CA3100594A1

CA3100594A1 - Extract and dermatological composition comprising same, for treating sensitive skin

Info

Publication number: CA3100594A1
Application number: CA3100594A
Authority: CA
Inventors: Nathalie Castex-Rizzi; Bertrand Chol; Fabrice LESTIENNE
Original assignee: Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA
Current assignee: Pierre Fabre Dermo Cosmetique SA
Priority date: 2018-06-01
Filing date: 2019-05-31
Publication date: 2019-12-05
Also published as: FR3081705B1; US11857578B2; FR3081705A1; WO2019229248A1; AR117590A1; AU2019276356A1; SG11202011861RA; EP3801580C0; JP7357645B2; EP3801580A1; JP2021526373A; MX2020012882A; ES2964122T3; US20210353690A1; CN112423769A; EP3801580B1; KR20210015871A; BR112020023771A2

Abstract

The invention relates to a new bacterial extract that can be used for protecting and/or treating sensitive skin and/or reactive, intolerant skin, particularly by means of targeted action on neurogenic inflammation of the skin. The invention also relates to cosmetic or dermatological compositions comprising such a bacterial extract as an active ingredient.

Description

EXTRAIT ET COMPOSITION DERMATOLOGIQUE LE COMPRENANT POUR LE
TRAITEMENT DES PEAUX SENSIBLES
DOMAINE DE L'INVENTION
La présente invention concerne un nouvel extrait bactérien qui peut être utile dans la protection et/ou le traitement de la peau sensible et/ou de la peau intolérante réactive, notamment par une action ciblée sur l'inflammation neurogène cutanée. L'invention a également pour objet des compositions cosmétiques ou dermatologiques comprenant un tel extrait bactérien comme agent actif.
ETAT DE LA TECHNIQUE ANTERIEURE
L'épiderme est un épithélium pluristratifié qui exerce une fonction barrière de protection contre son environnement et ses agressions. Parmi ses multiples fonctions physiologiques, l'épiderme possède celle de constituer une barrière à la fois biologique, physique et chimique contre l'invasion de l'organisme par les microorganismes. Cette propriété de barrière physique de l'épiderme est notamment liée à sa structure. Ainsi l'épiderme est conventionnellement divisé en une couche basale de kératinocytes constituant la couche germinative de l'épiderme, une couche dite épineuse constituée de plusieurs couches de cellules polyédriques et enfin, un ensemble de couches supérieures appelé couche cornée (ou stratum corneum), constituée de kératinocytes au stade terminal de leur différenciation appelés cornéocytes. Les propriétés de barrière chimique de l'épiderme dépendent, notamment, de la libération à la surface de ce dernier de nombreux peptides antimicrobiens. Un dysfonctionnement de l'organisation structurelle cellulaire épidermique, ou un défaut de la fonction barrière chimique de l'épiderme, peut se traduire par un état inflammatoire cutané.
L'inflammation est une réaction de défense immunitaire normale de l'organisme à une agression de type : infectieuse, EXTRACT AND DERMATOLOGICAL COMPOSITION INCLUDING IT FOR THE
TREATMENT OF SENSITIVE SKIN
FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel bacterial extract which may be useful in protecting and / or treating the skin sensitive and / or intolerant reactive skin, in particular by a targeted action on neurogenic skin inflammation. The invention has also for the subject of cosmetic compositions or dermatological agents comprising such a bacterial extract as an agent active.
STATE OF THE PRIOR ART
The epidermis is a multi-layered epithelium that exerts a barrier function of protection against its environment and assaults. Among its many physiological functions, the epidermis has that of constituting a barrier at the same time biological, physical and chemical against the invasion of the organism by microorganisms. This physical barrier property of the epidermis is particularly linked to its structure. Thus the epidermis is conventionally divided into a basal layer of keratinocytes constituting the germinal layer of the epidermis, a so-called thorny layer made up of several layers of polyhedral cells and finally, a set of layers upper called stratum corneum (or stratum corneum), made up of keratinocytes at the terminal stage of their differentiation called corneocytes. The chemical barrier properties of the epidermis depend, in particular, on the release to the surface of the latter of many antimicrobial peptides. A
dysfunction of cellular structural organization epidermal, or a defect in the chemical barrier function of the epidermis, can result in an inflammatory skin condition.
Inflammation is an immune defense reaction normal of the organism to an attack of the type: infectious,

2 thermique, mécanique, chimique, lésionnelle ou encore allergique.
Elle se caractérise en quatre points qui sont : la rougeur, la chaleur, le gonflement et la douleur. L'inflammation cutanée aigue est une réponse immédiate à un agent agresseur, de courte durée (quelques jours ou semaines), d'installation souvent brutale et caractérisée par un gonflement intense. Les inflammations aigues guérissent spontanément ou avec un traitement. La chronicité apparaît lorsque l'inflammation ne guérit pas spontanément, persiste ou s'aggrave pendant plusieurs mois voire plusieurs années. La réaction inflammatoire est un processus dynamique comportant plusieurs étapes successives :
vasculaire (vasodilatation), la diapédèse des leucocytes et le chimiotactisme des cellules immunitaires et pour finir la détersion. La diapédèse leucocytaire correspond à la traversée active des parois vasculaires et à l'accumulation de cellules immunitaires circulantes, les lymphocytes, les neutrophiles et les monocytes dans le foyer lésionnel. Les neutrophiles ont pour fonction d'attirer d'autres cellules inflammatoires par chimiotactisme et de nettoyer le site lésé en sécrétant des substances antimicrobiennes et des protéases. Les monocytes migrent par chimiotactisme et se différencient en macrophages nettoyant la zone lésée. Ils sécrètent des facteurs de croissances, des cytokines inflammatoires, comme IL-1, notamment IL-10, TNFoc, des protéases, des prostaglandines et des IFNs permettant le maintien et/ou l'amplification de l'inflammation.
La détersion est consécutive à la phase vasculaire et contemporaine de la diapédèse leucocytaire. Il s'agit de l'élimination des tissus nécrosés et des agents pathogènes.
L'inflammation neurogène cutanée se définit comme l'induction et/ou l'amplification d'un processus inflammatoire primaire par les terminaisons nerveuses, ainsi il s'agit d'une inflammation de la peau induite par l'activation des fibres nerveuses intra-épidermiques qui sécrètent des neuropeptides tels que la substance P. L'inflammation neurogène cutanée est 2 thermal, mechanical, chemical, lesion or even allergic.
It is characterized in four points which are: the redness, the heat, swelling and pain. Skin inflammation acute is an immediate response to an abusive agent, short duration (a few days or weeks), installation often sudden and characterized by intense swelling. The acute inflammations heal spontaneously or with a treatment. Chronicity occurs when the inflammation does not does not resolve spontaneously, persists or worsens for several months or even several years. The inflammatory reaction is a dynamic process comprising several successive stages:
vascular (vasodilation), leukocyte diapedesis and chemotaxis of the immune cells and finally the debridement. Leukocyte diapedesis corresponds to the crossing activates vascular walls and cell buildup circulating immune systems, lymphocytes, neutrophils and monocytes in the lesion site. Neutrophils have for function of attracting other inflammatory cells by chemotaxis and cleanse the injured site by secreting antimicrobial substances and proteases. Monocytes migrate by chemotaxis and differentiate into macrophages cleaning the injured area. They secrete factors of growths, inflammatory cytokines, such as IL-1, especially IL-10, TNFoc, proteases, prostaglandins and IFNs allowing the maintenance and / or the amplification of the inflammation.
Debridement is consecutive to the vascular phase and contemporary with leukocyte diapedesis. It is removal of necrotic tissue and pathogens.
Neurogenic skin inflammation is defined as induction and / or amplification of an inflammatory process primary by the nerve endings, so it is a inflammation of the skin induced by fiber activation intraepidermal nerves that secrete neuropeptides such as than substance P. Neurogenic skin inflammation is

3 particulièrement impliquée dans les peaux sensibles, les peaux intolérantes réactives voire dans des dermatoses inflammatoires prurigineuses. Le prurit est défini comme une sensation déplaisante qui provoque le besoin de se gratter. Il émerge depuis peu la notion de pruricepteurs, récepteurs spécifiques permettant de percevoir le prurit, mais leur distinction de la famille des récepteurs nociceptifs reste encore débattue. Ces pruricepteurs utilisent les fibres intra-épidermiques de type Ao et surtout celles de type C. Ils sécrètent des neuropeptides : la substance P, le calcitonin gene related peptide (CGRP) et le vasoactive intestinal peptide (VIP). Depuis peu, le rôle des protéases (trypsine, cathepsine G, thrombine etc.) dans l'induction du prurit a été clairement établi. En effet, leur récepteur PAR-2 a été défini comme la deuxième grande voie d'activation du prurit (Misery et al., Nat. Rev. Neurol 10, 408-416, 2014).
Les fibres nerveuses intradermiques interagissent directement ou indirectement avec les cellules cutanées et les cellules du système endocrinien, lymphatique et immunitaire. Ces communications ont conduit à la définition d'un système neuro-immuno-endocrino-cutané. Pour fonctionner, ce système nécessite un langage commun constitué de molécules de différentes natures, les neuromédiateurs, les cytokines et des facteurs de croissance.
Ces molécules sont synthétisées et libérées par les cellules de la peau, les cellules immunitaires résidentes et recrutées, ainsi que par les terminaisons nerveuses intra-épidermiques. Les cellules épidermiques et dermiques peuvent également produire des neuromédiateurs, des enzymes, des neurotrophines, des cytokines, des chémokines et des facteurs de croissance. Ces médiateurs régulent l'innervation cutanée et la réponse inflammatoire. En cas d'inflammation, les cellules immunitaires en transit ou présentes constitutivement dans la peau, peuvent s'activer sous l'action de ces médiateurs sécrétées par les terminaisons nerveuses sensorielles et les cellules de la peau. Ce processus 3 particularly involved in sensitive skin, skin reactive intolerant even in inflammatory dermatoses itchy. Itching is defined as a sensation unpleasantness that causes the need to scratch. It emerges recently the notion of pruriceptors, specific receptors allowing to perceive the pruritus, but their distinction from family of nociceptive receptors is still debated. These pruriceptors use intraepidermal fibers of type Ao and especially those of type C. They secrete neuropeptides:
substance P, calcitonin gene related peptide (CGRP) and intestinal vasoactive peptide (VIP). Recently, the role of proteases (trypsin, cathepsin G, thrombin etc.) in induction of pruritus has been clearly established. Indeed, their PAR-2 receptor was defined as the second major pathway activation of pruritus (Misery et al., Nat. Rev. Neurol 10, 408-416, 2014).
Intradermal nerve fibers interact directly or indirectly with skin cells and cells of the endocrine, lymphatic and immune system. These communications led to the definition of a neuro-system immuno-endocrino-cutaneous. To function, this system requires a common language made up of molecules of different kinds, neurotransmitters, cytokines and growth factors.
These molecules are synthesized and released by the cells of skin, resident and recruited immune cells, as well than by intraepidermal nerve endings. The epidermal and dermal cells can also produce neurotransmitters, enzymes, neurotrophins, cytokines, chemokines and growth factors. These mediators regulate skin innervation and the inflammatory response. In inflammation, immune cells in transit or constitutively present in the skin, may activate under the action of these mediators secreted by the endings sensory nerve and skin cells. This process

4 conduit à une seconde vague de libération de cytokines et neuromédiateurs, qui engendrent une boucle d'amplification de l'inflammation.
Un nouveau concept émerge depuis peu, suggérant que les kératinocytes sont également des acteurs majeurs de l'inflammation neurogène cutanée.
L'inflammation neurogène cutanée générée par des neuropeptides est impliquée dans la réactivité des peaux sensibles et aussi des peaux intolérantes. La notion de peau sensible reflète le niveau de sensibilité de la peau de chacun.
S'il est possible d'avoir une peau sensible à tout âge, cela est extrêmement répandu chez les bébés et les personnes âgées. La peau des bébés a une épaisseur représentant environ un cinquième de celle de la peau des adultes, elle est par conséquent extrêmement sensible aux agressions chimiques, physiques et microbiennes, ainsi qu'aux rayons UV. La fonction de barrière de la peau des adultes, quant à elle, s'affaiblit progressivement avec l'âge, parallèlement au ralentissement des processus métaboliques. Le vieillissement de la peau entraîne peu à peu une déficience en lipides, ce qui la rend plus facilement irritable par les substances alcalines telles que le savon.
Lorsque la peau présente un seuil de sensibilité très bas, c'est-à-dire qu'elle réagit de manière exacerbée à la moindre agression extérieure, on parlera de peau intolérante, voire de peau intolérante réactive. Les peaux intolérantes sont plus vulnérables aux agressions extérieures et se caractérisent par un inconfort quotidien et une forte irritabilité. Certains signes, plus ou moins marqués, permettent de les reconnaitre. La peau intolérante du visage présente par exemple des rougeurs et des picotements. Elle tire, chauffe ou démange. Elle peut également procurer des sensations de brûlure. Les peux intolérantes présentent généralement un terrain allergique et sont par conséquent, particulièrement sensibles aux composants des soins cosmétiques.
La peau sensible est en fait une peau sujette aux 4 leads to a second wave of cytokine release and neurotransmitters, which generate an amplification loop of inflammation.
A new concept has recently emerged, suggesting that keratinocytes are also major players in neurogenic skin inflammation.
Neurogenic skin inflammation generated by neuropeptides are involved in the reactivity of the skin sensitive and also intolerant skin. The concept of skin sensitive reflects the sensitivity level of the individual's skin.
If it is possible to have sensitive skin at any age, it is extremely common in babies and the elderly. The babies' skin is about a fifth thick that of the skin of adults, it is therefore extremely sensitive to chemical, physical and microbial, as well as UV rays. The barrier function of the skin of adults, on the other hand, gradually weakens with age, at the same time as the processes slow down metabolic. The aging of the skin gradually leads to a lipid deficiency, which makes it more easily irritable by alkaline substances such as soap.
When the skin has a very low sensitivity threshold, that is to say, she reacts in an exacerbated way to the slightest external aggression, we will speak of intolerant skin, or even reactive intolerant skin. Intolerant skin is more vulnerable to external aggressions and are characterized by a daily discomfort and strong irritability. Some signs, more or less marked, allow them to be recognized. The skin intolerant of the face presents, for example, redness and tingling. It pulls, gets hot or itches. She can also provide burning sensations. The intolerant ones generally present an allergic ground and are by therefore, particularly sensitive to the components of care cosmetics.
Sensitive skin is actually skin prone to

5 picotements, échauffements, fourmillements et démangeaisons, parfois accompagnées de rougeurs. Ces sensations d'inconfort apparaissent de façon exacerbée en réaction à des stimuli qui ne déclencheraient pas d'irritation sur une peau normale. Cette hyper-sensibilité de la peau résulte d'une diminution de son seuil de tolérance. Plus la peau est sensible, plus son seuil de tolérance est faible et lorsque le seuil de tolérance est au plus bas, on parlera de peau intolérante. Cette hyper-sensibilité peut s'expliquer par différents facteurs :
- Une réaction inflammatoire qui se développe au contact de substances chimiques irritantes comme certains savons, les détergents ménagers ou la pollution ; le seuil déclenchant des ces substances permettant ainsi d'évoquer la peau sensible ou la peau intolérante.
- Une altération de la fonction barrière de l'épiderme. Ce phénomène favorise alors une déshydratation de la peau et surtout la pénétration d'agents potentiellement irritants ;
- Des facteurs psychologiques, comme le stress ;
- Des facteurs hormonaux ;
- Des facteurs physiques comme le soleil, les changements de température (chaud/froid), le vent, la climatisation, le chauffage, l'eau calcaire.
La peau est recouverte d'un film protecteur, appelé film hydrolipidique de surface. Ce film en constitue la barrière la plus externe, ainsi que la plus fragile, la plus perturbée et la plus représentative de la santé de la peau ; il est constitué en grande partie des corps gras excrétés par les glandes sébacées et des lipides provenant de la dégradation des cellules lors de la 5 tingling, heating, tingling and itching, sometimes accompanied by redness. These feelings of discomfort appear exacerbated in response to stimuli that do not would not cause irritation on normal skin. This hyper-sensitivity of the skin results from a decrease in sound tolerance's threshold. The more sensitive the skin, the lower its threshold tolerance is low and when the tolerance threshold is at most below, we will talk about intolerant skin. This hypersensitivity can can be explained by different factors:
- An inflammatory reaction that develops on contact with irritating chemicals like some soaps, household detergents or pollution; the threshold triggering these substances thus making it possible to evoke sensitive skin or intolerant skin.
- An alteration of the barrier function of the epidermis. This phenomenon then promotes dehydration of the skin and especially the penetration of agents potentially irritants;
- Psychological factors, such as stress;
- Hormonal factors;
- Physical factors such as the sun, changes temperature (hot / cold), wind, air conditioning, heating, hard water.
The skin is covered with a protective film, called a film surface hydrolipidic. This film constitutes the barrier more external, as well as the most fragile, the most disturbed and the more representative of the health of the skin; it is made up of a large part of the fatty substances excreted by the sebaceous glands and lipids resulting from the breakdown of cells during

6 phase de kératinisation des cellules cornées, ainsi que de composés hydrophiles, tels que l'eau de la sueur, le glycérol, l'urée, les facteurs naturels d'hydratation de la peau, les sels, les métabolites de la flore cutanée, etc. Ce film de surface est très exposé et très sensible aux stress environnementaux, aux habitudes d'hygiène, et à l'état de la peau. Il s'avère important de préserver, et même d'améliorer, cette fonction barrière, et ce d'autant plus pour les peaux les plus sensibles. Et, s'il est connu que les populations à peaux intolérantes dont la barrière cutanée est fragilisée nécessitent des soins avec des agents hydrolipidiques physio-mimétiques, notamment des agents émollients et hydratants physiologiques, il est en outre important d'éviter la mise en contact de la peau avec toute substance susceptible de dégrader le film hydrolipidique de surface, telle qu'un agent tensioactif ou un conservateur.
La peau sensible ou intolérante relève d'un mécanisme non allergique et implique une réaction inflammatoire sans reconnaissance d'un allergène spécifique.
Les mécanismes physiopathologiques de l'hyper-réactivité
cutanée ne sont pas clairement élucidés mais on tend à identifier deux types de facteurs, qui peuvent être concourants. D'un côté
il y a l'altération de la barrière cutanée via la perte en eau et l'altération des lipides intercornéocytaires. La peau devient plus sensible aux irritants et stimuli externes et l'irritation, même minime, entraine le relargage de cytokines inflammatoires et de composés de la cascade arachidonique. D'un autre côté, un trouble neurologique peut être responsable de la sensibilité, de la réactivité de la peau. Les fibres nerveuses parvenant jusqu'aux cellules de l'épiderme produisent, sous l'influence de stimuli externes, des neuromédiateurs (comme la substance P) à
l'origine d'une inflammation neurogène, c'est l'inflammation neurogène cutanée. 6 keratinization phase of horny cells, as well as hydrophilic compounds, such as sweat water, glycerol, urea, natural skin hydration factors, salts, the metabolites of the skin flora, etc. This surface film is very exposed and very sensitive to environmental stresses, hygiene habits, and the condition of the skin. It turns out important to preserve, and even improve, this barrier function, and this all the more for the most sensitive skins. And, if he is known that populations with intolerant skin whose barrier skin is weakened require treatment with agents physio-mimetic hydrolipidic agents, in particular physiological emollients and moisturizers, it is also important to avoid skin contact with any substance capable of degrading the hydrolipidic film of surface, such as a surfactant or a preservative.
Sensitive or intolerant skin is the result of a non allergic and involves an inflammatory reaction without recognition of a specific allergen.
The pathophysiological mechanisms of hyper-reactivity cutaneous are not clearly elucidated but we tend to identify two types of factors, which can be concurrent. On the one hand there is an alteration of the skin barrier via the loss of water and alteration of intercorneocyte lipids. The skin becomes more sensitive to irritants and external stimuli and irritation, even minimal, leads to the release of inflammatory cytokines and of compounds of the arachidonic cascade. On the other hand, a neurological disorder may be responsible for sensitivity, the reactivity of the skin. The nerve fibers reaching up to the cells of the epidermis produce, under the influence of external stimuli, from neurotransmitters (such as substance P) to the origin of neurogenic inflammation is inflammation skin neurogen.

7 On a donc un besoin en composition capable de traiter, prévenir, protéger les peaux sensibles, les peaux intolérantes dont la composante inflammatoire est une inflammation neurogène.
La présente invention a pour objet de répondre à ces besoins, c'est-à-dire proposer une composition qui protège et/ou améliore l'état de la peau sensible, voire de la peau intolérante, en diminuant ou inhibant l'inflammation neurogène cutanée.
Pour la première fois, la demanderesse a mis en évidence les propriétés bénéfiques dans la régénération tissulaire et la cicatrisation des lésions cutanées d'un extrait bactérien issu d'une souche bactérienne (ou bactérie) LMB64 isolée à partir d'une nappe phréatique. Cette bactérie a été décrite par la demanderesse dans la demande de brevet W02012/085182. Plus particulièrement, étaient décrits et exemplifiés les extraits dénommés SO, EO et ESO, respectivement constitués du surnageant de culture séparé de la biomasse, de la biomasse de cellules lysées, et du surnageant après incubation de la culture à pH
basique pendant plusieurs heures. Les fractions EO et ESO étaient testées et il était montré que ces extraits EO et ESO avaient la capacité d'induction des cytokines et de maturation de cellules de Langherans (pour EO) ainsi que d'activation des récepteurs TLR2/TLR4/TLR5, d'antagonisme de récepteurs PARs et d'induction des peptides antimicrobiens (pour ESO). Ces résultats permettaient d'envisager l'utilisation de tels extraits dans le traitement de maladies inflammatoires comme le prurit, le psoriasis, l'eczéma ou encore la dermatite atopique.

WO 2019/229247 There is therefore a need for a composition capable of treating, prevent, protect sensitive skin, intolerant skin whose inflammatory component is neurogenic inflammation.
The object of the present invention is to respond to these needs, that is to say to propose a composition which protects and / or improves the condition of sensitive skin, even the skin intolerant, decreasing or inhibiting neurogenic inflammation cutaneous.
For the first time, the plaintiff has highlighted the beneficial properties in tissue regeneration and healing of skin lesions from a bacterial extract obtained of a bacterial strain (or bacterium) LMB64 isolated from of a water table. This bacterium has been described by Applicant in patent application W02012 / 085182. More in particular, were described and exemplified the extracts called SO, EO and ESO, respectively made up of the supernatant culture separated from biomass, cell biomass lysed, and the supernatant after incubation of the culture at pH
basic for several hours. The EO and ESO fractions were tested and it was shown that these EO and ESO extracts had the ability to induce cytokines and mature cells Langherans (for EO) as well as activation of receptors TLR2 / TLR4 / TLR5, PARs receptor antagonism and induction antimicrobial peptides (for ESO). These results made it possible to consider the use of such extracts in the treatment of inflammatory diseases such as pruritus, psoriasis, eczema or even atopic dermatitis.

WO 2019/22924

8 PCT/EP2019/064211 RESUME DE L'INVENTION
Les inventeurs ont de façon surprenante mis en évidence l'efficacité d'un nouvel extrait bactérien particulier dans la prévention et/ou le traitement de l'inflammation neurogène cutanée.
En effet, les inventeurs ont démontré que cet extrait bactérien présente un effet inhibiteur sur la libération par les kératinocytes d'IL-1P et de TNF-ainduites par la substance P.
DESCRIPTION DETAILLEE
Selon un premier mode de réalisation, la présente invention a pour objet un extrait bactérien selon l'invention ainsi que son utilisation dans la prévention et/ou le traitement de l'inflammation neurogène cutanée.
De manière particulière, la prévention et/ou le traitement de l'inflammation neurogène cutanée comprend, ou consiste en, la protection et/ou le traitement de la peau sensible ou de la peau intolérante.
De manière particulière, la prévention et/ou le traitement de l'inflammation neurogène cutanée comprend, ou consiste en, la protection et/ou le traitement de la peau sensible.
De manière particulière, la prévention et/ou le traitement de l'inflammation neurogène cutanée comprend, ou consiste en, la protection et/ou le traitement de la peau intolérante.
La bactérie LMB64 a été caractérisée et définie comme appartenant à la classe des Beta-proteobacteria, sous famille des Neisseriaceae, et probablement d'un nouveau genre non encore défini. L'analyse de la séquence du gène codant pour l'ARN
ribosomique (ARNr) 16S a permis de situer cette bactérie proche 8 PCT / EP2019 / 064211 SUMMARY OF THE INVENTION
The inventors have surprisingly demonstrated the efficacy of a new bacterial extract in particular in the prevention and / or treatment of neurogenic inflammation cutaneous.
Indeed, the inventors have demonstrated that this extract bacterial shows an inhibitory effect on the release by IL-1P and TNF-ainduced keratinocytes by substance P.
DETAILED DESCRIPTION
According to a first embodiment, the present invention relates to a bacterial extract according to the invention as well as its use in the prevention and / or treatment of neurogenic skin inflammation.
In particular, the prevention and / or treatment neurogenic skin inflammation includes, or consists of, the protection and / or treatment of sensitive skin or skin intolerant.
In particular, the prevention and / or treatment neurogenic skin inflammation includes, or consists of, the protection and / or treatment of sensitive skin.
In particular, the prevention and / or treatment neurogenic skin inflammation includes, or consists of, the protection and / or treatment of intolerant skin.
The LMB64 bacterium has been characterized and defined as belonging to the class of Beta-proteobacteria, subfamily of Neisseriaceae, and probably of a new genus not yet defined. Analysis of the sequence of the gene encoding RNA
ribosomal (rRNA) 16S allowed to locate this bacterium close to

9 des genres Chromobacterium, Paludimonas, Lutelia et Glubenkania, avec lesquels elle partage 95% de similarité de séquence. Cette bactérie, non-pathogène, est une bactérie à Gram négatif qui a été isolée à partir de la nappe phréatique. Plus particulièrement, la bactérie LMB64 se présente sous la forme d'un bâtonnet d'une longueur aux alentours de 2,3pm 0,3pm et d'une largeur aux alentours de 1,0pm 0,1pm. Une particularité
de cette bactérie est la présence d'un flagelle polaire.
Le gène codant pour l'ARNr 16S a été presque totalement séquence (1487 pb, correspondant à la séquence SEQ ID No. 1). La bactérie LMB64 possède un plasmide circulaire de 10948 pb. Ce plasmide a été entièrement séquence et la séquence est représentée en la séquence SEQ ID No. 2.
Selon une autre forme de réalisation, une bactérie dont est issu un extrait bactérien selon l'invention comprend au moins un plasmide comprenant la séquence SEQ ID No. 2, ou toute séquence présentant au moins 80% d'identité avec la séquence SEQ ID No. 2, de manière avantageuse au moins 85%, au moins 90%, au moins 95%, encore au moins 97% et plus préférentiellement encore au moins 98% d'identité avec la séquence SEQ ID No. 2.
Aussi, une bactérie dont est issu l'extrait bactérien selon l'invention est une bactérie non-pathogène à Gram négatif appartenant à la classe des Betaproteobacteria, sous-famille des Neisseriaceae, ladite bactérie comprenant un ARNr 16S comprenant la séquence SEQ ID No. 1, ou toute séquence présentant au moins 80%, encore au moins 90%, au moins 95%, au moins 97% d'identité
avec la séquence SEQ ID No. 1 et ladite bactérie comprenant au moins un plasmide comprenant la séquence SEQ ID No. 2, ou toute séquence présentant au moins 80% d'identité avec la séquence SEQ
ID No. 2, de manière avantageuse au moins 85%, au moins 90%, au moins 95%, encore au moins 97% et plus préférentiellement encore au moins 98% d'identité avec la séquence SEQ ID No. 2.
A titre d'exemple une telle bactérie est représentée par la souche LMB64 qui a été déposée au nom de la demanderesse à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM), Institut Pasteur, Paris, le 8 avril 2010 sous la référence I-4290.
Ayant ces informations génotypiques, associées aux 5 caractéristiques de croissance en milieu non sulfuré, de la nature non filamenteuse de cette bactérie, un homme du métier n'aurait pas difficulté à trouver/identifier une autre bactérie permettant d'obtenir un extrait bactérien selon l'invention. Une telle identification d'une autre bactérie certes légèrement 9 of the genera Chromobacterium, Paludimonas, Lutelia and Glubenkania, with which it shares 95% sequence similarity. This bacterium, non-pathogenic, is a Gram-negative bacterium which has been isolated from the water table. More in particular, the LMB64 bacterium occurs in the form a stick with a length of around 2.3pm 0.3pm and with a width around 1.0pm 0.1pm. A particularity of this bacterium is the presence of a polar flagellum.
The gene encoding 16S rRNA has been almost completely sequence (1487 bp, corresponding to the sequence SEQ ID No. 1). The LMB64 bacteria has a circular plasmid of 10948 bp. This plasmid has been fully sequenced and the sequence is represented in the sequence SEQ ID No. 2.
According to another embodiment, a bacterium of which is derived from a bacterial extract according to the invention comprises at least one plasmid comprising the sequence SEQ ID No. 2, or any sequence exhibiting at least 80% identity with the sequence SEQ ID No. 2, advantageously at least 85%, at least 90%, at least 95%, still at least 97% and more preferably still at least 98% identity with the sequence SEQ ID No. 2.
Also, a bacterium from which the bacterial extract is derived according to the invention is a non-pathogenic Gram-negative bacterium belonging to the class of Betaproteobacteria, a subfamily of Neisseriaceae, said bacterium comprising a 16S rRNA comprising the sequence SEQ ID No. 1, or any sequence having at least 80%, still at least 90%, at least 95%, at least 97% identity with the sequence SEQ ID No. 1 and said bacterium comprising at least one plasmid comprising the sequence SEQ ID No. 2, or any sequence exhibiting at least 80% identity with the sequence SEQ
ID No. 2, advantageously at least 85%, at least 90%, at least less 95%, still at least 97% and more preferably still at least 98% identity with the sequence SEQ ID No. 2.
By way of example, such a bacterium is represented by strain LMB64 which was deposited in the name of the applicant at the National Collection of Cultures of Microorganisms (CNCM), Institut Pasteur, Paris, April 8, 2010 under the reference I-4290.
Having this genotypic information, associated with 5 characteristics of growth in a non-sulfurized medium, non-filamentous nature of this bacterium, a person skilled in the art would not have difficulty finding / identifying another bacteria making it possible to obtain a bacterial extract according to the invention. A
such identification of another bacterium admittedly slightly

10 différente génotypiquement mais rassemblant les critères phénotypiques de l'invention quant à l'extrait bactérien peut être réalisé après un travail de sélection qui n'est en aucun cas insurmontable et ce sur la base des informations contenues dans la présente demande ainsi que celles contenues dans la demande W02012/085182 associées aux connaissances générales de l'homme du métier.
Par pourcentage d'identité entre deux séquences d'acides nucléiques au sens de la présente invention, on entend désigner un pourcentage de nucléotides identiques entre les deux séquences à comparer, obtenu après le meilleur alignement (alignement optimal, ce pourcentage étant purement statistique et les différences entre les deux séquences étant réparties au hasard et sur toute leur longueur. Les comparaisons de séquences entre deux séquences d'acides nucléiques sont traditionnellement réalisées en comparant ces séquences après les avoir alignées de manière optimale, ladite comparaison pouvant être réalisée par segment ou par fenêtre de comparaison .
L'alignement optimal des séquences pour la comparaison peut être réalisé, outre manuellement, au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Smith et Waterman (1981) [Ad. App. Math. 2 :482], au moyen de l'algorithme d'homologie locale de Neddleman et Wunsch (1970) [J.
Mol. Biol. 48 : 443], au moyen de la méthode de recherche de similarité de Peason et Lipman (1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. USA
85 : 2444], au moyen de logiciels informatiques utilisant ces 10 different genotypically but meeting the criteria phenotypic of the invention as regards the bacterial extract can be carried out after a selection work which is in no case insurmountable and this on the basis of the information contained in this application as well as those contained in the application W02012 / 085182 associated with general knowledge of the human job.
By percentage identity between two acid sequences nucleic acids within the meaning of the present invention, is intended to denote a percentage of identical nucleotides between the two sequences to compare, obtained after the best alignment (alignment optimal, this percentage being purely statistical and the differences between the two sequences being distributed at random and over their entire length. Sequence comparisons between two nucleic acid sequences are traditionally carried out by comparing these sequences after having aligned them so optimal, said comparison being able to be carried out by segment or by comparison window.
Optimal alignment of sequences for comparison can be performed, besides manually, using the local homology algorithm of Smith and Waterman (1981) [Ad. App. Math. 2: 482], by means of the local homology algorithm of Neddleman and Wunsch (1970) [J.
Mol. Biol. 48: 443], using the search method for similarity of Peason and Lipman (1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. USA
85: 2444], by means of computer software using these

11 algorithmes (GAP, BESTFIT, FASTA et TFASTA dans le Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI, ou encore par les logiciels de comparaison BLAST N ou BLAST P).
Le pourcentage d'identité entre deux séquences nucléiques est déterminé en comparant ces deux séquences alignées de manière optimale dans laquelle la séquence d'acides nucléiques à comparer peut comprendre des additions ou des délétions par rapport à la séquence de référence pour un alignement optimal entre ces deux séquences. Le pourcentage d'identité est calculé en déterminant le nombre de positions identiques pour lesquelles le nucléotide est identique entre les deux séquences, en divisant ce nombre de positions identiques par le nombre total de positions dans la fenêtre de comparaisons et en multipliant le résultat obtenu par 100 pour obtenir le pourcentage d'identité entre ces deux séquences.
Par exemple, on pourra utiliser le programme BLAST, BLAST
2 sequences (Tatusova et al., Blast 2 sequences - anew tool for comparing protein and nucleotide sequences , FEMS Microbiol Lett. 174 :247-250) disponible sur le site http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/b12.html, les paramètres utilisés sont ceux donnés par défaut (en particulier pour les paramètres open gap penaltie : 5, et extension gap penaltie : 2 ; la matrice choisie est par exemple la matrice BLOSUM 62 proposée par le programme). Le pourcentage d'identité entre les deux séquences à comparer est calculé
directement par le programme. Il est également possible d'utiliser d'autres programmes comme les logiciels ALIGN ou Megalign (DNASTAR).
Une bactérie selon l'invention, en particulier la bactérie LMB64, comprend au moins un plasmide comprenant la séquence SEQ
ID No. 2, ou toute séquence présentant au moins 80%, de préférence 85%, 90%, 95% et 98% d'identité avec ladite séquence SEQ ID No. 2. D'autres caractéristiques de ladite bactérie, en 11 algorithms (GAP, BESTFIT, FASTA and TFASTA in Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI, or by comparison software BLAST N or BLAST P).
The percentage of identity between two nucleic acid sequences is determined by comparing these two sequences aligned so optimal in which the nucleic acid sequence to be compared may include additions or deletions from the reference sequence for optimal alignment between these two sequences. Percent identity is calculated by determining the number of identical positions for which the nucleotide is identical between the two sequences, by dividing this number of identical positions by the total number of positions in the comparison window and multiplying the result obtained by 100 to get the percentage of identity between these two sequences.
For example, we can use the program BLAST, BLAST
2 sequences (Tatusova et al., Blast 2 sequences - anew tool for comparing protein and nucleotide sequences, FEMS Microbiol Lett. 174: 247-250) available on the website http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/b12.html, the settings used are those given by default (in particular for parameters open gap penalty: 5, and extension gap penalty: 2; the chosen matrix is for example the matrix BLOSUM 62 proposed by the program). The percentage identity between the two sequences to compare is calculated directly by the program. It is also possible to use other programs such as ALIGN software or Megalign (DNASTAR).
A bacterium according to the invention, in particular the bacterium LMB64, comprises at least one plasmid comprising the sequence SEQ
ID No. 2, or any sequence exhibiting at least 80%, of preferably 85%, 90%, 95% and 98% identity with said sequence SEQ ID No. 2. Other characteristics of said bacterium, in

12 particulier la bactérie LMB64, seront détaillées plus loin dans les exemples.
De manière générale, le terme extrait bactérien selon l'invention est utilisé pour décrire l'ensemble comprenant les composés solubles présents dans le cytosol de la bactérie, obtenus après l'isolement des cellules bactériennes du milieu de fermentation, leur lyse, en particulier par congélation-décongélation, une re-suspension dans un solvant aqueux et et la récupération la fraction liquide comprenant les composants cytosoliques, les composés intracellulaires solubles des cellules, les composés/molécules membranaires solubles, les composés/molécules transmembranaires solubles, les composés/molécules périplasmiques solubles ainsi que les composés/molécules flagellaires solubles, en particulier les protéines.
Par composés/molécules membranaires solubles, composés/molécules transmembranaires solubles, composés/molécules périplasmiques solubles ainsi que composés/molécules flagellaires solubles, il faut comprendre protéines et autres composés solubles contenus dans le cytoplasmique, voire dans l'espace périplasmique, dans l'espace membranaire ou transmembranaire ou dans le flagelle, et qui sont libérés par la lyse d'une bactérie selon l'invention. Ces protéines et composés sont obtenus par le procédé selon l'invention, c'est à dire la récupération de la phase liquide suivant une séparation liquide/solide menée sur la masse cellulaire de bactéries lysées, par exemple par congélation-décongélation, après isolement de cette masse cellulaire du milieu de fermentation. Ces protéines ou composés intracellulaires cytosoliques, membranaires, périplasmiques et/ou flagellaires solubles comprennent par exemple les ribosomes, les 12 in particular the LMB64 bacteria, will be detailed later in the examples.
In general, the term bacterial extract according to the invention is used to describe the assembly comprising the soluble compounds present in the cytosol of the bacteria, obtained after the isolation of bacterial cells from the medium of fermentation, their lysis, in particular by freezing thawing, resuspension in aqueous solvent and and recovery of the liquid fraction comprising the components cytosolic, soluble intracellular compounds of cells, soluble membrane compounds / molecules, soluble transmembrane compounds / molecules, the soluble periplasmic compounds / molecules as well as soluble flagellar compounds / molecules, in particular protein.
By membrane compounds / molecules soluble, transmembrane compounds / molecules soluble, soluble periplasmic compounds / molecules as well than soluble flagellar compounds / molecules, it is necessary to understand proteins and other soluble compounds contained in the cytoplasmic, even in the periplasmic space, in the membrane or transmembrane or in the flagellum, and which are released by the lysis of a bacterium according to the invention. These proteins and compounds are obtained by the process according to the invention, i.e. the recovery of the liquid phase following a liquid / solid separation carried out on the mass cell of lysed bacteria, for example by freezing thawing, after isolation of this cell mass from the fermentation medium. These proteins or compounds intracellular cytosolic, membrane, periplasmic and / or Soluble flagellars include, for example, ribosomes,

13 enzymes associées au métabolisme cellulaire, des lipopolysaccharides, des sucres, des lipoprotéines, membranaires et périplasmiques, libérés par la lyse et solubles dans l'eau ou dans un solvant aqueux.
Les bactéries se multiplient par fission binaire, c'est-à-dire que chaque bactérie grandit puis se divise en deux cellules filles séparées par un septum de division formé par la paroi cellulaire. Durant la division, l'ADN se duplique ainsi que les autres constituants. Divers systèmes enzymatiques de synthèse et de dégradation participent à la division cellulaire.
La croissance bactérienne est l'accroissement ordonné de tous les composants de la bactérie. Elle aboutit à l'augmentation du nombre de bactéries. Au cours de la croissance, il se produit, d'une part, un appauvrissement du milieu de culture en nutriments et, d'autre part, un enrichissement en biomolécules sécrétées et excrétées dans le milieu de culture par la bactérie et solubilisées dans ce milieu ainsi qu'en sous-produits du métabolisme.
Par l'expression milieu de culture , il faut comprendre tout milieu comprenant au moins les nutriments nécessaires pour la croissance et la multiplication des bactéries. Les bactéries peuvent être cultivées en milieu liquide, solide ou semi-liquide.
De préférence, le milieu de culture est un milieu liquide permettant la croissance et la récupération de la biomasse et permettant l'obtention d'un extrait bactérien selon l'invention.
Un milieu de culture adéquat contient des nutriments favorisants la croissance et la multiplication des bactéries. De manière générale, un milieu de culture convenable pourra comprendre de l'eau une source de carbone, une source d'azote et des sels.
On pourra évoquer le milieu de fermentation ou culture bactérienne qui correspond au milieu de culture contenant les bactéries en fin de croissance et développement. 13 enzymes associated with cell metabolism, of lipopolysaccharides, sugars, lipoproteins, membranes and periplasmic, released by lysis and soluble in water or in an aqueous solvent.
Bacteria multiply by binary fission, that is say that each bacteria grows and then divides into two cells daughters separated by a dividing septum formed by the wall cellular. During division, DNA duplicates as well as other constituents. Various synthetic enzyme systems and degradation are involved in cell division.
Bacterial growth is the orderly growth of all components of the bacteria. It results in the increase the number of bacteria. During growth it occurs, on the one hand, a depletion of the culture medium in nutrients and, on the other hand, an enrichment in secreted biomolecules and excreted into the culture medium by the bacteria and solubilized in this medium as well as in by-products of metabolism.
By the expression culture medium, we must understand any medium comprising at least the nutrients necessary for the growth and multiplication of bacteria. Bacteria can be grown in liquid, solid or semi-liquid medium.
Preferably, the culture medium is a liquid medium.
allowing the growth and recovery of biomass and making it possible to obtain a bacterial extract according to the invention.
The right culture medium contains nutrients promoting the growth and multiplication of bacteria. Of In general, a suitable culture medium can understand water as a source of carbon, a source of nitrogen and salts.
We can evoke the fermentation or culture medium bacterial which corresponds to the culture medium containing the bacteria at the end of growth and development.

14 En pratique, l'extrait bactérien selon l'invention, en particulier un extrait de la bactérie LMB64, peut être obtenu à
partir d'une culture d'une bactérie selon l'invention dans un milieu de culture permettant la croissance, le développement et la multiplication de ladite bactérie et la récupération des cellules après leur séparation de la phase liquide, par exemple centrifugation, sous la forme d'un culot ou biomasse. Cette biomasse est soumise à un traitement permettant de perméabiliser et détériorer les membranes et parois cellulaires - par exemple par congélation-décongélation. L'obtention de l'extrait selon l'invention peut se faire en reprenant la biomasse traitée, en particulier décongelée, avec un tampon basique puis un effectuant une séparation solide/liquide du mélange, par exemple par centrifugation. On obtient ainsi une phase aqueuse représentant l'extrait selon l'invention.
La récupération de la biomasse à partir du milieu de fermentation peut se faire par tout moyen de séparation liquide/solide. Plus particulièrement il est donc possible, par les techniques connues par l'homme de l'art, d'isoler la biomasse cellulaire contenant majoritairement des cellules entières, débris cellulaires comprenant des protéines de surface et/ou des protéines localisées dans l'espace périplasmique de la bactérie de la fraction liquide contenant les solutés résiduels du milieu de culture et les biomolécules excrétées par la bactérie et solubilisées dans le milieu de fermentation.
A titre illustratif, la séparation liquide/solide peut être réalisée par une technique choisie parmi : la centrifugation, la sédimentation, la filtration, l'ultrafiltration, la décantation.
De manière préférée, la séparation liquide/solide est réalisée par centrifugation milieu de fermentation contenant la culture bactérienne afin de séparer, d'un côté la phase solide, c'est-à-dire le culot de biomasse, contenant cellules et débris cellulaires et d'un autre côté la phase liquide, c'est-à-dire le surnageant comprenant les molécules solubles excrétées lors de la fermentation et composés résiduels du milieu de culture non consommés par la bactérie.
5 La phase solide, ie la biomasse obtenue, en particulier le culot de centrifugation, est soumise à une étape entraînant la rupture des membranes des cellules, par exemple une congélation, suivie d'une décongélation.
La congélation peut être réalisée à toute température 10 négative permettant la solidification de l'eau, la formation de cristaux intracellulaires et intermembranaires et donc une rupture, au moins partielle, des membranes.
En particulier, la congélation peut être menée à une 14 In practice, the bacterial extract according to the invention, in in particular an extract of the LMB64 bacterium, can be obtained at from a culture of a bacterium according to the invention in a culture medium allowing the growth, development and multiplication of said bacteria and recovery of cells after separation from the liquid phase, for example centrifugation, in the form of a pellet or biomass. This biomass is subjected to a treatment allowing to permeabilize and deteriorate membranes and cell walls - for example by freezing-thawing. Obtaining the extract according to the invention can be carried out by taking up the treated biomass, by particularly thawed, with a basic buffer and then a a solid / liquid separation of the mixture, for example by centrifugation. This gives an aqueous phase representing the extract according to the invention.
The recovery of biomass from the medium of fermentation can be done by any means of separation liquid / solid. More particularly it is therefore possible, by the techniques known to those skilled in the art, to isolate the biomass cellular mainly containing whole cells, cellular debris comprising surface proteins and / or proteins located in the periplasmic space of the bacteria of the liquid fraction containing the residual solutes of the medium culture and biomolecules excreted by the bacteria and solubilized in the fermentation medium.
By way of illustration, the liquid / solid separation can be carried out by a technique chosen from: centrifugation, sedimentation, filtration, ultrafiltration, settling.
Preferably, the liquid / solid separation is carried out by centrifugation of fermentation medium containing the bacterial culture in order to separate the solid phase on one side, i.e. the biomass pellet, containing cells and debris cells and on the other hand the liquid phase, that is to say the supernatant comprising the soluble molecules excreted during the fermentation and residual compounds of the culture medium not consumed by the bacteria.
5 The solid phase, ie the biomass obtained, in particular the centrifugation pellet, is subjected to a step involving the rupture of cell membranes, for example freezing, followed by thawing.
Freezing can be done at any temperature 10 negative allowing the solidification of water, the formation of intracellular and intermembrane crystals and therefore a at least partial rupture of the membranes.
In particular, freezing can be carried out at a

15 température de -10 C, voire de -20 C, voire encore de -30 C, de -40 C, de -50 C de -60 C, voire encore de -80 C environ.
Préférentiellement, la congélation est faite à -20 C environ.
La durée et la vitesse de congélation ne sont pas critiques en soi. La durée de congélation pourra être fonction de la température et par exemple une durée d'une à plusieurs heures est convenable. La phase solide mise congelée pourra aussi bien être conservées plusieurs jours, semaines ou mois même si ce n'est pas nécessaire.
La vitesse de congélation, ou de décongélation, n'est pas non plus critique et on cherchera des conditions permettant l'altération des parois et membranes bactériennes.
Par décongélation en entend un retour à une température positive permettant une fusion des cristaux de glace.
Cette étape de perméabilisation et rupture des parois et membranes peut aussi être réalisée par des moyens chimiques, 15 temperature of -10 C, or even -20 C, or even -30 C, -40 C, from -50 C to -60 C, or even from -80 C approximately.
Preferably, the freezing is carried out at approximately -20 ° C..
Freezing time and speed are not critical in itself. The duration of freezing may depend on the temperature and for example a duration of one to several hours is suitable. The frozen solid phase may as well be kept for several days, weeks or months even if it is not necessary.
The speed of freezing, or defrosting, is not no longer critical and we will look for conditions allowing alteration of bacterial walls and membranes.
By defrosting means a return to a temperature positive allowing fusion of the ice crystals.
This step of permeabilization and rupture of the walls and membranes can also be made by chemical means,

16 ultrasoniques ou mécaniques tels que des détergents, agents chaotropiques, billes de verres, par exemple.
Cette étape permet la libération des composés intracellulaires cytoplasmiques solubles et qui sont donc présents dans cette phase solide de cellules lysées ou endommagées.
A cette phase solide est ensuite ajoutée une phase liquide sous la forme d'un solvant aqueux pour effectuer une resuspension des cellules lysées ou endommagées et extraire les composés solubles cytoplasmiques solubles dans ledit solvant.
Le solvant aqueux est préférentiellement un tampon, en particulier un tampon basique. D'une manière préférée ce tampon basique est un tampon Tris ou un tampon arginine ou un tampon Tris-arginine. De préférence il s'agit d'un tampon arginine. La concentration en arginine pourra être comprise entre 0.1 et 1 M, particulièrement environ 0.3 à 0.5 M. La concentration en Tris pourra être comprise entre 1 à 100 mM, particulièrement 20 mM. Le pH du tampon basique pourra être compris entre 8 et 12, et de préférence entre 9 et 11.
Cette étape de resuspension permet d'extraire les composés solubles cytoplasmiques contenus dans la biomasse de cellules lysées ou endommagées.
Enfin, on procède à la séparation liquide/solide pour récupérer une phase aqueuse liquide, en particulier une phase aqueuse liquide tamponnée, contenant des composés intracellulaires cytoplasmiques solubles. 16 ultrasonic or mechanical such as detergents, agents chaotropics, glass beads, for example.
This step allows the release of the compounds soluble cytoplasmic intracellular cells and which are therefore present in this solid phase of lysed cells or damaged.
To this solid phase is then added a liquid phase in the form of an aqueous solvent to effect resuspension lysed or damaged cells and extract the compounds soluble cytoplasmic soluble in said solvent.
The aqueous solvent is preferably a buffer, in especially a basic buffer. In a preferred way this tampon basic is Tris buffer or arginine buffer or buffer Tris-arginine. Preferably it is an arginine buffer. The arginine concentration may be between 0.1 and 1 M, particularly about 0.3 to 0.5 M. The concentration of Tris may be between 1 to 100 mM, particularly 20 mM. The pH of the basic buffer may be between 8 and 12, and preferably between 9 and 11.
This resuspension step makes it possible to extract the compounds cytoplasmic solubles contained in cell biomass lysed or damaged.
Finally, the liquid / solid separation is carried out to recover a liquid aqueous phase, in particular a phase buffered liquid aqueous, containing compounds soluble cytoplasmic intracellular cells.

17 Cette phase liquide obtenue représente ainsi l'extrait selon l'invention.
Le ratio phase solide/phase liquide aqueuse pour l'étape de resuspension peut être compris entre 1 et 10% w/v.
L'emploi d'un tampon basique permet de perméabilier encore plus les membranes externes et de favoriser la diffusion des molécules depuis l'espace périplasmique vers le milieu liquide.
L'emploi d'un tampon basique permet en outre de stabiliser les composés, en particulier les protéines solubles et d'éviter leur agrégation sur une longue période de stockage ainsi que leur dégradation par l'action des protéases.
Une ou plusieurs étapes de filtration peuvent réalisées pour clarifier l'extrait et aboutir à un extrait selon l'invention, extrait purifié.
La filtration pourra être réalisée par tout moyen adéquat permettant une clarification de la phase liquide, ou de la phase liquide tamponnée. Une telle clarification par filtration permet l'élimination des particules en suspension qui n'auraient pas été
éliminées lors de la seconde étape de séparation liquide/solide et vise à obtenir un extrait bactérien selon l'invention purifié, limpide.
La filtration peut être réalisée par tout moyen de filtration, ultrafiltration ou diafiltration.
De manière avantageuse la filtration est effectuée par filtration sur filtre ou cartouche à filtre présentant un seuil de 0,4pm, préférentiellement 0,2pm. Dans ce cas, l'extrait bactérien est caractérisé en ce que les composés présents dans l'extrait bactérien ont une taille inférieure ou égale à 0,2pm.
A titre préféré, il peut être utilisé des filtres ou préfiltres non chargés électrostatiquement afin d'éviter toute absorption des biomolécules responsables de tout ou partie de 17 This liquid phase obtained thus represents the extract according to invention.
The solid phase / aqueous liquid phase ratio for the step of resuspension can be between 1 and 10% w / v.
The use of a basic tampon allows to further permeabilate more the outer membranes and promote the diffusion of molecules from the periplasmic space to the liquid medium.
The use of a basic buffer also makes it possible to stabilize the compounds, especially soluble proteins and to avoid their aggregation over a long storage period as well as their degradation by the action of proteases.
One or more filtration steps can be carried out to clarify the extract and obtain an extract according to the invention, purified extract.
Filtration can be carried out by any suitable means allowing clarification of the liquid phase, or of the phase buffered liquid. Such filtration clarification allows elimination of suspended particles that would not have been removed during the second liquid / solid separation step and aims to obtain a purified bacterial extract according to the invention, limpid.
Filtration can be carried out by any means of filtration, ultrafiltration or diafiltration.
The filtration is advantageously carried out by filtration through a filter or filter cartridge with a threshold 0.4 pm, preferably 0.2 pm. In this case, the extract bacterial is characterized in that the compounds present in the bacterial extract have a size less than or equal to 0.2 μm.
Preferably, filters or pre-filters not electrostatically charged in order to avoid any absorption of biomolecules responsible for all or part of

18 l'activité de l'extrait.
Les différentes étapes seront décrites plus en détails dans les exemples. Il faut comprendre que toute modification du procédé, des milieux, des enchainements d'étapes qui parait évidente pour un homme du métier au regard de la présente description devra être considérée comme entrant dans le champ de la présente invention.
Selon une forme d'exécution, le procédé selon l'invention consiste en un procédé de préparation d'un extrait bactérien selon l'invention, ledit procédé comprenant les étapes de :
a) Mise en culture d'une bactérie selon l'invention, en particulier LMB64, dans un milieu approprié pour obtenir une culture bactérienne ;
b) séparation liquide/solide de ladite culture et élimination de la phase liquide ;
c) lyse cellulaire de la phase solide, d) resuspension de la phase solide lysée dans une phase liquide aqueuse, préférentiellement tamponnée, e) séparation liquide/solide et récupération de la phase liquide, f) Optionnellement filtration de la phase liquide.
Selon un mode préféré, l'étape c) de lyse cellulaire de la phase solide est réalisée par congélation suivie de décongélation.
Selon un mode particulier, la bactérie est une bactérie non pathogène à Gram négatif appartenant à la classe des betaproteobacteria, sous-famille des Neisseriaceae, comprenant un ARNr 16S comprenant la séquence SEQ ID No. 1, ou toute séquence présentant au moins 80% d'identité avec la séquence SEQ ID No. 1, plus particulièrement il s'agit de la bactérie LMB64. 18 the activity of the extract.
The different steps will be described in more detail in the examples. It should be understood that any modification of the process, environments, sequences of steps which seems obvious to a person skilled in the art in view of the present description should be considered as falling within the scope of the present invention.
According to one embodiment, the method according to the invention consists of a process for preparing a bacterial extract according to the invention, said method comprising the steps of:
a) Cultivation of a bacterium according to the invention, in particular LMB64, in an appropriate medium to obtain a bacterial culture;
b) liquid / solid separation of said culture and elimination of the liquid phase;
c) cell lysis of the solid phase, d) resuspension of the lysed solid phase in a phase aqueous liquid, preferably buffered, e) liquid / solid separation and recovery of the phase liquid, f) Optionally filtration of the liquid phase.
According to a preferred embodiment, step c) of cell lysis of the phase solid is made by freezing followed by thawing.
According to a particular mode, the bacterium is a bacterium not Gram-negative pathogen belonging to the class of betaproteobacteria, a subfamily of Neisseriaceae, comprising a 16S rRNA comprising the sequence SEQ ID No. 1, or any sequence exhibiting at least 80% identity with the sequence SEQ ID No. 1, more particularly, it is the LMB64 bacterium.

19 De manière préférentielle, la bactérie comprend au moins un plasmide comprenant la séquence SEQ ID No.2, ou toute séquence présentant au moins 80% d'identité avec la séquence SEQ ID No.2.
Selon un mode de réalisation, la présente invention vise un extrait bactérien obtenu, ou susceptible d'être obtenu, par un procédé selon l'invention tel que décrit supra.
Dans un mode de réalisation, l'invention vise un extrait bactérien selon l'invention, en particulier un extrait obtenu ou susceptible d'être obtenu par un procédé selon l'invention, pour son utilisation pour la prévention, le traitement, la prévention et le traitement de l'inflammation neurogène cutanée.
De manière avantageuse, l'inflammation neurogène cutanée comprend la peau sensible et/ou la peau intolérante.
Selon un autre mode de réalisation, l'invention vise une composition cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un extrait bactérien selon l'invention, avec au moins un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, pour son utilisation dans la prévention, le traitement, la prévention et le traitement de l'inflammation neurogène cutanée.
Selon un autre mode de réalisation, l'invention vise une composition cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un extrait bactérien selon l'invention, avec au moins un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, pour son utilisation dans la protection et/ou le traitement des peaux sensibles ou intolérantes. En particulier il s'agit de peaux sensibles ou intolérantes ayant pour origine une inflammation neurogène cutanée.
L'invention concerne également l'utilisation d'une composition cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un extrait bactérien selon l'invention, avec au moins un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, pour la fabrication d'un médicament destiné à la prévention, le 5 traitement, la prévention et le traitement de l'inflammation neurogène cutanée.
L'invention concerne également une méthode de prévention et/ou de traitement de l'inflammation neurogène cutanée 10 comprenant l'administration à un individu en ayant besoin, d'une quantité efficace d'une composition cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un extrait bactérien selon l'invention, avec au moins un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable.
15 De manière avantageuse, l'inflammation neurogène cutanée comprend la peau sensible et/ou la peau intolérante.
Dans la présente invention, on entend désigner par cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable ce qui est utile dans la préparation d'une composition cosmétique ou 19 Preferably, the bacterium comprises at least one plasmid comprising the sequence SEQ ID No.2, or any sequence exhibiting at least 80% identity with the sequence SEQ ID No.2.
According to one embodiment, the present invention aims at a bacterial extract obtained, or likely to be obtained, by a method according to the invention as described above.
In one embodiment, the invention relates to an extract bacterial according to the invention, in particular an extract obtained or obtainable by a process according to the invention, for its use for prevention, treatment, prevention and treatment of neurogenic skin inflammation.
Advantageously, neurogenic skin inflammation includes sensitive skin and / or intolerant skin.
According to another embodiment, the invention is aimed at cosmetic or dermatological composition comprising at least one bacterial extract according to the invention, with at least one excipient cosmetically or dermatologically acceptable, for its use in the prevention, treatment, prevention and treatment of neurogenic skin inflammation.
According to another embodiment, the invention is aimed at cosmetic or dermatological composition comprising at least one bacterial extract according to the invention, with at least one excipient cosmetically or dermatologically acceptable, for its use in the protection and / or treatment of skin sensitive or intolerant. In particular, these are skins sensitive or intolerant caused by inflammation skin neurogen.
The invention also relates to the use of a cosmetic or dermatological composition comprising at least one bacterial extract according to the invention, with at least one excipient cosmetically or dermatologically acceptable, for manufacture of a drug intended for the prevention, 5 treatment, prevention and treatment of inflammation skin neurogen.
The invention also relates to a method of preventing and / or treatment of neurogenic skin inflammation 10 comprising administration to an individual in need thereof, a effective amount of a cosmetic or dermatological composition comprising at least one bacterial extract according to the invention, with at least one cosmetically or dermatologically excipient acceptable.
Advantageously, the neurogenic skin inflammation comprises sensitive skin and / or intolerant skin.
In the present invention, the term “
cosmetically or dermatologically acceptable which is useful in the preparation of a cosmetic composition or

20 dermatologique qui est généralement sûr, non toxique et ni biologiquement ni autrement non souhaitable et qui est acceptable pour une utilisation cosmétique ou dermatologique, notamment par application topique.
Selon un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention se présente sous une forme adaptée à une application topique.
Les compositions cosmétiques ou dermatologiques selon l'invention pourront se présenter sous les formes qui sont habituellement connues pour une administration topique, c'est-à-dire notamment les lotions, les mousses, les gels, les dispersions, les émulsions, les sprays, les sérums, les masques ou les crèmes, les gelées, notamment les gelées micellaires, avec des excipients permettant notamment une pénétration cutanée afin 20 dermatological which is generally safe, non-toxic and neither biologically or otherwise undesirable and which is acceptable for cosmetic or dermatological use, in particular by topical application.
According to a particular embodiment, the composition according to the invention is in a form suitable for a topical application.
Cosmetic or dermatological compositions according to the invention may be in the forms which are usually known for topical administration, i.e.
say in particular lotions, foams, gels, dispersions, emulsions, sprays, serums, masks or creams, jellies, in particular micellar jellies, with excipients allowing in particular skin penetration in order to

21 d'améliorer les propriétés et l'accessibilité du principe actif.
Avantageusement, il s'agira d'une crème, une crème riche, une lotion, un soin yeux, un soin UV.
Ces compositions contiennent généralement, outre les composés de l'extrait bactérien selon l'invention, un milieu physiologiquement acceptable, en général à base d'eau ou de solvant, par exemple des alcools, des éthers ou des glycols.
Elles peuvent également contenir des agents tensioactifs, des agents complexants, des conservateurs, des agents stabilisants, des émulsifiants, des épaississants, des gélifiants, des humectants, des émollients, des oligo-éléments, des huiles essentielles, des parfums, des colorants, des agents matifiants, des filtres chimiques ou minéraux, des agents hydratants, des eaux thermales, etc.
Avantageusement, les compositions selon la présente invention comprendront 0,05 à 10% en poids, de préférence 0,1 à
5% en poids, de manière encore préférée 0,5 à 3% en poids de l'extrait bactérien selon l'invention par rapport au poids total de la composition.
La composition selon l'invention apporte une protection qui reste confortable tout au long de la journée. Elle peut en particulier être appliquée aux peaux sensibles, les peaux réactives, et notamment aux peaux de bébé.
De préférence, la composition selon la présente invention est utilisée pour prévenir, protéger et/ou traiter les peaux sensibles.
D'une manière générale, les peaux sensibles se définissent par une réactivité particulière de la peau. Cette réactivité
cutanée se traduit classiquement par la manifestation de signes d'inconfort en réponse à la mise en contact du sujet avec un élément déclenchant qui peut avoir diverses origines. Il peut s'agir de l'application d'un produit cosmétique en surface de la peau sensible, de la prise d'aliments, de l'exposition à des variations brutales de températures, à la pollution atmosphérique 21 to improve the properties and accessibility of the active principle.
Advantageously, it will be a cream, a rich cream, a lotion, eye care, UV care.
These compositions generally contain, in addition to compounds of the bacterial extract according to the invention, a medium physiologically acceptable, usually based on water or solvent, for example alcohols, ethers or glycols.
They can also contain surfactants, complexing agents, preservatives, stabilizers, emulsifiers, thickeners, gelling agents, humectants, emollients, trace elements, oils essential, perfumes, dyes, mattifying agents, chemical or mineral filters, moisturizing agents, thermal waters, etc.
Advantageously, the compositions according to the present invention will comprise 0.05 to 10% by weight, preferably 0.1 to 5% by weight, more preferably 0.5 to 3% by weight of the bacterial extract according to the invention relative to the total weight of the composition.
The composition according to the invention provides protection which stays comfortable all day long. She can especially to be applied to sensitive skin, skin reactive, and in particular to baby's skin.
Preferably, the composition according to the present invention is used to prevent, protect and / or treat the skin sensitive.
In general, sensitive skin is defined by a particular reactivity of the skin. This responsiveness skin usually results in the manifestation of signs discomfort in response to the subject coming into contact with a triggering element which can have various origins. he can it is the application of a cosmetic product on the surface of the sensitive skin, food intake, exposure to sudden changes in temperature, air pollution

22 et/ou à des rayons ultra-violets ou infrarouges. Il existe également des facteurs associés avec l'âge et le type de peau.
Ainsi les peaux sensibles sont plus fréquentes parmi les peaux sèches ou grasses que parmi les peaux normales. Au sens de la présente invention, les peaux sensibles couvrent les peaux irritables et les peaux intolérantes.
De telles compositions peuvent être fabriquées selon des procédés bien connus de l'homme du métier.
L'invention sera mieux comprise à la lecture des exemples ci-dessous qui l'illustrent sans en limiter la portée.
Exemple 1 : Culture de la bactérie LMB64 A titre d'exemple non limitatif, des milieux de culture préférés contiennent du chlorure d'ammonium, du sulfate de magnésium et de l'extrait de levure. A noter également, comme cela ressort entre autres de la demande W02012/085182, d'autres milieux similaires pourront être utilisés et doivent donc être considérés comme faisant partie intégrante de la présente description. Toute adaptation de l'Homme de l'art doit également être considérée comme partie de l'invention.
Un exemple de procédé de culture est décrit ci-dessous. Il convient de rappeler ici que cet exemple n'a de valeur qu'illustrative et ne doit aucunement être considéré comme limitatif.
La souche LMB64 est cultivée en trois étapes, à savoir un premier inoculum, une préculture (ou préfermentation) en mode batch et enfin une culture mais en mode fed-batch (ajout de glucose).
Inoculum : Un tube de la WCB LMB64 est utilisé pour ensemencer un Erlenmeyer contenant 1000mL de milieu stérile. L'erlenmeyer est 22 and / or ultraviolet or infrared rays. It exists also factors associated with age and skin type.
Thus sensitive skin is more common among the skin dry or oily than normal skin. Within the meaning of present invention, sensitive skin covers skin irritable and intolerant skin.
Such compositions can be made according to methods well known to those skilled in the art.
The invention will be better understood on reading the examples below which illustrate it without limiting its scope.
Example 1: Culture of the LMB64 bacterium By way of non-limiting example, culture media preferred contain ammonium chloride, sulphate of magnesium and yeast extract. Also note, as this emerges among others from application W02012 / 085182, others similar media can be used and must therefore be considered to be an integral part of this description. Any adaptation by a person skilled in the art must also be considered as part of the invention.
An example of a cultivation method is described below. He should be remembered here that this example has no value illustrative and should in no way be considered as limiting.
The LMB64 strain is cultivated in three stages, namely a first inoculum, a preculture (or pre-fermentation) in batch and finally a culture but in fed-batch mode (addition of glucose).
Inoculum: A tube of WCB LMB64 is used to inoculate a Erlenmeyer flask containing 1000mL of sterile medium. The Erlenmeyer is

23 ensuite placé dans le shaker incubateur sous agitation. Lorsque la densité cellulaire du bouillon est suffisante, la culture est arrêtée. Les cellules sont alors mises en refroidissement jusqu'à
transfert dans le préfermenteur.
Préculture : le préfermenteur est ensuite rempli avec environ 16 L de milieu puis stérilisée à plein.
Deux flacons satellites sont connectés sur le préfermenteur après stérilisation de la cuve puis des blocs d'ajout :
- Un flacon contenant une solution stérile de glucose à
50%. Cette solution (glucose batch préculture) est transférée immédiatement dans le milieu de culture pour atteindre la concentration initiale de glucose de 20g/L.
- L'erlenmeyer contenant l'inoculum décrit plus haut à
l'étape Inoculum est ensemencé dans le préfermenteur.
La préculture est lancée puis régulée automatiquement. A
titre d'exemple, il peut être mentionné les paramètres suivants :
température, vitesse d'agitation, pression, débit d'air ou encore Po2.
La croissance des cellules est suivie par une mesure de la densité optique à 620nm. La préculture est arrêtée par refroidissement lorsqu'elle atteint une densité suffisante.
Culture : le fermenteur est ensuite rempli avec 127 L de milieu ajusté à pH 7,0 puis stérilisé à plein. Trois flacons satellites sont utilisés :
- Un flacon contenant une solution stérile de glucose.
Cette solution est transférée immédiatement dans le milieu de culture pour atteindre la concentration initiale de glucose de 20g/L.
- Un flacon d'antimousse. Cet antimousse sera ajouté
automatiquement pendant la culture pour contrôler le niveau de mousse dans la cuve.
- Un flacon de glucose fedbatch. Cette solution sera ajoutée en cours de culture pour supporter la croissance des cellules. 23 then placed in the shaker incubator with agitation. When the cell density of the broth is sufficient, the culture is stopped. The cells are then cooled until transfer to the prefermenter.
Preculture: the pre-fermenter is then filled with approximately 16 L of medium then sterilized to full.
Two satellite flasks are connected to the pre-fermenter after sterilization of the tank then of the addition blocks:
- A vial containing a sterile solution of glucose 50%. This solution (preculture batch glucose) is immediately transferred to the culture medium for reach the initial glucose concentration of 20g / L.
- The Erlenmeyer flask containing the inoculum described above at the Inoculum step is inoculated in the prefermenter.
The preculture is started and then regulated automatically. AT
As an example, the following parameters can be mentioned:
temperature, stirring speed, pressure, air flow or even Po2.
Cell growth is monitored by measuring the optical density at 620nm. The preculture is stopped by cooling when it reaches a sufficient density.
Culture: the fermenter is then filled with 127 L of medium adjusted to pH 7.0 then fully sterilized. Three satellite bottles are used :
- A vial containing a sterile glucose solution.
This solution is immediately transferred to the culture medium to achieve concentration initial glucose of 20g / L.
- A bottle of defoamer. This defoamer will be added automatically during cultivation to control the foam level in the tank.
- A vial of fedbatch glucose. This solution will be added during cultivation to support growth cells.

24 La culture est lancée puis régulée automatiquement. A titre d'exemple, il peut également être mentionné les paramètres suivants : température, pH, agitation, pression, débit d'air P02.
Après épuisement du glucose initialement présent dans le milieu (remontée de Po2), l'ajout de la solution glucose fedbatch est déclenché et permet une croissance des cellules à haute densité. La fermentation est arrêtée après consommation totale du glucose. A ce stade, le mout de fermentation est refroidi automatiquement. Tout au long de la culture, la croissance des cellules est suivie par une mesure de la densité optique à 620nm.
La quantité de biomasse sèche (g/L) obtenue en fin de culture est déterminée en utilisant une méthode pondérale.
Exemple 2 : extraction de la fraction selon l'invention L'exemple ci-dessous est donné à titre illustratif d'un mode de réalisation préféré, mais ne doit pas être considéré comme limitatif.
L'extrait bactérien selon l'invention est obtenu de manière générale après centrifugation du résultat de l'étape de culture afin d'éliminer le surnageant et de garder la biomasse, c'est à
dire les cellules, les protéines de surface, les protéines localisées dans l'espace périplasmique et des protéines intracellulaires de la bactérie (présence due à l'étape de congélation). Pour l'étape de centrifugation, la ligne de transfert du fermenteur à la centrifugeuse est stérilisée. Le mout de fermentation est ensuite séparé par centrifugation continue sur une centrifugeuse. La centrifugation est conduite à
150 L/h ( 30 L/h) avec une vitesse de rotation du bol de 10900 1000 rpm. Les cellules sont récupérées dans une poche à usage unique. Le surnageant est éliminé à l'upérisation. Cette étape de centrifugation est suivie d'une étape de congélation à -20 C
pendant du culot pendant au moins 1 heure.
Cent dix litres de tampon d'extraction Tris Arginine sont stérilisés dans le fermenteur. Les cellules auparavant décongelées à température ambiante sont transférées dans le fermenteur via la pompe péristaltique. Le temps de contact nécessaire est compris entre 1 et 7 heures. La concentration cible en Tris et arginine après ajout dans la poche à usage 5 unique est aux alentours de 0,3M en L-arginine et 20mM en Tris.
Le mout de fermentation est ensuite séparé par centrifugation continue sur une centrifugeuse. La centrifugation est conduite à 100 L/h ( 30 L/h) avec une vitesse de rotation du bol de 10900 1000 rpm. Les débourbages partiels sont initiés 10 automatiquement en fonction de la turbidité de l'effluent avec une consigne à 20% de turbidité. Une série de débourbages totaux est déclenchée manuellement à la moitié du volume à séparer. Le surnageant est récupéré dans une poche à usage unique. Les cellules sont éliminées à l'upérisation.
15 Deux étapes de filtration sont réalisées en ligne, afin de clarifier le surnageant et aboutir à un extrait bactérien selon l'invention exempt de germes. Le pilotage de la filtration est réalisé grâce au système de filtration/répartition. La cartouche de filtration en profondeur à usage unique est placée dans son 20 carter de filtration. Les manifolds de filtration sont équipés de leurs manomètres permettant la sécurisation de l'étape de filtration. Le module de pré filtration est rincé avec environ 92L 5L d'eau purifiée puis la poche de produit à filtrer est connectée et mise sous agitation. Enfin, la cartouche de 24 The culture is started and then regulated automatically. As example, it can also be mentioned the parameters following: temperature, pH, agitation, pressure, air flow P02.
After exhaustion of the glucose initially present in the medium (rise in Po2), adding the fedbatch glucose solution is triggered and allows high cell growth density. Fermentation is stopped after total consumption of the glucose. At this stage, the fermentation must is cooled.
automatically. Throughout culture, the growth of cells is followed by an optical density measurement at 620nm.
The quantity of dry biomass (g / L) obtained at the end of the culture is determined using a weight method.
Example 2: extraction of the fraction according to the invention The example below is given by way of illustration of a mode preferred embodiment, but should not be considered as limiting.
The bacterial extract according to the invention is obtained in a manner general after centrifugation of the result of the culture step in order to eliminate the supernatant and keep the biomass, it is say cells, surface proteins, proteins localized in the periplasmic space and proteins intracellular bacteria (presence due to the stage of freezing). For the centrifugation step, the line of transfer from the fermenter to the centrifuge is sterilized. The fermentation mash is then separated by centrifugation continues on a centrifuge. Centrifugation is carried out at 150 L / h (30 L / h) with a bowl rotation speed of 10900 1000 rpm. The cells are collected in a bag for use unique. The supernatant is eliminated during the operation. This step of centrifugation is followed by a freezing step at -20 C
pellet for at least 1 hour.
One hundred and ten liters of Tris Arginine extraction buffer are sterilized in the fermenter. Cells before thawed at room temperature are transferred to the fermenter via the peristaltic pump. Contact time required is between 1 and 7 hours. Concentration target in Tris and arginine after addition to the use bag Unique 5 is around 0.3M in L-arginine and 20mM in Tris.
The fermentation must is then separated by continuous centrifugation on a centrifuge. Centrifugation is driven at 100 L / h (30 L / h) with a rotation speed of bowl of 10900 1000 rpm. Partial settling is initiated 10 automatically depending on the turbidity of the effluent with a set point at 20% turbidity. A series of total settling is manually triggered at half the volume to be separated. The supernatant is collected in a disposable bag. The cells are eliminated upon uptake.
15 Two filtration steps are carried out online, in order to clarify the supernatant and result in a bacterial extract according to germ-free invention. The filtration control is achieved through the filtration / distribution system. The cartridge disposable depth filtration filter is placed in its 20 filter housing. The filtration manifolds are equipped with their pressure gauges allowing the safety of the filtration. The pre-filtration module is rinsed with approximately 92L 5L of purified water then the bag of product to be filtered is connected and stirred. Finally, the cartridge of

25 filtration 0,2pm 30" en PES est connectée au reste du système de filtration. La filtration est réalisée à un débit initial de 240L/h 10L grâce à une pompe péristaltique. Lorsque la pression en amont des filtres atteint 1,2 bars le débit de filtration est diminué. La totalité du produit filtré est récupéré stérilement dans un container équipé d'une poche à usage unique de 400L. La poche de produit filtré est pesée sur le plateau balance puis stockée à +5 C jusqu'à répartition. Après utilisation, le filtre stérilisant est déconnecté puis contrôlé par un test d'intégrité. 25 0.2pm 30 "filtration in PES is connected to the rest of the filtration. Filtration is carried out at an initial flow rate of 240L / h 10L thanks to a peristaltic pump. When the pressure upstream of the filters reaches 1.2 bars the filtration flow rate is decreases. All of the filtered product is sterilized in a container fitted with a 400L disposable bag. The bag of filtered product is weighed on the weighing plate then stored at +5 C until distribution. After use, the filter sterilant is disconnected and then checked by an integrity test.

26 Exemple 3 : Effet de l'extrait bactérien selon l'invention sur l'inflammation neurogène cutanée Le but de cette étude est d'évaluer les propriétés modulatrices de l'extrait bactérien selon l'invention dans l'inflammation cutanée. Pour ce faire une approche expérimentale in vitro basée sur la mesure de production et de libération de INF-a (Tumor Necrosis Factor-alpha) et d'IL-1P (Interleukin-1 beta) par des kératinocytes épidermiques humains, activés par la substance P, est proposée comme modèle in vitro de l'inflammation neurogène cutanée.
Protocole L'étude est réalisée sur des kératinocytes épidermiques normaux humains, ces cellules sont obtenues à partir de prépuces de nouveau-nés. Ces cellules sont mises en culture dans un milieu sans sérum selon des procédures classiques en laboratoire. Le dosage des marqueurs de l'inflammation neurogène cutanée est réalisé sur ces kératinocytes cultivés dans un milieu en absence (condition contrôle) ou en présence des composés à tester (extrait bactérien selon l'invention et produit de référence), et exposés ou pas à la substance P. Les kératinocytes sont traités 3 heures avant le stress induit par la substance P et durant les 24 heures suivantes. Les niveaux de cytokines pro inflammatoires (INF-a et IL-10) sont quantifiés 24h après l'induction du stress inflammatoire par l'ajout de la substance P (0,5pM).
Simultanément, le composé CP96345, un inhibiteur sélectif NK-1R
est testé à 1pM comme produit de référence. Chaque condition expérimentale est conduite sur deux donneurs différents de kératinocytes.
Les productions de INF-a et IL-1f3 sont mesurées dans les milieux d'incubation et quantifiées par ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). L'analyse statistique (*p<0,05 ; **p<0,01 ou ***p<0,001) est déterminée sur le pourcentage d'inhibition en utilisant un test non-paramétrique car les données ne passent pas 26 Example 3: Effect of the bacterial extract according to the invention on neurogenic skin inflammation The aim of this study is to evaluate the properties modulators of the bacterial extract according to the invention in skin inflammation. To do this an experimental approach in vitro based on measurement of production and release of INF-a (Tumor Necrosis Factor-alpha) and IL-1P (Interleukin-1 beta) by human epidermal keratinocytes, activated by substance P, is proposed as an in vitro model of inflammation skin neurogen.
Protocol The study is carried out on epidermal keratinocytes normal human cells, these cells are obtained from foreskin of newborns. These cells are cultured in a medium serum-free according to standard laboratory procedures. The determination of markers of neurogenic skin inflammation is carried out on these keratinocytes cultured in a medium in the absence (control condition) or in the presence of the compounds to be tested (bacterial extract according to the invention and reference product), and exposed or not to substance P. The keratinocytes are treated 3 hours before the stress induced by substance P and during the 24 following hours. Levels of pro-inflammatory cytokines (INF-a and IL-10) are quantified 24 hours after stress induction inflammatory by adding substance P (0.5 pM).
Simultaneously, the compound CP96345, a selective NK-1R inhibitor is tested at 1pM as a reference product. Each condition experimental is carried out on two different donors of keratinocytes.
The productions of INF-a and IL-1f3 are measured in incubation media and quantified by ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Statistical analysis (* p <0.05; ** p <0.01 or *** p <0.001) is determined on the percentage of inhibition in using a non-parametric test because the data does not pass

27 le test de normalité, suivi par le test de comparaison multiple de Dunn comme post-test.
Les résultats sur la libération IL-10 (pg/mg de protéine totale) sont résumés dans le tableau 1 ci-dessous :
Groupes conc IL-10 (pg/ml) % Inh Stats moyenne e.s.
Cont SP(-) 122,2 11,8 - P<0,001 Cont SP(+) 241,2 18,3 NK-1R inh 1pM 132,5 12,1 91 P<0,05 Composé 1,64pg/m1 143,2 9,2 80 NS
selon 5,45pg/m1 127,7 8,4 93 P<0,05 l'invention 16,36pg/m1 125,7 10,2 96 P<0,01 Conc : concentrations, Inh : inhibition, Stats : statistique versus Cont (+) ; E.s. : Erreur standard à la moyenne ; Cont :
contrôle (sans produit à tester) ; SP (-) : sans substance P ; SP
(+) : en présence de substance P.
L'exposition des kératinocytes à la substance P induit une libération importante et statistiquement significative d'IL-1P.
Le traitement par le CP96345 à 1 pM réduit fortement (91%, P<0,05) la production d'IL-113. Ce résultat est très probant, l'utilisation de cet inhibiteur NK-1R a permis de valider ce test. Le traitement des kératinocytes avec le composé selon l'invention permet une inhibition concentration-dépendante de la libération d'IL-1P induite par la substance P. Si la première concentration testée (1,64pg/m1 de protéines) n'atteint pas la significativité, elle réduit tout de même de 80% cette libération d'IL-1P. Aux concentrations de 5,45pg/m1 et 16.36pg/m1 (pl/ml de protéine), cette inhibition est statistiquement significative (93% et 96% d'inhibition, p<0,05 et p<0,01, respectivement). 27 the normality test, followed by the multiple comparison test of Dunn as a post-test.
Results on IL-10 release (pg / mg total protein) are summarized in Table 1 below:
Conc IL-10 groups (pg / ml)% Inh Stats average Cont SP (-) 122.2 11.8 - P <0.001 Cont SP (+) 241.2 18.3 NK-1R inh 1pM 132.5 12.1 91 P <0.05 Compound 1.64pg / m1 143.2 9.2 80 NS
according to 5.45pg / m1 127.7 8.4 93 P <0.05 invention 16.36pg / m1 125.7 10.2 96 P <0.01 Conc: concentrations, Inh: inhibition, Stats: statistics versus Cont (+); Es: Standard error of the mean; Cont:
control (without product to test); SP (-): without substance P; SP
(+): in the presence of substance P.
Exposure of keratinocytes to substance P induces a significant and statistically significant release of IL-1P.
Treatment with CP96345 at 1 pM greatly reduced (91%, P <0.05) IL-113 production. This result is very convincing, the use of this NK-1R inhibitor validated this test. Treatment of keratinocytes with the compound according to the invention allows a concentration-dependent inhibition of the release of IL-1P induced by substance P. If the first concentration tested (1.64pg / m1 of protein) does not reach the significance, it still reduces this release by 80%
IL-1P. At concentrations of 5.45pg / m1 and 16.36pg / m1 (pl / ml of protein), this inhibition is statistically significant (93% and 96% inhibition, p <0.05 and p <0.01, respectively).

28 Les résultats sur la libération de INF-a (pg/mg de protéine totale) sont résumés dans le tableau 2 ci-dessous :
Groupes conc INF-a(pg/m1) % Inh Stats moyenne e.s.
Cont SP(-) 4,1 0,7 - P<0,01 Cont SP(+) 9,9 0,8 NK-1R inh 1pM 4,6 0,9 90 P<0,001 extrait 1,64pg/m1 6,1 0,5 63 NS
selon 5,45pg/m1 5,9 0,6 68 NS
l'invention 16,36pg/m1 5,4 0,6 77 P<0,01 Conc : concentrations, Inh : inhibition, Stats : statistique versus Cont (+) ; E.s. : Erreur standard à la moyenne ; Cont :
contrôle (sans produit à tester) ; SP (-) : sans substance P ; SP
(+) : en présence de substance P.
L'exposition des kératinocytes à la substance P induit une libération importante et statistiquement significative de INF-a.
Le traitement par le CP96345 à 1 pM réduit fortement (90%, P<0,05) la production de INF-a. Ce résultat est également très probant, l'utilisation de cet inhibiteur NK-1R a permis de valider ce test. Le traitement des kératinocytes avec l'extrait bactérien selon l'invention permet une inhibition concentration-dépendante de la libération de INF-a induite par la substance P.
La plus faible concentration testée de l'extrait bactérien selon l'invention inhibe la libération de INF-a de 60%. Même si cette inhibition n'atteint pas le seuil de significativité, l'effet concentration-réponse mis en évidence montre clairement que l'extrait bactérien selon l'invention est très actif sur ce test.
A la concentration de 16.36pg/m1 de protéine, cette inhibition est statistiquement significative (77% d'inhibition p<0,01).
Ainsi les inventeurs mettent en évidence qu'un extrait bactérien selon l'invention est capable d'inhiber significativement la production de cytokines produites via la 28 The results on the release of INF-a (pg / mg protein total) are summarized in Table 2 below:
Groups conc INF-a (pg / m1)% Inh Stats average Cont SP (-) 4.1 0.7 - P <0.01 Cont SP (+) 9.9 0.8 NK-1R inh 1pM 4.6 0.9 90 P <0.001 extract 1.64pg / m1 6.1 0.5 63 NS
according to 5.45pg / m1 5.9 0.6 68 NS
invention 16.36pg / m1 5.4 0.6 77 P <0.01 Conc: concentrations, Inh: inhibition, Stats: statistics versus Cont (+); Es: Standard error of the mean; Cont:
control (without product to test); SP (-): without substance P; SP
(+): in the presence of substance P.
Exposure of keratinocytes to substance P induces a significant and statistically significant release of INF-a.
Treatment with CP96345 at 1 pM greatly reduced (90%, P <0.05) the production of INF-a. This result is also very convincing, the use of this NK-1R inhibitor made it possible to validate this test. Treatment of keratinocytes with the extract bacteria according to the invention allows concentration inhibition dependent on the release of INF-a induced by substance P.
The lowest tested concentration of the bacterial extract according to the invention inhibits the release of INF-α by 60%. Even if this inhibition does not reach the significance level, the effect concentration-response highlighted clearly shows that the bacterial extract according to the invention is very active on this test.
At a concentration of 16.36 pg / m1 of protein, this inhibition is statistically significant (77% inhibition p <0.01).
Thus the inventors demonstrate that an extract bacterial according to the invention is capable to inhibit significantly the production of cytokines produced via

29 substance P, cet extrait bactérien selon l'invention est donc efficace dans le traitement de l'inflammation neurogène cutanée.
Exemple 4 : Effet de l'extrait bactérien selon l'invention sur le profil d'expression génique de l'immunité innée dans un modèle de kératinocytes épidermiques normaux humains La fonction barrière de la peau inclut aussi une défense contre les micro-organismes. L'épithélium joue un rôle actif dans les défenses innées de l'hôte. Les systèmes antimicrobiens cutanées reposent entre autres sur la présence de certains lipides de surface et de certaines protéines constitutives. Ces protéines possèdent des activités antimicrobiennes. De plus, l'acidification de la surface épidermique joue un rôle important sans la défense antimicrobienne cutanée. La peau agit ainsi non seulement comme une barrière physique, mais aussi comme une barrière chimique. Il existe également une composante adaptative de l'immunité innée reposant sur la sécrétion inductible de peptides antimicrobiens. Ces derniers jouent un rôle important comme médiateurs de l'inflammation en ayant des effets sur les cellules épithéliales et inflammatoires, en influençant la prolifération cellulaire et la production de cytokines. Leur mode d'action consiste à rompre la membrane plasmique des microbes infectieux ou à pénétrer dans le microorganisme afin d'interférer avec le métabolisme intracellulaire. Les peptides antimicrobiens les plus étudiés dans la peau sont les P-défensines et les cathélicidines. Les P-défensines humaines constituent la classe majeure des peptides antimicrobiens retrouvés dans les épithéliums humains et quatre d'entre elles ont été identifiées dans la peau, HBD 1-4. Bien qu'elles appartiennent à la même famille, elles sont régulées par des voix différentes. La p-défensine 2 humaine (hBD2), un peptide de 4kDa se liant à
l'héparine est l'un des principaux peptides antimicrobiens cutanés. L'expression des peptides hBD2 est inductible soit par la sécrétion de cytokines (IL-la et IL-10 et TNF-a) traduisant un état inflammatoire, soit par contact avec une bactérie ou un champignon.
5 Le but de cette étude est d'évaluer les effets de l'extrait bactérien selon l'invention sur l'expression génique de kératinocytes épidermiques normaux humains par une technique de RT-PCR sur 2 gènes reliés à l'immunité innée.

L'étude est réalisée sur des kératinocytes épidermiques normaux humains issus de trois donneurs. Ces cellules sont utilisées à leur troisième passage. Ces cellules sont mises en culture dans un milieu standard supplémenté en EGF (Epidermal Growth factor), de PE (Pituitary extract) et de gentamycine, 15 selon des procédures classiques en laboratoire.
L'extrait bactérien selon l'invention est testé à trois concentrations, 0,4 ; 2 et 10pg/m1 (pg/ml de protéines).
Simultanément, le chlorure de calcium est testé à 1,5mM
comme produit de référence.
20 Les kératinocytes sont ensemencés en plaques de 24 puits (50000 cellules par puits) et mises en culture pendant 24 heures dans un milieu de culture. Le milieu est ensuite remplacé par un milieu d'essai contenant ou pas (condition contrôle, DMSO) l'extrait bactérien selon l'invention, ou le chlorure de calcium 25 (produit de référence), les cellules sont incubées dans ces conditions pendant 48 heures. A la fin de cette période d'incubation, les cellules sont lavées dans une solution tamponnée et immédiatement congelées à une température de -80 C.
L'expression des marqueurs est analysée par la méthode de 29 substance P, this bacterial extract according to the invention is therefore effective in the treatment of neurogenic skin inflammation.
Example 4: Effect of the bacterial extract according to the invention on the gene expression profile of innate immunity in a model of normal human epidermal keratinocytes The barrier function of the skin also includes a defense against microorganisms. The epithelium plays an active role in the innate defenses of the host. Antimicrobial systems cutaneous are based, among other things, on the presence of certain surface lipids and some constituent proteins. These proteins possess antimicrobial activities. Furthermore, acidification of the epidermal surface plays an important role without skin antimicrobial defense. The skin does not only as a physical barrier, but also as a chemical barrier. There is also an adaptive component of innate immunity based on the inducible secretion of antimicrobial peptides. These play an important role as mediators of inflammation by having effects on the epithelial and inflammatory cells, influencing the cell proliferation and cytokine production. Their fashion action is to break the plasma membrane of microbes infectious or enter the microorganism in order to interfere with with intracellular metabolism. Antimicrobial peptides the most studied in the skin are the P-defensins and the cathelicidins. Human P-defensins constitute the class major antimicrobial peptides found in human epithelia and four of them have been identified in the skin, HBD 1-4. Although they belong to the same family, they are regulated by different voices. The p-human defensin 2 (hBD2), a 4kDa peptide that binds to heparin is one of the main antimicrobial peptides cutaneous. The expression of hBD2 peptides is inducible either by the secretion of cytokines (IL-1a and IL-10 and TNF-a) translating a inflammatory condition, either through contact with bacteria or mushroom.
5 The aim of this study is to evaluate the effects of the extract bacterial according to the invention on the gene expression of normal human epidermal keratinocytes by a technique of RT-PCR on 2 genes linked to innate immunity.

The study is carried out on epidermal keratinocytes normal human from three donors. These cells are used on their third pass. These cells are put in culture in a standard medium supplemented with EGF (Epidermal Growth factor), PE (Pituitary extract) and gentamycin, 15 according to conventional laboratory procedures.
The bacterial extract according to the invention is tested at three concentrations, 0.4; 2 and 10pg / m1 (pg / ml protein).
Simultaneously, the calcium chloride is tested at 1.5mM
as a reference product.
20 The keratinocytes are inoculated in 24-well plates (50,000 cells per well) and cultured for 24 hours in a culture medium. The middle is then replaced by a test medium containing or not (control condition, DMSO) the bacterial extract according to the invention, or calcium chloride 25 (reference product), the cells are incubated in these conditions for 48 hours. At the end of this period incubation, the cells are washed in a solution buffered and immediately frozen at -80 C.
The expression of the markers is analyzed by the method of

30 RT-qPCR sur l'ARN total extrait des cellules et ce dans chaque condition. L'ARN total est extrait dans chaque échantillon en utilisant le réactif Tripure Isolation selon les instructions du fournisseur. La quantité et la qualité d'ARN sont évaluées par électrophorèse capillaire. L'ADNc est synthétisé
par 30 RT-qPCR on total RNA extracted from cells in each condition. Total RNA is extracted from each sample by using the Tripure Isolation reagent according to the instructions of the provider. The quantity and quality of RNA are assessed by capillary electrophoresis. CDNA is synthesized through

31 transcription réverse de l'ARN total en présence d'oligo(dT) et de Transcriptor Reverse Transcriptase . La quantité d'ADNc est ensuite ajustée avant l'étape de PCR (Polymerase Chain Reaction).
La PCR est réalisée en utilisant le système LightCyclere de Roche selon les données du fournisseur.
Les données sont analysées par le logiciel Microsoft Excel.
L'incorporation de fluorescence dans l'ADN amplifié est continuellement mesurée pendant les cycles de PCR. Il en résulte dans une représentation graphique entre l'intensité de fluorescence et le nombre de cycles de PCR une valeur d'expression relative pour chaque marqueur.
La technique PCR utilisée dans cette étude inclut 2 gènes de référence (RPL13A et TBP), ces gènes sont utilisés pour la normalisation des données, puisque leur expression est constitutive et donc théoriquement stable. Par conséquent le niveau d'expression des gènes cibles est comparé à la moyenne du niveau d'expression de ces 2 marqueurs de référence pour toutes les conditions.
Le paramètre RQ (relative Quantification) est définie comme l'expression relative /100. Tous les résultats sont exprimés en facteur multiplicatif il représente le nombre de fois que le gène est surexprimé si RQ >1 ou sous-exprimé si RQ<1.
Le tableau 3 ci-dessous permet de classer les effets des conditions traitées vs contrôle Classification des effets Facteur de multiplication (FC) Forte stimulation FC > 3 Stimulation 3 > FC > 2 Légère stimulation, à confirmer 2 > FC > 1,5 - 1,5 > FC > -1,5 Légère inhibition, à confirmer -1,5 > FC > -2 Inhibition -2 > FC > -3 Forte inhibition -3 > FC
Pas d'expression Nombre de cycles > 33 31 reverse transcription of total RNA in the presence of oligo (dT) and by Transcriptor Reverse Transcriptase. The amount of cDNA is then adjusted before the PCR (Polymerase Chain Reaction) step.
PCR is performed using Roche's LightCyclere system according to supplier data.
The data is analyzed by Microsoft Excel software.
Incorporation of fluorescence into amplified DNA is continuously measured during PCR cycles. It results in a graphical representation between the intensity of fluorescence and the number of PCR cycles a value relative expression for each marker.
The PCR technique used in this study includes 2 genes from reference (RPL13A and TBP), these genes are used for normalization of the data, since their expression is constitutive and therefore theoretically stable. Therefore the level of expression of target genes is compared to the average of expression level of these 2 reference markers for all conditions.
The RQ (relative quantification) parameter is defined as the relative expression / 100. All results are expressed in multiplicative factor it represents the number of times that the gene is overexpressed if RQ> 1 or underexpressed if RQ <1.
Table 3 below is used to classify the effects of conditions treated vs control Classification of effects multiplication (FC) Strong stimulation HR> 3 Stimulation 3>HR> 2 Slight stimulation, to be confirmed 2>HR> 1.5 - 1.5>HR> -1.5 Slight inhibition, to be confirmed -1.5>HR> -2 Inhibition -2>HR> -3 Strong inhibition -3> HR
No expression Number of cycles> 33

32 L'analyse statistique est réalisée par une comparaison inter-groupe par un test de Student non-apparié.
Résultats Le traitement des kératinocytes épidermiques normaux humains avec 1.5mM de chlorure de calcium utilisé comme contrôle positif induit une forte expression des gènes ciblés dans l'immunité
innée, ce résultat permet de valider les conditions expérimentales (tableau 4).
Chlorure de calcium (1,5 mM) gènes Moyenne Ecart type sem Immunité innée HBD2 5,8 6,1 3,5 PAM S100A7 4,1 3,8 2,2 Pam : peptides antimicrobiens Le tableau 5 résume les effets de l'extrait bactérien selon l'invention aux trois concentrations testées Extrait bactérien (0,2pg/m1) gènes Moyenne Ecart type sem Immunité innée HBD2 4,5 3,16 1,83 PAM S100A7 2,1 0,39 0,23 Extrait bactérien (1,0pg/m1) Immunité innée HBD2 21,0 12,29 7,10 PAM S100A7 3,9 1,61 0,93 Extrait bactérien (5,0pg/m1) Immunité innée HBD2 596,4 546,48 315,51 PAM S100A7 10,6 6,56 2,05 Pam : peptides antimicrobiens 32 The statistical analysis is carried out by an inter-group by an unpaired Student's test.
Results Treatment of normal human epidermal keratinocytes with 1.5mM calcium chloride used as a positive control induces strong expression of target genes in immunity innate, this result validates the conditions experimental (Table 4).
Calcium chloride (1.5 mM) genes Mean Standard deviation wk Innate immunity HBD2 5.8 6.1 3.5 PAM S100A7 4.1 3.8 2.2 Pam: antimicrobial peptides Table 5 summarizes the effects of the bacterial extract according to the invention at the three concentrations tested Bacterial extract (0.2pg / m1) genes Mean Deviation type sem Innate immunity HBD2 4.5 3.16 1.83 PAM S100A7 2.1 0.39 0.23 Bacterial extract (1.0pg / m1) Innate HBD2 immunity 21.0 12.29 7.10 PAM S100A7 3.9 1.61 0.93 Bacterial extract (5.0pg / m1) Innate immunity HBD2 596.4 546.48 315.51 PAM S100A7 10.6 6.56 2.05 Pam: antimicrobial peptides

33 Les inventeurs mettent en évidence que toutes les concentrations testées de l'extrait bactérien selon l'invention induisent l'expression des gènes HBD2 et S100A7 et de façon-concentration-dépendante.
L'extrait bactérien selon l'invention a la capacité
d'augmenter l'induction de peptides antimicrobiens. Par cette stimulation de l'immunité innée, les peptides antimicrobiens induisent la défense cutanée et participent à la protection de la barrière cutanée.
L'ensemble de ces résultats, c'est-à-dire une diminution de l'inflammation neurogène cutanée combinée à une aide à la protection de la barrière cutanée permet de montrer que l'extrait bactérien selon l'invention agit réellement sur les peaux sensibles et/ou intolérantes. 33 The inventors demonstrate that all tested concentrations of the bacterial extract according to the invention induce the expression of the HBD2 and S100A7 genes and concentration-dependent.
The bacterial extract according to the invention has the ability to increase the induction of antimicrobial peptides. By this stimulation of innate immunity, antimicrobial peptides induce skin defense and participate in the protection of the skin barrier.
All of these results, i.e. a decrease in neurogenic skin inflammation combined with aid in protection of the skin barrier makes it possible to show that the extract bacterial according to the invention actually acts on the skin sensitive and / or intolerant.

Claims

1. Bacterial extract of a non-pathogenic Gram bacteria negative belonging to the class of betaproteobacteria, subfamily Neisseriaceae, comprising a 16S rRNA
comprising the sequence SEQ ID No. 1, or any sequence exhibiting at least 80% identity with the sequence SEQ ID
No. 1, said bacterial extract being obtained by a process comprising the steps of:
a. Culture of said bacterium in a medium suitable for obtaining a bacterial culture;
b. liquid / solid separation of said culture and elimination of the liquid phase;
vs. cell lysis of the solid phase, d. resuspension of the lysed solid phase in a phase aqueous liquid, preferably buffered, e. liquid / solid separation and phase recovery liquid, f. Optionally filtration of the liquid phase.

2. Bacterial extract according to claim 1 characterized in that than the aqueous liquid phase of resuspension step d) is a tampon, in particular a basic tampon.

3. Bacterial extract according to claim 2, characterized in that the basic buffer is chosen from Tris buffer, arginine buffer or Tris-arginine buffer.

4. Bacterial extract one of claims 1 to 3, characterized in that the bacterium comprises at least one plasmid comprising the sequence SEQ ID No.2, or any sequence having at least 80% identity with the sequence SEQ ID No.2.

5. Bacterial extract according to one of claims 1 to 4, characterized in that the bacterium is the LMB64 bacterium, filed with the CNCM on April 8, 2010 under the reference 1-4290.

6. Bacterial extract according to one of the preceding claims for its use for prevention and / or treatment neurogenic skin inflammation.

7. Extract for its use according to claim 6, 5 characterized in that the neurogenic inflammation of the skin includes sensitive skin and / or intolerant skin.

8. Cosmetic or dermatological composition comprising a bacterial extract according to one of claims 1 to 5 and less an excipient cosmetically or dermatologically 10 acceptable.

9. Cosmetic or dermatological composition according to claim 8, characterized in that it is suitable for topical application.

10. Dermatological composition according to claim 8 or 9 15 for use in the prevention, treatment, prevention and treatment of neurogenic inflammation cutaneous.

11. A composition for its use according to claim 10.
characterized in that the neurogenic inflammation of the skin 20 includes sensitive skin and / or intolerant skin.