Verfahren zur Herstelhmg neuer Aminocarbonsäureester
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von neuen Aminocarbonsäureestern.
Es wurde überraschenderweise gefunden, dass Verbindungen der Formel I,
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in welcher Rt einen aliphatischen oder araliphatischen Kohlenwasserstoffrest von höchstens 12 Kohlenstoffatomen sowie R einen Kohlenwasserstoffrest von höchstens 12 Kohlenstoffatomen bedeutet, wobei, falls R2 Phenyl ist, R1 mindestens 3 Kohlenstoffatome enthalten muss, in ihrer DL-, D- und L-Form, sowie ihre Additionssalze mit anorganischen oder organischen Säuren eine vorzügliche antiallergische und entzündungshemmende Wirkung zeigen und zugleich einen hohen therapeutischen Index aufweisen.
Die Verbindungen der Formel I und ihre Säureadditionssalze eignen sich auf Grund ihrer antiallergischen und entzündungshemmenden Wirksamkeit als Wirkstoffe von Arzneimitteln zur Behandlung von allergischen Krankheiten und zum Transplantatschutz bzw. zur Behandlung von Entzündungen verschiedener Genese, wie z. B. Affektionen des rheumatischen Formkreises, posttraumatischen und postoperativen Entzündungen und Schwellungen, Entzündungen der Blut- und Lymphgefässe sowie - zusätzlich zu Antibiotica oder Chemotherapoutica-bak- teriellen oder viralen Infektionen.
Die antiallergische und entzündungshemmende Wirksamkeit lässt sich in Standard-Testversuchen z. B. an der Ratte und am Meerschweinchen nachweisen.
Die neuen Mittel zur Behandlung von Allergien und Entzündungen verschiedener Genese enthalten als Wirkstoff Verbindungen der Formel I. In dieser Formel kann R, als aliphatischer und araliphatischer Rest beispielsweise die Methyl-, Äthyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl-, sek.Butyl-, Isobutyl-, tert.Butyl-, Pentyl-, Isopentyl-, 1,2-Dimethyl-propyl- usw. bis Dodecyl-, die Benzyl-, 2-Phenäthyl-, 1- und 2-Naphthylmethylgruppe sein.
Ferner kann R2 als aliphatischer, araliphatischer oder aromatischer Rest beispielsweise folgende Gruppen bedeuten: die Methyl-, Athyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl-, sek.Butyl-, Isobutyl-, tert.Butyl-, Pentyl-, Isopentyl-, 2,2-Dimethyl-propyl- usw. bis Dodecyl-, Benzyl-, 2-Phenäthyl-, 1- und 2-Naphthylmethyl-, Phenyloder die Naphthylgruppe. Reste Rt und R2, welche einen Benzol- oder Naphthalinring enthalten, können in diesen Ringen auch noch durch die Methyl- oder Äthyl- gruppe substituiert sein.
Zur erfindungsgemässen Herstellung einer Verbindung der Formel I setzt man eine Verbindung der Formel II,
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in welcher R2 die unter Formel I angegebene Bedeutung hat, oder ein reaktionsfähiges Derivat einer solchen Säure, mit einem aliphatischen oder araliphatischen Alkohol der Formel III
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um und führt gewünschtenfalls den erhaltenen Ester in ein Additionssalz einer anorganischen oder organischen Säure über.
Beispielsweise setzt man eine Säure der Formel II oder ein reaktionsfähiges funktionelles Derivat einer solchen mit einem aliphatischen oder araliphatischen Alkohol der Formel III, in welcher Rt die unter Formel I angegebene Bedeutung hat, um. Diese Umsetzung der freien Carbonsäure kann z. B. mit Hilfe einer Mineraisäure, wie Chlorwasserstoff oder konz. Schwefelsäure, einer aromatischen Sulfonsäure, wie p-Toluoloder Benzolsulfonsäure, und auch von Thionylchlorid oder Sulfurylchlorid stattfinden. Als Lösungsmittel verwendet man überschüssigen Alkohol und/oder ein inertes Lösungsmittel. Geeignete inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Kohlenwasserstoffe, wie Benzol oder Toluol, sowie chlorierte Kohlenwasserstoffe, wie Chloroform und Tetrachlorkohlenstoff.
Scheidet sich bei der Umsetzung Wasser ab, so wird dieses vorzugsweise durch azeotrope Destillation entfernt.
Anstelle einer freien Säure der Formel II kann man auch einen niederen Ester, wie z. B. den Methyloder Äthylester, mit einem aliphatischen oder araliphatischen Alkohol der Formel III umsetzen. Diese Umesterung wird vorzugsweise in überschüssigem Alkohol in Gegenwart eines Katalysators, wie z. B. Natriummethylat oder Aluminiumisopropylat, vorgenommen.
Als Ausgangsstoffe der allgemeinen Formel III sind beispielsweise solche geeignet, deren Reste RJ mit den anschliessend an Formel I explizit aufgezählten Gruppen übereinstimmen.
Nach einer Variante dieses Verfahrens kann man eine Säure der Formel II oder ein Salz einer solchen Säure auf einen reaktionsfähigen Ester eines aliphatischen oder araliphatischen Alkohols der Formel III einwirken lassen. Als solche Salze eignen sich Alkalisalze, wie Natrium- und Kaliumsalze, oder Salze von organischen Basen, wie Pyridin, Triäthylamin oder Dicyclohexyläthylamin, und als reaktionsfähige Ester von Alkoholen der Formel III Halogenide, wie Bromide oder Chloride, Carbonsäureester, wie z. B. Acetate, Sulfite, ferner Sulfate, Benzol- oder Toluolsulfonsäureester. Halogenide und Sulfate werden vorzugsweise mit den genannten Salzen, und Acetate oder Sulfite mit den entsprechenden freien Säuren der Formel II umgesetzt. Die Umwandlung der Acetate und Sulfite kann z. B. mit Hilfe von Benzol- oder p-Toluolsulfonsäure bzw. von Perchlorsäure vorgenommen werden.
Geeignete Ausgangsstoffe der Formel II sind z. B. solche, deren Reste R2 mit den anschliessend an Formel I explizit aufgezählten Gruppen übereinstimmen.
Sie können analog hergestellt werden wie das in der Literatur beschribeene N6-Acetyl-L-lysin.
Die nach den erfindungsgemässen Verfahren erhaltenen Verbindungen der Formel I werden anschliessend gewünschtenfalls in üblicher Weise in ihre Addi tionssalze mit anorganischen und organischen Säuren übergeführt. Beispielsweise versetzt man eine Lösung einer Verbindung der Formel I in einem organischen Lösungsmittel, wie Methanol, Äthanol, Diäthyläther, Chloroform oder Methylenchlorid, mit der als Salzkomponente gewünschten Säure oder einer Lösung derselben und trennt das ausgefallene Salz ab.
Zur Verwendung als Arzneistoffe können anstelle freier Basen Säureadditionssalze eingesetzt werden, d. h. Salze mit solchen Säuren, deren Anionen bei den in Frage kommenden Dosierungen pharmazeutisch an nehmbar sind. Ferner ist es von Vorteil, wenn die als Arzneistoffe zu verwendenden Salze gut kristallisierbar und nicht oder wenig hygroskopisch sind. Zur Salzbildung mit Verbindungen der Formel I kommen z. B. die Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, khansulfonsäure, ss-Hydroxyäthansulfonsäure, Essigsäure, Milchsäure, Oxalsäure, Bernsteinsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Apfelsäure, Weinsäure, Citronensäure, Benzoesäure, Salicylsäure, Phenylessigsäure, Mandelsäure und Embonsäure als Wirkstoffe anstelle der freien Basen in Betracht.
Die neuen Wirkstoffe werden peroral, rektal und parenteral verabreicht. Die täglichen Dosen der freien Basen oder von pharmazeutisch annehmbaren Salzen derselben bewegen sich zwischen 10 und 800 mg für erwachsene Patienten mit normalem Gewicht. Geeig- nete Doseneinheitsformen, wie Dragees, Tabletten, Supposicorien oder Ampullen, enthalten vorzugsweise 550 mg eines erfindungsgemässen Wirkstoffes oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes desselben.
Die nachfolgenden Beispiele erläutern die Herstellung der neuen Verbindungen der Formel I. Die Temperaturen sind in Celsiusgraden angegeben.
Beispiel 1
Man tropft unter gutem Rühren bei -10" 1,04 ml (14,4 m Mol) Thionylchlorid zu 12 ml Methanol, fügt 2, 26 g (12,0 m Mol) N6-Acetyl-L-lysin zu und lässt das Gemisch 2 Stunden bei 20 und 18 Stunden bei 500 stehen. Zur Aufarbeitung wird das Reaktionsgemisch im Vakuum eingedampft und durch mehrmaliges Lösen in Methanol und Eindampfen im Vakuum von Schwefeldioxid und Salzsäure befreit. Man kristallisiert das zurückbleibende Ö1 aus Methanol-Aceton.
Das erhaltene N6-Acetyl-L-lysin-methylester-hydrochlorid ist sehr hygroskopisch, sintert bei 75" und zersetzt sich bei 80-830 im zugeschmolzenen Röhrchen; taJ250, + 17,2" (c = 2,05 in Methanol); [a] D230, + 13,1" (c = 1,92 in Wasser).
Das in üblicher Weise bereitete p-Toluolsulfonat schmilzt nach Kristallisation aus Methanol-Äther bei 122-123,5" unter Zersetzung; [α]D20 , + 14,70 (c= 1,99 in Athanol); [a]D21", + 11,5" (c = 2,04 in Wasser).
Beispiel 2
Zu 30ml Benzylalkohol werden unter gutem Rühren bei 100 1,74 ml (24,0 m Mol) Thionylchlorid zugetropft, 2,26 g (12,0 m Mol) N6-Acetyl-L-lysin beigefügt und das erhaltene Gemisch 34 Stunden bei 30 und 9 Stunden bei 60 gehalten. Zur Aufarbeitung wird das Reaktionsgemisch mit Diäthyläther versetzt und dann mit Wasser mehrmals extrahiert. Man fügt zu den vereinigten Wasserextrakten unter Eiskühlung 2,5 g Natriumcarbonat und extrahiert die freigesetzte Base mit Diäthyläther. Die ätherische Lösung wird über Natriumsulfat getrocknet, im Vakuum eingeengt und bei 0 mit überschüssiger l-n. ätherischer Salzsäure versetzt.
Das ausgefallene Ö1 wird zweimal aus absolutem Diäthyläther-Methanol umgefällt und aus Äthanol-Aceton kristallisiert. Das erhaltene N3-Acetyl- L-lysin- benzylester-hydrochlorid zersetzt sich bei 133-134"; [a] D230,-9, -9,80 (c = 1,04 in Wasser), [a1250, -2,5" (c = 1,04 in Äthanol).
Beispiel 3
200 ml Dodecylalkohol werden bei 25 tropfenweise mit 28,7 g (240mMol) Thionylchlorid versetzt.
Zur erhaltenen Lösung gibt man portionenweise unter gutem Rühren bei 25 30,0 g (120 m Mol) N6-Benzoyl-L-lysin. Das Reaktionsgemisch wird während 28 Stunden auf 45 erwärmt, anschliessend auf 20 abgekühlt und mit 500 ml Diäthyläther versetzt, worauf das rohe N6-Benzoyl-L-lysin-dodecylester-hydrochlorid ausfällt. Zur Reinigung wird das Rohprodukt zweimal aus Äthanol-Aceton kristallisiert, worauf die Verbindung bei 139 sintert und bei 139,5-140,5 unter Zersetzung schmilzt; [α]D22 , 6.2 (c = 1,93 in Methanol); [α]D22 , + 1,1 (c = 2,02 in Dimethylformamid).
Beispiel 4
Zu 400 ml auf 100 abgekühltes sec.-Butanol werden bei 100 35, 9 g (300 mMol) Thionylchlorid getropft. Die Lösung wird auf 150 erwärmt und portionenweise unter gutem Rühren mit 37,5 g (150 m Mol) N6-Benzoyl-L-lysin versetzt. Die Suspension wird 40 Stunden auf 45 erwärmt, wobei eine klare Lösung entsteht. Darauf wird das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft, der Rückstand zur Entfernung des Schwefeldioxids und des überschüssigen Chlorwasserstoffs mehrmals in Aceton aufgenommen und das Lösungsmittel jeweils im Vakuum abdestilliert. Das zurückbleibende öl wird in 200 ml Wasser gelöst. Unter Eiskühlung fügt man 30g (283 m Mol) Natriumcarbonat zu und extrahiert die freigesetzte Base mit Diäthyläther aus der wässrigen Phase.
Die ätherische Lösung wird mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Nach Einengen der Lösung im Vakuum wird durch Zugabe von 40 ml 4-n. ätherischer Salzsäure das N6-Benzoyl-L-lysin-sec.butylester-hydrochlorid ausgefällt. Das Rohprodukt wird in methanolischer Lösung mit Tierkohle entfärbt und zweimal aus Methanol Diäthyläther kristallisiert, worauf die reine Verbindung bei 140 sintert und bei 142,5-143,5 unter Zersetzung schmilzt; [α]D22 , 10,8 (c = 2,03 in Methanol); [αD22 , + 15,9 (c = 2,03 in Wasser).
Beispiel 5
250 ml Benzylalkohol werden bei 5 tropfenweise mit 23,8 g (200 m Mol) Thionylchlorid versetzt. Dazu gibt man portionenweise unter gutem Rühren bei 5 25,0 g (100 m Mol) N6-Benzoyl-L-lysin. Das Gemisch wird während 18 Stunden auf 45 erwärmt. Nach dem Abkühlen fällt man das rohe Hydrochlorid durch Zugabe von 500ml Petroläther als öl aus. Die es wird zur Reinigung in 100 ml Wasser aufgenommen und unter Eiskühlung mit 20 g (188 m Mol) Natriumcarbonat versetzt. Die freigesetzte Base wird mit Diäthyläther extrahiert.
Die organische Phase wird mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Nach Einengen der ätherischen Lösung im Vakuum fällt man das N6-Benzoyl-L-lysin-benzylester-hydrochlorid durch Zugabe von 30 ml 4-n. ätherischer Salzsäure aus. Das Rohprodukt wird noch zweimal aus Methanol-Diäthyläther kristallisiert. Die reine Verbindung schmilzt bei 161-163 unter Zersetzung; [α]D21 , -2,3 (c = 1,99 in Äthanol): [α]D21 , 5,5 (c = 2,00 in Wasser).
Beispiel 6 a) Zu 200 ml (4,94 Mol) auf -10 abgekühltes Methanol tropft man bei -10 18,3 ml (250 m Mol)
Thionylchlorid. Zur erhaltenen Lösung werden unter gutem Rühren bei -10 27,2 g (100 mMol) N6-Octanoyl-L-lysin gegeben. Man lässt das Reaktionsgemisch innerhalb einer Stunde Raumtemperatur annehmen.
Dabei geht das Ausgangsmaterial vollständig in Lösung. Anschliessend wird die Reaktionslösung 4 Stunden auf 40 erwärmt; dann wird das Methanol im Vakuum abdestilliert, der ölige Rückstand zur vollständigen Entfernung von Salzsäure und Schwefeldioxid mehrmals in Methanol gelöst und das Lösungsmittel jeweils wieder abdestilliert. Das erhaltene Hydrochlorid wird in 20 ml Eiswasser gelöst und die wässerige Lösung unter Eiskühlung mit l-n. Natronlauge auf pH 9,5 eingestellt. Man extrahiert die freigesetzte Base mit Essigsäure-äthylester, wäscht die Essigsäure-äthylester Lösung mit Wasser und trocknet sie über Natriumsulfat.
Nach Entfernung des Lösungsmittels im Vakuum wird das zurückbleibende Öl in 50 ml Methanol gelöst und unter Eiskühlung mit 35 ml 3-n. ätherischer Salzsäure versetzt. Durch Zugabe von 400 ml Diäthyläther wird das rohe N6-Octanoyl-L-lysin-methylester-hydro- chlorid ausgefällt. Zur Reinigung kristallisiert man das Rohprodukt zweimal aus Methanol-Essigsäure-äthylester-Diäthyläther; Smp. 149-150 ; [α]D21 , +15,7 (c = 2,06 in Methanol); [α]D21 , 15,5 (c = 1,06 in Wasser). b) Analog Beispiel 6a) stellt man aus N5-Octanoyl- L-lysin mit Benzylalkohol das NS-Octanoyl-L-lysin- benzylester-hydrochlorid her, Smp. 144-145 (aus Methanol-Essigsäure-äthylester-Diäthyläther; [α]D22 , -5,6 (c = 1,57 in Wasser).
Die Ausgangssubstanz von Beispiel 6a) und 6b), das N6-Octanoyl-L-lysin wird wie folgt erhalten: c) Eine Lösung von 54,8 g (300mMol) L-Lysin hydrocblorid in 480 ml Wasser wird mit 55 g basi schcm Kupfercarbonat (2CuCO2, Cu(OH)2) versetzt und während 30 Minuten zum Sieden erhitzt. Man filtriert das überschüssige Kupfercarbonat ab und wäscht es mit 80 ml Wasser. Die erhaltene tiefblaue Kupferlysinatlösung wird auf 0 abgekühlt und tropfenweise innerhalb einer Stunde bei 0 bis +30 unter intensivem Rühren mit 53,7 g (330 m Mol) Octanoylchlorid versetzt. Man rührt das Reaktionsgemisch 6 Stunden bei 0 weiter und hält während der Reaktion durch Zutropfen von 4-n.
Natronlauge ein pH von 8 bis 9 ein.
Anschliessend wird der im Verlauf der Reaktion ausgefallene Kupferkomplex von N6-Octanoyl-L-lysin abfiltriert, gut mit Wasser und Aceton gewaschen und getrocknet. Zur Entkupferung löst man den Kupferkomplex in 1000 ml 2-n. Salzsäure und leitet in die Lösung während einer S@unde Schwefelwasserstoff ein. Der überschüssige Schwefelwasserstoff wird dann durch einen kräftigen Luftstrom ausgetrieben. Nach Abfiltrie ren des ausgefallenen Kupfersulfides wird das Filtrat mit konz. Ammoniak aus pH 6 eingestellt, worauf das rohe N6-Octanoyl-L-lysin ausfällt. Es wird abfikriert, mit Wasser und Äthanol gewaschen und zweimal aus Wasser-Athanol kristallisiert; Smp. 259-261 (Zersetzung); [a] D220, + 17,10 (c = 0,94 in 2-n. Salzsäure).
Beispiel 7 a) Man fügt bei -10 tropfenweise 6,55 g (55 m Mol) Thionylchlorid zu 30 ml Methanol und versetzt diese Lösung bei -10 bis -5 portionenweise mit 13, 2 g (50 m Mol) NG-Phenylacetyl-Llysin, Dann lässt man das Reaktionsgemisch stehen, bis die Temperatur auf 200 angestiegen ist und erwärmt es während 6 Stunden auf 40 . Die erhaltene schwach gelbliche Lösung wird im Vakuum eingedampft, der Rückstand zur Entfernung des Schwefeldioxids und überschüssigen Chlorwasserstoffs wiederholt in Methanol und Diäthyläther aufgenommen und im Vakuum eingeengt.
Man verreibt das zurückbleibende Ö1 mehrmals mit frischem Methanol und Diäthyläther, bis es kristallisiert.
Das erhaltene N6-Phenyl-acetyl-L-lysin-methylesterhydrochlorid wird mit Diäthyläther gewaschen, im Vakuum getrocknet und aus Methanol-Essigsäureäthyl- ester-Diäthyläther kristallisiert, Smp. 125-126 ; ta]220, +16,8" (c = 2,03 in Methanol).
Beispiel 8
Eine Suspension von 13, 2 g (50 m Mol) N6-Phe nylacetyl-L-lysin in einer Lösung von 100 ml (970 mMol) Benzylalkohol, 100 ml Tetrachlorkohlenstoff und 8,7 g (55 m Mol) Benzolsulfonsäure wird während 16 Stunden zum Sieden erhitzt. Dabei geht das Ns-Phenylacetyl-L-lysin in Lösung. Das entstehende Wasser wird während der Reaktion mit Tetrachlorkohlenstoff fortlaufend azeotrop abdestilliert.
An Ende der Reaktion wird der Tetrachlorkohlen- stoff im Vakuum entfernt und dann der Benzylalkohol im Hochvakuum abdestilliert. Das zurückbleibende gelbe Ö1 wird in 120 ml eiskaltem Wasser gelöst, die Lösung unter Eiskühlung mit l-n. Natronlauge auf pH 9 gebracht und in der Kälte viermal mit je 150ml Essigsäure-äthylester extrahiert. Die vereinigten Essig s-ureäthyle ter-Extrakte werden dreimal mit je 40 ml Eiswassser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Nach Entfernung des Lösungsmittels im Vakuum wird das zurückbleibende öl in 20 ml Methanol gelöst und unter Eiskühlung mit 45 ml 1,21-n. ätherischer Salzsäure versetzt.
Durch Zugabe von 200 ml Diäthyl äther wird das NG-Phenylacetyl-Llysin-benzylester- hydrochlorid vollständig ausgefällt. Zur Reinigung wird das rohe Hydrochlorid aus Chloroform-Essigsäure äthylester-Diäthyläther und dann aus Methanol-Essigsäure-äthylester-Diäthyläther kristallisiert, Smp. 135 136 ;[α]D22 , + 4,0 (c = 2,07 in 1-n. Salzsäure).
Beispiel 9
Analog Beispiel 8 erhält man aus N6-Phenylacetyl- L-lysin mit sec. Butanol das Ns-Phenylacetyl-L-lysin- sec.butylester-hydrochlorid vom Smp. 136-137 (aus Methanol-Aceton-Diäthyläther); [α]D22 , + 14,40 (c = 1,97 in Methanol); [α]D22 , + 15,40 (c = 1,03 in Wasser).
Beispiel 10 a) 250 ml (6,2 Mol) Methanol werden auf -10 abgekühlt und bei -10 tropfenweise mit 18,3 ml (250 m Mol) Thionylchlorid versetzt. Zu dieser Lösung gibt man unter gutem Rühren bei -10 (100 m Mol) feingep ulvertes No-Phenoxyacetyl-L-lysin. Man lässt die klare, farblose Reaktionslösung Raumtemperatur annehmen und erwärmt sie 5,5 Stunden auf 40 . Dann wird die Reaktionslösung im Vakuum eingeengt, das zurückbleibende Ö1 mehrmals in Methanol gelöst und das Lösungsmittel jeweils im Vakuum entfernt. Das zurückbleibende, ölige Hydrochlorid wird aus Methanol Essigsäure-äthylester-Diäthyläther kristallisiert. Zur Reinigung werden 30 g (90 m Mol) des erhaltenen No- Phenoxyacetyl-L-lysin-methylester-hydrochlorids bei 0 in 100 ml l-n.
Natronlauge gelöst. Die freie Base wird mit Essigsäure-äthylester unter Eiskühlung extrahiert, die organische Phase mit Eiswasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Die Lösung wird im Vakuum bis auf 50 ml eingeengt und das Hydrochlorid durch Zugabe von 35 ml 2-n. ätherischer Salzsäure bei 0 ausgefällt. Nach zweimaliger Kristallisation aus Methanol-Essigsäure-äthylester-Diäthyläther schmilzt das N6-Phenoxyacetyl-L-lysin-methylester-hydrochlorid bei 123-125 ; [α]D22 , + 13,8 (c = 2,07 in Wasser); [α]D22 , +16,4 (c = 2,07 in Methanol).
Die Ausgangssubstanz, das N6-Phenoxyacetyl-L-lysin wird wie folgt hergestellt: b) Eine Lösung von 18,3 g (100 m Mol) L-Lysin hydrochlorid in 80 ml Wasser wird mit 18,3 g basischem Kupfercarbonat (2CuCO8, Cu(OH)2 versetzt und für 30 Minuten zum Sieden erhitzt. Das überschüssige Kupfercarbonat wird abgesaugt, mit Wasser nachgewaschen, die blaue Lösung auf 0 abgekühlt, und tropfenweise innerhalb von drei Stunden unter intensivem Rühren bei 0 mit 25,6 g (150 m Mol) Phenoxyacetylchlorid versetzt. Dann rührt man noch 3 Stunden bei 0 weiter. Durch Zutropfen von 2-n.
Natronlauge wird das pH während der Reaktion bei 8,5 bis 9 gehalten. Der abgeschiedene Kupferkomplex von N6-Phenoxy-acetyl-L-lysin wird abfiltriert, mit Wasser und Aceton gut gewaschen und getrocknet.
30,5 g des erhaltenen feingepulverten Kupferkomplexes werden in eine siedende Lösung von 29,2 g (100 mMol) N,N,N',N'-Äthylendiamin-tetraessigsäure in 125 ml Wasser und 1000 ml 2-n. Natronlauge eingetragen. Eine kleine Menge eines unlöslichen Nebenproduktes wird abfiltriert und das Filtrat in einem Eisbad erkalten gelassen. Dabei scheidet sich farbloses N6-Phenoxy-acetyl-L-lysin ab. Es wird abfiltriert, mit wenig Wasser und Äthanol gewaschen und im Vakuum getrocknet. Durch Einengen der Mutterlauge lässt sich noch eine weitere Menge der Verbindung gewinnen. Das Rohprodukt wird aus Wasser-At- hanol kristallisiert und schmilzt bei 230-231 unter Zersetzung.
Beispiel 11 a) 9,1 ml (125 m Mol) Thionylchlorid werden zu 120 ml (2,96 Mol) Methanol getropft, das auf -10 abgekühlt ist. In diese Lösung werden bei -10 14,8 g (50 m Mol) Ne-Phenylmercapto-L-lysin portionenweise unter gutem Rühren eingetragen. Man lässt die Reaktionslösung Raumtemperatur annehmen und erwärmt sie dann 5,5 Stunden auf 40 . Dann wird das Lösungsmittel im Vakuum entfernt und das ölige Hydrochlorid zur vollständigen Entfernung von Salzsäure und Scfiwefeldioxid wiederholt in Methanol aufgenommen und das Lösungsmittel jeweils wieder abdestilliert. Das zurückbleibende Öl wird durch Behandeln mit Diäthyl äther zur Kristallisation gebracht.
Das rohe N3-Phenyl- mercapto-L-lysin-methylester-hydrochlorid wird zweimal aus Methanol-Essigsäure-äthylester-Diäthyläther kristallisiert, Smp. 161-163 ; [α]D22 , +13,5 (c = 2,04 in Wasser); [al280, +14,5 (c = 2,0 in Methanol).
Die Ausgangssubstanz, das N6-Phenylmercapto L-lysin wird wie folgt erhalten: b) 84 g (460 m Mol) L-Lysin-hydrochlorid werden in 800 ml Wasser gelöst, mit 84 g basischem Kupfercarbonat (2CuCO8, Cu(OII)2) versetzt und während 30 Minuten zum Sieden erhitzt. Nach Entfernung von unverändertem Kupfercarbonat werden innerhalb von 3 Stunden unter intensivem Rühren bei 0 128 g (690 m Mol) Phenylmercaptoacetylchlorid zur tiefblauen Kupferlysinat-Lösung getropft. Zum Schluss rührt man das Reaktionsgemisch 3 Stunden bei 0 .
Während der Reaktion wird das pH durch Zugabe von 6-n. Natronlauge zwischen 8,5 bis 9 gehalten. Der als feiner, hellblauer Niederschlag ausgefallene Kupferkomplex des N3-Phenylmercaptoacetyl-L-lysins wird abfiltriert, mit Wasser und Aceton gewaschen und getrocknet.
110 g des erhaltenen Kupferkomplexes werden in 1600 ml Wasser und 1600 ml Äthanol suspendiert und mit einer Lösung von 60 g (205 m Mol) N, N, N', N'-Äthylendiamin-tetraessigsäure in 200 ml 2-n.
Natronlauge versetzt. Das Gemisch wird am Rückfluss zum Sieden erhitzt, bis eine klare Lösung entsteht.
Nach Filtration lässt man die Lösung in einem Eisbad erkalten. Dabei scheidet sich das N6-Phenylmercapto- acetyl-L-lysin in Form von farblosen Kristallen ab. Das Rohprodukt wird abgenutscht, mit Wasser-Äthanol Gemisch (1:1) gewaschen und getrocknet. Durch Einengen der Mutterlauge kann eine weitere Menge des Rohproduktes erhalten werden. Zur vollständigen Reinigung wird das N6-Phenylmercaptoacetyl-Llysin aus Wasser-Äthanol (1:1) kristallisiert, Smp. 230-232 unter Zersetzung; [a1230, 15,0" (c = 0,98 in 2-n. Salzsäure).
Process for the production of new aminocarboxylic acid esters
The present invention relates to a process for the preparation of new aminocarboxylic acid esters.
It has surprisingly been found that compounds of the formula I,
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in which Rt is an aliphatic or araliphatic hydrocarbon radical of at most 12 carbon atoms and R is a hydrocarbon radical of at most 12 carbon atoms, where, if R2 is phenyl, R1 must contain at least 3 carbon atoms in their DL, D and L form, as well as their Addition salts with inorganic or organic acids show an excellent antiallergic and anti-inflammatory effect and at the same time have a high therapeutic index.
The compounds of formula I and their acid addition salts are suitable because of their antiallergic and anti-inflammatory activity as active ingredients in drugs for the treatment of allergic diseases and for transplant protection or for the treatment of inflammations of various origins, such as. B. Affects of the rheumatic form, post-traumatic and post-operative inflammation and swellings, inflammation of the blood and lymph vessels and - in addition to antibiotics or chemotherapeutic - bacterial or viral infections.
The antiallergic and anti-inflammatory effectiveness can be demonstrated in standard tests such as B. can be detected in rats and guinea pigs.
The new agents for the treatment of allergies and inflammations of various origins contain compounds of the formula I as active ingredient. In this formula, R, as an aliphatic and araliphatic radical, can be, for example, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, sec-butyl -, isobutyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, 1,2-dimethylpropyl, etc. to dodecyl, the benzyl, 2-phenethyl, 1- and 2-naphthylmethyl groups.
Furthermore, as an aliphatic, araliphatic or aromatic radical, R2 can mean, for example, the following groups: the methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, sec-butyl, isobutyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, 2,2-dimethyl-propyl, etc. to dodecyl, benzyl, 2-phenethyl, 1- and 2-naphthylmethyl, phenyl or the naphthyl group. Rt and R2 radicals which contain a benzene or naphthalene ring can also be substituted in these rings by the methyl or ethyl group.
To prepare a compound of the formula I according to the invention, a compound of the formula II is used
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in which R2 has the meaning given under formula I, or a reactive derivative of such an acid, with an aliphatic or araliphatic alcohol of formula III
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and, if desired, converts the ester obtained into an addition salt of an inorganic or organic acid.
For example, an acid of the formula II or a reactive functional derivative of such is reacted with an aliphatic or araliphatic alcohol of the formula III, in which Rt has the meaning given under formula I. This implementation of the free carboxylic acid can, for. B. with the help of a mineral acid such as hydrogen chloride or conc. Sulfuric acid, an aromatic sulfonic acid such as p-toluene or benzenesulfonic acid, and also of thionyl chloride or sulfuryl chloride. The solvent used is excess alcohol and / or an inert solvent. Suitable inert solvents are, for example, hydrocarbons, such as benzene or toluene, and also chlorinated hydrocarbons, such as chloroform and carbon tetrachloride.
If water separates out during the reaction, it is preferably removed by azeotropic distillation.
Instead of a free acid of the formula II you can also use a lower ester, such as. B. the methyl or ethyl ester with an aliphatic or araliphatic alcohol of the formula III. This transesterification is preferably carried out in excess alcohol in the presence of a catalyst, such as. B. sodium methylate or aluminum isopropylate made.
Suitable starting materials of the general formula III are, for example, those whose radicals RJ correspond to the groups explicitly listed below in formula I.
According to a variant of this process, an acid of the formula II or a salt of such an acid can be allowed to act on a reactive ester of an aliphatic or araliphatic alcohol of the formula III. As such salts are alkali salts, such as sodium and potassium salts, or salts of organic bases such as pyridine, triethylamine or dicyclohexylethylamine, and as reactive esters of alcohols of the formula III halides, such as bromides or chlorides, carboxylic acid esters, such as. B. acetates, sulfites, also sulfates, benzene or toluenesulfonic acid esters. Halides and sulfates are preferably reacted with the salts mentioned, and acetates or sulfites with the corresponding free acids of the formula II. The conversion of the acetates and sulfites can, for. B. be made with the help of benzene or p-toluenesulfonic acid or perchloric acid.
Suitable starting materials of the formula II are, for. B. those whose radicals R2 agree with the groups explicitly listed below in formula I.
They can be prepared analogously to the N6-acetyl-L-lysine described in the literature.
The compounds of the formula I obtained by the process according to the invention are then, if desired, converted into their addition salts with inorganic and organic acids in the customary manner. For example, a solution of a compound of the formula I in an organic solvent, such as methanol, ethanol, diethyl ether, chloroform or methylene chloride, is mixed with the acid desired as the salt component or a solution thereof and the precipitated salt is separated off.
For use as medicinal substances, acid addition salts can be used instead of free bases; H. Salts with acids whose anions are pharmaceutically acceptable at the dosages in question. It is also advantageous if the salts to be used as medicinal substances are readily crystallizable and have little or no hygroscopic properties. For salt formation with compounds of the formula I, for. B. hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulphonic acid, khansulphonic acid, β-hydroxyethanesulphonic acid, acetic acid, lactic acid, oxalic acid, succinic acid, fumaric acid, maleic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, benzoic acid, salicylic acid as active substances, instead of emboxylic acid, phenyl acetic acid free bases into consideration.
The new active ingredients are administered orally, rectally and parenterally. The daily doses of the free bases or pharmaceutically acceptable salts thereof range between 10 and 800 mg for adult patients of normal weight. Suitable dosage unit forms, such as dragees, tablets, suppositories or ampoules, preferably contain 550 mg of an active ingredient according to the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
The following examples explain the preparation of the new compounds of the formula I. The temperatures are given in degrees Celsius.
example 1
1.04 ml (14.4 mol) of thionyl chloride are added dropwise to 12 ml of methanol at -10 "with thorough stirring, 2.26 g (12.0 mol) of N6-acetyl-L-lysine are added and the mixture is left Stand for 2 hours at 20 and 18 hours at 500. For work-up, the reaction mixture is evaporated in vacuo and freed from sulfur dioxide and hydrochloric acid by repeated dissolution in methanol and evaporation in vacuo, and the oil that remains is crystallized from methanol-acetone.
The N6-acetyl-L-lysine methyl ester hydrochloride obtained is very hygroscopic, sinters at 75 "and decomposes at 80-830 in the sealed tube; taJ250, + 17.2" (c = 2.05 in methanol); [a] D230, + 13.1 "(c = 1.92 in water).
The p-toluenesulfonate, prepared in the usual way, melts after crystallization from methanol-ether at 122-123.5 "with decomposition; [α] D20, + 14.70 (c = 1.99 in ethanol); [a] D21" , + 11.5 "(c = 2.04 in water).
Example 2
1.74 ml (24.0 mol) of thionyl chloride are added dropwise to 30 ml of benzyl alcohol with thorough stirring at 100, 2.26 g (12.0 mol) of N6-acetyl-L-lysine are added and the resulting mixture is stored at 30 for 34 hours and held at 60 for 9 hours. For working up, the reaction mixture is mixed with diethyl ether and then extracted several times with water. 2.5 g of sodium carbonate are added to the combined water extracts while cooling with ice, and the released base is extracted with diethyl ether. The ethereal solution is dried over sodium sulfate, concentrated in vacuo and at 0 with excess l-n. ethereal hydrochloric acid added.
The precipitated oil is reprecipitated twice from absolute diethyl ether-methanol and crystallized from ethanol-acetone. The N3-acetyl-L-lysine benzyl ester hydrochloride obtained decomposes at 133-134 "; [a] D230, -9, -9.80 (c = 1.04 in water), [a1250, -2.5 "(c = 1.04 in ethanol).
Example 3
200 ml of dodecyl alcohol are added dropwise at 25 with 28.7 g (240 mmol) of thionyl chloride.
To the solution obtained, 30.0 g (120 mol) of N6-benzoyl-L-lysine are added in portions at 25 with thorough stirring. The reaction mixture is heated to 45 for 28 hours, then cooled to 20 and treated with 500 ml of diethyl ether, whereupon the crude N6-benzoyl-L-lysine dodecyl ester hydrochloride precipitates. For purification, the crude product is crystallized twice from ethanol-acetone, whereupon the compound sinters at 139 and melts at 139.5-140.5 with decomposition; [α] D22, 6.2 (c = 1.93 in methanol); [α] D22, +1.1 (c = 2.02 in dimethylformamide).
Example 4
At 100, 35.9 g (300 mmol) of thionyl chloride are added dropwise to 400 ml of sec-butanol, cooled to 100. The solution is heated to 150 and 37.5 g (150 mol) of N6-benzoyl-L-lysine are added in portions, with thorough stirring. The suspension is heated to 45 hours for 40 hours, a clear solution being formed. The solvent is then evaporated off in vacuo, the residue is taken up several times in acetone to remove the sulfur dioxide and the excess hydrogen chloride and the solvent is distilled off in each case in vacuo. The remaining oil is dissolved in 200 ml of water. While cooling with ice, 30 g (283 mol) of sodium carbonate are added and the released base is extracted from the aqueous phase with diethyl ether.
The ethereal solution is washed with water and dried over sodium sulfate. After the solution has been concentrated in vacuo, 40 ml of 4-n. ethereal hydrochloric acid precipitates the N6-benzoyl-L-lysine-sec.butyl ester hydrochloride. The crude product is decolorized in methanolic solution with animal charcoal and crystallized twice from methanol diethyl ether, whereupon the pure compound sinters at 140 and melts at 142.5-143.5 with decomposition; [α] 22 D, 10.8 (c = 2.03 in methanol); [αD22, + 15.9 (c = 2.03 in water).
Example 5
250 ml of benzyl alcohol are added dropwise at 5 with 23.8 g (200 mol) of thionyl chloride. 25.0 g (100 m mol) of N6-benzoyl-L-lysine are added in portions with thorough stirring at 5. The mixture is heated to 45 over 18 hours. After cooling, the crude hydrochloride is precipitated as an oil by adding 500 ml of petroleum ether. It is taken up in 100 ml of water for cleaning and treated with 20 g (188 mol) of sodium carbonate while cooling with ice. The released base is extracted with diethyl ether.
The organic phase is washed with water and dried over sodium sulfate. After concentrating the ethereal solution in vacuo, the N6-benzoyl-L-lysine benzyl ester hydrochloride is precipitated by adding 30 ml of 4-n. essential hydrochloric acid. The crude product is crystallized twice from methanol diethyl ether. The pure compound melts at 161-163 with decomposition; [α] D21, -2.3 (c = 1.99 in ethanol): [α] D21, 5.5 (c = 2.00 in water).
Example 6 a) To 200 ml (4.94 mol) of methanol cooled to -10 is added dropwise at -10 18.3 ml (250 mol)
Thionyl chloride. 27.2 g (100 mmol) of N6-octanoyl-L-lysine are added to the resulting solution with thorough stirring at -10. The reaction mixture is allowed to reach room temperature within one hour.
The starting material goes completely into solution. The reaction solution is then heated to 40 for 4 hours; then the methanol is distilled off in vacuo, the oily residue is dissolved several times in methanol to completely remove hydrochloric acid and sulfur dioxide and the solvent is distilled off again in each case. The hydrochloride obtained is dissolved in 20 ml of ice water and the aqueous solution with ice cooling with l-n. Sodium hydroxide solution adjusted to pH 9.5. The base released is extracted with ethyl acetate, and the ethyl acetate solution is washed with water and dried over sodium sulfate.
After removal of the solvent in vacuo, the remaining oil is dissolved in 50 ml of methanol and, while cooling with ice, with 35 ml of 3-n. ethereal hydrochloric acid added. The crude N6-octanoyl-L-lysine methyl ester hydrochloride is precipitated by adding 400 ml of diethyl ether. For purification, the crude product is crystallized twice from methanol-acetic acid-ethyl ester-diethyl ether; M.p. 149-150; [α] D21, +15.7 (c = 2.06 in methanol); [α] D21, 15.5 (c = 1.06 in water). b) Analogously to Example 6a), NS-octanoyl-L-lysine benzyl ester hydrochloride is prepared from N5-octanoyl-L-lysine with benzyl alcohol, melting point 144-145 (from methanol-ethyl acetate-diethyl ether; [? ] 22 D, -5.6 (c = 1.57 in water).
The starting substance of Example 6a) and 6b), the N6-octanoyl-L-lysine, is obtained as follows: c) A solution of 54.8 g (300 mmol) of L-lysine hydrochloride in 480 ml of water is mixed with 55 g of basic copper carbonate (2CuCO2, Cu (OH) 2) and heated to boiling for 30 minutes. The excess copper carbonate is filtered off and washed with 80 ml of water. The deep blue copper lysinate solution obtained is cooled to 0 and 53.7 g (330 m mol) of octanoyl chloride are added dropwise over the course of one hour at 0 to +30 with vigorous stirring. The reaction mixture is stirred for a further 6 hours at 0 and maintained during the reaction by adding dropwise 4-n.
Caustic soda has a pH of 8 to 9.
The copper complex of N6-octanoyl-L-lysine which has precipitated out in the course of the reaction is then filtered off, washed well with water and acetone and dried. To remove the copper, dissolve the copper complex in 1000 ml of 2-n. Hydrochloric acid and introduces hydrogen sulfide into the solution for a period of time. The excess hydrogen sulfide is then driven off by a powerful stream of air. After filtering off the precipitated copper sulfide, the filtrate is concentrated with. Ammonia adjusted to pH 6, whereupon the crude N6-octanoyl-L-lysine precipitates. It is filtered off, washed with water and ethanol and crystallized twice from water-ethanol; M.p. 259-261 (decomposition); [a] D220, + 17.10 (c = 0.94 in 2N hydrochloric acid).
Example 7 a) At -10, 6.55 g (55 mol) of thionyl chloride are added dropwise to 30 ml of methanol and this solution is added in portions at -10 to -5 with 13.2 g (50 mol) of NG-phenylacetyl-llysine The reaction mixture is then left to stand until the temperature has risen to 200 and heated to 40 over 6 hours. The pale yellowish solution obtained is evaporated in vacuo, the residue is repeatedly taken up in methanol and diethyl ether to remove the sulfur dioxide and excess hydrogen chloride and concentrated in vacuo.
The remaining oil is triturated several times with fresh methanol and diethyl ether until it crystallizes.
The N6-phenyl-acetyl-L-lysine methyl ester hydrochloride obtained is washed with diethyl ether, dried in vacuo and crystallized from methanol-ethyl acetate-diethyl ether, mp 125-126; ta] 220, +16.8 "(c = 2.03 in methanol).
Example 8
A suspension of 13.2 g (50 mol) of N6-Phe nylacetyl-L-lysine in a solution of 100 ml (970 mmol) of benzyl alcohol, 100 ml of carbon tetrachloride and 8.7 g (55 mol) of benzenesulfonic acid is added for 16 hours heated to boiling. The Ns-phenylacetyl-L-lysine goes into solution. The water formed is continuously azeotropically distilled off during the reaction with carbon tetrachloride.
At the end of the reaction, the carbon tetrachloride is removed in vacuo and the benzyl alcohol is then distilled off in a high vacuum. The yellow oil that remains is dissolved in 120 ml of ice-cold water, the solution with ice-cooling with l-n. Brought sodium hydroxide solution to pH 9 and extracted four times in the cold with 150 ml of ethyl acetate each time. The combined vinegar s-ureäthyle ter extracts are washed three times with 40 ml of ice water and dried over sodium sulfate. After removal of the solvent in vacuo, the remaining oil is dissolved in 20 ml of methanol and, while cooling with ice, with 45 ml of 1.21-n. ethereal hydrochloric acid added.
By adding 200 ml of diethyl ether, the NG-phenylacetyl-Llysine-benzyl ester hydrochloride is completely precipitated. For purification, the crude hydrochloride is crystallized from chloroform-ethyl acetate-diethyl ether and then from methanol-ethyl acetate-diethyl ether, mp 135 136; [α] D22, + 4.0 (c = 2.07 in 1-n . Hydrochloric acid).
Example 9
Analogously to Example 8, Ns-phenylacetyl-L-lysine-sec.butyl ester hydrochloride of melting point 136-137 (from methanol-acetone-diethyl ether) is obtained from N6-phenylacetyl-L-lysine with sec. Butanol; [α] 22 D, + 14.40 (c = 1.97 in methanol); [α] 22 D, + 15.40 (c = 1.03 in water).
Example 10 a) 250 ml (6.2 mol) of methanol are cooled to -10 and, at -10, 18.3 ml (250 mol) of thionyl chloride are added dropwise. Finely powdered no-phenoxyacetyl-L-lysine is added to this solution with thorough stirring at -10 (100 m mol). The clear, colorless reaction solution is allowed to reach room temperature and is heated to 40 for 5.5 hours. The reaction solution is then concentrated in vacuo, the oil that remains is dissolved several times in methanol and the solvent is removed in each case in vacuo. The oily hydrochloride that remains is crystallized from methanol, ethyl acetate, and diethyl ether. For purification, 30 g (90 mol) of the resulting No-phenoxyacetyl-L-lysine methyl ester hydrochloride are added at 0 in 100 ml of l-n.
Sodium hydroxide solution dissolved. The free base is extracted with ethyl acetate while cooling with ice, the organic phase is washed with ice water and dried over sodium sulfate. The solution is concentrated in vacuo to 50 ml and the hydrochloride by adding 35 ml of 2-n. ethereal hydrochloric acid precipitated at 0. After two crystallizations from methanol-ethyl acetate-diethyl ether, the N6-phenoxyacetyl-L-lysine methyl ester hydrochloride melts at 123-125; [α] D22, + 13.8 (c = 2.07 in water); [α] D22, +16.4 (c = 2.07 in methanol).
The starting substance, N6-phenoxyacetyl-L-lysine, is prepared as follows: b) A solution of 18.3 g (100 mol) of L-lysine hydrochloride in 80 ml of water is mixed with 18.3 g of basic copper carbonate (2CuCO8, Cu (OH) 2 are added and the mixture is heated to the boil for 30 minutes. The excess copper carbonate is filtered off with suction, washed with water, the blue solution is cooled to 0, and 25.6 g (150 m mol.) Are added dropwise within three hours with vigorous stirring at 0 ) Phenoxyacetyl chloride is added and the mixture is then stirred for a further 3 hours at 0. By adding dropwise 2-n.
Sodium hydroxide solution, the pH is kept at 8.5 to 9 during the reaction. The deposited copper complex of N6-phenoxy-acetyl-L-lysine is filtered off, washed well with water and acetone and dried.
30.5 g of the finely powdered copper complex obtained are in a boiling solution of 29.2 g (100 mmol) of N, N, N ', N'-ethylenediamine-tetraacetic acid in 125 ml of water and 1000 ml of 2-n. Caustic soda entered. A small amount of an insoluble by-product is filtered off and the filtrate is allowed to cool in an ice bath. Colorless N6-phenoxy-acetyl-L-lysine separates out. It is filtered off, washed with a little water and ethanol and dried in vacuo. A further amount of the compound can be obtained by concentrating the mother liquor. The crude product is crystallized from water-ethanol and melts at 230-231 with decomposition.
Example 11 a) 9.1 ml (125 mol) of thionyl chloride are added dropwise to 120 ml (2.96 mol) of methanol which has cooled to -10. 14.8 g (50 mol) of Ne-phenylmercapto-L-lysine are introduced into this solution in portions at -10 with thorough stirring. The reaction solution is allowed to reach room temperature and is then heated to 40 for 5.5 hours. The solvent is then removed in vacuo and the oily hydrochloride is repeatedly taken up in methanol to completely remove hydrochloric acid and sulfur dioxide and the solvent is distilled off again in each case. The remaining oil is made to crystallize by treatment with diethyl ether.
The crude N3-phenyl-mercapto-L-lysine methyl ester hydrochloride is crystallized twice from methanol-ethyl acetate-diethyl ether, mp 161-163; [α] D22, +13.5 (c = 2.04 in water); [al280, +14.5 (c = 2.0 in methanol).
The starting substance, the N6-phenylmercapto L-lysine, is obtained as follows: b) 84 g (460 m mol) of L-lysine hydrochloride are dissolved in 800 ml of water, with 84 g of basic copper carbonate (2CuCO8, Cu (OII) 2) added and heated to boiling for 30 minutes. After the unchanged copper carbonate has been removed, 128 g (690 m mol) of phenyl mercaptoacetyl chloride are added dropwise to the deep blue copper lysinate solution over the course of 3 hours with vigorous stirring at 0. Finally, the reaction mixture is stirred at 0 for 3 hours.
During the reaction, the pH is adjusted by adding 6-n. Caustic soda kept between 8.5 to 9. The copper complex of N3-phenylmercaptoacetyl-L-lysine which has precipitated out as a fine, light blue precipitate is filtered off, washed with water and acetone and dried.
110 g of the copper complex obtained are suspended in 1600 ml of water and 1600 ml of ethanol and treated with a solution of 60 g (205 mol) of N, N, N ', N'-ethylenediamine-tetraacetic acid in 200 ml of 2-n.
Sodium hydroxide solution added. The mixture is heated to boiling under reflux until a clear solution is formed.
After filtration, the solution is allowed to cool in an ice bath. The N6-phenylmercapto-acetyl-L-lysine separates out in the form of colorless crystals. The crude product is filtered off with suction, washed with a water-ethanol mixture (1: 1) and dried. A further amount of the crude product can be obtained by concentrating the mother liquor. For complete purification, the N6-phenylmercaptoacetyl-lysine is crystallized from water-ethanol (1: 1), melting point 230-232 with decomposition; [a1230, 15.0 "(c = 0.98 in 2-n. hydrochloric acid).