CN100375788C - 用于测定流体中是否存在抗生素的经过改进的检验系统 - Google Patents

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CN100375788C CNB2004800187807A CN200480018780A CN100375788C CN 100375788 C CN100375788 C CN 100375788C CN B2004800187807 A CNB2004800187807 A CN B2004800187807A CN 200480018780 A CN200480018780 A CN 200480018780A CN 100375788 C CN100375788 C CN 100375788C
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Abstract

本发明提供了一种检验系统、检验方法和检验试剂盒,它们基于一种检验培养基,所述培养基中包含溴百里酚蓝或结构相关的指示剂。

Description

用于测定流体中是否存在抗生素的经过改进的检验系统
技术领域
本发明涉及经过改进的、新颖的微生物检验系统,以及用所述检验系统,对流体(例如,奶、肉汁、血清和尿液)中是否存在抗细菌化合物进行测定的新方法。
发明背景
用于测定流体(例如,奶、肉汁、血清和尿液)中抗细菌化合物的微生物检验方法已为人们所知了很长一段时间,所述抗细菌化合物特别是抗生素(例如头孢菌素、青霉素、四环素及其衍生物)残余物,以及化疗药物残余物,例如磺胺类(sulfa’s)。此类检验的例子已被描述于CA2056581、DE3613794、EP0005891、EP0285792、EP0611001、GBA1467439和US4,946,777中。这类描述全都涉及即用型检验,其中使用了微生物,并通过加入到检验系统中的指示剂分子指示的变化来给出结果。其原理是:当抗细菌化合物以足以抑制微生物生长的浓度存在于流体中时,指示剂的颜色保持不变,而当没有抑制发生时,微生物的生长伴随有酸或代谢产物的形成,或其它现象的发生,这会诱导出指示剂信号。
上述检验系统包括:检验培养基以及pH指示剂和/或氧化还原指示剂,所述培养基例如是经过微生物接种的琼脂培养基,微生物优选为Bacillus、Escherichia coli或Streptococcus的菌株。将微生物和指示剂加入到琼脂溶液中,可选地,该溶液经过缓冲:可选地,将营养物质加入到溶液中,以及,可选地,将能改变某些抗微生物化合物灵敏度的物质加入到溶液中。最终,使得琼脂溶液固化,形成检验培养基,使微生物保持存活,而不会扩增,这是因为营养物质的缺乏和/或低温造成的。合适的检验应具有理想的关于待检验化合物的灵敏度。
目前市场上出现和/或文献中描述的检验系统存在的问题在于,其对于某些抗生素来说灵敏度有限。该问题的后果之一就是对某些应用而言,例如.,当阈值要求改变了的时候,用现有技术无法获得足够应用的检验系统。因此,人们需要不存在上述问题的经过改进的检验方法。
发明内容
本发明的目的是提供用于测定流体中抗生素的经过改进的方法。我们已惊奇地发现,当应用本发明的指示剂时,可获得正面的效果。
通过在微生物检验系统中应用本发明的指示剂,可以获得对抗生素,例如β-内酰胺和氨基糖苷的灵敏度方面的优势。通过在用于测定流体中抗生素的方法中应用所述的指示剂,可以获得灵敏度的提高。所述提高可多达25%,甚至可多达100%,这取决于相应的抗生素。此外,已经发现,使用所述的指示剂可获得下述检测系统,其中,对阳性和阴性样品进行比较时,所述检测系统呈现出提高的视觉对比度。后一现象大大促进了对检验结果的视觉判断的准确性。
本发明提供了用于测定流体中是否存在抗生素的检验系统,其包含检验培养基,检验培养基包含微生物、提供固体状态的物质和适于检测青霉素G的指示剂,其特征在于,所述指示剂是具有如下通式的化合物:
其中,R1、R2、R3和R4各自独立地代表烷基、卤素或氢,X=C或S,如果X=C,n=1,如果X=S,n=0、1或2,R5和R6各自独立地代表:
Figure C20048001878000061
其中R7、R8和R9各自独立地代表烷基、带支链的烷基、氢或卤素,R10是烷基或带支链的烷基,或其盐。
此外,本发明提供了用于测定流体中是否存在抗生素的方法,所述方法包括如下步骤:
(a)将所述流体的样品与检验培养基接触,所述检验培养基包含微生物、至少一种用于提供固体状态的物质以及指示剂;
(b)将所述的微生物培养一段时间,使得假设在流体样品中不存在抗生素时使微生物生长:以及
(c)用指示剂检测微生物生长的生长情况或抑制情况,其特征在于,所述的指示剂是具有通式(I)的化合物。
此外,本发明还提供了适于对流体中抗生素进行检测的试剂盒,其包含部分装有检验培养基的容器,检验培养基包含微生物、胶凝剂和指示剂,其特征在于,所述指示剂是具有通式(I)的化合物。
最后,本发明提供了具有通式(I)的化合物作为用于抗生素的检验系统中指示剂的用途。
发明详述
下面给出的术语和缩写用于本申请文件中,其定义如下。
术语“CFU”是菌落形成单位(Colony Forming Units)的缩写,其表示:能产生微生物菌落的微生物、微生物芽孢/孢子(spore)、微生物的部分发育的芽孢或营养细胞的数目。
术语“流体”指有流动性或服从其容器形状的趋势的(例如液体)物质。
术语“胶凝剂(gelling agent)”指帮助混合物变为或成为凝胶形式的化合物。
术语“指示剂”指用于对检验培养基关于是否存在特定物质的状态,(例如酸、碱、氧化或还原试剂)进行测量(例如,通过颜色或荧光的变化)的物质。例如,术语“指示剂”可以指已知是pH指示剂的一种或多种化合物,也可以是已知是氧化还原指示剂的一种或多种化合物。此外,术语“指示剂”还指两种或多种不同类型的指示剂的混合物,例如pH指示剂和氧化还原指示剂的组合。通常,当使用两种或多种指示剂时,这些指示剂共同作用,以使指示剂的效果较之每种指示剂单独使用有所增加。
术语“营养物”指:本发明的方法中用到的微生物生长所需要的或能促进其生长的一种或多种营养物质或成分。
术语“上样设备”指可促使流体样品被加入到检验培养基中的设备。此类设备可以是容器,可选地,具有体积标识。此类容器可以是毛细管、注射器、移液管和自动移液系统。此类注射器或移液管可被设计为:仅有一种操作模式下,可从待分析流体中排出预定体积。
术语“灵敏度”指给定系统感知某种状态的灵敏程度。更具体地,在本发明的情况下,“灵敏度”指样品中抗生素可被检测到的浓度的程度。
术语“芽孢/孢子”指微生物产生的、通常为单细胞的、通常对环境具有抗性的、休眠的或生殖体,其能发育成新的个体微生物。
术语“检验培养基”指组合物,例如,溶液,固体,或者,优选地,以溶胶或凝胶形式存在的,例如包含胶凝剂。合适的胶凝剂的例子是琼脂、褐藻酸及其盐、角叉胶、明胶、羟丙基瓜尔胶(hydroxypropylguar)及其衍生物、角豆胶(Carob胶)、经加工的麒麟菜属海藻等。但是,本领域技术人员能理解,其它类型的固体检验培养基可以基于载体物质,例如陶瓷、棉花、玻璃、金属颗粒、纸张、任何形状或形式的聚合物、硅酸盐、海绵、羊毛等。通常,检验培养基含有一种或多种指示剂,但是,上述化合物还可在检验进行之时加入。检验培养基包含一种或多种类型的微生物作为检测剂。可选地,检验培养基还可以含有一种或多种缓冲液、营养物、稳定剂、以正面或负面方式改变对某种抗微生物化合物的灵敏度的物质、和/或增加粘度的试剂。当培养基中存在缓冲液时,可在对培养基成分进行混合期间将其加入,或者,培养基成分可溶于和/或悬浮于缓冲液中。可选地,对检验培养基进行灭菌,通常将pH调至需要的值。能改变对某种抗微生物化合物的灵敏度的物质的例子是抗叶酸制剂,例如欧美德普(ormethoprim)、四氧普林(tetroxoprim)和三甲氧苄二氨嘧啶(trimethoprim),其能提高微生物对磺胺类化合物或草酸盐或氢氟酸盐的灵敏度,提高对四环素的灵敏度。增加粘度的试剂的例子是抗坏血酸甲硅烷醇梳状聚合物(ascorbyl methylsilanol pectinate)、卡波姆(carbomer)、羧甲基纤维素、Cetearyl Alcohol、鲸腊醇(cetylalcohol)、鲸腊酯(cetyl ester)、椰油酰胺DEA、乳化腊、葡萄糖、羟乙基纤维素、羟丙甲基纤维素、月桂酰胺DEA、亚油酰胺DEA、硅酸铝镁、麦芽糊精、PEG-8二硬脂酸、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、PVP/十六烯共聚物、氯化钠、硫酸钠、大豆氨基丙基甜菜碱(soyamidopropylbetaine)、黄原胶等。或者,上文提到的检验培养基的可选成份可以由外源加入。检验培养基可被包含于任何类型的容器中:通常所用的容器是试管、微滴定板和培养皿。
术语“阈值”指这样的浓度值,高于该值时,给定的被分析物被认为是存在的,而低于该值时,所述被分析物就被认为是不存在的。通常,对于特定样品中特定被分析物而言,阈值是由当地、地区或区域间的权威机构给出的,但对于某些研究目的而言,也可对其进行预先设定。
在本发明的第一个方面,提供了一种检验系统,其中包含检验培养基。该检验培养基包含微生物、提供固体状态的物质和至少一种指示剂,指示剂中至少有一种具有上文给出的通式(I)。所述指示剂的优选的例子是溴甲酚绿(Bromocresol Green)、溴百里酚蓝(Bromothymol Blue)、氯甲酚绿(Chlorocresol Green)、间甲酚紫(m-Cresol Purple)、麝香草酚蓝(Thymol Blue)和二甲酚蓝(Xylenol Blue)。最优选地,指示剂是溴百里酚蓝。
优选地,提供固体状态的物质是胶凝剂和/或载体物质。检验培养基中胶凝剂的量可在2至100g·1-1之间,优选在5至50g·1-1之间,更优选在10至20g·1-1之间,最优选在12至15g·1-1之间。优选地,胶凝剂是琼脂。
在本发明的第一个方面的一种实施方式中,微生物是热稳定性的微生物,例如Bacillus的种(优选为Bacillus stearothermophilts)、Escherichiacoli种或Streptococcus的种(优选为Streptococcus thermophilus)。上述菌种可作为能产生菌落的单位,或菌落形成单位(CFU’s)被引入到检验中。所述CFU’s可以是芽孢/孢子、营养细胞或它们的混合物。所述CFU’s的浓度可表达为每ml检验培养基中菌落形成单位(CFU·m1-1)的形式,其通常在1x105至1x1012CFU·ml-1之间,优选在1x106至1x1010CFU·ml-1之间,更优选在2×106至1x109CFU·ml-1之间,最优选在5×106至lx108CFU·ml-1之间,或者进一步更优选在5×106至2×107CFU·ml-1之间。
在本发明的第二个方面,提供了一种测定流体中的抗生素的方法,所述方法包括如下步骤:在营养物质存在时,将所述流体的样品与根据本发明第一个方面的检验培养基接触。有利地,该方法提供了下述条件:通过将检验培养基保持于能阻止生长的条件下(例如相对低温和/或缺乏用于生长的必要营养物),使得在加入流体样品之前,没有微生物的生长。加入流体样品后,通过加入营养物(可选地,在接触所述流体样品前),和/或升高温度,和/或提供使微生物得以生长的pH值,从而在足够长的时间段内允许微生物生长的进行,假设没有抗生素存在的话,该时间段足以令微生物生长;并且,通过对指示剂是否存在变化进行观察,来检测微生物的生长情况。本发明的方法还包括:在加入检验培养基之前,对样品进行混合(例如,与其它样品混合,还可与盐、缓冲化合物、营养物、稳定剂、同位素标记的化合物、荧光标记的化合物等混合)、浓缩和/或稀释(例如,用稀释性液体,例如,水,奶,或来自奶的液体,血液或来自血液的液体、尿液和/或溶剂)。
在本发明第二个方面的一种实施方式中,抗生素是β-内酰胺抗生素,例如头孢菌素或青霉素衍生物。此类衍生物的例子是阿莫西林、氨苄青霉素(ampicillin)、头孢羟氨苄(cefadroxil)、头孢拉定(cefradine)、头孢噻呋(cefiiofur)、头孢氨苄(cephalexin)、青霉素G、青霉素V和替卡西林(ticarcillin),但是,当然,很多其它类似的β-内酰胺衍生物也是已知的,并可用于本发明的方法。在另一种实施方式中,抗生素是氨基糖苷.(aminoglycoside),例如新霉素(neomycin)。
有利地,已经确定,本发明的方法展示出对抗生素的选择性(selectivity),特别是对β-内酰胺抗生素和氨基糖苷的选择性。
在本发明的第二个方面的另一种实施方式中,微生物的生长在预定的时间内发生,优选地,在0.5至4小时的时间跨度内,更优选地,在1至3.5小时的时间跨度内,最优选地,在2.0至3.25小时的时间跨度内。优选地,微生物的生长在预定的温度下进行,优选地,在微生物的最佳生长温度下进行。例如,当使用热稳定微生物时,所述温度优选在40至70℃之间,更优选在50至65℃之间,最优选在60至64℃之间。可选地,所述反应在温度调节设备的协助下进行。或者,微生物生长所需要的时间等于不含任何能引起指示剂变化的被分析物的校正样品需要的时间。
在本发明的第二个方面的又一种实施方式中,营养物作为单独的来源加入,例如,作为药片、圆盘(disc)或纸质过滤器(paper filter)。此外,其它化合物,例如指示剂、微生物、稳定剂和/或抗叶酸制剂也可作为单独的来源加入,可选地,被包括进营养培养基。
在本发明的第二个方面的另一种实施方式中,提供了一种测定流体样品中是否存在抗生素的方法,其中,流体样品与检验培养基的比例超过2∶3(0.68∶1)(v/v)。优选地,所述比例为至少20∶27(0.74∶1)(v/v),更优选地,所述比例为至少25∶27(0.93∶1)(v/v),最优选地,所述比例为至少2∶1(v/v)。已经发现,对流体样品的量的上限而言,没有技术原因上的限制。实际操作中,该体积不应超过容纳检验培养基的容器的最大容量。例如,在具有0.2ml检验培养基的2ml容器中,应当加入不超过1.8ml的流体样品。实际操作中,用于开展本发明的方法的容器的体积很少超过50ml,因此将被加入的流体样品的量不应超过50ml,优选为10ml,更优选为5ml,进一步更优选为2ml,最优选为1ml。因此,通常,流体样品的体积与检验培养基体积比例的上限为250∶1(v/v),优选为50∶1(v/v),更优选为25∶1(v/v),进一步更优选为10∶1(v/v),最优选为5∶1(v/v)。优选地,流体样品的体积大于检验培养基的体积。
通过观察所用的一种或多种指示剂是否存在变化,来测得本发明方法的结果。例如,当上述变化是颜色变化时,可以通过视觉观察到所述的颜色变化。但是,在本发明的一种实施方式中,所述颜色变化可通过如下方法来测定:使用能产生数字图像数据的装置(arrangement),或能产生模拟图像数据并能将所述模拟图像数据转化为数字图像数据的装置,然后通过计算机处理器对所述数字图像数据进行解读。此类装置,可以例如是样品阅读设备,例如与个人计算机偶联的扫描仪,被描述于国际专利申请WO03/033728中,该申请文件通过引用的方式被包括进本文,并在下文中对其进行了简要概括。
该装置适用于,例如,对奶中的抗生素残余物进行检测。用该装置,可以对检验板中每种样品的底部进行检测。用三个变量来记录被反射的光的颜色和亮度,每个描述一种颜色分量,例如,所谓的L*a*b*模型,在L*a*b*模型中,色谱被分为二维矩阵。用两个变量“a”和“b”来记录颜色在矩阵中的位置。变量L表示强度(例如,从淡蓝到深蓝)。可以构建出包含a值、b值和L值的标准,来构建出如下复合函数:
Z=WL·L+wa·a+wb·b
其中WL、wa和wb分别是L值、a值和b值的权重因子。上述权重因子的值可通过“判别分析(discriminent analysis)”来计算,使得组的平均值展示出相对扩展(spreading)而言最大的距离(distance)。通过以预定的方式(这取决于残余物和样品的类型),对L*a*b*模型的两种或多种颜色分量进行组合,可能可以获得精确的检测。实际操作中,通过实验来预先确定作为阳性和阴性结果之间转化值的某个Z值。
在本发明的第三个方面,提供了开展本发明第二个方面的方法的试剂盒。此类试剂盒包含一种或多种容器,容器中装有本发明第一个方面所述的检验培养基;以及,可选地,包含上样设备。容器可以是任何形状和尺寸的试管,其可来自任何可获得的材料,只要能够观察到指示剂的变化即可。此外,容器还可以是孔(well),例如,包括于微滴定板中的。
所述上样设备是协助将流体加入到所述检验培养基中的设备。优选地,此类设备可以是容器,可选地,具有体积标识。更优选地,此类容器是注射器、移液管和自动移液系统。此类注射器或移液管可被设计为:仅有一种操作模式下,可从待分析流体中排出预定体积。可选地,可以使用本领域内已知的、用单种操作即可操纵多于一支的注射器或移液管的系统。本发明的第二个方面的目的是提供一种试剂盒,其使得:可以很简单地加入根据本发明第一个方面的将被加入的流体的量。可选地,所述试剂盒包含:用于在培养期间对装有检验培养基的所述容器进行密封的设备,和/或用于使用的说明书,和/或用于设定培养所需要的时间的设备。
在本发明的第三个方面的一种实施方式中,所述试剂盒包含营养物。优选地,所述营养物被包含于介质内,例如,药片、圆盘或纸质过滤器。提供被包含于介质中的营养物的好处在于,使用者可以很容易地将它们加入到检验培养基中,并且加入量可以预先确定,以避免在加入所需剂量方面的错误。此外,其它化合物,例如(多种)指示剂、稳定剂和/或抗叶酸制剂也可作为单独的来源加入,可选地,被包括于营养培养基中。
在本发明的第三个方面的另一种实施方式中,所述试剂盒包含温度调节设备,在其协助下,检验样品可被保持于预先设定的温度下,例如,微生物能展示出充分生长的温度下。优选地,所述温度调节设备被设计为:其能容纳装有检验培养基的所述容器。可选地,温度调节设备与设定需要用于培养的时间的装置偶联,使得在预先设定的阶段结束之后,加热和/或冷却也可停止。
在本发明的第三个方面的又一种实施方式中,所述试剂盒包含数据载体,其上载有计算机程序,该程序适于指导计算机对从样品阅读设备获得的数字数据进行分析。所述数据载体可以是适于存储数字信息的任何载体,例如,CD-ROM、磁盘、DVD、存储卡、磁带等。有利地,所述载有计算机程序的数据载体提供了获得适于用于本发明方法的最新可获得的计算机程序的简单途径。
在本发明的第四个方面,提供了具有通式(I)的化合物用于在微生物抑制检验中提高对抗生素的灵敏度的用途。
实施例
实施例1  在对青霉素G的测定中,溴百里酚蓝和溴甲酚紫的比较
通过用指示剂溴百里酚蓝(160mg·l-1)来代替溴甲酚紫,对可根据EP0005891所述的方法制备出的、可从商业途径获得的DelvotestMCS进行改造。通过在不同检验系统中对含有不同浓度青霉素G的样品进行研究,来测定对青霉素G的灵敏度。结果被总结于下表中(灵敏度的值以ppb表示)。
    溴甲酚紫     溴百里酚蓝
    青霉素G<sup>1</sup>     4     2
    青霉素G<sup>2</sup>     3     2
1.对0、2、4和6ppb的青霉素G浓度进行研究。
2.对0、1、2、3和4ppb的青霉素G浓度进行研究。
实施例2在对多种抗生素的测定中,溴百里酚蓝和溴甲酚紫的比较
通过用指示剂溴百里酚蓝(160mg-1-1)来代替溴甲酚紫,对可根据EP0005891所述的方法制备出的、可从商业途径获得的DelvotestMCS进行改造。通过用平板检验或试管检验系统,对两组(每组六个)实验进行研究,来测定对不同抗生素的灵敏度。在不含抗生素的对照样品改变颜色的时刻,通过读取实验数据测定灵敏度。从被总结于下表中的结果(灵敏度的值以ppb表示)可以看出,对所有被研究的抗生素而言,溴百里酚蓝都比溴甲酚紫(BP)展示出更好的灵敏度,只是除了磺胺嘧啶,这两种指示剂对磺胺嘧啶的灵敏度相同
    Bp<sup>1</sup>     溴百里酚蓝
    检验类型     平板检验     试管检验
    实验#     0     1     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12
青霉素G 3 1 2 1 1 1-2 1 2 2 2 2 2 2
    氨苄青霉素     8     2     2     2     2     2     2     2     2     2     2     2     2
    阿莫西林     8     4     2     2     2     2-4     2     4     4     4     4     4     4
    头孢匹林     8     2     2     4     6     2     4-6     4     4     4     4     4     4
    氯唑西林     40     10     10     10     10     10     10     20     20     20     20     20     20
 新霉素  600  100  100  100  100  100  100  200  200  200  200  200  200
 磺胺嘧啶  50  50  50  50  50  50  50  50  50  50  50  50  50
1.BP:溴甲酚紫
实施例3溴百里酚蓝和溴甲酚紫的浓度效果的比较
制备两套检验系统。其区别仅在于,第一套系统中采用可从商业途径获得的DelvotestMCS,其中溴甲酚紫的浓度为160mg·1-1,而第二套系统中则用溴百里酚蓝(160mg·1-1)代替了第一套系统中的溴甲酚紫。在不含抗生素的对照样品改变颜色的时刻,通过读取实验数据测定对青霉素G的灵敏度。从展示于下表(灵敏度的值以ppb表示)的结果可以看出,指示剂浓度相同时,溴百里酚蓝的灵敏度优于溴甲酚紫。
    溴甲酚紫(160mg·1<sup>-1</sup>)     溴百里酚蓝(160mg-1<sup>-1</sup>)
    青霉素G     3     2
实施例4在工业生产规模的微生物抑制检验中溴百里酚蓝和溴甲酚紫的 比较
制备两套生产规模的检验系统。第一套系统中采用可从商业途径获得的DelvotestMCS,而第二套系统中则用溴百里酚蓝(160mg·1-1)代替了第一套系统中的溴甲酚紫。在不含抗生素的对照样品改变颜色的时刻,通过读取实验数据测定对不同抗生素的灵敏度。结果展示于下表中(灵敏度的值以ppb表示)。
    溴甲酚紫     溴百里酚蓝
    青霉素G<sup>1</sup>     3     2
    青霉素G<sup>2</sup>     3     2
    氨苄青霉素<sup>2</sup>     6     2
    阿莫西林<sup>2</sup>     8     4
    头孢匹林<sup>2</sup>     8     4
    氯唑西林<sup>2</sup>     40     20
    新霉素<sup>2</sup>     400     200
1.批次#1,生产后立即使用。
2.批次#1,生产后过三周再使用。

Claims (13)

1.测定流体中是否存在抗生素的方法,所述方法包括如下步骤:
(a)将所述流体的样品与检验培养基接触,所述检验培养基包含微生物、至少一种用于提供固体状态的物质以及指示剂;
(b)将所述的微生物培养一段时间,使得假设在流体样品中不存在抗生素时使微生物生长;以及
(c)用指示剂检测微生物生长的生长情况或抑制情况,其特征在于,所述指示剂是溴百里酚蓝。
2.如权利要求1所述的方法,其中,待测定的抗生素选自β-内酰胺抗生素和氨基糖苷组成的组。
3.如权利要求1或2所述的方法,其中,将对其中抗生素进行测定的流体是可从动物或人体中获得的流体。
4.如权利要求1至3中任意一项所述的方法,其中,所述流体的体积与检验培养基的体积的比例超过0.68∶1。
5.如权利要求4所述的方法,其中液体样品的体积与检验培养基的体积的比例超过20∶27(0.74∶1)(v/v)、25∶27(0.93∶1)(v/v)或2∶1(v/v)。
6.如权利要求1至5中任意一项所述的方法,其中,液体样品的体积大于检验培养基的体积。
7.用于测定流体中是否存在抗生素的检验系统,其包括一种检验培养基,所述检验培养基包含微生物、至少一种用于提供固体状态的物质以及指示剂,其特征在于,所述指示剂是溴百里酚蓝。
8.适于测定流体中抗生素的试剂盒,其包含部分装有检验培养基的容器,所述检验培养基包含微生物、胶凝剂和指示剂,其特征在于,所述指示剂是溴百里酚蓝。
9.如权利要求8所述的试剂盒,其还包含适于允许微生物生长的营养物。
10.如权利要求8至9中任意一项所述的试剂盒,还包含温度调节设备,在其协助下检验样品可被保持于预先设定的温度。
11.如权利要求8至10中任意一项所述的试剂盒,还包含载有计算机程序的数据载体,所述程序适于指导计算机对从样品阅读设备获得的数字数据进行分析。
12.溴百里酚蓝用于在微生物抑制检验中提高对抗生素的灵敏度的用途。
13.如权利要求12所述的用途,其中,所述抗生素选自β-内酰胺抗生素和氨基糖苷组成的组。
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