BR112021019998B1 - 4h-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona, seus usos, composição farmacêutica, e kit de partes - Google Patents

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Abstract

compostos 4h-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona presente invenção refere-se a compostos de fórmula (i) processos para a sua produção e sua utilização como produtos farmacêuticos.

Description

Campo de aplicação da invenção
[0001] A invenção se refere a compostos substituídos de 4H- pirrolo [3,2-c]piridin-4-ona, um processo para a sua produção e seus usos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[0002] A família da tirosina cinase do receptor do fator de crescimento epidérmico (receptor EGFR ou receptor do EGF) consiste em 4 membros: EGFR (Erbb1, Her1), ERBB2 (Her2), ERBB3 (Her3) e ERBB4 (Her4). O EGFR media a ativação das vias de sinalização MAPK e PI3K e, portanto, regula a proliferação, diferenciação, migração e sobrevivência celular (Pao et al., 2010). A amplificação, superexpressão e mutações do gene do EGFR são frequentemente observadas em várias indicações de câncer e estão associadas a um prognóstico ruim (Gridelli et al., 2015).
[0003] No adenocarcinoma de pulmão, as mutações do EGFR são prevalentes em aproximadamente 15 % dos pacientes ocidentais e até 50 % dos pacientes do Leste Asiático (Paez et al., 2004). Essas mutações ocorrem normalmente em um dos quatro éxons, éxons 1821, no domínio de cinase do EGFR (Paez et al., 2004). As mutações de ativação mais comuns no EGFR são uma mutação pontual no éxon 21, substituindo uma arginina por uma leucina (L858R) e uma pequena deleção no quadro no éxon 19 que remove quatro aminoácidos (del 19/del746-750) (Pao et al., 2010). Os inibidores aprovados pela FDA gefitinibe, erlotinibe e afatinibe, visando mutações nos éxons 18, 19 e 21 do EGFR, são eficazes em pacientes, porém, a resposta geralmente não é durável (Mok et al., 2009; Sequist et al., 2013). A resistência ocorre frequentemente nesses pacientes em resposta à aquisição de uma segunda mutação, T790M (Pao et al., 2005). Inibidores de segunda geração, por exemplo, o afatinibe, irreversivelmente, tem como alvo essa mutação, porém, ainda são inibidores potentes do EGFR tipo selvagem, levando à toxicidade limitante da dose e falta de eficácia em pacientes. Um inibidor irreversível de terceira geração, osimertinibe, que maximiza a atividade para T790M enquanto minimiza a atividade para EGFR tipo selvagem, é eficaz em pacientes mutantes T790M e é atualmente o tratamento padrão para pacientes T790M positivos (Mok et al., 2017). O osimertinibe também foi aprovado como terapia de primeira linha para pacientes com mutações nos éxons 19 ou 21 do EGFR (Soria et al., 2018).
[0004] No entanto, os pacientes também desenvolvem resistência aos inibidores irreversíveis do EGFR de terceira geração, como o osimertinibe. Um dos principais mecanismos de resistência ao osimertinibe identificados é a mutação da cisteína na posição 797 para uma serina, resultando na perda da cisteína de interação covalente e perda de sensibilidade aos inibidores irreversíveis de EGFR, ponto em que os pacientes em progresso têm atualmente apenas opções de tratamento limitadas (Thress et al., 2015; Oxnard et al., 2018). Essas mutações C797S também podem ocorrer quando o osimertinibe é usado como uma terapia de primeira linha, na ausência da mutação T790M (Ramalingham et al., 2018a; Ramalingham et al., 2018b). Uma nova terapia direcionada que é capaz de abordar especificamente a mutação de resistência adquirida EGFR-C797S seria altamente benéfica para esses pacientes.
[0005] Por outro lado, e com exceção de A763_Y764insFQEA,pequenas inserções in-frame do exon20 de EGFR são resistentes a todos os inibidores de EGFR clinicamente aprovados em doses alcançáveis em pacientes com câncer de pulmão e compreendem uma necessidade médica não atendida (Yasuda et. Al., 2013).
[0006] Pacientes com inserções de exon20 de EGFR, como V769_ D770insASV, D770_N771insSVD, D770_N771insNPG, N771_P772 insH, H773_V774insH, H773_V774insNPH, V774_C775insHV mostram taxas de resposta particularmente baixas para todas as terapias direcionadas ao EGFR atualmente aprovadas, resultando em sobrevida livre de progressão significativamente reduzida, bem como sobrevida global (Chen et al., 2016). Isso foi demonstrado para os inibidores de primeira geração erlotinibe e gefitinibe, bem como para o inibidor de segunda geração afatinibe (Chen et al., 2016; Yang et al., 2015).
[0007] Portanto, o tratamento padrão para pacientes com inserção do exon20 de EGFR é atualmente a quimioterapia.
[0008] O mesmo perfil de resistência foi observado para mutações de inserção do exon20 em ERBB2 (por exemplo, ERBB2 A775_G776 insYVMA com a prevalência mais alta), outro membro da família de receptores do EGF (Arcila et al., 2012) e algumas das mutações do EGFR incomuns como L681Q (Chiu et al., 2015).
[0009] Vários inibidores irreversíveis estão atualmente em ensaios clínicos para o tratamento de pacientes com inserção do exon20 do EGFR: Osimertinibe, inicialmente aprovado para o tratamento de pacientes com NSCLC mutante T790M (Floc'h et al., 2018); poziotinibe (HM-781-36B), um inibidor de pan-Her não aprovado direcionado ao EGFR, Her2/neu e Her4 (Robichaux et al., 2018); bem como TAK-788 (AP32788) (Doebele et al., ASCO 2018). Destes, os primeiros dados clínicos foram publicados para poziotinibe e TAK-788. Ambos os compostos mostram claramente eficácia clínica em pacientes com inserção do exon20 do EGFR. No entanto, os principais eventos adversos, mediados pela inibição do EGFR tipo selvagem, foram relatados para ambos os ensaios clínicos e esses eventos adversos podem limitar a utilidade clínica.
[0010] Mais recentemente, novos dados pré-clínicos foram publicados para dois compostos adicionais que mostram atividade em inserções de exon20 do EGFR: TAS6417 (TCP-064) e composto 1a (Hasako et al., 2018; Jang et al., 2018). Ainda não há resultados clínicos disponíveis para esses dois compostos.
[0011] Em resumo, o EGFR mutante é um alvo promissor para a terapia do câncer. Em particular, os pacientes com resistência primária às terapias anti-EGFR aprovadas, devido às inserções do exon20 do EGFR, têm apenas algumas opções de tratamento até o momento e há uma grande necessidade de novas alternativas e/ou terapias melhoradas para fornecer a esses pacientes uma terapia eficaz, bem tolerável (Oxnard et al., 2013). Portanto, os inibidores potentes do EGFR mutante, particularmente do EGFR mutante com mutações de inserção do exon20 que mostram seletividade melhorada em relação ao EGFR do tipo selvagem, representam compostos valiosos que devem complementar as opções terapêuticas como agentes únicos ou em combinação com outros fármacos.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0012] A invenção fornece compostos que inibem um EGFR mutante; especificamente, um EGFR compreendendo uma ou mais mutações de inserção do éxon 20, uma mutação do L858R ou uma pequena deleção in-frame do éxon 19, na presença ou ausência de uma mutação C797S. Além disso, esses compostos têm atividade reduzida em relação ao EGFR tipo selvagem.
[0013] Verificou-se agora que os compostos da presente invenção têm propriedades surpreendentes e vantajosas.
[0014] Em particular, verificou-se surpreendentemente que os referidos compostos da presente invenção inibem eficazmente o EGFR mutante com mutações de inserção do éxon 20, particularmente aquelas que abrigam uma inserção do éxon 20 de SVD D770_N771ins com uma IC50 inferior a 5 nM. Além disso, verificou-se que estes compostos apresentam adicionalmente potência celular abaixo de 1 μM na inserção do éxon 20 de EGFR V769_D770insASV, D770_N771insSVD, D770_N771insNPG, N771_P772insH ou H773_V774insNPH que abriga linhagens celulares BA/F3. Além disso, os compostos aqui descritos são ativos em linhagens celulares BA/F3 que abrigam D770 _N771insSVD C797S. Além disso, os compostos aqui descritos inibem potentemente a proliferação de linhagens celulares BA/F3 portadoras de mutações de ativação de EGFR com ou sem mutações de resistência adquiridas C797S (EGFR E746_A750del, L858R, E746_ A750del C797S, L858R C797S),mutações do EGFR incomuns (EGFR20 L681Q) ou inserção do exon20 do ERBB2 A775_G776ins YVMA.
[0015] Surpreendentemente, esses compostos apresentam, adicionalmente, seletividade de pelo menos 5 vezes em um ensaio antiproliferativo de inserção do éxon 20 de EGFR D770_N771ins SVD que abriga linhagens celulares BA/F3 versus EGFR tipo selvagem que abriga células BA/F3 e pode, portanto, ser usado para o tratamento ou profilaxia de doenças de crescimento celular descontrolado, proliferação e/ou sobrevivência, respostas imunes celulares inadequadas ou respostas inflamatórias celulares inadequadas ou doenças que são acompanhadas por crescimento celular descontrolado, proliferação e/ou sobrevivência, respostas imunes celulares inadequadas ou respostas inflamatórias celulares inadequadas mediadas por mutantes do EGFR com mutações de inserção do éxon 20 e/ou redução (ou bloqueio) da proliferação em células que abrigam mutações de inserção do éxon 20 do EGFR, por exemplo, tumores hematológicos, tumores sólidos e/ou metástases dos mesmos, por exemplo leucemias e síndrome mielodisplásica, linfomas malignos, tumores de cabeça e pescoço, incluindo tumores cerebrais e metástases cerebrais, tumores do tórax incluindo tumores pulmonares de células não pequenas e de células pequenas, tumores gastrointestinais, tumores endócrinos, tumores mamários e outros tumores ginecológicos, tumores urológicos incluindo tumores renais, da bexiga e da próstata, tumores de pele e sarcomas e/ou suas metástases.
Descrição da invenção
[0016] De acordo com um primeiro aspecto, a invenção se refere a compostos de Fórmula (I), em que: R1 representa metila, etila, trifluorometila, 2,2-difluoroetila, ciano, cloro, bromo, metóxi ou difluorometóxi; R2 representa hidrogênio, metila, etila, flúor, cloro ou bromo; R3 representa hidrogênio ou flúor; R4 representa hidrogênio ou metila; R5 independentemente em cada ocorrência representa hidrogênio, trifluorometila ou C1-C3 alquila, R5 sendo ligado a qualquer átomo de carbono do anel; R6 independentemente em cada ocorrência representa hidrogênio, C1-C3-alquila ou C1-C3-haloalquila; R7 representa C1-C3-alquila ou C2-C3-haloalquila; R8 representa C1-C3-alquila ou C2-C3-haloalquila; X representa NR7 ou O; Y representa NR8 ou O; m representa 0, 1, 2 ou 3; n representa 0 ou 1; ou um N-óxido, um sal ou um tautômero do referido composto, ou um sal do referido N-óxido ou tautômero. Em algumas modalidades, pelo menos dois grupos R5 são grupos geminais (isto é, ligados ao mesmo átomo de carbono).
[0017] Em um segundo aspecto, a invenção se refere a compostos de Fórmula (I) como descrito supra, em que: R1 representa metila, etila, cloro, metóxi ou difluorometóxi; R2 representa metila, etila, flúor ou cloro; R3 representa hidrogênio ou flúor; R4 representa hidrogênio ou metila; R5 representa hidrogênio, metila ou trifluorometila, R5 sendo ligado a qualquer átomo de carbono do anel; R6 representa hidrogênio, metila ou trifluorometila; R7 representa C1-C2-alquila ou C2-C3-fluoroalquila; R8 representa C1-C2-alquila ou C2-C3-fluoroalquila; X representa NR7 ou O; Y representa NR8 ou O; m representa 0, 1 ou 2; n representa 0 ou 1; ou um N-óxido, um sal ou um tautômero do referido composto, ou um sal do referido N-óxido ou tautômero.
[0018] Em um terceiro aspecto, a invenção se refere a compostos de Fórmula (I) como descrito supra, em que: R1 representa metila, etila, cloro ou metóxi; R2 representa, flúor ou cloro; R3 representa hidrogênio ou flúor; R4 representa hidrogênio; R5 representa hidrogênio ou metila, R5 sendo ligado a qualquer átomo de carbono do anel; R6 representa hidrogênio; R7 representa metila; R8 representa metila, 2,2,2-trifluoroetila ou 2,2-difluoro- etila; X representa NR7 ou O; Y representa NR8 ou O; m representa 0, 1, ou 2; n representa 0 ou 1; ou um N-óxido, um sal ou tautômero do referido composto, ou um sal do referido N-óxido ou tautômero.
[0019] Em um quarto aspecto, a invenção se refere a compostos de Fórmula (I) como descrito supra, que é selecionado a partir do grupo que consiste em: 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-3-(3-fluoro-2-metoxianilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2- metoxianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2- metoxianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(2,3-dicloroanilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-1,5,6,7- tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(2,3-dicloroanilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(2,3-dicloroanilino)-2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4- il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2R)-4-metilmorfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2R)-4-metilmorfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[4-metilmorfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-4-(2,2-difluoroetil)morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro- 2-metoxianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-(2,2,2-trifluoroetil)morfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[2-(4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{2-[(2R)-1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{2-[(2S)-1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-(2,2,2- trifluoroetil)morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H- pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2- il)metóxi]piridin-4-il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2R)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2R)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2- metoxianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2- metoxianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{2-[(2R)-1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2- metoxianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{2-[(2S)-1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2- metoxianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-3-(3-fluoro-2- metilanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2- metilanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluoroanilino]-2-{3-[(1,4-dioxan-2- il)metóxi]piridin-4-il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluoroanilino]-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2- il)metóxi]piridin-4-il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2R)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-3-(3-fluoro-2-metilanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-metilanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-metilanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-1,5,6,7- tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{1-[1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{(1S)-1-[(2S)-1,4-dioxan-2- il]etóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{(1S)-1-[(2R)-1,4-dioxan-2- il]etóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{(1R)-1-[(2S)-1,4-dioxan-2- il]etóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{(1R)-1-[(2R)-1,4-dioxan-2- il]etóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metilanilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluoroanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluoroanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluoroanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3- fluoroanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2R)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3- fluoroanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3- fluoroanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({1-[4-metilmorfolin-2-il]etil}óxi)piridin-4- il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({(1R)-1-[(2R)-4-metilmorfolin-2- il]etil}óxi)piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({(1S)-1-[(2S)-4-metilmorfolin-2- il]etil}óxi)piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({(1R)-1-[(2S)-4-metilmorfolin-2- il]etil}óxi)piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({(1S)-1-[(2R)-4-metilmorfolin-2- il]etil}óxi)piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[0020] Um outro aspecto da invenção se refere a compostos de Fórmula (I), que estão presentes como seus sais.
[0021] Deve ser entendido que a presente invenção se refere a qualquer subcombinação dentro de qualquer modalidade ou aspecto da presente invenção de compostos de Fórmula Geral (I), supra.
[0022] Mais particularmente ainda, a presente invenção abrange compostos de Fórmula Geral (I) que são descritos na seção de Exemplos deste texto, infra.
[0023] De acordo com outro aspecto, a presente invenção abrange métodos de preparação de compostos da presente invenção, tais métodos compreendendo as etapas conforme descrito na Seção Experimental deste documento.
[0024] Outra modalidade da invenção são compostos de acordo com descrito na seção das Reivindicações ou análogos descritos dos compostos exemplificados e suas subcombinações.
Definições
[0025] Deve ser entendido que as modalidades descritas neste documento não devem ser entendidas como modalidades individuais que não se relacionariam umas com as outras. As características discutidas com uma modalidade, ou aspecto da invenção devem ser descritas também em conexão com outras modalidades ou aspectos da invenção aqui mostrados. Se, em um caso, um aspecto específico não for descrito com uma modalidade, ou aspecto da invenção, porém, com outro, a pessoa versada entenderia que isso não significa necessariamente que o referido aspecto não se destina a ser descrito com a referida outra modalidade ou aspecto da invenção. O versado na técnica entenderia que é a essência deste pedido divulgar o referido aspecto também para a outra modalidade ou aspecto da invenção, porém, isso apenas para fins de clareza e para manter o comprimento desta especificação gerenciável. Por exemplo, deve ser entendido que todos os aspectos, modalidades, composições farmacêuticas, combinações, usos e/ou métodos da presente invenção aqui definidos para os compostos de Fórmula (I) também se referem a modalidades mais específicas dos compostos de Fórmula (I), tais como, porém, não se limitando a, compostos de Fórmula (Ia) e vice- versa, por exemplo.
[0026] Deve ainda ser entendido que o conteúdo dos documentos aqui referidos é incorporado por referência na sua totalidade, por exemplo, para fins de habilitação, nomeadamente quando, por exemplo, um método é discutido, cujos detalhes são descritos no referido documento. Esta abordagem serve para manter o comprimento desta especificação gerenciável.
[0027] Os constituintes, que são opcionalmente substituídos conforme indicado neste documento, podem ser substituídos, a menos que indicado de outra forma, uma ou mais vezes, independentemente um do outro em qualquer posição possível. Quando qualquer variável ocorre mais de uma vez em qualquer constituinte, cada definição é independente. Por exemplo, quando R1, R1a, R1b, R1c, R2, R3 e/ou R4 ocorrem mais de uma vez em qualquer composto de Fórmula (I), cada definição de R1, R1a, R1b, R1c, R2, R3 e R4 é independente.
[0028] Caso um constituinte seja composto por mais de uma parte, por exemplo, C1-C4-alcóxi-C2-C4-alquila, a posição de um possível substituinte pode estar em qualquer uma dessas partes em qualquer posição adequada. Um hífen no início ou no final do constituinte marca o ponto de ligação ao restante da molécula. Se um anel for substituído, o substituinte pode estar em qualquer posição adequada do anel, também em um átomo de nitrogênio do anel, se adequado.
[0029] O termo "compreendendo" quando usado na especificação inclui "consistindo em".
[0030] Se for referido como "conforme mencionado acima" ou "mencionado acima", "supra" na descrição, é referido a qualquer uma das descrições feitas dentro do relatório descritivo em qualquer uma das páginas anteriores.
[0031] Se for referido como "conforme mencionado neste documento", "descrito neste documento", "fornecido neste documento" ou "conforme mencionado no presente texto," ou "declarado neste documento" na descrição, será referido a qualquer uma das descrições feitas dentro da especificação em qualquer uma das páginas anteriores ou subsequentes.
[0032] "Adequado" no sentido da invenção significa quimicamente possível ser feito por métodos dentro do conhecimento de uma pessoa versada.
[0033] Os termos mencionados no presente texto podem ter os seguintes significados:
[0034] O termo "átomo de halogênio", "halo-" ou "Hal-" deve ser entendido como significando um átomo de flúor, cloro, bromo ou iodo.
[0035] O termo "C1-C6-alquila" deve ser entendido como significando um grupo hidrocarboneto linear ou ramificado, saturado, monovalente com 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono, por exemplo, uma metila, etila, propila, butila, pentila, hexila, iso-propila, iso-butila, sec-butila, terc-butila, iso-pentila, 2-metilbutila, 1-metilbutila, 1-etilpropila, 1,2-dimetilpropila, neo-pentila, 1,1-dimetilpropila, 4-metilpentila, 3-metilpentila, 2-metilpentila, 1-metilpentila, 2-etilbutila, 1- etilbutila, 3,3-dimetilbutila, 2,2-dimetilbutila, 1,1 grupo -dimetilbutila, 2,3-dimetilbutila, 1,3-dimetilbutila ou 1,2-dimetilbutila, ou seu isômero. Particularmente, o referido grupo tem 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono ("C1-C4-alquila"), por exemplo, um grupo metila, etila, propila, butila, iso-propila, iso-butila, sec-butila, terc-butila, mais particularmente 1, 2 ou 3 átomos de carbono ("C1-C3-alquila"), por exemplo, um grupo metila, etila, n-propila ou iso-propila.
[0036] O termo "C1-C4-haloalquila" deve ser entendido como significando um grupo hidrocarboneto monovalente linear ou ramificado, saturado, no qual o termo "C1-C4-alquila" é definido supra, e no qual um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos por um átomo de halogênio, de forma idêntica ou diferente, isto é, um átomo de halogênio sendo independente do outro. Particularmente, o referido átomo de halogênio é F. O referido grupo C1-C4-haloalquila é, por exemplo, -CF3, -CHF2, -CH2F, -CF2CF3, -CH2CH2F, -CH2CHF2, -CH2CF3, -CH2CH2CF3 ou -CH(CH2F)2.
[0037] O termo "C2-C3-fluoroalquila" deve ser entendido como significando um grupo hidrocarboneto monovalente linear ou ramificado, saturado, no qual o termo "C2-C3-alquila" é definido supra, e no qual um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos por um átomo de flúor. O referido grupo C2-C3 fluoroalquila é, por exemplo, - CF2CF3, -CH2CH2F, -CH2CHF2, -CH2CF3, -CH2CH2CF3 ou -CH(CH2F)2.
[0038] O termo "C1-C4-alcóxi" deve ser entendido como significando um grupo hidrocarboneto linear ou ramificado, saturado, monovalente, de Fórmula -O-alquila, em que o termo "alquila" é definido supra, por exemplo, um grupo metóxi, etóxi, n-propóxi, iso- propóxi, n-butóxi, iso-butóxi, terc-butóxi ou sec-butóxi, ou um isômero do mesmo.
[0039] A menos que definido de outra forma, o termo "heterocicloalquila de 5 a 6 membros" ou "anel heterocíclico de 5 a 6 membros" deve ser entendido como significando um anel de hidrocarboneto monocíclico monovalente saturado que contém 4 ou 5 átomos de carbono, e um grupo contendo heteroátomo selecionado dentre O e NR, em que R significa um átomo de hidrogênio, um grupo C1-C3 alquila ou uma C1-C3 haloalquila, sendo possível para o referido grupo heterocicloalquila ser ligado ao restante da molécula por meio de qualquer um dos átomos de carbono. Particularmente, sem estar limitado a isso, o referido heterocicloalquila pode ser um anel de 5 membros, como tetra-hidrofuranila, pirazolidinila, ou um anel de 6 membros, como tetra-hidropiranila, piperidinila, por exemplo.
[0040] O termo "C1-C6", conforme usado ao longo deste texto, por exemplo, no contexto da definição de "C1-C6-alquila" ou "C1-C6-haloal- quila" deve ser entendido como significando um grupo alquila com um número finito de átomos de carbono de 1 a 6, isto é, 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono. Deve ser entendido ainda que o referido termo "C1-C6" deve ser interpretado como qualquer subintervalo compreendido no mesmo, por exemplo, C1-C6, C2-C6, C3-C6, C1-C2, C1C3, particularmente C1-C2, C1-C3, C1-C4.
[0041] O termo "C1-C4", conforme usado ao longo deste texto, por exemplo, no contexto da definição de "C1-C4-alquila", "C1-C4-haloal- quila", "C1-C4-alcóxi" ou "C1-C4-haloalcóxi" deve ser entendido como significando um grupo alquila tendo um número finito de átomos de carbono de 1 a 4, isto é, 1, 2, 3 ou 4 átomos de carbono. Deve ser entendido ainda que o referido termo "C1-C4" deve ser interpretado como qualquer subintervalo compreendido no mesmo, por exemplo, C1-C4, C2-C4, C3-C4, C1-C2, C1-C3, particularmente C1-C2, C1-C3, C1-C4, no caso de "C1-C6-haloalquila" ou "C1-C4-haloalcóxi"ainda mais particularmente C1-C2.
[0042] Além disso, conforme usado neste documento, o termo "C3C6", conforme usado ao longo deste texto, por exemplo, no contexto da definição de "C3-C6-cicloalquila", deve ser entendido como significando um grupo cicloalquila com um número finito de átomos de carbono de 3 a 6, isto é, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono. Deve ser entendido ainda que o referido termo "C3-C6" deve ser interpretado como qualquer subintervalo compreendido no mesmo, por exemplo, C3-C6, C4-C5, C3-C5, C3-C4, C4-C6, C5-C6; particularmente C3-C6.
[0043] O termo "substituído" significa que um ou mais hidrogênios no átomo designado são substituídos por uma seleção do grupo indicado, desde que a valência normal do átomo designado nas circunstâncias existentes não seja excedida e que a substituição resulte em um composto estável. Combinações de substituintes e/ou variáveis são permitidas apenas se tais combinações resultarem em compostos estáveis.
[0044] O termo "opcionalmente substituído" significa substituição opcional com os grupos, radicais ou porções especificados.
[0045] Substituinte do sistema de anel significa um substituinte ligado a um sistema de anel aromático ou não aromático que, por exemplo, substitui um hidrogênio disponível no sistema de anel.
[0046] Quando aqui usado, o termo "um ou mais", por exemplo, na definição dos substituintes dos compostos das Fórmulas gerais da presente invenção, é entendido como significando "um, dois, três, quatro, cinco, etc. particularmente um, dois, três ou quatro, mais particularmente um, dois ou três, ainda mais particularmente um ou dois ".
[0047] Os compostos de Fórmula Geral (I) podem existir como variantes isotópicas. A invenção inclui, portanto, uma ou mais variante(s) isotópica(s) dos compostos de Fórmula Geral (I), particularmente compostos contendo deutério de Fórmula Geral (I).
[0048] O termo "variante isotópica" de um composto ou reagente é definido como um composto que exibe uma proporção não natural de um ou mais dos isótopos que constituem tal composto.
[0049] O termo "variante isotópica do composto de Fórmula Geral (I)" é definido como um composto de Fórmula Geral (I) exibindo uma proporção não natural de um ou mais dos isótopos que constituem tal composto.
[0050] A expressão "proporção não natural" deve ser entendida como significando uma proporção de tal isótopo que é maior do que sua abundância natural. As abundâncias naturais de isótopos a serem aplicadas neste contexto são descritas em "Isotopic Compositions of Elements 1997", Pure Appl. Chem., 70(1), 217-235, 1998. Exemplos de tais isótopos incluem isótopos estáveis e radioativos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, enxofre, flúor, cloro, bromo e iodo, tais como 2H (deutério), 3H (trício), 11C, 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 32P, 33P, 33S, 34S, 35S, 36S, 18F, 36Cl, 82Br, 123I, 124I, 125I, 129I e 131I, respectivamente.
[0051] No que diz respeito ao tratamento e/ou profilaxia dos distúrbios aqui especificados, a(s) variante(s) isotópica(s) dos compostos de Fórmula Geral (I) em uma modalidade, contêm deutério ("compostos contendo deutério de Fórmula Geral (I)"). Variantes isotópicas dos compostos de Fórmula Geral (I) em que um ou mais isótopos radioativos, tais como 3H ou 14C, são incorporados, são úteis, por exemplo, em estudos de distribuição de fármaco e/ou tecido de substrato. Estes isótopos são particularmente preferidos pela facilidade de sua incorporação e detectabilidade. Isótopos emissores de pósitrons, como 18F ou 11C, podem ser incorporados em um composto de Fórmula Geral (I). Estas variantes isotópicas dos compostos de Fórmula Geral (I) são úteis para aplicações de imagem in vivo. Os compostos contendo deutério e contendo 13C de Fórmula Geral (I) podem ser usados em análises de espectrometria de massa (H. J. Leis et al., Curr. Org. Chem., 1998, 2, 131) no contexto de estudos pré-clínicos ou clínicos.
[0052] Variantes isotópicas dos compostos de Fórmula Geral (I) podem geralmente ser preparadas por métodos conhecidos por alguém versado na técnica, tais como aqueles descritos nos esquemas e/ou exemplos aqui, substituindo um reagente por uma variante isotópica do referido reagente, em uma modalidade, para um reagente contendo deutério. Dependendo dos sítios de deuteração desejados, em alguns casos, o deutério de D2O pode ser incorporado diretamente nos compostos ou em reagentes que são úteis para a síntese de tais compostos (Esaki et al., Tetrahedron, 2006, 62, 10954;Esaki et al., Chem. Eur. J., 2007, 13, 4052). O gás deutério também é um reagente útil para incorporar o deutério às moléculas. A deuteração catalítica de ligações olefínicas (HJ Leis et al., Curr. Org. Chem., 1998, 2, 131; JR Morandi et al., J. Org. Chem., 1969, 34 (6), 1889) e ligações acetilênicas (NH Khan, J. Am. Chem. Soc., 1952, 74 (12), 3018; S. Chandrasekhar et al., Tetrahedron, 2011, 52, 3865) é uma via rápida para a incorporação de deutério. Catalisadores de metal (isto é, Pd, Pt e Rh) na presença de gás deutério podem ser usados para trocar diretamente deutério por hidrogênio em grupos funcionais contendo hidrocarbonetos (J. G. Atkinson et al., Patente Norte-americana 3966781). Uma variedade de reagentes deuterados e blocos de construção sintéticos estão comercialmente disponíveis em empresas como, por exemplo, C/D/N Isotopes, Quebec, Canada; Cambridge Isotope Laboratories Inc., Andover, MA, USA; e CombiPhos Catalists, Inc., Princeton, NJ, USA. Outra informação no estado da técnica com respeito à troca de deutério-hidrogênio é dada, por exemplo, em Hanzlik et al., J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990; R. P. Hanzlik et al., Biochem. Biofis. Res. Commun. 160, 844, 1989; P. J. Reider et al., J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987; M. Jarman et al., Carcinogenesis 16(4), 683-688, 1993; J. Atzrodt et al., Angew. Chem., Int. Ed. 2007, 46, 7744; K. Matoishi et al., J. Chem. Soc, Chem. Commun. 2000, 1519-1520; K. Kassahun et al., WO2012/112363.
[0053] O termo "composto contendo deutério de Fórmula Geral (I)" é definido como um composto de Fórmula Geral (I), em que um ou mais átomo(s) de hidrogênio é/são substituídos por um ou mais átomo(s) de deutério e em que a abundância de deutério em cada posição deuterada do composto de Fórmula Geral (I) é maior do que a abundância natural de deutério, que é cerca de 0,015 %.Particularmente, em um composto contendo deutério de Fórmula Geral (I), a abundância do deutério em cada posição deuterada do composto de Fórmula Geral (I) é superior a 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 % ou 80 %, em uma modalidade, superior a 90 %, 95 %, 96 % ou 97 %, em outras modalidades superior a 98 % ou 99 % na(s) referida(s) posição(ões). Entende-se que a abundância de deutério em cada posição deuterada é independente da abundância de deutério em outra(s) posição(ões) deuterada(s).
[0054] A incorporação seletiva de um ou mais átomo(s) de deutério em um composto de Fórmula Geral (I) pode alterar as propriedades físico-químicas (como, por exemplo, acidez [A. Streitwieser et al., J. Am. Chem. Soc., 1963, 85, 2759; C. L. Perrin, et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129, 4490], basicidade [C. L. Perrin, et al., J. Am. Chem. Soc., 2003, 125, 15008; C. L. Perrin in Advances in Physical Organic Chemistry, 44, 144; C. L. Perrin et al., J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 9641], lipofilicidade [B. Testa et al., Int. J. Pharm., 1984, 19(3), 271]) e/ou o perfil metabólico da molécula e pode resultar em alterações na proporção do composto origem para metabólitos ou nas quantidades de metabólitos formados. Tais mudanças podem resultar em certas vantagens terapêuticas e, portanto, podem ser preferidas em algumas circunstâncias. Taxas reduzidas de metabolismo e troca metabólica, onde a proporção de metabólitos é alterada, foram relatadas (D. J. Kushner et al., Can. J. Physiol. Pharmacol., 1999, 77, 79; A. E. Mutlib et al., Toxicol. Appl. Pharmacol., 2000, 169, 102). Essas mudanças na exposição ao fármaco origem e metabólitos podem ter consequências importantes no que diz respeito à farmacodinâmica, tolerabilidade e eficácia de um composto contendo deutério de Fórmula Geral (I). Em alguns casos, a substituição de deutério reduz ou elimina a formação de um metabólito indesejado ou tóxico e aumenta a formação de um metabólito desejado (por exemplo, Nevirapine: A. M. Sharma et al., Chem. Res.Toxicol., 2013, 26, 410; Uetrecht et al., Chemical Research in Toxicology, 2008, 21, 9, 1862; Efavirenz: A. E. Mutlib et al., Toxicol. Appl. Pharmacol., 2000, 169, 102). Em outros casos, o principal efeito da deuteração é reduzir a taxa de depuração sistêmica. Como resultado, a meia-vida biológica do composto é aumentada. Os benefícios clínicos potenciais incluiriam a capacidade de manter uma exposição sistêmica semelhante com níveis de pico diminuídos e níveis de vale aumentados. Isso pode resultar em efeitos colaterais mais baixos e eficácia realçada, dependendo da relação farmacocinética/farmacodinâmica do composto específico. Indiplon (A. J. Morales et al., Abstract 285, The 15t Nort American Meeting do International Society of Xenobiotics, San Diego, CA, October 12-16, 2008), ML-337 (C. J. Wentur et al., J. Med. Chem., 2013, 56, 5208), e Odanacatibe (K. Kassahun et al.,WO2012/112363) são exemplos para este efeito de deutério. Ainda outros casos foram relatados nos quais as taxas reduzidas do metabolismo resultam em um aumento na exposição ao fármaco sem alterar a taxa de depuração sistêmica (por exemplo, Rofecoxib: F. Schneider et al., Arzneim. Forsch. Drug. Res., 2006, 56, 295;Telaprevir: F. Maltais et al., J. Med. Chem., 2009, 52, 7993). Os fármacos deuterados que mostram este efeito podem ter requisitos de dosagem reduzidos (por exemplo, menor número de doses ou dosagem mais baixa para atingir o efeito desejado) e/ou podem produzir cargas de metabólitos mais baixas.
[0055] Um composto de Fórmula Geral (I) pode ter vários locais potenciais de ataque para o metabolismo. Para otimizar os efeitos descritos acima nas propriedades físico-químicas e no perfil metabólico, compostos contendo deutério de Fórmula Geral (I) tendo um certo padrão de uma ou mais trocas de deutério-hidrogênio podem ser selecionados. Particularmente, o(s) átomo(s) de deutério do(s) composto(s) contendo deutério de Fórmula Geral (I) está(estão) ligado(s) a um átomo de carbono e/ou está(estão) localizado(s) nas posições do composto de Fórmula Geral (I), que são sítios de ataque para metabolizar enzimas, como por exemplo citocromo P450.
[0056] Onde a forma plural da palavra compostos, sais, polimorfos, hidratos, solvatos e semelhantes é usada aqui, isso significa também um único composto, sal, polimorfo, isômero, hidrato, solvato ou semelhantes.
[0057] Por "composto estável" ou "estrutura estável" entende-se um composto que é suficientemente robusto para sobreviver ao isolamento até um grau útil de pureza de uma mistura de reação e formulação em um agente terapêutico eficaz.
[0058] Os compostos desta invenção podem conter um ou mais centros assimétricos, dependendo da localização e natureza dos vários substituintes desejados. Os átomos de carbono assimétricos podem estar presentes na configuração (R) ou (S), resultando em misturas racêmicas no caso de um único centro assimétrico e misturas diastereoméricas no caso de múltiplos centros assimétricos. Em certos casos, a assimetria também pode estar presente devido à rotação restrita em torno de uma determinada ligação, por exemplo, a ligação central adjacente a dois anéis aromáticos substituídos dos compostos especificados.
[0059] Os substituintes em um anel também podem estar presentes na forma cis ou trans. Pretende-se que todas essas configurações (incluindo enantiômeros e diastereômeros) estejam incluídas no escopo da presente invenção.
[0060] Os compostos preferidos são aqueles que produzem a atividade biológica mais desejável. Isômeros e estereoisômeros separados, puros ou parcialmente purificados ou misturas racêmicas ou diastereoméricas dos compostos desta invenção estão também incluídos no escopo da presente invenção. A purificação, e a separação de tais materiais podem ser realizadas por técnicas padrão conhecidas na técnica.
[0061] Os isômeros óticos podem ser obtidos por resolução das misturas racêmicas de acordo com processos convencionais, por exemplo, pela formação de sais diastereoisoméricos usando um ácido ou base oticamente ativo ou formação de diastereômeros covalentes. Exemplos de ácidos apropriados são o ácido tartárico, diacetiltartárico, ditoluoiltartárico e canforsulfônico. As misturas de diastereoisômeros podem ser separadas nos seus diastereoisômeros individuais com base nas suas diferenças físicas e/ou químicas por métodos conhecidos na técnica, por exemplo, por cromatografia ou cristalização fracional. As bases ou ácidos oticamente ativos são, então, liberados dos sais diastereoméricos separados. Um processo diferente para a separação de isômeros óticos envolve o uso de cromatografia quiral (por exemplo, colunas de HPLC quirais), com ou sem derivatização convencional, escolhida de forma otimizada para maximizar a separação dos enantiômeros. As colunas de HPLC quirais adequadas são fabricadas pela Daicel, por exemplo, Chiracel OD e Chiracel OJ entre muitos outros, todos rotineiramente selecionáveis. As separações enzimáticas, com ou sem derivatização, também são úteis. Os compostos oticamente ativos desta invenção podem igualmente ser obtidos por sínteses quirais utilizando materiais de partida oticamente ativos.
[0062] A fim de limitar os diferentes tipos de isômeros entre si, é feita referência às Regras IUPAC, Seção E (Pure Appl Chem 45, 1130, 1976).
[0063] A presente invenção inclui todos os estereoisômeros possíveis dos compostos da presente invenção como estereoisômeros únicos, ou como qualquer mistura dos referidos estereoisômeros, por exemplo, isômeros R ou S, ou isômeros E ou Z, em qualquer relação. O isolamento de um único estereoisômero, por exemplo, um único enantiômero ou um único diastereômero, de um composto da presente invenção pode ser alcançado por qualquer método adequado do estado da técnica, tal como cromatografia, especialmente cromatografia quiral, por exemplo.
[0064] Além disso, os compostos da presente invenção podem existir como tautômeros. Por exemplo, qualquer composto da presente invenção que contém uma porção de pirazol como um grupo heteroarila, por exemplo, pode existir como um tautômero 1H, ou um tautômero 2H, ou mesmo uma mistura em qualquer quantidade dos dois tautômeros, ou uma porção triazol, por exemplo pode existir como um tautômero 1H, um tautômero 2H ou um tautômero 4H, ou mesmo uma mistura em qualquer quantidade dos referidos tautômeros 1H, 2H e 4H, isto é:
[0065] A presente invenção inclui todos os tautômeros possíveis dos compostos da presente invenção como tautômeros simples, ou como qualquer mistura dos referidos tautômeros, em qualquer relação.
[0066] Além disso, os compostos da presente invenção podem existir como N-óxidos, que são definidos pelo fato de que pelo menos um nitrogênio dos compostos da presente invenção é oxidado. A presente invenção inclui todos esses N-óxidos possíveis.
[0067] A presente invenção também se refere a formas úteis dos compostos como aqui descritos, tais como metabólitos, hidratos, solvatos, profármacos, sais, em particular sais farmaceuticamente aceitáveis e coprecipitados.
[0068] Os compostos da presente invenção podem existir como um hidrato, ou como um solvato, em que os compostos da presente invenção contêm solventes polares, em particular água, metanol ou etanol, por exemplo, como elemento estrutural da treliça de cristal dos compostos. A quantidade de solventes polares, em particular água, pode existir em uma relação estequiométrica ou não estequiométrica. No caso de solvatos estequiométricos, por exemplo, um hidrato, hemi-, (semi-), mono-, sesqui-, di-, tri-, tetra-, penta- etc., solvatos ou hidratos, respectivamente, são possíveis. A presente invenção inclui todos esses hidratos ou solvatos.
[0069] Além disso, os compostos da presente invenção podem existir na forma livre, por exemplo, como uma base livre, ou como um ácido livre, ou como um zwitterion, ou pode existir na forma de um sal. O referido sal pode ser qualquer sal, um sal de adição orgânico ou inorgânico, particularmente qualquer sal de adição orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitável, normalmente usado em farmácia.
[0070] O termo "sal farmaceuticamente aceitável" se refere a um sal de adição de ácido relativamente não tóxico, inorgânico ou orgânico de um composto da presente invenção. Por exemplo, veja SM Berge, et al. "Pharmaceutical Salts," J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19.
[0071] Um sal farmaceuticamente aceitável adequado doscompostos da presente invenção pode ser, por exemplo, um sal de adição de ácido de um composto da presente invenção carregando um átomo de nitrogênio, em uma cadeia ou em um anel, por exemplo, que é suficientemente básico, tal como um sal de adição de ácido com um ácido inorgânico, tal como ácido clorídrico, bromídrico, iodídrico, sulfúrico, bissulfúrico, fosfórico ou nítrico, por exemplo, ou com um ácido orgânico, tal como ácido fórmico, acético, acetoacético, pirúvico, trifluoroacético, propiônico, butírico, hexanoico, heptanoico, undecanoico, láurico, benzoico, salicílico, 2-(4-hidroxibenzoil)- benzoico, canfórico, cinâmico, ciclopentanopropiônico, diglicônico, 3- hidróxi-2-naftoico, nicotínico, pamoico, pectínico, persulfúrico, 3- fenilpropiônico, pícrico, piválico, 2-hidroxietanossulfonato, itacônico, sulfâmico, trifluorometanossulfônico, dodecilsulfúrico, etanossulfônico, benzenossulfônico, para-toluenossulfônico, metanossulfônico, 2- naftalenossulfônico, naftalenossulfônico, canforsulfônico, cítrico, tartárico, esteárico, lático, oxálico, malônico, succínico, málico, adípico, algínico, maleico, fumárico, D-glicônico, mandélico, ascórbico, glico- heptanoico, glicerofosfórico, aspártico, sulfossalicílico, hemissulfúrico ou tiociânico, por exemplo.
[0072] Além disso, outro sal adequadamente farmaceuticamente aceitável de um composto da presente invenção que é suficientemente ácido, é um sal de metal alcalino, por exemplo, um sal de sódio ou potássio, um sal de metal alcalino terroso, por exemplo, um sal de cálcio ou magnésio, um sal de amônio ou um sal com uma base orgânica que proporciona um cátion fisiologicamente aceitável, por exemplo, um sal com N-metil-glicamina, dimetil-glicamina, etil- glicamina, lisina, diciclo-hexilamina, 1,6-hexadiamina, etanolamina, giucosamina, sarcosina, serinol, tris-hidróxi-metil-aminometano, aminopropandiol, base de sovak, 1-amino-2,3,4-butantriol. Adicionalmente, grupos contendo nitrogênio básico podem ser quaternizados com agentes tais como haletos de alquila inferior, tais como cloretos, brometos e iodetos de metila, etila, propila e butila; sulfatos de dialquila como sulfato de dimetila, dietila e dibutila; e sulfatos de diamila, haletos de cadeia longa, tais como cloretos, brometos e iodetos de decila, laurila, miristila e estrearila, haletos de aralquila como brometos de benzila e fenetila e outros.
[0073] Os versados na técnica reconhecerão ainda que os sais de adição de ácido dos compostos reivindicados podem ser preparados pela reação dos compostos com o ácido inorgânico ou orgânico apropriado por meio de qualquer um dentre uma série de métodos conhecidos. Alternativamente, os sais de metais alcalinos e alcalino terrosos de compostos ácidos da invenção são preparados fazendo reagir os compostos da invenção com a base apropriada através de uma variedade de métodos conhecidos.
[0074] A presente invenção inclui todos os sais possíveis dos compostos da presente invenção como sais simples, ou como qualquer mistura dos referidos sais, em qualquer relação.
[0075] No presente texto, em particular na Seção Experimental, para a síntese de intermediários e de exemplos da presente invenção, quando um composto é mencionado como uma forma de sal com a base ou ácido correspondente, a composição estequiométrica exata da referida forma de sal, conforme obtido pelo respectivo processo de preparação e/ou purificação, é, na maioria dos casos, desconhecida.
[0076] A menos que especificado de outra forma, sufixos para nomes químicos ou Fórmulas estruturais, tais como "cloridrato", "trifluoroacetato", "sal de sódio" ou "x HCl", "x CF3COOH", "x Na+", por exemplo, devem ser entendidos como não uma especificação estequiométrica, porém, apenas como uma forma de sal.
[0077] Isto se aplica analogamente a casos em que intermediaries de síntese ou compostos de exemplo ou seus sais foram obtidos, pelos processos de preparação e/ou purificação descritos, como solvatos, tais como hidratos com (se definido) composição estequiométrica desconhecida.
[0078] Os sais incluem sais insolúveis em água e, particularmente, solúveis em água.
[0079] Além disso, os derivados dos compostos de Fórmula (I), e os seus sais que são convertidos em um composto de Fórmula (I) ou um sal do mesmo em um sistema biológico (bioprecursores ou profármacos) são abrangidos pela invenção. O referido sistema biológico é, por exemplo, um organismo mamífero, particularmente um ser humano. O bioprecursor é, por exemplo, convertido no composto de Fórmula (I) ou um sal deste por processos metabólicos.
[0080] Quando aqui usado, o termo "éster hidrolisável in vivo" é entendido como significando um éster hidrolisável in vivo de um composto da presente invenção contendo um grupo carbóxi ou hidróxi, por exemplo, um éster farmaceuticamente aceitável que é hidrolisado no corpo do ser humano ou animal para produzir o ácido ou álcool original. Os ésteres farmaceuticamente aceitáveis adequados para carbóxi incluem, por exemplo, alquila, cicloalquila e fenilalquila opcionalmente substituídas, em particular ésteres benzílicos, C1-C6 alcoximetil ésteres, por exemplo, metoximetila, C1-C6 alcanoiloximetil ésteres, por exemplo, pivaloiloximetila, ftalidil ésteres, C3-C8 cicloalcóxi-carbonilóxi-C1-C6 alquil ésteres, por exemplo, 1-ciclo- hexilcarboniloxietila, 1,3-dioxolen-2-onilmetil ésteres, por exemplo, 5- metil-1,3-dioxolen-2-onilmetila, e C1-C6-alcoxicarboniloxietil ésteres, por exemplo, 1-metoxicarboniloxietila, e podem ser formados em qualquer grupo carbóxi nos compostos desta invenção.
[0081] Um éster hidrolisável in vivo de um composto da presente invenção contendo um grupo hidróxi inclui ésteres inorgânicos, tais como ésteres de fosfato e éteres alfa-aciloxialquílicos e compostos relacionados que, como resultado da hidrólise in vivo da degradação do éster para produzir o grupo hidroxila origem. Exemplos de [alfa]- aciloxialquil éteres incluem acetoximetóxi e 2,2-dimetilpropioniloxime- tóxi. Uma seleção de grupos formadores de éster hidrolisáveis in vivo para hidróxi incluem alcanoíla, benzoíla, fenilacetila e benzoíla e fenilacetila substituídas, alcoxicarbonil (para produzir alquil carbonato ésteres), dialquilcarbamoíal e N-(dialquilaminoetil)-N-alquilcarbamoila- minoíla (para produzir carbamatos), dialquilamino e carboxiacetila. A presente invenção abrange todos esses ésteres.
[0082] Além disso, a presente invenção inclui todas as formas cristalinas possíveis, ou polimorfos, dos compostos da presente invenção, como polimorfos simples, ou como uma mistura de mais de um polimorfo, em qualquer relação.
[0083] No contexto das propriedades dos compostos da presente invenção, o termo "perfil farmacocinético" significa um único parâmetro ou uma combinação dos mesmos, incluindo permeabilidade, biodisponibilidade, exposição e parâmetros farmacodinâmicos, como duração ou magnitude do efeito farmacológico, conforme medido em um experimento adequado. Os compostos com perfis farmacocinéticos melhorados podem, por exemplo, ser usados em doses mais baixas para atingir o mesmo efeito, podem atingir uma duração de ação mais longa ou podem alcançar uma combinação de ambos os efeitos.
[0084] O termo "combinação" na presente invenção é usado como conhecido pelos versados na técnica e pode estar presente como uma combinação fixa, uma combinação não fixa ou kit de partes.
[0085] Uma "combinação fixa" na presente invenção é usada conforme conhecido pelos versados na técnica e é definida como uma combinação em que o referido primeiro ingrediente ativo, e o referido segundo ingrediente ativo estão presentes juntos em uma unidade de dosagem ou em uma única entidade. Um exemplo de uma "combinação fixa" é uma composição farmacêutica em que o referido primeiro ingrediente ativo, e o referido segundo ingrediente ativo estão presentes em mistura para administração simultânea, tal como em uma formulação. Outro exemplo de uma "combinação fixa" é uma combinação farmacêutica em que o referido primeiro ingrediente ativo, e o referido segundo ingrediente ativo estão presentes em uma unidade sem estar em mistura.
[0086] Uma combinação não fixa ou "kit de partes" na presente invenção é usada como conhecido pelos versados na técnica e é definida como uma combinação em que o referido primeiro ingrediente ativo, e o referido segundo ingrediente ativo estão presentes em mais de uma unidade. Um exemplo de uma combinação não fixa ou kit de partes é uma combinação em que o referido primeiro ingrediente ativo, e o referido segundo ingrediente ativo estão presentes separadamente. Os componentes da combinação não fixa ou kit de partes podem ser administrados separadamente, sequencialmente, simultaneamente, concorrentemente ou escalonados cronologicamente. Qualquer combinação de um composto de Fórmula (I) da presente invenção com um agente anticâncer, conforme definido abaixo, é uma modalidade, da invenção.
[0087] O termo "agentes anticâncer (quimioterápicos)" se refere a qualquer agente que reduz a sobrevivência ou proliferação de uma célula cancerosa e inclui, porém, não está limitados a
[0088] 131I-chTNT, abarelix, abiraterona, aclarrubicina, ado-trastu- zumabe entansina, afatinibe, aflibercepte, aldesleucina, alentuzumabe, Ácido alendrônico, alitretinoína, altretamina, amifostina, aminoglutetimida, Hexil aminolevulinato, anrubicina, ansacrina, anastrozol, ancestim, anetol ditioletiona, angiotensina II, antitrombina III, aprepitante, arcitumomabe, arglabina, trióxido arsênico, asparaginase, axitinibe, azacitidina, basiliximabe, belotecano, bendamustina, belinostate, bevacizumabe, bexaroteno, bicalutamida, bisantreno, bleomicina, bortezomibe, busserrelina, bosutinibe, brentuximabe vedotina, bussulfano, cabazitaxel, cabozantinibe, folinato de cálcio, levofolinato de cálcio, capecitabina, capromabe, carboplatina, carfilzomibe, carmofur, carmustina, catumaxomabe, celecoxibe, celmoleucina, ceritinibe, cetuximabe, clorambucila, clormadinona, clormetina, cidofovir, cinacalcete, cisplatina, cladribina, ácido clodrônico, clofarabina, copanlisibe, crisantaspase, ciclofosfamida, ciproterona, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, darbepoetina alfa, dabrafenibe, dasatinibe, daunorrubicina, decitabina, degarelix, denileukin diftitox, denosumabe, depreotidae, deslorrelina, dexrazoxano, cloreto de dibrospídio, dianhidrogalactitol, diclofenaco,docetaxel, dolasetron, doxifluridina, doxorrubicina, doxorrubicina + estrona, dronabinol, eculizumabe, edrecolomabe, acetato de elliptinium e, eltrombopag, endostatina, enocitabina, enzalutamida, epirrubicina, epitiostanol, epoetina alfa, epoetina beta, epoetina zeta, eptaplatina, eribulina, erlotinibe, esomeprazol, estradiol, estramustina, etoposídeo, everolimus, exemestano, fadrozol, fentanila, filgrastim, fluoxi- mesterona, floxuridina, fludarabina, fluorouracila, flutamida, ácido folínico, formestano, fosaprepitante, fotemustina, fulvestrante, gadobutrol, gadoteridol, ácido gadotérico, meglumina,gadoversetamida, ácido gadoxético, nitrato de gálio, ganirelix, gefitinibe, gencitabina, gentuzumabe, Glucarpidase, glutoxim, GM- CSF, gosserrelina, granisetron, fator estimulador da colônia de granulócito, dicloridrato de histamina, histrelina, hidroxicarbamida, sementes I-125, lansoprazol, ácido ibandrônico, ibritumomabe tiuxetam, ibrutinibe, idarrubicina, ifosfamida, imatinibe, imiquimode, improssulfano, indisetron, ácido incadrônico, mebutato de ingenol, interferon alfa, interferon beta, interferon gama, iobitridol, iobenguano (123I), iomeprol, ipilimumabe, irinotecano, Itraconazol, ixabepilona, lanreotida, lapatinibe, Iasocolina, lenalidomida, lenograstim, lentinan, letrozol, leuprorrelina, levamisol, levonorgestrel, levotiroxina sódica, lisurida, lobaplatina, lomustina, lonidamina, masoprocol, medroxiprogesterona, megestrol, melarsoprol, melfalana, mepitiostano, mercaptopurina, mesna, metadona, metotrexato, metoxsaleno,metilaminolevulinato, metilprednisolona, metiltestosterona, metirosina, mifamurtida, miltefosina, miriplatina, mitobronitol, mitoguazona,mitolactol, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, mogamulizumabe, molgramostim, mopidamol, cloridrato de morfina, sulfato de morfina, nabilona, nabiximols, nafarrelina, naloxona + pentazocina, naltrexona, nartograstim, nedaplatina, nelarabina, ácido neridrônico, nivolumabpentetreotida, nilotinibe, nilutamida, nimorazol, nimotuzumabe, nimustina, nitracrina, nivolumabe, obinutuzumabe, octreotida, ofatumumabe, mepessuccinato de omacetaxina, omeprazol, ondansetrona, oprelvekin, orgoteína, orilotimode, osimertinibe, oxaliplatina, oxicodona, oximetolona, ozogamicina, terapia gênica de p53, paclitaxel, palifermina, semente de paládio-103, palonosetrona, ácido pamidrônico, panitumumabe, pantoprazol, pazopanibe, pegaspargase, PEG-epoetina beta (metóxi PEG-epoetina beta), pembrolizumabe, pegfilgrastim, peginterferona alfa-2b, pemetrexede, pentazocina, pentostatina, peplomicina, Perflubutano, perfosfamida, Pertuzumabe, picibanila, pilocarpina, pirarrubicina, pixantrona, plerixafor, plicamicina, poliglusam, fosfato de poliestradiol, polivinilpirrolidona + hialuronato sódico, polissacarídeo-K, pomalidomida, ponatinibe, porfímero sódico, poziotinibe, pralatrexato, prednimustina, prednisona, procarbazina, procodazol, propranolol, quinagolida, rabeprazol, racotumomabe, cloreto de rádio-223, radotinibe, raloxifeno, raltitrexede, ramosetrona, ramucirumabe, ranimustina, rasburicase, razoxano, refametinibe, regorafenibe, ácido risedrônico, etidronato de rênio-186, rituximabe, romidepsina, romiplostim, romurtide, roniciclibe, samário (153Sm) lexidronam, sargramostim, satumomabe, secretina, sipuleucel-T, sizofirano, sobuzoxano, glicididazol de sódio, sorafenibe, estanozolol, estreptozocina, sunitinibe, talaporfina, tamibaroteno, tamoxifeno, tapentadol, tasonermina, teceleucina, nofetumomabe merpentano de tecnécio (99mTc), 99mTc-HYNIC-[Tir3]-octreotida, tegafur, tegafur + gimeracil + oteracil, temoporfina, temozolomida, temsirolimus, teniposídeo, testosterona, tetrofosmina, talidomida, tiotepa, timalfasina, tirotropim alfa, tioguanina, tocilizumabe, topotecana, toremifeno, tositumomabe, trabectedina, tramadol, trastuzumabe, trastuzumabe entansina, treossulfano, tretinoína, trifluridina + tipiracil, trilostano, triptorrelina, trametinibe, trofosfamida, trombopoetina, triptofano, ubenimex, valatinibe, valrubicina, vandetanibe, vapreotida, vemurafenibe, vimblastina, vincristina, vindesina, vinflunina, vinorelbina, vismodegibe, vorinostate, vorozol, microsferas de vidro de ítrio-90, zinostatina, estimalâmero de zinostatina, ácido zoledrônico, zorrubicina.
[0089] Por "Polipeptídeo do Receptor do Fator de Crescimento Epidérmico (EGFR)" entende-se um polipeptídeo com pelo menos cerca de 95 % de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência fornecida no No. de Acesso UniProt P00533-1 ou um fragmento deste. Em algumas modalidades, o fragmento do EGFR liga-se a um ligante do EFGR e/ou tem atividade de cinase. Os polipeptídeos mutantes do EGFR incluem aqueles que têm uma inserção entre, por exemplo, os aminoácidos V769 e D770 ou entre D770 e N771. Em outras modalidades, a identidade de sequência de aminoácidos é 96, 97, 98, 99 ou 100 % para o No. de Acesso UniProt P00533-1.
[0090] Uma sequência exemplar de tamanho natural do EGFR humano, que indica V769, D770 e N771 em negrito, é fornecida no No. de Acesso UniProt P00533-1, que é reproduzido abaixo:
[0091] Um polinucleotídeo exemplar que codifica EGFR é fornecido na Sequência de Referência NCBI: NM_001346897.1, que é reproduzido abaixo:
[0092] Os intermediários usados para a síntese dos compostos das reivindicações 1-4 como descrito abaixo, bem como a sua utilização para a síntese dos compostos das reivindicações 1-4, são um outro aspecto da presente invenção. Os intermediários preferidos são os Exemplos de Intermediários conforme descrito abaixo.
Procedimentos Gerais
[0093] Os compostos de acordo com a invenção podem ser preparados de acordo com os seguintes esquemas 1-4.
[0094] Os esquemas e procedimentos descritos abaixo ilustram as vias sintéticas para os compostos de Fórmula Geral (I) da invenção e não se destinam a ser limitantes. É óbvio para a pessoa versada na técnica que a ordem das transformações, conforme exemplificada nos esquemas, pode ser modificada de várias maneiras. A ordem das transformações exemplificadas nos esquemas, portanto, não tem a intenção de ser limitante. Além disso, a interconversão de qualquer um dos substituintes R1, R2, R3, R4, R5, R6 e PG pode ser alcançada antes e/ou após as transformações exemplificadas. Estas modificações podem ser tais como a introdução de grupos de proteção, clivagem de grupos de proteção, redução ou oxidação de grupos funcionais, halogenação, metalação, substituição ou outras reações conhecidas pela pessoa versada na técnica. Estas transformações incluem aquelas que introduzem uma funcionalidade que permite a interconversão adicional de substituintes. Os grupos de proteção apropriados, e a sua introdução e clivagem são bem conhecidos pela pessoa versada na técnica. Exemplos específicos são descritos nos parágrafos subsequentes.Esquema 1:
[0095] Esquema 1: Rotina para a preparação de compostos de Fórmula Geral (I), em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, X, Y, m e n têm o significado dado para a Fórmula Geral (I) e PG podem ser hidrogênio ou, opcionalmente, um grupo de proteção adequado, por exemplo, terc-butoxicarbonila (Boc).
[0096] Os compostos de Fórmula 1, 2 e 4 estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados de acordo com os procedimentos disponíveis no domínio público, conforme compreensível para a pessoa versada na técnica. Exemplos específicos são descritos nos parágrafos subsequentes.
[0097] Uma piperadina-2,4-diona adequadamente substituída de Fórmula Geral (Composto de Fórmula 1), tal como, por exemplo, 2,4- piperadinediona, pode ser reagida com um isotiocianato adequadamente substituído (Composto de Fórmula 2), tal como, por exemplo, 3 fluorofenilisotiocianato, em um sistema de solvente adequado, como, por exemplo, acetonitrila, na presença de uma base adequada, como, por exemplo, trietilamina ou DBU, em temperaturas que variam de -78 °C a +100 °C, em algumas modalidades, a reação é realizada a 0 °C ou +100 °C, para fornecer a Fórmula Geral (3). Reações semelhantes foram realizadas na literatura (D. E. Worrall, J. Am. Chem. Soc., 1940, 62, 675).
[0098] Os intermediários de Fórmula Geral (3) podem ser convertidos em intermediários de Fórmula Geral (5) por reação com uma amina adequada (compostos de Fórmula Geral 4), tal como, por exemplo, 4-(aminometil)piridina, em um sistema de solvente adequado, tal como, por exemplo, etanol e acetato de etila, a uma temperatura entre a temperatura ambiente, e o ponto de ebulição dos respectivos solventes, em algumas modalidades a reação é realizada no ponto de ebulição dos respectivos solventes, pelo que a água formada na reação é removida da reação por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica, tal como, por exemplo, remoção azeotrópica de água (condições de Dean-Stark) ou com peneiras moleculares, para fornecer a Fórmula Geral (5).
[0099] Os intermediários de Fórmula Geral (3) e intermediários de Fórmula Geral (5) em que PG representa um grupo de proteção podem ser convertidos em intermediários em que PG representa um átomo de hidrogênio usando condições de desproteção padrão conhecidas por aqueles versados na técnica. Quando PG é um grupo protetor, como, por exemplo, terc-butoxicarbonila (Boc), a desprotecção pode ser realizada usando ácidos, como, por exemplo, ácido clorídrico e ácido trifluoroacético, em um sistema de solvent adequado, tal como, por exemplo, diclorometano e dioxano, a uma temperatura entre 0 °C, e o ponto de ebulição dos respectivos solventes, em uma modalidade, a reação é realizada em temperatura ambiente, para fornecer os compostos de Fórmula Geral (3) e intermediários de Fórmula Geral (5) em que PG é um átomo de hidrogênio.
[00100] Os intermediários de Fórmula Geral (5) reagem com uma base e/ou reagente de oxidação, em uma modalidade, um agente de oxidação, tal como, por exemplo, peróxido de hidrogênio ou SIBX (ácido iodoxibenoico estabilizado, em um sistema de solvente adequado, tal como, por exemplo, metanol, em uma faixa de temperatura de -30 °C até o ponto de ebulição do respectivo solvente, em uma modalidade, a reação é realizada no ponto de ebulição do respectivo solvente, para fornecer os compostos de Fórmula Geral (I). Opcionalmente, estes tipos de reações podem ser realizadas com um aditivo, tal como, por exemplo, um ácido ou base, tal como, por exemplo, ácido acético ou ácido trifluoroacético (não limitante) e trietilamina ou diispropiletilamina (não limitante).
[00101] Os intermediários de Fórmula Geral (5) podem ser convertidos em compostos de Fórmula Geral (I) por aquecimento térmico em um solvente adequado em temperaturas elevadas, que podem estar acima do ponto de ebulição do referido solvente, tal como, por exemplo, RT a +250 °C. Estas reações podem ser opcionalmente realizadas em vaso, pelo que a pressão pode ser aumentada, como, por exemplo, em uma autoclave. Os intermediários de Fórmula Geral (5) também podem ser convertidos em compostos de Fórmula Geral (I) por aquecimento térmico na presença de um catalisador de metal, tal como, por exemplo, paládio sobre carvão ativado, em um solvente adequado, como, por exemplo, DMF, DMA, EtOH, MeOH, NMP (não limitante) em temperaturas elevadas, como, por exemplo, RT a +150 °C. Opcionalmente, esses tipos de reações podem ser realizadas com um aditivo, tal como, por exemplo, um ácido ou base, tal como, por exemplo, ácido acético ou ácido trifluoroacético (não limitante) e trietilamina ou diispropiletilamina (não limitante), para fornecer os compostos de Fórmula Geral (I).Esquema 2:
[00102] Esquema 2: Processo para a preparação de compostos de Fórmula Geral (4), em que R4, R5, R6, X, Y, m e n têm o significado dado para a Fórmula Geral (I).
[00103] Os compostos de Fórmula Geral (6) podem ser convertidos em compostos de Fórmula Geral (7) por tratamento com um nucleófilo adequado, tal como, por exemplo, aminas, alcoóis, alcóxidos de metal, azidas, tióis ou tiolatos de metal, sob condições básicas, neutras, ácidas, catalíticas, em uma modalidade, condições básicas, em um solvente adequado ou usando o nucleófilo como solvente, tal como, por exemplo, DMF, tetra-hidrofurano (THF), em uma faixa de temperatura de -78 °C ao ponto de ebulição do respectivo solvente, em uma modalidade, a reação é realizada -10 °C até o ponto de ebulição do respectivo solvente, para fornecer a Fórmula Geral (7). Tais reações de substituição foram relatadas anteriormente (Clark et al., J. Med. Chem., 2008, 51, 6631 - 6634; Guo et al., Tetrahedron Letts., 2013, 54, 3233 - 3237; Watterson et al., J. Med. Chem., 2007, 50, 3730 - 3742; Bellale et al., J. Med. Chem., 2014, 57, 6572 - 6582;Klimesova et al., Eur. J. Med. Chem., 1996, 31, 389 - 395; Leroi et al., Sint. Commun., 1997, 27, 2905 - 2916; LaMattina et al., J. Org. Chem., 1981, 46, 4179 - 4182; Beugelmans et al., Tetrahedron, 1983, 39, 4153 - 4162).
[00104] Os compostos de Fórmula Geral (7) podem ser convertidos em compostos de Fórmula Geral (4) por muitos métodos de redução conhecidos por aqueles versados na técnica, usando vários reagentes e condições de reação diferentes; tais métodos e reagentes podem ser realizados com hidretos de metal, como, por exemplo, hidreto de alumínio e lítio em THF (Bullock et al., J. Am. Chem. Soc., 1956, 78, 490, Wang et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 4021 - 3160), ou usando zinco em ácido acético (Rabe, Chem. Ber., 1913, 46, 1024), ou usando diborano (De Munno et al., Heterocicles, 1996, 43, 1893-1900), ou usando métodos de hidrogenação catalítica, por exemplo, hidrogênio e paládio sobre carbono sob condições ácidas (Stokker et al., J. Med. Chem., 1981, 24, 115 - 117; Bertini et al., J. Med. Chem., 2005, 48, 664 - 670), hidrogênio e níquel em condições básicas (Walpole et al., J. Med. Chem., 1993, 36, 2362 - 2372, Kuramochi et al., Bioorg. Med. Chem., 2005, 13, 4022 - 4036.) Esquema 3:
[00105] Esquema 3: Processo para a preparação de compostos de Fórmula Geral 2, em que R1a representa metila ou difluorometila correspondendo a R1 na Fórmula Geral (I) com o significado de metóxi e difluorometóxi. A síntese dos compostos 9 e 10 se refere à substituição de alcóxi do anel fenila. No entanto, o produto 2 contendo isotiocianato, e a sua síntese (isto é, 10 ^ 2 ou 11 ^ 2) é geral para grupos R1 de acordo com a Fórmula Geral (I).
[00106] Os compostos de Fórmula Geral (8), podem ser convertidos em compostos de Fórmula Geral (9), usando vários métodos que são conhecidos por aqueles versados na técnica. Essas transformações podem ser, por exemplo, para alquilar o álcool fenólico com reagentes de alquilação, tais como, por exemplo, haletos de alquila, sulfonatos de alquila, em que esses grupos alquila podem conter opcionalmente fluoretos, grupos alcoxila. Estas reações de alquilação são conhecidas por aqueles versados na técnica usando uma variedade de métodos: i) K2CO3 em um solvente, tal como, DMF, acetona, DMFA (veja os ensinamentos de Muro et al., J. Med. Chem., 2009, 52, 7974 e WO2009/20990 A1); ii) KOH em EtOH (veja os ensinamentos de Macias et al., J. Agric. Food Chem., 2006, 54, 9843); iii) reação de Mitsunobu (veja os ensinamentos de US2006/122168 A1 e EP2151431 A1) para fornecer os intermediários de Fórmula Geral (9).
[00107] Os compostos de Fórmula Geral (9) podem ser convertidos em compostos de Fórmula Geral (10) por métodos de redução e estes métodos são conhecidos por aqueles versados na técnica. Essas reduções podem ser realizadas usando: i) gás hidrogênio e um catalisador (para Pd/C como catalisador, veja os ensinamentos de Chan et al., J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 2989; para platina veja os ensinamentos de Niemann et al., J. Am. Chem Soe, 1941, 63, 2204; para Raney-Nickel veja os ensinamentos de US2009/253767 A1); ii) cloreto de ferro e amônio (veja os ensinamentos de Sweeney et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2008, 18, 4348); iii) ditionito de sódio (veja os ensinamentos de Chong et al., J. Med. Chem., 2012, 55, 10601); iv) cloreto de zinco e amônio (veja os ensinamentos de WO2010/42699 A1) para fornecer os intermediários de Fórmula Geral (10).
[00108] Os compostos de Fórmula Geral (10) podem ser convertidos em compostos de Fórmula Geral (2) usando reagentes tais como, por exemplo, tiofosgênio, dissulfeto de carbono, 1,1"- tiocarbonildi-2(1H)-piridona ou 1,1'-tiocarbonildiimidazol, em uma modalidade, tiofosgênio, sob condições básicas, em um solvente adequado, tal como, por exemplo, diclorometano, clorofórmio, acetona ou misturas bifásicas, tais como, por exemplo, diclorometano, clorofórmio com soluções básicas aquosas, em outra modalidade, diclorometano com uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio ou carbonato de sódio, em uma faixa de temperatura de -78 °C até o ponto de ebulição do respectivo solvente, em outra modalidade, a reação é realizada de 0 °C até a temperatura ambiente, para fornecer os compostos de Fórmula Geral (2). Tais reações de transformação foram relatadas anteriormente (Harris et al., J. Med. Chem., 2005, 48, 1610; Degorce et al., Tetrahedron Lett.,2011, 52, 6719; WO2016/91845 A1; Fairhurst et al., Org. Lett., 2005, 7,4697; Chaskar et al., Sint. Commun., 2008, 38, 16940; US2004/122237 A1). Esquema 4:
[00109] Esquema 4: Rotina para a preparação de compostos de Fórmula Geral (I), em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, X, Y, m e n têm o significado dado para a Fórmula Geral (I) e PG representa hidrogênio ou um grupo de proteção adequado, por exemplo, terc-butoxicarbonila (Boc).
[00110] Compostos semelhantes aos de Fórmula Geral 12 são conhecidos por aqueles versados na técnica e suas sínteses foram relatadas na literatura (veja os ensinamentos de Voss et al., WO2015/22073 A1; Hart et al., WO2016/100166 A1; Anderson et al., J. Med. Chem., 2007, 50, 2647; Vanotti et al., J. Med. Chem., 2008, 51, 487).
[00111] Os compostos de Fórmula Geral (12) podem ser convertidos em compostos de Fórmula Geral (13) usando métodos de bromação padrão que são conhecidos por aqueles versados na técnica (WO2016/100166 A1). Essas bromações podem ser realizadas usando um agente de bromação, como, por exemplo, N bromossuccinimida, em um solvente adequado, como, por exemplo, DMF, em uma faixa de temperatura de -78 °C até o ponto de ebulição do referido solvente, em uma modalidade, a faixa de temperatura é de 0 °C a RT.
[00112] Os intermediários de Fórmula Geral (13) podem reagir com anilinas adequadas, como, por exemplo, 2-difluorometoxianilina, na presença de uma base, como, por exemplo, bis(trimetilsilil)amida de lítio (LHMDS), na presença de um catalisador, tal como, por exemplo, um ligante adequado, em uma modalidade, 2-(di-terc-butilfosfino)- 2‘,4‘,6‘-triisopropil-3,6-dimetóxi-1,1‘-bifenila (tBuBrettPhos) e na presença de um pré-catalisador, tal como, por exemplo, um pré-catalisador de paládio, em outra modalidade cloro[2-(diciclo-hexilfosfino)-3,6-dime- tóxi-2‘,4‘,6‘-triisopropil -1,1‘-bifenil] [2-(2-aminoetil) fenil]paládio (II) (aduzido de BrettPhos-PreCat MTBE éter) em um sistema de solvente adequado, tal como, por exemplo, tetra-hidrofurano (THF), a uma faixa de temperatura de 0 °C a 200 °C. Em uma modalidade, a reação é realizada a 80 °C, para fornecer os compostos de Fórmula Geral (I). Transformações semelhantes foram realizadas e relatadas (WO2015/ 193339 A1). Esquema 5:
[00113] Esquema 5: Rotina para a preparação de compostos de Fórmula Geral (I), em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, X, Y, m e n têm o significado dado para a Fórmula Geral (I) e PG representa hidrogênio ou um grupo de proteção adequado, por exemplo terc-butoxicarbonila (Boc).
[00114] Compostos semelhantes aos da Fórmula Geral (14) podem ser preparados de acordo com o procedimento descrito pelo Esquema 1 sob a utilização de 4-(aminometil)-3-hidroxipiridina em vez do intermediário (4). Os intermediários de Fórmula Geral (14) podem ser convertidos em compostos de Fórmula Geral (I) por reação com um álcool adequado sob condições de Mitsunobu (os ensinamentos de Oyo Mitsunobu, Synthesis, 1981, 1-28 ou Tsunoda et al., Tetrahedron Lett., 1994, 35, 5081), tal como, por exemplo, oxetan-3-ilmetanol, na presença de (tributilfosforanilideno) acetonitrila ou trifenilfosfina juntamente com diisopropil azodicarboxilato em um sistema de solvente adequado, tal como, por exemplo, dioxano ou THF, em um temperatura entre a temperatura ambiente, e o ponto de ebulição dos respectivos solventes.
[00115] É conhecido pela pessoa versada na técnica que, se houver uma série de centros reativos em um composto de partida ou intermediário, pode ser necessário bloquear um ou mais centros reativos temporariamente por grupos de proteção, a fim de permitir que uma reação prossiga especificamente no centro de reação desejado.
[00116] Os compostos de acordo com a invenção são isolados e purificados de um modo conhecido per se, por exemplo, por destilação do solvente em vácuo e recristalização do resíduo obtido a partir de um solvente adequado ou submetendo-o a um dos métodos de purificação habituais, tal como cromatografia em um material de suporte adequado. Além disso, pode ser aplicada HPLC preparativa de fase reversa. Os compostos da presente invenção que possuem uma funcionalidade suficientemente básica ou ácida, podem resultar como um sal, tal como, no caso de um composto da presente invenção que é suficientemente básico, um trifluoroacetato ou sal de formiato, por exemplo, ou, no caso de um composto da presente invenção que é suficientemente ácido, um sal de amônio, por exemplo. Os sais deste tipo podem ser transformados na sua base livre ou na sua forma de ácido livre, respectivamente, por vários métodos conhecidos pela pessoa versada na técnica, ou podem ser usados como sais em ensaios biológicos subsequentes. Além disso, o processo de secagem durante o isolamento dos compostos da presente invenção pode não remover totalmente os vestígios de cossolventes, especialmente tais como ácido fórmico ou ácido trifluoroacético, para produzir solvatos ou complexos de inclusão. A pessoa versada na técnica reconhecerá quais solvatos ou complexos de inclusão são aceitáveis para serem usados em ensaios biológicos subsequentes. Deve ser entendido que a forma específica (por exemplo, sal, base livre, ácido livre, solvato, complexo de inclusão) de um composto da presente invenção como isolado e descrito aqui não é necessariamente a única forma em que o referido composto pode ser aplicado a um ensaio biológico para quantificar a atividade biológica específica.
[00117] Sais dos compostos de Fórmula (I) de acordo com a invenção podem ser obtidos por dissolução do composto livre em um solvente adequado (por exemplo, uma cetona, como acetona, metiletilcetona ou metilisobutilcetona, um éter, como éter dietílico, tetra-hidrofurano ou dioxano, um hidrocarboneto clorado, como cloreto de metileno ou clorofórmio, ou um álcool alifático de baixo peso molecular, como metanol, etanol ou isopropanol) que contém o ácido ou base desejado, ou ao qual o ácido ou base desejado é, então, adicionado. O ácido ou a base podem ser empregados na preparação do sal, dependendo de se tratar de um ácido ou base mono ou polibásico e dependendo de qual sal é desejado, em uma relação equimolar ou diferente dela. Os sais são obtidos por filtração, reprecipitação, precipitação com um não solvente para o sal ou por evaporação do solvente. Os sais obtidos podem ser convertidos nos compostos livres que, por sua vez, podem ser convertidos em sais. Deste modo, os sais farmaceuticamente inaceitáveis, que podem ser obtidos, por exemplo, como produtos de processo na fabricação em uma escala industrial, podem ser convertidos em sais farmaceuticamente aceitáveis por processos conhecidos pela pessoa versada na técnica. Especialmente preferidos são os cloridratos, e o processo usado na seção de exemplo.
[00118] Podem ser obtidos diastereômeros puros e enantiômeros puros dos compostos e sais de acordo com a invenção, por exemplo, por síntese assimétrica, usando compostos de partida quirais em síntese ou por divisão de misturas enantioméricas e diasterioméricas obtidas em síntese.
[00119] As misturas enantioméricas e diastereoméricas podem ser divididas em enantiómeros puros e diastereómeros puros por métodos conhecidos pela pessoa versada na técnica. Em uma modalidade, as misturas diastereoméricas são separadas por cristalização, em particular cristalização fractional ou cromatografia. As misturas enantioméricas podem ser separadas, por exemplo, formando diastereômeros com um agente auxiliar quiral, resolvendo os diastereômeros obtidos e removendo o agente auxiliar quiral. Como agentes auxiliares quirais, por exemplo, ácidos quirais podem ser usados para separar bases enantioméricas tal como, por exemplo, ácido mandélico e bases quirais podem ser usados para separar ácidos enantioméricos por formação de sais diastereoméricos. Além disso, derivados diastereoméricos, tais como ésteres diastereoméricos, podem ser formados a partir de misturas enantioméricas de alcoóis ou misturas enantioméricas de ácidos, respectivamente, usando ácidos quirais ou alcoóis quirais, respectivamente, como agentes auxiliares quirais. Adicionalmente, complexos diastereoméricos ou clatratos diastereoméricos podem ser usados para separar misturas enantioméricas. Alternativamente, as misturas enantioméricas podem ser divididas usando colunas de separação quirais em cromatografia. Outro método adequado para o isolamento de enantiômeros é a separação enzimática.
[00120] Um aspecto preferido da invenção é o processo para a preparação dos compostos das reivindicações 1-4 de acordo com os exemplos, bem como os intermediários usados para a sua preparação.
[00121] Opcionalmente, os compostos da Fórmula (I) podem ser convertidos nos seus sais, ou, opcionalmente, os sais dos compostos da Fórmula (I) podem ser convertidos nos compostos livres. Os processos correspondentes são habituais para a pessoa versada.
Utilidade comercial
[00122] Como mencionado supra, os compostos da presente invenção foram surpreendentemente encontrados para inibir eficazmente o EGFR mutante em uma célula (por exemplo, uma célula cancerosa) em contato com o composto, induzindo assim a morte celular (por exemplo, apoptose) e podem, portanto, ser usados para o tratamento ou profilaxia de doenças de crescimento celular descontrolado, proliferação e/ou sobrevivência, respostas imunes celulares inadequadas ou respostas inflamatórias celulares inadequadas ou doenças que são acompanhadas por crescimento celular descontrolado, proliferação e/ou sobrevivência, respostas imunológicas celulares inadequadas ou respostas inflamatórias celulares inadequadas, particularmente em que o crescimento celular descontrolado, proliferação e/ou sobrevivência, respostas imunes celulares inadequadas ou respostas inflamatórias celulares inadequadas são mediadas por EGFR mutante, como, por exemplo, neoplasia benigna e maligna, mais especificamente tumores hematológicos, tumores sólidos e/ou metástases dos mesmos, por exemplo leucemias e síndrome mielodisplásica, linfomas malignos, tumores de cabeça e pescoço, incluindo tumores cerebrais e metástases cerebrais, tumores do tórax incluindo células não pequenas e tumores pulmonares de células pequenas, tumores gastrointestinais, tumores endócrinos, tumores mamários e outros tumores ginecológicos, tumores urológicos incluindo tumores renais, tumores de bexiga e próstata, tumores de pele e sarcomas e/ou metástases dos mesmos, especialmente tumores hematológicos, tumores sólidos e/ou metástases de mama, bexiga, osso, cérebro, sistema nervoso central e periférico, colo do útero, cólon, glândulas endócrinas (por exemplo, córtex da tireoide e adrenal), tumores endócrinos, endométrio, esôfago, tumores gastrointestinais, células germinativas, rim, fígado, pulmão, laringe e hipofaringe, mesotelioma, ovário, pâncreas, próstata, reto, renal, intestino delgado, tecidos moles, estômago, pele, testículos, ureter, vagina e vulva, bem como neoplasias malignas, incluindo tumores primários nos referidos órgãos e tumores secundários correspondentes na região órgãos distantes ("metástases tumorais"). Os tumores hematológicos podem, por exemplo, ser exemplificados por formas agressivas e indolentes de leucemia e linfoma, nomeadamente doença não Hodgkins, leucemia mieloide crônica e aguda (CML/AML), leucemia linfoblástica aguda (ALL), doença de Hodgkins, mieloma múltiplo e linfoma de célula T. Também estão incluídos a síndrome mielodisplásica, neoplasia de células plasmáticas, síndromes paraneoplásicas e cânceres de sítio primário desconhecido, bem como doenças malignas relacionadas à AIDS.
[00123] Um outro aspecto da invenção é o uso dos compostos de acordo com a Fórmula (I) para o tratamento do câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão contendo EGFR mutante com mutações de inserção do exon20, mais particularmente câncer de pulmão que abriga inserções no éxon 20 de SVD V769_770ins ASV e/ou D770_N771ins e/ou metástases das mesmas, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I).
[00124] Um outro aspecto da invenção é o uso dos compostos de acordo com a Fórmula (I) para o tratamento do câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um EGFR mutante com deleções in-frame no éxon 19 (tal como EGFR E746_A750del) ou mutações pontuais no éxon 21 (por exemplo, L858R), e/ou suas metástases.
[00125] Um outro aspecto da invenção é o uso dos compostos de acordo com a Fórmula (I) para o tratamento do câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um EGFR mutante com uma mutação de resistência adquirida D770_N771insSVD C797S, E746_A750del C797S, ou L858R C797S, e/ou suas metástases.
[00126] Um outro aspecto da invenção é o uso dos compostos de acordo com a Fórmula (I) para o tratamento do câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um ERBB2 mutante com mutações de inserção no éxon 20 (como ERBB2 A775_G776insYVMA), e/ou suas metástases.
[00127] De acordo com um aspecto da presente invenção, portanto, a invenção se refere a um composto de Fórmula Geral I, ou um N- óxido, um sal, um tautômero ou um estereoisômero do referido composto, ou um sal do referido N-óxido, tautômero ou estereoisômero particularmente um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma mistura dos mesmos, como aqui descrito e definido, para uso no tratamento ou profilaxia de uma doença, especialmente para uso no tratamento de uma doença.
[00128] Outro aspecto particular da presente invenção é, portanto, o uso de um composto de Fórmula Geral I, descrito supra, ou um estereoisômero, um tautômero, um N-óxido, um hidrato, um solvato ou um sal do mesmo, particularmente um sal farmaceuticamente aceitável deste, ou uma mistura deste, para a profilaxia ou tratamento de distúrbios hiperproliferativos ou distúrbios responsivos à indução de morte celular, isto é, apoptose.
[00129] Por "doença hiperproliferativa" entende-se uma doença, como o câncer, associada a níveis inadequadamente altos de divisão celular, níveis inadequadamente baixos de apoptose ou ambos. O termo "inapropriado" no contexto da presente invenção, em particular no contexto de "respostas imunes celulares inadequadas ou respostas inflamatórias celulares inadequadas", quando aqui usado, deve ser entendido como geralmente significando uma resposta, que é menor que, ou maior do que o normal, e que está associado a, responsável por, ou resulta na patologia dessas doenças.
[00130] Em modalidades particulares, o uso é no tratamento ou profilaxia de doenças, especialmente o tratamento, em que as doenças são tumores hematológicos, tumores sólidos e/ou suas metástases.
[00131] Outro aspecto é o uso de um composto de Fórmula (I) para a profilaxia e/ou tratamento de câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga EGFR mutante com mutações de inserção no éxon 20, mais particularmente câncer de pulmão que abriga inserções no éxon 20 de SVD V769_770ins ASV e/ou D770_N771ins e/ou metástases do mesmo, especialmente preferidas para o seu tratamento.
[00132] Outro aspecto da presente invenção é o uso de um composto de Fórmula (I) ou um estereoisômero, um tautômero, um N- óxido, um hidrato, um solvato ou um sal do mesmo, particularmente um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma mistura do mesmo, como aqui descrito, na fabricação de um medicamento para o tratamento ou profilaxia de uma doença, em que tal doença é um distúrbio hiperproliferativo ou um distúrbio responsivo à indução de morte celular, por exemplo, apoptose. Em uma modalidade, a doença é um tumor hematológico, um tumor sólido e/ou suas metástases. Em outra modalidade, a doença é câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão com EGFR mutante com mutações de inserção no éxon 20, mais particularmente câncer de pulmão que abriga inserções no éxon 20 de SVD V769_770ins ASV e/ou D770_N771ins e/ou suas metástases.
Método de tratamento de distúrbios hiperproliferativos
[00133] A presente invenção se refere a um método para usar os compostos da presente invenção e composições dos mesmos, para tratar distúrbios hiperproliferativos em mamíferos. Os compostos podem ser utilizados para inibir, bloquear, reduzir, diminuir, etc., a proliferação celular e/ou divisão celular e/ou produzir a morte celular, por exemplo, apoptose. Este método compreende a administração a um mamífero em necessidade do mesmo, incluindo um ser humano, de uma quantidade de um composto desta invenção, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, isômero, polimorfo, metabólito, hidrato, solvato ou éster; etc., que é eficaz para tratar a doença. Os distúrbios hiperproliferativos incluem, porém, não estão limitados, por exemplo, psoríase, queloides e outras hiperplasias que afetam a pele, hiperplasia benigna da próstata (BPH), tumores sólidos, como câncer de mama, do trato respiratório, cérebro, órgãos reprodutivos, trato digestivo, trato urinário, olho, fígado, pele, cabeça e pescoço, tireoide, paratireoide e suas metástases distantes. Esses distúrbios também incluem linfomas, sarcomas e leucemias.
[00134] Exemplos de câncer de mama incluem, porém, não estão limitados a carcinoma ductal invasivo, carcinoma lobular invasivo, carcinoma ductal em situ e carcinoma lobular in situ.
[00135] Exemplos de cânceres do trato respiratório incluem, porém, não estão limitados a carcinoma de pulmão de células pequenas e não pequenas, bem como adenoma brônquico e blastoma pleuropulmonar.
[00136] Exemplos de cânceres cerebrais incluem, porém, não estão limitados a glioma do tronco cerebral e hipotálmico, astrocitoma cerebelar e cerebral, meduloblastoma, ependimoma, bem como tumor neuroectodérmico e pineal.
[00137] Os tumores dos órgãos reprodutores masculinos incluem, porém, não estão limitados a, câncer de próstata e testicular. Os tumores dos órgãos reprodutivos femininos incluem, porém, não estão limitados a, câncer endometrial, cervical, ovariano, vaginal e vulvar, bem como sarcoma do útero.
[00138] Os tumores do trato digestivo incluem, porém, não estão limitados a câncer anal, cólon, colorretal, esofágico, da vesícula biliar, gástrico, pancreático, retal, do intestino delgado e da glândula salivar.
[00139] Os tumores do trato urinário incluem, porém, não estão limitados a câncer de bexiga, pênis, rim, pelve renal, ureter, uretral e renal papilar humano.
[00140] Os cânceres oculares incluem, porém, não estão limitados a melanoma intraocular e retinoblastoma.
[00141] Exemplos de cânceres de fígado incluem, porém, não estão limitados a carcinoma hepatocelular (carcinomas de células hepáticas com ou sem variante fibrolamelar), colangiocarcinoma (carcinoma do ducto biliar intra-hepático) e colangiocarcinoma hepatocelular misto.
[00142] Os cânceres de pele incluem, porém, não estão limitados a carcinoma de células escamosas, sarcoma de Kaposi, melanoma maligno, papiloma nasossinusal invertido, carcinoma de células escamosas nasossinusais associado ao papiloma nasossinusal invertido, câncer de pele de células de Merkel e câncer de pele não melanoma.
[00143] Os cânceres de cabeça e pescoço incluem, porém, não estão limitados a câncer de laringe, hipofaringe, nasofaringe, orofaringe, papiloma nasossinusal invertido, carcinoma de células escamosas nasossinusais associado ao papiloma nasossinusal invertido, câncer de lábio e cavidade oral e células escamosas. Os linfomas incluem, porém, não estão limitados a linfoma relacionado à AIDS, linfoma não Hodgkin, linfoma cutâneo de células T, linfoma de Burkitt, doença de Hodgkin e linfoma do sistema nervoso central.
[00144] Os sarcomas incluem, porém, não estão limitados a sarcoma do tecido mole, osteossarcoma, histiocitoma fibroso maligno, linfossarcoma e rabdomiossarcoma.
[00145] As leucemias incluem, porém, não estão limitadas a leucemia mieloide aguda, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crônica, leucemia mieloide crônica e leucemia de células pilosas.
[00146] Estes distúrbios foram bem caracterizados em humanos, porém, também existem com uma etiologia semelhante em outros mamíferos e podem ser tratados pela administração de composições farmacêuticas da presente invenção.
[00147] O termo "tratar" ou "tratamento" conforme declarado ao longo deste documento é usado convencionalmente, por exemplo, o controle ou cuidado de um indivíduo com a finalidade de combater, aliviar, reduzir, acalmar, melhorar a condição de, etc., uma doença ou distúrbio, como um carcinoma.
[00148] A presente invenção se refere a um método de tratamento de câncer em um indivíduo, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula Geral (I) como aqui definido.
[00149] A presente invenção se refere a um método de tratamento de câncer em um indivíduo, em que o câncer é ou adquiriu resistência a uma terapia anti-receptor do EGF, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula Geral (I) como aqui definido.
[00150] A presente invenção se refere a um método para aumentar a eficácia de uma terapia anti-receptor do EGF, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma terapia antireceptor do EGF em combinação com um composto de Fórmula Geral (I) como aqui definido.
[00151] Em uma outra modalidade, a presente invenção se refere a um método de tratamento de câncer em um indivíduo, em que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em leucemia, síndrome mielodisplásica, linfoma maligno, tumores de cabeça e pescoço, tumores do tórax, tumores gastrointestinais, tumors endócrinos, tumores mamários e outros tumores ginecológicos, tumores urológicos, tumores de pele e sarcomas, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula Geral (I) como aqui definido.
[00152] Em uma outra modalidade, a presente invenção se refere a um método de tratamento de câncer em um indivíduo, em que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em papiloma nasossinusal invertido ou papiloma nasossinusal invertido associado a carcinoma de células escamosas nasossinusais, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula Geral (I) como aqui definido.
[00153] Em uma outra modalidade, a presente invenção se refere a um método de tratamento de câncer em um indivíduo, em que o tumor do tórax é câncer de pulmão de células não pequenas, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula Geral (I) conforme aqui definido.
[00154] Em uma outra modalidade, a presente invenção se refere a um método de tratamento de câncer em um indivíduo, em que o câncer é câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um EGFR mutante com deleções no éxon 19 (como EGFR E746_A750del) ou mutações pontuais no éxon 21 (por exemplo, L858R), e/ou suas metástases, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula Geral (I) como aqui definido.
[00155] Em uma outra modalidade, a presente invenção se refere a um método de tratamento de câncer em um indivíduo, em que o câncer é câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um EGFR mutante com uma mutação de resistência adquirida D770_N771insSVD C797S, E746_A750del C797S ou L858R C797S, e/ou suas metástases, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula Geral (I) como aqui definido.
[00156] Em uma outra modalidade, a presente invenção se refere a um método de tratamento de câncer em um indivíduo, em que o câncer é câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um ERBB2 mutante com mutações de inserção no éxon 20 (como ERBB2 A775_G776insYVMA), e/ou suas metástases, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula Geral (I), conforme definido neste documento.
[00157] A presente descrição também está relacionada ao método de seleção de um paciente para o tratamento de câncer com um composto de Fórmula Geral (I) compreendendo a detecção da presença de uma mutação no éxon 20 do gene que codifica o receptor do EGF em uma amostra biológica do indivíduo, determinando assim que o paciente deve ser tratado com o referido composto. Em algumas modalidades, o EGFR compreende aD770_N771insSVD C797S, E746_A750del C797S ou mutação de resistência adquirida L858R C797S e/ou suas metástase. Em algumas modalidades, o método de seleção de um paciente para o tratamento de câncer com um composto de Fórmula Geral (I) pode compreender a detecção da presença de deleções inframe no éxon 19 ou mutações pontuais no éxon 21 do gene que codifica o receptor do EGF em uma amostra biológica do indivíduo, determinando assim que o paciente deve ser tratado com o referido composto. Por exemplo, a deleção in-frame no éxon 19 pode ser E746_A750del do EGFR ou a mutação pontual no éxon 21 pode ser L858R. Em algumas modalidades, o método de seleção de um paciente para o tratamento do câncer com um composto de Fórmula Geral (I) pode compreender a detecção da presença de uma mutação no éxon 20 do gene que codifica ERBB2 em uma amostra biológica do indivíduo, determinando assim que o paciente deve ser tratado com o referido composto. Em algumas modalidades, o ERBB2 compreende uma mutação de inserção ERBB2 A775 ou_G776insYVMA e/ou suas metástases. Além disso, os métodos de tratamento de um paciente com câncer podem compreender a administração ao indivíduo de um composto de Fórmula Geral (I) (por exemplo, em combinação com terapia anti-receptor do EGF), em que o indivíduo é selecionado para terapia detectando a presença de uma mutação em EGFR em uma amostra biológica do indivíduo. A detecção da presença de uma mutação no éxon 20 está ao alcance de alguém versado na técnica.
[00158] Em algumas modalidades, a detecção de uma mutação (por exemplo, em um EGFR ou uma mutação no éxon 20 do gene que codifica EGFR) pode ser realizada por sequenciamento (por exemplo, Sanger, Sequenciamento de Próxima Geração) ou um método selecionado a partir do grupo que consiste em imunoblotting, espectrometria de massa, PCR quantitativa de imunoprecipitação, Nortern Blot, microarranjo, ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA), hibridização in situ e suas combinações.
Métodos de tratamento de distúrbios da cinase
[00159] A presente invenção também fornece métodos para o tratamento de distúrbios associados à atividade aberrante da cinase extracelular mitogênica, incluindo, porém, não se limitando a acidente vascular cerebral, insuficiência cardíaca, hepatomegalia, cardiomegalia, diabetes, doença de Alzheimer, fibrose cística, sintomas de rejeições ao xenoenxerto, choque séptico ou asma.
[00160] Quantidades eficazes de compostos da presente invenção podem ser usadas para tratar tais distúrbios, incluindo aquelas doenças (por exemplo, câncer) mencionadas na seção Antecedente acima. No entanto, esses cânceres e outras doenças podem ser tratados com compostos da presente invenção, independentemente do mecanismo de ação e/ou da relação entre a cinase, e o distúrbio.
[00161] A frase "atividade aberrante da cinase" ou "atividade aberrante da tirosina cinase" inclui qualquer expressão ou atividade anormal do gene que codifica a cinase ou do polipeptídeo que ela codifica. Exemplos de tal atividade aberrante incluem, porém, não estão limitados a, superexpressão do gene ou polipeptídeo; amplificação de genes; mutações que produzem atividade de cinase constitutivamente ativa ou hiperativa; mutações genéticas, deleções, substituições, adições, etc.
[00162] A presente invenção também fornece métodos de inibição da atividade da cinase, especialmente da cinase extracelular de mitogênio, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um composto da presente invenção, incluindo sais, polimorfos, metabólitos, hidratos, solvatos, profármacos (por exemplo: ésteres) dos mesmos, e suas formas diastereoisoméricas. A atividade da cinase pode ser inibida nas células (por exemplo, in vitro), ou nas células de um indivíduo mamífero, especialmente um paciente humano em necessidade de tratamento.
Métodos de tratamento de distúrbios angiogênicos
[00163] A presente invenção também fornece métodos de tratamento de distúrbios e doenças associadas com angiogênese excessiva e/ou anormal.
[00164] A expressão inadequada e ectópica da angiogênese pode ser deletéria para um organismo. Uma série de condições patológicas estão associadas ao crescimento de vasos sanguíneos estranhos. Estes incluem, por exemplo, retinopatia diabética, oclusão isquêmica da veia retiniana e retinopatia da prematuridade [Aiello et al. New Engl. J. Med. 1994, 331, 1480; Peer et al. Lab. Invest. 1995, 72, 638], degeneração macular relacionada à idade [AMD; veja, Lopez et al. Investir. Opttalmol. Vis. Sci. 1996, 37, 855], glaucoma neovascular, psoríase, fibroplasias retrolentais, angiofibroma, inflamação, artrite reumatoide (RA), reestenose, reestenose intra-stent, reestenose de enxerto vascular, etc. Além disso, o aumento do suprimento de sangue associado ao tecido canceroso e neoplásico, estimula o crescimento, levando ao aumento rápido do tumor e metástase. Além disso, o crescimento de novos vasos sanguíneos e linfáticos em um tumor fornece uma rotina de fuga para as células renegadas, estimulando a metástase, e a consequente disseminação do câncer. Assim, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para tratar e/ou prevenir qualquer um dos distúrbios da angiogênese acima mencionados, por exemplo, inibindo e/ou reduzindo a formação de vasos sanguíneos; inibindo, bloqueando, reduzindo, diminuindo, etc. a proliferação de células endoteliais ou outros tipos envolvidos na angiogênese, bem como causando morte celular, por exemplo, apoptose de tais tipos de células.
[00165] Em várias modalidades, as doenças do referido método são tumores hematológicos, tumor sólido e/ou suas metástases.
[00166] Os compostos da presente invenção podem ser usados, em particular, na terapia e prevenção, isto é, profilaxia, especialmente na terapia de crescimento tumoral e metástases, especialmente em tumores sólidos de todas as indicações e fases com ou sem pré- tratamento do crescimento tumoral.
Composições farmacêuticas dos compostos da invenção
[00167] Esta invenção também se refere a composições farmacêuticas contendo um ou mais compostos da presente invenção. Estas composições podem ser utilizadas para alcançar o efeito farmacológico desejado por administração a um paciente com necessidade das mesmas. Um paciente, para o propósito desta invenção, é um mamífero, incluindo um ser humano, em necessidade de tratamento para a condição, distúrbio ou doença particular.
[00168] Portanto, a presente invenção inclui composições farmacêuticas que são constituídas por um veículo ou auxiliar farmaceuticamente aceitável e uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto, ou seu sal, da presente invenção.
[00169] Outro aspecto da invenção é uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) e um auxiliar farmaceuticamente aceitável para o tratamento de uma doença mencionada supra, especialmente para o tratamento de tumores hematológicos, tumores sólidos e/ou suas metástases.
[00170] Um veículo ou auxiliar farmaceuticamente aceitável pode ser um veículo que não é tóxico e inócuo para um paciente em concentrações consistentes com a atividade eficaz do ingrediente ativo, de modo que quaisquer efeitos colaterais atribuíveis ao veículo não viciem os efeitos benéficos do ingrediente ativo. Os veículos e auxiliares são todos os tipos de aditivos que auxiliam a composição a ser adequada para administração.
[00171] Uma quantidade farmaceuticamente eficaz de composto pode ser aquela quantidade que produz um resultado ou exerce a influência pretendida na condição particular a ser tratada.
[00172] Os compostos da presente invenção podem ser administrados com veículos farmaceuticamente aceitáveis ou auxiliares bem conhecidos na técnica usando quaisquer formas de dosagem unitária convencionais eficazes, incluindo preparações de liberação imediata, lenta e temporizada, oralmente, parenteralmente, topicamente, nasalmente, oftalmicamente, oticamente,sublingualmente, retalmente, vaginalmente e semelhantes.
[00173] Para administração oral, os compostos podem ser formulados em preparações sólidas ou líquidas, tais como cápsulas, pílulas, comprimidos, trociscos, pastilhas, fundidos, pós, soluções, suspensões ou emulsões e podem ser preparados de acordo com os métodos conhecidos na técnica para a fabricação de composições farmacêuticas. As formas de dosagem unitária sólida podem ser uma cápsula que pode ser do tipo de gelatina dura ou mole comum contendo auxiliares, por exemplo, tensoativos, lubrificantes e cargas inertes, tais como lactose, sacarose, fosfato de cálcio e amido de milho.
[00174] Em outra modalidade, os compostos desta invenção podem ser comprimidos com bases de comprimidos convencionais, tais como lactose, sacarose e amido de milho em combinação com ligantes, tais como goma arábica, amido de milho ou gelatina, agentes desintegrantes destinados a auxiliar na quebra e dissolução do comprimido após a administração, como amido de batata, ácido algínico, amido de milho e goma guar, goma tragacanto, acácia, lubrificantes destinados a melhorar o fluxo de granulação do comprimido e prevenir a adesão do material do comprimido às superfícies dos matrizes de comprimido e punções, por exemplo, talco, ácido esteárico ou estearato de magnésio, cálcio ou zinco, corantes, agentes corantes e agentes aromatizantes, tais como hortelã-pimenta, óleo de gualtéria ou aroma de cereja, destinados a realçar as qualidades estéticas dos comprimidos e torná-los mais aceitáveis para o paciente. Excipientes adequados para uso em formas de dosagem líquidas orais incluem fosfato dicálcico e diluentes, tais como água e alcoóis, por exemplo, etanol, álcool benzílico e alcoóis de polietileno, com ou sem a adição de um tensoativo farmaceuticamente aceitável, agente de suspensão ou agente emulsificante. Vários outros materiais podem estar presentes como revestimentos ou de outra forma para modificar a forma física da unidade de dosagem. Por exemplo, comprimidos, pílulas ou cápsulas podem ser revestidos com goma- laca, açúcar ou ambos.
[00175] Os pós e grânulos dispersíveis são adequados para a preparação de uma suspensão aquosa. Eles fornecem o ingrediente ativo em mistura com um agente dispersante ou umectante, um agente de suspensão e um ou mais conservantes. Agentes dispersantes ou umectantes e agentes de suspensão adequados são exemplificados por aqueles já mencionados acima. Excipientes adicionais, por exemplo, aqueles agentes adoçantes, aromatizantes e corantes descritos acima, também podem estar presentes.
[00176] As composições farmacêuticas desta invenção também podem estar na forma de emulsões de óleo-em-água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, como parafina líquida ou uma mistura de óleos vegetais. Os agentes emulsificantes adequados podem ser (1) gomas de ocorrência natural, como goma acácia e goma tragacanto, (2) fosfatídeos de ocorrência natural, como soja e lecitina, (3) ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, monooleato de sorbitano, (4) produtos de condensação dos referidos ésteres parciais com óxido de etileno, por exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitano. As emulsões também podem conter agentes adoçantes e aromatizantes.
[00177] As suspensões oleosas podem ser formuladas suspendendo o ingrediente ativo em um óleo vegetal tal como, por exemplo, óleo de amendoim, azeite, óleo de gergelim ou óleo de coco, ou em um óleo mineral como parafina líquida. As suspensões oleosas podem conter um agente espessante como, por exemplo, cera de abelha, parafina dura ou álcool cetílico. As suspensões também podem conter um ou mais conservantes, por exemplo, etil ou n-propil p-hidroxibenzoato; um ou mais agentes corantes; um ou mais agentes aromatizantes; e um ou mais adoçantes, tais como sacarose ou sacarina.
[00178] Os xaropes e elixires podem ser formulados com agentes adoçantes como, por exemplo, glicerol, propileno glicol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações também podem conter um demulcente e conservante, como metil e propil parabenos e agentes aromatizantes e corantes.
[00179] Os compostos desta invenção também podem ser administrados por via parenteral, isto é, subcutânea, intravenosa, intraocular, intrassinovial, intramuscular ou interperitoneal, como dosagens injetáveis do composto em, por exemplo, um diluente fisiologicamente aceitável com um veículo farmacêutico que pode ser um líquido estéril ou mistura de líquidos, como água, solução salina, dextrose aquosa e soluções de açúcar relacionadas, um álcool, como etanol, isopropanol ou álcool hexadecílico, glicóis, como propileno glicol ou polietileno glicol, glicerol cetais, como 2,2-dimetil-1,1- dioxolano-4-metanol, éteres como poli(etileno glicol) 400, um óleo, um ácido graxo, um éster de ácido graxo ou, um glicerídeo de ácido graxo ou um glicerídeo de ácido graxo acetilado, com ou sem a adição de um tensoativo farmaceuticamente aceitável, como um sabão ou detergente, agente de suspensão, como pectina, carbômeros, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose ou carboximetilcelulose, ou agente emulsificante e outros adjuvantes farmacêuticos.
[00180] Ilustrativos de óleos que podem ser usados nas formulações parenterais desta invenção são aqueles de origem petrolífera, animal, vegetal ou sintética, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de soja, óleo de gergelim, óleo de caroço de algodão, óleo de milho, azeite, vaselina e óleo mineral. Os ácidos graxos adequados incluem ácido oleico, ácido esteárico, ácido isoestearico e ácido mirístico. Os ésteres de ácidos graxos adequados são, por exemplo, oleato de etila e miristato de isopropila. Os sabões adequados incluem sais de metal alcalino de ácido graxo, amônio e trietanolamina, e os detergentes adequados incluem detergentes catiônicos, por exemplo haletos de dimetil dialquil amônio, haletos de alquil piridínio e acetatos de alquilamina; detergentes aniônicos, por exemplo, sulfonatos de alquila, arila e olefina, alquila, olefina, éter e sulfatos de monoglicerídeo e sulfossuccinatos; detergentes não iônicos, por exemplo, óxidos de aminas graxas, alcanolamidas de ácidos graxos e poli(oxietileno-oxipropileno)s ou copolímeros de óxido de etileno ou óxido de propileno; e detergentes anfotéricos, por exemplo, alquil-beta-aminopropionatos e sais de amônio quaternário de 2-alquilimidazolina, bem como misturas.
[00181] As composições parentéricas desta invenção conterão tipicamente de cerca de 0,5 % a cerca de 25 % em peso do ingrediente ativo em solução. Conservantes e tampões também podem ser usados com vantagem. A fim de minimizar ou eliminar a irritação no sítio da injeção, tais composições podem conter um tensoativo não iônico com um equilíbrio hidrófilo-lipófilo (HLB) em uma modalidade, de cerca de 12 a cerca de 17. A quantidade de tensoativo em tal formulação em uma modalidade, varia de cerca de 5 % a cerca de 15 % em peso. O tensoativo pode ser um único componente tendo o HLB acima ou pode ser uma mistura de dois ou mais componentes tendo o HLB desejado.
[00182] Ilustrativos de tensoativos usados em formulações parenterais são a classe de ésteres de ácido graxo de polietileno sorbitano, por exemplo, monooleato de sorbitano, e os aduzidos de alto peso molecular de óxido de etileno com uma base hidrofóbica, formados pela condensação de óxido de propileno com propileno glicol.
[00183] As composições farmacêuticas podem estar na forma de suspensões aquosas injetáveis estéreis. Tais suspensões podem ser formuladas de acordo com métodos conhecidos usando agentes dispersantes ou umectantes adequados e agentes de suspensão tais como, por exemplo, carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxipropilmetil-celulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto e goma acácia; agentes dispersantes ou umectantes que podem ser um fosfatídeo de ocorrência natural, como lecitina, um produto de condensação de um óxido de alquileno com um ácido graxo, por exemplo, estearato de polioxietileno, um produto de condensação de óxido de etileno com um álcool alifático de cadeia longa, por exemplo, heptadeca-etilenoxicetanol, um produto de condensação de óxido de etileno com um éster parcial derivado de um ácido graxo e um hexitol, tal como monooleato de polioxietileno sorbitol, ou um produto de condensação de um óxido de etileno com um éster parcial derivado de um ácido graxo e um anidrido de hexitol, por exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitano.
[00184] A preparação injetável estéril também pode ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente não tóxico parentericamente aceitável. Os diluentes e solventes que podem ser empregados são, por exemplo, água, solução de Ringer, soluções isotônicas de cloreto de sódio e soluções isotônicas de glicose. Além disso, óleos fixos estéreis são convencionalmente empregados como solventes ou meios de suspensão. Para este propósito, qualquer óleo fixo suave pode ser empregado incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, ácidos graxos, como ácido oleico, podem ser usados na preparação de injetáveis.
[00185] Uma composição da invenção também pode ser administrada na forma de supositórios para administração retal do fármaco. Estas composições podem ser preparadas misturando o fármaco com um excipiente não irritante adequado que é sólido à temperatura normal, porém, líquido à temperatura retal e, portanto, derreterá no reto para liberar o fármaco. Esses materiais são, por exemplo, manteiga de cacau e polietileno glicol.
[00186] As formulações de liberação controlada para administração parenteral incluem formulações lipossomais, de microesferas poliméricas e de gel polimérico que são conhecidas na técnica.
[00187] Pode ser desejável ou necessário introduzir a composição farmacêutica ao paciente por meio de um dispositivo de distribuição mecânica. A construção e utilização de dispositivos de distribuição mecânica para a distribuição de agentes farmacêuticos são bem conhecidas na técnica. Técnicas diretas para administração, por exemplo, administrar um fármaco diretamente ao cérebro geralmente envolvem a colocação de um cateter de liberação de fármaco no sistema ventricular do paciente para contornar a barreira hematoencefálica. Um tal sistema de liberação implantável, usado para o transporte de agentes para regiões anatômicas específicas do corpo, é descrito na Patente Norte-americana No. 5.011.472, emitida em 30 de abril de 1991.
[00188] As composições da invenção também podem conter outros ingredientes de composição convencionais farmaceuticamente aceitáveis, geralmente referidos como veículos ou diluentes, conforme necessário ou desejado. Podem ser utilizados procedimentos convencionais para preparar tais composições em formas de dosagem apropriadas.
[00189] Tais ingredientes e procedimentos incluem aqueles descritos nas seguintes referências, cada uma das quais é aqui incorporada por referência: Powell, M.F. et al., "Compendium de Excipients for Parenteral Formulations" PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1998, 52(5), 238-311; Stricklei, R.G "Parenteral Formulations de Small Molecule Therapeutics Marketed no United States (1999)-Part-1" PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1999, 53(6), 324-349; e Nema, S. et al., "Excipients e Their Use em Injectable Products" PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1997, 51(4), 166-171.
[00190] Ingredientes farmacêuticos comumente usados que podem ser usados conforme apropriado para formular a composição para sua via de administração pretendida incluem: agentes acidificantes (exemplos incluem, mas não estão limitados a ácido acético, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido clorídrico, ácido nítrico); agentes alcalinizantes (exemplos incluem, mas não estão limitados a solução de amônia, carbonato de amônio, dietanolamina, monoetanolamina, hidróxido de potássio, borato de sódio, carbonato de sódio, hidróxido de sódio, trietanolamina, trolamina); adsorventes (exemplos incluem, mas não estão limitados a celulose em pó e carvão ativado); propelentes de aerossol (exemplos incluem, mas não estão limitados a dióxido de carbono, CCl2F2, F2ClC-CClF2 e CClF3); agentes de deslocamento de ar (exemplos incluem, mas não estão limitados a nitrogênio e argônio); conservantes antifúngicos (exemplos incluem, mas não estão limitados a ácido benzoico, butilparabeno, etilparabeno, metilparabeno, propilparabeno, benzoato de sódio); conservantes antimicrobianos (exemplos incluem, mas não estão limitados a cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, álcool benzílico, cloreto de cetilpiridínio, clorobutanol, fenol, álcool feniletílico, nitrato fenilmercúrico e timerosal); antioxidantes (exemplos incluem, mas não estão limitados a ácido ascórbico, palmitato de ascorbila, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, ácido hipofosforoso, monotioglicerol, propilgalato, ascorbato de sódio, bissulfito de sódio, sulfoxilato de formaldeído de sódio, metabissulfito de sódio); materiais de ligação (exemplos incluem, mas não estão limitados a polímeros em bloco, borracha natural e sintética, poliacrilatos, poliuretanos, silicones, polissiloxanos e copolímeros de estireno-butadieno); agentes tamponantes (exemplos incluem mas não estão limitados a metafosfato de potássio, fosfato dipotássico, acetato de sódio, citrato de sódio anidro e citrato de sódio di-hidratado); agentes de transporte (exemplos incluem, mas não estão limitados a xarope de acácia, xarope aromático, elixir aromático, xarope de cereja, xarope de cacau, xarope de laranja, xarope, óleo de milho, óleo mineral, óleo de amendoim, óleo de gergelim, injeção bacteriostática de cloreto de sódio e água bacteriostática para injeção); agentes quelantes (exemplos incluem, mas não estão limitados a edetato dissódico e ácido edético); corantes (os exemplos incluem, mas não estão limitados a FD&C Vermelho No. 3, FD&C Vermelho No. 20, FD&C Amarelo No. 6, FD&C Azul No. 2, D&C Verde No. 5, D&C Laranja No. 5, D&C Vermelho No. 8, caramelo e óxido férrico vermelho); agentes de clarificação (exemplos incluem, mas não estão limitados a bentonita); agentes emulsionantes (exemplos incluem, mas não estão limitados a acácia, cetomacrogol, álcool cetílico, monoestearato de glicerila, lecitina, monooleato de sorbitano, monoestearato de polioxietileno 50); agentes encapsulantes (exemplos incluem, mas não estão limitados a gelatina e ftalato de acetato de celulose); aromatizantes (exemplos incluem, mas não estão limitados a óleo de erva-doce, óleo de canela, cacau, mentol, óleo de laranja, óleo de hortelã-pimenta e vanilina); umectantes (exemplos incluem mas não estão limitados a glicerol, propileno glicol e sorbitol); agentes de levigação (exemplos incluem, mas não estão limitados a óleo mineral e glicerina); óleos (exemplos incluem, mas não estão limitados a óleo de amendoim, óleo mineral, azeite, óleo de amendoim, óleo de gergelim e óleo vegetal); bases para unguentos (exemplos incluem, mas não estão limitados a lanolina, unguento hidrofílico, unguento de polietileno glicol, vaselina, vaselina hidrofílica, unguento branco, unguento amarelo e unguento de água de rosas); realçadores de penetração (liberação transdérmica) (exemplos incluem, mas não estão limitados a mono-hidróxi ou poli- hidróxi alcoóis, alcoóis mono ou polivalentes, alcoóis graxos saturados ou insaturados, ésteres graxos saturados ou insaturados, ácidos dicarboxílicos saturados ou insaturados, óleos essenciais, derivados de fosfatidila, cefalina, terpenos, amidas, éteres, cetonas e ureias); plastificantes (exemplos incluem mas não estão limitados a dietil ftalato e glicerol); solventes (exemplos incluem, mas não estão limitados a etanol, óleo de milho, óleo de caroço de algodão, glicerol, isopropanol, óleo mineral, ácido oleico, óleo de amendoim, água purificada, água para injeção, água estéril para injeção e água estéril para irrigação); agentes de endurecimento (exemplos incluem, mas não estão limitados a álcool cetílico, cera de ésteres cetílicos, cera microcristalina, parafina, álcool estearílico, cera branca e cera amarela); bases de supositório (exemplos incluem, mas não estão limitados a manteiga de cacau e polietileno glicóis (misturas)); tensoativos (exemplos incluem, mas não estão limitados a cloreto de benzalcônio, nonoxinol 10, oxtoxinol 9, polissorbato 80, lauril sulfato de sódio e monopalmitato de sorbitano); agentes de suspensão (exemplos incluem, mas não estão limitados a ágar, bentonita, carbômeros, carboximetilcelulose de sódio, hidroxietilcelulose, hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, caulim, metilcelulose, tragacanto e veegum); agentes adoçantes (exemplos incluem, mas não estão limitados a aspartame, dextrose, glicerol, manitol, propileno glicol, sacarina sódica, sorbitol e sacarose); antiaderentes para comprimidos (exemplos incluem, mas não estão limitados a estearato de magnésio e talco); ligantes para comprimidos (exemplos incluem, mas não estão limitados a acácia, ácido algínico, carboximetilcelulose de sódio, açúcar compressível, etilcelulose, gelatina, glicose líquida, metilcelulose, polivinilpirrolidona não reticulada e amido pré- gelatinizado); diluentes de comprimidos e cápsulas (exemplos incluem, mas não estão limitados a fosfato de cálcio dibásico, caulim, lactose, manitol, celulose microcristalina, celulose em pó, carbonato de cálcio precipitado, carbonato de sódio, fosfato de sódio, sorbitol e amido); agentes de revestimento de comprimidos (exemplos incluem, mas não estão limitados a glicose líquida, hidroxietilcelulose, hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, metilcelulose, etilcelulose, ftalato de acetato de celulose e goma-laca); excipientes de compressão direta de comprimidos (exemplos incluem, mas não estão limitados a fosfato de cálcio dibásico); desintegrantes de comprimidos (exemplos incluem, mas não estão limitados a ácido algínico, carboximetilcelulose de cálcio, celulose microcristalina, polacrilina de potássio, polivinilpirrolidona reticulada, alginato de sódio, glicolato de amido sódico e amido); deslizantes de comprimidos (exemplos incluem, mas não estão limitados a sílica coloidal, amido de milho e talco); lubrificantes de comprimidos (exemplos incluem, mas não estão limitados a estearato de cálcio, estearato de magnésio, óleo mineral, ácido esteárico e estearato de zinco); opaquantes de comprimido/cápsula (exemplos incluem, mas não estão limitados a dióxido de titânio); agentes de polimento de comprimidos (exemplos incluem, mas não estão limitados a cera de carnuba e cera branca); agentes espessantes (exemplos incluem, mas não estão limitados a cera de abelha, álcool cetílico e parafina); agentes de tonicidade (exemplos incluem, mas não estão limitados a dextrose e cloreto de sódio); agentes de aumento da viscosidade (exemplos incluem, mas não estão limitados a ácido algínico, bentonita, carbômeros, carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, polivinilpirrolidona, alginato de sódio e tragacanto); e agentes umectantes (exemplos incluem, mas não estão limitados a heptadecaetileno oxicetanol, lecitinas, monooleato de sorbitol, monooleato de polioxietileno sorbitol e estearato de polioxietileno).
[00191] As composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção podem ser ilustradas da seguinte forma:
[00192] Solução i.v. estéril: Uma solução de 5 mg/mL do composto desejado desta invenção pode ser feita usando água injetável estéril, e o pH é ajustado se necessário. A solução é diluída para administração a 1 - 2 mg/mL com dextrose 5 % estéril e é administrada por uma infusão i.v. durante cerca de 60 minutos.
[00193] Pó liofilizado para administração i.v.: Uma preparação estéril pode ser preparada com (i) 100 - 1000 mg do composto desejado desta invenção como um pó liofilizado, (ii) 32-327 mg/mL de citrato de sódio, e (iii) 300 - 3000 mg de Dextran 40. A formulação é reconstituída com solução salina injetável estéril ou dextrose 5 % a uma concentração de 10 a 20 mg/mL, que é posteriormente diluída com solução salina ou dextrose 5 % a 0,2 - 0,4 mg/mL, e é administrada em bolo IV ou por infusão IV durante 15 - 60 minutos.
[00194] Suspensão intramuscular: A seguinte solução ou suspensão pode ser preparada, para injeção intramuscular: 50 mg/mL do composto insolúvel em água desejado desta invenção 5 mg/mL de carboximetilcelulose de sódio 4 mg/mL de TWEEN 80 9 mg/mL de cloreto de sódio 9 mg/mL de álcool benzílico
[00195] Cápsulas de Casca Dura: Um grande número de cápsulas unitárias são preparadas enchendo cápsulas de galantina rígidas padrão de duas peças, cada uma com 100 mg de ingrediente ativo em pó, 150 mg de lactose, 50 mg de celulose e 6 mg de estearato de magnésio.
[00196] Cápsulas de gelatina mole: Uma mistura de ingrediente ativo em um óleo digerível, como óleo de soja, óleo de caroço de algodão ou azeite de oliva, é preparada e injetada por meio de uma bomba de deslocamento positivo na gelatina fundida para formar cápsulas de gelatina mole contendo 100 mg do ingrediente ativo. As cápsulas são lavadas e secadas. O ingrediente ativo pode ser dissolvido em uma mistura de polietileno glicol, glicerina e sorbitol para preparar uma mistura de medicamento miscível em água.
[00197] Comprimidos: Um grande número de comprimidos é preparado por procedimentos convencionais de modo que a unidade de dosagem seja 100 mg do ingrediente ativo, 0,2 mg de dióxido de silício coloidal, 5 mg de estearato de magnésio, 275 mg de celulose microcristalina, 11 mg de amido e 98,8 mg de lactose. Revestimentos aquosos e não aquosos adequados podem ser aplicados para aumentar a palatabilidade, melhorar a elegância e estabilidade ou retardar a absorção.
[00198] Comprimidos/Cápsulas de Liberação Imediata: Estas são formas de dosagem oral sólidas feitas por processos convencionais e novos. Essas unidades são tomadas por via oral sem água para dissolução imediata e liberação do medicamento. O ingrediente ativo é misturado em um líquido contendo ingredientes como açúcar, gelatina, pectina e adoçantes. Esses líquidos são solidificados em comprimidos ou cápsulas sólidas por meio de liofilização e técnicas de extração em estado sólido. Os compostos da droga podem ser comprimidos com açúcares viscoelásticos e termoelásticos e polímeros ou componentes efervescentes para produzir matrizes porosas destinadas à liberação imediata, sem a necessidade de água.
Dose e administração
[00199] Com base em técnicas de laboratório padrão conhecidas para avaliar compostos úteis para o tratamento de distúrbios hiperproliferativos e distúrbios angiogênicos, por testes de toxicidade padrão e por ensaios farmacológicos padrão para a determinação do tratamento das condições identificadas acima em mamíferos, e pela comparação desses resultados com os resultados de medicamentos conhecidos que são usados para tratar estas condições, a dosagem eficaz dos compostos desta invenção pode ser facilmente determinada para o tratamento de cada indicação desejada. A quantidade do ingrediente ativo a ser administrado no tratamento de uma dessas condições pode variar amplamente de acordo com considerações como o composto particular, e a unidade de dosagem empregada, o modo de administração, o período de tratamento, a idade, e o sexo do paciente tratada, e a natureza e extensão da condição tratada.
[00200] A quantidade total do ingrediente ativo a ser administrado geralmente variará de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 200 mg/kg de peso corporal por dia, e em modalidades particulares de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 20 mg/kg de peso corporal por dia . Os esquemas de dosagem clinicamente úteis irão variar de uma a três vezes ao dia a uma vez a cada quatro semanas. Além disso, "férias de droga" nas quais um paciente não recebe uma dose de uma droga por um certo período de tempo podem ser benéficas para o equilíbrio geral entre o efeito farmacológico, e a tolerabilidade. Uma dosagem unitária pode conter de cerca de 0,5 mg a cerca de 1500 mg de ingrediente ativo e pode ser administrada uma ou mais vezes por dia ou menos de uma vez por dia. A dosagem diária média para administração por injeção, incluindo injeções intravenosas, intramusculares, subcutâneas e parentéricas, e o uso de técnicas de infusão será em outras modalidades de 0,01 a 200 mg/kg de peso corporal total. O regime de dosagem retal médio diário será, em modalidades particulares, de 0,01 a 200 mg/kg de peso corporal total. O regime de dosagem vaginal diário médio será, em outras modalidades, de 0,01 a 200 mg/kg de peso corporal total. O regime de dosagem tópico diário médio ainda em outras modalidades será de 0,1 a 200 mg administrados entre uma a quatro vezes ao dia. A concentração transdérmica será em outras modalidades a necessária para manter uma dose diária de 0,01 a 200 mg/kg. O regime de dosagem de inalação diária média será em outras modalidades de 0,01 a 100 mg/kg de peso corporal total.
[00201] É claro que o regime de dosagem inicial e contínuo específico para cada paciente irá variar de acordo com a natureza e gravidade da condição, conforme determinado pelo médico assistente, a atividade do composto específico utilizado, a idade, e a condição geral do paciente, o tempo de administração, via de administração, taxa de excreção do fármaco, combinações de fármacos e semelhantes. O modo de tratamento desejado, e o número de doses de um composto da presente invenção ou um sal ou éster farmaceuticamente aceitável ou composição do mesmo podem ser determinados por aqueles versados na técnica usando testes de tratamento convencionais.
Terapias de Combinação
[00202] Os compostos desta invenção podem ser administrados como o único agente farmacêutico ou em combinação com um ou mais outros agentes farmacêuticos onde a combinação não causa efeitos adversos inaceitáveis. Esses agentes farmacêuticos combinados podem ser outros agentes com efeitos antiproliferativos, tais como, por exemplo, para o tratamento de tumores hematológicos, tumores sólidos e/ou metástases dos mesmos e/ou agentes para o tratamento de efeitos colaterais indesejáveis. A presente invenção também se refere a tais combinações.
[00203] Outros agentes anti-hiperproliferativos adequados para uso com a composição da invenção incluem, mas não estão limitados aos compostos reconhecidos para serem usados no tratamento de doenças neoplásicas em Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (Nona Edição), editor Molinoff et al., publ. por McGraw-Hill, páginas 1225-1287, (1996), que é aqui incorporado por referência, especialmente agentes anticancerígenos (quimioterapêuticos) como definidos supra. A combinação pode ser uma combinação não fixa ou uma combinação de dose fixa conforme o caso.
[00204] Os métodos de teste de uma propriedade farmacológica ou farmacêutica particular são bem conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00205] Os exemplos de experiências de teste aqui descritos servem para ilustrar a presente invenção, e a invenção não está limitada aos exemplos dados.
[00206] Como será apreciado por pessoas versadas na técnica, a invenção não está limitada às modalidades particulares aqui descritas, mas cobre todas as modificações das referidas modalidades que estão dentro do espírito e escopo da invenção conforme definido pelas reivindicações anexas.
[00207] Os exemplos seguintes ilustram a invenção em maior detalhe, sem a restringir. Outros compostos de acordo com a invenção, cuja preparação não é explicitamente descrita, podem ser preparados de uma forma análoga.
[00208] Os compostos, que são mencionados nos exemplos, e os seus sais, representam modalidades preferidas da invenção, bem como uma reivindicação cobrindo todas as subcombinações dos resíduos do composto de Fórmula (I) conforme descrito pelos exemplos específicos.
[00209] O termo "de acordo com" dentro da seção experimental é usado no sentido de que o procedimento referido deve ser usado "analogamente a".
SEÇÃO EXPERIMENTAL
[00210] Os nomes químicos foram gerados usando o software ACD/Name da ACD/Labs. Em alguns casos, nomes geralmente aceitos de reagentes comercialmente disponíveis foram usados no lugar dos nomes gerados por ACD/Name.
[00211] A seguinte tabela 1 lista as abreviações usadas neste parágrafo e na seção de Exemplos, desde que não sejam explicadas no corpo do texto. Outras abreviaturas têm seus significados habituais per se para a pessoa versada.Tabela 1: Abreviações
[00212] Outras abreviaturas têm seus significados habituais per se para a pessoa versada.
[00213] Os vários aspectos da invenção descritos neste pedido são ilustrados pelos seguintes exemplos que não pretendem limitar a invenção de qualquer forma.
[00214] Os exemplos de experiências de teste aqui descritos servem para ilustrar a presente invenção, e a invenção não está limitada aos exemplos dados.
SEÇÃO EXPERIMENTAL - PARTE GERAL
[00215] Todos os reagentes, para os quais a síntese não é descrita na parte experimental, estão comercialmente disponíveis ou são compostos conhecidos ou podem ser formados a partir de compostos conhecidos por métodos conhecidos por uma pessoa versada na técnica.
[00216] Os compostos e intermediários produzidos de acordo com os métodos da invenção podem requerer purificação. A purificação de compostos orgânicos é bem conhecida da pessoa versada na técnica e pode haver várias maneiras de purificar o mesmo composto. Em alguns casos, nenhuma purificação pode ser necessária. Em alguns casos, os compostos podem ser purificados por cristalização. Em alguns casos, as impurezas podem ser removidas por trituração usando um solvente adequado. Em alguns casos, os compostos podem ser purificados por cromatografia, particularmente cromatografia de coluna flash, usando, por exemplo, cartuchos de sílica gel pré-embalados, por exemplo, Cartuchos Biotage SNAP KP- Sil® ou KP-NH® em combinação com um sistema autopurificador Biotage (SP4® ou Isolera Four®) e eluentes como gradientes de hexano/acetato de etila ou DCM/metanol. Na cromatografia de coluna flash, sílica gel não modificada ("regular") pode ser usada, bem como sílica gel funcionalizada com aminofase. Se for feita referência à cromatografia de coluna flash ou à cromatografia flash na seção experimental sem especificação de uma fase estacionária, foi usada sílica gel regular.
[00217] Em alguns casos, os compostos podem ser purificados por HPLC preparativa usando, por exemplo, um autopurificador Waters equipado com um detector de matriz de diodos e/ou espectrômetro de massa de ionização por eletropulverização on-line em combinação com uma coluna de fase reversa pré-embalada adequada e eluentes, como gradientes de água e acetonitrila que pode conter aditivos tais como ácido trifluoroacético, ácido fórmico ou amônia aquosa.
[00218] Em alguns casos, os métodos de purificação descritos acima podem fornecer aqueles compostos da presente invenção que possuem uma funcionalidade suficientemente básica ou ácida na forma de um sal, tal como, no caso de um composto da presente invenção que é suficientemente básico, um sal de trifluoroacetato ou formiato, por exemplo, ou, no caso de um composto da presente invenção que é suficientemente ácido, um sal de amónio por exemplo. Um sal deste tipo pode ser transformado na sua forma de base livre ou ácido livre, respectivamente, por vários métodos conhecidos da pessoa versada na técnica, ou ser usado como sais em ensaios biológicos subsequentes. Deve ser entendido que a forma específica (por exemplo, sal, base livre, etc.) de um composto da presente invenção como isolado e como descrito aqui não é necessariamente a única forma em que o referido composto pode ser aplicado a um ensaio biológico a fim de para quantificar a atividade biológica específica. Métodos de LC-MS Analítica: Método 1: Instrumento: Waters Acquity UPLCMS SingleQuad; Coluna: Acquity UPLC BEH C18 1,7 μm, 50x2,1 mm; eluente A: água + 0,1 % em vol. de ácido fórmico (99 %), eluente B: acetonitrila; gradiente: 01,6 min. 1-99 % de B, 1,6-2,0 min. 99 % de B; vazão 0,8 mL/min; temperatura: 60 °C; Varredura DAD: 210-400 nm. Método 2: Instrumento: Waters Acquity UPLCMS SingleQuad; Coluna: Acquity UPLC BEH C18 1,7 μm, 50x2,1 mm; eluente A: água + 0,2 % em vol. de amônia aquosa (32 %), eluente B: acetonitrila; gradiente: 01,6 min. 1-99 % de B, 1,6-2,0 min. 99 % de B; vazão 0,8 mL/min; temperatura: 60 °C; Varredura DAD: 210-400 nm. Método 3: Instrumento: Sistema Waters Acquity UPLC H-Class; Coluna: Acquity CSH C18 1,7 μm 2,1x50 mm; eluente A: água + 0,1 % em vol. de ácido fórmico, eluente B: acetonitrila, eluente C: 2 % em vol. de amônia (28 %) em água, eluente D: 2 % em vol. de ácido fórmico em água; gradiente: 0-1,2 min 2-95 % de B com A e 5 % D ao longo, 1,2-1,4 min. 95 % de B; vazão 0,8 mL/min; temperatura: 40 °C; PDA: 215-350 nm. Método 4: Instrumento: Sistema Waters Acquity UPLC H-Class; Coluna: XBridge BEH C18 2,5 μm 2,1 x 50 mm; eluente A: água + 0,1 % em volume de ácido fórmico, eluente B: acetonitrila, eluente C: 2 % em volume de amônia (28 %) em água, eluente D: 2 % em volume de ácido fórmico em água; gradiente: 0-1,2 min 2-95 % de B com A e 5 % C ao longo, 1,2-1,4 min 95 % de B; vazão 0,8 mL/min; temperatura: 40 °C; PDA: 215-350 nm. Método 5: Instrumento de MS: SHIMADZU LCMS-2020; Instrumento de HPLC: LabSolution versão 5.72; Coluna: Kinetex@5um EVO C18 30 x 2,1 mm; eluente A: 0,0375 % de TFA em água (v/v), eluente B: 0,01875 % de TFA em acetonitrila: gradiente: 0,0 min 0 % de B ^ 3,00 min 60 % de B ^ 3,50 min 60 % de B ^ 3,51 min 0 % de B ^ 4,00 min 0 % de B; taxa de fluxo: 0,8 mL/mistura; temperatura do forno: 50 °C; Detecção de UV: 220 nm e 254 nm. Método 6: Instrumento: Agilent 1290 UPLCMS 6230 TOF; Saule: BEH C 18 1,7 μm, 50x2,1 mm; Eluente A: Wasser + 0,05 % de Ameisensaure (99 %); Eluente B: Acetonitril + 0,05 % de Ameisensaure (99 %); Gradiente: 0-1,7 2-90 % de B, 1,7-2,0 90 % de B; Fluss 1,2 mL/min; Temperatura: 60 °C; Varredura DAD: 190-400 nm. Métodos de LC-MS Preparativa: Método 7: Instrumento: Waters Autopurification MS SingleQuad; Coluna: Waters XBrigde C18 5 μ 100x30 mm; eluente A: água + 0,2 % em vol. de amônia aquosa (32 %), eluente B: acetonitrila; gradiente: 05,5 min. 5-100 % de B; vazão 70 mL/min; temperatura: 25 °C; Varredura DAD: 210-400 nm Método 8: Instrumento: Waters Autopurification MS SingleQuad; Coluna: Waters XBrigde C18 5 μ 50x50 mm; eluente A: água + 0,1 % em volume de ácido fórmico, eluente B: metanol; gradiente: 0-0,50 min. 20 % de B; vazão de 50 a 100 mL/min, 0,50-8,00 min. 20 - 60 % de B; vazão 100 mL/min, temperatura: 25 °C; Varredura DAD: 210-400 nm Método 9: Instrumento: Labomatic HD-5000, cabeçote HDK-280, módulo gradiente NDB-1000, coletor de frações Labomatic Labocol Vario 2000, detector Knauer UV Azura UVD 2,1S, software Prepcon 5. Coluna: Chromatorex C18 10 μM 120x30 mm; Eluente A: água + ácido fórmico 0,1 %; Eluente B: acetonitrila; gradiente: dado para intermediários e exemplos, taxa de 150 mL/min, temperatura de 25 °C; UV 220 nm Método 10: Instrumento: Labomatic HD-5000, cabeçote HDK-280, módulo gradiente NDB-1000, coletor de frações Labomatic Labocol Vario 2000, detector Knauer UV Azura UVD 2,1S, software Prepcon 5. Coluna: Chromatorex C18 10 μM 120x30 mm; Eluente A: 0,1 % de amônia em água; Eluente B: acetonitrila; gradiente: dado para intermediários e exemplos, taxa de 150 mL/min, temperatura de 25 °C; UV 250 nm Método 11: Instrumento: Labomatic HD-5000, cabeçote HDK-280, módulo gradiente NDB-1000, coletor de frações Labomatic Labocol Vario 2000, detector Knauer UV Azura UVD 2,1S, software Prepcon 5. Coluna: Chromatorex C18 10 μM 300 x 50 mm; Eluente A: 0,1 % de amônia em água; Eluente B: acetonitrila; gradiente: dado para intermediários e exemplos, taxa de 250 mL/min, temperatura 25 °C; UV 250 nm Espectros de RMN:
[00219] As multiplicidades de sinais de prótons em espectros de 1H RMN dados nos parágrafos a seguir refletem a forma de sinal observada e não levam em consideração nenhum fenômeno de sinal de ordem superior. Como regra, os dados de desvio químico se referem ao centro do sinal em questão. No caso de amplos multipletos, um intervalo é especificado. Os sinais ocultos por solvente ou água foram atribuídos provisoriamente ou não estão listados. Sinais fortemente ampliados - por exemplo, causados pela rotação rápida de porções moleculares ou por prótons intercambiáveis - também foram atribuídos provisoriamente (muitas vezes referido como um amplo multipleto ou amplo singleto) ou não são mostrados.
[00220] Os dados de 1H-RMN de compostos selecionados estão listados na forma de listas de pico de 1H-RMN. Nesse caso, para cada pico de sinal, o valor δ em ppm é dado, seguido pela intensidade do sinal, relatada entre parênteses. Os pares de intensidade de sinal de valor δ de diferentes picos são separados por vírgulas. Portanto, uma lista de picos é descrita pela forma geral: δ1 (intensidade1), δ2 (intensidade2), ..., δi (intensidadei), ..., δn (intensidaden).
[00221] A intensidade de um sinal agudo se correlaciona com a altura (em cm) do sinal em um espectro de RMN impresso. Quando comparados com outros sinais, esses dados podem ser correlacionados às relações reais das intensidades do sinal. No caso de sinais amplos, mais de um pico ou o centro do sinal junto com sua intensidade relativa, em comparação com o sinal mais intenso exibido no espectro, são mostrados. Uma lista de pico de 1H-RMN é semelhante a uma leitura clássica de 1H-RMN e, portanto, geralmente contém todos os picos listados em uma interpretação clássica de RMN. Além disso, semelhante às impressões clássicas de 1H-RMN, as listas de pico podem mostrar sinais de solvente, sinais derivados de estereoisômeros do composto alvo específico, picos de impurezas, picos de satélite 13C e/ou bandas laterais giratórias. Os picos de estereoisômeros e/ou picos de impurezas são tipicamente exibidos com uma intensidade mais baixa em comparação com os picos do composto alvo (por exemplo, com uma pureza de > 90 %). Esses estereoisômeros e/ou impurezas podem ser típicos para o processo de fabricação particular e, portanto, seus picos podem ajudar a identificar uma reprodução do processo de fabricação com base em "impressões digitais de subproduto". Um especialista que calcula os picos do composto alvo por métodos conhecidos (MestReC, simulação ACD ou pelo uso de valores de expectativa avaliados empiricamente) pode isolar os picos do composto alvo conforme necessário, opcionalmente usando filtros de intensidade adicionais. Tal operação seria semelhante à seleção de pico na interpretação clássica de 1H-RMN. Uma descrição detalhada do relatório de dados de RMN na forma de listas de picos pode ser encontrada na publicação "Citation of RMN Peaklist Data within Patent Applications" (cf. http://www.researchdisclosure.com/searching-disclosures, Número do Banco de Dados de Descrição de Pesquisa 605005, 2014, 01 de agosto de 2014). Na rotina de coleta de pico, conforme descrito no Número do Banco de Dados de Descrição de Pesquisa 605005, o parâmetro "MinimumHeight" pode ser ajustado entre 1 % e 4 %. No entanto, dependendo da estrutura química e/ou dependendo da concentração do composto medido, pode ser razoável definir o parâmetro "MinimumHeight" < 1 %. Síntese dos Compostos do Intermediário 1 Intermediário 1-1 3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridina-4-carbonitrila
[00222] 3-cloropiridina-4-carbonitrila (CAS 68325-15-5, 1,40 g, 10,1 mmol) e (1,4-dioxan-2-il)metanol (CAS 143669-41-4, 1,31 g, 11,1 mmol) foram dissolvidos em THF (45 mL). Foi adicionado terc-butóxido de potássio (1,03 g, 9,14 mmol), e a mistura foi agitada durante 1 h a 0 °C. A mistura de reação foi diluída lentamente com solução de cloreto de amônio e extraída com EtOAc (3x). A fase orgânica foi lavada com salmoura e filtrada sobre um filtro repelente de água, concentrada sob pressão reduzida e purificada por cromatografia flash (sílica, gradiente de hexano/EtOAc 0-100 %; gradiente de EtOAc/EtOH 0-35 %) para produzir 1,18 g do composto título (53 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,72 (s, 1 H), 8,23 - 8,46 (m, 1 H), 7,68 - 7,86 (m, 1 H), 4,32 (d, 2 H), 3,40 - 3,99 (m, 7H). LC-MS (método 2): Tr = 0,77 min; MS (ESIpos): m/z = 221 [M+H]+ Intermediário 1-2 3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridina-4-carbonitrila
[00223] A uma solução de [(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metanol (CAS 1620510-50-0, 1,00 g, 7,62 mmol) em THF (20 mL) a 0 °C foi adicionado lentamente hidreto de sódio (366 mg , 9,15 mmol, pureza de 60 %). A mistura de reação foi agitada durante 3 horas em TA. 3- cloropiridina-4-carbonitrila (CAS 68325-15-5, 1,06 g, 7,62 mmol) em THF (10 mL) foi adicionado, e a mistura foi agitada durante a noite. A mistura de reação foi extinta com HCl 1 N até pH = 7. A suspensão foi filtrada através de um papel de filtro hidrofóbico, e a massa filtrante foi lavada com EtOAc. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica básica, gradiente de hexano/EtOAc 0-100 %) para produzir 355 mg do composto título (20 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,75 (s, 1 H), 8,40 (d, 1 H), 7,78 (d, 1 H), 4,44 (dd, 1 H), 4,23 (dd, 1 H), 3,87 (dd, 1 H), 3,71 (dt, 1 H), 3,50 (td, 1 H), 3,35 - 3,41 (m, 1 H), 2,65 - 2,71 (m, 1 H), 2,45 - 2,49 (m, 1 H), 2,29 - 2,35 (m, 3 H), 2,24 (ddd, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,72 min; MS (ESIpos): m/z = 234,2 [M+H]+ Intermediário 1-3 3-{[4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridina-4-carbonitrila
[00224] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 1-1 com 3-cloropiridina-4-carbonitrila (CAS 68325-15-5, 764 mg, 5,51 mmol) e [4-metilmorfolin-2-il]metanol (CAS 40987-46- 0, 940 mg, 7,17 mmol) como materiais de partida; foram preparados 836 mg (pureza de 90 %, rendimento de 59 %) do composto título. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,893 (0,97), 1,920 (1,44), LC-MS (método 2): Tr = 0,70 min; MS (ESIpos): m/z = 234,2 [M+H]+ Intermediário 1-4 3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridina-4-carbonitrila
[00225] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 1-2 com 3-cloropiridina-4-carbonitrila (CAS 68325-15-5, 1,00 g, 7,24 mmol) e [(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metanol (1,00 g, pureza de 95 %, 7,24 mmol; CAS 1620510-51-1) como os materiais de partida; foram preparados 823 mg (pureza de 99 %, rendimento de 48 %) do composto título. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,211 (0,52), 2,219 (0,64), 2,236 (0,66), 2,240 (0,68), 2,245 (0,68), 2,249 (0,72), 2,266 (0,69), 2,274 (0,63), 2,306 (16,00), 2,472 (0,48), 2,475 (0,50), 2,518 (1,22), 2,522 (0,71), 2,658 (0,56), 2,664 (1,27), 2,671 (0,67), 2,687 (0,47), 2,694 (0,96), 2,701 (0,47), 3,356 (1,17), 3,378 (1,16), 3,384 (1,30), 3,406 (1,20), 3,472 (0,50), 3,478 (0,58), 3,499 (0,80), 3,506 (0,81), 3,525 (0,71), 3,532 (0,61), 3,685 (0,44), 3,692 (0,86), 3,698 (0,45), 3,720 (0,66), 3,856 (0,80), 3,864 (0,81), 3,884 (0,73), 3,892 (0,72), 4,209 (1,03), 4,223 (1,01), 4,234 (1,29), 4,249 (1,23), 4,417 (1,25), 4,429 (1,28), 4,443 (1,03), 4,454 (0,99), 7,778 (2,39), 7,780 (2,38), 7,790 (2,45), 7,792 (2,50), 8,391 (3,23), 8,403 (3,11), 8,745 (3,91). LC-MS (método 2): Tr = 0,70 min; MS (ESIpos): m/z = 234 [M+H]+ Intermediário 1-5
[00226] terc-butil (2S)-2-{[(4-cianopiridin-3-il)óxi]metil}morfolina-4-carboxilato
[00227] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 1-1 com 3-cloropiridina-4-carbonitrila (CAS 68325-15-5, 2,55 g, 18,4 mmol) e terc-butil (2S)-2-(hidroximetil)morfolina-4- carboxilato (CAS 135065-76-8, 4,00 g, 18,4 mmol) como os materiais de partida; 4,82 g (90 % de pureza, 74 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,41 (s, 9 H), 2,72 - 3,05 (m, 2 H), 3,46 (br d, 1 H), 3,67 - 3,82 (m, 2 H), 3,82 - 3,88 (m, 1 H), 4,00 (s, 1 H), 4,37 (br d, 2 H), 7,79 (d, 1 H), 8,40 (d, 1 H), 8,73 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,06 min; MS (ESIpos): m/z = 320 [M+H]+ Intermediário 1-6 3-[2-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridina-4-carbonitrila
[00228] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 1-2 com 3-cloropiridina-4-carbonitrila (CAS 68325-15-5, 2,10 g, 15,1 mmol) e 2-(1,4-dioxan-2-il)etan-1-ol (CAS 151720-04-6, 2,00 g, 15,1 mmol) como os materiais de partida; 2,89 g (99 % de pureza, 81 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,754 (0,63), 1,768 (1,37), 1,774 (0,82), 1,781 (0,98), 1,790 (2,18), 1,803 (3,39), 1,810 (2,10), 1,817 (1,93), 1,824 (3,23), 1,838 (2,78), 1,855 (2,41), 1,867 (2,45), 1,869 (2,40), 1,874 (2,53), 1,886 (2,23), 1,902 (0,99), 1,910 (0,87), 1,922 (0,67), 2,326 (0,72), 2,668 (0,69), 3,223 (4,26), 3,247 (5,57), 3,250 (5,62), 3,276 (5,26), 3,428 (1,77), 3,434 (1,89), 3,455 (4,59), 3,462 (4,80), 3,483 (3,76), 3,489 (3,97), 3,530 (3,36), 3,535 (3,38), 3,558 (4,71), 3,564 (5,40), 3,585 (1,93), 3,592 (3,08), 3,626 (4,58), 3,631 (4,33), 3,654 (3,70), 3,659 (4,02), 3,668 (1,98), 3,673 (1,97), 3,680 (2,77), 3,687 (2,85), 3,693 (2,89), 3,706 (6,98), 3,712 (6,06), 3,724 (1,75), 3,735 (3,40), 3,759 (4,77), 3,766 (4,02), 3,788 (4,04), 3,794 (3,73), 4,315 (0,93), 4,329 (1,18), 4,339 (3,54), 4,354 (6,92), 4,359 (5,21), 4,370 (6,49), 4,384 (3,79), 4,392 (1,47), 4,408 (0,68), 7,778 (9,22), 7,790 (9,58), 8,380 (10,88), 8,392 (10,45), 8,698 (16,00). LC-MS (método 6): Tr = 0,64 min; MS (ESIpos): m/z = 235 [M+H]+ Intermediário 1-7 3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridina-4-carbonitrila
[00229] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 1-2 com 3-cloropiridina-4-carbonitrila (CAS 68325-15-5, 948 mg, 6,84 mmol) e (5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metanol (1,00 g, 6,84 mmol; CAS 54321-57-2) como os materiais de partida; 1,31 g (95 % de pureza, 73 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,014 (0,69), 1,048 (16,00), 1,172 (0,55), 1,200 (0,51), 1,263 (13,01), 1,987 (0,92), 2,518 (0,62), 2,523 (0,43), 3,313 (1,67), 3,340 (2,27), 3,342 (2,21), 3,542 (2,95), 3,570 (2,39), 3,604 (1,50), 3,627 (1,97), 3,734 (1,24), 3,760 (3,08), 3,781 (2,25), 3,787 (2,73), 3,791 (1,58), 3,796 (0,77), 3,802 (0,63), 4,356 (3,63), 4,365 (4,41), 7,780 (3,42), 7,792 (3,63), 8,387 (4,49), 8,399 (4,29), 8,715 (5,54). LC-MS (método 6): Tr = 0,75 min; MS (ESIpos): m/z = 249 [M+H]+ Intermediário 1-8 3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridina-4-carbonitrila
[00230] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 1-1 com 3-cloropiridina-4-carbonitrila (CAS 68325-15-5, 1,00 g, 7,22 mmol) e [(2R)-1,4-dioxan-2-il]metanol (CAS406913-88-0, 938 mg, 7,94 mmol) como os materiais de partida; 490 mg (95 % de pureza, 29 % de rendimento) do composto título foram preparados. Rotação ótica: [α]D = - 1,68° +/- 0,35° (c = 7 mg/mL, metanol) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm = 3,41 - 3,53 (m, 2 H), 3,59 - 3,72 (m, 2 H), 3,75 - 3,81 (m, 1 H), 3,82 - 3,87 (m, 1 H), 3,87 - 3,95 (m, 1 H), 4,27 - 4,37 (m, 2 H), 7,77 - 7,80 (m, 1 H), 8,38 - 8,41 (m, 1 H), 8,71 - 8,73 (m, 1 H). Intermediário 1-9 terc-butil (3R)-3-{[(4-cianopiridin-3-il)óxi]metil}morfolina-4-carboxilato
[00231] A uma solução de terc-butil (3S)-3-(hidroximetil)morfolina-4- carboxilato (4,30 g, 19,8 mmol) em THF (28 mL) a 0 °C foi adicionado lentamente hidreto de sódio (1,55 g, 55 % de pureza, 35,6 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 1 h. 3-fluoropiridina-4-carbonitrila (CAS 113770-88-0, 2,42 g, 19,8 mmol) em THF (14 mL) foi adicionado, e a mistura foi agitada durante 4 h a 0 °C. A mistura de reação foi extinta com HCl 2N até pH = 6 - 7 e foi extraída com EE. A camada orgânica foi filtrada através de um papel de filtro repelente de água e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 0-7 %) para produzir 4 g do composto título (rendimento de 70 %). LC-MS (método 6): Tr = 0,95 min; MS (ESIpos): m/z = 264 [M+H]+ Intermediário 1-10 terc-butil (2R)-2-{[(4-cianopiridin-3-il)óxi]metil}morfolina-4-carboxilato
[00232] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 1-1 com 3-cloropiridina-4-carbonitrila (CAS 68325-15-5, 3,25 g, 23,5 mmol) e terc-butil (2R)-2-(hidroximetil)morfolina-4- carboxilato (CAS 135065-71-3, 5,10 g, 23,5 mmol) como os materiais de partida; 6,92 g (90 % de pureza, 83 % de rendimento) do composto título foram preparados.1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,41 (s, 9 H), 2,73 - 3,00 (m, 2 H), 3,39 - 3,50 (m, 1 H), 3,75 (m, 2 H), 3,82 - 3,89 (m, 1 H), 3,95 - 4,00 (m, 1 H), 4,37 (br d, 2 H), 7,79 (d, 1 H), 8,40 (d, 1 H), 8,73 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,04 min; MS (ESIpos): m/z = 320 [M+H]+ Intermediário 1-11 3-[(1S)-1-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridina-4-carbonitrila
[00233] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 1-9 com 3-fluoropiridina-4-carbonitrila (878 mg, 7,19 mmol) e (1S)-1-[1,4-dioxan-2-il]etan-1-ol (CAS 1372875-59-6, 950 mg, 7,19 mmol) como os materiais de partida; 1,68 g (95 % de pureza, 95 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO- de): δ ppm = 0,988 (0,85), 1,004 (0,92), 1,056 (0,59), 1,071 (0,60), 1,154 (4,47), 1,166 (0,63), 1,172 (9,29), 1,189 (4,59), 1,276 (12,44), 1,292 (12,55), 1,325 (11,08), 1,341 (11,16), 1,987 (16,00), 2,518 (1,63), 2,522 (1,05), 3,300 (0,46), 3,396 (1,81), 3,421 (2,99), 3,424 (2,99), 3,429 (1,78), 3,450 (5,06), 3,457 (3,42), 3,472 (1,97), 3,478 (1,62), 3,485 (2,38), 3,497 (2,19), 3,500 (1,91), 3,525 (2,26), 3,552 (1,16), 3,559 (1,31), 3,582 (2,48), 3,588 (2,91), 3,611 (1,70), 3,616 (2,62), 3,638 (4,15), 3,642 (3,63), 3,664 (3,89), 3,671 (4,01), 3,676 (1,93), 3,683 (1,76), 3,685 (1,80), 3,689 (1,79), 3,695 (1,76), 3,701 (1,17), 3,704 (1,27), 3,707 (1,26), 3,710 (1,28), 3,744 (1,82), 3,750 (3,32), 3,757 (1,01), 3,778 (3,94), 3,784 (2,19), 3,807 (1,47), 3,813 (1,33), 3,906 (1,40), 3,912 (1,35), 3,935 (1,24), 3,941 (1,18), 3,999 (1,24), 4,016 (3,72), 4,034 (3,66), 4,052 (1,20), 4,804 (0,41), 4,821 (1,95), 4,836 (3,43), 4,852 (2,64), 4,864 (1,34), 7,755 (3,58), 7,757 (3,60), 7,769 (4,33), 7,771 (3,80), 7,783 (3,28), 7,785 (3,20), 8,351 (4,95), 8,363 (4,90), 8,368 (4,48), 8,380 (4,17), 8,749 (6,40), 8,772 (5,46). LC-MS (método 6): Tr = 0,64 min; MS (ESIpos): m/z = 235 [M+H]+ Intermediário 1-12 3-{(1R)-1-[1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridina-4-carbonitrila
[00234] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 1-9 com 3-fluoropiridina-4-carbonitrila (905 mg, 7,42 mmol) e (1R)-1-[1,4-dioxan-2-il]etan-1-ol (CAS 1372881-98-5, 980 mg, 7,42 mmol) como os materiais de partida; 1,39 g (95 % de pureza, 76 % de rendimento) do composto título foram preparados.1H-RMN (400 MHz, DMSO- de): δ ppm = 1,274 (0,82), 1,289 (0,87), 1,322 (16,00), 1,337 (15,97), 1,984 (0,48), 2,331 (0,56), 2,673 (0,57),8,348 (0,42), 8,365 (6,23), 8,377 (6,01), 8,743 (0,51), 8,765 (9,13). LC-MS (método 6): Tr = 0,67 min; MS (ESIpos): m/z = 235 [M+H]+ Intermediário 1-71 3-[1-(4-metilmorfolin-2-il)etóxi]isonicotinonitrila
[00235] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 1-9 com 3-fluoropiridina-4-carbonitrila (824 mg, 6,75 mmol) e 1-(4-metilmorfolin-2-il)etanol (980 mg, 6,75 mmol, CAS 1540922-49-3) como os materiais de partida; 817 mg (99 % de pureza, 48 % de rendimento) do composto título foram preparados após a cromatografia de coluna usando a Biotage Isolera. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,285 (4,44), 1,300 (4,47), 1,318 (5,38), 1,333 (5,31), 1,848 (0,57), 1,874 (0,94), 1,901 (0,63), 1,927 (0,93), 1,933 (0,66), 1,953 (2,04), 1,961 (1,23), 1,981 (1,32), 1,990 (0,60), 2,188 (16,00), 2,518 (1,33), 2,522 (0,90), 2,572 (0,89), 2,600 (0,79), 2,718 (0,54), 2,746 (0,52), 2,839 (0,64), 2,867 (0,60), 3,485 (0,78), 3,488 (0,66), 3,491 (0,85), 3,516 (1,00), 3,522 (0,92), 3,544 (0,48), 3,550 (0,42), 3,562 (0,44), 3,568 (0,54), 3,573 (0,73), 3,578 (0,77), 3,587 (0,81), 3,593 (0,83), 3,598 (0,85), 3,604 (0,71), 3,772 (0,51), 3,777 (0,56), 3,781 (0,78), 3,786 (0,61), 3,789 (0,59), 3,794 (0,56), 3,800 (0,46), 3,805 (0,46), 3,809 (0,64), 3,814 (0,50), 3,817 (0,45), 4,818 (0,60), 4,833 (0,97), 4,848 (0,79), 4,858 (0,65), 4,862 (0,67), 4,874 (0,57), 7,746 (1,41), 7,760 (2,88), 7,772 (1,71), 8,341 (1,93), 8,355 (2,69), 8,368 (2,12), 8,745 (2,34), 8,766 (2,68). LC-MS (método 6): Tr = 0,32 min; MS (ESIpos): m/z = 248 [M+H]+ Sínteses dos Compostos do Intermediário 2 Intermediário 2-1 1-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina
[00236] Uma autoclave foi carregada com 3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi] piridina-4-carbonitrila (intermediário 1-1,1,17 g, 5,34 mmol), amônia (19 mL, 7,0 M em metanol, 850 mmol) e Níquel de Raney (CAS 744002-0, 783 mg, 50 % úmido), e a mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogênio de 25 bar em temperatura ambiente por 22 h. A mistura foi filtrada através de uma almofada de celite, eluída com metanol, e os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi usado diretamente na próxima etapa sem purificação adicional (1,13 g, 94 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,24 (s, 1 H), 8,17 (d, 1 H), 7,38 (d, 1 H), 4,09 (d, 2 H), 3,73 - 3,91 (m, 3 H), 3,59 - 3,73 (m, 4 H), 3,46 - 3,52 (m, 2 H), 3,39 - 3,45 (m, 2H). 2,06 (br., 2H). LC-MS (método 2): Tr = 0,54 min; MS (ESIpos): m/z = 225 [M+H]+ Intermediário 2-2 1-(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina
[00237] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 2-1 com 3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridina-4- carbonitrila (intermediário 1-2, 355 mg, 1,52 mmol) como o material de partida; 350 mg do composto título foram preparados (89 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,24 - 8,31 (m, 1 H), 8,17 (d, 1 H), 7,39 (d, 1 H), 4,18 - 4,27 (m, 1 H), 4,00 (dd, 1 H), 3,86 (dd, 1 H), 3,63 - 3,75 (m, 3 H), 3,42 - 3,55 (m, 1 H), 3,36 - 3,41 (m, 1 H), 2,67 (dq, 1 H), 2,40 - 2,47 (m, 1 H), 2,19 - 2,31 (m, 4 H), 1,63 - 2,19 (m, 2H). Intermediário 2-3 1-(3-{[4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina
[00238] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 2-1 com 3-{[4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridina-4- carbonitrila (intermediário 1-3, 836 mg, 3,58 mmol) como o material de partida; 860 mg (90 % de pureza, 91 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,68 - 1,84 (br s, 2 H), 1,85 - 1,94 (t, 1 H), 1,94 - 2,05 (td, 1 H), 2,19 (s, 3 H), 2,57 - 2,64 (d, 1 H), 2,73 - 2,83 (d, 1 H), 3,46 - 3,63 (t, 1 H), 3,63 - 3,73 (s, 2 H), 3,73 - 3,86 (m, 3 H), 4,10 (br d, 2 H), 7,34 - 7,44 (d, 1 H), 8,10 - 8,20 (d, 1 H), 8,21 - 8,30 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,56 min; MS (ESIpos): m/z = 238 [M+H]+ Intermediário 2-4 1-(3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina
[00239] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 2-1 com 3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridina-4- carbonitrila (intermediário 1-4, 823 mg, 3,53 mmol) como o material de partida; 798 mg (90 % de pureza, 86 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,865 (0,49), 2,199 (0,64), 2,210 (1,08), 2,228 (0,99), 2,233 (0,96), 2,236 (0,96), 2,254 (0,85), 2,263 (0,81), 2,269 (0,55), 2,284 (16,00), 2,327 (0,53), 2,430 (0,78), 2,439 (0,81), 2,447 (0,65), 2,518 (2,11), 2,523 (1,42), 2,649 (0,75), 2,654 (1,38), 2,660 (0,91), 2,669 (0,65), 2,674 (0,60), 2,678 (0,83), 2,684 (1,22), 2,690 (0,66), 3,361 (1,52), 3,365 (1,53), 3,388 (1,10), 3,469 (0,59), 3,474 (0,65), 3,496 (1,15), 3,502 (1,16), 3,523 (0,75), 3,528 (0,68), 3,683 (2,49), 3,690 (2,42), 3,712 (0,79), 3,719 (1,11), 3,846 (1,01), 3,853 (1,04), 3,873 (0,94), 3,880 (0,91), 3,982 (0,79), 3,997 (0,86), 4,007 (1,03), 4,021 (0,96), 4,215 (1,01), 4,226 (1,09), 4,240 (0,86), 4,250 (0,84), 7,379 (0,99), 7,389 (1,01), 8,168 (1,06), 8,179 (1,11), 8,259 (1,53). Intermediário 2-5 terc-butil (2S)-2-({[4-(aminometil)piridin-3-il]óxi}metil)morfolina-4-carboxilato
[00240] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 2-1 com terc-butil (2S)-2-{[(4-cianopiridin-3- il)óxi]metil}morfolina-4-carboxilato (intermediário 1-5, 5,75 g, 18,0 mmol) como o material de partida; 6,00 g (95 % de pureza, 98 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,41 (s, 9 H), 3,16 (s, 2 H), 3,39 - 3,49 (m, 2 H), 3,66 - 3,79 (m, 5 H), 3,79 - 3,98 (m, 3 H), 4,07 - 4,20 (m, 3 H), 7,39 (d, 1 H), 8,19 (d, 1 H), 8,27 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,84 min; MS (ESIpos): m/z = 324 [M+H]+ Intermediário 2-6 1-{3-[2-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4-il}metanamina
[00241] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 2-1 com 3-[2-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridina-4-carbonitrila (intermediário 1-6, 2,89 g, 12,3 mmol) como o material de partida; 2,22 g (90 % de pureza, 68 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,536 (0,40), 1,729 (1,99), 1,751 (3,41), 1,765 (5,01), 1,785 (6,00), 1,804 (5,59), 1,817 (5,34), 1,834 (4,06), 1,852 (2,92), 1,870 (2,15), 2,326 (1,02), 2,669 (1,04), 3,159 (0,53), 3,208 (5,54), 3,235 (8,67), 3,261 (7,11), 3,424 (3,46), 3,430 (3,63), 3,451 (7,09), 3,457 (7,51), 3,479 (5,43), 3,485 (5,78), 3,528 (4,90), 3,534 (5,03), 3,557 (6,69), 3,563 (7,65), 3,584 (3,06), 3,590 (4,57), 3,622 (8,16), 3,653 (8,66), 3,688 (14,98), 3,697 (16,00), 3,731 (13,03), 3,759 (6,36), 4,136 (7,05), 4,152 (13,01), 4,167 (8,38), 7,385 (5,36), 7,394 (5,58), 8,163 (5,21), 8,172 (5,56), 8,224 (7,44). Intermediário 2-7 1-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina
[00242] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 2-1 com 3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridina-4- carbonitrila (intermediário 1-7, 1,30 g, 5,24 mmol) como o material de partida; 1,26 g (90 % de pureza, 86 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,014 (0,96), 1,049 (16,00), 1,201 (0,72), 1,262 (13,58), 1,751 (0,48), 2,518 (2,17), 2,523 (1,47), 3,308 (2,76), 3,539 (2,43), 3,567 (1,99), 3,601 (1,13), 3,623 (1,75), 3,694 (1,97), 3,720 (2,07), 3,746 (2,38), 3,783 (0,46), 4,128 (3,01), 4,136 (2,80), 7,386 (0,85), 8,181 (0,83), 8,237 (0,96). Intermediário 2-8 1-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina
[00243] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 2-1 com 3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridina-4- carbonitrila (intermediário 1-8, 1,24 g, 5,63 mmol) como o material de partida; 1,56 g (80 % de pureza, 99 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,232 (0,52), 1,845 (1,06), 2,518 (2,37), 2,523 (1,54), 3,159 (14,24), 3,171 (14,33), 3,376 (0,69), 3,379 (0,65), 3,404 (2,41), 3,419 (0,41), 3,428 (3,79), 3,431 (3,86), 3,439 (0,59), 3,447 (0,69), 3,455 (2,71), 3,465 (1,97), 3,474 (0,57), 3,486 (2,71), 3,493 (2,97), 3,508 (1,01), 3,520 (2,61), 3,592 (0,45), 3,601 (1,92), 3,608 (2,10), 3,630 (2,77), 3,636 (3,65), 3,659 (5,73), 3,661 (5,45), 3,683 (16,00), 3,700 (1,95), 3,754 (3,49), 3,762 (2,18), 3,784 (2,51), 3,794 (0,57), 3,812 (0,61), 3,823 (2,48), 3,829 (3,16), 3,842 (0,81), 3,849 (2,07), 3,856 (6,45), 3,868 (1,93), 3,874 (1,37), 3,880 (1,69), 3,887 (1,30), 3,892 (1,13), 3,899 (0,89), 4,087 (11,44), 4,099 (10,46), 4,111 (2,62), 4,125 (1,15), 7,380 (4,02), 7,391 (4,11), 7,411 (0,67), 7,423 (0,67), 8,168 (6,28), 8,179 (6,26), 8,184 (1,58), 8,196 (1,02), 8,230 (10,21), 8,274 (1,76). Intermediário 2-9 terc-butil (3R)-3-({[4-(aminometil)piridin-3-il]óxi}metil)morfolina-4-carboxilato
[00244] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 2-1 com terc-butil (3R)-3-{[(4-cianopiridin-3- il)óxi]metil}morfolina-4-carboxilato (intermediário 1-9, 4,00 g, 12,5 mmol) como o material de partida; 3,65 g do composto título foram preparados (86 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,038 (0,41), 1,055 (0,77), 1,073 (0,44), 1,363 (10,92), 1,754 (6,47), 2,200 (1,02), 2,325 (1,05), 2,330 (1,42), 2,334 (1,05), 2,521 (5,72), 2,526 (3,72), 2,667 (0,88), 2,672 (1,22), 2,676 (0,89), 3,057 (1,02), 3,068 (1,10), 3,087 (1,65), 3,090 (1,62), 3,097 (1,89), 3,101 (1,73), 3,120 (2,21), 3,130 (2,39), 3,168 (16,00), 3,210 (1,86), 3,235 (0,59), 3,240 (1,07), 3,258 (1,25), 3,265 (1,40), 3,286 (1,75), 3,294 (2,07), 3,316 (3,15), 3,365 (3,67), 3,372 (3,73), 3,395 (1,88), 3,402 (1,68), 3,462 (1,41), 3,470 (1,43), 3,503 (3,53), 3,534 (2,78), 3,682 (7,14), 3,764 (1,68), 3,774 (1,81), 3,792 (3,17), 3,802 (2,81), 3,820 (1,93), 3,855 (0,89), 3,859 (1,19), 3,865 (1,80), 3,869 (2,32), 3,873 (3,62), 3,882 (2,64), 3,886 (3,02), 3,889 (2,79), 3,893 (4,31), 3,899 (3,39), 3,902 (2,87), 3,927 (2,09), 4,111 (1,76), 4,227 (3,64), 4,303 (0,96), 4,315 (1,37), 4,329 (3,71), 4,331 (3,43), 4,338 (1,95), 4,345 (2,50), 7,401 (2,60), 8,192 (2,81), 8,337 (2,91). LC-MS (método 1): Tr = 0,49 min; MS (ESIpos): m/z = 324 [M+H]+ Intermediário 2-10 terc-butil (2R)-2-({[4-(aminometil)piridin-3-il]óxi}metil)morfolina-4- carboxilato
[00245] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 2-1 com terc-butil (2R)-2-{[(4-cianopiridin-3- il)óxi]metil}morfolina-4-carboxilato (intermediário 1-10, 6,92 g, 21,7 mmol) como o material de partida; 6,95 g do composto título foram preparados (90 % de pureza, 89 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,41 (s, 9 H), 2,70 - 3,01 (m, 2 H), 3,17 (d, 3 H), 3,41 - 3,52 (m, 1 H), 3,63 - 3,70 (m, 2 H), 3,70 - 3,81 (m, 2 H), 3,82 - 4,00 (m, 2 H), 4,08 - 4,18 (m, 3 H), 7,39 (d, 1 H), 8,18 (d, 1 H), 8,25 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,84 min; MS (ESIpos): m/z = 324 [M+H]+ Intermediário 2-11 1-{3-[(1S)-1-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4-il}metanamina
[00246] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 2-1 com 3-[(1S)-1-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridina-4- carbonitrila (intermediário 1-11, 1,68 g, 7,17 mmol) como o material de partida; 1,49 g (90 % de pureza, 78 % de rendimento) do composto título foram preparados. LC-MS (método 6): Tr = 0,2 min; MS (ESIpos): m/z = 239 [M+H]+ 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 0,990 (0,87), 1,006 (0,89), 1,058 (0,73), 1,073 (0,73), 1,165 (0,76), 1,216 (15,68), 1,232 (16,00), 1,256 (14,15), 1,272 (13,96), 1,755 (9,46), 1,917 (0,88), 3,240 (0,43), 3,265 (0,46), 3,276 (0,41), 3,293 (0,54), 3,302 (0,81), 3,325 (0,68), 3,338 (0,50), 3,350 (0,56), 3,371 (0,56), 3,378 (0,58), 3,400 (2,78), 3,412 (2,79), 3,426 (5,84), 3,438 (5,24), 3,453 (6,52), 3,459 (6,28), 3,466 (5,96), 3,479 (2,46), 3,486 (3,26), 3,493 (2,78), 3,521 (0,49), 3,529 (0,67), 3,535 (0,58), 3,564 (2,05), 3,572 (2,72), 3,580 (2,41), 3,600 (6,11), 3,609 (5,52), 3,617 (4,09), 3,634 (11,25), 3,637 (11,05), 3,756 (8,08), 3,785 (6,75), 3,889 (2,49), 3,894 (2,48), 3,917 (2,26), 3,922 (2,16), 4,540 (1,04), 4,555 (3,05), 4,569 (4,27), 4,580 (2,83), 4,584 (2,84), 7,369 (3,21), 7,379 (4,91), 8,135 (3,33), 8,146 (5,23), 8,157 (3,20), 8,261 (4,69), 8,275 (4,23). Intermediário 2-12 1-{3-[(1R)-1-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4-il}metanamina
[00247] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 2-1 com 3-{(1R)-1-[1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridina-4- carbonitrila (intermediário 1-12, 1,39 g, 5,93 mmol) como o material de partida; 1,36 g (95 % de pureza, 91 % de rendimento) do composto título foram preparados. ¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,216 (0,81), 1,232 (0,99), 1,255 (15,91), 1,271 (16,00), 1,753 (0,71), 3,290 (0,44), 3,399 (0,54), 3,412 (2,42), 3,424 (0,71), 3,437 (3,81), 3,440 (3,42), 3,453 (0,77), 3,459 (2,72), 3,465 (5,00), 3,485 (1,48), 3,494 (2,02), 3,573 (1,45), 3,580 (1,70), 3,598 (2,00), 3,603 (3,43), 3,609 (3,84), 3,616 (2,24), 3,622 (2,04), 3,628 (1,97), 3,634 (4,41), 3,638 (4,68), 3,645 (2,04), 3,662 (5,32), 3,672 (6,05), 3,713 (0,63), 3,757 (2,28), 3,764 (2,39), 3,787 (1,75), 3,790 (1,84), 3,887 (2,14), 3,894 (2,12), 3,916 (1,94), 3,922 (1,85), 4,535 (0,53), 4,550 (1,85), 4,564 (2,15), 4,566 (2,17), 4,579 (1,80), 4,595 (0,50), 7,381 (3,18), 7,393 (3,14), 8,144 (4,36), 8,156 (4,13), 8,257 (0,50), 8,272 (6,58). LC-MS (método 6): Tr = 0,21 min; MS (ESIpos): m/z = 239 [M+H]+ Intermediário 2-71 1-{3-[1-(4-metilmorfolin-2-il)etóxi]piridin-4-il}metanamina
[00248] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 2-1 com 3-({1-[4-metilmorfolin-2-il]etil}óxi)piridina-4- carbonitrila (intermediário 1-71, 815 mg, 3,30 mmol) como o material de partida; 810 mg (99 % de pureza, 97 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,227 (3,82), 1,242 (3,97), 1,254 (4,80), 1,270 (4,60), 1,850 (1,08), 1,862 (1,12), 1,876 (1,43), 1,888 (1,42), 1,903 (0,90), 1,915 (1,07), 1,928 (0,67), 1,937 (0,65), 1,945 (0,81), 1,957 (1,14), 1,965 (0,95), 1,973 (0,53), 1,985 (0,64), 1,993 (0,48), 2,152 (0,51), 2,183 (16,00), 2,332 (0,45), 2,518 (2,14), 2,522 (1,29), 2,575 (1,38), 2,602 (1,24), 2,673 (0,44), 2,692 (0,68), 2,720 (0,63), 2,834 (0,79), 2,862 (0,75), 3,475 (0,48), 3,480 (0,56), 3,487 (0,60), 3,504 (1,27), 3,508 (1,56), 3,514 (1,44), 3,536 (1,04), 3,542 (1,01), 3,563 (0,49), 3,568 (0,50), 3,575 (0,48), 3,588 (0,47), 3,667 (1,61), 3,793 (1,27), 3,821 (1,05), 4,561 (0,97), 7,374 (1,24), 8,138 (1,27), 8,267 (1,31). LC-MS (método 6): Tr = 0,11 min; MS (ESIpos): m/z = 252 [M+H]+ Sínteses dos Compostos do Intermediário 3 Intermediário 3-1 1-cloro-3-isotiocianato-2-metoxibenzeno
[00249] 3-cloro-2-metoxianilina (CAS 51114-68-2, 8,4 mL, 63 mmol) foi dissolvido em DCM (100 mL) e solução de bicarbonato de sódio (100 mL) foi adicionada. À mistura resfriada em gelo foi adicionado lentamente tiofosgênio (5,4 mL, 70 mmol). A reação foi agitada a 0 °C durante 2 h. Em temperatura ambiente, a camada de DCM foi separada e lavada com solução de bicarbonato de sódio, filtrada através de um filtro hidrofóbico e concentrada sob pressão reduzida para produzir o composto título (12,97 g, rendimento de 100 %) que foi usado diretamente na próxima etapa. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 7,51 (dd, 1 H), 7,35 (dd, 1 H), 7,20 (t, 1 H), 3,85 - 3,91 (m, 3H). Intermediário 3-4 1-fluoro-3-isotiocianato-2-metoxibenzeno
[00250] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 3-1; 3-fluoro-2-metoxianilina (CAS 437-83-2, 5,00 g, 35,4 mmol) como o material de partida; 6,24 g do composto título foram preparados (96 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 7,32 (m, 1 H), 7,10 - 7,19 (m, 2 H), 3,96 (d, 3H). Intermediário 3-18 1-cloro-5-fluoro-3-isotiocianato-2-metoxibenzeno
[00251] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 3-1 com 3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilina (1,00 g, 5,70 mmol) como o material de partida; 1,17 g do composto título foram preparados (95 % de pureza, 90 % de rendimento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3,86 (s, 3 H) 7,38 (dd, 1H) 7,58 (dd, 1H). Intermediário 3-29 1-cloro-2-etil-3-isotiocianatobenzeno
[00252] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 3-1; 3-cloro-2-etilanilina (5,00 g, 85 % de pureza, 27,3 mmol) como o material de partida, o composto título foi preparado 6,29 g (85 % de pureza, 99 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,009 (7,50), 1,027 (16,00), 1,046 (7,55), 1,090 (0,44), 1,109 (0,89), 1,128 (0,44), 2,590 (2,26), 2,608 (6,71), 2,627 (6,58), 2,646 (2,00), 5,199 (6,39), 6,533 (4,44), 6,539 (4,27), 6,553 (5,20), 6,559 (4,97), 6,821 (3,47), 6,841 (5,70), 6,861 (2,75), 7,056 (0,43), 7,060 (0,52). Intermediário 3-65 2-etil-1-fluoro-3-isotiocianatobenzeno
[00253] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 3-1; 2-etil-3-fluoroanilina (2,50 g, 18,0 mmol, CAS 1139437-61-8) como o material de partida, o composto título foi preparado 3,0 g (90 % de pureza, 83 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,108 (7,13), 1,127 (16,00), 7,296 (2,38), 7,301 (2,38), 7,317 (2,53), 7,322 (0,79), 7,337 (0,79). Sínteses dos Compostos do Intermediário 4 Intermediário 4-1 terc-butil 5-[(3-cloro-2-metoxifenil)carbamotioil]-4-hidróxi-6-oxo-3,6-di- hidropiridina-1(2H)-carboxilato
[00254] A uma solução resfriada em gelo de 1-cloro-3-isotiocianato- 2-metoxibenzeno (intermediário 3-1,4,00 g, 20,0 mmol) e terc-butil 2,4- dioxopiperidina-1-carboxilato (CAS 845267-78-9, 4,27 g, 20,0 mmol) em acetonitrila (92 mL) foi adicionado gota a gota DBU (4,5 mL, 30 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. À mistura de reação foi adicionado gelo-água (200 mL) e HCl conc. (2 mL). A mistura foi agitada durante 20 min. e extraída com DCM. A fase orgânica foi filtrada sobre um filtro repelente de água, conentrada sob pressão reduzida e purificada por cromatografia flash (sílica, gradiente de hexano/EtOAc 0-50 %) para produzir 6,54 g do composto título (71 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 13,36 (br s, 1 H), 7,73 (d, 1 H), 7,47 (dd, 1 H), 7,22 (t, 1 H), 3,76 - 3,82 (m, 5 H), 2,88 (t, 2 H), 1,48 (s, 9H). LC-MS (método 1): Tr = 1,49 min; MS (ESIpos): m/z = 413,1 [M+H]+ Intermediário 4-4 terc-butil 5-[(3-fluoro-2-metoxifenil)carbamotioil]-4-hidróxi-6-oxo-3,6-di- hidropiridina-1(2H)-carboxilato
[00255] Usando um método análogo ao descrito para o Intermediário 4-1 com terc-butil 2,4-dioxopiperidina-1-carboxilato (CAS 845267-78-9, 7,26 g, 34,1 mmol) e 1-fluoro-3-isotiocianato-2- metoxibenzeno (intermediário 3-4, 6,24 g, 34,1 mmol) como materiais de partida; foram preparados 9,49 g do composto título (rendimento de 67 %) após agitação do produto em MeOH, filtração e secagem do precipitado em vácuo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 13,37 (br s, 1 H), 7,58 (br d, 1 H), 7,23 - 7,30 (m, 1 H), 7,09 - 7,21 (m, 1 H), 4,10 (br s, 1 H), 3,78 (t, 2 H), 3,17 (s, 3 H), 2,88 (br t, 2 H), 1,48 (s, 9H). LC-MS (método 2): Tr = 0,66 min; MS (ESIpos): m/z = 397,3 [M+H]+ Intermediário 4-7 terc-butil 5-[(2,3-diclorofenil)carbamotioil]-4-hidróxi-6-oxo-3,6-di-hidro- piridina-1(2H)-carboxilato
[00256] 1,2-Dicloro-3-isotiocianatobenzeno (CAS 6590-97-2, 5,00 g, 24,5 mmol) e terc-butil 2,4-dioxopiperidina-1-carboxilato (CAS 84526778-9, 5,22 g, 24,5 mmol) foram solubilizados em acetonitrila (55 mL), DBU (5,5 mL, 37 mmol) foi adicionado cuidadosamente a 0 °C sob atmosfera de argônio, e a mistura foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com HCl (200 mL, 1 N em água) e agitada durante 30 min. em TA. O sólido resultante foi removido por filtração, a massa filtrante foi lavada com água e secada a 50 °C em forno a vácuo durante a noite para produzir 9,40 g do composto título (rendimento de 92 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,467 (16,00), 1,484 (0,56), 1,622 (0,34), 1,644 (0,25), 1,661 (0,20), 1,674 (0,17), 1,898 (0,19), 1,913 (0,31), 1,927 (0,19), 2,075 (0,20), 2,327 (0,18), 2,518 (0,60), 2,523 (0,39), 2,621 (0,30), 2,647 (0,32), 2,665 (0,24), 2,669 (0,29), 2,673 (0,25), 3,249 (0,25), 3,459 (0,23), 3,473 (0,39), 3,487 (0,22), 3,538 (0,28), 3,561 (0,29), 3,727 (0,50), 7,357 (0,17), 7,377 (0,36), 7,383 (0,28), 7,397 (0,28), 7,544 (0,27), 7,547 (0,33), 7,560 (0,29), 7,564 (0,31), 7,568 (0,25), 7,580 (0,18). LC-MS (método 2): Tr = 0,70 min; MS (ESIpos): m/z = 416 [M-H]- Intermediário 4-10 terc-butil 5-[(3-cloro-2-metilfenil)carbamotioil]-4-hidróxi-6-oxo-3,6-di- hidropiridina-1(2H)-carboxilato
[00257] De acordo com o método descrito para o intermediário 4-1; 1-cloro-3-isotiocianato-2-metilbenzeno (CAS 19241-35-1; 2,50 g, 13,6 mmol) e terc-butil 2,4-dioxopiperidina-1-carboxilato (CAS 845267-78-9, 2,9 g, 13,6 mmol) como materiais de partida; foram preparados 4,68 g do composto título (rendimento de 78 %), após adição de HCl, filtração e secagem do precipitado em vácuo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 15,73 (s, 1 H), 12,77 (br s, 1 H), 7,45 (d, 1 H), 7,30 (t, 1 H), 7,19 (d, 1 H), 3,78 (t, 2 H), 2,85 (t, 2 H), 2,20 (s, 3 H), 1,48 (s, 9H). LC-MS (método 2): Tr = 0,72 min; MS (ESIpos): m/z = 397,3 [M+H]+ Intermediário 4-18 terc-butil 5-[(3-cloro-5-fluoro-2-metoxifenil)carbamotioil]-4-hidróxi-6- oxo-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato
[00258] Usando um método análogo ao descrito para o Intermediário 4-1 com terc-butil 2,4-dioxopiperidina-1-carboxilato (CAS 845267-78-9, 1,15 g, 5,38 mmol) e 1-cloro-5-fluoro-3-isotiocianato-2- metoxibenzeno (intermediário 3-18, 1,17 g, 5,38 mmol) como os materiais de partida; 1,42 g do composto título foram preparados (75 % de pureza, 46 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,154 (0,88), 1,172 (1,70), 1,189 (0,80), 1,484 (16,00), 1,987 (3,28), 2,518 (0,89), 2,522 (0,61), 2,883 (0,73), 2,899 (0,40), 3,359 (0,69), 3,644 (4,46), 3,760 (7,94), 3,774 (0,44), 3,782 (1,03), 3,798 (0,53), 4,017 (0,69), 4,035 (0,69), 6,400 (0,60), 6,405 (0,53), 6,427 (1,00), 7,498 (0,41). LC-MS (método 2): Tr = 0,73 min; MS (ESIpos): m/z = 431 [M+H]+ Intermediário 4-29 terc-butil 5-[(3-cloro-2-etilfenil)carbamotioil]-4-hidróxi-6-oxo-3,6-di- hidropiridina-1(2H)-carboxilato
[00259] Usando um método análogo ao descrito para o Intermediário 4-1 com terc-butil 2,4-dioxopiperidina-1-carboxilato (CAS 845267-78-9, 5,77 g, 27,0 mmol) e 2-cloro-1-etil-3- isotiocianatobenzeno (intermediário 3-29, 6,29 g, 85 % de pureza, 27,0 mmol) como os materiais de partida; 6,35 g do composto título foram preparados (85 % de pureza, 49 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,063 (0,89), 1,082 (2,14), 1,100 (0,95), 1,362 (0,65), 1,478 (16,00), 1,486 (1,29), 2,518 (0,64), 2,523 (0,44), 2,631 (0,70), 2,650 (0,69), 2,850 (0,41), 2,866 (0,78), 2,883 (0,43), 3,775 (0,51), 3,791 (0,90), 3,807 (0,46), 7,212 (0,46), 7,214 (0,44), 7,232 (0,62), 7,234 (0,61), 7,293 (0,62), 7,313 (1,08), 7,332 (0,53), 7,440 (0,61), 7,443 (0,62), 7,460 (0,49), 7,463 (0,45). Intermediário 4-38 terc-butil 5-[(3-fluoro-2-metilfenil)carbamotioil]-4-hidróxi-6-oxo-3,6-di- hidropiridina-1(2H)-carboxilato
[00260] Usando um método análogo ao descrito para o Intermediário 4-1 com terc-butil 2,4-dioxopiperidina-1-carboxilato (CAS 845267-78-9, 8,19 g, 38,4 mmol) e 1-fluoro-3-isotiocianato-2-metilben- zeno (CAS 363179-58-2, 6,42 g, 38,4 mmol) como os materiais de partida; 11,1 g do composto título foram preparados (95 % de pureza, 72 % de rendimento) após agitação do produto em MeOH, filtração e secagem do precipitado em vácuo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,479 (16,00), 2,084 (2,80), 2,088 (2,74), 2,834 (0,58), 2,850 (1,12), 2,866 (0,61), 3,768 (0,64), 3,784 (1,16), 3,800 (0,59), 7,073 (0,61), 7,093 (0,71), 7,186 (0,59), 7,299 (0,45), 7,316 (0,42). Intermediário 4-40 terc-butil 5-{[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluorofenil]carbamotioil}-4-hidróxi-6- oxo-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato
[00261] Usando um método análogo ao descrito para o Intermediário 4-1 com terc-butil 2,4-dioxopiperidina-1-carboxilato (CAS 845267-78-9, 7,85 g, 36,8 mmol) e 2-(2,2-difluoroetil)-1-fluoro-3- isotiocianatobenzeno (CAS 2311902-79-9, 8,00 g, 36,8 mmol) como os materiais de partida; 12,1 g do composto título foram preparados (95 % de pureza, 72 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,471 (16,00), 2,518 (0,65), 2,523 (0,43), 2,788 (0,47), 2,804 (0,87), 2,820 (0,50), 3,166 (3,72), 3,754 (0,60), 3,770 (1,08), 3,786 (0,57), 7,149 (0,62), 7,169 (0,70), 7,271 (0,58), 7,446 (0,46), 7,462 (0,43). Intermediário 4-65 terc-butil 5-[(2-etil-3-fluorofenil)carbamotioil]-4-hidróxi-6-oxo-3,6-di- hidropiridina-1(2H)-carboxilato
[00262] Usando um método análogo ao descrito para o Intermediário 4-1 com terc-butil 2,4-dioxopiperidina-1-carboxilato (CAS 845267-78-9, 7,85 g, 36,8 mmol) e 2-etil-1-fluoro-3- isotiocianatobenzeno (intermediário 3-65, 3,00 g, 16,6 mmol) como os materiais de partida; 5,46 g do composto título foram preparados (95 % de pureza, 79 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,066 (1,02), 1,085 (2,41), 1,104 (1,06), 1,477 (16,00), 1,486 (1,04), 2,074 (0,65), 2,518 (1,12), 2,522 (0,92), 2,538 (0,61), 2,858 (0,69), 3,771 (0,55), 3,787 (0,98), 3,803 (0,50), 7,092 (0,50), 7,112 (0,55), 7,186 (0,45), 7,311 (0,44), 7,327 (0,41).LC-MS (método 2): Tr = 0,72 min; MS (ESIpos): m/z = 395 [M+H]+ Sínteses dos Compostos do Intermediário 5 Intermediário 5-1 N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida
[00263] A uma solução de terc-butil 5-[(3-cloro-2-metoxifenil) carbamotioil]-4-hidróxi-6-oxo-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (intermediário 4-1,6,54 g, 15,8 mmol) em diclorometano (94 mL) foi adicionado TFA (12 mL, 160 mmol), e a mistura foi agitada 1,5 h em temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi dissolvido em EtOAc e lavado com solução de bicarbonato de sódio e salmoura. A camada orgânica foi filtrada através de um filtro hidrofóbico, e o filtrado foi secado até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (sílica, gradiente de hexano/EtOAc 20-100 %) para produzir 4,06 g do composto título (rendimento de 78 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 16,45 (d, 1 H), 14,69 (s, 1 H), 14,33 (s, 1 H), 9,37 (br s, 1 H), 8,18 (br s, 1 H), 7,76 - 7,87 (m, 1 H), 7,37 - 7,45 (m, 1 H), 7,15 - 7,23 (m, 1 H), 3,73 - 3,76 (m, 3 H), 3,43 (td, 1 H), 3,27 - 3,32 (m, 1 H), 2,79 (t, 1 H), 2,59 - 2,69 (m, 1H). LC-MS (método 1): Tr = 1,19 min; MS (ESIpos): m/z = 313 [M+H]+ Intermediário 5-4 N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida
[00264] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 5-1 com terc-butil 5-[(3-fluoro-2-metoxifenil)carbamotioil]- 4-hidróxi-6-oxo-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (intermediário 44, 9,49 g, 23,9 mmol) como o material de partida, 6,98 g do composto título foi preparado (89 % de rendimento) após 15 min de agitação e usado nas etapas seguintes sem purificação adicional. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 16,48 (d, 1 H), 14,63 (s, 0,5 H), 14,28 (s, 0,5 H), 9,34 (br s, 0,5 H), 8,16 (br s, 0,5 H), 7,65 (t, 1 H), 6,97 - 7,37 (m, 2 H), 3,79 - 3,85 (m, 3 H), 3,35 - 3,46 (m, 1 H), 3,26 - 3,32 (m, 1 H), 2,78 (t, 1 H), 2,63 (t, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,46 min; MS (ESIpos): m/z = 297,1 [M+H]+ Intermediário 5-7 N-(2,3-diclorofenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida
[00265] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 5-1 com terc-butil 5-[(2,3-diclorofenil)carbamotioil]-4- hidróxi-6-oxo-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (intermediário 4-7, 9,40 g, 22,5 mmol) como o material de partida; 5,71 g do composto título foram preparados (62 % de rendimento) após agitar durante a noite. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,018 (1,18), 1,050 (1,33), 1,072 (0,81), 1,102 (0,59), 1,132 (0,81), 1,154 (1,84), 1,172 (3,17), 1,189 (1,84), 1,199 (0,88), 1,231 (1,92), 1,259 (1,40), 1,486 (0,66), 1,593 (1,33), 1,626 (1,18), 1,695 (1,25), 1,727 (1,18), 1,907 (2,14), 1,987 (5,97), 2,322 (3,17), 2,326 (4,28), 2,331 (3,17), 2,518 (15,85), 2,522 (9,44), 2,638 (11,06), 2,664 (7,82), 2,669 (7,52), 2,673 (5,53), 2,798 (8,11), 3,436 (9,81), 4,017 (1,18), 4,035 (1,11), 5,560 (1,33), 5,579 (1,25), 7,392 (4,42), 7,410 (10,03), 7,430 (9,22), 7,565 (12,24), 7,585 (16,00), 7,605 (9,51), 8,134 (0,74), 8,197 (4,35), 9,418 (3,91), 14,273 (6,93), 14,665 (6,64), 16,114 (1,03), 16,295 (9,95), 16,352 (5,82), 16,503 (1,11). LC-MS (método 2): Tr = 0,55 min; MS (ESIpos): m/z = 316 [M-H]-. Intermediário 5-10 N-(3-cloro-2-metilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida
[00266] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 5-1 com terc-butil 5-[(3-cloro-2-metilfenil)carbamotioil]-4- hidróxi-6-oxo-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (intermediário 4-10, 4,67 g, 11,8 mmol) como o material de partida, 3,54 g do composto título foram preparados (91 % de rendimento) após 3 h e usados nas próximas etapas sem purificação adicional. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 16,42 (d, 1 H), 14,01 - 14,37 (m, 1 H), 8,14 - 9,40 (m, 1 H), 7,43 (br t, 1 H), 7,16 - 7,32 (m, 2 H), 3,42 - 3,48 (m, 1 H), 3,26 - 3,34 (m, 1 H), 2,78 (t, 1 H), 2,60 - 2,68 (m, 1 H), 2,12 - 2,21 (m, 3H). LC-MS (método 2): Tr = 0,60 min; MS (ESIpos): m/z = 297,4 [M+H]+. Intermediário 5-18 N-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6-tetra- hidropiridina-3-carbotioamida
[00267] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 5-1 com terc-butil 5-[(3-cloro-5-fluoro-2- metoxifenil)carbamotioil]-4-hidróxi-6-oxo-3,6-di-hidropiridina-1(2H)- carboxilato (intermediário 4-18, 1,42 g, 3,30 mmol) como o material de partida; 690 mg do composto título foram preparados (95 % de pureza, 60 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,61 - 2,70 (m, 1 H), 2,80 (m, 1 H), 3,25 - 3,32 (m, 1 H), 3,38 - 3,47 (m, 1 H), 3,74 (s, 3 H), 7,39 - 7,62 (m, 1 H), 7,83 - 8,02 (m, 1 H), 8,20 - 8,33 (s, 0,5 H), 9,33 - 9,57 (s, 0,5 H), 14,53 (s, 0,5 H), 14,93 (s, 0,5 H), 16,29 (s, 0,5 H), 16,36 (s, 0,5H). LC-MS (método 2): Tr = 0,57 min; MS (ESIneg): m/z = 329 [M-H]-. Intermediário 5-29 N-(3-cloro-2-etilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida
[00268] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 5-1 com terc-butil 5-[(3-cloro-2-etilfenil)carbamotioil]-4- hidróxi-6-oxo-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (intermediário 4-29, 2,35 g, 75 % de pureza, 4,29 mmol) como o material de partida; 1,22 g do composto título foram preparados (95 % de pureza, 87 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,048 (7,06), 1,067 (16,00), 1,086 (7,43), 1,107 (1,58), 1,124 (1,32), 1,143 (0,50), 1,154 (1,34), 1,172 (2,43), 1,190 (1,24), 1,232 (0,50), 1,988 (4,56), 2,318 (0,47), 2,323 (1,05), 2,327 (1,56), 2,332 (1,11), 2,336 (0,47), 2,518 (5,61), 2,523 (4,03), 2,581 (2,03), 2,600 (6,41), 2,619 (6,62), 2,642 (4,59), 2,661 (2,69), 2,669 (1,90), 2,673 (1,27), 2,678 (0,58), 2,771 (2,35), 2,789 (4,82), 2,807 (2,58), 3,287 (1,61), 3,294 (1,79), 3,305 (3,11), 3,312 (3,14), 3,323 (2,06), 3,330 (2,35), 3,415 (1,53), 3,422 (1,66), 3,433 (2,56), 3,441 (2,45), 3,452 (1,40), 3,459 (1,24), 4,017 (1,03), 4,035 (1,00), 7,166 (0,95), 7,176 (0,58), 7,179 (0,58), 7,248 (0,71), 7,259 (6,30), 7,268 (3,58), 7,275 (4,43), 7,287 (7,20), 7,294 (3,90), 7,303 (3,56), 7,324 (0,87), 7,392 (1,85), 7,400 (1,37), 7,407 (1,85), 7,415 (1,74), 7,419 (2,40), 7,426 (1,77), 7,436 (1,77), 7,443 (1,45), 8,174 (1,77), 9,335 (1,42), 14,111 (2,98), 14,452 (2,74), 16,428 (7,88), 16,441 (7,38). LC-MS (método 6): Tr = 1,28 min; MS (ESIpos): m/z = 311 [M+H]+. Intermediário 5-38 N-(3-fluoro-2-metilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida
[00269] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 5-1 com terc-butil 5-[(3-fluoro-2-metilfenil)carbamotioil]-4- hidróxi-6-oxo-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (intermediário 4-38, 11,1 g, 29,1 mmol) como o material de partida, 7,25 g do composto título foram preparados (84 % de rendimento) após 15 min de agitação e usados nas próximas etapas sem purificação adicional. 1H-RMN (400 MHz, DMSO- d6): δ [ppm] = 1,172 (0,55), 1,987 (1,05) 2,063 (16,00), 2,518 (1,49), 2,523 (1,01), 2,612 (1,94), 2,631 (3,67) 16,468 (4,62). LC-MS (método 2): Tr = 0,47 min; MS (ESIpos): m/z = 281 [M+H]+. Intermediário 5-40 N-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluorofenil]-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropi- ridina-3-carbotioamida
[00270] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 5-1 com terc-butil 5-{[2-(2,2-difluoroetil)-3- fluorofenil]carbamotioil}-4-hidróxi-6-oxo-3,6-di-hidropiridina-1(2H)- carboxilato (intermediário 4-40, 12,1 g, 28,0 mmol) como o material de partida; 8,81 g do composto título foram preparados (95 % de pureza, 90 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,145 (0,50), 1,154 (1,98), 1,172 (3,87), 1,190 (1,88), 1,441 (0,60), 1,987 (7,01), 2,323 (1,39), 2,327 (1,98), 2,332 (1,39), 2,518 (8,20), 2,523 (5,52), 2,617 (6,21), 2,635 (11,74), 2,653 (7,04), 2,665 (3,21), 2,669 (3,14), 2,673 (2,21), 2,769 (5,92), 2,786 (10,81), 2,803 (6,18), 3,059 (7,57), 3,067 (7,93), 3,104 (15,40), 3,111 (15,40), 3,148 (7,93), 3,307 (9,36), 3,434 (8,96), 4.000 (0,56), 4,017 (1,65), 4,035 (1,65), 4,053 (0,53), 6,057 (3,27), 6,067 (6,55), 6,077 (2,98), 6,198 (6,18), 6,208 (13,09), 6,217 (6,12), 6,339 (2,81), 6,348 (6,12), 6,358 (3,01), 7,165 (5,62), 7,185 (7,24), 7,207 (6,64), 7,227 (8,53), 7,242 (9,39), 7,265 (9,26), 7,288 (3,31), 7,393 (2,38), 7,413 (5,55), 7,430 (6,51), 7,459 (4,53), 7,479 (1,45), 8,152 (5,29), 9,352 (4,96), 14,013 (9,02), 14,389 (7,90), 16,346 (15,47), 16,353 (16,00). LC-MS (método 2): Tr = 0,48 min; MS (ESIpos): m/z = 331,1 [M+H]+. Intermediário 5-65 N-(2-etil-3-fluorofenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida
[00271] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 5-1 com terc-butil 5-[(2-etil-3-fluorofenil)carbamotioil]-4- hidróxi-6-oxo-3,6-di-hidropiridina-1(2H)-carboxilato (intermediário 4-65, 5,46 g, 71 % de pureza, 9,83 mmol) como o material de partida; 4,0 g do composto título foram preparados (70 % de pureza, 97 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) delta [ppm]: 1,052 (6,61), 1,071 (16,00), 1,089 (6,75), 1,116 (0,56), 1,224 (4,60), 1,734 (1,58), 2,326 (0,43), 2,472 (1,56), 2,518 (2,10), 2,523 (1,69), 2,647 (0,85), 2,659 (0,85), 2,664 (0,98), 2,668 (1,03), 2,673 (0,80), 2,782 (0,89), 3,423 (0,82), 4,037 (0,62), 7,160 (2,35), 7,288 (0,98), 8,170 (0,48), 14,073 (0,46), 14,414 (0,52). LC-MS (método 6): Tr = 1,18 min; MS (ESIpos): m/z = 295 [M+H]+. Sínteses dos Compostos do Intermediário 6 Intermediário 6-1 N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-[({3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metil) amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00272] Uma mistura de N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo- 1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-1,498 mg, 1,59 mmol) e 1 - {3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 2-1,0,5 g, 2,23 mmol) foi agitada durante 4 h a 120 °C. A mistura de reação foi purificada por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 0-30 %) para produzir 325 mg do composto título (39 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 14,79 (s, 1 H), 13,69 (t, 1 H), 8,39 (s, 1 H), 8,24 (d, 1 H), 7,81 (dd, 1 H), 7,73 (s, 1 H), 7,26 - 7,33 (m, 2 H), 7,11 (t, 1 H), 4,67 (d, 2 H), 4,16 (t, 2 H), 3,84 - 3,95 (m, 2 H), 3,74 - 3,79 (m, 1 H), 3,71 (s, 3 H), 3,59 - 3,70 (m, 2 H), 3,45 - 3,54 (m, 2 H), 3,11 - 3,20 (m, 2 H), 2,78 (t, 2H). LC-MS (método 2): Tr = 1,07 min; MS (ESIpos): m/z = 519,2 [M+H]+. Intermediário 6-2 N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-{[(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4- il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00273] Uma mistura de N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo- 1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-1,866 mg, 2,77 mmol) e 1-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina (intermediário 2-8, 776 mg, 80 % de pureza, 2,77 mmol) em ACN (22 mL) foi tratada com N,O-bis(trimetilsilil)acetamida (2,05 mL, 8,6 mmol, CAS 10416-59-8) e agitada a 80°C durante 4 h. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e purificada por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 0-20 %) para produzir 1,23 g (95 % de pureza, 81 % de rendimento) do composto título. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,78 (t, 2 H), 3,16 (td, 2 H), 3,40 - 3,54 (m, 3 H), 3,59 - 3,69 (m, 2 H), 3,71 (s, 3 H), 3,73 - 3,79 (m, 1 H), 3,83 - 3,95 (m, 2 H), 4,16 (t, 2 H), 4,67 (d, 2 H), 7,11 (t, 1 H), 7,27 - 7,33 (m, 2 H), 7,73 (br s, 1 H), 7,81 (dd, 1 H), 8,24 (d, 1 H), 8,39 (s, 1 H), 13,69 (s, 1 H), 14,79 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,09 min; MS (ESIpos): m/z = 519 [M+H]+ Intermediário 6-4 4-[({3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metil)amino]-N-(3-fluoro-2- metoxifenil)-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00274] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo- 1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-4, 179 mg, 604 μmol) e 1-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 2-1,190 mg, 845 μmol) como os materiais de partida; 120 mg do composto título foram preparados (34 % de rendimento) após aquecimento durante 2 h e purificação por cromatografia flash (sílica de fase amino, gradiente de DCM/EtOH 0-10 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 14,74 (s, 1 H), 13,70 (br t, 1 H), 8,39 (s, 1 H), 8,24 (d, 1 H), 7,64 - 7,73 (m, 2 H), 7,30 (d, 1 H), 7,02 - 7,14 (m, 2 H), 4,67 (d, 2 H), 4,13 - 4,21 (m, 2 H), 3,84 - 3,95 (m, 2 H), 3,59 - 3,77 (m, 4 H), 3,40 - 3,53 (m, 2 H), 3,13 - 3,22 (m, 2 H), 2,68 - 2,80 (m, 2 H), 1,59 (br s, 1 H), 0,93 - 1,39 (m, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,01 min; MS (ESIpos): m/z = 503 [M+H]+. Intermediário 6-7 N-(2,3-diclorofenil)-4-[({3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4- il}metil)amino)]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00275] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(2,3-diclorofenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6-tetra- hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-7, 160 mg, 504 μmol) e 1-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 21,158 mg, 706 μmol) como materiais de partida; 110 mg do composto título foram preparados (rendimento de 35 %) após aquecimento durante 2 h e purificação por cromatografia flash (sílica de fase amino, gradiente de DCM/EtOH 0-10 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 14,90 (s, 1 H), 13,66 (t, 1 H), 8,39 (s, 1 H), 8,24 (d, 1 H), 7,75 (br s, 1 H), 7,55 (dd, 1 H), 7,51 (dd, 1 H), 7,28 - 7,38 (m, 3 H), 4,68 (d, 3 H), 4,14 - 4,21 (m, 2 H), 3,87 - 3,90 (m, 1 H), 3,72 - 3,76 (m, 1 H), 3,64 - 3,67 (m, 1 H), 3,58 - 3,63 (m, 1 H), 3,35 - 3,53 (m, 3 H), 2,79 (t, 2H). LC-MS (método 2): Tr = 1,08 min; MS (ESIpos): m/z = 523 [M+H]+. Intermediário 6-10 N-(3-cloro-2-metilfenil)-4-[({3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4- il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00276] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1; N-(3-cloro-2-metilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6-tetra- hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-10, 189 mg, 637 μmol) e 1-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 21,200 mg, 892 μmol) como os materiais de partida; 180 mg do composto título foram preparados (56 % de rendimento) após aquecimento durante 2 h e purificação por cromatografia flash (sílica de fase amino, gradiente de DCM/EtOH 0-10 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 14,54 (s, 1 H), 13,64 (br t, 1 H), 8,38 (s, 1 H), 8,24 (d, 1 H), 7,69 (br s, 1 H), 7,28 - 7,37 (m, 2 H), 7,13 - 7,26 (m, 2 H), 4,65 (d, 2 H), 4,14 - 4,20 (m, 2 H), 3,74 - 3,88 (m, 3 H), 3,63 - 3,71 (m, 2 H), 3,42 - 3,53 (m, 2 H), 3,14 - 3,31 (m, 2 H), 2,77 (t, 2 H), 2,16 (s, 3H). LC-MS (método 2): Tr = 1,09 min; MS (ESIpos): m/z = 501 [M+H]+. Intermediário 6-11 N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-{[(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin- 4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00277] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-1,142 mg, 407 μmol) e 1 -(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina (intermediário 2-2, 116 mg, 489 μmol) como os materiais de partida; 85,6 mg do composto título foram preparados (36 % de rendimento) após aquecimento durante 3 h e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 30 % de B, 0,50 - 6,00 min 30 - 70 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 14,79 (s, 1 H), 13,67 (br t, 1 H), 8,41 (s, 1 H), 8,24 (d, 1 H), 7,81 (dd, 1 H), 7,73 (br s, 1 H), 7,28 - 7,33 (m, 2 H), 7,11 (t, 1 H), 4,67 (br d, 2 H), 4,31 (dd, 1 H), 4,05 (dd, 1 H), 3,90 (dd, 1 H), 3,67 - 3,73 (m, 4 H), 3,50 (td, 1 H), 3,34 - 3,40 (m, 1 H), 3,13 - 3,21 (m, 2 H), 2,79 (t, 2 H), 2,63 - 2,70 (m, 1 H), 2,19 - 2,33 (m, 4 H), 1,46 - 1,76 (m, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,08 min; MS (ESIpos): m/z = 532,5 [M+H]+ Intermediário 6-12 N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-(((3-hidroxipiridin-4-il)metil)amino)-2-oxo- 1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00278] Uma mistura de 4-(aminometil)piridin-3-ol (CAS 20485-352, 75 g, 0,604 mol) e N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-4, 150 g, 0,506 mol) em DMA (1,2 L) foi agitada a 120 °C durante 2,5 h sob nitrogênio. A mistura foi concentrada em vácuo para remover a maior parte do solvente. A solução castanha escura foi adicionada lentamente a EtOAc (8 L) com agitação. A mistura resultante foi lavada com água (2,5 L) e salmoura (2,5 L x 2). A fase orgânica foi secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi suspenso com EtOAc (300 mL) e filtrado. A massa filtrante foi secada em vácuo para produzir o composto título (87 g, 47 % de rendimento) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 14,73 (s, 1 H), 13,69 (t, 1 H), 10,28 (s, 1 H), 8,21-8,13 (m, 2 H), 7,67-7,66 (m, 2 H), 7,10 (br.s, 1 H), 7,09-7,04 (m, 2 H), 4,61 (d, 2 H), 3,79 (s, 3 H), 3,16 (t, 2 H), 2,77 (t, 2H). Intermediário 6-15 N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-[({3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4- il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00279] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo- 1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-4, 100 mg, 320 μmol) e 1-(3-{[4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina (intermediário 2-3, 114 mg, 480 μmol) como os materiais de partida; 74,3 mg (80 % de pureza, 35 % de rendimento) do composto título foram preparados após aquecimento durante 4 h e purificação por cromatografia flash (sílica de fase amino, gradiente de DCM/EtOH 010 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,880 (0,45), 2,176 (4,07), 2,186 (0,73), 2,191 (0,45), 2,518 (1,66), 2,523 (1,13), 2,787 (0,65), 2,799 (0,61), 3,162 (0,56), 3,169 (0,54), 3,533 (0,46), 3,539 (0,45), 3,711 (9,24), 3,819 (0,47), 3,823 (0,40), 4,149 (0,65), 4,161 (1,12), 4,176 (0,61), 4,655 (0,80), 4,670 (0,82), 5,759 (16,00), 7,086 (0,63), 7,107 (1,27), 7,127 (0,73), 7,283 (0,77), 7,287 (0,81), 7,302 (0,77), 7,306 (1,39), 7,318 (0,80), 7,723 (0,53), 7,803 (0,59), 7,806 (0,60), 7,823 (0,57), 7,827 (0,53), 8,234 (1,27), 8,246 (1,26), 8,392 (1,87), 14,791 (1,01). LC-MS (método 2): Tr = 0,84 min; MS (ESIpos): m/z = 532 [M+H]+ Intermediário 6-18 N-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxifenil)-4-[({3-[(4-metilmorfolin-2- il)metóxi]piridin-4-il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida
[00280] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2- oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-18, 100 mg, 302 μmol) e 1-(3-{[4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4- il)metanamina (intermediário 2-3, 108 mg, 453 μmol) como os materiais de partida; 166 mg (70 % de pureza, 70 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por cromatografia flash (sílica de fase amino, gradiente de DCM/EtOH 0-10 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,881 (0,59), 1,908 (0,51), 1,984 (0,51), 1,991 (0,55), 2,174 (5,75), 2,185 (0,88), 2,191 (2,53), 2,518 (2,46), 2,523 (1,65), 2,581 (0,55), 2,609 (0,49), 2,785 (0,52), 2,798 (0,96), 2,815 (0,60), 3,096 (0,44), 3,161 (0,55), 3,168 (0,51), 3,387 (0,97), 3,535 (0,57), 3,542 (0,68), 3,700 (7,75), 3,786 (0,69), 3,791 (0,73), 3,795 (0,71), 3,810 (0,63), 3,815 (0,70), 3,823 (0,75), 4,115 (0,52), 4,119 (0,55), 4,128 (0,53), 4,154 (0,77), 4,166 (0,94), 4,181 (0,60), 4,672 (0,76), 4,687 (0,77), 5,759 (16,00), 7,267 (0,58), 7,275 (0,65), 7,287 (0,58), 7,295 (0,63), 7,313 (0,77), 7,325 (0,74), 7,792 (0,49), 8,046 (0,50), 8,053 (0,50), 8,073 (0,47), 8,080 (0,47), 8,238 (1,20), 8,250 (1,12), 8,267 (0,55), 8,279 (0,66), 8,399 (1,72), 15,080 (0,94). LC-MS (método 2): Tr = 1,11 min; MS (ESIpos): m/z = 550 [M+H]+ Intermediário 6-19 N-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxifenil)-4-[({3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin- 4-il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00281] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2- oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-18, 100 mg, 302 μmol) e 1-(3-{[1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina (intermediário 2-1,94,9 mg, 423 μmol) como os materiais de partida, 160 mg (90 % de pureza, 89 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 0-30 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 0,821 (0,41), 0,904 (0,45), 1,035 (8,84), 1,052 (16,00), 1,070 (9,56), 1,154 (1,90), 1,172 (3,66), 1,189 (1,72), 1,987 (6,85), 2,518 (1,36), 2,522 (0,92), 2,790 (0,61), 3,157 (0,42), 3,404 (1,39), 3,417 (1,49), 3,421 (4,01), 3,434 (4,35), 3,439 (4,40), 3,452 (4,43), 3,457 (1,21), 3,461 (0,53), 3,469 (1,28), 3,501 (0,40), 3,652 (0,66), 3,655 (0,65), 3,702 (7,42), 3,750 (0,43), 3,785 (0,67), 3,788 (0,43), 3,890 (0,58), 3,999 (0,46), 4,017 (1,36), 4,035 (1,39), 4,053 (0,47), 4,156 (0,56), 4,165 (0,77), 4,179 (0,54), 4,343 (2,52), 4,356 (4,91), 4,368 (2,35), 4,683 (0,68), 4,697 (0,68), 7,272 (0,48), 7,280 (0,60), 7,293 (0,51), 7,300 (0,64), 7,305 (0,63), 7,317 (0,62), 7,800 (0,42), 8,032 (0,40), 8,040 (0,42), 8,059 (0,41), 8,066 (0,40), 8,242 (0,98), 8,254 (0,94), 8,394 (1,43), 15,078 (0,82). LC-MS (método 2): Tr = 1,14 min; MS (ESIpos): m/z = 537 [M+H]+ Intermediário 6-20 N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-{[(3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piri- din-4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00282] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo- 1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-4, 200 mg, 675 μmol) e 1-(3-{[(3 S )-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin-4- il)metanamina (intermediário 2-4, 208 mg, 877 μmol) como os materiais de partida, 105 mg (99 % de pureza, 30 % de rendimento) do composto título foram preparados após aquecimento durante 3 h e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 6,00 min 15 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,195 (0,50), 2,203 (0,62), 2,221 (0,73), 2,224 (0,80), 2,229 (0,79), 2,232 (0,77), 2,250 (0,69), 2,258 (0,63), 2,287 (16,00), 2,322 (0,48), 2,326 (0,65), 2,331 (0,46), 2,518 (2,86), 2,522 (1,80), 2,645 (0,60), 2,651 (1,24), 2,658 (0,75), 2,664 (0,58), 2,668 (0,75), 2,673 (0,96), 2,680 (1,16), 2,687 (0,56), 2,760 (1,14), 2,776 (2,31), 2,793 (1,34), 3,134 (0,86), 3,142 (0,98), 3,152 (1,59), 3,158 (1,51), 3,167 (0,87), 3,175 (0,73), 3,347 (1,31), 3,371 (1,26), 3,375 (1,37), 3,398 (1,19), 3,473 (0,50), 3,480 (0,60), 3,501 (0,98), 3,507 (0,98), 3,527 (0,72), 3,533 (0,60), 3,677 (0,56), 3,683 (1,07), 3,690 (0,58), 3,704 (0,46), 3,711 (0,82), 3,718 (0,41), 3,780 (13,85), 3,783 (13,72), 3,884 (0,99), 3,892 (0,99), 3,912 (0,89), 3,920 (0,88), 4,029 (0,98), 4,044 (1,01), 4,054 (1,17), 4,070 (1,12), 4,291 (1,18), 4,302 (1,21), 4,317 (1,03), 4,327 (0,97), 4,658 (1,87), 4,674 (1,89), 7,044 (0,58), 7,049 (1,31), 7,065 (1,59), 7,069 (2,63), 7,075 (1,64), 7,085 (1,41), 7,090 (0,58), 7,096 (1,44), 7,101 (1,44), 7,117 (0,56), 7,122 (0,41), 7,296 (2,20), 7,308 (2,24), 7,653 (1,44), 7,658 (0,89), 7,670 (1,15), 7,676 (0,86), 7,704 (1,58), 8,236 (3,27), 8,247 (3,17), 8,411 (4,92), 13,661 (0,56), 13,676 (1,10), 13,690 (0,53), 14,736 (2,92). LC-MS (método 6): Tr = 0,62 min; MS (ESIpos): m/z = 516 [M+H]+ Intermediário 6-21 N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-{[(3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin- 4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00283] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-1, 200 mg, 639 μmol) e 1 -(3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina (intermediário 2-4, 197 mg, 831 μmol) como os materiais de partida 102 mg (99 % de pureza, 30 % de rendimento) do composto título foram preparados após aquecimento durante 3h a 120 °C e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 6,00 min 15 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 2,288 (3,78), 2,327 (0,47), 2,518 (1,87), 2,523 (1,27), 2,651 (0,43), 2,665 (0,45), 2,669 (0,59), 2,673 (0,55), 2,679 (0,47), 2,769 (0,69), 2,786 (1,40), 2,803 (0,81), 8,250 (1,65), 8,413 (3,11), 13,667 (0,68), 14,787 (1,82). LC-MS (método 6): Tr = 0,68 min; MS (ESIpos): m/z = 532 [M+H]+ Intermediário 6-22 terc-butil (2S)-2-[({4-[({5-[(3-fluoro-2-metoxifenil)carbamotioil]-6-oxo- 1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il}amino)metil]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina- 4-carboxilato
[00284] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo- 1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-4, 1,00 g, 3,37 mmol) e terc-butil (2S)-2-({[4-(aminometil)piridin-3- il]óxi}metil)morfolina-4-carboxilato (intermediário 2-5, 1,53 g, 4,72 mmol) como os materiais de partida; 1,43 g (70 % de pureza, 49 % de rendimento) do composto título foram preparados após aquecimento durante 6 h e purificação por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 0-20 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,035 (6,69), 1,052 (16,00), 1,070 (7,70), 1,394 (4,63), 1,401 (2,39), 1,405 (3,46), 2,331 (0,41), 2,518 (1,92), 2,523 (1,41), 2,673 (0,42), 3,404 (1,10), 3,417 (1,21), 3,422 (3,66), 3,435 (3,78), 3,440 (3,26), 3,452 (3,33), 3,457 (1,19), 3,469 (1,18), 3,780 (2,11), 3,782 (2,08), 3,797 (0,42), 3,857 (0,84), 3,860 (0,83), 4,219 (0,41), 4,231 (0,42), 4,344 (2,52), 4,356 (4,87), 4,369 (2,35), 8,241 (0,54), 8,253 (0,53), 8,402 (0,81), 14,735 (0,40). LC-MS (método 2): Tr = 1,19 min; MS (ESIpos): m/z = 602 [M+H]+ Intermediário 6-24 N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-[({3-[2-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4- il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00285] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-1,200 mg, 639 μmol) e 1-(3-{2-[1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)metanamina (intermediário 2-6, 198 mg, 831 μmol) como os materiais de partida, 110 mg (96 % de pureza, 31 % de rendimento) do composto título foram preparados após aquecimento durante 3h a 130°C e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 6,00 min 15 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,792 (0,45), 1,812 (0,43), 1,838 (0,40), 1,850 (0,42), 2,518 (1,13), 2,523 (0,78), 2,763 (0,87), 2,771 (0,86), 2,780 (0,52), 2,786 (0,47), 3,140 (0,51), 3,148 (0,57), 3,156 (0,97), 3,164 (0,96), 3,173 (0,50), 3,181 (0,43), 3,197 (0,60), 3,224 (0,94), 3,227 (0,95), 3,253 (0,64), 3,445 (0,75), 3,452 (0,83), 3,471 (0,48), 3,480 (0,60), 3,545 (0,45), 3,551 (0,53), 3,573 (0,70), 3,580 (0,81), 3,605 (0,86), 3,611 (1,14), 3,617 (0,53), 3,638 (0,55), 3,644 (0,47), 3,689 (0,92), 3,697 (1,10), 3,712 (16,00), 3,718 (2,12), 3,744 (0,88), 3,749 (0,65), 4,203 (0,84), 4,219 (1,35), 4,232 (0,58), 4,238 (0,56), 4,656 (1,44), 4,670 (1,43), 7,089 (1,01), 7,110 (2,16), 7,130 (1,25), 7,286 (1,37), 7,289 (1,46), 7,306 (2,13), 7,310 (1,42), 7,317 (1,10), 7,726 (0,93), 7,802 (1,03), 7,806 (1,05), 7,823 (0,99), 7,826 (0,93), 8,225 (1,23), 8,237 (1,18), 8,373 (1,98), 13,695 (0,65), 14,792 (1,75). LC-MS (método 6): Tr = 0,90 min; MS (ESIpos): m/z = 533 [M+H]+ Intermediário 6-27 terc-butil (2S)-2-[({4-[({5-[(3-cloro-5-fluoro-2-metoxifenil)carbamotioil]-6- oxo-1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il}amino)metil]piridin-3-il}óxi)metil] morfolina-4-carboxilato
[00286] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2- oxo-1,2,5, 6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-18, 225 mg, 680 μmol) e terc-butil (2S)-2-({[4-(aminometil)piridin-3- il]óxi}metil) morfolina-4-carboxilato (intermediário 2-5, 308 mg, 952 μmol) como os materiais de partida; 150 mg (80 % de pureza, 28 % de rendimento) do composto título foram preparados após aquecimento durante 6 h e purificação por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 0-20 %). [ppm]: 1,035 (2,70), 1,052 (5,86), (16,00), 1,405 (6,16), 1,419 (1,21), (0,51), 2,518 (3,46), 2,523 (2,53), (1,14), 2,805 (0,74), 3,137 (0,46), (0,75), 3,405 (0,58), 3,417 (0,72), (1,70), 3,445 (0,63), 3,452 (1,56), (0,79), 3,699 (12,68), 3,719 (0,53), (0,49), 3,764 (0,44), 3,787 (2,07), (0,40), 4,225 (1,58), 4,237 (1,60), (0,82), 4,681 (1,14), 4,696 (1,11), (1,12), 7,287 (0,96), 7,295 (1,05), (0,77), 8,031 (0,67), 8,038 (0,68), (1,81), 8,257 (1,63), 8,290 (0,54), (1,58). LC-MS (método 2): Tr = 1,30 min; MS (ESIpos): m/z = 636 [M+H]+ Intermediário 6-29 N-(3-cloro-2-etilfenil)-4-[({3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4-il} metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00287] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-cloro-2-etilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-29, 300 mg, 965 μmol) e 1 -(3-{[4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina (intermediário 2-3, 321 mg, 1,35 mmol) como os materiais de partida; 300 mg (80 % de pureza, 47 % de rendimento) do composto título foram preparados após aquecimento durante 6 h e purificação por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 0-20 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 0,798 (0,84), 0,814 (0,93), 0,821 (0,93), 0,840 (0,43), 0,886 (0,53), 0,904 (1,07), 0,922 (0,50), 1,035 (9,51), 1,052 (16,00), 1,066 (1,09), 1,070 (9,08), 1,073 (1,50), 1,232 (0,45), 1,874 (0,59), 1,901 (0,47), 1,907 (0,59), 1,983 (0,41), 1,990 (0,52), 2,178 (5,56), 2,195 (1,38), 2,202 (0,47), 2,331 (0,74), 2,518 (3,86), 2,522 (2,50), 2,580 (0,57), 2,591 (1,05), 2,610 (1,21), 2,673 (0,95), 2,784 (0,95), 2,817 (0,50), 3,162 (0,41), 3,172 (0,69), 3,179 (0,65), 3,404 (1,33), 3,417 (1,38), 3,421 (3,41), 3,434 (3,43), 3,439 (3,91), 3,452 (4,01), 3,457 (1,15), 3,469 (1,19), 3,529 (0,57), 3,535 (0,57), 3,735 (0,55), 3,784 (0,47), 3,788 (0,47), 3,792 (0,47), 3,812 (0,64), 3,816 (0,62), 4,111 (0,41), 4,123 (0,48), 4,138 (0,83), 4,149 (0,83), 4,154 (0,88), 4,168 (0,74), 4,343 (2,64), 4,356 (5,06), 4,368 (2,39), 4,636 (0,93), 4,651 (0,93), 7,205 (1,50), 7,208 (1,38), 7,218 (2,69), 7,296 (1,02), 7,305 (1,02), 7,308 (1,05), 7,315 (1,17), 7,327 (0,55), 7,701 (0,64), 8,228 (1,50), 8,240 (1,38), 8,282 (0,47), 8,385 (2,07), 13,654 (0,43), 14,636 (1,17). LC-MS (método 2): Tr = 1,14 min; MS (ESIpos): m/z = 530 [M+H]+ Intermediário 6-30 N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-[({3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi] piridin-4-il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida
[00288] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-1,200 mg, 639 μmol) e 1-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 2-7, 210 mg, 831 μmol) como os materiais de partida; 55,0 mg (98 % de pureza, 15 % de rendimento) do composto título foram preparados após aquecimento durante 3h a 130°C e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 6,00 min 15 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,042 (9,29), 1,249 (8,31), 2,518 (2,85), 2,523 (1,83), 2,752 (0,79), 2,768 (1,57), 2,785 (0,95), 3,147 (0,74), 3,156 (1,18), 3,164 (1,13), 3,299 (1,11), 3,533 (1,90), 3,562 (1,50), 3,628 (0,50), 3,648 (1,21), 3,658 (1,28), 3,667 (1,26), 3,691 (1,55), 3,713 (16,00), 3,720 (1,14), 3,795 (0,51), 3,806 (0,64), 3,817 (0,52), 4,154 (0,42), 4,164 (0,43), 4,180 (1,25), 4,191 (1,23), 4,198 (1,31), 4,212 (1,18), 4,225 (0,43), 4,663 (1,86), 4,678 (1,86), 7,088 (1,13), 7,108 (2,42), 7,128 (1,39), 7,286 (1,58), 7,290 (1,68), 7,305 (2,17), 7,310 (1,58), 7,316 (1,59), 7,729 (1,16), 7,799 (1,26), 7,803 (1,27), 7,819 (1,18), 7,823 (1,14), 8,241 (1,91), 8,253 (1,81), 8,397 (3,02), 13,669 (0,43), 13,683 (0,81), 14,792 (2,17). LC-MS (método 6): Tr = 1,04 min; MS (ESIpos): m/z = 547 [M+H]+ Intermediário 6-33 4-[({3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metil)amino]-N-(3- fluoro-2-metoxifenil)-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00289] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1; N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-1,200 mg, 675 μmol) e 1-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 2-7, 221 mg, 877 μmol) como os materiais de partida, 130 mg (96 % de pureza, 35 % de rendimento) do composto título foram preparados após aquecimento durante 2 h a 130°C e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 6,00 min 15 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,043 (15,59), 1,251 (13,74) 13,693 (1,25), 13,707 (0,60), 14,741 (3,47). LC-MS (método 6): Tr = 0,94 min; MS (ESIpos): m/z = 531 [M+H]+ Intermediário 6-35 4-{[(3-{2-[1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)metil]amino}-N-(3-fluoro-2- metoxifenil)-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00290] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1; N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-4, 200 mg, 675 μmol) e 1-(3-{2-[1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)metanamina (intermediário 2-6, 209 mg, 877 μmol) como os materiais de partida, 137 mg (96 % de pureza, 38 % de rendimento) do composto título foram preparados. LC-MS (método 6): Tr = 0,83 min; MS (ESIpos): m/z = 517 [M+H]+ 3,639 (1,07), 3,645 (0,93), 3,690 (1,77), 3,697 (2,11), 3,709 (0,79), 3,719 (3,54), 3,728 (1,41), 3,735 (0,73), 3,744 (1,71), 3,751 (1,33), 3,782 (15,79), 3,784 (16,00), 4,203 (1,78), 4,219 (2,73), 4,232 (1,20), 4,237 (1,18), 4,653 (2,89), 4,667 (2,88), 7,030 (0,49), 7,046 (0,68), 7,051 (1,63), 7,067 (1,82), 7,070 (3,31), 7,077 (2,11), 7,086 (1,65), 7,092 (0,71), 7,098 (1,72), 7,103 (1,73), 7,119 (0,68), 7,124 (0,52), 7,303 (1,99), 7,314 (2,03), 7,660 (1,68), 7,665 (1,06), 7,677 (1,35), 7,683 (1,07), 7,703 (1,84), 8,226 (1,84), 8,237 (1,79), 8,373 (2,98), 13,689 (0,64), 13,704 (1,28), 13,718 (0,60), 14,740 (3,42). Intermediário 6-37 N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-{[(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin -4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00291] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo- 1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-4, 200 mg, 675 μmol) e 1-(3-{[(3 R )-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin-4- il)metanamina (intermediário 2-2, 224 mg, 945 μmol) como os materiais de partida; 134 mg do composto título foram preparados (38 % de rendimento) após aquecimento durante 1 h a 124 °C e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 6,00 min 15 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,205 (0,86), 2,226 (1,57), 2,254 (1,23), 2,290 (15,27), 2,327 (1,28), 2,654 (2,07), 2,681 (1,95), 2,762 (2,11), 2,779 (3,81), 2,795 (2,41), 3,155 (3,13), 3,374 (3,80), 3,401 (2,16), 3,482 (0,97), 3,504 (1,80), 3,531 (1,16), 3,686 (1,75), 3,714 (1,51), 3,784 (16,00), 3,888 (1,65), 3,916 (1,59), 4,031 (1,27), 4,047 (1,48), 4,057 (1,61), 4,073 (1,47), 4,294 (1,53), 4,304 (1,57), 4,320 (1,45), 4,328 (1,29), 4,661 (3,52), 4,675 (3,54), 7,031 (0,48), 7,052 (1,50), 7,070 (3,26), 7,087 (1,82), 7,099 (1,95), 7,122 (0,79), 7,299 (2,83), 7,311 (2,84), 7,655 (2,12), 7,672 (2,11), 7,706 (2,52), 8,239 (3,08), 8,250 (2,98), 8,414 (5,21), 13,678 (1,85), 14,738 (3,80). LC-MS (método 6): Tr = 0,64 min; MS (ESIpos): m/z = 516 [M+H]+ Intermediário 6-38 4-[[3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]-4-piridil]metilamino]-N-(3- fluoro-2-metil-fenil)-6-oxo-2,3-di-hidro-1H-piridina-5-carbotioamida
[00292] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-fluoro-2-metilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-38, 350 mg, 1,25 mmol) e 1-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4- il}metanamina (intermediário 2-7, 315 mg, 1,25 mmol) como os materiais de partida; 192 mg do composto título foram preparados (27 % de rendimento) após aquecimento durante 3 h a 120 °C e purificação por HPLC preparativa (método 11, gradiente: 0,00 - 2,00 min 30 % de B, 2,00 - 14,00 min 30 - 70 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,046 (16,00), 1,253 (14,02), 7,686 (1,77), 8,237 (2,54), 8,249 (2,42), 8,393 (3,97), 13,662 (1,07), 14,520 (2,54). LC-MS (método 6): Tr = 0,98 min; MS (ESIpos): m/z = 515 [M+H]+ Intermediário 6-40 N-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluoro-fenil]-4-[[3-(1,4-dioxan-2-ilmetóxi)-4- piridil]metilamino]-6-oxo-2,3-di-hidro-1H-piridina-5-carbotioamida
[00293] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluorofenil]-4-hidróxi-2- oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-40, 100 mg, 303 μmol) e 1-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 2-1,95,0 mg, 424 μmol) como os materiais de partida; 19,5 mg do composto título foram preparados (10 % de rendimento) após purificação por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 0-10 %). LC-MS (método 2): Tr = 1,07 min; MS (ESIpos): m/z = 537 [M+H]+ Intermediário 6-41 terc-butil (2S)-2-{[(4-{[(5-{[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluorofenil]carbamotioil}- 6-oxo-1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)amino]metil}piridin-3-il)óxi]metil} morfolina-4-carboxilato
[00294] Uma mistura de N-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluorofenil]-4-hidró- xi-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-40, 200 mg, 605 μmol) e terc-butil (2S)-2-({[4-(aminometil)piridin-3-il]óxi} metil)morfolina-4-carboxilato (intermediário 2-5, 274 mg, 848 μmol) em ACN (2,5 mL) foi tratada com N,O-bis-(trimetilsiliil)acetamida (111 μl, 0,6 mmol, CAS 10416-59-8) e agitada a 80 °C durante 5 h. A reação foi tratada com outro equivalente (111 μl, 0,6 mmol) de N,O-bis- (trimetilsiliil)acetamida e agitada a 80 °C durante a noite. A mistura de reação foi diluída em DCM e purificada por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOHe 0-20 %) para produzir 255 mg (45 % de rendimento) do composto título. LC-MS (método 2): Tr = 1,25 min; MS (ESIpos): m/z = 636 [M+H]+ Intermediário 6-42 terc-butil (2S)-2-[({4-[({5-[(3-cloro-2-metilfenil)carbamotioil]-6-oxo- 1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il}amino)metil]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina- 4-carboxilato
[00295] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-cloro-2-metilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-10, 350 mg, 1,18 mmol) e terc-butil (2S)-2-({[4-(aminometil)piridin-3-il]óxi}metil)morfolina- 4-carboxilato (intermediário 2-5, 381 mg, 1,18 mmol) como os materiais de partida; 208 mg do composto título foram preparados (99 % de pureza, 29 % de rendimento) após aquecimento durante 3 h e purificação por HPLC preparativa (método 11, 0,00-1,00 min 30 % de B, 1,00-12,74 min 30-68,9 % de B, 12,74 - 14,19 min 68,9 B, 14,19 - 14,45 min 68,9 - 70 % de B) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,396 (16,00), 2,077 (0,96), 2,158 (7,73), 2,520 (2,53), 2,525 (1,63), 2,542 (0,50), 2,747 (0,68), 2,763 (1,35), 2,780 (0,85), 3,146 (0,53), 3,153 (0,62), 3,162 (0,99), 3,169 (0,96), 3,434 (0,57), 3,441 (0,60), 3,710 (0,46), 3,723 (0,54), 3,730 (0,70), 3,737 (0,68), 3,749 (0,56), 3,756 (0,45), 3,837 (0,42), 4,213 (1,89), 4,225 (1,86), 4,648 (1,39), 4,663 (1,40), 7,153 (0,57), 7,170 (1,15), 7,196 (0,92), 7,216 (1,36), 7,236 (0,59), 7,294 (0,89), 7,306 (0,92), 7,326 (1,13), 7,329 (1,10), 7,346 (0,85), 7,349 (0,79), 7,691 (0,91), 8,237 (2,11), 8,249 (1,94), 8,399 (3,05), 13,653 (0,59), 14,540 (1,38). LC-MS (método 6): Tr = 1,17 min; MS (ESIpos): m/z = 602 [M+H]+ Intermediário 6-43 terc-butil (3R)-3-[({4-[({5-[(3-cloro-2-metilfenil)carbamotioil]-6-oxo- 1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il}amino)metil]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina- 4-carboxilato
[00296] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-1 com N-(3-cloro-2-metilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-10, 350 mg, 1,18 mmol) e terc-butil (3R)-3-({[4-(aminometil)piridin-3-il]óxi}metil)morfolina- 4-carboxilato (intermediário 2-9, 381 mg, 1,18 mmol) como os materiais de partida; 184 mg do composto título foram preparados (99 % de pureza, 26 % de rendimento) após aquecimento durante 3 h e por HPLC preparativa (método 11, 0,00-1,00 min 30 % de B, 1,00- 12,74 min 30-68,9 % de B, 12,74 - 14,19 min 68,9 B, 14,19 - 14,45 min 68,9 - 70 % de B) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,339 (2,92), 2,087 (1,31), 2,161 (16,00), 2,521 (1,63), 2,525 (1,08), 2,676 (0,52), 2,708 (0,66), 2,725 (1,74), 2,742 (1,82), 2,757 (0,75), 3,140 (1,42), 3,147 (1,59), 3,156 (2,44), 3,163 (2,41), 3,319 (0,58), 3,365 (1,06), 3,372 (1,25), 3,395 (0,56), 3,402 (0,54), 3,478 (0,92), 3,507 (1,00), 3,651 (0,51), 3,797 (0,72), 3,821 (0,64), 3,957 (0,67), 3,985 (0,59), 4,236 (1,53), 4,415 (0,46), 4,441 (0,83), 4,625 (2,12), 4,639 (2,15), 7,160 (1,07), 7,178 (2,26), 7,200 (2,08), 7,220 (3,03), 7,239 (1,27), 7,291 (1,19), 7,301 (1,19), 7,329 (2,50), 7,332 (2,34), 7,349 (1,83), 7,352 (1,71), 7,691 (1,99), 8,240 (3,22), 8,252 (3,11), 8,489 (2,72), 13,669 (0,94), 14,536 (3,05). LC-MS (método 6): Tr = 1,17 min; MS (ESIpos): m/z = 602 [M+H]+ Intermediário 6-44 N-(3-cloro-2-metil-fenil)-4-[[3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]-4- piridil]metilamino]-6-oxo-2,3-di-hidro-1H-piridina-5-carbotioamida
[00297] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(3-cloro-2-metilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-10, 200 mg, 674 μmol) e 1-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 2-7, 200 mg, 85 % de pureza, 674 μmol) como os materiais de partida; 328 mg do composto título foram preparados (97 % de pureza, 89 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,047 (14,25), 1,253 (12,85), 2,077 (16,00), 2,162 (14,45), 2,520 (1,87), 2,525 (1,19), 2,742 (1,21), 8,245 (0,80), 8,399 (1,03), 13,621 (0,57), 13,635 (1,07), 14,542 (2,54). LC-MS (método 6): Tr = 1,06 min; MS (ESIpos): m/z = 531 [M+H]+ Intermediário 6-47 4-[[3-(1,4-dioxan-2-ilmetóxi)-4-piridil]metilamino]-N-(3-fluoro-2-metil- fenil)-6-oxo-2,3-di-hidro-1H-piridina-5-carbotioamida
[00298] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(3-fluoro-2-metilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-38, 300 mg, 1,07 mmol) e 1-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 2-1,240 mg, 1,07 mmol) como os materiais de partida; 156,3 mg do composto título foram preparados (93 % de pureza, 71 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 0.000 (0,70), 1,998 (0,55), 2,033 (16,00), 2,038 (15,45), 2,064 (3,23), 2,508 (3,78), 2,513 (2,36), 2,737 (2,61), 2,754 (5,23), 2,771 (2,96), 3,142 (2,39), 3,151 (3,71), 3,158 (3,53), 3,168 (2,07), 3,393 (2,34), 3,418 (3,51), 3,421 (3,41), 3,446 (3,16), 3,461 (1,34), 3,482 (2,56), 3,488 (2,76), 3,506 (1,42), 3,516 (2,71), 3,579 (1,64), 3,585 (1,94), 3,608 (2,49), 3,614 (2,79), 3,641 (5,03), 3,670 (1,97), 3,735 (2,71), 3,744 (2,66), 3,769 (2,09), 3,837 (2,39), 3,844 (2,81), 3,871 (4,35), 3,883 (1,72), 3,890 (1,32), 3,895 (1,57), 3,902 (1,32), 3,907 (1,44), 3,914 (1,14), 3,926 (0,62), 4,108 (0,85), 4,120 (0,95), 4,134 (3,73), 4,145 (6,69), 4,158 (3,48), 4,171 (0,87), 4,184 (0,75), 4,624 (4,75), 4,639 (4,68), 7,028 (1,64), 7,050 (3,46), 7,062 (3,48), 7,073 (2,79), 7,081 (4,60), 7,179 (1,62), 7,198 (2,71), 7,215 (2,51), 7,235 (1,00), 7,333 (1,12), 7,676 (3,41), 8,321 (0,42), 13,651 (2,04), 14,509 (4,80). LC-MS (método 6): Tr = 0,85 min; MS (ESIpos): m/z = 487 [M+H]+ Intermediário 6-50 N-(3-cloro-2-metil-fenil)-4-[[3-(1,4-dioxan-2-ilmetóxi)-4- piridil]metilamino]-6-oxo-2,3-di-hidro-1H-piridina-5-carbotioamida
[00299] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(3-cloro-2-metilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-10, 200 mg, 674 μmol) e 1-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 2-1,151 mg, 674 μmol) como os materiais de partida; 150,0 mg do composto título foram preparados (96 % de pureza, 42 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,077 (1,64), 2,162 (16,00), 2,520 (2,60), 2,525 (1,64), 2,751 (1,41), 2,768 (2,82), 2,784 (1,63), 3,156 (1,22), 3,165 (1,94), 3,172 (1,87), 3,404 (1,32), 3,429 (1,94), 3,432 (1,93), 3,457 (1,81), 3,472 (0,72), 3,493 (1,40), 3,500 (1,50), 3,518 (0,79), 3,528 (1,45), 3,591 (0,91), 3,597 (1,05), 3,619 (1,35), 3,626 (1,54), 3,650 (2,14), 3,653 (2,65), 3,660 (0,95), 3,682 (1,04), 3,748 (1,44), 3,756 (1,54), 3,781 (1,16), 3,849 (1,30), 3,855 (1,59), 3,883 (2,54), 3,894 (0,99), 3,901 (0,68), 3,906 (0,89), 3,913 (0,76), 3,918 (0,79), 3,925 (0,62), 3,930 (0,51), 4,118 (0,55), 4,129 (0,59), 4,144 (2,26), 4,155 (4,42), 4,168 (2,30), 4,181 (0,52), 4,194 (0,48), 4,648 (3,19), 4,663 (3,19), 7,159 (1,24), 7,176 (2,55), 7,203 (1,84), 7,222 (2,83), 7,242 (1,22), 7,290 (2,72), 7,302 (2,78), 7,330 (2,22), 7,333 (2,19), 7,349 (1,69), 7,353 (1,54), 7,691 (1,83), 8,233 (4,07), 8,245 (3,96), 8,383 (6,40), 13,623 (0,61), 13,637 (1,14), 14,544 (2,74). LC-MS (método 6): Tr = 0,94 min; MS (ESIpos): m/z = 503 [M+H]+ Intermediário 6-52 N-(3-cloro-2-etil-fenil)-4-[[3-(1,4-dioxan-2-ilmetóxi)-4-piridil]metilamino]- 6-oxo-2,3-di-hidro-1H-piridina-5-carbotioamida
[00300] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(3-cloro-2-etilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-29, 150 mg, 483 μmol) e 1-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 2-1,108 mg, 483 μmol) como os materiais de partida; 150,0 mg do composto título foram preparados (90 % de pureza, 54 % de rendimento) usando cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 1-13 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm = 1,01 - 1,11 (m, 4 H), 2,56 - 2,65 (m, 2 H), 2,73 - 2,81 (m, 2 H), 3,12 - 3,22 (m, 2 H), 3,39 - 3,54 (m, 3 H), 3,58 - 3,69 (m, 2 H), 3,73 - 3,80 (m, 1 H), 3,88 (s, 2 H), 4,09 - 4,23 (m, 2 H), 4,11 - 4,15 (m, 1 H), 4,57 - 4,71 (m, 2 H), 7,16 - 7,25 (m, 2 H), 7,28 - 7,36 (m, 2 H), 7,32 (s, 1 H), 7,66 - 7,75 (m, 1 H), 8,07 - 8,11 (m, 1 H), 8,21 - 8,26 (m, 1 H), 8,33 - 8,43 (m, 1 H), 13,60 - 13,70 (m, 1 H), 14,59 - 14,67 (m, 1 H). LC-MS (método 2): Tr = 1,15 min; MS (ESIpos): m/z = 517 [M+H]+ Intermediário 6-53 N-(3-cloro-2-etilfenil)-4-{[(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4- il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00301] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(3-cloro-2-etilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-29, 210 mg, 676 μmol) e 1-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina (intermediário 2-8, 185 mg, 90 % de pureza, 743 μmol) como os materiais de partida; 320,0 mg do composto título foram preparados (86 % de rendimento) usando cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 1-15 %). [ppm] = 1,036 (8,39), 1,040 (4,03), (8,71), 1,078 (3,84), 2,066 (0,41), (0,95), 2,596 (2,98), 2,614 (2,87), (3,38), 2,790 (1,92), 3,152 (1,31), (2,23), 3,185 (1,26), 3,403 (1,67), (4,19), 3,427 (2,48), 3,430 (2,54), (4,76), 3,457 (2,12), 3,470 (1,96), (0,85), 3,526 (1,70), 3,589 (1,03), (1,85), 3,651 (3,24), 3,679 (1,31), (2,03), 3,847 (1,59), 3,853 (1,84), (0,84), 3,905 (1,04), 3,912 (0,89), (0,59), 3,936 (0,44), 4,116 (0,64), (5,01), 4,167 (2,53), 4,180 (0,60), (5,10), 4,369 (2,52), 4,647 (3,70), (4,85), 7,222 (8,23), 7,231 (0,55), 7,293 (2,86), 7,307 (4,24), 7,319 (3,43), 7,331 (1,67), 7,706 (2,31), 8,234 (3,16), 8,246 (3,01), 8,383 (5,19), 13,642 (0,84), 13,657 (1,55), 13,672 (0,72), 14,639 (4,11). LC-MS (método 2): Tr = 1,17 min; MS (ESIpos): m/z = 517 [M+H]+ Intermediário 6-55 terc-butil (2R)-2-[({4-[({5-[(3-cloro-2-etilfenil)carbamotioil]-6-oxo-1,2,3,6- tetra-hidropiridin-4-il}amino)metil]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina-4- carboxilato
[00302] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(3-cloro-2-etilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-29, 300 mg, 965 μmol) e terc- butil (2 R )-2-({[4-(aminometil)piridin-3-il]óxi}metil)morfolina- 4-carboxilato (intermediário 2-10, 312 mg, 965 μmol) como os materiais de partida; 476,0 mg do composto título foram preparados (95 % de pureza, 76 % de rendimento) usando cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 1-10 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,036 (1,51), 1,055 (3,57), 1,073 (1,55), 1,393 (16,00), 2,518 (1,71), 2,523 (1,10), 2,590 (1,19), 2,609 (1,16), 2,751 (0,68), 2,769 (1,33), 2,785 (0,84), 3,165 (0,96), 3,171 (0,92), 3,431 (0,55), 3,438 (0,59), 3,729 (0,71), 3,749 (0,48), 3,756 (0,41), 3,835 (0,41), 4,210 (1,81), 4,222 (1,76), 4,646 (1,35), 4,662 (1,35), 5,758 (7,84), 7,202 (2,06), 7,214 (2,99), 7,296 (1,00), 7,304 (1,58), 7,316 (1,60), 7,328 (0,75), 7,703 (0,94), 8,236 (1,90), 8,248 (1,81), 8,398 (2,84), 13,671 (0,64), 14,632 (1,67). LC-MS (método 2): Tr = 1,32 min; MS (ESIpos): m/z = 616 [M+H]+ Intermediário 6-56 terc-butil (2S)-2-[({4-[({5-[(3-cloro-2-etilfenil)carbamotioil]-6-oxo-1,2,3,6- tetra-hidropiridin-4-il}amino)metil]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina-4-carbo- xilato
[00303] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(3-cloro-2-etilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-29, 300 mg, 965 μmol) e terc-butil(2S)-2-({[4-(aminometil)piridin-3-il]óxi}metil)morfolina- 4-carboxilato (intermediário 2-5, 312 mg, 965 μmol) como os materiais de partida; 479,0 mg do composto título foram preparados (95 % de pureza, 77 % de rendimento) após purificação por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 1-10 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 14,55 - 14,67 (m, 1 H), 13,60 - 13,72 (m, 1 H), 8,40 (s, 1 H), 8,24 (d, 1 H), 7,70 (br s, 1 H), 7,16 - 7,36 (m, 4 H), 5,70 - 5,80 (m, 1 H), 5,66 - 5,81 (m, 1 H), 4,59 - 4,73 (m, 2 H), 4,12 - 4,27 (m, 2 H), 3,80 - 3,99 (m, 2 H), 3,65 - 3,78 (m, 2 H), 3,37 - 3,50 (m, 1 H), 3,10 - 3,22 (m, 2 H), 2,70 - 2,99 (m, 4 H), 2,55 - 2,64 (m, 2 H), 1,30 - 1,46 (m, 9 H), 1,01 - 1,12 (m, 3H). LC-MS (método 2): Tr = 1,32 min; MS (ESIpos): m/z = 616 [M+H]+ Intermediário 6-57 N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-([{3-[(1S)-1-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4- il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00304] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo- 1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-1,300 mg, 959 μmol) e 1-{3-[(1 S)-1-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 2-11, 251 mg, 1,06 mmol) como os materiais de partida; 384 mg do composto título foram preparados (99 % de pureza, 74 % de rendimento) as mistura de diastereomers. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 0,064 (0,95), 1,239 (2,82), 3,772 (0,52), 3,794 (0,57), 4,651 (1,27), 4,665 (1,31), 4,682 (0,58), 7,090 (0,70), 7,110 (1,53), 7,131 (0,88), 7,287 (1,67), 7,289 (1,87), 7,300 (1,26), 7,305 (1,12), 7,309 (1,02), 7,314 (0,67), 7,726 (0,98), 7,791 (0,95), 7,794 (0,96), 7,811 (0,90), 7,815 (0,85), 8,198 (1,34), 8,211 (1,99), 8,223 (0,91), 8,416 (1,88), 8,432 (1,35), 13,666 (0,43), 13,675 (0,50), 14,790 (1,61). LC-MS (método 6): Tr = 0,96 min e Tr = 0,98 min; MS (ESIpos): m/z = 533,2 [M+H]+ Intermediário 6-60 N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-{[(3-{(1R)-1-[1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4- il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00305] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo- 1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-1,300 mg, 959 μmol) e 1-{3-[(1 R)-1-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4-il}metanamina (intermediário 2-12, 251 mg, 1,06 mmol) como os materiais de partida; 346 mg (99 % de pureza, 67 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO- de): δ [ppm] = 1,278 (5,25), 1,294 (5,21), 2,073 (0,98), 2,331 (0,40), 2,518 (2,02), 2,522 (1,36), 2,673 (0,42), 2,749 (0,74), 2,765 (0,56), 2,775 (0,83), 2,792 (0,42), 3,140 (0,62), 3,147 (0,73), 3,156 (1,17), 3,164 (1,16), 3,417 (0,81), 3,441 (1,16), 3,445 (1,15), 3,469 (1,68), 3,475 (0,85), 3,503 (0,74), 3,570 (0,47), 3,576 (0,55), 3,598 (0,72), 3,604 (0,82), 3,631 (1,87), 3,638 (0,97), 3,646 (0,63), 3,652 (0,78), 3,657 (1,02), 3,663 (0,93), 3,670 (0,52), 3,677 (0,47), 3,710 (16,00), 3,758 (0,87), 3,767 (0,74), 3,790 (0,67), 3,920 (0,78), 3,926 (0,76), 3,949 (0,72), 3,955 (0,66), 4,646 (1,57), 4,653 (1,48), 4,662 (1,63), 4,682 (0,73), 7,092 (1,08), 7,112 (2,33), 7,133 (1,33), 7,287 (1,60), 7,290 (1,60), 7,302 (1,73), 7,306 (1,61), 7,310 (1,69), 7,314 (1,68), 7,725 (1,16), 7,791 (1,23), 7,794 (1,22), 7,811 (1,17), 7,814 (1,08), 8,210 (2,42), 8,222 (2,24), 8,430 (3,36), 13,651 (0,41), 13,665 (0,79), 14,786 (2,12). LC-MS (método 6): Tr = 0,96 min; MS (ESIpos): m/z = 533 [M+H]+ Intermediário 6-62 N-(3-fluoro-2-metilfenil)-4-{[(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin- 4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00306] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(3-fluoro-2-metilfenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-38, 197 mg, 704 μmol) e 1 -(3-{[-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina (intermediário 2-3, 167 mg, 704 μmol) como materiais de partida; Foram preparados 170 mg do composto título (pureza de 93 %, rendimento de 45 %) após purificação por HPLC de fase reversa (básica). 7,306 (2,30), 7,679 (1,46), 8,227 (3,76), 8,239 (3,55), 8,383 (5,45), 13,662 (0,88), 14,516 (2,06). LC-MS (método 6): Tr = 0,62 min; MS (ESIpos): m/z = 500 [M+H]+ Intermediário 6-65 4-{[(3-{[1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)metil]amino}-N-(2-etil-3- fluorofenil)-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00307] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(2-etil-3-fluorofenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (300 mg, 1,02 mmol) e 1-(3-{[1,4- dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina (229 mg, 1,02 mmol) como materiais de partida; foram preparados 218 mg do composto título (pureza de 90 %, rendimento de 38 %) após evaporação do solvente, filtração e lavagem do sólido com ACN. 7,029 (2,23), 7,051 (3,97), 7,074 (2,84), 7,091 (3,92), 7,110 (5,33), 7,191 (2,31), 7,207 (2,86), 7,211 (3,55), 7,228 (3,42), 7,248 (1,35), 7,351 (1,30), 7,701 (4,14), 8,329 (0,48), 8,476 (0,42), 13,662 (1,51), 13,676 (2,76), 13,691 (1,37), 14,588 (6,37). LC-MS (método 6): Tr = 0,92 min; MS (ESIpos): m/z = 501 [M+H]+ Intermediário 6-68 4-{[(3-{[5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)metil]amino}- N-(2-etil-3-fluorofenil)-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioa- mida
[00308] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(2-etil-3-fluorofenil)-4-hidróxi-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (300 mg, 1,02 mmol) e 1-(3-{[5,5- dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina (257 mg, 1,02 mmol) como materiais de partida; 360 mg do composto título foram preparados (93 % de pureza, 62 % de rendimento) após purificação por cromatografia de coluna. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,014 (0,69), 1,044 (16,00), 1,061 (7,08), 1,080 (3,30), 1,172 (0,52), 1,200 (0,60), 1,251 (13,22), 1,987 (0,87), 2,745 (1,36), 2,761 (2,65), 2,779 (1,61), 3,164 (2,11), 3,170 (2,09), 3,295 (1,79), 3,532 (2,73), 3,560 (2,19), 3,615 (0,59), 3,624 (0,79), 3,644 (1,91), 3,653 (2,05), 3,664 (1,79), 3,688 (2,07), 3,718 (1,01), 3,778 (0,45), 3,789 (0,91), 3,801 (1,07), 3,812 (0,86), 3,824 (0,63), 4,145 (0,65), 4,156 (0,71), 4,172 (1,96), 4,182 (1,95), 4,191 (2,02), 4,205 (1,76), 4,218 (0,69), 4,231 (0,59), 4,644 (3,11), 4,658 (3,10), 7,029 (0,86), 7,050 (1,63), 7,074 (1,12), 7,091 (1,71), 7,111 (2,37), 7,189 (0,89), 7,208 (1,52), 7,225 (1,39), 7,245 (0,52), 7,295 (2,40), 7,306 (2,41), 7,700 (1,92), 8,235 (3,11), 8,247 (2,98), 8,389 (5,24), 13,661 (0,71), 13,675 (1,32), 13,688 (0,68), 14,587 (3,04). LC-MS (método 6): Tr = 1,03 min; MS (ESIpos): m/z = 529 [M+H]+ Intermediário 6-71 N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-({[3-({1-[4-metilmorfolin-2-il]etil}óxi)piridin-4- il]metil}amino)-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida
[00309] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 6-41 com N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-hidróxi-2-oxo- 1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 5-1,300 mg, 959 μmol) e 1-[3-({1-[4-metilmorfolin-2-il]etil}óxi)piridin-4-il]metanamina (intermediário 2-71, 265 mg, 1,06 mmol) como os materiais de partida; 360 mg do composto título foram preparados (93 % de pureza, 62 % de rendimento) após purificação por cromatografia de coluna. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,014 (0,69), 1,044 (16,00), 1,061 (7,08), 1,080 (3,30), 1,172 (0,52), 1,200 (0,60), 1,251 (13,22), 1,987 (0,87), 2,745 (1,36), 2,761 (2,65), 2,779 (1,61), 3,164 (2,11), 3,170 (2,09), 3,295 (1,79), 3,532 (2,73), 3,560 (2,19), 3,615 (0,59), 3,624 (0,79), 3,644 (1,91), 3,653 (2,05), 3,664 (1,79), 3,688 (2,07), 3,718 (1,01), 3,778 (0,45), 3,789 (0,91), 3,801 (1,07), 3,812 (0,86), 3,824 (0,63), 4,145 (0,65), 4,156 (0,71), 4,172 (1,96), 4,182 (1,95), 4,191 (2,02), 4,205 (1,76), 4,218 (0,69), 4,231 (0,59), 4,644 (3,11), 4,658 (3,10), 7,029 (0,86), 7,050 (1,63), 7,074 (1,12), 7,091 (1,71), 7,111 (2,37), 7,189 (0,89), 7,208 (1,52), 7,225 (1,39), 7,245 (0,52), 7,295 (2,40), 7,306 (2,41), 7,700 (1,92), 8,235 (3,11), 8,247 (2,98), 8,389 (5,24), 13,661 (0,71), 13,675 (1,32), 13,688 (0,68), 14,587 (3,04). LC-MS (método 6): Tr = 1,03 min; MS (ESIpos): m/z = 529 [M+H]+ Intermediário 12 3-((3-fluoro-2-metoxifenil)amino)-2-(3-hidroxipiridin-4-il)-6,7-di-hidro- 1H-pirrolo[3,2-c]piridin-4(5H)-ona
[00310] A uma suspensão de N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-(((3-hidro- xipiridin-4-il)metil)amino)-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioa- mida (intermediário 6-12, 41 g, 101,88 mmol) em MeOH (410 mL) foi adicionado TFA (0,75 mL, 10,13 mmol), seguido por peróxido de hidrogênio (18 mL, 30 % em água). A mistura foi aquecida a 60 °C e agitada durante 16 h. TFA adicional (6,8 mL, 91,84 mmol) e peróxido de hidrogênio (1,5 mL, 30 % em água) foram adicionados. A suspensão foi agitada a 60 °C durante mais 3 h. A mistura foi resfriada em temperatura ambiente e em repouso durante a noite. A suspensão foi combinada com uma segunda batelada gerada de forma idêntica. A suspensão combinada foi filtrada, e a massa foi lavada com água (250 mL) e MeOH (150 mL) e, em seguida, suspensa em MeOH (150 mL). A suspensão foi filtrada. A massa foi lavada com MeOH (75 mL) e secada em vácuo para se obter o composto título (25,4 g, 33,8 % de rendimento) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ = 11,45 (s, 1 H), 8,18 (s, 1 H), 7,98 (d, 1 H), 7,39 (d, 1 H), 7,18 (s, 1 H), 6,67 (t, 1 H), 6,54 (t, 1 H), 6,04 (d, 1 H), 3,92 (s, 3 H), 3,40 (t, 2 H), 2,90 (t, 2H). LC-MS (método 5): Tr = 1,851 min; m/z = 369,0 (M +H)+ Intermediário 22-1 terc-butil (2S)-2-[({4-[3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-4-oxo-4,5,6,7-tetra- hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina-4-carbo- xilato
[00311] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com terc-butil (2S)-2-[({4-[({5-[(3-fluoro-2-metoxifenil)carbamotioil]-6-oxo- 1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il}amino)metil]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina- 4-carboxilato (intermediário 6-22, 1,43 g, 2,38 mmol) como o material de partida; 572 mg (80 % de pureza, 34 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 0-10 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,035 (0,86), 1,053 (1,99), 1,071 (0,88), 1,380 (0,83), 1,401 (6,79), 1,409 (16,00), 2,518 (1,63), 2,523 (1,18), 2,842 (0,65), 2,859 (1,16), 2,877 (0,76), 3,178 (0,95), 3,301 (0,60), 3,398 (0,50), 3,404 (0,61), 3,415 (0,94), 3,418 (0,82), 3,422 (1,10), 3,435 (0,77), 3,440 (0,72), 3,452 (0,50), 3,553 (0,42), 3,560 (0,43), 3,750 (0,64), 3,760 (0,40), 3,851 (0,50), 3,858 (0,40), 3,873 (0,46), 3,906 (6,63), 3,936 (0,57), 3,939 (0,59), 3,950 (0,46), 7,509 (0,98), 8,025 (1,38), 8,038 (1,27), 8,401 (2,10), 11,020 (0,61). LC-MS (método 2): Tr = 1,12 min; MS (ESIpos): m/z = 568 [M+H]+ Intermediário 22-2 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00312] Terc-butil (2S)-2-[({4-[3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-4-oxo- 4,5,6,7-tetra-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]piridin-3-il}óxi)metil] morfolina-4-carboxilato (intermediário 22-1,572 mg, 1,01 mmol) foi solubilizado em diclorometano (7,2 mL) e foi adicionado TFA (780 μl, 10 mmol). A mistura foi agitada durante 2h em TA. A mistura foi evaporada e purificada por cromatografia flash (sílica de fase amino, gradiente de DCM/EtOH 0-20 %) para produzir 352 mg (pureza de 95 %, rendimento de 71 %) do composto título. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,53 - 2,78 (m, 4 H), 2,80 - 2,90 (m, 3 H), 3,38 - 3,47 (m, 3 H), 3,55 - 3,66 (m, 1 H), 3,83 - 3,90 (m, 1 H), 3,91 - 3,95 (s, 3 H), 4,07 - 4,16 (m, 1 H), 4,29 - 4,39 (m, 1 H), 6,01 (d, 1 H), 6,44 - 6,56 (m, 1 H), 6,65 (dt, 1 H), 7,17 (s, 1 H), 7,29 (d, 1 H), 7,53 (s, 1 H), 8,01 (d, 1 H), 8,39 (s, 1 H), 11,10 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,84 min; MS (ESIpos): m/z = 468 [M+H]+ Intermediário 27-1 terc-butil (2S)-2-[({4-[3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-4-oxo-4,5,6,7- tetra-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina-4- carboxilato
[00313] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com terc-butil (2S)-2-[({4-[({5-[(3-cloro-5-fluoro-2-metoxifenil)carbamotioil]-6- oxo-1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il}amino)metil]piridin-3-il}óxi)metil] morfolina-4-carboxilato (intermediário 6-27, 150 mg, 236 μmol) como o material de partida, 73,5 mg (90 % de pureza, 47 % de rendimento) do composto título foram preparados. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,40 (s, 9 H), 2,52 - 2,53 (m, 2 H), 2,70 - 3,03 (m, 1 H), 2,87 (br t, 2 H), 3,42 (td, 2 H), 3,46 - 3,61 (m, 1 H), 3,71 - 3,79 (m, 1 H), 3,82 (s, 4 H), 3,93 (br d, 1 H), 4,20 (m, 1 H), 4,27 - 4,33 (dd, 1 H), 5,85 (dd, 1 H), 6,55 (dd, 1 H), 7,11 (s, 1 H), 7,32 (d, 1 H), 7,60 (s, 1 H), 8,10 (d, 1 H), 8,44 (s, 1 H), 11,17 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,19 min; MS (ESIpos): m/z = 602 [M+H]+ Intermediário 27-2 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-morfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00314] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 22-2 com terc-butil (2S)-2-[({4-[3-(3-cloro-5-fluoro-2- metoxianilino)-4-oxo-4,5,6,7-tetra-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]piridin- 3-il}óxi) metil]morfolina-4-carboxilato (intermediário 27-1,73,0 mg, 121 μmol) como o material de partida; 56,3 mg (95 % de pureza, 88 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por cromatografia flash (sílica de fase amino, gradiente de DCM/EtOH 015 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,51 - 2,58 (m, 2 H), 2,61 - 2,75 (m, 2 H), 2,77 - 2,94 (m, 3 H), 3,38 - 3,48 (m, 1 H), 3,56 (td, 1 H), 3,76 - 3,92 (m, 2 H), 3,84 (s, 3 H), 4,10 (dd, 1 H), 4,29 (dd, 1 H), 5,85 (dd, 1 H), 6,57 (dd, 1 H), 7,13 (s, 1 H), 7,32 (d, 1 H), 7,64 (d, 1 H), 8,09 (d, 1 H), 8,43 (s, 1 H), 11,22 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,93 min; MS (ESIpos): m/z = 502 [M+H]+. Intermediário 41-1 terc-butil (2S)-2-{[(4-{3-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluoroanilino]-4-oxo-4,5,6, 7-tetra-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il}piridin-3-il)óxi]metil}morfolina- 4-carboxilato
[00315] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com terc-butil (2S)-2-{[(4-{[(5-{[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluorofenil]carbamotioil}- 6-oxo-1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il)amino]metil}piridin-3- il)óxi]metil}morfolina-4-carboxilato (intermediário 6-41, 266 mg, 418 μmol) como o material de partida; 33,0 mg (65 % de pureza, 9 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 30 % de B, 0,50-6,00 min 30-70 % de B). LC-MS (método 2): Tr = 1,16 min; MS (ESIneg): m/z = 600 [M-H]- Intermediário 41-2 3-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluoroanilino]-2-(3-{[(2S)-morfolin-2-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00316] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 22-2 com terc-butil (2S)-2-{[(4-{3-[2-(2,2-difluoroetil)-3- fluoroanilino]-4-oxo-4,5,6,7-tetra-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2- il}piridin-3-il)óxi] metil}morfolina-4-carboxilato (intermediário 41-1,33,0 mg, 54,9 μmol) como o material de partida; 22,0 mg (65 % de pureza, 52 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por cromatografia flash (sílica de fase amino, gradiente de DCM/EtOH 010 %). LC-MS (método 2): Tr = 0,92 min; MS (ESIneg): m/z = 500 [M-H]- Intermediário 42-1 terc-butil (2S)-2-[({4-[3-(3-cloro-2-metilanilino)-4-oxo-4,5,6,7-tetra-hidro -1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina-4-carboxilato
[00317] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com terc-butil (2S)-2-[({4-[({5-[(3-cloro-2-metilfenil)carbamotioil]-6-oxo- 1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il}amino)metil]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina- 4-carboxilato (intermediário 6-42, 207 mg, 344 μmol) como o material de partida; 27,8 mg (90 % de pureza, 13 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 9, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-4,65 min 15-44,9 % de B, 4,65 - 5,94 min 44,9 % de B, 5,94 - 7,29 min 44,9 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,414 (16,00), 2,349 (5,99), 2,520 (0,82), 2,525 (0,50), 2,853 (0,68), 2,870 (1,29), 2,887 (0,75), 3,405 (0,49), 3,410 (0,53), 3,422 (0,95), 3,428 (0,93), 3,439 (0,48), 3,445 (0,43), 3,554 (0,43), 3,560 (0,45), 4,294 (0,43), 4,304 (0,45), 6,191 (0,69), 6,195 (0,66), 6,211 (0,71), 6,214 (0,69), 6,719 (0,48), 6,735 (1,31), 6,738 (1,11), 6,747 (0,85), 6,767 (0,82), 7,175 (0,83), 7,232 (0,92), 7,245 (0,92), 7,351 (0,48), 7,998 (1,24), 8,010 (1,16), 8,378 (1,84), 11,016 (0,78). LC-MS (método 6): Tr = 0,92 min; MS (ESIpos): m/z = 568 [M+H]+ Intermediário 42-2 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00318] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 22-2 com terc-butil (2S)-2-[({4-[3-(3-cloro-2-metilanilino)- 4-oxo-4,5,6,7-tetra-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]piridin-3-il}óxi)metil] morfolina-4-carboxilato (intermediário 42-1,30,0 mg, 52,8 μmol) como o material de partida, 19,0 mg (92 % de pureza, 71 % de rendimento) do composto título foram preparados após filtração através de uma coluna SCX-2 (lavagem com MeOH seguida por eluição com amônia 1 M em MeOH). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,235 (1,09), 2,334 (1,58), 2,338 (0,84), 2,362 (16,00), 2,520 (7,24), 2,525 (4,55), 2,545 (1,21), 2,570 (1,33), 2,575 (1,40), 2,601 (1,20), 2,676 (1,83), 2,680 (1,06), 2,705 (1,02), 2,713 (0,99), 2,732 (1,01), 2,740 (0,93), 2,758 (1,50), 2,787 (0,62), 2,846 (1,74), 2,863 (4,52), 2,880 (2,07), 2,894 (1,12), 3,300 (4,30), 3,410 (1,44), 3,416 (1,55), 3,427 (2,54), 3,433 (2,52), 3,445 (1,29), 3,585 (0,65), 3,593 (0,77), 3,612 (1,20), 3,620 (1,22), 3,640 (0,69), 3,646 (0,62), 3,851 (0,59), 3,868 (0,92), 3,875 (0,91), 3,902 (1,40), 3,930 (1,00), 4,073 (1,20), 4,090 (1,18), 4,098 (1,63), 4,116 (1,39), 4,274 (1,41), 4,282 (1,45), 4,299 (1,18), 4,307 (1,08), 5,528 (0,41), 6,196 (1,85), 6,200 (1,81), 6,215 (2,00), 6,219 (1,86), 6,726 (1,04), 6,730 (1,33), 6,746 (3,44), 6,750 (2,92), 6,761 (2,53), 6,780 (2,58), 6,800 (0,88), 7,192 (2,31), 7,231 (3,82), 7,244 (3,92), 7,364 (4,42), 7,980 (4,81), 7,993 (4,51), 8,370 (6,73), 8,397 (0,45), 11,102 (2,40). LC-MS (método 6): Tr = 0,52 min; MS (ESIpos): m/z = 468 [M+H]+ Intermediário 43-1 terc-butil (3R)-3-[({4-[3-(3-cloro-2-metilanilino)-4-oxo-4,5,6,7-tetra-hidro -1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina-4-carboxilato
[00319] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com terc-butil (3R)-3-[({4-[({5-[(3-cloro-2-metilfenil)carbamotioil]-6-oxo- 1,2,3,6-tetra-hidropiridin-4-il}amino)metil]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina- 4-carboxilato (180 mg, 299 μmol) como o material de partida; 35,1 mg (90 % de pureza, 19 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 9, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-4,23 min 15-41,9 % de B, 4,23 - 5,60 min 41,9 % de B, 5,60 - 7,37 min 41,9 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,344 (16,00), 2,357 (14,22), 7,351 (4,78), 7,971 (1,97), 7,983 (1,88), 8,445 (5,01), 11,063 (1,60). LC-MS (método 6): Tr = 0,92 min; MS (ESIpos): m/z = 568 [M+H]+ Intermediário 43-2 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(3R)-morfolin-3-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00320] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 22-2 com terc-butil (3R)-3-[({4-[3-(3-cloro-2-metilanilino)- 4-oxo-4,5,6,7-tetra-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]piridin-3- il}óxi)metil]morfolina-4-carboxilato (intermediário 43-1,30,0 mg, 52,8 μmol) como o material de partida 25,3 mg (97 % de pureza, 99 % de rendimento) do composto título foram preparados após filtração através de uma coluna SCX-2 (lavagem com MeOH seguida por eluição com amônia 1 M em MeOH). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,235 (0,47), 2,334 (1,10), 2,338 (0,53), 2,367 (16,00), 2,383 (0,45), 2,520 (5,15), 2,525 (3,36), 2,676 (1,09), 2,680 (0,50), 2,825 (1,81), 2,842 (3,79), 2,860 (2,41), 2,888 (0,56), 2,945 (0,90), 2,976 (0,54), 3,155 (0,67), 3,371 (1,08), 3,398 (1,36), 3,416 (2,04), 3,426 (3,16), 3,433 (2,75), 3,444 (2,06), 3,450 (1,95), 3,471 (0,57), 3,720 (1,01), 3,747 (0,86), 3,794 (1,03), 3,816 (0,90), 4,192 (0,59), 4,208 (0,66), 4,218 (1,25), 4,232 (1,21), 4,252 (1,38), 4,261 (1,46), 4,277 (0,69), 4,286 (0,59), 6,222 (1,82), 6,225 (1,83), 6,241 (1,98), 6,245 (1,89), 6,731 (1,15), 6,735 (1,43), 6,751 (3,26), 6,754 (2,74), 6,769 (2,24), 6,790 (2,51), 6,809 (0,87), 7,172 (2,36), 7,217 (2,75), 7,230 (2,77), 7,391 (4,55), 7,941 (1,75), 7,953 (1,66), 8,359 (2,93), 12,612 (0,40). LC-MS (método 6): Tr = 0,53 min; MS (ESIpos): m/z = 468 [M+H]+ Intermediário 55-1 terc-butil (2R)-2-[({4-[3-(3-cloro-2-etilanilino)-4-oxo-4,5,6,7-tetra-hidro- 1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina-4-carboxilato
[00321] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com terc-butil (2R)-2-[({4-[({5-[(3-cloro-2-etilfenil)carbamotioil]-6-oxo-1,2,3,6- tetra-hidropiridin-4-il}amino)metil]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina-4- carboxilato (intermediário 6-55, 473 mg, 768 μmol) como o material de partida; 57,0 mg (95 % de pureza, 12 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 10 % de B, 0,50-11,05 min 10- 34,4 % de B, 11,05 - 12,46 min 34,4 % de B, 12,46 - 24,12 min 34,4 - 60 % de B) seguido por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 0-12 %). LC-MS (método 2): Tr = 1,26 min; MS (ESIpos): m/z = 582 [M+H]+ Intermediário 55-2 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2R)-morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00322] Usando um método análogo ao descrito para o intermediário 22-2 com terc-butil (2R)-2-[({4-[3-(3-cloro-2-etilanilino)-4- oxo-4,5,6,7-tetra-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]piridin-3- il}óxi)metil]morfolina-4-carboxilato (intermediário 55-1,70,4 mg, 121 μmol) como o material de partida; 58,0 mg (95 % de pureza, 95 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH + trietilamina 1-40 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 10,96 - 11,17 (m, 1 H), 8,36 (s, 1 H), 7,69 - 8,02 (m, 1 H), 7,37 - 7,51 (m, 1 H), 7,19 (s, 2 H), 6,65 - 6,86 (m, 2 H), 6,15 - 6,24 (m, 1 H), 6,12 - 6,31 (m, 1 H), 4,26 - 4,36 (m, 1 H), 4,06 - 4,14 (m, 1 H), 3,85 - 3,96 (m, 2 H), 3,58 - 3,67 (m, 1 H), 3,40 - 3,46 (m, 2 H), 3,35 - 3,39 (m, 1 H), 2,69 - 2,96 (m, 7 H), 2,56 - 2,64 (m, 1 H), 1,19 - 1,27 (m, 6H). LC-MS (método 2): Tr = 0,99 min; MS (ESIneg): m/z = 480 [M-H]- Intermediário 56-1 terc-butil (2S)-2-[({4-[3-(3-cloro-2-etilanilino)-4-oxo-4,5,6,7-tetra-hidro- 1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina-4-carboxilato
[00323] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com terc-butil (2S)-2-[({4-[({5-[(3-cloro-2-etilfenil)carbamotioil]-6-oxo-1,2,3,6- tetra-hidropiridin-4-il}amino)metil]piridin-3-il}óxi)metil]morfolina-4- carboxilato (intermediário 6-56, 476 mg, 772 μmol) como o material de partida; 68,0 mg (95 % de pureza, 14 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 20 % de B, 0,50-12,99 min 20-40 % de B, 12,99 - 15,46 min 40 % de B, 15,46 - 24,12 min 40 - 55 % de B) seguido por cromatografia flash (sílica, gradiente de DCM/EtOH 012 %). LC-MS (método 2): Tr = 1,26 min; MS (ESIpos): m/z = 582 [M+H]+ Intermediário 56-2 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2S)-morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00324] Usando um método intermediário 22-2 com terc-butil (2S)-2-[({4-[3-(3-cloro-2-etilanilino)-4- oxo-4,5,6,7-tetra-hidro-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-2-il]piridin-3-il}óxi)metil] morfolina-4-carboxilato (intermediário 56-1,70,4 mg, 121 μmol) como o material de partida; 46,9 mg (95 % de pureza, 78 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por cromatografia flash (sílica de fase amino, gradiente de DCM/EtOH 1-35 %). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 11,09 (s, 1 H), 8,36 (s, 1 H), 7,96 (d, 1 H), 7,46 (s, 1 H), 7,19 (d, 2 H), 6,68 - 6,84 (m, 2 H), 6,23 (dd, 1 H), 4,24 - 4,34 (m, 1 H), 4,03 - 4,16 (m, 1 H), 3,82 - 3,96 (m, 2 H), 3,57 - 3,65 (m, 1 H), 3,39 - 3,48 (m, 2 H), 2,82 - 2,94 (m, 5 H), 2,64 - 2,79 (m, 2 H), 2,54 - 2,60 (m, 1 H), 1,23 (t, 3H). LC-MS (método 2): Tr = 0,99 min; MS (ESIneg): m/z = 480 [M-H]- Exemplos Exemplo 1 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00325] A uma suspensão de N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-[({3-[(1,4- dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiri- dina-3-carbotioamida (intermediário 6-1,140 mg, 240 μmol) em MeOH (2,7 mL) foi adicionado TFA (42 μl, 540 μmol) seguido por peróxido de hidrogênio aquoso (94 μl, pureza de 35 %, 1,08 mmol), e a mistura foi aquecida a 50 °C durante 17 h. A mistura de reação foi deixada resfriar até a temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-6,00 min 15-55 % de B) para produzir 70 mg do composto título (51 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,86 (t, 2 H), 3,37 - 3,57 (m, 4 H), 3,70 - 3,90 (m, 4 H), 3,88 (s, 3 H), 3,92 - 4,08 (m, 1 H), 4,10 - 4,20 (m, 1 H), 4,28 (dd, 1 H), 6,15 (t, 1 H), 6,68 (d, 2 H), 7,16 (br s, 1 H), 7,28 (d, 1 H), 7,52 (s, 1 H), 8,04 (d, 1 H), 8,39 (s, 1 H), 11,07 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,98 min; MS (ESIpos): m/z = 485 [M+H]+ Exemplo 2 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (Estereoisômero 1)
[00326] O composto título do exemplo 1 (140 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 27 mg em Ta = 14,0 - 17,0 min) e enantiômero 2 (25 mg em Ta = 20,0 - 24,8 min, veja o exemplo 3). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: Labomatic HD5000, Labocord-5000; Gilson GX-241, Labcol Vario 4000; coluna: Celulose SB 5μ, 250x30 mm; eluente A: hexano + 0,1 % em vol. de dietilamina (99 %); eluente B: 2-propanol; isocrático: 50 % de A + 50 % de B; vazão 50 mL/min; UV: 254 nm. Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Agilent HPLC 1260; coluna: Celulose SB 3μ, 100x4,6 mm; eluente A: hexano + 0,1 % em vol. de dietilamina (99 %); eluente B: 2-propanol; isocrático: 50 % de A + 50 % de B, vazão 1,4 mL/min; temperatura: 25 °C; UV: 254 nm HPLC quiral analítica: Tr = 4,49 min. Rotação ótica: [α]D = 1,7 ° +/- 0,98 ° (c = 3,6 mg/2 mL, metanol)
[00327] A síntese enantiosseletiva confirmou o composto título como 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona. 872 mg (pureza de 95 %, 72 % de rendimento) do composto título foram preparados em analogia ao exemplo 1 usando N-(3-cloro-2- metoxifenil)-4-{[(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)metil]amino}- 2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-2, 1,23 g, 2,36 mmol) como material de partida, seguido de purificação com HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-6,00 min 15-55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,86 (t, 2 H), 3,38 - 3,47 (m, 3 H), 3,53 (td, 1 H), 3,69 - 3,78 (m, 2 H), 3,83 (dd, 1 H), 3,88 (s, 3 H), 3,90 (m, 1 H), 3,98 - 4,08 (m, 1 H), 4,12 - 4,18 (m, 1 H), 4,28 (dd, 1 H), 6,12 - 6,17 (quin, 1 H), 6,66 - 6,71 (m, 2 H), 7,16 (s, 1 H), 7,28 (d, 1 H), 7,52 (s, 1 H), 8,04 (d, 1 H), 8,39 (s, 1 H), 11,07 (s, 1H). HPLC quiral analítica: Tr = 4,46 min. Rotação ótica: [α]D = -12,5° +/- 0,52° (c = 5,6 mg/mL, clorofórmio) Exemplo 3 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (Estereoisômero 2)
[00328] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 1. A separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 2 para o método) produziu 25 mg do composto título (em Tr = 20,0 - 24,8 min).HPLC quiral analítica (veja o exemplo 2 para o método): Tr = 6,56 min. Rotação ótica: [α]D = -3,0° +/- 1,03° (c = 3,2 mg/2 mL, metanol) Rotação ótica: [α]D = 22,8° +/- 6,1° (c = 6,3 mg/mL, clorofórmio) Exemplo 4 2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-3-(3-fluoro-2-metoxianilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00329] Em analogia ao exemplo 1, 4-[({3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi] piridin-4-il}metil)amino]-N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-2-oxo-1,2,5,6-tetra- hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-4, 120 mg, 239 μmol) foi usado para preparar 25,7 mg do composto título (21 % de rendimento) após aquecimento durante 25 horas e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-6,00 min 15-55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,86 (t, 2 H), 3,37 - 3,57 (m, 4 H), 3,66 - 3,89 (m, 4 H), 3,91 (s, 3 H), 3,98 - 4,09 (m, 1 H), 4,09 - 4,20 (m, 1 H), 4,28 (dd, 1 H), 6,00 (d, 1 H), 6,45 - 6,54 (m, 1 H), 6,64 (m, 1 H), 7,16 (br s, 1 H), 7,29 (d, 1 H), 7,53 (s, 1 H), 8,04 (d, 1 H), 8,39 (s, 1 H), 11,05 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,92 min; MS (ESIpos): m/z = 469 [M+H]+ Exemplo 5 2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-3-(3-fluoro-2-metoxianilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00330] O composto título do exemplo 4 (26 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 11 mg, em Tr = 8,2 - 9,1 min, rendimento de 10 %) e enantiômero 2 (12 mg, em Tr = 9,7 - 10,7 min, veja o exemplo 6). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: Labomatic HD5000, Labocord-5000; Gilson GX-241, Labcol Vario 4000; coluna: Celulose SB 5μ, 250x30 mm; eluente A: MTBE + 0,1 % em vol. de dietilamina (99 %); eluente B: acetonitrila; gradiente: 2-60 % de B em 20 min; vazão 50 mL/min; UV: 280 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Agilent HPLC 1260; coluna: Celulose SB 3μ, 100x4,6 mm; eluente A: MTBE + 0,1 % em vol. de dietilamina (99 %); eluente B: acetonitrila; gradiente: 2-60 % de B em 7 min, vazão 1,4 mL/min; temperatura: 25 °C; UV: 280 nm HPLC quiral analítica: Tr = 4,34 min. Rotação ótica: [α]D = -0,5° +/- 0,87° (c = 7,5 mg/2 mL, metanol) Exemplo 6 2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-3-(3-fluoro-2-metoxianilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 2)
[00331] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 4. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 5 para o método) para produzir 12 mg do composto título (em Tr = 9,7 - 10,7 min, 11 % de rendimento). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 5 para o método): Tr = 5,11 min. Rotação ótica: [α]D = -0,1° +/- 0,89° (c = 6,3 mg/3 mL, metanol) Exemplo 7 3-(2,3-dicloroanilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-1,5,6,7- tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00332] Em analogia ao exemplo 1, N-(2,3-diclorofenil)-4-[({3-[(1,4- dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra- hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-7, 110 mg, 210 μmol) foi usado para preparar 34,6 mg do composto título (32 % de rendimento) após aquecimento durante 25 horas e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-6,00 min 15-55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,86 (br t, 2 H), 3,35 - 3,45 (m, 3 H), 3,47 - 3,56 (m, 1 H), 3,65 - 3,75 (m, 2 H), 3,75 - 3,88 (m, 2 H), 3,93 - 4,04 (m, 1 H), 4,06 - 4,20 (m, 2 H), 6,27 (dd, 1 H), 6,83 - 6,91 (m, 2 H), 7,17 (br s, 1 H), 7,26 (d, 1 H), 7,66 (s, 1 H), 8,08 (d, 1 H), 8,38 (s, 1 H), 11,21 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,01 min; MS (ESIpos): m/z = 489 [M+H]+ Exemplo 8 3-(2,3-dicloroanilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-1,5,6,7- tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00333] O composto título do exemplo 7 (27 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 10 mg) e enantiômero 2 (12 mg, veja o exemplo 9). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: Labomatic HD5000, Labocord-5000; Gilson GX-241, Labcol Vario 4000; coluna: Celulose SB 5μ, 250x30 mm; eluente A: MTBE + 0,1 % em vol. de dietilamina (99 %); eluente B: acetonitrila; gradiente: 2-60 % de B em 20 min; vazão 50 mL/min; UV: 280 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Agilent HPLC 1260; coluna: Celulose SB 3μ, 100x4,6 mm; eluente A: MTBE + 0,1 % em vol. de dietilamina (99 %); eluente B: acetonitrila; gradiente: 2-60 % de B em 7 min, vazão 1,4 mL/min; temperatura: 25 °C; UV: 280 nm HPLC quiral analítica: Tr = 5,11 min. Rotação ótica: [α]D = 1,4° +/- 0,69° (c = 5,8 mg/2 mL, metanol) Exemplo 9 3-(2,3-Dicloroanilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-1,5,6,7- tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 2)
[00334] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 7. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (método veja o exemplo 8) para produzir 12 mg do composto título.HPLC quiral analítica (método veja o exemplo 8): Tr = 6,74 min. Rotação ótica: [α]D = -14,9° +/- 3,16° (c = 5,6 mg/mL, metanol) Exemplo 10 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00335] Em analogia ao exemplo 1, N-(3-cloro-2-metilfenil)-4-[({3- [(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hi- dropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-10, 180 mg, 358 μmol) foi usado para preparar 12,1 mg do composto título (7 % de rendimento) após aquecimento durante 25 horas e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-6,00 min 15-55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,35 (s, 3 H), 2,86 (br t, 2 H), 3,37 - 3,47 (m, 3 H), 3,55 (br dd, 1 H), 3,67 - 3,85 (m, 3 H), 3,89 (br d, 1 H), 4,01 (br dd, 1 H), 4,08 - 4,18 (m, 1 H), 4,24 (dd, 1 H), 6,20 (d, 1 H), 6,71 - 6,80 (m, 2 H), 7,19 (br s, 1 H), 7,24 (d, 1 H), 7,37 (s, 1 H), 8,01 (d, 1 H), 8,37 (s, 1 H), 11,05 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,02 min; MS (ESIpos): m/z = 469 [M+H]+ Exemplo 11 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin -4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00336] Em analogia ao exemplo 1, N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-{[(3- {[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin-4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6- tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-11, 82 mg, 139 μmol) foi usado para preparar 11 mg do composto título (15 % de rendimento) após aquecimento durante 17 horas e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-6,00 min 15-55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 11,51 - 12,57 (m, 1 H), 8,40 (br s, 1 H), 8,04 (br s, 1 H), 7,62 (br s, 1 H), 7,32 (d, 1 H), 7,19 (br s, 1 H), 6,71 (br d, 2 H), 6,15 (dd, 1 H), 4,40 (br s, 2 H), 3,90 (s, 4 H), 3,85 (br s, 1 H), 3,60 (br d, 3 H), 3,40 - 3,51 (m, 3 H), 3,01 (br s, 1 H), 2,74 - 2,96 (m, 3 H), 2,22 - 2,43 (m, 2H). LC-MS (método 6): Tr = 0,55 min; MS (ESIpos): m/z = 498,2 [M+H]+ Rotação ótica: [α]D = -82,0° +/- 0,41° (c = 5,8 mg/mL, metanol) Exemplo 12 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4- il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00337] 3-(3-Fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-hidroxipiridin-4-il)-1,5,6,7- tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (intermediário 12, 150 mg, 407 μmol) foi dissolvido em dioxano (4,8 mL). A mistura de reação foi desgaseificada com argônio. Em seguida, (tributilfosfanilideno) acetonitrila (384 μl, 1,5 mmol, CAS 157141-27-0) e (4-metilmorfolin-2- il)metanol (CAS 40987-46-0, 80,0 mg, 610 μmol) foram adicionados, e a mistura foi agitada a 50 °C durante 30 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e solução de bicarbonato de sódio foi adicionada. A mistura foi extraída com DCM. A fase orgânica foi filtrada sobre um filtro repelente de água, concentrada sob pressão reduzida e purificada por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 1 % de B, 0,50 - 27,40 min 1 - 50 % de B) para produzir 16,2 mg do composto título (8 % de rendimento). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 11,05 (s, 1 H), 8,40 (s, 1 H), 8,02 (d, 1 H), 7,52 (s, 1 H), 7,29 (d, 1 H), 7,16 (s, 1 H), 6,64 (td, 1 H), 6,50 (ddd, 1 H), 6,01 (d, 1 H), 4,34 (dd, 1 H), 4,15 (dd, 1 H), 3,88 - 4,00 (m, 5 H), 3,67 (td, 1 H), 3,37 - 3,47 (m, 2 H), 2,85 (t, 2 H), 2,77 (br d, 1 H), 2,66 - 2,70 (m, 1 H), 2,20 (s, 3 H), 2,04 (td, 1 H), 1,91 (t, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,92 min; MS (ESIpos): m/z = 482,3 [M+H]+ Exemplo 13 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4- il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00338] O composto título do exemplo 12 (19 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 6 mg, em Tr = 6,7 - 8,7 min, 3 % de rendimento) e enantiômero 2 (7 mg, em Tr = 8,9 - 11,9 min, veja o exemplo 14). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; coluna: Chiralcel OD-H 5μ, 250x20; eluente A: acetonitrila + 0,1 % em vol. de dietilamina (99 %); eluente B: etanol; isocrático: 93 % de A + 7 % de B; vazão 20 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Waters Alliance 2695; coluna: Chiralcel OD-H 5μ, 100x4,6; eluente A: etanol + 0,1 % em vol. de dietilamina (99 %); eluente B: etanol; isocrático: 90 % de A + 10 % de B, vazão 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm HPLC quiral analítica: Tr = 2,91 min. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 11,05 (s, 1 H), 8,40 (s, 1 H), 8,02 (d, 1 H), 7,53 (s, 1 H), 7,29 (d, 1 H), 7,16 (s, 1 H), 6,64 (td, 1 H), 6,50 (t, 1 H), 6,01 (d, 1 H), 4,34 (dd, 1 H), 4,15 (dd, 1 H), 3,89 - 3,99 (m, 5 H), 3,67 (td, 1 H), 3,38 - 3,46 (m, 2 H), 2,85 (t, 2 H), 2,77 (br d, 1 H), 2,61 - 2,71 (m, 1 H), 2,20 (s, 3 H), 1,98 - 2,16 (m, 1 H), 1,91 (t, 1H). Exemplo 14 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4- il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 2)
[00339] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 12. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 13 para o método) para produzir 7 mg do composto título (em Tr = 8,9 - 11,9 min, 3 % de rendimento). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 13 para o método): Tr = 3,70 min. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 11,05 (s, 1 H), 8,40 (s, 1 H), 8,02 (br d, 1 H), 7,53 (s, 1 H), 7,29 (d, 1 H), 7,16 (br s, 1 H), 6,59 - 6,70 (m, 1 H), 6,50 (br t, 1 H), 6,01 (br d, 1 H), 4,34 (br dd, 1 H), 4,15 (br dd, 1 H), 3,86 - 4,00 (m, 5 H), 3,60 - 3,74 (m, 1 H), 3,40 - 3,48 (m, 2 H), 2,85 (br t, 2 H), 2,77 (br d, 1 H), 2,63 - 2,70 (m, 1 H), 2,20 (s, 3 H), 1,99 - 2,09 (m, 1 H), 1,91 (br t, 1H). Exemplo 15 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00340] Em analogia ao exemplo 1, N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-[({3- [(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4-il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra- hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-15, 74,0 mg, 139 μmol) foi usado para preparar 24,1 mg (90 % de pureza, 31 % de rendimento) do composto título após aquecimento durante 18 horas e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-6,00 min 15-55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,86 - 1,95 (t, 1 H), 2,00 - 2,09 (td, 1 H), 2,20 (s, 3 H), 2,66 (br d, 1 H), 2,73 - 2,81 (br d, 1 H), 2,86 (t, 2 H), 3,42 (td, 2 H), 3,61 - 3,73 (td, 1 H), 3,88 (s, 3 H), 3,91 - 4,02 (m, 2 H), 4,16 (dd, 1 H), 4,33 (dd, 1 H), 6,15 (t, 1 H), 6,69 (d, 2 H), 7,16 (s, 1 H), 7,28 (d, 1 H), 7,53 (s, 1 H), 8,03 (d, 1 H), 8,40 (s, 1 H), 11,07 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,97 min; MS (ESIpos): m/z = 498 [M+H]+ Exemplo 16 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00341] O composto título do exemplo 15 (24,1 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 8 mg, em Tr = 17,4 - 21,8, 11 % de rendimento) e enantiômero 2 (7 mg, em Tr = 12,5 - 14,5 min, veja o exemplo 17). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: Chiralpak IF 5μ, 250x30; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol + 0,1 % em vol de dietilamina; isocrático: 50 % de A+50 % de B; vazão: 40 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: Chiralpak IF 3μ, 100x4,6; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol; isocrático: 50 % de A+50 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm HPLC quiral analítica: Tr = 4,55 min. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,232 (1,95), 1,259 (0,49), 1,888 (0,59), 1,914 (1,04), 1,941 (0,65), 2,016 (0,40), 2,037 (0,73), 2,045 (0,70), 2,065 (0,49), 2,206 (9,36), 2,327 (0,42), 2,518 (1,60), 2,523 (1,15), 2,540 (16,00), 2,646 (0,75), 2,670 (0,96), 2,673 (0,98), 2,758 (0,81), 2,787 (0,77), 2,841 (1,13), 2,858 (2,36), 2,876 (1,27), 3,405 (0,89), 3,410 (0,98), 3,422 (1,69), 3,428 (1,67), 3,439 (0,85), 3,445 (0,77), 3,638 (0,41), 3,644 (0,49), 3,666 (0,89), 3,672 (0,89), 3,694 (0,54), 3,700 (0,52), 3,883 (15,90), 3,933 (0,86), 3,952 (0,89), 3,960 (1,15), 3,976 (0,47), 3,983 (0,40), 4,137 (0,82), 4,154 (0,74), 4,163 (1,02), 4,179 (0,84), 4,315 (0,97), 4,324 (1,01), 4,341 (0,80), 4,349 (0,72), 6,139 (1,35), 6,151 (2,23), 6,163 (1,38), 6,681 (4,49), 6,692 (3,40), 6,694 (3,35), 7,163 (1,58), 7,274 (1,81), 7,287 (1,83), 7,533 (3,41), 8,021 (1,20), 8,034 (1,14), 8,402 (1,87), 11,066 (1,70). Exemplo 17 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 2)
[00342] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 15. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 16 para o método) para produzir 7 mg do composto título (em Tr = 12,5 - 14,5 min). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 16 para o método): Tr = 2,93 min. Exemplo 18 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[4-metilmorfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00343] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com N-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxifenil)-4-[({3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi] piridin-4-il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioami- da (intermediário 6-18, 166 mg, 302 μmol) como o material de partida; 13,0 mg (95 % de pureza, 8 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 6,00 min 15 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,88 (t, 1 H), 1,93 - 2,05 (dt, 1 H), 2,19 (s, 3 H), 2,60 - 2,66 (d, 1 H), 2,70 - 2,77 (d, 1 H), 2,86 (t, 2 H), 3,37 - 3,48 (m, 2 H), 3,56 - 3,68 (m, 1 H), 3,83 (s, 3 H), 3,90 (br d, 2 H), 4,15 (m, 1 H), 4,27 (dd, 1 H), 5,85 (dd, 1 H), 6,56 (dd, 1 H), 7,13 (s, 1 H), 7,33 (d, 1 H), 7,64 (s, 1 H), 8,10 (d, 1 H), 8,43 (s, 1 H), 11,18 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,00 min; MS (ESIpos): m/z = 516 [M+H]+ Exemplo 19 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00344] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com N-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxifenil)-4-[({3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin- 4-il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-19, 160 mg, 298 μmol) como o material de partida; 3,90 mg (90 % de pureza, 2 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 6,00 min 15 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,86 (t, 2 H), 3,37 - 3,45 (m, 3 H), 3,47 - 3,61 (m, 1 H), 3,62 - 3,77 (m, 3 H), 3,77 - 3,87 (m, 6 H), 3,94 - 4,01 (m, 1 H), 4,07 - 4,20 (m, 1 H), 4,24 (dd, 1 H), 5,85 (dd, 1 H), 6,56 (dd, 1 H), 7,13 (s, 1 H), 7,33 (d, 1 H), 7,60 - 7,66 (d, 1 H), 8,11 (br d, 1 H), 8,42 (s, 1 H), 11,19 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,01 min; MS (ESIpos): m/z = 503 [M+H]+ Exemplo 20 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piri- din-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00345] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com N-(3-fluoro-2-metoxifenil)-4-{[(3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi} piridin-4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida (intermediário 6-20, 102 mg, 197 μmol) como o material de partida; 27,9 mg (90 % de pureza, 26 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 10 % de B, 0,50 - 6,00 min 10 - 50 % de B). LC-MS (método 6): Tr = 0,51 min; MS (ESIpos): m/z = 482 [M+H]+ 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 2,274 (13,29), 2,304 (1,76), 2,318 (0,55), 2,404 (0,46), 2,426 (0,88), 2,434 (0,91), 2,449 (0,43), 2,454 (0,88), 2,458 (1,03), 2,463 (1,43), 2,468 (1,37), 2,473 (1,55), 2,518 (5,99), 2,523 (4,32), 2,775 (0,40), 2,798 (0,70), 2,815 (1,49), 2,822 (0,88), 2,832 (0,91), 2,841 (1,16), 2,858 (0,79), 2,908 (1,13), 2,938 (1,00), 3,294 (0,43), 3,406 (0,64), 3,423 (1,46), 3,429 (1,19), 3,438 (1,37), 3,453 (0,58), 3,459 (0,55), 3,546 (1,13), 3,573 (1,76), 3,589 (1,13), 3,594 (1,22), 3,600 (1,28), 3,618 (0,61), 3,816 (0,94), 3,840 (1,83), 3,847 (1,95), 3,868 (1,06), 3,875 (0,97), 3,938 (16,00), 3,951 (2,07), 4,374 (1,67), 4,386 (2,71), 4,414 (0,46), 6,011 (1,89), 6,031 (1,89), 6,514 (1,03), 6,518 (0,97), 6,535 (1,28), 6,539 (1,34), 6,541 (1,19), 6,545 (0,94), 6,562 (1,19), 6,565 (1,06), 6,655 (0,97), 6,670 (1,03), 6,675 (1,70), 6,691 (1,55), 6,696 (0,82), 6,711 (0,67), 7,176 (2,07), 7,310 (3,71), 7,323 (3,68), 7,514 (0,43), 7,527 (0,52), 7,533 (0,58), 7,601 (4,56), 7,977 (5,29), 7,990 (4,50), 8,067 (0,61), 8,080 (0,55), 8,358 (6,27), 8,439 (0,73), 12,011 (2,13). Exemplo 21 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piri- din-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00346] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-{[(3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin- 4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-21, 99,5 mg, 187 μmol) como o material de partida; 4,70 mg (98 % de pureza, 5 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 10 % de B, 0,50 - 6,00 min 10 - 50 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,232 (0,45), 2,276 (9,36), 2,426 (0,63), 2,434 (0,67), 2,456 (0,51), 2,464 (0,76), 2,472 (0,79), 2,518 (1,95), 2,523 (1,26), 2,539 (9,95), 2,806 (0,54), 2,823 (1,37), 2,841 (1,19), 2,860 (0,60), 2,910 (0,85), 2,940 (0,76), 3,408 (0,49), 3,425 (1,12), 3,431 (0,95), 3,441 (1,04), 3,454 (0,49), 3,460 (0,44), 3,544 (0,71), 3,572 (1,31), 3,588 (0,84), 3,594 (0,92), 3,599 (0,96), 3,617 (0,47), 3,817 (0,72), 3,841 (1,23), 3,847 (1,34), 3,868 (0,69), 3,875 (0,63), 3,912 (16,00), 3,924 (0,49), 4,376 (1,24), 4,387 (2,11), 6,151 (1,35), 6,162 (2,22), 6,175 (1,39), 6,718 (3,50), 6,720 (3,93), 6,731 (4,23), 7,179 (1,54), 7,299 (2,18), 7,312 (2,21), 7,614 (3,34), 7,983 (1,76), 7,995 (1,68), 8,362 (2,68), 12,027 (1,61). LC-MS (método 6): Tr = 0,54 min; MS (ESIpos): m/z = 498 [M+H]+ Exemplo 22 2-(3-{[(2S)-4-(2,2-difluoroetil)morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro- 2-metoxianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00347] 3-(3-Fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-morfolin-2-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (intermediário 22, 50,0 mg, 107 μmol) foi solubilizado em DMF (1,6 mL), trietilamina (89 μl, 640 μmol) e 2,2-difluoroetil trifluorometanossulfonato (64 μl, 480 μmol) foram adicionados, e a mistura foi agitada durante 1 h em temperatura ambiente. A mistura foi purificada por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 6,00 min 15 - 55 % de B) para produzir 11,3 mg (90 % de pureza, 18 % de rendimento) do composto alvo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,24 (t, 1 H), 2,34 - 2,40 (dd, 1 H), 2,78 (m, 1 H), 2,78 - 2,81 (m, 1 H), 2,83 (m, 1 H), 2,85 - 2,90 (t, 2 H), 2,90 - 2,97 (d, 1 H), 3,38 - 3,47 (m, 2 H), 3,68 (dt, 1 H), 3,89 - 3,92 (s, 3 H), 3,92 - 4,03 (m, 2 H), 4,17 (dd, 1 H), 4,29 (dd, 1 H), 5,97 - 6,02 (d, 1 H), 6,02 - 6,34 (tt, 1 H), 6,47 - 6,54 (m, 1 H), 6,64 (td, 1 H), 7,16 (s, 1 H), 7,29 (d, 1 H), 7,54 (s, 1 H), 8,02 (d, 1 H), 8,40 (s, 1 H), 11,03 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,04 min; MS (ESIpos): m/z = 532 [M+H]+ Exemplo 23 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-(2,2,2-trifluoroetil)morfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00348] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 22 com 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-morfolin-2-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (intermediário 22, 35,0 mg, 74,9 μmol) e 2,2,2-trifluoroetil trifluorometanossulfonato (CAS 6226-25-1,16 μl, 110 μmol) como os materiais de partida; 11,9 mg (95 % de pureza, 27 % de rendimento) do composto título foram preparados após HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 70 % de B). [ppm] = 1,231 (0,47), 1,264 (0,47), (0,93), 2,387 (1,69), 2,414 (1,15), (2,30), 2,673 (1,58), 2,805 (1,18), (1,79), 2,936 (1,26), 2,964 (1,11), (1,54), 3,230 (1,58), 3,247 (1,51), (0,54), 3,400 (1,26), 3,406 (1,33), (1,15), 3,440 (1,08), 3,654 (0,54), (1,18), 3,688 (1,15), 3,711 (0,68), (1,11), 3,983 (0,72), 3,999 (0,75), 8,391 (6,17), 11,018 (2,48). LC-MS (método 2): Tr = 1,09 min; MS (ESIpos): m/z = 550 [M+H]+ Exemplo 24 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[2-(4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00349] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-[({3-[2-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4-il}metil) amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-24, 105 mg, 197 μmol) como o material de partida; 43,5 mg (95 % de pureza, 42 % de rendimento) do composto título foram preparados após HPLC preparativa (método 7). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,817 (0,39), 1,834 (1,18), 1,849 (1,57), 1,861 (1,08), 1,876 (0,49), 2,518 (3,04), 2,522 (2,06), 2,673 (0,59), 2,833 (0,88), 2,846 (1,87), 2,863 (0,98), 3,204 (0,88), 3,231 (1,47), 3,260 (1,08), 3,312 (1,28), 3,396 (1,67), 3,408 (2,16), 3,413 (2,16), 3,426 (1,28), 3,456 (1,18), 3,462 (1,08), 3,484 (0,98), 3,490 (0,98), 3,521 (0,79), 3,525 (0,88), 3,549 (1,08), 3,554 (1,18), 3,582 (0,69), 3,625 (1,28), 3,648 (1,37), 3,668 (2,45), 3,678 (0,98), 3,693 (1,37), 3,716 (1,28), 3,745 (0,98), 3,858 (16,00), 4,226 (1,37), 4,241 (2,94), 4,257 (1,37), 6,103 (1,47), 6,115 (2,06), 6,127 (1,47), 6,640 (5,60), 6,650 (3,63), 7,108 (1,77), 7,287 (2,65), 7,299 (2,75), 7,458 (3,93), 8,020 (3,04), 8,033 (2,85), 8,350 (4,32), 11,191 (1,96). LC-MS (método 6): Tr = 0,68 min; MS (ESIpos): m/z = 499 [M+H]+ Exemplo 25 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[2-(4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4-il}-1,5,6, 7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00350] O composto título do exemplo 24 (40 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 18,0 mg, em Tr = 18,8 - 21,3 min, 96 % de pureza) e enantiômero 2 (17 mg, em Tr = 21,7 - 24,5 min, veja o exemplo 26). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: YMC Cellulose SB 5μ, 250x30; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: acetonitrila + 0,1 % em vol de dietilamina; gradiente: 0-20 min 2-60 % de B; vazão: 40 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: YMC Cellulose SB 3μ, 100x4,6; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: acetonitrila; gradiente: 0-7 min 2-60 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm HPLC quiral analítica: Tr = 4,94 min. Rotação ótica: [α]D = -1,6° +/- 1,63° (c = 2,8 mg/mL em metanol) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm] = 1,835 (1,01), 1,851 (1,31), 1,862 (0,93), 1,877 (0,41), 2,518 (1,52), 2,522 (0,99), 2,834 (0,77), 2,846 (1,61), 2,852 (1,47), 2,864 (0,82), 2,869 (0,80), 3,205 (0,76), 3,231 (1,30), 3,235 (1,27), 3,261 (0,85), 3,391 (0,83), 3,397 (0,91), 3,408 (1,57), 3,415 (1,62), 3,430 (0,98), 3,457 (0,99), 3,463 (1,01), 3,485 (0,84), 3,491 (0,79), 3,522 (0,72), 3,527 (0,76), 3,551 (0,96), 3,556 (1,07), 3,584 (0,57), 3,624 (1,00), 3,649 (1,11), 3,654 (1,11), 3,671 (1,96), 3,680 (0,81), 3,687 (0,53), 3,695 (1,23), 3,718 (1,09), 3,723 (1,01), 3,747 (0,79), 3,859 (16,00), 4,227 (1,22), 4,242 (2,58), 4,258 (1,21), 6,105 (1,40), 6,118 (1,81), 6,129 (1,46), 6,641 (5,45), 6,651 (3,33), 6,654 (3,12), 7,110 (1,60), 7,288 (2,35), 7,300 (2,36), 7,306 (0,49), 7,462 (3,57), 8,023 (2,38), 8,035 (2,27), 8,353 (3,43), 11,186 (1,77). Exemplo 26 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[2-(4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (Estereoisômero 2)
[00351] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 24. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 25 para o método) para produzir 25 mg do composto título (em Tr = 21,7 - 24,5 min, 19 % de rendimento). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 25 para o método): Tr = 5,49 min. Rotação ótica: [α]D = 2,5° +/- 1,93° (c = 2,7 mg/mL em metanol) Exemplo 27 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00352] 3-(3-Cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-morfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (intermediário 27, 24,0 mg, 47,8 μmol) foi solubilizado em metanol (650 μl), formaldeído (7,2 μl, 37 % de pureza, 96 μmol) e ácido acético (2,7 μl, 48 μmol) foram adicionados, e a mistura foi agitada durante 15 min em temperatura ambiente. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (15,2 mg, 71,7 μmol), e a mistura foi agitada durante 1 h em TA. A mistura foi diluída com metanol, filtrada através de uma coluna SCX e lavada com metanol e amônia (7 M em metanol). O filtrado foi evaporado e purificado por HPLC preparativa (método 9, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 6,00 min 15 - 55 % de B) para produzir 17,3 mg (pureza de 95 %, rendimento de 61 %) do composto título como seu sal de formiato. LC-MS (método 2): Tr = 1,01 min; MS (ESIpos): m/z = 516 [M+H]+ 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 2,189 (13,49), 2,330 (5,06), 2,729 (5,60), 2,861 (7,86), 3,348 (16,00), 3,419 (15,57), 3,624 (4,81), 3,830 (14,46), 3,908 (6,49), 7,633 (4,30), 8,098 (4,59), 8,146 (8,39).
[00353] 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metóxi-anilino)-2-[3-[[(2S)-4-metilmor- folin-4-io-2-il]metóxi]-4-piridil]-1,5,6,7-tetra-hidropirrolo[3,2-c]piridin-4- ona; formiato foi solubilizado em DCM e lavado com NaHCO3 aquoso saturado e salmoura para produzir 9,00 mg (90 % de pureza, 33 % de rendimento) do composto alvo como sua base livre. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,79 - 1,96 (t, 1 H), 1,97 - 2,05 (td, 1 H), 2,19 (s, 3 H), 2,63 (br d, 1 H), 2,71 - 2,82 (br d, 1 H), 2,86 (t, 2 H), 3,43 (td, 2 H), 3,58 - 3,67 (m, 1 H), 3,83 (s, 3 H), 3,87 - 4,01 (m, 2 H), 4,14 (dd, 1 H), 4,29 (dd, 1 H), 5,85 (dd, 1 H), 6,56 (dd, 1 H), 7,13 (s, 1 H), 7,33 (d, 1 H), 7,64 (d, 1 H), 8,07 - 8,12 (d, 1 H), 8,43 (s, 1 H), 11,18 (s, 1H). Exemplo 28 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-(2,2,2-trifluoroetil) morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c] piridin-4-ona
[00354] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 22 com 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-morfolin-2-il]metóxi} piri- din-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (intermediário 27, 25,0 mg, 49,8 μmol) e 2,2,2-trifluoroetil trifluorometanossulfonato (CAS 6226-25-1,11 μl, 75 μmol) como os materiais de partida; 15,1 mg (95 % de pureza, 49 % de rendimento) do composto título foram preparados após HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 30 % de B, 0,50 - 6,00 min 30 - 70 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,35 (t, 1 H), 2,77 - 2,95 (m, 4 H), 3,21 (dd, 2 H), 3,42 (td, 2 H), 3,60 - 3,69 (m, 1 H), 3,83 (s, 3 H), 3,88 - 4,01 (m, 2 H), 4,14 - 4,28 (m, 2 H), 5,84 (dd, 1 H), 6,56 (dd, 1 H), 7,13 (s, 1 H), 7,32 (d, 1 H), 7,62 - 7,66 (m, 1 H), 8,10 (d, 1 H), 8,43 (s, 1 H), 11,16 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,19 min; MS (ESIpos): m/z = 584 [M+H]+ Exemplo 29 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00355] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com N-(3-cloro-2-etilfenil)-4-[({3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4- il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-29, 300 mg, 566 μmol) como o material de partida; 3,00 mg (85 % de pureza, 1 % de rendimento) do composto título foram preparados após HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 30 % de B, 0,50 - 6,00 min 30 - 70 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 0,851 (0,47), 1,210 (0,41), 1,230 (2,24), 1,352 (0,41), 2,206 (1,49), 2,331 (2,92), 2,336 (1,36), 2,518 (16,00), 2,522 (10,31), 2,539 (1,02), 2,673 (3,05), 2,678 (1,42), 2,864 (0,41), 6,728 (0,41), 6,735 (0,47), 7,188 (0,47), 7,201 (0,47), 7,962 (0,54), 7,975 (0,47), 8,365 (0,68). LC-MS (método 2): Tr = 1,07 min; MS (ESIpos): m/z = 496 [M+H]+ Exemplo 30 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi] piridin-4-il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00356] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-[({3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi] piridin-4-il}metil)amino]-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida (intermediário 6-30, 55,0 mg, 101 μmol) como o material de partida; 28,00 mg (98 % de pureza, 53 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 30 % de B, 0,50 - 6,00 min 30 - 70 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,066 (9,57), 1,234 (8,81), 2,074 (0,42), 2,326 (1,06), 2,331 (0,74), 2,518 (3,90), 2,522 (2,65), 2,668 (1,04), 2,673 (0,76), 2,819 (1,08), 2,837 (2,21), 2,853 (1,18), 3,398 (1,96), 3,409 (1,62), 3,416 (1,61), 3,427 (2,05), 3,580 (0,57), 3,588 (0,65), 3,609 (1,17), 3,618 (1,13), 3,629 (1,85), 3,654 (1,43), 3,657 (1,70), 3,679 (1,32), 3,709 (0,74), 3,868 (16,00), 3,894 (0,49), 3,902 (0,53), 3,910 (0,64), 3,918 (0,58), 3,927 (0,42), 4,155 (0,76), 4,171 (0,72), 4,181 (1,01), 4,198 (0,88), 4,295 (0,97), 4,304 (0,99), 4,322 (0,76), 4,330 (0,67), 6,143 (1,40), 6,155 (1,71), 6,167 (1,40), 6,653 (0,46), 6,663 (5,26), 6,673 (3,14), 6,676 (2,88), 7,138 (1,48), 7,270 (2,51), 7,283 (2,51), 7,475 (3,39), 8,033 (3,36), 8,045 (2,98), 8,404 (4,26), 11,073 (1,66). LC-MS (método 6): Tr = 0,80 min; MS (ESIpos): m/z = 513 [M+H]+ Exemplo 31 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi] piridin-4-il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (Estereoisômero 1)
[00357] O composto título do exemplo 30 (26,3 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 11,00 mg, em Tr = 10,7 - 13,4 min) e enantiômero 2 (10 mg, em Tr = 14,0 - 19,9 min, veja o exemplo 32). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: Chiralcel OD-H 5μ, 250x20; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol + 0,1 % em vol de dietilamina; isocrático: 70 % de A+30 % de B; vazão: 20 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: Chiralcel OD-H 5μ, 100x4,6; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol; isocrático: 70 % de A+30 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm HPLC quiral analítica: Tr = 6,72 min. Exemplo 32 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi] piridin-4-il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (Estereoisômero 2)
[00358] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 30. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 31 para o método) para produzir 10 mg do composto título (em Tr = 14,0 - 19,9 min). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 31 para o método): Tr = 10,04 min. Exemplo 33 2-(3-{[5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-meto- xianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00359] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1; 4- {[(3-{[5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)metil]amino}-N-(3-flu- oro-2-metoxifenil)-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-33, 125 mg, 236 μmol) como o material de partida, 15,00 mg (80 % de pureza, 10 % de rendimento) do composto título foram preparados após HPLC preparativa (método 7). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,068 (15,53), 1,236 (15,37), 2,517 (2,98), 2,522 (2,00), 2,817 (1,52), 2,834 (3,10), 2,851 (1,65), 2,903 (0,47), 2,921 (0,89), 2,936 (0,48), 3,402 (2,87), 3,408 (2,55), 3,415 (2,29), 3,431 (3,39), 3,580 (0,97), 3,588 (1,12), 3,609 (2,52), 3,618 (2,17), 3,633 (3,03), 3,651 (2,10), 3,661 (2,34), 3,677 (2,32), 3,706 (1,26), 3,900 (16,00), 3,917 (5,39), 3,933 (0,80), 3,942 (0,71), 4,147 (1,18), 4,163 (1,12), 4,173 (1,56), 4,189 (1,34), 4,294 (1,63), 4,302 (1,37), 4,320 (1,26), 4,329 (0,93), 4,769 (0,55), 4,780 (0,55), 4,787 (0,58), 4,797 (0,52), 5,696 (0,85), 5,759 (1,92), 5,985 (0,55), 6.000 (1,88), 6,020 (1,84), 6,455 (0,97), 6,476 (1,43), 6,479 (1,49), 6,503 (1,30), 6,597 (0,86), 6,612 (1,11), 6,618 (1,49), 6,625 (0,60), 6,633 (1,47), 6,638 (0,71), 6,653 (0,62), 7,141 (2,11), 7,277 (3,15), 7,289 (3,21), 7,297 (1,00), 7,479 (4,43), 7,531 (1,26), 8,030 (3,74), 8,042 (3,54), 8,399 (6,35), 11,053 (2,30), 11,085 (0,73). LC-MS (método 6): Tr = 0,71 min; MS (ESIpos): m/z = 497 [M+H]+ 2-(3-{[5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-meto- xianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (Estereoisômero 1)
[00360] O composto título do exemplo 33 (15,0 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 5,00 mg, em Tr = 10,9 - 13,1 min, 32 % de rendimento) e enantiômero 2 (4 mg, em Tr = 13,5 - 18,3 min, veja o exemplo 34). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: Chiralcel OD-H 5μ, 250x20; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol; isocrático: 70 % de A+30 % de B; vazão: 20 mL/min; temperatura: 25 °C; UV: 280 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: Chiralcel OD-H 5μ, 100x4,6; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol; isocrático: 70 % de A+30 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm HPLC quiral analítica: Tr = 6,58 min. Rotação ótica: [α]D = 2,6° +/- 1,66° (c = 2,3 mg/mL em metanol) Exemplo 34 2-(3-{[5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-meto- xianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 2)
[00361] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 33. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 33 para o método) para produzir 4 mg do composto título (em Tr = 13,5 - 18,3 min, 24 % de rendimento). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 33 para o método): Tr = 9,21 min. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,046 (0,67), 1,068 (13,52), 1,108 (0,86), 1,185 (0,55), 1,236 (13,07), 1,259 (0,64), 2,084 (0,44), 2,331 (0,49), 2,518 (2,88), 2,523 (1,93), 2,673 (0,47), 2,817 (1,52), 2,834 (3,11), 2,851 (1,67), 3,403 (2,57), 3,409 (2,57), 3,416 (2,39), 3,431 (2,89), 3,581 (0,83), 3,589 (0,95), 3,611 (1,68), 3,618 (1,66), 3,633 (2,61), 3,652 (1,72), 3,661 (2,23), 3,678 (1,86), 3,707 (1,00), 3,901 (16,00), 3,917 (1,07), 3,926 (0,91), 3,934 (0,65), 3,943 (0,58), 4,148 (1,01), 4,165 (0,96), 4,174 (1,36), 4,190 (1,18), 4,294 (1,36), 4,303 (1,36), 4,320 (1,03), 4,329 (0,91), 6.000 (1,83), 6,021 (1,91), 6,455 (0,83), 6,459 (0,87), 6,476 (1,19), 6,480 (1,27), 6,486 (0,94), 6,503 (1,10), 6,506 (1,01), 6,597 (0,86), 6,612 (1,01), 6,618 (1,47), 6,633 (1,44), 6,638 (0,75), 6,654 (0,61), 7,141 (2,15), 7,277 (2,70), 7,290 (2,68), 7,479 (4,53), 8,030 (2,67), 8,043 (2,48), 8,400 (4,07), 11,054 (2,33). Exemplo 35 2-(3-{2-[1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-metoxianilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00362] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com 4-{[(3-{2-[1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)metil]amino}-N-(3-fluoro-2- metoxifenil)-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-35, 130 mg, 252 μmol) como o material de partida, 30,0 mg (90 % de pureza, 22 % de rendimento) do composto título racêmico foram preparados após HPLC preparativa (método 7). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,229 (0,48), 1,827 (0,71), 3,862 (0,95), 3,889 (16,00), 3,906 (1,19), 4,074 (0,71), 4,222 (2,14), 4,238 (3,96), 4,253 (1,82), 4,754 (0,55), 5,960 (1,98), 5,981 (1,98), 6,430 (0,95), 6,433 (0,95), 6,451 (1,43), 6,455 (1,43), 6,461 (0,95), 6,478 (1,19), 6,482 (1,11), 6,572 (0,95), 6,587 (1,11), 6,593 (1,58), 6,608 (1,58), 6,613 (0,79), 6,628 (0,63), 7,108 (2,30), 7,292 (2,77), 7,305 (2,77), 7,455 (4,67), 8,017 (2,61), 8,030 (2,46), 8,344 (4,04), 11,175 (2,46). LC-MS (método 6): Tr = 0,63 min; MS (ESIpos): m/z = 483 [M+H]+ 2-(3-{2-[1,4-Dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-metoxianilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona racêmico (25,0 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 12,00 mg, em Tr = 15,1 - 17,0 min,) e enantiômero 2 (4 mg, em Tr = 19,8 - 26,8 min, veja o exemplo 36). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: Chiralpak IF 5μ, 250x30; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol + 0,1 % em vol de dietilamina; isocrático: 70 % de A+30 % de B; vazão: 50 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: Chiralpak IF 3μ, 100x4,6; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol; isocrático: 70 % de A+30 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm HPLC quiral analítica: Tr = 4,68 min. Rotação ótica: [α]D = -12,9° +/- 1,72° (c = 1,4 mg/mL em metanol) Exemplo 36 2-(3-{2-[1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-metoxianilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (Estereoisômero 2)
[00363] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 35. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 35 para o método) produziu 4 mg do composto título (em Tr = 19,8 - 26,8 min). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 35 para o método): Tr = 6,58 min. Rotação ótica: [α]D = -21,4° +/- 1,94° (c = 1,3 mg/mL em metanol) Exemplo 37 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00364] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1; N- (3-fluoro-2-metoxifenil)-4-{[(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin- 4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-37, 130 mg, 252 μmol) como o material de partida, 35,00 mg (92 % de pureza, 27 % de rendimento) do composto título foram preparados após HPLC preparativa (método 7). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,277 (13,00), 2,292 (1,54), 2,307 (0,96), 2,324 (0,70), 2,329 (0,89), 2,334 (0,66), 2,407 (0,69), 2,428 (1,27), 2,435 (1,36), 2,520 (2,98), 2,525 (1,88), 2,667 (0,63), 2,671 (0,83), 2,676 (0,62), 2,777 (0,67), 2,801 (0,82), 2,818 (1,61), 2,825 (0,99), 2,835 (1,02), 2,844 (1,23), 2,860 (0,82), 2,911 (1,23), 2,940 (1,09), 3,388 (0,53), 3,408 (0,96), 3,425 (1,66), 3,431 (1,41), 3,441 (1,54), 3,455 (0,69), 3,548 (1,12), 3,576 (1,89), 3,592 (1,35), 3,597 (1,35), 3,602 (1,33), 3,621 (0,70), 3,626 (0,70), 3,783 (1,37), 3,785 (1,33), 3,818 (1,11), 3,843 (1,97), 3,849 (2,06), 3,870 (1,11), 3,878 (0,99), 3,941 (16,00), 3,954 (1,12), 4,078 (0,56), 4,349 (0,43), 4,358 (0,42), 4,376 (1,85), 4,388 (2,91), 4,416 (0,47), 6,013 (1,90), 6,034 (1,91), 6,516 (0,95), 6,520 (0,92), 6,537 (1,27), 6,541 (1,33), 6,547 (0,95), 6,564 (1,12), 6,568 (1,03), 6,657 (0,94), 6,672 (1,04), 6,678 (1,61), 6,693 (1,51), 6,698 (0,80), 6,714 (0,65), 7,180 (2,21), 7,313 (3,72), 7,325 (3,57), 7,605 (4,51), 7,980 (4,40), 7,993 (4,17), 8,360 (6,21), 8,414 (0,59), 12,014 (2,24). LC-MS (método 6): Tr = 0,51 min; MS (ESIpos): m/z = 482 [M+H]+ Exemplo 38 2-[3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]-4-piridil]-3-(3-fluoro-2-metil- anilino)-1,5,6,7-tetra-hidropirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00365] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1; 4- [[3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]-4-piridil]metilamino]-N-(3-fluoro- 2-metil-fenil)-6-oxo-2,3-di-hidro-1H-piridina-5-carbotioamida (intermediário 6-38, 190 mg, 369 μmol) como o material de partida, 30,2 mg (98 % de pureza, 17 % de rendimento) do composto título foram preparados após HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 5,59 min 15 - 51,7 % de B, 5,59 - 5,88 min 51,7 % de B, 5,88 - 5,93 min 51,7 - 52,1 % de B, 5,93 - 5,95 min 52,1 % de B, 5,95 - 6,32 min 52,1-55 % de B) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,073 (16,00), 1,243 (14,37), 2,177 (9,43), 2,180 (9,37), 2,520 (3,20), 2,525 (2,30), 2,542 (0,63), 2,826 (1,74), 2,843 (3,73), 2,861 (2,01), 3,406 (3,15), 3,417 (2,63), 3,424 (2,71), 3,434 (3,36), 3,569 (0,91), 3,577 (1,10), 3,598 (1,87), 3,607 (1,84), 3,643 (4,40), 3,671 (4,37), 3,699 (1,24), 3,881 (0,69), 3,890 (0,81), 3,898 (1,03), 3,907 (0,94), 3,915 (0,67), 3,923 (0,65), 4,121 (1,26), 4,137 (1,17), 4,147 (1,71), 4,163 (1,45), 4,265 (1,62), 4,274 (1,65), 4,291 (1,24), 4,300 (1,11), 6,059 (2,34), 6,080 (2,42), 6,427 (1,06), 6,449 (1,94), 6,470 (1,21), 6,721 (0,73), 6,742 (1,51), 6,759 (1,47), 6,779 (0,63), 7,168 (2,42), 7,232 (4,19), 7,244 (4,24), 7,308 (4,82), 7,997 (5,22), 8,009 (4,80), 8,373 (6,80), 11,029 (2,61). LC-MS (método 6): Tr = 0,74 min; MS (ESIpos): m/z = 481 [M+H]+ Exemplo 39 2-[3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]-4-piridil]-3-(3-fluoro-2-metil- anilino)-1,5,6,7-tetra-hidropirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00366] O composto título do exemplo 38 (30,2 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 10,00 mg, Tr = 30,4 - 36,0 min, 5 % de rendimento) e enantiômero 2 (9 mg, Tr = 45,9 - 51,7 min). Método de HPLC quiral preparativa: NPB Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: Chiralpak IF 5μ, 250x30; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol + 0,1 % em vol de dietilamina; isocrático: 90 % de A+10 % de B; vazão: 50 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm Método de HPLC quiral analítica: NPB Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: Chiralpak IF 3μ, 100x4,6; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol; isocrático: 90 % de A+10 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm HPLC quiral analítica: Tr = 11,60 min. Rotação ótica: [α]D = - 6,4° +/- 0,47° (c = 6,2 mg/mL em DMSO) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 0,700 (5,10), 0,744 (1,84), 0,764 (1,85), 0,836 (0,93), 0,854 (1,20), 1,073 (15,11), 1,152 (5,69), 1,235 (8,54), 1,243 (16,00), 1,296 (2,78), 1,350 (0,95), 1,378 (0,62), 1,672 (0,88), 2,179 (9,59), 2,525 (2,28), 2,827 (1,75), 2,844 (3,61), 2,861 (1,95), 3,407 (3,22), 3,418 (2,68), 3,424 (2,72), 3,434 (3,38), 3,570 (0,86), 3,578 (1,00), 3,599 (1,76), 3,607 (1,71), 3,644 (4,10), 3,671 (4,05), 3,700 (1,09), 3,882 (0,67), 3,890 (0,80), 3,899 (1,00), 3,907 (0,92), 3,915 (0,66), 3,924 (0,61), 4,121 (1,09), 4,138 (1,06), 4,147 (1,50), 4,164 (1,30), 4,267 (1,44), 4,275 (1,48), 4,292 (1,11), 4,301 (1,01), 6,060 (2,24), 6,080 (2,31), 6,428 (1,04), 6,450 (1,90), 6,472 (1,17), 6,722 (0,70), 6,742 (1,49), 6,759 (1,45), 6,780 (0,58), 6,959 (0,44), 7,170 (2,40), 7,201 (0,51), 7,222 (0,55), 7,234 (1,95), 7,246 (1,95), 7,309 (4,47), 7,999 (1,12), 8,010 (1,08), 8,375 (1,57), 11,031 (2,61). Exemplo 40 3-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluoro-anilino]-2-[3-(1,4-dioxan-2-ilmetóxi)-4- piridil]-1,5,6,7-tetra-hidropirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00367] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com N-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluorofenil]-4-{[(3-{[1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin- 4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-40, 19,5 mg, 36,3 μmol) como o material de partida; 3,80 mg (92 % de pureza, 19 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 30 % de B, 0,50 - 6,00 min 30 - 70 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,86 (t, 2 H), 3,22 - 3,30 (m, 1 H), 3,39 - 3,48 (m, 3 H), 3,50 - 3,58 (td, 1 H), 3,67 - 3,93 (m, 5 H), 3,97 - 4,06 (m, 1 H), 4,09 - 4,18 (m, 1 H), 4,25 - 4,31 (dd, 1 H), 6,07 - 6,17 (d, 1 H), 6,29 - 6,63 (q, 2 H), 6,83 - 6,94 (m, 1 H), 7,10 (s, 1 H), 7,34 (s, 1 H), 7,37 (d, 2 H), 8,00 (d, 1 H), 8,38 (s, 1 H), 11,07 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,99 min; MS (ESIpos): m/z = 503 [M+H]+ Exemplo 41 3-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluoroanilino]-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il] metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00368] 3-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluoroanilino]-2-(3-{[(2S)-morfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (intermediário 41, 22,0 mg, 43,9 μmol) foi suspenso em MeOH, formaldeído (6,6 μl, 37 % de pureza em água, 88 μmol) e ácido acético (2,5 μl, 44 μmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada durante 15 min em temperatura ambiente. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (13,9 mg, 65,8 μmol), e a mistura foi agitada durante 1 h em temperatura ambiente. A mistura foi filtrada através de uma coluna SCX e lavada com MeOH e amônia (7 M em MeOH). O filtrado de amônia foi evaporado e purificado por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-6,00 min 15-55 % de B) para produzir 8,8 mg (90 % de pureza, 35 % de rendimento) do composto título. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2,07 (m, 3 H), 2,22 (s, 3 H), 2,63 - 2,83 (m, 2 H), 2,86 (t, 2 H), 3,27 - 3,31 (m, 1 H), 3,35 - 3,38 (m, 1 H), 3,42 (td, 2 H), 3,68 (td, 1 H), 3,91 - 4,00 (m, 2 H), 4,12 - 4,19 (dd, 1 H), 4,33 (dd, 1 H), 6,13 (d, 1 H), 6,29 - 6,64 (m, 1 H), 6,89 (q, 1 H), 7,07 - 7,14 (m, 1 H), 7,33 - 7,40 (t, 2 H), 7,99 (d, 1 H), 8,39 (s, 1 H), 11,07 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 0,98 min; MS (ESIpos): m/z = 516 [M+H]+ Exemplo 42 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00369] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 41 com 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-morfolin-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (intermediário 42, 18,0 mg, 38,5 μmol) como o material de partida; 10,9 mg (94 % de pureza, 55 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 6,00 min 15 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,234 (0,45), 1,874 (1,12), 1,901 (1,88), 1,928 (1,19), 2,006 (0,51), 2,015 (0,63), 2,035 (1,18), 2,043 (1,18), 2,064 (0,68), 2,072 (0,56), 2,207 (15,79), 2,324 (0,67), 2,329 (0,91), 2,334 (0,71), 2,338 (0,45), 2,357 (16,00), 2,374 (1,16), 2,520 (2,98), 2,525 (1,85), 2,647 (1,22), 2,671 (1,61), 2,676 (1,69), 2,736 (1,32), 2,764 (1,23), 2,847 (1,67), 2,865 (3,57), 2,882 (1,86), 3,411 (1,24), 3,417 (1,33), 3,428 (2,40), 3,434 (2,36), 3,445 (1,17), 3,451 (1,06), 3,639 (0,62), 3,645 (0,95), 3,667 (1,35), 3,672 (1,38), 3,695 (0,78), 3,701 (0,66), 3,937 (1,97), 3,960 (1,51), 4,111 (1,22), 4,128 (1,10), 4,137 (1,63), 4,153 (1,36), 4,253 (1,46), 4,262 (1,52), 4,279 (1,14), 4,287 (1,03), 6,190 (1,81), 6,194 (1,78), 6,209 (1,99), 6,213 (1,81), 6,722 (0,90), 6,726 (1,25), 6,742 (3,67), 6,746 (2,96), 6,753 (2,81), 6,773 (2,59), 6,792 (0,84), 7,190 (2,30), 7,232 (3,39), 7,244 (3,38), 7,377 (4,48), 7,990 (3,43), 8,003 (3,19), 8,370 (5,23), 11,051 (2,53). LC-MS (método 6): Tr = 0,52 min; MS (ESIpos): m/z = 482 [M+H]+ Exemplo 43 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00370] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 41 com 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(3R)-morfolin-3-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (30,0 mg, 64,1 μmol) como o material de partida; 7,0 mg (94 % de pureza, 21 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 15 % de B, 0,50 - 6,00 min 15 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = -0,002 (3,00), 0,879 (0,57), 2,085 (5,27), 2,272 (14,21), 2,318 (0,47), 2,382 (16,00), 2,397 (1,43), 2,423 (1,05), 2,431 (1,10), 2,460 (1,63), 2,518 (5,17), 2,523 (3,38), 2,660 (0,46), 2,810 (0,81), 2,828 (2,27), 2,845 (1,96), 2,864 (0,87), 2,909 (1,32), 2,938 (1,16), 3,411 (0,70), 3,428 (1,64), 3,435 (1,37), 3,444 (1,50), 3,464 (0,63), 3,540 (1,08), 3,568 (2,41), 3,595 (2,18), 3,620 (0,70), 3,818 (1,11), 3,844 (2,09), 3,864 (1,06), 3,872 (0,93), 4,357 (1,94), 4,368 (3,51), 4,395 (0,46), 6,209 (1,79), 6,212 (1,85), 6,228 (1,98), 6,232 (1,91), 6,756 (1,10), 6,760 (1,40), 6,776 (3,46), 6,779 (2,93), 6,793 (2,52), 6,813 (2,75), 6,833 (0,95), 7,200 (2,25), 7,250 (3,55), 7,263 (3,70), 7,431 (4,31), 7,946 (3,93), 7,958 (3,66), 8,338 (5,51), 12,003 (2,32). LC-MS (método 6): Tr = 0,57 min; MS (ESIpos): m/z = 512 [M+H]+ Exemplo 44 3-(3-cloro-2-metil-anilino)-2-[3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]-4- piridil]-1,5,6,7-tetra-hidropirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00371] Em analogia ao exemplo 1, N-(3-cloro-2-metil-fenil)-4-[[3- [(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]-4-piridil]metilamino]-6-oxo-2,3-di-hi- dro-1H-piridina-5-carbotioamida (intermediário 6-44, 320 mg, 603 μmol) foi usado para preparar 32 mg do composto título (98 % de pureza, 10 % de rendimento) após agitação durante 2 h em temperatura ambiente e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-5,92 min 15-54,2 % de B, 5,92 - 7,34 min 54,2 % de B, 7,34 - 7,42 min 54,2 - 55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,072 (14,59), 1,241 (13,05), 2,325 (0,47), 2,329 (0,73), 2,344 (16,00), 2,520 (1,82), 2,525 (1,27), LC-MS (método 6): Tr = 0,79 min; MS (ESIpos): m/z = 497 [M+H]+ Exemplo 45 3-(3-cloro-2-metil-anilino)-2-[3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]-4- piridil]-1,5,6,7-tetra-hidropirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00372] O composto título do exemplo 44 (32,0 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 15,50 mg, Tr = 12,1 - 14,2 min) e enantiômero 2 (12,6 mg, Tr = 14,5 - 19,0 min, veja o exemplo 46). Método de HPLC quiral preparativa: POB Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: Chiralcel OD-H 5μ, 250x20; eluente A: etanol + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: metanol; isocrático: 70 % de A+30 % de B; vazão: 10 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm Método de HPLC quiral analítica: POB Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: Chiralcel OD-H 5μ, 100x4,6; eluente A: etanol + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: metanol; isocrático: 70 % de A+30 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm HPLC quiral analítica: Tr = 3,52 min. Rotação ótica: [α]D = 30,31° +/- 1,05° (c = 2,7 mg/mL em Clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,050 (0,51), 1,070 (14,54), 1,119 (0,40), 1,137 (0,77), 1,155 (0,80), 1,190 (0,47), 1,239 (13,63), 2,085 (0,73), 2,318 (0,77), 2,323 (1,71), 2,327 (2,48), 2,332 (2,11), 2,342 (16,00), 2,518 (7,25), 2,523 (5,03), 2,660 (0,73), 2,665 (1,64), 2,669 (2,30), 2,673 (1,60), 2,679 (0,73), 2,825 (1,60), 2,842 (3,43), 2,859 (1,86), 3,306 (0,95), 3,399 (2,77), 3,415 (2,44), 3,421 (2,59), 3,429 (2,84), 3,563 (0,87), 3,572 (1,02), 3,592 (1,71), 3,601 (1,68), 3,638 (3,46), 3,665 (4,15), 3,695 (1,17), 3,869 (0,77), 3,878 (0,77), 3,886 (0,95), 3,894 (0,87), 3,903 (0,62), 3,911 (0,58), 4,120 (1,13), 4,137 (1,06), 4,147 (1,53), 4,163 (1,31), 4,252 (1,46), 4,261 (1,53), 4,278 (1,09), 4,287 (0,98), 6,193 (1,82), 6,197 (1,75), 6,212 (1,93), 6,216 (1,82), 6,703 (0,98), 6,707 (1,28), 6,723 (3,50), 6,727 (2,81), 6,736 (2,59), 6,756 (2,51), 6,775 (0,84), 7,162 (2,22), 7,228 (3,64), 7,241 (3,64), 7,321 (4,48), 8,002 (4,30), 8,014 (4,01), 8,372 (5,94), 11,046 (2,48). LC-MS (método 6): Tr = 0,80 min; MS (ESIpos): m/z = 497 [M+H]+ Exemplo 46 3-(3-cloro-2-metil-anilino)-2-[3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]-4- piridil]-1,5,6,7-tetra-hidropirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 2)
[00373] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 44. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 45 para o método) para produzir 12,6 mg do composto título (Tr = 14,5 - 19,0 min). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 45 para o método): Tr = 4,43 min. Rotação ótica: [α]D = - 26,44° +/- 1,41° (c = 2,9 mg/mL em Clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 0,748 (0,44), 0,764 (0,44), 1,053 (0,52), 1,070 (14,81), 1,154 (1,45), 1,239 (13,86), 2,085 (1,85), 2,318 (0,46), 2,323 (0,99), 2,327 (1,45), 2,332 (1,39), 2,342 (16,00), 2,518 (4,03), 2,523 (2,82), 2,540 (0,54), 2,665 (0,89), 2,669 (1,25), 2,673 (0,85), 2,825 (1,61), 2,843 (3,39), 2,859 (1,81), 3,399 (2,78), 3,415 (2,48), 3,421 (2,64), 3,429 (2,88), 3,563 (0,83), 3,572 (0,99), 3,593 (1,69), 3,601 (1,67), 3,638 (3,49), 3,665 (4,15), 3,695 (1,15), 3,869 (0,83), 3,878 (0,77), 3,886 (0,95), 3,895 (0,89), 3,903 (0,64), 3,912 (0,58), 4,120 (1,09), 4,137 (1,03), 4,147 (1,53), 4,163 (1,33), 4,252 (1,45), 4,261 (1,51), 4,278 (1,09), 4,287 (0,97), 6,193 (1,77), 6,197 (1,75), 6,212 (1,97), 6,216 (1,85), 6,703 (0,95), 6,707 (1,27), 6,723 (3,51), 6,727 (2,82), 6,736 (2,58), 6,756 (2,54), 6,775 (0,85), 7,162 (2,26), 7,228 (3,10), 7,241 (3,12), 7,321 (4,45), 8,002 (2,54), 8,015 (2,36), 8,372 (3,89), 11,046 (2,46). LC-MS (método 6): Tr = 0,80 min; MS (ESIpos): m/z = 497 [M+H]+ Exemplo 47 2-[3-(1,4-dioxan-2-ilmetóxi)-4-piridil]-3-(3-fluoro-2-metil-anilino)-1,5,6,7- tetra-hidropirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00374] Em analogia ao exemplo 1, 4-[[3-(1,4-dioxan-2-ilmetóxi)-4- piridil]metilamino]-N-(3-fluoro-2-metil-fenil)-6-oxo-2,3-di-hidro-1H- piridina-5-carbotioamida (intermediário 6-47, 399 mg, 820 μmol) foi usado para preparar 135 mg do composto título (97 % de pureza, 35 % de rendimento) após agitação durante a noite a 60 °C e purificação por HPLC preparativa (método 9, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-6,00 min 15-55 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,154 (4,20), 1,172 (8,22), 1,189 (3,94), 1,987 (16,00), 2,185 (2,36), 2,189 (2,36), 2,518 (0,75), 2,522 (0,47), 2,843 (0,44), 2,860 (0,94), 2,877 (0,50), 3,398 (0,42), 3,425 (1,01), 3,451 (0,56), 3,709 (0,44), 3,740 (0,57), 3,999 (1,26), 4,017 (3,61), 4,035 (3,57), 4,053 (1,15), 4,125 (0,48), 4,230 (0,43), 4,239 (0,42), 5,758 (0,88), 6,052 (0,58), 6,072 (0,60), 6,459 (0,48), 7,186 (0,59), 7,234 (1,00), 7,247 (1,01), 7,345 (1,17), 7,990 (1,32), 8,002 (1,20), 8,361 (1,76), 11,030 (0,60). LC-MS (método 6): Tr = 0,65 min; MS (ESIpos): m/z = 453 [M+H]+ Exemplo 48 2-[3-(1,4-dioxan-2-ilmetóxi)-4-piridil]-3-(3-fluoro-2-metil-anilino)-1,5,6,7- tetra-hidropirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00375] O composto título do exemplo 47 (15,0 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 3,0 mg, Tr = 5,5 - 6,2 min) e enantiômero 2 (2,0 mg, Tr = 9,0 - 9,9 min, veja o exemplo 49). Método de HPLC quiral preparativa: MTBE Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: YMC Cellulose SB 5μ, 250x30; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: acetonitrila; isocrático: 55 % de B+45 % de A; vazão: 80 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm; Método de HPLC quiral analítica: MTBE Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: YMC Cellulose SB 3μ, 100x4,6; eluente A: metil terc-butil éter + 0,2 % em vol de dietilamina; eluente B: acetonitrila; isocrático: 50 % de A+50 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 280 nm; HPLC quiral analítica: Tr = 2,90 min. Rotação ótica: [α]D = - 19,1° +/- 1,65° (c = 2,19 mg/mL em Clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = -0,008 (0,55), 0.000 (16,00), 0,008 (0,53), 0,700 (0,57), 0,752 (0,76), 0,770 (0,76), 1,140 (1,18), 1,160 (2,36), 1,234 (1,64), 1,296 (0,42), 2,189 (11,55), 2,191 (11,53), 2,521 (2,85), 2,525 (1,90), 2,846 (2,15), 2,863 (4,59), 2,880 (2,42), 3,401 (1,96), 3,410 (1,71), 3,417 (1,88), 3,428 (4,95), 3,444 (1,64), 3,454 (2,68), 3,505 (0,67), 3,510 (0,82), 3,532 (1,56), 3,539 (1,58), 3,560 (1,14), 3,569 (1,03), 3,712 (2,13), 3,721 (1,35), 3,743 (2,76), 3,750 (1,24), 3,771 (1,14), 3,778 (0,84), 3,800 (1,69), 3,806 (1,85), 3,829 (1,52), 3,835 (1,54), 3,885 (1,66), 3,912 (1,22), 3,992 (0,42), 4,001 (0,68), 4,008 (1,01), 4,017 (1,14), 4,025 (1,10), 4,033 (0,93), 4,042 (0,78), 4,049 (0,53), 4,103 (1,71), 4,119 (1,24), 4,129 (2,26), 4,145 (1,73), 4,233 (2,09), 4,243 (2,05), 4,259 (1,54), 4,269 (1,33), 6,056 (2,82), 6,076 (2,91), 6,440 (1,29), 6,463 (2,36), 6,484 (1,46), 6,734 (0,89), 6,754 (1,85), 6,771 (1,77), 6,792 (0,72), 7,187 (2,91), 7,237 (3,80), 7,250 (3,82), 7,348 (5,65), 7,994 (2,64), 8,006 (2,47), 8,365 (4,17), 11,029 (3,12). LC-MS (método 6): Tr = 0,66 min; MS (ESIpos): m/z = 453 [M+H]+ Exemplo 49 2-[3-(1,4-dioxan-2-ilmetóxi)-4-piridil]-3-(3-fluoro-2-metil-anilino)-1,5,6,7- tetra-hidropirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 2)
[00376] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 47. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 48 para o método) para produzir 2,0 mg do composto título (Tr = 9,0 - 9,9 min). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 48 para o método): Tr = 4,67 min. Rotação ótica: [α]D = 24,3° +/- 7,66° (c = 1,29 mg/mL em Clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: -0,008 (0,54), 0.000 (16,00), 0,008 (0,54), 0,700 (0,74), 0,752 (0,54), 0,771 (0,57), 0,854 (0,52), 1,139 (0,91), 1,160 (1,70), 1,234 (2,19), 1,296 (0,52), 2,087 (0,66), 2,189 (11,26), 2,191 (11,28), 2,521 (4,55), 2,525 (3,00), 2,846 (2,09), 2,863 (4,47), 2,880 (2,36), 3,401 (1,99), 3,410 (1,67), 3,417 (1,87), 3,428 (4,87), 3,444 (1,65), 3,454 (2,65), 3,505 (0,69), 3,510 (0,84), 3,532 (1,52), 3,539 (1,55), 3,560 (1,13), 3,569 (1,03), 3,712 (2,09), 3,721 (1,35), 3,744 (2,70), 3,750 (1,23), 3,771 (1,16), 3,778 (0,81), 3,800 (1,67), 3,806 (1,77), 3,829 (1,50), 3,835 (1,52), 3,885 (1,62), 3,912 (1,20), 3,992 (0,42), 4,001 (0,66), 4,009 (0,98), 4,017 (1,11), 4,025 (1,08), 4,033 (0,91), 4,042 (0,76), 4,049 (0,54), 4,103 (1,70), 4,119 (1,20), 4,129 (2,19), 4,145 (1,72), 4,233 (2,04), 4,243 (2,04), 4,259 (1,52), 4,269 (1,33), 6,055 (2,75), 6,076 (2,85), 6,440 (1,25), 6,463 (2,31), 6,484 (1,45), 6,734 (0,86), 6,754 (1,79), 6,772 (1,72), 6,792 (0,74), 7,187 (2,83), 7,237 (3,37), 7,250 (3,42), 7,349 (5,43), 7,994 (2,24), 8,007 (2,14), 8,365 (3,56), 11,030 (3,02). Exemplo 50 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00377] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 1 com N-(3-cloro-2-metil-fenil)-4-[[3-(1,4-dioxan-2-ilmetóxi)-4- piridil]metilamino]-6-oxo-2,3-di-hidro-1H-piridina-5-carbotioamida (intermediário 6-50, 150 mg, 298 μmol) como o material de partida, 35,0 mg (25 % de rendimento) do composto título racêmico foram preparados após HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-6,00 min 15-55 % de B). LC-MS (método 6): Tr = 0,71 min; MS (ESIpos): m/z = 469 [M+H]+
[00378] 3-(3-Cloro-2-metil-anilino)-2-[3-(1,4-dioxan-2-ilmetóxi)-4- piridil]-1,5,6,7-tetra-hidropirrolo[3,2-c]piridin-4-ona racêmico (35,0 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 12,5 mg, Tr = 14,3 - 16,6 min,) e enantiômero 2 (13,4 mg, Tr = 21,1 - 25,3 min, veja o exemplo 51). Método de HPLC quiral preparativa: MTBE Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: YMC Cellulose SB 5μ, 250x30; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol; gradiente:; vazão: 40 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm Método de HPLC quiral analítica: MTBE Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: YMC Cellulose SB 3μ, 100x4,6; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol; gradiente:; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm HPLC quiral analítica: Tr = 3,23 min. Rotação ótica: [α]D = -20,5° +/- 1,23° (c = 2,7 mg/mL em Clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,234 (0,41), 2,338 (0,44) 2,355 (16,00), 2,520 (2,76), 2,524 (1,87), 2,847 (1,60), 2,864 (3,40) 4,033 (0,55), 4,104 (1,32), 4,120 (0,96), 4,130 (1,76), 4,146 (1,34), 4,223 (1,59), 4,232 (1,56), 4,249 (1,15), 4,258 (1,00), 6,190 (1,73), 6,194 (1,69), 6,210 (2,01), 6,213 (1,79), 6,718 (0,97), 6,722 (1,27), 6,738 (3,59), 6,742 (2,81), 6,751 (2,54), 6,771 (2,47), 6,790 (0,80), 7,184 (2,17), 7,234 (3,49), 7,247 (3,51), 7,364 (4,36), 7,999 (3,35), 8,012 (3,08), 8,365 (4,78), 11,044 (2,32). LC-MS (método 6): Tr = 0,70 min; MS (ESIpos): m/z = 469 [M+H]+
[00379] A síntese enantiosseletiva a partir de 1-(3-{[(2S)-1,4-dioxan- 2-il]metóxi}piridin-4-il)metanamina (intermediário 2-8) confirmou o composto título como 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan- 2-il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona. Exemplo 51 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00380] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 50. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 50 para o método) produziu 13,4 mg do composto título (Tr = 21,1 - 25,3 min). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 50 para o método): Tr = 5,22 min. Rotação ótica: [α]D = 20,4° +/- 1,23° (c = 2,69 mg/mL em clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,173 (0,44), 1,234 (0,51), 2,355 (16,00), 2,521 (2,29), 2,525 (1,50), 2,848 (1,58), 2,865 (3,44), 2,882 (1,83), 3,346 (0,44), 3,399 (1,49), 3,410 (1,19), 3,416 (1,34), 3,428 (3,98), 3,432 (2,45), 3,444 (1,19), 3,452 (2,35), 3,503 (0,46), 3,508 (0,62), 3,531 (1,13), 3,538 (1,20), 3,558 (0,84), 3,567 (0,81), 3,711 (1,90), 3,718 (1,09), 3,740 (2,39), 3,768 (0,88), 3,775 (0,62), 3,797 (1,26), 3,803 (1,39), 3,825 (1,14), 3,832 (1,17), 3,883 (1,25), 3,910 (0,90), 3,995 (0,49), 4,001 (0,76), 4,010 (0,82), 4,018 (0,79), 4,026 (0,71), 4,035 (0,56), 4,042 (0,40), 4,104 (1,30), 4,121 (0,95), 4,130 (1,77), 4,147 (1,36), 4,224 (1,60), 4,233 (1,58), 4,250 (1,15), 4,259 (0,99), 6,191 (1,74), 6,195 (1,73), 6,210 (1,96), 6,214 (1,81), 6,719 (0,94), 6,723 (1,27), 6,738 (3,57), 6,743 (2,82), 6,752 (2,56), 6,771 (2,49), 6,791 (0,81), 7,185 (2,19), 7,235 (3,09), 7,248 (3,12), 7,365 (4,33), 8.000 (2,48), 8,013 (2,34), 8,366 (3,75), 11,045 (2,33). LC-MS (método 6): Tr = 0,70 min; MS (ESIpos): m/z = 469 [M+H]+ Exemplo 52 3-(3-cloro-2-etil-anilino)-2-[3-(1,4-dioxan-2-ilmetóxi)-4-piridil]-1,5,6,7- tetra-hidropirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00381] Em analogia ao exemplo 1, N-(3-cloro-2-etil-fenil)-4-[[3-(1,4- dioxan-2-ilmetóxi)-4-piridil]metilamino]-6-oxo-2,3-di-hidro-1H-piridina-5- carbotioamida (intermediário 6-52, 150 mg, 290 μmol) foi usado para preparar 23,2 mg do composto título (95 % de pureza, 16 % de rendimento) após agitação durante 4 h a 60 °C e purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 10 % de B, 0,50-8,06 min 10-20 % de B, 8,06-9,02 min 20 % de B, 9,02-24,12 min 20-50 % de B, 24,12-27,44 min 50 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm = 1,23 (t, 3 H), 2,86 (s, 4 H), 3,38 - 3,46 (m, 4 H), 3,49 - 3,58 (m, 1 H), 3,68 - 3,78 (m, 2 H), 3,78 - 3,85 (m, 1 H), 3,86 - 3,92 (m, 1 H), 3,98 - 4,06 (m, 1 H), 4,09 - 4,17 (m, 1 H), 4,21 - 4,28 (m, 1 H), 6,22 (dd, 1 H), 6,67 - 6,78 (m, 2 H), 7,20 (d, 2 H), 7,45 (s, 1 H), 7,98 (d, 1 H), 8,32 - 8,39 (m, 1 H). LC-MS (método 2): Tr = 1,08 min; MS (ESIpos): m/z = 483 [M+H]+ Exemplo 53 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00382] O composto título do exemplo 52 (23,2 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (enantiômero 1, 6,0 mg, Tr = 6,6 - 7.-3 min) e enantiômero 2 (5,0 mg, Tr = 10,7 - 11,6 min, veja o exemplo 54). Método de HPLC quiral preparativa: MTBE Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: YMC Cellulose SB 5μ, 250x30; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: acetonitrila; isocrático: 50 % de A+50 % de B; vazão: 60 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm Método de HPLC quiral analítica: MTBE Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: YMC Cellulose SB 3μ, 100x4,6; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: acetonitrila; isocrático: 50 % de A+50 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm HPLC quiral analítica: Tr = 2,40 min. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,23 (t, 3 H), 2,81 - 2,91 (m, 4 H), 3,40 -3,45 (m, 3 H), 3,53 (dt, 1 H), 3,69 - 3,79 (m, 2 H), 3,79 - 3,85 (m, 1 H), 3,86 - 3,93 (m, 1 H), 3,99 - 4,06 (m, 1 H), 4,12 (dd, 1 H), 4,24 (dd, 1 H), 6,23 (dd, 1 H), 6,69 - 6,78 (m, 2 H), 7,15 - 7,23 (m, 2 H), 7,43 - 7,47 (m, 1 H), 7,98 (d, 1H) 8,36 (s, 1 H), 11,03 (br s, 1H).
[00383] A síntese enantiosseletiva confirmou o composto título como 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona. Em analogia ao exemplo 1, o composto título (25 mg, 7,6 % de rendimento) foi preparado usando N-(3-cloro-2-etilfenil)-4-{[(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2- il]metóxi}piridin-4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida (intermediário 6-53, 320 mg, 0,62 mmol) como material de partida, seguido por purificação com HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 5 % de B, 0,50-7,99 min 5-60 % de B, 7,9911,20 min 60 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 11,03 (s, 1 H), 8,36 (s, 1 H), 7,98 (d, 1 H), 7,43 - 7,49 (m, 1 H), 7,15 - 7,24 (m, 2 H), 6,68 - 6,80 (m, 2 H), 6,14 - 6,28 (m, 1 H), 4,21 - 4,33 (m, 1 H), 4,10 - 4,17 (m, 1 H), 4,00 - 4,05 (m, 1 H), 3,70 - 3,92 (m, 4 H), 3,51 - 3,59 (m, 1 H), 3,39 - 3,47 (m, 3 H), 2,81 - 2,90 (m, 4 H), 1,23 (t, 3H). Exemplo 54 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00384] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 52. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 53 para o método) produziu 5,0 mg do composto título (Tr = 10,7 - 11,6 min). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 53 para o método): Tr = 3,22 min. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,14 - 1,34 (m, 6 H), 2,81 - 2,91 (m, 4 H), 3,38 - 3,48 (m, 3 H), 3,55 (dd, 1 H), 3,69 - 3,85 (m, 3 H), 3,85 - 3,93 (m, 1 H), 3,99 - 4,06 (m, 1 H), 4,09 - 4,17 (m, 1 H), 4,25 (dd, 1 H), 6,23 (dd, 1 H), 6,69 - 6,79 (m, 2 H), 7,14 - 7,23 (m, 2 H), 7,39 - 7,49 (m, 1 H), 7,91 - 8,04 (m, 1 H), 8,31 - 8,40 (m, 1 H), 10,97 - 11,12 (m, 1H). Exemplo 55 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00385] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 41 com 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2R)-morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (intermediário 55, 58,0 mg, 120 μmol) como o material de partida; 27,5 mg (95 % de pureza, 44 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 30 % de B, 0,50 - 7,00 min 30 - 70 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,23 (t, 3 H), 1,90 (t, 1 H), 1,99 - 2,09 (td, 1 H), 2,21 (s, 3 H), 2,63 - 2,71 (d, 1 H), 2,73 - 2,78 (d, 1 H), 2,78 - 2,89 (m, 4 H), 3,40 - 3,47 (td, 2 H), 3,67 (td, 1 H), 3,92 - 3,98 (m, 2 H), 4,14 (dd, 1 H), 4,27 (dd, 1 H), 6,23 (dd, 1 H), 6,71 - 6,78 (m, 2 H), 7,16 - 7,21 (m, 2 H), 7,46 (s, 1 H), 7,97 (d, 1 H), 8,36 (s, 1 H), 11,04 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,10 min; MS (ESIpos): m/z = 496 [M+H]+ Exemplo 56 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00386] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 41 com 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2S)-morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (intermediário 56, 68,0 mg, 141 μmol) como o material de partida; 37,8 mg (95 % de pureza, 51 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00 - 0,50 min 30 % de B, 0,50 - 7,00 min 30 - 70 % de B). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,23 (t, 3 H), 1,90 (t, 1 H), 2,00 - 2,08 (td, 1 H), 2,21 (s, 3 H), 2,63 - 2,72 (d, 1 H), 2,72 - 2,81 (d, 1 H), 2,81 - 2,90 (m, 4 H), 3,44 (td, 2 H), 3,67 (td, 1 H), 3,91 - 3,99 (m, 2 H), 4,13 (dd, 1 H), 4,29 (dd, 1 H), 6,23 (dd, 1 H), 6,71 - 6,78 (m, 2 H), 7,16 - 7,21 (m, 2 H), 7,46 (s, 1 H), 7,97 (d, 1 H), 8,36 (s, 1 H), 11,04 (s, 1H). LC-MS (método 2): Tr = 1,10 min; MS (ESIpos): m/z = 496 [M+H]+ Exemplo 57 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(1S)-1-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4- il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00387] Em um tubo de micro-ondas, uma solução de N-(3-cloro-2- metoxifenil)-4-([{3-[(1S)-1-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4-il}metil)amino]- 2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-57, 380 mg, 713 μmol) em metanol (1,5 mL) foi tratada com TFA (55 μl, 710 μmol) seguido por peróxido de hidrogênio (9,2 μl, 0,106 mmol), aquecido a 60 °C e agitado durante 16 h. A mistura de reação foi concentrada até a secura sob pressão reduzida, dissolvida em DMSO e purificada por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-5,00 min 15-50 % de B, 5,00-8,00 min 50 % de B) para produzir após liofilização o produto desejado (174 mg, 44 % de rendimento) como uma mistura de dois estereoisômeros. 8,396 (4,10), 8,411 (2,66), 11,072 (1,20), 11,085 (1,69). LC-MS (método 6): Tr = 0,72 min; MS (ESIpos): m/z = 499 [M+H]+ Exemplo 58 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(1S)-1-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4- il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (Estereoisômero 1)
[00388] O composto título do exemplo 57 (170 mg) foi separado em estereoisômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (estereoisômero 1, 58 mg, Tr = 16,2-18,8 min) e estereoisômero 2 (35 mg, Tr = 19,3-21,6 min, veja o exemplo 60). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: YMC Cellulose SC 5μ, 250x30; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol + 0,1 % em vol de dietilamina; gradiente: 0-15 min 20-30 % de B; vazão: 40 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm Método de HPLC analítica quiral: Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: YMC Cellulose SC 3μ, 100x4,6; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol; isocrático: 70 % de A+30 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm HPLC quiral analítica: Tr = 5,19 min. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,157 (0,42), 1,326 (5,83), 1,342 (5,94), 2,518 (2,45), 2,523 (1,64), 2,854 (1,00), 2,872 (2,23), 2,889 (1,30), 3,159 (0,76), 3,172 (0,81), 3,403 (0,88), 3,409 (0,98), 3,420 (1,66), 3,427 (1,98), 3,435 (0,89), 3,456 (1,40), 3,469 (0,49), 3,485 (1,09), 3,493 (0,89), 3,500 (0,89), 3,522 (0,63), 3,530 (0,42), 3,699 (1,04), 3,725 (1,77), 3,748 (1,00), 3,755 (0,79), 3,777 (0,55), 3,783 (0,42), 3,806 (1,16), 3,812 (1,76), 3,824 (0,88), 3,836 (1,39), 3,843 (1,20), 3,850 (0,51), 3,890 (16,00), 3,919 (1,02), 3,948 (0,70), 4,631 (0,81), 4,646 (0,95), 4,659 (0,80), 6,143 (1,46), 6,151 (1,29), 6,159 (1,42), 6,167 (1,47), 6,679 (0,61), 6,691 (6,25), 6,699 (2,81), 6,706 (2,43), 6,727 (0,42), 7,159 (1,65), 7,298 (2,69), 7,311 (2,69), 7,518 (3,71), 7,998 (3,52), 8,010 (3,22), 8,395 (4,49), 11,084 (1,82). Rotação ótica: [α]D = 30,21° +/- 0,60° (c = 1,0 g/100 mL em clorofórmio) LC-MS (método 6): Tr = 0,72 min; MS (ESIpos): m/z = 499 [M+H]+ Exemplo 59 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(1S)-1-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4- il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (Estereoisômero 2)
[00389] O composto título do exemplo 57 (170 mg) foi separado em estereoisômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o estereoisômero 2 do composto título (35 mg, Tr = 19,3-21,6 min, veja o exemplo 58 para método de separação). HPLC quiral analítica: Tr = 5,91 min. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 0,798 (0,48), 0,815 (0,56), 0,822 (0,55), 0,905 (0,48), 1,084 (0,46), 1,137 (0,84), 1,156 (0,69), 1,233 (1,00), 1,246 (6,21), 1,261 (6,32), 2,084 (0,60), 2,332 (0,57), 2,518 (3,49), 2,522 (2,23), 2,673 (0,60), 2,833 (1,01), 2,850 (2,05), 2,867 (1,22), 3,308 (0,48), 3,373 (0,98), 3,402 (2,29), 3,412 (2,05), 3,418 (2,16), 3,427 (2,02), 3,435 (1,84), 3,442 (1,19), 3,465 (0,79), 3,607 (0,46), 3,614 (0,62), 3,643 (2,17), 3,670 (1,14), 3,726 (0,62), 3,732 (0,73), 3,738 (0,65), 3,744 (0,72), 3,751 (0,57), 3,757 (0,63), 3,762 (0,57), 3,768 (0,57), 3,805 (1,25), 3,815 (1,51), 3,821 (1,12), 3,834 (1,01), 3,844 (1,36), 3,850 (1,08), 3,863 (16,00), 3,889 (0,74), 4,625 (0,83), 4,637 (0,87), 4,641 (0,90), 4,653 (0,81), 6,133 (1,40), 6,143 (1,44), 6,147 (1,32), 6,157 (1,50), 6,639 (2,71), 6,643 (3,20), 6,653 (5,57), 6,663 (0,45), 7,120 (1,71), 7,294 (2,55), 7,307 (2,61), 7,438 (3,73), 8,031 (2,89), 8,043 (2,69), 8,411 (4,05), 11,071 (1,88). Rotação ótica: [α]D = 19,87° +/- 0,91° (c = 1,0 g/100 mL em clorofórmio) LC-MS (método 6): Tr = 0,72 min; MS (ESIpos): m/z = 499 [M+H]+ Exemplo 60 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(1R)-1-(1,4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4- il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (Estereoisômero 1)
[00390] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 57 com N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-{[(3-{(1R)-1-[1,4-dioxan-2- il]etóxi}piridin-4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida (intermediário 6-60, 340 mg, 638 μmol) como material de partida; 76,0 mg (pureza de 99 %, rendimento de 24 %) do composto título (estereoisômero 1, Tr = 18,7-22,0 min) foram preparados após purificação por HPLC preparativa (método 10, gradiente: 0,00-0,50 min 15 % de B, 0,50-5,00 min 15-50 % de B, 5,00-8,00 min 50 % de B) seguido por preparação quiral. HPLC. Adicionalmente, foram isolados 7 mg de estereoisômero 2 (exemplo 61) (Tr = 16,5-17,9 min). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: YMC Cellulose SB 5μ, 250x30; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol + 0,1 % em vol de dietilamina; isocrático: 80 % de A+20 % de B; vazão: 60 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm Método analítico de HPLC analítico quiral: Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: YMC Cellulose SB 3μ, 100x4,6; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: etanol; isocrático: 80 % de A+20 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm HPLC quiral analítica: Tr = 6,96 min. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,245 (5,93), 1,261 (5,97), 2,518 (0,96), 2,522 (0,61), 2,833 (0,89), 2,850 (1,81), 2,868 (1,07), 3,374 (0,88), 3,398 (1,92), 3,402 (2,05), 3,412 (1,84), 3,418 (1,88), 3,427 (1,81), 3,435 (1,62), 3,442 (1,07), 3,465 (0,71), 3,608 (0,45), 3,614 (0,62), 3,643 (2,07), 3,669 (1,04), 3,726 (0,57), 3,733 (0,70), 3,736 (0,65), 3,744 (0,69), 3,751 (0,53), 3,757 (0,58), 3,762 (0,53), 3,768 (0,55), 3,805 (1,12), 3,815 (1,32), 3,821 (0,99), 3,834 (0,89), 3,844 (1,24), 3,850 (0,97), 3,864 (16,00), 3,890 (0,81), 4,068 (0,46), 4,626 (0,76), 4,637 (0,80), 4,641 (0,83), 4,653 (0,76), 6,133 (1,41), 6,148 (1,26), 6,158 (1,48), 6,638 (2,78), 6,643 (3,34), 6,653 (5,70), 6,663 (0,46), 7,122 (1,57), 7,294 (2,67), 7,307 (2,70), 7,440 (3,53), 8,031 (3,75), 8,044 (3,34), 8,411 (4,42), 11,072 (1,72). LC-MS (método 6): Tr = 0,72 min; MS (ESIpos): m/z = 499 [M+H]+ Exemplo 61 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{(1R)-1-[(1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (Estereoisômero 2)
[00391] Para a preparação do composto título como uma mistura de dois diastereômeros veja o exemplo 60. A separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 60 para o método) produziu 7,0 mg do composto título (Tr = 9,4 - 10,8 min). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 60 para o método): Tr = 6,10 min. Rotação ótica: [α]D = -3,38° +/- 0,78° (c = 3,7 mg/mL, clorofórmio). Exemplo 62 3-(3-fluoro-2-metilanilino)-2-(3-{[4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00392] A uma solução de N-(3-fluoro-2-metilfenil)-4-{[(3-{[4-metil- morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)metil]amino}-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropi- ridina-3-carbotioamida (intermediário 6-62, 110 mg, 220 μmol) em ácido acético (1,1 mL) foi adicionado peróxido de hidrogênio aquoso (45 μl, 30 % de pureza, 440 μM), e a mistura foi aquecida a 80 °C durante 2 h. A mistura de reação foi extinta com solução saturada de tiossulfato de sódio, e o pH 7 foi ajustado pela adição de solução aquosa de hidróxido de sódio 4M. Após a adição de DCM, a mistura foi agitada durante 15 min em temperatura ambiente. As fases foram separadas, e a fase aquosa extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secadas por papel de filtro hidrofóbico e concentradas sob pressão reduzida. A mistura foi purificada por HPLC prep. (método 10) para produzir o composto título; 28 mg (pureza de 97 %, rendimento de 26 %). ¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1,877 (1,11), 1,904 (1,76), 1,931 (1,15), 2,007 (0,48), 2,016 (0,62), 2,036 (1,18), 2,044 (1,14), 2,064 (0,65), 2,074 (0,91), 2,188 (9,04), 2,191 (9,20), 2,204 (16,00), 2,326 (0,50), 2,518 (1,93), 2,522 (1,23), 2,647 (1,09), 2,669 (1,06), 2,673 (1,34), 2,743 (1,21), 2,770 (1,13), 2,844 (1,64), 2,861 (3,54), 2,878 (1,85), 3,410 (1,18), 3,415 (1,29), 3,426 (2,35), 3,432 (2,33), 3,443 (1,13), 3,449 (1,04), 3,642 (0,55), 3,648 (0,70), 3,670 (1,28), 3,675 (1,30), 3,698 (0,76), 3,703 (0,63), 3,935 (1,65), 3,942 (1,53), 3,951 (0,92), 3,962 (1,44), 3,967 (1,29), 4,109 (1,20), 4,126 (1,08), 4,135 (1,56), 4,151 (1,27), 4,276 (1,43), 4,285 (1,48), 4,301 (1,18), 4,310 (1,07), 6,056 (2,20), 6,076 (2,25), 6,442 (1,00), 6,464 (1,83), 6,486 (1,13), 6,735 (0,68), 6,755 (1,42), 6,772 (1,36), 6,793 (0,57), 7,188 (2,26), 7,230 (3,88), 7,242 (3,85), 7,346 (4,43), 7,979 (5,07), 7,991 (4,58), 8,368 (6,78), 11,029 (2,41). LC-MS (método 6): Tr = 0,46 min; MS (ESIpos): m/z = 466 [M+H]+ Exemplo 63 3-(3-fluoro-2-metilanilino)-2-(3-{[4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00393] O composto título do exemplo 62 (21 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (estereoisômero 1, 7,0 mg, Tr = 7,1-8,1 min) e estereoisômero 2 (9,0 mg, Tr = 9,4 - 10,8 min, veja o exemplo 64). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: YMC Cellulose SB 5μ, 250x30; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: acetonitrila; isocrático: 50 % de A+50 % de B; vazão: 60 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: YMC Cellulose SB 3μ, 100x4,6; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: acetonitrila; isocrático: 50 % de A+50 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm HPLC quiral analítica: Tr = 2,60 min. Rotação ótica: [α]D = 21,60° +/- 1,04° (c = 1,0 g/100 mL em clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO- d6): δ [ppm] = 1,232 (0,89), 1,877 (1,15), 1,904 (1,74), 1,931 (1,14), 2,008 (0,48), 2,016 (0,62), 2,036 (1,17), 2,044 (1,15), 2,064 (0,65), 2,073 (0,56), 2,188 (9,17), 2,191 (9,34), 2,204 (16,00), 2,322 (0,45), 2,327 (0,62), 2,332 (0,45), 2,518 (2,49), 2,523 (1,54), 2,646 (1,12), 2,669 (1,21), 2,673 (1,46), 2,743 (1,23), 2,770 (1,15), 2,844 (1,60), 2,861 (3,42), 2,878 (1,82), 3,410 (1,23), 3,415 (1,32), 3,426 (2,40), 3,432 (2,38), 3,444 (1,15), 3,449 (1,07), 3,641 (0,56), 3,648 (0,70), 3,670 (1,28), 3,675 (1,31), 3,698 (0,76), 3,703 (0,61), 3,935 (1,67), 3,942 (1,57), 3,951 (0,95), 3,962 (1,45), 4,109 (1,14), 4,126 (1,03), 4,135 (1,51), 4,152 (1,21), 4,276 (1,39), 4,285 (1,43), 4,301 (1,14), 4,310 (1,03), 6,056 (2,16), 6,076 (2,23), 6,442 (1,01), 6,464 (1,85), 6,486 (1,14), 6,735 (0,67), 6,755 (1,42), 6,772 (1,37), 6,793 (0,56), 7,188 (2,29), 7,230 (3,04), 7,243 (3,00), 7,345 (4,40), 7,979 (3,05), 7,991 (2,83), 8,368 (4,67), 11,030 (2,40). LC-MS (método 6): Tr = 0,46 min; MS (ESIpos): m/z = 466 [M+H]+ Exemplo 64 3-(3-fluoro-2-metilanilino)-2-(3-{[4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 2)
[00394] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 63. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 63 para o método) para produzir 9,0 mg do composto título (Tr = 9,4 - 10,8 min). HPLC quiral analítica (veja o exemplo 63 para o método): Tr = 3,37 min. Rotação ótica: [α]D = - 20,75° +/- 1,29° (c = 1,0 g/ 100 mL em Clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO- d6): δ [ppm] = 1,232 (0,99), 1,877 (1,12), 1,904 (1,80), 1,931 (1,15), 2,008 (0,49), 2,016 (0,64), 2,036 (1,17), 2,044 (1,15), 2,065 (0,66), 2,073 (0,57), 2,188 (9,36), 2,191 (9,48), 2,204 (16,00), 2,323 (0,47), 2,327 (0,62), 2,332 (0,47), 2,518 (2,39), 2,522 (1,44), 2,647 (1,15), 2,669 (1,24), 2,673 (1,48), 2,743 (1,24), 2,770 (1,16), 2,844 (1,63), 2,861 (3,47), 2,878 (1,82), 3,410 (1,27), 3,415 (1,36), 3,426 (2,43), 3,432 (2,39), 3,443 (1,17), 3,449 (1,07), 3,642 (0,56), 3,648 (0,70), 3,670 (1,30), 3,675 (1,30), 3,698 (0,75), 3,703 (0,63), 3,935 (1,71), 3,942 (1,60), 3,962 (1,47), 4,109 (1,17), 4,126 (1,03), 4,135 (1,51), 4,152 (1,22), 4,276 (1,40), 4,285 (1,45), 4,301 (1,13), 4,310 (1,03), 6,056 (2,19), 6,076 (2,26), 6,442 (1,05), 6,464 (1,87), 6,486 (1,15), 6,735 (0,70), 6,755 (1,43), 6,772 (1,38), 6,793 (0,56), 7,188 (2,30), 7,230 (3,03), 7,243 (3,07), 7,346 (4,46), 7,979 (3,01), 7,992 (2,84), 8,368 (4,73), 11,030 (2,43). LC-MS (método 6): Tr = 0,46 min; MS (ESIpos): m/z = 466 [M+H]+ Exemplo 65 2-(3-{[1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluoroanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00395] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 62 com 4-{[(3-{[1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)metil]amino}-N-(2-etil-3- fluorofenil)-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-65, 215 mg, 429 μmol) como o material de partida; Foram preparados 76,0 mg (pureza de 95 %, rendimento de 36 %) do composto título após purificação por HPLC preparativa (condições básicas). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) delta [ppm]: 1,097 (0,45), 1,206 (6,70), 11,012 (5,43). LC-MS (método 6): Tr = 0,70 min; MS (ESIpos): m/z = 467 [M+H]+ Exemplo 66, exemplo 67 2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluoroanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluoroanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona Exemplo 66 2-(3-{[1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluoroanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00396] O composto título do exemplo 65 (74 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (estereoisômero 1, 30 mg, Tr = 4,5-5,3 min) e estereoisômero 2 (31 mg, Tr = 5,3-6,2 min, veja o exemplo 67). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC; Coluna: YMC Cellulose SB 10μ, 250x50; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: metanol; isocrático: 90 % de A+10 % de B; vazão: 150 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: YMC Cellulose SB 3μ, 100x4,6; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: metanol; isocrático: 90 % de A+10 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm HPLC quiral analítica: Tr = 4,41 min. Rotação ótica: [α]D = -21,9° +/- 0,60° (c = 1,0 g/100 mL em clorofórmio) LC-MS (método 6): Tr = 0,70 min; MS (ESIpos): m/z = 467 [M+H]+ Exemplo 67 2-(3-{[1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluoroanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 2)
[00397] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 65. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 66 para o método) para produzir 31 mg do composto título. HPLC quiral analítica (veja o exemplo 63 para o método): Tr = 4,49 min. Rotação ótica: [α]D = 22,51° +/- 0,86° (c = 1,0 g/ 100 mL em Clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,104 (0,57), 1,164 (0,90) 1,206 (6,89), 1,225 (16,00), 1,244 (7,18), 2,322 (0,60), 2,326 (0,81) LC-MS (método 6): Tr = 0,70 min; MS (ESIpos): m/z = 467 [M+H]+ Exemplo 68 2-(3-{[5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3- fluoroanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00398] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 62 com 4-{[(3-{[5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)metil]amino}- N-(2-etil-3-fluorofenil)-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3-carbotioamida (intermediário 6-68, 350 mg, 662 μmol) como o material de partida; 82 mg (85 % de pureza, 21 % de rendimento) do composto título foram preparados após purificação por HPLC preparativa (condições básicas). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 1,051 (1,89), 1,073 (11,18), 1,171 (0,57), 1,182 (0,76), 1,197 (3,04), 1,216 (5,73), 1,234 (3,31), 1,243 (10,52), 2,326 (0,46), 2,518 (1,69), 2,522 (1,07), 2,539 (16,00), 2,669 (0,94), 2,673 (0,76), 2,688 (1,36), 2,706 (1,38), 2,828 (1,23), 2,845 (2,62), 2,862 (1,40), 3,412 (2,22), 3,422 (1,93), 3,428 (1,91), 3,440 (2,37), 3,574 (0,81), 3,582 (0,90), 3,604 (1,34), 3,612 (1,29), 3,629 (0,40), 3,646 (2,91), 3,674 (3,37), 3,703 (0,90), 3,896 (0,52), 3,903 (0,59), 3,912 (0,74), 3,920 (0,70), 3,929 (0,49), 3,938 (0,47), 4,129 (0,89), 4,146 (0,81), 4,155 (1,16), 4,172 (1,00), 4,284 (1,20), 4,292 (1,15), 4,310 (0,88), 4,319 (0,81), 5,758 (2,21), 6,089 (1,68), 6,110 (1,75), 6,420 (0,77), 6,443 (1,38), 6,464 (0,88), 6,709 (0,64), 6,729 (1,28), 6,746 (1,24), 6,767 (0,55), 7,165 (1,72), 7,200 (2,88), 7,213 (2,92), 7,249 (0,48), 7,369 (0,47), 7,382 (0,67), 7,392 (2,91), 7,972 (3,81), 7,985 (3,48), 8,067 (0,61), 8,080 (0,54), 8,372 (5,10), 8,439 (0,78), 11,018 (1,92). LC-MS (método 6): Tr = 0,79 min; MS (ESIpos): m/z = 495 [M+H]+ Exemplo 69, exemplo 70 2-(3-{[(2R)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-flu- oroanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-flu- oroanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona Exemplo 69 2-(3-{[5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluo- roanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00399] O composto título do exemplo 68 (32 mg) foi separado em enantiômeros por HPLC quiral preparativa para produzir o composto título (estereoisômero 1, 13 mg, Tr = 36,8-46,0 min) e estereoisômero 2 (10 mg, Tr = 21,9-26,4 min., veja o exemplo 70) Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC-4; Coluna: Chiralcel OD-H 5μ, 250x20; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: 2- propanol; isocrático: 70 % de A+30 % de B; vazão: 10 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Thermo Fisher UltiMate 3000; Coluna: Chiralcel OD-H 5μ, 100x4,6; eluente A: hexano + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: 2-propanol; isocrático: 70 % de A+30 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm HPLC quiral analítica: Tr = 7,38 min. Rotação ótica: [α]D = -24,42° +/- 0,72° (c = 1,0 g/100 mL em clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 0,698 (1,11), 0,742 (0,61), 0,834 (0,47), 0,851 (0,63), 1,072 (16,00), 1,147 (1,48), 1,195 (4,00), 1,214 (8,27), 1,233 (6,80), 1,242 (15,37), 1,294 (0,70), 2,322 (0,63), 2,326 (0,85), 2,331 (0,63), 2,517 (3,89), 2,522 (2,40), 2,664 (1,17), 2,668 (1,54), 2,673 (1,19), 2,687 (1,95), 2,705 (1,86), 2,722 (0,66), 2,826 (1,78), 2,843 (3,74), 2,860 (2,02), 3,411 (3,06), 3,420 (2,79), 3,427 (2,73), 3,440 (3,33), 3,573 (0,89), 3,581 (1,05), 3,603 (1,84), 3,611 (1,82), 3,646 (3,73), 3,674 (4,44), 3,703 (1,16), 3,893 (0,70), 3,901 (0,84), 3,910 (1,06), 3,918 (0,98), 3,926 (0,71), 3,935 (0,66), 4,126 (1,20), 4,143 (1,14), 4,152 (1,62), 4,169 (1,39), 4,281 (1,52), 4,290 (1,61), 4,307 (1,22), 4,316 (1,10), 6,088 (2,37), 6,108 (2,47), 6,417 (1,08), 6,440 (1,96), 6,461 (1,24), 6,707 (0,87), 6,728 (1,74), 6,745 (1,70), 6,765 (0,75), 7,159 (2,50), 7,197 (3,08), 7,209 (3,08), 7,378 (4,32), 7,967 (2,35), 7,980 (2,25), 8,368 (3,77), 11,014 (2,75). LC-MS (método 6): Tr = 0,78 min; MS (ESIpos): m/z = 495 [M+H]+ Exemplo 70 2-(3-{[5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluo- roanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 2)
[00400] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 68. Separação de enantiômeros por HPLC quiral preparativa (veja o exemplo 69 para o método) para produzir 10 mg do composto título. HPLC quiral analítica (veja o exemplo 69 para o método): Tr = 5,50 min. Rotação ótica: [α]D = 33,52° +/- 1,07° (c = 1,0 g/ 100 mL em Clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ [ppm]: 0,852 (0,50), 1,072 (16,00), 1,147 (0,81), 1,195 (3,63), 1,214 (8,06), 1,233 (5,99), 1,242 (15,29), 2,322 (0,67), 2,326 (0,93), 2,331 (0,67), 2,518 (4,20), 2,522 (2,70), 2,664 (1,19), 2,668 (1,61), 2,673 (1,22), 2,687 (1,88), 2,705 (1,81), 2,722 (0,65), 2,826 (1,76), 2,843 (3,72), 2,860 (1,98), 3,411 (2,99), 3,420 (2,72), 3,427 (2,69), 3,440 (3,28), 3,573 (0,90), 3,582 (1,04), 3,603 (1,85), 3,611 (1,82), 3,646 (3,73), 3,674 (4,50), 3,703 (1,19), 3,893 (0,69), 3,901 (0,82), 3,910 (1,04), 3,918 (0,98), 3,927 (0,70), 3,935 (0,65), 4,126 (1,23), 4,143 (1,15), 4,152 (1,63), 4,169 (1,40), 4,281 (1,53), 4,290 (1,62), 4,307 (1,24), 4,316 (1,12), 6,088 (2,36), 6,108 (2,47), 6,419 (1,10), 6,440 (1,96), 6,461 (1,24), 6,707 (0,90), 6,728 (1,77), 6,744 (1,72), 6,765 (0,75), 7,159 (2,47), 7,196 (3,38), 7,209 (3,41), 7,378 (4,36), 7,967 (2,84), 7,980 (2,69), 8,368 (4,39), 11,014 (2,71). LC-MS (método 6): Tr = 0,78 min; MS (ESIpos): m/z = 495 [M+H]+ Exemplo 71 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({1-[4-metilmorfolin-2-il]etil}óxi) piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
[00401] Usando um método análogo ao descrito no exemplo 62 com N-(3-cloro-2-metoxifenil)-4-({[3-({1-[4-metilmorfolin-2-il]etil}óxi) piridin-4-il]metil}amino)-2-oxo-1,2,5,6-tetra-hidropiridina-3- carbotioamida (intermediário 6-71, 420 mg, 769 μmol) como o material 4,637 (0,80), 4,650 (1,17), 4,659 (0,74), 4,665 (1,09), 4,675 (0,61), 6,146 (2,23), 6,155 (2,15), 6,162 (1,69), 6,170 (2,32), 6,642 (2,11), 6,647 (2,51), 6,657 (4,69), 6,667 (0,52), 6,672 (0,41), 6,680 (0,65), 6,692 (5,88), 6,701 (2,71), 6,709 (2,25), 7,122 (1,19), 7,160 (1,40), 7,290 (2,01), 7,300 (2,69), 7,303 (2,35), 7,313 (2,45), 7,426 (0,41), 7,435 (2,71), 7,520 (3,23), 7,989 (3,33), 8,002 (3,13), 8,019 (2,70), 8,031 (2,40), 8,402 (3,96), 8,421 (3,26), 11,070 (1,28), 11,110 (1,54). LC-MS (método 6): Tr = 0,54 min; MS (ESIpos): m/z = 512 [M+H]+ Exemplo 72, exemplo 73, exemplo 74, exemplo 75 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({(1R)-1-[(2R)-4-metilmorfolin-2- il]etil}óxi)piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({(1S)-1-[(2S)-4-metilmorfolin-2- il]etil}óxi)piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({(1R)-1-[(2S)-4-metilmorfolin-2- il]etil}óxi)piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({(1S)-1-[(2R)-4-metilmorfolin-2- il]etil}óxi)piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona Exemplo 72 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({1-[4-metilmorfolin-2-il]etil}óxi) piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 1)
[00402] O composto título do exemplo 71 (135 mg) foi separado em quatro estereoisômeros por HPLC quiral preparativa. O estereoisômero 1 do composto título (20 mg, Tr = 6,8-7,6 min) foi obtido além do estereoisômero 2 (27 mg, Tr = 9,6-10,9 min., veja o exemplo 73), estereoisômero 3 (37 mg, veja o exemplo 74) e estereoisômero 4 (37 mg, veja o exemplo 75). Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: PrepCon Labomatic HPLC 4; Coluna: YMC Cellulose SB 10μ, 250x50; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: acetonitrila; isocrático: 80 % de A+20 % de B; vazão: 140 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Waters Alliance 2695; Coluna: YMC Cellulose SB 3μ, 100x4,6; eluente A: metil terc-butil éter + 0,1 % em vol de dietilamina; eluente B: acetonitrila; isocrático: 80 % de A+20 % de B; vazão: 1,4 mL/min; temperatura: 25°C; UV: 254 nm HPLC quiral analítica: Tr = 3,85 min. Rotação ótica: [α]D = 16,84° +/- 0,40° (c = 1,0 g/100 mL em clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) delta [ppm]: 1,137 (0,95), 1,159 (0,63), 1,232 (0,54), 1,277 (5,83), 1,293 (5,97), 1,826 (0,63), 1,853 (1,16), 1,880 (0,71), 1,907 (0,46), 1,928 (0,77), 1,935 (0,78), 1,956 (0,45), 2,160 (9,53), 2,326 (0,58), 2,522 (2,28), 2,579 (0,94), 2,608 (0,86), 2,665 (0,41), 2,669 (0,54), 2,673 (0,40), 2,748 (0,95), 2,776 (0,90), 2,835 (1,17), 2,852 (2,46), 2,869 (1,37), 3,402 (1,17), 3,413 (1,92), 3,419 (1,92), 3,431 (0,97), 3,523 (0,52), 3,545 (0,95), 3,551 (0,92), 3,573 (0,56), 3,660 (0,71), 3,670 (0,67), 3,690 (0,73), 3,866 (16,00), 3,891 (0,61), 4,649 (0,83), 4,659 (0,85), 4,664 (0,85), 4,675 (0,80), 5,758 (1,51), 6,145 (1,46), 6,155 (1,45), 6,159 (1,36), 6,169 (1,48), 6,643 (2,83), 6,647 (3,21), 6,657 (5,61), 6,667 (0,55), 7,123 (1,81), 7,291 (2,03), 7,303 (2,10), 7,435 (3,81), 8,018 (1,65), 8,031 (1,59), 8,420 (2,63), 11,071 (2,01). LC-MS (método 6): Tr = 0,53 min; MS (ESIpos): m/z = 512 [M+H]+ Exemplo 73 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({1-[4-metilmorfolin-2-il]etil}óxi) piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 2)
[00403] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 71. Separação de estereoisômeros por HPLC quiral preparativa (método veja o exemplo 72) para produzir 27 mg do estereoisômero 2 do composto título. HPLC quiral analítica (método veja o exemplo 72): Tr = 5,24 min. Rotação ótica: [α]D = 16,84° +/- 0,40° (c = 1,0 g/100 mL em Clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) delta [ppm]: 1,137 (0,95), 1,159 (0,63), 1,232 (0,54), 1,277 (5,83), 1,293 (5,97), 1,826 (0,63), 1,853 (1,16), 1,880 (0,71), 1,907 (0,46), 1,928 (0,77), 1,935 (0,78), 1,956 (0,45), 2,160 (9,53), 2,326 (0,58), 2,522 (2,28), 2,579 (0,94), 2,608 (0,86), 2,665 (0,41), 2,669 (0,54), 2,673 (0,40), 2,748 (0,95), 2,776 (0,90), 2,835 (1,17), 2,852 (2,46), 2,869 (1,37), 3,402 (1,17), 3,413 (1,92), 3,419 (1,92), 3,431 (0,97), 3,523 (0,52), 3,545 (0,95), 3,551 (0,92), 3,573 (0,56), 3,660 (0,71), 3,670 (0,67), 3,690 (0,73), 3,866 (16,00), 3,891 (0,61), 4,649 (0,83), 4,659 (0,85), 4,664 (0,85), 4,675 (0,80), 5,758 (1,51), 6,145 (1,46), 6,155 (1,45), 6,159 (1,36), 6,169 (1,48), 6,643 (2,83), 6,647 (3,21), 6,657 (5,61), 6,667 (0,55), 7,123 (1,81), 7,291 (2,03), 7,303 (2,10), 7,435 (3,81), 8,018 (1,65), 8,031 (1,59), 8,420 (2,63), 11,071 (2,01). LC-MS (método 6): Tr = 0,53 min; MS (ESIpos): m/z = 512 [M+H]+ Exemplo 74 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({1-[-4-metilmorfolin-2-il]etil}óxi) piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 3)
[00404] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 71. Para a separação dos estereoisômeros 3 e do estereoisômero 4 (veja o exemplo 75), primeiro foi realizada uma HPLC quiral preparativa usando o método descrito no exemplo 72. Uma fração (Tr = 5,5-6,5 min.) foi adicionalmente separada por outra HPLC quiral preparativa usando o seguinte método para produzir 37 mg do estereoisômero 3 do composto título. Método de HPLC quiral preparativa: Instrumento: Sepiatec: Prep SFC100; Coluna: Chiralpak IG 5μ 250x30 mm; eluente A: CO2; eluente B: 2-propanol + 0,4 % em vol de dietilamina; isocrático: 40 % de B; vazão: 100 mL/min; temperatura: 40°C; BPR: 150bar; UV: 254 nm Método de HPLC quiral analítica: Instrumento: Agilent: 1260, Aurora SFC-Modul; Coluna: Chiralpak IG 5μ 100x4,6mm; eluente A: CO2; eluente B: 2-propanol + 0,4 % em vol de dietilamina; isocrático: 40 % de B; vazão: 4 mL/min; temperatura: 37,5°C; BPR: 100bar; UV: 254 nm HPLC quiral analítica: Tr = 3,98 min. Rotação ótica: [α]D = 30,08° +/- 0,91° (c = 1,0 g/ 100 mL em Clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) delta [ppm]: 0,697 (0,90), 1,026 (1,27), 1,042 (1,28), 1,088 (0,45), 1,137 (0,56), 1,232 (1,77), 1,293 (0,50), 1,358 (5,47), 1,374 (5,50), 1,893 (0,68), 1,920 (1,22), 1,947 (0,76), 1,959 (1,07), 1,966 (0,44), 1,987 (0,74), 1,995 (0,74), 2,016 (0,44), 2,180 (9,88), 2,327 (0,45), 2,523 (1,85), 2,643 (0,83), 2,669 (1,19), 2,749 (0,84), 2,776 (0,82), 2,847 (0,81), 2,865 (1,90), 2,882 (1,25), 3,409 (0,92), 3,419 (1,42), 3,425 (1,62), 3,439 (0,79), 3,640 (0,45), 3,663 (0,82), 3,668 (0,85), 3,691 (0,49), 3,712 (0,49), 3,718 (0,58), 3,724 (0,55), 3,730 (0,61), 3,738 (0,58), 3,744 (0,54), 3,750 (0,58), 3,755 (0,50), 3,891 (16,00), 3,970 (0,75), 3,993 (0,66), 4,638 (0,75), 4,653 (0,92), 4,666 (0,75), 6,146 (1,43), 6,154 (1,30), 6,162 (1,45), 6,170 (1,48), 6,681 (0,60), 6,693 (6,14), 6,701 (2,75), 6,709 (2,40), 6,729 (0,44), 7,162 (1,65), 7,301 (1,65), 7,313 (1,71), 7,521 (3,68), 7,990 (1,16), 8,002 (1,10), 8,403 (1,76), 11,111 (1,82). LC-MS (método 6): Tr = 0,53 min; MS (ESIpos): m/z = 512 [M+H]+ Exemplo 75 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({1-[-4-metilmorfolin-2-il]etil}óxi) piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona (estereoisômero 4)
[00405] Para a preparação do composto título racêmico, veja o exemplo 71. Para a separação dos estereoisômeros 3 (veja o exemplo 74) e estereoisômero 4 (exemplo 75), primeiro uma HPLC quiral preparativa foi realizada usando o método descrito no exemplo 72. Uma fração (Tr = 5,5-6,5 min.), foi ainda separada por outra HPLC quiral preparativa (método veja o exemplo 74) para produzir 37 mg do estereoisômero 4 do composto título. HPLC quiral analítica: Tr = 7,23 min. Rotação ótica: [α]D = -24,97° +/- 0,50° (c = 1,0 g/ 100 mL em Clorofórmio) 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) delta [ppm]: 0,697 (2,05), 0,742 (1,32), 0,760 (1,30), 0,832 (0,55), 0,851 (0,74), 0,973 (0,66), 0,984 (0,67), 0,991 (0,96), 0,999 (0,64), 1,009 (0,72), 1,026 (0,75), 1,042 (0,77), 1,070 (0,82), 1,088 (1,27), 1,106 (1,27), 1,151 (4,27), 1,232 (4,01), 1,293 (1,22), 1,358 (5,91), 1,373 (6,07), 1,894 (0,71), 1,921 (1,28), 1,948 (0,80), 1,959 (1,52), 1,988 (0,82), 1,995 (0,85), 2,017 (0,51), 2,181 (10,00), 2,322 (0,74), 2,326 (0,99), 2,331 (0,74), 2,522 (4,96), 2,643 (0,98), 2,669 (1,77), 2,749 (0,99), 2,777 (0,93), 2,849 (0,99), 2,865 (2,18), 2,882 (1,43), 3,408 (1,14), 3,424 (1,91), 3,640 (0,51), 3,663 (0,93), 3,668 (0,95), 3,692 (0,56), 3,718 (0,67), 3,730 (0,69), 3,743 (0,64), 3,750 (0,64), 3,891 (16,00), 3,969 (0,87), 3,993 (0,79), 4,638 (0,82), 4,653 (1,03), 4,667 (0,80), 6,145 (1,44), 6,154 (1,38), 6,161 (1,41), 6,169 (1,51), 6,681 (0,63), 6,693 (5,87), 6,701 (2,92), 6,709 (2,49), 6,729 (0,47), 7,162 (1,85), 7,300 (1,91), 7,313 (1,96), 7,520 (3,80), 7,990 (1,46), 8,002 (1,40), 8,402 (2,29), 11,110 (1,99). LC-MS (método 6): Tr = 0,53 min; MS (ESIpos): m/z = 512 [M+H]+
SEÇÃO EXPERIMENTAL - ENSAIOS BIOLÓGICOS
[00406] A atividade farmacológica dos compostos de acordo com a invenção pode ser avaliada usando ensaios in vitro e/ou in vivo, como conhecido por alguém versado na técnica. Os exemplos seguintes descrevem a atividade biológica dos compostos de acordo com a invenção, sem que a invenção se limite aos referidos exemplos.
[00407] Compostos exemplares de acordo com a invenção foram testados em ensaios biológicos selecionados uma ou mais vezes. Quando testado mais de uma vez, os dados são relatados como valores médios ou como valores medianos, em que • o valor médio, também conhecido como valor médio aritmético, representa a soma dos valores obtidos dividida pelo número de vezes testado, e • o valor mediano representa o número do meio do grupo de valores quando classificado em ordem crescente ou decrescente. Se o número de valores no conjunto de dados for ímpar, a mediana é o valor médio. Se o número de valores no conjunto de dados for par, a mediana será a média aritmética dos dois valores intermediários.
[00408] Os exemplos foram sintetizados uma ou mais vezes. Quando sintetizados mais de uma vez, os dados dos ensaios biológicos representam valores médios ou valores medianos calculados utilizando conjuntos de dados obtidos a partir do teste de um ou mais bateladas sintéticas.
[00409] A atividade in vitro dos compostos da presente invenção pode ser demonstrada nos seguintes ensaios:
Expressão e purificação das proteínas EGFR usadas nos ensaios bioquímicos da cinase
[00410] As diferentes proteínas EGFR usadas nos ensaios de inibição da atividade bioquímica da cinase foram geradas internamente por expressão em células de inseto usando o sistema Baculo Virus e subsequente purificação conforme descrito nos parágrafos seguintes. Construções de expressão:
[00411] Os cDNAs que codificam as várias sequências de proteínas do EGFR humano (P00533) foram otimizados para expressão em células eucarióticas e sintetizados pela Tecnologia GeneArt da Life Technologyes.
[00412] Essas sequências de DNA codificaram a seguinte sequência: Construir EGFR # 1 aminoácido R669 a A1210 Construir EGFR # 2 aminoácido R669 a A1210, e a inserção da sequência de aminoácidos ASV entre V769 e D770 Construir EGFR # 3 aminoácido R669 a A1210, e a inserção da sequência de aminoácidos SVD entre D770 e N771
[00413] Além disso, todas as construções EGFR # 1 a # 3 codificam: no N-terminal um sítio de clivagem da protease TEV (Tobacco etch virus) (DYDIPTTENLYFQG), no C-terminal dois códons de interrupção e, adicionalmente, sequências att-DNA em 5 'e 3' para Gateway Cloning.
[00414] Cada uma das quatro construções EFGR foi subclonada usando a Gateway Technology no vetor de destino pD-Ins1. O vetor pD-Ins1 é um vetor de transferência de baculovírus (com base no vetor pVL1393, Pharmingen) que fornece uma fusão N-terminal de um marcador GST à construção do gene integrado. Os respectivos vetores de transferência foram denominados pD-Ins1_ EGFR # 1, pD- Ins1_ EGFR # 2, pD-Ins1_ EGFR # 3.
Geração de Baculovírus recombinante:
[00415] Em abordagens separadas, cada um dos três vetores de transferência foi cotransfectado em células Sf9 com DNA de baculovírus (Flashbac Gold DNA, Oxford Expression Technologyes) usando Fugene HD (Roche). Após 5 dias, o sobrenadante das células transfectadas contendo o Baculovírus recombinante que codifica as várias proteínas EGFR foi usado para posterior infecção de células Sf9 para amplificação de vírus, em que o título do vírus foi monitorado usando qPCR.
Expressão de EGFR em células Sf9 usando biorreator:
[00416] Células Sf9 cultivadas (meio Insect-xpress, Lonza, 27 °C) em um biorreator Wave com um saco de cultura descartável foram infectadas a uma densidade celular de 106 células/mL com um dos estoques de baculovírus recombinantes em uma multiplicidade de infecção de 1 e incubado por 48 h. Subsequentemente, as células foram colhidas por centrifugação, e o pélete celular congelado a -80 °C.
Purificação das proteínas de fusão GST-EGFR:
[00417] A purificação das proteínas de fusão GST-EGFR foi alcançada por cromatografia de afinidade usando a matriz Glutathion Sepharose 4B (GE Healtcare Life Sciences).
[00418] As células peletizadas (a partir de 4 l de cultura de células) foram ressuspensas em tampão de lise (HEPES 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mM, glicerol a 5 %, MgCl2 1 mM, MnCl2 1 mM, Na3VO4 0,5 mM) e lisadas por um ciclo de congelamento-descongelamento seguido por uma incubação em gelo por 60 min. O sobrenadante foi centrifugado a 4000 x g durante 30 min. a 4 °C. O sobrenadante foi então incubado com matriz de Glutathion Sepharose 4B (em uma garrafa de vidro girando por 16 h, a 4 °C) para a ligação da proteína de fusão GST EGFR, enxaguada com Tampão de Lavagem e finalmente a proteína ligada foi eluída usando Tampão de Eluição (Tampão de Lise mais Glutationa 25 mM) e congelado por choque com nitrogênio líquido.
Ensaio de cinase WT-EGFR
[00419] A atividade inibidora de compostos da presente invenção contra o receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) tipo selvagem foi quantificada empregando o ensaio de EGFR baseado em TR-FRET conforme descrito nos parágrafos seguintes.
[00420] A proteína de fusão recombinante de Glutationa-S-Transfe- rase N-terminal (GST) e um fragmento de EGFR humano (aminoácidos R669 a A1210), expressa em células de inseto Sf9 e purificada por meio de cromatografia de afinidade usando Sefarose de Glutationa como descrito acima, foi usada como uma cinase. Como substrato para a reação de cinase foi utilizado o peptídeo biotinilado biotina-Ahx-AEEEEYFELVAKKK (terminal C na forma de amida), que pode ser adquirido, por exemplo, da empresa Biosintan GmbH (Berlin- Buch, Germany).
[00421] Para o ensaio, 50 nl de uma solução 100 vezes concentrada do composto teste em DMSO foram pipetados para uma placa de microtitulação de 384 cavidades de baixo volume preta ou uma placa de microtitulação de 1536 cavidades preta (ambos Greiner Bio-One, Frickenhausen, Germany), 2 μl de uma solução de EGFR em tampão de ensaio aquoso [Hepes 50 mM pH 7,0, MgCl2 10 mM, ditiotreitol 1 mM, EGTA 0,5 mM, orto-vanadato de sódio ativado 0,3 mM, albumina de soro bovino 0,005 % (p/v), Tween-20 0,005 % (v/v)], e a mistura foi incubada durante 15 min a 22 °C para permitir a pré- ligação dos compostos teste à enzima antes do início da reação da cinase. Em seguida, a reação de cinase foi iniciada pela adição de 3 μL de uma solução de trifosfato de adenosina (ATP, 3,33 mM => conc. final no volume de ensaio de 5 μL é 2 mM) e substrato (1,67 μM => conc. final no volume de ensaio de 5 μL é de 1 μM) em tampão de ensaio, e a mistura resultante foi incubada por um tempo de reação de 30 min a 22 °C. A concentração de EGFR foi ajustada dependendo da atividade da batelada de enzima e foi escolhida apropriada para ter o ensaio na faixa linear, a concentração típica era 7,6 pg/μl. A reação foi interrompida pela adição de 3 μl de uma solução de reagentes de detecção de HTRF (estreptavidina-XL665 83,3 nM [Cisbio Bioassays, Codolet, France] e PT66-Tb-Criptato 1,67 nM, um anticorpo anti-fosfo- tirosina marcado com criptato de térbio de Cisbio Bioassays [em vez de PT66 Tb criptato, PT66 Eu Quelato de Perkin Elmer também pode ser usado]) em uma solução aquosa de EDTA (EDTA 133,3 mM, 0,2 % (p/v) de albumina de soro bovino em HEPES 50 mM pH 7,5)
[00422] A mistura resultante foi incubada 1 h a 22 °C para permitir a ligação do peptídeo fosforilado biotinilado ao estreptavidina-XL665 e ao PT66-Tb-Criptato. Posteriormente, a quantidade de substrato fosforilado foi avaliada pela medição da transferência de energia de ressonância do PT66-Tb-Criptato para o estreptavidina-XL665. Portanto, as emissões de fluorescência a 620 nm e 665 nm após excitação a 337 nm foram medidas em um leitor de HTRF, por exemplo, um Pherastar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) ou um Viewlux (Perkin-Elmer). A relação das emissões em 665 nm e em 622 nm foi tomada como medida para a quantidade de substrato fosforilado. Os dados foram normalizados (reação enzimática sem inibidor = 0 % de inibição, todos os outros componentes do ensaio, mas nenhuma enzima = 100 % de inibição). Normalmente, os compostos teste foram testados na mesma placa de microtitulação em 11 concentrações diferentes na faixa de 20 μM a 0,07 nM (20 μM, 5,7 μM, 1,6 μM, 0,47 μM, 0,13 μM, 38 nM, 11 nM, 3,1 nM, 0,9 nM, 0,25 nM e 0,07 nM, a série de diluição preparada separadamente antes do ensaio no nível das soluções concentradas 100 vezes em DMSO por diluições em série, as concentrações exatas podem variar dependendo dos pipetadores usados) em valores duplicados para cada concentração, e os valores de IC50 foram calculados usando o software Genedata Screener™.
Ensaio de cinase Exon20-mutante-EGFR (D770_N771insSVD)
[00423] A atividade inibidora de compostos da presente invenção contra um receptor de fator de crescimento epidérmico (EGFR) com uma inserção da sequência de aminoácidos SVD entre D770 e N771 foi quantificada empregando o ensaio de atividade de cinase baseado em TR-FRET conforme descrito nos parágrafos seguintes.
[00424] Uma proteína de fusão recombinante de Glutation-S- Transferase N-terminal (GST) e um fragmento de variante de EGFR humano (aminoácidos R669 a A1210 com inserção da sequência de aminoácidos SVD entre D770 e N771 ("EGFR insSVD"), expressa em células de inseto Sf9 e purificado por cromatografia de afinidade usando Glutathion Sepharose como descrito acima, foi usado como uma cinase. Como substrato para a reação de cinase, o peptídeo biotinilado biotina-Ahx-AEEEEYFELVAKKK (C-terminal na forma de amida) foi usado, o qual pode ser adquirido por exemplo, da empresa Biosintan GmbH (Berlin-Buch, Germany).
[00425] Para o ensaio, 50 nl de uma solução 100 vezes concentrada do composto teste em DMSO foram pipetados em uma placa de microtitulação de baixo volume de 384 cavidades ou uma placa de microtitulação preta de 1536 cavidades (ambas Greiner Bio- One, Frickenhausen, Germany), 2 μl de uma solução de EGFR em tampão de ensaio aquoso [Hepes 50 mM pH 7,0, MgCl2 10 mM, ditiotreitol 1 mM, EGTA 0,5 mM, orto-vanadato de sódio ativado 0,3 mM, 0,005 % (p/v) de albumina de soro bovino, 0,005 % (v/v) de Tween-20] foram adicionados, e a mistura foi incubada durante 15 min a 22 °C para permitir a pré-ligação dos compostos teste à enzima antes do início da reação da cinase. Em seguida, a reação de cinase foi iniciada pela adição de 3 μL de uma solução de trifosfato de adenosina (ATP, 3,33 mM => conc. final no volume de ensaio de 5 μL é 2 mM) e substrato (1,67 μM => conc. final no volume de ensaio de 5 μL é de 1 μM) em tampão de ensaio, e a mistura resultante foi incubada por um tempo de reação de 30 min a 22 °C. A concentração de EGFR foi ajustada dependendo da atividade da batelada da enzima e foi escolhida apropriada para ter o ensaio na faixa linear, a concentração típica era de 15 pg/μl. A reação foi interrompida pela adição de 3 μl de uma solução de reagentes de detecção de HTRF (estreptavidina-XL665 83,3 nM [Cisbio Bioassays, Codolet, France] e PT66-Tb-Criptato 1,67 nM, um anticorpo anti-fosfo-tirosina marcado com criptato de térbio de Cisbio Bioassays [em vez de PT66 Tb criptato, PT66 Eu Quelato de Perkin Elmer também pode ser usado]) em uma solução aquosa de EDTA (EDTA 133,3 mM, 0,2 % (p/v) de albumina de soro bovino em HEPES 50 mM pH 7,5)
[00426] A mistura resultante foi incubada 1 h a 22 °C para permitir a ligação do peptídeo fosforilado biotinilado ao estreptavidina-XL665 e ao PT66-Tb-Criptato. Posteriormente, a quantidade de substrato fosforilado foi avaliada pela medição da transferência de energia de ressonância do PT66-Tb-Criptato para o estreptavidina-XL665. Portanto, as emissões de fluorescência a 620 nm e 665 nm após excitação a 337 nm foram medidas em um leitor de HTRF, por exemplo, um Pherastar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) ou um Viewlux (Perkin-Elmer). A relação das emissões em 665 nm e em 622 nm foi tomada como medida para a quantidade de substrato fosforilado. Os dados foram normalizados (reação enzimática sem inibidor = 0 % de inibição, todos os outros componentes do ensaio, mas nenhuma enzima = 100 % de inibição). Normalmente, os compostos teste foram testados na mesma placa de microtitulação em 11 concentrações diferentes na faixa de 20 μM a 0,07 nM (20 μM, 5,7 μM, 1,6 μM, 0,47 μM, 0,13 μM, 38 nM, 11 nM, 3,1 nM, 0,9 nM, 0,25 nM e 0,07 nM, a série de diluição preparada separadamente antes do ensaio no nível das soluções 100 vezes concentradas em DMSO por diluições em série, as concentrações exatas podem variar dependendo dos pipetadores usados) em valores duplicados para cada concentração, e os valores de IC50 foram calculados usando Genedata Software Screener™.
Ensaio da cinase Exon20-mutante-EGFR (V769_D770insASV)
[00427] A atividade inibidora de compostos da presente invenção contra um receptor de fator de crescimento epidérmico (EGFR) com uma inserção da sequência de aminoácidos ASV entre V769 e D770 foi quantificada empregando o ensaio de atividade de cinase baseado em TR-FRET conforme descrito nos parágrafos seguintes.
[00428] Uma proteína de fusão recombinante de Glutation-S-Trans- ferase N-terminal (GST) e um fragmento de variante de EGFR humano (aminoácidos R669 a A1210 com inserção da sequência de aminoácidos ASV entre V769 e D770; ("EGFR ins ASV"), expresso em células de inseto Sf9 e purificado por meio de cromatografia de afinidade usando Glutathion Sepharose como descrito acima, foi usado como cinase. Como substrato para a reação de cinase, o peptídeo biotinilado biotina-Ahx-AEEEEYFELVAKKK (C-terminal em forma de amida) foi usado, o qual pode ser adquirido por exemplo, da empresa Biosintan GmbH (Berlin-Buch, Germany).
[00429] Para o ensaio, 50 nl de uma solução concentrada 100 vezes do composto teste em DMSO foram pipetados para uma placa de microtitulação de 384 cavidades de baixo volume preta ou uma placa de microtitulação de 1536 cavidades preta (ambos Greiner Bio- One, Frickenhausen, Germany), 2 μl de uma solução de EGFR em tampão de ensaio aquoso [Hepes 50 mM pH 7,0, MgCl2 10 mM, ditiotreitol 1 mM, EGTA 0,5 mM, orto-vanadato de sódio ativado 0,3 mM, 0,005 % (p/v) de albumina de soro bovino, 0,005 % (v/v) de Tween-20], e a mistura foi incubada durante 15 min a 22 °C para permitir a pré-ligação dos compostos teste à enzima antes do início da reação da cinase. Em seguida, a reação de cinase foi iniciada pela adição de 3 μL de uma solução de trifosfato de adenosina (ATP, 3,33 mM => conc. final no volume de ensaio de 5 μL é 2 mM) e substrato (1,67 μM => conc. final no volume de ensaio de 5 μL é de 1 μM) em tampão de ensaio, e a mistura resultante foi incubada por um tempo de reação de 30 min a 22 °C. A concentração de EGFR foi ajustada dependendo da atividade da batelada de enzima e foi escolhida de forma apropriada para ter o ensaio na faixa linear, a concentração típica foi de 2,5 pg/μl. A reação foi interrompida pela adição de 3 μl de uma solução de reagentes de detecção de HTRF (estreptavidina- XL665 83,3 nM [Cisbio Bioassays, Codolet, France] e PT66-Tb- Criptato 1,67 nM, um anticorpo anti-fosfo-tirosina marcado com criptato de térbio de Cisbio Bioassays [em vez de PT66 Tb criptato, PT66 Eu Quelato de Perkin Elmer também pode ser usado]) em uma solução aquosa de EDTA (EDTA 133,3 mM, 0,2 % (p/v) de albumina de soro bovino em HEPES 50 mM pH 7,5)
[00430] A mistura resultante foi incubada 1 h a 22 °C para permitir a ligação do peptídeo fosforilado biotinilado ao estreptavidina-XL665 e ao PT66-Tb-Criptato. Posteriormente, a quantidade de substrato fosforilado foi avaliada pela medição da transferência de energia de ressonância do PT66-Tb-Criptato para o estreptavidina-XL665. Portanto, as emissões de fluorescência a 620 nm e 665 nm após excitação a 337 nm foram medidas em um leitor de HTRF, por exemplo, um Pherastar (BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) ou um Viewlux (Perkin-Elmer). A relação das emissões em 665 nm e em 622 nm foi tomada como medida para a quantidade de substrato fosforilado. Os dados foram normalizados (reação enzimática sem inibidor = 0 % de inibição, todos os outros componentes do ensaio, mas nenhuma enzima = 100 % de inibição). Normalmente, os compostos teste foram testados na mesma placa de microtitulação em 11 concentrações diferentes na faixa de 20 μM a 0,07 nM (20 μM, 5,7 μM, 1,6 μM, 0,47 μM, 0,13 μM, 38 nM, 11 nM, 3,1 nM, 0,9 nM, 0,25 nM e 0,07 nM, a série de diluição preparada separadamente antes do ensaio no nível das soluções concentradas 100 vezes em DMSO por diluições em série, as concentrações exatas podem variar dependendo dos pipetadores usados) em valores duplicados para cada concentração, e os valores de IC50 foram calculados usando o software Genedata Screener™. A Tabela 2 mostra os resultados da inibição no ensaio bioquímico de EGFR mutante.
Ensaio de ATP cinase alta de Bub1
[00431] A atividade inibidora de Bub1 de compostos da presente invenção em uma alta concentração de ATP foi quantificada empregando o ensaio de ATP cinase alta de TR-FRET de Bub1 como descrito nos parágrafos seguintes.
[00432] O domínio catalítico recombinante marcado com His6 N- terminal de Bub1 humano (aminoácidos 704-1085), expresso em células de inseto (Hi5) e purificado por cromatografia de afinidade Ni- NTA e subsequente cromatografia por exclusão de tamanho, foi usado como enzima. Como substrato para a reação de cinase foi utilizado o peptídeo biotinilado biotina-Ahx-VLLPKKSFAEPG - SEQ ID 5 (terminal C na forma amida) que pode ser adquirido, por exemplo, da empresa Biosintan (Berlim, Germany).
[00433] Para o ensaio, 50 nl de uma solução concentrada 100 vezes do composto teste em DMSO foram pipetados para uma placa de microtitulação de 384 cavidades de baixo volume preta ou uma placa de microtitulação de 1536 cavidades preta (ambos Greiner Bio- One, Frickenhausen, Germany), 3 μl de uma solução de adenosina-tri- fosfato (ATP, 3,33 mM => conc. final no volume de ensaio de 5 μl é 2 mM) e substrato (1,67 μM => conc. final. no volume de ensaio de 5 μL é 1 μM) em tampão de ensaio aquoso [Tris/HCl 50 mM pH 7,5, cloreto de magnésio 10 mM (MgCl2), cloreto de potássio 200 mM (KCl), ditiotreitol 1,0 mM (DTT), orto-vanadato de sódio 0,1 mM, glicerol a 1 % (v/v), 0,01 % (p/v) de albumina de soro bovino (BSA), 0,005 % (v/v) de Trition X-100 (Sigma), mistura de inibidor de protease sem EDTA Completo 1x (Roche)] foram adicionados. Em seguida, a reação da cinase foi iniciada pela adição de 2 μl de uma solução de Bub1 em tampão de ensaio, e a mistura resultante foi incubada por um tempo de reação de 60 min a 22 °C. A concentração de Bub1 foi ajustada dependendo da atividade da batelada da enzima e foi escolhida apropriada para ter o ensaio na faixa linear, uma concentração típica é de cerca de 200 ng/mL. A reação foi interrompida pela adição de 3 μl de uma solução de reagentes de detecção TR-FRET (0,167 μM de estreptavidina-XL665 [Cisbio Bioassays, Codolet, France] e 1,67 nM de anticorpo anti-fosfo-serina [Merck Millipore, cat. # 35 -002] e anticorpo IgG anti-camundongo LANCE EU-W1024 0,67 nM [Perkin- Elmer, produto n° AD0077, como uma alternativa, um anticorpo IgG anti-camundongo marcado com criptato de térbio de Cisbio Bioassays pode ser usado]) em um solução aquosa de EDTA (EDTA 83,3 mM, albumina de soro bovino a 0,2 % (p/v) em HEPES 100 mM pH 7,5).
[00434] A mistura resultante foi incubada 1 h a 22 °C para permitir a formação de complexo entre o peptídeo biotinilado fosforilado, e os reagentes de detecção. Posteriormente, a quantidade de substrato fosforilado foi avaliada pela medição da transferência de energia de ressonância do quelato de Eu para a estreptavidina-XL. Portanto, as emissões de fluorescência a 620 nm e 665 nm após excitação a 350 nm foram medidas em um leitor TR-FRET, por exemplo, um Pherastar ou Pherastar FS (ambos da BMG Labtechnologies, Offenburg, Germany) ou um Viewlux (Perkin-Elmer). A relação das emissões em 665 nm e em 622 nm foi tomada como medida para a quantidade de substrato fosforilado. Os dados foram normalizados (reação enzimática sem inibidor = 0 % de inibição, todos os outros componentes do ensaio, mas nenhuma enzima = 100 % de inibição). Normalmente, os compostos teste foram testados na mesma placa de microtitulação em 11 concentrações diferentes na faixa de 20 μM a 0,7 nM (20 μM, 5,7 μM, 1,6 μM, 0,47 μM, 0,13 μM, 38 nM, 11 nM, 3,1 nM, 0,9 nM, 0,25 nM e 0,07 nM, a série de diluição preparada separadamente antes do ensaio no nível das soluções 100 vezes concentradas em DMSO por diluições em série, as concentrações exatas podem variar dependendo dos pipetadores usados) em valores duplicados para cada concentração, e os valores de IC50 foram calculados por um ajuste de parâmetro 4. A Tabela 3 mostra os resultados da inibição no ensaio de ATP cinase alta de Bub1.
[00435] Os compostos da presente invenção podem apresentar propriedades vantajosas adicionais, tais como, inibição mais potente de EGFR mutante com inserções de exon20 do que inibição de EGFR tipo selvagem, que pode ser útil para reduzir a toxicidade potencial decorrente da inibição excessiva de EGFR tipo selvagem.
Descrição de Dados Celulares (WT, insSVD)
[00436] As células 293T da ATCC foram transfectadas com construções de expressão pBABEpuro para WT EGFR ou EGFR- insSVD e vetor de embalagem pCL-Eco usando o reagente de transfecção Fugene-6 da Promega. As placas foram incubadas a 37 °C durante 48 h. O retrovírus foi colhido filtrando o sobrenadante do meio através de um filtro de 0,45 μm.
[00437] As células Ba/F3 adquiridas da DSMZ foram cultivadas em RPMI + FBS a 10 % + IL-3 10 ng/mL e infectadas com sobrenadante retroviral filtrado a uma diluição de 1:2. Polibreno foi adicionado a uma concentração de 8 μg/mL, as placas foram giradas por 90 min e incubadas durante a noite a 37 °C. 2 μg/mL de puromicina foram adicionados às células infectadas 24 h após a infecção, e as células foram continuamente cultivadas na presença de puromicina e 10 ng/mL de IL-3. A seguir, linhagens celulares Ba/F3 expressando estavelmente foram geradas: Ba/F3-EGFR-WT, Ba/F3-EGFR-insSVD, (Ba/F3- vetor-controle).
[00438] Para os ensaios de sobrevivência celular, as células Ba/F3 foram cultivadas até uma densidade de 1-2 milhões de células por mL, centrifugadas e ressuspensas em meio sem IL-3 e replantadas a uma concentração de 200.000-500.000 células por mL. As células que expressam ectopicamente WT EGFR ou EGFR-insSVD foram semeadas com 10 ng/mL de EGF de grau de cultura Millipore. As células que expressam ectopicamente o vetor vazio pBABEpuro foram semeadas com 10 ng/mL de IL-3.
[00439] 2 dias depois, as células foram semeadas em 50 μL em uma placa de 384 cavidades a uma concentração de 4000 células por cavidade para células testadas na ausência de IL-3 e 2000 células por cavidade para células testadas na presença de IL-3. 100 nL de composto foram adicionados a cada cavidade usando uma cabeça de pino de 100 nL, e as placas foram incubadas a 37 °C por 48 h.
[00440] A viabilidade celular foi medida adicionando 20 μL de Reagente de Viabilidade Celular Luminescente Cell Titer-Glo diluído 1:3 em PBS. As placas foram seladas com Perkin Elmer Top-Seal, invertidas várias vezes para misturar e imediatamente centrifugadas a 1000 rpm durante 2 min. As placas foram incubadas em condições de baixa luminosidade por 8-10 min, e a luminescência foi medida. Os valores de IC50 para os exemplos são mostrados na Tabela 4.
[00441] Em contrasl e com os compostos reivindicados desta invenção, os compostos reivindicados na técnica anterior mais próxima WO 2016/120196 não mostram as propriedades combinadas vantajosas descritas acima. Isso pode ser visto na Tabela 5.
Descrição de Dados Celulares (células Ba/F3 superexpressando EGFR mutante diferente de insSVD)
[00442] As células 293T da ATCC foram transfectadas com construções de expressão pBABEpuro para mutantes EGFR (V769_D770 insASV, D770_N771insNPG, N771_P772insH, H773_V774insNPH, E746_A750del, L858R, D770_N771insSVD C797S, E746_A750del C797S, L858R C797S, L861Q) ou ERBB2 mutante (A775_G776ins YVMA) e vetor de embalagem pCL-Eco usando o reagente de transfecção Fugene-6 da Promega. As placas foram incubadas a 37 °C durante 48 h. O retrovírus foi colhido filtrando o sobrenadante do meio através de um filtro de 0,45 μm.
[00443] As células Ba/F3 adquiridas da DSMZ foram cultivadas em RPMI + FBS a 10 % + IL-3 10 ng/mL e infectadas com sobrenadante retroviral filtrado a uma diluição de 1:2. Polibreno foi adicionado a uma concentração de 8 μg/mL, as placas foram giradas por 90 min e incubadas durante a noite a 37 °C. 2 μg/mL de puromicina foram adicionados às células infectadas 24 h após a infecção, e as células foram continuamente cultivadas na presença de puromicina e 10 ng/mL de IL-3. A seguir, linhagens celulares Ba/F3 expressando estavelmente foram geradas: Ba/F3-EGFR-V769_D770insASV, Ba/F3- EGFR-D770_N771 insNPG, Ba/F3-EGFR-N771_P772insH, Ba/F3- EGFR-H773_V774ins NPH, Ba/F3-EGFR-E746_A750del, Ba/F3- EGFR-L858R, Ba/F3-EGFR-D770_N771insSVD C797S, Ba/F3-EGFR- E746_A750del C797S, Ba/F3-EGFR-L858R C797S, Ba/F3-EGFR L861Q e Ba/F3-ERBB2-A775_ G776insYVMA (Ba/F3-vetor-controle).
[00444] Para os ensaios de sobrevivência celular, as células Ba/F3 foram cultivadas até uma densidade de 1-2 milhões de células por mL, centrifugadas e ressuspensas em meio sem IL-3 e replantadas a uma concentração de 200.000-500.000 células por mL. As células que expressam ectopicamente EGFR WT semeadas com EGF de grau de cultura Millipore 10 ng/mL e células Ba/F3 contendo EGFR mutante ou ERBB2 mutante foram cultivadas sem EGF. As células que expressam ectopicamente o vetor vazio pBABEpuro foram semeadas com 10 ng/mL de IL-3.
[00445] 2 dias depois, as células foram semeadas em 50 μL em uma placa de 384 cavidades a uma concentração de 4000 células por cavidade para células testadas na ausência de IL-3 e 2000 células por cavidade para células testadas na presença de IL-3. 100 nL de composto foram adicionados a cada cavidade usando uma cabeça de pino de 100 nL, e as placas foram incubadas a 37 °C por 48 h.
[00446] A viabilidade celular foi medida adicionando 20 μL de Reagente de Viabilidade Celular Luminescente Cell Titer-Glo diluído 1:3 em PBS. As placas foram seladas com Perkin Elmer Top-Seal, invertidas várias vezes para misturar e imediatamente centrifugadas a 1000 rpm durante 2 min. As placas foram incubadas em condições de baixa luminosidade por 8-10 min, e a luminescência foi medida. Os valores de IC50 para os exemplos são mostrados nas Tabelas 6, 7, 8 e 9.
Descrição de Dados Celulares (células PC9, EGFRex19del)
[00447] As células PC9 foram adquiridas da ATCC. 400 células PC9 por cavidade foram semeadas em meio de crescimento (DMEM, 10 % FCS) em uma placa de 384 cavidades (CORNING # 3571). Placa de referência de sementes para determinação do tempo zero no mesmo dia. Todas as placas foram incubadas durante a noite a 37 °C. Após 24 horas, os compostos teste foram adicionados em uma diluição de 7 etapas usando a impressora de compostos HP e incubados a 37 °C durante 72 horas. Após 3 dias, 30 μL/cavidade de solução de CTG (solução Promega Cell Titer Glo; catálogo # G755B e G756B) foram adicionados a cada cavidade, incubados por 30 minutos, e a placa lida em PheraStar. A proliferação é calculada após subtração dos valores de tempo zero de luminescência dos valores do dia 4 e comparação com cavidades não tratadas.
[00448] Os valores de IC50 foram determinados usando o ajuste de quatro parâmetros. Os valores de IC50 para os exemplos são mostrados na Tabela 9.
Descrição de Dados Celulares (células HCC-827, EGFRex19del)
[00449] As células HCC-827 foram adquiridas da ATCC. 400 células HCC-829 por cavidade foram semeadas em meio de crescimento (RPMI1640, 10 % FCS) em uma placa de 384 cavidades (CORNING # 3571). Placa de referência de sementes para determinação do tempo zero no mesmo dia. Todas as placas foram incubadas durante a noite a 37 °C. Após 24 horas, os compostos teste foram adicionados em uma diluição de 7 etapas usando a impressora de compostos HP e incubados a 37 °C durante 72 horas. Após 3 dias, 30 μL/cavidade de solução de CTG (solução Promega Cell Titer Glo; catálogo # G755B e G756B) foram adicionados a cada cavidade, incubados por 30 minutos, e a placa lida em PheraStar. A proliferação é calculada após subtração dos valores de tempo zero de luminescência dos valores do dia 4 e comparação com cavidades não tratadas.
[00450] Os valores de IC50 foram determinados usando o ajuste de quatro parâmetros. Os valores de IC50 para os exemplos são mostrados na Tabela 9. Referências: Arcila et al., 2012: Arcila et al., Clin Cancer Res. 2012 Sep 15;18(18):4910-8. Chen et al., 2016: Chen et al., Onco Targets Ther. 2016 Jul 8;9:4181-6 Chiu et al., 2015 : Chiu et al., J Thorac Oncol. 2015;10: 793-799 Doebele et al., 2018 : Doebele et al.. Poster 338, presented at the 54th Annual Meeting of the American Society of Clinical Oncology, June 1-5, 2018, Chicago, Illinois Floc'h et al., 2018 : Floc'h et al., Mol Cancer Ther. 2018 May 17(5) : 885-896 Hasako et al., 2018: Hasako et al., Mol Cancer Ther. 2018 Aug ;17(8):1648-1658 Jang et al., 2018: Jang et al., Angew Chem Int Ed Engl. 2018 Sep 3; 57(36): 11629-11633 Mok et al., 2009 : Mok et al., N Engl J Med. 2009 Sep 3;361(10):947-57 Mok et al., 2017: Mok et al., N Engl J Med. 2017 Feb 16;376(7):629-640 Oxnard et al., 2013: Oxnard et al., J Thorac Oncol. 2013 Feb; 8(2): 179-184 Oxnard et al., 2018: Oxnard et al., JAMA Oncol. 2018;4(11):1527-1534 Paez et al., 2004 : Paez et al., Science. 2004 Jun 4;304(5676):1497-500 Pao et al., 2005: Pao et al., PLoS Med. 2005 Mar;2(3):e73 Pao et al., 2010: Pao and Chmielecki, Nat Rev Cancer. 2010 Nov;10(11):760-74 Ramalingam et al.,2018a: Ramalingam et al., J Clin Oncol. 2018 Mar 20;36(9):841-849. Ramalingam et al., 2018b: Ramalingam et al., ESMO 2018; Annals Oncol. 2018 Oct : 29 (Suppl 8) Robichaux et al., 2018 : Robichaux et al., Nat Med. 2018 May;24(5):638-646 Sequist et al., 2013: Sequist et al., J Clin Oncol. 2013 Sep 20;31(27):3327-34 Soria et al., 2018: Soria et al., N Engl J Med. 2018 Jan 11;378(2):113-125. Thress et al., 2015: Thress et al., Nat Med. 2015 Jun; 21(6): 560-562. Yang et al., 2015: Yang et al., Lancet Oncol. 2015 Jul;16(7):830-8 Yasuda, 2013: Yasuda, Sci Transl Med. 2013 Dec 18;5(216):216ra177.

Claims (43)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (I), na qual R1 representa metila, etila, trifluorometila, 2,2-difluoroetila, ciano, cloro, bromo, metóxi ou difluorometóxi; R2 representa hidrogênio, metila, etila, fluoro, cloro ou bromo; R3 representa hidrogênio ou fluoro; R4 representa hidrogênio ou metila; R5 independentemente em cada occurrência representa hidrogênio, trifluorometila ou C1-C3 alquila, R5 sendo ligado a qualquer átomo de carbono do anel; R6 independentemente em cada occurrência representa hidrogênio, C1-C3-alquila ou C1-C3-haloalquila; R7 representa C1-C3-alquila ou C2-C3-haloalquila; R8 representa C1-C3-alquila ou C2-C3-haloalquila; X representa NR7 ou O; Y representa NR8 ou O; m representa 0, 1, 2 ou 3; n representa 0 ou 1; ou um N-óxido, um sal ou um tautômero do referido composto, ou um sal do referido N-óxido ou tautômero.
2. Composto de Fórmula (I), de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: R1 representa metila, etila, cloro, metóxi ou difluorometóxi; R2 representa metila, etila, fluoro ou cloro; R3 representa hidrogênio ou fluoro; R4 representa hidrogênio ou metila; R5 representa hidrogênio, metila ou trifluorometila, R5 sendo ligado a qualquer átomo de carbono do anel; R6 representa hidrogênio, metila ou trifluorometila; R7 representa C1-C2-alquila ou C2-C3-fluoroalquila; R8 representa C1-C2-alquila ou C2-C3-fluoroalquila; X representa NR7 ou O; Y representa NR8 ou O; m representa 0, 1 ou 2; n representa 0 ou 1; ou um N-óxido, um sal ou um tautômero do referido composto, ou um sal do referido N-óxido ou tautômero.
3. Composto de Fórmula (I), de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que: R1 representa metila, etila, cloro ou metóxi; R2 representa, fluoro ou cloro; R3 representa hidrogênio ou fluoro; R4 representa hidrogênio; R5 representa hidrogênio ou metila, e R5 sendo ligado a qualquer átomo de carbono do anel; R6 representa hidrogênio; R7 representa metila; R8 representa metila, 2,2,2-trifluoroetila ou 2,2-difluoro- etila; X representa NR7 ou O; Y representa NR8 ou O; m representa 0, 1, ou 2; n representa 0 ou 1; ou um N-óxido, um sal ou tautômero do referido composto, ou um sal do referido N-óxido ou tautômero.
4. Composto de Fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir do grupo que consiste em: 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-3-(3-fluoro-2-metoxianilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-metoxia- nilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-metoxia- nilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(2,3-dicloroanilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-1,5,6,7- tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(2,3-dicloroanilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(2,3-dicloroanilino)-2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4- il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[4-metilmorfolin-2-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(3S)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-4-(2,2-difluoroetil)morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro- 2-metoxianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-(2,2,2-trifluoroetil)morfolin-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[2-(4-dioxan-2-il)etóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{2-[(2R)-1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{2-[(2S)-1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]me- tóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-5-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-4-(2,2,2-trifluoroetil) morfolin-2-il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo [3,2-c] piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi] piridin-4-il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2R)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il] metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(2S)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metó- xi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2R)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2- metoxianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2- metoxianilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{2-[(2R)-1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-metoxi- anilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{2-[(2S)-1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-metoxia- nilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona. 3-(3-fluoro-2-metoxianilino)-2-(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}- piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-3-(3-fluoro-2- metilanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2- metilanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluoroanilino]-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi] piridin-4-il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-[2-(2,2-difluoroetil)-3-fluoroanilino]-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il] metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(3R)-4-metilmorfolin-3-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-{3-[(5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il)metóxi] piridin-4-il}-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2R)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2- il]metóxi}piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-3-(3-fluoro-2-metilanilino)-1,5, 6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-metilanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(3-fluoro-2-metilanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-{3-[(1,4-dioxan-2-il)metóxi]piridin-4-il}-1,5,6,7- tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-etilanilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin-4- il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{1-[1,4-dioxan-2-il]etóxi}piridin-4-il)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{(1S)-1-[(2S)-1,4-dioxan-2-il]etóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{(1S)-1-[(2R)-1,4-dioxan-2-il]etóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{(1R)-1-[(2S)-1,4-dioxan-2-il]etóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-(3-{(1R)-1-[(2R)-1,4-dioxan-2-il]etóxi} piridin-4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metilanilino)-2-{3-[(4-metilmorfolin-2-il)metóxi]piridin-4-il}- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2R)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-fluoro-2-metilanilino)-2-(3-{[(2S)-4-metilmorfolin-2-il]metóxi}piridin- 4-il)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluoroanilino)-1,5,6, 7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2R)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluoroanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3-fluoroanilino)- 1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3- fluoroanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2R)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3- fluoroanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 2-(3-{[(2S)-5,5-dimetil-1,4-dioxan-2-il]metóxi}piridin-4-il)-3-(2-etil-3- fluoroanilino)-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({1-[4-metilmorfolin-2-il]etil}óxi)piridin-4- il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({(1R)-1-[(2R)-4-metilmorfolin-2- il]etil}óxi)piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({(1S)-1-[(2S)-4-metilmorfolin-2- il]etil}óxi)piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({(1R)-1-[(2S)-4-metilmorfolin-2- il]etil}óxi)piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona 3-(3-cloro-2-metoxianilino)-2-[3-({(1S)-1-[(2R)-4-metilmorfolin-2- il]etil}óxi)piridin-4-il]-1,5,6,7-tetra-hidro-4H-pirrolo[3,2-c]piridin-4-ona
5. Composto de Fórmula Geral (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para tratamento ou profilaxia de doenças hiperproliferativas e/ou distúrbios responsivos à indução de morte celular, sendo que as doenças hiperproliferativas e/ou distúrbios responsivos à indução de morte celular são tumores hematológicos, tumores sólidos e/ou suas metástases.
6. Composto de Fórmula (I), de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o tumor abriga um EGFR mutante e/ou suas metástases.
7. Composto de Fórmula (I), de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o tumor é câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um EGFR mutante com mutação de inserção do éxon 20 e/ou suas metástases.
8. Composto de Fórmula (I), de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o tumor é câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um EGFR mutante com deleções in-frame no éxon 19 ou mutações pontuais no éxon 21, e/ou suas metástases.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o EGFR mutante com deleções inframe no éxon 19 é EGFR E746_A750del.
10. Composto, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o EGFR mutante com mutações pontuais no éxon 21 é L858R.
11. Composto de Fórmula (I), de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o tumor é câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um EGFR mutante com uma mutação de resistência adquirida D770_N771insSVD C797S, E746_A750del C797S ou L858R C797S, e/ou suas metástases.
12. Composto de Fórmula (I), de acordo com a reivindicação5, caracterizado pelo fato de que o tumor é câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um ERBB2 mutante com mutações de inserção no éxon 20, e/ou suas metástases.
13. Composto, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o ERBB2 mutante com mutações de inserção no éxon 20 é ERBB2 A775_ G776insYVMA.
14. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um composto de Fórmula Geral (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, juntamente com pelo menos um auxiliar farmaceuticamente aceitável.
15. Composição, de acordo com a reivindicação 114, caracterizada pelo fato de que é para tratamento de tumores hematológicos, tumores sólidos e/ou suas metástases.
16. Composto de Fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para uso na inibição da atividade da cinase do receptor de EGF em uma célula cancerosa ou para uso na redução da sobrevivência de uma célula cancerosa ou para indução da morte em uma célula cancerosa, sendo que a dita célula cancerosa compreende uma mutação em um receptor de EGF, sendo que a célula cancerosa é in vitro ou in vivo, sendo que o receptor de EGF compreende uma mutação no éxon 20, e sendo que a célula cancerosa é derivada de um câncer selecionado a partir do grupo que consiste em leucemia, síndrome mielodisplásica, linfoma maligno, tumores de cabeça e pescoço, tumores gastrointestinais, tumores endócrinos, mamários e outros tumores ginecológicos, tumores urológicos, tumores de pele e sarcomas.
17. Composto, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a célula cancerosa é derivada de um câncer selecionado a partir do grupo que consiste em papiloma nasossinusal invertido ou papiloma nasossinusal invertido associado ao carcinoma de células escamosas nasossinusais.
18. Composto de Fórmula Geral (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para tratamento de câncer em um indivíduo.
19. Composto de Fórmula Geral (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para tratamento de câncer em um indivíduo, sendo que o câncer é ou adquiriu resistência a uma terapia de receptor anti-EGF.
20. Composto de Fórmula Geral (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para realçar a eficácia de uma terapia de receptor anti-EGF, sendo que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em leucemia, síndrome mielodisplásica, linfoma maligno, tumores de cabeça e pescoço, tumores do tórax, tumores gastrointestinais, tumores endócrinos, mamários e outros tumores ginecológicos, tumores urológicos, tumores de pele e sarcomas.
21. Composto, de acordo a reivindicação 18 ou 19, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em leucemia, síndrome mielodisplásica, linfoma maligno, tumores de cabeça e pescoço, tumores do tórax, tumores gastrointestinais, tumores endócrinos, mamários e outros tumores ginecológicos, tumores urológicos, tumores de pele e sarcomas.
22. Composto, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em papiloma nasossinusal invertido ou papiloma nasossinusal invertido associado a carcinoma de células escamosas nasossinusais.
23. Composto, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que o tumor do tórax é câncer de pulmão de células não pequenas.
24. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 23, caracterizado pelo fato de que o receptor de EGF compreende uma mutação.
25. Composto, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que o receptor de EGF compreende uma mutação no éxon 20.
26. Composto, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o receptor de EGF compreende uma inserção no éxon 20.
27. Composto, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o receptor de EGF compreende uma inserção entre os aminoácidos V769-D770 e/ou entre D770-N771.
28. Composto, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a inserção é uma inserção de ASV e/ou SVD.
29. Composto, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que o receptor de EGF compreende uma inserção de ASV entre os aminoácidos V769-D770 e/ou uma inserção de SVD entre os aminoácidos D770-N771.
30. Método para seleção de um paciente para tratamento de câncer com um composto de Fórmula Geral (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que compreende a detecção da presença de uma mutação no éxon 20 do receptor de EGF em uma amostra biológica do indivíduo, determinando assim que o paciente deve ser tratado com o referido composto.
31. Composto de Fórmula Geral (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para tratar um paciente com câncer em uma terapia de receptor anti- EGF, sendo que o indivíduo é selecionado para terapia através da detecção da presença de uma mutação no éxon 20 do receptor de EGF em uma amostra biológica do indivíduo.
32. Composto, de acordo com a reivindicação 30 ou 31, caracterizado pelo fato de que o receptor de EGF compreende uma inserção no éxon 20.
33. Composto, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o receptor de EGF compreende uma inserção entre os aminoácidos V769-D770 e/ou entre os aminoácidos D770-N771.
34. Composto, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que a inserção é uma inserção de ASV e/ou SVD.
35. Composto, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o receptor de EGF compreende uma inserção de ASV entre os aminoácidos V769-D770 e/ou uma inserção de SVD entre os aminoácidos D770-N771.
36. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16, 20, 30 e 31, caracterizado pelo fato de que o câncer é câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um EGFR mutante com deleções in-frame no éxon 19 (como EGFR E746_A750del) ou mutações pontuais no éxon 21 (por exemplo, L858R), e/ou suas metástases.
37. Composto, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que o EGFR mutante com deleções inframe no éxon 19 é EGFR E746_A750del.
38. Composto, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que o EGFR mutante com mutações pontuais no éxon 21 é L858R.
39. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16, 20, 30 e 31, caracterizado pelo fato de que o câncer é câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um EGFR mutante com uma mutação de resistência adquirida D770_ N771insSVD C797S, E746_A750del C797S ou L858R C797S, e/ou suas metástases.
40. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16, 20, 30 e 31, caracterizado pelo fato de que o câncer é câncer de pulmão, particularmente câncer de pulmão que abriga um ERBB2 mutante com mutações de inserção no éxon 20 e/ou suas metástases.
41. Composto, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que o ERBB2 mutante com mutações de inserção no éxon 20 é ERBB2 A775_G776insYVMA.
42. Uso de um composto de Fórmula Geral (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de é para preparação de um medicamento e/ou composição farmacêutica para: (i) tratamento ou profilaxia de doenças e/ou distúrbios hiperproliferativos que respondem à indução de morte celular, sendo que as doenças e/ou distúrbios hiperproliferativos que respondem à indução de morte celular são tumores hematológicos, tumores sólidos e/ou suas metástases; (ii) inibição da atividade da cinase do receptor de EGF em uma célula cancerosa ou redução da sobrevivência de uma célula cancerosa ou indução da morte em uma célula cancerosa, sendo que a célula cancerosa é in vitro ou in vivo, sendo que a célula cancerosa compreende uma mutação em um receptor de EGF; sendo que o receptor de EGF inclui uma mutação no exon 20, sendo que a célula cancerosa é derivada de um câncer selecionado do grupo que consiste em leucemia, síndrome mielodisplásica, linfoma maligno, tumores de cabeça e pescoço, tumores gastrointestinais, tumores endócrinos, tumores mamários e outros tumores ginecológicos, tumores urológicos, tumores de pele e sarcomas; (iii) tratamento de câncer em um indivíduo; (iv) realçar a eficácia de uma terapia de receptor anti-EGF em um indivíduo, sendo que o câncer é selecionado do grupo que consiste em leucemia, síndrome mielodisplásica, linfoma maligno, tumores de cabeça e pescoço, tumores do tórax, tumores gastrointestinais, tumores endócrinos, tumores mamários e outros tumores ginecológicos, tumores urológicos, tumores de pele e sarcomas; e/ou (v) tratamento de um paciente com câncer em uma terapia de receptor anti-EGF, sendo que o paciente é selecionado para terapia através da detecção da presença de uma mutação no éxon 20 do receptor de EGF em uma amostra biológica do paciente.
43. Kit de partes, caracterizado pelo fato de que comprrende: (a) um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4; ou (b) uma composição farmacêutica, como definida na reivindicação 14; e (c) instruções para administração ao paciente.
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