BR122021008456B1

BR122021008456B1 - Métodos de fabricação de um extrato de alérgenos de ácaro de pó doméstico

Info

Publication number: BR122021008456B1
Application number: BR122021008456-4A
Authority: BR
Inventors: Heather Michelle Webster; Jason Daniel Frey; Trena Larissa Repp; Craig T. Grass; David Rowles; Gary Smith; Domingo Barber Hernandez; Fernando Juan Vidales; Carmen Arteaga Vázquez; Juan Carlos Moreno Segura; Maria José Chamorro Salillas
Original assignee: Alk-Abelló A/S
Priority date: 2010-06-03
Filing date: 2011-06-03
Publication date: 2021-08-03
Also published as: RU2711727C1; HK1249412A1; JP2019196379A; BR112012030705A2; BR112012030705B1; JP6827075B2

Abstract

a presente invenção refere-se a um produto farmacêutico compreendendo um extrato de alérgeno ou do alergoide do mesmo para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia e asma alérgica causada por ácaros do pó da casa, cujo extrato compreende pelo menos um extrato dos corpos dos ácaros selecionados de entre os seguintes grupos a) a b): a) um extrato dos corpos dos ácaros der p, e b) um extrato dos corpos dos ácaros der f e, pelo menos, um extrato de culturas dos ácaros selecionado a partir dos seguintes grupos c) a g): c) um extrato de partículas das fezes der p, d) um extrato de partículas das fezes de der f, e) um extrato de cultura do ácaro der f inteiro, f) um extrato de uma cultura do ácaro der p inteiro, e g) uma combinação de extratos c) a f).

Description

[001] A presente invenção refere-se a um produto farmacêuticoadequado para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia a ácaros do pó da casa e a asma alérgica causada por meio dos ácaros do pó da casa compreendendo os alérgeno dos ácaros e um método para a fabricação dos mesmos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] A alergia é um problema de saúde em países com um estilode vida ocidental. Além disso, a prevalência de doenças alérgicas tem vindo a aumentar nestes países. Embora a alergia, em geral, não pode ser considerada uma doença fatal, a asma anualmente provoca um significativo número de mortes. Uma prevalência excepcional em cerca de 30% dos adolescentes transmite uma perda substancial na qualidade de vida, dias de trabalho e dinheiro, e garante a classificação entre os principais problemas de saúde no mundo ocidental.

[003] A manifestação e os sintomas clínicos da alergiamanifestam-se de várias maneiras, e podem variar dependendo do indivíduo sensibilizado e a alergia infligida. Os sintomas mais comuns são edema, coceira, consultemelhidão e escorrimento dos olhos e do nariz (rinite e conjuntivite) e sintomas de vias aéreas superiores e inferiores, tais como chiado, tosse, falta de ar, condições de pele como urticária, eczema e coceira. Outros sintomas como fadiga e insônia também são experienciados. O tratamento sintomático tem como objetivo reduzir ou afetar a gravidade dos sintomas ou a redução da necessidade de outros fármacos dadas em paralelo. Os fármacos sintomáticos incluem anti-histamínicos como antagonistas dos receptores H1 e H2, corticosteroides intranasais e sistêmicos, fármacos anti-inflamatórios não esteroidais, descongestionantes nasais, como agonistas adrenérgicos. O tratamento e o alívio de um ou mais sintomas de alergia e/ou a redução na necessidade de uma outra medicação é um outro objetivo da presente invenção.

[004] Imunoterapia específica do alérgeno (também referido comoimunoterapia do alérgeno, imunoterapia do alérgeno da alergia, a vacinação específica contra à alergia (SAV), hipossensibilização ou dessensibilização) é um tratamento causal da doença alérgica. O mesmo interfere com os mecanismos imunológicos básicos os quais resultam em uma melhora persistente ou a longo prazo do estado imunológico dos pacientes. Dessa maneira, o efeito protetor da vacinação específica da alergia se estende além do período de tratamento, ao contrário do tratamento com fármacos sintomáticos. Alguns doentes que receberam o tratamento são curados, e, além disso, a maioria dos pacientes experimentam um alívio na gravidade da doença e os sintomas experimentados, ou pelo menos uma paragem no que diz respeito ao agravamento da doença. A imunoterapia do alérgeno também tem efeitos preventivos no que diz respeito à redução do risco de desenvolvimento de febre dos fenos em asma, e promovem a redução do risco de desenvolvimento de novas sensibilidades.

[005] A imunoterapia convencional do alérgeno é realizadautilizando a administração múltipla de alérgeno aplicado ao longo de um período de tempo prolongado.

[006] Um uso de longa data da imunoterapia do alérgeno é atravésda injeção (chamado também de SCIT, SIT ou imunoterapia subcutânea). Comumente, o alérgeno é administrado por via subcutânea em doses incrementais até que uma dose de manutenção seja atingida, mas também os regimes de tratamento com administração em grupo ou sem dosagens maiores são utilizados. O alérgeno pode ser administrado por um período de até três anos, ou mais, antes de completar ou cessar o tratamento, dependendo do esquema de tratamento a ser aplicado.

[007] Uma via de administração alternativa é a administraçãosublingual (ITSL) que é mais conveniente para o paciente uma vez que a administração pode ser efetuada em casa.

[008] Os produtos de imunoterapia para a uso na imunoterapiatipicamente compreendem o alérgeno que provoca a alergia no paciente ou os derivados dos mesmos, como o ingrediente ativo, que pode ser formulado por meio de várias maneiras de acordo com a via de administração escolhida, como as formulações aquosas, suspensões de hidróxido de alumínio ou de alergoides. O ingrediente ativo pode ser, por exemplo, um extrato aquoso do pólen contendo alérgenos do pólen e/ou extrato aquoso dos ácaros contendo alérgenos dos ácaros.

[009] Os ácaros do pó da casa mais importantes os quaispertencem à família de Pyroglyphidae incluem Euroglyphus maynei, Dermatophagoides pteronyssinus e Dermatophagoides farinae. Estes são encontrados em quase todo o mundo, incluindo Europa, Estados Unidos da América, China e muitos outros países e alergia e asma alérgica causada por ácaros é uma doença comum, que atinge 25% da população.

[0010] Alguns pacientes são mais sensíveis a Euroglyphus maynei,Dermatophagoides pteronyssinus, alguns outros, por sua vez, apresentam uma mior sensibilidade a Dermatophagoides farinae e outros a ambas as espécies.

[0011] Os pacientes normalmente apresentam uma sensibilidade(embora a um grau variável) para os dois principais alérgenos em ácaros do pó da casa, isto é, os alérgenos do grupo 1 e/ou os alérgenos do grupo 2.

[0012] Os ácaros do pó da casa contêm mais do que 20 diferentesalérgenos. Contudo, os dois principais alérgenos do grupo 1 e do grupo 2 são os alérgenos mais importantes, devido à frequência de doentes os quais apresentam uma sensibilidade a estes dois alérgenos, a quantidade de IgE produzida em resposta a estes alérgenos e do seu conteúdo em extratos naturais.

[0013] No caso dos pacientes da imunoterapia do alérgeno, osmesmos são tratados com alérgenos aos quais apresentam uma determinada sensiblidade. A capacidade de alérgenos para eliciar as respostas imunologicamente mediadas por IgE torna importante para controlar o teor de alérgeno, em particular, os alérgenos do grupo 1 e do grupo 2 nos extratos do alérgeno administrados a doentes alérgicos a fim de evitar os efeitos colaterais.

[0014] Os alérgenos do grupo 1 e do grupo 2 a partir de Der f e Derp estão intimamente relacionados, mas não são idênticos, consulte "Alérgenos e Imunoterapia do alérgeno, Alergia e Imunologia Clínica, série 21, Lockey Ledfors, 4 a ed., Páginas 162 a 164).

[0015] Todos os produtos no mercado hoje para a imunoterapia depacientes com alergia aos ácaros do pó da casa compreendes os extratos aquosos do alérgeno contendo os alérgenos dos ácaros do grupo 1 e do grupo 2. Muitos produtos contêm extratos de ambos Dermatophagoides pteronyssinus e Dermatophagoides farinae.

[0016] Os extratos de alérgenos dos ácaros são geralmentepreparados através do cultivo dos ácaros em um meio dos ácaros adequado seguindo da extração da cultura do ácaro completa ou a extração de uma fração de corpo do ácaro do mesmo, consulte "Alérgenos e imunoterapia da alergia, Quarta Edição, Alergia e Imunoterapia Clínica, série 21, Ed: RF Lockey e DK Ledfors, página 286.

[0017] No que diz respeito à fabricação de extrato de alérgeno éimportante controlar a variabilidade e alcançar consistência e reprodutibilidade no que diz respeito à segurança e eficácia ótima em um ambiente clínico subsequente. A padronização de extrato de alérgenos é uma questão complexa e, em princípio, envolve toda a cadeia produtiva de processos, incluindo o estabelecimento de procedimentos de fabricação robustos e reproduzíveis, consulte "Métodos e protocolos de Alergia, Jones e Lympany" (2008), capítulos 12 e 13. Por causa da capacidade de ligação a IgE a um extrato de alérgeno está relacionada com o conteúdo de um ou de alguns dos principais alérgenos, a estratégia geral de padronização normalmente envolve a padronização do extrato em relação ao conteúdo de uma seleção destes alérgenos principais adicionais a potência e composição de ligação a IgE em uma visão geral. O método relevante para ensaios para ter acesso aos extratos dos alérgenos é bem conhecido na técnica e incluem os ensaios, tais como a imunoelectroforese CIE, CRIE, FRIE, CLIE, os métodos de quantificação usando os anticorpos mono- ou poliespecíficos como SRID, RIS, QIE, bem como os métodos de preparação de normalização das referências. Existem normas internacionais de forma limitada, sendo um exemplo a FDA ; a referência CBER fornecida para os fabricantes do extrato para padronizar contra e rotular seus produtos com uma etiqueta resultando em biopotência de AI ou BAU (Unidades de Alergia ou Unidades de Alergia Bioequivalentes).

[0018] Há um considerável lote a uma variação de lotes naquantidade, em peso, de alérgenos do grupo 1 e do grupo 2 nos extratos de alérgenos e a quantidade em peso do alérgeno do grupo 1 nos extratos de alérgenos geralmente é maior do que a quantidade em peso do alérgeno do grupo 2.

[0019] É bem conhecido que os ácaros do pó doméstico dosalérgenos do grupo 1 e do grupo 2 são encontrados em ambos os corpos dos ácaros e nas partículas das fezes produzidas por tais ácaros durante o cultivo. Sabe-se também que o alérgeno do grupo 1 está associada com as partículas das fezes e o alérgeno do grupo 2 está associado com os ácaros; consulte Batard el al.Int Allergy Arch Immunol 2006, 140, p. 295 a 305.

[0020] Como já foi mencionado anteriormente acima, na presenteinvenção, existe um lote considerável a uma variação de lotes no conteúdo dos alérgenos do grupo 1 e dos alérgenos do grupo 2 no que diz respeito aos lotes de extratos de cultura dos ácaros inteiros, incluindo os extratos dos corpos dos ácaros, o que torna muito difícil a preparação de extratos dos ácaros, com um nível constante e predeterminado do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2. Isto é, evidentemente, um problema grave na produção em escala industrial grande ou de um produto farmacêutico, o qual deve conter, tanto quanto possível, a mesma quantidade de ingrediente (s) ativo (s) em cada lote.

[0021] Portanto, processos melhorados e produto (s) sãoimportantes no que diz respeito à maximização da eficiência da produção, bem como o fornecimento dos produtos de alta qualidade para o usuário final em questão de eficácia e segurança.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0022] Por conseguinte, a presente invenção refere-se a um produtofarmacêutico compreendendo um extrato de alérgeno ou um alergoide dos mesmos, que compreende pelo menos um extrato dos ácaros selecionado entre os seguintes grupos a) a b):a) um extrato dos corpos dos ácaros Der p, b) um extrato dos corpos dos ácaros Der f, e pelo menos um extrato das culturas dos ácaros selecionado a partir dos seguintes grupos c) a g):c) um extrato de partículas das fezes de Der p, d) um extrato de partículas das fezes de Der f, e) um extrato de cultura do ácaro Der f inteiro, f) um extrato de cultura do ácaro Der p inteiro, g) uma combinação de extratos c) a f).

[0023] A presente invenção também se refere a um produtofarmacêutico compreendendo um extrato de alérgeno ou um alergoide dos mesmos, que compreende pelo menos um extrato dos ácaros selecionado entre os seguintes grupos a) a b):a) um extrato dos corpos dos ácaros Der p,b) um extrato dos corpos dos ácaros Der f, e pelo menos um extrato de partículas das fezes dos ácaros selecionados entre os seguintes grupos c) a d):c) um extrato de partículas das fezes de Der p, d) um extrato de partículas das fezes de Der f.

[0024] A presente invenção também diz respeito a uma fração decorpo do ácaro que compreende mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 85% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros e de preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros.

[0025] A presente invenção também diz respeito a uma fração departículas das fezes dos ácaros que compreende, de preferência, mais do que 70% em v/v de particulas das fezes, de preferência mais do que 75% em v/v de particulas das fezes, de preferência mais do que 80% em v/v de particulas das fezes, de preferência mais do que 85% de v/v de particulas das fezes, de preferência mais do que 90% em v/v de particulas das fezes, de preferência mais do que 95% em v/v departiculas das fezes, de preferência mais do que 98% em v/v departículas das fezes.

[0026] A presente invenção também se refere a um método para afabricação de um extrato do alérgeno dos ácaros compreendendo alérgeno Der p 1 e Der p 2, método esse que compreende as seguintes etapas:a) Isolamento da (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros Der p a partir de culturas dos corpos dos ácaros Der p, em que a (s) dita (s) fração (ões) compreende (m) (m) mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 75% em v/v dos corposdos ácaros Der p, de preferência mais do que 80% em v/v dos corposdos ácaros Der p, de preferência mais do que 85% em v/v dos corposdos ácaros Der p, de preferência mais do que 90% em v/v dos corposdos ácaros Der p, de prefrência mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der p e de preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der p ;b) opcionalmente combinar várias da (s) dita (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros Der p; ec) extração dos alérgenos a partir da (s) dita (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros Der p, obtido na etapa a) ou na etapa b) como acima, com a finalidade de obter o referido extrato de alérgeno dos ácaros.

[0027] A presente invenção também se refere a um método para afabricação de um extrato de alérgeno dos ácaros compreendendo os alérgenos Der f 1 e Der f 2, método esse que compreende as seguintes etapas:a) isolamento da (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros Der f a partir de culturas dos ácaros Der f, em que a (s) dita (s) fração (ões) compreende (m) mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, depreferência mais do que 85% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, depreferência mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, depreferência mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der f e depreferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der f; b) opcionalmente combinar várias da (s) dita (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros Der f ec) extração de alérgenos a partir da (s) dita (s) fração (ões) de corpo do ácaro de Der f, obtido na etapa a) ou na etapa b) como já foi mencionado anteriormente acima, na presente invenção,, com a finalidade de obter o referido extrato de alérgeno dos ácaros.

[0028] A presente invenção também se refere a um método para afabricação de uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia ou asma alérgica causada por ácaros do pó da casa, que compreendem um extrato de alérgeno ou alergoides dos mesmos possuindo um teor predeterminado e controlado de alérgenos selecionados a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 e os alérgenos que compreendem as seguintes etapas:a) frações dos corpos dos ácaros Der p e/ou frações de partículas das fezes dos corpos dos ácaros Der p são isoladas a partir de culturas dos corpos dos ácaros Der p, e/ou frações dos corpos dos ácaros Der f e/ou as frações de partículas das fezes do ácaro de Der f são isoladas a partir de culturas dos ácaros Der f ; opcionalmenteb) combinação de várias frações dos corpos dos ácaros Der p, opcionalmente, combinando as diversas frações de partículas das fezes de Der p, opcionalmente, combinando as diversas frações dos ácaros Der f e, opcionalmente, combinando as diversas frações de partículas das fezes de Der f ;c) extração dos alérgenos a partir da (s) fração (ões) dos corpos do ácaro, obtido na etapa a) ou na etapa b) como descrito acima e/ou a extração de alérgenos a partir da (s) fração (ões) de partículas das fezes do ácaro obtidas na etapa a) ou na etapa b) como descrito acima, e depoisd) medição da concentração (p/v) do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 em extratos de alérgeno do ácaro obtido na etapa c) como descrito acima, e opcionalmentee) mistura de um ou mais extratos dos corpos dos ácaros com um ou mais extratos de partículas das fezes tal como obtido na etapa c) tal como mencionado acima com a finalidade de obter uma mistura de extratos de alérgenos com uma concentração predeterminada (p/v) do alérgeno do grupo 1 ou do grupo 2 e, opcionalmentef) conversão do extrato para alergoides de extrato.

[0029] A presente invenção também se refere a um extrato dealérgeno de uma série de extratos de alérgenos para o uso em um produto alérgeno farmacêutico para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia e asma alérgica causada por meio dos ácaros do pó da casa, cada extrato de alérgeno, compreendendo pelo menos um extrato dos corpos dos ácaros, e pelo menos um extrato de partículas das fezes dos ácaros, ou um extrato de corpo do ácaro de uma fração dos corpos dos ácaros que tenham menos do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros ou de um extrato de cultura do ácaro inteiro, em que o dito extrato de alérgeno tem uma proporção predeterminada de alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2, e em que o coeficiente de variação da dita relação é de não mais do que 25, 20, 15, 10, ou 7,5% para o conjunto dos extratos.

[0030] A presente invenção também se refere a um extrato dealérgeno de uma série de extratos de alérgenos para uso em um produto farmacêutico alérgeno para o diagnóstico de alergia causada por meio dos ácaros do pó da casa, cada extrato de alérgeno, compreendendo pelo menos um extrato dos ácaros e pelo menos um extrato de partículas das fezes dos ácaros, ou um extrato de corpo do ácaro de uma fração dos corpos dos ácaros que tenham menos do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros ou de um extrato de cultura do ácaro inteiro, em que o dito extrato de alérgeno tem uma proporção predeterminada do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2, e em que o coeficiente de variação da dita relação é não mais do que 25, 20, 15, 10, ou de 7,5% para o conjunto dos extratos.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0031] A figura 1 mostra uma configuração, como na forma descritano Exemplo 2.

DEFINIÇÕES

[0032] Tal como usado na presente invenção, o termo "ácaro"refere-se a ácaros do pó da casa. Os exemplos de tais são os ácaros Dermatophagoides farinae e/ou Dermatophagoides pteronyssinus e/ou Euroglyphus maynei ou outras espécies importantes que pertencem à família de Pyroglyphidae.

[0033] Tal como usado na presente invenção, o termo "Der p"significa "Dermatophagoides pteronyssinus", "Der p 1" significa "alérgeno de Der p do grupo 1" e "Der p 2" significa "alérgeno de Der p do grupo 2 ".

[0034] Tal como usado na presente invenção, o termo "Der f"significa "Dermatophagoides farinae", "Der f 1" significa " alérgeno de Der f do grupo 1" e "Der f 2" significa " alérgeno de Der f do grupo 2".

[0035] Os alérgenos do grupo 1 e os alérgenos do grupo 2 das duasespécies dos ácaros Der f e Der p existem naturalmente em várias isoformas, por exemplo, consulte www.allergen.org sob fontes de alérgenos (Animalia Anthropoda/Astigmata/Dermatophagoides farinae ou Dermatophagoides farinae). Como usado na presente invenção, o termo "alérgeno do grupo 1", "grupo 1", "alérgeno do grupo 2" e "grupo 2" incluem todas as isoformas de ocorrência natural de cada um dos alérgenos dos Grupos 1 e 2, incluindo os mencionados no www.allergen.org.

[0036] Como usado na presente invenção, o termo "cultura dosácaros", "cultura do ácaro inteiro" e "cultura inteira", " cultura do ácaro Der p" e " cultura do ácaro Der f " ou "culturas dos corpos dos ácaros Der p" e "culturas dos ácaros Der f "significa que o material obtido após o crescimento de Der p ou Der f em um suporte adequado e contém toda a cultura, incluindo os ácaros, as partes dos ácaros, as partículas das fezes, os ovos, os meios dos componentes dos ácaros etc

[0037] Como usado na presente invenção, o termo "meio ou médiade cultura do ácaro" ou "meio ou média do ácaro "significa uma dieta adequada para o crescimentos dos ácaros do pó da casa.

[0038] Como usado na presente invenção, o termo "extrato dosácaros", "extrato dos corpos dos ácaros Der p" e "extrato dos ácaros Der f" significa "extrato de uma fração ou mais frações combinadas dos ácaros", "extraro de uma fração ou mais frações combinadas dos corpos dos ácaros Der p " e "extrato de uma fração ou mais frações combinadas dos corpos dos ácaros Der f ", respectivamente.

[0039] Como usado na presente invenção, o termo "extrato departículas das fezes dos ácaros", "extrato de partículas das fezes", " extrato de partículas das fezes de Der p" e "extrato de partículas das fezes de Der f " significa "extrato de uma ou mais fração (ões) combinada (s) de partículas das fezes do ácaro ", " extrato de uma ou mais fração (ões) combinada (s) de partículas das fezes "," extrato de uma ou mais fração (ões) combinada (s de partículas das fezes de Der p " e " extrato de uma ou mais fração (ões) combinada (s) de partículas das fezes de Der f ", respectivamente.

[0040] Como usado na presente invenção, o termo "extrato dealérgeno" e "extrato de alérgeno (I)" são utilizados indiferentemente e significam um extrato de pelo menos um "extrato de corpo do ácaro" ou "extrato de partícula das fezes", opcionalmente em combinação com os extratos dos ácaros adiconais em qualquer combinação.

[0041] Como usado na presente invenção, o termo " fração (ões)dos corpos dos ácaros", significa uma ou mais fração (ões) combinada (5) de culturas dos ácaros que contêm mais do que 50% em v/v dos corpos dos ácaros, "fração (ões) dos corpos dos ácaros Der p" significa uma ou mais fração (ões) combinada (s) de culturas do ácaro Der p que contêm mais do que 50% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, e " fração (ões) dos corpos de Der f" significa uma ou mais fração (ões) combinada (s) de culturas do ácaro Der f que contêm mais do que 50% de v/v dos corpos der f.

[0042] Como usado na presente invenção, o termo " fração (ões) departículas das fezes dos ácaros" e "fração (ões) de partículas das fezes", significa uma ou mais fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que contêm mais do que 50% de partículas de v/v dos ácaros das fezes, "fração (ões) de partículas das fezes de Der p "significa uma ou mais fração (ões) combinada (s) de culturas dos corpos dos ácaros Der p que contêm mais do que 50% de v/v de partículas das fezes de Der p, e "fração (ões) de partículas das fezes de Der f " significa uma ou mais fração (ões) combinada (s) de culturas do ácaro Der f que contêm mais do que 50% de v/v de partículas das fezes de Der f.

[0043] Como usado na presente invenção, "(s)" como a última partede uma palavra, significa a palavra em ambas as formas, tanto no singular ou no plural.

[0044] Como usado na presente invenção, "tratamento" significa"cura ou alívio de sintomas alérgicos."

[0045] Como usado na presente invenção, o termo "comprimidosublingual de dissolução rápida" refere-se aos comprimidos e as formas de dosagem não comprimidas que se desintegram em menos de cerca de 90 segundos, de preferência em menos de cerca de 60 segundos, de preferência em menos do que cerca de 30 segundos, mais preferivelmente em menos de cerca de 20 segundos , ainda mais preferencialmente em menos de cerca de 10 segundos na cavidade oral, ainda mais preferencialmente, em menos do que cerca de 5 segundos, e mais preferivelmente em menos de cerca de 2 segundos depois de ser recebido sob a língua na cavidade oral. Tais comprimidos sublinguais de dissolução rápida estão descritos no WO 04/77994.

[0046] Como usado na presente invenção, o termo "CV" significa ocoeficiente de variação expresso em percentagem.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0047] Os produtos farmacêuticos da presente invenção sãoadequados para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia aos ácaros do pó da casa e a asma alérgica causada por ácaros do pó da casa.

[0048] Como já foi mencionado anteriormente acima, na presenteinvenção, existe um lote considerável a uma variação de lotes no conteúdo de alérgenos do grupo 1 dos ácaros e do grupo 2 dos ácaros em lotes de extratos de cultura dos ácaros inteiros, incluindo os extratos dos ácaros, o que torna muito difícil a preparação de extratos dos ácaros, com uma constante e predeterminado nível do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2.

[0049] Foi agora encontrado que, ao preparar vários, tais como doisextratos, para cada lote de cultura dos ácaros, por exemplo, através do isolamento de uma fração da cultura do ácaro contendo principalmente os corpos dos ácaros e uma fração da cultura do ácaro compreendendo, principalmente, as partículas das fezes dos ácaros seguindo da extração separada da fração de corpo do ácaro e a fração de partículas das fezes do ácaro proporciona a capacidade de controlar a proporção dos alérgenos do grupo 1 e do grupo 2 no extrato de alérgeno final por meio da mistura do extrato de corpo do ácaro com o extrato das partículas das fezes dos ácaros até que a proporção em peso desejada seja atingida.

[0050] Também foi verificado que se a cultura do ácaro obtida pormeio do cultivo dos ácaros é purificada com a finalidade de produzir uma fração de corpo do ácaro que contenha mais do que 70% em v/v ou mais preferido ainda mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros, a extração desta fração de corpo do ácaro purificado irá normalmente produzir um extrato de corpo do ácaro que contêm uma quantidade igual em peso do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 ou mais do alérgeno do grupo 2 do que o alérgeno do grupo 1.

[0051] Um extrato de corpo do ácaro com mais alérgeno do grupo2 do que do grupo 1 em peso pode ser suplementado com extrato de partículas das fezes dos ácaros que normalmente contêm mais alérgeno do grupo 1 do que alérgeno do grupo 2, em peso, para criar uma mistura de extratos com predeterminadas e, se desejado, quantidades mais iguais em peso do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2.

[0052] Exemplos de extratos, que normalmente contêm maisalérgeno do grupo 1 do que alérgeno do grupo 2 em peso, e que podem ser usados para complementar a, é um extrato de uma cultura do ácaro inteiro ou uma (s) fração (ões) de corpo com menos de 70% em v/v dos ácaros

[0053] Um extrato de corpo do ácaro com mais alérgeno do grupo2 do que alérgeno do grupo 1 em peso também pode ser suplementado com extrato de cultura do ácaro inteiro ou uma fração de corpo do ácaro tendo menos de 70% em v/v dos ácaros, tanto que, normalmente, contêm mais alérgeno do grupo 1 do que alérgeno do grupo 2 em peso para criar uma mistura de extratos com predeterminadas e, se desejado quantidades mais iguais em peso do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2.

[0054] É possível, por meio da mistura de extratos dos ácaros e umaoutra fração, de preferência, as partículas das fezes, a obtenção de uma mistura de extratos que contêm uma vasta gama de proporções do grupo 1 para o grupo 2 em peso, tais como a partir de 1: 0,6 a 1: 1,6, 1: 0,7 a 1: 1,5, 1: 1,4 a 1: 0.8, 1: 0.9 a 1: 1,3, 1: 1,2 a 1: 0.95, 1: 0.98 a 1: 5.15, incluindo uma mistura que contém quantidades iguais em peso dos alérgenos do grupo 1 e do grupo 2, isto é, de uma mistura 1: 1: 1: 1 de Der p 1, Der p 2, Der f 1 e Der f 2.

[0055] Em um aspecto, a presente invenção refere-se a um métodopara a fabricação de uma mistura de extratos dos ácaros alérgeno de um produto farmacêutico com uma quantidade predeterminada, controlada em peso de alérgenos Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2.

[0056] A presente invenção também se refere a um produtofarmacêutico compreendendo extratos de alérgenos selecionados a partir de pelo menos um extrato dos ácaros e, opcionalmente, pelo menos um extrato de partículas das fezes dos ácaros selecionados a partir de: a) um extrato dos corpos dos ácaros Der p, b) um extrato de partículas das fezes de Der p, c) um extrato dos ácaros Der f e d) um extrato de partículas das fezes de Der f, onde os principais alérgenos Der p 1, Der p 2, Der f 1 e/ou Der f 2 estão presentes nas quantidades predeterminadas, controladas.

[0057] Em algumas modalidades, os extratos da presente invençãosão caracterizados por conterem mais alérgeno do grupo 2 em peso em relação aos produtos existentes no mercado. Os inventores do presente pedido de patente têm fornecido um processo em larga escala industrial para a produção de extratos de alérgeno do ácaro com esta proporção em peso alterada entre o alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2.

[0058] Verificou-se que, se extratos separados de ambos os corposdos ácaros e partículas das fezes dos ácaros são preparados para cada uma das duas espécies dos ácaros, e uma fração de corpo do ácaro suficientemente puro (e fração de partículas das fezes do ácaro) são utilizados para a extração, é possível criar extratos do ácaro com uma proporção em peso do alérgeno do alérgeno do grupo 1 em referência ao alérgeno do grupo 2 que está entre 1: 0,6 a 1: 1,6, para cada espécie dos ácaros.

[0059] Por meio da combinaçção, os extratos de ambas as espéciesde uma relação em peso entre o Der p 1, Der p 2, Der f 1 e Der f 2, que é 1: 1: 1: 1 podem ser alcançados.

[0060] Estes produtos são vantajosos porque o conteúdo dealérgenos dos produtos farmacêuticos está bem controlado.

[0061] Anteriormente, os extratos de alérgeno do ácaronormalmente continham mais alérgeno do grupo 1 do que alérgeno do grupo 2 em peso que pode ter causado um mau tratamento de pacientes alérgicos que apresentam uma sensibilidade, em particular, a alérgenos do grupo 2.

[0062] De acordo com a presente invenção, um processo industrialpara a preparação de extratos com uma maior quantidade em peso de grupo de alérgenos 2 do que o grupo de alérgenos do grupo 1normalmente se encontra em extratos que tem sido fornecidos.

[0063] De uma maneira adequada, o produto farmacêutico comomencionado anteriormente acima compreende pelo menos um extrato dos ácaros e pelo menos um extrato de partículas das fezes dos ácaros selecionados de entre os grupos a) a d) mencionados acima.

[0064] De preferência, o extrato compreende um extrato dealérgeno dos ácaros dos corpos dos ácaros Der p, de um extrato de partículas das fezes de Der p, um extrato dos ácaros Der f e um extrato de partículas das fezes de Der f.

[0065] De acordo com outras modalidades da presente invenção, oextrato de alérgenos dos ácaros incluem:- um extrato dos corpos dos ácaros Der p e um extrato de partículas das fezes de Der p e, opcionalmente, nenhum extrato dos ácaros Der f e nenhum extrato de partículas das fezes de Der f, ou- um extrato Dos corpos dos ácaros Der f e um extrato de partículas das fezes de Der f e, opcionalmente, nenhum extrato dos corpos dos ácaros Der p e nenhum extrato de partículas das fezes de Der p, ou- um extrato dos corpos dos ácaros Der p e um extrato dos ácaros Der f e, opcionalmente, nenhum extrato de partículas das fezes dos ácaros, ou- um extrato dos corpos dos ácaros Der p e nenhum extrato dos ácaros Der f e, opcionalmente, nenhum extrato de partículas das fezes dos ácaros, ou- um extrato dos ácaros Der f e nenhum extrato dos corpos dos ácaros Der p e, opcionalmente, nnehum extrato de partículas das fezes dos ácaros.

[0066] Em uma modalidade preferida da presente invenção, oextrato dos dos corpos dos ácaros Der p é preparado a partir de uma ou mais a (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros Der p em que a extração da (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros Der p resulta em um extrato o qual compreende as quantidades iguais em peso do alérgeno do grupo 1 e do alérgeno do grupo 2 ou mais alérgeno do grupo 2 do que alérgeno do grupo 1 em peso e/ou o extrato dos ácaros Der f é preparado a partir de um ou mais fração (ões) dos corpos dos ácaros Der f e em que a extração da (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros Der f resulta em um extrato o qual compreende as quantidades iguais em peso do alérgeno do grupo 1 e do alérgeno do grupo 2 ou mais alérgeno do grupo 2 do que alérgeno do grupo 1 em peso.Em uma modalidade preferida- o extrato dos corpos dos ácaros Der p é de uma maneira adequada preparado a partir de uma fração ou frações de culturas do ácaro Der p a partir da (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência mais doque 75% de v/v do ácaros Der p, mais preferencialmente mais do que80% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que85% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de prefrência mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der p e de preferência mais do que 98% de v/v dos ácaros Der p e/ou- o extrato dos ácaros Der f é de uma maneira adequada preparado a partir de uma fração ou frações combindas de culturas do ácaro Der f das ditas frações que compreendem mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 80% emv/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 85% emv/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 90% emv/v dos corpos dos ácaros Der f, mais de preferência, mais do que 95%em v/v dos corpos dos ácaros Der f, e de preferência mais do que 98%em v/v dos corpos dos ácaros Der f, e/ou- o extrato de partículas das fezes de Der p é de uma maneiraadequada preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas do ácaro Der p da (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferência mais do que 75% de v/v partículas das fezes de Der p, de preferência mais do que 80% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferência mais do que 85% em v/v de particulas das fezesde Der p, de preferência mais do que 90% de v/v de partículas das fezesde Der p, de preferência mais do que 95% de v/v de partículas das fezesde Der p, de preferência mais do que 98% de v/v de partículas das fezesde Der p e/ou- o extrato de partículas das fezes de Der f é de uma maneira adequada preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas do ácaro Der f da (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência, mais do que 75% de v/v De partículas das fezes de Der f, de preferência, mais do que 80% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência mais do que 85% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência mais do que 90% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência, mais do que 95% de v/v, e mais preferencialmente mais do que 98% de v/v de partículas das fezes de Der f.

[0067] Em uma modalidade da invenção, a fração das fezes não étão pura como a fração do corpo.

[0068] Em uma modalidade preferida, cada uma das frações oufrações combinadas acima compreendem menos de 10% de v/v de partículas de meio de cultura do ácaro.

[0069] A fração de corpo do ácaro ou as frações combinadas decorpo do ácaro podem conter até 20% em v/v de partes dos ácaros (pernas, ovos etc), meio e partículas das fezes (isto é, qualquer coisa que não seja ácaros ou contaminantes), desde que a quantidade de partículas do meio seja abaixo de 10% de v/v

[0070] A fração das partículas das fezes do ácaro ou as frações daspartículas das fezes combinadas dos ácaros podem conter até 20% em v/v das partes dos ácaros (pernas, etc ovos) e partículas do meio (isto é, qualquer coisa que não seja partículas das fezes ou contaminantes), desde que as quantidades das partículas do meio sejam inferiores a 10% em v/v

[0071] Em uma outra modalidade, cada uma das frações ou fraçõescombinadas é composta por não mais do que um total de 1,0% p/p de materiais estranhos detectáveis. As partículas das fezes dos ácaros, as partes dos ácaros, os corpos dos ácaros ou o meio dos ácaros não são considerados como substâncias estranhas.

[0072] As percentagens volumétricas dos ácaros e as partículas dasfezes dos ácaros no corpo do ácaro e as frações de partículas das fezes são determinados por meio da microscopia. O número de partículas (por exemplo, corpo dos ácaros ou de partículas das fezes) é contado e expresso como% de v/v através da multiplicação com um valor que é o volume médio de partícula em questão (por exemplo, corpo dos ácaros ou de partículas das fezes).Contagem microscópica realizada em frações dos corpos do ácaro:

[0073] A amostra é pesada e suspensa em uma solução de glicerolque contém (25% de glicerol, 5% de Igepal). A amostra é colocada em um filtro de grade, enquanto sob vácuo a fim de remover o líquido e imobilizar as partículas no filtro. O filtro é, em seguida, seco para aumentar a visibilidade quando se utiliza o microscópio. As grades a serem contadas são escolhidas de uma maneira aleatória e todas as partículas dentro de uma grade escolhida são contadas. As grades são escolhidas até que pelo menos 800 partículas tenham sido contadas. O procedimento acima pode ser realizado em várias, tais como duas, três, quatro ou cinco amostras independentes. No cálculo dos resultados, a variação entre as amostras tem de satisfazer um critério de aceitação desejado (tais como, por exemplo, mais do que 80% em vol/vol dos corpos dos ácaros inteiros, e/ou menos de 10% em vol/vol de partículas do meio) para o ensaio em a fim de garantir a coerência entre as amostras. Se os resultados das amostras são consistentes, em seguida, as contagens estão em média proporcionando o resultado do ensaio.

[0074] As contagens não volumétricas são traduzidas em volumesusando volumes predeterminados atribuídos por ácaros, fezes e partículas do meio.Contagem microscópica realizada em frações de fezes:

[0075] A amostra é pesada, colocada em uma câmara de contagemde grade e misturada com óleo de parafina com a finalidade de dar uma camada uniforme. As grades a serem contadas são escolhidas de uma maneira aleatória e todas as partículas dentro de uma grade escolhida são contadas. As grades são escolhidas até que pelo menos 800 partículas tenham sido contadas. O procedimento mencionado acima pode ser realizado em várias, tais como duas, três, quatro ou cinco amostras independentes. No cálculo dos resultados, a variação entre as amostras tem de satisfazer um critério de aceitação (tais como, por exemplo, mais do que 80% em vol/vol dos ácaros inteiros, e/ou menos de 10% em vol/vol das partículas do meio) para o ensaio de modo a assegurar a coerência entre as amostras. Se os resultados das amostras são consistentes, em seguida, as contagens estão em média dando o resultado do ensaio. As contagens não volumétricas são traduzidas em volumes predeterminados, utilizando volumes atribuídos para ácaros, fezes e partículas do meio.

[0076] Os volumes atribuídos aos corpos dos ácaros, partículas dasfezes, partículas do meio dos ácaros são os seguintes:Corpos dos ácaros Der f: 21132000 micrômetros em cubos Corpos dos ácaros Der p: 12926000 micrômetros em cubos Partículas do meio do ácaro em frações dos corpos: 6721000 micrômetros cúbicospartículas do meio do ácaro em frações das fezes: 10000 micrômetros cúbicosPartículas das fezes: 19000 micrômetros cúbicos

[0077] Como já foi mencionado anteriormente acima, na presenteinvenção, a mesma baseia-se na descoberta de que através da purificação da (s) fração (ões) de corpo do ácaro de modo que contenham mais do que 70% de v/v dos corpos dos ácaros, ou, mais de preferência, mais do que 80% de v/v, é possível preparar um extrato de corpo do ácaro a partir de tal fração ou frações combinadas de corpo do ácaro em que a quantidade em peso do alérgeno do grupo 1 no extrato é menor do que a quantidade de alérgeno do grupo 2, em peso ou a concentração do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 em peso é igual.

[0078] De acordo com uma modalidade preferida, a quantidade empeso do alérgeno do grupo 1 é inferior à quantidade em peso do alérgeno do grupo 2 no (s) extrato (s) de corpo do ácaro e a quantidade em peso do alérgeno do grupo 1 é muito mais elevada do que o alérgeno do grupo 2 em peso nos extratos das partículas das fezes dos ácaros.

[0079] De uma maneira adequada, a proporção em peso doalérgeno do grupo 1 em referência ao alérgeno do grupo 2 no extrato do alérgeno está mais próximo da proporção em peso ddo alérgeno do grupo 1 em referência ao alérgeno do grupo 2 em extratos de corpo do ácaro do que a proporção em peso do alérgeno do grupo 1 em referência ao alérgeno do grupo 2 em que os extratos das partículas das fezes dos ácaros, que é usado para a preparação da mesma.

[0080] De acordo com a presente invenção, é possível alterar aproporção em peso do alérgeno do grupo 1 em referência ao alérgeno do grupo 2 a quantidades mais iguais em peso, de um extrato, do que no extrato dos corpos dos ácaros e as partículas das fezes dos ácaros da qual eles foram preparados. Isto não era possível anteriormente, onde os lotes típicos de ambos os órgãos dos ácaros e as partículas das fezes contem mais alérgeno do grupo 1 do que alérgeno do grupo 2 em peso.

[0081] Um produto farmacêutico da presente invenção éproporcionado, compreendendo o extrato de alérgeno, o qual compreende os alérgenos selecionados de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 e em que o alérgeno presente na menor concentração (p/v) no extrato do alérgeno, está presente em uma concentração que é superior a 50% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferivelmente acima de 60% da concentração do alérgeno selecionada de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 70% da concentração do alérgeno Der f selecionada a partir de 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 80% da concentração do alérgeno selecionada de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 85% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada (p/v ), mais preferido acima de 90% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 95% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), de preferência acima de 98% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), ou o mais preferido acima de 99% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presentes em uma concentração mais elevada (p/v).

[0082] Uma dose diária de um produto da presente invençãocontêm de uma maneira adequada de 2 a 10 ug ou mais preferencialmente de 3 a 8 mg de Der p 1, 3 a 8 ug de Der p 2, 3 a 8 ug de Der f 1 e 3 a 8 ug de Der f 2.

[0083] Em uma modalidade preferida, a dose diária de alérgenos dogrupo 1 e alérgenos do grupo 2 em um produto sublingual da presente invenção é de uma maneira adequada entre 3 e 4 mg, mais preferencialmente de cerca de 3,6 ug de Der p 1, Der p 2, Der f 1 e/ou Der f 2.

[0084] Em uma outra modalidade, a dose diária de alérgenos dogrupo 1 e alérgenos do grupo 2 em um produto da presente invenção por via sublingual de uma maneira adequada entre 6 e 8 mg, mais preferencialmente cerca de 7,2 ug de Der p 1, Der p 2, Der f 1 e/ou Der f 2.

[0085] O produto farmacêutico tal como pode ser formulado acima como um comprimido sublingual prensado ou não prensado (por exemplo, como no documento WO 04/77994), um produto líquido sublingual (por exemplo, como no documento WO 07/051476), ou um produto líquido para injeção, opcionalmente com adjuvante de hidróxido de alumínio (por exemplo, como no documento WO 10/043675). Preferivelmente, o produto farmacêutico é um comprimido sublingual de rápida dissolução. De uma maneira adequada, os comprimidos estão na forma de comprimidos, cápsulas, pastilhas ou cápsulas.

[0086] O extrato de alérgeno pode estar presente sob a forma dealergoides nos produtos farmacêuticos descritos acima.

[0087] A presente invenção também se relaciona com um métodopara a fabricação de um extrato de alérgeno dos ácaros para um produto farmacêutico, o referido extrato tendo uma predeterminada, controlada e, se desejado, proporção em peso mais igual do alérgeno de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e/Der p 2.

[0088] A invenção também se refere a um método para a fabricaçãode um extrato de alérgeno dos ácaros ou alergoides do mesmo para um produto farmacêutico tal como descrito acima em que o referido extrato de alérgeno tem uma quantidade predeterminada e controlada em peso de alérgenos selecionados a partir de alérgenos de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 e compreendendo as seguintes etapas a) e c) a d) e, opcionalmente, b), e) e/ou f):a) As frações dos corpos dos ácaros Der p e/ou frações de partículas das fezes dos ácaros Der p são isoladas a partir de culturas dos ácaros de Der p e/ou frações dos corpos do ácaros Der f e/ou frações de partículas das fezes do ácaro Der f que são isoladas a partir de culturas do ácaro Der F;b) Opcionalmente combinando as diversas frações dos corpos dos ácaros Der p, opcionalmente, combinando as diversas frações de partículas das fezes do ácaro Der p, opcionalmente, combinando as diversas frações dos ácaros Der f e, opcionalmente, combinando as diversas frações de partículas das fezes do ácaro Der f ;c) extração dos alérgenos a partir da (s) fração (ões) de corpo do ácaro, obtida na etapa a) ou na etapa b) como descrito acima e/ou de extração de alérgenos a partir da (s) fração (ões) de partículas das fezes, obtidas na etapa a) ou na etapa b) como acima, e depoisd) Medição da concentração (p/v) do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 em extratos de alérgeno do ácaro obtido na etapa c) como descrito acima, e opcionalmentee) Misturar um ou mais do (s) extrato (s) dos corpos dos ácaros com um ou mais do (s) extrato (s) de partículas das fezes dos ácaros tal como obtido na etapa a c) tal como mencionado acima com a finalidade de obter uma mistura de extratos de alérgenos com uma quantidade predeterminada e proporção em peso do alérgeno do grupo 1 e do grupo 2 e, opcionalmentef) conversão do extrato de alérgeno para um alergoides dos mesmos.

[0089] De acordo com a presente invenção, os extratos de fraçõesdos ácaros e os extratos de frações de partículas das fezes dos ácaros podem ser combinados ou misturados, no entanto a (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros nunca são combinadas com a (s) fração (ões) de partículas das fezes.

[0090] De uma maneira adequada, um ou mais do (s) extrato (s) doscorpos dos ácaros e um ou mais do (s) extrato (s) de partículas das fezes são misturados com a finalidade de obter uma mistura de extratos de alérgenos.

[0091] De preferência, a mistura de extrato de alérgeno dos ácaroscompreende o (s) extrato (s) dos corpos de Der p, o (s) extrato (s) dos ácaros de partículas das fezes de Der p, extrato (s) dos corpos dos ácaros Der f e extrato (s) de partículas das fezes de Der f 2.

[0092] Para preparar o extrato de mais do que uma fração doscorpos dos ácaros podem ser combinados de acordo com a etapa b) seguido da extração de acordo com a etapa c).

[0093] Também mais do que uma fração de partículas dos ácarosdas fezes podem ser combinadas de acordo com a etapa b) seguido da extração de acordo com a etapa c).

[0094] De uma maneira alternativa, uma fração dos corpos dosácaros obtida na etapa a) é submetido à extração e/ou à fração de partículas dos ácaros das fezes obtidas na etapa a) é submetida à extração.

[0095] De uma maneira adequada, um ou mais do (s) extrato (s) doscorpos dos ácaros obtidos na etapa c) é misturado em uma etapa e) com um ou mais do (s) extrato (s) de partículas das fezes dos ácaros obtidos na etapa c).

[0096] De uma maneira adequada um dos corpos de extrato dosácaros obtido na etapa c) é misturado em uma etapa e) com um extrato das partículas das fezes dos ácaros obtidos na etapa c).

[0097] No método acima como um ou mais do (s) extrato (s) doscorpos dos ácaros obtidos na etapa c) podem ser misturados na fase e) com um extrato de partículas das fezes dos ácaros obtidos na etapa c).

[0098] De uma maneira alternativa, um extrato dos ácaros obtido naetapa c) pode ser misturado na etapa e) com um ou mais do (s) extrato (s) de partículas das fezes dos ácaros obtidos na etapa c).

[0099] Como usado na presente invenção, o termo "mistura deextratos "inclui a mistura de ambos os lotes inteiros de extratos, bem como as partes de lotes inteiros.

[00100] De acordo com uma modalidade preferida da presente invenção, o (s) extrato (s) do corpo dos ácaros é (são) suplementado (s) com uma quantidade de extrato de partículas das fezes que é suficiente com a finalidade de conseguir a proporção desejada em peso do alérgeno do grupo 1 ao alérgeno do grupo 2 na mistura de extratos de alérgeno do ácaro.

[00101] Em uma outra modalidade preferida da invenção, o extrato de corpo do ácaro já tem uma quantidade quase equivalente de alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 em peso, e não precisa de ser misturado com o extrato das partículas das fezes dos ácaros.

[00102] O coeficiente de variação (CV) é calculado como a proporção entre o desvio padrão para a meio ."':a

[00103] Às vezes, é expresso em percentagem, caso em que o CV é multiplicado por 100.

[00104] O CV é usado com a finalidade de descrever a melhor consistência de lote-a-lote do extrato e dos produtos farmacêuticos (diagnóstico ou terapêutico), de acordo com a presente invenção.

[00105] Os intervalos de Confiança (IC) tais como 95% podem ser utilizados.Cultivo dos ácaros:

[00106] Um número de dietas adequado para o crescimento dos ácaros é conhecido e têm havido numerosos estudos sobre a eficácia dos diferentes ingredientes de meio de cultura tais como leveduras, albuminas, alimentos para animais, alimentos para peixes (TetraMin), os derivados de escalas de pele humana, peles de porco, ovos de artémia, germes de trigo, comida de rato, alimentos para cães, fígado dos animais em pó, hidrolisado de proteínas do leite, vitaminas, minerais, hidrolisado de proteína e farinha de soja.

[00107] As dietas dos ácaros são, por exemplo, descritas em International Journal of Acarologia, Vol. 8, N ° 3 (1982), p. 189 a 192, Rodriques, Recent Advances in Aacarolgy, vol. 11 (1979), 211 a 216, Batard et ai., Int Arch Allergy Immunol. 140 (2006) p. 295 a 305, Yi et al,. Asian Pacific Journal of Allergy and Immunology, 17 (1999), p. 189 a 194, Arlian et al., J. Allergy. Clin. Immunol, No. 3 (1987), p. 457 a 66, e patente EP No.1236394.

[00108] Um exemplo de um meio para a criação dos ácaros que compreende uma mistura de 1: 1 de levedura e Daphnia seco é descrito em Dust Mites por Matthew Colloff (2009), p. 270. Outro exemplo de um meio para a criação dos ácaros é como descrito na patente EP No. 1236394.

[00109] Prefere-se utilizar um hidrolisado de proteínas, bem como outros ingredientes que são de baixo risco alergênico, a fim de reduzir a possibilidade das reações anafiláticas em pacientes que apresentam sensibilidade à alérgeno. É ainda preferível utilizar o meio do ácaro que não contêm proteína animal ou humana.

[00110] De uma maneira adequada, o meio do ácaro é utilizado sob a forma de partículas que são de tamanho suficiente e integridade com a finalidade de suportar os rigores do processamento a jusante e ser facilmente eliminados por meio do processo de rastreio primário.

[00111] As duas espécies dos corpos dos ácaros Der p e Der F sempre são cultivadas em recipientes separados, mas podem ser cultivadas em um meio do mesmo ácaro. Exemplos de recipientes incluem recipientes de vidro ou de plástico de tamanho e forma adequados, tais como fly-bottles. Os recipientes descartáveis para os ácaros da cultura são, por exemplo, descritos no WO2008/119762.

[00112] Os ácaros são cultivados em recipientes com meio de cultura e são colocados em um ambiente de controle controlando a temperatura e humidade do ambiente ao redor das culturas em crescimento dos ácaros. As condições adequadas para Der p e Der f estão descritas, por exemplo, em uma série de artigos, tais como por Fain et al (ISBN 9071868-12-5) e por Crowther: Exp. Appl Acarol. 2007 ; 41 (1-2) : 61 a 86.

[00113] Um conjunto apropriado de parâmetros para as condições de cultura para cada uma das espécies dos ácaros é fornecido na tabela 1a abaixo.

Tabela 1a

[00114] As contagens microscópicas de crescimento e viabilidade são realizadas durante o cultivo ou a fim de identificar o momento ótimo para a colheita dos ácaros.

[00115] A morte da cultura pode ser realizada por meio dacongelação. Os ácaros também podem ser mortos, por exemplo, por meio da asfixia com, por exemplo, acetona. Os recipientes de armazenagem com a cultura dos ácaros mortos são armazenados à temperatura de -20°C até processamento adicional.Purificação da cultura dos ácaros:

[00116] As culturas dos ácaros são descongeladas e secas e peneiradas com a finalidade de obter as frações da cultura do ácaro contendo os componentes de diferentes tamanhos. A secagem pode ser realizada por meio do fluxo de ar até que a humidade seja inferior a 20%, mais preferido de 15%

[00117] A cultura do ácaro pode ainda ser purificada e corpo do ácaro ou frações das fezes isoladas utilizando as técnicas de separação, incluindo a peneiramento (por exemplo utilizando as malhas de 1 mm, 500 um, 250 um, 100 um de um agitador de peneira), suspensões de cloreto de sódio saturadas, e a suspensão de etanol, consulte, por exemplo Dust Mites por Mateus Colloff (2009), p. 271.

[00118] Em uma modalidade, a (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros e a (s) fração (ões) de partículas das fezes dos ácaros pode (m) ser preparada (s) por meio da peneiramento da cultura do ácaro com a finalidade de produzir quatro frações:a) grandes partículas do meio > 350 μMb) fração do corpo do ácaro 350 a 90 μMc) aglomerados de fezes e de partes dos ácaros 90 a 50 μM d) partículas das fezes < 50 μm

[00119] É dentro destes intervalos de tamanho dos diferentes componentes da cultura dos ácaros, tais como os corpos dos ácaros, as partículas das fezes e as partículas do meio, etc são geralmente encontradas. As frações da cultura dos ácaros isoladas dentro de um intervalo de tamanhos diferentes dos intervalos de tamanho referidos acima podem também ser úteis de acordo com a presente invenção, desde que seja possível preparar as frações de corpo do ácaro e as partículas das fezes que são suficientemente puras e em quantidade suficiente.

[00120] As frações a) e c) são descartadas. A fração d) pode ser utilizada, de uma maneira direta, no processo de extração e a fração b) é submetida à purificação adicional antes da extração.Purificação da fração do corpo do ácaro:

[00121] Um método para a purificação dos corpos dos ácaros a partir das partículas do meio por meio da flutuação em um líquido adequado que foi descrito anteriormente, Patente GB. No. 1318560, na página 3. J. Med. Chem. Entomol. (1979), Vol.16, No. 2, p. 128 a 132 descreve a flotação em álcool (etanol) para a separação dos corpos dos ácaros a partir das partículas do meio dos ácaros.

[00122] Foi agora encontrado que a centrifugação de densidade repetida da fração de corpo do ácaro em um líquido adequado produz uma fração de corpo do ácaro de alta pureza que quando extraído produz um extrato com mais alérgeno do grupo 2 do que o alérgeno do grupo 1 em peso, ou uma quantidade igual, em peso, do alérgeno do grupo 1 e do alérgeno do grupo 2.

[00123] Dessa maneira, a presente invenção também se refere a um método para o isolamento e para a purificação dos corpos dos ácaros que compreende as etapas de:i) isolamento da (s) fração (ões) do corpo do ácaro a partir de cultura (s) do ácaro Der p e/ou Der f eii) sujeição de uma ou mais da (s) fração (ões) de corpo do ácaro (s) Der p, ou uma ou mais da (s) fração (ões) de corpo do ácaro (s) Der f, a centrifugação de densidade em um primeiro meio líquido tendo iia) uma densidade maior do que os corpos dos ácaros e uma densidade mais baixa do que o meio de cultura à temperatura utilizada durante a centrifugação, eiii) recolha dos corpos dos ácaros a partir da superfície do dito primeiro meio líquidoe repetição da etapa ii) e iii) até que a pureza desejada dos ácaros tenha sido alcançada, opcionalmente seguido poriv) lavagem dos corpos dos ácaros com a finalidade de remover o referido primeiro líquido com um segundo líquido que não extrai o alérgeno do grupo 1 e do grupo 2 a partir dos ácaros, à temperatura utilizada durante a etapa de lavagem.

[00124] De preferência, os primeiro e segundo líquidos no processo acima não contém água (anidro) para limitar a extração de alérgenos a partir do material de base na etapa de purificação instantânea do material base. Em uma outra modalidade, o método para o isolamento e para a purificação dos corpos dos ácaros da etapa ii) de sujeição de uma ou mais da (s) fração (ões) de corpo do ácaro (s) Der p, ou uma ou mais da (s) fração (ões) de corpo do ácaro (s) Der f, a centrifugação de densidade em um primeiro meio líquido é efetuada com um primeiro líquido que tem iia) uma densidade maior do que os corpos dos ácaros e uma densidade mais baixa do que os meios de cultura e as partículas IIB) não extraem a forma do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 dos corpos do ácaro à temperatura utilizada durante o centrifugação ;

[00125] Os líquidos adequados incluem os derivados do ácido metrizóico (como iohexol, Nycodenz ® (N-2,3-di-hidroxipropilacetamido- 2,4,6-tri-iodo-NN-bis (2,3-di-hidroxipropil)), polipropilenoglicóis (como ARCOL ® ( polipropilenoglicol 4000), composições à base de sílica (como RediGrad ®)

[00126] É difícil evitar completamente alguma extração do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 dos ácaros durante o processo de centrifugação acima. De acordo com a presente invenção, os líquidos que não extraem o alérgenos do grupo 1 e do grupo 2 dos corpos ácaros são líquidos que não extraem os alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 dos corpos dos ácaros à temperatura utilizada na etapa ii) e iv) acima, em uma quantidade que afeta o rendimento final e a proporção do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2.

[00127] A extração do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 dos ácaros durante o processo de centrifugação pode ser reduzida efetuando a centrifugação a uma temperatura baixa, por exemplo, temperatura de congelação.

[00128] Em uma modalidade preferida, o líquido que tem uma densidade mais elevada do que os corpos dos ácaros e menor do que as partículas de meios de cultura é um líquido anidro, por exemplo, glicerol anidro.

[00129] O glicerol pode ser removido a partir dos corpos dos ácaros por meio da lavagem com etanol, de preferência etanol anidro.

[00130] A etapa ii) e iii) adequadas são repetidas uma vez ou a centrifugação em glicerol é repetida até que a fração de corpo do ácaro obtida seja composta por pelo menos 70% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 85% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 90% corpos v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros e de preferência mais do que 98% de v/v dos corpos dos ácaros e a fração do corpo do ácaro contendo abaixo de 20% de v/v das partes dos ácaros, as partículas das fezes e as partículas do meio e abaixo de 10% em v/v de partículas do meio.

[00131] Em vez de centrifugação de densidade com glicerol como descrito na etapa ii) e iii) a fração de corpo do ácaro pode ser purificada por meio da separação com solução de NaCl saturada, como o primeiro líquido até que a fração de corpo do ácaro é composta de, pelo menos, 70% em v/v dos corpos dos corpos, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 85% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros e de preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros e contêm menos de 20% em v/v das partes dos ácaros, partículas das fezes e partículas do meio e inferior a 10% de v/v de partículas do meio sem a necessidade de aplicação de etapa iv) .

[00132] Em vez da centrifugação de densidade da fração de corpo do ácaro poder ser purificada por meio da passagem por crivo até que a fração do corpo do ácaro seja composta de, pelo menos, 70% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 85% corpos v/v, de preferência mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros e de preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros e contem menos de 20% em v/v de partes dos ácaros, partículas das fezes e partículas do meio e inferior a 10% em v/v de partículas do meio.

[00133] Os corpos dos ácaros podem estar em uma dimensão de mais do que 400 m de comprimento, mas pode, contudo, serem capazes de passar através de 300 a 400 um de peneira, quando eles são secos antes da peneiramento.

[00134] Os ácaros têm pernas e cabelo e podem ser separados a partir de partículas do meio dos ácaros em peneiramento com um movimento horizontal circular. O método tira vantagem da capacidade dos ácaros para formar emaranhados formados com os cabelos e as pernas quando movidos horizontalmente sobre uma peneira. Em uma torre de peneiramento, que é movida horizontalmente em círculos, os ácaros são capturados no topo das peneiras de malha 200, 300 e/ou a 400 uM e é deste modo separado das partículas de cultura de outros ácaros, com um tamanho entre 150 e 300 um.

[00135] Dessa maneira, em uma alternativa para o método de centrifugação da fração rica em corpo do ácaro entre 90 e 350 um isolado no processo de peneiramento acima pode ser purificado por meio do seguinte método:1) peneiramento de culturas de ácaro Der f ou Der p em uma vibração de peneiramento com uma torre de peneira de malha 300, 150 e 80 uM, seguido por meio do isolamento de uma fração rica em corpo do ácaro entre 150 um e 300 um e uma fração rica das partículas das fezes do ácaro abaixo de 80 pm, seguido por2) peneiramento da fração rica em corpo do ácaro (150 um e 300 um) em um agitador de peneiras com um movimento horizontal e circular e com uma torre de peneiras de malha 200, 300 e/ou 400 uM e isolando a (s) fração (ões) rica (s) em corpo capturado pelas peneiras de malha de 200, 300 e/ou 400 uM, seguido por3) peneiramento da fração rica em corpo em um agitador de peneira com movimento de arremesso 3D e uma peneira de malha 300, 200, 150 e 100 com a finalidade de produzir uma fração de malha entre 150 e 300 dos ácaros e um extrato das partículas das fezes do ácaro abaixo de 100 um; eopcionalmente, a combinação da fração de partículas inferior a 80 da peneira vibratório e a fração de partículas das fezes abaixo de 100 um a partir da peneira com o movimento de arremesso 3D e submetendo a fração combinada das fezes de peneiramento na peneira com o movimento de arremesso 3D e uma torre de peneiras de malha de 100 , 80 e 50 mM.

[00136] As frações dos corpos dos ácaros b) obtidas acima podem também ser purificadas por meio das etapas 2 e 3 no processo mencionado acima.

Extração

[00137] As frações dos ácaros e partículas das fezes dos ácaros são extraídas de forma mais ou menos da mesma maneira mas em processos separados, porque as condições ótimas para a extração dos ácaros não são as mesmas que para as partículas das fezes dos ácaros.

[00138] A fim de extrair os alérgenos dos ácaros e as partículas das fezes dos mesmos, os corpos têm de ser rompidos para liberar os alérgenos. O craqueamento pode ser conseguido através da aplicação de uma força externa, a uma suspensão dos corpos dos ácaros.

[00139] De acordo com a presente invenção, verificou-se que um misturador de alto corte é particularmente eficaz para quebrar e liberar os alérgenos dos ácaros e partículas das fezes.

[00140] Dessa maneira, de acordo com uma modalidade da presente invenção, a extração dos alérgenos é levada a cabo por meio da suspensão dos ácaros ou as partículas das fezes dos ácaros em um tampão com um misturador de cisalhamento elevado (tipicamente de 15 a 30 minutos) e, em seguida, permitindo que a extração prossiga sem a mistura (tipicamente durante 1 a 6 horas).

[00141] A liberação de alérgenos é diferente para ácaros e partículas das fezes. Os alérgenos nas partículas das fezes são extraídos após 1 hora de extração enquanto que pelo menos 3 horas são necessárias para extrair os alérgenos dos ácaros.

[00142] Os tampões para extração de alérgenos dos ácaros são bem conhecidos na técnica.

[00143] A fonte de material alergénico (corpo do ácaro e/ou partículas das fezes dos ácaros), por exemplo, pode ser extraída através de um tampão de extração contendo NaCl a 0,15 M, NaHCO3 a 0,012 M e NaOH/HCl/água para se ajustar o pH. A extração é efetuada de uma maneira adequada utilizando uma proporção entre o tampão de extração e a fonte de material alergénico de 1: 10 (p/p) um pH de 7 a 8, a uma temperatura entre 4 a 12°C e um tempo de extração de entre 1 a 6 horas.

[00144] Estes extratos podem ser submetidos à purificação adicional antes de serem utilizados em um produto farmacêutico.

[00145] O restante do material insolúvel pode, por exemplo, ser removido a partir do extrato de partículas das fezes dos ácaros por meio da centrifugação e clarificação. O extrato das partículas das fezes do ácaro pode depois ser submetido a ultrafiltração realizada em três etapas: Primeira concentração por meio da eliminação de água e de outras moléculas pequenas, por meio de filtração de fluxo tangencial, seguida de diafiltração com a finalidade de remover as pequenas moléculas e seus sais e ajustamento posterior de matéria seca.

[00146] O extrato de alérgeno pode depois ser clarificado por meio da filtração de clarificação.

[00147] A purificação posterior dos extratos dos corpos dos ácaros de uma maneira adequada envolve os seguintes processos: A separação usando a diafiltração deixando a matéria insolúvel na membrana e continuamente a adição de água ao extrato, do outro lado da membrana. O extrato é em seguida submetido a ultra-filtração e clarificação, tal como descrito acima.

[00148] Os extratos podem ser estabilizados através da formação de bolas congeladas de extratos (criogrânulos), conforme descrito no documento WO 05/058474.

[00149] A concentração do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 nos extratos dos ácaros e partículas das fezes dos ácaros pode ser medida por meio de uma série de métodos convencionalmente utilizados para a medição do teor de alérgeno, incluindo, por exemplo, ELISA, RID/SRID (imunodifusão radial simples) ou MS (espectrometria de massa, por exemplo, tal como descrito no documento WO 2007/031080), consulte também o que já foi mencionado anteriormente.

[00150] O princípio do processo de RID é que as proteínas (antígenos) aplicadas em saídas circulares bem difusas formando um gradiente de concentração de um gel de agarose contendo o anticorpo correspondente. O anticorpo utilizado neste procedimento émonoespecífico (isto é, criado contra um antigênio específico) epoliclonais tornando possível a formação de precipitados de complexos antigênio-anticorpo. O anticorpo está presente em excesso e a difusão do antigênio irá continuar até que o ponto de equivalência seja atingido e um anel de precipitados de antigênio-anticorpo é formado. Em seguida, os anéis de precipitação são corados. A área do precipitado é medida e a concentração de antigênio em amostras desconhecidas pode agora ser interpolada a partir da curva de calibração gerada com um padrão de referência. O conteúdo alérgeno principal é determinado em relação ao padrão de referência (consulte, Allergy Methods and Protocols, Jones e Lympany (2008), p.138 a 141, p.152 a 153 e p. 159 a 161).

[00151] Os diferentes métodos de sanduíche ELISA (ensaio imunossorvente ligado à Enzima) podem ser utilizados para determinação do teor principal de alérgeno Der p e Der f. Uma para a determinação de Der f 1, uma para determinação de Der p 1 e um para a determinação de Der do grupo 2, desde que os dois grupos de dois principais alérgenos sejam imunoquimicamente idênticos.

[00152] Os anticorpos monoclonais específicos para o alérgeno principal (Der f 1, Der p 1, Der do grupo 2) são adsorvidos às cavidades de uma placa de microtitulação de 96 cavidades. Os mAbs reconhecem osepitopos do alérgeno principal e se ligam ao alérgeno presente na amostra. O anticorpo-antigênio ligado é lavado e um alérgeno principal de peroxidase marcado com anticoelho de corpo IgG de é adicionado. Por meio daadição de substrato de enzima, uma reação de cor irá desenvolver, que é de uma maneira direta proporcional ao conteúdo de alérgeno principal acoplado. Uma curva padrão é também analisada na corrida analítica e a atividade de alérgeno principal é interpolada na curva de calibração. Após a uso de um padrão interno, o Centro de Avaliação e Pesquisa Biológica FDA usa uma competição ELISA, como descrito em " in "Potency Limits for Standardized Dust Mite and Grass Allergen Vaccines: A revised protocol. 2000(http://www.fda.gov/BiologicsBloodVaccines/GuidanceComplianceReg ulatoryInformation/Guidances/Allergenics/ucm071931.htm) para a rotulagem da potência dos produtos alergênicos.

[00153] Em uma outra modalidade preferida, a concentração do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 é medida por MS (espectrometria de massa), como descrito no documento WO 2007/031080 utilizando os peptídeos de calibração padrão seguintes: TNACSINGNAPAEIDLR (Der p 1) SEQ ID NO: 1, NSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQYPYVVIM (Der f 1), SEQ ID NO: 2,VLVPGCHGSEPCIIHR (Der p 2) SEQ ID NO: 3. GKPFTLEALFDANQNTK (Der f 2) SEQ ID NO: 4, e GIEYIQQNGVVEER (Der f 1), SEQ ID NO: 5

[00154] Quando a concentração do alérgeno do grupo 1 e do alérgeno do grupo 2 foi determinada por meio de uma série de extratos dos ácaros, extratos de corpo do ácaro e extratos das partículas das fezes são misturados para conseguir a proporção desejada em peso entre o alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2.

[00155] A determinação de quais extrato e o peso dos referidos extratos a ser misturado é um processo interativo em que os valores em peso dos extratos de lotes diferentes a serem usados é determinado e preenchido com a seguinte fórmula para Der f até que a proporção desejada seja alcançada:Proporção de alérgeno principal = grupo 1 Total /grupo Total 2 = MF1 x Cf1grp1 + MB1 x Cb1grp1 + mf2 x Cf2grp1 + /MF1 xCf1grp2 + MB1 x Cb1grp2 + mf2 x Cf2grp2 +

[00156] Onde MF1 é a massa do primeiro extrato de partículas das fezes de Der f utilizado, mf2 é a massa do segundo extrato das fezes Der f utilizado etc ... Cf1grp1 é a concentração de alérgeno do grupo 1 em MF1, Cf2grp1 é a concentração do alérgeno do grupo 1 dos segundos extratos das fezes utilizados, MB1 é o primeiro extrato do corpo do ácaro usado e Cb1grp1 é a concentração de alérgeno do grupo 1 em MB1. Cf1grp2 é a concentração do alérgeno do grupo 2 em MF1, Cb1grp2 é concentração de alérgeno em MB1 e Cf2grp2 é a concentração de alérgeno do grupo 2 em mf2 etc

[00157] Uma fórmula semelhante para Der p é usada com a finalidade de determinar qual e quanto extrato da mistura de modo a formar um extrato com a proporção desejada do alérgeno do grupo 1 em referência ao alérgeno do grupo 2.

[00158] Os extratos individuais são descongelados e misturados de acordo com a fórmula acima.

[00159] A mistura dos extratos de alérgenos pode ser estabilizada e armazenada como gotículas congeladas, como descrito no WO 05/0058474 ou utilizado de uma maneira direta na formulação.

[00160] Os extratos são normalmente submetidos a processos de normalização que envolvem uma série de testes, por exemplo, um teste de potência, antes que eles sejam de liberação para a formulação.

[00161] A mistura de extratos de alérgeno do ácaro pode ser utilizada como o ingrediente ativo em uma formulação de dosagem sólida para administração sublingual, tal como descrito no WO 04/77994.

[00162] De uma maneira alternativa, a mistura de extratos dealérgeno pode ser formulada como uma formulação líquida para administração sublingual na forma de gotas. Tal formulação compreende, tipicamente, cerca de 50% de glicerol, NaCl e NaOH.

[00163] A mistura pode também ser formulada como uma formulação líquida para injeção subcutânea. O extrato pode ser administrado quer como uma formulação líquida aquosa, sem adjuvantes ou com um adjuvante tal como um hidróxido de alumínio.

[00164] Os alergoides podem ser preparados por meio dos extratos reticulados com um agente de reticulação, que é, tipicamente, um aldeído, tal como o glutaraldeído. Os processos para a preparação de alergoides são conhecidos na técnica.

[00165] Outras modalidades de acordo com a presente invenção:

[00166] Modalidade 1. Um produto farmacêutico compreendendo um extrato de alérgeno ou um alergoide dos mesmos, que compreende pelo menos um extrato dos ácaros selecionados entre os seguintes grupos a) a b):a) um extrato dos corpos dos ácaros Der p,b) um extrato dos corpos dos ácaros Der f,e pelo menos um extrato de culturas dos ácaros selecionados a partir dos seguintes grupos c) a g): c) um extrato de partículas das fezes de Der p,d) um extrato de partículas das fezes de Der f,e) um extrato de cultura do ácaro inteiro Der f ,f) um extrato de uma cultura do ácaro inteiro Der p,g) uma combinação de extratos de c) a f).

[00167] Modalidade 2. Um produto farmacêutico compreendendo um extrato de alérgeno ou do alergoide dos mesmos, que compreende pelo menos um extrato dos corpos dos ácaros selecionados entre os seguintes grupos a) a b):a) um extrato dos corpos dos ácaros Der p,b) um extrato dos corpos dos ácaros Der f,e pelo menos um extrato de partículas das fezes dos ácaros selecionados entre os seguintes grupos c) a d):c) um extrato de partículas das fezes de Der p,d) um extrato de partículas das fezes de Der f.

[00168] Modalidade 3. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 2,em que o extrato dos corpos dos ácaros Der p é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que a (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 75% de v/v do ácaros Der p, mais preferencialmente mais do que 80% emv/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 85% emv/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 90% emv/v dos corpos dos ácaros Der p, de prefrência mais do que 95% em v/vdos corpos dos ácaros Der p e de preferência mais do que 98% de v/v dos ácaros Der p e/ouo extrato dos ácaros Der f é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros das ditas frações que compreendem mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 85% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, mais de preferência, mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, e de preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der f.

[00169] Modalidade 4. Um produto farmacêutico compreendendo extrato de alérgeno, o qual compreende os alérgenos selecionados de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 e em que o alérgeno presente em uma menor concentração (p/v) no extrato de alérgeno, está presente em uma concentração que é superior a 50% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 60% da concentração selecionada a partir de alérgeno Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 70% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 80% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presentes nas alturas concentração (p/v), mais preferencialmente superior a 85% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferivelmente acima de 90% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 95% da concentração do alérgeno Der f selecionado a partir de 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), de preferência acima de 98% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada (p/v), ou o mais preferido acima de 99% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada (p/v ).

[00170] Modalidade 5. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 4 compreendendo um extrato dos corpos dos ácaros Der p e um extrato de partículas das fezes de Der p.

[00171] Modalidade 6. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 4 compreendendo um extrato dos ácaros Der f e um extrato de partículas das fezes de Der f.

[00172] Modalidade 7. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 4 compreendendo um extrato dos corpos dos ácaros Der p e um extrato dos ácaros Der f.

[00173] Modalidade 8. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 7 compreendendo um extrato dos corpos dos ácaros de Der p, um extrato de partículas das fezes de Der p, um extrato dos ácaros Der f e um extrato das partículas das fezes de Der f 2.

[00174] Modalidade 9. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 4 a 8, em que o extrato dos corpos dos ácaros Der p é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que a (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferênciamais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferênciamais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferênciamais do que 85% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferênciamais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência, mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der p e mais preferido de 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, e/ou

[00175] o extrato dos ácaros Der f é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros das ditas frações que compreendem mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 85% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, mais de preferência, mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, e de preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der f.

[00176] Modalidade 10. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 9, em que o extrato dos corpos dos ácaros Der p é preparado a partir de uma fração de corpo do ácaro Der p ou Der p das frações combinadas do corpo dos ácaros e em que a extração da (s) dita (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros resultam em um extrato compreendendo as quantidades iguais em massa do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 ou mais alérgeno do grupo 2 do que alérgeno do grupo 1 e/ou o extrato dos ácaros Der f é preparado a partir de uma fração do corpo do ácaro de Der f ou as frações do corpo do ácaro de Der f mais combinada e em que a extração da (s) dita (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros resultam em um extrato compreendendo, em peso, quantidades iguais em peso do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 ou mais alérgeno do grupo 2 do que alérgeno do grupo 1.

[00177] Modalidade 11. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 10, em que o extrato dos corpos dos ácaros Der p é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros da (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros Der p,de preferência mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros Der p,de preferência mais do que 85% em v/v dos corpos dos ácaros Der p,de preferência mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros Der p,de preferência, mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der p e mais preferido de 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, e/ou

[00178] o extrato dos corpos dos ácaros Der f é preparado a partir deuma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros dasditas frações que compreendem mais do que 70% em v/v dos corpos preferência mais do que preferência mais do que preferência mais do que preferência mais do que75% em v/v dos corpos80% em v/v dos corpos85% em v/v dos corpos90% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, mais de preferência, mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, e de preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der f.

[00179] Modalidade 12. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 11, em que

[00180] o extrato de partículas das fezes de Der p é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que a (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferência mais do que 75% de v/v de Der p das fezes partículas, de preferência mais do que 80% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferência mais do que 85% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferência mais do que 90% de v/v de partículas das fezes de Der p, mais de preferência, mais do que 95% de v/v Der p partículas das fezes, de preferência mais do que 98% de v/v de partículas de Der p das fezes e/ou

[00181] o extrato de partículas das fezes de Der f é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que a (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência, mais do que 75% de v/v de Der f das fezes partículas, de preferência, mais do que 80% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência mais do que 85% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência mais do que 90% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência, mais do que 95% de v/v, de preferência mais do que 98% de v/v de partículas das fezes de Der f.

[00182] Modalidade 13. Produto farmacêutico de acordo com a modalidade 12, em que uma fração ou as frações dos corpos dos ácaros e/ou em que uma fração ou as frações de partículas das fezes dos ácaros cada compreende menos de 10% de v/v de meio de cultura do ácaro.

[00183] Modalidade 14. Produto farmacêutico de acordo com a modalidade 13, em que a fração de corpo do ácaro ou as frações combinadas do corpo compreende até 20% em v/v das partes dos ácaros (por exemplo, pernas), partículas das fezes e ácaros do médio.

[00184] Modalidade 15. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 12 a 14, em que a fração das fezes dos ácaros ou frações combinadas das fezes compreende até 20% em v/v das partes dos ácaros (por exemplo, pernas) e do meio dos ácaros.

[00185] Modalidade 16. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 15, em que a quantidade em peso do alérgeno do grupo 1 é menor do que a quantidade em peso do grupo de alérgeno 2 em extratos de corpo do ácaro e a quantidade em peso do grupo 1 é maior alérgeno do que a quantidade em peso do alérgeno do grupo 2 nos extratos de partículas das fezes dos ácaros.

[00186] Modalidade 17. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 16 que compreende o extrato de alérgeno, o qual compreende os alérgenos selecionados de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 e em que o presente alérgeno em uma menor concentração (p/v) no extrato de alérgeno, está presente em uma concentração que é superior a 50% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada (p/v), mais preferido acima de 60% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 70% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 80% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 85% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada ( p/v), mais preferencialmente superior a 90% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferivelmente acima de 95% da concentração do alérgeno selecionado a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), de preferência acima de 98% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), ou o mais preferido acima de 99% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presentes em uma concentração mais elevada (p/v).

[00187] Modalidade 18. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 17, em que o produto farmacêutico é um comprimido (s) prensado (s) ou não prensado (s) sublingual (is), compreendendo o (s) extrato (s) ou alergoides preparados a partir de um extrato (s), um produto líquido sublingual compreendendo o (s) extrato (s) ou alergoides preparados a partir de extrato (s), ou um produto líquido para injeção compreendendo o (s) extrato (s) ou alergoides preparados a partir de extrato (s).

[00188] Modalidade 19. Produto farmacêutico de acordo com a modalidade 18, em que o produto farmacêutico é um comprimido sublingual de dissolução rápida que compreende um extrato.

[00189] Modalidade 20. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 19, compreendendo ainda um extrato de uma cultura do ácaro inteiro ou uma (s) fração (ões) de corpo com menos de 70% de v/v dos ácaros.

[00190] Modalidade 21. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 20 para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia e asma alérgica causada por ácaros do pó da casa e/ou para o diagnóstico de alergia.

[00191] Modalidade 22. O uso do produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 21, para a preparação de um fármaco para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia e asma alérgica causada por ácaros do pó da casa e/ou para o diagnóstico de alergia.

[00192] Modalidade 23. Uma fração de corpo do ácaro que preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros.

[00193] Modalidade 24. A fração de corpo do ácaro acordo com a modalidade 23, em que os corpos dos ácaros são os corpos dos ácaros Der p ou corpos dos ácaros Der f.

[00194] Modalidade 25. Fração de corpo do ácaro de acordo com qualquer uma das modalidades 23 a 24, contendo menos de 10% em v/v dos meios de cultura das partículas.

[00195] Modalidade 26. Fração de corpo do ácaro de acordo com qualquer uma das modalidades 23 a 25 compreendendo menos de 20% em v/v das partes dos ácaros, partículas das fezes e meio dos ácaros.

[00196] Modalidade 27. Um extrato de uma fração de corpo do ácaro como definido em qualquer uma das modalidades 23 a 26 para uso em um produto farmacêutico para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia e asma alérgica causada por meio dos ácaros do pó da casa.

[00197] Modalidade 28. A fração de partículas das fezes dos ácarosque compreende mais do que 70% em v/v de particulas das fezes, de preferência mais do que 98% de v/v de partículas de fezes.

[00198] Modalidade 29. A fração de partículas das fezes dos ácaros de acordo com a modalidade 28, em que as partículas das fezes são partículas das fezes de Der p ou partículas das fezes de Der f.

[00199] Modalidade 30. A fração de partículas das fezes dos ácaros de acordo com qualquer uma das modalidades 28 a 29 compreendendo até 20% em v/v de partes dos ácaros (por exemplo, pernas) e do meio dos ácaros.

[00200] Modalidade 31. Um extrato de uma fração de partículas das fezes dos ácaros, tal como definido em qualquer uma das modalidades 28 a 30 para uso em um produto farmacêutico para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia e asma alérgica causada por ácaros do pó da casa.

[00201] Modalidade 32. Uso de um extrato de acordo com qualquer uma das modalidades 27 e 31 para a preparação de um fármaco para uso em um produto farmacêutico para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia e asma alérgica causada por ácaros do pó da casa.

[00202] Modalidade 33. Um método para a fabricação de um extrato de alérgeno dos ácaros compreendendo alérgeno Der p 1 e Der p 2, método esse que compreende as seguintes etapas:a. isolar a (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros de Der p a partir de culturas dos corpos dos ácaros Der p, em que a (s) dita (s) fração (ões) compreende (m) mais do que 70% em v/v dos corpos dosácaros Der p, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dosácaros Der p, de prefrência mais do que 80% em v/v dos corpos dosácaros Der p, de preferência mais do que 85% em v/v dos corpos dosácaros Der p, de preferência mais do que 90% de v/v dos ácaros Der p de preferência, mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der p e de preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der p;b. opcionalmente combinar as várias da (s) dita (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros Der p, ec. extração dos alérgenos a partir da (s) dita (s) fração (ões) do corpo do ácaro Der p (s), obtido na etapa a) ou um etapa b) como acima, com a finalidade de obter o dito extrato de alérgeno do ácaro.

[00203] Modalidade 34. Um método para a fabricação de um extrato de alérgeno dos ácaros compreendendo Alérgenos Der f 1 e Der f 2, método esse que compreende as seguintes etapas:a. isolar a (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros Der f a partir de culturas dos ácaros Der f, em que a (s) dita (s) fração (ões) compreende (m) mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, depreferência mais do que 85% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, depreferência mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, depreferência mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der f e depreferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der f ;b. opcionalmente combinar as várias da (s) dita (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros Der f ec. extração dos alérgenos Da (s) dita (s) fração (ões) do corpo der f, obtido na etapa a) ou na etapa b) como acima, com a finalidade de obter o extrato de alérgeno do dito ácaro.

[00204] Modalidade 35. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 34, método esse que compreende ainda a seguinte etapa: a mistura de um ou mais extratos de alérgenos dos ácarosda modalidade 33, com um ou mais extratos de alérgenos dos ácaros da modalidade 34 com a finalidade de obter uma mistura de extratos de alérgeno do ácaro compreendendo o alérgeno Der p 1, Der p 2, Der f 1, e Der f 2.

[00205] Modalidade 36. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 35, método esse que compreende ainda as seguintes etapas:a. isolamento da (s) fração (ões) de partículas de fezes dos ácaros Der p a partir de culturas dos corpos dos ácaros Der p ;b. opcionalmente combinar as várias da (s) dita (s) fração (ões) de partículas de fezes dos ácaros Der p ;c. extração dos alérgenos Da (s) dita (s) fração (ões) das particulas das fezes de Der p, obtido na etapa a) ou de uma etapa b), como acima ;d. mistura de um ou mais extratos de alérgenos dos ácaros de qualquer uma das modalidades 33 a 35, com um ou mais do (s) extrato (s) de partículas das fezes tal como obtido na etapa a c) acima, com a finalidade de obter uma mistura de extratos de alérgeno do ácaro.

[00206] Modalidade 37. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 36, método esse que compreende ainda as seguintes etapas:a. isolamento da (s) fração (ões) de partículas das fezes dos ácaros Der f de culturas de ácaros Der f ; b. opcionalmente combinar as várias da (s) dita (s) fração (ões) de partículas das fezes dos ácaros Der f ;c. extração dos alérgenos da (s) dita (s) fração (ões) das particulas das fezes de Der f, obtido na etapa a) ou etapa b), como acima ;d. mistura de um ou mais extratos de alérgenos dos ácaros de qualquer uma das modalidades 33 a 35, com um ou mais do (s) extrato (s) de partículas das fezes tal como obtido na etapa a c) acima, com a finalidade de obter uma mistura de extratos de alérgeno do ácaro.

[00207] Modalidade 38. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 37, método esse que compreende ainda a etapa seguinte: a mistura de um ou mais extratos de alérgenos dos ácaros da modalidade 33 e modalidade 34, com um ou mais extratos de alérgenos dos ácaros da etapa c, na modalidade 36 e da etapa c, na modalidade 37 com a finalidade de se obter uma mistura de extratos de alérgeno do ácaro compreendendo alérgenos de Der p 1, Der p 2, Der f 1, e Der f 2.

[00208] Modalidade 39. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 38, em que o extrato de alérgeno de ácaro obtido é convertido para um alergoides dos mesmos.

[00209] Modalidade 40. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 39, método esse que compreende uma etapa adicional dea. medição da concentração (p/v) do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 em extratos do alérgeno dos ácaros da etapa c) de qualquer uma das modalidades 33 a 34 e 36 a 37.

[00210] Modalidade 41. Método de acordo com a modalidade 40, método esse que compreende uma etapa adicional dee) mistura de um ou mais extratos dos corpos dos ácaros da etapa c) de qualquer uma das modalidades 33 a 34, com um ou mais do (s) extrato (s) das partículas de fezes da etapa c) de acordo com qualquer uma das modalidades 36 a 37 com a finalidade de obter uma mistura de extratos de alérgenos dos ácaros, com uma quantidade predeterminada em peso do alérgeno do grupo 1 em referência ao alérgeno do grupo 2.

[00211] Modalidade 42. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 41, em que a mistura de extrato de alérgeno dos ácaros compreende extrato (s) dos corpos de Der p, extrato (s) dos ácaros de partículas das fezes de Der p, extrato (s) dos corpos dos ácaros Der f e extrato (s) das partículas das fezes de Der f 2.

[00212] Modalidade 43. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 42, em que mais do que uma das frações dos ácaros são combinadas de acordo com a etapa b) seguida de extração de acordo com a etapa c) das modalidades 33 e/ou 34.

[00213] Modalidade 44. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 43, em que mais do que uma fração de partículas das fezes são combinadas de acordo com a etapa b) seguido de extração de acordo com a etapa c) das modalidades 36 e/ou 37.

[00214] Modalidade 45. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 44, em que um ou mais do (s) extrato (s) dos corpos dos ácaros obtidos na etapa c) da modalidade 33 e/ou 34 é misturado, na fase e) com um ou mais do que extrato (s) de partículas das fezes dos ácaros obtidos na etapa c) das modalidades 36 e/ou 37.

[00215] Modalidade 46. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 45, em que um ou mais do (s) extrato (s) dos corpos dos ácaros obtidos na etapa c) da modalidade 33 e/ou 34 é misturado, na fase e) com um extrato de partículas das fezes dos ácaros obtidos na etapa c) das modalidades 36 e/ou 37.

[00216] Modalidade 47. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 46, em que o extrato de um dos corpos dos ácaros obtido na etapa c) da modalidade 33 e/ou 34 é misturado em uma etapa com um ou mais do (s) extrato (s) de partículas das fezes dos ácaros obtidos na etapa c) das modalidades 36 e/ou 37.

[00217] Modalidade 48. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 47, em que um extrato (s) de corpo do ácaro é suplementado com uma quantidade, em peso de extrato de partículas das fezes, um extrato de corpo a partir de uma fração de massa de menos de 70% de v/v ou toda uma cultura do extrato, o que é suficiente para alcançar um desejado um grupo de alérgenos do grupo 2 em proporção em peso da mistura de extratos de alérgeno do ácaro.

[00218] Modalidade 49. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 48, em que

[00219] o extrato de partículas das fezes de Der p na etapa c) das modalidades 36 é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que a (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferência mais do que 75% de v/v de partículas das fezes de Der p, de preferência mais do que 80% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferência mais do que 85% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferência mais do que 90% de v/v de partículas das fezes de Der p, mais preferidas mais do que 95% de v/v de partículas das fezes de Der p, de preferência mais do que 98% de v/v de partículas das fezes de Der p e/ou

[00220] o extrato de partículas das fezes de Der f na etapa c) da modalidade 37 é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que a (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência mais do que 75% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência, mais do que 80% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência mais do que 85% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência mais do que 90% de v/v de partículas das fezes de Der f, mais preferido de 95% de v/v, mais preferencialmente mais do que 98% de v/v de partículas das fezes de Der f.

[00221] Modalidade 50. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 49, em que uma fração dos corpos dos ácaros na etapa a) ou as frações combinadas dos ácaros na etapa b) das modalidades 33 e/ou 34 e/ou em que uma fração de partículas das fezes na etapa a) ou as frações de partículas das fezes dos ácaros na etapa b) das modalidades 36 e/ou 37 cada uma compreende menos de 10% em v/v de meio de cultura do ácaro.

[00222] Modalidade 51. Método de acordo com a modalidade 50, em que a fração de corpo do ácaro na etapa a) ou as frações combinadas do corpo na etapa b) das modalidades 33 e/ou 34 compreende até 20% em v/v das partes dos ácaros (por exemplo, pernas), partículas das fezes e meio dos ácaros.

[00223] Modalidade 52. Método de acordo com a modalidade 50, em que a fração das fezes dos ácaros na etapa a) ou as frações combinadas de fezes na etapa b) das modalidades 36 e/ou 37 compreende até 20% em v/v das partes dos ácaros (por exemplo, pernas) e do meio dos ácaros.

[00224] Modalidade 53. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 52, em que a (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros da modalidade 33 e/ou 34, e a (s) fração (ões) de partículas das fezes dos ácaros na etapa a) das modalidades 36 e/ou 37 está isolada a partir da cultura do ácaro (s) por meio da peneiramento do Der p e/ou Der f da (s) cultura (s) do ácaro com a finalidade de produzir uma fração do corpo do ácaro b) e uma fração de partículas das fezes dos ácaros d).

[00225] Modalidade 54. Método de acordo com a modalidade 33 a 53, em que a (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros e a (s) fração (ões) de partículas das fezes dos ácaros é obtida por meio da peneiramento da Der p e/ou a (s) cultura (s) do ácaro Der f com a finalidade de produzir quatro frações:a. grandes partículas do meio > 350 uMb. fração de corpo do ácaro 350 a 90 μMc. aglomerados e partes das fezes dos ácaros 90 a 50 uMd. partículas das fezes < 50 μme. fração a) e c) são descartadas, fração d) e b) podem opcionalmente ser submetidas a qualquer purificação adicional ou usado de uma maneira direta para a extração.

[00226] Modalidade 55. Método de acordo com a modalidade 54, em que a fração do corpo do ácaro b) é a seguinte:ii) submeter à centrifugação de densidade, em um primeiro meio líquido tendo uma densidade mais elevada do que os corpos dos ácaros e uma menor densidade do que as partículas de meios de cultura, seguido pelaiii) recolha dos ácaros do referido meio líquido antes de repetir a etapa ii) e iii) até que a pureza desejada dos ácaros venha ser alcançada, opcionalmente seguido poriv) lavagem dos corpos dos ácaros com a finalidade de remover o referido primeiro líquido com um segundo líquido.

[00227] Modalidade 56. Um método para o isolamento e purificação dos corpos dos ácaros que compreende as etapas de:i) isolamento da (s) fração (ões) do corpo do ácaro a partir da (s) cultura (s) de ácaro Der p ou Der f eii) submeter uma ou mais da (s) fração (ões) do corpo do ácaro Der p, ou uma ou mais da (s) fração (ões) do corpo do ácaro Der f, a centrifugação de densidade, em um primeiro meio líquido tendo uma densidade mais elevada do que os corpos dos ácaros e uma densidade mais baixa do que o meio de cultura das partículas, eiii) coletar os ácaros do referido primeiro meio líquidoe repetição da etapa ii) e iii) até que a pureza desejada dos ácaros venha a ser alcançada, opcionalmente seguido poriv) lavagem dos corpos dos ácaros com a finalidade de remover o referido primeiro líquido com um segundo líquido.

[00228] Modalidade 57. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 55 a 56, em que os primeiro e segundo líquidos são líquidos anidros, de preferência farmaceuticamente aceitáveis.

[00229] Modalidade 58. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 55 a 57, em que o primeiro líquido é de glicerol anidro.

[00230] Modalidade 59. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 55 a 58, em que o segundo líquido é o etanol anidro.

[00231] Modalidade 60. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 55 a 59, em que a etapa ii) e iii), é repetida uma vez.

[00232] Modalidade 61. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 55 a 60, em que as etapa ii) e iii) são repetidas até que a fração de corpo do ácaro obtida compreende pelo menos 70% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 85 corpos v/v, de preferência mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros e de preferência mais do que 98% de v/v dos corpos dos ácaros.

[00233] Modalidade 62. Método de acordo com a modalidade 55 a 61, em que a purificação da fração de corpo do ácaro é continuada até que a fração de corpo do ácaro contenha menos de 10% de v/v de partículas de meios de cultura.

[00234] Modalidade 63. Método de acordo com a modalidade 62, em que a purificação de corpo do ácaro é continuada até que menos de 20% em v/v das partes dos ácaros, partículas das fezes e meio do ácaro estão presentes.

[00235] Modalidade 64. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 63, em que frações dos corpos dos ácaros Der f, as frações dos corpos dos ácaros Der p, fração (ões) de partículas das fezes de Der p e/ou frações de partículas das fezes de Der f na etapa a) de qualquer uma modalidade de 33 a 34 e 36 a 37 são isoladas por meio de um processo de peneiramento que compreende:1) peneiramento de culturas ácaro Der f ou Der p em uma vibração de peneiramento com uma torre de 300, 150 e uma peneira de malha de 80 uM, seguido por meio do isolamento de uma fração rica de corpo do ácaro entre 150 um e 300 um e uma fração rica das partículas das fezes do ácaro abaixo de 80 pm, seguido por2) peneiramento da fração rica do corpo do ácaro (150 um e 300 um) em um agitador de peneiras com um movimento horizontal e circular e com uma torre de peneiras de malha 200, 300 e/ou 400 uM e isolando a (s) fração (ões) de corpo capturada (s) por meio das peneiras de malha 200, 300 e/ou 400 uM, seguida pelo3) peneiramento da fração rica do corpo em um agitador de peneira com movimento de arremesso 3D e peneira de malha 300, 200, 150 e 100 com a finalidade de produzir uma fração de corpo do ácaro entre 150 e 300 um e o extrato das partículas das fezes do ácaro abaixo de 100 um ; e4) opcionalmente combinar a fração de partículas inferior a 80 um Facal a partir da peneira vibratório e a fração de partículas das fezes abaixo de 100 um a partir da peneira com o movimento de arremesso 3D e sujeitando a fração combinada das fezes de peneiramento na peneira com o movimento de arremesso 3D e uma torre de peneiras de malha 100, 80, 50 uM e isolar a fração rica das partículas das fezes abaixo de 50 um.

[00236] Modalidade 65. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 33 a 64, em que os extratos ou as misturas de extratos obtidas são formuladas de um produto farmacêutico tal como um comprimido (s) sublingual (is) prensado (s) ou não prensado (s), compreendendo o (s) extrato (s) ou preparado a partir de um extrato (s) de alergoides, um produto líquido sublingual compreendendo o (s) extrato (s) ou alergoides preparados a partir de extrato (s), ou um produto líquido para injeção compreendendo o (s) extrato (s) ou alergoides preparados a partir de extrato (s).

[00237] Modalidade 66. Método de acordo com a modalidade 65, em que o produto farmacêutico é um comprimido sublingual de dissolução rápida que compreende um extrato.

[00238] Modalidade 67. Um produto farmacêutico preparado por meio de um método como definido em qualquer uma das modalidades 33 a 67.

[00239] Modalidade 68. Produto farmacêutico de acordo com a modalidade 67 para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia e asma alérgica causada por ácaros do pó da casa.

[00240] Modalidade 69. Um extrato de alérgeno de uma série de extratos de alérgenos para o uso em um produto alérgeno farmacêutico para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia e asma alérgica causada por ácaros do pó da casa, cada extrato de alérgeno, compreendendo pelo menos um extrato dos ácaros, e de pelo menos um extrato de partículas das fezes dos ácaros, ou um extrato de corpo do ácaro de uma fração dos corpos dos ácaros que tenham menos do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros ou de um extrato de cultura do ácaro inteiro, em que o dito extrato de alérgeno tem uma proporção predeterminada do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 , e em que o coeficiente de variação da dita relação é de não mais do que 25, 20, 15, 10, ou 7,5% para o conjunto dos extratos.

[00241] Modalidade 70. Um extrato de alérgeno uma série de extratos de alérgenos para o uso de um produto farmacêutico para o alérgeno no diagnóstico da alergia causada por ácaros do pó da casa, cada extrato de alérgeno, compreendendo pelo menos um extrato dos ácaros e pelo menos um extrato de partículas das fezes dos ácaros, ou um extrato de corpo do ácaro de uma fração dos corpos dos ácaros que tenham menos de 70% em v/v dos corpos dos ácaros ou de um extrato de cultura do ácaro inteiro, em que o dito extrato de alérgeno tem uma proporção predeterminada do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2, e em que o coeficiente de variação da dita proporção é de não mais do que 25, 20, 15, 10, ou 7,5% para o conjunto dos extratos.

[00242] Modalidade 71. O extrato de alérgeno de acordo com qualquer uma das modalidades 69 a 70, em que a quantidade em peso do alérgeno do grupo 1 é menor do que a quantidade em peso do grupo de alérgeno 2 em extratos de corpo do ácaro e a quantidade em peso do alérgeno do grupo 1 é maior do que a quantidade em peso do alérgeno do grupo 2 nos extratos de partículas das fezes dos ácaros.

[00243] Modalidade 72. O extrato de alérgeno de acordo com qualquer uma das modalidades 69-71, em que o extrato de alérgeno é como definido em qualquer uma das modalidades 1 a 32.

[00244] Modalidade 73. O extrato de alérgeno de acordo com qualquer uma das modalidades 69-71, em que o extrato de alérgeno é preparado tal como definido em qualquer uma das modalidades 33 a 66.

[00245] Outras modalidades de acordo com a presente invenção:

[00246] Modalidade 1. Um produto farmacêutico compreendendo um extrato de alérgeno (I) ou do alergoide dos mesmos para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia e asma alérgica causada por ácaros do pó da casa, compreendendo pelo menos um extrato dos ácaros e, opcionalmente, pelo menos um extrato de partículas das fezes dos ácaros selecionado a partir dos seguintes grupos a) a d):a) um extrato dos corpos dos ácaros Der p,b) um extrato de partículas das fezes de Der p, c) um extrato dos ácaros Der f, e d) um extrato de partículas das fezes de Der f.

[00247] Modalidade 2. Um produto farmacêutico compreendendo extrato de alérgeno (I) para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia e asma alérgica causada por ácaros do pó da casa compreendendo os alérgenos selecionados de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 e em que o alérgeno presente na menor concentração (p/v) no extrato de alérgeno (I), está presente em uma concentração que é superior a 50% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presentes em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 60% da concentração do alérgeno selecionado do Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada (p/v), mais preferido acima de 70% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 80% da concentração do alérgeno selecionado a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 85% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 90% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 95% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada (p/v), de preferência acima de 98% da concentração do alérgeno selecionado a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), ou o mais preferido acima de 99% da concentração do alérgeno selecionado a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v).

[00248] Modalidade 3. Um produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 2, compreendendo pelo menos um extrato dos ácaros e pelo menos um extrato de partículas das fezes dos ácaros.

[00249] Modalidade 4. Produto farmacêutico de acordo com a modalidade 3 que compreende um extrato dos corpos dos ácaros Der p, um extrato de partículas das fezes de Der p, um extrato dos ácaros Der f e um extrato das partículas das fezes de Der f 2.

[00250] Modalidade 5. Um produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 2 compreendendo um extrato dos corpos dos ácaros Der p e de um extrato de partículas das fezes de Der p e nenhum extrato dos ácaros Der f e nenhum extrato de partículas das fezes de Der f.

[00251] Modalidade 6. Um produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 2 compreendendo um extrato dos ácaros Der f e um extrato de partículas das fezes de Der f e nenhum extrato dos corpos dos ácaros Der p e nenhum extrato de partículas das fezes de Der p.

[00252] Modalidade 7. Um produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 2 compreendendo um extrato dos corpos dos ácaros Der p e de um extrato Dos corpos dos ácaros Der f e nenhum extrato de partículas das fezes dos ácaros.

[00253] Modalidade 8. Um produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 2 compreendendo um extrato dos corpos dos ácaros Der p e nenhum extrato Dos corpos dos ácaros Der f e nenhum extrato de partículas das fezes dos ácaros.

[00254] Modalidade 9. Um produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 2, compreendendo um extrato dos ácaros Der f e nenhum extrato de Der p decorpos dos ácaros e nenhum extrato de partículas das fezes dos ácaros.

[00255] Modalidade 10. Um produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 9, em queo extrato dos corpos dos ácaros Der p é preparado a partir de uma fração de corpo do ácaro Der p ou frações combinadas do corpo dos ácaros Der p e em que a extração da (s) dita (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros resulta em um extrato compreendendo as quantidades iguais de peso do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 ou mais alérgeno do grupo 2 do que alérgeno do grupo 1 e/ouo extrato dos ácaros Der f é preparado a partir de uma fração de corpo do ácaro Der f ou mais frações combinadas do corpo dos ácaros Der f e em que a extração da (s) dita (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros resulta em um extrato compreendendo, em peso, as quantidades iguais em peso do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 ou mais alérgeno do grupo 2 que o alérgeno do grupo 1.

[00256] Modalidade 11. Um produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 10 em queo extrato dos corpos dos ácaros Der p é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que a (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 75% em v/v doscorpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 80% em v/v doscorpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 85% em v/v doscorpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 90% em v/v doscorpos dos ácaros Der p, de prefrência mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der p e de preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der p,o extrato dos ácaros Der f é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros das ditas frações que compreendem mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 85% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, mais de preferência, mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, e de preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der f,o extrato de partículas das fezes de Der p é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que a (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferência mais do que 75% de v/v de Der p das fezes partículas, de preferência mais do que 80% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferência mais do que 85% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferência mais do que 90% de v/v de partículas das fezes de Der p, mais de preferência, mais do que 95% de v/v das partículas das fezes de Der p, de preferência mais do que 98% de v/v de partículas das fezes de Der p e/ouo extrato de partículas das fezes de Der f é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que a (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência, mais do que 75% de v/v de Der f das fezes partículas, de preferência, mais do que 80% em v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência mais do que 85% em v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência mais do que 90% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência, mais do que 95% de v/v, de preferência mais do que 98% de v/v de partículas das fezes de Der f.

[00257] Modalidade 12. Produto farmacêutico de acordo com a modalidade 11, em que uma fração ou as frações dos ácaros e/ou em que uma fração ou as frações de partículas das fezes dos ácaros cada uma compreende menos de 10% de v/v de meio de cultura do ácaro.

[00258] Modalidade 13. Produto farmacêutico de acordo com a modalidade 12, em que a fração de corpo do ácaro ou as frações combinadas do corpo compreende até 20% em v/v das partes dos ácaros (por exemplo, pernas), partículas das fezes e meio dos ácaros.

[00259] Modalidade 14. Produto farmacêutico de acordo com a modalidade 12, em que a fração das fezes dos ácaros ou frações combinadas das fezes compreendem até 20% em v/v das partes dos ácaros (por exemplo, pernas) e do meio dos ácaros.

[00260] Modalidade 15. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 14, em que a quantidade em peso do alérgeno do grupo 1 é inferior à quantidade em peso do alérgeno do grupo 2 em extratos de corpo do ácaro e a quantidade em peso do alérgeno do grupo 1 é maior do que a quantidade em peso do grupo de alérgeno 2 nos extratos de partículas das fezes dos ácaros.

[00261] Modalidade 16. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1, 3 a 15 compreendendo o extrato de alérgeno (I) para o tratamento e/ou para a prevenção de alergia e asma alérgica causada por ácaros do pó da casa compreendendoos alérgenos selecionados de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 e em que o alérgeno presenteem uma menor concentração (p/v) no extrato de alérgeno (I), está presente em uma concentração que é superior a 50% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 60% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presentes na concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 70% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada (p/v), mais preferido acima de 80% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 85% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 90% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v), mais preferencialmente superior a 95% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada ( p/v), de preferência acima de 98% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente na concentração mais elevada (p/v), ou o mais preferido acima de 99% da concentração do alérgeno selecionada a partir de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 presente em uma concentração mais elevada (p/v).

[00262] Modalidade 17. Produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 16, em que o produto farmacêutico é um comprimido (s) sublingual (is) prensado (s) ou não prensado (s), compreendendo o extrato (I) ou alergoides preparados a partir de um extrato (I) sob uma forma sólida, líquida produto sublingual ou um produto líquido para injeção compreendendo o extrato (I), ou preparado a partir de extrato de alergoides (I), de preferência, o produto farmacêutico é um comprimido sublingual de dissolução rápida que compreende um extrato (I) na forma sólida.

[00263] Modalidade 18. Um método para a produção de um extrato de alérgeno dos ácaros do alérgeno (I) ou alergoides do mesmo para um produto farmacêutico de acordo com qualquer uma das modalidades 1 a 10 e 15 a 16, o dito extrato de alérgeno (I), com uma quantidade predeterminada e controlada em peso de alérgenos selecionados de Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 e os alérgenos que compreendem as seguintes etapas:a) as frações dos corpos dos ácaros Der p e/ou frações de partículas das fezes do ácaro de Der p são isoladas a partir de culturas dos ácaros de Der p, e/ou frações dos corpos dos ácaros Der f e/ou frações de partículas das fezes do ácaro Der f são isoladas a partir de culturas do ácaro Der F ;b) opcionalmente combinando as diversas frações dos corpos dos ácaros Der p, opcionalmente, combinando as diversas frações de partículas das fezes do ácaro Der p, opcionalmente, combinando as diversas frações dos ácaros Der f e, opcionalmente, combinando as diversas frações de partículas das fezes do ácaro Der f ;c) extração dos alérgenos da (s) fração (ões) de corpo do ácaro, obtidos na etapa a) ou um etapa b) como descrito acima e/ou de extração de alérgenos da (s) fração (ões) de partículas das fezes do ácaro obtidos na etapa a) ou etapa b) como acima, e depois d) medição da concentração (p/v) do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 em extratos de alérgeno do ácaro obtidos na etapa c) como descrito acima, e opcionalmentee) misturar um ou mais do (s) extrato (s) dos corpos dos ácaros com um ou mais do (s) extrato (s) de partículas das fezes tal como obtido na etapa a c) tal como mencionado acima com a finalidade de obter uma mistura de extratos de alérgenos (I) com uma quantidade predeterminada, em peso, grupo 1 ao grupo 2 e alérgeno opcionalmentef) conversão do extrato (I) para um alergoide do mesmo.

[00264] Modalidade 19. Método de acordo com a modalidade 18, em que um ou mais do (s) extrato (s) dos corpos dos ácaros e de um ou mais do (s) extrato (s) de partículas das fezes são misturados com a finalidade de obter uma mistura de extratos de alérgenos (I).

[00265] Modalidade 20. Método de acordo com as modalidades 18 a 19, em que a mistura de extrato dos ácaros alérgeno (I) compreende extrato (s) dos corpos de Der p, extrato (s) de partículas das fezes dos ácaros Der p, extrato (s) dos corpos dos ácaros Der f e extrato (s) de partículas das fezes Der f 2.

[00266] Modalidade 21. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 18 a 20, em que mais do que uma fração dos ácaros são combinadas de acordo com a etapa b) seguido da extração de acordo com a etapa c).

[00267] Modalidade 22. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 18 a 21, em que mais do que uma fração de partículas das fezes são combinadas de acordo com a etapa b) seguido da extração de acordo com a etapa c).

[00268] Modalidade 23. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 18-22, em que um ou mais do (s) extrato (s) dos corpos dos ácaros obtidos na etapa c) é misturado em uma etapa e) com um ou mais do (s) extrato (s) de partículas das fezes dos ácaros obtidos na etapa c).

[00269] Modalidade 24. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 18 a 23, em que um ou mais do (s) extrato (s) dos corpos dos ácaros obtidos na etapa c) é misturado em uma etapa e) com um extrato dos ácaros partículas das fezes obtidas na etapa c).

[00270] Modalidade 25. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 18 a 24, em que um extrato dos ácaros obtido na etapa c) é misturado em uma etapa e) com um ou mais do (s) extrato (s) de partículas das fezes dos ácaros obtidos na etapa c).

[00271] Modalidade 26. Método de acordo com qualquer modalidade de 18 a 25, em que um extrato (s) de corpo do ácaro é suplementado com uma quantidade, em peso de extrato de partículas das fezes que é suficiente para alcançar a desejada proporção em peso de alérgeno do grupo 1 ao alérgeno do grupo 2 na mistura de alérgenos dos extratos do ácaro (I).

[00272] Modalidade 27. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 14 a 26, em que o extrato nos corpos de ácaros Der p na etapa c) é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que a (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, mais preferencialmente mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 85% em v/v dos corpos dos ácaros Der p, de preferência mais do que 90% de v/v dos ácaros Der p de preferência, mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros Der p e de preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der p,o extrato dos corpos dos ácaros Der f na etapa c) é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas do ácaro das ditas frações que compreendem mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 75%em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 80%em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 85%em v/v dos corpos dos ácaros Der f, de preferência mais do que 90%em v/v dos corpos dos ácaros Der f, mais de preferência, mais do que 95% de v/v Corpos dos ácaros Der f, e de preferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros Der f,o extrato de partículas das fezes de Der p na etapa c) é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que a (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferência mais do que 75% de v/v de partículas das fezes de Der p, de preferênciamais do que 80% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferênciamais do que 85% em v/v de particulas das fezes de Der p, de preferênciamais do que 90% em v/v de partículas das fezes de Der p, de preferênciamais do que 95% em v/v de partículas das fezes de Der p, de preferênciamais do que 98% em v/v de partículas das fezes de Der p e/ou o extrato de partículas das fezes de Der f na etapa c) é preparado a partir de uma fração ou fração (ões) combinada (s) de culturas dos ácaros que a (s) dita (s) fração (ões), compreendendo mais do que 70% de v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência, mais do que 75% em v/v De partículas das fezes de Der f, de preferência, mais do que 80% em v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência mais do que 85% em v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência mais do que 90% em v/v de partículas das fezes de Der f, de preferência, mais do que 95% em v/v, mais preferencialmente mais do que 98% de v/v de partículas das fezes de Der f.

[00273] Modalidade 28. Método de acordo com a modalidade 27, em que uma fração dos corpos dos ácaros na etapa a) ou as frações combinadas dos ácaros na etapa b) e/ou em que uma fração de partículas das fezes na etapa a) ou as frações de partículas dos ácaros das fezes na etapa b) cada um compreende menos de 10% em v/v de meio de cultura do ácaro.

[00274] Modalidade 29. Método de acordo com a modalidade 28, em que a fração de corpo do ácaro na etapa a) ou as frações combinadas de corpo da etapa b) compreende até 20% em v/v das partes dos ácaros (por exemplo, pernas), partículas das fezes e meio dos ácaros.

[00275] Modalidade 30. Método de acordo com a modalidade 29, em que a fração dos ácaros das fezes na etapa a) ou as frações combinadas das fezes na etapa b) compreende até 20% em v/v das partes dos ácaros (por exemplo, pernas) e do meio dos ácaros.

[00276] Modalidade 31. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 18 a 30, em que a (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros e a (s) fração (ões) de partículas dos ácaros das fezes na etapa a) das modalidades 18 são isoladas a partir de cultura do ácaro (s) por meio do peneiramento do p Der e/ou Der f de cultura do ácaro (s) com a finalidade de produzir uma fração de corpo do ácaro b) e uma fração de partículas das fezes dos ácaros d).

[00277] Modalidade 32. Método de acordo com a modalidade 31, em que a (s) fração (ões) dos corpos dos ácaros e a (s) fração (ões) de partículas das fezes dos ácaros é obtida por meio do peneiramento da Der p e/ou a cultura do ácaro Der f (s) com a finalidade de produzir quatro frações:a) grandes partículas do meio > 350 uMb) fração do corpo do ácaro 350 a 90 mMc) aglomerados de fezes e de partes dos ácaros 90 a 50 uM preparadosd) partículas das fezes < 50 umas frações a) e c) são descartadas, a fração d) é utilizada de uma maneira direta para a extração ea fração b) é submetida à purificação adicional.Modalidade 33. Um método para o isolamento e para a purificação dos corpos dos ácaros que compreende as etapas de:i) isolamentoda (s) fração (ões) do corpo do ácaro a partir da (s) cultura (s) de ácaro Der p ou Der f eii) sujeição de uma ou mais fração (ões) do corpo do ácaro Der p, ou uma ou mais fração (ões) do corpo do ácaro Der f, a centrifugação de densidade em um primeiro meio líquido tendo iia) uma densidade maior do que os corpos dos ácaros e uma densidade mais baixa de meio de cultura das partículas e IIB) não extrair o alérgeno o grupo 1 e do grupo 2 a partir dos corpos dos ácaros eiii) Coleta dos ácaros da superfície do dito primeiro meio líquidoe repetição da etapa ii) e iii) até que a pureza desejada dos ácaros venham a ser alcançada, opcionalmente seguido poriv) lavagem dos corpos dos ácaros com a finalidade de remover o referido primeiro líquido com um segundo líquido que não extrai o alérgeno o grupo 1 e do grupo 2 a partir dos corpos dos ácaros.

[00278] Modalidade 34. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 31 a 32, em que a fração do corpo do ácaro b) é:ii) submetido à centrifugação de densidade em um primeiro meio líquido tendo iia) uma densidade maior do que os corpos dos ácaros e uma densidade mais baixa do que as partículas dosmeios de cultura e IIb) não extrair o alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 a partir dos corpos dos ácaros, seguido poriii) coleta dos ácaros da superfície do dito primeiro meio líquido, e repetindo a etapa ii) e iii) até que a pureza desejada dos ácaros venha a ser alcançada, opcionalmente seguido poriv) lavagem dos corpos dos ácaros com a finalidade de remover o referido primeiro líquido com um segundo líquido que não extrai o alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 a partir de dos corpos dos ácaros.

[00279] Modalidade 35. Método de acordo com qualquer das modalidades 33 ou 34, em que o primeiro e segundo líquidos são líquidos anidros, de preferência farmaceuticamente aceitáveis.

[00280] Modalidade 36. Um método de acordo com a modalidade 35, em que o primeiro líquido é de glicerol anidro.

[00281] Modalidade 37. Um método de acordo com a modalidade 36, em que o segundo líquido é o etanol anidro.

[00282] Modalidade 38. Método de acordo com a modalidade 33 a 37 em que a etapa ii) e iii) são repetidas por uma vez.

[00283] Modalidade 39. Método de acordo com qualquer uma dasmodalidades 33 a 37, em que etapa ii) e iii) são repetidas até que afração de corpo do ácaro obtido compreende pelo menos 70% em v/vdos corpos dos ácaros, de preferência mais do que 75% em v/v doscorpos dos ácaros, de preferência mais do que 80% corpos v/v, depreferência mais do que 85% em v/v corpos dos ácaros, de preferênciaPetição 870210039562, de 30/04/2021, pág. 86/11974/88mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros, de preferência mais doque 95% em v/v dos corpos dos ácaros e de preferência mais do que98% v/v dos corpos do ácaro.

[00284] Modalidade 40. Método de acordo com a modalidade 31 a33 e 38 a 39, em que a purificação da fração de corpo do ácaro écontinuada até que a fração de corpo do ácaro contenha menos de 10%de v/v de partículas de meios de cultura.

[00285] Modalidade 41. Método de acordo com a modalidade 40, emque a purificação de corpo do ácaro é continuada até que menos de20% em v/v das partes dos ácaros, partículas das fezes e meio ácaroesteja presente.

[00286] Modalidade 42. Uma fração de corpo do ácaro quecompreende mais do que 70% em v/v dos corpos dos ácaros, depreferência mais do que 75% em v/v dos corpos dos ácaros, depreferência mais do que 80% em v/v dos corpos dos ácaros, depreferência mais do que 85% em v/v dos corpos dos ácaros, depreferência mais do que 90% em v/v dos corpos dos ácaros, depreferência mais do que 95% em v/v dos corpos dos ácaros e depreferência mais do que 98% em v/v dos corpos dos ácaros.

[00287] Modalidade 43. Uma fração de corpo do ácaro de acordo com a modalidade 42, contendo menos de 10% em v/v de partículas de meios de cultura.

[00288] Modalidade 44. Uma fração de corpo do ácaro de acordo com a modalidade 43 compreendendo menos de 20% em v/v das partes dos ácaros, partículas das fezes e meio dos ácaros.

[00289] Modalidade 45. O método de qualquer uma das modalidades 18 a 30 em que as frações Dos corpos dos ácaros Der f, frações dos corpos dos ácaros Der p, fração (ões) de partículas das fezes de Der p e/ou frações de partículas das fezes de Der f na etapa 18 a) são isoladas por meio de um processo de peneiramento, compreendendo: 1) peneiramento das culturas ácaro Der f ou Der p em um agitador de peneiramento com uma torre de peneira de malha de 300, 150 e 80 uM, seguido por meio do isolamento de uma fração rica de corpo do ácaro entre 150 um e 300 um e uma fração rica em partículas das fezes do ácaro abaixo de 80 pm, seguido por2) peneiramento da fração rica de corpo do ácaro (150 um e 300 um) em um agitador de peneiras com um movimento horizontal e circular e com uma torre de peneiras de malha de 200, 300 e/ou 400 uM e isolando a (s) fração (ões) do corpo capturadas por meio das peneiras de malha de 200, 300 e/ou 400 uM, seguida pela3) peneiramento da fração rica de corpo em um agitador de peneira com movimento de arremesso 3D e peneira de malha de 300, 200, 150 e 100 com a finalidade de produzir uma fração de corpo do ácaro entre 150 e 300 um malha e o extrato das partículas das fezes do ácaro abaixo de 100 um ; e4) opcionalmente combinar a fração Facal de partículas inferior a 80 um do agitador de peneira e a fração de partículas das fezes abaixo de 100 um a partir da peneira com o movimento de arremesso 3D e sujeitando a fração das fezes combinada à peneiramento na peneira com o movimento de arremesso 3D e uma torre de peneiras de malha de 100, 80, 50 uM e isolar a fração rica das partículas das fezes abaixo de 50 um.

[00290] Modalidade 46. Método de acordo com qualquer uma das modalidades 18 a 41, 45 em que a mistura dos extratos (I) obtidos e formulados como um comprimido (s) sublingual (is) prensado (s) ou não prensado (s), compreendendo o extrato (I) ou é preparado a partir de extrato de alergoides (I) em uma forma sólida, um produto líquido sublingual ou um produto líquido para injeção compreendendo o extrato (I), ou preparado a partir de extrato de alergoides (I), de preferência, o produto farmacêutico é um comprimido sublingual de dissolução rápida que compreende um extrato (I) na forma sólida.SEÇÃO EXPERIMENTALEXEMPLO 1:1.0 Cultivo dos ácaros

[00291] Os ácaros Der p e Der f são cultivados separadamente em um suporte adequado com as partículas do meio, que são de tamanho e integridade suficiente para suportar os rigores do processamento a jusante e serem facilmente eliminados por meio do processo de rastreio primário. O meio do ácaro apropriadamente contém uma fonte de proteína, hidratos de carbono, minerais, óleo, vitaminas e um conservante.

[00292] Os ácaros são mortos por meio do congelamento a - 20 ° C ± 5°C, quando o crescimento ótimo tem sido alcançado.1.1 Purificação dos corpos dos ácaros e as partículas das fezes dos ácaros

[00293] A cultura dos ácaros (Der p ou Der f) é seca ao teor de umidade abaixo de 15% e peneirada com a finalidade de produzir quatro frações:1) partículas grandes do meio > 350 um2) fração do corpo do ácaro 350 a 90 mM3) aglomerados de fezes e de partes dos ácaros 90 a 50 uM 4) partículas das fezes < 50 um

[00294] Uma unidade de peneiramento automatizado é utilizada com a finalidade de rastrear a cultura do ácaro seco. A peneira usa a rotação em ângulos e velocidade ajustados com a finalidade de obter as frações. A tela, que produz as frações 1, 2 e 3 acima pode ser "cegada" durante o peneiramento. Os finos (fração 4) são coletados no tabuleiro inferior da unidade de peneiramento.

[00295] As partículas grandes do meio na fração 1 e os aglomerados e partes das fezes dos ácaros da fração 3 são descartadas.

[00296] A qualidade das partículas das fezes na fração 4 é testada (com a finalidade de assegurar que a fração contém principalmente as partículas das fezes e a mesma satisfaz as especificações de liberação) e é decidido se a fração é adequada para a extração de alérgenos Der p ou Der f.

[00297] A% em v/v corpos dos corpos inteiros dos ácaros, partes do corpo, partículas das fezes dos ácaros, meios dos ácaros e de contaminantes é medida por meio da microscopia de amostras, consulte as páginas 13 a 14.

[00298] Várias frações das fezes dos ácaros podem ser combinadas antes da extração.

[00299] 1.2 Purificação da fração dos corpos dos ácaros 2 por meioda centrifugação com Glicerol

[00300] Centrifugação da fração 2 é realizada em uma (centrífuga Beckman J6MI).

[00301] Não mais do que 900 gramas de fração 2 é lentamente adicionada à glicerina anidra USP (99,0 a 101,0% de pureza) em uma quantidade que é cinco vezes o peso da fração 2.

[00302] A cultura do ácaro misturada com a glicerina anidra é vertida em copos de centrifugação de modo a que todos os copos contêm o mesmo volume. Os copos são colocados no rotor e os mesmos são centrifugados a 3000 rpm durante 7 minutos à temperatura de -5°C. O plug do corpo do ácaro formado é removido da superfície da glicerina anidra e pesado. Os corpos dos ácaros são misturados com uma quantidade de glicerina anidra, 3 vezes o peso da fração de corpo do ácaro e a centrifugação é repetida.

[00303] O plug do corpo do ácaro é cuidadosamente removido da superfície da glicerina anidra e pesado. O peso dos ácaros é multiplicado por 2,5 para determinar a quantidade mínima em peso de etanol anidro necessária para formar a pasta fluida. O corpo do ácaro e a pasta fluida de etanol são misturados durante 5 minutos em um recipiente de mistura equipado com uma lâmina de baixo cisalhamento. A pasta fluida é vertida em duas peneiras de 106 microns com um conjunto de um recipiente de coleta.

[00304] Raspar os ácaros das peneiras e registrar o peso dos ácaros. Repetir a etapa de purificação final com mais um tempo de etanol e secar os ácaros utilizando vácuo ou os mesmos são deixados secar na peneira 106 em um extrator de fumo.

[00305] A% em v/v corpos dos corpos inteiros dos ácaros, partes do corpo, partículas das fezes dos ácaros, meios dos ácaros e de contaminantes é medida por meio da microscopia de amostras, consulte as páginas 13 a 14. A fração de corpo do ácaro alcançada compreende tipicamente de 98 a 99% em vol/vol dos ácaros inteiros.

[00306] As frações de corpo do ácaro a partir de culturas dos ácaros diferentes podem ser misturadas.1.3 Purificação da fração dos corpos dos ácaros 2 por meio da centrifugação com NaCl saturado

[00307] A fração de corpo do ácaro 2 é misturada com NaCl saturado (em uma quantidade que é cinco vezes o peso da fração 2) a uma pasta fluida. A suspensão é centrifugada a 3.000 rpm em 7 min (15 ° C, em uma centrífuga Sorvall). O tampão corpo do ácaro é cuidadosamente removido da superfície e ressuspenso em uma quantidade de NaCl que é cinco vezes o peso e a centrifugação é repetida. A% de v/v corpos dos corpos inteiros dos ácaros, partes do corpo, partículas das fezes dos ácaros, meios dos ácaros e de contaminantes é medida por meio da microscopia de amostras, consulte as páginas 13 a 14.

[00308] A fração de corpo do ácaro alcançada compreende tipicamente de 98 a 99% em vol/vol dos ácaros inteiros.Tabela 1b:

[00309] Os números 1 e 2 são água salgada saturada de um girador 1, os números 3 e 4 são água salgada de um girador 2

Tabela 1bEXEMPLO 22.0 Purificação dos corpos dos ácaros e das partículas das fezes dos ácaros

[00310] Colocar a cultura congelada em bandejas dentro da sala de purificação. Certifique-se que a cultura está espalhada em uma camada uniforme sobre as bandejas e deixar a cultura descongelar e secar em condições ambientais por volta de 4 a 14 dias.

[00311] A cultura é em seguida fluidizada com a finalidade de secá- la e separá-la em duas frações, consulte a figura 1. Um fluxo de ar é aplicado concetando a bomba de vácuo de um lado e uma entrada de ar no outro.

[00312] Os recipientes de vidro da figura 1 são nomeados da esquerda para a direita "A" com a cultura do ácaro inteiro, "B" é rica em partículas do corpo e "C" são as partículas das fezes.

[00313] As duas frações (B) e (C) são isoladas e submetidas a peneiramento.2.1 A purificação dos corpos dos ácaros2.1.1 Peneira Grande

[00314] As frações B são adicionadas a um agitador de peneira de contínua carga industrial vibratória Filtra FT 500. A peneira tem uma torre de três malhas: 300, 150, e 80 um e trabalha a 1500 rpm.

[00315] O material acima de 300 μm é, principalmente, as partículas dos alimentos e é descartado.

[00316] O material inferior a 80 μm é adicionalmente purificado em uma peneira pequena com a finalidade de isolar a fração das fezes.

[00317] O material inferior a 300 μm, e, acima de 150 μm foi isolado na forma de uma fração rica do corpo e peneirado na peneira média abaixo.2.1.2 Peneira Média

[00318] Os ácaros tem uma forma que não é regular, e pode chegar a 400 μm em uma dimensão, mas são geralmente menores na forma seca. Os ácaros têm pernas e cabelos e quando um movimento circular horizontal é usado durante o peneiramento, os ácaros são orientados horizontalmente forçando os emaranhados de formação. Apenas algumas partículas desorientadas ou partículas menores, que não fazem parte do emaranhado, entram na malha da peneira e não estão bloqueadas tão rapidamente.

[00319] A peneira utilizada é uma peneira de agitação Retsch AS 400 com uma torre de malha de 400, 300 e 200 μm. Um modo depeneiramento circular horizontal é usado e o processo de peneiramento tira vantagem da formação de emaranhados dos ácaros que tenham um tamanho superior a 200, 300 e/ou 400 μm.

[00320] O material a partir da peneira grande é dividido em porções de 150 a 200 g e adicionado ao segundo (peneira média).

[00321] O trabalho de peneiramento a uma velocidade entre 210 a 240 rpm e cada lote é peneirado por volta de 1 a 2 minutos.

[00322] As frações superiores a 200, e 300 μM são reprocessadas por volta de 2 a 6 vezes.

[00323] O teor dos ácaros capturados nas peneiras de malha 200, 300 e/ou 400 μM é determinado por meio da inspeção microscópica das frações e a fração rica de corpo é isolada, submetida a uma peneiramento adicional, tal como descrito abaixo.2.1.3 Peneira Pequena

[00324] A fração rica de corpo recuperada a partir da peneira médio é então submetida ao peneiramento em uma peneira pequena (Retsch AS 200) através de um movimento de arremesso em 3-D. A quantidade da média da fração rica de corpo carregada para a peneira é de 60 g e uma torre de malha de 300, 200, 150 e 100 é usada.

[00325] A velocidade é definida para 240 a 260 rpm, a amplitude é definida em 30 segundos e cada carga é peneirada por volta de 5 a 15 minutos. Cada carga é reprocessada por volta de 1 a 6 vezes.

[00326] Em processos de controle: Durante o processo de peneiramento, a pureza da fração é ensaiada utilizando um microscópio.

[00327] A fração abaixo de 100 μm foi isolada na forma de uma fração de partículas de fezes a qual foi purificada como descrito abaixo.

[00328] As frações superiores a 100 μm e 150 μm são isoladas como as frações do corpo dos ácaros.2.2 A purificação da fração das fezes

[00329] As frações ricas das fezes obtidas nas etapas anteriores (fração C da etapa de pré-tratamento, fração < 80 um do agitador da peneira grande e a fração < 100 μm do agitador da peneira pequena) são combinadas.

[00330] O agitador da peneira pequena (Retsch AS 200) é utilizado com uma torre de malha de 100, 80 e 50 μm e as condições de operação foram as mesmas, como já foi mencionado anteriormente acima, na presente invenção, para esta peneira.

[00331] A fração inferior a 50 μm é isolada como a fração das fezes.

[00332] Em processos de controle: Durante o processo depeneiramento, o grau de pureza das frações é estimado utilizando um microscópio. EXEMPLO 33.0 Extração dos corpos do ácaro

[00333] Os ácaros foram suspensos usando um misturador de alto corte (20 min). A extração foi realizada em um tampão contendo NaHCO3 a 0,012 M, NaCl a 0,154 M, a um pH de 7,5 durante 3 horas a uma temperatura de 8°C. O corpo dos ácaros para tamponar foi 1 + 10 (p/p).3.0.1 Separação

[00334] A fonte de material remanescente insolúvel é separada da solução do extrato por meio da centrifugação.

[00335] Após a centrifugação, o produto centrifugado resultante foi decantado a partir da fração sólida e clarificado através de um filtro em uma solução de filtrado. Depois da filtração do extrato de alérgeno, o filtro é lavado com tampão de extração e reunido com a finalidade de aumentar o rendimento.3.0.2 Ultrafiltração

[00336] A ultrafiltração é realizada em três etapas: uma etapa de concentração, uma etapa de diafiltração e uma etapa de ajuste da matéria seca. Em primeiro lugar, a solução de filtrado é concentrada através de remoção da água e outras pequenas moléculas, por meio de filtração de fluxo tangencial. Em segundo lugar, as pequenas moléculas e os sais são removidos da solução de extrato de alérgeno por meio da diafiltração contra água purificada. Em terceiro lugar, a concentração de matéria seca (DM) do extrato de alérgeno é ajustada através de uma concentração mais elevada ou da adição de água purificada. Durante a ultrafiltração, a temperatura e a pressão da trans-membrana (TMP) são monitorizadas e mantidas dentro dos critérios de aceitação.Em processos de controle:Temperatura: 3 a 15° CPressão da Trans Membrana: < 0,3 MPa (3 bars) Concentração DM: 40 a 60 mg/ml3.0.3 Clareamento da filtração

[00337] A solução de extrato de alérgeno é clarificada através de um filtro de 0,2 μM.3.04 Estabilização

[00338] Após filtração, o extrato é dispensado como gotículas em queda livre dentro de um recipiente cheio com nitrogênio líquido, onde as gotículas congelam imediatamente. O nitrogênio líquido é, em seguida, deixado evaporar. Durante o processo de estabilização, o fluxo de alimentação (fluxo de produto) é controlado para estar dentro dos critérios de aceitação.

[00339] Em processos de controle: fluxo do produto: 8 a 12 ml/min/distribuição do furo.3,1 Partículas das fezes

[00340] As partículas das fezes dos ácaros são suspensas utilizando um misturador de alto corte (20 min). A extração foi realizada em um tampão contendo NaHCO3 a 0,012 M, NaCl a 0,154 M , a um pH de 7,5 durante 1 hora a uma temperatura de 8 ° C. O corpo dos ácaros para tamponar a relação é de 1 10 (p/p).3.1.1 Separação

[00341] Após a extração, o material de base insolúvel é separado da solução de alérgeno de uma etapa de diafiltração. A diafiltração é realizada utilizando um sistema de filtração de membrana vibratória (técnica de TFF). O extrato de alérgeno passa através da membrana como permeato, enquanto que o material de fonte insolúvel será retido pela membrana. Durante o processo de diafiltração, um volume predeterminado de água purificada é adicionado continuamente à solução de extrato de recirculação na mesma taxa como o extrato de alérgeno (permeado) é coletado a partir do outro lado da membrana.

[00342] Em processos de controle: Fluxo de permeado: 18 a 22 litros/m2/hora Temperatura: 4 a 12°C3.1.2 Ultrafiltração

[00343] A ultrafiltração é realizada em três etapas: uma etapa de concentração, uma etapa de diafiltração e uma etapa de ajuste de massa seca. Em primeiro lugar, a solução de filtrado é concentrada através de remoção da água e outras pequenas moléculas através de filtração de fluxo tangencial. Em segundo lugar, as pequenas moléculas e os sais são removidos da solução de exctrato do alérgeno por meio da diafiltração contra água purificada. Em terceiro lugar, a concentração de matéria seca (MS) da solução alergênica é ajustada por meio de mais concentração ou adição de água purificada. Durante a ultrafiltração, a temperatura e a pressão da trans membrana (TMP) são monitoradas como em processos de controle e mantidas dentro dos critérios de aceitação.

[00344] Em processos de controle:Temperatura: 3 a 15°CPressão da Trans membrana: 0,3 MPa (3 bars) Concentração DM: 40 a 60 mg/ml3.1.3 Clareamento da filtraçãoA solução alergênica é clarificada através de um filtro de 0,2 μm.3.1.4 Estabilização

[00345] Após a filtração, o extrato de alérgeno é dispensado como gotículas em queda livre dentro de um recipiente cheio com nitrogênio líquido, onde as gotículas congelam imediatamente. O nitrogênio líquido é, em seguida, deixado evaporar. Durante o processo de estabilização, o fluxo de alimentação (fluxo de produto) é controlado para estar dentro de critérios de aceitação.Em processos de controle: Fluxo de produto: 8 a 12 ml/min/furo de distribuiçãoEXEMPLO 4

[00346] O conteúdo do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2 é medido por meio da espectrometria de massa MS (tal como descrito no documento WO 2007/031080 utilizando os peptídeos de calibração padrão a seguir:TNACSINGNAPAEIDLR (Der p 1) SEQ ID NO: 1,NSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQYPYVVIM (Der f 1), SEQ ID NO: 2,VLVPGCHGSEPCIIHR (Der p 2) SEQ ID NO: 3, GKPFTLEALFDANQNTK (Der f 2) SEQ ID NO: 4, e GIEYIQQNGVVEER (Der f 1), SEQ ID NO: 5EXEMPLO 55,0 Mistura de extratos

[00347] As esferas congeladas de extrato de corpo do ácaro foram adicionadas às esferas congeladas de extrato das partículas das fezes com a finalidade de alcançar a proporção desejada do alérgeno do grupo 1 e alérgeno do grupo 2.

[00348] A determinação de que os lotes das esferas congeladas a serem utilizados e o número de esferas congeladas a serem usadas é um processo iterativo.

[00349] A mistura com a proporção desejada é criada por meio do cálculo da quantidade em peso do grupo de um alérgeno que irá resultar da mistura de um número de esferas a partir de pelo menos um lote de extratos de corpo do ácaro e, pelo menos, um lote de partículas das fezes dos ácaros. A quantidade, em peso, do alérgeno do grupo 1 é calculada como a quantidade, em peso, de qualquer lote multiplicado com a concentração do alérgeno do grupo 1 no referido lote. A quantidade em peso do alérgeno do grupo 2 resultante da mistura dos mesmos lotes é calculada da mesma maneira.

[00350] Mais grupos ou partes de lotes são adicionados ou removidos do cálculo, tal como descrito na página 27 acima até que a proporção desejada fosse atingida.Exemplo:

[00351] A quantidade de extratos a partir de cada lote é calculada para ser de 140 gramas e 966 gramas MF1 MB1

[00352] Proporção do alérgeno principal = 1 = Grupo Total 1/grupo Total 2 = MF1 x Cf1grp1 + MB1 x Cb1grp1/MF1 x Cf1grp2 + MB1 x Cb1grp2 = 2393 • 140 + 991 • 966/792 • 140 + 966 = 1223 • 1

[00353] As esferas congeladas necessárias são, portanto,descongeladas e misturadas e, opcionalmente, congeladas como esferas novamente. As misturas descongeladas podem ser utilizadas no processo de formulação.EXEMPLO 6

[00354] Os alérgenos do grupo 1 e do grupo 2 são determinados como descrito no exemplo 5.

EXAMPLE 76.1 Preparação de uma composição farmacêutica de rápida dissolução contendo um extrato

[00355] Composição do comprimido de ácaro do pó de casa antes da sublimação de água durante a secagem por congelamento:

Tabela 3Preparação do comprimido:

[00356] Gelatina, manitol e água purificada são misturados e a pré-mistura resultante é aquecida até à temperatura apropriada. Na sequência de resfriamento, o pH da solução é ajustado com uma solução de hidróxido de sódio (~ 6% p/p). As substâncias defármacos são adicionadas à pré-mistura em gotículas congeladas. O pH da mistura foi testado e ajustado, se necessário. As quantidades adicionais de água purificada necessária para completar a formulação são calculadas usando a fórmula de fabricação e transferido para a solução de mistura. A solução é doseada para dentro de tabuleiros pré-formados de plástico bolha. Após a administração, os plásticos bolha cheios são passados através de um túnel de congelação com nitrogênio líquido. Todos os produtos congelados são imediatamente colocados em uma câmara de refrigeração para armazenamento congelado antes da liofilização. As unidades são liofilizadas e armazenadas em uma câmara de armazenagem a seco em um ambiente de umidade controlada, até a vedação. As unidades liofilizadas foram então seladas com folha de alumínio.

Claims

1. Método de fabricação de um extrato de alérgenos de ácaro de pó doméstico compreendendo o alérgeno do ácaro do grupo 1 Der p 1 de pó doméstico e o alérgeno do ácaro do grupo 2 Der p 2 de pó doméstico, caracterizado pelo fato de que compreende:a) separar uma fração de corpos de ácaros Der p de uma cultura de ácaros Der p, em que a referida fração compreende mais de 70 por cento v/v de corpos de ácaros Der p,em que a) compreende as seguintes etapas:i) isolar uma fração de corpos de ácaro de uma cultura do ácaro Der p;ii) submeter a referida fração de corpos de ácaros Der p isolada em i) a centrifugação de densidade em um primeiro meio líquido tendo uma densidade mais alta do que os corpos de ácaros e uma densidade mais baixa do que as partículas do meio de cultura;iii) coletar os corpos de ácaros do referido primeiro meio líquido; e repetir a etapa ii) e iii) até que a fração de corpos de ácaros compreenda pelo menos 70 por cento v/v de corpos de ácaros;b) extrair os alérgenos da referida fração de corpos de ácaro Der p obtida em a) para produzir o referido extrato de alérgeno do ácaro Der p.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a fração de corpos de ácaro Der p da etapa i) é isolada por peneiração da cultura de Der p para produzir uma fração de corpos de ácaro com tamanho de 350 a 90 micrômetros.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a fração de corpos de ácaros Der p compreende pelo menos 85% v/v de corpos de ácaros.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a extração dos referidos corpos de ácaros Der p em b) resulta em um extrato de alérgenos compreendendo em peso quantidades iguais de alérgenos do grupo 1 e do grupo 2 ou mais alérgenos do grupo 2 do que do grupo 1.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa a) compreende ainda a etapa iv) de lavagem dos corpos dos ácaros para remover o referido primeiro líquido com um segundo líquido.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o primeiro líquido é glicerol anidro.

7. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o segundo líquido é etanol anidro.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o extrato de alérgenos de ácaro de pó doméstico é produzido na forma de uma solução aquosa farmacêutica ou um produto farmacêutico liofilizado.

9. Método de fabricação de um extrato de alérgenos de ácaro de pó doméstico compreendendo o alérgeno do ácaro do grupo 1 Der f 1 de pó doméstico e o alérgeno do do ácaro grupo 2 Der f 2 de pó doméstico, caracterizado pelo fato de que compreende:a) separar uma fração de corpos de ácaros Der f de uma cultura de ácaros Der f, em que a referida fração compreende mais de 70 por cento v/v de corpos de ácaros Der f,em que a) compreende as seguintes etapas:i) isolar uma fração de corpos de ácaro de uma cultura de ácaros Der f;ii) submeter a referida fração de corpos de ácaros isolados em i) a centrifugação de densidade em um primeiro meio líquido tendo uma densidade mais alta do que os corpos de ácaros e uma densidade mais baixa do que as partículas do meio de cultura;iii) coletar os corpos de ácaros do referido primeiro meio líquido; e repetir a etapa ii) e iii) até que a fração de corpos de ácaros compreenda pelo menos 70 por cento v/v de corpos de ácaros; eb) extrair os alérgenos da referida fração de corpos de ácaro Der f obtida em a) para produzir o referido extrato de alérgenos de ácaro Der f.

10. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a fração de corpos de ácaro Der f da etapa i) é isolada por peneiração da cultura de Der f para produzir uma fração de corpos de ácaro com tamanho de 350-90 micrômetros.

11. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a fração de corpos de ácaros Der f compreende pelo menos 85% v/v de corpos de ácaros.

12. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a extração dos referidos corpos de ácaros Der f resulta em um extrato de alérgenos compreendendo quantidades iguais em peso de alérgenos do grupo 1 e do grupo 2 ou mais alérgenos do grupo 2 do que do grupo 1.

13. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a etapa a) compreende ainda a etapa iv) de lavagem dos corpos dos ácaros para remover o referido primeiro líquido com um segundo líquido.

14. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o primeiro líquido é glicerol anidro.

15. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o segundo líquido é etanol anidro.

16. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o extrato de alérgenos de ácaro de pó doméstico é produzido na forma de uma solução aquosa farmacêutica ou de um produto farmacêutico liofilizado.

17. Método de fabricação de um extrato de alérgenos de ácaros de pó doméstico compreendendo os alérgenos de ácaros do grupo 1 Der p 1 e Der f 1 de pó doméstico e os alérgenos de ácaros de grupo 2 Der p 2 e Der f 2 de pó doméstico, caracterizado pelo fato de que compreendea) separar uma fração de corpos de ácaros Der p de uma cultura de ácaros Der p, em que a referida fração de corpos de ácaros Der p compreende mais de 70 por cento v/v de corpos de ácaros Der p, em que a) compreende as seguintes etapas:i) isolar uma fração de corpos de ácaros Der p de uma cultura de ácaros Der p;ii) submeter a referida fração de corpos de ácaros Der p isolada em i) a centrifugação de densidade em um primeiro meio líquido tendo uma densidade mais alta do que os corpos de ácaros e uma densidade mais baixa do que as partículas do meio de cultura;iii) coletar os corpos do ácaro Der p do referido primeiro meio líquido; e repetir os passos ii) e iii) até a fracção do ácaro Der p compreender pelo menos 70 por cento v/v de corpos do ácaro Der p;b) extrair os alérgenos da referida fração de corpos de ácaro Der p obtida em a) para produzir um extrato de alérgeno de ácaro Der p;c) separar uma fração de corpos de ácaros Der f de uma cultura de ácaros Der f, em que a referida fração de corpos de ácaros Der f compreende mais de 70 por cento v/v de corpos de ácaros Der f, em que c) compreende as seguintes etapas:i) isolar uma fração de corpos de ácaro Der f de uma cultura de ácaros Der f;ii) submeter a referida fração de corpos de ácaros isolados em i) a centrifugação de densidade em um primeiro meio líquido tendo uma densidade mais alta do que os corpos de ácaros e uma densidade mais baixa do que as partículas do meio de cultura; iii) coletar os corpos de ácaros Der f do referido primeiro meio líquido; e repetir os passos ii) e iii) até que a fracção de corpos de ácaros Der f compreenda pelo menos 70 por cento v/v de corpos de ácaros de Der f;d) extrair os alérgenos da referida fração de corpos de ácaros Der f obtida em c) para produzir um extrato de alérgenos de ácaros Der f; ee) misturar um ou mais dos referidos extratos de alérgenos de ácaros Der p produzidos em b) com um ou mais dos referidos extratos de alérgenos de ácaros Der f produzidos na etapa d) para produzir um extrato de alérgenos de ácaros de pó doméstico compreendendo os referidos alérgenos de ácaros Der p 1, Der f 1, Der p 2 e Der f 2 de pó doméstico.

18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a fração de corpos de ácaro Der p da etapa i) é isolada por peneiração da cultura Der p para produzir uma fração de ácaro Der p com tamanho de 350-90 micrômetros; eem que a fração de corpos Der f da etapa i) é isolada por peneiração da cultura Der f para produzir uma fração de corpos de ácaro Der f com tamanho de 350-90 micrômetros.

19. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a extração dos referidos corpos de ácaros Der p em b) resulta em um extrato compreendendo quantidades iguais em peso de alérgenos do grupo 1 e do grupo 2 ou mais alérgenos do grupo 2 do que alérgenos do grupo 1; eem que a extração dos referidos corpos de ácaros Der f em d) resulta em um extrato de alérgenos compreendendo quantidades iguais em peso de alérgenos do grupo 1 e do grupo 2 ou mais alérgenos do grupo 2 do que do grupo 1.

20. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a etapa b) compreende ainda que o extrato de alérgenos de ácaro Der p de b) seja misturado com um extrato de alérgenos de ácaro Der p adicional obtido por extração de uma fração de partículas fecais de ácaro Der p compreendendo mais de 70 % v/v de partículas fecais de ácaros p, em que a fração de partículas fecais de ácaros Der p são isoladas de uma cultura de ácaros Der p, para produzir um extrato de alérgenos de ácaro Der p que é usado na etapa e); eem que a etapa d) compreende ainda que o extrato de alérgenos de ácaro Der f de d) seja misturado com um extrato de alérgenos de ácaro Der f adicional obtido por extração de uma fração de partículas fecais de ácaro Der f compreendendo mais de 70% v/v partículas fecais de ácaro f, em que a fração de partículas fecais de ácaro Der f é isolada de uma cultura de ácaros Der f, para produzir o referido extrato de alérgeno de ácaro Der f que é usado na etapa e); eem que a etapa e) compreende a mistura de um ou mais dos referidos extratos de alérgenos Der p obtidos com um ou mais dos referidos extratos de alérgenos Der f obtidos para produzir um extrato de alérgenos de ácaros de pó doméstico compreendendo os referidos alérgenos de ácaros Der p 1, Der f 1, Der p 2 e Der f 2 de pó doméstico.

21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o referido extrato de alérgenos de ácaro Der p produzido e que é usado na etapa e) contém uma quantidade em peso de alérgenos do grupo 1 para alérgenos do grupo 2 em uma razão que varia de 1: 0,7 a 1: 1,5; eem que o referido extrato de alérgenos de ácaro Der f produzido e que é usado na etapa e) contém uma quantidade em peso de alérgenos do grupo 1 para alérgenos do grupo 2 em uma razão que varia de 1: 0,7 a 1: 1,5.

22. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o extrato de alérgenos de ácaro de pó doméstico produzido na etapa e) contém uma quantidade em peso de alérgenos do grupo 1 para alérgenos do grupo 2 em uma proporção que varia de 1: 0,7 a 1: 1,5.

23. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o extrato de alérgenos de ácaro de pó doméstico produzido na etapa e) contém uma quantidade de cada um dos alérgenos Der f 1, Der f 2, Der p 1 e Der p 2 de modo que o alérgeno selecionado entre Der f 1, Der f 2, Der p1 e Der p 2 que estão presentes na menor concentração (p/v) no extrato de alérgenos, estão presentes em uma concentração que está acima de 70% da concentração de alérgenos de Der f 1, Der f 2, Der p 1 ou Der p 2 presentes na concentração mais alta (p/v).

24. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o extrato de alérgenos de ácaro de pó doméstico é produzido na forma de uma solução aquosa farmacêutica ou de um produto farmacêutico liofilizado.