Procédé de fabrication de tétracyclines halogénées
L'invention concerne un procédé pour la fabrication de tétracyclines halogénées par Xréaction d'une tétracycline avec un agent d'halogénation en présence e d'un acide fort. Par le procédé selon l'invention, on peut préparer, par exemple, une tétracycline halogênée en 7 en faisant réagir une tétracycline non substituée en 7 avec un agent d'halogénation, une tétracycline halogénée en lla en faisant réagir une tétracycline substituée en 7 avec un agent d'halogénation ou une tétracycline dihalogénée en 7 et lla en faisant réagir une tétracycline qui n'est pas substi- tuée en position 7 avec au moins deux équivalents d'un agent d'halogénation.
Comme agents d'halogénation, on peut citer les
N-haloamides telles que N-bromosuccinimide, N bromacétamide, N-bromaphtalimide, N-chlorosucci- nimide, N-iodosuccinimide. Comme autre exemple, on peut citer le brome.
Les halotétracyclines sont préparées en dissolvant une tétracycline, par exemple la 6-démethyl-6-dés- oxytétracycline ou 5-hydroxy-6-désoxytétracycJine dans un acide fort comme un acide minéral concen- tré, par exemple l'acide chlorhydrique, l'acide sulfuri- que, etenajoutant un agent d'halogénation, par exemple une N-haloamide, à savoir N-bromosuccini- mide, N-bromacétamide, N-bromaphtalimide, N chlorosuccinimide, N-iodosuccinimide. La réaction avec les haloamides est effectuée de préférence à des températures d'environ 0 à 200 C jusqu'à ce que la réaction soit complète.
Suivant une variante, par exemple, on peut utiliser, comme agent d'halogéna- tion, le brome dans un acide minéral fort, par exem- ple HBr, et dans un solvant organique convenable tel qu'un alcanoïque inférieur, par exemple acide acétique, acide propionique, etc., à des températures d'environ 10 à 500 C. La halotétfacycline ainsi formes peut être isolée à partir du milieu réactionnel par tout procédé convenable, par exemple par précipitation avec l'éther éthylique ou composé analogue et on peut purifier le produit par recristallisation à partir, de sa solution dans le mélange alcool-acétoneéther, de la manière habituelle.
Par le procédé selon 4'invention, on peut préparer une tétracycline de formule :
EMI1.1
dans laquelle Ri et Br, Cl ou I et Rg est H ou CHo lorsque R3 est H, et R2 est CH3 lorsque Rg est OH.
Les halotétracyclines sont des composés actifs au point de vue biologique et présentent l'activité antibactérienne sur un large spectre des tétracyclines précédemment connues. Le s, pectre antibactérien de certains de ces composés, représentant la quantité désirée pour inhiber la croissance de différentes bactéries typiques, est détermine par la méthode stan- dard par la technique des raies de dilution dans l'agarqagar qui est utilisée pour l'essai des nouveaux antibiotiques.
Les concentrations nunima pour l'in- hibition, exprimées en gamma/cm3 {le 7 < bromo-6- déméthyl-6-désoxytétracyaline, 7-bromo-6-désoxyté- tracycline et 7-iodo-6-désoxytétracyolinevis-à-vis de certains organismes témoins sont reportées sur le tableau ci-après. A titre de comparaison on a indiqué aussi l'activité de la tétracycline vis-à-vis des mêmes organismes.
Tableau
Organisme TÚtracycline 7-Bromo-6-dÚsoxy-tÚtracycline 7-Bromo-6-dÚmÚthyl-6-dÚsoxy-tÚtracycline 7-Iodo-6-dÚsoxy-tÚtracycline Mycobacterium ranae 1 0, 5 0, 25 4
Mycobacterium smegmatis ATCC 607 1 1 0, 25 8
Staphylococcus aureus 209P 2 1 1 2
Sarcina Lutea 1001 2 1 0, 5 2
Bacillus subtilis ATCC 6633 0, 5 0, 25 0, 25 0, 5
Streptococcus pyogenes C2Q3 0, 5 0, 25 0, 5 2 Streptococcus y ? 11 250 4 4 4
Staphylococcus albus N 69 > 250 8 8 15
Streptococcus ¯ N¯ 80 250 4 2 4
Staphylococcus aureus NY 104 2 1 1 2
Bacillus Cereus No 5 0, 25 0, 25 0,
5 2 Pseudomonas aeruginosa 15 250 31 > 250 Proteus vulgaris 8427 15 8 2 31 Escherichia coll ATCC 9637 15 250 31 > 250
Salmonella gallinarum 8 250 31 > 250
Escherichia coli N¯ 22 4 15 8 62
La 7-iododésoxytétracycline et la 7-bromodés oxytétracycline sont particulièrement utiles comme agents diagnostiques et comme agents thérapeuti- ques dans le diagnostic et le traitement du cancer.
La 7-iododésoxytétracycline et la 7-bromodésoxy- tétracycline semblent se concentrer dans les tissus proliférant rapidement comme ceux que l'on trouve lors de la croissance des tumeurs. On peut rendre ces composés radioactifs par introduction d'iode-131 ou brome-82 en position 7 sur le noyau. Ces composés marqués, du fait de rémission de radiations gamma et des particules bêta, permettent la découverte, la localisation et la diagnose des tissus néoplastiques. Dans certains cas, la même radiation peut être utilisée en thérapeutique en fournissant une radiation interne suffisamment localisée dans les cellules cancéreuses pour ralentir ou inhiber leur croissance.
Les procédés chimiques pour la préparation de ces composés marqués sont identiques aux procédés de préparation déjà décrits pour la préparation de composés non radioactifs avec la modification Úvidente, à savoir que l'on emploie le radio-isotope des halogènes convenables.
Exemple 1 :
Préparation de la 7-bromo-6-dÚsoxytÚtracycline
A une solution de 0, 2 g de 6-désoxytétracycline [J. A. C. S. 80, 5324 (1958)] dans 10cc d'acidle sulfu- rique concentré, à Oo C, on ajoute 76 mg de N bromosuccinimide. On maintient le mélange réactionnel à 00 C, pendant 30 mn et ensuite on l'ajoute len tement, goutte à goutte, à 200 ce d'éther froid. Il précipite un solide qu'on filtre et sèche. Le produit pèse 160 mg. On fait recristalliser ce produit à partir de sa solution dans le mélange éthanol-acétone-éther pour obtenir 120 mg de produit purifié.
Ce produit est 1, 2-1, 5 fois plus actif, au point de vue biologique, que la tétracycline.
Exemple 2 :
PrÚparation
de la 7-bromo-6-dÚmÚthyl-6-dÚsoxytÚtracycline
On conserve une solution de 200 mg (0,045 m. mole) de chlorhydrate de 6-déméthyl-6-désoxytétra- cycline [J. A. C. S. 80 5324 (1958)] et 80 mg (0, 45 m. mole) de N-bromosuccinimide dans 5, 0 ce d'acide sulfurique concentré, à la température du bain de glace, pendant 30 mn. On ajoute lentement le mélange réactionnel à 250 cc d'éther froid et le solide, qui se sépare, pèse 0, 2g. On fait rocristalliser une portion (25 mg) de ce produit à partir de sa solution dans le mélange éthanol/ether, ce qui donne 19 mg de 7-bromo-6-déméthyl-6-désoxytétracycline qui est 2, 2 à 2, 5 fois plus active que la tétracycline.
Exemple 3 :
PrÚparation de la 7-chloro-dÚsoxytÚtracycline
On répète le processus de l'exemple 1, sauf que l'on emploie la N-chlorosuccinimide comme agent d'halogénation. On isole le produit comme dans s l'exemple 1 et on obtient la 7-chlorodésoxytétra- cycline.
Exemple 4 : Preparatiofz
de la 7-chloro-6-dÚmÚthyl-6-dÚsoxytÚtracycline
On suit le processus de l'exemple 2, sauf que l'on emploie le N-chlorosuccinimide comme agent d'halogénation. On isole le produit comme à l'exem- ple 2 et on obtient la 7-chloro-6-dÚmÚthyl-6-dÚsoxy tëtracycline.
Exemple 5 :
Préparation de la 7-bromo-6-dÚsoxytÚtracycline
On dissout 85, 6 mg de 6-désoxytétracycline dans 3, 9 cc d'acide acétique et 1 ce d'acide acétique-HBr à 30 O/o. En agitant, on, ajoute 0, 22cc de brome moléculaire dans l'acide acétique (excès de 10"/o par rapport à 1 équivalent). Après repos pendant 65 heures à la température ambiante, on ajoute 10 cc d'éther et il se dépose lentement un solide cristallin jaune. Après 6 heures, on filtre Je solide et on sèche ; poids 68, 4 mg.
Exemple 6 :
Preparatiort
de la 7-bromo-5-hydroxy-6-desoxytetracycline
On agite une solution de 200mg (0, 42 m. mole) de 5-hydroxy-6-désoxytétracycline [J. A. C. S. 80, 5324 (1958)] et 75 mg (0,42 m.mole) de N-bromosuccinimide dans 5, 0 cc d'acide sulfurique concentré, à la température du bain de glace, pendant 10 mn.
On verse la solution lentement, dans 250 ce d'éther froid. On filtre le solide et on le sèche ; rondement 1, 8 g. On convertit ce produit en base libre en dissolvant dans l'eau, en ajustant I, pH de la solution à 6, 5 à l'aide de carbonate de sodium 1N et en soumettant à l'extraction avec le N-butanol. Rendement 75 mg.
L'activité microbiologique est égale à 45 o/o de celle de la tétracycline (l'activité du produit de départ 5-hydroxy-6-désoxytétracycline équivaut à 30 ouzo de celle de la tétracycline).
Exemple 7 :
Préparation dti sulfate de 7-iodo-6-désoxytétracycline
On agite une solution de 200 mg (0, 3 8 m. mole) de sulfate de 6-désoxytétracycLine dans 85, 5 mg (0, 35 m. mole) de N-iodosuccinim1de dans 5, 0 cc d'acide sulfurique concentré, à Oo C, pendant 40 mn.
On ajoute le mélange, goutte à goutte, à 250 cc d'éther froid. Le solide, qui se sépare, pèse 0, 16g.
On fait recristalliser une portion (50 mg) de ce produit à partir de sa solution dans le mélange méthylccllo- solve/chloroforme ; rendement 22 mg.
Exemple 8 :
PrÚparation du sulfate
de 7-iodo-5-hydroxy-6-desoxytetracycline
On répète le processus de l'exemple précédent, sauf que l'on emploie la 5-hydroxy-6-désoxytétra- cycline. On obtient la 7-iodo-5-hyklroxy-6-désoxy- tétracycline.
Exemple 9 :
Sulfate de 7-iodo-6-demethyl-6-desoxytetracycline
A une solution de 0, 2 g (0, 39 m. mole) de 6-dé méthyl-6-désoxytetracycline dans 5, 0 cc diacide sulfurique concentré froid (00 C), on ajoute 88 mg (0, 39 m. mole) de N-iodosuccinimide. On stocke le mélange à 00 C, pendant 40 mn, et on le verse lentoment dans 250 cc, d'éther froid. Le solide, qui se sépare, pèse 0, 157 g. On fait recristallliser une por- tion 50 mg de ce produit à partir de sa solution dans le mélange méthyl-aeslosolve/chloroforme ; rendement 20 mg.
Exemple 10 :
Préparation du disulfate d'amina-bromo-6-desoxytetracycline
A une solution de 100 mg de disulfate d', amino- 6-désoxytétracyclin, e dans 4, 0 cc d'acide s, ulfurique concentré, en agitant, dans un bain de glace, on ajoute 32mg de N-bromo-succinimide. On agite la solution pendant 30 mn et on la verse lentement dans 100 ce d'éther anhydre froid, en agitant. On recueille le disulfate d'amino-bromodÚsoxytÚtracycline résultant, on le lave avec de l'éther anhydre froid (108 mg) Rf = 0, 45 (n-butanal : pH 2, tampon phosphate).
Exemple 11: Preparation de sulfate
de bromo-nitro-6-déméthyl-6-désoxytétracycline
(isomère A)
On dissout 920 mg (2 m. moles de nitro-6-démé- thyl-6-désoxytétracyoline (isomère A) dans 20 ce de
H2SO4 concentré à 00 C. A la solution froide agitée, on ajoute 256mg (2m. moles) de N-bromosuccinimide. On agite le mélange réactionnel à 00 C, pendant 30 mn. On verse le mélange réactionnel brun foncé, froid, dans 1, 1 litre d'éther agité (à 0OC) à une cadence telle que l'on puisse maintenir la tem- pérature au-dessous de 5 C.
Il précipite un solide légèrement jaune, fin, que l'on filtre sous vide et qu'on lave avec l'éther (trois fois 50 cc). On sèche le solide sous vide à la température ambiante, pendant 2 heures. Poids 1, 27 g.
Exemple 12 :
PrÚparation de sulfate
de bromo-nitro-6-dÚmÚthyl-6-dÚsoxytÚtracycline
(isom¯re B)
On dissout 130mg (0, 3 m.mole) de nitro-6-dé- méthyl-6-désoxytétracycline (isomère B) dans 3 cc de H2SO4 concentré à 0O C. A la solution, on ajoute 59, 3 mg (0, 3 m. mole) de N-bromo-succinimide. On agite la solution, à froid (00 C), pendant 45 mn. On verse la solution réactionnelle brun foncé, froide, dans 150 cc d'éther agité à 00 C à une vitesse telle que la température se maintienne au-dessous de 5 C.
On filtre le solide légèrement jaune qui précipite, on le lave avec de l'éther froid (3 fois 5 cc) et on sèche sous vide, Ó 60¯ C, pendant l heure. Poids 170 mg.
Exemple 13: Préparation du disulfate
de bromo-amino-6-demethyl-6-desoxytetracycline
(isomère B)
On dissout 92 mg d'. amino-6-déméthyl-6-désoxy- tétracycline (isomère B) dans 3 cc de HOSTOS concentré, à 00 C. A la solution brun foncé, on ajoute 37, 5 mg de N-bromo-succinimide. On agite le mélange réactionnel à 00 C, pendant une heure et on verse ensuite dans 150 cc d'éther agité, à 00 C, à une cadence telle que la température reste au-dessous de 5O C. On filtre le solide brun, tanin, qui précipite, on le lave avec de l'éther froid et on le sèche sous vide, à la température ambiante, pendant 3 heures.
Poids 64 mg, Rf = 0, 73 (N-butanol : pH 2, tampon phosphate).
Exemple 14 :
Préparation
du sulfate de dibromo-6-désoxytétracycline
On agite une solution de 60, 5 mg (0, 1 m. mole) de sulfate de 6-bromo-6-désoxytétracycline et 18 mg (0, 1 m. mole) de N-bromosuccinimide dans 2, 0 cc d'acide sulfurique concentré à la température du bain de glace, pendant une heure. On verse la solution lentement, dans 200 cc d'éther glacé. Le solide qui se sépare pèse 30 mg.
Process for manufacturing halogenated tetracyclines
The invention relates to a process for the manufacture of halogenated tetracyclines by reacting a tetracycline with a halogenating agent in the presence of a strong acid. By the process according to the invention, one can prepare, for example, a halogenated tetracycline at 7 by reacting an unsubstituted tetracycline at 7 with a halogenating agent, a halogenated tetracycline at 11a by reacting a substituted tetracycline at 7 with a halogenating agent or a dihalogenated tetracycline at 7 and 11a by reacting a tetracycline which is not substituted in the 7-position with at least two equivalents of a halogenating agent.
Mention may be made, as halogenating agents, of
N-haloamides such as N-bromosuccinimide, N-bromacetamide, N-bromaphthalimide, N-chlorosuccinimide, N-iodosuccinimide. As another example, there may be mentioned bromine.
Halotetracyclines are prepared by dissolving a tetracycline, for example 6-demethyl-6-de-oxytetracycline or 5-hydroxy-6-deoxytetracycline in a strong acid such as a concentrated mineral acid, for example hydrochloric acid, sulfuric acid, andadding a halogenating agent, for example an N-haloamide, namely N-bromosuccinimide, N-bromacetamide, N-bromaphthalimide, N chlorosuccinimide, N-iodosuccinimide. The reaction with the haloamides is preferably carried out at temperatures from about 0 to 200 ° C until the reaction is complete.
Alternatively, for example, as the halogenating agent, bromine in a strong mineral acid, for example HBr, and in a suitable organic solvent such as a lower alkanoic, for example acetic acid can be used. , propionic acid, etc., at temperatures of about 10 to 500 C. The halotetfacycline thus formed can be isolated from the reaction medium by any suitable method, for example by precipitation with ethyl ether or the like and it is possible to isolate it from the reaction medium. purify the product by recrystallization from its solution in the alcohol-acetoneether mixture, in the usual manner.
By the process according to the invention, it is possible to prepare a tetracycline of formula:
EMI1.1
wherein R1 and Br, Cl or I and Rg is H or CHo when R3 is H, and R2 is CH3 when Rg is OH.
Halotetracyclines are biologically active compounds and exhibit antibacterial activity over a broad spectrum of previously known tetracyclines. The antibacterial s, pectre of some of these compounds, representing the amount desired to inhibit the growth of different typical bacteria, is determined by the standard method by the technique of dilution lines in the agarqagar which is used for the test. new antibiotics.
The nunima concentrations for the inhibition, expressed in gamma / cm3 {the 7 <bromo-6-demethyl-6-deoxytetracyaline, 7-bromo-6-deoxytetracycline and 7-iodo-6-deoxytetracyoline vis-à-vis of certain control organisms are shown in the table below. By way of comparison, the activity of tetracycline towards the same organisms has also been indicated.
Board
Organism TÚtracycline 7-Bromo-6-dÚsoxy-tÚtracycline 7-Bromo-6-dÚmÚthyl-6-dÚsoxy-tÚtracycline 7-Iodo-6-dÚsoxy-tÚtracycline Mycobacterium ranae 1 0, 5 0, 25 4
Mycobacterium smegmatis ATCC 607 1 1 0, 25 8
Staphylococcus aureus 209P 2 1 1 2
Sarcina Lutea 1001 2 1 0, 5 2
Bacillus subtilis ATCC 6633 0, 5 0, 25 0, 25 0, 5
Streptococcus pyogenes C2Q3 0, 5 0, 25 0, 5 2 Streptococcus y? 11 250 4 4 4
Staphylococcus albus N 69> 250 8 8 15
Streptococcus ¯ N¯ 80 250 4 2 4
Staphylococcus aureus NY 104 2 1 1 2
Bacillus Cereus No 5 0, 25 0, 25 0,
5 2 Pseudomonas aeruginosa 15 250 31> 250 Proteus vulgaris 8427 15 8 2 31 Escherichia coll ATCC 9637 15 250 31> 250
Salmonella gallinarum 8 250 31> 250
Escherichia coli N¯ 22 4 15 8 62
7-iododeoxytetracycline and 7-bromode oxytetracycline are particularly useful as diagnostic agents and as therapeutic agents in the diagnosis and treatment of cancer.
7-iododeoxytetracycline and 7-bromodeoxytetracycline appear to concentrate in rapidly proliferating tissues such as those found during tumor growth. These compounds can be made radioactive by introducing iodine-131 or bromine-82 in position 7 on the nucleus. These labeled compounds, due to remission of gamma radiation and beta particles, allow the discovery, localization and diagnosis of neoplastic tissues. In some cases, the same radiation can be used therapeutically by providing internal radiation sufficiently localized in cancer cells to slow or inhibit their growth.
The chemical processes for the preparation of these labeled compounds are identical to the preparation processes already described for the preparation of non-radioactive compounds with the obvious modification, namely that the radioisotope of the suitable halogens is employed.
Example 1:
Preparation of 7-bromo-6-dÚsoxytÚtracycline
To a solution of 0.2 g of 6-deoxytetracycline [J. A. C. S. 80, 5324 (1958)] in 10 cc of concentrated sulfuric acid, at 0 ° C., 76 mg of N bromosuccinimide are added. The reaction mixture is maintained at 00 ° C. for 30 min and then it is added slowly, dropwise, to 200 cc of cold ether. It precipitates a solid which is filtered and dried. The product weighs 160 mg. This product is recrystallized from its solution in an ethanol-acetone-ether mixture to obtain 120 mg of purified product.
This product is 1, 2-1, 5 times more biologically active than tetracycline.
Example 2:
Preparation
7-bromo-6-dÚmÚthyl-6-dÚsoxytÚtracycline
A solution of 200 mg (0.045 m. Mol) of 6-demethyl-6-deoxytetracycline hydrochloride is kept [J. A. C. S. 80 5324 (1958)] and 80 mg (0.45 m. Mole) of N-bromosuccinimide in 5.0 cc of concentrated sulfuric acid, at the temperature of the ice bath, for 30 min. The reaction mixture is slowly added to 250 cc of cold ether and the solid, which separates, weighs 0.2 g. A portion (25 mg) of this product is crystallized from its solution in an ethanol / ether mixture, which gives 19 mg of 7-bromo-6-demethyl-6-deoxytetracycline which is 2, 2 to 2, 5 times more active than tetracycline.
Example 3:
Preparation of 7-chloro-dÚsoxytÚtracycline
The procedure of Example 1 is repeated except that N-chlorosuccinimide is employed as the halogenating agent. The product is isolated as in Example 1 and 7-chlorodeoxytetra-cyclin is obtained.
Example 4: Preparatiofz
7-chloro-6-dÚmÚthyl-6-dÚsoxytÚtracycline
The procedure of Example 2 is followed except that N-chlorosuccinimide is employed as the halogenating agent. The product is isolated as in Example 2 and 7-chloro-6-dÚmÚthyl-6-dÚsoxy tëtracycline is obtained.
Example 5:
Preparation of 7-bromo-6-dÚsoxytÚtracycline
85.6 mg of 6-deoxytetracycline are dissolved in 3.9 cc of acetic acid and 1 cc of acetic acid-HBr at 30 O / o. With stirring, 0.22 cc of molecular bromine in acetic acid (10 "/ o excess over 1 equivalent) is added. After standing for 65 hours at room temperature, 10 cc of ether is added and it is added. A yellow crystalline solid settles slowly After 6 hours the solid is filtered off and dried, wt 68.4 mg.
Example 6:
Preparatiort
7-bromo-5-hydroxy-6-deoxytetracycline
A solution of 200 mg (0.42 m. Mole) of 5-hydroxy-6-deoxytetracycline [J. A. C. S. 80, 5324 (1958)] and 75 mg (0.42 mmol) of N-bromosuccinimide in 5.0 cc of concentrated sulfuric acid, at the temperature of the ice bath, for 10 min.
The solution is poured slowly into 250 cc of cold ether. The solid is filtered off and dried; roundly 1, 8 g. This product is converted to the free base by dissolving in water, adjusting the pH of the solution to 6.5 with 1N sodium carbonate and extracting with N-butanol. Yield 75 mg.
The microbiological activity is equal to 45% of that of tetracycline (the activity of the starting material 5-hydroxy-6-deoxytetracycline is equivalent to 30 ouzo of that of tetracycline).
Example 7:
Preparation of 7-iodo-6-deoxytetracycline sulfate
A solution of 200 mg (0.38 m. Mol) of 6-deoxytetracycLine sulfate in 85.5 mg (0.35 m. Mole) of N-iodosuccinim1de in 5.0 cc of concentrated sulfuric acid is stirred, at Oo C, for 40 minutes.
The mixture is added dropwise to 250 cc of cold ether. The solid, which separates, weighs 0.16g.
A portion (50 mg) of this product is recrystallized from its solution in a methylclo-solve / chloroform mixture; yield 22 mg.
Example 8:
Sulphate preparation
7-iodo-5-hydroxy-6-deoxytetracycline
The procedure of the previous example is repeated except that 5-hydroxy-6-deoxytetracycline is employed. 7-iodo-5-hyklroxy-6-deoxy-tetracycline is obtained.
Example 9:
7-iodo-6-demethyl-6-deoxytetracycline sulfate
To a solution of 0.2 g (0.39 m. Mole) of 6-de-methyl-6-deoxytetracycline in 5.0 cc cold concentrated sulfuric diacid (00 ° C.), 88 mg (0.39 m. Mole) are added. ) of N-iodosuccinimide. The mixture is stored at 00 ° C. for 40 min, and it is poured slowly into 250 cc of cold ether. The solid, which separates, weighs 0.17 g. A 50 mg portion of this product is recrystallized from its solution in a methyl-aeslosolve / chloroform mixture; yield 20 mg.
Example 10:
Preparation of amina-bromo-6-deoxytetracycline disulfate
To a solution of 100 mg of, amino-6-deoxytetracyclin disulfate, e in 4.0 cc of concentrated ulfuric acid, with stirring, in an ice bath, 32 mg of N-bromo-succinimide are added. The solution was stirred for 30 min and slowly poured into 100 cc of cold anhydrous ether, with stirring. The resulting amino-bromodÚsoxytÚtracycline disulfate is collected, washed with cold anhydrous ether (108 mg) Rf = 0.45 (n-butanal: pH 2, phosphate buffer).
Example 11: Preparation of sulfate
bromo-nitro-6-demethyl-6-deoxytetracycline
(isomer A)
920 mg (2 m. Moles of nitro-6-demethyl-6-deoxytetracyoline (isomer A) are dissolved in 20 cc of
H2SO4 concentrated at 00 ° C. To the cold stirred solution, 256 mg (2 m. Moles) of N-bromosuccinimide are added. The reaction mixture is stirred at 00 C for 30 min. The cold dark brown reaction mixture is poured into 1.1 liter of stirred ether (0OC) at a rate such that the temperature can be maintained below 5 ° C.
It precipitates a light yellow solid, fine, which is filtered under vacuum and washed with ether (three times 50 cc). The solid is dried in vacuo at room temperature for 2 hours. Weight 1.27 g.
Example 12:
Sulphate preparation
bromo-nitro-6-dÚmÚthyl-6-dÚsoxytÚtracycline
(isomer B)
130 mg (0.3 m.mole) of nitro-6-demethyl-6-deoxytetracycline (isomer B) are dissolved in 3 cc of H2SO4 concentrated at 0O C. To the solution, 59.3 mg (0, 3 mol) of N-bromo-succinimide. The solution is stirred in the cold (00 ° C.) for 45 min. The cold, dark brown reaction solution is poured into 150 cc of ether stirred at 00 C at a rate such that the temperature is kept below 5 C.
The slightly yellow solid which precipitates is filtered off, washed with cold ether (3 times 5 cc) and dried in vacuo, 60 ° C, for 1 hour. Weight 170 mg.
Example 13: Preparation of the disulfate
bromo-amino-6-demethyl-6-deoxytetracycline
(isomer B)
92 mg of. amino-6-demethyl-6-deoxy-tetracycline (isomer B) in 3 cc of concentrated HOSTOS at 00 ° C. To the dark brown solution, 37.5 mg of N-bromo-succinimide are added. The reaction mixture is stirred at 00 C for one hour and then poured into 150 cc of stirred ether at 00 C at a rate such that the temperature remains below 5O C. The brown solid, tannin is filtered off. , which precipitated, washed with cold ether and dried in vacuo at room temperature for 3 hours.
Weight 64 mg, Rf = 0.73 (N-butanol: pH 2, phosphate buffer).
Example 14:
Preparation
dibromo-6-deoxytetracycline sulfate
A solution of 60.5 mg (0.1 m. Mole) of 6-bromo-6-deoxytetracycline sulfate and 18 mg (0.1 m. Mole) of N-bromosuccinimide in 2.0 cc of acid is stirred. concentrated sulfuric acid at ice bath temperature for one hour. The solution is poured slowly into 200 cc of ice-cold ether. The solid which separates weighs 30 mg.