BRPI0806609A2

BRPI0806609A2 - composições, preparações farmacêuticas, processo para produção da composição e método

Info

Publication number: BRPI0806609A2
Application number: BRPI0806609-4A
Authority: BR
Inventors: Hermann Bujard; Rolf Lutz; Christian Kauth; Christian Epp; Ute Woehlbier
Original assignee: Hermann Bujard
Priority date: 2007-01-15
Filing date: 2008-01-11
Publication date: 2011-09-20
Also published as: CA2676308A1; CA2676308C; WO2008086984A1; US20100297163A1; AU2008207143A1; EP2114995A1; AU2008207143B2; US8318185B2; EP2114995B1; CN101636409A; EP1944313A1

Abstract

COMPOSIçõES, PREPARAçõES FARMACêUTICAS, PROCESSO PARA PRODUçãO DA COMPOSIçãO E MéTODO. A presente invenção refere-se a uma vacina recombinante contra malária e um método para sua produção.

Description

"COMPOSIÇOES, PREPARAÇÕES FARMACÊUTICAS, PROCESSO PARA PRODUÇÃO DA COMPOSIÇÃO E MÉTODO"

DESCRIÇÃO

A presente invenção refere-se a uma vacina recombinante contra malária e um método para sua produção.

A proteína de superfície do merozoíto (MSP-I) do parasita da malária Plasmodium ocorre na superfície de merozoítos, a forma invasiva de eritrócito do Plasmodium. MSP-I é produzida como uma proteína precursora com um peso molecular de cerca de 190 kDa que é proteoliticamente processada durante a maturação do merozoíto em quatro fragmentos designados como p83, p30, p38 e p42, que permanecem em uma forma associada não-covalentemente na superfície do parasita. No momento da invasão eritrocitária, ocorre uma maior clivagem proteolítica.

A proteína MSP-I é constituída por várias regiões altamente conservadas, uma região dimórfica associada com uma das duas formas alélicas e dois blocos oligomórficos relativamente pequenos na região N-terminal (Tanabe et al., J. Mol. Biol. 195 (1987) 273-287; Miller et al., Mol. Biochem. Parasitol. 59 (1993), 1-14; que são aqui incorporados através de referência).

Há evidências de que a proteína MSP-I é uma candidata potencial a vacina (Holder e Freeman, Nature 294 (1981), 361-364; Majarian et al., J. Immunol., 132 (1984), 3131- 3137). Além disso, vários estudos de vacinação com material MSP-I de Ρ. falciparum foram realizados em primatas, em particular, macacos Aotus e Saimiri (por exemplo, Perrin et al., J. Exp. Med. 160 (1984), 441-451; Hall et al. , Nature 311 (1984) 379-382; Siddiqui et al., Proc. Natl. Acad. Sei.

USA 84 (1987), 3014-3018; Ettlinger et al. , Inf. Imm. 59 (1991), 3498-3503; Holder et al. , Parasite Immunol. 10 (1988), 607-617; Herrera et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87 (1990), 4017-4021; Herrera et al. , Inf. Ixnm. 60 (1992), 154-158 e Patarroyo et al., Nature 328 (1987), 629-632, que são aqui incorporados através de referência).

Estudos de vacinação com sobreposição de fragmentos recombinantes da proteína MSP-I de E. coli geraram proteção (Tolle et al., Infect. Immun. 61 (1993), 40-47). Um efeito protetor foi também encontrado após a administração do domínio C-terminal da proteína MSP-I na forma dos polipeptídeos pl9 e p42 (Chang et al., Inf. Imm. 64 (1996), 253-261) .

O WO 98/14583 descreve um método para produzir um polipeptídeo MSP-I recombinante completo por diminuição do conteúdo AT da seqüência de DNA expressa em comparação com a seqüência que ocorre naturalmente. Existem, no entanto, algumas desvantagens associadas com o processo descrito no WO 98/14583. Em primeiro lugar, o método de produção só permite eficiente purificação na presença de caudas N- e/ou C- na seqüência terminal. Em segundo lugar, o método de purificação só funciona em uma pequena escala. Uma adaptação de métodos de purificação em larga escala que são exigidos em processos industriais de fabricação da vacina não é facilmente disponível.

Kauth et al. (J. Biol. Chem. 278 (2003), 22257-22264) descrevem a reconstituição in vitro do polipeptídeo MSP-I de P. falciparum cepa 3D7 de subunidades produzidas heterologamente. A purificação é, no entanto, somente descrita para polipeptídeos que são fundidos nas caudas da seqüência heteróloga, tais como GST, estreptococo ou cauda hexahistidina. A presença dessas seqüências heterólogas em uma vacina, no entanto, é indesejável.

A presente invenção supera os inconvenientes do método anterior, proporcionando uma composição que inclui

(a) um fragmento p83/30 purificado da proteína gpl90/MSP-l de Plasmodium sem seqüências heterólogas, e

(b) um fragmento purificado p38/42 da proteína gpl90/MSP-l de Plasmodium sem seqüências heterólogas.

Preferencialmente, o fragmento p83/3 0 purificado é um fragmento F, ou seja, um fragmento derivado de uma cepa F de Plasmodium, especialmente a partir do P. falciparum estirpe FCB-I também conhecida como FC ou F.

Surpreendentemente, verificou-se que o fragmento F é mais estável contra a degradação proteolítica do que o fragmento D, ou seja, um fragmento derivado de uma cepa D de Plasmodium, especialmente a partir do P. falciparum cepa 3D7 também conhecida como NF54. Além disso, foi surpreendente verificar que o fragmento F p38/30 pode ser combinado com um fragmento p38/42 heterólogo e/ou homólogo, por exemplo, com um fragmento D p38/42 heterólogo e/ou um fragmento F p38/42.

Na composição da invenção os componentes (a) e (b) são preferivelmente presentes em quantidades equimolares, por exemplo, proporção molar de 1,5:1 para 1:1,5, mais preferivelmente de 1,2:1 para 1:1,2 e mais preferivelmente de cerca de 1:1 de componente (a) para componente (b).

Preferivelmente, pelo menos 70%, mais preferivelmente pelo menos 80% e mais pref erivelmente pelo menos 90% dos fragmentos na composição estão presentes como dímero associado não-covalentemente.

Componentes (a) e (b) são preferivelmente polipeptídeos recombinantes, ou seja, polipeptídeos que tenham sido fabricados em uma célula hospedeira recombinante, por exemplo, uma célula hospedeira eucariótica, tais como uma célula de levedura, por exemplo, S. cerevisiae ou P. pastoris, ou em células procarióticas, por exemplo, células bacterianas gram-negativas, como E. coli. Preferencialmente, a célula hospedeira recombinante é uma célula de E. coli. Mais preferivelmente, a célula hospedeira é E. coli W3110Z2.

Em um experimento preferido, a composição da invenção tem uma pureza de pelo menos 95% e mais pref erivelmente de pelo menos 97,5%, determinada em gel de eletroforese SDS e coloração prata. Neste contexto, o termo "pureza" refere-se à ausência de polipeptídeos heterólogos, ou seja, polipeptídeos não-MSP-1.

Num outro experimento preferido, a composição tem um teor de degradação dos produtos de menos de 30%, mais preferivelmente menos de 2 0%, e mais preferivelmente menos de 10%, conforme medido por gel de eletroforese SDS e imuno-coloração. Neste contexto, o termo "degradação de produtos" refere-se a moléculas polipeptídicas que resultam de uma degradação do fragmento p83/3 0 ou do fragmento p38/42 como descrito acima.

A composição da invenção compreende um fragmento purificado p83/30 da proteína gpl90/MSP-l de Plasmodium e um fragmento purificado p38/42 da proteína gpl90/MSP-l de Plasmodium. 0 termo "fragmento p83/3 0" refere-se a um único polipeptídeo compreendendo o fragmento p83 e o fragmento p30 da proteína MSP-I de Plasmodium. Preferencialmente, a composição compreende um fragmento p83/3 0 de Plasmodium cepa F. 0 fragmento p38/42 é um polipeptídeo único compreendendo o fragmento p38 e o fragmento p42 da proteína MSP-I de Plasmodium. 0 fragmento p38/42 pode ser obtido a partir de qualquer cepa de Plasmodium, por exemplo, uma cepa D ou uma cepa F de P. falciparum.

O fragmento p83/3 0 preferivelmente inclui a seqüência de aminoácidos de uma cepa F de P. falciparum como mostrado na SEQ ID NO: 1 e, opcionalmente, uma seqüência peptídica sinal N-terminal ou um fragmento F modificado derivado da seqüência da cepa F. Em um experimento menos preferido, o fragmento p83/3 0 inclui a seqüência de aminoácidos de uma cepa D de P. falciparum e, opcionalmente, uma seqüência peptídica sinal N-terminal ou uma seqüência da cepa D modificada. A seqüência de aminoácidos mostrada na SEQ ID NO: 2 é derivada da seqüência de aminoácidos de uma cepa D e inclui 2 substituições de aminoácidos na posição 611 (Ε -> K) e 866 (Q -> H).

O fragmento p3 8/42 pode ser obtido a partir de uma cepa F de P. falciparum como mostrado na SEQ ID NO: 3 e/ou de uma cepa D de P. falciparum como mostrado na SEQ ID NO: 4. Surpreendentemente, verificou-se que um fragmento p83/3 0 de uma cepa F tanto pode ser combinado com um fragmento p3 8/42 homólogo de uma cepa F ou com um fragmento p3 8/42 heterólogo de uma cepa diferente de P. falciparum, por exemplo, uma cepa D.

Os termos "fragmento p83/30" e "fragmento p38/42" também se referem aos fragmentos modificados que tenham uma seqüência de identidade de aminoácidos de pelo menos 90%, de preferência de pelo menos 95% e mais preferivelmente de pelo menos 98% durante todo o comprimento do polipeptídeo para um fragmento nativo p83/30 ou p38/42. Os termos também englobam fragmentos truncados que podem incluir supressões de aminoácidos únicos e/ou aminoácidos de até 10 porções, mais preferivelmente até 5 aminoácidos, em comparação com os polipeptídeos do tipo selvagem. Um fragmento p83/30 preferivelmente tem um comprimento de pelo menos 800 aminoácidos, mais preferivelmente de pelo menos 850 aminoácidos. Além disso, o fragmento p83/30 possui uma identidade de seqüência de pelo menos 90%, mais preferivelmente de pelo menos 95% e, mais preferencialmente de pelo menos 98% com o fragmento p83/30 de P. falciparum variante F na SEQ ID NO: 1.

O fragmento p38/42 preferivelmente tem um comprimento de pelo menos 7 00 aminoácidos e mais preferivelmente de pelo menos 750 aminoácidos. Além disso, é preferível que o fragmento p3 8/42 possua uma seqüência de identidade de pelo menos 90%, mais preferivelmente de pelo menos, 95% e, mais preferencialmente de pelo menos 98%, em comparação com os fragmentos p38/42 de uma cepa F de P. falciparum (SEQ ID NO: 3) e/ou a partir de uma cepa D (SEQ ID NO: 4).

As seqüências de aminoácidos de experimentos particularmente preferidos de p83/30 e p38/42 são mostradas nas SEQ ID NO: 1, 2, 3 e 4.

A presente invenção também se refere a uma preparação farmacêutica compreendendo uma composição conforme descrita acima e veículos farmaceuticamente aceitáveis, diluentes e/ou adjuvantes. Preferencialmente, a preparação é uma vacina. A vacina pode estar presente como liofilizado reconstitutível, como líquido, por exemplo, como solução ou suspensão, ou como emulsão, por exemplo, como emulsão água em óleo. A vacina pode incluir adjuvantes, tais como alumínio, MF59 ou BCG, incluindo BCG recombinante como descrito no PCT/EP2005/011127, "Combination of a bacterial cell and a biologically active agent", que é aqui incorporado por referência. A vacina é administrada preferencialmente por injeção, por exemplo, intradérmica, subcutânea ou injeção intramuscular.

A dose preferida da vacina compreende 1-500 μg, mais preferivelmente 20-100 yg de proteínas para aplicação na medicina humana. A vacina pode ser administrada em dose única ou em doses múltiplas. A administração de doses múltiplas é preferível.

A composição da presente invenção pode ser produzida por um processo compreendendo as etapas:

(a) expressão do fragmento p83/30 da proteína gpl90/MSP-1 de Plasmodium sem seqüência heteróloga em uma célula hospedeira,

(b) expressão do fragmento p38/42 da proteína gpl90/MSP-1 de Plasmodium sem seqüência heteróloga em uma célula hospedeira,

(c) recuperação do fragmento p83/30 e o fragmento p38/42 de células hospedeiras, (d) opcionalmente combinação os fragmentos p83/30 e p38/42, e

(e) purificação dos fragmentos combinados.

A expressão dos fragmentos p83/30 e p38/42 pode ser realizada em uma única célula hospedeira ou separadamente, em uma primeira célula hospedeira e em uma segunda célula hospedeira. A utilização da primeira e segunda célula hospedeira separada é preferível. As células hospedeiras podem ser fornecidas pela transfecção com um ácido nucléico codificando o respectivo fragmento MSP-I. Preferencialmente, o ácido nucléico codificando o fragmento p83/30 e o ácido nucléico codificando o fragmento p38/42 podem ser localizados em um vetor de expressão adequado para a respectiva célula hospedeira, por exemplo, uma célula bacteriana gram-negativa, tal como uma célula de E. coli. O vetor de expressão pode ser um vetor episomal, como um plasmídeo, ou um vetor integrado cromossomalmente. 0 vetor de expressão compreende os ácidos nucléicos em uma ligação operatória com uma seqüência de controle de expressão adequada, por exemplo, que pode incluir um promotor constitutivo ou induzível. 0 vetor de expressão pode incluir mais elementos genéticos, por exemplo, uma origem de replicação, um marcador de seleção, etc. Exemplos de vetores de expressão adequados são descritos em Sambrook et al. Molecular Cloning, A Laboratory Manual (1989), Cold Spring Harbor Laboratory Press, e outros livros-texto padrões. Quando as células hospedeiras são células bacterianas, por exemplo, células de E. coli, os fragmentos são preferencialmente expressos na forma insolúvel, por exemplo, como corpos de inclusão. Preferencialmente, os fragmentos são recuperados separadamente como corpos de inclusão que podem ser solubilizados separadamente, por exemplo, na presença de sais caotrópicos, como cloridrato de guanidina e, posteriormente duplicado, por exemplo, na presença de reagentes arginina e tiol, como glutationa.

Alternativamente, os fragmentos p83/30 e p38/42 podem ser combinados antes da solubilização, após solubilização ou após duplicação em uma razão molar adequada. Após duplicação, os fragmentos são transferidos para um tampão adequado que pode incluir um agente tensioativo não iônico como o Tween 80, Tween 20 ou Triton X-100. Se desejado, os fragmentos podem ser purificados separadamente por etapas subsequentes de tratamento, compreendendo pelo menos uma das seguintes características: filtração, cromatografia de troca catiônica e/ou aniônica, tais como HP-cromatografia Q-Sepharose, ou HP-cromatografia SP-Sepharose, acondicionamento e concentração, por exemplo, por ultrafiltração.

De acordo com a etapa (d), os fragmentos são combinados. Preferencialmente, os fragmentos são combinados em quantidades aproximadamente equimolares, conforme indicado acima. A quantidade do respectivo fragmento pode ser determinada por medições espectroscópicas de proteína, por exemplo, determinando absorção de UV a 2 80 nm. É especialmente preferido que os fragmentos sejam combinados na ausência de polipeptídeos heterólogos como a albumina.

Depois de combinar, os fragmentos podem ser ainda mais purificados, por exemplo, por cromatografia por exclusão por tamanho, por exemplo, utilizando Sephacryl S 300-HR/GE. Outros tratamentos podem incluir filtração, concentração e esterilização, por exemplo, filtração por esterilização.

Os ácidos nucléicos codificando os fragmentos p83/3 0 e p3 8/42 podem ter um teor reduzido de AT em comparação com o tipo selvagem, tal como descrito no WO 98/14583, que está aqui incorporado por de referência.

Além disso, a invenção refere-se a uma composição que inclui um fragmento p83/3 0 purificado da proteína gpl90/MSP-l de Plasmodium a partir de uma cepa F. 0 fragmento p83/30 preferencialmente compreende a seqüência como mostrada na SEQ ID NO: 1 ou uma seqüência modificada, como descrito acima. Esta composição é preferencialmente utilizada como uma preparação farmacêutica, por exemplo, como uma vacina, como descrito acima. No que diz respeito às características preferidas, por exemplo, pureza e/ou conteúdo dos produtos de degradação, desta composição, se refere à divulgação, como descrito acima.

A presente invenção é explicada pelos seguintes exemplos: Exemplo 1

Produção do fragmento p83/3 0

A seqüência de aminoácidos do fragmento p83/3 0 é mostrada na SEQ ID NO: 1 (cepa F) ou SEQ ID NO: 2 (cepa D). Uma seqüência de ácido nucléico codificando tal fragmento foi clonada no vetor de expressão pZE23D 83/3 0 mostrado na Fig. 1. O fragmento codificando ácido nucléico operatório está operacionalmente ligado com o promotor IPTG-induzível pAllacOl. A cepa produzida de E.coli foi W3110Z2 (por exemplo, Bacteriol. Ref. 36, (1972), 525-530; Proc. Natl. Acad. Sei. USA 78 (1981), 7069-7072).

As células de E. coli foram pré-cultivadas em meio LB. A pré-cultura foi diluída a 1:50 com Supercaldo e cultivadas em um fermentador a 37°C. Em uma densidade ótica (OD6Oo) de 1,5, doxiciclina (200 ng / ml) foi adicionada. Na OD60O = 4,5, IPTG (1 mM) foi adicionado.

As células foram colhidas em um OD6oo — 7 ou 2,5 h após a indução com IPTG.

As bactérias colhidas foram rompidas por homogeneização contínua em uma taxa de transferência de 10 l/h e 1500 bar de pressão máxima (Niro-Soavi, Tipo Panda) . O homogeneizado foi centrifugado por 3 0 min a 6.000 g seguido por dois ciclos de lavagem/centrifugação, a fim de obter os corpos de inclusão. Uma comparação da estabilidade dos corpos de inclusão do fragmento p83/30 de uma cepa D e uma F é mostrada na Fig. 2. Os valores da figura são os seguintes:

1+9: marcador;

2: amostra de fermentação de F-83/30;

3: IBs F-83/30 após a preparação;

4: Albumina sérica bovina (BSA) 800 ng;

5: BSA 600 ng;

6: BSA 400 ng;

7: BSA 200 ng;

8: BSA 100 ng;

10: IBs F-83/30 (após 9 meses de armazenamento a -18°C);

11: IBs de D-83/30 (após preparação);

12: amostra de fermentação de F-83/30;

13: amostra de fermentação de D-83/30.

É evidente na Fig. 2 que o fragmento p83/30 de um P. falciparum cepa F é significativamente mais estável do que o fragmento p83/30 correspondente de uma cepa D.

Exemplo 2

Produção do fragmento p3 8/42

A seqüência de aminoácido do fragmento p38/42 é mostrada na SEQ ID NO: 3 (cepa F) ou SEQ ID NO: 4 (cepa D). Corpos de inclusão do fragmento p38/42 foram produzidos substancialmente conforme descrito no exemplo 1 para o fragmento p83/3 0.

Exemplo 3

Produção de uma composição compreendendo quantidades equimolares de fragmentos p83/30 e p38/42

Os corpos de inclusão obtidos nos Exemplos 1 e 2 foram solubilizados separadamente, acrescentando tampão de solubilização (6M de guanidina HCl; 50 mM de fosfato de sódio (Na fosfato) ; 10 mM de ditiotreitol, 1 mM de EDTA, pH 8,0) para os Corpos de Inclusão (IBs).

Para os fragmentos p83/3 0, três diferentes proporções de IBs para tampão de solubilização foram utilizadas, ou seja, 1 g de IB + 2,5 ml de tampão; 1 g de IB + 4,0 ml de tampão e 1 g de IB + 8,0 ml de tampão. Para o fragmento p38/40, Ig de IB foi adicionado a 2,5 ml de tampão.

O filtrado foi submetido a um procedimento de duplicação por incubação em 500 mM de arginina, 50 mM de fosfato de sódio (Na fosfato), 1 mM de L-glutationa reduzida, 0,1 mM de glutationa oxidada, 1 mM de EDTA pH 8,0 por toda a noite, à temperatura ambiente.

As soluções de proteína resultantes foram 5x concentradas por ultrafiltração. O tampão foi modificado com 20 mM de fosfato de sódio (Na fosfato) , 50 mM de NaCl, 0,01% de Tween 80 pH 8.0. Após filtração em um filtro de 0,2 μπι, o produto foi submetido a cromatograf ia HP Q-Sepharose. A elusão ocorreu em um gradiente de tampão A de 0-100% (20 mM de fosfato de sódio (Na fosfato), 50 mM de NaCl, 0,01 de Tween 80 pH 8,0) e tampão B (20 mM de fosfato de sódio (Na fosfato), 350 mM de NaCl, 0,01% de Tween 80 pH 8,0).

Os eluatos foram condicionados pela diluição 1:5 em tampão de diluição (10 mM de fosfato de sódio (Na fosfato), 0,01% de Tween 80 pH 5,8) e filtrados através de um filtro de 0,2 μπι. 0 produto resultante foi submetido a uma cromatograf ia HP SP Sepharose e eluído em um gradiente de 0-100% de tampão A (10 mM de fosfato de sódio (Na fosfato), 50 mM de NaCl, 0,01% de Tween 80, pH 5,8) e tampão B (10 mM de fosfato de sódio (Na fosfato), 600 mM de NaCl, 0,01% de Tween 80, pH 5,8). Posteriormente, o pH foi ajustado para 7,4.

As soluções de proteína foram concentradas a 4 mg/ml por ultrafiltração. Então, ambas as subunidades foram agrupadas em uma relação de 1:1 (com base nas quantidades de proteína total medidas por UV a 280 nin) na ausência de polipeptídeos heterólogos. Após filtração, a composição foi submetida a cromatografia por exclusão de tamanho, por exemplo, com Sephacryl S-300-HR/GE em tampão PBS Ix a pH 7.2-7.4. A composição foi opcionalmente concentrada por ultrafiltração, a fim de proporcionar uma concentração de até 1 mg de proteína/ml. Após a filtração estéril, a composição foi armazenada. LISTAGEM DE SEQÜÊNCIAS

<110> Depositante: Vakzine Projekt Management GmbH

<120> Título da Invenção: COMPOSIÇÕES, PREPARAÇÕES FARMACÊUTICAS, PROCESSO PARA PRODUÇÃO DA COMPOSIÇÃO E MÉTODO

<130> Referência do documento: 37784P EP <160> Quantidade de SEQ ID NOs.: 4

<170> Software: PatentIn versão 3.3

<210> SEQ ID NO: 1

<211> Comprimento: 872 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: P. falciparum

<220> Características:

<221> Nome/Chave: MISC_FEATURE

<223> Outras Informações: MSP-IF 83/30

<400> Seqüência: 1

Met Lys Ile Ile Phe Phe Leu Cys Ser Phe Leu Phe Phe Ile Ile Asn 1 5 10 15

Thr Gln Cys Val Thr His Glu Ser Tyr Gln Glu Leu Val Lys Lys Leu 20 25 30

Glu Ala Leu Glu Asp Ala Val Leu Thr Gly Tyr Ser Leu Phe Gln Lys 35 40 45

Glu Lys Met Val Leu Lys Asp Gly Ala Asn Thr Gln Val Val Ala Lys 50 55 60

Pro Ala Asp Ala Val Ser Thr Gln Ser Ala Lys Asn Pro Pro Gly Ala 65 70 75 80

Thr Val Pro Ser Gly Thr Ala Ser Thr Lys Gly Ala Ile Arg Ser Pro 85 90 95

Gly Ala Ala Asn Pro Ser Asp Asp Ser Ser Asp Ser Asp Ala Lys Ser 100 105 110

Tyr Ala Asp Leu Lys His Arg Val Gln Asn Tyr Leu Phe Thr Ile Lys 115 120 125

Glu Leu Lys Tyr Pro Glu Leu Phe Asp Leu Thr Asn His Met Leu Thr 130 135 140 Leu Cys Asp Asn Ile His Gly Phe Lys Tyr Leu Ile Asp Gly Tyr Glu 145 150 155 160

Glu Ile Asn Glu Leu Leu Tyr Lys Leu Asn Phe Tyr Phe Asp Leu Leu

165 170 175

Arg Ala Lys Leu Asn Asp Val Cys Ala Asn Asp Tyr Cys Gln Ile Pro 180 185 190

Phe Asn Leu Lys Ile Arg Ala Asn Glu Leu Asp Val Leu Lys Lys Leu 195 200 205

Val Phe Gly Tyr Arg Lys Pro Leu Asp Phe Ile Lys Asp Asn Val Gly 210 215 220

Lys Met Glu Asp Tyr Ile Lys Lys Asn Lys Thr Thr Ile Ala Asn Ile 225 230 235 ' 240

Asn Glu Leu Ile Glu Gly Ser Lys Lys Thr Ile Asp Gln Asn Lys Asn

245 250 255

Ala Asp Asn Glu Glu Gly Lys Lys Lys Leu Tyr Gln Ala Gln Tyr Asp 260 265 270

Leu Phe Ile Tyr Asn Lys Gln Leu Gln Glu Ala His Asn Leu Ile Ser 275 280 285

Val Leu Glu Lys Arg Ile Asp Thr Leu Lys Lys Asn Glu Asn Ile Lys 290 295 300

Lys Leu Leu Glu Asp Ile Asp Lys Ile Lys Ile Asp Ala Glu Lys Pro 305 310 315 320

Thr Thr Gly Val Asn Gln Ile Leu Ser Leu Arg Leu Glu Lys Glu Ser

325 330 335

Arg His Glu Glu Lys Ile Lys Glu Ile Ala Lys Thr Ile Lys Phe Asn 340 345 350

Ile Asp Arg Leu Phe Thr Asp Pro Leu Glu Leu Glu Tyr Tyr Leu Arg 355 360 365

Glu Lys Asn Lys Lys Val Asp Val Thr Pro Lys Ser Gln Asp Pro Thr 370 375 380 Lys Ser Val Gln Ile Pro Lys Val Pro Tyr Pro Asn Gly Ile Val Tyr 385 390 395 400

Pro Leu Pro Leu Thr Asp Ile His Asn Ser Leu Ala Ala Asp Asn Asp 405 410 415

Lys Asn Ser Tyr Gly Asp Leu Met Asn Pro His Thr Lys Glu Lys Ile 420 425 430

Asn Glu Lys Ile Ile Thr Asp Asn Lys Glu Arg Lys Ile Phe Ile Asn 435 440 445

Asn Ile Lys Lys Gln Ile Asp Leu Glu Glu Lys Asn Ile Asn His Thr 450 455 460

Lys Glu Gln Asn Lys Lys Leu Leu Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Lys Lys 465 470 475 480

Asp Tyr Glu Glu Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Glu Met Lys Phe Asn Asn 485 490 495

Asn Phe Asn Lys Asp Val Val Asp Lys Ile Phe Ser Ala Arg Tyr Thr 500 505 510

Tyr Asn Val Glu Lys Gln Arg Tyr Asn Asn Lys Phe Ser Ser Ser Asn 515 520 525

Asn Ser Val Tyr Asn Val Gln Lys Leu Lys Lys Ala Leu Ser Tyr Leu 530 535 540

Glu Asp Tyr Ser Leu Arg Lys Gly Ile Ser Glu Lys Asp Phe Asn His 545 550 555 560

Tyr Tyr Thr Leu Lys Thr Gly Leu Glu Ala Asp Ile Lys Lys Leu Thr 565 570 575

Glu Glu Ile Lys Ser Ser Glu Asn Lys Ile Leu Glu Lys Asn Phe Lys 580 585 590

Gly Leu Thr His Ser Ala Asn Ala Ser Leu Glu Val Ser Asp Ile Val 595 600 605

Lys Leu Gln Val Gln Lys Val Leu Leu Ile Lys Lys Ile Glu Asp Leu 610 615 620 Arg Lys Ile Glu Leu Phe Leu Lys Asn Ala Gln Leu Lys Asp Ser Ile 625 630 635 640

His Val Pro Asn Ile Tyr Lys Pro Gln Asn Lys Pro Glu Pro Tyr Tyr

645 650 655

Leu Ile Val Leu Lys Lys Glu Val Asp Lys Leu Lys Glu Phe Ile Pro 660 665 670

Lys Val Lys Asp Met Leu Lys Lys Glu Gln Ala Val Leu Ser Ser Ile 675 680 685

Thr Gln Pro Leu Val Ala Ala Ser Glu Thr Thr Glu Asp Gly Gly His 690 695 700

Ser Thr His Thr Leu Ser Gln Ser Gly Glu Thr Glu Val Thr Glu Glu 705 710 715 720

Thr Glu Glu Thr Val Gly His Thr Thr Thr Val Thr Ile Thr Leu Pro 725 730 735

Pro Lys Glu Val Lys Val Val Glu Asn Ser Ile Glu His Lys Ser Asn 740 745 750

Asp Asn Ser Gln Ala Leu Thr Lys Thr Val Tyr Leu Lys Lys Leu Asp 755 760 765

Glu Phe Leu Thr Lys Ser Tyr Ile Cys His Lys Tyr Ile Leu Val Ser 770 775 780

Asn Ser Ser Met Asp Gln Lys Leu Leu Glu Val Tyr Asn Leu Thr Pro 785 790 795 800

Glu Glu Asn Glu Leu Lys Ser Cys Asp Arg Leu Asp Leu Leu Phe Asn 805 810 815

Ile Gln Asn Asn Ile Pro Ala Met Tyr Ser Leu Tyr Asp Ser Met Asn 820 825 830

Asn Asp Leu Gln His Leu Phe Phe Glu Leu Tyr Gln Lys Glu Met Ile 835 840 845

Tyr Tyr Leu His Lys Leu Lys Glu Glu Asn His Ile Lys Lys Leu Leu 850 855 860 Glu Glu Pro Lys Gln Ile Thr Gly 865 870

<210> SEQ ID NO: 2 <211> Comprimento: 893 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Ρ. falciparum

<220> Características:

<221> Nome/Chave: MISC_FEATURE

<223> Outras Informações: MSP-ID 83130

<400> Seqüência: 2

Met Val Thr His Glu Ser Tyr Gln Glu Leu Val Lys Lys Leu Glu Ala 1 5 10 15

Leu Glu Asp Ala Val Leu Thr Gly Tyr Ser Leu Phe Gln Lys Glu Lys 20 25 30

Met Val Leu Asn Glu Glu Glu Ile Thr Thr Lys Gly Ala Ser Ala Gln 35 40 45

Ser Gly Ala Ser Ala Gln Ser Gly Ala Ser Ala Gln Ser Gly Ala Ser 50 55 60

Ala Gln Ser Gly Ala Ser Ala Gln Ser Gly Ala Ser Ala Gln Ser Gly 65 70 75 80

Thr Ser Gly Pro Ser Gly Pro Ser Gly Thr Ser Pro Ser Ser Arg Ser 85 90 95

Asn Thr Leu Pro Arg Ser Asn Thr Ser Ser Gly Ala Ser Pro Pro Ala 100 105 110

Asp Ala Ser Asp Ser Asp Ala Lys Ser Tyr Ala Asp Leu Lys His Arg 115 120 125

Val Arg Asn Tyr Leu Phe Thr Ile Lys Glu Leu Lys Tyr Pro Glu Leu 130 135 140

Phe Asp Leu Thr Asn His Met Leu Thr Leu Cys Asp Asn Ile His Gly 145 150 155 160

Phe Lys Tyr Leu Ile Asp Gly Tyr Glu Glu Ile Asn Glu Leu Leu Tyr 165 170 175 Lys Leu Asn Phe Tyr Phe Asp Leu Leu Arg Ala Lys Leu Asn Asp Val 180 185 190

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Leu Asp Asn Ile Lys Asp Asn Val Gly Lys Met Glu Asp Tyr Ile Lys 225 230 235 240

Lys Asn Lys Thr Thr Ile Ala Asn Ile Asn Glu Leu Ile Glu Gly Ser 245 250 255

Lys Lys Thr Ile Asp Gln Asn Lys Asn Ala Asp Asn Glu Glu Gly Lys 260 265 270

Lys Lys Leu Tyr Gln Ala Gln Tyr Asp Leu Ser Ile Tyr Asn Lys Gln 275 280 285

Leu Glu Glu Ala His Asn Leu Ile Ser Val Leu Glu Lys Arg Ile Asp 290 295 300

Thr Leu Lys Lys Asn Glu Asn Ile Lys Lys Leu Leu Asp Lys Ile Asn 305 310 315 320

Glu Ile Lys Asn Pro Pro Pro Ala Asn Ser Gly Asn Thr Pro Asn Thr 325 330 335

Leu Leu Asp Lys Asn Lys Lys Ile Glu Glu His Glu Glu Lys Ile Lys 340 345 350

Glu Ile Ala Lys Thr Ile Lys Phe Asn Ile Asp Ser Leu Phe Thr Asp 355 360 365

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Val Thr Pro Lys Ser Gln Asp Pro Thr Lys Ser Val Gln Ile Pro Lys 385 390 395 400

Val Pro Tyr Pro Asn Gly Ile Val Tyr Pro Leu Pro Leu Thr Asp Ile 405 410 415 His Asn Ser Leu Ala Ala Asp Asn Asp Lys Asn Ser Tyr Gly Asp Leu 420 425 430

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Leu Glu Glu Lys Asn Ile Asn His Thr Lys Glu Gln Asn Lys Lys Leu 465 470 475 480

Leu Glu Asp Tyr Glu Lys Ser Lys Lys Asp Tyr Glu Glu Leu Leu Glu 485 490 495

Lys Phe Tyr Glu Met Lys Phe Asn Asn Asn Phe Asp Lys Asp Val Val 500 505 510

Asp Lys Ile Phe Ser Ala Arg Tyr Thr Tyr Asn Val Glu Lys Gln Arg 515 520 525

Tyr Asn Asn Lys Phe Ser Ser Ser Asn Asn Ser Val Tyr Asn Val Gln 530 535 540

Lys Leu Lys Lys Ala Leu Ser Tyr Leu Glu Asp Tyr Ser Leu Arg Lys 545 550 555 560

Gly Ile Ser Glu Lys Asp Phe Asn His Tyr Tyr Thr Leu Lys Thr Gly 565 570 575

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Asn Lys Ile Leu Glu Lys Asn Phe Lys Gly Leu Thr His Ser Ala Asn 595 600 605

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Lys Asn Ala Gln Leu Lys Asp Ser Ile His Val Pro Asn Ile Tyr Lys 645 650 655 Pro Gln Asn Lys Pro Glu Pro Tyr Tyr Leu Ile Val Leu Lys Lys Glu 660 665 670

Val Asp Lys Leu Lys Glu Phe Ile Pro Lys Val Lys Asp Met Leu Lys 675 680 685

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Ser Glu Thr Thr Glu Asp Gly Gly His Ser Thr His Thr Leu Ser Gln 705 710 715 720

Ser Gly Glu Thr Glu Val Thr Glu Glu Thr Glu Glu Thr Glu Glu Thr 725 730 735

Val Gly His Thr Thr Thr Val Thr Ile Thr Leu Pro Pro Thr Gln Pro 740 745 750

Ser Pro Pro Lys Glu Val Lys Val Val Glu Asn Ser Ile Glu His Lys 755 760 765

Ser Asn Asp Asn Ser Gln Ala Leu Thr Lys Thr Val Tyr Leu Lys Lys 770 775 780

Leu Asp Glu Phe Leu Thr Lys Ser Tyr Ile Cys His Lys Tyr Ile Leu 785 790 795 800

Val Ser Asn Ser Ser Met Asp Gln Lys Leu Leu Glu Val Tyr Asn Leu 805 810 815

Thr Pro Glu Glu Glu Asn Glu Leu Lys Ser Cys Asp Pro Leu Asp Leu 820 825 830

Leu Phe Asn Ile Gln Asn Asn Ile Pro Ala Met Tyr Ser Leu Tyr Asp 835 840 845

Ser Met Asn Asn Asp Leu Gln His Leu Phe Phe Glu Leu Tyr Gln Lys 850 855 860

Glu Met Ile Tyr Tyr Leu His Lys Leu Lys Glu Glu Asn His Ile Lys 865 870 875 880

Lys Leu Leu Glu Glu Gln Lys Gln Ile Thr Gly Thr Ser 885 890 <210> SEQ ID NO: 3 <211> Comprimento: 808 <212> Tipo: PRT <213> Organismo:Ρ. falciparum

<220> Características:

<221> Nome/Chave:MISC_FEATURE

<223> Outras Informações: MSP IF 38/42

<400> Seqüência:3

Thr Ser Ser Thr Ser Ser Pro Gly Asn Thr Thr Val Asn Thr Ala Gln 1 5 10 15

Ser Ala Thr His Ser Asn Ser Gln Asn Gln Gln Ser Asn Ala Ser Ser 20 25 30

Thr Asn Thr Gln Asn Gly Val Ala Val Ser Ser Gly Pro Ala Val Val 35 40 45

Glu Glu Ser His Asp Pro Leu Thr Val Leu Ser Ile Ser Asn Asp Leu 50 55 60

Lys Gly Ile Val Ser Leu Leu Asn Leu Gly Asn Lys Thr Lys Val Pro 65 70 75 80

Asn Pro Leu Thr Ile Ser Thr Thr Glu Met Glu Lys Phe Tyr Glu Asn 85 90 95

Ile Leu Lys Ile Met Ile Pro Ile Phe Asn Asp Asp Ile Lys Gln Phe 100 105 110

Val Lys Ser Asn Ser Lys Val Ile Thr Gly Leu Thr Glu Thr Gln Lys 115 120 125

Asn Ala Leu Asn Asp Glu Ile Lys Lys Leu Lys Asp Thr Leu Gln Leu 130 135 140

Ser Phe Asp Leu Tyr Asn Lys Tyr Lys Leu Lys Leu Asp Arg Leu Phe 145 150 155 160

Asn Lys Lys Lys Glu Leu Gly Gln Asp Lys Met Gln Ile Lys Lys Leu 165 170 175

Thr Leu Leu Lys Glu Gln Leu Glu Ser Lys Leu Asn Ser Leu Asn Asn 180 185 190 Pro His Asn Val Leu Gln Asn Phe Seir Vcil Phe Phe Asn Lys Lys Lys 195 200 205

Glu Ala Glu Ile Ala Glu Thr Glu Asn Thr Leu Glu Asn Thr Lys Ile 210 215 220

Leu Leu Lys His Tyr Lys Gly Leu Val Lys Tyr Tyr Asn Gly Glu Ser 225 230 235 240

Ser Pro Leu Lys Thr Leu Ser Glu Val Ser Ile Gln Thr Glu Asp Asn 245 250 255

Tyr Ala Asn Leu Glu Lys Phe Arg Val Leu Ser Lys Ile Asp Gly Lys 260 265 270

Leu Asn Asp Asn Leu His Leu Gly Lys Lys Lys Leu Ser Phe Leu Ser 275 280 285

Ser Gly Leu His His Leu Ile Thr Glu Leu Lys Glu Val Ile Lys Asn 290 295 300

Lys Asn Tyr Thr Gly Asn Ser Pro Ser Glu Asn Asn Lys Lys Val Asn 305 310 315 320

Glu Ala Leu Lys Ser Tyr Glu Asn Phe Leu Pro Glu Ala Lys Val Thr 325 330 335

Thr Val Val Thr Pro Pro Gln Pro Asp Val Thr Pro Ser Pro Leu Ser 340 345 350

Val Arg Val Ser Gly Ser Ser Gly Ser Thr Lys Glu Glu Thr Gln Ile 355 360 365

Pro Thr Ser Gly Ser Leu Leu Thr Glu Leu Gln Gln Val Val Gln Leu 370 375 380

Gln Asn Tyr Asp Glu Glu Asp Asp Ser Leu Val Val Leu Pro Ile Phe 385 390 395 400

Gly Glu Ser Glu Asp Asn Asp Glu Tyr Leu Asp Gln Val Val Thr Gly 405 410 415

Glu Ala Ile Ser Val Thr Met Asp Asn Ile Leu Ser Gly Phe Glu Asn 420 425 430 Glu Tyr Asp Val Ile Tyr Leu Lys Pro Leu Ala Gly Val Tyr Arg Ser 435 440 445

Leu Lys Lys Gln Ile Glu Lys Asn Ile Phe Thr Phe Asn Leu Asn Leu 450 455 460

Asn Asp Ile Leu Asn Ser Arg Leu Lys Lys Arg Lys Tyr Phe Leu Asp 465 470 475 480

Val Leu Glu Ser Asp Leu Met Gln Phe Lys His Ile Ser Ser Asn Glu 485 490 495

Tyr Ile Ile Glu Asp Ser Phe Lys Leu Leu Asn Ser Glu Gln Lys Asn 500 505 510

Thr Leu Leu Lys Ser Tyr Lys Tyr Ile Lys Glu Ser Val Glu Asn Asp 515 520 525

Ile Lys Phe Ala Gln Glu Gly Ile Ser Tyr Tyr Glu Lys Val Leu Ala 530 535 540

Lys Tyr Lys Asp Asp Leu Glu Ser Ile Lys Lys Val Ile Lys Glu Glu 545 550 555 560

Lys Glu Phe Pro Ser Ser Pro Pro Thr Thr Pro Pro Ser Pro Ala Lys 565 570 575

Thr Asp Glu Gln Lys Lys Glu Ser Lys Phe Leu Pro Phe Leu Thr Asn 580 585 590

Ile Glu Thr Leu Tyr Asn Asn Leu Val Asn Lys Ile Asp Asp Tyr Leu 595 600 605

45 Ile Asn Leu Lys Ala Lys Ile Asn Asp Cys Asn Val Glu Lys Asp Glu 610 615 620

Ala His Val Lys Ile Thr Lys Leu Ser Asp Leu Lys Ala Ile Asp Asp 625 630 635 640

Lys Ile Asp Leu Phe Lys Asn Pro Tyr Asp Phe Glu Ala Ile Lys Lys 645 650 655

Leu Ile Asn Asp Asp Thr Lys Lys Asp Met Leu Gly Lys Leu Leu Ser 660 665 670 Thr Gly Leu Val Gln Asn Phe Pro Asn Thr Ile Ile Ser Lys Leu Ile 675 680 685

Glu Gly Lys Phe Gln Asp Met Leu Asn Ile Ser Gln His Gln Cys Val 690 695 700

Lys Lys Gln Cys Pro Gln Asn Ser Gly Cys Phe Arg His Leu Asp Glu 705 710 715 720

Arg Glu Glu Cys Lys Cys Leu Leu Asn Tyr Lys Gln Glu Gly Asp Lys 725 730 735

Cys Val Glu Asn Pro Asn Pro Thr Cys Asn Glu Asn Asn Gly Gly Cys 740 745 750

Asp Ala Asp Ala Lys Cys Thr Glu Glu Asp Ser Gly Ser Asn Gly Lys 755 760 765

Lys Xle Thr Cys Glu Cys Thr Lys Piro Asp Ser Tyr Pro Leu Phe Asp 770 775 780

Gly Ile Phe Cys Ser Ser Ser Asn Phe Leu Gly Ile Ser Phe Leu Leu 785 790 795 800

Ile Leu Met Leu Ile Leu Tyr Ser 805

<210> SEQ ID NO: 4 <211> Comprimento: 794 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo:P. falciparum

<220> Características: <221> Nome/Chave:MISC_FEATURE

<223> Outras Informações: MSP-ID 38/42

<400> Seqüência:4

Met Ser Ser Thr Ser Ser Pro Gly Asn Thr Thr Val Asn Thr Ala Gln 15 10 15

Ser Ala Thr His Ser Asn Ser Gln Asn Gln Gln Ser Asn Ala Ser Ser 20 25 30

Thr Asn Thr Gln Asn Gly Val Ala Val Ser Ser Gly Pro Ala Val Val 35 40 45 Glu Glu Ser His Asp Pro Leu Thr Val Leu Ser Ile Ser Asn Asp Leu 50 55 60

Lys Gly Ile Val Ser Leu Leu Asn Leu Gly Asn Lys Thr Lys Val Pro 65 70 75 80

Asn Pro Leu Thr Ile Ser Thr Thr Glu Met Glu Lys Phe Tyr Glu Asn 85 90 95

Ile Leu Lys Asn Asn Asp Thir Tyir Ptie Asn Asp Asp Xle Lys Gln Ptie 100 105 110

Val Lys Ser Asn Ser Lys Val Ile Thr Gly Leu Thr Glu Thr Gln Lys 115 120 125

Asn Ala Leu Asn Asp Glu Ile Lys Lys Leu Lys Asp Thr Leu Gln Leu 130 135 140

Ser Phe Asp Leu Tyr Asn Lys Tyr Lys Leu Lys Leu Asp Arg Leu Phe 145 150 155 160

Asn Lys Lys Lys Glu Leu Gly Gln Asp Lys Met Gln Ile Lys Lys Leu 165 170 175

Thr Leu Leu Lys Glu Gln Leu Glu Ser Lys Leu Asn Ser Leu Asn Asn 180 185 190

Pro His Asn Val Leu Gln Asn Phe Ser Val Phe Phe Asn Lys Lys Lys 195 200 205

Glu Ala Glu Ile Ala Glu Thr Glu Asn Thr Leu Glu Asn Thr Lys Ile 210 215 220

Leu Leu Lys His Tyr Lys Gly Leu Val Lys Tyr Tyr Asn Gly Glu Ser 225 230 235 240

Ser Pro Leu Lys Thr Leu Ser Glu Val Ser Ile Gln Thr Glu Asp Asn 245 250 255

Tyr Ala Asn Leu Glu Lys Phe Arg Val Leu Ser Lys Ile Asp Gly Lys 260 265 270

Leu Asn Asp Asn Leu HiS Leu Gly Lys Lys Lys Leu Ser Phe Leu Ser 275 280 285 Ser Gly Leu His His Leu Ile Thr Glu Leu Lys Glu Val Ile Lys Asn 290 295 300

Lys Asn Tyr Thr Gly Asn Ser Pro Ser Glu Asn Asn Lys Lys Val Asn 305 310 315 320

Glu Ala Leu Lys Ser Tyr Glu Asn Phe Leu Pro Glu Ala Lys Val Thr 325 330 335

Thr Val Val Thr Pro Pro Gln Pro Asp Val Thr Pro Ser Pro Leu Ser 340 345 350

Val Arg Val Ser Gly Ser Ser Gly Ser Thr Lys Glu Glu Thr Gln Ile 355 360 365

Pro Thr Ser Gly Ser Leu Leu Thr Glu Leu Gln Gln Val Val Gln Leu 370 375 380

Gln Asn Tyr Asp Glu Glu Asp Asp Ser Leu Val Val Leu Pro Ile Phe 385 390 395 400

Gly Glu Ser Glu Asp Asn Asp Glu Tyr Leu Asp Gln Val Val Thr Gly 405 410 415

Glu Ala Ile Ser Val Thr Met Asp Asn Ile Leu Ser Gly Phe Glu Asn 420 425 430

Glu Tyr Asp Val Ile Tyr Leu Lys Pro Leu Ala Gly Val Tyr Arg Ser 435 440 445

Leu Lys Lys Gln Ile Glu Lys Asn Ile Phe Thr Phe Asn Leu Asn Leu 450 455 460

Asn Asp Ile Leu Asn Ser Arg Leu Lys Lys Arg Lys Tyr Phe Leu Asp 465 470 475 480

Val Leu Glu Ser Asp Leu Met Gln Phe Lys His Ile Ser Ser Asn Glu 485 490 495

Tyr Ile Ile Glu Asp Ser Phe Lys Leu Leu Asn Ser Glu Gln Lys Asn 500 505 510

Thr Leu Leu Lys Ser Tyr Lys Tyr Ile Lys Glu Ser Val Glu Asn Asp 515 520 525 Ile Lys Phe Ala Gln Glu Gly Ile Ser Tyr Tyr Glu Lys Val Leu Ala 530 535 540

Lys Tyr Lys Asp Asp Leu Glu Ser Ile Lys Lys Val Ile Lys Glu Glu 545 550 555 560

Lys Glu Lys Phe Pro Ser Ser Pro Pro Thr Thr Pro Pro Ser Pro Ala 565 570 575

Lys Thr Asp Glu Gln Lys Lys Glu Ser Lys Phe Leu Pro Phe Leu Thr 580 585 590

Asn Ile Glu Thr Leu Tyr Asn Asn Leu Val Asn Lys Ile Asp Asp Tyr 595 600 605

Leu Ile Asn Leu Lys Ala Lys Ile Asn Asp Cys Asn Val Glu Lys Asp 610 615 620

Glu Ala His Val Lys Ile Thr Lys Leu Ser Asp Leu Lys Ala Ile Asp 625 630 635 640

Asp Lys Ile Asp Leu Phe Lys Asn Pro Tyr Asp Phe Glu Ala Ile Lys 645 650 655

Lys Leu Ile Asn Asp Asp Thr Lys Lys Asp Met Leu Gly Lys Leu Leu 660 665 670

Ser Thr Gly Leu Val Gln Asn Phe Pro Asn Thr Ile Ile Ser Lys Leu 675 680 685

Ile Glu Gly Lys Phe Gln Asp Met Leu Asn Ile Ser Gln His Gln Cys 690 695 700

Val Lys Lys Gln Cys Pro Glu Asn Ser Gly Cys Phe Arg His Leu Asp 705 710 715 720

Glu Arg Glu Glu Cys Lys Cys Leu Leu Asn Tyr Lys Gln Glu Gly Asp 725 730 735

Lys Cys Val Glu Asn Pro Asn Pro Thr Cys Asn Glu Asn Asn Gly Gly 740 745 750

Cys Asp Ala Asp Ala Thr Cys Thr Glu Glu Asp Ser Gly Ser Ser Arg 755 760 765 Lys Lys Ile Thr Cys Glu Cys Thr Lys Pro Asp Ser Tyr Pro Leu Phe 770 775 780

Asp Gly Ile Phe Cys Ser Ser Ser Asn Val 785 790

Claims

1. Uma composição caracterizada por compreender: (a) um fragmento p83/30 purificado da proteína gpl90/MSP-1 de Plasmodium sem seqüências heterólogas, e (b) um fragmento p38/42 purificado da proteína gpl90/MSP-1 de Plasmodium sem seqüências heterólogas.

2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o componente (a) ser um fragmento p83/3 0 de uma cepa F de Plasmodium.

3. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada por o componente (b) ser um fragmento p38/42 de uma cepa F de Plasmodium.

4. Composição de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada por o componente (b) ser um fragmento p38/42 de uma cepa heteróloga de Plasmodium, por exemplo, uma cepa D.

5. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, caracterizada por os componentes (a) e (b) estarem presentes em quantidades aproximadamente equimolares.

6. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5, caracterizada por os componentes (a) e (b) serem polipeptídeos recombinantes.

7. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, caracterizada por ter uma pureza de pelo menos -95%, preferivelmente de pelo menos 97,5%.

8. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, caracterizada por ter o conteúdo dos produtos de degradação de menos de 3 0%, preferivelmente com menos de -20%.

9. Uma preparação farmacêutica caracterizada por compreender a composição reivindicada de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8 e veículos farmaceuticamente aceitáveis, diluentes e/ou adjuvantes.

10. Preparação farmacêutica de acordo com a reivindicação -9, caracterizada por ser uma vacina.

11. Um processo para produção da composição reivindicada de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, caracterizado por compreender as etapas: (a) expressar o fragmento p83/30 da proteína gpl90/MSP-l de Plasmodium sem seqüências heterólogas em uma célula hospedeira, (b) expressar o fragmento p38/42 da proteína gpl90/MSP-l de Plasmodium sem seqüências heterólogas em uma célula hospedeira, (c) recuperar o fragmento p83/30 e o fragmento p38/42 de células hospedeiras, (d) combinar opcionalmente os fragmentos p83/3 0 e p38/42, e (e) purificar os fragmentos combinados.

12. Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por os fragmentos p83/30 e p38/42 serem expressos na mesma célula hospedeira.

13. Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por os fragmentos p83/30 e p38/42 serem expressos em diferentes primeira e segunda células hospedeiras.

14. Um método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 11 a 13, caracterizado por a célula hospedeira ser uma célula bacteriana, preferivelmente uma célula bacteriana gram-negativa, mais preferivelmente uma célula de E. coli.

15. Método de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por a célula hospedeira ser uma célula W3110Z2 de E. coli.

16. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 e 13 a 15, caracterizado por os fragmentos serem recuperados separadamente como corpos de inclusão.

17. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 e 13 a 16, caracterizado por os corpos de inclusão serem solubilizados separadamente.

18. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 e 13 a 17, caracterizado por os fragmentos solubilizados serem duplicados separadamente.

19. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 11 a 18, caracterizado por os fragmentos serem combinados em quantidades aproximadamente equimolares.

20. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 11 a 19, caracterizado por os fragmentos combinados serem purificados por cromatografia de exclusão de tamanho.

21. Uma composição caracterizada por compreender um fragmento p83/30 purificado da proteína gpl90/MSP-l de uma cepa F de Plasmodium.

22. Composição de acordo com a reivindicação 21, caracterizada por o fragmento não conter seqüências heterólogas.

23. Uma preparação farmacêutica caracterizada por compreender a composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 21 ou 22 e veículos farmaceuticamente aceitáveis, diluentes e/ou adjuvantes.

24. Preparação de acordo com a reivindicação 23, caracterizada por ser uma vacina.