Verfahren zur Herstellung einer Probeflüssigkeit für die Erkennbarkeit von Syphilis. Vorliegende Erfindung betrifft ein Ver fahren zur Herstellung einer Probeflüssig keit für die Erkennbarkeit von Syphilis, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass fein verteilter tierischer Muskel, zum Beispiel Herzmuskel mit Alkohol gemischt und diese Mischung längere Zeit, zum Beispiel zwei Wochen oder länger in einem Warmwasser bad bei einer Temperatur von mindestens 40 Grad Celsius gehalten, dann abgekühlt und mit Cholesterin sowie einem Farbstoff versetzt wird.
Die klassische Methode zum Nachweis von Syphilis ist die Wassermannsche Reak tion. Ihre Durchführung erfordert jedoch grosse Geschicklichkeit, eine komplizierte Apparatur und das Ergebnis kann erst nach etwa 24 Stunden gewonnen werden.
Um diese Nachteile zu vermeiden, sind als Ersatz :die Präzipitationsmethoden ein geführt worden, deren bekannteste diejenigen von Meinicke, Sachs-Georgi, Kahn,. Murata usw. sind. Einige Forscher sind der Auffas sung, dass diese Ersatzmethoden nicht so zu- verlässig wie die Wassermannsche Reaktion sind. Bei den Präzipitationsmethoden kann. das Ergebnis nach ungefähr 30 Minuten er kannt werden, nimmt aber gewöhnlich doch 2 bis 3 Stunden in Anspruch.
Bei allen die sen Methoden muss dem zu Untersuchenden verhältnismässig viel Blut entnommen wer den und das Blut muss in Serum geschieden werden. Demgegenüber kann mit der gemäss der Erfindung hergestellten Probeflüssigkeit die Untersuchung auf Syphilis schnell durch geführt werden. Wie Versuche ergaben, ge nügt bei Verwendung dieser Probeflüssigkeit ein Tropfen Blut des zu Untersuchenden und kann das Ergebnis der Untersuchung in wenigen Minuten im Arbeitszimmer des Arztes selbst gewonnen werden. Die Aus wertung der Untersuchung gründet sich auf eine typische Färbung.
Die Untersuchung kann auch mit Blutserum, mit Spinalflüs- sigkeit oder serösen Egsudaten aus Bläschen durchgeführt werden. Als Farbstoff kann bei dem erfindungsgemässen Verfahren, zum Beispiel Kristallviolett oder ein Farbstoff aus seiner Gruppe, Azur<B>11</B> oder ein Farb stoff aus dieser Gruppe, Methylenblau oder ein Farbstoff aus dieser Gruppe verwendet werden.
Im folgenden sei ein Ausführungsbeispiel des erfindungsgemässen Verfahrens beschrie ben: Herzmuskeln, zum Beispiel von Rinder herzen werden mehrfach gemahlen, wozu eine übliche Fleisch-Mahlmaschine verwendet werden kann, nachdem das Fett, das Faser gewebe und die Blutgefässe entfernt worden sind. Die zermahlene Muskelmasse wird dann mit 95%igem Alkohol behandelt.
In einen Behälter, der durch einen Korkstopfen dicht abschliessbar ist, wird die Masse in der Weise eingefüllt, dass auf 20 g Herzmuskelmasse 100 cm' Alkohol kommen. Der Behälter wird mit dieser Masse in ein Warmwasser bad gestellt, dessen Temperatur zwischen 40 bis<B>7</B>5 Grad Celsius gehalten wird, vor zugsweise auf 60 Grad. Der Behälter ver bleibt im Warmwasserbad mindestens zwei oder drei Wochen, kann aber auch vorteil- hafterweise sieben bis zehn Wochen und so gar noch länger dort verbleiben. Während dieser Zeit soll die Masse regelmässig geschüt telt werden, zum Beispiel einmal morgens und dann wieder abends an jedem Tage.
Dann wird die Masse abgekühlt, gefiltert und im Dunkeln als Ausgangslösung auf bewahrt.
Zu 100 em3 der in oben beschriebener Weise erhaltenen Ausgangslösung werden 0,2 g Cholesterin beigefügt und durch Schüt teln in einem Warmwasserbad bei 56 C während etwa zehn Minuten aufgelöst. Im folgenden soll diese Lösung der Einfachheit halber als Lösung Nr. 1 bezeichnet werden.
Mit einem andern Teil der Ausgangs lösung wird eine 5 % ige Lösung von Benzoe- harz hergestellt. Diese Lösung wird im folgenden als Lösung Nr. 2 bezeichnet.
Dann wird eine 1 % alkoholische Lösung von Kristallviolett hergestellt. Diese Lösung wird im folgenden als Lösung Nr. 3 be zeichnet. In ähnlicher Weise ist eine I % ige alko holische Lösung von Azur Il, das heisst einer Mischung von 1 Teil Methylenazur und 1 Teil Methylenblau herzustellen. Diese Lö sung wird im folgenden als Lösung Nr. 4 bezeichnet.
Zu 100 cm' Lösung Nr. 1 werden 5 cm' der Lösung Nr. 2 zugefügt und beide wer den sorgfältig vermischt. 1 cm' der Lösung Nr. 3 und 1 cm' der Lösung Nr. 4 werden gut miteinander vermischt und 1,2 cm' ,die ser Mischung werden der oben angegebenen Mischung der Lösungen Nr. 1 und 2 zuge fügt. Die sich iso ergebende purpurblaue Flüssigkeit ist das Endprodukt, mit welchem nunmehr die Probe auf Syphilis durchge führt werden kann.
An Stelle des Rinderherzmuskels können auch die Herzmuskeln anderer Tiere als Aus gangsstoff verwendet werden, zum Beispiel von Pferden, Kaninchen, Widdern, Meer schweinchen und andern Tieren. Der Gehalt an Farbstoff kann je nach seiner Wirksam keit abgestuft werden und es können auch noch andere geeignete Farbstoffe an Stelle der angegebenen oder gemeinsam mit ihnen verwendet werden.
Die nach den obigen Darlegungen erhal tene Flüssigkeit kann in folgender Weise zur Durchführung einer Prüfung auf Syphi lis benutzt werden.
Ein Tropfen Blut (etwa 0,03 cm') der zu untersuchenden Person wird aus einer Fingerspitze oder einem Ohrläppchen ent nommen und auf die hohle Fläche eines kon kaven Schiebeschälchens gebracht, dessen Konkavität zweckmässig etwas grösser ist, als bei den üblichen Schiebeschälchen. Ein Tropfen (etwa 0,05 cm') 3%iger Natrium- chloridlösung wird zugefügt, bevor das Blut geronnen ist, und es wird mit der Spitze eines gewöhnlichen Glasstäbchens umgerührt.
Hierzu wird dann ein Tropfen (0,03 cm3) der erfindungsgemäss hergestellten, verdünn ten Probierflüssigkeit gegeben. Ein Teil der Probierflüssigkeit verdünnt mit drei Tei len 2,5 % iger Natriumohloridlösung ist am zweckmässigsten. Nach einem ungefähr drei Minuten dauernden Schütteln wird das Schiebeschälchen unter dem Mikroskop bei fünfzigfacher Vergrösserung geprüft.
Eine positive Reaktion liegt vor bei Auftreten von schön purpurblau gefärbten Klumpen zwi schen den roten Körperchen im Felde, wäh rend, wenn die Reaktion negativ ist, diese Erscheinung nicht auftritt und nur die roten Blutzellen allein erkennbar sind.
Wenn die Reaktion sehr stark positiv ist, kann man sogar mit dem blossen Augen nach 2 oder 3 Minuten Schütteln oder schon wäh rend des Schüttelns das Auftreten der pur purblauen Teilchen erkennen. Ist jedoch die Reaktion nur schwach oder zweifelhaft posi tiv, so erkennt man nur unter dem Mikro skop die winzigkleinen purpurblauen Kör perchen.
Als Vorteil der beschriebenen Probier flüssigkeit ergibt sich, dass ein Tropfen Blut des zu Untersuchenden ausreicht, um die Probe durchzuführen. Es ist nicht erforder lich das Blut in Serum zu trennen und die Probe lässt sich in einfacher Weise in weni gen Minuten beispielsweise im Arbeitsraum des Arztes selbst durchführen und das Auf treten einer Färbung ist leicht zu erkennen.
Process for the preparation of a sample liquid for the detectability of syphilis. The present invention relates to a method for producing a test liquid for the detection of syphilis, which is characterized in that finely divided animal muscle, for example heart muscle, mixed with alcohol and this mixture for a longer time, for example two weeks or longer in a warm water bath kept at a temperature of at least 40 degrees Celsius, then cooled and mixed with cholesterol and a dye.
The classic method for detecting syphilis is the Wassermann reaction. However, it requires great skill and complicated equipment to be carried out, and the result can only be obtained after about 24 hours.
In order to avoid these disadvantages, the following substitutes were introduced: the precipitation methods, the best known of which were those by Meinicke, Sachs-Georgi, Kahn ,. Murata etc. are. Some researchers believe that these replacement methods are not as reliable as the Wassermann reaction. With the precipitation methods can. the result can be seen in about 30 minutes, but it usually takes 2 to 3 hours to complete.
With all of these methods, a relatively large amount of blood must be taken from the person to be examined and the blood must be separated into serum. In contrast, the test for syphilis can be carried out quickly with the sample liquid produced according to the invention. Tests have shown that when this sample liquid is used, a drop of blood from the person to be examined is sufficient and the result of the examination can be obtained in a few minutes in the doctor's office. The evaluation of the investigation is based on a typical color.
The examination can also be carried out with blood serum, spinal fluid or serous egudata from vesicles. The dye used in the process according to the invention, for example, crystal violet or a dye from its group, azure or a dye from this group, methylene blue or a dye from this group.
In the following an embodiment of the method according to the invention will be described ben: Heart muscles, for example from cattle hearts, are ground several times, for which a conventional meat grinding machine can be used after the fat, the fiber tissue and the blood vessels have been removed. The ground muscle mass is then treated with 95% alcohol.
The mass is poured into a container that can be tightly sealed with a cork stopper in such a way that 100 cm of alcohol are added to 20 g of heart muscle mass. The container is placed with this mass in a hot water bath, the temperature of which is kept between 40 to <B> 7 </B> 5 degrees Celsius, preferably at 60 degrees. The container remains in the warm water bath for at least two or three weeks, but can also advantageously remain there for seven to ten weeks and even longer. During this time, the mass should be shaken regularly, for example once in the morning and then again in the evening every day.
Then the mass is cooled, filtered and stored in the dark as a starting solution.
0.2 g of cholesterol are added to 100 em3 of the starting solution obtained in the manner described above and dissolved by shaking in a warm water bath at 56 ° C. for about ten minutes. For the sake of simplicity, this solution will be referred to below as solution no. 1.
Another part of the starting solution is used to make a 5% solution of benzoin resin. This solution is referred to as Solution No. 2 in the following.
Then a 1% alcoholic solution of crystal violet is made. This solution is referred to below as solution no. 3 be. A 1% alcoholic solution of azure II, i.e. a mixture of 1 part methylene azure and 1 part methylene blue, can be prepared in a similar way. This solution is referred to as solution no. 4 in the following.
To 100 cm 'solution no. 1 5 cm' of solution no. 2 are added and both who carefully mixed. 1 cm 'of solution no. 3 and 1 cm' of solution no. 4 are mixed well together and 1.2 cm 'of this mixture are added to the above mixture of solutions no. 1 and 2. The iso resulting purple-blue liquid is the end product with which the sample for syphilis can now be carried out.
Instead of the bovine heart muscle, the heart muscles of other animals can also be used as starting material, for example horses, rabbits, rams, guinea pigs and other animals. The content of dye can be graded depending on its effectiveness and other suitable dyes can also be used in place of those specified or together with them.
The liquid obtained from the above can be used to test for syphilis in the following manner.
A drop of blood (about 0.03 cm ') from the person to be examined is taken from a fingertip or an earlobe and placed on the hollow surface of a concave sliding bowl, the concavity of which is usefully somewhat larger than that of conventional sliding bowls. A drop (about 0.05 cm) of 3% sodium chloride solution is added before the blood has clotted and it is stirred with the tip of an ordinary glass rod.
To this end, a drop (0.03 cm3) of the diluted sample liquid prepared according to the invention is then added. A part of the sample liquid diluted with three parts of 2.5% sodium chloride solution is most useful. After shaking for about three minutes, the sliding bowl is examined under the microscope at fifty times magnification.
A positive reaction is given if there are beautiful purple-blue colored lumps between the red cells in the field, while if the reaction is negative, this phenomenon does not occur and only the red blood cells can be seen alone.
If the reaction is very positive, you can even see the appearance of the pure blue particles with the bare eyes after 2 or 3 minutes of shaking or while shaking. If, however, the reaction is only weak or doubtful, the tiny purple-blue bodies can only be seen under the microscope.
The advantage of the sample liquid described is that a drop of blood from the person to be examined is sufficient to carry out the sample. It is not necessary to separate the blood into serum and the sample can be carried out in a simple manner in a few minutes, for example in the doctor's workroom, and the occurrence of a color is easy to recognize.