CA2611201A1 - Utilisation de la fumagilline et de ses derives pour augmenter la biodisponibilite des lactones macrocycliques - Google Patents

Abstract

L'invention concerne l'utilisation de la fumagilline, et de ses dérivés analogues, en tant qu'inhibiteurs des transporteurs cellulaires, tels que le s transporteurs ABC, et plus particulièrement de la P-glycoprotéine, afin d'augmenter la biodisponibilité de principes actifs susceptibles d'être utilisés dans le traitement de pathologies telles que les cancers ou les maladies parasitaires, et en particulier afin d'augmenter la biodisponibilit é des lactones macrocycliques.

Description

UTILISATION DE LA FUMAGILLINE ET DE SES DERIVES POUR
AUGMENTER LA BIODISPONIBILITE DES LACTONES
MACROCYCLIQUES
-------------------------------------------------------------------------------------------------L'invention concerne l'utilisation de la fumagilline, et de ses dérivés analogues, en tant qu'inhibiteurs des transporteurs cellulaires, tels que les transporteurs ABC, et plus particulièrement de la P-glycoprotéine, afin d'augmenter la biodisponibilité
de principes actifs susceptibles d'être utilisés dans le traitement de pathologies telles que les cancers ou les maladies parasitaires, et en particulier afin d'augmenter la biodisponibilité des lactones macrocycliques.
Les lactones macrocycliques ou LM, telles que les avermectines et milbemycines, sont des molécules antiparasitaires à usage vétérinaire très performantes (actives contre les endo et ectoparasites, longue rémanence, faible toxicité).
Les avernlectines sont les composés de formule générale suivante :
o1~
R2 ,, O
O ,,0 H H
O ~ -H ~O

IoH
o ~
H OH

L'ivermectine Bla est le composé de formule précédente avec X-CH2CH2- et R1= CH(CH3)CH2CH3 ;
l'abamectine Bia est le composé de formule précédente avec X-CH=CH- et R1=
CH(CH3)CHaCH3 ;
la doramectine est le composé de formule précédente avec X-CH=CH- et R1=
cyclohéxyle ;
l'éprinomectine est le composé de formule précédente avec X=-CH=CH-, R1=
CH(CH3)CH2CH3, et R2 = NHCOCH3.
Une autre avermectine, la sélamectine, est le composé de formule suivante :

2 o0I la Ho~, CHJ ~Ctia II~C O ~~Oi, 0 HaG~'' ( oti -0 ~ C~,t3 li NoH

Les milbemycines constituent une autre famille de LM. Parmi les milbemycines, la némadectine est le composé de formule suivante :

O
H
O
H O
O
O
O HI
H
O
et la moxidectine est le composé de formule suivante H O
\ _O
H N
~' -O O
O
O
O HI
H

3 Les avantages des LM sont à l'origine d'une large utilisation chez de nombreux mammifères (bovins, ovins, câprins, porcs, équins, chiens et chats).
L'iverinectine 'est aussi tttilisée en médecine hlunaine pottr le traitement de l'Oncochercose (de Silva et al., 1997). La place des lactones macrocycliques dans le marché des médicaments vétérinaires est économiquement importante.
Cependant, en raison d'un usage non adapté (utilisation de posologie ou de voies.
non préconisées et / ou utilisation chez des espèces pour lesquelles' il n'existe pas d'autorisation de mise sur le marché), des phénomènes de résistance parasitaire sont apparus chez de nombreuses espèces. En raison de l'absence de développement de nouvelles molécules, il est primordial d'optimiser l'utilisation des lactones macrocycliques (LM) en respectant leur sécurité d'usage. L'activité
antiparasitaire de ces composés est directement liée à la concentration de principe actif dans l'organisme animal. Ainsi, l'optimisation de leur efficacité passe par l'augmentation de la quantité de médicainent chez l'animal hôte après administration.
Des méthodes physiologiques et pharmacologiques ont été utilisées pour augmenter la biodisponibilité des LM telles que la diminution de la ration alimentaire chez le mouton (Ali and Hennessy, 1996), la mise à jeun chez des chevaux (Alvinerie et al., 2000), la co-administration de médicaments (Lifschitz et al., 2002) ou de composé
naturel (Dupuy et al., 2003).
Parmi les nombreux facteurs pouvant moduler la biodisponibilité des LM, la P-glycoprotéine ou Pgp est reconnue comme un des éléments majeurs aussi bien sur des cellules (Dupuy et al., 2001b), chez l'animal entier (Alvinerie et al., 1999;
Dupuy et al., 2003; Lifschitz et al., 2002) que chez les parasites (Xu et al., 1998). En effet, ce transporteur membranaire de la famille des e< ATP binding cassette transporters , impliqué dans les mécanismes, de polychimiorésistances (résistances multidrogues ou MDR), contrôle l'efflux actif de nombreux composés dont l'ivermectine et la moxidectine. Cette Pgp est présente au niveau de la barrière hémato-méningée où elle protége le système nerveux central de la neurotoxicité de l'ivermectine (Roulet et al., 2003; Schinkel et al., 1994). L'implication de la Pgp dans l'élimination des LM par les voies biliaires et intestinales, voies majeures d'élimination, a été démontrée (Laffont et al., 2002).
Les hépatocytes de rat en culture primaire ont été utilisés pour évaluer l'aptitude de différents composés à augmenter la quantité intracellulaire de 14C
moxidectine. Dans ce modèle, le verapamil (inhibiteur reconnu de la Pgp) ou la quercetine (un flavonoïde

4 naturel qui interfère avec la Pgp) augmentent de manière significative la quantité de 14C
moxidectirie dans les hépatocytes de rat (Dupuy et al., 2001b; Dupuy et al., 2003). De même, le kétoconazole majore de façon importante la quantité intracellulaire de 14C
moxidectine, effet à relier à son action inhibitrice concomitante sur les Pgp et les cytochromes P450, deux systèmes présents dans les hépatocytes.
De plus, la modulation de la Pgp est également utile pour augmenter la biodisponibilité de principes actifs différents des LM. La modulation de la Pgp est par exemple utile dans le cadre du traitement du cancer, afin d'augmenter la biodisponibilité
de principes actifs anticancéreux.
Ainsi, plusieurs agents modulateurs de la Pgp ont été utilisés récemment pour traiter des leucémies aiguës myéloblastiques (LAM) et des leucémies aiguës lymphoblastiques (LAL) chez l'homme (Roos 2004), comme cela est résuiné dans le tableau 1 ci-dessous Tableau 1= utilisation de composés modulant l'activité de la Pgp pour traiter des leucémies aiguës myéloblasti ues (LAM) et des leucémies ai ug ës lymphoblastiques (LAL) chez l'homme (Roos 2004) Type de cancer Traitement composés modulant l'activité Pgp LAM Daunorubicine Cyclosporine LAM Etoposide, mitoxantrone Cyclosporine LAM Etoposide, daunorubicine Valspodar (PSC 833) LAM, LAL Mitoxantrone Quinine De façon surprenante, les inventeurs ont découvert que la fumagilline et ses dérivés permettent d'augmenter la biodisponibilité des LM, ce qui apporte une solution technique nouvelle au problème décrit ci-dessus.
La fumagilline est produite par le champignon Aspergillus fianaigatus, active in vivo sur la microsporidiose des abeilles et in vitro sur les spores d'Enterocytozoon Bieneusi (Fumidil B - CEVA Santé Animale). Chez l'homme, la fumagilline est utilisée depuis quarante ans pour traiter l'amibiase intestinale et est actuellement prescrite en application locale pour la kératoconjonctivite à microsporidie. De plus, la fum.agilline et ses analogues sont des inhibiteurs de l'angiogénèse par inhibition de la prolifération cellulaire endothéliale (Pyun et al., 2004). En raison de leurs propriétés antiangiogéniques, ces composés sont utilisés en médecine humaine pour le traitement des cancers.
L'invention a principalement pour but de fournir des compositions permettant d'augmenter la biodisponibilité de principes actifs dans l'organisme humain et animal, et

5 ainsi d'améliorer les traitements existants, notamment dans le cadre des maladies parasitaires ou cancéreuses.
L'invention a plus particulièrement pour but de fournir des compositions permettant d'augmenter la biodisponibilité des lactones macrocycliques et des agents anti-tumoraux.
L'invention concerne principalement l'utilisation d'au moins un composé de formule générale (I) suivante :

p (1) R&

dans lequel :
- Rl est H ou un alkyle en C1_8linéaire ou ramifié ;
- R2 est H, un alkyle en C1_4, un aryle, un aryle alkyle en C1_4, un cycloalkyle, un cycloalkyle alkyle en C1_4, ou un groupe alcényle de 1 à 10 atomes de carbone tel qu'un groupe CH2R6, dans lequel R6 est un 2-méthyl-1-propényle ou un isobutyle éventuellement substitué par un groupe hydroxyle, amino, (alkyle en Cl_3)-amino ou di(alkyle en C1-3)-amino - R3 est un atome H, un alkyle en C1_4, ou un aryle en C5_8 qui est éventuellement substitué par un ou plusieurs halogènes, tel que F, Cl, I, Br, un alcoxyle en C1_4 ou un alkyle en Cl_4 ;
- R4 est un atome H, un OH ou un alcoxyle en C1_4 ;
- R5 est de la forme OR7, auquel cas la liaison représente une liaison simple, ou R5 est de la forme N
R8 Rg

6 auquel cas la liaison représente une liaison en a ou (3 ;
- R7 est choisi parini le groupe composé de :
= l'atome H, = un groupe alcanoyle ou alcènoyle en C1_ lo, saturé ou insaturé, qui peut être substitué notamment par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1_6)-amino, di-(alkyl en C1_6)-amino, nitro, halogéno, hydroxy, alcoxy en C1_6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1_6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en CI_6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parini les atomes d'halogène, les alkyles en C1_6, les alcoxy en C1_6 les alkyles halogénés et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques, = un groupe aroyle qui peut être substitué par un atome d'halogène ou par un alkyle en C2_6, amino, hydroxy, alcoxy en C1_6, cyano, carbamyle ou carboxyle, = un hétérocyle-carbonyle qui peut être substitué par un atome d'halogène ou par un alkyle en C2_6, amino, hydroxy, alcoxy en C1_6, cyano, carbamyle ou carboxyle, = un carbamyle, qui peut être substitué par un ou deux substituants choisis parmi les groupes alkyles en C1_6, eux-mêmes pouvant être substitués par un groupe mono- ou di-(alkyle en C1_6)-amino, alcanoyle en C1_6, chloroacétyle, dichloroacétyle, trichloroacétyle, (alcoxy en C1_6) - carbonyle - méthyle, carboxy-méthyle, phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1_6, les alcoxy en C1_6 les alkyles halogénés et nitro), naphtyle ou benzoyle, . un alkyle en C1_I0 à chaîne droite ou ramifiée, qui peut éventuellement être époxydé et / ou substitué notamment par un à
trois substituants choisis parmi amino, (aikyl en C1_6)-amino, di-(alkyl en C1_6)-amino, nitro, halogéno, 'hydroxy, alcoxy en C 1_6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1_6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en C1_6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq

7 substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les all(yles en C1_6, les alcoxy en C1_6 les alkyles halogénés et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques, = un alcényle en C1_lo à chaîne droite ou ramifiée, = un alcynyle en CI_lo à chaîne droite ou ramifiée, = un résidu d'hydrocarbure cycloaliphatique, = tu1(ainine cyclique)-carbonyle, = un benzène-sulfonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi les allcyles en C1_6 et les atomes d'halogène, = un C1_to alkyle-sulfonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi amino, (allcyl en C1_6)-amino, di-(alkyl en C1_6)-amino, nitro, halogéno, alcoxy en C1_6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1_6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en C1_6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1.6, les alcoxy en C1_6 les alkyles halogénés et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques, = un sulfamyle, qui peut éventuellement être substitué par un ou deux substituants choisis parmi les alkyles en Cl_6 et un phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1.6, les alcoxy en C1_6 les alkyles halogénés et nitro), = un alcoxy-carbonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1_6)-amino, di-(alkyl en C1_6)-amino, ni.tro, halogéno, alcoxy en C1_6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1_6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en Ci_6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1_6, les alcoxy en C1_6 les alkyles halogénés et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques, = un phénoxycarbonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi les atomes d'halogène et les alkyles en C1_6,

8

9 PCT/FR2006/001297 = C(O)-NH-C(O)-CH2-Cl;
- R8 et R9 représentent chacun un atome H, un groupe hydrocarboné
éventuellement substitué ou un groupe acyle éventuellement substitué, ou bien R8 et Rg peuvent constituer un cycle conjointement avec l'atome d'azote adj acent ;
en tant qu'adjuvant pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs, notainment de principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux, et donc de potentialiser leurs effets, ces principes actifs étant susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs cellulaires pour être transportés hors de ces cellules sans pouvoir atteindre leur cible thérapeutique intracellulaire, lesdits transporteurs étant présents dans les cellules de l'organisme huinain ou animal auquel sont administrés lesdits principes actifs, et, le cas échéant, dans les cellul'es des parasites contre lesquels ces principes actifs sont administrés.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de composés de formule (I) choisis parmi les composés de formule (Ia) suivante :

O R1 Rs Ra O (Ia) O \ \ \ \
OH
O

dans laquelle Rl, R2, R3, et R4 sont tels que définis ci-dessus.
L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée de composés de formule (I) choisis parmi les composés de formule (Ib) suivante :

O Ri OCH3 O (Ib) O \ \ \ \
OH
O
dans laquelle :

- Rl est H ou un alkyle en C1_$ linéaire ou ramifié ;
- R2 est H, un alkyle en C1_4, ou un groupe alcényle de 1 à 10 atomes de carbone tel qu'un groupe CH2R6, dans lequel R6 est un 2-méthyl-1-propényle.
L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée du composé de formule (I) ci-dessus correspondant à la fumagilline de forinule (II) suivante :

C O
(II) O \ \ \
1-1 1.11 OH
O

Par adjuvant on entend un composé qui entre dans une composition pharmaceutique pour un médicament, afin de potentialiser , c'est à dire de renforcer et /
ou rendre possible et / ou de rendre plus rapide l'action du composé de base, ledit composé de base étant encore appelé ici principe actif .
Par biodisponibilité d'un principe actif on entend la quantité de principe actif effectivement présente dans un organisme humain ou animal, et / ou la quantité
de principe actif effectivement présente dans une partie déterminée d'un organisme humain ou animal, en particulier dans un ou des organe(s) déterminé(s) d'un organisme humain ou animal, et en particulier dans un sous-ensemble de cellules d'un ou plusieurs type(s) déterminé(s) d'un organisme humain ou animal. La biodisponibilité peut également désigner la proportion du principe actif administré à un organisme humain ou animal qui est effectivement active ou susceptible d'activité dans ledit organisme.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et notamment des composés de formule (Ia), (Ib), et de la fumagilline de formule (II), pour la préparation d'un médicament destiné à
augnienter la biodisponibilité de principes actifs, plus particulièrement de principes actifs antiparasitaires, susceptibles d'être reconnus et de se'lier à des transporteurs cellulaires ATP dépendants, encore désignés transporteurs ABC (ATP Binding Cassette) ou transporteurs à séquences de liaison à l'ATP, ces transporteurs étant décrits notamment dans Dean et al. (2001), Genome Research, 11 : 1156-1166, et Dean et al.
(2001), Journal of Lipid Research, 42 :1007-1017.

L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et notamment des composés de formule (la), (Ib), et de la fiunagilline de formule (II), pour la préparation d'un médicament destiné à
augmenter la biodisponibilité de principes actifs, plus particulièrement de. principes actifs 5 antiparasitaires, susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs ABC choisis parini la P-glycoprotéine (Pgp, encore désignée ABCB1), les transporteurs ABCC
(ABCC1 à 8, encore désignés MRP1 à 8), ou les transporteurs ABC G2.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et notamment des composés de formule (la), (Ib), et de

10 la fitmagilline de formule (II), en tant qu'inhibiteurs de la fonction de transport des transporteurs cellulaires par interaction entre ces composés et ces transporteurs, pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs, plus particulièrement de principes actifs antiparasitaires, susceptibles d'être reconnus et de se lier à ces transporteurs.
L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et notamment des composés de formule (la), (Ib), et de la fumagilline de formule (II), en tant qu'inhibiteurs de la fonction de transport de la Pgp par interaction entre ces composés et la Pgp, pour la préparation d'un médicament destiné
à augmenter la biodisponibilité de principes actifs, plus particulièrement de principes actifs antiparasitaires, susceptibles d'être reconnus et de se lier à la Pgp.
De manière avantageuse, les composés de formule (I) susmentionnée, sont utilisés en tant qu'adjuvants pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux choisis parmi les substrats des transporteurs cellulaires, et plus particulièrement des substrats des ABC, transporteurs définis ci-dessus, notamment de la Pgp, dans le cadre du traitement de pathologies parasitaires ou cancéreuses.
Avantageusement les composés de formule (I) susmentionnée utilisés en tant qu'adjuvants pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité
de principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux dans le cadre du traitement de pathologies parasitaires ou cancéreuses sont choisis parmi les composés de formule (Ia), (Ib), et la fumagilline de formule (II).

De préférence, le composé de formule (I) susmentionnée utilisé en tant qu'adjuvant pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de pathologies parasitaires ou cancéreuses est la fumagilline de formule (II).

11 De manière avantageuse, l'utilisation susmentionnée des composés de forinule (I) ci-dessus, et plus particulièrement des composés de formule (la), (Ib), et de la fiunagilline de formule (II), est caractérisée en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les lactones macrocycliques, telles que les avermectines et les milbemycines.
De manière avantageuse, l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et plus particulièrement des composés de formule (Ia), (Ib), et de la fiunagilline de formule (II), est caractérisée en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi' les avermectines, telles que l'ivermectine, l'abainectine, la doramectine, l'éprinomectine ou la sélamectine, dans le cadre du traitement des maladies parasitaires endoparasitaires et ectoparasitaires.
De manière avantageuse, l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et plus particulièrement des composés de forinule (la), (Ib), et de la fitmagilline de formule (II), est caractérisée en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les milbemycines, telles que la moxidectine ou la némadectine, dans le cadre du traitement des maladies parasitaires endoparasitaires ou ectoparasitaires.
Les maladies endoparasitaires concernent les affections par parasites internes, tandis que les maladies ectoparasitaires concernent les affections par parasites externes.
Parmi les maladies parasitaites avantageusement traitées par les LM et entraint donc dans le cadre de l'invention on compte notamment :

- les strongyloses gastro-intestinales (adulte et larve L3 ou L4) :
Haemonchus, Ostertagia, Trichostrongylus, Cooperia, Oesophagostonum, Nematodirus, Bunostonum ;
- les strongyloses pulmonaires : Dictyocaulus viviparus ;
- les hypodermoses (tous les stades larvaires) : Hypoderma bovis et lineatum ;
- les gales sarcoptiques et psoroptiques ;
- les phtyrioses ;
- la filariose ;
- l'onchocercose.

De manière également avantageuse, l'utilisation susmentionnée des composés de formule (I) ci-dessus, et plus particulièrement des composés de formule (Ia), (Ib), et de la fumagilline de formule (II), est caractérisée en ce que les principes actifs anticancéreux sont choisis parmi les substrats des transporteurs cellulaires, et plus particulièrement des substrats des ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment de la Pgp, dans le cadre du traitement des cancers, et plus particulièrement des cancers résistants aux chimiothérapies.

12 PCT/FR2006/001297 Par cancers résistants aux chimiothérapies on entend cancers qui en réponse aux traitements chimiques surexpriment des transporteurs celhilaires, tels que les ABC-transporteurs, notainment la P-gp. En effluant le principe actif hors de la cellule, ces transporteurs diminuent ou neutralisent l'effet thérapeutique attendu.
Les principes actifs ' anticancéreux qui sont des substrats des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement de la Pgp, sont notamment :
- les antibiotiques antitumoraux de type anthracycline, et notamment :
* la daunurubicine et la doxorubicine (utilisées dans le.traitement des leucémies aiguës, des leucémies myéloïdes chroniques en transformation aiguë, des lymphomes hodgkiniens et non hodgkiniens), * la mitomycine C (utilisée dans le traitement des cancers du sein, de l'estomac, de l' sophage, de la vessie), * la mitoxantrone (utilisée dans le traitement de la leucémie myéloïde ou lymphocytaire aiguë, du cancer du sein, de la prostate, de l'ovaire), * l'adriamycine (utilisée dans le traitement des leucémies aiguës, des leucémies myéloïdes chroniques en transformation aiguë, des lymphomes hodgkiniens et non hodgkiniens), * l'actinomycine D (utilisée dans les mêmes cas que l'adriamycine), - les taxanes, et notamment :
* le docétaxel (utilisé dans le traitement des lymphomes, du cancer du sein, de I'Cesophage, de l'estomac, de la vessie, de la prostate, de l'utérus), * le paclitaxel (utilisé dans le traitement du cancer de l'ovaire, du poumon, du sarcome de Kaposi lié au SIDA), - les alcaloïdes, et notamment :
* la vinblastine (utilisée dans le traitement du cancer du sein, de la vessie, des testicules et des lymphomes), * la vincristine (utilisée dans le traitement de la leucémie, des lymphomes, des sarcomes, du cancer du poumon, de l'utérus, du cerveau), - les épipodophyllotoxines, et notamment :

13 * l'étoposide (utilisé dans le traitement du cancer des testicules et de certains types de cancer du poumon), * l'irinotécan (utilisé dans le traitement du cancer colorectal), * le téniposide (utilisé dans le traitement du cancer du poumon, du cerveau, du sein), * le topotécan.
Un atitre aspect de l'invention concerne une composition pharinacetttique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins tin composé de formule (I) tel que défini ci-dessus en association avec un ou plusieurs principes actifs susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement à des ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment à de la Pgp, pour être transportés hors des cellules de l'organisme humain ou animal.
L'invention a plus particulièrement pour objet une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, comprenant au moins un composé de formule (I) choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus.
Selon un mode de réalisation préféré, ladite composition pharmaceutique est caractérisée en ce que les principes actifs en association avec un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement avec un composé de formule (Ia), (Ib), ou la fumagilline de formule (II), sont des principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux.
Selon un mode de réalisation plus particulier, ladite composition pharmaceutique est caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou la fumagilline de formule (II), en association avec des principes actifs antiparasitaires choisis parmi les lactones macrocycliques, telles que les avermectines et les milbemycines.
Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, ladite composition pharmaceutique est caractérisée en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les avermectines, telles que l'ivermectine, l'abamectine, la doramectine, l'éprinomectine ou la sélamectine.
Selon un autre mode de réalisation particulièrement préféré, ladite composition pharmaceutique est caractérisée en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les milbemycines, telles que la moxidectine ou la némadectine.
De manière avantageuse, la composition pharmaceutique susmentionnée est caractérisée en ce qu'elle contient au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou la fumagilline de

14 formule (II), à un dosage approprié pour tule administration journalière d'environ 0,2 à
environ 2 mg/kg.

De manière avantageuse, la composition pharmaceutique susmentionnée est caractérisée en ce que le principe actif antiparasitaire, et le composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement le composé de formule (Ia), (Ib), ou la fumagilline de formule (II), sont présents dans rapport en poids compris entre environ 1:1 et environ 1:100, en particulier entre environ 1:1 et environ 1:20.
En général le composé de formule (I) tel que défini ci-dessus,, et plus particulièrement le composé de formule (Ia), (Ib), ou la fumagilline de formule (II), doit en effet être dosé en excès par rapport au principe actif, car son affinité
pour les transporteurs cellulaires susmentionnés, notamment la Pgp, est inférieure à
celle du principe actif.
L'invention concerne plus particulièrement une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, comprenant de la fumagilline de formule (II) susmentionnée, en association avec un ou plusieurs principes actifs antiparasitaires tels que définis ci-dessus.
Selon un autre mode de réalisation préféré, la composition pharmaceutique susmentionnée est caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus en association avec des principes actifs anticancéretix choisis parmi les substrats des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement des substrats des ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment de la Pgp ;
de préférence cette composition pharmaceutique comprend au moins un composé de formule (I) choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus ; cette composition est caractérisée de façon particulièrement avantageuse en ce qu'elle contient au moins un composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus à un dosage approprié pour une administration journalière d'environ 0,2 à environ 2 mg/kg ; et de manière encore plus avantageuse, cette composition pharmaceutique est caractérisée en ce que le principe actif anticancéreux, et le composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus, sont présents dans un rapport en poids compris entre environ 1:1 et environ 1:100 et en particulier entre environ 1:1 et environ 1:20.
L'invention a plus particulièrement pour objet une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé de formule (I), (Ia), (Ib), ou la fiimagilline de formule (II), en association avec au moins un antibiotique antitumoral de type anthracycline et / ou un taxane et / ou un alcaloïde et / ou une épipodophyllotoxiné tels que mentionnés ci-dessus.

L'invention concerne plus particulièrement une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus, comprenant de la ftimagilline de formule (II) susmentionnée, en association avec un ou plusieurs principes actifs anticancéreux tels que définis ci-dessus.
Dans leurs divers modes de réalisations, les compositions pharmaceutiques selon 5 l'invention sont en outre caractérisées de façon avantageuse en ce qu'elles se présentent sous une forme administrable par voie parentérale, ou orale.
Un autre objet de l'invention concerne des produits de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie, notamment antiparasitaire ou anticancéreuse, utilisant un principe actif susceptible d'être reconnu et 10 de se lier à des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement à des ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment à de la Pgp, pour être transporté hors des cellules de l'organisme humain ou animal, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif tel que défini ci-dessus, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement de la fumagilline de formule (II).

15 Avantageusement, le composé de formule (I) dans les produits de combinaison est choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus.
De manière préférée, les produits de cômbinaison selon l'invention sont caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif susceptible d'êtrë reconnu et de se lier à des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement à des ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment à de la Pgp, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou de la fumagilline de formule (II), dans un rapport en poids d'environ 1:1 à environ 1:100 et en particulier d'environ 1:1 à environ 1:20.
Plus particulièrement, les produits de combinaison selon l'invention, pour une utilisation simultanée, séparée =ou étalée dans le temps, en thérapie antiparasitaire, sont caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif antiparasitaire, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé
de formule (Ia), (Ib), ou de la fumagilline de formule (II).
De manière avantageuse, les produits de coinbinaison selon l'invention sont caractérisés en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les lactones macrocycliques, telles que les avermectines et les milbemycines.
Dans un mode de réalisation plus particulier, les produits de combinaison selon l'invention sont caractérisés en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi. les avermectines, telles que l'ivermectine, l'abamectine, la doramectine,

16 l'éprinomectine ou la sélamectine, dans le cadre du traitement des maladies parasitaires endoparasitaires et ectoparasitaires.
Plus particulièrement, lesdits produits de combinaison sont caractérisés en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les milbemycines, telles que la moxidectine ou la némadectine, dans le cadre du traitement des maladies parasitaires endoparasitaires ou ectoparasitaires.
De manière avantageuse, lesdits produits de combinaison sont caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif antiparasitaire, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement de la fumagilline de formule (II), dans un rapport en poids d'environ 1:1 à environ 1:100 et en particulier d'environ 1:1 à environ 1:20.
L'invention a plus particulièrement pour objet les produits de combinaison pour une utilisation simultanée, =séparée ou étalée dans le temps, en thérapie antiparasitaire, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif antiparasiiaire tel, que défini ci-dessus, et la fumagilline de formule (II) telle que susmentionnée.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, les produits de combinaison selon l'invention, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie cancéreuse, sont caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif anticancéreux, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou de la fum.agilline de formule (II).
De manière préférée, lesdits produits de combinaison sont caractérisés en ce que les principes actifs anticancéreux sont choisis parmi les substrats des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement des substrats des ABC
transporteurs définis ci-dessus, notamment de la Pgp, dans le cadre du traitement des cancers et plûs particulièrement des cancers résistants aux chimiothérapies, et sont plus particulièrement choisis parmi les antibiotiques antitumoraux de type anthracycline, les taxanes, les alcaloïdes et les épipodophyllotoxines tels que mentionnés ci-dessus.
De manière particulièrement préférée, lesdits produits de combinaison sont caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif anticancéreux, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé
de formule (Ia), (Ib), ou de la fumagilline de formule (II), dans un rapport en poids d'environ 1:1 à environ 1:100 et en particulier d'environ 1:1 à environ 1:20.
L'invention a plus particulièrement pour objet les produits de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie anticancéréuse,

17 caractérisés en ce qu'ils contiemient au moins un principe actif anticancéreux tel que défini ci-dessus, et la fumagilline de formule (II) telle que susmentionnée.

Description dës figures La figure 1 représente l'aire sous la courbe (AUC) de la 14C moxidectine après deux traitements distincts : en blanc, le témoin (moxidectine) ; en noir : le traitement avec la ftimagilline. L'axe des ordomiées est en g.mL.1f 1. On a p<0,01 pour le traitement avec la fumagilline (résultat significativement différent du témoin).
La figure 2 représente l'effet de différents composés sur l'accumulation de rhodamine 123 dans des cellules LLCPK1 transfectées avec la Pgp murine. En abscisse :
la concentration du composé ; en ordonnée, le pourcentage d'accumulation de Rho 123 par rapport au témoin (Rho 123 / contenu protéique). En blanc, l'ivermectine ;
en gris uni, le valspodar ; en hachuré, la fumagilline.
La figure 3 représente l'accumulation de Rho 123 dans des cellules Mdrla LLC-PK1 après traitement par la fumagilline. En abscisse, la concentration de fumagilline en M ; en ordonnée, le pourcentage d'effet par rapport à l'effet du valspodar (modélisation selon le modèle de Hill).

Partie expérimentale Dans cette partie expérimentale, on démontre d'abord la capacité de la fumagilline a augmenter la concentration intracellulaire de la 14C moxidectine dans les hépatocytes de rat (exemple 1). Ensuite on évalue sa capacité à interférer avec la fonction Pgp sur des cellules épithéliales de rein de porc transfectées avec la Pgp murine (Mdr la-LLCPK1), comme cela est résumé dans l'exemple 2. La fonction de transport de la Pgp est évaluée par l'accumulation intracellulaire de la rhodamine 123, substrat avéré de la Pgp. Ce modèle est particulièrement adapté pour la détection de composés interagissant avec la Pgp (Hamada et al., 2003).
Composés chimiques et milieux La solution standard de 14C moxidectine (radiopureté = 98,2%, pureté chimique >
99%, activité spécifique = 14,8 Ci/mg) a été fournie par Fort-Dodge Santé
Animale (Tours, France). La fiunagilline a été fournie par CEVA Santé Animale (Libourne, France). Le valspodar (VSP) a été gracieusement fourni par Novartis (Basel, Suisse). Le diméthyl-sulfoxide (DMSO), le sodium dodécyl sulfate (SDS), le collagène, la rhodamine 123 (Rholz3), la trypsine-EDTA et l'ivermectine ont été achetés chez Sigma Chimie

18 (Saint-Quentin Fallavier, France). Le milieu 199, le tampon phosphate salin (PBS 10X), le sértun de veau fortal, la solution saline de Hanks' (HBSS) sans rouge phénol, la pénicilline, la streptomycine et la géniticine (G418) proviennent d'InVitrogen (Cergy Pontoise, France). Les boîtes de culture sont de cliez chez Nunclon (Roskilde, Danemark), les flasques de culture et les plaques de culture cellulaire 24 puits de chez Sarstedt France (Orsay, France). Le kit acide bicinchoninic provient de chez Interchim (Montltiçon, France). L'acétonitrile et le méthanol (qualité RS pour la chromatographie Liquide Haute performance) ont été achetés chez Carlo Erba (Milan, Italie). L'eau utilisée lors de cette étude était de qualité ultrâ.-pure (appareil MilliQ A10, Millipore SA, Saint-Quentin, France).
Isolement des héiiatocxtes mise en culture et traitements L'isolement et la mise en culture des hépatocytes de rat ont été décrits précédemment (Dupuy et al., 2001b). Les hépatocytes sont répartis dans des boîtes de culture et maintenus à 37 C pendant 12 heures (étuve 5% C02). Les cellules sont cultivées en présence de 5 M de 1~C moxidectine (témoin) +/- 100 M de fumagilline.
Après 0, 6, 24, 48 et 72 h les incubations sont stoppées (n = 3 pour chaque traitement), les milieux collectés et les hépatocytes récoltés par dissociation mécanique dans du tampon phosphate salin (PBS IX). Les milieux et les hépatocytes sont stockés à-20 C jusqu'à
analyse par Chromatographie Liquide Haute Performance (HPLC).
Mdrla-LLCPKI et accumulation intracellulaire de rhodamine 123 (Rho123) Les cellules transfectées avec la Pgp murine (Mdrla-LLCPKI) ont été cultivées dans du milieu 199 supplémenté en pénicilline (100 unités/ml) et streptomycine (100 g/ml), 10% de sérum de veau fcetal et de la géniticine sulfate (G418, 400 g/ml) comme agent de sélection de la Pgp. Les cellules à confluence sont repiquées par trypsinisation chaque semaine et le=milieu renouvelé 2 fois par semaine. Elles sont maintenues à 37 C en atmosphère contrôlée à 5% de C02. Afin de suivre la fonction de transport via la Pgp dans les cellules Mdrla-LLCPKI, l'accumulation intracellulaire de Rho123 est mesurée. Les cellules Mdrla-LLCPKI sont réparties sur des plaques de culture cellulaire (24 puits) à
raison de 1.5.105 cellules/puits. Elles sont cultivées 48 heures à 37 C pour atteindre la confluence dans 1 ml de milieu sans G418. Le milieu est éliminé et les cellules lavées avec 0.5 ml de PBS 1X. Les cellules sont cultivées 2 heures à 37 C avec 0.2 ml de milieu HBSS contenant 10 M de Rho123 (HBSS/DMSO, 50/50, v/v) +/- 5 M de VSP (dans DMSO) +/- 10 M d'IVM (dans DMSO) +/- 1, 5, 10, 50 et 100 M de fumagilline (dans DMSO). Après 2 heures, le milieu de culture est éliminé, les cellules lavées avec 0,5 ml

19 de PBS 1X pour éliminer l'excès de Rho123. Les cellules sont lysées par l'addition de 0,3 ml de PBS 1X/ 0.5 % sodium dodécyl sulfate (50/50, v/v) dans chaque puits.
Après 10 minutes à température ambiante, 0,3 ml de PBS 1X est ajouté dans chaque puits puis le lysat total (0,6 ml) est transféré dans un tube plastique de 2 ml et stocké à-

20 C jusqu'à
son analyse par spectrofluorimétrie.
Quantification et analyse des données : 14C moxidectine daiis les hépatoc es en culture La 14C moxidectine est quantifiée dans le milieu et les hépatocytes par une technique HPLC couplée à une détection de radioactivité en ligne (Dupuy et al., 2001b).
Cette technique permet de détecter et de quantifier la 14C moxidectine et son métabolite majeur (C29 monohydroxymethyl moxidectine) dans les hépatocytes de rat. La radioactivité est mesurée par comptage en scintillation liquide (compteur Kontron Beta V). La radioactivité initiale totale du milieu initial à 5 M de 14C
moxidectine +/- 100 M
de fumagilline correspondait à la valeur 100%. Grâce à la concentration de moxidectine détectée dans les hépatocytes (ng.ml"1) et au pourcentage de radioactivité
initiale introduite, les aires sous la courbe temps-concentrations sont calculées du premier au dernier point expérimental en utilisant la méthode des trapèzes (Gibaldi and Perrier, 1982).
Quantification et analyse des données : accumulation de la Rho 123 dans Mdrla-LLCPKI
La fluorescence de la Rho123 est mesurée à l'aide d'un fluorimètre (Perkin Elmer LS50B, ~õaX excitation = 507 nin ;I,,,a,, emission = 529 nm) puis normalisée avec le contenu protéique de chaque puits (dosage par réaction colorimétrique, kit BCA).. Les résutats sont exprimés en pourcentage d'accumulation de Rho 123 dans les cellules traitées (VSP ou IVM ou fumagilline) par rapport aux cellules témoins contenant de la IZho123 seule. Afin de comparer les différentes molécules, le VSP est défini comme le composé pour lequel l'accumulation de Rho123 est maximale et correspond donc à
une inhibition de 100% de la Pgp. Les résultats obtenus ont été modélisés selon le modèle de Hill (logiciel Scientist, Micromath research, Saint Louis, USA).
Analyse statistique La moyenne et la déviation standard ont été déterminées pour tous les paramètres étudiés. Toutes les données ont été soumises à un test de Fischer (PLSD
Fischer test) via le logiciel Statview (Abacus Concept, Berkeley, USA). Dans tous les cas, une valeur, de p < 0.05 est considérée comme significative.

Exemple 1: hépatoçytes de rat La viabilité des cultures d'hépatocytes de rat (exclusion du bleu trypan) est supérieure à 80% et aucun changement morphologique n'est observé lors des 72 h de culture, quel que soit le traitement. Le composé principal détecté est la moxidectine et les 5 quantités intracellulaires sont rapportées dans le tableau 2 ci-dessous. Le métabolite majeur correspondant au C29 monohydroxymethyl déjà décrit lors d'une étude précédente (Dupuy et al., 2001b), ne représente que 4% (valeur maximale) du principe parental. La fumagilline augmente significativement la quantité de moxidectine intracellulaire avec un maximum à 6 h chez les témoins et après 24 h chez les cellules traitées par la fumagilline.
10 La diminution de la concentration en moxidectine dans les hépatocytes est plus rapide dans les témoins (6 heures post-traitement) que dans ceux traités par la fumagilline (24 heures post-traitement). La concentration du métabolite majeur augmente à
partir de 6 h pour atteindre sa valeur maximale 24 h après traitement et sa cinétique de production n'est pas affectée. L'exposition des cellules à la moxidectine est quantifiée par l'aire sous la 15 courbe temps-concentration calculée sur la durée de l'expérimentation (Figure 1). La fumagilline augmente significativement de 65 % la quantité de moxidectine dans les hépatocytes sur la période de 72 h.

Tableau 2: quantité de 14C moxidectine dans les hépatocytes de rat en culture a 20 a-près traitement par la moxidectine +/- fumâ illine 100 I~M) Durée de culture Moxidectine +
(heure) Moxidectine fumagilline 0 4,5 1,25 7,05 0,24 6 72,95 9,98 79,29 1,01 24 52,60 5,94 82,94 14,97**
48 22,19 4,00 27,88 2,67 72 11,98 1,30 16,22 1,21 a Les valeurs représentent la moyenne .+ écart type de 3 boîtes de culture différentes.
** significativement différent des cellules traitées par la moxidectine. P <
0.01

21 Exemple 2 : Mdrla-LLCPK1 L'accumulation intracellulaire de la Rho123 a été suivie pour évaluer l'effet de la ftimagilline sur l'activité de la Pgp dans les cellules Mdrla-LLCPK1. Ce modèle a été
validé à l'aide de 2 composés reconnus comme agents interféraut avec la Pgp :
l'IVM et le VSP. Les résultats de fluorescence ont été norinalisés par rapport à la quantité protéique.
L'effet induit par le VSP (10 M) est considéré comme la valeur maximale (100%) d'acciunulation de Rho 123 dans les cellules (figure 2). L'IVM à 5 M a une puissance inhibitrice très prôche du VSP puisqu'elle génère un effet représentant 95% de l'effet VSP. La fumagilline (10 à 100 M) a permis d'augmenter la quantité de Rho 123 intracellulaire. Les résultats ont été alors exprimés en pourcentage d'accumulation par rapport au VSP et ont été modélisés à l'aide du modèle de Hill. Une courbe sigmoïde a été
ainsi générée (figure 3).. L'effet maximal (Emax), défini comme la quantité
maximale de Rho123 dans les cellules en présence de fumagilline, est atteint à des concentration de 50 M de fumagilline et représente 43,7% de l'effet obtenu en présence de VSP.
L'EC50, concentration nécessaire pour atteindre 50% de l'effet maximal, est obtenu en présence de 10 gM pour la fumagilline et représentait 21,8% de l'effet VSP.
Discussion sur les expériences En médecine vétérinaire, les LM restent les composés antiparasitaires les plus efficaces en raison notamment de leur large spectre d'action et de leur mécanisme unique d'action. Pour assurer la pérennité de ces composés il est urgent d'optimiser leur utilisation. Une des stratégies consiste à augmenter la biodisponibilité du ' composé, puisque l'efficacité des LM est directement liée à la présence du médicament dans la circulation systémique pendant une durée de temps suffisante. Les méthodes pharmacologiques avec administration de composés chimiques ou naturels (Dupuy et al., 2003; Lifschitz et al., 2002) sont principalement basées sur l'implication de transporteurs actifs tels que la Pgp, qui modulent la biodisponibilité des LM chez l'animal et chez les parasites. Grâce à l'utilisation d'inhibiteurs de la Pgp la biodisponibilité
de l'IVM chez le rat (Alvinerie et al.,1999) et de la moxidectine chez le mouton (Dupuy et al., 2003) a pu être augmentée. De plus, l'efficacité antiparasitaire a été accrue par la co-administration de LM et d'agents interférant avec la Pgp chez des souches de parasites résistants à
l'ivermectine et à la moxidectine. Ceci montre que la Pgp pourrait jouer un rôle dans la résistance des nématodes aux LM (Molento and Prichard, 1999).

22 Des études précédentes ont montré que les hépatocytes de rat en culture primaire représentent un outil particulièrement adapté à l'étude de la fonction de la Pgp et des interactions Pgp/cytochrome P450 3A (Dupuy et al., 2001b ; Hirsch-Ernst et al.,'2001). En effet, la Pgp est exprimée dans les hépatocytes et son expression est augnientée avec le temps (Hirsch-Ernst et al., 1998). Ici la capacité de la fiimagilline, médicament utilisé en médecine vétérinairé et humaine, à auginenter la quantité de moxidectine intracellulaire dans les hépatocytes de rat a été évaluée. De manière surprenante, la fumagilline a induit une accumulation intracellulaire de la moxidectine. Par comparaison aux résultats précédemment obtenus avec ce modèle cellulaire, l'accumulation intracellulaire de moxidectine obtenue avec la fumagilline (100 M) est comparable à celle obtenue avec la quercétine avec un effet maximal 24 heures après le traitement (Dupuy et al., 2003). La diminution en fonction du temps de la concentration de moxidectine dans les hépatocytes (témoins, traités par la fumagilline) et aussi notée avec la quercétine peut être attribuée à
l'activité des cytochromes P450 qui est à l'origine de la production de métabolites qui sont rapidement expulsé hors des hépatocytes. Ces résultats montrent que la fumagilline peut moduler l'accumulation intracellulaire de moxidectine dans le système cellulaire utilisé ici. L'effet obtenu avec le vérapamil ou la quercétine met certainement en jeu l'implication de la Pgp dans l'accumulation de moxidectine dans le modèle hépatocytes puisque ces composés sont connus pour interférer avec la Pgp.
L'influence de la fumagilline sur l'accumulation intracellulaire de Rho123 dans des cellules Mdrla-LLCPK1 (Sch.inkel et al., 1995) a égaleinent été étudiée.
Ces cellules surexpriment la Pgp murine et possèdent peu ou pas d'autres transporteurs de la même famille (ABC-transporteurs) ou de cytocliromes P450. Une étude récente a montré que différents LM permettaient de moduler l' efflux de la Rho 123 et l'accumulation de calcéïne dans des cellules tumorales (Korystov et al., 2004). Dans notre modèle, la fi.unagilline a permis d'augmenter la quantité de Rho123 d'une manière dépendant de la dose, ce qui implique une interaction avec la Pgp. La modélisation de l'effet de la fumagilline a permis de corréler le pourcentage d'accumulation de Rho123 par rapport à un l'effet induit par un inhibiteur reconnu (VSP) de la Pgp. L'effet maximal obtenu avec 100 M de fiimagilline correspond à 43% de l'effet VSP. Or aucune donnée n'existait jusqu'ici sur l'interaction entre la fumagilline et la Pgp ou d'autres ABC-transporteurs. Ces résultats montrent que l'augmentation de moxidectine observée dans les hépatocytes de rat en présence de fumagilline est associée à un effet inhibiteur de ce composé sur la fonction Pgp.

23 A ce titre la fumagilline acquiert un intérêt nouveati dans le domaine de la médecine vétérinaire, comme agent régulateur de la Pgp. En raison de l'émergence de résistance aux lactones macrocycliques dans de nombreuses espèces et de l'absence de développement de notiveaux principes antiparasitaires performants à moyen terme, il est urgent de développer des stratégies qui visent à faire perdurer l'efficacitë
des LM. La fumagilline permet ainsi d'accroître l'efficacité des LM vis-à-vis des parasites en majorant la quantité de médicament au sein des parasites résistants.
Une telle approche de potentialisation de l'action d'un composé efflué par la Pgp par la co-administration d'une substance pour palier aux phénomènes de résistance est utilisée en chimiothérapie cancéreuse humaine. Des essais cliniques sont actuellement conduits chez des patients atteints de cancer et développant des résistances aux anticancéreux. L'utilisation de molécules inhibitrices de la fonction Pgp en association avec un anticancéreux permet de majorer la quantité de médicament chez ces patients afin d'avoir une efficacité thérapeutique accrue (List et al., 2001). Récemment, il a été
démontré que les avermectines pouvaient majorer la quantité de médicaments antitiunoraux dans des cellules cancéreuses (Korystov et al., 2004). Il est donc envisageable d'utiliser des lactones macrocycliques en chimiothérapie cancéreuse.
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Claims (23)

1. Utilisation d'au moins un composé de formule générale (I) suivante :

dans lequel:
- R1 est H ou un alkyle en C1-8 linéaire ou ramifié ;
- R2 est H, un alkyle en C1-4, un aryle, un aryle alkyle en C1-4, un cycloalkyle, un cycloalkyle alkyle en C1-4, ou un groupe alcényle de 1 à 10 atomes de carbone tel qu'un groupe CH2R6, dans lequel R6 est un 2-méthyl-1-propényle ou un isobutyle éventuellement substitué par un groupe hydroxyle, amino, (alkyle en C1-3)-amino ou di(alkyle en C1-3)-amino ;

- R3 est un atome H, un alkyle en C1-4, ou un aryle en C5-8 qui est éventuellement substitué par un ou plusieurs halogènes, tel que F, Cl, I, Br, un alcoxyle en ou un alkyle en C1-4 ;

- R4 est un atome H, un OH ou un alcoxyle en C1-4 ;
- R5 est de la forme OR7, auquel cas la liaison représente une liaison simple, ou R5 est de la forme auquel cas la liaison représente une liaison en .alpha. ou .beta. ;

- R7 est choisi parmi le groupe composé de :
.cndot. l'atome H, .cndot. un groupe alcanoyle ou alcènoyle en C1-10, saturé ou insaturé, qui peut être substitué notamment par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1-6)-amino, di-(alkyl en C1-6)-amino, nitro, halogéno, hydroxy, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1-6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en C1-6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogénés et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques, .cndot. un groupe aroyle qui peut être substitué par un atome d'halogène ou par un alkyle en C2-6, amino, hydroxy, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle ou carboxyle, .cndot. un hétérocyle-carbonyle qui peut être substitué par un atome d'halogène ou par un alkyle en C2-6, amino, hydroxy, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle ou carboxyle, .cndot. un carbamyle, qui peut être substitué par un ou deux substituants choisis parmi les groupes alkyles en C1-6, eux-mêmes pouvant être substitués par un groupe mono- ou di-(alkyle en C1-6)-amino, alcanoyle en C1-6, chloroacétyle, dichloroacétyle, trichloroacétyle, (alcoxy en C1-6) - carbonyle - méthyle, carboxy-méthyle, phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogénés et nitro), naphtyle ou benzoyle, .cndot. un alkyle en C1-10 à chaîne droite ou ramifiée, qui peut éventuellement être époxydé et / ou substitué notamment par un à
trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1-6)-amino, di-(alkyl en C1-6)-amino, nitro, halogéno, hydroxy, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1-6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en C1-6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogénés et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques, .cndot. un alcényle en C1-10 à chaîne droite ou ramifiée, .cndot. un alcynyle en C1-10 à chaîne droite ou ramifiée, .cndot. un résidu d'hydrocarbure cycloaliphatique, .cndot. un (amine cyclique)-carbonyle, .cndot. un benzène-sulfonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi les alkyles en C1-6 et les atomes d'halogène, .cndot. un C1-10 alkyle-sulfonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1-6)-amino, di-(alkyl en C1-6)-amino, nitro, halogéno, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1-6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en C1-6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogénés et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques, .cndot. un sulfamyle, qui peut éventuellement être substitué par un ou deux substituants choisis parmi les alkyles en C1-6 et un phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogénés et nitro), .cndot. un alcoxy-carbonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1-6)-amino, di-(alkyl en C1-6)-amino, nitro, halogéno, alcoxy en C1-6, cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1-6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en C1-6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en C1-6, les alcoxy en C1-6 les alkyles halogénés et nitro), et les groupes hétérocycliques aromatiques, .cndot. un phénoxycarbonyle, qui peut éventuellement être substitué par un à trois substituants choisis parmi les atomes d'halogène et les alkyles en C1-6, .cndot. C(O)-NH-C(O)-CH2-Cl;
- R8 et R9 représentent chacun un atome H, un groupe hydrocarboné
éventuellement substitué ou un groupe acyle éventuellement substitué, ou bien R8 et R9 peuvent constituer un cycle conjointement avec l'atome d'azote adjacent ;
en tant qu'adjuvant pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs, et donc de potentialiser leurs effets, ces principes actifs étant susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs cellulaires présents dans les cellules de l'organisme humain ou animal auquel sont administrés lesdits principes actifs, et, le cas échéant, dans les cellules des parasites contre lesquels ces principes actifs sont administrés, pour être transportés hors de ces cellules sans pouvoir atteindre leur cible thérapeutique intracellulaire.

2. Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle le composé de formule (I) est le composé de formule (Ia) suivante:

dans laquelle R1, R2, R3, et R4 sont tels que définis dans la revendication 1.

3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le composé de formule (I) est le composé de formule (Ib) suivante :

dans laquelle:
- R1 est H ou un alkyle en C1-8 linéaire ou ramifié ;
- R2 est H, un alkyle en C1-4, ou un groupe alcényle de 1 à 10 atomes de carbone tel qu'un groupe CH2R6, dans lequel R6 est un 2-méthyl-1-propényle.

4. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le composé de formule (I) est la fumagilline de formule (II) suivante :

5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, d'un composé de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs cellulaires ATP
dépendants, encore désignés transporteurs ABC (ATP Binding Cassette) ou transporteurs à séquences de liaison à l'ATP, tels que les transporteurs ABC choisis parmi la P-glycoprotéine (Pgp, encore désignée ABCB1), les transporteurs ABCC (ABCC1 à 8, encore désignés MRP1 à 8), ou les transporteurs ABC G2.

6. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, d'un composé de formule (I) en tant qu'inhibiteur de la fonction de transport des transporteurs cellulaires par interaction entre ce composé et ces transporteurs, pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs susceptibles d'être reconnus et de se lier à ces transporteurs.

7. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, d'un composé de formule (I) en tant qu'inhibiteurs de la fonction de transport de la Pgp par interaction entre ces composés et la Pgp, pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs susceptibles d'être reconnus et de se lier à: la Pgp.

8. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7, d'un composé de formule (I) choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib), ou (II), en tant qu'adjuvant pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux dans le cadre du traitement de pathologies parasitaires ou cancéreuses.

9. Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les lactones macrocycliques, telles que les avermectines, notamment l'ivermectine, l'abamectine, la doramectine, l'éprinomectine ou la sélamectine, ou telles que les milbemycines, notamment la moxidectine ou la némadectine, dans le cadre du traitement des maladies parasitaires endoparasitaires ou ectoparasitaires.

10. Utilisation selon la revendication 9, caractérisée en ce que les principes actifs anticancéreux sont choisis parmi les substrats des transporteurs cellulaires, notamment de la Pgp, notamment parmi les antibiotiques antitumoraux de type anthracycline, tels que la daunurubicine, la doxorubicine, la mitomycine C, la mitoxantrone, l'adriamycine, et l'actinomycine D, ou parmi les taxanes, tels que le docétaxel, et le paclitaxel, ou parmi les alcaloïdes, tels que la vinblastine, et la vincristine, ou parmi les épipodophyllotoxines, tels que l'étoposide, l'irinotécan, le téniposide, et le topotécan, dans le cadre du traitement des cancers et plus particulièrement des cancers résistants aux chimiothérapies.

11. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) défini dans la revendication 1, en association avec un ou plusieurs principes actifs susceptibles d'être reconnus et de se lier à des transporteurs cellulaires tels que définis dans l'une des revendications 5 à 7.

12. Composition pharmaceutique selon la revendication 11, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis dans l'une des revendications 2 à 4.

13. Composition pharmaceutique selon la revendication 11 ou 12, caractérisée en ce que les principes actifs en association avec le composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II), sont des principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux, tels que définis dans les revendications 9 et 10.

14. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 11 à 13, caractérisée en ce qu'elle contient un composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) défini dans l'une des revendications 1 à 4, à un dosage approprié pour une administration journalière d'environ 0,2 à environ 2 mg/kg.

15. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 11 à 14, caractérisée en ce que le principe actif et le composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) défini dans l'une des revendications 1 à 4 sont présents dans un rapport en poids compris entre environ 1:1 et environ 1:100, et en particulier entre environ 1:1 et environ 1:20.

16. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 11 à 15, caractérisée en ce qu'elle comprend de la fumagilline de formule (II) telle que définie dans la revendication 4, en association avec un ou plusieurs principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux, tels que définis dans les revendications 9 et 10.

17. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 11 à 16, caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme administrable par voie parentérale, ou orale.

18. Produits de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie utilisant un principe actif susceptible d'être reconnu par des transporteurs cellulaires tels que définis dans l'une des revendications 5 à
7, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif tel que défini ci-dessus, et un composé
de formule (I) tel que défini dans la revendication 1.

19. Produits de combinaison selon la revendication 18, caractérisés en ce que le composé de formule (I) est choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis dans l'une des revendications 2 à 4.

20. Produits de combinaison selon la revendication 18 ou 19, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie antiparasitaire, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif tel que défini dans la revendication 9, et un composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) définis dans l'une des revendications 1 à 4.

21. Produits de combinaison selon la revendication 18 ou 19, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie anticancéreuse, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif tel que défini dans la revendication 10, et un composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) définis dans l'une des revendications 1 à 4.

22. Produits de combinaison selon l'une des revendications 18 à 21, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif susceptible d'être reconnu par des transporteurs cellulaires, et un composé de formule (I), dans un rapport en poids d'environ 1:1 à environ 1:100, et en particulier d'environ 1:1 à environ 1:20.

23. Produits de combinaison selon l'une des revendications 18 à 22, caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif antiparasitaire ou anticancéreux tel que défini dans la revendication 9 ou 10, et la fumagilline de formule (II) telle que définie dans la revendication 4.