CH678918A5

CH678918A5 -

Info

Publication number: CH678918A5
Application number: CH819/89A
Authority: CH
Inventors: Nagy Peter Dr Literati; Maria Dr Boros; Jenoe Dr Szilbereky; Istvan Dr Racz; Gyoengyver Dr Soos; Miklos Dr Koller; Alan Dr Pinter; Gabor Nemeth
Original assignee: Biorex Kft
Priority date: 1988-03-09
Filing date: 1989-03-06
Publication date: 1991-11-29
Also published as: HUT60432A; JPH01316316A; FI891145A0; CA1334576C; FI94591B; LU87471A1; IT8919704A0; SE8900828L; IT1229562B; DE3907649A1; SE8900828D0; KR890014103A; GB2216418B; FR2628324B1; BE1002890A3; HU209973B; GB8905385D0; GB2216418A; FI94591C; NL8900574A

Description

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

65 65

CH 678 918 A5 CH 678 918 A5

Beschreibung description

Die Erfindung betrifft ein antivirales und/oder (immunstimulierendes Präparat und ein Verfahren zu seiner Herstellung. The invention relates to an antiviral and / or (immunostimulating preparation and a method for its preparation.

Die mehrfach ungesättigten o>-3-Fettsäuren, wie 5,8,11,14,17-Eikosapentaensäure (im folgenden: EPA) und die 4,7,10,13,16,19-Dokosahexaensäure (im folgenden: DHA) haben, wie schon mehrfach beobachtet wurde, eine Wirkung gegen Viren. In seinen in vitro vorgenommenen Versuchen zeigte Szads (Antimicrobial Agents and Chemotherapy 12, 523 [1977]), dass diese Fettsäuren fähig sind, die Replika-tion der Viren zu verhindern. Diese Tatsache wurde von Reinhardt et al. (J. of Virology 25, 479 [1978]), die die Replikationshemmung an dem Bakteriophagen PR4 untersuchten, bestätigt. The polyunsaturated o> -3 fatty acids, such as 5,8,11,14,17-eicosapentaenoic acid (hereinafter: EPA) and 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid (hereinafter: DHA) , as has been observed several times, an action against viruses. In his in vitro experiments, Szads (Antimicrobial Agents and Chemotherapy 12, 523 [1977]) showed that these fatty acids are able to prevent replication of the viruses. This fact was confirmed by Reinhardt et al. (J. of Virology 25, 479 [1978]), who examined the inhibition of replication on the bacteriophage PR4.

In der US-PS 4 513 008 ist die antivirale Wirkung der mehrfach ungesättigten Fettsäuren, darunter auch die der EPA und der DHA, ausführlich beschrieben. In Tierversuchen mit Mäusen und Meerschweinchen wurde die Wirkung von EPA und DHA mit der Wirkung des gegenwärtig am häufigsten angewendeten antiviralen Mittels, des «Acyclovirs [9-(2-Hydroxyäthoxymethyl)-guanin], verglichen. Es konnte gezeigt werden, dass insbesondere die DHA enthaltenden Präparate gegen Herpesviren vorteilhafterwaren als das Acyclovir. US Pat. No. 4,513,008 describes in detail the antiviral activity of the polyunsaturated fatty acids, including that of the EPA and the DHA. In animal experiments with mice and guinea pigs, the effects of EPA and DHA were compared with the effects of the currently most frequently used antiviral agent, acyclovir [9- (2-hydroxyethoxymethyl) guanine]. It could be shown that in particular the preparations containing DHA against herpes viruses were more advantageous than the acyclovir.

In der Fachliteratur befassen sich noch zahlreiche Artikel mit der antiviralen Wirkung von DHA und EPA, zum Beispiel Whitaker et al. (Proc. Nati. Acad. Sei. USA. 76. 5919 [1979]) sowie Goodnight et al. (Arterïosclerosis 2,87 [1982]) und Yoshiaki (Biochimica et Biophysica Acta 80,793 [1984]). Numerous articles in the specialist literature deal with the antiviral effects of DHA and EPA, for example Whitaker et al. (Proc. Nati. Acad. Sci. USA. 76, 5919 [1979]) and Goodnight et al. (Arteriosclerosis 2.87 [1982]) and Yoshiaki (Biochimica et Biophysica Acta 80.793 [1984]).

Prickett et al. (Immunologi 46, 819 [1982]) zeigten, dass die Eikosapentaensäure als ein Analoges der Arachidonsäure die humorale Immunantwort stimuliert. Die auf Eialbumin einsetzende spezifische IgG-und IgE-Produktion in Sprague-Dawley-Ratten (Inzucht) steigt bei Verabreichung EPA-reicher Diät auf den 4-8fachen Wert der Kontrolle an. Gemäss dem Artikel induziert die EPA-reiche Diät eine angestiegene Antikörper-Antwort Die Untersuchungen zeigten weiterhin, dass die EPA ihre Wirkung über die Hemmung des suppressiv wirkenden Prostaglandin-Systems ausübt, d.h. fähig ist, die Altersimmunschwäche und sonstige krankhafte Prozesse (autoimmune Prozesse, Tumorgenese) zu hemmen beziehungsweise zu korrigieren. Diese Feststellungen werden auch durch die Arbeiten von Kelley et al. (J. of Imnunol. 134.1914 [1985]) und Homey et al. (Clin. Exp. Immunol. 65,473 [1986]) gestützt. Prickett et al. (Immunologi 46, 819 [1982]) showed that eicosapentaenoic acid as an analog of arachidonic acid stimulates the humoral immune response. The specific IgG and IgE production based on egg albumin in Sprague-Dawley rats (inbred) increases to 4-8 times the value of the control when the EPA-rich diet is administered. According to the article, the EPA-rich diet induces an increased antibody response. The studies further showed that the EPA exerts its effect by inhibiting the suppressive prostaglandin system, i.e. is able to inhibit or correct old age deficiency and other pathological processes (autoimmune processes, tumorigenesis). These findings are also borne out by the work of Kelley et al. (J. of Imnunol. 134.1914 [1985]) and Homey et al. (Clin. Exp. Immunol. 65,473 [1986]).

Seit langem ist durch die in vivo vorgenommenen Untersuchungen von Pearson et al. (Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 79, 409 [1952]) bekannt, dass 1-Lysin auf das Virus der Encephalomyelitis hemmend wirkt. Später fand Tankersley (J. Bact. 87, 609 [1964]), dass Lysin unter in vitro Bedingungen in menschlichen Zellen die Replikation des Herpes simplex Virus (HSV) verhindert. Kagan zeigte 1974 auf Grund seiner an Menschen vorgenommenen Versuche, dass die durch oralen wie auch durch genitalen Herpes Simplex verursachten Läsionen durch eine Behandlung mit 1-Lysin sehr schnell verschwinden (The Lan-ceti, 137 [1974]). The in vivo studies by Pearson et al. (Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 79, 409 [1952]) that 1-lysine has an inhibitory effect on the virus of encephalomyelitis. Tankersley (J. Bact. 87, 609 [1964]) later found that lysine prevents replication of the herpes simplex virus (HSV) under in vitro conditions in human cells. In 1974 Kagan showed on the basis of his experiments on humans that the lesions caused by oral as well as genital herpes simplex disappear very quickly after treatment with 1-lysine (The Lan-ceti, 137 [1974]).

Griffith et al. (Dermatologica 156. 257 [1978]) untersuchten unter Einbeziehung von 45 Patienten die therapeutische Wirkung des 1-Lysins in unterschiedlichen Dosen, während verschieden langer Behandlungszeiten an mit HSV I und HSV II infizierten Kranken. Das Alter der Patienten (in erster Linie Frauen) lag zwischen 8 und 60 Jahren. Die Autoren stellten fest, dass das 1-Lysin auf HSV nur supprimie-rend wirkt, jedoch nicht heilt. Griffith et al. (Dermatologica 156, 257 [1978]) examined the therapeutic effects of 1-lysine in different doses, including 45 patients, during different treatment times for patients infected with HSV I and HSV II. The age of the patients (primarily women) ranged from 8 to 60 years. The authors found that 1-lysine only suppresses HSV but does not heal.

Ziel der Erfindung war die Bereitstellung eines Arzneimittelpräparates neuartiger Zusammensetzung, das die günstigen pharmakologischen Wirkungen der ra-3-ungesättigten Fettsäuren und gewisser essentieller Aminosäuren, insbesondere des Lysins, Ornithins und Histidins, in sich vereint und stärker wirkt als alle bisher bekannten antiviralen Mittel. The aim of the invention was to provide a pharmaceutical preparation of a novel composition which combines the beneficial pharmacological effects of ra-3-unsaturated fatty acids and certain essential amino acids, in particular lysine, ornithine and histidine, and has a stronger effect than all previously known antiviral agents.

Die Erfindung beruht auf der Erkenntnis, dass die getrennt bereits bekannten günstigen antiviralen Wirkungen der o-3-ungesättigten Fettsäuren, insbesondere EPA und DHA, und der Aminosäuren, insbesondere Lysin, sich in einem aus diesen Komponenten gebildeten Gemisch synergistisch verstärken und das Gemisch auch eine immunstimulierende Wirkung zeigt. The invention is based on the knowledge that the separately known favorable antiviral effects of the o-3-unsaturated fatty acids, in particular EPA and DHA, and the amino acids, in particular lysine, are synergistically enhanced in a mixture formed from these components and the mixture also has a shows immunostimulating effect.

Gegenstand der Erfindung ist demnach ein antivirales und/oder immunstimulierendes Präparat, das als Wirkstoffe im Molverhältnis 1:4-4:1 im lebenden Organismus vorkommende Aminosäuren und/oder deren Ci-C4-Alkylester oder Amide, femer deren Hydrate und/oder Salze, vorzugsweise Alkali-, Erdalkali- oder Ammoniumsalze, und eine oder mehrere, wenigstens zwei Doppelbindungen enthaltende Fettsäuren der Kettenlänge C18-C24 und gegebenenfalls die in der Arzneimittelindustrie üblichen Trägerund sonstigen Hilfsstoffe enthält. The invention accordingly relates to an antiviral and / or immunostimulating preparation which comprises, as active ingredients in a molar ratio of 1: 4-4: 1, amino acids occurring in the living organism and / or their C 1 -C 4 -alkyl esters or amides, moreover their hydrates and / or salts, preferably contains alkali metal, alkaline earth metal or ammonium salts, and one or more fatty acids of chain length C18-C24 containing at least two double bonds and optionally the carriers and other auxiliaries customary in the pharmaceutical industry.

Als im lebenden Organismus vorkommende Aminosäuren kommen zum Beispiel Taurin, Cycloserin, Ho-moserin, Homocystein, Kanavanin, Sarkosin, Hydroxyprolin, Hydroxylysin, p-Hydroxyphenylalanin und essentielle Aminosäuren in Frage. Als Substituenten der Carboxylgruppe sind das Natrium- und das Kaliumion bevorzugt. Possible amino acids in the living organism are, for example, taurine, cycloserine, homoserine, homocysteine, canavanine, sarcosine, hydroxyproline, hydroxylysine, p-hydroxyphenylalanine and essential amino acids. Sodium and potassium ions are preferred as substituents of the carboxyl group.

Die Fettsäurekomponente der erfindungsgemässen Komposition besteht vorzugsweise aus wenigstens zwei Doppelbindungen enthaltenden œ-3-Fettsâuren der Kettenlänge C18-C24. Besonders bevorzugt ist es, diese ungesättigten Fettsäuren mit basischen Aminosäuren zu vermischen. Als essentielle Aminosäuren kommen insbesondere Lysin, Histidin, Ornithin beziehungsweise deren Derivate in Betracht. The fatty acid component of the composition according to the invention preferably consists of at least two - 3-fatty acids with chain length C18-C24 containing double bonds. It is particularly preferred to mix these unsaturated fatty acids with basic amino acids. Lysine, histidine, ornithine or their derivatives are particularly suitable as essential amino acids.

Das Präparat wird in an sich bekannter Weise durch Vermischen der Komponenten hergestellt. Als gegebenenfalls einsehbare Streck-, Träger- und Hilfsstoffe können die in der Arzneimittelherstellung The preparation is produced in a manner known per se by mixing the components. Possible extenders, carriers and auxiliaries that can be viewed in pharmaceutical production

2 2nd

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üblichen Stoffe, zum Beispiel Lactose, Stärke und Magnesiumstearat verwendet werden. Bevorzugte Hilfsstoffe sind die Antioxydantien. Um eine Oxydation des Präparates zu verhindern, werden als aktives Haltbarkeitsmittel zweckmässig a-Tokoferol (Vitamin E), Glutathion oder herkömmliche Antioxydantien, zum Beispiel Butylhydroxytoluol, verwendet. usual substances, for example lactose, starch and magnesium stearate can be used. Preferred auxiliaries are the antioxidants. In order to prevent oxidation of the preparation, a-Tokoferol (vitamin E), glutathione or conventional antioxidants, for example butylated hydroxytoluene, are expediently used as the active preservative.

5 Die Wirksamkeit und die auf Zellkulturen eventuell ausgeübte Toxizität wurden an Hand der auf Vermehrung und Morphologie von Hep-2-Zellkulturen (epitheliale Tumorzellinie menschlichen Ursprungs) ausgeübten Wirkung untersucht. Die untersuchten Präparate bestanden aus einem Gemisch ca-3-unge-sättigter Fettsäuren (das 27,6% EPA und 44,6% DHA enthielt) und 1-Lysin in den Molverhältnissen 1:1, 1:4 und 4:1. Zur Durchführung der Versuche dienten Gewebekulturplatten aus Kunststoff, von denen 10 jede 6x4 Vertiefungen mit je 1,9 cm2 Grundfläche aufwies. 5 The effectiveness and the toxicity possibly exerted on cell cultures were examined on the basis of the effect exerted on the proliferation and morphology of Hep-2 cell cultures (epithelial tumor cell line of human origin). The investigated preparations consisted of a mixture of ca-3-unsaturated fatty acids (which contained 27.6% EPA and 44.6% DHA) and 1-lysine in the molar ratios 1: 1, 1: 4 and 4: 1. Tissue culture plates made of plastic were used to carry out the experiments, 10 of which each had 6x4 wells with a base area of 1.9 cm2 each.

Aus den Testsubstanzen wurden mit Eagle MEM Medium (Hersteller: Serva GmbH, Heidelberg, BRD) Stammlösungen der Konzentration von 10 mg/ml hergestellt. Der klare Überstand der Stammlösung wurde zunächst auf das Doppelte verdünnt Mit den erhaltenen Lösungen wurde die doppelte Verdünnung noch zweimal wiederholt, wodurch die in der folgenden Tabelle zusammengestellten Lösungen sinkender 15 Konzentration entstanden (Lösungen 1-5). Die Zellkulturen wurden mit je 1 ml Lösung behandelt From the test substances, stock solutions with a concentration of 10 mg / ml were prepared with Eagle MEM Medium (manufacturer: Serva GmbH, Heidelberg, Germany). The clear supernatant of the stock solution was first diluted to double. With the solutions obtained, the double dilution was repeated twice, resulting in the solutions of decreasing concentration shown in the following table (solutions 1-5). The cell cultures were treated with 1 ml of solution

Lösung Wirkstoffgehalt Solution drug content

Nr. ' ; |ig/ml No. ' ; | ig / ml

10000 1000 500 250 125 10000 1000 500 250 125

Die Einwirkungszeit betrug eine Stunde, dann wurden die Kulturen mit gepufferter Salzlösung (phosphate buffer saline, PBS) zweimal gewaschen. Dann wurde Nährflüssigkeit zu den Kulturen gege-30 ben. flach 24 Stunden wurde mit Methanol fixiert, dann wurden die Kulturen mit 4%iger äthanolischer Giemsa-Lösung (Hersteller: Reanal, Budapest, Ungarn) angefärbt, und die Morphologie der Zellen wurde mit einem Lichtmikroskop untersucht. Es erwies sich, dass alle Testsubstanzen erst in einer Konzentration von mehr als 1000 ng/ml toxisch sind. The exposure time was one hour, then the cultures were washed twice with phosphate buffer saline (PBS). Then nutrient liquid was added to the cultures. Flat fixation was carried out for 24 hours with methanol, then the cultures were stained with 4% ethanolic Giemsa solution (manufacturer: Reanal, Budapest, Hungary), and the morphology of the cells was examined with a light microscope. It turned out that all test substances are toxic only in a concentration of more than 1000 ng / ml.

Die Hemmwirkung auf die Virenvermehrung wurde auf die oben beschriebene Weise an Hep-2-Zellen 35 untersucht. Zur Infektion wurde das Virus Herpes simplex I in einer Konzentration von annähernd 1000 PFU (plaque forming unit) verwendet. Aus den Testsubstanzen wurden Lösungen der Konzentrationen von 1000, 500 und 250 ng/ml bereitet, und diese wurden in einer Menge von jeweils 0,1 ml zu der unverdünnten Virensuspension gegeben. Die Ansätze wurden bei 37°C eine Stunde lang inkubiert. Dann wurden die Zellen mit dem zusammen mit den Testsubstanzen vorinkubierten Virus behandelt, und die cyto-40 pathologischen Veränderungen wurden 7 Tage lang beobachtet. The inhibitory effect on virus replication was investigated in the manner described above on Hep-2 cells 35. The virus Herpes simplex I was used in a concentration of approximately 1000 PFU (plaque forming unit). Solutions of concentrations of 1000, 500 and 250 ng / ml were prepared from the test substances, and these were added in an amount of 0.1 ml each to the undiluted virus suspension. The batches were incubated at 37 ° C for one hour. The cells were then treated with the virus preincubated with the test substances and the cyto-40 pathological changes were observed for 7 days.

Es wurde festgestellt, dass die Testsubstanzen in Konzentrationen von 500 und 250 (ig/ml die Vermehrung des Virus unmittelbar hemmen, der auf 0,1 ml bezogene negative Logarithmus der cytopathologi-schen Dosis (neg. log. CPDso) betrug 1,75-2,04, während der neg. log. CPDso der unbehandelten Kon-trollvirenkultur bei 4,5 lag. Bezogen auf die Kontrolle übersteigt der Wert der Virushemmung zwei Grös-45 senordnungen. Unter den gleichen Bedingungen zeigten EPA und DHA keine wahrnehmbare Hemmwirkung, während Lysin für sich die Replikation des Virus zwar hemmte, diese Hemmwirkung jedoch nur etwa eine Grössenordnung ausmachte. It was found that the test substances in concentrations of 500 and 250 (ig / ml inhibit the multiplication of the virus immediately, the negative logarithm of the cytopathological dose (neg. Log. CPDso) based on 0.1 ml was 1.75- 2.04, while the negative log CPD of the untreated control virus culture was 4.5, the value of the virus inhibition exceeds two orders of magnitude in relation to the control. Under the same conditions, EPA and DHA showed no noticeable inhibitory effect during Lysine itself inhibited the replication of the virus, but this inhibitory effect was only about an order of magnitude.

In auf die gleiche Weise vorgenommenen in vitro Versuchen wurde auch das Vaccina-Virus behandelt. Der auf die angegebene Weise ermittelte infektive Titer (neg. log. CPDso) des behandelten Virus 50 betrug 1,75-2,15, der des unbehandelten Kontrollvirus 5,5, d.h. die Testsubstanz hemmte die Virusvermehrung bezogen auf die Kontrolle um drei Grössenordnungen. The vaccina virus was also treated in in-vitro experiments carried out in the same way. The infectious titer (neg. Log. CPDso) of the treated virus 50, as determined, was 1.75-2.15, that of the untreated control virus 5.5, i.e. the test substance inhibited virus propagation by three orders of magnitude in relation to the control.

Die auf das Immunsystem ausgeübte Wirkung des erfindungsgemässen Präparates wurde in vitro an Hand der Aktivierung von Lymphozyten durch polyklone Mitogene an der Blast-Transformation der Lymphozyten untersucht Eine mittels des Fico-Uromiro-Gradienten (Scand. J. Clin. Lab. Invest. 21. 97 55 [1968]) gewonnene Lymphozyten-Zellpopulation wurde in die Vertiefungen flacher Platten pipettiert, und zu jeder der parallelen Kulturen wurden 25 ng/ml Concanavalin A (Con. A, Hersteller: Pharmacia, Upp-sala, Schweden) und dann die 0,1,1,0 beziehungsweise 10 ng/ml Wirkstoff enthaltenden Lösungen der Testsubstanzen gegeben. Als Kontrolle diente eine Kultur, zu der nur 25 ng/ml Concanavalin A gegeben wurden. Die Platten wurden bei 37°C in einer 5% COz enthaltenden Atmosphäre 72 Stunden lang inku-60 biert. In der 64. Stunde wurden zu jeder Probe 0,4 p.Ci 3H-Thymidin gegeben. Nach Ablauf der 72 Stunden wurden die Kulturen auf Giasfilter filtriert. Die Filter wurden in Scintillationsküvetten eingebracht und in je 5 ml Toluol, das ein Fluoreszenzmittel enthielt, mit einem die Betastrahlung messenden Zähler untersucht. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt. The effect of the preparation according to the invention on the immune system was investigated in vitro on the basis of the activation of lymphocytes by polyclone mitogens on the blast transformation of the lymphocytes, one using the fico-Uromiro gradient (Scand. J. Clin. Lab. Invest. 21. 97 55 [1968]) obtained lymphocyte cell population was pipetted into the wells of flat plates, and to each of the parallel cultures 25 ng / ml Concanavalin A (Con. A, manufacturer: Pharmacia, Upp-sala, Sweden) and then the 0 , 1.1.0 or 10 ng / ml of active ingredient-containing solutions of the test substances. A culture served as a control, to which only 25 ng / ml Concanavalin A was added. The plates were incubated at 37 ° C in an atmosphere containing 5% CO 2 for 72 hours. In the 64th hour, 0.4 p.Ci 3H-thymidine was added to each sample. After the 72 hours had elapsed, the cultures were filtered on gias filters. The filters were placed in scintillation cuvettes and examined in 5 ml of toluene, which contained a fluorescent agent, with a counter measuring the beta radiation. The results are summarized in the following table.

65 65

3 3rd

zu to

25 25th

1 1

2 2nd

3 3rd

4 4th

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

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Behandlung treatment

Wirkstoffkonzentr. »g/g Drug concentration »G / g

Einschläge pro Minute (cpm) Impacts per minute (cpm)

Wirkung effect

Kontrolle (Con. A) Control (Con. A)

25 25th

8969 ±2984 8969 ± 2984

A A

1-Tyrosin • • 1-tyrosine • •

0,1 0.1

12 915 ± 2045 12 915 ± 2045

+ +

1,0 1.0

12 313 ± 2003 12 313 ± 2003

1-Lysin 1-lysine

0,1 0.1

11 063 ± 1528 11 063 ± 1528

— -

1,0 1.0

11 833 ±1823 11 833 ± 1823

+ +

Na-Salz des ©-3-Fetlsäuregemischs Na salt of the © -3-fatty acid mixture

0,1 0.1

12 332 ±2235 12 332 ± 2235

— -

(wie in Beispiel 1) (as in example 1)

1,0 1.0

12 039 ±1640 12 039 ± 1640

- -

Kontrolle (Con. A) Control (Con. A)

25 25th

8396 ±2233 8396 ± 2233

— -

Komp. Beispiels Comp. Example

0,1 0.1

14 605 ±1747 14 605 ± 1747

+++ +++

1.0 1.0

12010±2285 12010 ± 2285

— -

Komp. Beispiel 1 Comp. Example 1

0,1 0.1

16 085 ±2063 16 085 ± 2063

+++ +++

1,0 1.0

14 681 ±1769 14 681 ± 1769

-H- -H-

Komp. Beispiel3 Comp. Example3

0,1 0.1

12661 ±1548 12661 ± 1548

++ ++

1,0 1.0

12420±1452 12420 ± 1452

++ ++

Komp. Beispiel 4 Comp. Example 4

0,1. 0.1.

11 920 ±2005 11 920 ± 2005

++ ++

1,0 1.0

12240±1950 12240 ± 1950

4+ 4+

Zeichenerklärung: Explanation of symbols:

—schwache signifikante Abnahme - weak significant decrease

—nicht signifikant -not significant

+ schwacher signifikanter Anstieg + weak significant increase

++ signifikanter Anstieg ++ significant increase

•H-t- starker signifikanter Anstieg • H-t strong significant increase

Aus den Untersuchungen geht hervor, dass die erfindungsgemässen Kompositionen, insbesondere die Gemische mehrfach ungesättigter Fettsäuren zusammen mit Lysin und Tyrosin enthaltenden, eine starke immunstimulierende Wirkung zeigen, während die einzelnen Komponenten, für sich angewendet, entweder keine oder nur eine schwache signifikante Wirkung zeigten. The investigations show that the compositions according to the invention, in particular the mixtures containing polyunsaturated fatty acids together with lysine and tyrosine, show a strong immunostimulating effect, while the individual components, when used on their own, showed either no or only a weak significant effect.

Als Ausgangsstoff zur Gewinnung der ungesättigten ©-3-Fettsäuren einer Kettenlänge von 0(8-C24 kommen in erster Linie die aus den Fischen der Nordsee, zum Beispiel dem Lachs und dem Dorsch, ferner aus Sardinen beziehungsweise die aus der Leber dieser Fische gewinnbaren Öle in Frage, jedoch können auch Fischöle aus Süsswasserfischen verwendet werden. Aus den Ölen können die ungesättigten «8-3-Fetfsäuren in an sich bekannter Weise (JACS 59, 117 [1982]) gewonnen werden. Diese Fettsäuren werden leicht oxydiert. Deshalb ist es zweckmässig, als Haltbarkeitsmittel Antioxydantien (z.B a-To-koferol, das Vitamin E) zu verwenden. The starting material for the production of the unsaturated © -3 fatty acids with a chain length of 0 (8-C24 comes primarily from the fish of the North Sea, e.g. salmon and cod, also from sardines or the oils that can be obtained from the liver of these fish Fish oils from freshwater fish can also be used. The unsaturated 8-3 fatty acids can be obtained from the oils in a manner known per se (JACS 59, 117 [1982]). These fatty acids are easily oxidized expedient to use antioxidants (eg a-to-koferol, vitamin E) as a preservative.

Die Wirkstoffe der erfindungsgemässen Komposition können in der üblichen Weise zu Tabletten, Kapseln, Dragees oder sonstigen Arzneimittelpräparaten formuliert werden. The active ingredients of the composition according to the invention can be formulated in the usual way into tablets, capsules, dragees or other pharmaceutical preparations.

Die erfindungsgemässen Arzneimittelpräparate habe folgende Hauptvorteile: The pharmaceutical preparations according to the invention have the following main advantages:

1. Sie enthalten als Wirkstoffe eine Komposition, deren Komponenten schon an sich über eine antivirale Wirkung verfügen, jedoch in Kombination miteinander ihre Wirkungen synergistisch verstärken. 1. They contain a composition as active ingredients, the components of which already have an antiviral effect per se, but in combination with one another reinforce their effects synergistically.

2. Sie können bei akuten Virusinfektionen, besonders vorteilhaft im Falle der Infektion mit Herpes simplex zum Zurückdrängen der im Anfangsstadium befindlichen Infektion verwendet werden. 2. In the case of acute viral infections, particularly advantageously in the case of infection with herpes simplex, they can be used to suppress the infection which is in the initial stage.

3. Da sie das Immunsystem stimulieren, können sie auch gegen Retroviren, zum Beispiel gegen das lm-munmangelsyndrom (AIDS), das durch HTLV III und HTLVIV verursacht wird, angewendet werden. 3. Since they stimulate the immune system, they can also be used against retroviruses, for example against the immune deficiency syndrome (AIDS), which is caused by HTLV III and HTLVIV.

4. Die Präparate enthalten ausschliesslich physiologisch essentielle Wirkstoffe natürlichen Ursprungs, d.h. sie können, falls die Gefahr einer Vireninfektion besteht oder das Immunsystem angegriffen ist, auch über lange Zeit hinweg präventiv oder als Kur verabreicht werden. 4. The preparations contain only physiologically essential active substances of natural origin, i.e. If there is a risk of viral infection or the immune system is at risk, they can also be administered preventively or as a cure for a long time.

5. Sie wirken auch von innen, d.h. von der in der antiviralen Therapie üblichen, unbequemen äusserli-chen Behandlung kann abgegangen werden. 5. They also work from the inside, i.e. the uncomfortable external treatment common in antiviral therapy can be used.

Die Erfindung wird an Hand der folgenden Beispiele näher erläutert, ist jedoch nicht auf diese Beispiele beschränkt. The invention is explained in more detail using the following examples, but is not restricted to these examples.

Beispiel 1 example 1

164 g (1 Mol) 1 -Lysin-monohydrat und 320 g (etwa 1 Mol) eines Gemisches aus ungesättigten o-3-Fett-säuren (das Gemisch enthält 27,6% EPA und 44,6% DHA) werden bei Raumtemperatur miteinander ver- 164 g (1 mol) of 1-lysine monohydrate and 320 g (about 1 mol) of a mixture of unsaturated o-3-fatty acids (the mixture contains 27.6% EPA and 44.6% DHA) are mixed with one another at room temperature ver

4 4th

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

CH 678 918 A5 CH 678 918 A5

mischt. Das homogene Gemisch wird in bekannter Weise in zur Aufnahme von 500 mg Wirkstoff geeignete Hartgelatinekapseln gefüllt. mixes. The homogeneous mixture is filled in a known manner into hard gelatin capsules suitable for taking up 500 mg of active ingredient.

Beispiel 2 Example 2

155 g (1 Mol) 1-Histidin und 320 g (etwa 1 Mol) des gemäss Beispiel 1 verwendeten Fettsäuregemisches werden miteinander vermischt und wie in Beispiel 1 verkapselt. 155 g (1 mol) of 1-histidine and 320 g (about 1 mol) of the fatty acid mixture used according to Example 1 are mixed together and encapsulated as in Example 1.

Beispiel 3 Example 3

41,0 g (0,25 Mol) 1-Lysin-monohydrat und 320 g (etwa 1 Mol) eines Gemisches aus o-3-Fettsäuren (das Gemisch enthält etwa 90,0%, EPA und 0,1% Vitamin E) werden miteinander vermischt und dann gemäss Beispiel 1 verkapselt. 41.0 g (0.25 mol) of 1-lysine monohydrate and 320 g (about 1 mol) of a mixture of o-3 fatty acids (the mixture contains about 90.0%, EPA and 0.1% vitamin E) are mixed together and then encapsulated according to Example 1.

Beispiel 4 Example 4

Man arbeitet auf die im Beispiel 3 beschriebene Weise, verwendet jedoch statt des Fettsäuregemisches 328 g (etwa 1 Mol) Dokosahexaensäure (Hersteller: Sigma, St. Louis, USA; Katalognummer: D-6508 [1987]) und vermischt diese mit 164 g (1 Mol) 1-Lysin-monohydrat. The procedure is as described in Example 3, but 328 g (about 1 mol) of docosahexaenoic acid (manufacturer: Sigma, St. Louis, USA; catalog number: D-6508 [1987]) are used instead of the fatty acid mixture and mixed with 164 g ( 1 mol) 1-lysine monohydrate.

Beispiel 5 Example 5

Man arbeitet auf die im Beispiel 1 beschriebene Weise, verwendet jedoch statt 1-Lysin 181 g (1,0 Mol) 1-Tyrosin. The procedure described in Example 1 is followed, but 181 g (1.0 mol) of 1-tyrosine are used instead of 1-lysine.

Beispiel 6 Example 6

Man arbeitet auf die im Beispiel 1 beschriebene Weise, verwendet statt 1-Lysin jedoch 120 g (1 Mol) 1-Threonin. The procedure is as described in Example 1, but 120 g (1 mol) of 1-threonine are used instead of 1-lysine.

Beispiel 7 Example 7

Man arbeitet auf die im Beispiel 3 beschriebene Weise, geht jedoch von 164 g (1 Mol) 1-Lysin-monohydrat und 80 g (etwa 0,25 Mo!) des gemäss Beispiel 3 verwendeten Gemisches ungesättigter Fettsäuren aus. The procedure described in Example 3 is followed, except that 164 g (1 mol) of 1-lysine monohydrate and 80 g (about 0.25 Mo!) Of the mixture of unsaturated fatty acids used in Example 3 are used.

Beispiel 8 Example 8

Man arbeitet auf die im Beispiel 3 beschriebene Weise, geht jedoch von 164 g (1 Mol) 1-Lysin-monohydrat und 302 g (1 Mol) Eikosapentaensäure (Hersteller: Sigma, St. Louis, USA; Katalognummer: E-7006 [1987]) aus. The procedure described in Example 3 is followed, except that 164 g (1 mol) of 1-lysine monohydrate and 302 g (1 mol) of eicosapentaenoic acid (manufacturer: Sigma, St. Louis, USA; catalog number: E-7006 [1987 ]) out.

Beispiel 9 Example 9

Man arbeitet wie in Beispiel 1 beschrieben, verwendet statt 1-Lysin jedoch 132 g (1,0 Mol) 1-Ornithin. Beispiel 10 The procedure is as described in Example 1, but instead of 1-lysine, 132 g (1.0 mol) of 1-ornithine are used. Example 10

Man arbeitet auf die im Beispiel 3 beschriebene Weise, verwendet jedoch statt 1-Lysin 33 g (0,25 Mol) 1-Ornithin. The procedure is as described in Example 3, but 33 g (0.25 mol) of 1-ornithine are used instead of 1-lysine.

Beispiel 11 Example 11

Man arbeitet auf die im Beispiel 4 beschriebene Weise, verwendet jedoch statt 1-Lysin 132 g (1,0 Mol) 1-Ornithin. The procedure is as described in Example 4, but 132 g (1.0 mol) of 1-ornithine are used instead of 1-lysine.

Beispiel 12 Example 12

Man arbeitet auf die im Beispiel 1 beschriebene Weise, verwendet jedoch statt 1 -Lysin 133 g (1,0 Mol) 1 -Asparaginsäure. The procedure is as described in Example 1, but 133 g (1.0 mol) of 1-aspartic acid are used instead of 1-lysine.

Beispiel 13 Example 13

Man arbeitet auf die im Beispiel 1 beschriebene Weise, verwendet jedoch statt 1 -Lysin 211 g (1,0 Mol) 1 -Arginin. HCl. The procedure is as described in Example 1, but 211 g (1.0 mol) of 1-arginine are used instead of 1-lysine. HCl.

5 5

10 10th

15 15

20 20th

25 25th

30 30th

35 35

40 40

45 45

50 50

55 55

60 60

CH 678 918 A5 CH 678 918 A5

Beispiel 14 Example 14

Man arbeitet auf die im Beispiel 1 beschriebene Weise, verwendet jedoch statt 1-Lysin 105 g (1,0 Mol) 1-Serin. The procedure is as described in Example 1, but 105 g (1.0 mol) of 1-serine are used instead of 1-lysine.

Beispiel 15 Example 15

Man arbeitet auf die im Beispiel 1 beschriebene Weise, verwendet jedoch statt 1-Lysin 145 g (1,0 Mol) 1-GIutamin. The procedure is as described in Example 1, but 145 g (1.0 mol) of 1-glutamine are used instead of 1-lysine.

Beispiel 16 Example 16

Herstellung von Tabletten. Manufacture of tablets.

Aus der Komposition gemäss Beispiel 1 werden Tabletten der folgenden Zusammensetzung bereitet: Tablets of the following composition are prepared from the composition according to Example 1:

Komposition gemäss Beispie! 1 Composition according to example! 1

500 mg 500 mg

Lactose Lactose

120 mg 120 mg

Stärke Strength

63 mg 63 mg

Poiyvinylpyrralidon Polyvinyl pyrralidone

3,5 mg 3.5 mg

Magnesiumstearat Magnesium stearate

3,5 mg 3.5 mg

Gewünschtenfalls können die Tabletten auf einer Dragiermaschine mit Zucker überzogen werden. Patentansprüche If desired, the tablets can be coated with sugar on a coating machine. Claims

1. Antivirale und/oder immunstimulierende Präparate, dadurch gekennzeichnet, dass sie als Wirkstoffe im Molverhältnis 1:4 bis 4:1 im lebenden Organismus vorkommende Aminosäuren und/oder deren Ci-C*-Alkylester oder Amide, ferner deren Hydrate und/oder Salze und eine oder mehrere, wenigstens zwei Doppelbindungen enthaltende Fettsäuren der Kettenlänge C18-C24 enthalten. 1. Antiviral and / or immunostimulating preparations, characterized in that they act as active ingredients in a molar ratio of 1: 4 to 4: 1 amino acids occurring in the living organism and / or their Ci-C * alkyl esters or amides, and also their hydrates and / or salts and one or more fatty acids of chain length C18-C24 containing at least two double bonds.

2. Präparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es Alkali-, Erdalkali- oder Ammoniumsalze der Aminosäuren enthält. 2. Preparation according to claim 1, characterized in that it contains alkali, alkaline earth or ammonium salts of the amino acids.

3. Präparat nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass es Träger- und weitere Hilfsstoffe enthält. 3. Preparation according to claim 1 or 2, characterized in that it contains carriers and other auxiliary substances.

4. Präparat nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass es ungesättigte Fettsäuren aus Fischöl enthält. 4. Preparation according to one of claims 1 to 3, characterized in that it contains unsaturated fatty acids from fish oil.

5. Präparat nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass es als Wirkstoffe 5,8,11,14,17-Eikosapentaensäure und L-Lysin enthält. 5. Preparation according to one of claims 1 to 3, characterized in that it contains 5,8,11,14,17-eicosapentaenoic acid and L-lysine as active ingredients.

6. Präparat nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass es als Wirkstoffe 4,7,10,13,16,19-Dokosahexaensäure und L-Lysin enthält. 6. Preparation according to one of claims 1 to 3, characterized in that it contains 4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid and L-lysine as active ingredients.

7. Präparat nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass es als Wirkstoffe DHA, EPA und L-Lysin enthält, 7. Preparation according to one of claims 1 to 3, characterized in that it contains DHA, EPA and L-lysine as active ingredients,

8. Verfahren zur Herstellung eines antiviral und/oder immunstimulierend wirkenden Arzneimittelpräparates, dadurch gekennzeichnet, dass man im Molverhältnis 1:4 bis 4:1 im lebenden Organismus vorkommende Aminosäuren und/oder deren Gi-C4-Alkylester oder Amide, ferner deren Hydrate und/oder Salze und eine oder mehrere, wenigstens zwei Doppelbindungen enthaltende Fettsäuren der Kettenlänge C18-C24 vermischt und zu Arzneimittelpräparaten formuliert. 8. A process for the preparation of an antiviral and / or immunostimulating pharmaceutical preparation, characterized in that amino acids occurring in the living organism in a molar ratio of 1: 4 to 4: 1 and / or their Gi-C4-alkyl esters or amides, furthermore their hydrates and / or salts and one or more fatty acids of chain length C18-C24 containing at least two double bonds and mixed and formulated into medicament preparations.

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