Es wurde gefunden, dass das bisher unbekannte 9cc -Fluor- 1 6-tluormethylen-prednisolon-21 -önonthat (I) etwa 4,5mal stärker antiproliferativ wirkt als das bekannte Handeispräparat Fluprednyliden -21 - acetat (Mäuseschwanztest; Testmethodik vgl. Arzneimittelforschung, Band 18, Seite 19 ff. (1968). Andererseits weist I einige in diesem Zusammenhang unerwünschte Nebenwirkungen nur in geringerem Masse auf. So wirkt I z. B. etwa 2,4mal schwächer glyconeogenetisch und etwa 2,2mal schwächer nebennierengewichtshenlmend als Fluprednyliden-21-acetat (Testmethodik vgl.
Arzneimittelfor schung, Band 18, Seite 15 ff. (1968)1. I ist daher in besonderem Masse als vorzugsweise topisch (lokal) anwendbares Heilmittel geeignet, beispielsweise zur Behandlung von Hautkrankheiten (z.B. Psoriasis).
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der Verbindung I, das darin besteht, dass man 9cc-Fluor-16-fluormethylen-hydrocortison-21-önanthat mit chemischen oder mikrobiologischen, in 1(2)-Stellung dehydrierenden Mitteln behandelt.
Als chemisches Dehydrierungsmittel eignet sich insbesondere 2,3 > 1Dichlor-5,6-dicyan-benzochinon, das man zweckmässig in Gegenwart eines Lösungsmittels wie Äthanol, Butanol, tert.-Butanol, tert.Butylessigsäuremethylester, Methylacetat, Äthylacetat, Tetrahydrofuran, Dioxan, Essigsäure, Benzol, Aceton, verwendet. Es ist vorteilhaft, dem Reaktionsgemisch geringe Mengen Nitrobenzol zuzumischen. Die Reaktionszeiten liegen in der Regel zwischen 5 und 48 Stunden, wenn man die Umsetzung bei der Siedetemperatur des Lösungsmittels durchführt.
Für die mikrobiologische Einführung des 1(2)-ständigen Doppelbindung eignen sich insbesondere Mikroorganismen, die den folgenden Gattungen angehören: Acetobacter, Aerobacter, Alvaligenes, Alternaria, Arthobacter, Azotobacter, Azotomonas, Bacillus (besonders Bacillus cyclooxydans und Bacillus sphaericus), Calonectria (besonders Calonectria decora), Colletotrichum, Corynebacterium, Cucurbitaria, Cylindrocarpon (besonders Cylindrocarpon radicicola), Didymella (besonders Didymella lycopersici), Erysipelothrix, Fusarium, Gliocladium, Gloeosporium, Helminthosporium, Leptospaerium, Listeria, Micromonospora, Mycobacterium (besonders Mycobacterium lacticola und Mycobacterium smegmatis), Nocardia, Ophiobolus, Protaminobacter, Pseudomonas, Pycnodothis, Septomyxa (besonders Septomyxa affinis), Serratia, Stereum,
Streptomyces (besonders Streptomyces lavendulae), Trichothecium, Vermicularia.
Die Fermentation benötigt etwa 4 bis 24 Stunden, je nachdem, welcher Mikroorganismus verwendet wird. Be sonders bevorzugt sind Kulturen von Bacillus sphaericus var. fusiformis und Corynebacterium simplex.
Die Verbindung I kann im Gemisch mit festen, flüssigen und/oder halbflüssigen Arzneimittelträgern in der Human- oder Veterinärmedizin eingesetzt werden. Als Trägersubstanzen kommen solche organischen oder anorganischen Stoffe in Frage, die für die parenterale, enterale od. insbesondere topische Applikation geeignet sind und die mit I nicht in Reaktion treten, wie beispielsweise
Wasser, pflanzliche öle, Polyäthylenglykole, Gelatine,
Milchzucker, Stärke, Magnesiumstearat, Talk, Vaseline,
Cholesterin. Zur parenteralen Applikation dienen insbe sondere Lösungen, vorzugsweise ölige Lösungen, sowie
Suspensionen oder Emulsionen. Für die enterale Ap plikation eignen sich ferner Tabletten, Dragees, Sirupe, Säfte und Suppositorien, für die topische Anwendung Salben, Cremes, Lotionen, Tinkturen, Aerosole oder Puder.
Die angegebenen Zubereitungen können gegebenenfalls sterilisiert oder mit Hilfsstoffen, wie Konservierungs-, Stabilisierungs- oder Netzmitteln, Salzen zur Beeinflussung des esmotischen Druckes, Puffersubstanzen, Farb-, Geschmacks- und/oder Aromastoffen versetzt werden.
Die Verbindung I wird oral vorzugsweise in einer Dosierung von 0,3 bis 6, insbesondere 1 bis 3 mg pro Dosierungseinheit verabfolgt. Der Gehalt an I in Zubereitungen für die topikale Applikation liegt vorzugsweise zwischen 0,1 und 1, insbesondere zwischen 0,025 und 0,1 Gewichtsprozent.
In der USA-Patentschrift 3 065 239 ist eine Verbindungsklasse der Formel
EMI1.1
worin unter anderem Rl auch OH, R2 auch niederes Alkanoyl, R auch H und X und Y auch Halogen bedeuten können, genannt. Zwar wird in dieser Patentschrift auch gesagt, dass bei den Verbindungen der obigen allgemeinen Formel anti-inflammatorische Aktivitäten vorkommen, jedoch ist weder die spezielle Verbindung 1, die den Gegenstand der vorliegenden Erfindung bildet noch deren hervorragende anti-proliferative Wirkung beschrieben.
Die spezielle Verbindung 9oc-Fluor-16-fluormethylen- -prednisolon-21-önanthat (I) war am Ammeldetag der vorliegenden Erfindung im patentrechtlichen Sinn somit neu. Insbesondere konnte auch der Fachmann die ausserordentlich wertvollen und fortschrittlichen Eigenschaften der neuen Verbindung keineswegs voraussehen.
Beispiel I
Eine in einem 10-1-Fermenter in an sich üblicher Weise gezüchtete Kultur von Corynebacterium simplex -erhält bei pH 6,8 einen Zusatz von 3 g 9cc-Fluor-16-fluor- methylen-hydrocortison-21-önanthat (erhältlich durch Veresterung von 9Fluor-16-fluormethylen-hydrocorti- son in 21-Stellung) in 100 ml ç ethanol. Nach 8stündigem Rühren ist die Umsetzung beendet. Das Gemisch wird fünfmal mit je 2 1 Dichlormethan extrahiert. Man dampft die vereinigten Auszüge ein, versetzt den Rückstand mit Petroläther, lässt über Nacht stehen, saugt ab, reinigt chromatographisch auf und erhält 9oo-Fluor-16- -fluormethylen-prednisolon-21-önanthat vom F. 2022040.
Beispiel 2
2 g 9cciFluor-16-fluormethylen-hydrocortison-21-ön- anthat und 1,8 g 2,3-Dichlor-5,6-dicyan-1,4-benzochinon werden in 20 ml wasserfreiem Benzol 12 Stunden ge kocht. Man kühlt ab, filtriert und giesst das Filtrat in 200 ml einer 2%igen wässerigen Natriumhydroxidlösung.
Man extrahiert mit Äther, wäscht mit Wasser, trocknet über Natriumsulfat, dampft ein und erhält 9α-Fluor-16- -fluormethylen-prednisolon-21-önanthat, F. 202-204 (aus Äther).
PATIiiN'iANSPRUCH
Verfahren zur Herstellung von 9α-Fluor-16-fluorme- thylen-prednisolon-21-önanthat, dadurch gekennzeichnet, dass man 9α-Fluor-16-fluormethylen-hydrocortison-21- -önanthat mit chemischen oder mikrobiologischen, in 1(2)-Stellung Idehydrierenden Mitteln behandelt.
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It was found that the previously unknown 9cc -fluoro-16-tluoromethylene-prednisolone-21-oenonthat (I) has an antiproliferative effect about 4.5 times more than the well-known hand ice cream preparation fluprednylidene -21-acetate (mouse tail test; test method cf. Arzneimittelforschung, volume 18, page 19 et seq. (1968). On the other hand, I has some undesirable side effects in this context only to a lesser extent. acetate (test method cf.
Pharmaceutical research, Volume 18, page 15 ff. (1968) 1. I is therefore particularly suitable as a remedy that can be applied topically (locally), for example for the treatment of skin diseases (e.g. psoriasis).
The invention relates to a process for the preparation of the compound I which consists in treating 9cc-fluoro-16-fluoromethylene-hydrocortisone-21-enanthate with chemical or microbiological agents which dehydrate in the 1 (2) position.
A particularly suitable chemical dehydrogenating agent is 2,3> 1-dichloro-5,6-dicyanobenzoquinone, which is expediently added in the presence of a solvent such as ethanol, butanol, tert-butanol, methyl tert-butylacetate, methyl acetate, ethyl acetate, tetrahydrofuran, dioxane, acetic acid , Benzene, acetone, are used. It is advantageous to add small amounts of nitrobenzene to the reaction mixture. The reaction times are generally between 5 and 48 hours if the reaction is carried out at the boiling point of the solvent.
Microorganisms belonging to the following genera are particularly suitable for the microbiological introduction of the 1 (2) double bond: Acetobacter, Aerobacter, Alvaligenes, Alternaria, Arthobacter, Azotobacter, Azotomonas, Bacillus (especially Bacillus cyclooxydans and Bacillus sphaericus), Calonectria (especially Calonectria decora), Colletotrichum, Corynebacterium, Cucurbitaria, Cylindrocarpon (especially Cylindrocarpon radicicola), Didymella (especially Didymella lycopersici), Erysipelothrix, Fusarium, Gliocladium, Gloeosporaium, Helminthosporium, Lactosporaium, Helminthosporium, Myromoncobisterium, Leptosporaerium, Helminthosporium, Myromoncobisterium, especially Myromosporaerium, Helminthosporium, Myromoncospaerium, Helminthosporium, Myromoncobisterium Nocardia, Ophiobolus, Protaminobacter, Pseudomonas, Pycnodothis, Septomyxa (especially Septomyxa affinis), Serratia, Stereum,
Streptomyces (especially Streptomyces lavendulae), Trichothecium, Vermicularia.
The fermentation takes about 4 to 24 hours, depending on the microorganism used. Cultures of Bacillus sphaericus var. Fusiformis and Corynebacterium simplex are particularly preferred.
The compound I can be used as a mixture with solid, liquid and / or semi-liquid pharmaceutical carriers in human or veterinary medicine. Suitable carrier substances are those organic or inorganic substances which are suitable for parenteral, enteral or, in particular, topical application and which do not react with I, such as, for example
Water, vegetable oils, polyethylene glycols, gelatine,
Lactose, starch, magnesium stearate, talc, petroleum jelly,
Cholesterol. Special solutions, preferably oily solutions, are used for parenteral administration
Suspensions or emulsions. Tablets, coated tablets, syrups, juices and suppositories are also suitable for enteral application, and ointments, creams, lotions, tinctures, aerosols or powders are suitable for topical application.
The specified preparations can optionally be sterilized or mixed with auxiliaries such as preservatives, stabilizers or wetting agents, salts to influence the esotic pressure, buffer substances, coloring, flavoring and / or aromatic substances.
The compound I is administered orally, preferably in a dosage of 0.3 to 6, in particular 1 to 3 mg per dosage unit. The content of I in preparations for topical application is preferably between 0.1 and 1, in particular between 0.025 and 0.1 percent by weight.
In U.S. Patent 3,065,239 there is a class of compounds of the formula
EMI1.1
where, inter alia, Rl can also mean OH, R2 can also mean lower alkanoyl, R also H and X and Y can also mean halogen. Although this patent specification also states that the compounds of the above general formula have anti-inflammatory activities, neither the specific compound 1, which forms the subject of the present invention, nor its excellent anti-proliferative effect is described.
The special compound 9oc-fluoro-16-fluoromethylene-prednisolone-21-oenanthate (I) was therefore new on the date of registration of the present invention in terms of patent law. In particular, even a person skilled in the art could not foresee the extraordinarily valuable and progressive properties of the new compound.
Example I.
A culture of Corynebacterium simplex cultivated in a 10-1 fermenter in the usual manner contains at pH 6.8 an addition of 3 g of 9cc-fluoro-16-fluoro-methylene-hydrocortisone-21-enanthate (obtainable by esterification of 9fluoro-16-fluoromethylene hydrocortisone in position 21) in 100 ml of ethanol. After stirring for 8 hours, the reaction has ended. The mixture is extracted five times with 2 liters of dichloromethane each time. The combined extracts are evaporated, petroleum ether is added to the residue, left to stand overnight, filtered off with suction, purified by chromatography and 900-fluoro-16-fluoromethylene-prednisolone-21-enanthate of F. 2022040 is obtained.
Example 2
2 g of 9cciFluoro-16-fluoromethylene-hydrocortisone-21-oenanthate and 1.8 g of 2,3-dichloro-5,6-dicyan-1,4-benzoquinone are boiled in 20 ml of anhydrous benzene for 12 hours. It is cooled, filtered and the filtrate is poured into 200 ml of a 2% aqueous sodium hydroxide solution.
It is extracted with ether, washed with water, dried over sodium sulphate, evaporated and 9α-fluoro-16-fluoromethylene-prednisolone-21-oenanthate, mp 202-204 (from ether) is obtained.
PATIiiN'i CLAIM
Process for the preparation of 9α-fluoro-16-fluoromethylene-prednisolone-21-oenanthate, characterized in that 9α-fluoro-16-fluoromethylene-hydrocortisone-21-oenanthate is mixed with chemical or microbiological, in 1 (2 ) -Position treated with dehydrating agents.
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