BR122019028108B1

BR122019028108B1 - Composições de methylobacterium antifúngicas e métodos de utilização

Info

Publication number: BR122019028108B1
Application number: BR122019028108-4A
Authority: BR
Inventors: Renée Rioux
Original assignee: Newleaf Symbiotics, Inc
Priority date: 2015-06-10
Filing date: 2016-06-10
Publication date: 2023-04-11
Also published as: EP3711489A1; CA2988782C; US11278029B2; CN114365747A; CN108271342B; EP3307071A4; BR112017026650A2; CA2988782A1; WO2016201284A2; BR112017026650B1; EP3307071B1; US20220256862A1; ZA201708245B; WO2016201284A3; CA3204746A1; CN108271342A; CN114365747B; EP3307071A2; UY36723A; US20180295841A1

Abstract

Composições compreendendo Methylobacterium com atividade antifúngica, métodos para controlar fungos patogênicos de plantas, e métodos de preparação das composições são fornecidos.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[0001] Este pedido de patente internacional reivindica o benefício do pedido de patente provisório norte-americano No. US 62/173,789, depositado em 10 de junho de 2015, o qual é incorporado aqui por referência em sua totalidade.

DECLARAÇÃO DE LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[0002] Uma listagem de sequência contendo o arquivo denominado 53907_153532_SL.txt que é 14.824.692 bytes (medida Em MS-Windows ®) e criado em 10 de junho de 2016, compreende 9.188 sequências, é fornecido com o presente pedido através do sistema EFS do USPTO, e é incorporado aqui por referência em sua totalidade.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0003] Compostos orgânicos de um-carbono, tais como metano e metanol são encontrados extensivamente na natureza e são utilizados como fontes de carbono por bactérias classificadas como metanotróficas e metilotróficas. As bactérias metanotróficas incluem espécies nos gêneros Methylobacter, Methylomonas, Methylomicrobium, Methylococcus, Methylosinus, Methylocystis, Methylosphaera, Methylocaldum e Methylocella (Lidstrom, 2006). As metanotróficas possuem a enzima metano monooxigenase que incorpora um átomo de oxigênio de 02 em metano, formando metanol. Todos as metanotróficas são utilitárias de um- carbono obrigatório que são incapazes de usar compostos contendo ligações carbono-carbono. As metilotróficas, por outro lado, também podem utilizar compostos orgânicos mais complexos, tais como ácidos orgânicos, álcoois superiores, açúcares e semelhantes. Assim, as bactérias metilotróficas são metilotróficas facultativas. Bactérias metilotróficas incluem espécies nos gêneros Methylobacterium, Hyphomicrobium, Methylophilus, Methylobacillus, Methylophaga, Aminobacter, Methylorhabdus, Methylopila, Methylosulfonomonas, Marinosulfonomonas, Paracoccus, Xanthobacter, Ancylobacter (também conhecida como Microcyclus), Thiobacillus, Rhodopseudomonas, Rhodobacter, Acetobacter, Bacillus, Mycobacterium, Arthobacter e Nocardia (Lidstrom, 2006).

[0004] A maioria das bactérias metanotróficas do gênero Methylobacterium são rosa-pigmentadas. Elas são convencionalmente referidas como bactérias PPFM, sendo metilotróficas facultativas, rosa-pigmentadas. Green (2005,002006) identificou doze espécies validadas no gênero Methylobacterium, especificamente, M. aminovorans, M. chloromethanicum, M. dichloromethanicum, M. extorquens, M. fujisawaense, M. mesophilicum, M. organophilum, M. radiotolerans, M. rhodesianum, M. rhodinum, M. thiocyanatum e M. zatmanii. No entanto, M. nidulans é uma methylobacterium de fixação de Nitrogênio que não é uma PPFM (Sy et al, 2001). A Methylobacterium é de natureza ubíqua, sendo encontrada em solo, pó, água fresca, sedimentos e superfícies de folhas, bem como em ambientes industriais e clínicos (Green, 2006).

[0005] Fusarium graminearum é o agente causador da Praga da cabeça Fusarium (FHB) em trigo, cevada, e outros cereais. Este patógeno é também responsável pela podridão da espiga e do caule no milho. Além de causar reduções significativas no rendimento e na qualidade do grão, F. Graminearum produz micotoxinas nocivas que são uma maior preocupação na indústria de ração animal. Além disso, há um problema crescente em agricultura com patógenos fúngicos, tais como F. graminearum tornando-se resistente a uma ampla faixa de fungicidas químicos. Assim, existe uma necessidade nas indústrias de preparação e ração para animais para o desenvolvimento de novas abordagens efetivas para o controle de patógenos fúngicos.

[0006] A rizoctonia solani é um fungo basideomiceto polifago, com uma ampla faixa de hospedeiros que abrange muitas plantas dicotiledôneas e dicotiledôneas economicamente importantes. R solani é conhecido principalmente como um agente de amortecimento de patógeno, porque ele ataca as mudas jovens, impedindo sua emergência do solo ou mata os mesmos logo após a emergência. Este patógeno transportado por solo persiste por anos no solo tanto por sobreviventes como uma saprolita, quanto pela formação de estruturas de sobrevivência dormente conhecidas como esclerócios. Além de fumigação, o que não é frequentemente possível devido às despesas e preocupações ambientais, rotações de múltiplos anos para longe das colheitas de hospedeiro, tratamento de semente química, e práticas culturais que promovem a saúde da planta são métodos preferidos de administração de doenças. Nenhum desses tratamentos, entretanto, é completamente eficaz, particularmente, em resfriamento, anos úmidos que promovem crescimento de patógenos e estresse da saúde das mudas.

[0007] Sclerotinia sclerotium é um fungo ascomiceto polifago, com uma faixa hospedeira que abrange milhares de plantas dicotiledôneas. O mofo branco, causado por S. sclerorum, em soja e outras colheitas leguminosas é de importância agronômica particular. Sob condições ambientais úmidas, frias, esta doença causa uma senescência prematura e rendimentos drasticamente reduzidos. Não existe nenhuma resistência genética completa disponível para o mofo branco e a resistência parcial é apenas marginalmente eficaz. Além disso, aplicações fungicidas especificamente para o mofo branco só são aplicadas em anos quando a doença é altamente provável e deve ser aplicada dentro de uma janela estreita para prover uma proteção eficaz.

[0008] A síndrome de morte súbita de soja primeiramente apareceu em Arkansas em 1971 e tem se espalhado para estados atravessando a região mediana dos estados unidos (Rupe et al. 1991). A doença é causada pelo fungo transportado por solo Fusarium virguliforme, anteriormente conhecido como Fusarium solani sp. Glycines, e é exacerbado por condições de alta umidade do solo e compactação do solo (Ringler, 1995; Roy et al 1997). Os sintomas de SDS incluem uma aparência semelhante a mosaico do tecido foliar, no qual as veias principais permanecem verdes, enquanto outras áreas de folha tornam-se cloróticas ou necróticas, descoloração avermelhada de tecido de xilema, escurecimento ou rotação do tecido da raiz, e reduções significativas na saúde global da planta e rendimento. De 1994 - 2010, perdas de rendimento de soja para doenças causadas por Espécies de Fusarium foram estimadas a 36,2 milhões de alqueire/ano e a maioria destas perdas foi atribuída a F. Viguliforme (Wrather et al 2010).

[0009] A falta de medidas eficazes de administração de doenças é a principal razão que a maior parte das perdas de rendimento de soja para Fusarium spp. durante este tempo, pode ser atribuído a F. virguliforme. Devido à natureza suspensa desta doença, existem poucas opções para erradicar o patógeno, uma vez que tenha sido introduzido. Consequentemente, métodos culturais que promovem a saúde da planta, cultivares resistentes e tratamento de semente são táticas de gerenciamento de SDS preferido. Nenhuma destas táticas fornece controle completo da doença, e opções para cultivares resistentes e tratamentos de semente rotulados para SDS são limitados. Além disso, iLevo (flupiram; Bayer CropScience), a opção de tratamento de semente Primária para SDS, é caro e tem um impacto negativo na saúde da planta da estação precoce. As aplicações de bactérias PPFM em conjunto com outras estratégias para combater o SDS proporcionam um método de atração para melhorar a supressão desta doença economicamente importante e combater as perdas de rendimento significativas às quais ela contribui.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0010] São providas aqui composições que compreendem Methylobacterium que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas, métodos de uso das composições para controlar infecções fúngicas de plantas, partes de planta, e plantas derivadas das mesmas, e métodos de produção das composições. Tal Methylobacterium que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas é em determinados casos referidos aqui como "metanobactéria que inibe fungos patogênicos de plantas" ou, em certos contextos, como simplesmente "Methylobacterium" em determinadas concretizações, a Methylobacterium que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas pode ser distinguida de outras Methylobacterium que não inibem fungos patogênicos de plantas por ensaiar para a capacidade da Methylobacterium para inibir doença fúngica em uma planta ou parte de planta isolada.

[0011] São providas aqui composições que compreendem uma mono- ou co-cultura de Methylobacterium que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas e um excipiente agrícola aceitável e/ou um adjuvante agrícola aceitável. Em certas concretizações, a Methylobacterium sp. é selecionada a partir do grupo consistindo em M. aminovorans, M. extorquens, M. fujisawaense, M. mesophilicum, M. radiotolerans, M. rhodesianum, M. nodulans, M. phyllosphaerae, M. thiocyanatum, and M. oryzae. Em certas concretizações, a Methylobacterium não é M. radiotolerans or M. oryzae. Em certas concretizações, o fungo patogênico de plantas é selecionado do grupo consistindo em Alternaria sp., an Ascochyta sp., an Aspergillus sp., a Bipolaris sp., a Botrytis sp., a Bremia sp., a Cercospora sp., a Cochliobolus sp., a Colletotrichum sp., a Diplodia sp., an Erysiphe sp., an Exserohilum sp., a Fusarium sp., Gaeumanomyces sp., Macrophomina sp., a Magnaporthe sp., a Nectria sp., a Peronospora sp., a Phakopsora sp., a Phialophora sp., a Phoma sp., a Phymatotrichum sp., a Phytophthora sp., a Plasmopara sp., a Puccinia sp., a Podosphaera sp., a Pyrenophora sp., a Pyricularia sp, a Pythium sp., a Rhizoctonia sp., a Sclerotium sp., a Sclerotinia sp., a Septoria sp., a Stagonospora sp., a Thielaviopsis sp., an Uncinula sp, an Ustilago sp., a Venturia sp., e um Verticillium sp.. Em certas concretizações, o Fusarium sp. é selecionado do grupo consistindo em Fusarium graminearum, Fusarium verticillioides, Fusarium oxysporum, Fusarium virguliforme, e Fusarium solani. Em certas concretizações de qualquer uma das composições acima mencionadas, a composição compreende uma substância sólida em que uma mono-cultura ou co-cultura de methylobacterium é aderida a este. Em certas concretizações, o fungo patogênico de plantas Rhizoctonia sp. ou um Sclerotinia sp. Em certas concretizações, a Rizoctonia sp. é Rhizoctonia solani or Rhizoctonia cerealis. Em certas concretizações, a Esclerotinia sp. é Sclerotinia sclerotiorum or Sclerotinia homoeocarpa. Em certas concretizações, a composição compreende um colóide formado pela substância sólida, em que uma mono-cultura ou co-cultura de Methylobacterium é aderida ao mesmo e um líquido. Em certas concretizações, o colóide é um gel. Em certas concretizações de qualquer uma das composições acima mencionadas, a composição é uma emulsão. Em certas concretizações de qualquer uma das composições acima mencionadas, a Methylobacterium é NLS0066 (RRL B -50940), LS0089 (RRL B -50933), uma combinação de NLS0066 e NLS0017 (NRRL B-50931), ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações de qualquer uma das composições acima mencionadas, a composição compreende ainda uma cepa de Methylobacterium NLS0020 (NRRL B -50930) ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações de qualquer uma das composições acima mencionadas, a Methylobacterium é NLS0066, NLS0089, uma combinação de NLS0066 e NLS0017, uma combinação de NLS0066 e NLS0020, uma combinação de NLS0089 e NLS0020, ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações, a Methylobacterium é NLS0089 e o fungo patogênico de plantas é Rhizoctonia sp. ou uma Esclerotinia sp. Em certas concretizações, a Methylobacterium é NLS066, NLS066 e NLS0017, NLS0089, ou NLS0089 e NLS0020 e o fungo patogênico de plantas é Fusarium graminearum, Cercospora zeae-maydis, ou Colletotrichum graminicola. Em certas concretizações, a Methylobacterium é NLS0089, ou NLS0089 e NLS0020 e o fungo patogênico de plantas é Septoria tritici, Stagonospora nodorum, Pythium spp., Rhizoctonia solani, a Fusarium spp., Magnaportha grisea, Pyrenophora tritici-repentis, Microdochium nivale, Sclerotinia sclerotiorum, Cercospora sojina, Cercospora kikuchii, Fusarium spp., Rhizoctonia solani, Fusarium virguliforme, Pythium spp., Rhizoctonia solani, Gibberella zeae ou um Pythium spp. Em certas concretizações de qualquer uma das composições acima mencionadas, a Methylobacterium sp. que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas tem pelo menos um elemento de DNA polimórfico ou gene ortólogo que está presente em isolado de Methylobacterium NLS0066, mas que está ausente de um ou mais isolados de Methylobacterium NLS0020 e NLS0037 que não inibem as infecções de Fusarium graminouum nas plantas. Em certas concretizações, a Methylobacterium que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas tem pelo menos um gene que é ortólogos a, ou que tem pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, ou 100% de identidade de sequência a, pelo menos um gene selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 7279 - 9187, e 9188. Em certas concretizações, a Methylobacterium sp. que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas tem pelo menos um gene que é ortólogo, ou que codifica uma proteína tendo pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99% 5 %, Ou 100% de identidade de sequência a, pelo menos uma proteína selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 2585 - 4593, e 4594. Em qualquer uma das concretizações acima mencionadas, o fungo patógeno vegetal que é inibido pode estar em sua forma anamórfica, sua forma telemórfica, ou em sua forma anamórfica e suas formas telemórficas. Em qualquer uma das concretizações acima mencionadas, a composição pode compreender uma concentração inibitória de fungos da mono- ou co-cultura de Methylobacterium. Em qualquer uma das concretizações acima mencionadas, a composição pode ainda compreender um composto anti-fungico selecionado do grupo que consiste em um azol, ditiocarbamato, estrobilurina e benzimidazole. Em certas concretizações, o azol é ipconazol. Uso de qualquer uma das composições acima mencionadas para revestir ou revestir parcialmente uma parte vegetal (por exemplo, uma semente) para inibir o crescimento de qualquer um dos fungos patogênicos de plantas acima mencionados também é fornecido aqui.

[0012] Também são providas plantas ou partes de plantas que são pelo menos parcialmente revestidas com qualquer uma das composições acima mencionadas compreendendo uma mono-ou co-cultura de Methylobacterium. Em certas concretizações, a planta pelo menos parcialmente revestida ou parte de planta é uma planta de cereais ou parte de planta de cereais em certas concretizações, a planta de cereais pelo menos parcialmente revestida é selecionada do grupo consistindo em um arroz, trigo, milho, cevada, milho, sorgo, aveia e centeio. Em certas concretizações, a parte de planta de cereal pelo menos parcialmente revestida é selecionada do grupo consistindo em arroz, trigo, milho, cevada, milho, sorgo, aveia, e parte de planta centeio Em certas concretizações, a planta ou parte de planta pelo menos parcialmente revestida é uma parte de planta dicotiledônea em certas concretizações, a planta dicotiledônea ou parte de planta é uma parte de planta de soja, amendoim ou tomate em certas concretizações de qualquer um dos mesmos acima de plantas ou partes de plantas, a Methylobacterium na composição foi obtida de um gênero vegetal, espécie vegetal, sub-espécie vegetal, ou cultivar de planta que é distinto do gênero, espécie, sub-espécie, ou cultivar da planta ou parte vegetal que é revestida com a composição. Também são providos produtos vegetais processados que compreendem uma quantidade detectável de qualquer uma das Methylobacteriums de qualquer uma das composições acima mencionadas. Em certas concretizações, a Methylobacterium que é detectada foi obtida a partir de um gênero vegetal, espécie vegetal, subespécie vegetal, ou cultivar de planta que é distinto do género, espécie, sub-espécie, ou cultivar usado para obter o produto vegetal processado. Em certas concretizações, a Methylobacterium é LS066, LS066 e LS0017, LS0089, ou LS0089 e NLS0020, o fungo patogênico de plantas que é inibido é Fusarium graminearum e a planta ou parte vegetal é uma planta de trigo ou parte vegetal Em certas concretizações, a Methylobacterium é LS066, LS066 e LS0017, LS0089, ou NLS0089 e NLS0020, o fungo patogênico de planta que é inibido é Cercospora zeae-maydis, ou Colltotrichum Gramincola, e a planta ou parte vegetal é uma planta de milho ou parte de planta de milho. Em certas concretizações, a Methylobacterium é NLS0089 ou LS0089 e NLS0020, o fungo patogênico de plantas que é inibido é o Septoria tritici, Stagonospora nodorum, Pythium spp. Rhizoctonia solani, a Fusarium spp. Magnaporte grisea, pyenophora tritici-repents, Microdochum nivale, e a planta ou parte de planta é uma planta de trigo ou parte de planta de trigo. Em certas concretizações, a Methylobacterium é LS0089 ou NLS0089 e LS0020, o fungo patogênico de plantas que é inibido é Sclerotinia sclerotium, Cercospora sojina, Cercospora kikuchii, Fusarium spp. Rhizoctonia solani, Fusarium Virguliforme, Pythium spp. e a planta ou parte vegetal é uma planta de soja ou uma parte vegetal de soja. Em certas concretizações, a Methylobacterium é LS0089 ou NLS0089 e LS0020 e o fungo patogênico de plantas que é inibido é um Fusarium spp. Pythium spp. ou Giberella Zeae, e a planta ou parte de planta é uma planta de milho ou parte de planta de Milho em certas concretizações, a planta ou parte vegetal compreende uma quantidade inibitória fúngica da Methylobacterium. Em certas concretizações, uma quantidade inibitória fúngica da Methylobacterium aplicada a uma parte vegetal {por exemplo, uma semente) é cerca de 1.0 x 103, 1.0 x 104, ou 1.0 x 105 a cerca de 1.0 x 107 or 1.0 x 108 CFUs de bactéria PPFM/parte vegetal (por exemplo, uma semente) Em certas concretizações, a Methylobacterium é heteróloga à planta ou parte vegetal Em certas concretizações de qualquer uma das partes de planta acima mencionadas, a parte de planta é uma folha, uma haste, uma flor, uma raiz, um tubérculo ou uma semente.

[0013] Também são providos métodos para a produção de qualquer uma das composições acima mencionadas contendo a Methylobacterium que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas que compreende a combinação de uma Methylobacterium que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas com um excipiente farmaceuticamente aceitável e/ou com um adjuvante agrícola aceitável. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium é selecionada do grupo consistindo em M. aminovorans, M. extorquens, M. fujisawaense, M. mesophilicum, M. radiotolerans, M. rhodesianum, M. nodulans, M. phyllosphaerae, M thiocyanatum, and M. oryzae. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium não é M. radiotolerans or M. oryzae. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium é NLS0066, NLS0089, uma combinação de LS0066 e LS0017, ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a composição compreende ainda a cepa Methylobacterium LS0020 ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a Methylobacterium é LS0066, LS0089, uma combinação de NLS0066 e LS0017, uma combinação de NLS0066 e LS0020, uma combinação de LS0089 e NLS0020, ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações, a planta ou parte vegetal é uma planta de soja ou uma parte vegetal de soja em certas concretizações, a planta ou parte vegetal é selecionada do grupo consistindo em arroz, trigo, milho, cevada, millet, sorgo, aveia, e planta de centeio ou parte de planta Em certas concretizações, a Methylobacterium é NLS0089 e o fungo patogênico de planta é um Rizoctonia sp. ou um Esclerotinia sp. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium sp. que inibe o crescimento de um fungo patogênico de planta tem pelo menos um elemento de DNA polimórfico ou gene ortólogo que está presente em NLS0066, mas que está ausente de um ou mais isolados de Methylobacterium NLS0020 e/ou NLS0037 que não inibem infecções de Fusarium graminarum de plantas. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium sp. que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas tem pelo menos um gene que é ortólogos, ou que tem pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100%) identidade de sequência a, pelo menos um gene selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 7279-9187, e 9188. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium sp. que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas tem pelo menos um gene que é ortólogos, ou que codifica uma proteína tendo pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99% 5 %, ou 100%) de identidade de sequência, pelo menos uma proteína selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 2585 - 4593, e 4594. Em certas concretizações dos métodos, o fungo patogênico de plantas é selecionado do grupo consistindo em um Alternaria sp., um Ascochyta sp., um Aspergillus sp., um Bipolaris sp., um Botrytis sp., um Bremia sp., um Cercospora sp., um Cochliobolus sp., um Colletotrichum sp., um Diplodia sp., um Erysiphe sp., um Exserohilum sp., um Fusarium sp., Gaeumanomyces sp., Macrophomina sp., um Magnaporthe sp., um Nectria sp., um Peronospora sp., um Phakopsora sp., um Phialophora sp., um Phoma sp., um Phymatotrichum sp., um Phytophthora sp., um Plasmopara sp., um Puccinia sp., um Podosphaera sp., um Pyrenophora sp., um Pyricularia sp, um Pythium sp., um Rhizoctonia sp., um Sclerotium sp., um Sclerotinia sp., um Septoria sp., um Stagonospora sp., um Thielaviopsis sp., um Uncinula sp, an Ustilago sp., um Venturia sp. e um Verticillium sp. Em certas concretizações dos métodos, o fungo patogênico de plantas é um Fusarium sp. Em certas concretizações dos métodos, o Fusarium sp. é selecionado do grupo que consiste em Fusarium graminearum, Fusarium verticillioides, Fusarium oxysporum, Fusarium virguliforme, and Fusarium solani. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a mono- ou co- cultura de Methylobacterium é aderida a uma substância sólida. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium que é aderida à substância sólida é combinada com um líquido para formar uma composição que é um colóide. Em certas concretizações dos métodos, o colóide é um gel. Em certas concretizações dos métodos, a mono- ou co- cultura de Methylobacterium aderiu aos mesmos a substância sólida é fornecida pela cultura da Methylobacterium na presença da substância sólida. Em certas concretizações dos métodos, a composição compreende uma emulsão. Em certas concretizações de métodos, de acordo com a presente invenção, a Methylobacterium é provida pela cultura da Methylobacterium em uma emulsão. Em qualquer uma das concretizações acima mencionadas, o fungo de patógeno vegetal que é inibido pode estar em sua forma anamórfica, sua forma telemórfica, ou em ambas as suas formas anamórficas e telemórficas. Em qualquer uma das concretizações acima mencionadas, a composição pode ainda compreender um composto antifúngico selecionado do grupo consistindo em um azol, ditiocarbamato, estrobilurina e benzimidazol. Em certas concretizações, o azol é ipconazol.

[0014] Também são providos métodos para controlar um fungo patogênico de plantas que compreende aplicar qualquer uma das composições acima mencionadas que contêm uma Methylobacterium que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas a uma planta ou uma parte vegetal em uma quantidade que fornece inibição de infecção pelo fungo patogênico de plantas na planta, parte vegetal, ou uma planta obtida a partir daí em relação à infecção de uma planta de controle, parte de planta, ou planta obtida a partir da mesma que não recebeu uma aplicação da composição. Em certas concretizações dos métodos, a aplicação da composição fornece pelo menos 40%, 50%, 75%, pelo menos 85%, ou pelo menos 95% de inibição de uma infecção fúngica patogênica vegetal na planta, parte vegetal, ou uma planta derivada da mesma relativa à infecção da planta de controle, parte de planta, ou planta obtida a partir da mesma. Em certas concretizações dos métodos, a parte vegetal é selecionada a partir do grupo que consiste em uma folha, uma haste, uma flor, uma raiz, um tubérculo e uma semente. Em certas concretizações dos métodos, o método compreende ainda a etapa de colher pelo menos uma parte vegetal selecionada do grupo que consiste em uma folha, uma haste, uma flor, uma raiz, um tubérculo, ou uma semente da planta ou parte vegetal Em certas concretizações dos métodos, os níveis de micotoxina na parte vegetal são reduzidos em pelo menos 50%, pelo menos 75%, pelo menos 85%, ou pelo menos 95% em relação a uma parte vegetal obtida da planta de controle, parte de planta, ou planta obtida a partir da mesma. Em certas concretizações dos métodos acima mencionados, o método compreende ainda a obtenção de uma composição de alimento ou alimento processada a partir da planta ou parte vegetal. Em certas concretizações dos métodos acima mencionados, os níveis de micotoxina no alimento processado ou composição de alimentação são reduzidos em pelo menos 50%, pelo menos 75%, pelo menos 85%, ou pelo menos 95% em relação a um alimento processado ou composição de alimentação obtida da instalação de controle, parte de planta, ou planta obtida a partir da mesma. Em certas concretizações, uma quantidade inibitória fúngica da Methylobacterium é aplicada à parte vegetal Em certas concretizações, a quantidade inibitória fúngica de Methylobacterium é aplicada a uma parte vegetal (por exemplo, uma semente) é cerca de 1,0 x 103, 1,0 x 104, ou 1,0 x 105 a cerda de 1,0 x 107, 1,0 x 108, 1,0 x 109, ou 1,0 x 1010 CFUs de parte de planta (por exemplo, uma semente) em certas concretizações, a Methylobacterium é heteróloga à planta ou parte vegetal. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a parte de planta é uma folha, uma haste, uma flor, uma raiz, um tubérculo, ou uma semente. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium é LS0066, LS0089, uma combinação de NLS0066 e LS0017, ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a composição compreende ainda a cepa Methylobacterium LS0020 Ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a Methylobacterium é NLS0066, LS0089, uma combinação de NLS0066 e LS0017, uma combinação de LS0066 e LS0020, uma combinação de NLS0089 e LS0020, ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações, a planta ou parte vegetal é uma planta de soja ou uma parte vegetal de soja em certas concretizações, a planta ou parte vegetal é selecionada do grupo consistindo em arroz, trigo, milho, cevada, millet, sorgo, aveia, e centeio vegetal ou parte Vegetal em certas concretizações, a Methylobacterium é LS0089 e o fungo patogenico vegetal é o Rhizoctonia spp. ou um Sclerotinia spp. Em certas concretizações, a Methylobacterium é NLS066, NLS066 e LS0017, LS0089, ou LS0089 e NLS0020, o fungo patogênico de plantas que é inibido é Fusarium graminearum e a planta ou parte vegetal é uma planta de trigo ou parte vegetal. Em certas concretizações, a Methylobacterium é LS066, LS066 e LS0017, LS0089, ou NLS0089 e NLS0020, o fungo patogênico de plantas que é inibido é Cercospora zeae-maydis, ou Colltotrichum gramincola e a planta ou parte de planta é uma planta de milho ou parte de planta de milho Em certas concretizações, a Methylobacterium é NLS0089 ou LS0089 e NLS0020, o fungo patogênico de plantas que é inibido é Septoria tritici, stagonopora nodorum, Pythium spp. Rhizoctonia solani, & Fusarium spp. Magnaporte grisea, pyenophora tritici-repents, microdochum nivale, e a planta ou parte vegetal é uma planta de trigo ou parte de planta de trigo Em certas concretizações, a Methylobacterium é LS0089 ou NLS0089 e LS0020, o fungo patogênico de plantas que é inibido é Sclerotinia sclerotium, Cercospora sojina, Cercospora kikuchii, Fusarium spp. Rhizoctonia solani, Fusarium Virguliforme, Pythium spp. e a planta ou parte vegetal é uma planta de soja ou uma parte vegetal de soja Em certas concretizações, a Methylobacterium é LS0089 ou NLS0089 e LS0020 e o fungo patogênico de plantas que é inibido é um Fusarium spp. Pythium spp. ou Giberella Zeae, e a planta ou parte de planta é uma planta de milho ou parte de planta de milho.

[0015] Também são providas Methylobacterium isolada que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas. Em certas concretizações, a Methylobacterium tem pelo menos um elemento de DNA polimórfico ou gene ortólogo que está presente no NLS0066, mas que está ausente de um ou mais isolados de Methylobacterium LS0020 E/ou LS0037 que não inibem as infecções por Fusarium graminarum nas plantas. Em certas concretizações, a Methylobacterium sp. que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas tem pelo menos um gene que é ortólogos a, ou que tem pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, ou 100% de identidade de sequência a, pelo menos um gene selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 7279 - 9187, e 9188. Em certas concretizações, a Methylobacterium sp. que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas tem pelo menos um gene que é ortólogos, ou que codifica uma proteína tendo pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, ou 100% de identidade de sequência a, pelo menos uma proteína selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 2585 - 4593, e 4594. Em certas concretizações, a Methylobacterium é selecionada do grupo que consiste em M. aminovorans, M. extorquens, M. fujisawaense, M. mesophilicum, M. radiotolerans, M. rhodesianum, M. nodulans, M. phyllosphaerae, M. thiocyanatum, and M. oryzae. Em certas concretizações, a Methylobacterium não é M. radiotolerans ou M. oryzae. Em certas concretizações, o fungo patogênico de plantas é selecionado do grupo consistindo em um Alternaria sp., um Ascochyta sp., um Aspergillus sp., um Bipolaris sp., um Botrytis sp., um Bremia sp., um Cercospora sp., um Cochliobolus sp., um Colletotrichum sp., um Diplodia sp., um Erysiphe sp., um Exserohilum sp., um Fusarium sp., Gaeumanomyces sp., Macrophomina sp., um Magnaporthe sp., um Nectria sp., um Peronospora sp., um Phakopsora sp., um Phialophora sp., um Phoma sp., um Phymatotrichum sp., um Phytophthora sp., um Plasmopara sp., um Puccinia sp., um Podosphaera sp., um Pyrenophora sp., um Pyricularia sp, um Pythium sp., um Rhizoctonia sp., um Sclerotium sp., um Sclerotinia sp., um Septoria sp., um Stagonospora sp., um Thielaviopsis sp., um Uncinula sp, um Ustilago sp., um Venturia sp., e um Verticillium sp. Em qualquer uma das concretizações acima mencionadas, os fungos de patógenos vegetais que são inibidos podem estar em sua forma anamórfica, sua forma telemórfica, ou em ambas as suas formas anamórficas e telemórficas.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0016] Os desenhos anexos, os quais são incorporados em e formam uma parte do relatório descritivo, ilustram certas concretizações da presente descrição. Nos desenhos:

[0017] A figura 1 é uma fotografia de resultados de doença representativos em plantas de distensão de bródio tratadas com PPFM. As setas pretas indicam desenvolvimento de doença significativo, como evidenciado pela presença de micélios de fungos brancos abundantes e necrose spikelet, em plantas que recebem A) tratamento de controle sem PPFM, B) Cepa NLS0017 com tratamento de semente com PPFM, C) cepa NLS0020 com tratamento de sementes com PPFM e D) cepa NLS0037 com tratamento de sementes com PPFM. As plantas que receberam o tratamento de sementes E) da cepa NLS0066 com PPFM reduziram significativamente a necrose de espinha e a abundância de micélios fúngicos, conforme indicado pela ponta de flecha cinzenta.

[0018] A figura 2 é um gráfico de barras que mostra a supressão da severidade do sintoma wilt do mofo branco de soja por LS0089

[0019] A figura 3 é um gráfico de barras que mostra a supressão do desenvolvimento do comprimento da lesão do mofo branco de soja pelo NLS0089

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO Definições

[0020] Conforme usado aqui, as frases "aderidas ao mesmo" e "aderente" se referem a Methylobacterium que é associada com uma substância sólida por crescimento, ou tendo sido desenvolvida, em uma substância sólida.

[0021] Como usado aqui, a frase "adjuvante agricolamente aceitável" se refere a uma substância que melhora o desempenho de agente ativo em uma composição que compreende uma mono-cultura ou co-cultura de Methylobacterium para o tratamento de plantas e/ou partes de planta.

[0022] Conforme usado aqui, a frase "excipiente farmaceuticamente aceitável" se refere a uma substância essencialmente inerte que pode ser usada diluente e/ou veículo para um agente ativo em uma composição para o tratamento de plantas e/ou partes de planta. Em certas composições, um agente ativo pode compreender uma monocultura ou co-cultura de Methylobacterium.

[0023] Conforme usado aqui, a frase "derivados dos mesmos, quando usado no contexto de um isolado de Methylobacterium, se refere a qualquer cepa que é obtida a partir dos mesmos isolado de Methylobacterium. Derivados de Methylobacterium; isolato de Methylobacterium incluem, mas não estão limitadas a variantes da cepa obtida por seleção, variantes da cepa selecionada por mutagênese e seleção, e cepas geneticamente transformadas obtidas a partir dos mesmos isolados de Methylobacterium.

[0024] Conforme usado aqui, o termo "Methylobacterium" se refere a bactérias que são metilotróficas facultativas do gênero Methylobacterium. O termo Methylobacterium, como aqui usado, desse modo não abrange as espécies nos gêneros Methylobacter, Methylomonas, Methylomicrobium, Methylococcus, Methylosinus, Methylocystis, Methylosphaera, Methylocaldum, e Methylocella, as quais são metanotróficas obrigatórias.

[0025] Conforme usado aqui, a frase "co-cultura de Methylobacterium" se refere a uma cultura de Methylobacterium compreendendo pelo menos duas cepas de Methylobacterium ou pelo menos duas espécies de Methylobacterium.

[0026] Conforme usado aqui, o termo "cultivar" se refere a qualquer planta conhecida apenas em cultivo e inclui plantas assexualmente propagadas, plantas sexualmente propagadas, linhagens endógenas, e híbridas.

[0027] Conforme usado aqui, a frase "microorganismo contaminante" se refere a microorganismos em uma cultura, caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação, ou composição que não foi identificada antes da introdução na cultura, caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação, ou composição.

[0028] Conforme usado aqui, o termo "emulsão" se refere a uma mistura coloidal de dois líquidos imiscíveis em que um líquido é a fase contínua e o outro líquido é a fase dispersa. Em certas concretizações, a fase contínua é um líquido aquoso e a fase dispersa é líquida que não é miscível, ou parcialmente miscível, no líquido aquoso.

[0029] Conforme usado aqui, a frase "essencialmente livre de Microorganismos contaminantes" se referem a uma cultura, caldo de fermentação, produto de fermentação, ou composição onde pelo menos cerca de 95% dos microorganismos presentes por quantidade ou tipo na cultura, caldo de fermentação, produto de fermentação, ou composição são a Methylobacterium desejada ou outros microorganismos desejados de identidade pré-determinada.

[0030] Conforme usado aqui, a frase "uma concentração inibitória fúngica da mono-ou co-cultura de Methylobacterium" é uma concentração que fornece pelo menos 40%, 50%), 75%), pelo menos 85%, ou pelo menos 95% de inibição de uma infecção fúngica patogênica vegetal em uma planta, parte vegetal, ou uma planta derivada da mesma relativa à infecção da planta de controle ou parte vegetal

[0031] Conforme usado aqui, o termo "heterólogo", quando usado no contexto de Methylobacterium que pelo menos parcialmente reveste uma planta ou parte vegetal, se refere a uma Methylobacterium que não é naturalmente associada com uma planta ou parte vegetal da mesma espécie que a planta ou parte vegetal que é pelo menos parcialmente revestida com MethylobacteriumMethylobacterium. Em certas concretizações, a Methylobacterium heteróloga que é usada para pelo menos parcialmente revestir uma planta ou parte vegetal de uma primeira espécie vegetal é uma Methylobacterium que foi isolada, ou pode ser isolada, a partir de uma segunda espécie vegetal e distinta.

[0032] Conforme usado aqui, a frase "substância sólida inanimada" se refere a substância que é insolúvel ou parcialmente solúvel em água ou soluções aquosas e que é ou não-viva ou que não é uma parte de um organismo ainda vivo a partir do qual ele foi derivado.

[0033] Para uso na presente invenção, a expressão "mono-cultura" e “Methylobacterium " se refere a uma cultura de Methylobacterium consistindo em uma cepa simples De Methylobacterium.

[0034] Conforme usado aqui, um "pesticida" se refere a um agente que é inseticida, fungicidas, nematocidas, bactericidas, ou qualquer combinação dos mesmos.

[0035] Conforme usado aqui, a expressão "agente bacteriostático" se refere a agentes que inibem o crescimento de bactérias, mas não matam a bactéria.

[0036] Conforme usado aqui, a frase "pesticida não inibe substancialmente o crescimento da Methylobacterium" se refere a qualquer pesticida que quando fornecido em composição compreendendo um produto de fermentação compreendendo uma substância sólida em que uma mono-cultura ou co-cultura de Methylobacterium é aderida a ela, resulta em não mais do que uma inibição de 50% do crescimento de Methylobacterium quando a composição é aplicada a uma planta ou parte vegetal em comparação com uma composição sem o pesticida. Em certas concretizações, o pesticida resulta em não mais do que 40%, 20%, 10%, 5% ou 1% de inibição de crescimento de Methylobacterium quando a composição é aplicada a uma planta ou parte vegetal em comparação com uma composição sem o pesticida.

[0037] Conforme usado aqui, o termo "bactéria PPFM" se refere sem limitação a espécies bacterianas no gênero Methylobacterium diferente de M. nodularis.

[0038] Conforme usado aqui, a frase "substância sólida" se refere a substância que é insolúvel ou parcialmente solúvel em água ou soluções aquosas.

[0039] Conforme usado aqui, a frase "fase sólida que pode ser suspensa no mesmo " se refere a uma substância sólida que pode ser distribuída por todo um líquido por agitação.

[0040] Conforme usado aqui, o termo "não regenerável" se refere a qualquer parte vegetal ou produto vegetal processado que não pode ser regenerado em uma planta inteira.

[0041] Conforme usado aqui, a frase "substancialmente toda a fase sólida é suspensa na fase líquida" se refere a meios em que pelo menos 95%, 98%, ou 99% de substância sólida (s) compreendendo a fase sólida é distribuída por todo o líquido por agitação.

[0042] Como usado aqui, a frase "substancialmente toda a fase sólida não é suspensa na fase líquida" se refere a meios em que menos de 5%, 2%, ou 1% do sólido está em uma forma particulada que é distribuída por todo o meio por agitação.

[0043] Até o ponto em que qualquer uma das definições precedentes é inconsistente com as definições fornecidas em qualquer patente ou referência de não-patente aqui incorporada por referência, qualquer patente ou referência de não-patente citada aqui, ou em qualquer patente ou referência de não-patente encontrada em outro lugar, entende-se que a definição precedente será aqui usada. Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas, Composições compreendendo Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas, métodos de sua utilização, e métodos de produção.

[0044] Várias Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas, composições que compreendem estas Methylobacterium, métodos de uso das composições para inibir fungos patogênicos de plantas, e métodos de produção das composições são fornecidas aqui. Conforme usado aqui, a inibição do crescimento de um fungo patogênico de plantas inclui qualquer diminuição mensurável no crescimento fúngico, onde o crescimento fúngico inclui, mas não está limitado a qualquer diminuição mensurável nos números e/ou extensão de células fúngicas, esporos, conídio ou micélios. Conforme usado aqui, a inibição da infecção por um fungo patogênico de plantas e/ou inibição do crescimento de sabe- se também que um fungo patogênico de plantas inclui qualquer diminuição mensurável nos efeitos adversos causados pelo crescimento fúngico em uma planta. Efeitos adversos do crescimento fúngico em uma planta incluem, mas não estão limitados a qualquer tipo de dano ou necrose de tecido vegetal, qualquer tipo de redução de produção de planta, qualquer redução no valor do produto vegetal vegetal E/ou a produção de metabólitos fúngicos indesejáveis ou subprodutos de crescimento fúngico incluindo, mas não limitado a, micotoxinas. Os fungos de patógenos vegetais que são inibidos pelas composições e Methylobacterium fornecida aqui podem estar em sua forma anamórfica, sua forma telemórfica, ou em ambas as suas formas anamórficas e telemórficas.

[0045] A Methylobacterium e as composições que compreendem as mesmas que inibem o crescimento de um fungo patogênico de plantas são fornecidas aqui. Em certas concretizações, a Methylobacterium é selecionada do grupo consistindo em M. aminovorans, M. extorquens, M. fujisawaense, M. mesophilicum, M. radiotolerans, M. rhodesianum, M. nodulans, M. phyllosphaerae, M. thiocyanatum, and M. oryzae. Em certas concretizações, a Methylobacterium não é M. radiotolerans or M. oryzae. Em certas concretizações, a Methylobacterium ou composição fornece pelo menos cerca de 25%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 50%, ou pelo menos cerca de 75% de inibição de crescimento fúngico patogênico na planta em comparação com um tratamento de controle quando da exposição a um fungo patogênico de plantas. Em certas concretizações, o fungo patogênico de plantas que é inibido é selecionado do grupo consistindo em um Alternaria sp., um Ascochyta sp., um Aspergillus sp., um Bipolaris sp., um Botrytis sp., um Bremia sp., um Cercospora sp., um Cochliobolus sp., um Colletotrichum sp., um Diplodia sp., um Erysiphe sp., um Exserohilum sp., um Fusarium sp., Gaeumanomyces sp., Macrophomina sp., um Magnaporthe sp., um Nectria sp., um Peronospora sp., um Phakopsora sp., um Phialophora sp., um Phoma sp., um Phymatotrichum sp., um Phytophthora sp., um Plasmopara sp., um Puccinia sp., um Podosphaera sp., um Pyrenophora sp., um Pyricularia sp, um Pythium sp., um Rhizoctonia sp., um Sclerotium sp., um Sclerotinia sp., um Septoria sp., um Stagonospora sp., um Thielaviopsis sp., um Uncinula sp, an Ustilago sp., um Venturia sp., e um Verticillium sp. Em certas concretizações, o fungo patogênico de plantas que é inibido é um Fusarium sp. Em certas concretizações, o Fusarium sp. que é inibido é selecionado do grupo consistindo em Fusarium graminearum, Fusarium verticillioides, Fusarium oxysporum, Fusarium virguliforme, and Fusarium solani. Em certas concretizações, a Methylobacterium isoladaé NLS0066, NLS0089, uma combinação de NLS0066 e LS0017, ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações, a composição compreende ainda a cepa Methylobacterium LS0020 Ou um derivado do mesmo. Os fungos de patógenos vegetais que são inibidos pelas composições e Methylobacterium fornecida aqui podem estar em sua forma anamórfica, sua forma telemórfica, ou em ambas as suas formas anamórficas e telemórficas.

[0046] Também são providas composições que compreendem Methylobacterium que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas. Em certas concretizações, as composições ainda compreendem um excipiente farmaceuticamente aceitável e/ou um adjuvante agrícola aceitável. Em certas concretizações, a Methylobacterium. É selecionado do grupo consistindo em M. aminovorans, M. extorquens, M. fujisawaense, M. mesophilicum, M. radiotolerans, M. rhodesianum, M. nodulans, M. phyllosphaerae, M. thiocyanatum e M. oryzae. Em certas concretizações, a Methylobacterium não é M. radiotolerans or M. oryzae. Em certas concretizações, a composição fornece pelo menos cerca de 25%, cerca de 50%, ou cerca de 75% de inibição de crescimento fúngico patogênico de planta em comparação com um tratamento de controle quando da exposição a um fungo patogênico de plantas. Em certas concretizações, o fungo patogênico de plantas que é inibido é selecionado do grupo consistindo em uma Alternaria sp., a Ascochyta sp., a Aspergillus sp., a Bipolaris sp., a Botrytis sp., a Bremia sp., a Cercospora sp., a Cochliobolus sp., a Colletotrichum sp., a Diplodia sp., an Erysiphe sp., a Exserohilum sp., a Fusarium sp., Gaeumanomyces sp., a Macrophomina sp., a Magnaporthe sp., a Nectria sp., a Peronospora sp., a Phakopsora sp., a Phialophora sp., a Phoma sp., a Phymatotrichum sp., a Phytophthora sp., a Plasmopara sp., a Puccinia sp., a Podosphaera sp., a Pyrenophora sp., a Pyricularia sp, a Pythium sp., a Rhizoctonia sp., a Sclerotium sp., a Sclerotinia sp., a Septoria sp., a Stagonospora sp., a Thielaviopsis sp., an Uncinula sp, a Ustilago sp., a Venturia sp. e a Verticillium sp. Em certas concretizações, o fungo patogênico de plantas que é inibido é um Fusarium sp. Em certas concretizações, o Fusarium sp. que é inibido é selecionado do grupo consistindo em Fusarium graminearum, Fusarium verticiloides, Fusarium oxysporum, Fusarium virguliforme, e Fusarium solani. Em certas concretizações de qualquer uma das composições acima mencionadas, a composição compreende uma substância sólida em que uma mono-cultura ou co-cultura de Methylobacterium é aderida a ela. Em certas concretizações, onde a Methylobacterium é aderida a uma substância sólida, a composição compreende um colóide formado pela substância sólida em que uma mono-cultura ou co-cultura de Methylobacterium é aderida ao mesmo e um líquido. Em certas concretizações, o colóide é um gel. Em certas concretizações de certas composições acima mencionadas, a composição é uma emulsão que não contém uma substância sólida. Em certas concretizações de qualquer uma das composições acima mencionadas, a Methylobacterium tem pelo menos um Elemento de DNA polimórfico ou gene ortólogo que está presente em LS0066, mas que está ausente de um ou mais dos isolados de Methylobacterium LS0020 E/ou LS0037 que não inibem as infecções por Fusarium graminouum nas plantas. Em certas concretizações de qualquer uma das composições acima mencionadas, Methylobacterium que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas tem pelo menos um gene que é ortólogos, ou que tem pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência para, pelo menos um gene selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 7279 - 9187 e 9188. Em certas concretizações de qualquer uma das composições acima mencionadas, a Methylobacterium sp. que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas tem pelo menos um gene que é ortólogos, ou que codifica uma proteína tendo pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, ou 100% de identidade de sequência a pelo menos uma proteína selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 2585 - 4593, e 4594. Em Certas concretizações de qualquer uma das composições acima mencionadas, a Methylobacterium éLS0066, LS0089, uma combinação de NLS0066 e LS0017, ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações de qualquer uma das composições acima mencionadas, a composição compreende ainda a cepa Methylobacterium NLS0020 ou um derivado do mesmo. Em qualquer uma das concretizações acima mencionadas, os fungos de patógenos vegetais que são inibidos podem estar em sua forma anamórfica, sua forma telemórfica, ou em ambas as suas formas anamórficas e telemórficas.

[0047] Em certas concretizações, a Methylobacterium sp. inibi fungos patogênicos de plantas pode ser identificada pelo teste de Methylobacterium sp. candidata recentemente isolada para a presença de ácido nucléico polimórfico, gene ortólogo, ou sequências de genes que estão presentes na Methylobacterium sp. Aqui fornecido, que inibem certos fungos patogênicos de plantas e que estão ausentes na Methylobacterium sp. Fornecido aqui que não inibe infecções por Fusarium graminearum de plantas. Uma Methylobacterium candidata sp. tem pelo menos um gene que é ortólogo a um gene presente na Methylobacterium sp. que inibe certos fungos patogênicos de plantas quando um cromossomo e/ou qualquer DNA extracromo-nosomal naquela Methylobacterium sp. candidata: (I) contém um gene que codifica uma proteína que tem pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98% , pelo menos 99%, ou 100% de identidade de sequência através de todo o comprimento da sequência de aminoácidos daquela proteína que está presente na Methylobacterium sp. que inibe certos fungos patogênicos de plantas; ou (ii) contém um gene que tem pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, pelo menos 99,5%, ou 100% de identidade de sequência através de todo o comprimento dos mesmos sequência de ácido nucleico daquele gene que está presente na Methylobacterium sp. que inibe certos fungos patogênicos de plantas. Em certas concretizações, o ácido nucléico polimórfico, gene ortólogo, ou sequências de gene que estão presentes na Methylobacterium identificada sp. que inibem certos fungos patogênicos de plantas também estão presentes na Methylobacterium sp. O isolado NLS0066 fornecido aqui que inibe certos fungos patogênicos de plantas, mas está ausente de um ou mais dentre a Methylobacterium sp. Os isolados LS0020 e/ou LS0037 providos aqui que não inibem as Infecções de Fusarium graminouum de plantas. Em certas concretizações, o ácido nucléico polimórfico, gene ortólogo, ou sequências de gene que estão presentes na Methylobacterium sp. identificada. que inibem os fungos patogênicos de plantas estão presentes na Methylobacterium sp. O isolado NLS0066, mas está ausente em duas dos Methylobacterium sp. Os isolados NLS0020 e LS0037 que não inibem as infecções de Fusarium graminouum nas plantas. Em certas concretizações, as sequências de proteína estão presentes na LS0066 que pode ser útil na identificação de Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas incluem, mas não estão limitadas a, SEQ ID NO: 2585 - 4594. As sequências de genes correspondentes (isto é, sequências de ácido nucleico) presente em NLS0066 que pode ser útil na identificação de Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas incluem, mas não estão limitados a SEQ ID NO: 7279 - 9188. Em certas concretizações, uma Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas tem pelo menos um gene que é ortólogos, ou tem pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, ou 100% de identidade de sequência a pelo menos um gene selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 7279 -9187 e 9188. Em certas concretizações, a Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas tem pelo menos um gene que codifica uma proteína tendo pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99% 5 %, ou 100% de identidade de sequência a pelo menos uma proteína selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 2585-4593, e 4594. Em certas concretizações, a Methylobacterium sp. que inibe fungos patogênicos de plantas também pode ter pelo menos um, dois, três, quatro, seis, oito, 10, 15, 20 ou 50 genes que codificam proteínas que são: (i) ortólogos a proteínas tendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID_NO: 2585-4593, e 4594; ou que (ii) codificam proteínas tendo pelo menos 95%, 97%, 98%), 99%), 99.5 % ou 100% de identidade de sequência a uma proteína selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 25854593, e 4594. Em certas concretizações, as Methylobacterium sp. que inibe fungos patogênicos de plantas pode ter pelo menos um, dois, três, quatro, seis, oito,10,15, 20 ou 50 genes que são ortólogos a, ou que têm pelo menos 95%, 97%), 98%), 99%), 99,5%), ou 100%) de identidade de sequência a, um ou mais genes selecionados do grupo consistindo das SEQ ID NO: 7279-9187 e 9188.

[0048] Tais polimorfismos de ácido nucleico que ocorrem na Methylobacterium sp. que inibem os fungos patogênicos de plantas podem incluir, mas não estão limitados a, polimorfismos de nucleotídeo simples, RFLP, AFLP e/ou outras Variações de DNA, tais como sequências repetitivas, sequências de inserção, transposons, e ilhas genômicas que ocorrem como resultado de inserções, eliminações , e substituições (Indels) no genoma bacteriano que inclui tanto o DNA cromossômico como também quaisquer elementos de ácido nucleico extracromossômico que possam estar presentes na Methylobacterium sp. que inibe fungos patogênicos de plantas. Tais elementos de ácido nucleico extracromossômicos incluem, mas não estão limitados a, plasmídeos DNA ou RNA de bacteriófago, e Semelhantes. Os métodos usados para identificar tais polimorfismos de nucleotídeo incluem, mas não estão limitados a uma única extensão de base (SBE) técnicas, hibridização específica de alelo (ASH), detecção de PCR em Tempo Real (isto É, TaqMan™; patentes US Nos. 5, 804, 375 ; 5.538.848; 5.487.972; E 5.210.015, que são aqui incorporadas por referência em suas totalidades), combinações de ASH e RT-PCR (KASP de sistemas de detecção, LGC Genomics, Middleex, reino Unido) e técnicas de sequenciamento profundo (Pedido de patente US. N° 20120264632, incorporado aqui por referência em sua totalidade)

[0049] Uma Methylobacterium sp. pode ser determinado conter um gene que codifica proteína que é ortólogas a uma proteína que está presente em Methylobacterium sp. que inibe fungos patogênicos de plantas, mas ausente de uma ou mais dentre a Methylobacterium sp. Os isolados por uma variedade de diferentes técnicas. Em certas concretizações, uma Methylobacterium sp. pode ser determinado conter um gene que codifica uma proteína que é ortólogas a uma proteína que está presente em NLS0066, mas ausente de uma ou mais da Methylobacterium sp. isola NLS0020 e/ou NLS0037 ou que é ortólogo a uma proteína presente em NLS0066. Em certas concretizações, uma Methylobacterium sp. pode ser determinado conter um gene que codifica uma proteína que é ortólogas a tais proteínas pela montagem de uma sequência genômica eletrônica completa compreendendo as Sequências de DNA cromossômicas e extracromossômicas presentes Em que a Methylobacterium sp. Com um computador e software associado, e determinar se qualquer um dos quadros de leitura aberta (ORF) presente em que a sequência de DNA codifica uma proteína tendo a identidade de sequência percentual acima mencionada. Em certas concretizações, a ORF pode ser identificada pela realização de uma tradução de seis vias da sequência eletronicamente montada e consultar as sequências traduzidas com uma sequência de proteína que está presente em NLS0066, mas ausente de um ou mais da Methylobacterium sp. isolado NLS0020 e/ou NLS0037 ou com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2585-4594. Em outras concretizações, a presença ou ausência de uma determinada sequência dentro de uma Methylobacterium sp. pode ser determinada por uma análise de ácido nucleico ou técnica de análise de proteína. Exemplos de sequências de ácido nucleico que codificam as proteínas da SEQ ID NO: 2585 - 4594 incluem, mas não estão limitados a SEQ ID NO: 7279 - 9188, respectivamente. Tais análises de ácido nucleico incluem, mas não estão limitadas a técnicas baseadas em hibridização de ácido nucleico, reações de cadeia de polimerase, espectroscopia de massa, detecção baseada em nanoporos, análises de DNA ramificado, combinações das mesmas, e semelhantes. As técnicas de análise de proteína incluem, mas não estão limitadas a imunodetecção, espectroscopia de massa, combinações dos mesmos, e semelhantes.

[0050] Sequências de proteína e de gene encontradas no isolado de Methylobacterium NLS0017 também são fornecidos aqui como SEQ ID NO: 1 - 2584 e 4595 - 7278, respectivamente. O isolado de Methylobacterium NLS0017 foi depositado como NRRL B-50931 com a AGRICULTURAL OCUTURE COLECTION (NRRL) dos National Center for Agricultural Utilization Research, Agricultural Research Service, US Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 USA sob os termos do tratado de Budapest No Reconhecimento Internacional do depósito De microorganismos para Os propósitos do Procedimento de Patente) A identificação da SEQ ID NO: 1 - 9188 é descrita NO pedido de Patente Internacional Co-cedido PCT/US2014/68611, o qual é incorporado aqui por referência em sua totalidade. Várias Methylobacterium sp. isoladas providas aqui são apresentadas na Tabela 1. Tabela 1. Methylobacterium sp. isolados

1Número de depósito para a cepa depositada na COLEÇÃO DE CULTURA DE SERVIÇO DE INVESTIGAÇÃO AGRÍCOLA (NRRL) do Centro Nacional de Pesquisa de Utilização Agrícola, Serviço de Pesquisa Agrícola, Departamento de Agricultura dos EUA, 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 EUA, sob os termos da Budapeste Tratado sobre o reconhecimento internacional do depósito de microorganismos para fins de procedimento de patente. Sujeito ao 37 CFR §1.808 (b), todas as restrições impostas pelo depositante sobre a disponibilidade para o público do material depositado serão irrevogavelmente removidas após a concessão de qualquer patente deste pedido de patente. 2Pode melhorar a atividade de NLS0066 em um tratamento combinado NLS0066 + NLS0017 em comparação com NLS0066 sozinho.

[0051] Também são providos aqui métodos para controlar um fungo patogênico de plantas que compreende aplicar qualquer uma das composições acima mencionadas compreendendo as mesmas Methylobacterium que é fornecida aqui a uma planta ou uma parte vegetal em uma quantidade que fornece para inibição de infecção pelo fungo patogênico de plantas na planta, parte vegetal, ou uma planta obtida a partir daí em relação à infecção de uma planta de controle, parte vegetal, ou uma planta obtida a partir da mesma que não recebeu uma aplicação da composição. Em certas concretizações, a aplicação da composição fornece pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 75%, pelo menos cerca de 85%, ou pelo menos cerca de 95% de inibição de uma infecção fúngica patogênica vegetal na planta, parte vegetal, ou uma planta derivada da mesma relativa à infecção da planta de controle, parte vegetal, ou planta obtida a partir da mesma. Em certas concretizações, a parte vegetal é selecionada do grupo consistindo em uma folha, uma haste, a flor, raiz, tubérculo e uma semente. Em certas concretizações, o método compreende ainda a etapa de colher pelo menos uma parte vegetal selecionada do grupo consistindo em uma folha, uma haste, uma flor, uma raiz, um tubérculo, ou uma semente da planta ou parte vegetal. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, os níveis de micotoxina na parte vegetal são reduzidos em pelo menos 50%, pelo menos 75%, pelo menos 85%, ou pelo menos 95% em relação a uma parte vegetal obtida da planta de controle, parte de planta, ou planta obtida a partir da mesma. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, os métodos compreendem ainda a obtenção de uma composição de alimento ou alimento processada a partir da planta ou parte vegetal Em certas concretizações dos métodos acima mencionados, os níveis de micotoxina no alimento processado ou composição de alimentação são reduzidos em pelo menos 50%, pelo menos 75%, pelo menos 85%, ou pelo menos 95% em relação a um alimento processado ou composição de alimentação obtida da instalação de controle, parte de planta, ou planta obtida a partir da mesma. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a composição compreende um, Methylobacterium que tem pelo menos um elemento de DNA polimórfico, gene ortólogo, ou gene que está presente em NLS0066 mas que está ausente de um ou mais Isolados de Methylobacterium NLS0020 e/ou NLS0037 Que não inibem infecções De Fusarium graminarum de plantas. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a composição compreende o isolado de Methylobacterium LS0066, LS0089, uma combinação de NLS0066 e LS0017, ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a composição compreende ainda a cepa Methylobacterium LS0020 Ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a composição compreende uma Methylobacterium sp. que tem pelo menos um gene que é ortólogos, ou que tem pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100% de identidade de sequência a, pelo menos um gene selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 7279-9187, e 9188. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a composição compreende uma Methylobacterium sp. que tem pelo menos um gene que é ortólogos a, ou que codifica uma proteína tendo pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99% 5 %, ou 100% de identidade de sequência, pelo menos uma proteína selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 2585 - 4593 e 4594.

[0052] Também são providos métodos para produzir as composições úteis para controlar fungos patogênicos de plantas que compreendem a combinação de uma Methylobacterium que inibe o crescimento de um fungo patogênico de plantas com um excipiente farmaceuticamente aceitável e/ou com um adjuvante agrícola aceitável. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium sp. é selecionada do grupo consistindo em aminovorans, M. aminovorans, M. extorquens, M. fujisawaense, M. mesophilicum, M. radiotolerans, M. rhodesianum, M. nodulans, M. phyllosphaerae, M thiocyanatum, and M. oryzae. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium não é M. radiotolerans or M. oryzae. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium que tem pelo menos um elemento de DNA polimórfico que está presente no NLS0066, mas que está ausente de um ou mais isolados de methylobacterium NLS0020 e/ou NLS0037 que não inibem as infecções de Fusarium graminouum nas plantas. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a composição compreende uma Methylobacterium sp. que tem pelo menos um gene que é ortólogos a, ou que tem pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, ou 100% de identidade de sequência a, pelo menos um gene selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO: 7279-9187 e 9188. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a composição compreende uma Methylobacterium sp. que tem pelo menos um gene que é ortólogos a, ou que codifica uma proteína tendo pelo menos 95%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ou 100%) identidade de sequência a, pelo menos uma proteína selecionada do grupo consistindo em SEQ ID NO: 2585-4593, e 4594. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a composição compreende o isolado Methylobacterium NLS0066, NLS0089, uma combinação de NLS0066 e NLS0017, ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, a composição ainda compreende Cepa Methylobacterium NLS0020 ou um derivado do mesmo. Em certas concretizações dos métodos, as composições proporcionam pelo menos cerca de 25%, pelo menos cerca de 50%, ou pelo menos cerca de 75% de inibição de crescimento fúngico patogênico na planta em comparação com uma composição de controle que carece de Methylobacterium que inibe um fungo patogênico de plantas quando da exposição ao fungo patogênico de plantas. Em certas concretizações dos métodos, o fungo patogênico de plantas é selecionado do grupo consistindo em Alternaria sp., a Ascochyta sp., a Aspergillus sp., a Bipolaris sp., a Botrytis sp., a Bremia sp., a Cercospora sp., a Cochliobolus sp., a Colletotrichum sp., a Diplodia sp., a Erysiphe sp., a Exserohilum sp., a Fusarium sp., Gaeumanomyces sp., a Macrophomina sp., a Magnaporthe sp., a Nectria sp., a Peronospora sp., a Phakopsora sp., a Phialophora sp., a Phoma sp., a Phymatotrichum sp., a Phytophthora sp., a Plasmopara sp., a Puccinia sp., a Podosphaera sp., a Pyrenophora sp., a Pyricularia sp, a Pythium sp., a Rhizoctonia sp., a Sclerotium sp., a Sclerotinia sp., a Septoria sp., a Stagonospora sp., a Thielaviopsis sp., an Uncinula sp, an Ustilago sp., a Venturia sp., e a Verticillium sp. Em certas concretizações dos métodos, o Fusarium sp. É selecionado do grupo que consiste em Fusarium graminearum, Fusarium Verticiloides, Fusarium Oxysporum e Fusarium solani. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium é aderida a uma substância sólida. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium aderida à substância sólida é combinada com um líquido para formar uma composição que é um colóide. Em certas concretizações dos métodos, o colóide é um gel. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium é aderida à substância sólida é provida pela cultura da Methylobacterium na presença da substância sólida. Em certas concretizações dos métodos, a composição compreende uma emulsão. Em certas concretizações dos métodos, a Methylobacterium é provida pela cultura da Methylobacterium em uma emulsão. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, o fungo patogênico de plantas é o Fusarium sp. e/ou a planta é uma planta de cereais. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, o fungo patogenico de plantas é o Fusarium sp. e a planta é uma planta de cereais selecionada do grupo consistindo em um arroz, trigo, milho, cevada, milho de milho, sorgo, aveia e centeio. Em certas concretizações de qualquer um dos métodos acima mencionados, o fungo patogênico de plantas é Fusarium graminearum e a planta é uma planta de cereais selecionada do grupo consistindo em arroz, trigo, milho, cevada, milho, sorgo, aveia e centeio. Em qualquer uma das concretizações acima mencionadas, os fungos de patógenos vegetais que são inibidos podem estar em sua forma anamórfica, sua forma telemórfica, ou em ambas as suas formas anamórficas e telemórficas.

[0053] Os métodos em que a Methylobacterium são cultivadas em meios bifásicos compreendendo uma fase líquida e uma substância sólida foram verificadas aumentar significativamente o rendimento resultante da Methylobacterium em relação aos métodos onde a metobactéria É cultivada em meio líquido sozinho. Em certas concretizações, os métodos podem compreender o crescimento da Methylobacterium em meio líquido com uma substância sólida particulada que pode ser suspensa no líquido por agitação sob condições que proporcionam crescimento de Methylobacterium. Em certas concretizações, as substâncias sólidas em partículas são usadas, pelo menos substancialmente toda a fase sólida pode assim ser suspensa na fase líquida sob agitação. Tais substâncias sólidas particuladas podem compreender materiais que têm cerca de 1 milímetro ou menos em comprimento ou diâmetro. Em certas concretizações, o grau de agitação é suficiente para prover uma distribuição uniforme da mesma substância sólida particulada na fase líquida e/ou níveis ótimos de aeração de cultura. Entretanto, em outras concretizações aqui fornecidas, pelo menos substancialmente toda a fase sólida não é suspensa na fase líquida, ou porções da fase sólida são suspensas na fase líquida e porções do sólido a fase não é suspensa na fase líquida. Substâncias sólidas não- particuladas podem ser usadas em certos meios bifásicos onde a fase sólida não está suspensa na fase líquida. Tais substâncias sólidas não-particuladas incluem, mas não estão limitadas a materiais que são maiores que cerca de 1 milímetro de comprimento ou diâmetro. Tais substâncias sólidas em partículas e não em partículas também incluem, mas não estão limitadas a materiais que são porosos, fibroso, ou de outro modo configurado para fornecer áreas superficiais aumentadas para o crescimento aderente da Methylobacterium. Meios bifásicos onde porções da fase sólida são suspensas na fase líquida e porções da fase sólida não são suspensas na fase líquida podem compreender uma mistura de substâncias sólidas particuladas e não-particuladas. Tais substâncias sólidas em partículas e não-particuladas usadas em qualquer um dos meios bifásicos mencionados acima também incluem, mas não estão limitadas a materiais que são porosos, fibrosos, ou configurados de outro modo para prover áreas superficiais aumentadas para o crescimento aderente das mesmas Methylobacterium. Em certas concretizações, o meio compreende um colóide formado por um sólido e uma fase líquida. Um colóide compreendendo um sólido e um líquido pode ser pré-formado e adicionado ao meio líquido ou pode ser formado em meios contendo um sólido e um líquido. Colóides compreendendo um sólido e um líquido podem ser formados submetendo-se certas substâncias sólidas a uma mudança química e/ou térmica. Em certas concretizações, o colóide é um gel. Em certas concretizações, a fase líquida do meio é uma emulsão. Em certas concretizações, a emulsão compreende um líquido aquoso e um líquido que não é miscível, ou apenas parcialmente miscível, no líquido aquoso. Líquidos que não são miscíveis, ou apenas parcialmente miscíveis, em água incluem, mas não estão limitadas a qualquer um dos seguintes: (1) líquidos tendo uma miscibilidade em água que é igual a ou menor do que aquele de pentanol, hexanol, ou heptanol a 25 graus C ; (2) Líquidos compreendendo um álcool, um aldeído, uma cetona, um ácido graxo, um fosfolipídeo, ou qualquer combinação dos mesmos; (3) álcoois selecionados do grupo consistindo em álcoois alifáticos contendo pelo menos 5 carbonos e esteróis; (4) óleo mineral, óleo microbiano, óleo sintético, óleo vegetal, ou combinação dos mesmos; e/ou, (5) óleo vegetal selecionado do grupo consistindo em milho, soja, algodão, amendoim, girassol, oliva, linho, coco, palma, semente de colza, semente de gergelim, açafroa e combinações dos mesmos. Em certas concretizações, o líquido imiscível ou parcialmente imiscível pode compreender pelo menos cerca de 0,02% a cerca de 20% da fase líquida por massa. Em certas concretizações, os métodos podem compreender a obtenção de um meio de cultura bifásico que compreende o líquido, o sólido, e Methylobacterium e incubação da cultura sob condições que proporcionam o crescimento Da Methylobacterium. Os meios de cultura bifásicos que compreendem o líquido, o sólido e a Methylobacterium podem ser obtido por uma variedade de métodos que incluem, mas não estão limitados a, qualquer um de: (a) inoculação de um meio bifásico compreendendo o líquido e a substância sólida com Methylobacterium; (b) inoculação da substância sólida com Methylobacterium e, então, a introdução da substância sólida compreendendo a Methylobacterium e o meio Líquido; (c) inoculação da substância sólida com Methylobacterium, incubação da Methylobacterium na substância sólida E, então, introduzir a substância sólida compreendendo a Methylobacterium no meio líquido; ou (d) qualquer combinação de (a), (b), ou (c). Métodos e composições para crescimento de Methylobacterium em meios bifásicos compreendendo um líquido e um sólido são descritos no pedido de patente US No. 13 /907,161, depositado em 31 de maio de 2013, o qual é incorporado aqui por referência em sua totalidade, e no Pedido de Patente Internacional PCT/US13/43722, depositado em 31 de maio de 2013, o qual é incorporado aqui por referência em sua totalidade.

[0054] Os métodos onde a Methylobacterium são cultivadas em meio compreendendo uma emulsão também tem sido verificado aumentar significativamente o rendimento resultante de Methylobacterium em relação aos métodos onde a Methylobacterium é cultivada em meio líquido sozinho. Em certas concretizações, os métodos para a produção das composições aqui fornecidas podem compreendem crescimento da Methylobacterium em uma emulsão sob condições que proporcionam o Crescimento de Methylobacterium. Meio compreendendo a emulsão e a Methylobacterium pode ser obtido por uma variedade de métodos que incluem, mas não estão limitados a, qualquer um de: (a) inoculação de um meio que compreende a Emulsão com Methylobacterium; (b) inoculação do líquido aquoso com a Methylobacterium, introdução do líquido não-aquoso, e mistura para formar uma emulsão; (c) inoculação do líquido aquoso com a Methylobacterium, introdução do líquido não-aquoso, e mistura para formar uma emulsão; ou (d) qualquer combinação de (a), (b), ou (c). Em certas concretizações, a emulsão compreende um líquido aquoso e um líquido que não é miscível, ou apenas parcialmente miscível, no líquido aquoso. Líquidos não-aquosos que não são miscíveis, ou apenas parcialmente miscíveis, em água incluem, mas não estão limitadas a, qualquer um dos seguintes: (1) líquidos tendo uma miscibilidade em água que é igual ou menor do que aquele de n-pentanol, n-hexanol, ou n-heptanol a 25 graus C; (2) líquidos compreendendo um álcool, um aldeído, uma cetona, um ácido graxo, um fosfolipídeo, ou qualquer combinação dos mesmos; (3) álcoois selecionados do grupo consistindo em álcoois alifáticos contendo pelo menos 5, 6 ou 7 carbonos e esteróis; (4) óleo mineral, óleo microbiano, óleo sintético, óleo vegetal, ou combinação dos mesmos; e/ou, (5) um óleo vegetal selecionado do grupo consistindo em milho, soja, algodão, amendoim, girassol, oliva, linho, coco, palma, semente de colza, semente de gergelim, açafroa, e combinações dos mesmos. Em certas concretizações, o líquido não-aquoso imiscível ou parcialmente imiscível pode compreender pelo menos cerca de 0,02% a cerca de 20% da emulsão por massa Em certas concretizações, o líquido não aquoso imiscível ou parcialmente imiscível pode compreender pelo menos cerca de 0,05%, 0,1%, 0,5%, ou 1% a cerca de 3%, 5%, 10% ou 20% da emulsão por massa Métodos e composições para crescimento de Methylobacterium em meio compreendendo uma emulsão são descritos em pedido de Patente Provisório US n° 61/829,987, depositado em 31 de maio de 2013, e No Pedido PCT N° PCT/US 14/40218, depositado em 30 de Maio de 2014, os quais são ambos incorporados aqui por referência em suas totalidades.

[0055] Em certas concretizações, o caldo de fermentação, o produto de caldo de fermentação, ou composições que compreendem Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas podem ainda compreender um ou mais microorganismos introduzidos de identidade pré- determinada Diferente de Methylobacterium. Outros microorganismos que podem ser adicionados incluem, mas não estão limitados a microorganismos que são biopesticidas ou proporcionam algum outro benefício quando aplicados a uma planta ou parte vegetal Os microorganismos biopesticidas ou de outro modo benéficos assim incluem, mas não estão limitados a, vários Bacillus sp. Pseudomonas sp. Latithirum sp. Pantoea sp. Streptomyces sp. e Trichoderma sp. Biopesticidas microbianas podem ser uma bactéria, fungo, vírus, ou protozoário. Microorganismos biopesticidas particularmente úteis incluem vários Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Bacillus pumlis, Pseudomonas syringae, Trichoderma harzianum, Trichoderma virens, e cepas de Streptomyces lydius. Outros microorganismos que são adicionados podem ser geneticamente engenheirados ou isolados que estão disponíveis como culturas puras. Em certas concretizações, é antecipado que o microorganismo bacteriano ou fúngico pode ser fornecido no caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação, ou composição na forma de um esporo.

[0056] Em certas concretizações, o meio de cultura líquido é preparado a partir de componentes baratos e facilmente disponíveis, incluindo, mas não limitado a sais inorgânicos tais como fosfato de potássio, sulfato de magnésio e similares, fontes de carbono tais como glicerol, metanol, ácido glutâmico, ácido aspártico, ácido succínico e similares, e misturas de aminoácidos tais como peptona, triptona e similares. Exemplos de meios líquidos que podem ser usados incluem, mas não estão limitados a meio de sais minerais de amónio (AMS) (Whittenbury et al,1970), Meio de cultura mínimo de Vogel-Bonner (VB) (Vogel e Bonner,1956), e caldo LB ("caldo Luria-Bertani")

[0057] Em geral, a substância sólida usada nos métodos e composições que proporcionam o crescimento eficiente de Methylobacterium pode ser qualquer substância sólida adequada que seja insolúvel ou apenas parcialmente solúvel em água ou soluções aquosas. Tais substâncias sólidas adequadas são também não bactericidas ou não bacteriostáticas com relação a Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas quando as substâncias sólidas são fornecidas no meio de cultura líquido. Em certas concretizações, tais substâncias sólidas adequadas são também substâncias sólidas que são prontamente obtidas em forma estéril ou tornadas estéreis. As substâncias sólidas usadas aqui podem ser esterilizadas por qualquer método que forneça a remoção de microorganismos contaminantes e assim incluir, mas não estão limitadas a métodos tais como autoclavagem, irradiação, tratamento químico, e qualquer combinação dos mesmos. Essas substâncias sólidas incluem substâncias de origem animal, vegetal, microbiana, fúngica, ou mineral, substâncias manobradas, ou combinações das mesmas. Em certas concretizações, as substâncias sólidas são substâncias sólidas inanimadas. Substâncias sólidas inanimadas de origem animal, vegetal, microbiana ou fúngica podem ser obtidas de animais, plantas, micróbios, ou fungos que são convidados (isto é, não mais vivos) ou que foram renderizados questionáveis. As cascas de diátomos são, portanto, substâncias sólidas inanimadas quando as algas de diátomo anteriormente associadas foram removidas ou de outra forma tornadas acessíveis. Visto que as cascas de diátomos são substâncias sólidas inanimadas, elas não são consideradas como sendo organismos fotossintéticos ou microorganismos fotossintéticos. Em certas concretizações, substâncias sólidas incluem, mas não são limitadas a areia, lodo, solo, argila, cinza, carvão vegetal, terra diatomácea e outros minerais similares, vidro moído ou contas de vidro, materiais cerâmicos triturados, contas cerâmicas, bentonita, caulim, talco, perlita, mica, vermiculita, sílicas, quartzo em pó, montmorilonita e combinações dos mesmos. Em certas concretizações, a substância sólida pode ser um polímero ou contas poliméricas. Polímeros que podem ser usados como uma substância sólida incluem, mas não estão limitados a vários polissacarídeos, tais como polímeros celulósicos e polímeros quitais que são insolúveis ou somente parcialmente solúvel em água ou soluções aquosas, ágar (isto é, galactanos), e combinações dos mesmos. Em certas concretizações, a substância sólida pode ser um cristal de sal insolúvel ou somente parcialmente solúvel. Cristais de sal que podem ser usados incluem, mas não são limitados a carbonatos, cromatos, sulfetos, fosfatos, hidróxidos, óxidos e sulfetos insolúveis ou apenas parcialmente solúveis. Em certas concretizações, a substância sólida pode ser uma célula microbiana, uma célula fúngica, um esporo microbiano ou um esporo fúngico. Em certas concretizações, a substância sólida pode ser uma célula microbiana ou esporos microbianos em que a célula microbiana ou esporo microbiano não é um microorganismo fotossintético. Em certas concretizações, a célula microbiana ou esporo microbiano não é um microorganismo fotossintético, onde o microorganismo fotossintético é selecionado do grupo consistindo em algas, cianobactérias, diátomos, Botryococcus braunii, Chlorella, Dunaliella tertiolecta, Gracilaria, Pleurochrysis carterae, Sargassum, and Ulva. Em ainda outras concretizações, a substância sólida pode ser uma célula bacteriana desativada (isto é, conável), fúngica, esporos microbianos, ou esporos fúngicos. Em ainda outras concretizações, a substância sólida pode ser imóvel (isto é, viável, mas não dividindo ativamente) a célula bacteriana, a célula fúngica, o esporo microbiano, ou o esporo fúngico. Em ainda outras concretizações, a substância sólida pode ser resíduos celulares de origem microbiana. Em ainda outras concretizações, a substância sólida pode ser matéria particulada de qualquer parte de uma planta. Partes de planta que podem ser usadas para obter a substância sólida incluem, mas não são limitadas a, espigas, cascas, cascos, folhas, raízes, flores, hastes, casca, sementes e combinações das mesmas. Produtos obtidos a partir de partes de planta processadas incluindo, mas não limitados a bagaço, farelo de trigo, grãos de soja, torta de semente esmagada, estante, e semelhantes também podem ser usados. Tais partes de planta, plantas processadas, e/ou partes de planta processadas podem ser fresadas para obter o material sólido em uma forma particulada que pode ser usada. Em certas concretizações, madeira ou um produto de madeira incluindo, mas não limitado a polpa de madeira, serragem, aparas, e similares podem ser usadas. Em certas concretizações, a substância sólida pode ser uma matéria particulada de um animal (s) incluindo, mas não limitado a farinha de osso, gelatina, cascas moídas ou pulverizadas, cabelo, couro macerado, e similares.

[0058] Em certas concretizações, a substância sólida é provida em uma forma particulada que fornece a distribuição da substância sólida no meio de cultura. Em certas concretizações, a substância sólida é compreendida de partícula de cerca de 2 mícrons a cerca de 1000 mícrons em comprimento médio ou diâmetro médio. Em certas concretizações, a substância sólida é compreendida de partícula de cerca de 1 mícrons a cerca de 1000 mícrons em comprimento médio ou diâmetro médio. Em certas concretizações, a substância sólida é uma partícula de cerca de 1, 2, 4, 10, 20, ou 40 mícrons a qualquer de cerca de 100, 200, 500, 750 ou 1000 mícrons em comprimento médio ou diâmetro médio. Características desejáveis de partículas usadas nos métodos e composições aqui providos incluem capacidade de umedecimento adequada de modo que as partículas possam ser suspensas por todo o meio sob agitação.

[0059] Em certas concretizações, a substância sólida é fornecida no meio como um colóide em que a fase contínua é um líquido e a fase dispersa é o sólido. Os sólidos adequados que podem ser usados para formar colóides em meios líquidos usados para crescer a Methylobacterium que inibe os fungos patogênicos de plantas incluem, mas não se limita a vários sólidos que são referidos como hidrocolóides. Tais hidrocolóides usados nos meios, métodos e composições aqui providos podem ser polímeros hidrofílicos, de origem vegetal, animal, microbiana ou sintética. Os polímeros hidrocolóides usados nos métodos podem conter muitos grupos hidroxila e/ou podem ser polieletrólitos. Polímeros hidrocolóides usados nas composições e métodos aqui providos incluem, mas não são limitados a agar, alginato, arabinoxilina, carragenano, carboximetilcelulose, celulose, curdlan, gelatina, gelano, beta-glucano, goma guar, goma arábica, goma de alfarroba, pectina, amido, goma xantana, e misturas dos mesmos. Em certas concretizações, o colóide usado nos meios, métodos e as composições fornecidas aqui podem compreender um polímero hidrocolóide e uma ou mais proteínas.

[0060] Em certas concretizações, a substância sólida pode ser uma substância sólida que provê para o crescimento aderente da Methylobacterium que inibe os fungos patogênicos da planta sobre a substância sólida. A Methylobacterium que inibe os fungos patogênicos de plantas que são aderidos a uma substância sólida é a Methylobacterium que não pode ser substancialmente removida por meio da simples lavagem da substância sólida com a Methylobacterium aderente que inibe os fungos patogênicos da planta com o meio de crescimento, enquanto que não aderente aMethylobacterium pode ser substancialmente removida por lavagem da substância sólida com meio de crescimento líquido. Neste contexto, "substancialmente removido" significa que pelo menos cerca de 30%, 40%, 50%, 60%, 70% ou 80% da Methylobacterium presentes são removidas quando a substância sólida é lavada com três volumes de meio de crescimento líquido. Tal lavagem pode ser efetuada por uma variedade de métodos incluindo, mas não limitado a decantação de líquido de uma fase sólida lavada ou passagem de líquido através de uma fase sólida. Um filtro que permite o fluxo através de bactérias no líquido. Em certas concretizações, a Methylobacterium aderente que inibe fungos patogênicos de plantas que são associados com o sólido pode incluir ambas As Methylobacterium que são diretamente ligadas à bactéria sólida e /'ou Methylobacterium que são indiretamente ligadas à substância sólida. As Methylobacterium que são indiretamente ligadas à substância sólida incluem, mas não estão limitadas a Methylobacterium que são ligadas a outra Methylobacterium ou a um outro microorganismo que é anexado à substância sólida, Methylobacterium que é anexada à substância sólida por ser ligada a uma outra substância que é fixada à substância sólida, e semelhantes. Em certas concretizações, pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99,5% ou 99% 9 % da Methylobacterium no caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação, ou composições São Methylobacterium que são aderidas à substância sólida. Em certas concretizações, a Methylobacterium aderente que inibe fungos patogênicos de plantas pode ser presente na superfície da substância sólida no caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação, ou composição em uma densidade de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/ 20 micrômetro quadrado, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium / 10 micrômetro quadrado, de pelo menos cerca de 3 Methylobacterium / 10 micrômetro quadrado, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium / 5 micrômetros quadrados, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium /2 micrômetroso quadrado, ou de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium /micrômetro quadrado. Em certas concretizações, a Methylobacterium aderente que inibe fungos patogênicos de plantas pode estar presente na superfície da substância sólida no caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação, ou composição em uma densidade de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/20 micrômetro quadrados para cerca de 1 Methylobacterium/micrômetro quadrado, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/10 micrômetro quadrados para cerca de 1 Methylobacterium/micrômetro quadrado, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/10 micrômetro quadrados para cerca de 1 Methylobacterium/micrômetro quadrado, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/5 micrômetro quadrados para cerca de 1 Methylobacterium/micrômetro quadrado, ou de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/2 micrômetro quadrados para cerca de 1 Methylobacterium/micrômetro quadrado. Em certas concretizações, a Methylobacterium aderente que inibe os fungos patogénicos das plantas pode estar presente na superfície da substância sólida no caldo de fermentação, no produto de caldo de fermentação ou na composição em uma densidade de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/20 micrômetro quadrados para cerca de 1 Methylobacterium/2 micrômetro quadrados, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/10 micrômetro quadrados para cerca de 1 Methylobacterium/ 2 micrômetro quadrados, de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/10 micrômetro quadrados para cerca de 1 Methylobacterium/ 2 micrômetro quadrados, ou de pelo menos cerca de 1 Methylobacterium/5 micrômetro quadrados para cerca de 1 Methylobacterium/2 micrômetro quadrados. Os calos de fermentação bifásicos providos aqui podem compreender uma fase líquida que contém Methylobacterium não aderente. Em certas concretizações, os títulos de Methylobacterium não aderente na fase líquida podem ser menores do que cerca de 100.000, 10.000 ou 1.000 CFU/ml.

[0061] Produtos de fermentação e composições com um mono- ou co-cultura de Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas em um título maior do que cerca de 5 x 107 unidades formadoras de colônia por mililitro, em um título maior do que cerca de 1 x 108 unidades formadoras de colônias por mililitro, em um título maior do que cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônias por mililitro, em um título maior do que cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônias por mililitro, em um título maior do que cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônias por mililitro , em um título de pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro são fornecidas aqui. Em certas concretizações, os produtos de fermentação e as composições aqui providas podem compreender Methylobacterium que inibe os fungos patogênicos de plantas em um título de pelo menos cerca de 5 x 107, 1 x 108, ou 5 x 108 unidades formadoras de colônias por mililitro até pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônias por mililitro, pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por mililitro até pelo menos cerca de 4 x 1010 unidades formadoras de colônias por mililitro , ou pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro. Em certas concretizações, os produtos de fermentação e composições aqui providas podem compreender Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas em um título de pelo menos cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônias por mililitro até pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônias por mililitro , pelo menos cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônia por mililitro até pelo menos cerca de 4 x 1010 unidades formadoras de colônias por mililitro, ou pelo menos cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônia por mililitro até pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônias por mililitro. Em certas concretizações , os produtos de fermentação e as composições aqui providas compreenderão Methylobacterium que inibe os fungos patogênicos de plantas em um título de pelo menos cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônias por mililitro até pelo menos cerca de 4 x 1010 unidades formadoras de colônias por mililitro ou pelo menos cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro. Em certas concretizações, os produtos de fermentação e as composições aqui providas compreenderão Methylobacterium que inibe os fungos patogênicos de plantas em um título de, pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônias por mililitro até pelo menos cerca de 4 x 1010 unidades formadoras de colônias por mililitro, ou pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro. Em qualquer um dos produtos ou composições de fermentação acima mencionados, as concentrações indicadas podem ser concentrações inibidoras fúngicas. Em qualquer um dos produtos ou composições de fermentação acima mencionados, os produtos ou composições de fermentação podem ser essencialmente livres de contaminação dos microorganismos podem compreender Methylobacterium que é aderida a e/ou associada com materiais que T e Methylobacterium não são aderidas a e/ou associadas a natureza, ou qualquer combinação das mesmas.

[0062] Produtos de fermentação e composições com Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas em um título maior do que cerca de 5 x 107, 1 x 108, ou 5 x 108 unidades formadoras de colônias por grama, em um título maior do que cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônias por grama, em um título maior do que cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama, em um título de pelo menos cerca de 3 x 10 unidades formadoras de colônias por grama são fornecidas aqui. Em certas concretizações, os produtos de fermentação e as composições aqui fornecidas podem compreender Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas em um título de pelo menos cerca de 5 x 107, 1 x 108, ou 5 x 108 unidades formadoras de colônias por grama pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama, pelo menos cerca de 5 x 107, 1 x 108, ou 5 x 108 unidades formadoras de colônias por grama até pelo menos cerca de 4 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama, ou pelo menos cerca de 5 x 107, 1 x 108 Ou 5 x 108 unidades formadoras de colônia por grama até pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama. Em certas concretizações, os produtos de fermentação e composições aqui providas podem compreender Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas em um título de pelo menos cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônias por grama até pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama, pelo menos cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônias por grama até pelo menos cerca de 4 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama , ou pelo menos cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônia por grama até pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama. Em certas concretizações, os produtos de fermentação e as composições aqui providas compreenderão Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas em um título de pelo menos cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama até pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama, pelo menos cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama até pelo menos cerca de 4 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama , ou pelo menos cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônia por grama até pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama. Em certas concretizações, os produtos de fermentação e as composições aqui providas compreenderão Methylobacterium que inibe os fungos patogênicos de plantas em um título de, pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama até pelo menos cerca de 4 x 1010 unidades formadoras de colônias por grama, ou pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por grama até pelo menos cerca de 6 x 1010, l x l013 ou 5 x l013 unidades formadoras de colônias por grama. Em qualquer um dos produtos ou composições de fermentação acima mencionados, a fermentação ou composição pode compreender uma mono- ou co-cultura de Methylobacterium que é aderida a uma substância sólida. Em qualquer um dos produtos ou composições de fermentação acima mencionados, as concentrações indicadas podem ser concentrações inibidoras fúngicas. Em qualquer um dos produtos ou composições de fermentação acima mencionados, as concentrações indicadas podem ser concentrações inibidoras fúngicas. Em qualquer um dos produtos ou composições de fermentação acima mencionados, os produtos ou composições de fermentação podem ser essencialmente livres de microorganismos contaminantes, podem compreender Methylobacterium que é aderida a e/ou associada a materiais que a Methylobacterium não é aderida e/ou associada com a natureza, ou qualquer combinação dos mesmos.

[0063] Substâncias sólidas com Methylobacterium aderente que inibem fungos patogênicos de plantas podem ser obtidas como produtos de fermentação podem ser usados para produzir várias composições úteis para o tratamento de plantas ou partes de plantas para inibir a infecção por fungos patogênicos de plantas. Alternativamente, as composições fornecidas aqui compreendem substâncias sólidas com Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas ou Methylobacterium aderentes que inibe fungos patogênicos de plantas pode ser usada para tratar plantas ou partes de planta. Plantas, partes de planta e, em particular, sementes de plantas que foram pelo menos parcialmente revestidas com os produtos de caldo de fermentação ou composições compreendendo as Methylobacterium que inibem os fungos patogênicos da planta são assim providas. Também são providos produtos vegetais processados que contêm os produtos de caldo de fermentação ou composições com Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas ou bactérias Metóxicas aderentes que inibem fungos patogênicos de plantas. Substâncias sólidas com Methylobacterium aderente que inibem fungos patogênicos de plantas podem ser usadas para produzir várias composições que são particularmente úteis para o tratamento de sementes de plantas. As sementes que foram pelo menos parcialmente revestidas com os produtos ou composições de caldo de fermentação são assim providas. Também são providos produtos de semente processados, incluindo, mas não limitados a farinha, farinha, alimentação, e flocos que contêm os produtos ou composições de caldo de fermentação providos aqui. Em certas concretizações, o produto vegetal processado será não-regenerável (isto é, será incapaz de desenvolver em uma planta) Em certas concretizações, a substância sólida usada no produto de fermentação ou composição que reveste pelo menos parcialmente a planta, parte de planta, ou semente de planta ou que está contida na planta processada, parte de planta, ou produto de semente compreende uma substância sólida e Methylobacterium associada ou aderente que inibem fungos patogênicos de plantas que podem ser facilmente identificados pela comparação de uma planta tratada e não tratada, parte de planta, semente de planta, ou produto processado do mesmo.

[0064] Composições úteis para o tratamento de plantas ou partes de plantas que compreendem Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas ou uma substância sólida com Methylobacterium aderente que inibe fungos patogênicos de plantas, emulsões contendo os mesmos Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas ou combinações dos mesmos também pode compreender um adjuvante agrícola aceitável ou um excipiente agrícola aceitável. Um adjuvante agrícola aceitável ou um excipiente agrícola aceitável é tipicamente um ingrediente que não causa fitotoxicidade indevida ou outros efeitos adversos quando expostos a uma planta ou parte vegetal. Em certas concretizações, a substância sólida pode por si só ser um adjuvante agrícola aceitável ou um excipiente agrícola aceitável desde que não seja bacteriostático ou bacteriostático para a Methylobacterium. Em outras concretizações, a composição ainda compreende pelo menos um de um adjuvante agrícola aceitável ou um excipiente agrícola aceitável. Qualquer uma das composições acima mencionadas também pode compreender ainda um pesticida. Os pesticidas usados na composição incluem, mas não estão limitados a um inseticida, um fungicida, um nematoide, e uma bactericida. Em certas concretizações, o pesticida usado na composição é um pesticida que não inibe substancialmente o crescimento da Methylobacterium. As Methylobacterium são bactérias gram-negativas, bactericidas adequados usados nas composições podem incluir, mas não estão limitadas a bactericidas que exibem atividade contra bactérias gram positivas mas não bactérias gram-negativas. As composições fornecidas aqui também podem compreender um agente bacteriostático que não inibe substancialmente o crescimento de Methylobacterium sp. Os agentes bacteriostáticos adequados para o uso nas composições aqui apresentadas incluem, mas não estão limitados a aquelas que exibem atividade contra bactérias gram positivas mas não bactérias gram-negativas. Qualquer uma das composições acima mencionadas também pode ser um produto essencialmente seco (isto é, tendo cerca de 5% ou menos de teor de água), uma mistura da composição com uma emulsão, ou uma suspensão.

[0065] Adjuvantes agricolamente aceitáveis usados nas composições que compreendem Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas, emulsões contendo os mesmos Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas, ou combinações dos mesmos, incluem, mas não estão limitadas a componentes que intensificam a eficácia do produto e/ou produtos que aumentam a facilidade de aplicação do produto. Adjuvantes que intensificam a eficácia do produto podem incluir vários mata-borrões/espalhadores que promovem adesão e espalhamento da composição em partes de planta, adesivos que promovem a adesão à parte da planta, penetrantes, extensores e umectantes que aumentam a densidade ou o tempo de secagem das composições pulverizadas. Os mata- boradores/espalhadores usados nas composições podem incluir, mas não são limitados a tensoativos não-iônicos, tensoativos aniônicos, tensoativos catiônicos, tensoativos anfotéricos, tensoativos de organo-silicato, e/ou tensoativos acidificados. Os adesivos usados nas composições podem incluir, mas não estão limitados a substâncias à base de látex, terpeno/pinoleno, e substâncias à base de pirrolidona. Penetrantes podem incluir óleo mineral, óleo vegetal, óleo vegetal esterificado, tensoativos de organo- silicato e tensoativos acidificados. Os extensores usados nas composições podem incluir, mas não são limitados a sulfato de amónio, ou substâncias baseadas em menteno. Umectantes usados nas composições podem incluir, mas não estão limitados a glicerol, propileno glicol, e dietil glicol. Adjuvantes que melhoram a facilidade de aplicação do produto incluem, mas não estão limitados a agentes de acidificação/tamponamento, agentes anti- espumantes/desespumação, agentes de compatibilidade, agentes de redução de desvio, corantes e condicionadores de água. Agentes Anti-formação de espuma/desespumação usados nas composições podem incluir, mas não estão limitados a dimetilpolissiloxano. Os agentes de compatibilidade usados nas composições podem incluir, mas não estão limitados a sulfato de amónio. Os agentes redutores de deriva usados nas composições podem incluir, mas não estão limitados a, poliacrilamidas e polissacarídeos. Os condicionadores de água usados nas composições podem incluir, mas não estão limitados a, sulfato de amônio.

[0066] Métodos de tratamento de plantas e/ou partes de planta com os calos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, e composições compreendendo Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de planta, ou combinações dos mesmos também são fornecidas aqui. As plantas tratadas, e as partes de planta tratadas obtidas a partir da mesma, incluem, mas não estão limitadas a milho, Brassica sp. (Por Exemplo, B. napus, B. Rapa, B. junea), alfafa, arroz, centeio, sorgo, millet (por exemplo , Millet millet (Pennisetum Glauum)), proso millet (Panicum miliaceum), rabo de raposa millet (Setaria italica), millet de dedo (Eleusine coracana), girassol, açafroa, soja, tabaco, batata, amendoins, algodão, batata doce (Ipmoea batatus), cassva, café, coco, abacaxi, árvores cítricas, cacau, chá, banana, abacate, figo, guava, manga, azeitona, mamão, cashew, macadamia, amêndoa, beterraba açucareira, cana-de-açúcar, aveia, cevada, tomates, alface, grãos verdes, feijões de lima, ervilhas, cucurbits tais como pepino , Cantaloupe, e almíscar melon, ornamentais, e coníferas. Partes de planta que são tratadas incluem, mas não são limitadas as folhas, as hastes, as flores, as raízes, as sementes, as frutas, os tubérculos, as colocações e similares. Plantas ornamentais e partes de plantas que podem ser tratadas incluem, mas não estão limitadas a azalea, hybicus, roses, tulábios, dafodils, petunas, carnação, poposetia e crissantemum. Plantas de coníferas e partes de planta que podem ser tratadas incluem, mas não são limitadas a pinas tais como pinho loblolly, pinheiro da flórida, pinheiro de monosa, pinheiro do poste de loge, e pinho Montery; Douglas-fir; Western hemlock; Sitka abeto; redwood; firs verdadeiras tais como abeto de prata e bálsamo; e cedores tais como Vermelho-cedar ocidental E Alaska amarelo-cedar. As plantas de grama e partes de planta que podem ser tratadas incluem, mas não são limitadas a, annual bluegrass, annual ryegrass, Canada bluegrass, fescue, bentgrass, trigograss, Kentucky bluegrass, orchard grass, ryegrass, redtop, Bermuda grass, St. Augustine grass, e zoysia grass. Em certas concretizações, a planta tratada ou parte vegetal é uma planta de cereais ou parte vegetal selecionada do grupo consistindo em um arroz, trigo, milho, cevada, milho, sorgo, aveia, e planta de centeio ou parte de planta Sementes ou outras propagações de qualquer uma das plantas acima mencionadas pode ser tratada com caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, produtos de fermentação, e/ou composições aqui providos.

[0067] Em certas concretizações, as plantas e/ou partes de plantas são tratadas por aplicação dos caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, produtos de fermentação, e composições que compreendem Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas, ou combinações dos mesmos como uma pulverização. Tais aplicações de pulverização incluem, mas não estão limitadas a tratamentos de uma única peça de planta ou qualquer combinação de partes de planta. A aspersão pode ser obtida com qualquer dispositivo que distribua os caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, produtos de fermentação, e composições para a planta e/ou parte vegetal (s). Dispositivos de aspersão úteis incluem um pulverizador de lança, um pulverizador manual ou de retroembalagem, dutores de colheita (isto é, aspersão aérea), e semelhantes. Dispositivos de pulverização e ou métodos provendo a aplicação dos caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, produtos de fermentação, e composições em qualquer uma ou ambas a superfície adaxial e/ou a superfície abaxial também podem ser usadas. Plantas e/ou partes de planta que são pelo menos parcialmente revestidas com qualquer um de um caldo de fermentação bifásico, um produto de caldo de fermentação, produto de fermentação ou composições que compreendem uma substância sólida com Methylobacterium que inibem os fungos patogênicos da planta aderidos ao mesmo, também são fornecidas aqui. Também são providos aqui produtos vegetais processados que compreendem uma substância sólida com Methylobacterium que inibem os fungos patogênicos de plantas aderidos ao mesmo.

[0068] Em certas concretizações, sementes são tratadas por exposição das sementes aos caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, produtos de fermentação, e composições que compreendem Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas, ou combinações dos mesmos. Sementes podem ser tratadas com os caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, e composições providas aqui por métodos que incluem, mas não limitado a absorção, revestimento, aspersão e similares. Os tratamentos de semente podem ser efetuados tanto com tratadores de semente contínuos e/ou em batelada. Em certas concretizações, as sementes revestidas podem ser preparadas misturando-se sementes com uma composição de revestimento contendo um caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação, ou composições que compreendem a substância sólida com Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas e secagem ao ar do produto resultante. A secagem ao ar pode ser realizada a qualquer temperatura que não seja prejudicial para a semente ou similar. A Methylobacterium, mas tipicamente não será maior do que 30 graus Centígrados. A proporção de revestimento que compreende uma substância sólida e Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas inclui, mas não está limitada a uma faixa de 0,1 a 25% em peso da semente, 0,5 a 5% em peso da semente, e 0,5 a 2,5% em peso de semente. Em certas concretizações, uma substância sólida usada no revestimento ou tratamento de semente terá Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas aderidos sobre o mesmo. Em certas concretizações, uma substância sólida usada no revestimento ou tratamento de semente será ser associada com Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas e será um caldo de fermentação, produto de caldo de fermentação, ou composição obtida pelos métodos aqui providos. Várias composições de tratamento de semente e métodos para o tratamento de sementes descritos nas Patentes US Nos. 5, 106, 648 ; 5,512,069 e 8,181,388 são aqui incorporados por referência em suas totalidades e podem ser adaptados para uso com produtos de fermentação ou composições aqui providos. Em certas concretizações, a composição usada para tratar a semente pode conter excipientes farmaceuticamente aceitáveis que incluem, mas não estão limitados a farinhas de madeira, argilas, carvão ativado, terra diatomácea, sólidos inorgânicos de grão fino, carbonato de cálcio e similares. Argilas e sólidos inorgânicos que podem ser usados com os caldos de fermentação, produtos de caldo de fermentação, ou composições aqui providas incluem, mas não estão limitadas a bentonita de cálcio, caulim, argila de china, talco, perlita, mica, vermiculita, sílicas, quartzo em pó, montmorilonita e misturas dos mesmos. Adjuvantes agricolamente aceitáveis que promovem a aderência à semente que podem ser usados incluem, mas não são limitados a, acetatos de polivinila, copolímeros de acetato de polivinila, acetatos polivinílicos hidrolisados, copolímero de polivinil pirrolidona-acetato de vinila, álcoois polivinílicos, copolímeros de álcool polivinílico, éter metil polivinílico, copolímero de polivinil metil éter- anidrido maléico, ceras, polímeros de látex, celuloses incluindo etilceluloses e Metilceluloses, hidróximetilceluloses, hidróxi propil celulose, Hidróxi propil celuloses, polivinil pirrolidonas, alginatos, dextrinas, malto-dextrinas, polissacarídeos, gorduras, óleos, as proteínas, a goma de caraia, a goma de jaguar, a goma de tragacanto, as gomas de polissacarídeo, a mucilagem, a goma de goma, a shellacs, polímeros e copolímeros de cloreto de vinilideno, polímeros e copolímeros de proteína à base de soja, lignosulfonatos, copolímeros acrílicos, amidos, polivinilacrilatos, zeinas, gelatina, carboximetilcelulose, quitosano, óxido de polietileno, polímeros e copolímeros de acrilamida, Acrilato de polihidroxietila, monômeros de metilacrilamida, alginato, etilcelulose, policloropreno e xaropes ou misturas dos mesmos. Outros adjuvantes comercialmente aceitáveis úteis que podem promover o revestimento incluem, mas não estão limitados a polímeros e copolímeros de acetato de vinila, copolímero de polivinil pirrolidona-acetato de vinila e ceras solúveis em água. Vários tensoativos, dispersantes, agentes antiaglomerante, agentes de controle de espuma e corantes descritos aqui e na patente US No. 8,181,388 podem ser adaptados para uso com produtos de fermentação ou composições aqui providas.

[0069] São providas aqui composições que compreendem Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas e que proporcionam controle de infecções fúngicas patogênicas de plantas, partes de planta, e plantas obtidas a partir das mesmas em relação às plantas não tratadas, partes de planta, e plantas obtidas a partir das mesmas que não foram expostas às composições. Em certas concretizações, partes de planta, incluindo, mas não se limitam a uma semente, uma folha, uma fruta, uma haste, uma raiz, um tubérculo, ou uma coleticidade pode ser tratada com as composições fornecidas aqui para controlar a doença fúngica. Os tratamentos ou aplicações podem incluir, mas não estão limitados a aspersão, revestimento, revestimento parcial, imersão e/ou embebição das partes de planta ou planta com as composições fornecidas aqui. Em certas concretizações, uma semente, uma folha, uma fruta, uma haste, uma raiz, um tubérculo, ou uma coleticidade pode ser imersa e/ou embebida com um líquido, semilíquido, emulsão ou pasta fluida de uma composição fornecida aqui. Tal imersão ou embebição de semente pode ser suficiente para fornecer inibição de doença fúngica em uma planta ou parte vegetal em comparação com uma planta ou parte vegetal não tratada Tal inibição de doença fúngica inclui, mas não é limitada a diminuições no crescimento fúngico e/ou nos efeitos adversos do crescimento fúngico em relação às plantas não tratadas. Em certas concretizações, sementes de plantas podem ser imersas e/ou embebidas por pelo menos 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 horas. Tal imersão e/ou absorção pode, em certas concretizações, ser conduzida em temperaturas que não são deletérias para a semente vegetal ou a Methylobacterium. Em certas concretizações, as sementes podem ser tratadas em cerca de 15 a cerca de 30 graus Centígrados ou a cerca de 20 a cerca de 25 graus Centígrados. Em certas concretizações, a embebição de semente e/ou imersão pode ser realizada com agitação suave.

[0070] Quantidades das composições que compreendem Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas que são suficientes para prover uma inibição de infecção fúngica de uma planta ou parte vegetal podem assim ser determinadas por medir qualquer ou todo o crescimento fúngico e/ou os efeitos adversos do crescimento fúngico em plantas tratadas ou partes da planta em relação às plantas não tratadas ou partes da planta. Efeitos adversos do crescimento fúngico em uma planta que pode ser medida incluem qualquer tipo de dano ou necrose de tecido vegetal, qualquer tipo de redução de produção de planta, qualquer redução no valor do produto vegetal, e/ou produção de metabólitos fúngicos indesejáveis ou subprodutos de crescimento fúngico incluindo, mas não limitado a micotoxinas. As micotoxinas compreendem um número de moléculas tóxicas produzidas por espécies fúngicas, incluindo, mas não limitadas a, poliquelinas (incluindo aflatoxinas, demetilsterigmatocistina, O-metilsterigmatocistina etc.), fumonisinas, alperisinas (por exemplo, A1, A2, B1, B2), esfingofunginas (A, B, C e D), tricotecenos, fumifunginas e semelhantes. Os métodos de quantificação dos níveis de micotoxinas estão amplamente documentados. Além disso, kits comerciais para medição de micotoxinas como aflatoxina, fumonisina, desoxinivalenol e zearalenona também estão disponíveis (VICAM, Watertown, MA, USA).

[0071] Acredita-se, portanto, que as composições aqui providas, que inibem fungos patogênicos de plantas, sejam úteis na inibição do crescimento fúngico e/ou infecção em uma ampla variedade de fungos patogênicos de plantas, incluindo, mas não limitado aos estágios anamórficos e/ou telemórficos dos fungos fitopatogênicos nos seguintes géneros e espécies: Alternaria (Alternaria alternata; Alternaria brassicicola; Alternaria solani); Ascochyta (Ascochyta pisi); Bipolaris (Bipolaris maydis); Botrytis (Botrytis cinerea); Bremia (Bremia lactucae); Cercospora (Cercospora kikuchii; Cercospora zeae-maydis); Cochliobolus (Colchliobolus maydis; Cochliobolus heterostrophus; Cochliobolus carbonum); Colletotrichum (Colletotrichum lindemuthianum; Colletotrichum graminicola; Colletotrichum cereale); Diplodia (Diplodia maydis); Erysiphe (Erysiphe graminis f.sp. graminis; Erysiphe graminis f.sp. hordei); Exserohilum (Exserohilum turcicum); Fusarium (Fusarium nivale; Fusarium oxysporum; Fusarium graminearum; Fusarium culmorum; Fusarium solani; Fusarium moniliforme; Fusarium virguliforme); Gaeumanomyces (Gaeumanomyces graminis f.sp. tritici); Macrophomina (Macrophomina phaseolina); Magnaporthe (Magnaporthe oryzae; Magnaporthe grisea); Nectria (Nectria haematococca); Peronospora (Peronospora manshurica; Peronospora tabacina); Phakopsora (Phakopsora pachyrhizi); Phialopora (Phialophora gregata); Phoma (Phoma betae); Phymatotrichum (Phymatotrichum omnivorum); Phytophthora (Phytophthora cinnamomi; Phytophthora cactorum; Phytophthora phaseoli; Phytophthora parasitica; Phytophthora citrophthora; Phytophthora megasperma f.sp. sojae; Phytophthora infestans); Plasmopara (Plasmopara viticola); Podosphaera (Podosphaera leucotricha); Puccinia (Puccinia sorghi; Puccinia striiformis; Puccinia graminis f.sp. tritici; Puccinia asparagi; Puccinia recondita; Puccinia arachidis; Puccinia coronata); Pythium (Pythium aphanidermatum; Pythium ultimum); Pyrenophora (Pyrenophora tritici-repentis); Rhizoctonia (Rhizoctonia solani; Rhizoctonia cerealis); Sclerotium (Sclerotium rolfsii); Sclerotinia (Sclerotinia sclerotiorum; Sclerotinia homoeocarpa); Septoria (Septoria lycopersici; Septoria glycines; Septoria nodorum; Septoria tritici); Setosphaeria (Setosphaeria turcica); Stagonospora (Stagonospora nodorum); Thielaviopsis (Thielaviopsis basicola); Uncinula (Uncinula necator); Ustilago (Ustilago maydis); Venturia (Venturia inaequalis); Verticillium (Verticillium dahliae; Verticillium albo-atrum) são também esperadas composições aqui providas compreendendo Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas para ser útil na inibição do crescimento fúngico e/ou infecção por Fusarium Graminearum, Fusarium verticiloides e/ou Fusarium proliferatum. As composições fornecidas aqui compreendem Methylobacterium que inibe o crescimento fúngico e/ou infecção Por Fusarium graminarum, pode ser usada para controlar infecções de plantas de cereais infectadas por estes fungos. Infecções de plantas de cereais selecionadas do grupo consistindo em arroz, trigo, milho, cevada, as plantas de sorgo, sorgo, aveia e centeio Por Fusarium sp podem ser controladas pelas composições fornecidas aqui. Em qualquer uma das concretizações acima mencionadas, o fungo patogênico de plantas que é inibido pode estar em sua forma anamórfica, sua forma telemórfica, ou em ambas as suas formas anamórficas e telemórficas. Certos Isolados de methylobacterium ou combinações de isolados também podem ser usados para inibir certos fungos patogênicos de plantas em certas colheitas como descrito na tabela 2. Em certas concretizações onde uma combinação de isolados é usada (por exemplo, LS0066 e LS0017 ou LS0089 e LS0020), os isolados podem ser aplicados simultaneamente ou sequencialmente. Em certas concretizações onde uma combinação de isolados é usada {por exemplo , NLS0066 e NLS0017 ou LS0089 e NLS0020), os isolados podem ser aplicados no mesmo modo (s) (por exemplo, através de um tratamento de semente, uma aplicação foliar, ou em sulcos) ou por modos distintos. Tabela 2. Isolados de Methylobacterium e combinações de isolados para uso no controle de certos fungos patogênicos de plantas em certas colheitas.

[0072] Em certas concretizações, uma quantidade de uma composição fornecida aqui é suficiente para fornecer inibição de infecção fúngica em uma planta ou peça de planta pode ser composição com Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas em um título de pelo menos cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 109 unidades formadoras de colônias por mililitro, pelo menos cerca de 1 x 1010 unidades formadoras de colônias por mililitro , ou pelo menos cerca de 3 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro. Em certas concretizações, uma quantidade de uma composição fornecida aqui que é suficiente para fornecer para inibição de doença fúngica em uma planta ou parte vegetal pode ser uma composição com Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas em um título de cerca de 5 x 108 unidades formadoras de colônia por mililitro a pelo menos cerca de 6 x 1010 unidades formadoras de colônia por mililitro. Em certas concretizações, uma quantidade de uma composição fornecida aqui é suficiente para fornecer inibição de doença fúngica em uma planta ou peça de planta pode ser um produto de caldo de fermentação com uma Methylobacterium que inibe o título de fungos patogênicos da planta de uma fase sólida desse produto é de pelo menos cerca de 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108, ou 5 x 108 unidades formadoras de colônias por grama até pelo menos cerca de 6 x 1010, lxlO13 ou 5xl013 unidades formadoras de colônia de Methylobacterium por grama da fase sólida em que uma monocultura ou co-cultura de Methylobacterium que inibe a patogenese vegetal. Os fungos são aderidos ao mesmo. Em certas concretizações, uma quantidade de uma composição fornecida aqui que é suficiente para fornecer inibição da doença fúngica. Uma planta ou parte vegetal pode ser uma composição com um título de Metanobacterium de pelo menos cerca de 1 x l07, 5 x l07, l x 108 ou 5 x 108 unidades formadoras de colônias por grama para pelo menos cerca de 6 x 1010, 1x1013 ou 5x1013 Unidades formadoras de colônias de Methylobacterium por grama de partículas na composição contendo as partículas que compreendem uma substância sólida em que uma mono-cultura ou co- cultura de Methylobacterium que inibe fungos patogênicos de plantas é aderida ao mesmo. Em qualquer uma das composições acima mencionadas, as concentrações indicadas podem ser concentrações inibidoras fúngicas.

EXEMPLOS

[0073] Os seguintes exemplos são incluídos para demonstrar várias concretizações. Será apreciado por técnicos versados no assunto que as técnicas descritas nos exemplos a seguir representam técnicas descobertas pelos Requerentes também funcionam bem. Entretanto, aqueles versados na técnica devem, à luz da presente descrição, apreciar que muitas mudanças podem ser feitas nas concretizações específicas que são descritas, enquanto ainda obtém resultados similares ou similares, sem se afastar do escopo da revelação.

Exemplo 1. Supressão de Fusarium graminearum por PPFMs

[0074] As culturas PPFM para o tratamento de semente foram crescidas em Meio AMS-GP emendada com 0,2% de terra diatomácea p/v (pedido de patente Internacional PCT/US13/43722, depositado Em 31 de maio de 2013). As células foram colhidas por centrifugação e ressuspensas em água para uma concentração final de aproximadamente 1,3xl08 CFU/ml. As Sementes de distensão de brodium de linhagem congênita Bd21- 3 foram tratadas pela incubação durante a noite em caixas de germinação de plástico entre duas folhas de papel de germinação saturado com 30 ml da Suspensão PPFM. As caixas de germinação foram colocadas no escuro a 4° C durante a duração do período de tratamento de semente. As sementes para o grupo de controle foram tratadas similarmente, exceto que a água foi aplicada ao papel de germinação.

[0075] As sementes tratadas foram plantadas em meio de recheadura com soilmenos e crescidas em uma câmara de crescimento de ambiente controlado (24° C, 50% de umidade relativa, e intensidade de luz de 200μv'/ 2 /8) com um comprimento de 2 dias para promover a florescência. Quarenta e dois ± dois dias após o plantio, plantas de distensão B Geneticamente Maduras foram movidas para a estufa (21 - 24 ° C, 40% de umidade relativa) A fim de permitir que o tempo de plantas aclise às condições de estufa, inoculações foram realizadas dois dias após a transferência para a estufa.

[0076] Fusarium graminearum foi mantido em agar de dextrose de batata (PDA). Uma semana antes da data de inoculação pretendida, três tampões de agar de 8x8 mm da borda de avanço de uma colônia de aproximadamente uma semana de idade de F graminearum foi transferida para 75 ml de Meio de CMC (capellini e Peterson, Mycologia 57: 962-966, 1965) em um frasco de 250 ml. Os frascos foram embalados em folha de estanho e incubados em temperatura ambiente por seis dias com agitação (175 rpm). Após o sexto dia, os conídios foram colhidos por filtração através de uma camada dupla de talagarça estéril, seguido por centrifugação. O conídio pelotizado foi então ressuspenso em água deionizada estéril (DI) a água e a concentração de conconal foram determinadas usando-se um hemacitômetro. Para a inoculação, uma concentração final de lxlO5 conídio/ml foi preparada em água DI Estéril modificada com Tween a 0,01% (v/v).

[0077] As plantas foram inoculadas por aspersão da suspensão conidial diretamente sobre spikets até que as plantas de controle de retirada de gotas receberam Um Tratamento de inoculação simulada de Água DI estéril modificada com Tween 20 a 0,01% imediatamente após a inoculação, as plantas individuais foram ensacadas para manter alta umidade e evitar contaminação cruzada. Todas as plantas foram então dispostas em um projeto de bloco completo randomizado com seis replicações. Os domos de umidade foram colocados sobre cada plano durante os primeiros cinco dias para manter umidade relativa próxima de 100%) Em 7 dias após a inoculação, a incidência de doença e a severidade foram avaliadas para cada planta. A incidência foi classificada como o número de pikelets sintomáticos afetados dividido pelo número total de spikets por planta. A área total das spikelets por planta mostrando sintomas de doença foi usada para classificar a severidade e foi classificada em escala de 0 a 5 com 0 indicando ausência de sintomas spikelet, 1 = 1 - 20%, 2 = 21 - 40, 3 = 41 - 60%, 4 = 61 - 80%, e 5 = 81 - 100%) de área de spikelet por planta.

[0078] Dos quatro tratamentos de semente de cepa NLS testados (Cepas PPFM LS0017, LS0020, LS0037 e NLS0066) somente as plantas das sementes tratadas com a Linhagem PPFM LS0066 exibiram significativamente reduzida (95-99%) intervalo de confiança) FHB incidência de sintoma (Tabela 3) e gravidade (tabela 4) em Relação ao controle tratado com água DI. A redução foi em ou próxima de 50% > para ambas as métricas de doença. O tratamento de semente com a Linhagem PPFM LS0017 reduziu tanto a severidade de sintoma quanto a incidência em relação às plantas de controle aproximadamente 27%; no entanto, esta diferença não foi significativa na confiança de 95% de Limite. As Cepas PPFM NLS0020 e LS0037 não afetaram um ou ambos incidência de spikelet ou gravidade de sintoma. Tabela 3. Incidência de espiquelete

Tabela 4 Gravidade do Sintoma

Exemplo 2. Identificação de cepas PPFM que conferem resistência a FHB de trigo na câmara de crescimento e testes de campo.

[0079] Praga de Cabeça de Fusarium (FHB) suscetível a cultivar de Trigo Bobwhite ou outro Cultivar FHB-suscetível será usada para estudos de câmara de crescimento. Para cada isolado PPFM a ser testado, as sementes serão plantadas sem qualquer Tratamento PPFM e crescidas na câmara de crescimento. Os picos de quinze plantas serão aspergidos com uma suspensão de cada cepa PPFM a 106 ou 108 cfu/ml. Dois picos de cada planta serão inoculados por pontos pela injeção de florências individuais no meio do furador em antese com uma suspensão conconal de 10 μl de F. graminouum PH-1 ou outro isolado virulento de F. graminearum (s) (105 esporos/ml) ou controle de água (parse) em solução Triton 60 ou Tween 20 a 0,01% (Goswami e Kistler, 2005). Após a inoculação, as plantas serão colocadas em uma câmara de crescimento a 16° C por 8 horas (noite) e 18° C por 16 horas (day) para assegurar a severidade apropriada da doença, os picos serão cobertos com sacos plásticos por 48 horas para aumentar a umidade. A primeira avaliação da doença será realizada 7 dias após a inoculação. O número de spikelets que exibe sintomas será contado para cada pico inoculado e registrado. A avaliação será repetida em 14 dias após a inoculação. A severidade da doença será calculada como percentual de spikelets doentes por pico (classificação de severidade da doença) para cada data de avaliação. Para testar o efeito de tratamento geral, a área sob a curva de progresso da doença (AUDPC) será calculada para cada planta. Prevê-se que as plantas tratadas com poucas cepas PPFM terão contagens de doença muito menores (AUDPC) do que as plantas de controle. Prevê-se que algumas cepas PPFM aplicadas como pulverização de flores fornecerão resistência a FHB nestes testes de câmara de crescimento. Os isolados PPFM que foram determinados para fornecer Resistência de FHB nos testes de câmara de crescimento serão avançados para testes no campo para sua capacidade de fornecer Resistência de FHB. Testes de campo serão conduzidos em duas ou mais localizações. Experimentos de campo serão conduzidos usando um projeto de bloco completo randomizado com quatro linhas e seis replicações por tratamento. Cinquenta sementes tratadas com PPFM por replicação serão semeadas em cada local. Quatro fileiras de borda circundarão o local de experimento e não serão tratadas com PPFMs. Cerca de 2 semanas antes da vacinação antecipada, os grãos de milho secos ao ar e secos colonizados por um único, isolamento agressivo de F graminearum será espalhado uniformemente a -25 grãos por m2 por toda a área de teste. As periosidades aparecerão nos grãos dentro de alguns dias e começam a liberar os ascoesporos no momento da antese quando o trigo é mais suscetível à infecção por este patógeno. No momento dos picos de florescência, a suspensão PPFM De cada cepa a 1 x 108 cfu/ml em água contendo 0,04% Tween 80 ou tensoativo similar será aplicado usando-se um pulverizador de embalagem traseira C02 conforme descrito (Schisler et al, 2002). Os tratamentos de controle serão aspergidos com água contendo Tween 80 a 0,04% ou tensoativo similar, mas sem PPFM. Durante a antese, os picos serão mantidos úmidos pelo uso de pequenos chuveiros de topo por 3 minutos a cada hora de manhã para duk. Quando as plantas atingem o estágio de desenvolvimento de leite tardio no campo, avaliações da incidência de FHB e gravidade serão feitas pela avaliação de 60 cabeças por réplica como descrito (Stack e McMullen, 1995). Os picos de trigo serão colhidos manualmente, debulhados e avaliados para peso de 100 grãos. Dez a 20 g de amostras de cada réplica serão analisadas por seu deoxignvalenol (DON) com o uso do Kit de teste DLIGADO quantitativo Veratrox ™ 5/5 (negen Corp. Lansing, MI, USA)

[0080] A análise estatística da incidência e gravidade da doença e dosdados DON serão realizados com PROC GFLMMLX de SAS (SAS Institute, Research Triangle Park, NC) ou o'lme'e pacotes relacionados em R (http://www.R-projet.org) Os Dados serão considerados significativamente diferentes em um valor P de < 0,05. Análise de correlação será conduzida em meios para A Severidade de FHB e conteúdo DON Usando PROC REG de SAS (SAS Institute, Research Triangle Park, NC), que calcula o coeficiente de correlação de Pearson. (1) Cappellini RA, Peterson JL (1965) Macroconidium formation in submerged cultures by a non-sporulating strain of Gibberella zeae. Mycologia 57: 962-966. (2) Spelbrink RG, Dilmac N, Allen A, Smith TJ, Shah DM, et al. (2004) Differential antifungal and calcium channel-blocking activity among structurally related plant defensins. Plant Physiol 135: 2055-2067. (3) Broekaert WF, Terras FR, Cammue BP, Vanderleyden J (1990) An automated quantitative assay for fungal growth inhibition. FEMS Microbiology Letters 69: 55-60. (4) Holland, M.A, Polacco, J.C. (1994) PPFMs and other covent contaminants: Is there more to plant physiology than just plant. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol Biol 45: 197-208. (5) Jacobson, B.J. (2006) Biological control of plant diseases by phyllosphere applied biological control agents. In MJ Bailey, AK Lilley, TM Timms-Wison, PTN Spencer- Phillips, eds, Microbial ecology of aerial strains in a controlled model system. CAB International, United Kingdom, Wallingford, pp 133-147. Exemplo 3. Supressão de raiz de Fusarium em trigo desenvolvido em estufa

[0081] Os concentrados PPFM congelados (l x l08 CFU/mL) foram descongelados até a temperatura ambiente imediatamente antes do uso no tratamento de sementes. Os concentrados PPFM foram então submetidos a vórtice durante 10 segundos e 75 μL, de cada tratamento foi pipetada em um tubo cónico de 15 mL contendo 100 sementes de trigo de primavera (Triticum Aestivum L, cv. " Bobwhite) Para simular tratamentos de semente de indústria padrão, 66, 8 uL de uma Solução de polímero agrícola (Fio Rite 1706 plantabilidade), BASF, North Carolina, EUA), preparada pela combinação de 6 1 Um polímero com 40 mL de água deionizada foi adicionado a cada tubo de tratamento. Os tubos foram tampados e submetidos a vórtice durante aproximadamente 90 segundos para revestir completamente as sementes. As sementes tratadas foram deixadas secar ao ar sob um Kimlenço ® em uma bancada de laboratório, antes e mantidas em temperatura ambiente antes do uso. Todas as sementes foram usadas dentro de uma semana de tratamento. As sementes em excesso foram verificadas quanto à concentração de PPFM e a viabilidade colocando dez sementes em água destilada estéril, vórtice por dez segundos, e chapeamento de lOOuL da lavagem de semente resultante No Meio seletivo de PPFM. As sementes de controle foram tratadas com uma solução de meio de crescimento PPFM e solução de polímero.

[0082] As sementes tratadas foram plantadas em uma mistura de 50/50 de meio de recheadura com soilless/solo de campo e crescidas em uma estufa condicionada ao ar (70° F) durante a noite/68° c (68° F) dia, 40 - 90% de UR, 16h de comprimento) até a antese. As plantas receberam água diária e fertilizante duas vezes por semana.

[0083] Fusarium graminearum foi mantido em agar de dextrose de batata (PDA). Uma semana antes da data de inoculação pretendida, três tampões de agar de 8x8 mm da borda de avanço de uma colônia de aproximadamente uma semana de idade de F graminearum foi transferida para 75 mL de Meio de CMC (capellini e Peterson,1965) em um frasco de 250 mL. Os frascos foram incubados em temperatura ambiente durante seis dias com agitação (175 rpm). Após o sexto dia, o conídio foi coletado por filtração através de uma camada dupla de talagarça estéril, seguido por centrifugação. O conídio peletizado foi então ressuspenso em água deionizada (DI) e a concentração conidial foi determinada usando-se um Hemacitômetro. Para a inoculação, uma concentração final de 1,0 - 2,0 x l05 de conídio/ ml foi preparada em água DI estéril modificada com Tween a 0,01% (v/v).

[0084] As plantas foram inoculadas por aspersão da suspensão conconal diretamente sobre spielets com uma escova de ar calibrada a 20 psi. Dez mL de suspensão conconal foram aplicados uniformemente através de cada plano de 18 potes. As plantas de controle receberam um tratamento de inoculação simulada de água DI estéril modificada com Tween a 0,01%. Logo antes da inoculação, potes de cada tratamento foram dispostos em um projeto de bloco completo randomizado com dezoito replicações por tratamento. As plantas foram colocadas em uma câmara de névoa a 90% de umidade relativa por 72h após a inoculação então movida para uma bancada de bancada. Em dez dias após a inoculação, a severidade da doença foi classificada para cada planta. A área total de cada cabeça com sintomas de doença visível foi classificada em escala de 0 a 100% e os valores de severidade individuais para cabeças dentro de um pote foram medidos em análise final.

[0085] O LS0089 demonstrou supressão de doença consistente com relação as plantas controle (GlyC), suprimindo a doença em quatro de seis experimentos (tabela 5). Tabela 5. Teste de Estufa para controle da Praga da Cabeça de Fusarium

Exemplo 4. Supressão de FHB no campo por Tratamento de semente PPFM

[0086] Um teste de campo para avaliar A supressão da Praga da Cabeça de Fusarium (FHB) por Tratamento de semente PPFM foi conduzido em Brooks, Sul Dakota na primavera de 2015. A seleção do cultivar de trigo de Primavera 2015. Foi usada para o teste e sementes foram semeadas na primeira semana de julho, com colheita em setembro tardio. Devido à data de plantio tardio deste experimento, os dados de rendimento não foram utilizáveis.

[0087] O teste foi disposto como um projeto de bloco completo randomizado (RBCD) com dez replicações. Cada bloco consistiu de quatro fileiras de 10 pés com 254 sementes por gráfico. O espaçamento de sementes em fileira foi de -8,5 cm (-8,5 polegadas) de distância com 2,11 sementes por polegada linear. Dois espaços de fileira em branco foram deixados entre os gráficos dentro de uma replicação e um espaço de gráfico em branco foi deixado entre replicações para fornecer separação entre tratamentos. Os dados de classificação de doença foram coletados apenas a partir das duas fileiras centrais dentro dos gráficos. Durante todo o experimento, os lotes foram mantidos usando práticas agronómicas padrão com a exceção de que nenhuma aplicação de fungicida foliar foi feita para o controle da doença.

[0088] Os PPFM foram aplicados à semente de trigo usando práticas de tratamento industrial padrão e foram plantadas em 24 horas de tratamento de semente. O tratamento de base consistiu em um fungicida de ginseng Rancona ® Para o controle da doença de muda (8,33 fl oz/cwt), inseticida de Gcho ® 480 (3,0 fl oz/cwt), e polímero de tratamento de semente padrão da indústria (1,0 fl oz/cwt; Flo Rite 1706 Plantabilidade polímero, BASF Corporation, North Carolina, USA) Os tratamentos PPFM concentrados foram fornecidos congelados em gelo seco e congelados imediatamente antes do uso no tratamento de sementes. As soluções PPFM foram aplicadas para atingir um alvo de 1, 0x106 CFUs de Bactérias PPFM/semente. Os tratamentos são listados na Tabela 6

[0089] As condições ambientais predominantes foram altamente favoráveis à doença, resultando em uma forte pressão FFIB natural. A inoculação Artificial na forma de conídio de Fusarium graminearum localmente originado foi aplicada à metade das replicações no experimento. O inoculo foi aplicado em uma concentração de lxl04 conídio/mL e 25 mL foram aplicados por plotagem. Os dados de doença para gráficos inoculados e naturalmente infectados não foram significativamente diferentes; assim, os pontos de dados foram agrupados para análise final. As classificações de doença foram tomadas aproximadamente um mês após a inoculação. As medidas coletadas foram a incidência percentual de FHB, determinada em um nível de plotagem por inspeção visual, e gravidade da doença, determinado pela classificação de uma amostra de 20 cabeçotes separados individuais coletados a partir do campo. Um índice de doença também foi calculado para cada gráfico usando A fórmula: [incidência X Severidade)/100]

[0090] Os dados de doença foram analisados usando-se o JMP (versão. 11) Pacote de software de descoberta estatística De SAS (SAS Institute, Research Triangle Park, North Os dados da Carolina) foram analisados usando-se um modelo misturado com o tratamento'e ' a inoculação'especificada como efeitos fixos e o bloco'' como um efeito aleatório. Após a determinação de que a "inoculação" não teve nenhum efeito significativo sobre os resultados da doença, este fator foi liberado do modelo. Um resumo dos resultados é fornecido na Tabela 7

Os asteriscos indicam significância estatística em relação ao tratamento de controle (tratamento De semente de Base sem PPFM) como segue: * P < 0,10, * * P < 0,05, * * * P < 0,01.

[0091] LS0089 reduziu significativamente a doença por todas as medidas, diminuindo o índice de doença em 24% em relação ao controle. A combinação de LS0017 e NLS0066 reduziu a doença por todas as métricas, desempenhado melhor para redução na incidência de doença de FHB, e realizado melhor do que qualquer esforço aplicado isoladamente. LS0017 sozinho também reduziu a doença por todas as métricas. NLS0020, que não mostrou supressão de FFIB em teste controle de ambiente foram incluídos como um controle negativo, e executados como esperado. Exemplo 5. Supressão da doença damping off de Rizoctonia

[0092] PPFMs foram testadas quanto à sua capacidade de suprimir a doença damping off de rizoctonia. Para estes ensaios, as cepas PPFM, um controle não tratado, e um controle positivo (Pseudomonas fluorescens) foram dispostos em três blocos em uma placa de 96 poços, crescidas por 24 horas a 30° C com agitação a 250 rpm, então armazenadas a - 80° C. as placas de estoque Congeladas foram usadas para iniciar novas culturas conforme necessário. Para o ensaio de damping off de Rizoctonia, as culturas iniciadas a partir de estoques a -80° C Foram crescidas para 5 dias em uma placa de 96 poços de 96 poços de 1 mL em sais minerais de amónio (AMS) meio contendo peptona, glutamale como a fonte de carbono, e um substrato sólido apropriado para promoção do Crescimento de Metilobachiano (pedido de Patente Internacional PCT/US 13/4372, depositado em 31 de Maio de 2013).

[0093] As condições de crescimento foram de 30° c com agitação em um agitador de plataforma a 250 rpm. Cinco centenas de uL de cultura PPFM de cada poço da placa de 96 poços foram pipetados para o interior um tubo de microcentrífuga de dois mL rotulado de forma correspondente e três sementes de ervilha (Pisum sativum L, cv. Encaixe de açúcar; sementes de Johnny, Maine, USA) foram colocados em cada tubo. Depois de ervilhas terem sido colocadas em um tubo, foi tampada e sacudida para revestir sementes com solução bacteriana. Após uma hora, sementes foram plantadas em meio de recheadura infestada por patógenos.

[0094] O inoculo de Rhizoctonia solani foi preparado por autoclavagem de uma mistura de farinha de milho amarela triturada e areia duas vezes, em seguida inoculação com tampões de agar excisados da borda de avanço de culturas fúngicas menores do que uma semana de idade. A mistura de farinha de milho-areia inoculada foi incubada por aproximadamente duas semanas em uma bancada de laboratório e sacudida a cada poucos dias para dispersar uniformemente o inoculo. Após duas semanas, o inoculo foi secado durante a noite em um alimento de segurança biológica estéril, então armazenado a 4° C até o uso. Uma pequena amostra de cada lote de inoculo foi plaqueada sobre agar de dextrose de batata no momento de colheita para verificar A colonização e para assegurar que os contaminantes não estavam presentes no inoculo. O inoculo foi incorporado no meio de recheadura logo antes do plantio em uma taxa final de 0,73 g de inoculo por copo e água deionizada foi adicionada ao meio de recheadura a uma taxa final de 6,25 mL por copo. Os meios de recheadura infestados por patógenos foram colocados 96 copos, um rotulado para cada poço na placa de cultura bacteriana de 96 cavidades, e as três sementes do tubo de tratamento de semente de poço correspondente foram plantadas em cada copo. Os copos foram então cobertos com uma tampa para criar um ambiente de alta umidade e colocados em uma câmara de crescimento com um comprimento de 14 horas e uma temperatura constante de 27° C. Os copos de sorvete Dixie gelo foram usados para este experimento porque o copo fechado impede o risco de contaminação cruzada entre os tratamentos) os copos vêm com tampas que podem ser usadas para aumentar a umidade e impedir a necessidade de rega durante o experimento.

[0095] As plantas foram classificadas quanto à severidade da doença em uma semana após Plantio/inoculação. As classificações incluíram o damping off de pré-emergência, o damping off pós-emergência, e a saúde da planta. O damping off de pré-emergência foi classificado por contagem do número total de sementes por pote que não germinaram; o damping off pós-emergência foi classificado por contagem do número de sementes por pote que foram mortas logo após a germinação; a saúde da planta foi classificada em escala de 0 a 5 como segue: 0 = planta morta; l = planta severamente atordotada/necrótica; 2 = classificação moderada a severa e necrose ; 3 = Atordotação moderada e/ou necrose; 4 = planta geralmente saudável com pequenas lesões ou leve retardo de crescimento; 5 = planta saudável. Para análise de dados, o número total de mudas com damping off e a saúde média da planta por valores de pot foi calculada através das três réplicas por tratamento. Estes valores foram comparados com o controle. As cepas para as quais [coeficiente médio de deformação-um erro padrão da média] não se sobrepõem com [média de controle não tratada + um erro padrão da média] foram consideradas para fornecer supressão de doença. Os dados de classificação de doença são resumidos na Tabela 8 e os dados de saúde da planta estão resumidos na Tabela 9. Tabela 8. Classificação de saúde da Planta Média de Rizoctonia

a Média calculada a partir da combinação de escores de saúde da planta de três potes replicados por tratamento com cada pote contendo três mudas. SEM calculada usando n = 3 para os três potes replicados. Tabela 9. Número médio de Rhizoctonia de Mudas Damped-Off

a Média calculada pela combinação de contagens de mudas de três vasos replicados por tratamento com cada pote contendo três mudas. SEM calculada usando n = 3 para os três potes replicados.

[0096] O amortecimento cumulativo de mudas e a saúde da planta foram medidos e analisados separadamente. As cepas NLS0017 e LS0089 suprimiram o amortecimento global da muda e aumentou a saúde geral da planta. Estas Methylobacterium spp. As cepas têm potencial para uso como sementes ou tratamentos em sulco para proteger contra doenças relacionadas à Rizoctonia. Exemplo 6. Supressão do mofo branco (Sclerotinia sclerotium) em soja por PPFMs

[0097] Duas soluções de estoque PPFM congeladas de duas mL em uma concentração de aproximadamente l x lO8 CFU/mL foram descongeladas até a temperatura ambiente diretamente antes do tratamento de semente. Estoques PPFM descongelados foram peletizados por centrifugação, lavados uma vez com água destilada estéril, em seguida resuspendida em um volume final de 20 mL de água destilada estéril. A solução de 20 mL foi colocada em um tubo cónico de 50 mL e 40 sementes de soja foram colocadas no tubo com a solução PPFM. O tubo foi colocado em seu lado e agitado a cada 10 minutos por um total de 30 minutos. Após o período de tratamento de 30 minutos, o líquido em excesso foi decantado e as sementes tratadas foram plantadas imediatamente.

[0098] Sementes foram plantadas em meios de acondicionamento, solo de campo, ou uma mistura de 50/50 de meio de recheadura e solo de campo, dependendo da experiência específica. Em todos os experimentos, os planos contendo 18 potes foram usados e os potes contendo os tratamentos individuais foram organizados em blocos completos randomizados ou no plantio ou logo antes da inoculação. Imediatamente após o plantio, os potes foram movidos para uma estufa (75-80° C); RH 40 - 90%; comprimento de 16h dias) e cresceu por um mês. As plantas foram regadas diariamente e receberam fertilizante suplementar duas vezes por semana.

[0099] As plantas de um mês de idade foram inoculadas com culturas de 5 - 7 dias de idade de Sclerotinia sclerotium cresceu em PDA de agar de dextrose de batata no escuro. Uma versão modificada da técnica de inoculação de petiole cortada foi usada (Hoffman et al. 2002. plant Dis. 86: 971-980) Em Resumo, o petíole do terceiro trifoliar foi cortado com tesoura a aproximadamente 2,54 cm (uma polegada) da haste. A extremidade ampla de uma ponta lOOOuL pipet foi usada para excisar um disco de ágar a partir da borda externa de uma Cultura de S. sclerorum. A ponta foi então colocada sobre o petiole cortado de modo que a extremidade ampla da ponta da pipeta estava em contato com a haste e a base petiole e a extremidade cortada do petiole estava em contato com o lado de micélio do tampão de ágar. Uma pequena peça de parafilme foi enrolada em torno da ponta e haste para impedir que A ponta caia. As plantas inoculadas foram incubadas na estufa durante 7-10 dias para permitir o desenvolvimento da doença antes da classificação.

[0100] O comprimento da lesão e a severidade de wilt foram coletados como métricas de doença. O comprimento das lesões marrom ou branqueada foi medido usando uma régua. A severidade de Wilt foi classificada em escala de 0 a 5 com 0 indicando uma planta completamente a saúde e 5 indicando uma planta morta. O experimento foi conduzido como um projeto de bloco completo randomizado com nove blocos por repetição experimental e o experimento foi repetido três vezes, para um tamanho de amostra de 27 unidades experimentais para cada grupo de tratamento. Os dados foram analisados usando-se análise de modelos mistos em JMP Vl 1.2 (SAS Institute; Cary, NC) Wilt E dados de comprimento de lesão foram analisados separadamente. Em cada caso, a repetição foi incluída como um efeito aleatório e tratamento como um efeito fixo. Os critérios de ajuste de modelo determinaram que os blocos dentro de repetições não contribuíram significativamente e este fator foi deixado a partir da análise final.

[0101] Através de todas as três repetições do experimento, o tratamento com LS0089 reduziu significativamente tanto a wilt (FlgG2) quanto o comprimento da lesão (Figure 3) relação ao grupo de controle não tratado (teste t independente de Duas amostras; R30% comparado com o grupo de controle e menor comprimento de lesão em relação ao grupo de controle em > 40%

[0102] Das cinco cepas testadas neste experimento, somente NLS0089 reduziu significativamente ambos os indicadores de severidade do mofo branco em relação ao grupo de controle. Esta cepa tem o potencial de fornecer supressão da doença sob condições agronómicas e poderia fornecer um complemento valioso para práticas de gerenciamento de doenças de mofo branco correntes. Exemplo 7. Supressão de Síndrome de Morte Súbita de Soja por PPFMs

[0103] Soluções de estoque PPFM congeladas em uma concentração de aproximadamente l x l08 CFU/mL foram descongeladas até a temperatura ambiente diretamente antes do tratamento de semente. Bateladas de 200 sementes foram tratadas em um tratador de semente em escala de laboratório com luL/semente de concentrado de PPFM e 0, 89uL/semente de solução de polímero diluído (FR1706, Becker subwood; 6, 1 mL de polímero diluído em 40 mL de água deionizada) Após o tratamento, as sementes foram deixadas secar durante a noite e foram usadas dentro de uma semana de tratamento. Para avaliar a colonização e viabilidade PPFM, alíquotas de dez sementes foram turbilhonadas por 10 segundos em lOmL de 0,9% estéril solução salina e lOOuL da solução de lavagem resultante foram plaqueadas em Placas de ágar específicas de PPFM. As sementes de controle foram tratadas com soluções de estoque de meio de crescimento PPFM/solução de polímero. O tratador foi completamente limpo com 70% de etanol entre cada tratamento para impedir a contaminação cruzada.

[0104] Os isolados de Fusarium virguliforme foram obtidos da coleção de cultura USDA-ARS NRRL. As culturas foram mantidas em temperatura ambiente em PDA e ágar de suco V8 clarificado. Os isolados foram também armazenados em glicerol a -80° C e foram re-isolados de plantas a cada poucos meses para assegurar agressividade continuada. O inoculo foi preparado por embebimento de grão de sorgo durante a noite em água de torneira em um frasco Erlenmeyer de 500 mL com uma tampa ventilada, drenar toda a água no dia seguinte, e autoclavar em um ciclo líquido de uma hora por dois dias consecutivos. O dia após autoclavagem foi completado, o grão de sorgo estéril foi inoculado com seis tampões de ágar excisados de uma cultura de 2-4 semanas de idade de Fusarium Virguliforme. Os frascos inoculados foram incubados em uma bancada de laboratório por aproximadamente duas semanas e agitados a cada poucos dias para dispersar uniformemente o inoculo. Após duas semanas, os grãos colonizados foram plaqueados no PDA Para verificar para contaminação e o inoculo foi movido para 4° C até o uso. O inoculo foi descartado e não mais usado para ensaios de triagem após um mês no armazenamento.

[0105] A inoculação ocorreu no momento do plantio. Os potes foram enchidos meia-cheio com a mistura 50 : 50 de sokareia de campo não-estéril e os tratamentos foram dispostos em um bloco randomizado completo com ambos os potes inoculados e não-inoculados para cada tratamento PPFM dentro de cada bloco. Os potes inoculados receberam 5 g de inoculo de grão de sorgo, que foi incorporado na mistura de solo antes da adição de sementes. Duas sementes foram plantadas em cada pote e então cobertas com aproximadamente dois centímetros de areia: mistura de sujeira. Para as primeiras duas semanas após o plantio, os experimentos foram mantidos em uma câmara de crescimento a 20° C e regados diariamente para fornecer condições que conduzem a SDS. Após duas semanas, as experiências foram transferidas para uma estufa em torno de 23-27° C e incubadas por mais duas semanas para permitir o desenvolvimento de sintomas de SDS acima mencionados.

[0106] Classificações de severidade de doença de SDS e medições de biomassa de plantas foram tomadas um mês após o plantio e inoculação. As medições da severidade da doença supra-tratada foram classificadas em escala de 0 a 5 com 0 indicando uma planta completamente para a saúde e 5 indicando uma planta morta. Após a classificação, as plantas foram colhidas e as raízes foram lavadas para remover sujeira aderente antes da secagem. As biotrincas de raiz seca e de broto foram tomadas individualmente para permitir entre as comparações de tratamento para cada parte de planta Dados brutos e dados sobre o tamanho do efeito, a diferença entre as plantas inoculadas e não inoculadas para cada tratamento, foram analisadas com Excel e JMP Versão 11.2 (SAS Institute, Cary, NC).

[0107] As cepas PPFM foram testadas em grupos ao longo de um controle tratado com parélio, que foi incluído em todos os grupos de teste. Devido às diferenças entre experimentos, os dados para diferentes grupos de teste são mostrados separadamente. Em um grupo de teste, LS0066 reduziu fortemente o tamanho de Efeito da métrica de doença relacionada a SDS, particularmente biomassa de raiz, indicando que estas cepas restringem o desenvolvimento de sintomas de doença e plantas protegidas contra diminuições de crescimento causadas por infecção SDS (Tabelas 10-12) O tamanho de efeito foi calculado como a diferença entre as plantas inoculadas e não inoculadas para um dado tratamento. Na ausência de pressão do patógeno, o LS0066 não teve nenhum efeito sobre o crescimento da planta. Tabela 10. Efeito do tamanho dos tratamentos PPFM Sobre SDS Severity3

a Gravidade foi avaliada em uma escala de 0-5 com 0 indicando uma planta totalmente saudável e 5 uma planta morta. Tamanho da amostra de n = 54 por tratamento. b valor menos negativo para o tamanho do efeito indica um pequeno aumento na gravidade dos sintomas com a inoculação de patógenos. Tabela 11: Efeito do Tamanho dos tratamentos PPFM sobre o peso de Raiz de plantas inoculadas com SDS

a pesos da raiz em unidades de mg. Tamanho da amostra de n = 54 por tratamento. b tamanho de efeito menor indica um efeito reduzido da inoculação de patógenos. Tabela 12: Efeito do Tamanho dos tratamentos PPFM Sobre A pesagem de Broto T3 de Plantas inoculadas com SDS

a pesos de Broto dado em unidades de mg. Tamanho de amostra de n = 54 por tratamento. b tamanho de efeito menor indica um efeito reduzido de inoculação de patógenos.

[0108] O tratamento de semente de soja com Cepa NLS0066 LS de LS Resultou Em Fortes efeitos no desenvolvimento de doença causada pelo Patógeno SDS F virguliforme sob condições de estufa. Estas cepas oferecem potencial como agentes de controle biológico que poderiam ser usados isoladamente ou em combinação com outras cepas e/ou estratégias de mitigação de doenças para fornecer administração eficaz e sustentável de SDS. Exemplo 8. Ensaios de Campo de Milho e Soja do verão de 2015

[0109] No verão de 2015, testes de campo para avaliar a supressão da doença em milho e soja por PPFMs foram realizados em dois locais independentes: Bethel, Missori e Troy, Ohio. Ambos os locais de teste foram gerenciados por organizações de pesquisa de contrato. O pessoal simbiótico de nova folha visitou cada local pelo menos duas vezes para assegurar a correta implementação de teste. As mesmas cepas e taxas de aplicação foram testadas em ambos os locais. Os testes foram dispostos como um gráfico dividido em um projeto de bloco RCBD (randomizado completo)) com seis replicações no local Bethel E quatro replicações no local Troy. Os tratamentos para o milho são descritos na Tabela 13 e os tratamentos para a soja são descritos na Tabela 14. Tratamentos Em sulco foram aplicados uma taxa de 1.250 mL de concentrado PPFM 10X por acre E tratamentos foliares foram aplicados em uma taxa de 5.000 mL de concentrado PPFM 10X por acre. O projeto de gráfico dividido permitiu a avaliação do tratamento em sulco, tratamento foliar, resposta aos tratamentos PPFM Sequenciais, e interações entre PPFMs diferentes. Tabela 13: Tratamentos de Teste de Campo de Milho da Patologia de 2015

Tabela 14. Tratamentos de Teste de Campo de Soja Patologia 2015 Numero do

[0110] Em cada local, o espaçamento de fileira convencional foi usado e práticas agronómicas padrão foram seguidas. Híbridos de milho e soja com genética similar, mas adequados para os locais de teste específicos foram fornecidos para cada local. Os tamanhos de Sub-plotagem não foram menores do que quatro fileiras de 20 '. Uma borda de cinco pés foi deixada entre sub-gráficos para mitigar os efeitos vizinhos. Adicionalmente, observações foram tomadas a partir de somente as duas fileiras centrais de cada gráfico. Os gráficos inteiros consistiram nos quatro sub- gráficos mais cinco bordas de pés entre os gráficos. As localizações de teste foram selecionadas em áreas com pressão de doença natural e nenhuma inoculação artificial foi feita. Como resultado, as mesmas doenças não foram avaliadas em cada local. As doenças classificadas em milho foram antracinariz (Colltotrichum gramincola), mancha de folha cinza (Cercospora Zeae-maydis), e doenças de ferrugem comuns (Puccinia sori) classificadas em soja foram manchas marrom {Septoria glycines) e outras doenças foliares. Para cada doença presente, as classificações de incidência e/ou severidade foram coletadas e analisadas para determinar os efeitos de tratamento.

[0111] As classificações de doença e resultados de análise estatística são reportadas nas Tabelas 3-5. Devido às diferentes classificações de doença e número de replicação em cada local, os dados dos dois locais de teste foram analisados separadamente. Análises de dados foram realizadas usando-se SAS JMP Software vl 1.2 (SAS Institute, Cary, NC) Os Dados foram analisados de acordo com as diretrizes de JMP para análise de plotagem dividida dentro da função do Modelo de Ajuste ', que utiliza a técnica de REML para modelos mistos. Os testes post hoc de Student T e Tukey 's HSD-hoc foram aplicados para determinar as diferenças entre os grupos de tratamento (a = 0,05) contrastes foram usados para fazer comparações entre grupos específicos de interesse. Tabela 15. Doença Foliar de Soja-Bethel, missori

T Tratamento significativamente diferente do controle (Parélio, parélio) Pelo teste T do Estudante (A = 0,05) H tratamento significativamente diferente do controle (Parélio, parélio) por Tukey 's HSD (A = 0,05) Tabela 16. Doença Foliar de Milho-Bethel, missori

T Tratamento significativamente diferente do controle por Teste T de Student (a = 0,05) H tratamento significativamente diferente do controle por HSD de Tukey (A = 0,05) Tabela 17. Doença Foliar De milho-Troy, Ohio

a média através de todos os tratamentos de partos de partas foi significativamente diferente da média através de todos os tratamentos LS0020 em Sulcos em contraste (a = 0,05) O Tratamento foi significativamente diferente do controle (Parélio, parélio) por contraste (a = 0,10)

[0112] Todos os tratamentos aplicados a soja demonstraram supressão da doença contra o ponto marrom {Septoria glycines) e outras doenças do ponto de folha foliar. A aplicação Foliar do NLS0020 Sem tratamento no sulco resultou na classificação mais baixa para todas as doenças e era o tratamento mais eficaz para a supressão da doença em relação ao controle. A aplicação Foliar de LS0020 Seguindo- Se ao tratamento com-rego LS0089 também demonstrou supressão de doença através de todos os tratamentos. Tratamento em sulco com LS0089 sozinho reduziu significativamente todas as doenças e teve um efeito particularmente forte contra doenças de mancha de folha foliar.

[0113] No milho no Bethel, Missouri local, aplicação em sulcos de LS0020 melhorou a supressão de doença provida por Aplicações foliares LS0066 em todos os exemplos. Isto demonstra eficácia aumentada através de múltiplas aplicações destas cepas PPFM específicas. Nenhuma aplicação de NLS0020, incluindo um sulco seguido por foliar, forneceu supressão de mais de uma doença.

[0114] Na localização de Troy, Ohio, a aplicação em sulco de NLS0020 sozinha suprimiu tanto a severidade quanto a incidência de infusão de ponta, que pode ser indicativo de um efeito sobre a doença e os estressores abióticos. Adicionalmente, todas as aplicações de comissura NLS0020 Combinadas suprimiram as métricas de dieta de ponta em relação a todos os tratamentos simulados em sulco combinados, indicando um efeito positivo total do tratamento NLS0020 no sulco. Exemplo 9. Identificação de polimorfismos de ácido nucleico presentes em Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas.

[0115] Bibliotecas de sequenciamento de genoma inteiro para a plataforma de sequenciamento de alto rendimento de Iluminan ™ são geradas para A Methylobacterium sp. Os isolados fornecidos na Tabela 1 utilizando os kits de preparação de amostra de DNA Iluminado TRUID ® Ou NEXTERA ™ (descrito nos sítios da internet Rel.ilumina.com/documentos/produtos/datasheets/datasheet_tr usq_adn_samplej3rep_kits. Pdf e Res ilumina. Com/documentos/produtos/datasheets/ datashee t_nexptera_adad_amostra_prep. Pdf) utilizando os métodos descritos pelo fabricante. As bibliotecas resultantes são então submetidas a um pirosequenciamento (Siqueira JF e outros J Oral Microbiol. 2012; 4:10. 3402 /Jom.v4i0.10743)

[0116] Os dados de sequência genômica gerados por pirosequenciamento brutos são submetidos a um corte com base em adaptador e qualidade para controle de qualidade. Pistola Shotpistola de genoma inteiro do Conjunto de sequência (1) é obtido montando-se os dados que passaram por qualidade usando-se o novo montador Velvet (2). Para descoberta e anotação de genes, dados de treinamento de referência são alavancados a partir de TIGRFAM (9), Pfam, COG (10), e Unrefloo (11). Os rRNAs são identificados com Rnese (5), genes que codificam proteína são identificados com Glimmer (3) ou Preparador (6), e tRNAs são identificados com tRNAscan-SE (4). As funções do Gene são designadas com blastx (7), blastp (7), FDVIMER (8), e Interprovarredura contra bases de dados de proteína compreensivas descritas acima (dados De Referência)

[0117] Detecção de polimorfismos (SNP ou outras variações de DNA que ocorrem como resultado de inserções, eliminações e substituições (indls)) na Methylobacterium sp. Os isolados da Tabela 1 são realizados com BWA (12) e o conjunto de cartão-ferramentas (na internet em sample s.sourceforge.net /), a variação estrutural é identificada com o Limite de Ruptura (na internet na ruptura de gudancer.sourceforge.net /) E CoGE (na internet) Genmevolu.org/CoGe /) polimorfismos diagnósticos Para Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas são identificados por comparações das sequências de do isolado de Methylobacterium NLS0066 que inibe fungos patogênicos de planta, mas que estão ausentes de um ou mais Isolados de Methylobacterium NLS0020 E/ou NLS0037 que não inibem Infecções por Fusarium graminearum de plantas. Polimorfismos presentes mMethylobacterium isolam NLS0066 que inibem fungos patogênicos de plantas, mas que estão ausentes nos isolados de Methylobacterium LS0020 E/ou LS0037 que não inibem o papel de Fusarium são então usados para identificar outros isolados de Methylobacterium que inibem fungos patogênicos de plantas. Referências para o Exemplo 9 1. 1. Miller JR, Koren S, Sutton G (2010) Assembly algorithms for next-generation sequencing data. Genomics 95: 315-327. 2. Zerbino DR, Birney E (2008) Velvet: algorithms for de novo short read assembly using de Bruijn graphs. Genome Res 18: 821-829. 3. Delcher AL, Bratke KA, Powers EC, Salzberg SL (2007) Identifying bacterial genes and endosymbiont DNA with Glimmer. Bioinformatics 23: 673-679. 4. Lowe TM, Eddy SR (1997) tRNAscan-SE: a program for improved detection of transfer RNA genes in genomic sequence. Nucleic Acids Res 25: 955-964. 5. Lagesen K, Hallin P, Rodland EA, Staerfeldt HH, Rognes T, et al. (2007) RNAmmer: consistent and rapid annotation of ribosomal RNA genes. Nucleic Acids Res 35: 3100-3108. 6. Cantarel B, Korf I, Robb S, et al. (2008) MAKER: An easy- to-use annotation pipeline designed for emerging model organism genomes. Genome Research 18: 188-196. 7. Altschul SF, Madden TL, Schaffer AA, Zhang J, Zhang Z, et al. (1997) Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Res 25: 33893402. 8. Eddy SR (2009) A new generation of homology search tools based on probabilistic inference. Genome Inform 23: 205-211. 9. Haft DH, Selengut JD, White O (2003) The TIGRFAMs database of protein families. Nucleic Acids Res 31: 371-373. 10. Tatusov RL, Fedorova ND, Jackson JD, Jacobs AR, Kiryutin B, et al. (2003) The COG database: an updated version includes eukaryotes. BMC Bioinformatics 4: 41. 11. Suzek BE, Huang H, McGarvey P, Mazumder R, Wu CH (2007) UniRef: comprehensive and non-redundant UniProt reference clusters. Bioinformatics 23: 1282-1288. 12. Li H. and Durbin R. (2009) Fast and accurate short read alignment with Burrows-Wheeler Transform. Bioinformatics, 25:1754-60. Exemplo 10. Identificação de Genes Ortólogos presentes em Methylobacterium sp. que pode inibir fungos patogênicos de plantas

[0118] As cepas PPFM listadas na Tabela 1 (NLS066, NLS0020, NLS0037) e/ou outras cepas PPFM que não inibem fungos patogênicos de plantas podem ser crescidas sobre meios de ágar sólido compreendendo Sais minerais De Amónio (AMS) mais glicerol e peptona a 30° C por 5 dias, essencialmente como descrito na Publicação de Pedido de Patente US co-cedido N ° 20130324407 e incorporada aqui por referência em sua totalidade. O DNA genômico pode ser extraído usando-se o kit de isolamento de DNA Microbiano MO-BIO (Carlsbad, CA), e 1 μg de DNA de alta qualidade pode ser usado para a Preparação de biblioteca Mexptera ™ XT seguido por um sequenciamento de extremidade pareada de 2 x 100 Em um sistema HiSeq2000™. Os dados de sequência genômica Colorida-prima podem ser submetidos a um corte com base em adaptador e qualidade para controle de qualidade. O conjunto de sequência Shotarma de Genoma Inteiro pode ser obtido montando-se os dados que passaram por qualidade usando-se o desmontador SPARDES (33). Para descoberta e anotação de genes, os dados de treinamento de referência podem ser alavancados a partir de TIGRFAM (9), Pfam, COG (10), e unrefloo (11). Os rRNAs podem ser identificados com Rnmer (5), genes que codificam proteína podem ser Identificados com Glimmer (3) e tRNAs podem ser identificados com tRNAscan-SE (4) as funções de Gene podem ser designadas com blastx (7), blastp (7), HMMER (8), e InterProScan contra bases de dados de proteína compreensivas descritas acima (dados de referência) Detecção de polimorfismos (SNP ou outras variações de DNA que ocorrem como resultado de inserções, eliminações e substituições (indls)) na Methylobacterium sp. Os isolados podem ser realizados com BWA (12) e o conjunto de cartão-ferramentas (na internet em sample s.sourceforge.net /) e o Kit de Ferramentas de Análise de Genoma (GAK, no world wide web internet site " broadinstitute.org/gatk/"), a variação estrutural pode ser identificada com o Limite de Ruptura (na internet na ruptura da ruptura) Net /) e Coge (na internet em genmevolu.org/Coge /) tais métodos para analisar Methylobacterium sp. Os genomas de isolados que melhoram a produção de tomate são descritos no Pedido de Patente Internacional PCT/US2014/68611, o qual é incorporado aqui por referência em sua totalidade.

[0119] Genes que codificam quadros de leitura abertos podem ser previstos a partir das sequências genômicas inteiras montadas de NLS0020, NLS0037 e NLS066 Essencialmente como descrito acima. Dentro e entre os genes ortólogos do genoma pode ser agrupado utilizando Oromcl (disponível no world wide web internet site " ortho.org/orocl/") anotações funcionais Putativas podem ser designadas para produtos de gene usando BLASTP (disponível no sítio da internet " blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.cgi ") contra o banco de dados UniProt (disponível no world wide web internet site "uniprot.org /") Genes presentes em genomas individuais do NLS0066 (como mostrado no Exemplo1) ou outro isolado que poderia inibir fungos patogênicos de plantas, mas que estão ausentes no genoma de NLS0037 e/ou LS0020 (como mostrado no Exemplo1) ou outro isolado que não inibe fungos patogênicos de plantas pode ser identificado em clusters de Ortólogos usando software personalizado. Referências para o Exemplo 10 1. Miller JR, Koren S, Sutton G (2010) Assembly algorithms for next-generation sequencing data. Genomics 95: 315-327. 2. Zerbino DR, Birney E (2008) Velvet: algorithms for de novo short read assembly using de Bruijn graphs. Genome Res 18: 821-829. 3. Delcher AL, Bratke KA, Powers EC, Salzberg SL (2007) Identifying bacterial genes and endosymbiont DNA with Glimmer. Bioinformatics 23: 673-679. 4. Lowe TM, Eddy SR (1997) tRNAscan-SE: a program for improved detection of transfer RNA genes in genomic sequence. Nucleic Acids Res 25: 955-964. 5. Lagesen K, Hallin P, Rodland EA, Staerfeldt HH, Rognes T, et al. (2007) RNAmmer: consistent and rapid annotation of ribosomal RNA genes. Nucleic Acids Res 35: 3100-3108. 6. Cantarel B, Korf I, Robb S, et al. (2008) MAKER: An easy-to-use annotation pipeline designed for emerging model organism genomes. Genome Research 18: 188-196. 7. Altschul SF, Madden TL, Schaffer AA, Zhang J, Zhang Z, et al. (1997) Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Res 25: 3389-3402. 8. Eddy SR (2009) A new generation of homology search tools based on probabilistic inference. Genome Inform 23: 205-211. 9. Haft DH, Selengut JD, White O (2003) The TIGRFAMs database of protein families. Nucleic Acids Res 31: 371-373. 10. Tatusov RL, Fedorova ND, Jackson JD, Jacobs AR, Kiryutin B, et al. (2003) The COG database: an updated version includes eukaryotes. BMC Bioinformatics 4: 41. 11. Suzek BE, Huang H, McGarvey P, Mazumder R, Wu CH (2007) UniRef: comprehensive and non-redundant UniProt reference clusters. Bioinformatics 23: 1282-1288. 12. Li H. and Durbin R. (2009) Fast and accurate short read alignment with Burrows-Wheeler Transform. Bioinformatics, 25:1754-60. REFERÊNCIAS Abanda-Nkpwatt, D., M. Musch, J. Tschiersch, M. Boettner, and W. Schwab. 2006. Molecular interaction between Methylobacterium extorquens and seedlings: growth promotion, methanol consumption, and localization of the methanol emission site. J. Exp. Bot. 57: 4025-4032. Broekaert WF, Terras FR, Cammue BP, Vanderleyden J (1990) An automated quantitative assay for fungal growth inhibition. FEMS Microbiology Letters 69: 55-60 Cappellini RA, Peterson JL (1965) Macroconidium formation in submerged cultures by a non-sporulating strain of Gibberella zeae. Mycologia 57: 962-966. Cao, Y-R, Wang, Q., Jin, R-X., Tang, S-K., He, W-X., Lai, H-X, Xu, L-H., and C-L Jiang. 2011. Methylobacterium soli sp. nov. a methanol-utilizing bacterium isolated from the forest soil. Antonie van Leeuwenhoek (2011) 99:629-634. Cappellini RA, Peterson JL (1965) Macroconidium formation in submerged cultures by a non-sporulating strain of Gibberella zeae. Mycologia 57: 962-966 Corpe, W.A., and D.V. Basile. 1982. Methanol-utilizing bacteria associated with green plants. Devel. Industr. Microbiol. 23: 483-493. Corpe, W.A., and S. Rheem. 1989. Ecology of the methylotrophic bacteria on living leaf surfaces. FEMS Microbiol. Ecol. 62: 243-250. Correll JC, Klittich CJR, Leslie JF (1987) Nitrate nonutilizing mutants of Fusarium graminearum and their use in vegetative compatibility tests. Phytopathology 77: 16401646. Green, P.N. 2005. Methylobacterium. In Brenner, D.J., N.R. Krieg, and J.T. Staley (eds.). “Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology. Volume two, The Proteobacteria. Part C, The alpha-, beta-, delta-, and epsilonproteobacteria.“ Second edition. Springer, New York. Pages 567-571. Green, P.N. 2006. Methylobacterium. In Dworkin, M., S. Falkow, E. Rosenberg, K.-H. Schleifer, and E. Stackebrandt (eds.). “The Prokaryotes. A Handbook on the Biology of Bacteria. Volume 5. Proteobacteria: Alpha and Beta Subclasses.“ Third edition. Springer, New York. Pages 257-265. Holland, M.A. 1997. Methylobacterium and plants. Recent. Res. Devel. in Plant Physiol. 1: 207-213. Holland, M.A., and J.C. Polacco. 1994. PPFMs and other covert contaminants: Is there more to plant physiology than just plant? Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 45: 197-209. Kutschera, U. 2007. Plant-associated methylobacteria as co-evolved phytosymbionts. A hypothesis. Plant Signal Behav. 2: 74-78. Lidstrom, M.E.. 2006. Aerobic methylotrophic prokaryotes. In Dworkin, M., S. Falkow, E. Rosenberg, K.- H. Schleifer, and E. Stackebrandt (eds.). “The Prokaryotes. A Handbook on the Biology of Bacteria. Volume 2. Ecophysiology and biochemistry.“ Third edition. Springer, New York. Pages 618-634. Madhaiyan, M., S. Poonguzhali, H.S. Lee, K. Hari, S.P. Sundaram, and T.M. Sa. 2005. Pink-pigmented facultative methylotrophic bacteria accelerate germination, growth and yield of sugarcane clone Co86032 (Saccharum officinarum L.) Biol. Fertil. Soils 41: 350-358. Madhaiyan, M., S. Poonguzhali, M. Senthilkumar, S. Seshadri, H. Chung, J. Yang, S. Sundaram, and T. Sa. 2004. Growth promotion and induction of systemic resistance in rice cultivar C0-47 (Oryza sativa L.) by Methylobacterium spp. Bot. Bull. Acad. Sin. 45: 315-324. Madhaiyan, M., S. Poonguzhali , and T. Sa. 2007. Influence of plant species and environmental conditions on epiphytic and endophytic pink-pigmented facultative methylotrophic bacterial populations associated with field- grown rice cultivars. J Microbiol Biotechnol. 2007 Oct;17(10):1645-54. Ringler, G.A. 1995. Reaction of soybean to inoculation with Fuusarium solani. MS thesis. Univ. of Illinois, Urbana- Champaign. Roy, K.W., J.C. Rupe, D.E. Hershman, and T.S. Abney. 19997. Sudden death syndrome of soybean, Plant Dis. 81:11001111. Rupe, J.C, E.E. Gbur, and D.M. Marx. 1991. Cultivar responses to sudden death syndrome of soybean. Plant Dis. 75:47-50. Spelbrink RG, Dilmac N, Allen A, Smith TJ, Shah DM, et al. (2004) Differential antifungal and calcium channelblocking activity among structurally related plant defensins. Plant Physiol 135: 2055-2067. Stanier, R.Y., N.J. Palleroni, and M. Doudoroff. 1966. The aerobic pseudomonads: A taxonomic study. J. Gen. Microbiol. 43: 159-271. Sy, A., Giraud, E., Jourand, P., Garcia, N., Willems, A., De Lajudie,P., Prin, Y., Neyra, M., Gillis, M., Boivin- Masson,C., and Dreyfus, B. 2001. Methylotrophic Methylobacterium Bacteria Nodulate and Fix Nitrogen in Symbiosis with Legumes. Jour. Bacteriol. 183(1):214-220, Sy, A., A.C.J. Timmers, C. Knief, and J.A. Vorholt. 2005. Methylotrophic metabolism is advantageous for Methylobacterium extorquens during colonization of Medicago truncatula under competitive conditions. Appl. Environ. Microbiol. 71: 7245-7252. Vogel, H.J., and D.M. Bonner. 1956. Acetylornithinase of Escherichia coli: Partial purification and some properties. J. Biol. Chem. 218: 97-106. Vogel, H. J. 1956. A convenient growth medium for Neurospora (Medium N). Microbial Genet Bull 13: 42-43 Whittenbury, R., S.L. Davies, and J.F. Wilkinson. 1970. Enrichment, isolation and some properties of methane- utilizing bacteria. J. Gen. Microbiol. 61: 205-218. Wrather, J.A. 2010. Soybean disease loss estimates for the United States 1996-2010. Missouri Agric. Res. Sta., Delta Research Center. http://aes.missouri.edu/delta/research/soyloss.htm

[0120] A inclusão de várias referências aqui não deve ser interpretada como qualquer admissão pelo Requerente que as referências constituem o estado da técnica. Os requerentes esperam expressamente a sua direita para desafiar quaisquer alegações de não-patentabilidade das invenções aqui descritas sobre as referências aqui incluídas.

[0121] Tendo ilustrado e descrito os princípios da presente descrição, deve ficar aparente aos versados na técnica que a descrição pode ser modificada em arranjo e detalhe sem se afastar de tais princípios.

[0122] Embora os materiais e métodos desta descrição tenham sido descritos em termos de várias concretizações e exemplos ilustrativos, será evidente para aqueles versados na técnica que variações podem ser aplicadas aos materiais e métodos descritos aqui sem se afastar do conceito, espírito e escopo da descrição. Todos tais substitutos e modificações similares evidentes para os técnicos versados no assunto são julgados como estando dentro do espírito, escopo e conceito da descrição conforme definido pelas reivindicações anexas ou de outra forma aqui revelados.

Claims

1. Método para produzir uma composição para uso na inibição do crescimento de um fungo patogênico na planta em uma planta de colheita caracterizado pelo fato de que compreende a combinação de uma Methylobacterium NLS0089 (NRRL B-50933) com um excipiente aceitável em agricultura e / ou com um adjuvante aceitável em agricultura.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: a composição ainda compreende Methylobacterium NLS0020 (NRRL B-50930).

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o fungo patogênico é um Alternaria sp., um Ascochyta sp., um Aspergillus sp., um Bipolaris sp., um Botrytis sp., um Bremia sp., um Cercospora sp., um Cochliobolus sp., um Colletotrichum sp., um Diplodia sp., um Erysiphe sp., um Exserohilum sp., um Fusarium sp., Gaeumanomyces sp., Macrophomina sp., um Magnaporthe sp., um Nectria sp., um Peronospora sp., um Phakopsora sp., um Phialophora sp., um Phoma sp., um Phymatotrichum sp., um Phytophthora sp., um Plasmopara sp., um Puccinia sp., um Podosphaera sp., um Pyrenophora sp., um Pyricularia sp, um Pythium sp., um Rhizoctonia sp., um Sclerotium sp., um Sclerotinia sp., um Septoria sp., um Stagonospora sp., um Thielaviopsis sp., um Uncinula sp, um Ustilago sp., um Venturia sp., ou um Verticillium sp.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o fungo patogênico é um Fusarium sp., um Rhizoctonia sp, um Sclerotinia sp, um Septoria sp.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o referido método compreende ainda a introdução de uma população de um ou mais microorganismos benéficos para as plantas, além de Methylobacterium, na composição.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o referido método compreende ainda a introdução de um pesticida na composição.

7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o referido pesticida é selecionado do grupo que consiste em um inseticida, fungicida, nematocida e bacteriocida.

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a referida Methylobacterium está em um título superior a cerca de 5 x 107 UFC por mililitro ou 5 x 107 UFC por gm.

9. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o fungo patogênico de plantas é Fusarium graminearum, Rhizoctonia solani, Sclerotinia sclerotiorum ou Septoria glycines.

10. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a planta cultivada é soja e o fungo patogênico da planta causa uma doença selecionada dentre: mofo branco ou podridão do caule esclerotinia, síndrome da morte súbita, podridão da semente, raiz, vagem ou colarinho de Fusarium, mancha da folha olho de rã, mancha marrom, ferrugem da folha de Cercospora, ou Rhizoctonia amortecimento ou podridão radicular.

11. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a planta cultivada é trigo e o fungo patogênico da planta causa a ferrugem da cabeça de Fusarium.

12. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a planta de colheita é milho e a doença é mancha cinza das folhas, queima das folhas da antracnose ou podridão dos caules ou mancha cinza das folhas, ferrugem comum, raiz de Fusarium ou podridão dos caules.

13. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a planta de colheita é soja e a doença é podridão branca de mofo ou caule de Sclerotinia, síndrome da morte súbita, semente de Fusarium, podridão de raiz, vagem ou coleira, mancha de folha de frogeye, mancha marrom, queima de folhas de Cercospora Rizoctonia amortecendo ou podridão radicular.

14. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a planta da colheita é trigo e a doença é a queima da cabeça de Fusarium.