WO92/00085 PCT/FR91~00486 ,."' 1 ~n~s~a~t Les Cucurbitacées constituent une famille de plantes dicotylédones annuelles répandues dans tous les pays du monde dont les fruits comestibles tels que courges, citrouilles, potirons (cucurbita), melons, - concombres (cucumis), pastèques (citrullus), calebasses (Lagenaria) sont largement consommés.
Depuis la plus haute Antiquité, ces plantes sont connues pour leurs vertus thérapeutiques bénéfiques et ~ certaines variétés non comestibles, la Bryone (Bryonia), le ; concombre d'ane (Echallium) pour leur toxicité.
Elles ont donné lieu 3i de multiples recherches bo~aniques, pharmacochimiques, pharmacodynamiques et à des applications th~rapeutiques diverses ainsi qu'à de très nombreuses publications et demandes de brevets.
Ces recherches se sont heurtées à la complexité
chimique de ces plantes et en cons~quence à l'instabilité
des r~sultats recueillis, en raison de la variété infinie des différentes espèces étudi~es, non seulement, l'une par rapport à l~autre, mais encore dans chaque espèce à la variation des sources, des saisons, des ann~es, des terrains ensemencés, des façons culturales.
La présente invention es~ relative à un nouveau lyophilisat d'extrait total de potiron doux hybride.
Ce lyophilisat est obtenu à partir d'une variété
sélectionnée depuis 12 ans par hybridations successLves. La plante est élevée sous contrat de culture biologique. Les contrôles sont ef~ectués périodiquement au niveau du terrain et des eaux de ruissellement au cours et en fin de production. Ce potiron cueilli à maturité, lavé, broy~ avec écorce, pulpe et pépins est lyophilisé selon un procédé
classique, puis rendu bactériologiquement stable par irradiation au rayonnement gamma.
La stabilité g~nétique obtenue par une culture ; étroitement contr81~e sur une longue période, facilite la standardisation des constantes physico-chimiques du lyophilisat ainsi obtenu.
, w o sa/oooss ~ PCI/FRg1/004B6 '` : 2 206~0~2 . Celui-ci présente les caractéxistiques suivantes :
Poudre fine, homogene et couleur jaune-orange : indél~bile.
. 5 Odeur herbacée, goût farineux.
:: . L'examen au microscope optique d~une préparation de lyophilisat dans une goutte d'eau distillée selon la Fig. 1 décèle la présence de fibres et l'absence de grains d'amidon all~ng~s.
- quantit~ de germes a~robies mesophiles inférieure ou égale à 5,0. lOZ.
- quantit~ de levures et moisissures inférieure ou .~ 15 égale à 5,0. 102.
- absence de germes pathogènes, ~ savoir absence :
- d'Escherichia Coli - de Staphylococcus aureus - de Pseudomonas aerugino~a - de Salmonella typhimurium - pH compris entre 6,44 et 6,47 - métaux lourds < 2ppm - teneur en glucides comprise entre 63 et 67 %
- teneur en lipides de 6% + 0,5 - teneur en prot~ines de 10~ + 1%
`~ - teneur en carotenoïdes totaux de 25mg ~ 10~ par gramme de lyophilisat.
Le dosage est réalisé par spectrophotométrie en ultra-violet à l'aide d'un appareil Perkin-Elmer , par ~ comparaison avec un lot témoin de ~ carok~ne, r~~rence : Merck 2236 selon les figures 2 et 3.
. Le produit est insoluble dans l'eau, peu soluble .` dans l'~thanol et le méthanol, modérément soluble dans l'éther et les huiles, soluble dans le chloroforme.
~ a conservation de ces paramètres est liée au stockage du produit à l'abri des phénomènes de photosynth~se ou d'oxydation dus ~ la chaleur.
FEU~l"L~ DE RE~PL~CEMP~T
. i,; ' , ! ; ' ' . ~ . . ~ ' -j::' . ,' ' . ' ' ; ' , '. ', 1 ' ' ' ' . ! . ' . ' ' . ' . ' ' ' . ~ . ' , ' ~' W092/d~5 2 ~ ~ 5 0 ~ 2 ,PCT/FR91/00486 . L~c~L~-~e~uJDuu~L3~ ~ du lyophilisat rév~le que la richesse en provitamines A (~ carotène) et en lipides de ce lyophilisat est trois fois plus importante que les teneurs correspondantes du potiron cou~ant ou de la carotte; par sa forte concentration en caroténoïdes, le compos~ induit la bio-synthèse du Retinol et favorise une r~g~nération cellulaire rapide accél~rant le processus de cicatrisation par stimulation de la mitose cellulaire.
L'huile de p~pins en incorporant plus de lipides et plus d'acides gras insaturés, linoléiques et linoléniques, à
celui-ci est elle-même un facteur important du pouvoir de p~nétration des préparations topiques ~ usage : dermatologique et cosmétique réalis~s avec le compos~. La i demi-vie dll lyophilisat a ét~ déterminée dans la mesure de quatre ~ cinq heures pour une dose thérapeutique de 100 mg/kilo/jour.
h ~ l4~ de ce composé a montr~ :
- une très faible toxicité aiguë, la DL 50 détermin~e per os chez la souris et le rat étant supérieure ~ 5 g par kilo;
. - une parfaite tol~rance après six moi~
. d'administration rép~t~e chez le rat des deux sexes, ~ objectivée par les examens pond~raux, h~matologiques, bio-~ chimiques et anatomo-pathoiogiques.
; . 25 ~ : l'activit~ anti-inflammatoire a ~té mise en évidence tant per os que par voie topique selon les méthodes de :
- l'oedème à la carragénine - l'oedème au kaolin.
~ 30 L'examen des résultats donnés figure 4 montre gue le lypohilisat de potiron administré tant en poudre par la voie orale qu'en gel par la voie cutan~e possbde une activit~ anti-inflammatoire hautement significative la ... ~ premi~re heure et importante les deuxième et troisi~me heures après chaque prise. Dans les mêmes conditions expérimentales, l'action de la betamethasone s'est montrée significative ~ la première heure, non significative ~ la deuxi~me heure, nulle à la troisième.
FElJ~I E D~ F~EMPLACEMEP~T
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:' . . W092/0~85 2 0 g ~ ~ 3 2 PCT/FR91/0~6 . 4 L'activit~ ~nalg~sique a ~t~ recherch~e et objectiv~e chez le rat s~lon la technique de La ~elle et Tislow. ~es r~sultats consignés dans la figure 5 montrent . que le lyophilisat testé comparativem~nt à la betaméthasone poss~de une activit~ égale, voire supérieure ~ celle-ci.
Les exemples d'applications thérapeutiques indiqu~s ci-après illustrent plus en détail l'invention sans en limiter la portée, le produit pouvant être prescrit et utilis~ seul ou en association avec d'autres principes actifs.
E:~L
Préparation orale sous forme de granulé micr~-encapsul~ permettant grâce à un support la lib~ration en :~ moins d'une heure d'une demi-dose d'l,5 g de principe actif. 15 et cinq heures après d'une deuxième dose d'1,5 g.
: Administrée selon une posologie de deux prises par jour, une le matin, l'autre le soix, cette forme pharmaceutique - absor~ée pendant une à deux semaines, réduit totalement les manifestations inflammatoires et douloureuses.
: 20 XF:MPT.F~ 2 ... Préparation topique (gel, cr~me ou pommade) pexmettant grâce à un excipient, huileux ou non, convenablement choisi une application toute3 les ~ ou 3 heures ~ur le5 parties l~s~es ; un dosage de principe actif : compris entre 2 et 10% procure une disparition rapide de l'inflammati~n et/ou de la douleur.
~ ., .
.. 30 Préparation topique du principe actif suspendu ~
raison de S0 ~ 60 mg de lyophilisat dans 100 ml de liquide propuls~ par un gaz inerte autorisé tel que l'azote, ce type de forme pharmaceutique étant particulièrement indiqué
dans le traitement des bralure~ et des escarres.
FElJ~LE DE~ MPLACEM~
.. . .. . . . . ~ .
,, . ,, ', ', '. , ,. , ', ' .,; ' I ' WO92 / 00085 PCT / FR91 ~ 00486 ,. "'1 ~ n ~ s ~ a ~ t Cucurbits are a family of annual broadleaf plants widespread in all countries of the world whose edible fruits such as squash, pumpkins, pumpkins (cucurbita), melons, - cucumbers (cucumis), watermelons (citrullus), calabashes (Lagenaria) are widely consumed.
Since ancient times, these plants are known for their beneficial therapeutic properties and ~ certain inedible varieties, Bryone (Bryonia), ; donkey cucumber (Echallium) for their toxicity.
They have given rise to numerous searches bo ~ aniques, pharmacochemicals, pharmacodynamics and various therapeutic applications as well as very numerous publications and patent applications.
This research has come up against complexity chemical of these plants and as a consequence of instability of the collected results, due to the infinite variety of the different species studied, not only one by compared to the other, but still in each species to the variation of sources, seasons, years, seeded land, farming methods.
The present invention is ~ relating to a new lyophilisate of total extract of hybrid sweet pumpkin.
This lyophilisate is obtained from a variety selected for 12 years by successLves hybridizations. The plant is raised under organic farming contract. The controls are carried out periodically at the land and runoff during and at the end of production. This pumpkin picked at maturity, washed, crushed ~ with bark, pulp and seeds is freeze-dried according to a process conventional, then made bacteriologically stable by gamma irradiation.
The genetic stability obtained by a culture ; tightly controlled over a long period, facilitates standardization of the physico-chemical constants of the lyophilisate thus obtained.
, wo sa / oooss ~ PCI / FRg1 / 004B6 '': 2 206 ~ 0 ~ 2 . This has the following characteristics:
Fine, homogeneous powder and yellow-orange color : indel ~ bile.
. 5 Herbal odor, floury taste.
::. Optical microscope examination of a preparation lyophilisate in a drop of distilled water according to the Fig. 1 detects the presence of fibers and the absence of grains all ~ ng ~ s starch.
- quantity of germs with robophilic mesophiles less than or equal to 5.0. lOZ.
- less quantity of yeasts and molds or . ~ 15 equal to 5.0. 102.
- absence of pathogenic germs, ~ namely absence:
- of Escherichia Coli - Staphylococcus aureus - of Pseudomonas aerugino ~ a - of Salmonella typhimurium - pH between 6.44 and 6.47 - heavy metals <2ppm - carbohydrate content between 63 and 67%
- lipid content of 6% + 0.5 - protein content of 10 ~ + 1%
`~ - total carotenoid content of 25mg ~ 10 ~ per gram of lyophilisate.
The assay is carried out by spectrophotometry in ultraviolet using a Perkin-Elmer device, for example ~ comparison with a control batch of ~ carok ~ ne, r ~~ rence : Merck 2236 according to Figures 2 and 3.
. The product is insoluble in water, sparingly soluble .` in ~ thanol and methanol, sparingly soluble in ether and oils, soluble in chloroform.
~ a conservation of these parameters is linked to storage of the product sheltered from the phenomena of photosynthesis or oxidation due to heat.
FIRE ~ l "DE ~ RE ~ PL ~ CEMP ~ T
. i ,; ',! ; '' ~. . ~ '-j :: '. , ''. '';','.',1''''. ! . '. '''.'''. ~. ',' ~ 'W092 / d ~ 5 2 ~ ~ 5 0 ~ 2, PCT / FR91 / 00486 . L ~ c ~ L ~ - ~ e ~ uJDuu ~ L3 ~ ~ lyophilisate rev ~ le that the richness in provitamins A (~ carotene) and in lipids of this lyophilisate is three times higher that the corresponding contents of the pumpkin cou ~ ant or the carrot; by its high concentration of carotenoids, the compos ~ induces the bio-synthesis of Retinol and promotes rapid cell generation accelerating the process of healing by stimulation of cell mitosis.
Pine oil by incorporating more and more lipids unsaturated fatty acids, linoleic and linolenic, to this is itself an important factor in the power of penetration of topical preparations : dermatological and cosmetic carried out with the compound. The i dll lyophilisate half-life was ~ determined to the extent of four ~ five hours for a therapeutic dose of 100 mg / kg / day.
h ~ l4 ~ of this compound has shown:
- very low acute toxicity, LD 50 determ ine per os in mice and rats being superior ~ 5 g per kilo;
. - perfect tol ~ rance after six months ~
. repeated administration in rats of both sexes, ~ objectified by pond ~ ral, h ~ matological, bio-~ chemical and anatomo-pathological.
; . 25 ~: activity ~ anti has been demonstrated both by bone and by topical route according to the methods of:
- carrageenan edema - edema with kaolin.
~ 30 Examination of the results given in Figure 4 shows that the pumpkin hypohilisate administered as a powder by the oral route only through the skin route ~ e possbde highly significant anti-inflammatory activity ... ~ first and important hour the second and third hours after each take. Under the same conditions effects of betamethasone have been shown significant ~ the first hour, not significant ~ the second hour, void at third.
FElJ ~ IED ~ F ~ LOCATION ~ T
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: '. . W092 / 0 ~ 85 2 0 g ~ ~ 3 2 PCT / FR91 / 0 ~ 6 . 4 The ~ nalg ~ sic activity has been researched and Objective in rats using the La ~ elle technique and Tislow. ~ es r ~ results recorded in Figure 5 show . that the lyophilisate tested comparativem ~ nt to betamethasone poss ~ of an activity ~ equal to, or even better than ~ this one.
Examples of therapeutic applications indicated ~ s below illustrate the invention in more detail without limiting its scope, the product may be prescribed and used alone or in combination with other principles assets.
E: ~ L
Oral preparation in the form of granules micr ~ -encapsul ~ allowing thanks to a support the lib ~ ration in : ~ less than an hour of half a dose of 1.5 g of active ingredient. 15 and five hours after a second dose of 1.5 g.
: Administered in a dosage of two doses per day, one in the morning, the other the soix, this pharmaceutical form - absorbed for one to two weeks, totally reduces inflammatory and painful manifestations.
: 20 XF: MPT.F ~ 2 ... Topical preparation (gel, cream or ointment) thanks to an excipient, oily or not, suitably chosen an application every 3 ~ or 3 hours ~ ur le5 parts l ~ s ~ es; an active ingredient dosage : between 2 and 10% provides rapid disappearance of inflammation and / or pain.
~.,.
.. 30 Topical preparation of the suspended active ingredient ~
due to S0 ~ 60 mg of lyophilisate in 100 ml of liquid powered by an authorized inert gas such as nitrogen, type of pharmaceutical form being particularly indicated in the treatment of bralure ~ and bedsores.
FElJ ~ LE DE ~ MPLACEM ~
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