BRPI1016020B1

BRPI1016020B1 - Linha cirúrgica que compreende células e método de produção da mesma

Info

Publication number: BRPI1016020B1
Application number: BRPI1016020-5A
Authority: BR
Inventors: Ithamar Stocchero; Erich Odermatt; Lutz Funk; Volker Friedrich; Marta Casanovas Albalate
Original assignee: Aesculap Ag
Priority date: 2009-06-29
Filing date: 2010-06-25
Publication date: 2020-09-29
Also published as: EP3085313B1; ES2600359T3; PL2448498T3; BRPI1016020A2; EP2448498B1; BRPI1016020B8; EP3085313A1; US9017378B2; EP2448498A1; WO2011000788A1; US20120232588A1

Abstract

linha cirúrgica que compreende células e método de produção da linha. a presente invenção refere-se a uma linha (100), em particular a uma linha cirúrgica, que compreende uma estrutura que retém células (110) e células (120). além disso, a invenção refere-se a um processo para a produção da linha.

Description

[001] A presente invenção refere-se a uma linha, em particular linha medicinal, que compreende células e a um método de produção da linha.

[002] Os dispositivos e os métodos para fechar ferimentos são bem conhecidos e incluem tipicamente suturas, grampos e adesivos para tecido.

[003] É mais predominante o uso de agulhas e suturas. As suturas fornecem geralmente uma alta resistência de tensão. Ainda, as suturas estão disponíveis para quase cada tipo de procedimento cirúrgico. Em conformidade, as suturas cirúrgicas estão tipicamente disponíveis em uma faixa de tamanhos convencionais. O tamanho da sutura utilizada pelo cirurgião para qualquer procedimento particular é dependente do tipo de tecido que será suturado, do tamanho relativo da estrutura do tecido, bem como das forças que serão aplicadas à sutura pelo tecido aproximado após o procedimento cirúrgico ser completado.

[004] Similarmente, o tipo de suturas selecionado é dependente do procedimento. As suturas que não podem ser absorvidas são tipicamente utilizadas para aplicações tais como cirurgia cardiovascular, cirurgia vascular, cirurgia ortopédica, cirurgia gastrointestinal e similares. As suturas bioabsorvíveis são tipicamente utilizadas para aplicações tais como cirurgia plástica, fixação de pele e aproximação de certos tecidos moles e similares. Uma sutura bioabsorvível pode ser utilizada quando a aproximação ou a fixação de tecido estendido não é requerida enquanto que a sutura mantém resistência adequada durante o período de cicatrização e é desejável para substituir a sutura por tecido análogo tal como pele ou tecido mole durante o processo de cicatrização.

[005] Uma desvantagem geral das suturas é a dependência da técnica de nó e de fatores específicos ao paciente tal como a constituição do tecido ou da pele, que será tratada, resultando em certo risco de maior formação de cicatriz ou deiscência.

[006] Ainda, as suturas possuem a reatividade no tecido mais alta. Isto é principalmente devido à razão de que as suturas são reconhecidas "per se" como corpos estranhos no corpo de um paciente (mamífero) e assim podem ativar respostas inflamatórias e, em particular, imunológicas indesejadas. Tais respostas indesejadas podem levar a complicações pós-operatórias que frequentemente requerem novas intervenções cirúrgicas.

[007] Um material para sutura coberto com células que contribui de uma maneira biologicamente ativa para reparar ferimentos é conhecida da EP 1 634 608 A1. Entretanto, quando tal material é puxado ao longo do tecido que será tratado, há sempre um risco de descamar as células, reduzindo assim o efeito terapêutico das células e do material, respectivamente.

[008] Assim, o objetivo fundamental da presente invenção é tornar disponível um material de sutura cirúrgica que evita as desvantagens conhecidas da técnica anterior. Além disso, o objetivo da presente invenção é também tornar disponível um método correspondente de produção.

[009] Este objetivo é atingido por uma linha que é, em particular, projetada na forma de uma linha medicinal, mais preferencialmente na forma de uma linha cirúrgica ou material de sutura cirúrgica. A linha compreende uma estrutura que retém células e células. O termo "estrutura que retém células" como utilizado aqui é preferencialmente entendido como uma estrutura que retém ou detém células de serem perdidas, em particular, de serem descamadas, durante a implantação ou a inserção da linha no corpo de um paciente.

[0010] A estrutura que retém células vantajosamente permite que uma população eficiente de células sejam fornecidos a uma zona de reparo de tecido junto com a linha.

[0011] Geralmente, a estrutura que retém células está presente na superfície da linha.

[0012] Em geral, as células podem parcialmente ou completamente colonizar ou ocupar, em particular, revestir ou cobrir, a linha. Pode ser preferido dentro do âmbito da invenção que a linha seja apenas parcialmente colonizada pelas células.

[0013] Preferencialmente, as células estão presentes sobre, particularmente revestindo ou cobrindo, a superfície da linha. Mais especificamente, as células podem estar presentes sobre uma superfície externa da linha. A estrutura que retém células compreende elementos que retêm células, em particular loci que retêm células. Mais especificamente, os elementos que retêm células podem ser projetados na forma de elementos que capturam células e/ou que aderem células e/ou elementos que capturam agentes e/ou que aderem agentes.

[0014] Vantajosamente, os elementos que retêm células podem ter um volume com a finalidade de satisfazer pelo menos uma célula, preferencialmente um grande número, isto é, uma população, de células.

[0015] Preferencialmente os elementos que retêm células podem ter um volume entre 0,02 pm3 e 2,1 mm3. Ainda, os elementos que retêm células podem ter uma profundidade entre 50 pm e 1 mm. Além disso, os elementos que retêm células podem estar presentes na superfície da linha em uma distância mútua entre 100 pm e 3 mm.

[0016] Os elementos que retêm células são projetados na forma de protuberâncias, isto é, na forma de elementos que se projetam da superfície da linha. Com a finalidade de exemplo, as protuberâncias podem ser devidas a uma textura da linha, que confere vantajosamente à linha um volume maior e, permitem assim uma melhor captura e aderência das células.

[0017] Ainda, os elementos que retêm células podem ser projetados na forma de fibras ou partes das mesmas. Mais especificamente, os elementos que retêm células podem ser derivados de fibras que contribuem para a estrutura têxtil da linha. Por exemplo, os elementos que retêm células podem estar presentes na forma de fibras que são cortadas da linha.

[0018] Em uma modalidade adicional, a estrutura que retém células da linha compreendem protuberâncias e depressões. Com a finalidade de exemplo, as protuberâncias e as depressões podem estar presentes em uma disposição alternativa sobre a linha.

[0019] Em uma modalidade concebível adicional, os elementos que retêm células estão presentes na forma de protuberâncias que podem ser erguidas, que repousam contra a superfície da linha. Assim, as protuberâncias podem ser erguidas, com a finalidade de exemplo manualmente ou submetendo a estímulos externos, permitindo vantajosamente assim um acabamento celular da linha sob as protuberâncias.

[0020] Vantajosamente, os elementos que retêm células também podem servir como meios de ancoragem para fixar a linha em tecidos biológicos, particularmente em tecidos humano e/ou de animais. Em outras palavras, a linha pode ser projetada na forma de uma linha de autoancoragem ou sem nó.

[0021] Geralmente, os elementos que retêm células podem estar presentes em formatos e geometrias diferentes. Com a finalidade de exemplo, os elementos que retêm células podem ser de formato de escudo, em formato de blindagem, em formato de escama, em formato de cunha, em formato de espinho, em formato de seta, em formato de ferrão, em formato duplo, em formato em V, em formato em W e, combinações dos mesmos. Ainda, os elementos que retêm células são preferencialmente pontiagudos ou afilados em suas extremidades livres. Além disso, os elementos que retêm células podem ter um configuração de várias pontas, em particular uma configuração de pontas duplas. Um exemplo para os elementos que retêm células que possuem uma configuração de pontas duplas é a formação no formato em W mencionado anteriormente de elementos que retêm células. Os elementos que retêm células que possuem uma configuração de pontas duplas podem, em particular, ser baseados em cortes planos dentro da linha, preferencialmente formados com um pequeno broto angular e em intervalos pequenos um dos outros.

[0022] Além disso, os elementos que retêm células podem estar dispostos em disposições diferentes na superfície da linha. Mais especificamente, os elementos que retêm células podem ter uma disposição sobre a linha que é selecionada do grupo que consiste de uma disposição em fileira, uma disposição escalonada, uma disposição sobreposta, uma disposição de broto, um broto e uma disposição parcialmente sobreposta, uma disposição em zigue-zague, uma disposição aleatória ou arbitrária, uma disposição similar a meandro, uma disposição similar à serpentina, uma disposição similar à cavidade, uma disposição espiral, uma disposição em hélice e combinações das mesmas.

[0023] Em uma modalidade adicional, os elementos que retêm células podem estar unidirecionalmente ou multidirecionalmente, em particular bidirecionalmente, dispostos sobre a superfície da linha.

[0024] De acordo com uma modalidade preferida adicional, os elementos que retêm células são projetados na forma de filamentos, preferencialmente se projetando da superfície da linha.

[0025] As células podem estaão presentes debaixo dos elementos que retêm células , que preferencialmente se projetam da superfície da linha. Mais especificamente, as células estão presentes sobre as áreas da superfície, em particular, áreas da superfície cortadas, da li nha, que ficam debaixo dos elementos que retêm células e que são preferencialmente cobertas com os elementos que retêm células que repousam contra superfície da linha.

[0026] Como uma alternativa ou em combinação, as células estão presentes na superfície inferior (face inferior) dos elementos que retêm células com os elementos que retêm células preferencialmente se projetando da superfície da linha.

[0027] Vantajosamente, as células estão empilhados ou alojados entre os elementos que retêm células e áreas da superfície, em particular, áreas da superfície cortadas, da linha, que ficam debaixo dos elementos que retêm células e que são preferencialmente cobertas com os elementos que retêm células que repousam contra superfície da linha. Assim, o risco de uma perda celular e/ou uma perda de agentes durante a implantação da linha e, se apropriado, durante uma cica- trização inicial do ferimento pode ser eficientemente minizado.

[0028] Mais especificamente, as células podem estar ligados aos elementos que retêm células e/ou áreas da superfície, em particular áreas da superfície cortadas, da linha, que ficam debaixo dos elementos que retêm células.

[0029] De acordo com uma modalidade especialmente preferida, as células predominantemente, em particular meramente, colonizam ou ocupam, em particular cobrem ou revestem, a estrutura que retém células , preferencialmente elementos que retêm células dos mesmos.

[0030] Em uma modalidade adicional, a estrutura que retém células , em particular, elementos que retêm células dos mesmos, são formados através de moldagem por injeção, extrusão, estampagem, impressão, corte, laser e similares. Preferencialmente, a estrutura que retém células são formadas através de cortes feitos no interior da linha. Mais preferencialmente, os elementos que retêm células são projetados na forma de cortes dentro da linha.

[0031] Vantajosamente, a estrutura que retém células também pode servir como a estutura que retém agentes. Ainda, os elementos que retêm células também podem servir como elementos que retêm agentes.

[0032] O termo "células" como utilizado de acordo com a invenção abrange pelo menos uma única célula. Preferencialmente, o termo "células" abrange um grande número de células, isto é, pelo menos duas células. Mais preferencialmente, o termo "células" significa uma população de células.

[0033] O termo "agentes" como utilizado de acordo com a invenção abrange pelo menos um único agente. Preferencialmente, o termo "agente" abrange um grande número de agentes, isto é, pelo menos dois agentes. Além disso, o termo "agentes" pode ser referir a uma combinação de agentes diferentes.

[0034] As células podem formar uma população homogênea ou heterogênea. Considerando as diferentes características de tipos de células diferentes, pode ser preferível que as células estejam presentes na forma de uma população heterogênea. Assim, a linha pode ser vantajosamente equipada ou acabada com características celulares diferentes.

[0035] Em uma modalidade preferida, a linha é carregada, em particular inoculada, com as células.

[0036] Tipicamente, as células são células viáveis ou vivas.

[0037] Geralmente, as células podem ser células autólogas, alo- gênicas e/ou xenogênicas. Entretanto, com a finalidade de minimizar o risco de respostas imunológicas, é especialmente preferido utilizar células de origem autóloga. Com a finalidade de equipar a linha com células autólogas, as células são tipicamente coletadas de um paciente que será tratado.

[0038] Preferencialmente, as células são células somáticas, em particular células de estroma, isto é, células do tecido conjuntivo. Mais preferencialmente, as células são derivadas de tecido epitelial, tecido endotelial, tecido adiposo, tecido cartilaginoso, tecido ósseo, linhagens celulares e combinações dos mesmos.

[0039] Em uma modalidade preferida, as células são células tronco, em particular células tronco mesenquimais. Em princípio, as células podem ser células tronco embrionárias e/ou adultas. Entretanto, com a finalidade de satisfazer preocupações éticas, as células tronco adultas podem ser preferidas e as células tronco embrionárias podem ser preferencialmente excluídas.

[0040] Em uma modalidade preferida, as células são células tronco pluripotentes. O termo "células tronco pluripotentes" como utilizado de acordo com a invenção refere-se a células tronco que são capazes de se diferenciar em uma variedade de tecidos.

[0041] Em uma modalidade adicionalmente preferida, as células são células tronco omnipotentes (totipotentes). O termo "células tronco omnipotentes"de acordo com a invenção refere-se a células que são capazes de se diferenciar em qualquer tipo de tecido.

[0042] Preferencialmente, as células tronco são derivadas de tecido adiposo, em particular gordura obtida por lipoaspiração, medula óssea, sangue, polpa dentária, córnea, linhagens de células não diferenciadas tais como fibroblastos não diferenciados e combinações dos mesmos. São especialmente preferidas as células tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo, devido a sua fácil obtenção (partindo de lipoaspiração ou lipectomia), uma baixa no local doador e um alto rendimento de células.

[0043] Em uma modalidade adicional, as células são engenheira- das, em particular, células geneticamente engenheiradas. Com a finalidade de exemplo, as células podem ser engenheiradas para expressarem características de outros tipos de células que podem ser preferencialmente selecionadas do grupo que consiste de células epiteliais, células endoteliais, condrócitos, osteócitos, fibroblastos, adipócitos, miócitos, neurônios, astrócitos, oligodentrócitos, hepatócitos, células pancreáticas, células progenitoras das mesmas, células tronco das mesmas e combinações das mesmas.

[0044] Mais especificamente, as células podem ser engenheiradas para secretarem fatores tais como fatores celulares e/ou sintéticos. Os fatores podem ser selecionados do grupo que consiste de fatores an- timicrobianos, em particular, antibióticos, fatores desinfetantes, fatores antiinflamatórios, fatores promotores de cicatrização de feridas, fatores de crescimento celular, fatores morfogenéticos, citocinas, peptídeos, proteínas, componentes extracelulares, fatores de diferenciação celular, fatores de adesão celular, fatores de recrutamento celular, fatores anestésicos e combinações dos mesmos.

[0045] Os fatores de crescimento úteis podem ser selecionados do grupo que consiste de fator de crescimento de fibroblastos (FGF), fator de crescimento transformante (TGF), fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), fator de crescimento epidérmico (EGF), fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos (GMCSF), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), fator de crescimento similar à insulina (IGF), fator de crescimento de hepatócitos (HGF), interleucina- 1 B (IL-1 B), interleucina-8 (IL-8), fator de crescimento nervoso (NGF) e combinações dos mesmos.

[0046] Os componentes extracelulares úteis podem ser selecionados do grupo que consiste de colágeno, reticulina, elastina, vitronecti- na, fibronectina, laminina, mucopolissacarídeos tais como ácido hialu- rônico, sais dos mesmos e combinações dos mesmos.

[0047] Os fatores de adesão celular úteis podem ser peptídeos que possuem uma sequência de aminoácidos que compreende argini- na, glicina e ácido aspártico.

[0048] Ainda, as células podem ser engenheiradas, em particular geneticamente engenheiradas, para carregarem agentes medicinais ou farmacêuticos, em particular, terapêuticos tais como agentes quimi- oterapêuticos e/ou agentes radioterapêuticos. Os agentes úteis podem ser selecionados do grupo que consiste de cis-platina, carboplatina, paclitaxel, irídio-192, iodo-125 e combinações dos mesmos.

[0049] Em uma modalidade especialmente preferida, as células são selecionadas do grupo que consiste de células epiteliais, células endoteliais, condrócitos, os-teócitos, fibroblastos, adipócitos, miócitos, neurônios, astrócitos, oligodentrócitos, hepatócitos, células pancreáti- cas, células progenitoras dos mesmos, células tronco das mesmas, células engenheiradas, em particular, geneticamente engenheiradas dos mesmos e combinações dos mesmos.

[0050] Em uma modalidade adicional, a linha pode compreender um revestimento, preferencialmente um revestimento que facilita, reforça e/ou aumenta a aderência das células. Com a finalidade de exemplo, o material de revestimento pode ser selecionado do grupo que consiste de peptídeos, proteínas de matriz extracelular, em particular, de células eucarióticas, anticorpos, antígenos de proteína, açúcares, lipídeos e combinações dos mesmos. Os peptídeos úteis podem ser peptídeos que possuem uma sequência de aminoácidos que compreende argini- na, glicina e ácido aspártico. As proteínas extracelulares úteis são selecionadas do grupo que consiste de colágeno, vitronectina, fibronectinas, lamininas, sais dos mesmos e combinações dos mesmos. Para o revestimento, a linha pode ser, com a finalidade de exemplo, encharcada ou imersa em um caldo do material de revestimento.

[0051] Como já mencionado, a linha pode compreender agentes, em particular fatores, adicionalmente às células. Mais especificamente, a linha pode ser equipada ou acabada, em particular, carregada, com agentes. Isto é particularmente útil para confer as características desejadas da linha, em particular, em vista de termos terapêuticos. Os agentes úteis podem ser agentes que promovem a colonização celular da linha. Ainda, os agentes úteis podem ser agentes que induzem a diferenciação de células tronco e/ou a expressão de características celulares tal como a secreção de substâncias desejadas, por exemplo, peptídeos, proteínas, citocinas e similares.

[0052] Preferencialmente, os agentes úteis são fatores que são selecionados do grupo que consiste de fatores antimicrobianos, em particular, antibióticos, fatores desinfetantes, fatores antiinflamatórios, fatores promotores de cicatrização de feridas, fatores de crescimento celular, fatores morfogenéticos, citocinas, peptídeos, proteínas, componentes extracelulares, fatores de diferenciação celular, fatores de adesão celular, fatores de recrutamento celular, fatores anestésicos e combinações dos mesmos.

[0053] Os fatores de crescimento úteis podem ser selecionados do grupo que consiste de fator de crescimento de fibroblastos (FGF), fator de crescimento transformante (TGF), fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), fator de crescimento epidérmico (EGF), fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos (GMCSF), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), fator de crescimento similar à insulina (IGF), fator de crescimento de hepatócitos (HGF), interleucina- 1 B (IL-1 B), interleucina-8 (IL-8), fator de crescimento nervoso (NGF) e combinações dos mesmos.

[0054] Os componentes extracelulares úteis podem ser selecionados do grupo que consiste de colágeno, reticulina, elastina, vitronecti- na, fibronectina, laminina, mucopolissacarídeos tal como ácido hialu- rônico, sais dos mesmos e combinações dos mesmos.

[0055] Os fatores de adesão celular úteis podem ser peptídeos que possuem uma sequência de aminoácidos que compreende argini- na, glicina e ácido aspártico.

[0056] Em uma modalidade adicional, os agentes são agentes medicinais ou farmacêuticos, particularmente terapêuticos. Os agentes úteis podem ser agentes quimioterapêuticos e/ou agentes radiotera- pêuticos, em particular, selecionados do grupo que consiste de cispla- tina, carboplatina, paclitaxel, irídio-192, iodo-125 e combinações dos mesmos.

[0057] Em uma modalidade adicional, a linha pode ser projetada na forma de uma linha absorvível, parcialmente absorvível ou não absorvível. Ainda, a linha pode ser uma linha natural ou sintética.

[0058] Em uma modalidade preferida, a linha é feita de um material não absorvível que é preferencialmente selecionado do grupo que consiste de poliolefina tal como polietileno, polipropileno, difluoreto de polivinilideno (PVDF), politetrafluoroetileno (PTFE), em particular, poli- tetrafluoro-etileno expandido (ePTFE), politetrafluoropropileno ou poli- hexafluoropropileno, poliéster tais como tereftalato de polietileno, teref- talato de polipropileno ou tereftalato de polibutileno, poliamida tal como nylon 6 ou nylon 6.6, poliuretano, seda, algodão, co-polímeros dos mesmos e combinações dos mesmos. É especialmente preferido nylon, seda, poliéster, algodão ou uma mistura de poliéster e algodão.

[0059] Mais especificamente, a linha pode ser feita de um polietileno selecionado do grupo que consiste de polietileno de baixa densidade (LDPE), polietileno de alta densidade (HDPE), polietileno de alto peso molecular (HMWPE), polietileno de peso molecular ultra alto (UHMWPE) e combinações dos mesmos.

[0060] Em uma modalidade adicionalmente preferida, a linha pode ser feita de um material absorvível tal como um polihidroxialcanoato. Mais especificamente, a linha pode ser feita de um material absorvível que é preferencialmente selecionado do grupo que consiste de poligli- colídeo, polilactídeo, poli-ε-caprolactona, carbonato de politrimetileno, poliparadioxanona, poli-3-hidroxibutirato, poli-4-hidroxibutirato, copolímeros dos mesmos e combinações dos mesmos. Um copolímero pre ferido é feito de glicolídeo e lactídeo, em particular, em uma proporção em peso de 9:1 até 1:9. Um copolímero adicionalmente preferido é feito de glicolídeo e ε-caprolactona.

[0061] O termo "copolímero" de acordo com a invenção é preferencialmente entendido como um polímero que é composto de pelo menos duas unidades monoméricas diferentes. Assim, tripolímeros, tetrapolímeros e similares também podem ser abrangidos pelo termo "copolímero". Mais especificamente, um copolímero referido nesta invenção pode estar presente na forma de um copolímero aleatório, copolímero alternante, copolímero em blocos ou segmentados ou copolímero de enxerto. Ainda, o copolímero pode ter uma estrutura isotáti- ca, sindiotática e atática.

[0062] Em uma modalidade adicionalmente preferida, a linha é projetada na forma de uma fibra ou monofilamento, pseudo monofila- mento ou multifilamento. Mais especificamente, a linha pode ser projetada na forma de uma linha trançada ou torcida. Um pseudo monofilamento deve ser preferencialmente entendido como multifilamento coberto por uma bainha, revestimento, envoltório e similares.

[0063] Ainda, a linha pode estar presente em um estado não esticado ou esticado. Entretanto, em vista de estabilidade mecânica, em particular, resistência à tensão, da linha, é vantajoso que a linha seja projetada na forma de uma linha esticada. Sob este aspecto, pode ser vantajoso que a linha compreenda elementos que retêm células , que são formadas, em particular, cortadas, na linha quando a linha está presente em um estado não esticado, em que a linha é esticada após a formação dos elementos que retêm células . Em outras palavras, a linha pode ser obtida ou obtível através de um método que compreende as etapas de: a) formação, em particular, corte dos elementos que retêm células e/ou dos elementos que retêm agentes em uma linha não esti- cada e b) esticamento da linha.

[0064] Ainda, a linha pode estar presente na forma de uma linha que possui uma estrutura de núcleo-bainha. Sob este aspecto, a estrutura que retém células , em particular, elementos que retêm células dos mesmos, são tipicamente derivados do material de bainha.

[0065] Em geral, a linha de acordo com a invenção pode ser aplicada em vários campos de aplicação medicinal, em particular, cirúrgica. Em particular, a linha pode ser aplicada no campo de hemostase, cirurgia invasiva mínima, cirurgia laparoscópica, cirurgia do trato gastrointestinal, cirurgia do trato urogenital, cirurgia do trato respiratório, cirurgia ocular, cirurgia vascular, cirurgia plástica e/ou reconstrutiva, cirurgia no tecido muscular, tecido epitelial, tecidos nervosos e/ou no campo de reparo de tendões, fascia, tecido ósseo, tecido conjuntivo e/ou tecido cartilaginoso, preferencialmente no campo de tratamento de defeitos nos discos invertebrais e/ou defeitos nas cartilagens articulares, em particular, no campo de tratamento de defeito da cartilagem do menisco.

[0066] De acordo com uma modalidade particularmente preferida, a linha é projetada na forma de um recheio, em particular, na forma de um recheio cirúrgico, preferencialmente no campo da cirurgia plástica e/ou reconstrutiva cirurgia. Mais especificamente, a linha pode ser utilizada para preencher e assim enrijecer e/ou suavizar, pequenas áreas do corpo tais como rugas e/ou dobras com a finalidade de minimizar sua aparência e, contribuindo assim para um melhor resultado em vista de termos cosméticos.

[0067] Em princípio, a linha pode ser inserida no corpo de um paciente através de cirurgia laparoscópica, cirurgia minimamente invasiva e similares.

[0068] Em uma modalidade adicional, a linha é conectada a um instrumento cirúrgico, preferencialmente uma agulha ou uma cânula cirúrgica.

[0069] Um aspecto adicional da presente invenção refere-se a um jogo cirúrgico que compreende uma linha de acordo com a presente invenção e um instrumento cirúrgico, preferencialmente uma agulha cirúrgica ou uma cânula cirúrgica. A linha pode ser vantajosamente colocada dentro ou conectada ao instrumento cirúrgico, quando entra no tecido. Em relação a detalhes e vantagens adicionais, em particular, em vista da linha, é feita referência em sua totalidade à descrição anterior.

[0070] Ainda, a presente invenção refere-se ainda a um método para a produção de uma linha de acordo com a presente invenção. Para esta finalidade, uma linha que compreende uma estrutura que retém células e/ou uma estutura que retém agentes é acabada ou equipada com células e/ou agentes.

[0071] Em geral, o acabamento pode ser realizado antes da implantação da linha, em particular, imediatamente antes de uma operação. Como uma alternativa ou em combinação, o acabamento pode ser realizado após a implantação da linha.

[0072] Mais preferencialmente, a linha é carregada, em particular, inoculada, com as células .

[0073] Em uma modalidade preferida, a linha é incubada na presença de um meio de cultura que inclui as células. Mais especificamente, a linha pode ser imersa em um meio de cultura que inclui as células. Na forma de uma alternativa, um meio de cultura que inclui as células pode ser inoculada sobre a linha.

[0074] Com a finalidade de facilitar a colonização celular da linha, a linha pode ser incubada na presença de um meio de cultura que inclui as células durante 1 até 14 dias, em particular, 2 até 10 dias, preferencialmente 2 até 7 dias.

[0075] O meio de cultura pode incluir adicionalmente os agentes que são descritos na descrição anterior.

[0076] Após a incubação, a linha pode ser lavada, preferencialmente com a finalidade de se livrar de componentes indesejados que podem ser em particular, derivados de um meio de cultura.

[0077] O meio de cultura pode estar presente na forma de uma solução ou uma suspensão.

[0078] De acordo com uma modalidade especialmente preferida, a linha é imersa em uma solução que possui uma concentração das células e/ou dos agentes que é suficiente para cobrir a linha durante tempo suficiente para que as células se adsorvam na linha.

[0079] Para um acabamento celular da linha, pode ser geralmente preferido utilizar uma solução que contém células ou uma suspensão que contém células, preferencialmente que possui uma concentraçãoi de células de 50000 células por ml_.

[0080] Ainda, uma estrutura que retém células e/ou estutura que retém agentes, em particular, elementos que retêm células dos mesmos, podem ser revestidos, em particular, pré-revestidos, com as células . Dependendo da natureza dos elementos que retêm células , o revestimento pode ser realizado dentro dos elementos que retêm células , sobre os elementos que retêm células ou entre os elementos que retêm células e superfícies da linha, que ficam preferencialmente debaixo dos elementos que retêm células .

[0081] Em relação aos detalhes e às vantagens adicionais, em particular, em vista da linha e das células, é feita referência em sua totalidade à descrição anterior.

[0082] A presente invenção refere-se ainda a um método para preparação de tecido, em particular, para fechar bordas de feridas, que compreende a etapa de inserção de uma linha de acordo com a invenção em um tecido que será reparado, in particular, nas bordas de feri- das que serão fechadas.

[0083] Mais especificamente, a linha pode ser inserida, vantajosamente através de meios endoscópicos, em um órgão, por exemplo, com a finalidade de promover regeneração de tecido. Para esta finalidade, a linha compreende preferencialmente células engenheiradas para secretarem fatores de crescimento tais como fatores de crescimento vascular voltados para promover crescimento vascular local em uma área que necessita de suprimento de sangue, tal como um coração isquêmico ou uma área recém-transplantada.

[0084] A linha pode ser inserida no tecido com a finalidade de inibir a proliferação celular tal como para tratamentos de câncer. Para esta finalidade, a linha preferencialmente compreende células tronco que são engenheiradas para carregarem uma substância tóxica.

[0085] A linha pode ser inserida através de um instrumento cirúrgico adequado tal como uma agulha ou uma cânula cirúrgica.

[0086] Ainda, a presente invenção refere-se ainda a um método para preencher uma área do corpo tal como rugas, dobras, malar, nariz, bochecha, mama e similares, que compreende a etapa de colocar uma linha de acordo com a presente invenção em uma área do corpo que será preenchida.

[0087] A linha pode ser colocada na área do corpo desejada de forma minimamente invasiva.

[0088] As células podem ser induzidas através da administração de agentes úteis, particularmente, fatores para a expressão de características desejadas, com a finalidade de exemplo, para secretarem substâncias terapêuticas e/ou, no caso de que as células estão presentes na forma de células tronco, para promoverem sua diferenciação em um tipo de células desejado. Como uma alternativa ou em combinação, a linha já pode ser acabada com fatores e agentes úteis, res-pectivamente.

[0089] Em relação a características e vantagens adicionais, em particular, em vista da linha, é feita referência em sua totalidade à descrição anterior.

[0090] Características e vantagens adicionais da invenção se tornarão evidentes partindo da descrição a seguir de modalidades preferidas e como referência aos exemplos e descrições das figuras em associação com as características das reivindicações dependentes e das figuras. As características individuais podem ser realizadas isoladamente ou em vários números em combinação.

[0091] As figuras mostram esquematicamente: figura 1: uma linha não de acordo com a invenção, figura 2: uma modalidade da linha de acordo com a invenção, figura 3: uma modalidade de uma linha de acordo com a invenção, figura 4: uma modalidade adicional da linha de acordo com a invenção.

Descrição das figuras

[0092] A figura 1 mostra esquematicamente uma linha 100. A linha 100 é preferencial mente projetada na forma de linha cirúrgica ou material cirúrgico e compreende uma estrutura que retém células 110 e células 120. A estrutura que retém células 110 compreende elementos que retêm células 115 na forma de depressões. As depressões 115 são dimensionadas para encontrar pelo menos uma célula. As células 120 podem não somente colonizar as depressões 115 como mostrado. Na verdade, as células 120 também podem colonizar o restante da superfície da linha 100. Através da colonização das depressões 115, as células 120 são vantajosamente prevenidas de se perderem durante a implantação da linha 100. Assim, uma quantidade eficiente das células 120 pode ser fornecida ao tecido que será tratado através da linha 100. Com a finalidade de facilitar a entrada no tecido, a linha 100 pode ser conectada a uma agulha cirúrgica 130 como mostrado na figura 1.

[0093] A figura 2 mostra esquematicamente uma linha 100 de acordo com a presente invenção. A linha 100 compreende uma estrutura que retém células 110 que possuem elementos que retêm células 115 na forma de protuberâncias, preferencialmente na forma de filamentos. Vantajosamente, as células 120 podem ser alojadas entre as protuberâncias 115 e as áreas da superfície da linha 108 debaixo das protuberâncias 115. Assim, o risco de uma perda celular, em particu-lar, através do descamamento das células 120, durante a inserção da linha 100 pode ser eficientemente minimizado.

[0094] A linha 100 que são representadas nas figuras 1 é especialmente útil como recheios cirúrgicos, em particular, com a finalidade de preencher pequenas áreas do corpo. Assim, a linha 100 pode ser aplicada, com a finalidade de exemplo, no campo da plástica e/ou cirurgia reconstrutiva, particularmente para tratar rugas e dobras com a finalidade de minimizar sua aparência.

[0095] A figura 3 mostra esquematicamente de uma linha 100. A linha 100 compreende uma estrutura que retém células 110 na forma de uma estrutura similar à cesta que é colonizada pelas células 120. A linha 100 que é exibida na figura 3 é em particular, utei para preencher áreas do corpo comparativamente grandes. Assim, a linha estruturada na forma de cesta 100 pode ser, com a finalidade de exemplo, aplicada para preencher uma área do corpo no busto feminino 121.

[0096] A figura 4 exibe esquematicamente uma linha 100. A linha 100 compreende uma estrutura que retém células 110 na forma de uma estrutura similar a tubular e células que colonizam a estrutura tubular (não mostrado). A linha 100 também é útil como um recheio cirúrgico para áreas do corpo comparativamente grandes tais como áreas ao redor do osso malar.

Exemplos 1. Materiais

[0097] Uma linha de monofilamento feita de um copolímero feito de glicolídeo e lactídeo e uma linha de monofilamento feita de nylon (poliamida 6.6) foram utilizadas.

[0098] Ainda, uma linha de monofilamento feita de polidioxanona (PDO) que possuei um diâmetro de USP 1 foi utilizada.

[0099] Além disso, células tronco derivadas de tecido adiposo adulto humano e condrócitos foram utilizadas como células para acabamento das linhas mencionadas anteriormente.

2. Processamento das linhas

[00100] A linha feita do copolímero e a linha feita de nylon como determinado sob 1. Os materiais foram cortados na superfície através de um aparato de corte, formando assim depressões capazes de encontrar células.

[00101] A linha PDO que é citada sob 1. Os materiais foram cortados de forma a gerar filamentos sobre a superfície da linha.

3. Isolamento e cultura das células 3.1 . Isolamento e cultura de células tronco derivadas de tecido adiposo humano adulto

[00102] O tecido adiposo foi obtido por lipoaspiração. Uma cânula com uma extremidade cega foi introduzida no espaço subcutâneo através de uma pequena incisão periumbilical (menos de 0,5 cm de diâmetro). A sucção foi realizada movendo a cânula ao longo do compartimento de tecido adiposo localizado sob a parede abdominal, ajudando assim o rompimento mecânico do tecido adiposo. Para minimizar a perda de sangue, uma solução salina e de epinefrina foi injetada como um agente vasoconstritor. 80 até 100 ml_ de células do lipoaspirato bruto foram obtidos de cada paciente utilizando este procedimento.

[00103] O lipoaspirato foi colocado em um frasco contendo solução salina tamponada com fosfato esterilizada (PBS) em pH 7,4 e 4°C. A mistura resultante foi pesada utilizando uma escala de precisão. Depois disso, esta foi levada para uma câmara de exposição biológica com a finalidade de ser processada.

[00104] O tecido adiposo foi lavado com PBS até que todo o sangue e líquidos aspirados visíveis fossem eliminados. A etapa facilitou um isolamento de células mais seletivo, com menos eritrócitos e restos celulares, uma vez que a presença destes elementos prejudicava etapas subsequentes no processo de isolamento das células tronco derivadas do tecido adiposo.

[00105] O restante do tecido foi colocado em um recipiente e então agitado (utilizando um agitador magnético) durante 60 minutos a 37°C. Depois disso, este foi submetido à digestão enzimática.

[00106] Para a digestão enzimática, foram utilizados os compostos a seguir (por grama de tecido): 2 ml_ de Meio de Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM), 2 mg/mL de Colagenase A, 20 mg/mL de Albumina de Soro Bovino (BSA) - Fração V, 124 pg/mL de penicilina e 100 pg/mL de estreptomicina.

[00107] Após 60 minutos, a digestão foi interrompida através da adição de Soro Fetal Bovino, em uma proporção equivalente a 10 % do volume total da solução enzimática. Esta inativação da Colgenase era importante para prevenir a lise de células.

[00108] O material digerido foi transferido para um tubo Falcon e centrifugado a 200 x g durante 5 minutos.

[00109] Após a centrifugação, a fração flutuante (que continha a fração de adipócitos) foi descartada e a pelota contendo a fração vascular estromal (SVF) foi ressuspensa em uma mistura de DMEM, 10 % de FBS, 124 pg/mL de penicilina e 100 pg/mL de estreptomicina.

[00110] As células coletadas foram colocadas em uma garrafa de cultura de 25 cm2 contendo DMEM, 10 % de FBS, 124 pg/mL de penicilina e 100 pg/mL de estreptomicina. Esta mistura prevenia contami- nação bacteriana na cultura de células.

[00111] As garrafas de cultura foram deixadas em uma incubadora, a uma concentração de 5 % de dióxido de carbono e 37°C, com a finalidade de promover expansão celular.

[00112] Durante os primeiros dois dias, as garrafas foram lavadas com PBS para remover restos celulares, eritrócitos e outras células não aderentes (as células tronco se aderiram no fundo da garrafa de cultura, não sendo assim removidas pela lavagem). No final desta etapa, a cultura resultante era quase exclusivamente constituída por células tronco derivadas de tecido adiposo.

[00113] Uma vez que as células tronco derivadas de tecido adiposo foram adequadamente isoladas, o meio de cultura foi trocado em dias alternados. Assim, as células se expandiram e atingiram aproximadamente 70% de confluência (que significa que as células se agruparam e ocuparam aproximadamente 70% da superfície inferior interna da garrafa de cultura).

[00114] Nesta cultura primária, uma vez que as células atingiram a confluência esperada, estas foram submetidas à tripsinização (a tripsi- na é uma serina protease que foi utilizada para destruir as proteínas que facilitam a adesão à garrafa e de forma intercelular), utilizando 5 ml_ de Tripsina-EDTA, formando assim uma suspensão de células.

[00115] Tal suspensão foi utilizada para transferir as células para uma garrafa maior (75 cm2), com a finalidade de aumentar os números de células.

[00116] Utilizando a técnica descrita anteriormente, em torno de 1.000.000, células tronco derivadas de tecido adiposo foram obtidas em 15 dias, partindo de 10 g de extrato de tecido adiposo.

3.2 Isolamento e cultura de condrócitos

[00117] Uma biópsia de cartilagem foi coletada por antroscopia do joelho de um paciente para dentro de um frasco esterilizado contendo um "meio de transporte" (DMEM/F12 com 20% de soro fetal de bezerro). O frasco contendo o meio de transporte foi fornecido dentro de 48 horas para o laboratório de cultura de células, onde a mistura foi pesada utilizando uma balança de precisão e subsequentemente levada para uma câmara de exposição biológica, com a finalidade de ser processada.

[00118] Os condrócitos foram expandidos em frascos de cultura de tecidos em uma incubadora de CO2 (5 % de CO2) a 37°C em meio de crescimento durante 3 até 6 semanas e depois mantidos em DMEM/F12 com o soro do próprio paciente inativado com calor (mamífero) (faixa de 10 até 20%) durante 3 até 10 dias. O meio de crescimento mencionado anteriormente foi suplementado com ácido L- ascórbico (50 pg/mL (300 pmoles/L)), sulfato de gentamicina (50 pg/mL (10 mmol/L)) e Fungizona (2 pg/mL (2,2 pmoles/L)). Quando a cultura de condrócitos foi expandida para a quantidade de células necessária para o reparo de uma lesão de cartilagem de certo paciente (mamífero), as células foram coletadas através da tripsinização em 0,25% de tripsina em 1 mM de EDTA, lavadas em meio contendo soro fetal de bezerro (20%) e centrifugadas a 900 x g durante 10 minutos à temperatura ambiente e ressuspensas em números de células entre 0,5 até 2 x 106 células por 0,1 mL de meio de crescimento (5 até 20 x 106 células por 1 mL de meio de crescimento). A contagem ótima de células por 0,1 mL de meio de crescimento para implantação era em torno de 1 milhão células. Em geral, um defeito na cartilagem produzia 0,1 mL de suspensão de células por defeito de 1 cm2.

4. Acabamento celular das linhas 4.1 Acabamento das linhas com células tronco derivadas de tecido adiposo

[00119] Os diferentes tipos de linhas citados sob 1. Materiais foram cortados em fragmentos que possuem um comprimento de aproxima damente 1 cm. Depois disso, os fragmentos de linha foram depositados em poços de uma placa de 12 poços. Uma suspensão de células tronco derivadas de tecido adiposo foi preparada em uma concentração de aproximadamente 50.000 células por ml_ e 1 ml_ da suspensão foi adicionado em cada poço. As placas de cultura sobre as quais os fragmentos de linha foram depositados foram cultivadas na presença da suspensão celular em uma atmosfera com 5% de CO2 a 37°C du-rante 24 horas.

[00120] Depois disso, os fragmentos de linha foram retirados dos poços e subsequentemente colocados em poços contendo uma solução de DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindol)/metanol. DAPI é um corante fluorescente que se liga especificamente ao DNA, formando assim complexos de DNA-DAPI de fluorescência forte. DAPI é rapidamente incorporado nas células resultando em núcleos celulares de fluorescência forte, que podem ser detectados através de fluorescência cito- plasmática.

[00121] Os fragmentos de linha foram incubados na presença de DAPI/metanol durante 15 minutos a 37°C. Após a incubação, os fragmentos de linha foram in-vestigados sob um microscópio eletrônico, confirmando assim uma colonização celular dos fragmentos de linha. Em particular, ocorreu que também as depressões e os filamentos das linhas foram populados pelas células troncos derivadas de tecido adiposo.

4.2 Acabamento das linhas com condrócitos

[00122] Os diferentes tipos de linhas citados sob 1. Materiais foram cortados em fragmentos que possuem um comprimento de aproximadamente 1 cm. Depois disso, os fragmentos de linha foram depositados em poços de uma placa de 12 poços. A suspensão de condrócitos foi preparada em uma concentração de aproximadamente 1 milhão células por ml_ e 1 mL da suspensão foi adicionado em cada poço. As placas de cultura sobre as quais os fragmentos de linha foram deposi tados foram cultivadas na presença da suspensão celular em uma atmosfera com 5% de CO2 a 37°C durante 24 horas.

[00123] Depois disso, os fragmentos de linha foram tirados dos poços e subsequentemente colocados em poços contendo solução de DAPI/metanol. Os fragmentos de linha foram incubados na presença de DAPI/metanol durante 15 minutos a 37°C. Após a incubação, os fragmentos de linha foram investigados sob um microscópio eletrônico, confirmando assim uma colonização celular dos fragmentos de linha. Em particular, ocorreu que também as depressões e os filamentos dos fragmentos de linha foram populados pelos condrócitos.

Claims

1. Linha cirúrgica (100), que compreende uma estrutura que retém células (110) e células (120), sendo que a estrutura que retém células (110) compreende elementos que retêm células (115) que se projetam da superfície da linha (100), caracterizada pelo fato de que alinha (100) é somente parcialmente colonizadas pelas células (120), e as células (120) são alojados entre os elementos que retêm células (115) e as áreas da superfície da linha debaixo dos elementos que retêm células (115).

2. Linha (100) de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que os elementos que contêm células (115) são derivados de fibras, que preferencialmente contribuem para a estrutura têxtil da linha (100).

3. Linha (100) de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que os elementos que contêm células são projetados (115) na forma de filamentos, preferencialmente se projetando da superfície da linha (100).

4. Linha (100) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que as células (120) são de origem autóloga, alogênica e/ou xenogênica, preferencialmente de origem autóloga.

5. Linha (100) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que as células (120) são células somáticas, em particular, células de estroma, preferencialmente derivadas de tecido epitelial, tecido endotelial, tecido adiposo, tecido cartilaginoso, tecido ósseo, córnea, polpa dentária, medula óssea, sangue, linhagens celulares ou combinações dos mesmos.

6. Linha (100) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que as células (120) são células tronco, em particular, células tronco adultas, preferencialmente células tronco mesenquimais.

7. Linha (100) de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que as células tronco são derivadas de tecido adiposo, em particular, gordura obtida por lipoaspiração, medula óssea, sangue, córnea, polpa dentária e/ou linhagens de células não diferenciadas, em particular, fibroblastoos não diferenciados.

8. Linha (100) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que as células (120) são selecionadas do grupo que consiste de células epiteliais, células endoteliais, condrócitos, osteócitos, fibroblastos, adipócitos, miócitos, neurônios, astrócitos, oligodentrócitos, hepatócitos, células pancreáticas, células progenitoras das mesmas, células tronco das mesmas, engenheiradas, em particular, geneticamente engenheiradas, células dos mesmos e combinações dos mesmos.

9. Linha (100) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que a linha (100) é um monofilamento, pseudomonofilamento ou mult- filamento, em particular, um multifilamento trançado ou torcido.

10. Linha (100) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que a linha (100) é feita de um material não absorvível que é preferencialmente selecionado do grupo que consiste de poliolefina tal como polietileno, polipropileno, difluoreto de polivinilideno, politetrafluoroetileno, em particular, politetrafluoroeti- leno, politetrafluoropropileno ou polihexafluoropropileno expandido, poliéster tal como tereftalato de polietileno, tereftalato de polipropileno ou tereftalato de polibutileno, poliamida tal como nylon 6 ou nylon 6.6, poliuretano, seda, algodão, copolímeros dos mesmos e combinações dos mesmos.

11. Linha (100) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que a linha (100) é feita de um material absorvível que é preferencialmente selecionado do grupo que consiste em poliglicolídeo, polilactídeo, poli-ε-caprolactona, carbonato de politrimetileno, poliparadioxanona, poli-3-hidroxibutirato, poli-4- hidroxibutirato, copolímeros dos mesmos e combinações dos mesmos.

12. Linha (100) de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada pelo fato de que é para uso como um recheio cirúrgico, em particular, no campo de cirurgia plástica e/ou cirurgia reconstrutiva, preferencialmente, para minizar a aparência de rugas e/ou dobras.

13. Método para a produção de uma linha (100) como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que uma linha que compreende uma estrutura (110) que retém células é equipada com células (120).