BR112021010369A2 - Nanoemulsão antimicrobial - Google Patents

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aqueous
aqueous nanoemulsion
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Alireza Roostaee
Frédéric Picard-Jean
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Laboratoire M2
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Abstract

NANOEMULSÃO ANTIMICROBIAl. O presente relatório descreve uma formulação de nanoemulsão aquosa compreendendo um óleo, um solvente, um sorbato e uma saponina em uma quantidade suficiente para formar uma nanoemulsão do referido óleo em água e água suficiente para perfazer 100 por cento em peso. O relatório também descreve o uso da formulação de nanoemulsão como desinfetante, pesticida e/ou regulador de crescimento vegetal.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para: “NANOEMULSÃO ANTIMICROBIAL”
REFERÊNCIA CRUZADA COM APLICAÇÕES RELACIONADAS
[001] Este pedido reivindica a prioridade do Pedido de Patente Provisório dos Estados Unidos No. 62/825.927 depositado em 29 de março de 2019, cuja especificação é aqui incorporada por referência em sua totalidade.
FUNDAMENTOS (a) Campo
[002] O assunto divulgado geralmente se refere a formulações de nanoemulsões antimicrobianas e antifungicidas naturais e seus usos. Mais especificamente, o assunto divulgado se refere a formulações de desinfetantes e pesticidas compreendendo óleo de tomilho, solvente, sorbato, saponinas e água.
(b) Técnica Anterior Relacionada
[003] A maioria dos desinfetantes ou pesticidas de plantas são potencialmente prejudiciais ou tóxicos para humanos, animais e plantas. Os desinfetantes modernos, pesticidas ou antimicrobianos geralmente contêm um composto fenólico orgânico como ingrediente ativo de desinfecção.
Outros ingredientes são geralmente altas concentrações de um solvente e um tensoativo. Quando usado em concentrações mais altas, a presença de um determinado solvente e tensoativo pode aumentar sinergicamente os efeitos colaterais negativos dos tensoativos e, consequentemente, os efeitos colaterais negativos e, potencialmente, a toxicidade do próprio desinfetante.
[004] A presente invenção minimiza o risco de toxicidade de desinfetantes de plantas, pesticidas ou antimicrobianos para humanos e plantas usando óleo de tomilho e fornece alternativas ideais para agentes antimicrobianos e antifúngicos altamente sintéticos e tóxicos em uso na indústria agrícola. Agentes tradicionais apresentam aspectos desvantajosos, como a necessidade de proteção do trabalhador, limitações na quantidade de uso e eficácia, além da poluição do meio ambiente, gerando custos e problemas significativos de remediação. Certos tensoativos sintéticos contribuem para tais problemas. Portanto, há uma necessidade de agentes emulsificantes alternativos em um sistema de nanoemulsão de óleos naturais ou óleo essencial que também não negue a natureza e as vantagens dos outros constituintes naturais.
[005] A presente invenção também fornece várias outras vantagens em comparação com alternativas atualmente disponíveis.
[006] Embora o uso de óleos essenciais (EO) como antimicrobianos/fúngicos seja bem conhecido, o custo do EO para uso na agricultura industrial os torna proibitivos. A presente invenção fornece uma solução natural e econômica para os custos inerentemente elevados de EOs usando sorbato, um ingrediente geralmente reconhecido como seguro (GRAS), que é relativamente barato, e amplifica a eficácia das propriedades antimicrobianas do timol, através da formação de micelas menores nas nanoemulsões. O efeito líquido é um antimicrobiano extremamente poderoso, que pode contar com relativamente pouco EO.
[007] A invenção produz um tamanho de nanoemulsão que é relativamente impermeável à sedimentação gravitacional ou formação de creme. Isso significa que a mistura, agitação ou manipulação da invenção no local não é necessária, mesmo após a diluição.
[008] Por último, as perdas atribuíveis a doenças são o prejuízo mais significativo para a produtividade agrícola.
A eficácia na redução das perdas de safra por meio do controle de doenças é essencial para a indústria agrícola.
O uso de sorbatos, como o sorbato de potássio, no sistema resulta em uma sinergia em termos de efeito antimicrobiano.
Sabe-se que o sorbato de potássio, por si só, é um antimicrobiano eficaz. É frequentemente referido como um interruptor da membrana celular, que se acredita ser o mecanismo de ação, devido à sua capacidade de enfraquecer as membranas celulares dos patógenos. Da mesma forma, o timol, possui propriedades antimicrobianas que têm o mesmo mecanismo de ação na membrana celular. Juntos, o sorbato de potássio enfraquece a membrana celular e aumenta a capacidade do timol de particionar os constituintes lipídicos da membrana e produzir vazamento citoplasmático mais rapidamente e morte celular patogênica. Isso produz uma taxa muito mais alta de morte patogênica, o que, por sua vez, reduz as doenças e aumenta o rendimento da colheita.
SUMÁRIO
[009] De acordo com uma modalidade, é fornecida uma formulação aquosa de nanoemulsão que compreende: a) de cerca de 0,05% a cerca de 55% em peso de um óleo; b) de cerca de 0,04% a cerca de 65% em peso de um solvente; c) de cerca de 0,01% a cerca de 25% de um sorbato; d) de cerca de 0,00025% a cerca de 0,37% em peso de uma saponina, em uma quantidade suficiente para formar uma nanoemulsão do óleo em água; e) água suficiente para perfazer 100 por cento em peso.
[0010] O óleo pode ser um óleo essencial ou um ingrediente ativo do mesmo.
[0011] O óleo essencial pode ser um óleo essencial antimicrobiano, um óleo essencial antibacteriano, um óleo essencial desinfetante, um óleo essencial pesticida ou uma combinação dos mesmos.
[0012] O óleo essencial pode ser qualquer um de óleo de anis, óleo de limão, óleo de laranja, óleo de orégano, óleo de alecrim, óleo de gaultéria, óleo de tomilho, óleo de lavanda, óleo de cravo, óleo de lúpulo, óleo de melaleuca (tea tree), óleo de citronela, óleo de trigo, óleo de cevada, óleo de capim-limão, óleo de folha de cedro, óleo de madeira de cedro, óleo de canela, óleo de pulga-de-grama (fleagrass), óleo de gerânio, óleo de sândalo, óleo de violeta, óleo de airela (cranberry), óleo de eucalipto, óleo de verbena, óleo de hortelã-pimenta, óleo de manjericão, óleo de erva-doce, óleo de abeto, óleo de bálsamo, óleo de ocmea origanum, óleo de Hydastis carradensis, óleo de Berberidaceae daceae, óleo de Ratanhiae, óleo de cúrcuma longa, óleo de gergelim, óleo de noz de macadâmia, óleo de prímula, óleo de coentro, bagas de pimentão óleo, óleo de rosa, óleo de bergamota, óleo de pau-rosa (rosewood), óleo de camomila, óleo de sálvia, óleo de salvia sclarea (clary sage), óleo de cipreste, óleo de erva-doce, óleo de olíbano, óleo de gengibre, óleo de toranja, óleo de jasmim, óleo de zimbro, óleo de cal (lime), óleo de tangerina, óleo de manjerona, óleo de mirra, óleo de neroli, óleo de patchouli, óleo de pimenta, óleo de pimenta preta, óleo de petitgrain, óleo de pinho, óleo de rosa de otto, óleo de hortelã, óleo de nardo, óleo de vetiver, um óleo essencial de conífera, ylang ylang, ou combinações dos mesmos.
[0013] O óleo essencial pode ser óleo de tomilho.
[0014] O óleo essencial pode ser óleo de alecrim.
[0015] O ingrediente ativo pode ser timol, carvacrol, cinamaldeído, citral, mentol, geraniol, capsaicina, paracimeno ou combinações dos mesmos.
[0016] O óleo pode ser óleo de neem, óleo de semente de algodão e uma combinação dos mesmos.
[0017] A formulação de nanoemulsão aquosa pode compreender ainda de cerca de 0,0002% a cerca de 0,3% em peso de um agente de ajuste de pH.
[0018] O óleo de tomilho pode ser de origem natural, de origem sintética ou uma combinação dos mesmos.
[0019] O óleo de alecrim pode ser de origem natural, de origem sintética ou uma combinação dos mesmos.
[0020] O solvente pode ser pelo menos um de 1,2- dicloroetano, 2-butanona, acetona, acetonitrila, benzeno, tetracloreto de carbono, clorofórmio, ciclo-hexano, hexano, pentano, tetra-hidrofurano, 1,1-dicloroetano, 1,2- dicloroetano, 1-butanol, 1-heptanol, 1-hexanol, 1-octanol, 1-pentanol, 1-propanol, 2-aminoetanol, 2-butanol, 2- butanona, 2-pentanol, 2-pentanona, 2-propanol, 3-pentanol, 3-pentanona, ácido acético, acetona, acetonitrila, acetil acetona, anilina, anisol, benzeno, benzonitrila, álcool benzílico, acetato de butila, lactato de butila, dissulfeto de carbono, tetracloreto de carbono, clorobenzeno, clorofórmio, ciclo-hexano, ciclo-hexanol, ciclo-hexanona, diclorometano, éter dietílico, dietilamina, dietilenoglicol,
diglima, éter diisopropílico, dimetoxietano, dimetilformamida, dimetilftalato, dimetilsulfóxido, di-n- butilftalato, dioxano, etanol, éter, acetato de etila, etil acetoacetato, etil benzoato, etilenoglicol, glicerol, heptano, hexano, i-butanol, isopropanol, metanol, acetato de metila, éter metil t-butílico, cloreto de metileno, éter metil-t-butílico, N, N-dimetilanilina, pentano, p-xileno, piridina, álcool t-butílico, tetra-hidrofurano, tolueno, tricloroetileno, água, água pesada e xileno.
[0021] Pelo menos um solvente pode ser pelo menos dois solventes, pelo menos três solventes, pelo menos quatro solventes ou pelo menos cinco solventes.
[0022] Pelo menos um solvente pode ser pelo menos três solventes.
[0023] Pelo menos três solventes podem compreender isopropanol, glicerol e lactato de butila.
[0024] O sorbato pode ser sorbato de potássio, sorbato de sódio, sorbato de cálcio, ácido sórbico ou combinações dos mesmos.
[0025] O sorbato pode ser sorbato de potássio.
[0026] A saponina pode ser fornecida por um extrato vegetal.
[0027] O extrato vegetal pode ser um extrato de Quillaja saponaria, um extrato de Yucca schidigera, um extrato de castanha da Índia, um extrato de semente de chá, um extrato de soja e combinações dos mesmos.
[0028] O extrato vegetal pode ser um extrato de Quillaja saponaria.
[0029] A formulação aquosa de nanoemulsão compreende de cerca de 0,004 a cerca de 0,5% em peso do extrato de Quillaja saponaria.
[0030] O agente de ajuste de pH pode ser pelo menos um de ácido cítrico, ácido láctico, ácido clorídrico, ácido bórico, ácido acético, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, ácido sulfúrico, carbonato de cálcio (CaCO3), carbonato de amônio, bicarbonato de amônio, citrato de amônio, citrato de sódio, carbonato de magnésio, carbonato de sódio, fosfato mono, di e/ou trissódico, fosfato mono, di e/ou tripotássico, Tris (hidroximetil) aminometano (TRIS), aminoácidos e zwitterions, tais como glicina, ácido 2-amino- 2metil-1,3-propanodiol (AMPD), N-(1,1-Dimetil-2- hidroxietil)-3-amino-2-hidroxipropanossulfônico (AMPSO), N- Glicilglicina (Gly-Gly), ácido 4-(2-hidroxietil)piperazina- 1-propanossulfônico (EPPS ou HEPPS), ácido 3- (ciclo- hexilamino)-1-propanossulfônico (CAPS), Ácido 3- (ciclo- hexilamino)-2-hidroxi-1-propanossulfônico (CAPSO), ácido 2- (ciclo-hexilamino) etanossulfônico (CHES), ácido N, N-bis[2- hidroxietil]-2-aminoetanossulfônico (BES), Ácido (2-[2- hidroxi-1,1-bis(hidroximetil) etilamino] etanossulfônico) (TES), ácido 2-(N-morfolino) etanossulfônico (MES), N-
[Tris(hidroximetil)metil] glicina (Tricina); Ácido N- tris(hidroximetil) metil-3-aminopropanossulfônico (TAPS) e ácido 3-N-morfolino propanossulfônico (MOPS), ácido piperazínico-N, N'-bis[2-hidroxipropanossulfônico](POPSO) e combinações dos mesmos.
[0031] O agente de ajuste de pH pode ser pelo menos ácido cítrico.
[0032] A formulação aquosa de nanoemulsão pode compreender ainda vitamina C.
[0033] A formulação de nanoemulsão aquosa pode compreender de cerca de 0,002 a cerca de 5% em peso da vitamina C.
[0034] A formulação de nanoemulsão aquosa pode compreender: a) de cerca de 0,05% a cerca de 55% em peso de óleo; b) de cerca de 0,005% a cerca de 7,5% em peso de isopropanol; c) de cerca de 0,02% a cerca de 30% em peso de glicerol; d) de cerca de 0,02% a cerca de 27% em peso de lactato de butila; e) de cerca de 0,01% a cerca de 25% de sorbato de potássio; f) de cerca de 0,0004% a cerca de 0,5% em peso de um extrato de Quillaja saponaria, em uma quantidade suficiente para formar uma nanoemulsão do óleo em água;
g) de cerca de 0,0002% a cerca de 0,3% em peso de ácido cítrico; h) água suficiente para perfazer 100 por cento em peso.
[0035] De acordo com outra modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção não compreende tensoativo adicional.
[0036] O pH pode variar de cerca de 6 a cerca de 9.
[0037] De acordo com outra modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão pode compreender ainda um tensoativo ou um outro agente emulsificante.
[0038] De acordo com outra modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão não compreende desinfetante, pesticida ou sanitizantes adicionais.
[0039] De acordo com uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção é para uso como uma formulação desinfetante.
[0040] De acordo com uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção é para uso como uma formulação pesticida para o controle de uma praga.
[0041] De acordo com uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção é para uso na regulação do crescimento de uma semente ou planta.
[0042] A formulação aquosa de nanoemulsão pode compreender ainda um outro pesticida, um fertilizante, um antiespumante, um regulador de crescimento vegetal ou combinações dos mesmos.
[0043] O outro pesticida pode ser escolhido de um algicida, um agente anti-incrustante, um desinfetante, um fungicida, um fumigante, um herbicida, um moluscicida, um ovicida, um rodenticida, um crescimento de inseto, um bactericida, um virucida, um repelente de insetos, um repelente de artrópodes, um nematicida, um inseticida, um acaricida, um herbicida e um regulador de crescimento vegetal.
[0044] O fertilizante pode ser escolhido de fertilizantes um fertilizante inorgânico, um fertilizante de nitrogênio, um fertilizante de potássio, um fertilizante de fosfato, um fertilizante orgânico, um estrume, um composto, um fosfato de rocha, uma farinha de osso, uma alfafa, um pedaço de madeira, uma langbeinita, uma colheita de cobertura, sulfato de potássio, um pó de rocha, cinzas, uma refeição de sangue, uma farinha de peixe, uma emulsão de peixe, uma alga, uma quitosana e um melaço.
[0045] O antiespumante pode ser escolhido a partir de um óleo mineral, um óleo vegetal, uma cera de parafina, uma cera de éster, uma sílica, um álcool graxo, um silicone, um polietilenoglicol, um polipropilenoglicol, copolímero e uma alquila poliacrilato.
[0046] O regulador de crescimento vegetal pode ser escolhido de um carbamato, um hidrocarboneto clorado, ciclo-
hexadiona, um ácido orgânico, ancimidol, etefon, ácido giberélico, giberelinas e benazladenina, hidrazida maleica, NAA, naftaleno acetamida, paclobutrazol, ácido N- acetilaspártico.
[0047] De acordo com outra modalidade, é fornecido um método para usar a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção, compreendendo a etapa de diluir a formulação aquosa de nanoemulsão com água.
[0048] De acordo com outra modalidade, é fornecido um método de desinfecção de uma superfície que compreende a aplicação da formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção a uma superfície que precisa ser desinfetada.
[0049] De acordo com outra modalidade, é fornecido um método para o controle de uma praga de um solo, uma semente ou uma planta, o método compreendendo o contato da semente ou planta com uma quantidade pesticida da formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção.
[0050] Na formulação de nanoemulsão aquosa da presente invenção, ou o método da presente invenção, em que a praga pode ser escolhida a partir de um inseto, um nematoide, um fungo, uma bactéria, uma larva, uma planta, um animal, um vírus, um parasita, um gastrópode, um artrópode, um caracol, uma lesma, uma alga ou combinações dos mesmos.
[0051] Na formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção, ou o método da presente invenção, em que a praga pode ser fogo bacteriano, oídio, septório e botrítis.
[0052] Uma planta pode ser uma erva daninha.
[0053] O artrópode pode ser um ácaro.
[0054] O inseto pode ser uma mariposa.
[0055] De acordo com outra modalidade, é fornecido um método para regular o crescimento de uma semente ou planta, o método compreendendo o contato da semente ou planta com uma quantidade reguladora de crescimento da formulação desinfetante aquosa da presente invenção.
[0056] O crescimento regulado pode compreender um aumento no número de frutas, vegetais, bulbos ou tubérculos da planta.
[0057] A regulação do crescimento pode compreender um aumento no tamanho da fruta, legume, bolbo ou tubérculo da planta.
[0058] A regulação do crescimento pode compreender um aumento no número de plantas saudáveis.
[0059] A planta pode ser escolhida a partir de uma bananeira, uma macieira, uma pereira, uma planta de batata, uma planta de arroz, uma cafeeira, uma árvore cítrica, uma cebola, ginseng, soja, uma erva daninha, um tomate.
[0060] Os seguintes termos são definidos abaixo.
[0061] O uso da palavra "um" ou "uma" quando usado em conjunto com o termo "compreendendo" nas reivindicações e/ou no relatório descritivo pode significar "um", mas também é consistente com o significado de "um ou mais", “Pelo menos um” e “um ou mais do que um”. Da mesma forma, a palavra "outro" pode significar pelo menos um segundo ou mais.
[0062] Conforme usado neste relatório descritivo e na(s) reivindicação(ões), as palavras "compreendendo" (e qualquer forma de compreender, como "compreender" e "compreender"), "tendo" (e qualquer forma de ter, como "ter" e “Tem”), “incluindo” (e qualquer forma de incluir, como “inclui” e “inclui”) ou “contendo” (e qualquer forma de conter, como “contém” e “contém”), são inclusivos ou em aberto e não exclui elementos ou etapas do processo adicionais não solicitados.
[0063] O termo "cerca de" é usado para indicar que um valor inclui uma variação inerente de erro para o dispositivo ou método sendo empregado para determinar o valor.
[0064] Observa-se que termos como "preferencialmente", "comumente" e "tipicamente" não são utilizados neste documento para limitar o escopo da invenção reivindicada ou para implicar que certas características são críticas, essenciais ou mesmo importantes para a estrutura ou função de a invenção reivindicada. Em vez disso, esses termos destinam-se apenas a destacar características alternativas ou adicionais que podem ou não podem ser utilizadas em uma modalidade particular da presente invenção.
[0065] Para fins de descrição e definição da presente invenção, é notado que o termo "substancialmente" é utilizado neste relatório para representar o grau inerente de incerteza que pode ser atribuído a qualquer comparação quantitativa, valor, medição ou outra representação. O termo "substancialmente" também é utilizado neste relatório para representar o grau pelo qual uma representação quantitativa pode variar de uma referência declarada sem resultar em uma mudança na função básica do assunto em questão.
[0066] O termo "formulação", como aqui utilizado, destina-se a abranger um produto que compreende os ingredientes especificados nas quantidades especificadas, bem como qualquer produto que resulte, direta ou indiretamente, da combinação dos ingredientes especificados nas quantidades especificadas. Além disso, a formulação se refere à mistura em que as substâncias na mistura não reagem umas com as outras, mas têm propriedades desejáveis como uma mistura. Tal termo em relação à composição farmacêutica pretende abranger qualquer composição feita pela mistura da formulação da presente invenção e um veículo farmaceuticamente aceitável. Por "farmaceuticamente aceitável" ou "aceitável" entende-se que o carreador, diluente ou excipiente deve ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não deletério para o receptor dos mesmos.
[0067] Porcentagem em peso, porcentagem em peso, % em peso, % em peso e semelhantes são sinônimos que se referem à concentração de uma substância como o peso dessa substância dividido pelo peso da composição e multiplicado por 100.
[0068] O termo "desinfetante", como aqui utilizado, se refere a um agente antimicrobiano que, na aplicação, destrói ou reduz o crescimento de microrganismos que vivem na superfície do objeto no qual é aplicado.
[0069] O termo "antimicrobiano", conforme usado neste relatório, se refere a um agente que mata microrganismos ou interrompe seu crescimento.
[0070] O termo "pesticida", conforme usado neste documento, se refere a substâncias destinadas a controlar pragas, incluindo ervas daninhas. O termo pesticida inclui todos os seguintes: herbicida, inseticidas (que podem incluir reguladores de crescimento de insetos, termiticidas, etc.) nematicida, moluscicida, piscicida, avicida, rodenticida, bactericida, repelente de insetos, repelente animal, antimicrobiano, fungicida e desinfetante (antimicrobiano) os mais comuns são os herbicidas que respondem por aproximadamente 80% de todo o uso de pesticidas. A maioria dos pesticidas tem como objetivo servir como produtos fitofarmacêuticos (também conhecidos como produtos de proteção de colheitas) que, em geral, protegem as plantas de ervas daninhas, fungos ou insetos.
[0071] O termo "biopesticida", como aqui utilizado, se refere à contração de "pesticidas biológicos" e se refere a certos tipos de pesticidas derivados de materiais naturais como animais, plantas, bactérias e certos minerais.
[0072] O termo "antisséptico", conforme usado neste relatório, se refere a substâncias antimicrobianas que são aplicadas a quaisquer superfícies, como pisos, paredes, tetos, bem como tecidos vivos para reduzir a possibilidade de contaminação microbiana, incluindo infecção, sepse ou putrefação.
[0073] O termo "origem natural", como aqui utilizado, se refere a compostos fenólicos e saponinas que existem ou são produzidos na natureza. Esses compostos fenólicos e saponinas podem ser extraídos ou isolados do seu ambiente natural por qualquer meio adequado. É claro que esses compostos fenólicos e saponinas também podem ser produzidos sinteticamente pela mão do homem. Esses equivalentes sintéticos estão dentro da definição de “origem natural”.
[0074] O termo "micelas", como aqui utilizado, se refere a agregados formados por moléculas anfifílicas quando suspensas em uma solução aquosa. O comprimento da cauda apolar de um detergente, a natureza e o tamanho da cabeça polar ou iônica de um detergente, a quantidade e o tipo de saponinas, a acidez da solução, a temperatura e a presença de sais adicionados são os fatores mais importantes que determinam a forma e o tamanho das micelas obtidas. Micelas são amplamente utilizadas no campo industrial e biológico por sua capacidade de dissolver e transportar substâncias polares através de um meio aquoso. A capacidade de transporte das micelas depende muito de seu tamanho e forma.
[0075] O termo "nanoemulsão", como aqui utilizado, se refere a emulsões óleo-em-água (o/a) com diâmetros médios de gotícula variando de cerca de 10 a cerca de 1000 nm, ou cerca de 20 a cerca de 1000 nm, ou cerca de 30 a cerca de 1000 nm.
nm, ou cerca de 40 a cerca de 1000 nm, ou cerca de 50 a cerca de 1000 nm, e muitas vezes com tamanho médio de gota entre cerca de 10 a cerca de 500 nm, ou cerca de 20 a cerca de 500 nm, ou cerca de 30 a cerca de 500 nm, ou cerca de 40 a cerca de 500 nm, ou cerca de 50 a cerca de 500 nm, ou cerca de 100 a cerca de 500 nm ou cerca de 70 a cerca de 300 nm, ou cerca de 50 a cerca de 300 nm, ou cerca de 10 a cerca de 200 nm, ou cerca de 20 a cerca de 200 nm, ou cerca de 30 a cerca de 200 nm, ou cerca de 40 a cerca de 200 nm, ou cerca de 50 a cerca de 200 nm, ou cerca de 60 a cerca de 200 nm, ou cerca de 70 a cerca de 200 nm, ou cerca de 80 a cerca de 200 nm, ou cerca de 90 a cerca de 200 nm, ou cerca de 100 a cerca de 200 nm, ou cerca de 125 a cerca de 200 nm, ou cerca de 150 a cerca de 200 nm, ou cerca de 175 a cerca de 200 nm, ou cerca de 10 a cerca de 175 nm, ou cerca de 20 a cerca de 175 nm, ou cerca de 30 a cerca de 175 nm, ou cerca de 40 a cerca de 175 nm, ou cerca de 50 a cerca de 175 nm, ou cerca de 60 a cerca de 175 nm, ou cerca de 70 a cerca de 175 nm, ou cerca de 80 a cerca de 175 nm, ou cerca de 90 a cerca de 175 nm,
ou cerca de 100 a cerca de 175 nm, ou cerca de 125 a cerca de 175 nm, ou cerca de 150 a cerca de 175 nm, ou cerca de 10 a cerca de 150 nm, ou cerca de 20 a cerca de 150 nm, ou cerca de 30 a cerca de 150 nm, ou cerca de 40 a cerca de 150 nm,
ou cerca de 50 a cerca de 150 nm, ou cerca de 60 a cerca de
150 nm, ou cerca de 70 a cerca de 150 nm, ou cerca de 80 a cerca de 150 nm, ou cerca de 90 a cerca de 150 nm, ou cerca de 100 a cerca de 150 nm, ou cerca de 125 a cerca de 150 nm,
ou cerca de 10 a cerca de 125 nm, ou cerca de 20 a cerca de
125 nm, ou cerca de 30 a cerca de 125 nm, ou cerca de 40 a cerca de 125 nm, ou cerca de 50 a cerca de 125 nm, ou cerca de 60 a cerca de 125 nm, ou cerca de 70 a cerca de 125 nm,
ou cerca de 80 a cerca de 125 nm, ou cerca de 90 a cerca de
125 nm, ou cerca de 100 a cerca de 125 nm, ou cerca de 10 a cerca de 100 nm, ou cerca de 20 a cerca de 100 nm, ou cerca de 30 a cerca de 100 nm, ou cerca de 40 a cerca de 100 nm,
ou cerca de 50 a cerca de 100 nm, ou cerca de 60 a cerca de
100 nm, ou cerca de 70 a cerca de 100 nm, ou cerca de 80 a cerca de 100 nm, ou cerca de 90 a cerca de 100 nm, ou cerca de 10 a cerca de 90 nm, ou cerca de 20 a cerca de 90 nm, ou cerca de 30 a cerca de 90 nm, ou cerca de 40 a cerca de 90 nm, ou cerca de 50 a cerca de 90 nm, ou cerca de 60 a cerca de 90 nm, ou cerca de 70 a cerca de 90 nm, ou cerca de 80 a cerca de 90 nm, ou cerca de 10 a cerca de 80 nm, ou cerca de 20 a cerca de 80 nm, ou cerca de 30 a cerca de 80 nm, ou cerca de 40 a cerca de 80 nm, ou cerca de 50 a cerca de 80 nm, ou cerca de 60 a cerca de 80 nm, ou cerca de 70 a cerca de 80 nm, ou cerca de 10 a cerca de 70 nm, ou cerca de 20 a cerca de 70 nm, ou cerca de 30 a cerca de 70 nm, ou cerca de 40 a cerca de 70 nm, ou cerca de 50 a cerca de 70 nm, ou cerca de 60 a cerca de 70 nm, ou cerca de 10 a cerca de 60 nm, ou cerca de 20 a cerca de 60 nm, ou cerca de 30 a cerca de 60 nm, ou cerca de 40 a cerca de 60 nm, ou cerca de 50 a cerca de 60 nm, ou cerca de 10 a cerca de 50 nm, ou cerca de 20 a cerca de 50 nm, ou cerca de 30 a cerca de 50 nm, ou cerca de 40 a cerca de 50 nm, ou cerca de 10 a cerca de 40 nm, ou cerca de 20 a cerca de 40 nm, ou cerca de 30 a cerca de 40 nm, ou cerca de 10 a cerca de 30 nm, ou cerca de 20 a cerca de 30 nm, ou cerca de 10 a cerca de 20 nm.
[0076] O termo "patógeno" se destina a significar um agente que pode produzir doenças. Um patógeno também pode ser referido como um agente infeccioso ou simplesmente um germe. Normalmente, o termo é usado para descrever um microrganismo ou agente infeccioso, como um vírus, bactéria, protozoário, príon, viróide ou fungo, gastrópodes, artrópodes, caracóis, lesmas, algas. Animais pequenos, como certos tipos de vermes e larvas de insetos e vertebrados (mamíferos e pássaros), também podem produzir doenças. No entanto, esses animais são geralmente, na linguagem comum, referidos como parasitas em vez de patógenos.
[0077] Os termos "regulando o crescimento da planta" e "quantidade de regulação do crescimento" pretendem significar que o método e a composição da presente invenção regulam pelo menos um aspecto do crescimento de uma planta.
A regulação do crescimento não precisa ser em todos os aspectos do crescimento das plantas. Por exemplo, a composição da presente invenção pode regular o crescimento de qualquer uma das folhas, folhas, flores, caules, ramos, frutas, vegetais, bolbo, tubérculos ou qualquer outra parte da planta, independentemente de outras partes do plantar.
Conforme usado neste relatório, o termo "quantidade de regulação do crescimento" se destina a significar uma quantidade da composição da presente invenção que faz com que pelo menos um dos aspectos do crescimento de uma planta seja regulado conforme definido acima. A regulação do crescimento da planta também pode incluir um aumento geral no crescimento de uma planta. A regulação do crescimento das plantas também pode se manifestar como um aumento no número de plantas saudáveis em uma cultura de plantas composta por vários indivíduos. A regulação do crescimento das plantas também pode incluir a estimulação do amadurecimento dos frutos. A regulação do crescimento da planta também pode incluir a inibição do crescimento da planta e do crescimento do broto. A regulação do crescimento da planta também pode incluir um aumento na floração. A regulação do crescimento das plantas também pode incluir a regulação da senescência de folhas e frutos. A quantidade reguladora do crescimento pode abranger uma faixa de concentração sobre a qual o efeito pode ser observado, e cada efeito regulador do crescimento pode ser observado em detrimento do crescimento de outras partes da planta. De preferência, o efeito de regulação do crescimento pode ser obtido sem quaisquer efeitos fitotóxicos para o restante das plantas, mas em algumas modalidades isso pode não ser possível.
[0078] O termo "quantidade de pesticida" significa uma quantidade da composição da presente invenção que será suficiente para controlar uma determinada praga. Isso, a quantidade pode variar de acordo com a praga alvo, o que implica que uma concentração mais baixa pode ser suficiente para controlar uma praga, e que uma concentração mais alta pode ser necessária para controlar outra praga.
[0079] Os termos "fruta" e "vegetal" pretendem significar o uso da linguagem comum de "fruta" e "vegetal", que normalmente significa as estruturas associadas a sementes carnudas de uma planta que são doces ou azedas e comestíveis em estado cru, como maçãs, bananas, uvas, limões, laranjas e morangos. Também inclui o uso botânico de “frutas” e “vegetais”, que inclui muitas estruturas que não são comumente chamadas de “frutas” ou “vegetais”, como vagens de feijão, grãos de milho, tomates e grãos de trigo.
[0080] O termo “tubérculo” pretende significar as estruturas aumentadas em algumas espécies de plantas usadas como órgãos de armazenamento de nutrientes. Eles são usados para a perenização da planta (sobrevivência no inverno ou meses secos), para fornecer energia e nutrientes para o crescimento durante a próxima estação de crescimento e como meio de reprodução assexuada. Os tubérculos do caule são formados a partir de rizomas espessados (caules subterrâneos) ou estolões (conexões horizontais entre organismos). As espécies de plantas comuns com tubérculos de caule incluem batata e inhame. Algumas fontes também tratam raízes laterais modificadas, (tubérculos de raiz) sob a definição; estes são encontrados na batata-doce, mandioca e dália.
[0081] As características e vantagens do assunto aqui tratado se tornarão mais evidentes à luz da seguinte descrição detalhada das modalidades selecionadas, conforme ilustrado nas figuras anexas. Como será percebido, o assunto divulgado e reivindicado é capaz de modificações em vários aspectos, tudo sem se afastar do escopo das reivindicações.
Consequentemente, os desenhos e a descrição devem ser considerados como ilustrativos por natureza, e não como restritivos e o escopo completo do assunto é estabelecido nas reivindicações.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0082] Outras características e vantagens da presente divulgação se tornarão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada, tomada em combinação com as figuras anexas, nas quais:
[0083] A Fig. 1A ilustra o tamanho das micelas na formulação desinfetante aquosa da presente invenção em comparação com tecnologias anteriores.
[0084] A Fig. 1B ilustra o tamanho das micelas na formulação desinfetante aquosa da presente invenção em comparação com tecnologias anteriores.
[0085] A Fig. 2 ilustra a eficácia antibacteriana da formulação desinfetante aquosa da presente invenção feita com óleo de tomilho natural e cristais de timol sintéticos.
[0086] A Fig. 3 ilustra a eficácia antibacteriana de formulações desinfetantes aquosas com diferentes composições.
[0087] A Fig. 4 ilustra a eficácia antibacteriana de formulações desinfetantes aquosas com base em óleos de tomilho sintéticos naturais idênticos.
[0088] A Fig. 5 ilustra a eficácia antibacteriana de formulações desinfetantes aquosas com base em óleos essenciais de orégano.
[0089] A Fig. 6 ilustra a eficácia antibacteriana de formulações desinfetantes aquosas à base de óleos essenciais de orégano.
[0090] A Fig. 7 ilustra a eficácia antibacteriana de formulações desinfetantes aquosas à base de óleos essenciais de alecrim.
[0091] A Fig. 8 ilustra a eficácia antibacteriana de formulações desinfetantes aquosas com base em óleos de tomilho sintéticos naturais idênticos de acordo com modalidades da presente invenção.
[0092] A Fig. 9 ilustra a eficácia antibacteriana de formulações desinfetantes aquosas com base em óleos de tomilho sintéticos naturais idênticos de acordo com modalidades da presente invenção, usados como um concentrado.
[0093] A Fig. 10 ilustra a eficácia antibacteriana de formulações desinfetantes aquosas com base em óleos de tomilho sintéticos naturais idênticos de acordo com modalidades da presente invenção, usados como uma diluição de 1/256.
[0094] A Fig. 11 ilustra a eficácia antibacteriana de formulações desinfetantes aquosas com base em óleos de tomilho sintéticos naturais idênticos de acordo com modalidades da presente invenção, usados como uma diluição de 1/512.
[0095] A Fig. 12 ilustra a eficácia antibacteriana dos tratamentos de controle Thymox™ em bactérias resistentes à estreptomicina.
[0096] A Fig. 13 ilustra as propriedades inibidoras de doenças de tratamentos de controle Thymox™ em plantas infectadas com Septoria e Oídio.
[0097] A Fig. 14 ilustra as propriedades inibidoras de Botrytis de tratamentos de controle Thymox™ em Stevia.
[0098] A Fig. 15 ilustra a ausência de fitotoxicidade dos tratamentos de controle Thymox™ em Artimesia Silvermound.
[0099] A Fig. 16 ilustra a ausência de fitotoxicidade dos tratamentos de controle Thymox™ em Artimesia “Castelo de Powis”.
[00100] A Fig. 17 ilustra a atividade antibacteriana de formulações da presente invenção contendo Vitamina C.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[00101] Nas modalidades, é divulgada uma formulação aquosa de nanoemulsão compreendendo óleo de tomilho, solvente, sorbato, saponinas e água. De acordo com as modalidades, a formulação de nanoemulsão aquosa pode ser: a) de cerca de 0,05% a cerca de 55% em peso de óleo; b) de cerca de 0,04% a cerca de 65% em peso de um solvente; c) de cerca de 0,01% a cerca de 25% de um sorbato; d) de cerca de 0,00025% a cerca de 0,37% em peso de uma saponina, em uma quantidade suficiente para formar uma nanoemulsão do óleo em água; e e) água suficiente para perfazer 100 por cento em peso.
[00102] A presente invenção pode ser preparada como formulações concentradas, bem como formulações diluídas para usos específicos.
Óleos
[00103] Na modalidade, o termo óleo se destina a significar qualquer substância química não polar que é um líquido viscoso à temperatura ambiente e é hidrofóbica e lipofílica. Os óleos podem ter um alto teor de carbono e hidrogênio e geralmente são inflamáveis e tensoativos.
Conforme usado neste documento, o óleo inclui óleos orgânicos e minerais.
[00104] De acordo com uma modalidade, o óleo pode ser um óleo essencial, ou um ingrediente ativo de um óleo essencial, que também tem uma natureza oleosa quando substancialmente isolado. Um óleo essencial, conforme usado aqui, é um líquido hidrofóbico concentrado contendo compostos químicos voláteis (facilmente evaporados em temperaturas normais) de plantas. Os óleos essenciais também são conhecidos como óleos voláteis, óleos etéreos, aetherolea ou simplesmente como o óleo da planta da qual foram extraídos, como o óleo de cravo. Um óleo essencial é "essencial" no sentido de que contém a "essência" da fragrância da planta, ou seja, a fragrância característica da planta da qual é derivado. Os óleos essenciais são geralmente extraídos por destilação, geralmente usando vapor. Outros processos incluem expressão, extração com solvente, sfumatura, extração absoluta de óleo, extração de resina, incorporação de cera e prensagem a frio. Eles são usados em perfumes, cosméticos, sabonetes e outros produtos, para dar sabor a alimentos e bebidas e para adicionar aromas a incensos e produtos de limpeza doméstica.
[00105] Em relação ao óleo essencial, alguns óleos essenciais são conhecidos por serem óleos essenciais antimicrobianos, óleos essenciais antibacterianos, óleos essenciais desinfetantes e/ou óleo essencial pesticida ou uma combinação dos mesmos. Esses óleos podem, com certeza, ser usados para preparar nanoemulsões aquosas preservando e potencializando tais propriedades do(s) óleo(s) essencial(ais) que o compreende.
[00106] O óleo essencial pode ser qualquer um de óleo de anis, óleo de limão, óleo de laranja, óleo de orégano, óleo de alecrim (incluindo óleo de alecrim espanhol), óleo de gaultéria, óleo de tomilho, óleo de lavanda, óleo de cravo, óleo de lúpulo, óleo de melaleuca, óleo de citronela, óleo de trigo, óleo de cevada, óleo de capim-limão, óleo de folha de cedro, óleo de madeira de cedro, óleo de canela, óleo de pulga-de-grama, óleo de gerânio, óleo de sândalo, óleo de violeta, óleo de airela, óleo de eucalipto, óleo de verbena, óleo de hortelã-pimenta, óleo de manjericão, óleo de erva-doce, óleo de abeto, óleo de bálsamo, óleo de ocmea origanum, óleo de Hydastis carradensis, óleo de Berberidaceae daceae, óleo de Ratanhiae, óleo de cúrcuma longa, óleo de gergelim, óleo de noz de macadâmia, óleo de prímula, óleo de coentro, óleo de bagas de pimentão, óleo de rosa, óleo de bergamota, óleo de pau-rosa, óleo de camomila, óleo de sálvia (incluindo óleo de sálvia espanhol), óleo de sálvia sclarea, óleo de cipreste, óleo de erva-doce do mar, óleo de olíbano, óleo de gengibre, óleo de toranja, óleo de jasmim, óleo de zimbro, óleo de cal, óleo de tangerina, óleo de manjerona, óleo de mirra, óleo de néroli, óleo de patchouli, óleo de pimenta, óleo de pimenta preta, óleo de petitgrain, óleo de pinho, óleo de rosa otto, óleo de hortelã, óleo de nardo, óleo de vetiver, uma conífera essencial óleo, ylang ylang ou combinações dos mesmos.
[00107] Em modalidades, o óleo essencial de conífera pode ser de qualquer conífera adequada, como cedros, abetos Douglas, ciprestes, abetos, zimbros, kauri, lariços, pinheiros, cicutas, sequóias, abetos vermelhos e teixos.
Exemplos de abetos podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em Picea breweriana, Picea sitchensis, Picea engelmannii, Picea glauca, Picea brachytyla, Picea chihuahuana, Picea farreri, Picea likiangensis, Picea martinezii, Picea maximowiczii, Picea morrisonicola, Picea neoveitchii, Picea orientalis, Picea purpurea, Picea schrenkiana, Picea smithiana, Picea winnulosa, Picil abithano, Picea spinulosa , Picea alcoquiana, Picea alpestris, Picea asperata, Picea crassifolia, Picea glehnii, Picea jezoensis, Picea koraiensis, Picea koyamae, Picea mariana, Picea meyeri, Picea obovate, Picea omorika, Picea pungens, Picea retroflexa e Picea rubensa.
[00108] De acordo com outras modalidades, o óleo também pode ser óleo de neem, óleo de semente de algodão ou combinações dos mesmos.
Óleo de tomilho
[00109] Em uma modalidade, o ingrediente desinfetante ativo na formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção é óleo de tomilho. O timol é um derivado fenol monoterpenóide natural do cimeno, C10H14O, isomérico com carvacrol, encontrado no óleo de tomilho e extraído do Thymus vulgaris e de vários outros tipos de plantas. Os compostos fenólicos de origem natural, conforme usados na presente invenção, podem ser produzidos sinteticamente por métodos conhecidos ou podem ser obtidos a partir de extratos de óleos vegetais.
[00110] Em uma modalidade da presente invenção, os compostos fenólicos de origem natural são obtidos a partir de extratos de plantas. Em uma outra modalidade, os compostos fenólicos de origem natural estão disponíveis comercialmente. Em ainda outra modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção compreende óleo de tomilho de origem natural, de origem sintética ou uma combinação dos mesmos. Exemplos de óleos de tomilho que podem ser usados para fazer as formulações de nanoemulsão aquosas da presente invenção estão listados na tabela 1.
Óleos de tomilho VDH Organics 1 Óleo de tomilho (sintético) VDH/TO/451109/18-19 VDH Organics 2 Óleo de tomilho (sintético) VDH/TO/444519/18-19 Katyani Exports Óleo de tomilho "KE" (natural) K-5655-KE-2017 Katyani Exports Óleo de tomilho 60% (natural) K-1548-KE-2018 Rakesh Óleo de tomilho "RS" (Comp) R000X3V14 SandaIndustries HBNO Óleo de tomilho (natural) HBNO - 4255 HBNO Tomilho Zygis Europa (natural) 1007182 HBNO Thyme Vulgaris India (Natural) 3600 BLAS LORENTE Thymol, Thyme oil 100% natural n/d BLAS LORENTE White thyme oil N.I. (Natural) n/d CARBONNEL Tomilho Branco (Sintético) 65059 CARBONNEL Tomilho Branco (Sintético) 00420 CARBONNEL Óleo de tomilho (natural) 00806 Óleo essencial de tomilho 100% Kush Aroma Exports KUSH/EO-100-003474/18-19 puro Natures Natural India Óleo de tomilho (natural) NNITHEO/234/1218 Natures Natural India Óleo de tomilho (sintético) NNITSEO/433/1218 AG Industries Óleo de tomilho puro (natural) FM/TMOLN/1901001 AG Industries Óleo de tomilho sintético FM/TMOLN/19010021 Shree Bankey Óleo de tomilho puro SBBLBM/THYM/001/2017-18 Tabela 1. Óleo de tomilho exemplar
[00111] De acordo com uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção compreende óleo de tomilho com porcentagens variáveis de compostos fenólicos, tais como carvacrol, timol, paracimeno e terpineno. A composição de óleos de tomilho naturais (Nat) ou sintéticos naturais idênticos (Syn) usados na formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção está listada na tabela 2. Os óleos de tomilho podem estar presentes em cerca de 0,05% a cerca de 55% em peso da formulação. Óleos naturais ou idênticos Sint/Nat Timol % Carvacrol % Paracimeno % Terpineno % aos naturais (sintéticos) VDH Organics Sintético 44.4 19.2 11.4 19.9 1 VDH Organics Sintético 45 9.3 14.2 25.1 2 Natures Natural Sintético 45.4 2.82 27.35 12.69 India Natures Natural Natural 45.83 3.03 27.39 12.78 India
AG Sintético 44.5 3.73 28.42 1.71 Industries
AG Natural 27.03 3.66 24.54 0.61 Industries Katyani Natural 50 3.97 20.13 8.15 Exports Rakesh Sandal Natural 52.65 6.3 14.23 10.5 Industries Tabela 2. Óleos de tomilho idênticos naturais ou idênticos aos naturais sintéticos usados na formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção Óleo de alecrim
[00112] Em uma modalidade, o ingrediente oleoso na formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção é óleo de alecrim. α-pineno, cânfora, 1,8-cineol, canfeno, limoneno e linalol estão entre os constituintes desse óleo. O óleo de alecrim pode ser de origem natural, de origem sintética ou uma combinação dos mesmos.
Ingrediente ativo de um óleo essencial
[00113] O óleo utilizado na nanoemulsão da presente invenção também pode ser ingrediente ativo isolado de um óleo essencial, que também possui uma natureza oleosa quando substancialmente isolado. Esses ingredientes podem ser timol, carvacrol, cinamaldeído, citral, mentol, geraniol, capsaicina, paracimeno ou combinações dos mesmos, por exemplo.
Solvente
[00114] Em uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção compreende ainda pelo menos um solvente polar ou não polar capaz de solubilizar os compostos fenólicos em óleo de tomilho e outros constituintes da formulação. Exemplos não limitativos de solventes incluem 1,2-dicloroetano, 2-butanona, acetona, acetonitrila, benzeno, tetracloreto de carbono, clorofórmio, ciclo-hexano, hexano, pentano, tetra-hidrofurano, 1,1-dicloroetano, 1,2- dicloroetano, 1-butanol, 1-heptanol, 1-hexanol, 1-octanol, 1-pentanol, 1-propanol, 2-aminoetanol, 2-butanol, 2- butanona, 2-pentanol, 2-pentanona, 2-propanol, 3-pentanol, 3-pentanona, ácido acético, acetona, acetonitrila, acetil acetona, anilina, anisol, benzeno, benzonitrila, álcool benzílico, acetato de butila, lactato de butila, dissulfeto de carbono, tetracloreto de carbono, clorobenzeno,
clorofórmio, ciclo-hexano, ciclo-hexanol, ciclo-hexanona,
diclorometano, éter dietílico, dietilamina, dietilenoglicol,
diglima, éter diisopropílico, dimetoxietano,
dimetilformamida, dimetilftalato, dimetilsulfóxido, di-n-
butilftalato, dioxano, etanol, éter, acetato de etila, etil acetoacetato, etil benzoato, etilenoglicol, glicerol,
heptano, hexano, 1-butanol, isopropanol, metanol, acetato de metila, metil t-éter butílico, cloreto de metileno, éter metil-t-butílico, N, N-dimetilanilina, pentano, p-xileno,
piridina, álcool t-butílico, tetra-hidrofurano, tolueno,
tricloroetileno, água, água pesada e xileno.
Em uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção compreende ainda pelo menos dois solventes, ou pelo menos três solventes, ou pelo menos quatro solventes, ou pelo menos cinco solventes.
De acordo com uma forma de modalidade preferida, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção compreende pelo menos três solventes.
Numa forma de modalidade preferida da formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção, os pelo menos três solventes compreendem isopropanol, glicerol e lactato de butila.
A formulação da presente invenção pode compreender de cerca de 0,04% a cerca de 65%, ou de cerca de 0,4% a cerca de 65%, ou de cerca de 1% a cerca de 65%, ou de cerca de 10%
a cerca de 65%, ou de cerca de 20% a cerca de 65%, ou de cerca de 30% a cerca de 65%, ou de cerca de 40% a cerca de 65%, ou de cerca de 50% a cerca de 65%, ou de cerca de 60% a cerca de 65%, ou de cerca de 0,4% a cerca de 60%, ou de cerca de 1% a cerca de 60%, ou de cerca de 10% a cerca de 60%, ou de cerca de 20% a cerca de 60%, ou de cerca de 30% a cerca de 60%, ou de cerca de 40% a cerca de 60%, ou de cerca de 50% a cerca de 60%, ou de cerca de 0,4% a cerca de 50%, ou de cerca de 1% a cerca de 50%, ou de cerca de 10% a cerca de 50%, ou de cerca de 20% a cerca de 50%, ou de cerca de 30% a cerca de 50%, ou de cerca de 40% a cerca de 50%, ou de cerca de 0,4% a cerca de 40%, ou de cerca de 1% a cerca de 40%, ou de cerca de 10% a cerca de 40%, ou de cerca de 20% a cerca de 40%, ou de cerca de 30% a cerca de 40%, ou de cerca de 0,4% a cerca de 30%, ou de cerca de 1% a cerca de 30%, ou de cerca de 10% a cerca de 30%, ou de cerca de 20% a cerca de 30%, ou de cerca de 0,4% a cerca de 20%, ou de cerca de 1% a cerca de 20%, ou de cerca de 10% a cerca de 20%, de cerca de 0,4% a cerca de 10%, ou de cerca de 1% a cerca de 10%, ou de cerca de 0,4% a cerca de 1% em peso de solvente.
Sorbato
[00115] Em uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção compreende um sorbato. Os sorbatos são usados principalmente como conservantes na indústria alimentícia. No entanto, como descrito anteriormente, o sorbato na presente invenção atua ainda como um cotensoativo para aumentar o número de micelas na nanoemulsão e amplifica o efeito antimicrobiano da formulação aquosa de nanoemulsão. O sorbato pode ser sorbato de potássio, sorbato de sódio, sorbato de cálcio, ácido sórbico ou combinações dos mesmos.
[00116] Em uma modalidade preferida, o sorbato é sorbato de potássio. O sorbato de potássio também é usado como conservante de alimentos que tem sido usado com eficácia por décadas como GRAS para conservar produtos alimentícios.
Estudos usando concentrações de potássio semelhantes às de produtos de cuidado corporal descobriram que o sorbato de potássio é praticamente não irritante e não sensibilizante [Relatório final sobre a avaliação da segurança do ácido sórbico e do sorbato de potássio. UITO International Journal of Toxicology,7(6),837-880(1988)]. Na verdade, a toxicidade do sorbato de potássio é próxima à do sal de cozinha. O sorbato de potássio também está incluído no Handbook of Green Chemicals, aprovado pela Natural Products Association, e também é aprovado pelo Whole Foods Premium Body Care.
[00117] Descobertas recentes continuam a validar a segurança do sorbato de potássio quando usado próximo a humanos e quando consumido. A Autoridade Europeia para a Segurança dos Alimentos (EFSA) estabeleceu uma ingestão diária aceitável de 3 mg por kg de peso corporal por dia. Os ratos foram alimentados com 300 mg por dia, sem efeitos deletérios observados. Nos EUA, a ingestão diária máxima aceitável para humanos é de 25 miligramas por quilograma (mg por kg) de peso corporal por dia. Para um adulto de 150 libras, isso chega a 1.750 mg por dia.
[00118] Além disso, o sorbato de potássio é bem caracterizado como seguro para uso agrícola como um "inibidor de fungos", e o ácido sórbico e outros ácidos mono- carboxílicos alifáticos insaturados e seus sais são conhecidos por serem eficazes na inibição do crescimento de microrganismos na agricultura.
[00119] Na presente invenção, o sorbato de potássio contribui para a formação e estabilidade de gotículas de nanoemulsão ou micelas menores que 200 nm de diâmetro.
Acredita-se que o menor tamanho das micelas seja vantajoso para tornar a formulação de emulsão relativamente impermeável à sedimentação gravitacional ou formação de creme. Mais importante ainda, a estabilidade da formulação, por sua vez, está diretamente relacionada à sua eficácia. As gotículas de nanoemulsões menores por unidade de volume (de óleo de tomilho) fornecem um maior número de micelas, o que, por sua vez, fornece uma maior incidência de contato entre a formulação antimicrobiana e os micróbios alvo. Uma vantagem crucial das pequenas nanoemulsões é a maior estabilidade e maior solubilidade da formulação do concentrado.
Consequentemente, o produto diluído final usado para fins de limpeza ou desinfecção é mais homogêneo e termodinamicamente estável. As formulações da presente invenção podem compreender de cerca de 0,01% a cerca de 25%, ou de cerca de 0,1% a cerca de 25%, ou cerca de 1% a cerca de 25%, ou cerca de 10% a cerca de 25%, ou cerca de 15% a cerca de 25%, ou cerca de 20% a cerca de 25%, ou cerca de 0,01% a cerca de 20%, ou de cerca de 0,1% a cerca de 20%, ou cerca de 1% a cerca de 20%, ou cerca de 10% a cerca de 20%, ou cerca de 15% a cerca de 20%, ou cerca de 0,01% a cerca de 15%, ou cerca de 0,1 % a cerca de 15%, ou cerca de 1% a cerca de 15%, ou cerca de 10% a cerca de 15%, ou cerca de 0,01% a cerca de 10%, ou de cerca de 0,1% a cerca de 10%, ou cerca de 1% a cerca de 10 %, ou cerca de 0,01% a cerca de 1%, ou de cerca de 0,1% a cerca de 1%, ou cerca de 0,01% a cerca de 0,1% em peso de um sorbato.
Saponinas
[00120] Na modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção compreende uma saponina.
[00121] As saponinas são uma classe de compostos químicos encontrados em particular abundância em várias espécies de plantas. Mais especificamente, eles são glicosídeos anfipáticos agrupados fenomenologicamente pela espuma semelhante a sabão que eles produzem quando agitados em soluções aquosas, e estruturalmente por terem uma ou mais porções glicosídicas hidrofílicas combinadas com um triterpeno lipofílico ou derivado de esteróide.
As saponinas são comumente usadas como tensoativos naturais não iônicos,
emulsificação, agentes espumantes e detergentes em uma variedade de indústrias, incluindo alimentos, cosméticos,
agricultura e farmacêutica.
As formulações da presente invenção podem compreender de cerca de 0,00025% a cerca de
0,37%, ou cerca de 0,0025% a cerca de 0,37%, ou cerca de
0,025% a cerca de 0,37%, ou cerca de 0,25% a cerca de 0,37%,
ou cerca de 0,00025% a cerca de 0,35%, ou cerca de 0,0025%
a cerca de 0,35%, ou cerca de 0,025% a cerca de 0,35%, ou cerca de 0,25% a cerca de 0,35%, ou cerca de 0,00025% a cerca de 0,30%, ou cerca de 0,0025% a cerca de 0,30%, ou cerca de
0,025% a cerca de 0,30%, ou cerca de 0,25% a cerca de 0,30%,
ou cerca de 0,00025% a cerca de 0,25%, ou cerca de 0,0025%
a cerca de 0,25%, ou cerca de 0,025% a cerca de 0,25%, ou cerca de 0,00025% a cerca de 0,20%, ou cerca de 0,0025% a cerca de 0,20%, ou cerca de 0,025% a cerca de 0,20%, ou cerca de 0,00025% a cerca de 0,15%, ou cerca de 0,0025% a cerca de
0,15%, ou cerca de 0,025% a cerca de 0,15%, ou cerca de
0,00025% a cerca de 0,10%, ou cerca de 0,0025% a cerca de
0,10%, ou cerca de 0,025% a cerca de 0,10%, ou cerca de
0,00025% a cerca de 0,05%, ou cerca de 0,0025% a cerca de
0,05%, ou cerca de 0,025% a cerca de 0,05% em peso de saponinas.
[00122] Nas modalidades, a saponina pode ser fornecida por um extrato vegetal, como um extrato de Quillaja saponaria, um extrato de Yucca schidigera, um extrato de castanha da Índia, um extrato de semente de chá, um extrato de soja e suas combinações. Em uma modalidade preferida da formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção, o extrato vegetal é um extrato de Quillaja saponaria e compreende de cerca de 0,004 a cerca de 0,5%, ou cerca de 0,04 a cerca de 0,5%, ou cerca de 0,04 a cerca de 0,5%, ou cerca de 0,4 a cerca de 0,5%, ou cerca de 0,004 a cerca de 0,4%, ou cerca de 0,04 a cerca de 0,4%, ou cerca de 0,04 a cerca de 0,4%, cerca de 0,004 a cerca de 0,3%, ou cerca de 0,04 a cerca de 0,3%, ou cerca de 0,04 a cerca de 0,3%, cerca de 0,004 a cerca de 0,2%, ou cerca de 0,04 a cerca de 0,2%, ou cerca de 0,04 a cerca de 0,2%, cerca de 0,004 a cerca de 0,1%, ou cerca de 0,04 a cerca de 0,1%, ou cerca de 0,04 a cerca de 0,1% em peso de extrato de Quillaja saponaria.
[00123] O extrato de quillaja é um composto seguro para alimentos que possui alta capacidade hidrofílica de saponinas e pode formar emulsões óleo-em-água(O/A) estáveis.
As emulsões formadas são estáveis em condições acídicas e na presença de sais. Na presente invenção, as propriedades semelhantes a tensoativos das saponinas, tais como aquelas encontradas no extrato de Quillaja, são usadas para produzir desinfetante baseado em emulsão altamente eficaz.
[00124] Na presente invenção, o uso de bio-tensoativo natural Quillaja e sorbato de potássio produz várias vantagens em relação à segurança e conveniência gerais, o tamanho menor das micelas da nanoemulsão e propriedades antibactericidas e antimicrobianas eficazes como discutido abaixo. O presente trabalho usa as propriedades tensoativas de um sistema tensoativo misto de saponinas Quillaja e um cotensoativo de qualidade alimentar, como o sorbato de potássio. A aplicação prática das invenções produz uma alternativa necessária aos antimicrobianos mais tóxicos e pesados em uso hoje. Em combinação com Quillaja e outros pequenos solventes polares, o sorbato fornece micelas menores em comparação com outros tensoativos comuns disponíveis no mercado e outros tensoativos à base de detergentes.
Agente de ajuste de pH
[00125] Em uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção compreende ainda de cerca de 0,0002% a cerca de 0,3% em peso de um agente de ajuste de pH. Em uma modalidade da presente invenção, o agente de ajuste de pH é usado para manter o equilíbrio iônico da formulação. Exemplos não limitativos de agentes de ajuste de pH de acordo com uma modalidade da presente invenção incluem pelo menos um de ácido cítrico, ácido láctico, ácido clorídrico, ácido bórico, ácido acético, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, ácido sulfúrico, carbonato de cálcio (CaCO3), carbonato de amônio, bicarbonato de amônio, citrato de amônio, citrato de sódio, carbonato de magnésio, carbonato de sódio, fosfato mono, di e/ou trissódico, fosfato mono, di e/ou tripotássico, tris (hidroximetil) aminometano (TRIS), aminoácidos e zwitterions, tal como glicina, 2-amino-2metil- 1,3-propanodiol(AMPD), Ácido N-(1,1-dimetil-2-hidroxietil) -3-amino-2-hidroxipropanossulfônico (AMPSO), N- glicilglicina (Gly-Gly), ácido 4-(2-hidroxietil) piperazina- 1-propanossulfônico (EPPS ou HEPPS), ácido 3- (ciclo- hexilamino)-1-propanossulfônico (CAPS), Ácido 3- (ciclo- hexilamino)-2-hidroxi-1-propanossulfônico (CAPSO), ácido 2- (ciclo-hexilamino)etanossulfônico (CHES), ácido N,N-bis[2- hidroxietil]-2-aminoetanossulfônico (BES), (2 Ácido-[2- hidroxi-1,1-bis(hidroximetil)etilamino]etanossulfônico) (TES), Ácido 2-(N-morfolino)etanossulfônico (MES), N-[tris (hidroximetil)metil]glicina (tricina); Ácido N-tris (hidroximetil)metil-3-aminopropanossulfônico (TAPS) e ácido 3-N-morfolinopropanossulfônico (MOPS), ácido piperazie-N, N'-bis[2-hidroxipropanossulfônico] (POPSO) e suas combinações. Em uma outra modalidade da formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção, o agente de ajuste de pH é pelo menos um de ácido cítrico.
[00126] Em uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção compreende um pH que varia de cerca de 6 a cerca de 9.
[00127] As formulações da presente invenção podem compreender de cerca de 0,0002% a cerca de 0,3%, ou cerca de 0,002% a cerca de 0,3%, ou cerca de 0,02% a cerca de 0,3%, ou cerca de 0,2% a cerca de 0,3%, ou cerca de 0,0002% a cerca de 0,2%, ou cerca de 0,002% a cerca de 0,2%, ou cerca de 0,02% a cerca de 0,2%, ou cerca de 0,0002% a cerca de 0,1%, ou cerca de 0,002% a cerca de 0,1%, ou cerca de 0,02% a cerca de 0,1%, ou cerca de 0,0002% a cerca de 0,05%, ou cerca de 0,002% a cerca de 0,05%, ou cerca de 0,02% a cerca de 0,05%, ou cerca de 0,0002% a cerca de 0,005%, ou cerca de 0,002% a cerca de 0,005%, ou cerca de 0,0002% a cerca de 0,0005 % em peso de agente de ajuste de pH.
Vitamina C
[00128] Em modalidades, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção pode compreender vitamina C, também conhecida como ácido ascórbico e ascorbato. A formulação aquosa de nanoemulsão compreende de cerca de 0,002 a cerca de 10%, ou de cerca de 0,02% a cerca de 10%, ou de cerca de 0,2% a cerca de 10%, ou de cerca de 1% a cerca de 10%, ou de cerca de 2% a cerca de 10%, ou de cerca de 3% a cerca de 10%, ou de cerca de 4% a cerca de 10%, ou de cerca de 5% a cerca de 10%, ou de cerca de 6% a cerca de 10%, ou de cerca de 7% a cerca de 10%, ou de cerca de 8% a cerca de
10%, ou de cerca de 9% a cerca de 10%, ou de cerca de 0,002 a cerca de 9%, ou de cerca de 0,02% a cerca de 9%, ou de cerca de 0,2% a cerca de 9%, ou de cerca de 1% a cerca de
9%, ou de cerca de 2% a cerca de 9%, ou de cerca de 3% a cerca de 9%, ou de cerca de 4% a cerca de 9%, ou de cerca de
5% a cerca de 9%, ou de cerca de 6% a cerca de 9%, ou de cerca de 7% a cerca de 9%, ou de cerca de 8% a cerca de 9%,
ou de cerca de 0,002 a cerca de 8%, ou de cerca de 0,02% a cerca de 8%, ou de cerca de 0,2% a cerca de 8%, ou de cerca de 1% a cerca de 8%, ou de cerca de 2% a cerca de 8%, ou de cerca de 3% a cerca de 8%, ou de cerca de 4% a cerca de 8%,
ou de cerca de 5% a cerca de 8%, ou de cerca de 6% a cerca de 8%, ou de cerca de 7% a cerca de 8%, ou de cerca de 0,002 a cerca de 7%, ou de cerca de 0,02% a cerca de 7%, ou de cerca de 0,2% a cerca de 7%, ou de cerca de 1% a cerca de
7%, ou de cerca de 2% a cerca de 7%, ou de cerca de 3% a cerca de 7%, ou de cerca de 4% a cerca de 7%, ou de cerca de
5% a cerca de 7%, ou de cerca de 6% a cerca de 7%, ou de cerca de 0,002 a cerca de 6%, ou de cerca de 0,02% a cerca de 6%, ou de cerca de 0,2% a cerca de 6%, ou de cerca de 1%
a cerca de 6%, ou de cerca de 2% a cerca de 6%, ou de cerca de 3% a cerca de 6%, ou de cerca de 4% a cerca de 6%, ou de cerca de 5% a cerca de 6%, ou de cerca de 0,002 a cerca de
5%, ou de cerca de 0,02% a cerca de 5%, ou de cerca de 0,2%
a cerca de 5%, ou de cerca de 1% a cerca de 5%, ou de cerca de 2% a cerca de 5%, ou de cerca de 3% a cerca de 5%, ou de cerca de 4% a cerca de 5%, ou de cerca de 0,002 a cerca de 4%, ou de cerca de 0,02% a cerca de 4%, ou de cerca de 0,2% a cerca de 4%, ou de cerca de 1% a cerca de 4%, ou de cerca de 2% a cerca de 4%, ou de cerca de 3% a cerca de 4%, ou de cerca de 0,002 a cerca de 3%, ou de cerca de 0,02% a cerca de 3%, ou de cerca de 0,2% a cerca de 3%, ou de cerca de 1% a cerca de 3%, ou de cerca de 2% a cerca de 3%, ou de cerca de 0,002 a cerca de 2%, ou de cerca de 0,02% a cerca de 2%, ou de cerca de 0,2% a cerca de 2%, ou de cerca de 1% a cerca de 2%, ou de cerca de 0,002 a cerca de 1%, ou de cerca de 0,02% a cerca de 1%, ou de cerca de 0,2% a cerca de 1%, ou de cerca de 0,002 a cerca de 0,2%, ou de cerca de 0,02% a cerca de 0,2%, ou de cerca de 0,002 a cerca de 0,02% em peso da vitamina C.
[00129] Em uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção compreende: a) de cerca de 0,05% a cerca de 55% em peso de óleo; b) de cerca de 0,005% a cerca de 7,5% em peso de isopropanol; c) de cerca de 0,02% a cerca de 30% em peso de glicerol; d) de cerca de 0,02% a cerca de 27% em peso de lactato de butila; e) de cerca de 0,01% a cerca de 25% de sorbato de potássio;
f) de cerca de 0,0004% a cerca de 0,5% em peso de um extrato de Quillaja saponaria, em uma quantidade suficiente para formar uma nanoemulsão do óleo em água; g) de cerca de 0,0002% a cerca de 0,3% em peso de ácido cítrico; e h) água suficiente para perfazer 100% do peso.
[00130] Em uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção não compreende um tensoativo adicional. A formulação de nanoemulsão aquosa pode estar livre de quaisquer tensoativos não naturais que podem ser considerados deletérios para as colheitas ou sementes, por exemplo.
[00131] Em uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção não compreende desinfetante, pesticida ou desinfetante adicional. A formulação de nanoemulsão aquosa pode estar isenta de quaisquer ingredientes adicionais com uma atividade desinfetante, pesticida ou desinfetante adicional sobre a do óleo de tomilho e os ingredientes divulgados neste relatório tendo tais atividades.
[00132] Em uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção compreende um pH que varia de cerca de 6 a cerca de 9.
Tensoativos
[00133] Em outra modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção pode compreender ainda um tensoativo. Como aqui utilizado, o termo "tensoativo" pretende significar os compostos anfifílicos com grupos hidrofóbicos (muitas vezes referidos como "caudas") e grupos hidrofílicos (muitas vezes referidos como "cabeças"). Eles também são referidos como detergentes e são distintos das saponinas descritas acima. Um tensoativo (agente tensoativo) geralmente se refere a uma substância que, quando dissolvida em água, ou em outros sistemas aquosos, reduz a tensão superficial ou interfacial entre ela e outra substância ou material.
[00134] Em uma modalidade da presente invenção, o tensoativo auxilia na dispersão ou emulsificação dos óleos essenciais dentro do transportador aquoso. Em uma outra modalidade da presente invenção, o tensoativo aumenta o número de micelas na nanoemulsão e amplifica o efeito antimicrobiano da formulação aquosa de nanoemulsão.
[00135] Exemplos não limitativos de tensoativos de acordo com uma modalidade da presente invenção incluem:
1. 2-Sulfolaurato de Alfa Sulfo Metil Sódio Aniônico 149458- 07-1
2. 1 difenil de difenil óxido de sódio dodecil aniônico 19345-04-9
3. Óxido difenil aniônico de óxido de sódio decil difenil 36445-71-3
4. Dodecil benzeno aniônico de sódio 68081-81-2
5. Dodecilbenzeno aniônico Dodecilbenzeno Sulfônico 68584- 22-5
6. Éter aniônico Carboxilato Ácido Capriletil-9 Carboxílico 53563-70-5 e Ácido Hexet-4 Carboxílico 105391-15-9
7. Éter aniônico carboxilato de ácido glicólico etoxilato lauril 27306-90-7
8. Isetionato aniônico de cocoil isetionato de sódio 61789- 32-0
9. Lauril éter sulfatos aniônicos Lauril éter sulfato de sódio 9004-82-4
10. Laurilsulfatos aniônicos Laurilsulfato de sódio 151-21- 3
11. Lauril Sulfatos Aniônicos Trietanolamina Lauril 90583- 18-9
12. Laurilsulfatos aniônicos Laurilsulfato de magnésio 3097- 08-3
13. Ésteres de fosfato aniônico Fosfato de nonoxinol-10 51609-41-7
14. Fosfato de ésteres de fosfato aniônico Deceth 4 Fosfato 68921-24-4
15. Fosfanatos aniônicos Amino Trismetileno Ácido Fosfônico 20592-85-2
16. Fofanatos aniônicos 1-hidroxietilideno-1,1, ácido difosfônico 2809-21-4
17. Sarcosinato aniônico de lauroil sarcosinato de sódio 137-16-6
18. Sulfossuccinato aniônico dissódico Laureth 68815-56-5
19. Xileno Sulfonatos Aniônicos de Sódio Xileno Sulfonato 1300-72-7
20. Óxidos de amina catiônica Óxido de lauramina 1643-20-5
21. Óxidos de amina catiônica Óxido de cocamidopropilamina 68155-09-9
22. Óxidos de amina catiônicos Lauril/miristil amidopropil 61792-31-2 e óxido de amina 67806-10-4
23. Óxidos de amina catiônica, amina de sebo + 2 EO 61791- 46-6
24. Óxidos de amina catiônica Óxido de miristamina 3332-27-
25. Composto catiônico de ônio, morfolinio de soja 61791-34- 2 etossulfato
26. Dioleiloiletil catiônico quaternizado 94095-35-9
27. Quaternium Quaternizado Catiônico 18 (Distearyl 61789- 80-8)
28. Catiônico Quaternizado Alquil Dimetil Benzil 68424-85-1
29. Quaternium catiônico quaternizado 12 (Didecyl 7173-51- 5)
30. Catiônico Quaternizado Dialquil Dimetil Amônio 68424-95- 3
31. Betaína Anfotérica Cocamidopropil Betaína 61789-40-0
32. Betaína anfotérica Cetil Betaína 693-33-4 e 0683-10-3
33. Betaína anfotérica Lauramidopropil Betaína 4292-10-8
34. Imidazólio dissódico anfotérico 68604-71-7 Composto de Cocoanfodipropionato
35. Imidazólio dissódico anfotérico 68650-39-5 Composto de Cocoanfodiacetato
36. Composto de cocoanfoacetato de sódio imidazólio anfotérico 68608-65-1
37. Sultaine anfotérica Lauryl Hydroxysultaine 13197-76-7
38. Álcool não iônico etoxilados Álcool linear (C1 1) 34398- 01-1 Etoxilato, POE-7
39. Álcool não iônico etoxilados Álcool linear (C9-1 1) 68439-46-3 etoxilato, POE-2.5
40. Álcool não iônico etoxilados Lauril álcool etoxilado, 9002-92-0
41. Álcool não iônico etoxilados Álcool secundário 84133-50-7
42. Alcanolamidas não iônicas Trideceth-2 Carboxamida 107628-04-6
43. Alcanolamidas não iônicas PEG-4 Rapeseedamida 85536-23-8
44. Alcanolamidas não iônicas PEG 5 Cocamida 68425-44- 5
45. Alcanolamidas não iônicas Cocamida DEA 68603-42-9
46. Alcanolamidas não iônicas Lauramida MEA 142-78-9
47. Alcanolamidas não iônicas Cocamida MEA 68140-00-1
48. Alcanolamidas não iônicas Lauramida DEA 120-40-1
49. Alcanolamidas não iônicas Oleamida DEA 93-83-4
50. Alquil poliglicosídeos não iônicos Caprilil/miristil glicosídeo 68515-73-1 e 1 10615-47-9
51. Alquil poliglicosídeos não iônicos Lauril/miristil glicosídeo 1 10615-47-9
52. Alquil poliglicosídeos não iônicos Caprilil/Decil glicosídeo 68515-73-1
53. Amida não iônica N, N-Dimetildecanamida 14433-76-2
54. Biostensoativo não iônico sophorolipídio-isopropil miristato de ésteres não iônicos 1 10-27-0
55. Ésteres não iônicos isopropil palmitato 142-91-6
56. Ácido graxo não iônico, origem natural do cocoato de glicerina-17-17 68201-46-7
57. Ácido graxo não iônico, origem do cocoato de glicereth 6 natural 68201-46-7
58. Ácido graxo não iônico, cocoato de origem natural de PEG/PPG-6/2 gliceril 72245-1-1-5
59. Álcool graxo não iônico Álcool cetoestearílico 67762-27-0
60. Amina Graxa Não Iônica PEG 2 Cocamina 61791 -14-8
61. Amina gordurosa não iônica PEG 2 sebo amina 61791 -26-2
62. Éster de glicerol não iônico Glycereth-7 36145938- 3
63. Éster de glicerol não iônico caprílico/triglicerídeo cáprico 73398-61-5
64. Oleato de gliceril éster de glicerol não iônico 37220-82-9
65. Éster de glicerol não iônico estearato de gliceril 123-94-4
66. Lactato não iônico Lauril Lactil Lactato 910661 - 93-7
67. Polissorbato de éster de sorbitano não iônico 80 9005-65-6
68. Lecitina 8002-43-5
69. Polioxietileno (20) Oleil Éter 9004-98-2
70. Polietileno Glicol Hexadecil Éter Polioxietileno (20) Cetil Éter 2724259
71. Polietileno Glicol Oleil Éter Polioxietileno (2) Oleil Éter 9004-98-2
72. Polietileno Glicol Hexadecil Éter Polioxietileno (10) Cetil Éter 9004-95-9
73. Polietileno Glicol Dodecil Éter Polioxietileno (4) Lauril Éter 9002-92-0
74. Éter estearílico de polioxietileno (100) 9005-00- 9;
75. Polietileno Glicol Octadecil Éter Polioxietileno (10) Estearil Éter 9005-00-9
76. Tetronic 90R4 26316-40-5
77. Tetronic 701 26316-40-5
78. Polioxietileno (12) Isooctilfenil Éter Polioxietileno (12) Octilfenil Éter, Ramificado 9002-93-1
79. Polioxietileno (12) Tridecil Éter 78330-21-9
80. PEG-PPG-PEG Pluronic® L-64 Outros agentes emulsificantes
[00136] Em outra modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção pode ainda outro agente emulsionante; isto é, agentes distintos dos tensoativos discutidos acima. Tal agente emulsionante inclui, mas não está limitado a lecitina de gema de ovo, lecitina de soja, mostarda, fosfato de sódio, mono e diglicerídeos, estearoil lactilato de sódio, éster de ácido diacetiltartárico de monoglicerídeo, celulose, ácido oleico (oleato). De acordo com uma modalidade preferida, o agente emulsionante adicional é o ácido oleico. O ácido oleico como seu sal de sódio é o principal componente do sabão como agente emulsificante. Também é usado como emoliente.
Água
[00137] Em uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção é um concentrado que compreende água. A água na formulação do concentrado é usada em uma baixa porcentagem para manter a polaridade e a solubilidade da formulação e trazer o volume total para 100%.
Fragrâncias
[00138] Os compostos fenólicos normalmente têm um odor pungente associado que impede severamente a aplicação.
Em uma modalidade, as composições de pesticidas da presente invenção podem, portanto, compreender ainda um ou mais agentes com a função dupla de aumentar ainda mais as propriedades desinfetantes das composições, ao mesmo tempo que transmitem um odor mais agradável às mesmas. Em ainda outra modalidade da presente invenção, as composições de pesticidas da presente invenção podem compreender ainda um ou mais agentes que transmitem um odor agradável aos mesmos (agente de fragrância). Exemplos não limitativos de agentes que conferem um odor agradável e/ou aumentam as propriedades desinfetantes compreendem carvacrol, cimeno, cineol, eugenol, timol, mentol, citral e limoneno. Outros exemplos adequados de tais agentes estão dentro da capacidade de um técnico especializado.
[00139] A composição de pesticidas da presente invenção pode ser usada sozinha ou em combinação com uma ou mais substâncias que são usadas em ambientes agrícolas. ou seja, como parte de suplementos. Exemplos de substâncias incluem, mas não estão limitados a pesticidas, tais como desinfetantes, fungicidas, bactericidas, virucidas, repelentes de insetos, repelentes de artrópodes, nematicidas, inseticidas, acaricidas, herbicidas e reguladores de crescimento de plantas. As substâncias também incluem fertilizantes, como fertilizante inorgânico, fertilizante de nitrogênio, fertilizante de potássio, fertilizante de fosfato, fertilizante orgânico, estrume, composto, fosfato de rocha, farinha de osso, alfafa, lascas de madeira, langbeinite, culturas de cobertura, sulfato de potássio, pó de rocha, cinzas, farinha de sangue, farinha de peixe, emulsão de peixe, algas, quitosana e melaço. As substâncias também incluem antiespumantes, tais como óleo mineral, óleo vegetal, cera de parafina, cera de éster, sílica, álcool graxo, silicone, polietilenoglicol, copolímeros de polipropilenoglicol e alquil poliacrilatos.
Pesticidas
[00140] A maioria das medidas de controle é dirigida contra o inóculo do patógeno e envolve os princípios de exclusão e evitação, erradicação, proteção, resistência e seleção do hospedeiro e terapia. As medidas de controle incluem o controle de vetores de patógenos (insetos e nematoides, por exemplo) e o controle químico (pesticidas).
Uma variedade de produtos químicos estão disponíveis e foram projetados para controlar doenças de plantas, inibindo o crescimento (por exemplo, por inativação ou desativação dos patógenos) ou matando os patógenos causadores de doenças.
Produtos químicos usados para controlar bactérias (bactericidas), fungos (fungicidas) e nematoides (nematicidas) podem ser aplicados a sementes, folhagens,
flores, frutas ou solo. Os tratamentos de solo são projetados para matar nematoides, fungos e bactérias que vivem no solo.
Essa erradicação pode ser realizada com vapor ou fumigantes químicos. Os nematoides do solo podem ser mortos pela aplicação de nematicidas granulares ou líquidos. A maior parte do solo é tratada bem antes do plantio; entretanto, certos fungicidas podem ser misturados ao solo na época do plantio. Sementes, bulbos, rebentos e tubérculos são frequentemente tratados com produtos químicos para erradicar bactérias patogênicas, fungos e nematoides e para proteger as sementes contra organismos no solo - principalmente fungos - que causam decomposição e umidade. As sementes costumam ser tratadas com fungicidas sistêmicos, que são absorvidos e protegem a muda em crescimento. Sprays e pós de proteção aplicados à folhagem e frutos de plantações e plantas ornamentais incluem uma ampla gama de produtos químicos orgânicos projetados para prevenir infecções. Os protetores não são absorvidos ou translocados pela planta; assim, eles protegem apenas as partes da planta tratadas antes da invasão pelo patógeno. Uma segunda aplicação é frequentemente necessária porque o produto químico pode ser removido pelo vento, chuva ou irrigação ou pode ser decomposto pela luz solar. O crescimento novo e não tratado também é suscetível à infecção. Novos produtos químicos estão sendo desenvolvidos constantemente.
[00141] Além de doenças de plantas causadas pelos organismos listados acima, animais como roedores e pássaros são responsáveis por importantes danos pré-colheita. Em uma escala global, estimou-se recentemente que quase 280 milhões de pessoas subnutridas poderiam se beneficiar adicionalmente se mais atenção fosse dada à redução das perdas pré e pós- colheita por roedores. Os roedores são perigosos, pois podem amplificar patógenos do meio ambiente e formar reservatórios de doenças (zoonóticas). Com a aplicação de métodos adequados de controle de roedores, é possível reduzir os riscos de doenças transmitidas por roedores em áreas onde humanos, animais alimentícios e roedores vivem próximos uns dos outros. Essas medidas de controle incluem repelentes para animais e pássaros e antimicrobianos para controlar os patógenos por eles introduzidos.
[00142] Qualquer organismo que danifique as plantações ou reduza a fertilidade da terra pode ser definido como uma praga. Isso inclui fungos, bactérias, vírus, insetos, nematoides, parasitas, gastrópodes, artrópodes, caracóis, lesmas, vertebrados (mamíferos e pássaros), algas, etc. Os produtos químicos usados para matar ou repelir pragas são chamados de pesticidas. Conforme relatado pela EPA, aqui está uma lista de exemplos de pesticidas:
Pesticida Organismo alvo (praga) Algicidas Controle as algas em lagos, canais, piscinas, tanques de água e outros locais.
Agentes anti- Matar ou repelir organismos que se fixam em incrustantes superfícies subaquáticas, como fundos de barcos Antimicrobianos Mata os microorganismos (como bactérias e vírus).
Atraentes Atraia pragas (por exemplo, para atrair um inseto ou roedor para uma armadilha). (No entanto, comida não é considerado um pesticida quando usado como um atrativo.) Biocidas Mata os microorganismos.
Biopesticidas Biopesticidas são certos tipos de pesticidas derivados de materiais naturais como animais, plantas, bactérias e certos minerais.
Desinfetantes e Matar ou inativar microorganismos produtores de sanitizantes doenças em objetos inanimados.
Fungicidas Mata fungos (incluindo pragas, bolor, mofo e ferrugem) Fumigantes Produz gás ou vapor destinado a destruir pragas em edifícios ou solo.
Herbicidas Mata as ervas daninhas e outras plantas que crescem onde não são desejadas.
Inseticidas Mata insetos e outros artrópodes.
Miticidas Mata os ácaros que se alimentam de plantas e (também animais. chamados acaricidas) Pesticidas Microorganismos que matam, inibem ou superam as microbianos pragas, incluindo insetos ou outros microorganismos.
Moluscicidas Mata caracóis e lesmas.
Nematicidas Mata os nematoides (organismos microscópicos semelhantes a vermes que se alimentam das raízes das plantas).
Ovicidas Mata os ovos de insetos e ácaros.
Feromônios Produtos bioquímicos usados para interromper o comportamento de acasalamento dos insetos. Repelentes Repele pragas, incluindo insetos (como mosquitos) e pássaros.
Rodenticidas Controla ratos e outros roedores. Desfolhantes Faz com que as folhas ou outra folhagem caiam de uma planta, geralmente para facilitar a colheita. Dessecantes Promove a secagem de tecidos vivos, como copas de plantas indesejadas. Reguladores de Interrompe a muda, a maturidade do estágio de pupa crescimento de ao adulto ou outros processos vitais dos insetos. insetos Reguladores de Substâncias (excluindo fertilizantes ou outros crescimento de nutrientes para as plantas) que alteram o plantas crescimento esperado, a floração ou a taxa de reprodução das plantas. Tabela 3. Exemplos de pesticidas
[00143] Os pesticidas incluem uma ampla variedade de substâncias geralmente direcionadas a pragas específicas. Os principais grupos químicos representados por pesticidas são resumidos na Tabela 3: GRUPO QUÍMICO Tipo de pesticida Acetamida herbicida Acilalanina + fungicida/inseticida Carboxamida + Ditiocarbamato + Neonicotinóide Acilalanina + Triazol Fungicida Acilalaninas fungicida Acilalaninas + fungicida cloronitrilas Amida herbicida Amida / Anilina inseticida Anilida fungicida Anilino Pirimidina fungicida Antibiótico fungicida Propionato de herbicida ariloxifenóxi Ácidos ariloxifenóxi herbicida Avermectina, álcool miticida Benzamide herbicida Benzamida + fungicida Ditiocarbamato Benzenamina Rodenticidas Benzimidazol fungicida
Benzimidazol + inseticida/fungicida Organofosfato + Ácido Ftálico Ácido benzóico Herbicida Benzotiadiazol Herbicida Bipiridílio Herbicida Carbamato (por exemplo, Fungicida/regulador de aldicarbe, carbofurano, crescimento/inseticida/miticida/nematicida carbaril, etienocarbe, fenobucarbe, oxamil e metomil) Carbamato + fungicida Cloronitrila Carboxamida fungicida Carboxamida + fungicida/inseticida Ditiocarbamato + Neonicotinóide Ácido carboxílico Herbicida Hidrocarboneto Clorado regulador de crescimento vegetal Cloroacetamida herbicida Cloro-nicotinil inseticida Cloronitrila fungicida Clorofenol fungicida Clorofenil fungicida Coumarin Rodenticidas Cianoacetamida- fungicida Ciclo-hexanediona Herbicida/regulador de crescimento vegetal Ciclo-hexanetriona regulador de crescimento Dicarboximida Fungicida Dinitroanilina Herbicida Éter difenílico Herbicida Ditiocarbamato fumigante, nematicida, fungicida, rodenticida, inseticida Ácido graxo inseticida/herbicida Glicina herbicida Guanidina fungicida Hidrocarbonetos fumigante Halogenados Hidroxianilida fungicida Hidroxicumarina Rodenticidas Imidazolinona herbicida Indanedione rodenticida & repelente de veado Inorgânico Fungicida, algicida, inseticida, rodenticida Microbiana Bactericida, inseticida, Morfolina fungicida Neonicontinoide + inseticida/fungicida Triazol + Acilalanina + Fenilpirrol
Nicotina inseticida Nitrilo herbicida Derivado nitro fungicida nitroguanidine inseticida Ácido orgânico Herbicida, regulador de crescimento vegetal Organoclorado Inseticida, miticida Organometálico Fungicida, miticida Organofosfato inseticida/miticida/nematicida Organofosfato + ácido inseticida/fungicida ftálico Oxadiazol Herbicida Fenoxi Herbicida Fenil-Carbamato + Herbicida Fenil-Carbamato Fenilpirrol + Triazol + fungicida/inseticida Neonicotinóide + Acilalanina Fthalamato Herbicida Ácido Ftálico + inseticida/fungicida Organofosfato + Benzimidazol Ftalimida Fungicida Piperazina Fungicida Piretrinas Inseticida Piretróide Inseticida Piridazinona inseticida/miticida Amônio quaternário Algaicida, desinfetante, herbicida Quinolinacido herbicida Estrobilurina fungicida Benzoilureia inseticida substituída Sulfonilureia herbicida Piretróide sintético inseticida Tetrazina miticida Tiadiazol fungicida Tiocarbamato herbicida Triazapentadieno inseticida Triazina fungicida Triazol fungicida Uracila herbicida Uréia herbicida dicloropropeno fumigante dicloropropeno + fumigante clorpicrina metame de sódio fumigante, nematicida benzoato de oxina fungicida formaldeído fungicida, fumigante Solvent stoddard herbicida metaldeído moluscicida ancymidol regulador de crescimento vegetal ethephon regulador de crescimento vegetal ácido giberélico regulador de crescimento vegetal giberelinas + regulador de crescimento vegetal benazladenina hidrazida maleica regulador de crescimento vegetal NAA regulador de crescimento vegetal naftaleno acetamida regulador de crescimento vegetal paclobutrazol regulador de crescimento vegetal sólidos de ovo inteiro repelentes putrescentes estricnina rodenticidas fosforeto de zinco rodenticidas Tabela 4. Principais grupos químicos de pesticidas
[00144] Está dentro da habilidade do técnico no assunto a determinar quanto de qualquer pesticida dado pode ser adicionado às composições da presente invenção a fim de obter o efeito pesticida desejado.
Fertilizantes e uso combinado de pesticidas e fertilizantes
[00145] Os fertilizantes são definidos como qualquer material de origem natural ou sintética que é adicionado ao solo para fornecer um ou mais nutrientes às plantas essenciais para o crescimento das plantas. Os fertilizantes vêm em várias formas. A forma mais típica é o fertilizante sólido na forma granulada ou em pó. A próxima forma mais comum é o fertilizante líquido. Os fertilizantes normalmente fornecem, em proporções variáveis: seis macronutrientes (nitrogênio (N), fósforo (P), potássio (K), cálcio (Ca), magnésio (Mg) e enxofre (S)); e oito micronutrientes (boro (B), cloro (Cl), cobre (Cu), ferro (Fe), manganês (Mn),
molibdênio (Mo), zinco (Zn) e níquel (Ni)). Os fertilizantes são amplamente divididos em fertilizantes orgânicos (compostos de matéria orgânica vegetal ou animal) ou fertilizantes inorgânicos ou comerciais. Os fertilizantes inorgânicos incluem: nitrato de amônio, sulfato de amônio, tiossulfato de amônio, nitrato de cálcio amônio, nitrato de cálcio, fosfato de diamônio, fosfato monocálcico, cloreto de potássio, nitrato de potássio, sulfato de potássio e termopotash. Os fertilizantes orgânicos incluem: azomita, bioefetora, biofertilizante, composto, farinha de semente de algodão, espalhamento de efluente, farinha de penas, emulsão de peixe, hidrolisado de peixe, farinha de peixe, estrume, maxicrop, bagaço de oliva, riverm, pó de rocha, fertilizante de algas e poço de lama.
[00146] De acordo com uma modalidade, na agricultura, os pesticidas são usados para limitar os danos causados por pragas e estimular o crescimento e podem ser usados em combinação com fertilizantes.
[00147] Está dentro da habilidade do técnico no assunto determinar quanto de qualquer fertilizante pode ser adicionado às composições da presente invenção a fim de obter o efeito fertilizante desejado.
Métodos de Uso e Uso das Formulações
[00148] Em uma outra modalidade, é divulgado um método que compreende a etapa de diluir ainda mais a formulação aquosa de nanoemulsão com água. Uma vez que as formulações de nanoemulsão desinfetante são tipicamente preparadas no local a partir de misturas de ingredientes em solução concentrada, a água é usada para diluições adicionais conforme necessário.
[00149] Em outra modalidade, a formulação de nanoemulsão desinfetante da presente invenção pode ser usada para a limpeza de superfícies por contato das superfícies com uma quantidade da formulação de nanoemulsão aquosa da presente invenção.
[00150] A formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção pode ser aplicada sobre uma superfície com necessidade de desinfecção por meio de uma variedade de técnicas de pulverização. Em uma modalidade, a formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção é aplicada usando um difusor ou um soprador de névoa. Alternativamente, a formulação de nanoemulsão da presente invenção também pode ser formulada em formulações de aerossol. Outros meios de aplicação das soluções de nanoemulsão da presente invenção estão dentro da capacidade de um técnico especializado. As formulações de nanoemulsão da presente invenção podem ser aplicadas diretamente ou podem ser diluídas antes da aplicação. Devido à natureza substancialmente não corrosiva das formulações de nanoemulsão da presente invenção, as formulações podem ser prontamente aplicadas sem danos indevidos à estrutura física existente (isto é, superfície).
[00151] Em uma modalidade, é divulgado um método para o controle de pragas de uma semente ou planta, o método compreendendo o contato da semente ou planta com uma quantidade pesticida da formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção. A formulação de nanoemulsão aquosa da presente invenção pode ser usada para desinfecção do solo (fungicida, bactericida, virucida), bem como desinfecção de vegetais, plantas e matéria vegetal, que incluem como exemplos não limitantes sementes, grãos, plantas, árvores, arbustos, raízes, folhagens, ervas daninhas, frutas, flores, colheitas, enxertos e semelhantes. A formulação de nanoemulsão aquosa da presente invenção também pode ser usada como repelente de insetos, repelentes de artrópodes, pesticidas, inseticidas, nematicidas, acaricidas, ovicidas, larvicidas e adulticidas.
[00152] Culturas com as quais a composição da presente invenção pode ser usada incluem, por exemplo, mas não estão limitadas a banana, maçã, pêra, batata, arroz, café, frutas cítricas, cebola, ginseng, soja, erva daninha e tomate.
[00153] De acordo com outra modalidade, também é divulgado um método para regular o crescimento de uma semente ou planta, o método compreendendo o contato da semente ou planta com uma quantidade reguladora de crescimento da fonte de informação de nanoemulsão da presente invenção. De acordo com ainda outra modalidade, é divulgado um método para regular o crescimento de uma planta, o método compreendendo o contato de um solo, uma semente, uma planta, ou adapta os mesmos, com uma quantidade reguladora de crescimento da fórmula de nanoemulsão da presente invenção.
[00154] De acordo com uma modalidade, a regulação do crescimento compreende um aumento no número de vegetais de frutas, bulbo ou tubérculo da planta. De acordo com outra modalidade, a regulação do crescimento compreende um aumento no tamanho da fruta, vegetal, bulbo ou tubérculo da planta.
De acordo com outra modalidade, a regulação do crescimento compreende um aumento no número de plantas saudáveis. Em outra modalidade, a regulação do crescimento pode ser de particular importância para plantas cuja folhagem é de particular interesse, como alface ou outras variedades de plantas cujas folhas são comestíveis. De acordo com outra modalidade, a regulação do crescimento compreende uma estimulação do amadurecimento da fruta. De acordo com outra modalidade, a regulação do crescimento compreende a inibição do crescimento da planta e do rebento. De acordo com outra modalidade, a regulação do crescimento aumenta a floração.
De acordo com outra modalidade, a regulação do crescimento compreende a regulação da senescência de folhas e frutos.
[00155] A presente invenção será mais facilmente compreendida referindo-se aos seguintes exemplos que são dados para ilustrar a invenção em vez de limitar o seu escopo.
EXEMPLO 1 Avaliação do tamanho da micela da nanoemulsão antimicrobiana usando quillaja e sorbato de potássio como cotensoativo
[00156] O objetivo deste exemplo é avaliar o tamanho das micelas da formulação aquosa de nanoemulsão da presente invenção em comparação com uma nanoemulsão feita usando tecnologia anterior.
[00157] A nanoemulsão antimicrobiana da presente invenção foi obtida misturando primeiro os solventes Quillaja e sorbato de potássio até que o equilíbrio seja alcançado. O óleo de tomilho foi adicionado consecutivamente lentamente para manter uma solubilidade persistente e contínua. A formulação final foi então agitada até que uma solução de homogenato transparente, representando a formação de pequenas nanoemulsões, fosse obtida. A formulação resultante foi analisada ao microscópio com ampliação de 40x e comparada com imagens de uma nanoemulsão feita com lauril sulfato de sódio Lauril Sulfato de Sódio(SLS).
[00158] Figs. 1A-B mostram que as nanoemulsões produzidas com as formulações da presente invenção resultam na formação de micelas muito pequenas com uma faixa de diâmetro de cerca de 10 nm a cerca de 30 nm (a imagem da direita é a mesma da esquerda, mas com escala barras adicionadas). Particularmente, a Fig. 1A são micrografias eletrônicas de controle Thymox™, uma formulação de acordo com a presente invenção [Pronto para uso (RTU); diluição 1/200] com ampliação de 60.000x mostrando nanoemulsões com tamanhos variando de cerca de 29 a cerca de 33 nm, por exemplo. A Fig. 1B são micrografias eletrônicas de controle Thymox™, uma formulação de acordo com a presente invenção (RTU; diluição 1/200) com ampliação de 100 000x mostrando nanoemulsões com tamanhos tão pequenos quanto 10 nm (a imagem da direita é a mesma que esquerda, mas com barras de escala adicionadas).
EXEMPLO 2 Efeitos antibacterianos de nanoemulsões antimicrobianas contendo óleo de tomilho de acordo com a presente invenção
[00159] Várias formulações foram preparadas variando os ingredientes na composição, bem como sua concentração. As composições das várias formulações de nanoemulsão aquosa preparadas e testadas são apresentadas na Tabela 5.
Composições de formulações com base em% p / p Ingredientes F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 F11 F12 F13 F14 F15 F16 F17 F18 F19 F20 F25 Óleo de 23 23 23 23 23 23 23 23 23 23 23 23 23 23 23 25 40 40 40 40 27 tomilho Isopropanol 14 14 14 14 14 14 14 14 14 14 14 14 7.5 15 7.5 3.5 3.5 4.3 Lactato de 43 28 5 51.6 7.5 14 28 14 12 13.5 13 15.8 N-butila Oleato 20 20 30 40 48 20 10 40.5 12 33 0
Lauril Sulfato de 48 41 36 50 48 0 Sódio Ácido 1 3 1.4 1.4 0 Cítrico Sorbato de 10 10 20 15 18.3 potássio PGME 36 0 Glucopon 420 41 0
UP Glicerol 15 10 5 10 18.5 19 5 18.5 22.5 3% de Quillaja + 1% de ácido 5 10 10 9 5 12.1 cítrico + 96% de H2O Lecitina 48 35 0 H2O 15 14 18 0 13 10 15 8 15 13.645.5 10 0 Total 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 Tabela 5. Formulações aquosas preparadas e testadas
[00160] A eficácia antibacteriana das formulações de nanoemulsão aquosa da presente invenção foi testada in vitro seguindo os padrões da Agência de Proteção Ambiental dos Estados Unidos (EPA). Bactérias (Staphylococcus aureus) foram expostas a cada formulação por 30 segundos após incubação a 37ºC por 24 horas. No dia seguinte, as colônias foram contadas e os resultados expressos em escala logarítmica como uma redução no número de colônias em comparação com um controle positivo com efeitos bactericidas conhecidos.
[00161] Referindo-se à Fig. 2, o efeito antibacteriano das formulações de nanoemulsão contendo óleo de tomilho de uma fonte natural (ou seja, as formulações F15 (1/256) e F15 (1/300)) foi primeiro testado e comparado com uma formulação semelhante feita com cristais de timol sintéticos como controle positivo (ou seja, a formulação D25b130 contendo 23% p/p de cristal de timol, 14% p/p de isopropanol, 48% p/p SLS, 1,4% p/p de ácido cítrico e 13,6% p/p de H2O) Como visto, as formulações F15 (1/256) e F15 (1/300) contendo óleo de tomilho natural demonstraram uma maior eficácia antibacteriana em comparação com o controle positivo da formulação D25b130 contendo cristais de timol sintéticos.
[00162] Com referência à Fig. 3, a eficácia antibacteriana de várias formulações de nanoemulsão antimicrobiana, conforme descrito na Tabela 5, também foi testada. Como visto, as formulações F17 (1/256) e F18 (1/256), ambas contendo Quillaja e Sorbato de Potássio como cotensoativos, tiveram a maior eficácia antibacteriana em comparação com as outras formulações testadas.
[00163] Referindo-se à Fig. 4, a eficácia antibacteriana de formulações de nanoemulsões aquosas com base na formulação F25 compreendendo óleos de tomilho sintéticos naturais idênticos VDH-1 e VDH-2 também foram testados. Os óleos VDH são óleos essenciais idênticos à natureza, que são cópias de verdadeiros óleos essenciais que usam componentes idênticos isolados de fontes naturais alternativas. São óleos sintéticos, com acumulação química idêntica aos da planta. Como visto, as formulações F25 (VDH1 (1/200)) e F25 (VDH2 (1/200)) demonstraram uma maior eficácia antibacteriana em comparação com o controle positivo da formulação D25b130 contendo cristais de timol sintéticos.
EXEMPLO 3 Efeitos antibacterianos de nanoemulsões antimicrobianas contendo óleo (s) de orégano de acordo com a presente invenção
[00164] Para demonstrar a versatilidade das nanoemulsões da presente invenção com vários óleos essenciais antimicrobianos, três nanoemulsões foram preparadas com base na formulação F25 da Tabela 5 acima, mas usando como ingrediente ativo um ou ambos os dois óleos de orégano listados em Tabela 6 abaixo. Particularmente, uma nanoemulsão KEM1 foi preparada com óleo essencial de orégano Hi Carvacrol em uma concentração final de 27%, uma nanoemulsão KEM2 foi preparada com óleo essencial de orégano Hi Thymol em uma concentração final de 27% e uma nanoemulsão KEM3 foi preparado com óleo essencial de Orégano Hi Carvacrol na concentração final de 13,5% e óleo essencial de Orégano Hi Timol na concentração final de 13,5% (resultando em uma concentração final de 27% do total de óleos essenciais de orégano). Todas as formulações foram misturadas à temperatura ambiente durante 5 horas. Depois de atingir a estabilidade, as propriedades de estabilidade adequadas foram confirmadas incubando 2 amostras de cada uma das 3 nanoemulsões à temperatura ambiente ou a 54° C. As soluções de trabalho para testar os testes de atividade antibacteriana (conforme descrito abaixo) foram então preparadas diluindo 1 mL de cada formulação de concentrado em 199 mL de água para dar uma diluição final de 1/200 (v/v).
Óleos Essenciais de Orégano Propriedades de pesticidas Orégano Hi Carvacrol (84% de conteúdo de carvacrol; Bactericida, Fungicida de KEMIN) Orégano Hi Thymol (Teor de timol de 86%; de Bactericida, Fungicida KEMIN) Tabela 6. Óleos essenciais de orégano usados para a preparação de nanoemulsão antimicrobiana de acordo com a presente invenção Ensaio de teste de spray EPA
[00165] Para avaliar a atividade antibacteriana, as nanoemulsões KEM1, KEM2 e KEM3 foram submetidas a um teste de spray seguindo os padrões da Agência de Proteção Ambiental dos Estados Unidos (EPA). Neste teste, as nanoemulsões KEM1, KEM2 e KEM3 são pulverizadas em lamínulas pré-carregadas com Staphylococcus aureus e as lamínulas são incubadas em tubos contendo meio de cultura. Após 2 dias de cultura, o número de tubos sem crescimento de Staphylococcus aureus é expresso como uma porcentagem que representa a eficácia antibacteriana das formulações KEM1, KEM2 e KEM3. A condição de controle positivo utilizou CO-LCL (Thymox-CO) comercialmente disponível, que tinha uma concentração final de timol de 0,207%. CO-LCL é um produto de controle feito de cristal de timol (isto é, não à base de óleo), solvente [éter metílico de propilenoglicol (PGME)] e tensoativo [laurilsulfato de sódio (SLS)].
[00166] Como mostrado na Fig. 5, todas as três nanoemulsões KEM1, KEM2 e KEM3 exibiram uma eficácia antibacteriana muito alta durante o ensaio de teste de pulverização e foram geralmente comparáveis ao controle positivo.
Teste antimicrobiano seco contado em Petri (PAMB)
[00167] Para avaliar ainda mais a atividade antibacteriana, as nanoemulsões KEM1, KEM2 e KEM3 foram submetidas a um teste quantitativo que compara a eficácia de uma dada nanoemulsão com base em sua capacidade de prevenir a formação de colônias bacterianas, o chamado Teste antimicrobiano seco contado em Petri (PAMB). Resumidamente, as nanoemulsões KEM1, KEM2 e KEM3 foram adicionadas a placas de Petri inoculadas com 106 Staphylococcus aureus e a redução logarítmica no número de colônias foi contada após um período de incubação de 24 horas, onde uma maior redução log representa uma maior atividade antibacteriana. A condição de controle positivo utilizou novamente CO-LCL comercialmente disponível, que também tinha uma concentração final de timol de 0,207%.
[00168] Conforme mostrado na Fig. 6, o controle positivo CO-LCL eliciou uma pontuação de redução logarítmica de 2,85, enquanto todas as três formulações KEM1, KEM2 e KEM3 eliciaram uma eficácia antibacteriana significativamente maior com uma pontuação de redução logarítmica de quase 5,50, destacando o antimicrobiano superior atividade da nanoemulsão KEM1, KEM2 e KEM3 sobre o controle positivo CO-LCL.
EXEMPLO 4 Efeitos antibacterianos de nanoemulsões antimicrobianas contendo outras fontes de óleo essencial de acordo com a presente invenção
[00169] Para demonstrar ainda mais a versatilidade das nanoemulsões da presente invenção em relação aos óleos essenciais antimicrobianos, várias outras nanoemulsões foram preparadas com base na formulação da Tabela 7.
Ingredientes W/V % Óleo essencial 15 Glicerol 27 Isopropanol 4.5 Lactato de butila 25
Sorbato de potássio 18.5 3% de Quillaja + 1% de ácido 10 cítrico + 96% de H2O Total 100 Tabela 7. Formulação usada para produzir as nanoemulsões da presente invenção com óleo(s) essencial(is) diferente de óleo de tomilho e óleo de orégano
[00170] Fontes exemplares de óleos essenciais que podem ser usados para preparar a formulação de nanoemulsão da Tabela 7 são mostradas na Tabela 8. Estes óleos essenciais, que podem ser, por exemplo, óleo de alecrim, cinamaldeído e/ou citral, têm principalmente propriedades inseticidas e miticidas e são usados na indústria, no lar ou na agricultura.
Óleos essenciais Pesticide Property Alecrim-1 (KEMIN) Inseticida/Miticida Alecrim-2 (KEMIN) Inseticida/Miticida Mistura KEMIN Inseticida/Miticida Alecrim (Rakesh) Inseticida/Miticida Alecrim (Katyani) Inseticida/Miticida Alecrim (natureza natural) Inseticida/Miticida Cinamaldeído (Sigma-Aldrich) Inseticida, Bactericida Citral (Sigma-Aldrich) Inseticida, Bactericida Tabela 8. Fontes de óleo essencial exemplares que podem ser usadas para produzir as formulações de nanoemulsão da Tabela 7
[00171] Como exemplos de nanoemulsões que podem ser preparadas com óleos essenciais diferentes de óleo de tomilho e óleo de orégano, duas nanoemulsões foram preparadas com base na formulação da Tabela 7 usando como ingrediente ativo óleo de alecrim alecrim-1 ou alecrim-2 da Tabela 8, que foram diluídos cada um para 0,5% em água antes do uso. As nanoemulsões assim preparadas foram submetidas a um bioensaio miticida para avaliação de suas respectivas propriedades inseticidas e/ou miticidas. Ácaros adultos de segundo instar foram colocados em discos de folhas e tratados separadamente com cada uma das nanoemulsões. A condição de controle positivo usou o Controle Competitivo (CC) disponível comercialmente, Tetracurb™-B (TC-B) e Tetracurb™- E (TC-E) (da Kemin). A condição de controle negativo não foi pulverizada para confirmar o manuseio adequado e configuração da arena. Bioensaios foram avaliados após um período de incubação de 24 horas, onde a contagem de ácaros vivos/mortos foi registrada para determinar a porcentagem de mortalidade e, portanto, a atividade antimicrobiana das nanoemulsões preparadas com alecrim-1 ou alecrim-2. Os ensaios foram replicados 6 vezes (N = 60).
[00172] Como mostrado na Fig. 7, as nanoemulsões contendo alecrim-1 e alecrim-2 produziram uma taxa de mortalidade de ácaro-rajado (TSSM) acima da condição de controle negativo e igual ou superior à condição de controle positivo, com o nano -emulsão contendo alecrim-2 tendo a maior mortalidade por TSSM.
EXEMPLO 5 Avaliação dos efeitos antibacterianos sinérgicos de nanoemulsões antimicrobianas de acordo com a presente invenção
[00173] As formulações de Nanoemulsão Antimicrobiana foram preparadas variando os ingredientes da composição, bem como sua concentração. A composição das várias formulações de nanoemulsão aquosa preparadas e testadas são apresentadas na Tabela 9. A eficácia antibacteriana das formulações de nanoemulsão aquosa da presente invenção foi testada in vitro seguindo os padrões da Agência de Proteção Ambiental dos Estados Unidos (EPA). Bactérias (Staphylococcus aureus) foram expostas a cada formulação por 30 segundos após incubação a 37ºC por 24 horas. No dia seguinte, as colônias foram contadas e os resultados expressos em escala logarítmica como uma redução no número de colônias em comparação com um controle positivo com efeitos bactericidas conhecidos. Formulações Ingredientes% F (10S F (0S + F (10S + F (15S + F (28O + F (35O + (w / w) + 0Q) 10Q) 10Q) 10Q) 10Q) 10Q) Óleo de 40 40 40 40 40 40 tomilho Glicerol 18.5 18.5 18.5 18.5 5 5 Isopropanol 7.5 7.5 7.5 3.5 3.5 0
Lactato de 14 14 14 13 13.5 10 butila Sorbato de 10 0 10 15 - - potássio 3% Quillaja + 1% de ácido 0 10 10 10 10 10 cítrico + 96% H2O Oleato - - - - 28 35 Ácido cítrico 10 10 0 0 0 0 1% Total 100 100 100 100 100 100 Tabela 9. Formulações antimicrobianas preparadas e testadas na presente invenção para avaliar os efeitos sinérgicos
[00174] Referindo-se à Fig. 8, são mostrados os efeitos sinérgicos da combinação de sorbato de potássio(S) e extrato de Quillaja(Q) na eficácia antimicrobiana das formulações testadas. Oleato(O) foi usado como um controle alternativo para o sorbato de potássio. Os resultados mostram que as formulações compreendendo apenas sorbato de potássio ou extrato de Quillaja [F (10S+0Q) e F (0S+10Q)], e as formulações em que o sorbato de potássio é substituído por oleato [i.e. F (28O+10Q) e F (35O+10Q)], teve desempenho pior do que a formulação de controle positivo D25b130 (ou seja, 23% p/p de cristal de timol, 14% p/p de isopropanol, 48% p/p SLS, 1,4% p/w ácido cítrico, 13,6% w/w H2O).
Surpreendentemente, a combinação de concentrações crescentes de sorbato de potássio com extrato de Quillaja exibiu eficácia antimicrobiana muito melhorada para a qual cerca de 0,5 log (cerca de 3,2x) sobre a formulação de controle positivo D25b130 e mais de 0,75 log (cerca de 5,6x) sobre as formulações que continham potássio sorbato ou extrato de Quillaja por si só demonstram claramente um efeito sinérgico das combinações desses ingredientes na formulação da presente invenção.
EXEMPLO 6 Avaliação adicional dos efeitos antibacterianos sinérgicos de nanoemulsões antimicrobianas de acordo com a presente invenção
[00175] Para caracterizar ainda mais o efeito sinérgico da combinação do extrato de Quillaja e sorbato de potássio, formulações de nanoemulsões antibacterianas foram preparadas variando os ingredientes na composição, bem como sua concentração. A composição das várias formulações de nanoemulsões aquosas preparadas e testadas são apresentadas na Tabela 10. A eficácia antibacteriana das formulações de nanoemulsões aquosas da presente invenção foi testada in vitro seguindo os padrões da Agência de Proteção Ambiental dos Estados Unidos (EPA). Bactérias (Staphylococcus aureus) foram expostas a cada formulação por 30 segundos após incubação a 37ºC por 24 horas. No dia seguinte, as colônias foram contadas e os resultados expressos em escala logarítmica como uma redução no número de colônias em comparação com um controle positivo com efeitos bactericidas conhecidos.
Ingredientes FS1 FS2 FS3 FS4 FS5 FS6 FS7 FS8 FS9 FS10 FS11 Tomilho VDH2 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 IP 7.5 7.5 7.5 7.5 7.5 7.5 7.5 4 7.5 7.5 7.5 Butilo 14 14 14 14 14 14 14 13 14 14 14 Quillaja 15 5 10 5 5 5 10 15 20 20 0 Glicerol 13.5 20 8.5 18.5 15 10 3.5 3 8.5 13.5 20 Ácido Cítrico 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Sorbato 10 10 20 0 15 20 25 25 10 5 5 H2O 0 3.5 0 2.5 0 0 0 0 0 0 13.5 Oleato 0 0 0 12.5 3.5 3.5 0 0 0 0 0 Total 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 Tabela 10. Formulações antimicrobianas testadas para avaliar o efeito sinérgico Concentrado FS1 FS2 FS3 FS4 FS5 FS6 FS7 FS8 FS9 FS10 FS11 Sorbato/Quillaja 0.7 2.0 2.0 0.0 3.0 4.0 2.5 1.7 0.5 0.3 0 Redução de Log 3.1 3.0 2.5 1.8 2.5 2.4 2.0 2.1 2.2 2.7 1.6 Aumento de vezes em comparação com 20 15.8 5 0 5 4 1.6 2 2.5 7.9 - FS4 Aumento de vezes em comparação com 32 25 8 - 8 6.3 2.5 3 8 12.6 0 FS11 Tabela 11. Efeito antimicrobiano das formulações testadas – concentrado
Diluição 1/256 FS1 FS2 FS3 FS4 FS5 FS6 FS7 FS8 FS9 FS10 FS11 Sorbato/Quillaja 0.7 2.0 2.0 0.0 3.0 4.0 2.5 1.7 0.5 0.3 0 Redução de Log 2.97 2.86 2.67 2.06 2.52 2.84 2.98 3.00 2.70 2.91 1.8 Aumento de vezes em comparação 8.1 6.3 4.1 0 2.9 6 8.3 8.7 4.4 7.1 - com FS4 Aumento de vezes em comparação 14.8 11.5 7.4 - 5.2 11 15 15.8 7.9 12.9 0 com FS11 Tabela 12. Efeito antimicrobiano das formulações testadas - diluição 1/256 Diluição 1/512 FS1 FS2 FS3 FS4 FS5 FS6 FS7 FS8 FS9 FS10 FS11 Sorbato/Quillaja 0.7 2.0 2.0 0.0 3.0 4.0 2.5 1.7 0.5 0.3 0 Redução de Log 1.32 1.19 1.15 1.01 1.49 1.42 1.57 1.29 1.44 1.30 0.9 Aumento de vezes em comparação com 2 1.5 1.4 0 3 2.6 3.6 1.9 2.7 1.9 - FS4 Aumento de vezes em comparação com 2.6 1.9 1.8 - 3.9 3.3 4.7 2.5 3.5 2.5 0 FS11 Tabela 13. Efeito antimicrobiano das formulações testadas - diluição 1/512
[00176] Com referência às Figs. 9 a 11 e Tabelas 11 a 13, os resultados apresentados mostram os efeitos sinérgicos da combinação de sorbato de potássio e extrato de Quillaja (fornecido como a porcentagem de um Quillaja a 3% + 1% de ácido cítrico + 96% de concentrado de H2O) em diferentes concentrações sobre a eficácia antimicrobiana das formulações testadas. O oleato foi utilizado como um controle alternativo para o sorbato de potássio, bem como um ingrediente adicional nas formulações FS5 e FS6, para melhorar a estabilidade dessas formulações. Os resultados mostram que as formulações que não compreendem sorbato de potássio (ou seja, a formulação FS4) ou nenhum extrato de Quillaja (ou seja, a formulação FS11) tiveram um desempenho pior do que qualquer uma das outras formulações e serviram como pontos de dados de referência para normalização dos resultados. As razões das porcentagens de sorbato sobre o extrato de Quillaja são apresentadas nas Tabelas 11 a 13.
[00177] Figs. 9 a 11 também mostram graficamente essas razões, bem como apresentam a redução logarítmica para cada formulação em comparação com a formulação FS4. Nas Tabelas 11 a 13, o aumento de vezes na redução em comparação com as formulações FS4 e FS11 é apresentado, para cada uma das formulações concentradas testadas diretamente e as diluições de 1/256 e 1/512. Surpreendentemente, todas as formulações concentradas exibiram forte sinergia entre o sorbato de potássio e o extrato de Quillaja, assim como todas as formulações diluídas a 1/256. A maioria das formulações diluídas a 1/512 também exibiu um comportamento sinérgico.
EXEMPLO 7 Use contra o fogo bacteriano de maçãs usando um ensaio de flor destacada para infecção de flores
[00178] O objetivo deste exemplo é testar o potencial de nanoemulsões antibacterianas contendo óleo de tomilho da presente invenção contra a fogo bacteriano e comparar os resultados obtidos com os resultados obtidos com estreptomicina, que é um padrão da indústria.
[00179] O fogo bacteriano causado por Erwinia amylovora é a doença mais devastadora tanto da maçã quanto da pera. Na maioria das circunstâncias, as infecções durante a floração através do nectário das flores são a maior preocupação. As estratégias de controle geralmente visam proteger flores com substâncias antagônicas às bactérias quando as condições de temperatura e umidade durante o florescimento favorecem a infecção.
[00180] Em muitas partes do mundo, bactericidas como a estreptomicina são pulverizados rotineiramente durante a floração para esse fim. No entanto, as crescentes preocupações sobre o uso de tal composto e a disseminação de cepas de bactérias resistentes levaram a esforços para encontrar alternativas que sejam econômicas e aceitáveis para diferentes mercados, incluindo a agricultura orgânica.
Os ensaios de flores destacadas (Pusey 1997) mostraram ser um método eficiente para rastrear preparações potenciais. O teste de floração reproduz infecções naturais e os resultados anteriores mostraram uma forte correlação com os dados de campo (Kunz e Haug 2006).
Materiais e métodos
[00181] Macieiras em vasos de 2 anos dormentes refrigeradas (cv Gala) foram forçadas a florescer em temperatura ambiente no final de março de 2019. Flores individuais frescas foram colhidas à medida que floresciam e colocadas em pequenos frascos contendo 10% de sacarose, garantindo que seus pedicelos estivessem submersos. Os frascos foram inseridos em prateleiras que foram colocados em pequenas caixas herméticas para incubação a 25° C. Uma camada fina de solução de glicerol em água (33% p/p) em cada caixa mantinha a umidade constante. As flores foram inoculadas individualmente diretamente no hipanto com 10 L de uma suspensão de 105 UFC/mL de Erwinia amylovora em PBS com Tween 20 a 0,1% p/p. Metade das flores foi inoculada com uma cepa resistente à estreptomicina (153sm5) coletada em Oregon, EUA, e a outra metade com uma cepa local sensível à estreptomicina (435s). Ambas as cepas se mostraram muito agressivas em testes anteriores. Aproximadamente 30 minutos após a inoculação, 10 flores individuais selecionadas aleatoriamente de cada cepa e organizadas em 5 blocos foram inundadas com 32 L de cada tratamento. Os tratamentos consistiram em um tratamento de controle F25 VDH2 (1/200) ("controle Thymox" a seguir) ou um controle padrão de estreptomicina 17 (0,6 g/L). Um controle de água e um controle não inoculado também foram incluídos (dados não mostrados). Após 72 h de incubação, todas as flores foram tratadas com uma suspensão aquosa de Scala (pirimetanil, 40% p/p) a uma taxa de 3 ml/L (ou seja, uma concentração final de 0,3% v/v) para minimizar a contaminação fúngica. Uma escala não paramétrica foi usada para estimar a severidade da doença (SD) 7 dias após a inoculação. A SD foi classificada da seguinte forma: 0 = ausência de necrose; 1 = necrose de minuto; 2 = ovário parcialmente necrótico; 3 = ovário gravemente necrótico; e 4 = necrose estendendo-se até o pedicelo. As pontuações de gravidade excluindo flores tratadas com estreptomicina foram analisadas com um modelo combinado de ligação cumulativa (clmm) no pacote “ordinal” de R (Christensen 2015) usando blocos como um efeito aleatório. Por causa da separação, os dados com estreptomicina foram analisados com a função “bracl” do pacote “brglm2” sob R usando redução de enviesamento médio (Kosmidis, Pagui e Sartori 2019). A formulação, concentração e a interação com a cepa bacteriana foram exploradas para modelar a eficácia do tratamento.
Resultados
[00182] A Fig. 12 mostra os dados brutos representados como um gráfico de barra cumulativo para a gravidade da doença. Como esperado, a estreptomicina inibiu fortemente o fogo bacteriano em flores inoculadas com uma cepa sensível da bactéria, mas não mostrou nenhum efeito na cepa resistente. Nenhuma doença foi encontrada nos controles não inoculados (não mostrados). Os tratamentos de controle com Thymox reduziram a severidade da doença em plantas sensíveis à estreptomicina (redução de 27,5%) e, surpreendentemente, reduziram fortemente a severidade da doença em plantas resistentes à estreptomicina (redução de 52%). Estes resultados demonstram que quando o problema de resistência aos antibióticos é um problema para proteger as plantas, o controle Thymox™ pode ser usado para ajudar as plantas a resistir contra bactérias.
EXEMPLO 8 Tratamento de controle Thymox protege pêras e maçãs contra o fogo bacteriano
[00183] A composição da presente invenção (Controle Thymox™) foi usada em testes de campo em pêras e maçãs, conforme apresentado na Tabela 14 abaixo.
Aplicação Teste A Teste B Teste C Pêras (Concorde, Pêras (Bartlett & Tipo de colheita Maçãs (Pink Lady) Cornice) Anjou) 20 de junho de 2019, 5h30, 18 ° C 7 de junho de 2019, 4 de junho de 2019, Datas e Frequência no momento da 6h, 22 ° C 6h30, 22-26 ° C aplicação e sol/céu limpo Solução a 0,5% (2 Solução de 0,5% (2 quartos em 100 quartos em 100 0,5% v/v/solução galões de água por galões de água por aplicada com Rears acre) aplicada com Diluição/Fórmula Bexar, Assail. acre) aplicada com Power Blast com uma pistola para ventilador de 33 '' Rimon, Agri-Mek e minimizar a deriva Summer oil-air-o- fan Pulverizador de jato de ar com acionamento do motor Nenhum fogo Nenhum fogo Nenhum fogo Resultados bacteriano bacteriano bacteriano observado observado observado Tabela 14 - Parâmetros e resultados do teste EXEMPLO 9 Tratamento de controle Thymox protege macieiras contra o fogo bacteriano
[00184] A composição da presente invenção (controle Thymox™) foi usada em testes de campo em pêras e maçãs, conforme apresentado na Tabela 15 abaixo.
Aplicação Teste A Teste B Tipo de colheita Maçãs (Pink Lady) Apples (Honeycrisp) 4 aplicações e 1 aplicação de Previsto Cobre Frequência orgânico a cada 5 dias Superfície de campo 1 acre Diluição/Formulação Controle Thymox ™ 0,5% 100 galões RTU/acre Tabela 15 - Parâmetros de teste
[00185] A aplicação interrompe completamente o fogo bacteriano, o que foi considerado inesperado, pois a macieira Pink Lady é uma variedade de maçã mais suscetível à doença.
EXEMPLO 10 O tratamento de controle Thymox ™ protege uvas e cerejas contra o oídio
[00186] A composição da presente invenção (controle Thymox™) foi usada em testes de campo em cerejas e uvas contra o oídio, conforme apresentado na Tabela 16 abaixo.
Aplicação Teste A Teste B Tipo de colheita Cerejas Uvas (Chardonnay) 5 de junho de 2019, um 10 de junho, 10 de julho, Data e Frequência aplicativo; Airblast 130 13 de julho, 3 aplicações gal/acre Superfície de campo 2 acres Condições do tempo Ensolarado e seco Vento quente, seco e fraco Solução de controle de Solução de controle de 0,5% Thymox a 0,5% Diluição/Formulação Thymox™ Mistura do tanque com enxofre Tabela 16 - Parâmetros e resultados do teste
[00187] As cerejas não apresentaram nenhum oídio devido à aplicação e, inesperadamente, pássaros, que normalmente comem as cerejas, repelimos com a aplicação de Controle Thymox™. As uvas apresentaram uma diminuição, mas não uma eliminação do oídio, e a co-aplicação de outro fungicida aumentaria o controle de pragas.
EXEMPLO 11 Avaliação da eficácia da aplicação foliar do controle Thymox no cânhamo contra doenças de plantas fúngicas: Mofo cinzento (Botrytis spp.) E Oídio (Leveillula sp.) Materiais e métodos
[00188] O experimento foi conduzido em casa de vegetação no delineamento de blocos ao acaso com 6 repetições /4 plantas por repetição. Os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e as médias de tratamento foram separadas ao nível de 5% de probabilidade (ou seja, p = 0,05). As plantas foram inoculadas com Botrytis spp. ou Leveillula sp. Os tratamentos foram observados e Septoria (Septoria cannabis) e Oídio (Leveillula Taurica) foram avaliados quanto à gravidade e incidência. Os tratamentos foram os seguintes: 1 = Sem tratamento; 2 = Tratamento comercial padrão (GreenCure® da GreenCure® Solutions, que contém 85% de bicarbonato de potássio); e (iii) tratamento de controle Thymox após 3 tratamentos/ 30 dias, 4 tratamentos/ 30 dias, 5 tratamentos/ 30 dias e 7 tratamentos/ 30 dias.
Resultados
[00189] Agora referindo-se à Fig. 13, é mostrado que o tratamento de controle Thymox™ inibiu completamente a incidência e a gravidade da doença em plantas infectadas com Septoria (lado esquerdo) e Oídio (lado direito).
EXEMPLO 12 O tratamento de controle Thymox™ inibe significativamente a Botrytis na estévia Materiais e métodos:
[00190] As propriedades de inibição de Botrytis do tratamento de controle Thymox™ foram avaliadas em Stevia. O tratamento de controle Thymox™ foi diluído 1/200 e pulverizado (isto é, a uma taxa de 0,5% v/v) em plantas contaminadas com Botrytis. Um dia após o tratamento, o efeito do controle Thymox™ em Botrytis foi avaliado.
Resultados
[00191] O tratamento de controle Thymox™ inibe completamente o Botrytis na Stevia. Conforme mostrado na Fig. 14, a maioria das folhas está infectada com Botrytis (ou seja, a condição anterior ao tratamento no lado esquerdo da Fig. 14), mas 24 horas após o tratamento, os danos induzidos por Botrytis nas folhas são completamente revertidos (ou seja, a condição pós-tratamento do lado direito).
EXEMPLO 13 O controle Thymox ™ não é fitotóxico para as plantas
[00192] A fitotoxicidade do tratamento de controle Thymox™ foi avaliada. Um dos problemas associados à aplicação de formulações à base de óleos essenciais é a sensibilidade das plantas a esses óleos em termos de fitotoxicidade. Em outras palavras, as folhas das plantas podem queimar e ficar amarelas ou laranja devido à fitotoxicidade das formulações de óleos essenciais, o que não é desejado pelos produtores e agricultores.
Materiais e Método
[00193] O tratamento de controle Thymox foi diluído 1/200 e pulverizado (isto é, a uma taxa de 0,5% v/v) em diferentes espécies de plantas para verificar a fitotoxicidade.
Resultado
[00194] Conforme mostrado na Fig. 15, a aplicação do tratamento de controle Thymox™ em Artimesia Silvermound (ou seja, a condição de pós-tratamento no lado direito da Fig.
15) não causa qualquer fitotoxicidade em comparação com Artimesia Silvermound após o tratamento (ou seja, o antes - condição de tratamento no lado esquerdo da Fig. 15).
[00195] Da mesma forma, como mostrado na Fig. 16, a aplicação do tratamento de controle Thymox™ em Artimesia “Powis Castle” (ou seja, a condição pós-tratamento no lado direito da Fig. 16) não causa qualquer fitotoxicidade em comparação com Artimesia “Powis Castle” após o tratamento (ou seja, a condição antes do tratamento no lado esquerdo da Fig. 16). Na verdade, as folhas de Artimesia “Powis Castle” tornam-se ainda mais saudáveis e verdes após a aplicação do tratamento de controle Thymox em comparação com as folhas de Artimesia “Powis Castle” antes da aplicação.
EXEMPLO 14
FORMULAÇÃO COMPREENDENDO VITAMINA C
[00196] As formulações de acordo com as presentes invenções também podem ser formuladas incluindo vitamina C (isto é, ácido ascórbico ou ascorbato). Exemplos de formulações compreendendo vitamina C, em comparação com a formulação F25 mostrada na Tabela 5 acima, são mostrados na tabela 17 abaixo.
F25-VC1 F25-VC2 F25 Ingredientes (% w/w) (% w/w) (% w/w) Óleo de tomilho 25 24 27 Isopropanol 4.5 4.5 4.3 Lactato de butila 16 16 15.8 Glicerol 22.5 22.5 22.5 Sorbato de
18.5 18.5 18.3 potássio Quillaja 0.35 0.35 0.35 Ácido Cítrico 0.15 0.15 0.15 Vitamina C 2 3 0 H2O 11 11 11.6 Total 100 100 100 Tabela 17. Formulações exemplares com base na formulação F25, compreendendo vitamina C.
[00197] Para avaliar ainda mais a atividade antibacteriana dessas formulações, elas foram submetidas a um teste quantitativo que compara a eficácia de uma determinada nanoemulsão com base em sua capacidade de prevenir a formação de colônias bacterianas, o chamado teste antimicrobiano seco contado em Petri (PAMB) Resumidamente, as formulações foram adicionadas a placas de Petri inoculadas com 106 Staphylococcus aureus e a redução logarítmica no número de colônias foi contada após um período de incubação de 24 horas, onde uma maior redução log representa uma maior atividade antibacteriana.
[00198] Agora referindo-se à Fig. 17, é mostrada uma comparação das formulações da presente invenção compreendendo vitamina C detalhada na Tabela 17 acima, em comparação com a formulação de base. Os resultados mostram que a substituição do óleo essencial (no caso, óleo de tomilho) pela vitamina C preserva a atividade antibacteriana da formulação.
[00199] Embora modalidades preferidas tenham sido descritas acima e ilustradas nos desenhos anexos, será evidente para os técnicos no assunto que modificações podem ser feitas sem se afastar desta divulgação. Tais modificações são consideradas como possíveis variantes compreendidas no escopo da divulgação.
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Claims (51)

REIVINDICAÇÕES
1. Formulação de nanoemulsão aquosa, caracterizada pelo fato de que compreende: a) de cerca de 0,05% a cerca de 55% em peso de um óleo; b) de cerca de 0,04% a cerca de 65% em peso de um solvente; c) de cerca de 0,01% a cerca de 25% de um sorbato; d) de cerca de 0,00025% a cerca de 0,37% em peso de uma saponina, em uma quantidade suficiente para formar uma nanoemulsão do referido óleo em água; e) água suficiente para perfazer 100 por cento em peso.
2. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o referido óleo é um óleo essencial ou um ingrediente ativo do mesmo.
3. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o referido óleo essencial é um óleo essencial antimicrobiano, um óleo essencial antibacteriano, um óleo essencial desinfetante, um óleo essencial pesticida ou uma combinação dos mesmos.
4. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o referido óleo essencial é qualquer um de óleo de anis, óleo de limão, óleo de laranja, óleo de orégano, óleo de alecrim, óleo de gaultéria, óleo de tomilho, óleo de lavanda, óleo de cravo, óleo de lúpulo, óleo de melaleuca, óleo de citronela, óleo de trigo, óleo de cevada, óleo de capim-limão, óleo de folha de cedro, óleo de madeira de cedro, óleo de canela, óleo de pulga-de-grama, óleo de gerânio, óleo de sândalo, óleo de violeta, óleo de airela, óleo de eucalipto, óleo de verbena, óleo de hortelã-pimenta, óleo de manjericão, óleo de erva- doce, óleo de abeto, óleo de bálsamo, óleo de ocmea origanum, óleo de Hydastis carradensis, óleo de Berberidaceae daceae, Óleo de Ratanhiae, óleo de cúrcuma longa, óleo de gergelim, óleo de noz de macadâmia, óleo de prímula, óleo de coentro, óleo de bagas de pimentão, óleo de rosa, óleo de bergamota, óleo de pau-rosa, óleo de camomila, óleo de salva, óleo de sálvia sclarea, óleo de cipreste, óleo de erva-doce, óleo de olíbano, óleo de gengibre, óleo de toranja, óleo de jasmim, óleo de zimbro, óleo de cal, óleo de tangerina, óleo de manjerona, óleo de mirra, óleo de neroli, óleo de patchouli, óleo de pimenta, óleo de pimenta preta, óleo de petitgrain, óleo de pinho, óleo de rosa otto, óleo de hortelã, óleo de nardo, óleo de vetiver, um óleo essencial de conífera, ylang ylang ou combinações dos mesmos.
5. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o referido óleo essencial é óleo de tomilho.
6. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o referido óleo essencial é óleo de alecrim.
7. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o referido ingrediente ativo é timol, carvacrol, cinamaldeído, citral, mentol, geraniol, capsaicina, paracimeno ou combinações dos mesmos.
8. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o referido óleo é óleo de neem, óleo de semente de algodão e uma combinação dos mesmos.
9. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda de cerca de 0,0002% a cerca de 0,3% em peso de um agente de ajuste de pH.
10. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 5, caracterizada pelo fato de que o referido óleo de tomilho é de origem natural, de origem sintética ou uma combinação dos mesmos.
11. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 ou 6, caracterizada pelo fato de que o referido óleo de alecrim é de origem natural, de origem sintética ou uma combinação dos mesmos.
12. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada pelo fato de que o referido solvente é pelo menos um de 1,2- dicloroetano, 2-butanona, acetona, acetonitrila, benzeno,
tetracloreto de carbono, clorofórmio, ciclo-hexano, hexano, pentano, tetrahidrofurano, 1,1-dicloroetano, 1,2- dicloroetano, 1-butanol, 1-heptanol, 1-hexanol, 1-octanol, 1-pentanol, 1-propanol, 2-aminoetanol, 2-butanol, 2- butanona, 2-pentanol, 2-pentanona, 2-propanol, 3-pentanol, 3-pentanona, ácido acético, acetona, acetonitrila, acetil acetona, anilina, anisol, benzeno, benzonitrila, álcool benzílico, acetato de butila, lactato de butila, dissulfeto de carbono, tetracloreto de carbono, clorobenzeno, clorofórmio, ciclo-hexano, ciclo-hexanol, ciclo-hexanona, diclorometano, éter dietílico, dietilamina, dietilenoglicol, diglima, éter diisopropílico, dimetoxietano, dimetilformamida, dimetilftalato, dimetilsulfóxido, di-n- butilftalato, dioxano, etanol, éter, acetato de etila, etil acetoacetato, etil benzoato, etilenoglicol, glicerol, heptano, hexano, i-butanol, isopropanol, metanol, acetato de metila, éter metil t-butílico, cloreto de metileno, éter metil-t-butílico, N, N-dimetilanilina, pentano, p-xileno, piridina, álcool t-butílico, tetra-hidrofurano, tolueno, tricloroetileno, água, água pesada e xileno.
13. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que pelo menos um solvente é pelo menos dois solventes, pelo menos três solventes, pelo menos quatro solventes ou pelo menos cinco solventes.
14. Formulação de nanoemulsão, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que pelo menos um solvente é pelo menos três solventes.
15. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 14, caracterizada pelo fato de que os referidos três solventes compreendem isopropanol, glicerol e lactato de butila.
16. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizada pelo fato de que o referido sorbato é sorbato de potássio, sorbato de sódio, sorbato de cálcio, ácido sórbico ou combinações dos mesmos.
17. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 16, caracterizada pelo fato de que o referido sorbato é sorbato de potássio.
18. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizada pelo fato de que a referida saponina é fornecida por um extrato vegetal.
19. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo fato de que o referido extrato vegetal é um extrato de Quillaja saponaria, um extrato de Yucca schidigera, um extrato de castanha da Índia, um extrato de semente de chá, um extrato de soja e suas combinações.
20. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pelo fato de que o referido extrato vegetal é um extrato de Quillaja saponaria.
21. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo fato de que a referida formulação de nanoemulsão aquosa compreende de cerca de 0,004 a cerca de 0,5% em peso do referido extrato de Quillaja saponaria.
22. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 21, caracterizada pelo fato de que o referido agente de ajuste de pH é pelo menos um dentre ácido cítrico, ácido lático, ácido clorídrico, ácido bórico, ácido acético, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, ácido sulfúrico, cálcio carbonato (CaCO3), carbonato de amônio, bicarbonato de amônio, citrato de amônio, citrato de sódio, carbonato de magnésio, carbonato de sódio, fosfato mono, di e/ou trissódico, fosfato mono, di e/ou tripotássico, Tris (hidroximetil) aminometano (TRIS), aminoácidos e zwitterions, como glicina, 2-amino-2metil-1,3- propanodiol (AMPD), Ácido N-(1,1-Dimetil-2-hidroxietil)-3- amino-2-hidroxipropanossulfônico (AMPSO), N-Glicilglicina (Gly-Gly), ácido 4-(2-hidroxietil)piperazina-1- propanossulfônico (EPPS ou HEPPS), Ácido 3- (ciclo- hexilamino)-1-propanossulfônico (CAPS), ácido 3- (ciclo- hexilamino)-2-hidroxi-1-propanossulfônico (CAPSO), ácido 2-
(ciclo-hexilamino)etanossulfônico (CHES), Ácido N, N-bis [2- hidroxietil]-2-aminoetanossulfônico (BES), ácido(2- [2- hidroxi-1,1-bis(hidroximetil)etilamino]etanossulfônico) (TES), 2-(N-morfolino)ácido etanossulfônico (MES), N-[Tris (hidroximetil)metil]glicina (Tricina); Ácido N-Tris (hidroximetil)metil-3-aminopropanossulfônico (TAPS) e ácido 3-N-morfolino propanossulfônico (MOPS), ácido piperazie-N, N'-bis[2-hidroxipropanossulfônico] (POPSO) e suas combinações.
23. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 22, caracterizada pelo fato de que o referido agente de ajuste de pH é pelo menos ácido cítrico.
24. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizada pelo fato de que compreende ainda vitamina C.
25. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 24, caracterizada pelo fato de que a referida formulação de nanoemulsão aquosa compreende de cerca de 0,002 a cerca de 5% em peso da referida vitamina C.
26. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizada pelo fato de que a referida formulação de nanoemulsão aquosa compreende: a) de cerca de 0,05% a cerca de 55% em peso de óleo;
b) de cerca de 0,005% a cerca de 7,5% em peso de isopropanol; c) de cerca de 0,02% a cerca de 30% em peso de glicerol; d) de cerca de 0,02% a cerca de 27% em peso de lactato de butila; e) de cerca de 0,01% a cerca de 25% de sorbato de potássio; f) de cerca de 0,0004% a cerca de 0,5% em peso de um extrato de Quillaja saponaria, em uma quantidade suficiente para formar uma nanoemulsão do referido óleo em água; g) de cerca de 0,0002% a cerca de 0,3% em peso de ácido cítrico; h) água suficiente para perfazer 100% do peso.
27. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizada pelo fato de que a referida formulação aquosa de nanoemulsão não compreende tensoativo adicional.
28. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizada pelo fato de que compreende um pH que varia de cerca de 6 a cerca de 9.
29. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26 e 28, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um tensoativo ou um outro agente emulsificante.
30. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizada pelo fato de que a referida formulação de nanoemulsão aquosa não compreende desinfetante, pesticida ou sanitizante adicional.
31. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 5, 7 e 9 a 30, caracterizado pelo fato de ser para uso como formulação desinfetante.
32. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 4, 6 e 9 a 30, caracterizado pelo fato de ser para uso como formulação pesticida para o controle de uma praga.
33. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 30, caracterizada pelo fato de que é para uso na regulação do crescimento de uma semente ou planta.
34. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 32 a 33, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um outro pesticida, um fertilizante, um antiespumante, um regulador de crescimento vegetal ou combinações dos mesmos.
35. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de que o referido pesticida é escolhido a partir de um algicida, um agente anti-incrustante, um desinfetante, um fungicida, um fumigante, um herbicida, um moluscicida, um ovicida, um rodenticida, um crescimento de inseto, um bactericida, um virucida, um repelente de insetos, um repelente de artrópodes, um nematicida, um inseticida, um acaricida, um herbicida e um regulador de crescimento vegetal.
36. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de que o referido fertilizante é escolhido a partir de fertilizantes, um fertilizante inorgânico, um fertilizante de nitrogênio, um fertilizante de potássio, um fertilizante de fosfato, um fertilizante orgânico, um estrume, um composto, um fosfato de rocha, uma farinha de osso , uma alfafa, uma lasca de madeira, uma langbeinite, uma colheita de cobertura, sulfato de potássio, um pó de rocha, cinzas, uma farinha de sangue, uma farinha de peixe, uma emulsão de peixe, uma alga, uma quitosana e um melaço.
37. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com a reivindicação 34, caracterizada pelo fato de que o referido antiespumante é escolhido a partir de um óleo mineral, um óleo vegetal, uma cera de parafina, uma cera de éster, uma sílica, um álcool graxo, um silicone, um polietilenoglicol, um polipropilenoglicol, copolímero e um alquil poliacrilato.
38. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que o referido regulador de crescimento vegetal é escolhido de um carbamato, um hidrocarboneto clorado, ciclo-hexadiona, um ácido orgânico, ancimidol, etefon, ácido giberélico, giberelinas e benazladenina, hidrazida maleica, NAA, naftaleno acetamida, paclobutrazol, ácido N-acetilaspártico.
39. Método de uso da formulação de nanoemulsão aquosa, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 38, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de diluir a formulação de nanoemulsão aquosa com água.
40. Método de desinfecção de uma superfície, caracterizado pelo fato de que compreende a aplicação da formulação de nanoemulsão aquosa, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 3 a 5, 7 e 9 a 31, a uma superfície que precisa ser desinfetada.
41. Método para o controle de uma praga de solo, uma semente ou uma planta, o método caracterizado pelo fato de que compreende o contato da referida semente ou planta com uma quantidade pesticida da formulação de nanoemulsão aquosa, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 35.
42. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 32 a 38, ou método da reivindicação 41, caracterizada pelo fato de que a referida praga é escolhida a partir de um inseto, um nematoide, um fungo, uma bactéria, uma larva, uma planta, um animal, um vírus, um parasita, um gastrópode, um artrópode, um caracol,
uma lesma, uma alga ou combinações dos mesmos.
43. Formulação de nanoemulsão aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 32 a 38, ou método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizada pelo fato de que a referida praga é fogo, oídio, septório e botrítis.
44. Método, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que a referida planta é uma erva daninha.
45. Método, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que o referido artrópode é um ácaro.
46. Método, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que o referido inseto é uma mariposa.
47. Método para regular o crescimento de uma semente ou planta, o método caracterizado pelo fato de que compreende o contato da referida semente ou planta com uma quantidade reguladora do crescimento da formulação desinfetante aquosa, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 38.
48. Método, de acordo com a reivindicação 47, caracterizado pelo fato de que a regulação do crescimento compreende um aumento no número de frutas, vegetais, bulbos ou tubérculos da referida planta.
49. Método, de acordo com a reivindicação 47, caracterizado pelo fato de que a regulação do crescimento compreende um aumento no tamanho da fruta, vegetal, bulbo ou tubérculo da referida planta.
50. Método, de acordo com a reivindicação 47, caracterizado pelo fato de que a regulação do crescimento compreende um aumento no número de plantas saudáveis.
51. Método, de acordo com a reivindicação 47, caracterizado pelo fato de que a referida planta é escolhida a partir de uma bananeira, uma macieira, uma pereira, uma planta de batata, uma planta de arroz, uma cafeeira, uma árvore cítrica, uma cebola, ginseng, soja, uma erva daninha, uma planta de tomate.
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