Relatório Descritivo da Patente de Invenção "PROCESSO E COMPOSIÇÕES PARA DESINFECÇÃO DE SUPERFÍCIES RESISTENTES A ÁLCALIS".
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção é dirigida a processos e composições para o tratamento de superfícies duras, incluindo a desinfecção e/ou sanitização dessas superfícies duras. As composições da invenção podem ser usadas em superfícies duras não porosas.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Os microorganismos podem ser usualmente categorizados em vários grupos gerais, de acordo com os níveis de resistência inatos para um espectro de germicidas físicos ou químicos (Manual of Clinicai Microbiology, 5a edição, ed. A. Balows, ASM Press, Washington, D. C., p. 185 (1991) . Para diminuir a resistência aos germicidas, os grupos amplos incluem: esporos microbianos - microbactérias (por exemplo, Mycobacterium turbeculosis var. bovis) - vírus não lipídicos ou pequenos (por exemplo, poliovírus, vírus coxsackie), fungos (por exemplo, Trichophyton sp., Candida sp.) -bactérias vegetativas (por exemplo, Staphylococcus aureus, Salmonella cholerasuis) - vírus lipídicos (por exemplo, herpes simples, HIV) . Desse esquema, pode-se presumir que a atividade contra os organismos mais resistentes (por exemplo, Mycobacterium tuberculosis var. bovis, poliovírus) implica atividade contra os organismos menos resistentes (por exemplo, bactérias vegetativas, vírus lipídicos). É geralmente conhecido que o etanol pode matar organismos resistentes, tais como Mycobacterium tuberculosis var. bovis e poliovírus, mas que são necessárias altas concentrações (por exemplo, 70 - 90%) . (Disinfection, Sterilization and Preservation, Seymour S. Block, Lea & Febiger, Filadélfia, p. 197 (1991)). Estudos anteriores mostraram que o etanol, em altas concentrações de 63 - 70%, têm pouca ação virucida contra poliovírus. Outros estudos mostraram que uma concentração mínima de 70% foi necessária para desativar esse vírus. Isso acarreta um problema ambiental. Há um interesse substancial da parte dos legisladores governamentais em reduzir VOC (compostos orgânicos voláteis) . Por exemplo, uma vez, o Painel de Recursos Aéreos da Califórnia sugeriu que o nível de VOC para as composições de aspersão desinfetantes ficasse abaixo de 60 por cento em peso.
Na patente U.S. 5.180.749, descreve-se uma composição antimicrobiana, que inclui até apenas cerca de 30 por cento em peso de etanol. Essas composições também incluem, no entanto, outro ingrediente ativo, que é também um VOC, álcool benzílico. Outras referências também mostram o uso de composições de teores relativamente baixos (por exemplo, cerca de 50% em peso de etanol) , mas essas também incluem outros componentes ativos, tipicamente, VOC. Esses outros componentes ativos também são freqüentemente indesejáveis por várias razões, uma das quais é o custo, bem como a falta de eficiência contra organismos altamente resistentes (por exemplo, poliovírus).
Desse modo, há uma necessidade continuada para processos e composições de desinfecção de baixo teor de VOC.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
De acordo com a presente invenção, descreve-se um processo para a desinfecção e/ou sanitização de uma superfície dura, que compreende a etapa de tratamento da dita superfície com uma composição aquosa, que compreende um álcool selecionado do grupo que consiste de metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, álcool benzílico e as suas misturas, que está presente em uma proporção de cerca de 40 a 70 por cento em peso; uma proporção efetiva de um agente modificador de pH, de modo que a faixa de pHs da composição seja de cerca de 7,0 a cerca de 13,0, em que a proporção de álcool na composição é inversamente proporcional ao pH da composição; opcionalmente, um componente selecionado do grupo que consiste de antimicrobianos, inibidores de corrosão, perfumes, veículos de perfume, solventes, tensoativos, propelentes, tampões de pH, fungicidas, polímeros formadores de filme e antioxidantes; e água, a 100 por cento em peso.
Em determinadas modalidades preferidas, as composições usadas no processo também incluem etilenodiaminotetracetato tetrassódico (Na4EDTA) como um modificador de pH. Em outras modalidades preferidas, o álcool é preferivelmente etanol, que está presente em uma proporção de cerca de 50 a cerca de 7 0 por cento em peso e, nas modalidades particularmente preferidas, o nível de álcool está presente em uma proporção de cerca de 6 0 a cerca de 7 0 por cento em peso. De preferência, a faixa de pHs é de cerca de 9 a cerca de 12, particularmente, de cerca de 10 a 12. De preferência, a composição está em uma forma de aerossol, mas formas diferentes de aerossóis são também consideradas.
Também, de acordo com a presente invenção, descreve-se uma composição para sanitização e/ou desinfecção de uma superfície dura, que compreende um álcool selecionado do grupo que consiste de metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, álcool benzílico e as suas misturas, que está presente em uma proporção de cerca de 40 a cerca de 40 por cento em peso; uma proporção efetiva de um agente modificador de pH, de modo que a faixa de pHs da composição seja de cerca de 7,0 a cerca de 13,0, em que a proporção de álcool seja inversamente proporcional ao pH da composição; opcionalmente, um componente selecionado do grupo que consiste de antimicrobianos, inibidores de corrosão, perfumes, veículos de perfume, solventes, tensoativos, propelentes, tampões de pH, fungicidas, polímeros formadores de filme e antioxidantes; e água, a 100 por cento em peso.
Em determinadas modalidades preferidas, as composições incluem Na^EDTA. Em outras modalidades preferidas, o álcool é, de preferência, etanol, que está presente em uma proporção de cerca de 50 a cerca de 70 por cento em peso e, nas modalidades particularmente preferidas, o nível de álcool é de cerca de 60 a cerca de 70 por cento em peso. De preferência, a faixa de pBs é de cerca de 9 a cerca de 12, particularmente, de cerca de 10 a 12. De preferência, a composição está em uma forma de aerossol, mas formas diferentes de aerossóis são também consideradas.
DESCRIÇÃO SUCINTA DO DESENHO A Figura 1 mostra a eficiência das diferentes formulações de etanol e Na.iEDTA (a solução de Na-sEDTA a 1,51 é 0,56% de EDTA ajustado para pH com cítrato de sódio) em vários níveis de pH contra poliovírus tipo 1. A legenda para a Figura 1 é a seguinte: DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
De acordo com a presente invenção, descreve-se um processo para a sanitização e/ou desinfecção de uma superfície dura, que compreende a etapa de tratamento da dita superfície com uma composição aquosa, que compreende um álcool selecionado do grupo que consiste de metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, álcool benzílico e as suas misturas, que está presente em uma proporção de cerca de 40 a 70 por cento em peso; uma proporção efetiva de um agente modificador de pH, de modo que a faixa de pHs da composição seja de cerca de 7,0 a cerca de 13,0, em que a proporção de álcool na composição é inversamente proporcional ao pH da composição; opcionalmente, um componente selecionado do grupo que consiste de antimicrobianos, inibidores de corrosão, perfumes, veículos de perfume, solventes, tensoativos, propelentes, tampões de pH, fungicidas, polímeros formadores de filme e antioxidantes; e água, a 100 por cento em peso.
Em determinadas modalidades preferidas, as composições usadas no processo também incluem Na4EDTA, como um modificador de pH. Em outras modalidades preferidas, o álcool é preferivelmente etanol, que está presente em uma proporção de cerca de 50 a cerca de 70 por cento em peso, e, nas modalidades particularmente preferidas, o nível de álcool está presente em uma proporção de cerca de 60 a cerca de 70 por cento em peso. De preferência, a faixa de pHs é de cerca de 9 a cerca de 12, particularmente, de cerca de 10 a cerca de 12. De preferência, a composição está em uma forma de aerossol, mas formas diferentes de aerossóis também são consideradas.
Também, de acordo com a presente invenção, descreve-se uma composição para sanitização e/ou desinfecção de uma superfície dura, que compreende um álcool selecionado do grupo que consiste de metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, álcool benzílico e as suas misturas, que está presente em uma proporção de cerca de 40 a cerca de 70 por cento em peso; uma proporção efetiva de um agente modificador de pH, de modo que a faixa de pHs da composição seja de cerca de 7,0 a cerca de 13,0, em que a proporção de álcool seja inversamente proporcional ao pH da composição; opcionalmente, um componente selecionado do grupo que consiste de antimicrobianos, inibidores de corrosão, perfumes, veículos de perfume, solventes, tensoativos, propelentes, tampões de pH, fungicidas, polímeros formadores de filme e antioxidantes; e água, a 100 por cento em peso.
Em determinadas modalidades preferidas, as composições incluem Na4EDTA. Em outras modalidades preferidas, o álcool é, de preferência, etanol, que está presente em uma proporção de cerca de 50 a cerca de 70 por cento em peso, e, nas modalidades particularmente preferidas, o nível de álcool está presente em uma proporção de cerca de 60 a 70 por cento em peso. De preferência, a faixa de pHs é de cerca de 9 a cerca de 12, particularmente, de cerca de 10 a cerca de 12. De preferência, a composição está em uma forma de aerossol, mas formas diferentes de aerossóis também são consideradas.
De acordo com a presente invenção, o álcool contendo a composição aquosa tem um pH na faixa de cerca de 7,0 a cerca de 13,0. 0 pH pode ser ajustado ao nível desejado, usando uma ou mais bases adequadas. Nesse aspecto, os inventores verificaram uma relação inversa entre o nível do álcool e o pH. 0 pH no qual a formulação é efetiva depende do nível do álcool. Os inventores verificaram que, por exemplo, uma formulação de etanol a 45% é efetiva contra poliovírus, a um pH igual ou superior a 11,5. Uma eficiência similar é encontrada com uma formulação a 65% de etanol, a um pH de cerca de 7,0. Desse modo, quanto mais alto o pH, mais baixa é a proporção de álcool, ou quanto mais baixo o pH, maior a proporção de álcool, que é necessária para as composições da presente invenção.
As bases úteis incluem, por exemplo, hidróxidos de metais alcalinos, tais como os hidróxidos de lítio, sódio, potássio e cálcio; hidróxido de amônio; Na4EDTA ; etilenodiaminotetracetato tri- ou tetramônio (EDTA de amônio); e etilenodiaminotetracetato tri- ou tetrapotássico (EDTA de potássio) . Os bicarbonatos ou os carbonatos de metais alcalinos, tais como carbonato de sódio ou bicarbonato de sódio, e os sais de boratos ou fosfatos de metais alcalinos também podem ser usados sozinhos, em mistura deles, ou em conjunto com as bases mencionadas acima.
Como verificado, prefere-se que as composições contenham proporções significativas de Na4EDTA, para ajustar o pH, embora outros compostos também possam contribuir para o ajuste do pH. Como usado na presente invenção, proporções de cerca de 0,1 a cerca de 2,0 são úteis. O Na4EDTA é comercialmente disponível com os nomes comerciais Versene 100LN da Dow Chemical and Dissolvine® E-39 da Akzo Nobel. Outros sais de EDTA, tais como EDTA tri- ou tetrapotássico ou EDTA tri- ou tetramônio, bem como as suas misturas, também podem ser usados para ajustar o pH das composições. O EDTA tri- ou tetrapotássico ou o EDTA tri- ou tetramônio também são disponíveis com o nome comercial Dissolvine®.
Como vai-se notar nos exemplos comparativos que se seguem, é surpreendente que as composições contendo álcool, tendo uma faixa de pHs de cerca de 7,0 a cerca de 13,0, proporcionem essa eficiência contra poliovírus e outros patógenos, uma vez que apenas uma solução com alto pH não proporciona esse efeito. O álcool usado nas composições inventivas está geralmente presente em uma proporção de cerca de 40 a cerca de 70 por cento em peso da composição, de preferência, de cerca de 50 a cerca de 7 0 por cento em peso e, nas modalidades particularmente preferidas, o nível de álcool está presente em uma proporção de cerca de 60 a cerca de 7 0 por cento em peso. O álcool usado nas composições inventivas pode ser metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, álcool benzílico ou as suas misturas. 0 componente principal das composições usado na invenção é água, cuja concentração, com base no peso total dos três ingredientes essenciais, varia de cerca de 30 a cerca de 55 por cento em peso.
Um ou mais outros ingredientes podem ser incluídos opcionalmente nas composições, para proporcionar propriedades estéticas ou outras benéficas a elas. Esses ingredientes opcionais são, por exemplo, outros agentes antimicrobianos, desodorizantes, emulsificantes, solubilizantes, inibidores de corrosão, quando as composições são embaladas em recipientes metálicos, por exemplo, recipientes de aerossóis, perfumes, veículos de perfume, tensoativos, propelentes, tampões de pH, fungicidas, polímeros formadores de filme e antioxidantes e solventes, o único requisito sendo que para qualquer composição particular, esses ingredientes opcionais sejam compatíveis com os outros ingredientes aqui presentes.
Por meio de exemplo, os ingredientes opcionais, que podem ser incorporados, incluem os seguintes.
Antimicrobianos (também conhecidos como antibacteriais) -compostos fenólicos, tais como o-fenilfenol, o-benzil-p-clorofenol e 4-t-amilfenol; e compostos de amônio quaternário, tais como cloreto de alquil dimetil benzil amônio, cloreto de octil decil dimetil amônio, cloreto de dioctil dimetil amônio, cloreto de dodecil dimetil amônio e sacarinato de alquil dimetil benzil amônio. Outros agentes antibacterianos úteis incluem aqueles descritos nas patentes U.S. 3.835.057 e 4.714.563. Os antibacterianos particulares, que são úteis, incluem: 2,6-dimetil-4-hidroxiclorobenzeno; 3,4,4'-triclorocarbanilida; 3 -trifluorometil-4,41 - diclorocarbanilida; 2,2' -di-hidróxi-3,3',5,5',6,6'- hexaclorodifenilmetano; 2,2'-di-hidróxi-3,3',5,5',6,6'- hexaclorodifenilmetano; 2,2'-di-hidróxi-3,3',5,5'- tetraclorodifenilmetano; 2,2'-di-hidróxi-3,3'-dibromo-5,5'-diclorodifenilmetano; 2-hidróxi-4,4'-diclorodifeniléter; 2- hidróxi-3,5',4-tribromodifeniléter; e 1,-hidróxi-4-metil-6-(2,4,4 -trimetilpentil)-2(1H)piridinona. Outros antibacterianos são disponíveis com as marcas comerciais BARDAC®, BARQUAT®, HYAMINE®, LONZABA®, BTC® e ONYXIDE®, que são descritos mais detalhadamente em, por exemplo, "Functional Materiais (Vol. 2)" de McCutcheon, edição norte-americana, 2000, e a respectiva literatura de produto dos respectivos fornecedores - Lonza (BARDAC, BARQUAT, HYAMINE, LONZABAC) e Stepan Chemical (BTC e ONYXIDE).
Um agente antibacteriano preferido é Onyxide 3300. Esse é um antimicrobiano de amônio quaternário não contendo íon cloreto, que é menos corrosivo do que os compostos de amônio quaternário à base de halogênio típicos. Quando adicionado às composições inventivas, o agente antimicrobiano está geralmente presente em uma proporção de cerca de 0,01 a cerca de 0,10 por cento em peso da composição, de preferência, de cerca de 0,05 a cerca de 0,075 por cento em peso.
Desodorizador - Sulfato de N-alquil-N-etilmorfolínio etila. Inibidor de corrosão - mono- e trietanolamina, hidróxido de amônio, molibdato de amônio e benzoato de sódio, boratos, silicatos, bem como outros inibidores de corrosão bem conhecidos por aqueles versados na técnica. O inibidor de corrosão, quando necessário, está geralmente presente em uma proporção de cerca de 0,02 a cerca de 0,50 por cento em peso da composição, de preferência, de cerca de 0,05 a cerca de 0,10 por cento em peso. Aqueles versados na técnica vão considerar que, se as composições da presente invenção são preparadas em um sistema não aerossol, inibidores de corrosão não vão ser necessários, quando essas composições são colocadas em garrafas plásticas com dispensadores de aspersões com bombas para disparo ou do tipo esguicho ou impregnadas em pequenos papéis-toalha.
Solvente - álcoois tais como álcool isopropílico e álcool butílico; glicóis tais propilenoglicol, trietilenoglicol e assemelhados; cada um dos quais pode também contribuir para a atividade antimicrobiana. Os glicóis são particularmente úteis nas modalidades de sanitizantes de ar.
Quando nenhuma orientação é dada acima, a proporção dos componentes opcionais pode ser determinada facilmente por uma pessoa versada na técnica.
As composições usadas na invenção podem conter pequenas proporções de tensoativo, para aperfeiçoar o molhamento da superfície e aperfeiçoar a uniformidade do contato. Esses tensoativos, quando usados para essa finalidade, estão presentes em baixas proporções, por exemplo, até cerca de 0,5 por cento em peso.
Os exemplos de tensoativos incluem: (1) alquilsulfonatos e -sulfatos, nos quais a alquila é linear ou ramificada e tem de cerca de 8 a cerca de 24 átomos de carbono e o cátion é solúvel em água, por exemplo, metal alcalino e amônio; (2) os tensoativos fluorados (preferidos), tais como, por exemplo, os tensoativos fluorados aniônicos, não iônicos, catiônicos e anfotéricos, comercializados pela E. I. DuPont de Nemours and Company, com a marca comercial ZONYL , por exemplo, ZONYL® FSK, um tensoativo fluorado anfotérico, ZONYL® FSN e ZONYL® FSO, tensoativos fluorados, ZONYL® FSJ, um tensoativo fluorado aniônico, e ZONYL® FSC e ZONYL® FSD, tensoativos fluorados catiônicos; bem como os tensoativos fluorados comercializados pela The 3M Corporation com a marca FLUORAD®, tais como Fluorad® FC-171 (um tensoativo fluorado não iônico), Fluorad FC-135 (um tensoativo cationico), Fluorad® FC-740 (descrito genericamente como sendo ésteres alquílicos fluorados), Fluorad® FC-430 (descrito genericamente como sendo ésteres alquílicos fluorados) , Fluorad FC-431 (descrito genericamente como sendo ésteres alquílicos fluorados) e Fluorad® FC-I-70-C (descrito genericamente como sendo etanóis de alquil polioxietileno fluorados); (3) sais de metais alcalinos de ácidos alquilbenzeno- e alquiltoluenossulfônicos, nos quais a alquila tem de cerca de 9 a cerca de 15 átomos de carbono; (4) sais de metais alcalinos e aminas, por exemplo, uma etanolamina, de ésteres mono- e dialquílicos de ácido sulfossuccínico, em que a alquila pode ser linear ou ramificada e tem de 7 a 30 átomos de carbono; (5) sais de metais alcalinos ou amônio do produto de reação de álcoois de 8 a 22 átomos de carbono e óxido de etileno. Os tensoativos úteis específicos incluem aqueles descritos no pedido de patente internacional WO 92/18100, isto é, sulfato de lauril éter de amônio, parenth-15-7 ácido carboxílico [éter poli(oxi—1,2-etanedil), alfa- (carboxymethyl)-omega-hidroxi-,Cll-C15-sec-alquil], sulfossuccinato de TEA-oleamido PEG-n; e fosfato de PPG-5-ceteth-10 [mistura complexa de ésteres de ácido fosfórico e polioxipropileno, éteres de polioxietileno de álcool cetílico]; (6) laurilsulfatos; succinatos de oleíla; sulfatos de éteres laurílicos; dodecilbenzenossulfonatos; e sarcosinato de N-lauroila. O contra-íon usual é sódio, amônio ou etanolaminas, tais como mono- e trietanolamina; (7) ácidos aminocarboxílico e aminossulfônico e os seus sais, tais como 3 -(dodecilamino) propionato de metais alcalinos e 3 -(dodecilamino) propano-l-sulfonato de metais alcalinos; e alquil e alquilamido betaínas, tal como cocamidopropil betaína; e (8) etoxilatos de álcoois primários lineares de 12 a 15 átomos de carbono (particularmente, um etoxilato de álcool linear de 12 a 15 átomos de carbono tendo 7 mols de EO (óxido de etileno) por mol de álcool, como comercialmente disponível com o nome comercial NEODOL 25-7, fornecido pela Shell Chemical Company, Houston, Texas).
As composições da invenção podem ser formuladas com propelentes convencionais, para dispensação como aerossóis de recipientes pressurizados convencionais. Os propelentes, que podem ser usados, são bem conhecidos e convencionais na técnica e incluem, por exemplo, um hidrocarboneto, de 1 a 10 átomos de carbono, tais como n-propano, n-butano, isobutano e as suas misturas; éter dimetílico e as suas misturas, bem como, individualmente ou em mistura, clorofluorocarbonos e/ou hidrocarbonetos fluorados ou hidrocarbonetos fluorados e clorados (HCFCs). As composições disponíveis comercialmente úteis incluem A-70 (Composições de aerossóis com uma pressão de vapor manométrica de 483 kPa (70 psig) disponível de empresas, tais como Diversifield e Aeropress.) Gases comprimidos, tais como dióxido de carbono, ar comprimido, nitrogênio e, possivelmente, fluidos densos ou supercríticos também podem ser usados. A proporção de propelente empregada deve proporcionar um modelo de aspersão adequado e para completar, essencialmente, a expulsão do compósito do recipiente de aerossol. A proporção adequada a ser usada para qualquer sistema propelente de aerossol particular pode ser facilmente determinada por uma pessoa versada na técnica. De preferência, os propelentes compreendem cerca de 1% a cerca de 50% da formulação de aerossol, com as proporções preferidas sendo de cerca de 2% a cerca de 25%, particularmente, de cerca de 5% a cerca de 15%. De uma maneira geral, a proporção de um propelente particular empregada deve proporcionar uma pressão manométrica interna de cerca de 138 a cerca de 1.034 kPa (cerca de 20 a cerca de 150 psig) a 21,1°C (70°F).
As composições podem ser embaladas em sistemas de dispensação prontos para uso, convencionais. Desse modo, podem ser embalados em forma de aerossol em recipientes de aerossol convencionais ou em forma líquida em garrafas de aspersão por bombas disparadoras e garrafas de aperto de não aerossóis, feitas de materiais plásticos usuais e tradicionais, tais como polipropileno, polietileno e assemelhados. Podem ser também impregnadas em pequenos papéis-toalha, e embaladas individualmente ou embaladas em forma a granel para dispensação individual. Os tipos de garrafas de aspersão de bomba disparadora, garrafas de apertar e pequenos papéis-toalha são bem conhecidos por aqueles versados na técnica.
As composições podem ser preparadas por procedimentos inteiramente convencionais, não sendo necessárias quaisquer técnicas especiais.
Os seguintes exemplos são apresentados para um melhor entendimento da invenção. Os dados mostrados nas Tabelas 1 a 5 mostram várias modalidades da presente invenção. A Tabela 1 mostra a desativação de poliovírus em vários níveis de álcool e de pH; a Tabela 2 mostra a desativação de poliovírus a um nível zero de álcool em vários pHs; as Tabelas 3A, 3B e 3C mostram a desativação de poliovírus em vários níveis de álcool a pH 7,0, 8,0 e 10,0, respectivamente; e a Tabela 4 mostra a atividade de desinfecção em vários níveis de álcool e de pH. * número de lâminas positivas das lâminas testadas N.A. = não avaliado ** sacarinato de alquil dimetil benzil amônio (33%) Outras composições exemplificativas, que são consideradas de acordo com a presente invenção e que têm atividade contra vários organismos, são mostradas nas Tabelas 5A a 5H apresentadas abaixo. 0 processo para determinar a eficiência das várias formulações contra poliovírus é descrito a seguir.
Populações de vírus do tipo poliovírus (Sabin) foram propagadas em células FRhK-4 e continham geralmente aproximadamente logi0 7,5 TCID50 por 0,2 ml. Para teste, 0,2 ml de população de vírus (contendo 10% de soro bovino fecal (FBS)) foi adicionado a 1,8 ml da formulação testada e deixado ficar na temperatura ambiente (aproximadamente 20 -26°C) por 10 minutos. Após o tempo de contato, diluições de 10 vezes em série do vírus foram conduzidas em meio de manutenção (Meio Essencial Mínimo de Earle (EMEM) + 2% FBS) . 0 meio de crescimento foi removido dos receptáculos das lâminas de ensaio de 24 receptáculos contendo monocamadas confluentes de células FRhK-4 e substituído por 2 ml do meio de manutenção (EMEM + 2% FBS). Uma alíquota de 0,2 ml de cada diluição de formulação de vírus / teste foi depois colocada em cada um dos quatro receptáculos separados de células hospedeiras. As lâminas de ensaio foram incubadas a 37°C por 10 dias, com mudanças de meio a cada 2-4 dias. Os controles de vírus foram conduzidos de uma maneira idêntica, usando 1,8 ml de EMEM, em lugar da formulação de teste. Os controles de citotoxicidade foram conduzidos por utilização de 0,2 ml de EMEM + 10% de FBS, em lugar da população de vírus. As lâminas foram classificadas para efeito citopático viral característico (arredondamento e degeneração celular), e os títulos dos pontos finais TCID50 foram determinados. 0 processo para determinação da eficiência das várias formulações contra as bactérias mencionadas foi baseado no teste padrão de Aspersão de Germicida AOAC ou teste de Atividade Tuberculocida AOAC de Produtos de Aspersão Desinfetantes. Um filme representativo de bactérias alvo foi seco em uma superfície não poroso, dura (por exemplo, lâminas de vidro). As lâminas tratadas foram depois ensaiadas com as formulações de teste, para um tempo de contato de dez minutos. Após exposição, as lâminas tratadas foram transferidas para recipientes contendo meio neutralizante e testadas para os sobreviventes. Os controles adequados de viabilidade, população de organismos secos e de neutralização foram conduzidos. A invenção foi descrita em detalhes, com referência particular às suas modalidades preferidas, mas deve-se entender que podem ser feitas variações e modificações dentro dos espírito e âmbito da invenção.
REIVINDICAÇÕES