BR112022014243B1

BR112022014243B1 - Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas

Info

Publication number: BR112022014243B1
Application number: BR112022014243-9A
Authority: BR
Inventors: Qiming He; Shaojun ZHAN; Jin Huang; Yuzhu Li; Chuting DU; Ke Liu; Huihui WANG; Huilin Li; Yanling Wang; Dan Wu; Dan Huang; Liangzhu KANG; Linfeng HANG; Hao Yin
Original assignee: Chengdu Newsun Crop Science Co., Ltd
Priority date: 2020-01-20
Filing date: 2020-12-25
Publication date: 2023-03-14
Also published as: US20230064585A1; US11732056B2; WO2021147609A1; BR112022014243A2

Abstract

APLICAÇÃO DE UM EXTRATO POLISSACARÍDICO DE PÓLEN PARA PROMOVER O CRESCIMENTO DE PLANTAS. A invenção refere-se a um líquido de extração de polissacarídeo de pólen. O líquido de extração é preparado por meio do uso do método a seguir: misturar o pólen de colza e água, aquecer e agitar os mesmos para extração; filtrar a mistura; combinar um filtrado; adicionar quitosana ao filtrado para obter um líquido a ser clarificado; manter o líquido a ser clarificado durante pelo menos uma hora a 60-80°C; e depois esfriar o mesmo e deixar o mesmo repousar, realizar a separação sólido-líquido, em que o líquido obtido é o líquido de extração de polissacarídeo de pólen. O líquido de extração de polissacarídeo de pólen pode ser usado na agricultura e pode ser usado especificamente para promover o crescimento de raízes de plantas, para promover o crescimento de plantas e na resistência ao estresse das plantas.

Description

Campo da Invenção

[0001] A invenção refere-se a um extrato polissacarídico de pólen e aplicação do mesmo no crescimento de plantas, e pertence ao campo técnico da agricultura.

Antecedentes da Invenção

[0002] Na produção agrícola, algumas vezes é necessário usar promotores de crescimento para promover o crescimento das plantas, incluindo promover o crescimento das raízes das plantas e o crescimento dos caules e folhas que estão acima do solo. Atualmente, o brassinolídeo (BR) é amplamente usado no mercado como um promotor de crescimento seguro. O brassinolídeo natural é, em geral, obtido a partir do pólen de colza por meio de extração alcoólica, mas sua taxa de extração não é alta, resultando em alto preço do brassinolídeo. Cerca de 40 substâncias de brassinolídeos foram descobertas, das quais apenas quatro ou cinco têm alta bioatividade e valor prático. Embora a síntese artificial tenha sido alcançada, o custo da síntese também é alto.

[0003] A empresa estudou processos de extração de brassinolídeo natural por quase 30 anos, desenvolveu com sucesso um novo processo ecológico para extrair brassinolídeo natural de pólen de colza e recebeu uma patente de invenção doméstica e uma patente de invenção internacional PCT nos Estados Unidos e Austrália. A empresa possui uma tecnologia de núcleo original na extração de brassinolídeo natural (brassinoesteroide 14-hidroxilado), e possui uma linha de produção estável para o brassinosteroide 14-hidroxilado, com uma produção anual de brassinosteroide 14-hidroxilado puro de 500 kg. Em um processo de extração de brassinolídeo natural, uma grande quantidade de polissacarídeo de pólen será produzida. De acordo com a invenção, um subproduto polissacarídico de pólen produzido no processo de extração de brassinolídeo natural tem um bom efeito promotor de crescimento das culturas e tem um bom efeito promotor nas raízes, caules, folhas e assim por diante de culturas em uma determinada faixa de concentração através de pulverização de folhagem ou irrigação radicular. Além disso, a aplicação do polissacarídeo de pólen às culturas pode aumentar significativamente a resistência ao estresse das culturas e reduzir os danos causados pela seca, condições salinas-alcalinas, baixa temperatura e outros estresses às raízes, folhas, botões de flores, frutas e outros órgãos das culturas, deste modo, reduzindo as perdas agrícolas causadas pelo clima extremo. De acordo com um teste de componente, o subproduto contém sacarídeos, proteínas, aminoácidos, lipídios e outros componentes. Os relatórios de pesquisa existentes sobre polissacarídeos de pólen de colza são principalmente nas áreas de alimentos e medicamentos, e pesquisas no campo agrícola ainda não foram relatadas.

Sumário da Invenção

[0004] Um problema técnico a ser resolvido pela invenção é fornecer um extrato polissacarídico de pólen que pode ser extraído a um custo extremamente baixo e pode promover o crescimento das plantas.

[0005] O extrato polissacarídico de pólen de acordo com a invenção é preparado por meio do método a seguir: misturar o pólen de colza com água, depois aquecer e agitar para extração pelo menos uma vez, filtrar, misturar os filtrados, adicionar quitosana ao filtrado resultante para obter um líquido a ser clarificado, manter o líquido a ser clarificado a 60-80°C durante pelo menos uma hora, esfriar e deixar repousar, e realizar a separação sólido-líquido para obter um líquido, particularmente o extrato polissacarídico de pólen.

[0006] Em uma modalidade, a agitação é realizada em uma velocidade de 3.000-4.000 r/min a 60-70°C durante 3-5 h durante cada extração.

[0007] Como modalidade preferida, a água é água desmineralizada.

[0008] Em uma modalidade específica, o pólen de colza e a água são misturados em uma proporção em peso de 1:1,5-5 durante cada extração. Em uma modalidade específica, o pólen de colza e a água são misturados em uma proporção em peso de 1:2.

[0009] Como uma das modalidades, o aquecimento e a agitação são realizados para extração duas vezes.

[0010] Em uma modalidade da invenção, a quitosana no líquido a ser clarificado tem uma concentração de 0,01-0,15% em peso. Em uma modalidade específica, a quitosana no líquido a ser clarificado tem uma concentração de 0,05-0,1% em peso. Em uma modalidade específica, a quitosana no líquido a ser clarificado tem uma concentração de 0,08% em peso.

[0011] Em uma modalidade da invenção, o líquido a ser clarificado é mantido a 70°C durante uma hora.

[0012] Um segundo problema técnico a ser resolvido pela invenção é fornecer um bioestimulante derivado de plantas.

[0013] O bioestimulante derivado de plantas de acordo com a invenção é preparado ao concentrar o extrato polissacarídico de pólen e adicionar excipientes agronomicamente aceitáveis.

[0014] A invenção fornece ainda uma aplicação do extrato polissacarídico de pólen na agricultura.

[0015] A invenção fornece ainda uma aplicação do extrato polissacarídico de pólen ou do bioestimulante derivado de plantas na promoção do crescimento de raízes de plantas.

[0016] Em uma modalidade da invenção, o extrato polissacarídico de pólen ou o bioestimulante derivado de plantas é aplicado às raízes das plantas quando em uso.

[0017] Em uma modalidade da invenção, a planta é um vegetal, uma árvore frutífera ou uma flor.

[0018] Em uma modalidade específica da invenção, a planta é trigo, alface, aipo, frutas cítricas, kiwi ou árvore do chá.

[0019] A invenção fornece ainda uma aplicação do extrato polissacarídico de pólen ou do bioestimulante derivado de plantas na promoção do crescimento de plantas.

[0020] Em uma modalidade da invenção, o extrato polissacarídico de pólen ou o bioestimulante derivado de plantas é pulverizado nas folhas das plantas ou aplicado às raízes das plantas quando em uso.

[0021] Em uma modalidade da invenção, a planta é um vegetal ou uma árvore frutífera.

[0022] Em uma modalidade específica da invenção, a planta é repolho Chinês bebê, alface aspargo, alface, repolho Chinês, frutas cítricas, kiwi, cereja ou maçã.

[0023] A invenção fornece ainda uma aplicação do extrato polissacarídico de pólen ou do bioestimulante derivado de plantas no desenvolvimento de resistência ao estresse de plantas.

[0024] Em uma modalidade da invenção, o extrato polissacarídico de pólen é pulverizado nas folhas das plantas ou aplicado às raízes das plantas quando em uso.

[0025] Em uma modalidade da invenção, a planta é um vegetal ou uma árvore frutífera.

[0026] Em uma modalidade específica da invenção, a planta é trigo, pimenta, tomate, frutas cítricas, kiwi, cereja, pera ou maçã.

[0027] Em uma modalidade da invenção, a resistência ao estresse da planta é resistência à seca, resistência a altas temperaturas, resistência ao frio ou resistência a condições salinas-alcalinas.

[0028] Comparado com o estado da técnica, a invenção tem as seguintes vantagens:

[0029] 1) De acordo com a invenção, um extrato polissacarídico de pólen é obtido por meio de clarificação após extração com água. O extrato polissacarídico de pólen tem um bom efeito na promoção do crescimento de raízes de plantas ou caules e folhas e o método para preparar o extrato polissacarídico de pólen é simples, seguro e ecológico.

[0030] 2) O extrato polissacarídico de pólen de acordo com a invenção pode aproveitar ao máximo os subprodutos do processo de produção do brassinolídeo e transformar resíduos em produtos valiosos com um custo extremamente baixo e grandes benefícios ambientais e econômicos.

[0031] 3) De acordo com a invenção, um polissacarídeo de pólen é usado pela primeira vez no campo agrícola, o que amplia o campo de aplicação do polissacarídeo de pólen e fornece uma nova opção para bioestimulantes derivados de plantas.

[0032] 4) O extrato polissacarídico de pólen de acordo com a invenção tem a função de melhorar a resistência à seca, resistência a altas temperaturas, resistência ao frio ou resistência a condições salinas-alcalinas das plantas, expande o campo de aplicação do polissacarídeo de pólen e fornece uma nova opção para o desenvolvimento de resistência ao estresse das plantas.

Breve Descrição dos Desenhos

[0033] A Figura 1 mostra um processo de extração para um polissacarídeo de pólen de acordo com a Modalidade 1 da invenção.

[0034] A Figura 2 mostra fotos de procedimentos de teste no Exemplo de Teste 1 da invenção, em que a parte superior esquerda mostra um procedimento de pré-germinação e imersão de trigo, a parte superior direita mostra um procedimento de germinação e crescimento de trigo (dia 2), a parte inferior esquerda mostra um processo de germinação e crescimento (dia 8) e a parte inferior direita mostra o registro de investigação do teste.

Descrição Detalhada das Modalidades Preferidas

[0035] O extrato polissacarídico de pólen de acordo com a invenção é preparado por meio do método a seguir: misturar o pólen de colza com água, depois aquecer e agitar para extração pelo menos uma vez, filtrar, misturar os filtrados, adicionar quitosana ao filtrado resultante para obter um líquido a ser clarificado, manter o líquido a ser clarificado a 60-80°C durante pelo menos uma hora, esfriar e deixar repousar, e realizar a separação sólido-líquido para obter um líquido, particularmente o extrato polissacarídico de pólen.

[0036] Um método para extrair o extrato polissacarídico de pólen é simples, sem reagentes orgânicos tóxicos no processo de extração, é seguro, ecológico e de baixo custo. Além disso, o extrato polissacarídico de pólen é proveniente de subprodutos do processo de extração da brassina natural, de modo que o custo é extremamente baixo, e o efeito de promover o crescimento de raízes, caules, folhas, etc. das culturas é notável.

[0037] Para fragmentar melhor as paredes celulares e permitir que os polissacarídeos sejam totalmente dissolvidos, em uma modalidade da invenção, a agitação é realizada em uma velocidade de 3000-4000 r/min a 60-70°C durante 3-5 h durante cada extração.

[0038] Em uma modalidade da invenção, o tempo de agitação é de 4 h.

[0039] Em uma modalidade da invenção, a água é água desmineralizada. Água desmineralizada refere-se a água com pouco ou nenhum composto de cálcio e magnésio solúveis. Normalmente, o teor de íons de cálcio e magnésio na água é expresso pelo índice de "dureza". Uma dureza de 1 grau equivale a 10 mg de óxido de cálcio por litro de água. A água abaixo de 8 graus é denominada de água desmineralizada. A água desmineralizada pode ser preparada por meio de um método convencional na técnica.

[0040] O polissacarídeo de pólen no pólen de colza é solúvel em água, portanto, a extração com água é adotada na invenção. Se a quantidade de água for muito baixa, haverá o defeito de baixa taxa de extração de polissacarídeos de pólen e, se a quantidade de água for muito alta, o custo de posterior concentração será maior. Portanto, de preferência, o pólen de colza e a água são misturados em uma proporção em peso de 1: 1,5-5 durante cada extração. Como solução preferida, o pólen de colza e a água são misturados na proporção em peso de 1:2.

[0041] Para extrair ao máximo o polissacarídeo de pólen do pólen de colza, levando em consideração a eficiência de extração, redução da dificuldade de remoção de impurezas do processo de extração para brassina natural e redução do consumo e o custo de energia, de preferência, o aquecimento e a agitação são realizados para extração duas vezes.

[0042] Após a extração, os filtrados são misturados e, em seguida, quitosana é adicionada para clarificação para remover as impurezas do polissacarídeo de pólen. Em uma modalidade da invenção, a quitosana no líquido a ser clarificado tem uma concentração de 0,01-0,15 % em peso. Em uma modalidade específica da invenção, a quitosana no líquido a ser clarificado tem uma concentração de 0,05-0,1 % em peso. Em uma modalidade específica da invenção, a quitosana no líquido a ser clarificado tem uma concentração de 0,08 % em peso.

[0043] Em uma modalidade da invenção, o líquido a ser clarificado é mantido a 70°C durante uma hora.

[0044] O bioestimulante derivado de plantas de acordo com a invenção é preparado ao concentrar o extrato polissacarídico de pólen e adicionar excipientes agronomicamente aceitáveis.

[0045] O extrato polissacarídico de pólen pode ser preparado em várias formas de dosagem comuns por meio de métodos de produção convencionais no campo de processamento de preparações. Por exemplo, o extrato polissacarídico de pólen é concentrado e depois misturado com um ou mais excipientes para preparar em soluções aquosas, concentrados solúveis, pó, grânulos e outras formas de dosagem conforme necessário.

[0046] O grau de concentração pode ser determinado por aqueles versados na técnica de acordo com a quantidade de água adicionada durante a extração e a demanda final dos produtos.

[0047] Para permitir que os produtos sejam estáveis e convenientes para transporte e armazenamento, excipientes precisam ser adicionados para preparar as formas de dosagem correspondentes. Os excipientes agronomicamente aceitáveis na invenção podem ser concentrados e preparados com o extrato polissacarídico de pólen a ser aplicado às plantas ou adicionados com excipientes para facilitar o armazenamento, transporte ou uso. Os excipientes podem ser excipientes convencionais na técnica, tais como um dispersante, agente umectante, aglutinante, emulsificante, estabilizante e solvente.

[0048] A invenção fornece uma aplicação do extrato polissacarídico de pólen na agricultura. Diferentemente da aplicação de polissacarídeos de pólen existentes nos campos de alimentos e medicamentos descobriu-se, pela primeira vez na invenção, que o extrato polissacarídico de pólen pode ser usado na agricultura para promover o crescimento de plantas.

[0049] A invenção fornece ainda uma aplicação do extrato polissacarídico de pólen ou do bioestimulante derivado de plantas na promoção do crescimento de raízes de plantas.

[0050] O extrato polissacarídico de pólen ou o bioestimulante derivado de plantas de acordo com a invenção pode promover o crescimento de raízes de plantas.

[0051] Em uma modalidade da invenção, o extrato polissacarídico de pólen ou o bioestimulante derivado de plantas é aplicado às raízes das plantas quando em uso. A concentração de aplicação é calculada pela concentração de polissacarídeos brutos no extrato polissacarídico de pólen ou no bioestimulante derivado de plantas e a concentração é controlada em 0,3-1 ppm. É aconselhável usar uma quantidade que possa umedecer todo o solo superficial.

[0052] Em uma modalidade específica da invenção, a planta é um vegetal, uma árvore frutífera ou uma flor. Mais preferivelmente, a planta é trigo, alface, aipo, frutas cítricas, kiwi ou árvore do chá.

[0053] O extrato polissacarídico de pólen ou o bioestimulante derivado de plantas de acordo com a invenção pode promover o crescimento de plantas, isto é, o crescimento de partes aéreas das plantas, incluindo caules e folhas.

[0054] Em uma modalidade da invenção, o extrato polissacarídico de pólen ou o bioestimulante derivado de plantas é pulverizado nas folhas das plantas ou aplicado às raízes das plantas quando em uso. A concentração de aplicação é calculada pela concentração de polissacarídeos brutos no extrato polissacarídico de pólen ou bioestimulante derivado de planta e a concentração de polissacarídeo bruto no extrato polissacarídico de pólen ou bioestimulante derivado de planta é controlada em 0,75-12 ppm; de preferência a 1,5-8 ppm; e, mais preferivelmente, a 3 ppm. A quantidade de aplicação é uma quantidade convencional. Por exemplo, é aconselhável manter todas as folhas umedecidas sem pingar após a pulverização.

[0055] Em uma modalidade específica da invenção, a planta é um vegetal ou uma árvore frutífera. Mais preferivelmente, a planta é repolho Chinês bebê, alface aspargo, alface, repolho Chinês, frutas cítricas, kiwi, cereja ou maçã.

[0056] O extrato polissacarídico de pólen ou o bioestimulante derivado de plantas de acordo com a invenção tem a função de melhorar a resistência à seca, resistência a altas temperaturas, resistência ao frio ou resistência a condições salinas-alcalinas das plantas, e pode ser aplicado ao desenvolvimento de resistência ao estresse das plantas.

[0057] Em uma modalidade da invenção, o extrato polissacarídico de pólen é pulverizado nas folhas das plantas ou aplicado às raízes das plantas quando em uso. A concentração de aplicação é calculada pela concentração de polissacarídeos brutos no extrato polissacarídico de pólen. A concentração de polissacarídeos brutos no extrato polissacarídico de pólen é controlada em 0,125-1 ppm quando aplicado às raízes e controlado em 1-8 ppm quando aplicado às folhas.

[0058] A quantidade de aplicação é uma quantidade convencional. Por exemplo, é aconselhável manter todas as folhas umedecidas sem pingar após a pulverização. Quando aplicado às raízes das plantas, é aconselhável usar uma quantidade que possa umedecer todo o solo superficial.

[0059] Em uma modalidade específica da invenção, a planta é um vegetal ou uma árvore frutífera. Mais preferivelmente, a planta é trigo, pimenta, tomate, frutas cítricas, kiwi, cereja, pera ou maçã.

[0060] A descrição a seguir detalhará as modalidades específicas da presente invenção, e a invenção não estará limitada às modalidades na mesma.

Modalidade 1

[0061] Pólen de colza e água desmineralizada são misturados na proporção em peso de 1:2, depois aquecidos e agitados para extração duas vezes e a agitação é realizada em uma velocidade de 3500 r/min a 65°C durante 4 h durante cada extração. Após agitação, a mistura resultante é filtrada para obter um pólen 2 isento de sacarídeos, o qual é usado para extrair o brassinolídeo. Após os filtrados (isto é, um filtrado polissacarídico de pólen 1 e um filtrado polissacarídico de pólen 2) serem misturados, quitosana é adicionada para clarificação. A concentração de quitosana no líquido a ser clarificado é controlada em 0,08 % e o líquido a ser clarificado é adicionado em banho-maria a 70°C para reação durante uma hora. Após deixar repousar em temperatura ambiente durante 24 h, um sobrenadante é extraído como um líquido clarificado. Após filtração, o líquido clarificado é concentrado sob vácuo até 1/4 do peso do líquido antes de concentração para obter um extrato polissacarídico de pólen.

[0062] Os componentes do extrato polissacarídico de pólen são testados e os resultados são mostrados na Tabela 1.

Obs.: Gordura total = gordura saturada + gordura monoinsaturada + gordura poli-insaturada + gordura trans. ND = não detectado.

Exemplo de Teste 1

[0063] Neste teste, o efeito do extrato polissacarídico de pólen obtido na Modalidade 1 sobre o crescimento da cultura é explorado principalmente pela hidroponia de trigo, na qual a concentração do extrato polissacarídico de pólen é calculada por polissacarídeos brutos. Procedimentos de teste:

1. Pré-germinação do trigo:

[0064] ® Imersão de sementes de trigo em solução de hipoclorito de sódio a 5 % para esterilização durante 10 min e lavagem com água por 5 a 6 vezes para remover o hipoclorito de sódio;

[0065] @ Embeber as sementes limpas em água limpa durante 6-8 h; e

[0066] @ Espalhar as sementes embebidas em uma incubadora com temperatura constante de 25°C de um dia para o outro para evitar a sobreposição de sementes e afetar a germinação.

2. Experimento hidropônico:

[0067] 0 Tomar o extrato polissacarídico de pólen e, em seguida, diluir o polissacarídeo de pólen em diferentes múltiplos para uso posterior;

[0068] @ Selecionar sementes de trigo integral com o mesmo tamanho, sem doenças e pragas de insetos e o mesmo grau de clareamento, transplantar as sementes de trigo para cestas de plantio, com 10 sementes de trigo em cada cesta de plantio;

[0069] @ Transplantar as cestas de plantio carregadas com sementes de trigo pré-germinadas para soluções de polissacarídeo de pólen em diferentes diluições, certificando-se de que as sementes entrem em contato com a superfície do líquido e definindo três réplicas para cada tratamento com polissacarídeo de pólen em cada concentração; e

[0070] © Definir um controle de água limpa.

3. Teste por meio de investigação:

[0071] © Tirar fotos de toda a aparência do trigo tratado com diferentes concentrações;

[0072] © Observar o comprimento da raiz (a distância da junção das raízes e caules até a ponta da raiz) e o comprimento total da planta (a distância da base da planta até a ponta da folha superior desdobrada);

[0073] @ Enxaguar as amostras de plantas repetidamente com água destilada e remover a umidade, depois cortar o trigo da junção das raízes e caules e medir o peso das partes acima do solo e partes subterrâneas, respectivamente; e

[0074] © Colocar estas partes em um forno para desativar as enzimas a 105°C por meia hora, depois secar a 70°C até um peso constante e medir o peso seco. 4. Processamento de dados:

[0075] Taxa de inibição/taxa de crescimento (%) = | comprimento da raiz ou altura da planta após tratamento - controle de comprimento da raiz ou altura da planta |/controle de comprimento da raiz ou altura da planta *100

[0076] Consulte as Tabelas 2 e 3 para os resultados do tratamento com polissacarídeo de pólen após 7 dias. Tabela 2 Resultados do teste

Tabela 3 Análise de dados após o teste

(Nota: - representa inibição, + representa promoção)

[0077] É evidente, a partir da Tabela 3, que o extrato polissacarídico de pólen de acordo com a invenção promove o crescimento da raiz em uma baixa concentração (0,125-0,2 ppm) e inibe o crescimento da raiz em uma alta concentração (2-10 ppm). Com base na experiência na técnica, a concentração para irrigação radicular é, em geral, 3 a 5 vezes maior do que para hidroponia. Portanto, a concentração do polissacarídeo de pólen é, de preferência, a partir de 0,3 a 1 ppm durante a irrigação radicular. Modalidade 2 5. Material Necessário Teste: Teste de bioatividade na promoção do crescimento de caules e folhas de mudas de repolho Chinês bebê pela poliacrilamida de pólen Caso: Repolho Chinês bebê

[0078] Mudas de repolho Chinês bebê comercialmente disponíveis (2-3 folhas) são compradas e transplantadas, uma em cada vaso, e mudas com crescimento similar são selecionadas para o teste após recuperação do crescimento. 6. Método de Aplicação

[0079] Um total de 7 grupos de tratamento são configurados neste teste, com 6 vasos de mudas de repolho Chinês bebê para cada grupo de tratamento. Antes do teste, a altura da parte aérea de cada muda e o teor de clorofila (valor SPAD) das novas folhas são medidos e, em seguida, um agente de tratamento de acordo com o design experimental é pulverizado, a quantidade do agente de tratamento sendo adequada para umedecer as plantas (cerca de 3 mL/planta). O tratamento de controle positivo é pulverizado com um extrato de algas marinhas em uma concentração de 5000 vezes o valor recomendado (10% de pó, fornecido pelo fabricante Qingdao Haijingling Seaweed Biotechnology Group Co., Ltda. em abril de 2018), e o controle em branco é pulverizado com a mesma quantidade de água limpa. Após a aplicação, todos os grupos de tratamento são cultivados sob as mesmas condições naturais. 7. Design do Agente de Tratamento

[0080] Consulte a Tabela 4 para configurações de concentração de teste. Tabela 4 Configurações de concentração de teste

[0081] A concentração do polissacarídeo de pólen diluído é calculada por polissacarídeos brutos. 8. Método de Investigação

[0082] Antes do teste, a altura da parte aérea de cada muda e os valores SPAD das folhas novas são medidos e o agente de tratamento é aplicado duas vezes com um intervalo de 7 dias. A investigação é realizada uma semana após a segunda aplicação, e a altura da parte aérea da muda de repolho Chinês bebê e o valor SPAD da mesma folha são medidos. Os valores SPAD são medidos três vezes e o valor médio é registrado. A taxa de crescimento da altura da planta, a taxa de crescimento relativa da altura da planta e o valor SPAD adicionado antes e após o tratamento são calculados. Taxa de crescimento da altura da planta = (altura da planta após o tratamento - altura da planta antes de tratamento) *100%/altura da planta antes de tratamento Taxa de crescimento relativa = (taxa de crescimento da altura da planta tratada - taxa de crescimento da altura da planta em branco) *100%/taxa de crescimento da altura da planta em branco

[0083] Após 14 dias de aplicação, os resultados medidos dos índices para os grupos de tratamento são mostrados na Tabela 5 e na Tabela 6, e todos os dados nas tabelas são valores médios. Tabela 5 Resultados medidos dos índices para os grupos de tratamento

Tabela 6 Resultados medidos dos índices para os grupos de tratamento

[0084] O SPAD pode refletir o teor de clorofila nas folhas. Quanto maior o valor SPAD, maior o teor de clorofila. De acordo com os dados acima, o polissacarídeo de pólen em cada grupo de tratamento pode aumentar o valor SPAD das folhas das plantas e promover o crescimento das partes aéreas das plantas. Dentre eles, a taxa de crescimento relativa da altura da planta da parte aérea de mudas de repolho Chinês pulverizadas com 3 ppm de polissacarídeo de pólen nas folhas é de 59,40% e o valor SPAD adicionado é de 4,07, os quais obviamente são superiores ao controle em branco com água e o controle positivo com extrato de algas marinhas.

[0085] Em conclusão, a pulverização da folhagem com 0,75-12 ppm de polissacarídeo de pólen pode promover o crescimento de mudas de repolho Chinês bebê, das quais a pulverização da folhagem com 3 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito promotor de crescimento.

Modalidade 3 1. Material Necessário

Teste: Teste de bioatividade na promoção do crescimento de caules e folhas de mudas de alface aspargo pelo polissacarídeo de pólen Caso: Mudas de alface aspargo (nome latino: Lactuca sativa var. angustata)

[0086] Mudas de alface aspargo comercialmente disponíveis (4-5 folhas) são compradas e transplantadas, uma em cada vaso, e mudas com crescimento similar são selecionadas para o teste após recuperação do crescimento.

2. Método de Aplicação

[0087] Um total de 7 grupos de tratamento são configurados neste teste, com 6 vasos de mudas de alface aspargo para cada grupo de tratamento. Consulte a Tabela 4 para obter detalhes. Antes do teste, a altura da parte aérea de cada muda e os valores SPAD das novas folhas são medidos e, em seguida, um agente de tratamento de acordo com o design experimental é pulverizado, a quantidade do agente de tratamento sendo adequada para umedecer as plantas (cerca de 3 mL/planta). O tratamento de controle positivo é pulverizado com um extrato de algas marinhas em uma concentração de 5000 vezes o valor recomendado (10% de pó, fornecido pelo fabricante Qingdao Haijingling Seaweed Biotechnology Group Co., Ltda. em abril de 2018), e o controle em branco é pulverizado com a mesma quantidade de água limpa. Após a aplicação, todos os grupos de tratamento são cultivados sob as mesmas condições naturais.

3. Design do Agente de Tratamento

[0088] Consulte a Tabela 7 para configurações de concentração de teste. Tabela 7 Configurações de concentração de teste

[0089] A concentração do polissacarídeo de pólen diluído é calculada por polissacarídeos brutos. 4. Método de Investigação

[0090] Antes do teste, a altura da parte aérea de cada muda e os valores SPAD das folhas novas são medidos e o agente de tratamento é aplicado duas vezes com um intervalo de 7 dias. A investigação é realizada uma semana após a segunda aplicação, e a altura da parte aérea da muda de alface aspargo e o valor SPAD da mesma folha são medidos. Os valores SPAD são medidos três vezes e o valor médio é registrado. A taxa de crescimento da altura da planta, a taxa de crescimento relativa da altura da planta e o valor SPAD adicionado antes e após o tratamento são calculados. Taxa de crescimento da altura da planta = (altura da planta após o tratamento - altura da planta antes de tratamento) *100%/altura da planta antes de tratamento Taxa de crescimento relativa = (taxa de crescimento da altura da planta tratada - taxa de crescimento da altura da planta em branco) *100%/taxa de crescimento da altura da planta em branco.

[0091] Após 14 dias de aplicação, os resultados medidos dos índices para os grupos de tratamento são mostrados na Tabela 8 e na Tabela 9, e todos os dados nas tabelas são os valores médios. Tabela 8 Resultados medidos dos índices dos grupos de tratamento

Tabela 9 Resultados medidos dos índices dos grupos de tratamento

[0092] De acordo com os dados acima, o polissacarídeo de pólen em cada grupo de tratamento pode aumentar o valor SPAD das folhas das plantas e promover o crescimento das partes aéreas das plantas. Dentre eles, o polissacarídeo de pólen na concentração de 3 ppm tem o melhor efeito. Após 14 dias de pulverização, a taxa de crescimento relativa da altura da planta é de 50,05 %, e o valor SPAD adicionado é de 3,84. O efeito promotor de crescimento é obviamente superior àquele do controle em branco com água e do controle positivo com extrato de algas marinhas.

[0093] Em conclusão, a pulverização da folhagem com 0,75-12 ppm de polissacarídeo de pólen pode promover o crescimento de mudas de alface aspargo, das quais 3 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito. Modalidade 4 1. Material Necessário Teste: Teste de bioatividade na promoção do crescimento de caules e folhas de mudas de alface pelo polissacarídeo de pólen Caso: Mudas de alface (nome latino: Lactuca sativa var. ramose Hort.)

[0094] Mudas de alface comercialmente disponíveis (duas a 3 folhas) são compradas e transplantadas, uma em cada vaso, e mudas com crescimento similar são selecionadas para o teste após recuperação do crescimento. 2. Método de Aplicação

[0095] Um total de 7 grupos de tratamento são configurados neste teste, com 10 vasos de mudas de alface para cada grupo de tratamento. Consulte a Tabela 7 para obter detalhes. Antes do teste, a altura da parte aérea de cada muda e os valores SPAD das novas folhas são medidos e, em seguida, um agente de tratamento de acordo com o design experimental é aplicado, a quantidade do agente de tratamento sendo adequada para umedecer as plantas (cerca de 3 mL/planta). O tratamento de controle positivo é pulverizado com 10.000 vezes de aminoácido (40% em pó, fornecido pelo fabricante Chengdu Aohe Biotechnology Co., Ltda. em abril de 2018), e o controle em branco é pulverizado com a mesma quantidade de água limpa. Após a aplicação, todos os grupos de tratamento são cultivados em uma incubadora (em uma temperatura de 25°C e umidade de 50%). 3. Design do Agente de Tratamento

[0096] Consulte a Tabela 10 para configurações de concentração de teste. Tabela 10 Configurações de concentração de teste

[0097] A concentração do polissacarídeo de pólen diluído é calculada por polissacarídeos brutos. 4. Método de Investigação

[0098] Antes do teste, a altura da parte aérea de cada muda e os valores SPAD das folhas novas são medidos e o agente de tratamento é aplicado duas vezes com um intervalo de 7 dias. A investigação é realizada uma semana após a segunda aplicação e a altura da parte aérea da muda de alface e o valor SPAD da mesma folha são medidos. Os valores SPAD são medidos três vezes e o valor médio é registrado. A taxa de crescimento da altura da planta, a taxa de crescimento relativa da altura da planta e o valor SPAD adicionado antes e após o tratamento são calculados. Taxa de crescimento da altura da planta = (altura da planta após o tratamento - altura da planta antes de tratamento) *100%/altura da planta antes de tratamento Taxa de crescimento relativa = (taxa de crescimento da altura da planta tratada - taxa de crescimento da altura da planta em branco) *100%/taxa de crescimento da altura da planta em branco

[0099] Após 14 dias de aplicação, os resultados medidos dos índices para os grupos de tratamento são mostrados na Tabela 11 e na Tabela 12, e todos os dados nas tabelas são os valores médios. Tabela 11 Resultados medidos dos índices dos grupos de tratamento

Tabela 12 Resultados medidos dos índices dos grupos de tratamento

[0100] De acordo com os dados acima, o polissacarídeo de pólen em cada grupo de tratamento pode aumentar o valor SPAD das folhas das plantas e promover o crescimento das partes aéreas das plantas. Dentre eles, o polissacarídeo de pólen na concentração de 3 ppm tem o melhor efeito. Após 14 dias de pulverização, a taxa de crescimento relativa da altura da planta é 72,59%, o valor SPAD adicionado é 3,64, a taxa de crescimento relativa da altura da planta em um grupo de tratamento com aminoácidos é 64,59% e o valor SPAD adicionado é 2,10. O efeito promotor de crescimento do polissacarídeo de pólen é superior àquele do grupo de controle positivo com aminoácidos.

[0101] Em conclusão, a pulverização da folhagem com 0,7-12 ppm de polissacarídeo de pólen pode promover o crescimento de mudas de alface, das quais 3 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito. Modalidade 5 1. Material Necessário Teste: Teste de bioatividade na promoção do crescimento de caules e folhas de mudas de repolho Chinês pelo polissacarídeo de pólen Caso: Mudas de repolho Chinês (nome latino: Brassica chinensis L.)

[0102] Mudas de repolho chinês comercialmente disponíveis (3-4 folhas) são compradas e transplantadas, uma em cada vaso, e mudas com crescimento similar são selecionadas para o teste após recuperação do crescimento. 2. Método de Aplicação

[0103] Um total de 7 grupos de tratamento são configurados neste teste, com 8 vasos de mudas de repolho Chinês para cada grupo de tratamento. Consulte a Tabela 10 para obter detalhes. Antes do teste, a altura da parte aérea de cada muda e os valores SPAD das novas folhas são medidos e, em seguida, um agente de tratamento de acordo com o design experimental é aplicado, a quantidade do agente de tratamento sendo adequada para umedecer as plantas (cerca de 3 mL/planta). O tratamento de controle positivo é pulverizado com 10.000 vezes de aminoácido (40% em pó, fornecido pelo fabricante Chengdu Aohe Biotechnology Co., Ltda. em abril de 2018), e o controle em branco é pulverizado com a mesma quantidade de água limpa. Após a aplicação, todos os grupos de tratamento são cultivados em uma incubadora (em uma temperatura de 25°C e umidade de 50%). 3. Design do Agente de Tratamento

[0104] Consulte a Tabela 13 para configurações de concentração de teste. Tabela 13 Configurações de concentração de teste

[0105] A concentração do polissacarídeo de pólen diluído é calculada por polissacarídeos brutos. 4. Método de Investigação

[0106] Antes do teste, a altura da parte aérea de cada muda e os valores SPAD das folhas novas são medidos e o agente de tratamento é aplicado duas vezes com um intervalo de 7 dias. A investigação é realizada uma semana após a segunda aplicação, medindo-se a altura da parte aérea da muda de repolho Chinês e o valor SPAD da mesma folha. Os valores SPAD são medidos três vezes e o valor médio é registrado. A taxa de crescimento da altura da planta, a taxa de crescimento relativa da altura da planta e o valor SPAD adicionado antes e após o tratamento são calculados. Taxa de crescimento da altura da planta = (altura da planta após o tratamento - altura da planta antes de tratamento) *100%/altura da planta antes de tratamento Taxa de crescimento relativa = (taxa de crescimento da altura da planta tratada - taxa de crescimento da altura da planta em branco) *100%/taxa de crescimento da altura da planta em branco

[0107] Após 14 dias de aplicação, os resultados medidos dos índices para os grupos de tratamento são mostrados na Tabela 14 e na Tabela 15, e todos os dados nas tabelas são os valores médios. Tabela 14 Resultados medidos dos índices dos grupos de tratamento

Tabela 15 Resultados medidos dos índices dos grupos de tratamento

[0108] De acordo com os dados acima, o polissacarídeo de pólen em cada grupo de tratamento pode aumentar o valor SPAD das folhas das plantas e promover o crescimento das partes aéreas das plantas. Dentre eles, o polissacarídeo de pólen na concentração de 3 ppm tem o melhor efeito. Após 14 dias de pulverização, a taxa de crescimento relativa da altura da planta é 65,38%, o valor SPAD adicionado é 3,21, a taxa de crescimento relativa da altura da planta no grupo de tratamento com aminoácidos é 57,31% e o valor SPAD adicionado é 1,32. O efeito promotor de crescimento do polissacarídeo de pólen é superior àquele do grupo de controle com aminoácidos.

[0109] Em conclusão, a pulverização de folhagem com 0,75-12 ppm de polissacarídeo de pólen pode promover o crescimento de mudas de repolho Chinês, das quais 3 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito. Modalidade 6 1. Material Necessário Teste: Teste de bioatividade na melhoria da resistência à seca do trigo pelo polissacarídeo de pólen Caso: Trigo (Yunong 495)

[0110] Sementes de trigo são esterilizadas com hipoclorito de sódio a 5% durante 10 min, depois limpas com água por 5 a 6 vezes para lavar a solução de hipoclorito de sódio, e as sementes de trigo limpas são embebidas de um dia para o outro durante 12 h. Um papel de filtro é colocado em uma caixa de germinação adicionada com uma pequena quantidade de água para umedecer o papel de filtro, e as sementes são espalhadas sobre o papel de filtro. Em seguida, a caixa de germinação é colocada em uma caixa de clima artificial para pré-germinação longe da luz a 25°C durante 1 dia, e sementes de trigo cheias com o mesmo tamanho, sem doenças e pragas de insetos e com o mesmo grau de branqueamento são selecionadas e transferidas para garrafas hidropônicas, com gargalos colocados em cestos de plantio e 10 sementes de trigo em cada cesto de plantio para cultivo hidropônico durante 3 dias para teste. 2. Método de Aplicação

[0111] Uma solução de PEG a 20% é preparada, 200 ml da solução de PEG preparada são adicionados a cada garrafa hidropônica, uma quantidade diferente de agente de tratamento é adicionada de acordo com o design de concentração do agente de tratamento e, após misturar bem, o trigo é colocado nas garrafas hidropônicas, com três réplicas para cada tratamento. Enquanto isso, uma solução de PEG a 20% e água limpa são usados como controles em branco, e um composto de aminoácidos em pó (40% em pó, fornecido pela Chengdu Aohe Biotechnology Co., Ltda. em abril de 2019) e brassinosteroide 14-hidroxilado (Chengdu Newsun Crop Science Co., Ltda., 20190608) são usados como controles positivos, com 3 réplicas para cada grupo. 3. Consulte a Tabela 16 para o design do agente de tratamento. Tabela 16 Configurações de concentração de teste

[0112] A concentração do polissacarídeo de pólen é calculada pela concentração de polissacarídeos brutos. 4. Método de Investigação

[0113] O comprimento da raiz, a altura da planta, o peso fresco da raiz e o peso fresco das partes aéreas do trigo são investigados seis dias depois. Os resultados são mostrados na Tabela 17 e todos os dados na tabela são as médias. Tabela 17 Resultados medidos dos índices dos grupos de tratamento

[0114] De acordo com os dados acima, sob o estresse hídrico simulado pelo PEG, o comprimento da raiz e a altura da planta do tratamento 7 (estresse por PEG) são obviamente inibidos comparado com aqueles do tratamento 8 (água limpa), e o estresse hídrico e danos a todos os grupos de tratamento são aliviados após a aplicação do polissacarídeo de pólen em diferentes concentrações. Dentre elas, 0,5 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito no alívio do estresse hídrico, o qual é similar a 0,01 ppm de brassinosteroide 14- hidroxilado e significativamente superior ao controle positivo com aminoácidos.

[0115] Em conclusão, 0,125-1 ppm de polissacarídeo de pólen pode promover o comprimento da raiz e a altura da planta de trigo sob estresse hídrico, aumentar o peso fresco da raiz e o peso fresco da parte aérea e aliviar os danos ao trigo sob estresse hídrico. Sob as condições experimentais acima, 0,5 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito. Modalidade 7 1. Material Necessário Teste: Teste de bioatividade na melhoria da resistência a condições salinas-alcalinas do trigo pelo polissacarídeo de pólen Caso: Trigo (Yunong 495)

[0116] Sementes de trigo são esterilizadas com hipoclorito de sódio a 5% durante 10 min, depois limpas com água por 5 a 6 vezes para lavar a solução de hipoclorito de sódio, e as sementes de trigo limpas são embebidas de um dia para o outro durante 12 h. Um papel de filtro é colocado em uma caixa de germinação adicionada com uma pequena quantidade de água para umedecer o papel de filtro, e as sementes são espalhadas sobre o papel de filtro. Em seguida, a caixa de germinação é colocada em uma caixa de clima artificial para pré-germinação longe da luz a 25°C durante 1 dia e sementes de trigo cheias com o mesmo tamanho, sem doenças e pragas de insetos e com o mesmo grau de branqueamento são selecionadas e transferidas para garrafas hidropônicas, com gargalos colocados em cestos de plantio e 10 sementes de trigo em cada cesto de plantio para cultivo hidropônico durante 3 dias para teste. 2. Método de Aplicação

[0117] Uma solução de estresse salina-alcalina (cloreto de sódio a 0,12% e carbonato de sódio a 0,1%) é preparada, 200 ml da solução salina-alcalina preparada são adicionados a cada garrafa hidropônica, uma quantidade diferente de agente de tratamento é adicionada de acordo com o design de concentração do agente de tratamento, e depois de bem misturado, o trigo é colocado nas garrafas hidropônicas, com três réplicas para cada tratamento. Enquanto isso, uma solução salina-alcalina e água limpa são usadas como controles em branco e um composto de aminoácidos em pó (40% em pó, fornecido pela Chengdu Aohe Biotechnology Co., Ltda. em abril de 2019) e brassinosteroide 14-hidroxilado (Chengdu Newsun Crop Science Co., Ltda., 20190608) são usados como controles positivos, com 3 réplicas para cada grupo. 3. Consulte a Tabela 18 para o design do agente de tratamento. Tabela 18 Configurações de concentração de teste

[0118] A concentração do polissacarídeo de pólen é calculada pela concentração de polissacarídeos brutos. 4. Método de Investigação

[0119] O comprimento da raiz, a altura da planta, o peso fresco da raiz e o peso fresco das partes aéreas do trigo são investigados seis dias depois. Os resultados são mostrados na Tabela 19 e todos os dados na tabela são as médias. Tabela 19 Resultados medidos dos índices dos grupos de tratamento

[0120] De acordo com os dados acima, sob estresse da solução salina-alcalina, o comprimento da raiz e a altura da planta de trigo são obviamente inibidos, e o estresse para todos os grupos de tratamento é aliviado após a aplicação do polissacarídeo de pólen em diferentes concentrações. Dentre elas, 0,5 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito no alívio do estresse salino-alcalino, o qual é similar a 0,01 ppm de brassinosteroide 14-hidroxilado e significativamente superior ao controle positivo com aminoácidos.

[0121] Em conclusão, 0,125-1 ppm de polissacarídeo de pólen pode promover o comprimento da raiz e a altura da planta de trigo sob estresse salino-alcalino, aumentar o peso fresco da raiz e o peso fresco da parte aérea e aliviar os danos ao trigo sob estresse salino-alcaliN°. Sob as condições experimentais acima, 0,5 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito. Modalidade 8 1. Material Necessário Teste: Teste de bioatividade na melhoria da resistência à seca de mudas de pimenta pelo polissacarídeo de pólen Caso: Mudas de pimenta

[0122] Sementes de pimenta são semeadas em AOS, e mudas com 4 folhas são transplantadas para vasos de viveiro para o teste após a recuperação, com 1 planta em cada vaso. Mudas de pimenta com crescimento similar são selecionadas e regadas uniformemente para umedecer completamente o solo, e nenhuma rega é realizada a partir de então. 2. Método de Aplicação

[0123] Neste teste, são montados 6 grupos de tratamento (um controle em branco e um controle positivo), com 6 plantas para cada tratamento. Quando o solo de envasamento está seco, um agente de tratamento é pulverizado sobre as mudas de acordo com diferentes configurações, e a quantidade do agente de tratamento é apropriada para umedecer as plantas (cerca de 3 mL/planta). O tratamento de controle positivo é pulverizado com 80 ppm de um composto de aminoácidos em pó (40% em pó, fornecido pela Chengdu Aohe Biotechnology Co., Ltda. em abril de 2019) e 0,1 ppm de brassinosteroide 14-hidroxilado (Chengdu Newsun Crop Science Co., Ltda., 20190608), e o controle em branco é pulverizado com a mesma quantidade de água limpa. Durante o tratamento, os grupos não são irrigados até que haja estresse hídrico. 3. Consulte a Tabela 20 para o design do agente de tratamento. Tabela 20 Configurações de concentração de teste

[0124] A concentração do polissacarídeo de pólen é calculada pela concentração de polissacarídeos brutos. 4. Método de Investigação

[0125] Uma investigação é realizada quando o estresse ocorre em cada grupo de tratamento. Neste teste, uma condição óbvia de seca se desenvolve 11 dias após a aplicação do agente de tratamento. O índice de dano de mudas de pimenta é investigado e os resultados são mostrados na Tabela 22. O teor de prolina das mudas é medido por meio de amostragem e os resultados são mostrados na Tabela 23. Índice de danos =(1*S1+2*S2+3*S3+4*S4 +5*S5)/número total de plantas sob estresse hídrico

[0126] S n é o número de mudas no nível de dano correspondente.

[0127] Consulte a Tabela 21 para obter os critérios de classificação de danos. Tabela 21 Critérios de classificação de danos

Tabela 22 Grau de dano de diferentes grupos de tratamento

Tabela 23 Teor de prolina dos grupos de tratamento

[0128] É evidente a partir dos resultados na Tabela 22 que, sob estresse hídrico, a pulverização de 1-8 ppm de polissacarídeo de pólen exógeno pode aliviar o grau de dano às mudas de pimenta, dos quais 2 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito, o índice de dano às mudas é 2,00, o efeito é ligeiramente superior àquele do brassinosteroide 14-hidroxilado (2,17), obviamente superior àquele do controle com água limpa (4,00) e do controle positivo com aminoácidos (3,17). Fica evidente na Tabela 23 que a pulverização de 1-8 ppm de polissacarídeo de pólen exógeno pode aumentar o teor de prolina das mudas de pimenta e a concentração do polissacarídeo de pólen no grupo de tratamento com o incremento máximo de prolina é de 2 ppm, o que corresponde ao grau de dano às mudas de pimenta, ou seja, quanto maior o teor de prolina, menor o grau de dano às mudas.

[0129] Em conclusão, a pulverização da folhagem de 1-8 ppm de polissacarídeo de pólen antes de seca pode aumentar o acúmulo de prolina em mudas de pimenta, deste modo, melhorando a resistência à seca das plantas, dos quais 2 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito. Modalidade 9 1. Material Necessário Teste: Teste de bioatividade na melhoria da resistência a altas temperaturas de mudas de soja pelo polissacarídeo de pólen Caso: Mudas de soja

[0130] Sementes de soja são semeadas em tanques de cultura AOS com antecedência para criar mudas. Quando duas folhas principais crescem, mudas de soja com o mesmo crescimento são selecionadas e transplantadas para copos de viveiro. Quando três folhas compostas crescem a partir dos entrenós, as mudas são usadas para o teste. 2. Método de Aplicação

[0131] Neste teste, são montados 6 grupos de tratamento (um controle em branco e um controle positivo), com 6 plantas para cada tratamento. Um agente de tratamento é pulverizado sobre as mudas de acordo com diferentes configurações, e a quantidade do agente de tratamento é apropriada para umedecer as plantas (cerca de 3 mL/planta). O tratamento de controle positivo é pulverizado com 80 ppm de um composto de aminoácidos em pó (40% em pó, fornecido pela Chengdu Aohe Biotechnology Co., Ltda. em abril de 2019) e 0,1 ppm de brassinosteroide 14-hidroxilado (Chengdu Newsun Crop Science Co., Ltda., 20190608), e o controle em branco é pulverizado com a mesma quantidade de água limpa. O valor SPAD das folhas é medido antes de tratamento, então, as mudas são rejuvenescidas em temperatura ambiente durante 1 dia após a pulverização e colocadas em uma caixa de clima artificial 1 dia depois para tratamento em alta temperatura de 40°C. 3. Consulte a Tabela 24 para o design do agente de tratamento. Tabela 24 Configurações de concentração de teste

[0132] A concentração do polissacarídeo de pólen é calculada pela concentração de polissacarídeos brutos. 4. Método de Investigação

[0133] Os valores SPAD das folhas são medidos quando há diferenças entre os tratamentos, o nível de dano térmico é investigado e as fotos são tiradas como registro. Os critérios de classificação de danos causados térmico são mostrados na Tabela 25. Este teste mostra diferenças significativas após o tratamento em alta temperatura durante 3 dias. Os resultados dos grupos de tratamento são mostrados na Tabela 26 e na Tabela 27. Os valores na Tabela 26 são valores médios. Índice de danos =(1*S1+2*S2+3*S3+4*S4 +5*S5)/número total de plantas sob estresse de alta temperatura

[0134] S n é o número de mudas no nível de dano térmico correspondente Tabela 25 Critérios de classificação de dano térmico

Tabela 26 Valores SPAD antes e após estresse por alta temperatura em diferentes grupos de tratamento

Tabela 27 Grau de dano de diferentes grupos de tratamento

[0135] É evidente a partir dos resultados na Tabela 26 que, sob estresse de alta temperatura, a pulverização de 1-8 ppm de polissacarídeo de pólen exógeno pode retardar a diminuição do teor de clorofila das mudas de soja, deste modo, melhorando a resistência à alta temperatura das mudas, das quais 2 ppm polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito, com diminuição do SPAD de 4,4 e a diminuição do SPAD dos controles positivos com brassinosteroide 14-hidroxilado, o composto de aminoácidos em pó e o controle com água limpa sendo de 4,1, 8,1 e 8, respectivamente.

[0136] De acordo com a Tabela 27, pode-se observar, a partir dos fenótipos das mudas, que a pulverização de 1-8 ppm de polissacarídeo de pólen exógeno pode reduzir o índice de danos às mudas de soja, das quais 2 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito.

[0137] Em conclusão, a pulverização da folhagem com 1-8 ppm de polissacarídeo de pólen antes de alta temperatura pode reduzir o índice de danos às mudas de soja, retardando a diminuição do valor SPAD em um ambiente de alta temperatura, das quais 2 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito. Modalidade 10 1. Material Necessário Teste: Teste de bioatividade na melhoria da resistência ao frio de cítricos pelo polissacarídeo de pólen Caso: Cítricos, Ai Yuan 38

[0138] As árvores cítricas para este teste são árvores adultas, com uma densidade de plantio de cerca de 80 árvores/666,66 m2. O local experimental está localizado no condado de Pujiang, Chengdu. 2. Método de Aplicação

[0139] Árvores cítricas com crescimento e capacidade de produção de frutos similares são selecionadas como materiais de teste. As plantas inteiras são pulverizadas de acordo com diferentes configurações até que todas as folhas e frutos estejam umedecidos sem pingar, com uma árvore cítrica para cada tratamento. As frutas cítricas nos tratamentos não são ensacadas. 3. Consulte a Tabela 28 para o design do agente de tratamento. Tabela 28 Configurações de concentração de teste

[0140] A concentração do polissacarídeo de pólen é calculada pela concentração de polissacarídeos brutos. 4. Método de Investigação

[0141] Os agentes de tratamento são aplicados 3 vezes, a primeira vez antes de ensacamento dos cítricos e depois uma vez por semana e uma investigação é realizada após baixa temperatura ou quando o controle de água limpa mostra danos óbvios pela geada. Todos os frutos são coletados para investigar a taxa de congelamento e os teores de malondialdeído e prolina nas folhas dos cítricos. Os resultados são mostrados na Tabela 29 e na Tabela 30. Tabela 29 Configurações de concentração de teste

Tabela 30 Teor de prolina dos grupos de tratamento

[0142] Fica evidente a partir da Tabela 29 que, sem ensacamento, a maioria das frutas cítricas no controle com água limpa são congeladas, com uma taxa de congelamento de 91,78 %. A pulverização de 1-8 ppm de polissacarídeo de pólen exógeno pode reduzir a taxa de congelamento de frutas cítricas, das quais 4 ppm de polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito, com uma taxa de congelamento de 50,88 %, que tem um efeito próximo à pulverização de 0,1 ppm de brassinosteroide 14-hidroxilado (a taxa de congelamento das frutas cítricas é de 50,72 %), sendo obviamente superior ao controle com água limpa e ao controle positivo com aminoácidos. É evidente na Tabela 30 que a pulverização de 1-8 ppm de polissacarídeo de pólen exógeno pode aumentar o teor de prolina e diminuir o teor de malondialdeído das folhas cítricas, e o grupo de tratamento com o melhor efeito é consistente com aquele que tem a menor taxa de congelamento.

[0143] Em conclusão, a pulverização de 1-8 ppm de polissacarídeo de pólen exógeno pode aumentar o acúmulo de prolina nos cítricos e reduzir a produção de malondialdeído, de modo a melhorar a resistência ao frio dos cítricos e reduzir a taxa de congelamento dos cítricos, dos quais 4 ppm polissacarídeo de pólen tem o melhor efeito. Modalidade 11 1. Material Necessário Teste: Teste de bioatividade do efeito do polissacarídeo de pólen na resistência ao frio de botões de flores e frutos de macieira em baixa temperatura Caso: Maçã Fuji Local experimental: Condado de Wanrong, província de Shanxi 2. Método de Aplicação

[0144] Macieiras com crescimento similar são selecionadas como materiais de teste. Os botões florais das macieiras geralmente germinam de março a abril. Se a temperatura cair repentinamente durante este período, os botões das flores ficarão congelados e as flores cairão, o que afetará seriamente o rendimento das macieiras. A época de aplicação neste teste é o período de floração (13 de março de 2018) das macieiras. Um total de 6 grupos de tratamento são configurados, com 3 árvores para cada grupo de tratamento. De acordo com o design experimental, diferentes grupos de tratamento são pulverizados com o polissacarídeo de pólen em concentrações correspondentes, brassinosteroide 14-hidroxilado e composto de aminoácidos em pó são usados como controles positivos, e o controle em branco é pulverizado com a mesma quantidade de água limpa. As plantas inteiras são pulverizadas até que todas as folhas estejam umedecidas sem pingar. Em 6 de abril de 2018, ocorreu um dano de congelamento por baixa temperatura, a temperatura do solo caiu para cerca de -6°C e a temperatura abaixo de 0°C durou mais de 8 h. O polissacarídeo de pólen foi pulverizado três vezes antes da onda de frio, com um intervalo de 7 dias. Foi realizado o manejo unificado de água e fertilizantes. Um ramo com o mesmo número de botões florais foi selecionado em quatro direções de cada árvore em cada grupo de tratamento para marcação, e o número de botões florais em cada ramo foi contado antes da terceira aplicação. 3. Consulte a Tabela 31 para o design do agente de tratamento. Tabela 31 Configurações de concentração de teste

[0145] A concentração do polissacarídeo de pólen é calculada pela concentração de polissacarídeos brutos. 5. Método de Investigação

[0146] Após a onda de frio (9 de abril), o número total de botões florais nos ramos marcados de cada grupo de tratamento foi contado quando a temperatura subiu para calcular a taxa de queda de botões. Após a frutificação (9 de maio), o número de frutos que frutificaram nos ramos marcados foi investigado para calcular a taxa de frutificação. Número de CKJKXS foras ornes da enda de frio Número de botões foras «KS a crida de frio Taxa de queda de botões (%) = X100 % Número de balões foras emes da onda de frio

[0147] Os resultados são mostrados na Tabela 32. Os dados na tabela são o número total em todos os ramos em cada grupo de tratamento. Tabela 32 Configurações de concentração de teste

[0148] É evidente a partir da Tabela 32 que os botões florais das macieiras serão seriamente danificados após uma onda de frio durante o período de floração sem quaisquer medidas de proteção; como um resultado, um grande número de flores cai, com uma taxa de queda de botões de até 47,41%, o que também tem algum impacto sobre a posterior frutificação. A pulverização do polissacarídeo de pólen em diferentes concentrações pode aumentar a resistência das macieiras em condições adversas e reduzir a taxa de queda de botões até certo ponto. A pulverização de 4 ppm de polissacarídeo de pólen pode reduzir a taxa de queda de botões para 19,97% e permitir que a taxa de frutificação atinja 7,99%, o que tem um efeito próximo àquele do controle positivo com 0,1 ppm de brassinosteroide 14-hidroxilado e obviamente é superior ao controle com água limpa.

[0149] Em conclusão, a pulverização de 2-8 ppm de polissacarídeo de pólen antes da onda de frio pode reduzir significativamente os danos pela baixa temperatura aos botões florais e frutos de macieiras, reduzir a taxa de queda de botões e melhorar a taxa de frutificação, das quais 4 ppm de pólen polissacarídeo tem o melhor efeito.

Claims

1. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen, caracterizada pelo fato de que é para promover o crescimento de plantas, em que o extrato polissacarídico de pólen é preparado pelo seguinte método: misturar pólen de colza com água, depois aquecer e agitar para extração pelo menos uma vez, filtrar, misturar filtrados, adicionar quitosana a um filtrado resultante para obter um líquido a ser clarificado, manter o líquido a ser clarificado a 60-80 °C por pelo menos 1 h, esfriar e deixar repousar, e realizar a separação sólido-líquido para obter um líquido, a saber o extrato polissacarídico de pólen; em que a quitosana no líquido a ser clarificado tem uma concentração de 0,01-0,15% em peso; e a agitação é realizada a uma velocidade de 3000-4000 r/min a 60-70 °C durante 3-5 h durante cada extração.

2. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a água é água desmineralizada.

3. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o pólen de colza e a água são misturados em uma proporção em peso de 1:1,5-5 durante cada extração.

4. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o pólen de colza e a água são misturados em uma proporção em peso de 1:2.

5. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o aquecimento e a agitação são realizados para extração duas vezes.

6. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a quitosana no líquido a ser clarificado tem uma concentração de 0,05-0,1 % em peso.

7. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a quitosana no líquido a ser clarificado tem uma concentração de 0,08% em peso.

8. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o líquido a ser clarificado é mantido a 70°C durante uma hora.

9. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a promoção do crescimento de plantas refere-se à promoção do crescimento de raízes de plantas.

10. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o extrato polissacarídico de pólen é aplicado às raízes de uma planta quando em uso, e a planta é trigo.

11. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a promoção do crescimento de plantas refere-se à promoção do crescimento de caules e folhas de plantas.

12. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o extrato polissacarídico de pólen é pulverizado em folhas de plantas ou aplicado em raízes de plantas quando em uso.

13. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para13. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que a planta é um vegetal ou uma árvore frutífera.

14. Aplicação de um extrato polissacarídico de pólen para promover o crescimento de plantas, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que a planta é repolho Chinês bebê, alface aspargo, alface, repolho Chinês, frutas cítricas, kiwi, cereja ou maçã.