BRPI0621555A2 - isolador cirúrgico - Google Patents

Abstract

ISOLADOR CIRúRGICO. A presente invenção refere-se a um isolador cirúrgico e um berço para uso em um método cirúrgico que envolve a remoção de ovos prematuros a partir de aves de modo a gerar ovos livres de germes e aves. Em particular, o isolador cirúrgico é usado para a geração de aves com um nível especificado livre de germes.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ISOLADOR CIRÚRGICO".

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a um isolador cirúrgico e um ber- ço, adequado para uso em um método cirúrgico para a remoção de ovos prematuros de aves de modo a gerar ovos e aves livres de germes. Antecedentes da Invenção

Os primeiros isoladores cirúrgicos foram desenvolvidos para uso em gnotobiótica onde animais de laboratório livres de germes foram obtidos ao se realizar o parto dos referidos animais por intervenção cesariana dire- tamente em um ambiente asséptico.

O pedido de patente européia N9 01650109 está direcionado a um método de criação de um pássaro em um estado livre de contaminação especificado. O método do presente pedido compreende o alojamento de um pássaro como um pássaro progenitor, cirurgicamente remover um ovo e seu invólucro a partir do pássaro progenitor antes da transferência do ovo para a cloaca no pássaro progenitor, incubar o ovo e chocar o ovo para produzir a postura do pássaro. O pedido se refere também à produção de ovos de aves em um estado específico livre de contaminação.

A presente invenção se refere a um isolador cirúrgico e berço para uso em procedimentos estéreis para a obtenção de ovos e aves em um estado específico livre de germes.

No presente relatório descritivo, o termo "livre de contamina- ção/livre de germes" é usado muito amplamente e se refere a muitos pató- genos e infecções que podem ser portadas por aves, em particular aves do- mésticas tais como galinhas e perus que são usados amplamente para pro- duzir um bando de aves para criação para produzir ovos férteis para produ- ção comercial e para produzir ovos e carne para consumo humano. Ade- mais, os referidos ovos e aves são usados na fabricação de uma grande va- riedade de substâncias biológicas incluindo vacinas, anticorpos, anticorpos monoclonais, fibroblastos e proteínas, tanto para uso terapêutico como para profilático em pessoas e animais. Os mesmos são ainda usados extensa mente para os testes de diagnóstico e a produção de ovos e aves transgêni- cos. Diversos dos referidos usos necessitam de ovos e/ou aves produzidos a partir dos mesmos que sejam livres seja de todos ou de qualquer contami- nante específico tais como infecções, incluindo uma variedade de espécies de parasitas, bactérias, micoplasma, vírus, retrovírus, príons, e fragmentos de DNA e RNA. Algumas vezes, vírus podem ser pequenos vírus que inclu- em picorna e parvovírus. Algumas das referidas bactérias a partir das quais os ovos são com freqüência contaminados incluem Clostridia e Enterobacte- ria. Há diversos organismos não patogênicos que devem ser controlados. De modo similar, alguns dos microorganismos que incluem parasitas, bactérias aeróbicas e anaeróbicas, espécies comensais e espécies associadas com o intestino são indesejáveis. De modo similar, micoplasma, vírus, incluindo retrovírus, príons, fungos, leveduras e mofos são também indesejáveis.

Portanto, o termo "livre de contaminação especificada" ou "esta- do livre de germes" pode incluir algum ou todos os referidos e é mais amplo do que apenas livre de patógenos específicos. Por exemplo, livre de patóge- nos específicos convencionais (SPF) são os livres não especificados a partir de algum vírus e de fato pode estar contaminado com bactéria. Assim, para determinados usos, os referidos podem ser insuficientes. O uso final preten- dido dos ovos e das aves determinará os contaminantes que os ovos ou as aves devem estar livres. Ovos livres de germes e alguns ovos SPF são deri- vados ao se tratar os ovos postos naturalmente com produtos químicos, in- cluindo desinfetantes e antibióticos, e colocar os mesmos em isoladores. Os referidos ovos postos naturalmente são obtidos a partir de aves progenitoras de estoque selecionado. Embora os referidos métodos tenham obtido suces- so relativo na produção de ovos SPF, os mesmos não foram verdadeiramen- te bem-sucedidos na produção de ovos livres de contaminantes. Entretanto, os produtos químicos não são capazes de eliminar a contaminação, por e- xemplo, a partir de bactérias que entram nos poros das cascas do ovo ime- diatamente após a postura e antes da desinfecção. A contaminação dos o- vos, seja os SPF, livres de germes ou gnotobióticos, resulta na perda de a- nuência às especificações e, em muitos casos, na perda do valor comercial e utilidade.

Determinação da Presente Invenção

De acordo com um primeiro aspecto da presente invenção, é proporcionado um isolador cirúrgico estéril e berço para uma ave que pro- porciona uma atmosfera livre de contaminantes na qual um procedimento cirúrgico é realizado compreendendo:

um isolador produzido de paredes com pelo menos dois orifícios dotados de luvas, um piso de isolador sólido que proporciona uma superfície de operação e um orifício cirúrgico dentro do piso de isolador sólido;

um berço para receber e posicionar a ave durante o procedi- mento cirúrgico estéril dotado de uma posição aberta e fechada;

onde o berço permite o posicionamento estável da superfície de operação da ave com relação à superfície de operação do isolador de modo que a superfície de operação da ave pode ser operada através do orifício cirúrgico; e

onde o berço na posição fechada proporciona uma vedação a ar completa e estável mantida entre a ave no berço e o orifício cirúrgico.

De acordo com um segundo aspecto da presente invenção, é proporcionado um método de usar o isolador cirúrgico e um berço de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes onde

o orifício cirúrgico é selado com uma primeira camada de filme adesivo estéril transparente;

a superfície de operação da ave é limpa e esterilizada e a ave é disposta no berço na posição aberta;

uma tira fina de filme adesivo transparente é disposta na super- fície estéril da ave;

uma segunda camada de filme adesivo transparente estéril é disposta em cima da tira estreita de filme adesivo; e

o berço é movido para a posição fechada para garantir o posi- cionamento estável da superfície de operação da ave, preferivelmente o ab- dômen com relação à superfície de operação do isolador cirúrgico;

onde a primeira camada adesiva está em contato com a segun- da camada adesiva e uma vedação a ar completa é criada entre a ave e o isolador cirúrgico.

Descrição Detalhada da Invenção

Em termos gerais, a presente invenção proporciona um isolador cirúrgico e um berço e meios para usar o mesmo para proporcionar uma at- mosfera livre de contaminação na qual um procedimento cirúrgico pode ser realizado. O procedimento cirúrgico envolve a remoção cirúrgica de um ovo prematuro em sua casca a partir de uma ave.

A cloaca é a principal área de contaminação dentro da ave. A cloaca é uma câmara ligada tanto ao sistema digestivo como ao sistema re- produtor da ave, portanto um ovo e fezes podem estar presentes na cloaca ao mesmo tempo. Entretanto, na medida em que a casca do ovo é porosa, contaminação externa quando o ovo passa a partir do sistema reprodutor através da cloaca é o problema principal. Métodos específicos são necessá- rios para remover o mesmo a partir da ave progenitora e ainda manter a es- terilidade e então, em virtude de sua prematuridade, métodos específicos adicionais são necessários para incubar e criar o mesmo com sucesso e consistência.

Especificamente, a presente invenção está direcionada a um i- solador cirúrgico e a um berço para uso em procedimentos cirúrgicos onde um ovo prematuro é removido em sua casca a partir de uma ave progenitora antes de transferir o ovo para a cloaca. Na medida em que a presente inven- ção está direcionada à obtenção de um ovo livre de germes, é imperativo que o isolador cirúrgico e o berço proporcionem um ambiente estéril para que o procedimento seja realizado.

De preferência, o isolador cirúrgico deve incluir uma atmosfera gasosa estéril.

De acordo com uma modalidade da presente invenção, o isola- dor adequado para a manipulação cirúrgica é produzido de paredes, que podem ser flexíveis, com pelo menos dois orifícios dotados de luvas para a manipulação cirúrgica, um orifício de entrada separado e um piso de isolador sólido elevado acima da terra. No piso do isolador na frente dos orifícios do- tados de luvas, há um orifício cirúrgico especial. Preferivelmente, o orifício cirúrgico pode ser de aproximadamente 200 mm x 300 mm.

As aves são apresentadas e mantidas para cirurgia usando um berço de aço inoxidável ajustável que é pivotavelmente fixado ou articulado ao lado de baixo do piso isolador abaixo do orifício cirúrgico.

O isolador cirúrgico e equipamento associado podem ser esteri- lizados usando uma combinação de métodos incluindo calor, umidade (va- por), radiação e produtos químicos tais como peróxidos e/ou iodo orgânico com álcool. Os métodos de esterilização que não prejudicam a viabilidade do embrião devem ser usados. Ademais, para se aumentar a isenção de bacté- rias e esporos, todo o equipamento cirúrgico deve ser irradiado com raios gama.

De acordo com uma modalidade preferida da presente inven- ção, isoladores cirúrgicos devem ser rigorosamente limpos, secos e pulveri- zados com álcool (tempo de exposição de pelo menos 10 minutos), secos, fumigados com 2% - 5% de ácido peracético volume em volume (tempo de exposição de pelo menos 20 minutos).

A atmosfera do isolador cirúrgico pode ser purgada com ar fil- trado e estéril para evitar a toxicidade do embrião. O equipamento elétrico e outros não adequados para vapor, irradiação ou esterilização por ácido pe- racético podem ser esterilizados com o uso de sistemas de esterilização por oxido de etileno comercial aplicados uma vez, ou preferivelmente duas ve- zes a cada 24 horas.

De acordo com uma outra modalidade da presente invenção, plástico cirúrgico adesivo, transparente e estéril ou filmes adesivos da pre- sente invenção, podem ser usados para alcançar uma vedação estável a ar entre a superfície esterilizada da ave e o isolador.

De acordo com uma modalidade preferida da presente inven- ção, o orifício cirúrgico é preferivelmente vedado com um plástico transpa- rente ou filme adesivo para permitir a formação de uma vedação a ar com- pleta e estável entre a superfície esterilizada da ave e a abertura do isolador cirúrgico. De acordo com a modalidade mais preferida, o orifício cirúrgico é vedado com uma primeira camada de filme adesivo transparente e estéril, a ave é disposta no berço e a superfície da ave é esterilizada, uma tira es- treita de filme adesivo transparente é disposta na superfície estéril da ave, uma segunda camada, em geral mais larga, de filme adesivo transparente e estéril é disposta em cima da tira estreita de filme adesivo, e o berço é pivo- tado na posição fechada para garantir o posicionamento estável do abdômen das aves com relação à superfície de cirurgia do isolador cirúrgico; onde a primeira camada de adesivo está em contato com a segunda camada de adesivo e uma vedação a ar completa é criada entre a ave e o isolador cirúr- gico.

Os filmes adesivos devem ser aplicados à pele da ave após a completa remoção das penas, meticulosa preparação e esterilização da pele e remoção dos ceratócitos superficiais e sebo (usando detergente, álcool e iodo orgânico).

A manutenção da integridade do filme e a facilidade da aborda- gem cirúrgica é aumentada pelo uso de um berço, que permite o posiciona- mento estável do abdômen da ave com relação à superfície cirúrgica do iso- lador cirúrgico.

Ainda de acordo com uma modalidade adicional da presente in- venção, a confirmação da integridade da vedação pode ser implementada usando materiais de teste de fluido tal como gás de hélio estéril liberado as- septicaménte dentro do isolador cirúrgico e o vazamento detectado externa- mente pelo uso de um detector de gás de hélio. Alternativamente, líquidos indicadores estéreis (tais como solução de iodo) podem ser usados e detec- tados por inspeção visual.

Preferivelmente, a remoção cirúrgica do ovo é completada mais rapidamente, em cerca de menos de 30 minutos a partir do tempo da euta- násia, para se evitar danos à viabilidade do embrião. O uso prolongado de anestésicos ou retardo excessivo entre a eutanásia da ave progenitora e a remoção do ovo irá afetar adversamente a viabilidade do embrião.

De acordo ainda com uma outra modalidade da presente inven- ção, o procedimento cirúrgico para a remoção do ovo prematuro a partir do útero da ave inclui a incisão através do filme adesivo, incisão da pele da ave, seccionar através do tecido subcutâneo, músculo e camadas peritoneais da ave. O ovo deve ser removido a partir da ave seja no útero intacto selado (por exemplo, retirado com pinças) ou diretamente por incisão no útero. To- do contato direto entre as formas fluidas de soluções de esterilização deve ser evitado para não se arriscar a danos à viabilidade do embrião. Alternativamente, a remoção cirúrgica compreende: realizar uma incisão laparotômica e amarrar os ovidutos da ave em ambas as extremidades com suturas;

seccionar o oviduto distai em cada sutura;

remover o ovo encerrado no oviduto;

esterilizar o oviduto;

remover o ovo; e

esterilizar o ovo.

O procedimento cirúrgico usado deve garantir que as tripas da ave não estejam contaminadas com material de dejetos e que o ovo não se- ja danificado. Técnicas assépticas devem ser usadas através do procedi- mento.

Preferivelmente, a ave é sacrificada por eutanásia ou extermínio antes da remoção do ovo em sua casca. Alternativamente, a ave pode ser eutanasiada. As aves progenitoras fêmeas podem ou estar vivas ou recen- temente exterminadas. As aves vivas podem, de acordo com a ética consis- tente, e considerações legais e de bem-estar animal, estar completamente consciente, sedada ou anestesiada. Os ovos e a ova podem ou estar fertili- zados ou não fertilizados conscientes, sedados ou anestesiados.

De acordo com uma modalidade preferida da presente inven- ção, o berço compreende duas barras substancialmente paralelas que defi- nem um espaço para receber uma ave. Em uso, o berço é aberto e a ave é disposta no berço. Preferivelmente, as barras são substancialmente idênti- cas e formam um ângulo agudo sob o piso isolador. A ave é disposta no ber- ço primeiro com a cabeça, de modo que a superfície cirúrgica da ave (o úte- ro e o abdômen) esteja paralela ao piso isolador. A extremidade do rabo da ave se encontra nas barras do berço de modo que o útero e o abdômen são corretamente posicionados. O mecanismo de liberação do berço é então fechado e o lado de baixo da ave está então paralelo ao piso isolador e o orifício cirúrgico. O procedimento cirúrgico para a remoção do ovo prematuro pode então ser implementado. Os orifícios dotados de luva nas paredes do isolador permitem o acesso ao lado de baixo e à superfície cirúrgica da ave.

O isolador cirúrgico em geral compreende uma borda circun- dando a superfície de área de trabalho dotada de orifícios dotados de luva, áreas de visualização e um painel de acesso na forma de um orifício cirúrgi- co. Há também um painel de acesso adicional que permite a transferência asséptica do ovo retirado cirurgicamente a partir do isolador cirúrgico para a unidade de transferência para a transferência subseqüente a um isolador de incubação.

Preferivelmente, a remoção do ovo se dá no momento antes e o mais próximo possível do tempo de transferência quando o ovo seria transfe- rido naturalmente da cloaca na ave progenitora.

O ovo removido cirurgicamente pode então ser disposto em um recipiente estéril e vedado. O recipiente deve permitir que o ovo resfrie e seja de configuração e tamanho adequados para armazenamento de ovos. O recipiente estéril é um com um volume aproximadamente 10 vezes aquele do ovo, com o ovo suportado e protegido por uma grade de plástico.

De acordo com uma modalidade adicional da presente inven- ção, a esterilidade de todo o procedimento cirúrgico pode ser confirmada. Isto inclui a coleta e a avaliação das amostras tal como por chumaços de algodão microbiológicos (obtidos como chumaços de algodão de umidade e imediatamente dispostos em um meio de transporte) a partir do ovo e do trato reprodutor (ou isolamento de microorganismos usando meio de cultura adequado para bactéria, micoplasma, vírus e fungos incluindo meio enrique- cido com caldo de cultura líquido, em ambientes aeróbicos, anaeróbicos e microaerofílicos.

Uma vez que o ovo prematuro nascido cirurgicamente estéril é obtido, o ovo pode então ser incubado em ambiente estéril e incubado e cri- ado para produzir uma ave de postura.

De acordo com a presente invenção, um ovo livre ao máximo de microorganismos deve preferivelmente ser enviado assepticamente a partir das fêmeas progenitoras antes da entrada dos ovos na cloaca (a não ser que a mesma seja também livre de germes ou gnotobiótica) e o ciclo de vida deve ser completo em isoladores estéreis. O ciclo de vida pode ser completo fora de isoladores quando ovos SPF e aves são produzidos.

Os organismos infecciosos que podem ser controlados pela pre- sente invenção incluem os organismos que podem ser patogênicos ou não patogênicos às espécies relevantes. Os referidos incluem espécies de aves (tipicamente, galinhas, aves selvagens e perus), seres humanos e outros mamíferos (tipicamente cães, gatos, cavalos, gado, porcos, ovelhas, cabras, ratos e camundongos). Para o objetivo da presente invenção, os microorga- nismos incluem parasitas, bactérias (incluindo espécies anaeróbica e aeróbi- ca, espécies comensais e espécies associadas aos intestinos), micoplasma, vírus (incluindo retrovírus), príons, fungos, leveduras, mofos e fragmentos de DNAeRNA.

A ave progenitora é a ave a partir da qual o ovo enviado cirurgi- camente é obtido. O ovo enviado cirurgicamente é então incubado e criado para formar uma ave de postura. O ovo enviado cirurgicamente e ave de postura subseqüente são livres de germe.

Em uma modalidade da presente invenção a ave progenitora é escolhida a partir de um bando de aves similares todos criadas sob as mes- mas condições.

Em outra modalidade da invenção, a ave progenitora é chocada naturalmente em um ambiente estéril a partir de um bando de aves de status livre de contaminação similar existente.

Em outra modalidade da presente invenção, a ave progenitora é uma do bando de aves as quais se encontram e outro estado livre de conta- minação tendo sido produzidas por métodos de seleção adequada e de cria- ção natural sob condições controladas e o método é usado para produzir aves em diferentes níveis livres de contaminação.

Preferivelmente uma ave de postura forma parte de um bando e após as aves de postura serem incubadas, uma amostra das aves de postu- ra é removida e testada quanto a contaminantes específicos para proporcio- nar uma medida do nível livre de contaminação do bando. De modo ideal, quando um nível livre de contaminação específico não é alcançado na ave de postura, a ave de postura é usada como uma ave progenitora no método.

Preferivelmente a ave progenitora é escolhida como uma ave de um dia de idade.

Em uma modalidade, a ave de postura é removida a partir do ambiente estéril para por ovos os quais por sua vez, são incubados para produzir aves de postura adicionais.

Em algumas modalidades, a ave de postura é removida do am- biente estéril e alimentada com alimento contendo flora intestinal normal. As aves produzidas pelo referido método, com flora intestinal normal, preferi- velmente sem patógenos de aves e zoonóticos, são adequadas para o con- sumo ou uso na indústria alimentícia.

Tipicamente, a ave é uma galinha.

Preferivelmente quando a ave é criada a partir de uma ave de postura dotada de um nível especificado livre de contaminantes e não é uma ave de postura, a ave assim incubada é criada em um ambiente estéril para fertilização subseqüente de aves de postura do mesmo nível ou de nível in- ferior livre de contaminantes.

De acordo com um aspecto adicional da presente invenção, a invenção adicionalmente proporciona um método de proporcionar um ovo de um nível especificado livre de contaminação em um ambiente estéril:

alojar uma ave de postura dotada do mesmo nível ou de um ní- vel melhor livre de contaminação de acordo com o proporcionado pelo méto- do da presente invenção;

usar a ave de postura para por os ovos; e

remover os ovos para outro ambiente estéril.

A ave de postura pode então ser usada para pôr um ovo, que pode ser o produto final em si, ou o qual pode incubar em uma ave que pode ou ser a partir de um bando de aves de nível livre de germes ou se não for uma ave de postura, pode ser usada para fertilizar a ave de postura para alcançar um estado livre de contaminação.

Se ovos férteis forem usados para produzir prole ou aves envia- das, então os ovos podem ser incubados, criados e mantidos e procriados seja em sistemas de acasalamento convencionais, sistemas SPF ou em iso- ladores para controlar a entrada de microorganismos.

Será observado que em determinadas circunstâncias, quando se obtém aves selecionadas como as aves progenitoras, as aves de postura produzidas podem de fato não ser suficientemente livres de contaminantes para produzir aves de postura de qualidade adequada. Pode ser necessário se realizar algumas etapas mais uma vez usando ovos produzidos a partir das referidas aves de postura e artificialmente remover os ovos a partir das referidas aves de postura para proporcionar aves de postura adicionais que esperançosamente serão livres de contaminantes.

De fato, a esterilidade pode ser adicionalmente aprimorada ao se alimentar as aves de postura, em ambiente estéril, com alimento que con- tém flora intestinal normal, ou alimento estéril. Preferivelmente, as aves são alimentadas em um ambiente estéril com alimento e água estéril. Alternati- vamente, a flora intestinal normal pode ser administrada ao pinto pré- incubação ou oralmente à ave em qualquer estágio após a incubação. A flo- ra intestinal normal pode ser uma sem patógenos. Será observado que quando as aves são incubadas não sendo aves de postura, as mesmas se- rão retidas para fertilização subseqüente das aves de postura. Deste modo, todo o bando pode ser estéril.

Será possível, na presente invenção, se produzir simplesmente os ovos para uso subseqüente. Quando é necessário que os ovos sejam livres de germes, a primeira coisa a se fazer é se incubar os ovos ao se usar as aves progenitoras desejadas. Então, quando as aves progenitoras foram testadas para contaminantes específicos para proporcionar uma medida de nível livre de germes, alojar a referida ave de postura em outro ambiente estéril e usar a referida ave de postura para pôr ovos que terão o estado livre de germes.

Uma outra modalidade da presente invenção proporciona um método para incubar e chocar de ovos enviados cirurgicamente, e então crescer e procriar a partir de aves subseqüentes.

Os ovos enviados cirurgicamente são prematuros em seu de- senvolvimento, por exemplo, a gastrulação pode ser retardada. Ainda, os ovos podem ser desprovidos de determinadas características de um ovo nascido naturalmente a termo, por exemplo, pode haver cutícula reduzida na casca e a formação de poros na casca pode ser prejudicada. A casca, seus poros e a cutícula modulam a troca de gás respiratório e a hidratação do embrião em desenvolvimento. Portanto, as práticas-padrão de incubação para os ovos postos normalmente podem não ser apropriadas para a viabili- dade ideal e pode necessitar de modificação para se alcançar uma incuba- ção altamente consistente de aves saudáveis a partir de ovos enviados ci- rurgicamente. As condições específicas necessárias podem variar, por e- xemplo, com as espécies e o estágio de desenvolvimento quando removido a partir da ave progenitora. O desenvolvimento e a procriação de aves envi- adas em um estado saudável e produtivo e ainda manter um estado livre de contaminantes especificado ou ambiente estéril necessita de ajustes do teor de nutrientes da dieta, em especial de nutrientes orgânicos tais como vitami- nas, para compensar a perda que ocorre durante a esterilização das dietas e da ausência de fornecimento de microorganismos comensais.

Preferivelmente, os ovos devem ser permitidos esfriar após a remoção a partir da ave progenitora. Os mesmos podem ser armazenados sem perturbação, no caso de galinhas, por pelo menos 24 horas e não mais que 72 horas. As condições de armazenamento podem ser dotadas de ar filtrado HEPA e, para os ovos de galinha a uma temperatura entre 15°C e 23°C, com uma umidade relativa de 50% - 75% e ser livre de vibração e mo- vimentos bruscos.

De acordo com uma modalidade adicional da presente inven- ção, para as primeiras 24 horas, as condições-padrão de incubação para as espécies de ovos podem ser usadas. Após cada ovo pode ser cuidadosa- mente monitorado quanto a perda de peso, temperatura de incubação, umi- dade relativa e, se apropriado, troca gasosa respiratória em especial de dió- xido de carbono e concentrações de oxigênio no ar. As condições de incu- bação e de chocar podem ser ajustadas de acordo com a presente invenção. De modo ideal, para o ovo prematuro enviado cirurgicamente de 55 g uma perda de peso-alvo de aproximadamente 0,4 g/dia é desejável. As tempera- turas de incubação de aproximadamente 37,2°C são preferíveis inicialmente no dia 0 até o dia 18 de incubação e então temperaturas de aproximadamen- te 36,5°C são desejáveis até a incubação. A umidade relativa pode inicial- mente ser ajustada em aproximadamente 40%, mas deve ser ajustada de acordo com o coeficiente de ventilação diário e a perda de peso diária do ovo até o dia 18 quando a umidade relativa deve ser aumentada para apro- ximadamente 65%.

Um ambiente adequado para pintos incubados, desenvolvimen- to, crescimento e reprodução de aves ativas, é o isolador de paredes rígidas, com ar filtrado a HEPA. O ar é mantido em pressão positiva e trocado em intervalos freqüentes (por exemplo, 10 vezes / hora para aves adultas. Le- vando-se em consideração a capacidade cúbica do isolador e a densidade do estoque), a área do piso de 0,2 m2 - 0,4 m2 / ave, luvas nos orifícios de entrada protegem contra danos as aves, e a temperatura do ar e o controle da luz para proporcionar condições similares àquelas para as aves conven- cionais da mesma espécie e estágio de ciclo de vida.

O desenvolvimento e a procriação em um estado saudável e produtivo e ainda manter em um ambiente estéril e livre de contaminação especificado necessita de dietas especializadas para compensar a falta de determinados nutrientes normalmente produzidos, por exemplo, pelos con- taminantes encontrados nos intestinos ou na pele da ave em um ambiente convencional.

Será entendido que a presente invenção se aplica a todas as espécies de aves e répteis, incluindo, mas não são limitados a, galinhas, perus, codornas, patos, gansos, porcos da guiné, faisão, perdiz, papagaios e tetrazes.

A presente invenção será mais claramente entendida a partir da descrição detalhada a seguir das figuras e Exemplos.

A figura 1 mostra o isolador cirúrgico e berço de acordo com a presente invenção.

A figura 2 é uma representação diagramática do método da pre- sente invenção usando o isolador cirúrgico e berço da figura 1.

A figura 1 mostra um isolador cirúrgico estéril e um berço para uma ave de acordo com a presente invenção. O referido isolador proporcio- na uma atmosfera livre de contaminantes na qual um procedimento cirúrgico ocorre. O isolador (1) compreende um isolador produzido a partir de paredes flexíveis com pelo menos dois orifícios dotados de luva (não mostrados), um piso isolador sólido (2) que proporciona uma superfície cirúrgica e um orifício cirúrgico (3) dentro do piso isolador sólido. O orifício cirúrgico proporciona uma abertura através da qual uma pessoa que realiza a cirurgia pode ter acesso à superfície cirúrgica da ave. Fixado ao piso isolador está um berço (4) para receber e posicionar a ave durante o procedimento cirúrgico. O ber- ço é pivotavelmente fixado ou articulado ao lado de baixo do piso isolador abaixo do orifício cirúrgico, como mostrado pela articulação (5). O orifício cirúrgico é adaptado para receber a ave no berço e para proporcionar uma vedação a ar completa e estável para ser mantida entre a ave no berço e o orifício cirúrgico durante a cirurgia. A abertura do orifício cirúrgico é preferi- velmente coberta com um filme adesivo estéril (mostrado em pontilhado). O referido filme adesivo estéril proporciona a vedação estável a ar. O referido berço proporciona também a vantagem de que o mesmo permite o posicio- namento estável do abdômen das aves com relação à superfície cirúrgica do isolador cirúrgico.

A figura 2 mostra uma representação diagramática do método de uso do berço de acordo com a presente invenção.

A figura 2a mostra o isolador cirúrgico (1) não em uso e na posi- ção fechada que compreende o piso isolador (2), orifício cirúrgico e filme adesivo (3), berço (4) e articulação (5). O berço está na posição fechada. O orifício cirúrgico (3) é selado com uma primeira camada de filme adesivo transparente e estéril.

A figura 2b mostra o isolador cirúrgico em uma posição aberta de modo que a galinha pode ser disposta no berço. A galinha é disposta primeiro com a cabeça no berço e a superfície cirúrgica da ave é limpa com a retirada das penas e esterilizada. A vedação a ar entre o isolador de ave pode ser testada antes e após a cirurgia usando materiais de teste de fluido estéril que são liberados para dentro do isolador cirúrgico para permitir que vazamentos externos sejam detectados.

A figura 2c mostra um segundo filme adesivo estéril disposto no lado de baixo esterilizado da galinha. Preferivelmente, uma tira estreita de filme adesivo transparente (não mostrada) é disposta em uma superfície es- téril da ave. Uma segunda camada de filme adesivo transparente e estéril é disposta em cima da tira estreita do filme adesivo. Neste estágio, o berço é pivotado para a posição fechada para garantir o posicionamento estável do abdômen das aves com relação à superfície cirúrgica para facilitar a manipu- lação cirúrgica, as pernas devem ser mantidas na posição completamente estendida e a cloaca selada.

A figura 2d mostra o berço na posição fechada de modo que o filme adesivo transparente e estéril do orifício cirúrgico e o filme adesivo na ave entrem em contato para formar uma vedação a ar estável dentro do iso- lador cirúrgico e proporcionar uma superfície estéril para ser operada. Quan- do a primeira camada adesiva no orifício está em contato com a segunda camada de adesivo na ave, uma vedação a ar completa é criada entre a ave e o isolador cirúrgico.

A vedação a ar entre a ave e o isolador cirúrgico pode ser testa- da antes e após a cirurgia usando materiais de fluido estéreis que são libe- rados dentro do isolador cirúrgico para permitir que vazamentos sejam de- tectados.

Exemplo 1

Método

Cinqüenta galinhas fêmeas adultas e cinco machos adultos de status SPF conhecido foram mantidos em dieta selecionada e permitidos procriar naturalmente. A cronometragem da postura do ovo (oviposição) foi registrada individualmente para cada fêmea por um período de duas sema- nas. O tempo médio do dia (tempo, L) quando um ovo foi posto foi calculado para cada fêmea. O tempo do dia para L-3h foi calculado e o período a partir de L.3 para L foi monitorado como o intervalo de derivação. O intervalo foi o tempo no qual a Iaparatomia cirúrgica asséptica foi realizada para a remoção dos ovos mais desenvolvidos em cada ave.

Para o procedimento, as aves foram eutanasiadas por desloca- mento cervical e logo em seguida preparadas. As aves foram submergidas em uma solução de desinfecção por 5 minutos. As penas foram removidas a partir do tórax ventral e o abdômen e a pele exposta foram esterilizados u- sando 50% de uma solução de iodo em álcool aquecida a 37°C. Cada ave foi então disposta sobre um isolador cirúrgico especialmente adaptado e es- terilizado com uma solução a 5% de ácido peracético e contendo instrumen- tos estéreis e um frasco de 500 mL contendo iodo em álcool. A ave foi co- berta com um lençol estéril e um orifício de entrada estéril do isolador foi en- tão disposto sobre o lençol. A incisão de Iaparatomia foi realizada e o oviduto (tipicamente o útero) foi amarrado em ambos os lados do ovo usando um material de sutura. O oviduto foi então seccionado distalmente em cada uma das suturas a partir do ovo e o oviduto contendo o ovo foi removido a partir do abdômen da fêmea. O ovo circunscrito pelo útero foi então disposto na solução de iodo/álcool por cinco minutos após os quais o ovo circunscrito pelo útero foi transferido por meio do orifício de entrada a partir do isolador cirúrgico para o isolador de recebimento. No isolador de recebimento, o ovi- duto foi seccionado, o ovo removido, limpo com solução desinfetante e trans- ferido para um isolador adaptado como uma incubadora de desenvolvimen- to.

No período de um dia de desenvolvimento, as galinhas vivas fo- ram removidas do isolador de desenvolvimento e transferidas para dois iso- ladores de crescimento em grande escala para o crescimento de grupos de galinhas jovens. As galinhas foram desenvolvidas em dietas comerciais este- rilizadas por radiação. Após 18 dias de idade, cinco galinhas foram removi- das a partir de cada isolador de crescimento. Eutanasiadas e coletadas a - mostras para bacteriologia por cultura aeróbica e anaeróbica. Amostrais in- cluíram amostras de fígado, baço, sangue cardíaco, vagina/cloaca, elemen- tos do ceco e do intestino delgado e fezes.

Resultados

As galinhas viáveis foram desenvolvidas com sucesso a partir dos ovos de postura cirúrgica (capacidade de incubação > 50%, mais fre- qüentemente > 90%). Não foram isoladas bactérias aeróbicas ou anaeróbi- cas a partir das galinhas em amostra. Conclusão

Um método seguro e altamente eficaz para a produção artificial de ovos férteis livres de germes em galinhas foi estabelecido. Os ovos foram viáveis e produziram galinhas viáveis livres de germes as quais foram manti- das com sucesso em isoladores.

Exemplo 2

Uma série de estudos adicionais foi conduzida de acordo com o exemplo 1. As variáveis antecipadas que afetam a viabilidade dos ovos fér- teis nascidos cirurgicamente foi avaliada no presente exemplo. As avalia- ções produzidas nos estudos e os resultados obtidos são proporcionados abaixo.

Os resultados identificaram as variáveis que são fundamentais para os pontos críticos necessários para produzir consistentemente ovos livres de germes de alta viabilidade. Alta viabilidade é definida como cerca de > 50% de capacidade de incubação e cerca de > 80% de alcance da ma- turidade reprodutiva.

Exemplo 2A

Efeitos das diferentes técnicas para a esterilização de equipa- mento incluindo isolador cirúrgico e instrumentos. A avaliação incluiu tipos, quantidade e tempo de radiação, e esterilizantes químicos (tipos peróxido, líquidos halogênio, álcool) em formas de líquido e vapor a partir de diferentes temperaturas e tempos, com ou sem solução detergente de enxágüe de o- vos em viabilidade de embrião e esterilidade.

Resultados

A exposição dos ovos removidos cirurgicamente ao álcool, álco- ol e iodo orgânico a 20, 32, ou 37°C, e à solução de ácido peracético (2% - 5% volume / volume) reduz a capacidade de incubação a partir de 60% - 100% (controles) a 13% - 89%.

A exposição ao vapor de ácido peracético por > 5 minutos reduz a capacidade de incubação em 0 - 28%. A exposição à solução de iodo re- duz a capacidade de incubação em 50%.

Exemplo 2B

Efeitos do tempo (zero a 180 minutos) entre eutanásia e ovos removidos em viabilidade e facilidade de manipulação cirúrgica, capacidade de incubação e esterilidade.

Resultados

Esterilidade-100%, maior dificuldade cirúrgica após 30 minutos, capacidade de incubação < 30% após 60 minutos.

Exemplo 2C

Efeitos dos diferentes tipos e métodos de aplicação de filmes adesivos, para criar uma vedação a ar entre a ave progenitora e o isolador cirúrgico; métodos de testar a vedação; dispositivos para posicionar a ave durante a cirurgia para otimizar a formação da vedação e a manipulação ci- rúrgica.

Resultados

A remoção das penas e a esterilização são importantes para a obtenção da vedação consistente entre o filme e a pele da ave.

O uso de pelo menos duas camadas de filme é necessário, uma aderida à ave, e a outra no orifício cirúrgico do isolador cirúrgico com a ca- mada adesiva adjacente à ave.

O abdômen da ave deve estar paralelo ao piso do isolador cirúr- gico para facilitar a manipulação cirúrgica; as pernas devem estar em uma posição completamente flexionada, com a cloaca selada. O teste de integridade da vedação antes / após a cirurgia usan- do gás de Hélio e/ou solução indicadora de iodo, mantém a pressão positiva e o ar estéril.

Exemplo 3

Exemplo 3A

Efeitos da diferença no tempo entre a oviposição esperada e a remoção cirúrgica do ovo a partir da ave progenitora na viabilidade e esterili- dade do ovo e facilidade de manipulação cirúrgica.

Resultados

Capacidade de incubacão:

o controle (ovos nascidos naturalmente) 85% - 100% de incuba- ção, 80% -100% estéril;

ovos removidos a partir do útero dentro de 30 minutos de anes- tesia ou eutanásia, 13% - 40% de incubação, 80% -100% estéril;

ovos removidos do útero dentro de 30 minutos de anestesia ou eutanásia, 13% - 40% de incubação, 80% - 100% estéril;

ovos removidos do útero após 60 minutos após a eutanásia, 14% de capacidade de incubação, 80% - 92% estéril.

Facilidade de manipulação cirúrgica: Controle não aplicável;

30 minutos, bom, tecidos facilmente retirados; 60 minutos, difícil, tecidos difíceis de retirar / rigor mortis preco- ce.

Exemplo 3B:

Efeitos da oviposição cronometrada com relação à palpação e com relação à combinação das referidas técnicas em proporções de ovos com cascas completas e com relação a cascas moles, viabilidade (em geral galinhas vivas no momento da incubação) e com a facilidade de manipula- ção cirúrgica.

Resultados

Tempo isoladamente, cascas macias e nenhum ovo adequado para remoção 8% - 71%, viabilidade 13% - 50%, esterilidade 75% - 100%, facilidade de manipulação cirúrgica variável;

palpação isoladamente, cascas macias e nenhum ovo adequado para remoção 13% - 71%, viabilidade 13% - 54%, esterilidade 89% - 100%, facilidade de manipulação cirúrgica boa;

tempo combinado com palpação, cascas macias e nenhum ovo adequado para remoção 10% - 23%, viabilidade 14% - 57%, esterilidade 92% -100%, facilidade de manipulação cirúrgica boa.

Exemplo 3C

Efeitos de antibióticos (por exemplo, fluroquinolonas administra- das por via oral) na eliminação de bactérias transovarianas e infecções do micoplasma e na viabilidade e esterilidade dos embriões e galinhas subse- qüentes.

Resultados

Sem antibiótico, viabilidade de 22% - 60%, e esterilidade 66% - 92%;

com antibióticos, viabilidade de 13% - 57%, e esterilidade de 89%-100%.

Exemplo 3D

Efeitos do tempo de armazenamento na pré-incubação (0 a 5 dias) e condições (temperatura, umidade, orientação do ovo, ventilação, vi- bração), condições de incubação (temperatura, umidade, ventilação, orienta- ção, perda de peso), condições de manipulação e de incubação na viabilida- de do embrião.

Resultados

Tempos de armazenamento de 0, 1 - 3 dias, 4-5 dias, a incu- bação foi de 90%, 90% e 60% respectivamente. Temperatura, ventila- ção/vibração para armazenamento de 3 dias: 25 0C e com vibra- ção/ventilação, aproximadamente 20 °C e sem vibração/ventilação; a capa- cidade de incubação foi de 60% e 80% respectivamente.

A orientação do ovo e a perda de peso: os ovos se achataram na lateral, perda de peso 7,8%, os ovos apresentaram a extremidade superi- or em forma de domo, perda de peso 10,2% -13,1%; capacidade de incuba- ção 30% e 80% - 90%, respectivamente. Conclusão

Como esperado, considerando a faixa das variáveis investiga- das, uma grande variedade de resultados para viabilidade e esterilidade foi obtida. Os resultados identificaram as variáveis que são pontos de controle fundamentais para produzir de modo consistente ovos livres de germes de alta viabilidade. A alta viabilidade é definida como cerca de > 50% de capa- cidade de incubação e cerca de 80% de alcance de maturidade reprodutiva.

Claims (11)

1. Isolador cirúrgico estéril e berço para uma ave que proporcio- na uma atmosfera livre de contaminantes na qual o procedimento cirúrgico é realizado compreendendo: um isolador produzido de paredes com pelo menos dois orifícios dotados de luva, um piso isolador sólido que proporciona uma superfície ci- rúrgica e um orifício cirúrgico dentro do piso isolador sólido; um berço para receber e posicionar a ave durante o procedi- mento cirúrgico estéril dotado de uma posição aberta e uma posição fechada; em que o berço permite o posicionamento estável da superfície cirúrgica da ave com relação à superfície cirúrgica do isolador de modo que a superfície cirúrgica da ave possa ser operada através do orifício cirúrgico; e em que o berço na posição fechada proporciona uma vedação a ar completa e estável para ser mantida entre a ave no berço e o orifício ci- rúrgico.

2. Isolador cirúrgico estéril e berço de acordo com a reivindica- ção 1, em que o orifício cirúrgico é selado com um filme transparente duran- te o uso.

3. Isolador cirúrgico estéril e berço de acordo com a reivindica- ção 1 ou 2, adequado para cirurgia envolvendo a remoção do ovo prematuro a partir do útero de uma ave.

4. Isolador cirúrgico estéril e berço de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, em que o berço é pivotavelmente fixado ou arti- culado ao lado de baixo do piso isolador abaixo do orifício cirúrgico.

5. Isolador cirúrgico estéril de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, em que o berço é fixado ao piso isolador em uma extremidade por um pivô ou meio de articulação e é fixado à extremidade oposta por meio de mecanismo de liberação.

6. Método de uso do isolador cirúrgico e berço como definido qualquer uma das reivindicações precedentes, em que o orifício cirúrgico é selado com a primeira camada de filme a- desivo transparente e estéril; a superfície cirúrgica da ave é limpa e esterilizada e a ave é dis- posta no berço na posição aberta; uma tira estreita de filme adesivo transparente e estéril é dispos- ta na superfície estéril da ave; uma segunda camada do filme adesivo transparente e estéril é disposta em cima da tira estreita de filme adesivo; e o berço é movido para a posição fechada para garantir o posi- cionamento estável da superfície cirúrgica da ave, preferivelmente o abdô- men, com relação à superfície cirúrgica do isolador cirúrgico, onde a primeira camada adesiva está em contato com a segun- da camada adesiva e uma vedação a ar completa é criada entre a ave e o isolador cirúrgico.

7. Método de acordo com a reivindicação 6, em que a vedação a ar entre a ave e o isolador cirúrgico é testada usando materiais de teste de fluido estéreis os quais são liberados no isolador cirúrgico para permitir que vazamentos externos sejam detectados.

8. Método de acordo com a reivindicação 8, em que o material de fluido de teste é gás hélio estéril.

9. Método cirúrgico para a remoção de um ovo prematuro em sua casca a partir da ave compreendendo as etapas de: realizar uma incisão através da pele da ave; trazer o útero da ave para a superfície; fazer uma incisão no útero e remover o ovo e o útero ao gram- pear o útero e remover o ovo.

10. Método de acordo com a reivindicação 9, adicionalmente compreendendo reparar o útero.

11. Método de acordo com a reivindicação 9 ou 10, em que o ovo é esterilizado imediatamente após a remoção do útero.