pro Ala Ile Asn Gly Arg Ser Gln

155 160 165

aca gat gac gag gag atg acg ggc gaa tagccctgct gcccggtgcc 641

Thr Asp Asp Glu Glu Met Thr Gly Glu

170 175

ttgagggggt ctcagggcag cagcatacaa ggtggcagcg ggtaaccctg ccttgttctg 701

tcatccag 709

<210>6

<211>176

<212>PRT

<213>人

<400>6

Met Asp Leu Pro Asp Ser Ala Ser Arg Val Phe Cys Gly Arg Ile Leu

1 5 10 15

Ser Met Val Asn Thr Asp Asp Val Asn Ala Ile Ile Leu Ala Gln Lys

20 25 30

Asn Met Leu Asp Arg Phe Glu Lys Thr Asn Glu Met Leu Leu Asn Phe

35 40 45

Asn Asn Leu Ser Ser Ala Arg Leu Gln Gln Met Ser Glu Arg Phe Leu

50 55 60

His His Thr Arg Thr Leu Val Glu Met Lys Arg Asp Leu Asp Ser Ile

65 70 75 80

Phe Arg Arg Ile Arg Thr Leu Lys Gly Lys Leu Ala Arg Gln His Pro

85 90 95

Glu Ala Phe Ser His Ile Pro Glu Ala Ser Phe Leu Glu Glu Glu Asp

100 105 110

Glu Asp Pro I1e Pro Pro Ser Thr Thr Thr Thr Ile Ala Thr Ser Glu

115 120 125

Gln Ser Thr Gly Ser Cys Asp Thr Ser Pro Asp Thr Val Ser Pro Ser

130 135 140

Leu Ser Pro Gly Phe Glu Asp Leu Ser His Val Gln Pro Gly Ser Pro

145 150 155 160

Ala Ile Asn Gly Arg Ser Gln Thr Asp Asp Glu Glu Met Thr Gly Glu

165 170 175

<210>7

<211>1170

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(12)..(1151)

<223>

<400>7

gattttgagt c atg aat gaa aaa tct tgc tct ttc cat agt aaa gaa gaa 50

Met Asn Glu Lys Ser Cys Ser Phe His Ser Lys Glu Glu

1 5 10

tta aga gat gga cag ggt gaa aga ttg tct gct gga tat tct cca tca 98

Leu Arg Asp Gly Gln Gly Glu Arg Leu Ser Ala Gly Tyr Ser Pro Ser

15 20 25

tat gac aag gac aag agt gtt ctg gct ttc aga gga atc cct atc tca 146

Tyr Asp Lys Asp Lys Ser Val Leu Ala Phe Arg Gly Ile Pro Ile Ser

30 35 40 45

gag ttg aag aac cat ggc att ctc cag gct ctg acc aca gaa gct tat 194

Glu Leu Lys Asn His Gly Ile Leu Gln Ala Leu Thr Thr Glu Ala Tyr

50 55 60

gaa tgg gag cca cgt gtt gtg agt aca gag gtg gtc aga gcc caa gaa 242

Glu Trp Glu Pro Arg Val Val Ser Thr Glu Val Val Arg Ala Gln Glu

65 70 75

gaa tgg gaa gct gtg gac acc atc cag cca gag aca ggg agc caa gct 290

Glu Trp Glu Ala Val Asp Thr Ile Gln Pro Glu Thr Gly Ser Gln Ala

80 85 90

agc tca gag cag cct ggg cag cta atc tcc ttc agt gag gcc ctg cag 338

Ser Ser Glu Gln Pro Gly Gln Leu Ile Ser Phe Ser Glu Ala Leu Gln

95 100 105

cac ttc cag act gtg gac ctt tcc ccc ttc aag aaa aga atc cag cca 386

His Phe Gln Thr Val Asp Leu Ser Pro Phe Lys Lys Arg Ile Gln Pro

110 115 120 125

act att cga agg act ggg ctc gcc gcc ctc cga cac tac ctc ttc ggg 434

Thr Ile Arg Arg Thr Gly Leu Ala Ala Leu Arg His Tyr Leu Phe Gly

130 135 140

cct cca aag ctc cac cag cgc ctt cgg gaa gaa agg gac ttg gtc ctg 482

Pro Pro Lys Leu His Gln Arg Leu Arg Glu Glu Arg Asp Leu Val Leu

145 150 155

acc att gct cag tgt ggc ctg gat agc caa gac cca gtg cat ggc cga 530

Thr Ile Ala Gln Cys Gly Leu Asp Ser Gln Asp Pro Val His Gly Arg

160 165 170

gtc ctc cag acc atc tat aag aag ctg acc ggc tcc aag ttt gac tgt 578

Val Leu Gln Thr Ile Tyr Lys Lys Leu Thr Gly Ser Lys Phe Asp Cys

175 180 185

gcc ctt cat gga aac cac tgg gag gac ctg ggc ttt cag gga gcg aat 626

Ala Leu His Gly Asn His Trp Glu Asp Leu Gly Phe Gln Gly Ala Asn

190 195 200 205

cca gcc aca gac ctg aga ggc gca ggc ttc ctt gcc ctc ctg cat ctg 674

Pro Ala Thr Asp Leu Arg Gly Ala Gly Phe Leu Ala Leu Leu His Leu

210 215 220

ctc tac ctg gtg atg gac tca aag acc ttg ccg atg gcg cag gag att 722

Leu Tyr Leu Val Met Asp Ser Lys Thr Leu Pro Met Ala Gln Glu Ile

225 230 235

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Phe Arg Leu Ser Arg His His Ile Gln Gln Phe Pro Phe Cys Leu Met

240 245 250

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Ser Val Asn Ile Thr His Ile Ala Ile Gln Ala Leu Arg Glu Glu Cys

255 260 265

ctc tcc aga gag tgt aat cgg cag cag aag gtc atc ccc gtg gtg aac 866

Leu Ser Arg Glu Cys Asn Arg Gln Gln Lys Val Ile Pro Val Val Asn

270 275 280 285

agc ttc tat gcc gcc aca ttc ctc cac ctc gca cat gtc tgg agg aca 914

Ser Phe Tyr Ala Ala Thr Phe Leu His Leu Ala His Val Trp Arg Thr

290 295 300

cag cgg aag acc atc tca gac tcg ggc ttt gtc ctc aaa gag agt tgg 962

Gln Arg Lys Thr Ile Ser Asp Ser Gly Phe Val Leu Lys Glu Ser Trp

305 310 315

aag tat tgg cca aga aga gcc cac ggc ggc tgc tca aga ccc tgg agc 1010

Lys Tyr Trp Pro Arg Arg Ala His Gly Gly Cys Ser Arg Pro Trp Ser

320 325 330

tgt act tgg cca ggg tgt caa agg gac agg cct cct tgt tgg gag cac 1058

Cys Thr Trp Pro Gly Cys Gln Arg Asp Arg Pro Pro Cys Trp Glu His

335 340 345

aga agt gct atg ggc cag aag ccc ctc cct tca agg atc tca cct tca 1106

Arg Ser Ala Met Gly Gln Lys Pro Leu Pro Ser Arg Ile Ser Pro Ser

350 355 360 365

cag gtg aga gtg acc tgc agt ctc act cat ccg aag gcg tat ggc 1151

Gln Val Arg Val Thr Cys Ser Leu Thr His Pro Lys Ala Tyr Gly

370 375 380

tgatctgacc tccgagatg 1170

<210>8

<211>380

<212>PRT

<213>人

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Met Asn Glu Lys Ser Cys Ser Phe His Ser Lys Glu Glu Leu Arg Asp

1 5 10 15

Gly Gln Gly Glu Arg Leu Ser Ala Gly Tyr Ser Pro Ser Tyr Asp Lys

20 25 30

Asp Lys Ser Val Leu Ala Phe Arg Gly Ile Pro Ile Ser Glu Leu Lys

35 40 45

Asn His Gly Ile Leu Gln Ala Leu Thr Thr Glu Ala Tyr Glu Trp Glu

50 55 60

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65 70 75 80

Ala Val Asp Thr Ile Gln Pro Glu Thr Gly Ser Gln Ala Ser Ser Glu

85 90 95

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100 105 110

Thr Val Asp Leu Ser Pro Phe Lys Lys Arg Ile Gln Pro Thr Ile Arg

115 120 125

Arg Thr Gly Leu Ala Ala Leu Arg His Tyr Leu Phe Gly Pro Pro Lys

130 135 140

Leu His Gln Arg Leu Arg Glu Glu Arg Asp Leu Val Leu Thr Ile Ala

145 150 155 160

Gln Cys Gly Leu Asp Ser Gln Asp Pro Val His Gly Arg Val Leu Gln

165 170 175

Thr Ile Tyr Lys Lys Leu Thr Gly Ser Lys Phe Asp Cys Ala Leu His

180 185 190

Gly Asn His Trp Glu Asp Leu Gly Phe Gln Gly Ala Asn Pro Ala Thr

195 200 205

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210 215 220

Val Met Asp Ser Lys Thr Leu Pro Met Ala Gln Glu Ile Phe Arg Leu

225 230 235 240

Ser Arg His His Ile Gln Gln Phe Pro Phe Cys Leu Met Ser Val Asn

245 250 255

Ile Thr His Ile Ala Ile Gln Ala Leu Arg Glu Glu Cys Leu Ser Arg

260 265 270

Glu Cys Asn Arg Gln Gln Lys Val Ile Pro Val Val Asn Ser Phe Tyr

275 280 285

Ala Ala Thr Phe Leu His Leu Ala His Val Trp Arg Thr Gln Arg Lys

290 295 300

Thr lle Ser Asp Ser Gly Phe Val Leu Lys Glu Ser Trp Lys Tyr Trp

305 310 315 320

Pro Arg Arg Ala His Gly Gly Cys Ser Arg Pro Trp Ser Cys Thr Trp

325 330 335

Pro Gly Cys Gln Arg Asp Arg Pro Pro Cys Trp Glu His Arg Ser Ala

340 345 350

Met Gly Gln Lys Pro Leu Pro Ser Arg Ile Ser Pro Ser Gln Val Arg

355 360 365

Val Thr Cys Ser Leu Thr His Pro Lys Ala Tyr Gly

370 375 380

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<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

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<223>

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Met Ala Ser Thr Gly

1 5

agc cag gcc tct gat ata gac gag att ttt gga ttc ttc aac gat ggc 102

Ser Gln Ala Ser Asp Ile Asp Glu Ile Phe Gly Phe Phe Asn Asp Gly

10 15 20

gaa cct ccc acc aaa aag ccc agg aag ctg ctt cca agc tta aaa act 150

Glu Pro Pro Thr Lys Lys Pro Arg Lys Leu Leu Pro Ser Leu Lys Thr

25 30 35

aag aag cct cga gaa ctt gtg cta gtg att gga aca ggc att agt gct 198

Lys Lys Pro Arg Glu Leu Val Leu Val Ile Gly Thr Gly Ile Ser Ala

40 45 50

gca gtt gcg ccc caa gtt cca gcc ctc aaa tcc tgg aag ggg tta att 246

Ala Val Ala Pro Gln Val Pro Ala Leu Lys Ser Trp Lys Gly Leu Ile

55 60 65

cag gcc tta ctg gat gct gcc att gat ttt gat ctt tta gaa gat gag 294

Gln Ala Leu Leu Asp Ala Ala Ile Asp Phe Asp Leu Leu Glu Asp Glu

70 75 80 85

gag agc aaa aag ttt cag aaa tgt ctc cat gaa gac aag aac ctg gtc 342

Glu Ser Lys Lys Phe Gln Lys Cys Leu His Glu Asp Lys Asn Leu Val

90 95 100

cat gtt gcc cat gac ctt atc cag aaa ctc tct cct cgt acc agt aat 390

His Val Ala His Asp Leu Ile Gln Lys Leu Ser Pro Arg Thr Ser Asn

105 110 115

gtt cga tcc aca ttt ttc aag gac tgt tta tat gaa gta ttt gat gac 438

Val Arg Ser Thr Phe Phe Lys Asp Cys Leu Tyr Glu Val Phe Asp Asp

120 125 130

ttg gag tca aag atg gaa gat tct gga aaa cag cta ctt cag tca gtt 486

Leu Glu Ser Lys Met Glu Asp Ser Gly Lys Gln Leu Leu Gln Ser Val

135 140 145

ctc cac ctg atg gaa aat gga gcc ctc gta tta act aca aat ttt gat 534

Leu His Leu Met Glu Asn Gly Ala Leu Val Leu Thr Thr Asn Phe Asp

150 155 160 165

aat ctc ttg gaa ctg tat gca gca gat cag ggg aaa cag ctt gaa tcc 582

Asn Leu Leu Glu Leu Tyr Ala Ala Asp Gln Gly Lys Gln Leu Glu Ser

170 175 180

ctt gac ctt act gat gag aaa aag gtc ctc gag tgg gct cag gag aag 630

Leu Asp Leu Thr Asp Glu Lys Lys Val Leu Glu Trp Ala Gln Glu Lys

185 190 195

cgt aag ctg agc gtg ttg cat att cac gga gtc tac acc aac cct agt 678

Arg Lys Leu Ser Val Leu His Ile His Gly Val Tyr Thr Asn Pro Ser

200 205 210

ggc att gtc ctt cat ccg gct gga tat cag aac gtg ctc agg aac act 726

Gly Ile Val Leu His Pro Ala Gly Tyr Gln Asn Val Leu Arg Asn Thr

215 220 225

gaa gtc atg aga gaa att cag aaa ctc tac gaa aac aag tca ttt ctt 774

Glu Val Met Arg Glu Ile Gln Lys Leu Tyr Glu Asn Lys Ser Phe Leu

230 235 240 245

ttc ctg ggc tgt ggc tgg act gtg gat gac acc act ttc cag gcc ctt 822

Phe Leu Gly Cys Gly Trp Thr Val Asp Asp Thr Thr Phe Gln Ala Leu

250 255 260

ttc ttg gag gct gtc aag cat aaa tct gac cta gaa cat ttc atg ctg 870

Phe Leu Glu Ala Val Lys His Lys Ser Asp Leu Glu His Phe Met Leu

265 270 275

gtt cgg aga gga gac gta gat gag ttc aaa aag ctt cga gaa aac atg 918

Val Arg Arg Gly Asp Val Asp Glu Phe Lys Lys Leu Arg Glu Asn Met

280 285 290

ctg gac aag ggg att aaa gtc atc tcc tat gga gat gac tat gcc gat 966

Leu Asp Lys Gly Ile Lys Val Ile Ser Tyr Gly Asp Asp Tyr Ala Asp

295 300 305

ctt cca gaa tat ttc aag cga ctg aca tgt gag atc tcc aca agg ggt 1014

Leu Pro Glu Tyr Phe Lys Arg Leu Thr Cys Glu Ile Ser Thr Arg Gly

310 315 320 325

aca tca gca ggg atg gtg aga gaa ggt cag cta aat ggc tca tct gca 1062

Thr Ser Ala Gly Met Val Arg Glu Gly Gln Leu Asn Gly Ser Ser Ala

330 335 340

gca cac agt gaa ata aga ggc tgt agt aca tgagcgagct agagaaatca 1112

Ala His Ser Glu Ile Arg Gly Cys Ser Thr

345 350

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<2l0>10

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<212>PRT

<213>人

<400>10

Met Ala Ser Thr Gly Ser Gln Ala Ser Asp Ile Asp Glu Ile Phe Gly

1 5 10 15

Phe Phe Asn Asp Gly Glu Pro Pro Thr Lys Lys Pro Arg Lys Leu Leu

20 25 30

Pro Ser Leu Lys Thr Lys Lys Pro Arg Glu Leu Val Leu Val Ile Gly

35 40 45

Thr Gly Ile Ser Ala Ala Val Ala Pro Gln Val Pro Ala Leu Lys Ser

50 55 60

Trp Lys Gly Leu Ile Gln Ala Leu Leu Asp Ala Ala Ile Asp Phe Asp

65 70 75 80

Leu Leu Glu Asp Glu Glu Ser Lys Lys Phe Gln Lys Cys Leu His Glu

85 90 95

Asp Lys Asn Leu Val His Val Ala His Asp Leu Ile Gln Lys Leu Ser

100 105 110

Pro Arg Thr Ser Asn Val Arg Ser Thr Phe Phe Lys Asp Cys Leu Tyr

115 120 125

Glu Val Phe Asp Asp Leu Glu Ser Lys Met Glu Asp Ser Gly Lys Gln

130 135 140

Leu Leu Gln Ser Val Leu His Leu Met Glu Asn Gly Ala Leu Val Leu

145 150 155 160

Thr Thr Asn Phe Asp Asn Leu Leu Glu Leu Tyr Ala Ala Asp Gln Gly

165 170 175

Lys Gln Leu Glu Ser Leu Asp Leu Thr Asp Glu Lys Lys Val Leu Glu

180 185 190

Trp Ala Gln Glu Lys Arg Lys Leu Ser Val Leu His Ile His Gly Val

195 200 205

Tyr Thr Asn Pro Ser Gly Ile Val Leu His Pro Ala Gly Tyr Gln Asn

210 215 220

Val Leu Arg Asn Thr Glu Val Met Arg Glu Ile Gln Lys Leu Tyr Glu

225 230 235 240

Asn Lys Ser Phe Leu Phe Leu Gly Cys Gly Trp Thr Val Asp Asp Thr

245 250 255

Thr Phe Gln Ala Leu Phe Leu Glu Ala Val Lys His Lys Ser Asp Leu

260 265 270

Glu His Phe Met Leu Val Arg Arg Gly Asp Val Asp Glu Phe Lys Lys

275 280 285

Leu Arg Glu Asn Met Leu Asp Lys Gly Ile Lys Val Ile Ser Tyr Gly

290 295 300

Asp Asp Tyr Ala Asp Leu Pro Glu Tyr Phe Lys Arg Leu Thr Cys Glu

305 310 315 320

Ile Ser Thr Arg Gly Thr Ser Ala Gly Met Val Arg Glu Gly Gln Leu

325 330 335

Asn Gly Ser Ser Ala Ala His Ser Glu Ile Arg Gly Cys Ser Thr

340 345 350

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<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(34)..(1347)

<223>

<400>11

ccaggtgctg gctctgcgtg aatatcttag gaa atg caa gct gag gac agg tca 54

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1 5

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Gln Phe Gly Ser Ala Ala Glu Met Leu Ser Glu Gln Thr Ala Ala Leu

10 15 20

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Gly Thr Gly Trp Glu Ser Met Asn Val Gln Leu Asp Gly Ala Glu Pro

25 30 35

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Gln Val Glu Arg Gly Ser Gln Glu Glu Arg Pro Trp Arg Thr Val Pro

40 45 50 55

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Gly Pro Leu Glu His Leu Cys Cys Asp Leu Glu Glu Glu Pro Gln Ser

60 65 70

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Leu Gln Glu Lys Ala Gln Ser Ala Pro Trp Val Pro Ala Ile Pro Gln

75 80 85

gag ggg aac act gga gac tgg gag atg gca gct gca ctt ctt gcg gct 342

Glu Gly Asn Thr Gly Asp TrpGlu Met Ala Ala Ala Leu Leu Ala Ala

90 95 100

gga tca cag ggc ctg gta acc atc aag gat gtg tca ctg tgc ttc tct 390

Gly Ser Gln Gly Leu Val Thr Ile Lys Asp Val Ser Leu Cys Phe Ser

105 110 115

cag gag gag tgg cgg agc ctg gac ccc tct cag aca gac ttt tat gga 438

Gln Glu Glu Trp Arg Ser Leu Asp Pro Ser Gln Thr Asp Phe Tyr Gly

120 125 130 135

gaa tat gtc atg cag gaa aac tgt ggg ata gta gtc tct ctg aga ttt 486

Glu Tyr Val Met Gln Glu Asn Cys Gly Ile Val Val Ser Leu Arg Phe

140 145 150

cca att ccc aaa ctg gac atg ctt tct caa cta gaa gga gga gaa gaa 534

Pro Ile Pro Lys Leu Asp Met Leu Ser Gln Leu Glu Gly Gly Glu Glu

155 160 165

caa tgg gtc cct gac ccc cag gac tta gag gag agg gac att ctg agg 582

Gln Trp Val Pro Asp Pro Gln Asp Leu Glu Glu Arg Asp Ile Leu Arg

170 175 180

gtc aca tat aca gga ggt gga agt gaa cat gag ggg gat acc cct gaa 630

Val Thr Tyr Thr Gly Gly Gly Ser Glu His Glu Gly Asp Thr Pro Glu

185 190 195

cta gaa gca gaa cct ccc aga atg tta tcc agc gtg tct gaa gat act 678

Leu Glu Ala Glu Pro Pro Arg Met Leu Ser Ser Val Ser Glu Asp Thr

200 205 210 215

gtt ctc tgg aac ccg gag cat gat gag agc tgg gat tcc atg ccc agc 726

Val Leu Trp Asn Pro Glu His Asp Glu Ser Trp Asp Ser Met Pro Ser

220 225 230

agc tcc aga gga atg ctc ctg ggg ccc cct ttt ctt cag gaa gat agt 774

Ser Ser Arg Gly Met Leu Leu Gly Pro Pro Phe Leu Gln Glu Asp Ser

235 240 245

ttc tca aac ctg ctg tgt agc aca gag atg gat tcc ctg tta aga ccc 822

Phe Ser Ash Leu Leu Cys Ser Thr Glu Met Asp Ser Leu Leu Arg Pro

250 255 260

cac aca tgc ccc cag tgt ggg aaa cag ttt gta tgg ggt tcc cac ctt 870

His Thr Cys Pro Gln Cys Gly Lys Gln Phe Val Trp Gly Ser His Leu

265 270 275

gcc agg cat caa caa aca cac act ggg gag aga ccc tac agc tgc ctc 918

Ala Arg His Gln Gln Thr His Thr Gly Glu Arg Pro Tyr Ser Cys Leu

280 285 290 295

aag tgt gag aag acc ttt ggg cga aga cat cac ctc atc agg cac cag 966

Lys Cys Glu Lys Thr Phe Gly Arg Arg His His Leu Ile Arg His Gln

300 305 310

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Lys Thr His Leu His Asp Lys Thr Ser Arg Cys Ser Glu Cys Gly Lys

315 32 0325

aat ttc cga tgc aac tcc cat ctg gcc agc cac cag aga gtg cat gca 1062

Asn Phe Arg Cys Asn Ser His Leu Ala Ser His Gln Arg Val His Ala

330 335 340

gaa ggc aaa tcc tgc aaa ggc caa gag gtt gga gag agc cct ggc aca 1110

Glu Gly Lys Ser Cys Lys Gly Gln Glu Val Gly Glu Ser Pro Gly Thr

345 350 355

agg aaa cgg cag cgt gcc cca cca gtg cca aag tgt cac gtg tgc act 1158

Arg Lys Arg Gln Arg Ala Pro Pro Val Pro Lys Cys His Val Cys Thr

360 365 370 375

gaa tgt ggg aag agc ttt ggc cga agg cac cac ctt gtg aga cac tgg 1206

Glu Cys Gly Lys Ser Phe Gly Arg Arg His His Leu Val Arg His Trp

380 385 390

ctg acc cac act ggg gag aag ccc ttc cag tgc cct cgc tgt gag aag 1254

Leu Thr His Thr Gly Glu Lys Pro Phe Gln Cys Pro Arg Cys Glu Lys

395 400 405

agc ttt ggc cga aaa cat cac ctg gac agg cac ctg ctc acc cac cag 1302

Ser Phe Gly Arg Lys His His Leu Asp Arg His Leu Leu Thr His Gln

410 415 420

gga caa agt ccc cgg aac agc tgg gac aga gga aca tct gtc ttc 1347

Gly Gln Ser Pro Arg Ash Ser Trp Asp Arg Gly Thr Ser Val Phe

425 430 435

tgaaatctgt ttccactaca gctatggtca agtctatcag ccggtgctac cagg 1401

<210>12

<211>438

<212>PRT

<213>人

<400>12

Met Gln Ala Glu Asp Arg Ser Gln Phe Gly Ser Ala Ala Glu Met Leu

1 5 10 15

Ser Glu Gln Thr Ala Ala Leu Gly Thr Gly Trp Glu Ser Met Asn Val

20 25 30

Gln Leu Asp Gly Ala Glu Pro Gln Val Glu Arg Gly Ser Gln Glu Glu

35 40 45

Arg Pro Trp Arg Thr Val Pro Gly Pro Leu Glu His Leu Cys Cys Asp

50 55 60

Leu Glu Glu Glu Pro Gln Ser Leu Gln Glu Lys Ala Gln Ser Ala Pro

65 70 75 80

Trp Val Pro Ala Ile Pro Gln Glu Gly Asn Thr Gly Asp Trp Glu Met

85 90 95

Ala Ala Ala Leu Leu Ala Ala Gly Ser Gln Gly Leu Val Thr Ile Lys

100 105 110

Asp Val Ser Leu Cys Phe Ser Gln Glu Glu Trp Arg Ser Leu Asp Pro

115 120 125

Ser Gln Thr Asp Phe Tyr Gly Glu Tyr Val Met Gln Glu Asn Cys Gly

130 135 140

Ile Val Val Ser Leu Arg Phe Pro Ile Pro Lys Leu Asp Met Leu Ser

145 150 155 160

Gln Leu Glu Gly Gly Glu Glu Gln Trp Val Pro Asp Pro Gln Asp Leu

165 170 175

Glu Glu Arg Asp Ile Leu Arg Val Thr Tyr Thr Gly Gly Gly Ser Glu

180 185 190

His Glu Gly Asp Thr Pro Glu Leu Glu Ala Glu Pro Pro Arg Met Leu

195 200 205

Ser Ser Val Ser Glu Asp Thr Val Leu Trp Asn Pro Glu His Asp Glu

210 215 220

Ser Trp Asp Ser Met Pro Ser Ser Ser Arg Gly Met Leu Leu Gly Pro

225 230 235 240

Pro Phe Leu Gln Glu Asp Ser Phe Ser Asn Leu Leu Cys Ser Thr Glu

245 250 255

Met Asp Ser Leu Leu Arg Pro His Thr Cys Pro Gln Cys Gly Lys Gln

260 265 270

Phe Val Trp Gly Ser His Leu Ala Arg His Gln Gln Thr His Thr Gly

275 280 285

Glu Arg Pro Tyr Ser Cys Leu Lys Cys Glu Lys Thr Phe Gly Arg Arg

290 295 300

His His Leu Ile Arg His Gln Lys Thr His Leu His Asp Lys Thr Ser

305 310 315 320

Arg Cys Ser Glu Cys Gly Lys Asn Phe Arg Cys Asn Ser His Leu Ala

325 330 335

Ser His Gln Arg Val His Ala Glu Gly Lys Ser Cys Lys Gly Gln Glu

340 345 350

Val Gly Glu Ser Pro Gly Thr Arg Lys Arg Gln Arg Ala Pro Pro Val

355 360 365

Pro Lys Cys His Val Cys Thr Glu Cys Gly Lys Ser Phe Gly Arg Arg

370 375 380

His His Leu Val Arg His Trp Leu Thr His Thr Gly Glu Lys Pro Phe

385 390 395 400

Gln Cys Pro Arg Cys Glu Lys Ser Phe Gly Arg Lys His His Leu Asp

405 410 415

Arg His Leu Leu Thr His Gln Gly Gln Ser Pro Arg Asn Ser Trp Asp

420 425 430

Arg Gly Thr Ser Val Phe

435

<210>13

<211>818

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(31)..(783)

<223>

<400>13

tagctggaac cacagaacat cagcactgga atg gcc ata gct gga ata atg tta 54

Met Ala Ile Ala Gly Ile Met Leu

1 5

ctt ttg aga agc att cga ctg aca tca aaa ttt aca agc tct tcg gat 102

Leu Leu Arg Ser Ile Arg Leu Thr Ser Lys Phe Thr Ser Ser Ser Asp

10 15 20

att cca gta gaa ttt ata aga aga aat gtt aaa cta cgt gga cga tta 150

Ile Pro Val Glu Phe Ile Arg Arg Asn Val Lys Leu Arg Gly Arg Leu

25 30 35 40

cgc cga ata act gag aat ggt tta gaa att gaa cat ata cct att act 198

Arg Arg Ile Thr Glu Asn Gly Leu Glu Ile Glu His Ile Pro Ile Thr

45 50 55

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Leu Pro Ile Ile Ala Ser Leu Arg Lys Glu Pro Arg Gly Ala Leu Leu

60 65 70

gtt aag ttg gct gga gta gaa ctc gct gaa act ggg aag gca tgg tta 294

Val Lys Leu Ala Gly Val Glu Leu Ala Glu Thr Gly Lys Ala Trp Leu

75 80 85

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Gln Lys Glu Leu Lys Pro Ser Gln Leu Leu Trp Phe Gln Leu Leu Gly

90 95 100

aag gag aat tca gca ctc ttt tgc tat ctt ctg gtg agt aag ggt gga 390

Lys Glu Asn Ser Ala Leu Phe Cys Tyr Leu Leu Val Ser Lys Gly Gly

105 110 115 120

tat ttc agc gtg aat ctg aat gaa gaa att ttg aga aga ggc ctt ggc 438

Tyr Phe Ser Val Asn Leu Asn Glu Glu Ile Leu Arg Arg Gly Leu Gly

125 130 135

aaa act gtt ctt gtt aaa ggg ctt aaa tat gat tct aaa atc tac tgg 486

Lys Thr Val Leu Val Lys Gly Leu Lys Tyr Asp Ser Lys Ile Tyr Trp

140 145 150

aca gtt cac aga aac tta ctt aaa gct gaa tta aca gcc tta aaa aaa 534

Thr Val His Arg Asn Leu Leu Lys Ala Glu Leu Thr Ala Leu Lys Lys

155 160 165

gga gaa gga ata tgg aag gaa gac tct gaa aaa gaa agt tac tta gaa 582

Gly Glu Gly Ile Trp Lys Glu Asp Ser Glu Lys Glu Ser Tyr Leu Glu

170 175 180

aaa ttc aaa gat tcc tgg aga gaa ata tgg aaa aag gac agt ttt tta 630

Lys Phe Lys Asp Ser Trp Arg Glu Ile Trp Lys Lys Asp Ser Phe Leu

185 190 195 200

aaa aca aca gga tca gat ttc agc ttg aaa aaa gaa agt tat tat gaa 678

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205 210 215

aaa ctt aaa agg act tat gaa ata tgg aaa gac aac atg aac aac tgc 726

Lys Leu Lys Arg Thr Tyr Glu Ile Trp Lys Asp Asn Met Asn Asn Cys

220 225 230

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Ser Leu Ile Leu Lys Phe Arg Glu Leu Ile Ser Arg Ile Asn Phe Arg

235 240 245

aga aaa ggg tgaaacggtc aagaaatcta gaggtaacct tctcc 818

Arg Lys Gly

250

<210>14

<211>251

<212>PRT

<213>人

<400>14

Met Ala Ile Ala Gly Ile Met Leu Leu Leu Arg Ser Ile Arg Leu Thr

1 5 10 15

Ser Lys Phe Thr Ser Ser Ser Asp Ile Pro Val Glu Phe Ile Arg Arg

20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

Leu Leu Trp Phe Gln Leu Leu Gly Lys Glu Asn Ser Ala Leu Phe Cys

100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

Lys Tyr Asp Ser Lys Ile Tyr Trp Thr Val His Arg Asn Leu Leu Lys

145 150 155 160

Ala Glu Leu Thr Ala Leu Lys Lys Gly Glu Gly Ile Trp Lys Glu Asp

165 170 175

Ser Glu Lys Glu Ser Tyr Leu Glu Lys Phe Lys Asp Ser Trp Arg Glu

180 185 190

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195 200 205

Leu Lys Lys Glu Ser Tyr Tyr Glu Lys Leu Lys Arg Thr Tyr Glu Ile

210 215 220

Trp Lys Asp Asn Met Asn Asn Cys Ser Leu Ile Leu Lys Phe Arg Glu

225 230 235 240

Leu Ile Ser Arg Ile Asn Phe Arg Arg Lys Gly

245 250

<210>15

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<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(36)..(1244)

<223>

<400>15

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1 5

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10 15 20

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25 30 35

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40 45 50

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55 60 65 70

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75 80 85

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90 95 100

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Val Ile Thr Ile Ile Thr Val Asp Arg Gln Pro Gly Phe His Tyr Val

105 110 115

ctg cag gtt gtg tcc cag ttc cac cgg ctt ctt cag caa tgt ggc ccc 437

Leu Gln Val Val Ser Gln Phe His Arg Leu Leu Gln Gln Cys Gly Pro

120 125 130

cag tgc gag ggg cac caa ctc ttc ctg tgc aac gtg gag cgt agt gtg 485

Gln Cys Glu Gly His Gln Leu Phe Leu Cys Asn Val Glu Arg Ser Val

135 140 145 150

agc cat ttt gat gcc aag ttg ctc tcc aag tat gtc cct gtg gcc aat 533

Ser His Phe Asp Ala Lys Leu Leu Ser Lys Tyr Val Pro Val Ala Asn

155 160 165

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Arg Tyr Glu Gly Thr Glu Asp Asp Tyr Gly Asp Asp Pro Ser Thr Asn

170 175 180

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Ser Phe Glu Lys Glu Lys Gln Asp Tyr Val Tyr Cys Leu Glu Ser Ser

185 190 195

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Leu Gln Thr Tyr Asn Pro Asp Tyr Val Leu Met Val Glu Asp Asp Ala

200 205 210

gta cca gaa gag cag atc ttc cca gtc ttg gag cac ctt ctg cgg gct 725

Val Pro Glu Glu Gln Ile Phe Pro Val Leu Glu His Leu Leu Arg Ala

215 220 225 230

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Arg Phe Ser Glu Pro His Leu Arg Asp Ala Leu Tyr Leu Lys Leu Tyr

235 240 245

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His Pro Glu Arg Leu Gln His Tyr Ile Asn Pro Glu Pro Met Arg Ile

250 255 260

ctg gaa tgg gtt ggt gta ggc atg ttg ctg ggg ccc tta cta acc tgg 869

Leu Glu Trp Val Gly Val Gly Met Leu Leu Gly Pro Leu Leu Thr Trp

265 270 275

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Ile Tyr Met Arg Phe Ala Ser Arg Pro Gly Phe Ser Trp Pro Val Met

280 285 290

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Leu Phe Phe Ser Leu Tyr Ser Met Gly Leu Val Glu Leu Val Gly Arg

295 300 305 310

cac tat ttc ctg gaa ctg cgg cgg ctg agt cct tcc ctg tac agt gtg 1013

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315 320 325

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Val Pro Ala Ser Gln Cys Cys Thr Pro Ala Met Leu Phe Pro Ala Pro

330 335 340

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Ala Ala Arg Arg Thr Leu Thr Tyr Leu Ser Gln Val Tyr Cys His Lys

345 350 355

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Gly Phe Gly Lys Asp Met Ala Leu Tyr Ser Leu Leu Arg Ala Lys Gly

360 365 370

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Glu Arg Ala Tyr Val Val Glu Pro Asn Leu Val Lys His Ile Gly Leu

375 380 385 390

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Phe Ser Ser Leu Arg Tyr Asn Phe His Pro Ser Leu Leu

395 400

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<210>16

<211>403

<212>PRT

<213>人

<400>16

Met Ser Thr Ser Thr Ser Pro Ala Ala Met Leu Leu Arg Arg Leu Arg

1 5 10 15

Arg Leu Ser Trp Gly Ser Thr Ala Val Gln Leu Phe Ile Leu Thr Val

20 25 30

Val Thr Phe Gly Leu Leu Ala Pro Leu Ala Cys His Arg Leu Leu His

35 40 45

Ser Tyr Phe Tyr Leu Arg His Trp His Leu Asn Gln Met Ser Gln Glu

50 55 60

Phe Leu Gln Gln Ser Leu Lys Glu Gly Glu Ala Ala Leu His Tyr Phe

65 70 75 80

Glu Glu Leu Pro Ser Ala Asn Gly Ser Val Pro Ile Val Trp Gln Ala

85 90 95

Thr Pro Arg Pro Trp Leu Val Ile Thr Ile Ile Thr Val Asp Arg Gln

100 105 110

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115 120 125

Leu Gln Gln Cys Gly Pro Gln Cys Glu Gly His Gln Leu Phe Leu Cys

130 135 140

Asn Val Glu Arg Ser Val Ser His Phe Asp Ala Lys Leu Leu Ser Lys

145 150 155 160

Tyr Val Pro Val Ala Asn Arg Tyr Glu Gly Thr Glu Asp Asp Tyr Gly

165 170 175

Asp Asp Pro Ser Thr Asn Ser Phe Glu Lys Glu Lys Gln Asp Tyr Val

180 185 190

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195 200 205

Met Val Glu Asp Asp Ala Val Pro Glu Glu Gln Ile Phe Pro Val Leu

210 215 220

Glu His Leu Leu Arg Ala Arg Phe Ser Glu Pro His Leu Arg Asp Ala

225 230 235 240

Leu Tyr Leu Lys Leu Tyr His Pro Glu Arg Leu Gln His Tyr Ile Asn

245 250 255

Pro Glu Pro Met Arg Ile Leu Glu Trp Val Gly Val Gly Met Leu Leu

260 265 270

Gly Pro Leu Leu Thr Trp Ile Tyr Met Arg Phe Ala Ser Arg Pro Gly

275 280 285

Phe Ser Trp Pro Val Met Leu Phe Phe Ser Leu Tyr Ser Met Gly Leu

290 295 300

Val Glu Leu Val Gly Arg His Tyr Phe Leu Glu Leu Arg Arg Leu Ser

305 310 315 320

Pro Ser Leu Tyr Ser Val Val Pro Ala Ser Gln Cys Cys Thr Pro Ala

325 330 335

Met Leu Phe Pro Ala Pro Ala Ala Arg Arg Thr Leu Thr Tyr Leu Ser

340 345 350

Gln Val Tyr Cys His Lys Gly Phe Gly Lys Asp Met Ala Leu Tyr Ser

355 360 365

Leu Leu Arg Ala Lys Gly Glu Arg Ala Tyr Val Val Glu Pro Asn Leu

370 375 380

Val Lys His Ile Gly Leu Phe Ser Ser Leu Arg Tyr Asn Phe His Pro

385 390 395 400

Ser Leu Leu

<210>17

<211>816

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(79)..(795)

<223>

<400>17

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1 5 10

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Leu Arg Asp Val Glu Gly Lys Val Gly Arg Lys Thr Pro Glu Gly Leu

15 20 25

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Leu Arg Gly Leu Arg Gly Glu Cys Glu Leu Gly Thr Ser Gly Ala Leu

30 35 40

ctg ctc cca ggg gcg tct agc acc ggc cac gac ttg ggg gac aag atc 255

Leu Leu Pro Gly Ala Ser Ser Thr Gly His Asp Leu Gly Asp Lys Ile

45 50 55

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Met Ala Leu Lys Met Glu Leu Ala Tyr Leu Arg Ala Ile Asp Val Lys

60 65 70 75

atc ctg cag cag ctg gtg acc ttg aat gag ggc atc gag gca gtg cgc 351

Ile Leu Gln Gln Leu Val Thr Leu Asn Glu Gly Ile Glu Ala Val Arg

80 85 90

tgg ctg ttg gag gag cgg ggg acg ttg acc agt cat tgc agc agc ctc 399

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95 100 105

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Thr Ser Ser Gln Tyr Ser Leu Thr Gly Gly Ser Pro Gly Arg Ser Arg

110 115 120

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Arg Gly Ser Trp Asp Ser Leu Pro Asp Thr Ser Thr Thr Asp Arg Leu

125 130 135

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Asp Ser Val Ser Ile Gly Ser Phe Leu Asp Thr Val Ala Pro Ser Glu

140 145 150 155

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Leu Asp Glu Gln Gly Pro Pro Gly Ala Pro Arg Ser Glu Met Asp Trp

160 165 170

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Ala Lys Val Ile Ala Gly Gly Glu Arg Ala Arg Thr Glu Val Asp Val

175 180 185

gca gcc acc agg cta ggg agc ttg aga gct gtg tgg aag ccc cca ggg 687

Ala Ala Thr Arg Leu Gly Ser Leu Arg Ala Val Trp Lys Pro Pro Gly

190 195 200

gag agg ctt caa ggt gga cca cct gag tca cca gag gat gag agt gcc 735

Glu Arg Leu Gln Gly Gly Pro Pro Glu Ser Pro Glu Asp Glu Ser Ala

205 210 215

aag ctg ggc ttc gag gcc cac tgg ttc tgg gag cag tgc cag gat gat 783

Lys Leu Gly Phe Glu Ala His Trp Phe Trp Glu Gln Cys Gln Asp Asp

220 225 230 235

gtg acc ttc ttg taacaactat tccacccttt t 816

Val Thr Phe Leu

<210>18

<211>239

<212>PRT

<213>人

<400>18

Met Glu Gly Thr Val Glu Ser Gln Thr Pro Asp Leu Arg Asp Val Glu

1 5 10 15

Gly Lys Val Gly Arg Lys Thr Pro Glu Gly Leu Leu Arg Gly Leu Arg

20 25 30

Gly Glu Cys Glu Leu Gly Thr Ser Gly Ala Leu Leu Leu Pro Gly Ala

35 40 45

Ser Ser Thr Gly His Asp Leu Gly Asp Lys Ile Met Ala Leu Lys Met

50 55 60

Glu Leu Ala Tyr Leu Arg Ala Ile Asp Val Lys Ile Leu Gln Gln Leu

65 70 75 80

Val Thr Leu Asn Glu Gly Ile Glu Ala Val Arg Trp Leu Leu Glu Glu

85 90 95

Arg Gly Thr Leu Thr Ser His Cys Ser Ser Leu Thr Ser Ser Gln Tyr

100 105 110

Ser Leu Thr Gly Gly Ser Pro Gly Arg Ser Arg Arg Gly Ser Trp Asp

115 120 125

Ser Leu Pro Asp Thr Ser Thr Thr Asp Arg Leu Asp Ser Val Ser Ile

130 135 140

Gly Ser Phe Leu Asp Thr Val Ala Pro Ser Glu Leu Asp Glu Gln Gly

145 150 155 160

Pro Pro Gly Ala Pro Arg Ser Glu Met Asp Trp Ala Lys Val Ile Ala

165 170 175

Gly Gly Glu Arg Ala Arg Thr Glu Val Asp Val Ala Ala Thr Arg Leu

180 185 190

Gly Ser Leu Arg Ala Val Trp Lys Pro Pro Gly Glu Arg Leu Gln Gly

195 200 205

Gly Pro Pro Glu Ser Pro Glu Asp Glu Ser Ala Lys Leu Gly Phe Glu

210 215 220

Ala His Trp Phe Trp Glu Gln Cys Gln Asp Asp Val Thr Phe Leu

225 230 235

<210>19

<211>1125

<212>DNA

<213>人

<220>

<221>CDS

<222>(30)..(647)

<223>

<400>19

aggcacttcg ggaagaggag gctgaaatg atg cat cag att tac agc tgc agt 53

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1 5

gac gag aac ata gaa gtt ttc acc acc gtg att cct tcc aag gta tcc 101

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10 15 20

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25 30 35 40

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45 50 55

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Leu Pro His Arg Gly Asp Arg Arg Asp Pro Gly Asp Arg Arg Arg Phe

60 65 70

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Gly Arg Leu Gln Thr Ala Arg Pro Pro Thr Ala His Pro Ala Lys Ala

75 80 85

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Ser Ala Arg Pro Val Gly Ile Ser Glu Pro Lys Thr Ser Asn Leu Cys

90 95 100

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Gly Asn Arg Ala Tyr Gly Lys Ser Leu Ile Pro Pro Val Pro Arg Ile

105 110 115 120

tca gtg aaa act tca gcc tct gcc tca ttg gag gcg aca gcc atg ggc 437

Ser Val Lys Thr Ser Ala Ser Ala Ser Leu Glu Ala Thr Ala Met Gly

125 130 135

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140 145 150

atg act gaa gag tat cca gcc ctt ccc caa gga gca gaa gcc tct cta 533

Met Thr Glu Glu Tyr Pro Ala Leu Pro Gln Gly Ala Glu Ala Ser Leu

155 160 165

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170 175 180

atg tgg aca agg cac aag aag aag tct gaa tat gtg gga gcc acc aac 629

Met Trp Thr Arg His Lys Lys Lys Ser Glu Tyr Val Gly Ala Thr Asn

185 190 195 200

agc gcc ttt gag gcc gac taaaggtgac cctcttcaag tgccctgtgt 677

Ser Ala Phe Glu Ala Asp

205

tggccaaggt tccccggaca agaggaaaaa ccttcaggat tgaaactgag ccacacgcac 737

ctctgctagt agctggtcca aacccattat cctccctcac tcattgatta ccctgggata 797

gggcacagga aagaaatgtc cctcgaaggc aatataaaac tgccccttct tagaattgct 857

aaagccattg gtctgaaagt gactttggga ggtcataaag tttgtatctc tatctttaag 917

caaaaaatta aactttccca gctcatttta aagacctcca aggaaggaaa aaagcaattc 977

ctctgtcttc cttgtgagtt gctctaaagt gtgtgatttt ctagtgtaaa tggactttga 1037

ggcacttgta aacacaatgg ttcttactgt ttccattact gcatttactt caccttgaca 1097

aggtacaatt ttcaaggaca aagcacta 1125

<210>20

<211>206

<212>PRT

<213>人

<400>20

Met His Gln Ile Tyr Ser Cys Ser Asp Glu Asn Ile Glu Val Phe Thr

1 5 10 15

Thr Val Ile Pro Ser Lys Val Ser Ser Pro Ala Arg Arg Arg Ala Lys

20 25 30

Ser Ser Gln His Leu Leu Thr Lys Asn Val Val Ile Glu Ser Asp Leu

35 40 45

Tyr Thr His Gln Pro Leu Glu Leu Leu Pro His Arg Gly Asp Arg Arg

50 55 60

Asp Pro Gly Asp Arg Arg Arg Phe Gly Arg Leu Gln Thr Ala Arg Pro

65 70 75 80

Pro Thr Ala His Pro Ala Lys Ala Ser Ala Arg Pro Val Gly Ile Ser

85 90 95

Glu Pro Lys Thr Ser Asn Leu Cys Gly Asn Arg Ala Tyr Gly Lys Ser

100 105 110

Leu Ile Pro Pro Val Pro Arg Ile Ser Val Lys Thr Ser Ala Ser Ala

115 120 125

Ser Leu Glu Ala Thr Ala Met Gly Thr Glu Lys Gly Ala Val Leu Met

130 135 140

Arg Gly Ser Arg His Leu Lys Lys Met Thr Glu Glu Tyr Pro Ala Leu

145 150 155 160

Pro Gln Gly Ala Glu Ala Ser Leu Pro Leu Thr Gly Ser Ala Ser Cys

165 170 175

Gly Val Pro Gly Ile Leu Arg Lys Met Trp Thr Arg His Lys Lys Lys

180 185 190

Ser Glu Tyr Val Gly Ala Thr Asn Ser Ala Phe Glu Ala Asp

195 200 205

Claims

1、抑制人体转录因子AP-1表达的蛋白，其特征在于该蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.6所示。

2、编码权利要求1所述蛋白的基因，其特征在于该基因的序列选自：

(a)如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；

(b)与(a)的多核苷酸互补的序列；

(c)在遗传密码简并范围内相应于(a)序列的至少一个序列。

3、一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求2所述的基因。

4、一种遗传工程宿主细胞，其特征在于，它是选自下组的一种宿主细胞：

(a)用权利要求2所述的基因转化或转导的宿主细胞；

(b)用权利要求3所述载体转化或转导的宿主细胞。

5、多肽的制备方法，包括如下步骤：

(I)将权利要求2所述基因序列可操作地连于表达调控序列，形成抗原表达载体；

(II)将步骤(I)中的表达载体转入宿主细胞，形成重组细胞；

(III)在适合表达多肽的条件下，培养步骤(II)中的重组细胞；

(IV)从培养物中分离出多肽。

6、一种抗体，其特征在于，所述抗体是能与权利要求1所述的蛋白特异性结合的抗体。

7、权利要求2所述的基因或权利要求1所述多肽在制备预防和/或治疗与人体细胞转录因子AP-1有关的疾病的药物中的用途，或在制备调节细胞增殖、凋亡、存活、分化、癌变药物或试剂中的用途。

8、根据权利要求7的用途，其中所述疾病选自炎症和肿瘤。

9、含有权利要求1所述多肽和药学上可接受的载体的药物组合物。