CH711412A1

CH711412A1 - Medical Tubes.

Info

Publication number: CH711412A1
Application number: CH01157/15A
Authority: CH
Inventors: Roth Felix
Original assignee: Roth Felix
Priority date: 2015-08-12
Filing date: 2015-08-12
Publication date: 2017-02-15
Also published as: WO2017025506A1

Abstract

Bei einem erfindungsgemässen Medizinalröhrchen (1) zur Aufbereitung einer biologischen Probe mittels Dichtegradientenzentrifugation oder passiver Sedimentation umfassend eine zylindrische, einen Innenraum (6) umschliessende Röhrchenwand (2), einen unteren, den Innenraum abschliessenden Röhrchenboden (3) und eine obere Einlassöffnung, welche mit einem lösbaren Deckel (5), vorzugsweise einem Schraubdeckel, dichtend abgeschlossen ist, ist es vorgesehen, dass das Medizinalröhrchen (1) zur Entnahme einer Zielfraktion der Probe in axialer Richtung des Medizinalröhrchens (1) entlang der Innenseite der Röhrchenwand (2) mit einem vom Innenraum (6) abgegrenzten Probeentnahmekanal (7) ausgebildet ist; wobei der Probeentnahmekanal (7) an einem unteren Ende im Bereich des Röhrchenbodens (3) eine Probeentnahmekanalmündung (8) aufweist, die in den Innenraum (6) des Medizinalröhrchens (1) mündet; und wobei der Probeentnahmekanal (7) an einem oberen, in Richtung der Einlassöffnung gelegenen Ende in eine Probeentnahmeöffnung (9) in der Röhrchenwand (2) mündet. Die Erfindung betrifft ebenfalls die Anwendung eines erfindungsgemässen Medizinalröhrchens zur Selektion und Reinigung von Spermien mittels Dichtegradientenzentrifugation und/oder passiver Sedimentation.In a medical tube according to the invention (1) for processing a biological sample by density gradient centrifugation or passive sedimentation comprising a cylindrical, an interior (6) enclosing tube wall (2), a lower, the interior final tube bottom (3) and an upper inlet opening, which with a detachable lid (5), preferably a screw cap, is sealingly closed, it is provided that the medical tube (1) for taking a target fraction of the sample in the axial direction of the medical tube (1) along the inside of the tube wall (2) with a from the interior (6) a defined sampling channel (7) is formed; wherein the sampling channel (7) at a lower end in the region of the tube bottom (3) has a sampling channel mouth (8), which opens into the interior (6) of the medical tube (1); and wherein the sampling channel (7) opens at an upper end in the direction of the inlet opening into a sampling opening (9) in the tube wall (2). The invention likewise relates to the use of a medical tube according to the invention for the selection and purification of sperm by means of density gradient centrifugation and / or passive sedimentation.

Description

Technisches GebietTechnical area

[0001] Die Erfindung betrifft ein Medizinalröhrchen zur Aufbereitung einer biologischen Probe mittels Dichtegradientenzentrifugation oder passiver Sedimentation. The invention relates to a medical tube for the preparation of a biological sample by density gradient centrifugation or passive sedimentation.

Technischer HintergrundTechnical background

[0002] Zentrifugieren ist eine gängige Methode um eine Probe zu fraktionieren. Häufig möchte man dabei eine Zielfraktion mit höherer Dichte vom umgebenden Medium abtrennen und diese Zielfraktion gleichzeitig reinigen und anreichern. Die sogenannte Dichtegradientenzentrifugation wird beispielsweise verwendet, um bewegliche Spermien von unbeweglichen zu trennen. Dabei können zudem unerwünschte Verunreinigungen wie Bakterien und Viren aus der Zielfraktion entfernt werden. Centrifugation is a common method to fractionate a sample. Often one would like to separate a target fraction with higher density from the surrounding medium and simultaneously purify and enrich this target fraction. The so-called density gradient centrifugation is used, for example, to separate mobile sperm from immobile. In addition, unwanted impurities such as bacteria and viruses can be removed from the target fraction.

[0003] Um nach der Zentrifugation das Pellet (Niederschlag mit der Zielfraktion) vom Überstand zu trennen wird meist eine von zwei gängigen Methoden angewandt. Bei der ersten Methode wird der Überstand abgesaugt bis nur noch das Pellet mit der Zielfraktion übrigbleibt, welches anschliessend weiterverarbeitet wird. Bei der zweiten Methode wird eine Nadel durch den Überstand gestossen, um direkt an das Pellet zu gelangen und dieses abzusaugen. Bei beiden Methoden besteht jedoch die Gefahr, dass Verunreinigungen aus dem Überstand wieder in die Zielfraktion eingebracht werden. Dies ist beispielsweise beim Reinigen von Sperma von HIV-positiven Männern besonders problematisch, da so die Zielfraktion wieder mit HIV kontaminiert werden kann. In order to separate the pellet (precipitate with the target fraction) from the supernatant after centrifugation is usually one of two common methods used. In the first method, the supernatant is aspirated until only the pellet with the target fraction remains, which is subsequently processed. In the second method, a needle is pushed through the supernatant to get directly to the pellet and to suck it. In both methods, however, there is a risk that impurities from the supernatant be reintroduced into the target fraction. For example, this is particularly problematic when purifying semen from HIV-positive men, as it can contaminate the target fraction with HIV again.

[0004] Um eine Rekontamination zu reduzieren schlägt DE 60 034 720 ein Medizinalröhrchen zum Reinigen und Zentrifugieren von Sperma vor, welches am Boden einen stark verjüngten Abschnitt aufweist, in welchem nach der Zentrifugation das Pellet mit der Zielfraktion, resp. die gereinigten Spermien, enthalten ist. Der verjüngte Abschnitt wird dann an einer Sollbruchstelle vom übrigen Medizinalröhrchen abgetrennt, um die Zielfraktion anschliessend weiterzuverarbeiten. Beim Abtrennen des verjüngten Abschnitts besteht jedoch die Gefahr, dass der gesamte Überstand ausläuft. Zudem besteht beim Abtrennen der Zielfraktion eine erhöhte Gefahr des Einbringens von Verunreinigungen aus der unmittelbaren Umgebung. To reduce recontamination, DE 60 034 720 proposes a medical tube for cleaning and centrifuging of semen, which has a strongly tapered section at the bottom, in which, after centrifugation, the pellet with the target fraction, resp. the purified sperm, is included. The tapered portion is then separated at a predetermined breaking point of the remaining medical tube to subsequently process the target fraction. When separating the tapered portion, however, there is a risk that the entire supernatant expires. In addition, there is an increased risk of introducing impurities from the immediate environment when separating the target fraction.

[0005] Um eine Rekontamination zu reduzieren, beschreibt US 2005 064 579 ein Medizinalröhrchen mit einem Einsatz, welcher in ein herkömmliches Medizinalröhrchen eingesetzt werden kann. Der Einsatz ist mittig mit einem Absaugröhrchen versehen, welches bis in den Bereich des Bodens des Medizinalröhrchens reicht, um nach der Zentrifugation die Zielfraktion resp. das Pellet abzusaugen. Nachteilig an dem Einsatz ist, dass beim Auftragen der Probe zwischen Absaugröhrchen und der Wandung des Medizinalröhrchens aufgrund der engen Platzverhältnisse die obere Öffnung des Absaugröhrchens kontaminiert werden kann, was bei Entnehmen der Zielfraktion wiederum zu einer Rekontamination führen kann. To reduce recontamination US 2005 064 579 describes a medical tube with an insert which can be inserted into a conventional medical tube. The insert is centrally provided with a suction tube, which extends into the region of the bottom of the medical tube, after centrifugation, the target fraction resp. to suck off the pellet. A disadvantage of the insert is that when applying the sample between the suction tube and the wall of the medical tube due to the tight space conditions, the upper opening of the suction tube can be contaminated, which in turn can lead to recontamination when removing the target fraction.

[0006] Aus EP 1 773 496 ist ein abgedichtetes und steriles Medizinalröhrchen zum Reinigen einer biologischen Probe bekannt, dessen Deckel mit einer Probeentnahmeöffnung und einer Einlassöffnung versehen ist. Die Probeentnahmeöffnung ist mit einer Nadel versehen, welche zur Probeentnahme bis in den Bereich des Bodens des Medizinalröhrchens reicht. Die Einlassöffnung ist mit einem durchstechbaren Septum versehen. Um bei geschlossenem Deckel das Einfüllen und Entnehmen der Probe zu ermöglichen, ist der Deckel mit einer einen Filter aufweisenden Druckausgleichsöffnung versehen. Der Deckel ist relativ komplex im Aufbau und benötigt viele Montageschritte, was die Herstellungskosten erheblich erhöht. Ein weiterer Nachteil besteht darin, dass bei einer Dichtegradientenzentrifugation die Medien zum Aufbau des Dichtegradienten durch die Einlassöffnung bei aufgesetztem Deckel eingefügt werden müssen, da ansonsten beim Verschliessen des Deckels der Dichtegradient aufgebwirbelt werden kann. Ähnliche Medizinalröhrchen sind aus WO 2005 039 773, US 7 717 274 und WO 2002 098 566 bekannt. From EP 1 773 496 a sealed and sterile medical tube for cleaning a biological sample is known, the lid of which is provided with a sampling opening and an inlet opening. The sampling opening is provided with a needle, which extends for sampling into the area of the bottom of the medical tube. The inlet opening is provided with a pierceable septum. In order to allow the filling and removal of the sample with the lid closed, the lid is provided with a filter having pressure equalization opening. The lid is relatively complex in construction and requires many assembly steps, which significantly increases the manufacturing cost. A further disadvantage is that in the case of a density gradient centrifugation, the media for establishing the density gradient must be inserted through the inlet opening when the lid is attached, since otherwise the density gradient can be swirled when the lid is closed. Similar medical tubes are known from WO 2005 039 773, US 7 717 274 and WO 2002 098 566.

Darstellung der ErfindungPresentation of the invention

[0007] Eine Aufgabe ist die obigen Probleme zu vermeiden und insbesondere eine Rekontamination effizient zu verhindern. Dabei steht der Sicherheitsaspekt im Vordergrund. An object is to avoid the above problems and in particular to prevent recontamination efficiently. The safety aspect is in the foreground.

[0008] Diese Aufgabe wird durch ein Medizinalröhrchen mit den Merkmalen des Anspruchs 1 gelöst. Das Medizinalröhrchen zur Aufbereitung einer biologischen Probe mittels Dichtegradientenzentrifugation oder passiver Sedimentation umfasst eine zylindrische, einen Innenraum umschliessende Röhrchenwand, einen unteren, den Innenraum abschliessenden Röhrchenboden und eine obere Einlassöffnung, welche mit einem lösbaren Deckel, vorzugsweise einen Schraubdeckel, dichtend abgeschlossen ist. Zur Entnahme einer Zielfraktion der Probe, die nach dem Zentrifugieren am Boden des Medizinalröhrchens liegt, ist in axialer Richtung des Medizinalröhrchens entlang der Innenseite der Röhrchenwand ein vom Innenraum abgegrenzter Probeentnahmekanal ausgebildet. Der Probeentnahmekanal weist an einem unteren Ende im Bereich des Röhrchenbodens eine Probeentnahmekanalmündung auf, die in den Innenraum mündet. An einem oberen, in Richtung der Einlassöffnung gelegenen Ende mündet der Probeentnahmekanal in eine Probeentnahmeöffnung in der Röhrchenwand. This object is achieved by a medical tube having the features of claim 1. The medical tube for the preparation of a biological sample by density gradient centrifugation or passive sedimentation comprises a cylindrical, an interior enclosing tube wall, a lower, the interior final tube bottom and an upper inlet opening, which is sealed with a detachable lid, preferably a screw cap. To remove a target fraction of the sample, which lies after centrifuging at the bottom of the medical tube, a sampling channel delimited from the interior is formed in the axial direction of the medical tube along the inside of the tube wall. The sampling channel has at a lower end in the region of the tube bottom to a sampling channel mouth, which opens into the interior. At an upper end located in the direction of the inlet opening, the sampling channel opens into a sampling opening in the tube wall.

[0009] Ein solches Medizinalröhrchen oder Zentrifugationsröhrchen kann also einen herkömmlichen Schraubdeckel ohne irgendwelche Öffnungen aufweisen. Die Medien für die verschiedenen Lagen des Dichtegradienten und anschliessend die Probe, z.B. eine Spermienprobe, können bei entferntem Deckel durch die Einlassöffnung des Medizinalröhrchen eingefüllt werden. Anschliessend wird das Medizinalröhrchen mit dem Deckel verschlossen und zentrifugiert. Nach erfolgter Zentrifugation kann das Pellet mit der gereinigten Zielfraktion vom Röhrchenboden des Medizinalröhrchens abgesaugt werden, indem ein dünner Entnahmeschlauch durch den Probeentnahmekanal direkt zum Pellet geführt wird. Eine Rekontamination der Zielfraktion mit in den oberen Lagen des Dichtegradienten verbleibenden Verunreinigungen wird verhindert, da der Entnahmeschlauch aufgrund des vom Innenraum abgeschlossenen Probeentnahmekanals mit diesen nicht in Berührung kommt. Zudem wird die Gefahr einer allfälligen Kontamination der Umgebung (z.B. bei HIV-kontaminierten Proben) verringert, da der Röhrchendeckel für den Entnahmevorgang nicht mehr geöffnet werden muss. Such a medical tube or Zentrifugationsröhrchen can thus have a conventional screw without any openings. The media for the various layers of the density gradient and then the sample, e.g. a sperm sample, can be filled with the lid removed through the inlet opening of the medical tube. Subsequently, the medical tube is closed with the lid and centrifuged. After centrifugation, the pellet can be aspirated with the purified target fraction from the tube bottom of the medical tube by a thin sampling tube is passed through the sampling channel directly to the pellet. Reconcentration of the target fraction with remaining in the upper layers of the density gradient impurities is prevented, since the sampling tube does not come into contact with them due to the closed interior of the sampling channel. In addition, the risk of a possible contamination of the environment (for example, in HIV-contaminated samples) is reduced because the tube lid for the removal process no longer needs to be opened.

[0010] Das Medizinalröhrchen mit angeformtem Probeentnahmekanal kann beispielsweise zweiteilig aus Kunststoff mittels Spritzgussverfahren hergestellt und anschliessend zusammengeschweisst werden. The medical tube with molded sampling channel can for example be made in two parts from plastic by injection molding and then welded together.

[0011] In einer Ausführungsform kann die Probeentnahmeöffnung im oberen Bereich des Medizinalröhrchens, vorzugsweise im oberen Drittel der Röhrchenwand, unterhalb des Deckels angeordnet sein. Dabei ist in der Regel die Probeentnahmeöffnung nicht durch den Deckel abgedeckt. Ist jedoch auch denkbar, dass der Deckel mit einer sich nach unten erstreckenden Hülse versehen ist, die über die Probeentnahmeöffnung reicht und diese abdeckt. Um das Pellet nach dem Zentrifugieren zu entnehmen, kann der Deckel entfernt werden, damit die Probeentnahmeöffnung freigegeben wird. Die Hülse kann auch über eine Sollbruchstelle mit dem Deckel verbunden sein, so dass sie ohne den Deckel abzunehmen vom Medizinalröhrchen entfernt werden kann. In one embodiment, the sampling opening may be arranged in the upper region of the medical tube, preferably in the upper third of the tube wall, below the lid. As a rule, the sampling opening is not covered by the lid. However, it is also conceivable that the lid is provided with a downwardly extending sleeve which extends over the sampling opening and covers it. To remove the pellet after centrifuging, the lid can be removed to expose the sampling port. The sleeve may also be connected via a predetermined breaking point with the lid so that it can be removed without removing the lid of the medical tube.

[0012] In einer Ausführungsform kann die die Probeentnahmeöffnung mittels einer Abziehfolie abgeschlossen sein, damit keine Verunreinigungen in den Probeentnahmekanal gelangen. Beim Entnehmen des Pellets wird die Abziehfolie entfernt, um die Probeentnahmeöffnung freizugeben. Die Abziehfolie kann eine gasdurchlässige Abziehfolie sein, so dass ein Druckausgleich zwischen dem Probeentnahmekanal und der Umgebung ausserhalb des Medizinalröhrchens möglich ist. In diesem Fall wirkt die Probeentnahmeöffnung auch als eine Entlüftungsöffnung. In one embodiment, the sampling opening may be completed by means of a peel-off, so that no impurities enter the sampling channel. Upon removal of the pellet, the release liner is removed to expose the sampling port. The peel-off film can be a gas-permeable peel-off film, so that a pressure equalization between the sampling channel and the environment outside the medical tube is possible. In this case, the sampling opening also acts as a vent.

[0013] In einer Ausführungsform kann am oberen Ende des Probeentnahmekanals ein vom Innenraum abgeschlossener Entlüftungskanal ausgebildet sein, welcher im Bereich des Deckels, resp. im vom Deckel abgedeckten Bereich, in eine erste Entlüftungsöffnung in der Röhrchenwand mündet. Die erste Entlüftungsöffnung ist dann in der Regel vom aufgesetzten Deckel abgedeckt. Diese Ausführungsform erlaubt ebenfalls einen Druckausgleich zwischen dem Probeentnahmekanal und der äusseren Umgebung des Medizinalröhrchens. Dabei besteht zwischen dem Deckel und dem oberen Bereich der Röhrchenwand, vorzugsweise einem Gewindebereich, genügend Spiel, um einen Druckausgleich zu erlauben. Der Entlüftungskanal kann einen geringeren Querschnitt als der Probeentnahmekanal aufweisen. Für den Entnahmevorgang kann der Deckel verschlossen bleiben. In one embodiment, at the upper end of the sampling channel from the interior of a closed venting channel may be formed, which in the region of the lid, respectively. in the covered area of the lid, opens into a first vent in the tube wall. The first vent is then usually covered by the attached lid. This embodiment also allows pressure equalization between the sampling channel and the external environment of the medical tube. In this case, there is enough clearance between the cover and the upper region of the tube wall, preferably a threaded region, to allow pressure equalization. The venting channel may have a smaller cross-section than the sampling channel. For the removal process, the lid can remain closed.

[0014] In einer Ausführungsform ist in der Röhrchenwand im Bereich des Deckels, resp. im vom Deckel abgedeckten Bereich, eine zweite Entlüftungsöffnung angeordnet ist, die vom aufgesetzten Deckel abgedeckt ist. Diese zweite Entlüftungsöffnung erlaubt einen Druckausgleich zwischen dem Innenraum und der Umgebung des Medizinalröhrchens. Diese zweite Entlüftungsöffnung kann in Kombination mit der ersten Entlüftungsöffnung oder in Kombination mit der mittels gasdurchlässiger Abziehfolie abgedeckter Probeentnahmeöffnung ausgebildet sein. Bei zwei Entlüftungsöffnungen kann die Abziehfolie eine gasdichte Abziehfolie sein. Alternativ kann die zweite Entnahmeöffnung auch im Deckel ausgebildet sein und mittels gasdurchlässigem Filter resp. gasdurchlässiger Folie gegenüber Verunreinigungen abgeschlossen sein. In one embodiment, in the tube wall in the region of the lid, resp. in the area covered by the lid, a second vent opening is arranged, which is covered by the attached lid. This second vent allows pressure equalization between the interior and the environment of the medical tube. This second vent opening may be formed in combination with the first vent opening or in combination with the sampling opening covered by the gas-permeable peel-off film. With two vents, the release liner may be a gas-tight release liner. Alternatively, the second removal opening may also be formed in the lid and by means of gas-permeable filter resp. Gas permeable film to be completed against impurities.

[0015] Insbesondere wenn die Probeentnahmeöffnung aus Sterilitätsgründen mit einer Abziehfolie dicht abgeschlossen ist, kann sich beim Aufbauen des Dichtegradienten oder beim Einfüllen einer Probe ein Druckunterschied zwischen dem Innenraum und dem Probeentnahmekanal aufgrund eines Niveauunterschied der Medien bilden. Beim Abziehen der Abziehfolie gleicht sich dieser Unterschied aus, was zu unerwünschten Turbulenzen und Durchmischungen im Bereich des Röhrchenbodens führen kann. Um solche Störungen zu vermeiden, weist das Medizinalröhrchen bevorzugt den Entlüftungskanal mit der ersten Entlüftungsöffnung und der zweiten Entlüftungsöffnung auf. Für den Entnahmevorgang kann der Deckel verschlossen bleiben. In particular, when the sampling opening is sealed for reasons of sterility with a release liner, can form a pressure difference between the interior and the sampling channel due to a difference in level of the media when building the density gradient or when filling a sample. When the peel-off film is peeled off, this difference is compensated, which can lead to undesired turbulences and mixing in the region of the tube bottom. In order to avoid such disturbances, the medical tube preferably has the venting channel with the first venting opening and the second venting opening. For the removal process, the lid can remain closed.

[0016] Das Medizinalröhrchen kann als Wegwerf-Medizinalröhrchen aus Kunststoff gefertigt sein. The medical tube may be made of plastic as a disposable medical tube.

[0017] Die Erfindung betrifft weiter die Verwendung eines voran beschriebenen Medizinalröhrchens zur Selektion und Reinigung von Spermien mittels Dichtegradientenzentrifugation. The invention further relates to the use of a previously described medical tube for the selection and purification of sperm by density gradient centrifugation.

[0018] Ein Reinigungsverfahren einer biologischen Probe, z.B. Spermien, kann dabei folgende Schritte enthalten: Bereitstellen eines sterilen voran beschriebenen Medizinalröhrchens; Einfüllen und Aufbauen eines Dichtegradienten im Innenraum des Medizinalröhrchen durch die Einlassöffnung; Auftragen der biologischen Probe durch die Einlassöffnung auf die oberste Lage des Dichtegradientens und aufsetzen des Deckels; Zentrifugieren Medizinalröhrchens mit der geladenen Probe bis sich am Röhrchenboden das gewünschte Pellet mit der Zielfraktion bildet; ggf. Entfernen der Abziehfolie; Einführen eines Probeentnahmeschlauchs in den Probeentnahmekanal bis zum Pellet hin; Absaugen des Pellets durch den Probenentnahmeschlauch; und ggf. Abdecken der Einlassöffnung mit der Abziehfolie und Entsorgung des Medizinalröhrchens.A purification process of a biological sample, e.g. Sperm, may include the following steps: Providing a sterile medical tube as described above; Filling and building up a density gradient in the interior of the medical tube through the inlet opening; Applying the biological sample through the inlet opening to the uppermost layer of the density gradient and placing the lid; Centrifuge the medical tube with the charged sample until the desired pellet with the target fraction forms at the bottom of the tube; if necessary, remove the peel-off film; Inserting a sampling tube into the sampling channel down to the pellet; Aspirating the pellet through the sampling tube; and If necessary, cover the inlet opening with the peel-off foil and dispose of the medical tube.

Kurze Erläuterung zu den FigurenBrief explanation of the figures

[0019] Die Erfindung soll nachfolgend anhand von Ausführungsbeispielen im Zusammenhang mit der(n) Zeichnung(en) näher erläutert werden. Es zeigen: <tb>Fig. 1<SEP>eine perspektivische Ansicht eines Medizinalröhrchens; <tb>Fig. 2<SEP>eine Schnittdarstellung eines Medizinalröhrchens mit Entlüftungsöffnungen; und <tb>Fig. 3<SEP>mehrere Schritte ( 3a ) bis ( 3d ) einer Verwendung eines Medizinalröhrchens mit Probeentnahmekanal.The invention will be explained in more detail by means of embodiments in connection with the (s) drawing (s). Show it: <Tb> FIG. 1 <SEP> is a perspective view of a medical tube; <Tb> FIG. 2 <SEP> is a sectional view of a medical tube with vents; and <Tb> FIG. 3 <SEP> several steps (3a) to (3d) of using a medical tube with sampling channel.

Wege zur Ausführung der ErfindungWays to carry out the invention

[0020] Fig. 1 zeigt eine perspektivische Ansicht eines durchsichtigen Medizinalröhrchens 1 zur Aufbereitung einer biologischen Probe 15 mittels Dichtegradientenzentrifugation. Das Medizinalröhrchen 1 weist eine zylindrische, einen Innenraum 6 umschliessende Röhrchenwand 2 und am unteren Ende einen konischen Röhrchenboden 3 auf. Eine Einlassöffnung 4 am oberen Ende des Medizinalröhrchens 1 ist mit einem lösbaren Deckel 5, vorzugsweise einem Schraubdeckel, dichtend abgeschlossen. Das Medizinalröhrchen 1 weist vorzugsweise die Dimensionen von Standard 15 ml oder 50 ml BD Falcon™-Tubes auf, so dass es in herkömmliche Zentrifugeneinsätze passt. Fig. 1 shows a perspective view of a transparent medical tube 1 for the preparation of a biological sample 15 by density gradient centrifugation. The medical tube 1 has a cylindrical tube wall 2 enclosing an interior 6 and a conical tube bottom 3 at the lower end. An inlet opening 4 at the upper end of the medical tube 1 is sealingly closed with a detachable lid 5, preferably a screw cap. The medical tube 1 preferably has the dimensions of standard 15 ml or 50 ml BD Falcon ™ tubing so that it fits into conventional centrifuge inserts.

[0021] An der Innenseite der Röhrchenwand 2 ist ein Probeentnahmekanal 7 angeformt, welcher lediglich am unteren Ende zum Innenraum 6 hin offen und ansonsten von diesem abgeschlossen ist. Diese Probeentnahmekanalmündung 8 am unteren Ende des Probeentnahmekanals 7 ist dabei im Bereich des Röhrchenbodens 3 angeordnet, wo nach der Zentrifugation das Pellet 16 zu liegen kommt. Der Probeentnahmekanal 7 erstreckt sich in axialer Richtung entlang der Röhrchenwand 2 und ist am oberen Ende mit einer Probeentnahmeöffnung 9 in der Röhrchenwand 2 verbunden. Der Probeentnahmekanal 7 ist derart dimensioniert, dass ein dünner Probeentnahmeschlauch 17 von 1 mm bis 3 mm durch den Probeentnahmekanal 7 bis zum Röhrchenboden 3 resp. bis zum Pellet 16 eingeführt werden kann. D.h. der Innendurchmesser liegt bevorzugt zwischen 2.5 mm und 5 mm. Zur leichteren Einführung eines Entnahmeschlauchs 17 ist der obere Bereich des Probeentnahmekanals 7 abgerundet ausgebildet. Die Probeentnahmeöffnung 9 kann mit einer in Fig. 1 nicht dargestellten Abziehfolie 10 gasdicht oder gasdurchlässig verschlossen sein, um eine Kontamination des Probeentnahmekanals 7 während der Probeaufbereitung und vor der Entnahme der Zielfraktion zu vermeiden. On the inside of the tube wall 2, a sampling channel 7 is formed, which is only open at the lower end to the interior 6 and otherwise completed by this. This sampling channel opening 8 at the lower end of the sampling channel 7 is arranged in the region of the tube bottom 3, where after pelletizing the pellet 16 comes to rest. The sampling channel 7 extends in the axial direction along the tube wall 2 and is connected at the upper end to a sampling opening 9 in the tube wall 2. The sampling channel 7 is dimensioned such that a thin sampling tube 17 of 1 mm to 3 mm through the sampling channel 7 to the tube bottom 3, respectively. until pellet 16 can be introduced. That the inner diameter is preferably between 2.5 mm and 5 mm. For easier insertion of a sampling tube 17, the upper portion of the sampling channel 7 is rounded. The sampling opening 9 can be closed in a gas-tight or gas-permeable manner by means of a peel-off film 10, not shown in FIG. 1, in order to avoid contamination of the sampling channel 7 during sample preparation and before removal of the target fraction.

[0022] Fig. 2 zeigt eine Schnittdarstellung eines Medizinalröhrchens 1. Im Unterschied zum Medizinalröhrchen 1 der Fig. 1 weist dieses Entlüftungsöffnungen 12, 13 auf, um Druckunterschiede auszugleichen, welche beim Aufbauen des Dichtegradienten und beim Auftragen und Aufbereiten der Probe 15 bei gasdicht verschlossener Probeentnahmeöffnung 9 auftreten können. Bei der gezeigten Ausführungsform ist entlang der Innenseite der Röhrchenwand 2 ein Entlüftungskanal 11 angeformt, welcher den oberen Bereich des Probeentnahmekanals 7 mit einer ersten Entlüftungsöffnung 12 in der Röhrchenwand 2 im Bereich des Deckels 5 fluidisch verbindet. Bei aufgesetztem Deckel 5 ist die erste Entlüftungsöffnung 12 durch den Deckel 5 abgedeckt, so dass keine Verunreinigungen in den Entlüftungskanal 11 gelangen und diesen kontaminieren, wobei bei aufgesetztem resp. aufgeschraubten Deckel 5 eine Gasaustausch möglich ist, da zwischen Deckel 5 und der Aussenseite der Röhrchenwand 2 genügend Spiel vorhanden ist. Der Entlüftungskanal 11 mit der ersten Entlüftungsöffnung 12 ermöglicht einen Druckausgleich zwischen Probeentnahmekanal 7 und der äusseren Umgebung des Medizinalröhrchens 1. Der Entlüftungskanal 11 kann einen geringeren Querschnitt als der Probeentnahmekanal 7 aufweisen. In contrast to the medical tube 1 of Fig. 1, this vent openings 12, 13 to compensate for pressure differences, which in the construction of the density gradient and during application and processing of the sample 15 with gas-tight Sampling opening 9 may occur. In the embodiment shown, a ventilation channel 11 is integrally formed along the inside of the tube wall 2, which fluidly connects the upper region of the sampling channel 7 with a first vent opening 12 in the tube wall 2 in the region of the lid 5. With the lid 5, the first vent 12 is covered by the lid 5, so that no contaminants in the vent passage 11 and contaminate it, wherein in attached resp. screwed lid 5 a gas exchange is possible because between lid 5 and the outside of the tube wall 2 enough clearance is available. The venting channel 11 with the first vent opening 12 allows a pressure equalization between the sampling channel 7 and the external environment of the medical tube 1. The venting channel 11 may have a smaller cross-section than the sampling channel 7.

[0023] Eine zweite Entlüftungsöffnung 13, die einen Druckausgleich zwischen Innenraum 6 und der äusseren Umgebung des Medizinalröhrchens 1 erlaubt, ist ebenfalls in der Röhrchenwand 2 im Bereich des Deckels 5 angeordnet. Bei aufgesetztem Deckel 5 ist die zweite Entlüftungsöffnung 13 ebenfalls durch den Deckel 5 abgedeckt, so dass keine Verunreinigungen in den Innenraum 6 gelangen, wobei auch hier bei aufgesetztem resp. aufgeschraubten Deckel 5 ein Gasaustausch möglich ist, da zwischen Deckel 5 und der Aussenseite der Röhrchenwand 2 genügend Spiel vorhanden ist. Diese zweite Entlüftungsöffnung verhindert einen Unterdruck während der Entnahme der Zielfraktion. A second vent 13, which allows pressure equalization between the interior 6 and the external environment of the medical tube 1, is also arranged in the tube wall 2 in the region of the lid 5. When the lid 5, the second vent opening 13 is also covered by the lid 5, so that no impurities in the interior 6 pass, which also here in attached resp. screwed lid 5 a gas exchange is possible because between lid 5 and the outside of the tube wall 2 enough clearance is available. This second vent prevents negative pressure during removal of the target fraction.

[0024] Die Fig. 3a bis 3d zeigen mehrere Schritte zur Verwendung eines Medizinalröhrchens 1 mit Probeentnahmekanal 7 für die Dichtegradientenzentrifugation einer biologischen Probe 15, z.B. zur Reinigung und Trennung einer Spermienprobe. In Fig. 3a ist ein leeres, steriles Medizinalröhrchen 1 mit aufgesetztem Deckel 5 schematisch dargestellt, wie es bereits unter Fig. 1 beschrieben ist, wobei hier die Probeentnahmeöffnung 9 mit einer Abziehfolie 10 abgedeckt ist. In einem ersten Schritt wird der Deckel entfernt und mehrere Lagen eines Dichtegradienten 14, 14 ́ werden im Medizinalröhrchen 1 aufgebaut (Fig. 3b ). Anschliessend wird die Probe 15 eingefüllt, der Deckel 5 aufgesetzt und das Medizinalröhrchen 1 mit Probe 15 ist bereit für die Zentrifugation (Fig. 3c ). Nach erfolgter Zentrifugation befindet sich die Zielfraktion der Probe im Pellet 16 am Röhrchenboden 3 des Medizinalröhrchens 1 und kann direkt vom Röhrchenboden 3 entnommen werden (Fig. 3d ). Dazu wird die Probeentnahmeöffnung 9 durch Abziehen der Abziehfolie 10 geöffnet und ein Probeentnahmeschlauch 14 kann durch den Probeentnahmekanal 7 bis zum Pellet 15 am Röhrchenboden 3 geführt werden. Der Probeentnahmeschlauch kommt dabei nicht mit allfälligen Kontaminanten aus den oberen Lagen des Dichtegradienten und dem Überstand der Probe 15» in Kontakt und eine Rekontamination ist effizient verhindert. Das Pellet 16 mit der Zielfraktion kann z.B. mittels einer Spritze 18 durch den Probenentnahmeschlauch 17 abgesaugt werden. Figures 3a to 3d show several steps for using a medical tube 1 with sampling channel 7 for the density gradient centrifugation of a biological sample 15, e.g. for cleaning and separating a sperm sample. In Fig. 3a, an empty, sterile medical tube 1 with attached lid 5 is shown schematically, as already described in Fig. 1, in which case the sampling opening 9 is covered with a release liner 10. In a first step, the lid is removed and a plurality of layers of a density gradient 14, 14 are built up in the medical tube 1 (FIG. 3b). Subsequently, the sample 15 is filled in, the lid 5 is put on and the medical tube 1 with sample 15 is ready for the centrifugation (FIG. 3c). After centrifugation, the target fraction of the sample is in the pellet 16 on the tube bottom 3 of the medical tube 1 and can be removed directly from the tube bottom 3 (Fig. 3d). For this purpose, the sampling opening 9 is opened by removing the peel-off film 10 and a sampling tube 14 can be guided through the sampling channel 7 to the pellet 15 on the tube bottom 3. The sampling tube does not come into contact with any contaminants from the upper layers of the density gradient and the supernatant of the sample, and recontamination is efficiently prevented. The pellet 16 with the target fraction may e.g. be sucked by the syringe 18 through the sampling tube 17.

[0025] Analog kann das Medizinalröhrchen für allfällig folgende Waschschritte verwendet werden. Dazu wird die entnommene Zielfraktion in ein neues Röhrchen überführt, mit einer Waschlösung versehen und nach dem Zentrifugieren oder passivem Sedimentieren auf die oben beschriebene Weise die Zielfraktion erneut entnommen. Analogously, the medical tube can be used for any subsequent washing steps. For this purpose, the removed target fraction is transferred to a new tube, provided with a washing solution and, after centrifuging or passively sedimenting in the manner described above, the target fraction removed again.

Bezeichnungslistename list

[0026] <tb>1<SEP>Medizinalröhrchen <tb>2<SEP>Röhrchenwand <tb>3<SEP>Röhrchenboden <tb>4<SEP>Einfüllöffnung <tb>5<SEP>Deckel <tb>6<SEP>Innenraum <tb>7<SEP>Probeentnahmekanal <tb>8<SEP>Probeentnahmekanalmündung <tb>9<SEP>Probeentnahmeöffnung <tb>10<SEP>Abziehfolie <tb>11<SEP>Entlüftungskanal <tb>12<SEP>erste Entlüftungsöffnung <tb>13<SEP>zweite Entlüftungsöffnung <tb>14, 14 ́<SEP>Schichten des Dichtegradienten <tb>15<SEP>Probe <tb>16<SEP>Pellet mit Zielfraktion <tb>17<SEP>Probeentnahmeschlauch <tb>18<SEP>Spritze[0026] <Tb> 1 <September> Medizinalröhrchen <Tb> 2 <September> tube wall <Tb> 3 <September> tube bottom <Tb> 4 <September> filling opening <Tb> 5 <September> Lid <Tb> 6 <September> Interior <Tb> 7 <September> sampling channel <Tb> 8 <September> sampling channel mouth <Tb> 9 <September> sampling opening <Tb> 10 <September> liner <Tb> 11 <September> vent channel <tb> 12 <SEP> first vent <tb> 13 <SEP> second vent <tb> 14, 14 <SEP> Layers of the density gradient <Tb> 15 <September> sample <tb> 16 <SEP> pellet with target fraction <Tb> 17 <September> sampling tube <Tb> 18 <September> Sprayer

Claims

1. Medicinal tube (1) for the preparation of a biological sample by density gradient centrifugation and / or passive sedimentation comprising a cylindrical tube wall (2) enclosing an inner space (6), a lower tube bottom (3) closing off the inner space and an upper inlet opening (4), which is sealed with a detachable lid (5), preferably a screw cap, characterized in that the medical tube (1) is designed to take a target fraction of the sample in the axial direction of the medical tube (1) along the inside of the tube wall (2) with a sampling channel (7) delimited from the interior (6); wherein the sampling channel (7) at a lower end in the region of the tube bottom (3) has a sampling channel mouth (8), which opens into the interior (6) of the medical tube (1); and wherein the sampling channel (7) opens at an upper end in the direction of the inlet opening (4) into a sampling opening (9) in the tube wall (2),

2. Medical tube according to claim 1, characterized in that the sampling opening (9) in the upper region of the medical tube (1), preferably in the upper third of the tube wall (2), below the lid (5) is arranged.

3. medical tube (1) according to one of the preceding claims, characterized in that the sampling opening (9) with a gas-tight or gas-permeable peel-off film (10) is completed.

4. medical tube (1) according to any one of the preceding claims, characterized in that at the upper end of the sampling channel (7) from the interior (6) closed venting channel (11) is formed, which in the region of the lid (5) in a first vent opening (12) in the tube wall (2) opens, wherein the first vent opening (12) from the attached cover (5) is covered.

5. medical tube (1) according to any one of the preceding claims, characterized in that in the tube wall (2) in the region of the lid (5) a second vent opening (13) is arranged, which is covered by the lid (5).

6. Use of a medical tube (1) according to any one of the preceding claims for the selection and purification of sperm by density gradient centrifugation and / or passive sedimentation.