CN100358483C - 携带质粒dna纳米粒的植入装置及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种携带质粒DNA纳米粒的植入装置及制备方法，携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，包括基架，在基架上设置有携带质粒DNA的纳米粒；携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液，喷涂或涂布于基架表面，干燥，本发明的一种携带质粒DNA纳米粒的植入装置，可以利用纳米粒的高渗透能力以及阳离子表面与细胞表面负电荷的结合有效地将一种安全的非病毒基因载体完整地运送至哺乳动物靶部位并在局部高效转染及表达。
Description
技术领域
本发明涉及一种基因递送体系，属于医疗材料领域。
背景技术
临床基因治疗存在的共同问题是病毒载体效率高，但安全性差；非病毒载体安全性高，但体内基因转染的效率低，转入基因量不足以达到临床治疗效果。目前基因治疗方面存在的主要问题还表现在不能将安全性好地质粒DNA有效地足量地运送至体内细胞并提高其转染效率以得到基因的高效表达。心血管内基因治疗的特殊性还在于很难把基因专一性递送到血管组织中的病灶处而不进入血液循环系统或进入血液循环系统也不产生毒性或仅有极小毒性。例如，采用球囊导管向血管内灌注转基因病毒的悬浮液，研究表明，灌注到血管中的病毒颗粒大部分随血液进入全身循环系统，最后被阻留在肝和肺中，很难在冠脉病灶局部血管中达到有效的基因浓度，此外病毒在体内器官中的广泛扩散，潜伏着致命的全身毒副作用，无论安全性还是有效性都不符合临床应用要求。虽然目前有许多载体系统在研究和试用，但是没有一个载体可以达到导向、高效地把基因导入体内的靶细胞。不少临床治疗方案失败原因是使用不合要求的载体。注射裸DNA的效果不佳，使用合成高分子或生物大分子包覆DNA的方法也存在各种缺陷，如与高分子接触的细胞发生过度增殖。将质粒DNA包埋在明胶海棉中植入骨中可成功地转入核酸，但大部分的DNA在短时间内(＜1小时)逃逸。其它的DNA运载体系包括包载核酸的的微球，都存在递送效率的问题。因此缺乏高效、局部的基因导入系统是基因治疗面临的主要技术难关。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种对人体安全无毒，同时又能诱导基因高效转染和可控表达的携带质粒DNA纳米粒的植入装置。
本发明的第二个目的是提供一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，包括基架，在所述基架上喷涂或涂布有携带了质粒DNA的纳米粒。
所述基架为血管支架或人工心瓣膜或人工植入假体。
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将壳聚糖或十二烷基化修饰的壳聚糖或精氨酸修饰的壳聚糖或多聚赖氨酸或聚乙烯亚胺或树枝状高聚物(dendrimers)，用醋酸缓冲液配制成质量百分浓度为0.01-0.5％的阳离子材料溶液；另将真核表达质粒DNA载体，用0.1mM-0.5mM的NaCl或Na2SO4水溶液配置成0.05-0.8μg/μl的质粒DNA溶液；
②各取等量的由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于40-70℃水浴5-30分钟后，将两种溶液快速混合，总体积不超过500μl，置于振荡混匀器振荡20-80秒，制得含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将所述含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液5-100μl，喷涂或涂布于基架表面，30-60℃，放置10-100分钟，干燥，所述喷涂或涂布次数为5-100之一次，制成一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置。
所述真核表达质粒DNA载体为报告基因和/或治疗基因，如pEGFP-C1(clontech)，pGL3(promega)，pCMV·SPORT-β gal(invitrogen)，phVEGF-2(pVGI.I，CorautusGenetics)，pcDNA3.1(Funakoshi)，pMSCV(clontech)，pIRES(clontech)
所述壳聚糖的分子量为5-390kD，80％-85％脱乙酰度。
所述十二烷基化修饰的壳聚糖分子量为50-200kD，80％-85％脱乙酰度。
所述精氨酸修饰的壳聚糖分子量为100-400kD，80％-85％脱乙酰度。
所述多聚赖氨酸分子量为5-70kD。
所述聚乙烯亚胺分子量为5-40kD。
所述树枝状高聚物为3-10代。
所述基架为血管支架或人工心瓣膜或人工植入假体。
本发明的一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，可以特异性有效地将质粒DNA完整地运送至哺乳动物靶部位并保留在该部位，并通过纳米粒表面正电荷促进质粒DNA对靶细胞的转染及靶细胞的基因表达，对人体安全无毒，同时又能诱导基因高效转染和可控表达。
附图说明
图1为携带质粒DNA pEGFP-C1的十二烷基化修饰的壳聚糖纳米粒的冠脉血管支架在血管平滑肌细胞中转染并表达的结果。
图2为携带质粒DNA pEGFP-C1的十二烷基化修饰的壳聚糖纳米粒的冠脉血管支架植入兔颈动脉血管后7天血管壁转染并表达的结果：倒置荧光显微镜提示新生内膜有GFP表达。
图3为携带质粒DNA pEGFP-C1的十二烷基化修饰的壳聚糖纳米粒的冠脉血管支架植入兔颈动脉血管后7天血管壁转染并表达的结果：抗GFP免疫组织化学证明新生内膜GFP表达。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步地说明：
实施例1
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将十二烷基化修饰的壳聚糖(50kD，85％脱乙酰度)，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.02％的阳离子材料溶液100μl；另将真核表达质粒DNA载体pEGFP-C1，用0.15mM的NaCl水溶液配置成0.1μg/μl的质粒DNA溶液100μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于50℃水浴20分钟后，将两种溶液快速混合，总体积200μl，置于振荡混匀器振荡45秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液10μl，喷涂于血管支架表面45℃，放置15分钟，干燥，喷涂10次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例2
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将精氨酸修饰的壳聚糖(100kD，85％脱乙酰度)，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.2％的阳离子材料溶液250μl；另将真核表达质粒DNA载体phVEGF-2，用0.15mM的Na2SO4水溶液配置成0.6μg/μl的质粒DNA溶液250μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于40℃水浴30分钟后，将两种溶液快速混合，总体积500μl，置于振荡混匀器振荡30秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于聚氨酯人工心瓣膜表面30℃，放置15分钟，干燥，喷涂20次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例3
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将多聚赖氨酸(20kD)，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.01％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体pGL3，用0.15mM的NaCl水溶液配置成0.6μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于70℃水浴5分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡30秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于冠状动脉血管支架表面60℃，放置10分钟，干燥，喷涂50次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例4
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将聚乙烯亚胺(20kD)，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.01％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体pGL3，用0.1mM的NaCl水溶液配置成0.6μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于70℃水浴5分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡30秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液25μl，喷涂于人工植入假体表面60℃，放置10分钟，干燥，喷涂50次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例5
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将聚乙烯亚胺(40kD)，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.02％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体pCMV·SPORT-β gal，用0.5mM的NaCl水溶液配置成0.6μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于40℃水浴5分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡30秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于冠状动脉血管支架表面60℃，放置10分钟，干燥，喷涂50次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例6
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将树枝状高聚物10代，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.1％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体phVEGF-2，用0.1mM的Na2SO4水溶液配置成0.6μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于50℃水浴5分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡30秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于人工植入假体表面60℃，放置10分钟，干燥，喷涂50次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例7
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将树枝状高聚物3代，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.2％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体pcDNA3.1，用0.5mM的Na2SO4水溶液配置成0.6μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于60℃水浴20分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡30秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于冠状动脉血管支架表面60℃，放置10分钟，干燥，喷涂50次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例8
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将聚乙烯亚胺(5kD)，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.3％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体pMSCV，用0.15mM的NaCl水溶液配置成0.05μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于55℃水浴10分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡20秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于冠状动脉血管支架表面60℃，放置40分钟，干燥，喷涂50次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例9
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将树枝状高聚物6代，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.4％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体pIRES，用0.15mM的NaCl水溶液配置成0.8μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于65℃水浴5分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡80秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于人工植入假体表面60℃，放置20分钟，干燥，喷涂50次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例10
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将壳聚糖(5kD，80％脱乙酰度)，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.5％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体pEGFP-C1，用0.15mM的NaCl水溶液配置成0.6μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于40℃水浴30分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡30秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于聚氨酯人工心瓣膜表面30℃，放置100分钟，干燥，喷涂10次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例11
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将壳聚糖(390kD，85％脱乙酰度)，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.01％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体phVEGF-2，用0.15mM的NaCl水溶液配置成0.1μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于70℃水浴5分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡40秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于聚氨酯人工心瓣膜表面45℃，放置10分钟，干燥，喷涂70次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例12
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将十二烷基化修饰的壳聚糖(200kD，80％脱乙酰度)，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.01％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体pGL3，用0.15mM的NaCl水溶液配置成0.2μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于70℃水浴5分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡50秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于冠状动脉血管支架表面60℃，放置10分钟，干燥，喷涂30次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例13
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将精氨酸修饰的壳聚糖(400kD，80％脱乙酰度)，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.01％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体pGL3，用0.15mM的NaCl水溶液配置成0.6μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于70℃水浴5分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡60秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于冠状动脉血管支架表面60℃，放置10分钟，干燥，喷涂50次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例14
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将多聚赖氨酸(5kD)，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.01％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体pCMV·SPORT-β gal，用0.15mM的NaCl水溶液配置成0.6μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于70℃水浴5分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡30秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于冠状动脉血管支架表面60℃，放置10分钟，干燥，喷涂5次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例15
一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将多聚赖氨酸(40kD)，用醋酸缓冲液(pH为5.0-5.8)配制成质量百分浓度为0.3％的阳离子材料溶液200μl；另将真核表达质粒DNA载体pIRES，用0.15mM的NaCl水溶液配置成0.6μg/μl的质粒DNA溶液200μl；
②各取等量由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于70℃水浴5分钟后，将两种溶液快速混合，总体积400μl，置于振荡混匀器振荡30秒，制得清澈的含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液15μl，喷涂于冠状动脉血管支架表面60℃，放置10分钟，干燥，喷涂100次，制得一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置，室温或4℃保存备用。
实施例16
由实施例1制备的携带质粒DNA pEGFP-C1的十二烷基化修饰的壳聚糖纳米粒的血管支架的细胞转染试验
为了使支架三维结构均被覆细胞，首先将本发明实施例1制备的血管支架在1×106A10细胞(大鼠血管平滑肌细胞)悬液中37℃孵育1小时，然后置于35mm细胞培养皿，加入1×105A10细胞悬液，于72小时后在倒置荧光显微镜下观察结果。见图1。
图1为携带质粒DNA pEGFP-C1的十二烷基化修饰的壳聚糖纳米粒的血管支架细胞转染结果。在图中可见，在支架上附着大量表达绿色荧光蛋白的细胞，而支架外的细胞未见绿色荧光蛋白表达。
实施例17
由实施例1制备的携带质粒DNA pEGFP-C1的十二烷基化修饰的壳聚糖纳米粒的血管支架的兔颈动脉支架植入血管壁转染实验
手术解剖兔颈动脉，将本发明实施例1制备的血管支架植入后， 缝合切口。植入7天后，处死动物，取出血管标本，纵行剖开，取出支架，将血管壁立即冰冻，切片，倒置荧光显微镜观察GFP荧光表达；用抗GFP第一抗体进行免疫组织化学染色观察并证明GFP阳性表达结果。见图2、图3。
图2为携带质粒DNA pEGFP-C1的十二烷基化修饰的壳聚糖纳米粒的血管支架植入兔颈动脉血管7天后血管壁转染并表达的结果：倒置荧光显微镜提示新生内膜有GFP表达。图3为携带质粒DNA pEGFP-C1的十二烷基化修饰的壳聚糖纳米粒的血管支架植入兔颈动脉血管7天后血管壁转染并表达的结果：抗GFP免疫组织化学染色证明GFP阳性表达结果。
Claims (8)
1.一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，其特征是包括如下步骤：
(1)制备含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液：
①将壳聚糖或十二烷基化修饰的壳聚糖或精氨酸修饰的壳聚糖或多聚赖氨酸或聚乙烯亚胺或树枝状高聚物，用醋酸缓冲液配制成质量百分浓度为0.01-0.5％的阳离子材料溶液；另将真核表达质粒DNA载体，用0.1mM-0.5mM的NaCl或Na2SO4水溶液配置成0.05-0.8μg/μl的质粒DNA溶液；
②各取等量的由步骤①制得的所述阳离子材料溶液及质粒DNA溶液置于40-70℃水浴5-30分钟后，将两种溶液快速混合，置于振荡混匀器振荡20-80秒，制得含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液；
③4℃保存；
(2)将所述含有质粒DNA的表面带有正电荷的纳米粒混合液5-100μl，喷涂或涂布于基架表面，30-60℃，放置10-100分钟，干燥，所述喷涂或涂布次数为5-100之一次，制成一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置。
2.根据权利要求1所述的一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，其特征是所述真核表达质粒DNA载体为pEGFP-Cl或pGL3或pCMV·SPORT-βgal或phVEGF-2或pcDNA3.1或pMSCV或pIRES。
3.根据权利要求1所述的一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，其特征是所述壳聚糖的分子量为5-390kD，80％-85％脱乙酰度。
4.根据权利要求1所述的一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，其特征是所述十二烷基化修饰的壳聚糖分子量为50-200kD，80％-85％脱乙酰度。
5.根据权利要求1所述的一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，其特征是所述精氨酸修饰的壳聚糖分子量为100-400kD，80％-85％脱乙酰度。
6.根据权利要求1所述的一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，其特征是所述多聚赖氨酸分子量为5-70kD。
7.根据权利要求1所述的一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，其特征是所述聚乙烯亚胺分子量为5-40kD。
8.根据权利要求1所述的一种携带质粒DNA的纳米粒的植入装置的制备方法，其特征是所述树枝状高聚物为3-10代。
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