BR112021008480A2 - dendrímeros, composição, métodos para determinar se um indivíduo tem um câncer, para determinar a progressão de um câncer, para determinar uma terapia apropriada para um indivíduo e para determinar a eficácia de uma terapia contra o câncer, métodos de imagem de um câncer em um indivíduo e de tratamento de câncer, usos de um dendrímero, intermediário para a produção de um dendrímero, kit e processo para a produção de um dendrímero - Google Patents

dendrímeros, composição, métodos para determinar se um indivíduo tem um câncer, para determinar a progressão de um câncer, para determinar uma terapia apropriada para um indivíduo e para determinar a eficácia de uma terapia contra o câncer, métodos de imagem de um câncer em um indivíduo e de tratamento de câncer, usos de um dendrímero, intermediário para a produção de um dendrímero, kit e processo para a produção de um dendrímero Download PDF

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Abstract

DENDRÍMEROS, COMPOSIÇÃO, MÉTODOS PARA DETERMINAR SE UM INDIVÍDUO TEM UM CÂNCER, PARA DETERMINAR A PROGRESSÃO DE UM CÂNCER, PARA DETERMINAR UMA TERAPIA APROPRIADA PARA UM INDIVÍDUO E PARA DETERMINAR A EFICÁCIA DE UMA TERAPIA CONTRA O CÂNCER, MÉTODOS DE IMAGEM DE UM CÂNCER EM UM INDIVÍDUO E DE TRATAMENTO DE CÂNCER, USOS DE UM DENDRÍMERO, INTERMEDIÁRIO PARA A PRODUÇÃO DE UM DENDRÍMERO, KIT E PROCESSO PARA A PRODUÇÃO DE UM DENDRÍMERO. É fornecido aqui um dendrímero que compreende: i) uma unidade de núcleo (C); e ii) unidades de construção (BU), em que a unidade de núcleo está covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção; o dendrímero tendo de duas a seis gerações de unidades de construção; em que unidades de construção de diferentes gerações são covalentemente ligadas umas às outras; e o dendrímero compreendendo ainda: iii) um ou mais primeiros grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada primeiro grupo terminal compreende uma porção contendo radionuclídeo; e iv) um ou mais segundos grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada segundo grupo terminal compreende uma porção de modificação farmacocinética; ou um sal da mesma. Também são fornecidas composições compreendendo os dendrímeros e métodos de uso dos dendrímeros e composições em aplicações de diagnóstico e terapêuticas.

Description

“DENDRÍMEROS, COMPOSIÇÃO, MÉTODOS PARA DETERMINAR SE UM INDIVÍDUO TEM UM CÂNCER, PARA DETERMINAR A PROGRESSÃO DE UM CÂNCER, PARA DETERMINAR UMA TERAPIA APROPRIADA PARA UM INDIVÍDUO E PARA DETERMINAR A EFICÁCIA DE UMA TERAPIA CONTRA O CÂNCER, MÉTODOS DE IMAGEM DE UM CÂNCER EM UM INDIVÍDUO E DE TRATAMENTO DE CÂNCER, USOS DE UM DENDRÍMERO, INTERMEDIÁRIO PARA A PRODUÇÃO DE UM DENDRÍMERO, KIT E PROCESSO PARA A PRODUÇÃO DE UM DENDRÍMERO” CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção se refere a dendrímeros que compreendem uma porção contendo radionuclídeo. Os dendrímeros encontram uso em aplicações diagnósticas, teranósticas e terapêuticas, por exemplo, com imagens de tumores. A presente invenção também se refere a composições farmacêuticas que compreendem os dendrímeros e métodos de diagnóstico, imagiologia, terapia de determinação e tratamento usando os dendrímeros.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] As técnicas de imagem molecular incluem a forma de realização única, como tomografia por emissão de pósitrons (PET), tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), imagem por ressonância magnética (MRI), espectroscopia de ressonância magnética (MRS), tomografia computadorizada (CT), ultrassom, bioluminescência, imagens de fluorescência e também multimodalidades como PET/CT, SPECT/CT e PET/MRI. Métodos de imagem com base em radionuclídeos, especialmente PET, continuam a ser uma área ativa de investigação para aplicações diagnósticas e terapêuticas devido à sua alta sensibilidade (nível picomolar) e penetração ilimitada no tecido.
[003] A radioterapia é uma ferramenta poderosa contra o câncer devido à sua capacidade de induzir danos ao DNA e interrupção do ciclo celular. Aproximadamente 50% dos pacientes com câncer recebem radioterapia, com sucesso em torno de 40%. A radiação interna fornece predominantemente radionuclídeos emissores de alfa ou beta ao tumor. Os métodos existentes de entrega de radioterapia no local desejado, embora minimizando a exposição prejudicial à radiação fora do local incluem miméticos, como esferas radioativas de Xifigo (Ra223, Bayer), como sirspheres (Y-90Sirtex), e terapias direcionadas, como Lutathera (AAA/Novartis). No entanto, existe uma necessidade de terapias que permitam uma melhor distribuição de radioterapêuticos e agentes de imagem de rádio no local do tumor. Além disso, há uma necessidade de radioteranósticos que permitam tanto a imagem quanto a terapia usando os mesmos agentes ou agentes intimamente relacionados.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO
[004] Verificou-se que a radiomarcação de dendrímeros tem grande potencial para aumentar a sensibilidade para detecção de doença em estágio inicial, diagnóstico preciso e terapia personalizada de vários tipos de doença, especialmente câncer. Os dendrímeros têm a capacidade de apresentar várias funcionalidades de superfície em uma superfície, como complexos de radionuclídeos para fornecer estabilidade de imagem e agentes de modificação farmacocinética que podem aumentar significativamente a solubilidade e fornecer discrição.
[005] A invenção é com base em parte na descoberta de que dendrímeros com base em lisina ou unidades de construção de análogo de lisina que têm um átomo de nitrogênio externo ligado a uma porção contendo radionuclídeo, e que têm um átomo de nitrogênio externo ligado à porção de modificação farmacocinética, são inesperadamente eficazes em aplicações de imagem tumoral. Constatou-se que dendrímeros contendo radionuclídeos de exemplo, surpreendentemente, se acumulam em grande extensão em tumores,
incluindo tumores cerebrais.
[006] Por conseguinte, em um primeiro aspecto, é fornecido um dendrímero que compreende: i) uma unidade de núcleo (C); e ii) unidades de construção (BU), em que a unidade de núcleo está covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção; o dendrímero tendo de duas a seis gerações de unidades de construção; em que unidades de construção de diferentes gerações são covalentemente ligadas umas às outras; e o dendrímero compreendendo ainda: iii) um ou mais primeiros grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada primeiro grupo terminal compreende uma porção contendo radionuclídeo; e iv) um ou mais segundos grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada segundo grupo terminal compreende uma porção de modificação farmacocinética; ou um sal do mesmo.
[007] Em algumas formas de realização, o primeiro grupo terminal compreende um grupo de complexação e um radionuclídeo. Em algumas formas de realização, o grupo de complexação é um grupo DOTA, benzil-DOTA, NOTA, DTPA, sarcofagina ou DFO. Em algumas formas de realização, o grupo de complexação é um grupo DOTA, benzil-DOTA, NOTA, DTPA ou DFO. Em algumas formas de realização, o radionuclídeo na porção contendo radionuclídeo é um radionuclídeo de lutécio, gadolínio, gálio, zircônio, actínio, bismuto, astatina, tecnécio ou cobre. Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um radionuclídeo de gadolínio, zircônio ou lutécio.
Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um radionuclídeo de cobre, zircônio, lutécio, actínio ou astatina. Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um radionuclídeo cobre-64, cobre-67, zircônio-89, lutécio-177, actínio-225 ou astatina-211. Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um emissor α. Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um emissor β.
[008] Em algumas formas de realização, a porção de modificação farmacocinética é um grupo de polietilenoglicol (PEG) ou um grupo de polietiloxazolina (PEOX). Em algumas formas de realização, a porção de modificação farmacocinética é um grupo de PEG com um peso molecular médio de pelo menos 500 Daltons. Em algumas formas de realização, a porção de modificação farmacocinética é um grupo de PEG com um peso molecular médio na faixa de 500 a 3000 Daltons. Em algumas formas de realização, o grupo de PEG é um PEG terminado em metoxi.
[009] Em algumas formas de realização, o dendrímero compreende um terceiro grupo terminal ligado a uma unidade de construção mais externa, o terceiro grupo terminal compreendendo um resíduo de um agente farmaceuticamente ativo. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é um agente anticâncer ou radiossensibilizador. Em algumas formas de realização, o agente anticâncer é selecionado a partir do grupo que consiste em uma auristatina, um maitansinoide, um taxano, um inibidor de topoisomerase e um análogo de nucleosídeo. Em algumas formas de realização, o agente anticâncer é selecionado a partir do grupo que consiste em monometila auristatina E, monometila auristatina F, cabazitaxel, docetaxel, SN-38 e gencitabina. Em algumas formas de realização, o agente anticâncer é selecionado a partir do grupo que consiste em cabazitaxel, docetaxel e SN-38.
[010] Em algumas formas de realização, o resíduo de um agente farmaceuticamente ativo é covalentemente ligado a uma unidade de construção mais externa por meio de um ligante. Em algumas formas de realização, o resíduo de um agente farmaceuticamente ativo é covalentemente ligado a uma unidade de construção mais externa por meio de um ligante clivável. Em algumas formas de realização, o ligante é: .
[011] Em algumas formas de realização, a unidade de núcleo não fornece um ponto de ligação para um grupo terminal que não seja através das unidades de construção.
[012] Em algumas formas de realização, as gerações de unidades de construção são gerações completas.
[013] Em algumas formas de realização, a unidade de núcleo é covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção através de ligações amida, cada ligação amida sendo formada entre um átomo de nitrogênio presente na unidade de núcleo e o átomo de carbono de um grupo acila presente em uma unidade de construção. Em algumas formas de realização, a unidade de núcleo do dendrímero é formada a partir de um precursor da unidade de núcleo que compreende dois grupos amino. Em algumas formas de realização, a unidade de núcleo é: .
[014] Em algumas formas de realização, unidades de construção de diferentes gerações são covalentemente ligadas umas às outras por meio de ligações amida formadas entre um átomo de nitrogênio presente em uma unidade de construção e o átomo de carbono de um grupo acila presente em outra unidade de construção. Em algumas formas de realização, as unidades de construção são resíduos de lisina ou seus análogos. Em algumas formas de realização, as unidades de construção são: .
[015] Em algumas formas de realização, o primeiro grupo terminal está ligado ao átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa e o segundo grupo terminal está ligado ao átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa. Em algumas formas de realização, de 1 a 3 dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas estão ligados a um primeiro grupo terminal. Em algumas formas de realização, pelo menos 40% dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas estão ligados a um segundo grupo terminal.
[016] Em algumas formas de realização, o dendrímero compreende um terceiro grupo terminal ligado ao átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa, o terceiro grupo terminal compreendendo um resíduo de um agente farmaceuticamente ativo. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo compreende um grupo hidroxila, em que o resíduo de um agente farmaceuticamente ativo é covalentemente ligado através do átomo de oxigênio do grupo hidroxila através de um ligante clivável a uma unidade de construção mais externa, e em que o ligante clivável é um grupo de ligação diacila. Em algumas formas de realização, o grupo de ligação diacila é de fórmula: , em que A é um grupo alquileno C2-C10 que é opcionalmente interrompido por O, S, S-S, NH ou N(Me), ou em que A é um heterociclo selecionado a partir do grupo que consiste em tetra-hidrofurano, tetra-
hidrotiofeno, pirrolidina e N-metilpirrolidina. Em algumas formas de realização, o ligante diacila é: ou .
[017] Em algumas formas de realização, pelo menos um terço dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas estão ligados a um terceiro grupo terminal.
[018] Em algumas formas de realização, o dendrímero compreende unidades de construção mais externas que contêm grupos -NH2 e/ou que contêm um átomo de nitrogênio que é coberto com um grupo acetila.
Em algumas formas de realização, pelo menos 80% dos átomos de nitrogênio presentes na geração mais externa de unidades de construção são substituídos.
[019] Em algumas formas de realização, o dendrímero compreende unidades de superfície que compreendem uma unidade de construção mais externa e um segundo grupo terminal de fórmula: 2º Grupo Terminal em que R representa um primeiro grupo terminal ou um terceiro grupo terminal.
[020] Em algumas formas de realização, o dendrímero é qualquer um dos dendrímeros de exemplo, conforme descrito neste documento.
[021] Em outro aspecto, é fornecida uma composição que compreende uma pluralidade de dendrímeros ou sais dos mesmos,
em que pelo menos alguns dos dendrímeros na composição são conforme descritos neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, o número médio de primeiros grupos terminais por dendrímero na composição está na faixa de cerca de 0,2 a 8, e o número médio de segundos grupos terminais por dendrímero na composição está na faixa de cerca de 10 a 32.
[022] Em algumas formas de realização, o número médio do terceiro grupo terminal por dendrímero na composição está na faixa de cerca de 10 a 31. Em algumas formas de realização, a composição é uma composição farmacêutica que compreende um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[023] Em outro aspecto, é fornecido um método para determinar se um indivíduo tem um câncer, compreendendo: administrar a um indivíduo um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos; realizar imagens no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo; e determinar se o indivíduo tem um câncer com base nos resultados de imagem.
[024] Em outro aspecto, é fornecido um método de imagiologia de um câncer em um indivíduo, compreendendo: administrar a um indivíduo com câncer um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos; realizar imagens no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo.
[025] Em outro aspecto, é fornecido um método para determinar a progressão de um câncer em um indivíduo, compreendendo: administrar a um indivíduo com câncer uma primeira quantidade de um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos; realizar uma primeira etapa de imagem no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo; administrar subsequentemente ao indivíduo uma segunda quantidade de um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos; realização de uma segunda etapa de imagem no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo; e determinar se o câncer progrediu com base no primeiro e no segundo resultados de imagem.
[026] Em outro aspecto, é fornecido um método para determinar uma terapia apropriada para um indivíduo com câncer, compreendendo: administrar ao indivíduo um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos; realizar imagens no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo; e determinar se os resultados de imagem indicam suscetibilidade do câncer ao tratamento com uma terapia, administrando a terapia ao indivíduo.
[027] Em outro aspecto, é fornecido um método para determinar a eficácia de uma terapia contra o câncer administrada a um indivíduo com câncer, compreendendo: administrar ao indivíduo uma primeira quantidade de um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos; realizar uma primeira etapa de imagem no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo; administrar ao indivíduo uma terapia contra o câncer; administrar subsequentemente ao indivíduo uma segunda quantidade de um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos; realização de uma segunda etapa de imagem no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo; e determinar a eficácia da terapia contra o câncer com base no primeiro e no segundo resultado de imagem.
[028] Em algumas formas de realização de qualquer um dos métodos acima, onde uma terapia é administrada, a terapia é um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos.
[029] Em outro aspecto, é fornecido um método de tratamento de câncer compreendendo a administração a um indivíduo em necessidade de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um dendrímero conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento, de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos.
[030] Em outro aspecto, é fornecido um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, para uso no diagnóstico de câncer em um indivíduo, para uso na determinação de uma terapia apropriada para um indivíduo com câncer, para uso na determinação da progressão de um câncer ou para uso na determinação da eficácia de uma terapia contra o câncer.
[031] Em outro aspecto, é fornecido um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, para uso no tratamento do câncer.
[032] Em outro aspecto, é fornecido o uso de um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, ou o uso de uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, na fabricação de um medicamento para o diagnóstico de câncer, ou para determinar uma terapia apropriada para um indivíduo com câncer, ou para determinar a progressão de um câncer, ou para determinar a eficácia de uma terapia contra o câncer.
[033] Em outro aspecto, é fornecido o uso de um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, ou de uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos do mesmo, na fabricação de um medicamento para o tratamento do câncer.
[034] Em algumas formas de realização, o câncer é câncer de próstata, câncer de pâncreas, câncer gastrointestinal, câncer de estômago, câncer de pulmão, câncer de útero, câncer de mama, câncer cerebral ou câncer de ovário. Em algumas formas de realização, o câncer é câncer de próstata, câncer de pâncreas, câncer de mama ou câncer cerebral. Em algumas formas de realização, o câncer é um câncer cerebral de um glioblastoma, meningioma, pituitária, bainha nervosa, astrocitoma, oligodendroglioma, ependimoma, meduloblastoma ou craniofaringioma.
[035] Em algumas formas de realização, o dendrímero é administrado em combinação com uma outra droga anticâncer.
[036] Em outro aspecto, é fornecido um intermediário para a produção de um dendrímero contendo radionuclídeo que compreende:
i) uma unidade de núcleo (C); e ii) unidades de construção (BU); em que a unidade de núcleo está covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção; o dendrímero tendo de duas a seis gerações de unidades de construção; em que unidades de construção de diferentes gerações são covalentemente ligadas umas às outras; e o dendrímero compreendendo ainda: iii) um ou mais primeiros grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada primeiro grupo terminal compreende um grupo de complexação para complexar um radionuclídeo; e iv) um ou mais segundos grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada segundo grupo terminal compreende uma porção de modificação farmacocinética; ou um sal do mesmo.
[037] Em outro aspecto, é fornecido um kit para a produção de um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, compreendendo: a) um intermediário para a produção de um dendrímero contendo radionuclídeo, conforme descrito neste documento, de acordo com qualquer uma ou mais das formas de realização ou exemplos dos mesmos; e b) um radionuclídeo.
[038] Em outro aspecto, é fornecido um processo para a produção de um dendrímero, conforme descrito neste documento de acordo com qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, compreendendo: contatar um intermediário conforme definido neste documento com um radionuclídeo, produzindo assim o dendrímero contendo radionuclídeo.
[039] Será apreciado que outros aspectos, formas de realização e exemplos são descritos neste documento, os quais podem incluir qualquer um ou mais dos aspectos, formas de realização ou exemplos descritos acima.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[040] A Figura 1 mostra uma imagem de rádio-TLC para os compostos de dendrímero 1b e 3 marcados com 89Zr.
[041] A Figura 2 mostra imagens representativas in vivo que mostram a biodistribuição do composto de dendrímero 1b marcado com 89Zr em camundongos (n = 4) com xenoenxerto DU-145 em 9 dias (216 horas) após a injeção. O tumor é marcado com uma seta branca nas imagens.
[042] A Figura 3 mostra imagens representativas in vivo que mostram a biodistribuição do composto de dendrímero 1b marcado com 89Zr em camundongos (n = 4) com xenoenxerto PC3 em 9 dias (216 horas) após a injeção. O tumor é marcado com uma seta branca nas imagens.
[043] A Figura 4 mostra imagens representativas in vivo que mostram a biodistribuição do composto de dendrímero 3 marcado com 89Zr em camundongos (n = 4) com xenoenxerto DU-145 em 9 dias (216 horas) após a injeção. O tumor é marcado com uma seta branca nas imagens.
[044] A Figura 5 mostra imagens representativas in vivo que mostram a biodistribuição do composto de dendrímero 3 marcado com 89Zr em camundongos (n = 4) com xenoenxerto PC3 em 9 dias (216 horas) após a injeção. O tumor é marcado com uma seta branca nas imagens.
[045] A Figura 6 mostra um gráfico que mostra a biodistribuição in vivo para grupos de camundongos administrados com composto de dendrímero 1b ou 3 marcado com 89Zr, em xenoenxertos de câncer de próstata DU145 e PC3, 8 horas após a injeção.
[046] A Figura 7 mostra um gráfico que mostra a biodistribuição in vivo para grupos de camundongos administrados com composto de dendrímero 1b ou 3 marcado com 89Zr, em xenoenxertos de câncer de próstata DU145 e PC3, 9 dias após a injeção.
[047] A Figura 8 mostra um gráfico que mostra um gráfico de acumulação relativa em função do tempo, para grupos de camundongos administrados com composto de dendrímero 1b ou 3 marcado com 89Zr, em xenoenxertos de câncer de próstata DU145 e PC3.
[048] A Figura 9 mostra uma imagem de rádio-TLC para os compostos de dendrímero 1b e 3 marcados com 89Zr.
[049] A Figura 10 mostra imagens representativas in vivo que mostram a biodistribuição do composto de dendrímero 1b marcado com 89Zr em camundongos (n = 4) com xenoenxerto MDA-MB-468 em 9 dias (216 horas) após a injeção. O tumor é marcado com uma seta branca nas imagens.
[050] A Figura 11 mostra imagens representativas in vivo que mostram a biodistribuição do composto de dendrímero 3 marcado com 89Zr em camundongos (n = 4) com xenoenxerto MDA-MB-468 em 9 dias (216 horas) após a injeção. O tumor é marcado com uma seta branca nas imagens.
[051] A Figura 12 mostra imagens representativas in vivo que mostram a biodistribuição do composto de dendrímero 1b marcado com 89Zr em camundongos (n = 4) com xenoenxerto PANC-1 em 9 dias (216 horas) após a injeção. O tumor é marcado com uma seta branca nas imagens.
[052] A Figura 13 mostra imagens representativas in vivo que mostram a biodistribuição do composto de dendrímero 3 marcado com 89Zr em camundongos (n = 4) com xenoenxerto PANC-1 em 9 dias (216 horas) após a injeção. O tumor é marcado com uma seta branca nas imagens.
[053] A Figura 14 mostra um gráfico que mostra a biodistribuição in vivo para grupos de camundongos administrados com composto de dendrímero 1b ou 3 marcado com 89Zr, em xenoenxertos de câncer de pâncreas e de mama MDA-MB-468 e PANC-1, 8 horas após a injeção.
[054] A Figura 15 mostra um gráfico que mostra a biodistribuição in vivo para grupos de camundongos administrados com composto de dendrímero 1b ou 3 marcado com 89Zr, em xenoenxertos de câncer de pâncreas e de mama MDA-MB-468 e PANC-1, 9 dias após a injeção.
[055] A Figura 16 mostra um gráfico que mostra um gráfico de acumulação relativa em função do tempo, para grupos de camundongos administrados com composto de dendrímero 1b ou 3 marcado com 89Zr, em xenoenxertos de câncer de pâncreas e de mama MDA-MB-468 e PANC-1.
[056] A Figura 17 mostra imagens de PET-MR de camundongos com glioma, 40 horas após a injeção do composto de dendrímero 1b marcado com 89Zr. A região do tumor é mostrada com setas brancas.
[057] A Figura 18 mostra imagens de PET-MR de camundongos com glioma, 5 dias após a injeção do composto de dendrímero 1b marcado com 89Zr. A região do tumor é mostrada com setas brancas.
[058] A Figura 19 mostra um gráfico que mostra a biodistribuição ex vivo para grupos de camundongos administrados com composto de dendrímero 1b ou 3 marcado com 89Zr, em xenoenxertos de câncer de pâncreas e de mama DU145, PC3, MDA-MB-468 e PANC-1, 9 dias após a injeção.
[059] A Figura 20 mostra um gráfico que mostra a mudança percentual no volume do tumor ao longo do tempo para grupos de camundongos administrados com composto de dendrímero 4b, 5 e/ou um dendrímero contendo cabazitaxel.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO DEFINIÇÕES GERAIS
[060] A menos que especificamente definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste documento devem ser considerados como tendo o mesmo significado como comumente entendido por alguém versado na técnica (por exemplo, química, bioquímica, química medicinal, química de polímeros e semelhantes).
[061] Ao longo deste relatório descritivo, a palavra “compreende”, ou variações como “compreender” ou “compreendendo”, serão entendidas como implicando a inclusão de um elemento declarado, inteiro ou etapa, ou grupo de elementos, inteiros ou etapas, mas não a exclusão de qualquer outro elemento, inteiro ou etapa, ou grupo de elementos, inteiros ou etapas.
[062] Conforme usado neste documento, o termo “e/ou”, por exemplo, “X e/ou Y” deve ser entendido como significando “X e Y” ou “X ou Y” e deve ser considerado para fornecer suporte explícito para ambos os significados ou para qualquer um dos significados.
[063] Conforme usado neste documento, o termo cerca de, a menos que indicado o contrário, refere-se a +/- 20%, mais preferencialmente +/- 10%, do valor designado.
[064] Conforme usado neste documento, os termos “um”, “uma” e “o/a” incluem aspectos singulares e plurais, a menos que o contexto indique claramente o contrário.
[065] Salvo indicação em contrário, termos como “primeiro”, “segundo”, etc. são usados neste documento meramente como rótulos e não se destinam a impor requisitos ordinais, posicionais ou hierárquicos aos itens aos quais esses termos se referem. Além disso, a referência a um “segundo”
item não requer ou exclui a existência de um item de numeração inferior (por exemplo, um “primeiro” item) e/ou um item de numeração superior (por exemplo, um “terceiro” item).
[066] Conforme usado neste documento, a frase “pelo menos um de”, quando usada com uma lista de itens, significa que diferentes combinações de um ou mais dos itens listados podem ser usadas e apenas um dos itens na lista pode ser necessário. O item pode ser um determinado objeto, coisa ou categoria. Em outras palavras, “pelo menos um de” significa que qualquer combinação de itens ou número de itens da lista pode ser usada, mas nem todos os itens da lista podem ser necessários. Por exemplo, “pelo menos um dos itens A, item B e item C” pode significar o item A; item A e item B; item B; item A, item B e item C; ou item B e item C. Em alguns casos, “pelo menos um do item A, item B e item C” pode significar, por exemplo e sem limitação, dois do item A, um do item B e dez do item C; quatro do item B e sete do item C; ou alguma outra combinação adequada.
[067] Conforme usado neste documento, o termo “indivíduo” se refere a qualquer organismo que é suscetível a uma doença ou condição. Por exemplo, o indivíduo pode ser um animal, um mamífero, um primata, um animal de criação (por exemplo, ovelha, vaca, cavalo, porco), um animal de companhia (por exemplo, cão, gato) ou um animal de laboratório (por exemplo, rato, coelho, rato, porquinho-da-índia, hamster). Em um exemplo, o indivíduo é um mamífero. Em uma forma de realização, o indivíduo é humano. Em uma forma de realização, o indivíduo é um animal não humano.
[068] Conforme usado neste documento, o termo “tratar” inclui o alívio dos sintomas associados a um distúrbio ou condição específica. Por exemplo, conforme usado neste documento, o termo “tratamento do câncer” inclui o alívio dos sintomas associados ao câncer. Em uma forma de realização, o termo “tratamento do câncer” se refere a uma redução no tamanho do tumor cancerígeno. Em uma forma de realização, o termo “tratamento do câncer” se refere a um aumento na sobrevida livre de progressão. Conforme usado neste documento, o termo “sobrevida livre de progressão” refere-se ao período de tempo durante e após o tratamento do câncer que um paciente vive com a doença, ou seja, câncer, mas não tem uma recorrência ou aumento nos sintomas da doença.
[069] Conforme usado neste documento, o termo “prevenção” inclui a profilaxia do distúrbio ou condição específica. Por exemplo, conforme usado neste documento, o termo “prevenção do câncer” refere-se à prevenção do início ou duração dos sintomas associados ao câncer. Em uma forma de realização, o termo “prevenção do câncer” refere-se a retardar ou interromper a progressão do câncer. Em uma forma de realização, o termo “prevenção do câncer” refere-se a retardar ou prevenir metástases.
[070] O termo “quantidade terapeuticamente eficaz”, conforme usado neste documento, refere-se a um dendrímero sendo administrado em uma quantidade suficiente para aliviar ou prevenir, até certo ponto, um ou mais dos sintomas do distúrbio ou condição a ser tratada. O resultado pode ser a redução e/ou alívio dos sinais, sintomas ou causas de uma doença ou condição, ou qualquer outra alteração desejada de um sistema biológico. Em uma forma de realização, o termo “quantidade terapeuticamente eficaz” refere- se a um dendrímero sendo administrado em uma quantidade suficiente para resultar em uma redução no tamanho do tumor cancerígeno. Em uma forma de realização, o termo “quantidade terapeuticamente eficaz” refere-se a um dendrímero sendo administrado em uma quantidade suficiente para resultar em um aumento na sobrevida livre de progressão. O termo, uma “quantidade eficaz”, conforme usado neste documento, refere-se a uma quantidade de um dendrímero eficaz para atingir um efeito farmacológico desejado ou melhoria terapêutica sem efeitos colaterais adversos indevidos ou para alcançar um efeito farmacológico desejado ou melhoria terapêutica com um perfil de efeito colateral reduzido. As quantidades terapeuticamente eficazes podem por exemplo ser determinadas por experimentação de rotina, incluindo, mas não se limitando a um ensaio clínico de escalonamento de dose. O termo “quantidade terapeuticamente eficaz” inclui, por exemplo, uma quantidade profilaticamente eficaz. Em uma forma de realização, uma quantidade profilaticamente eficaz é uma quantidade suficiente para prevenir metástases. Entende-se que “uma quantidade eficaz” ou “uma quantidade terapeuticamente eficaz” pode variar de sujeito para sujeito, devido à variação no metabolismo do composto e qualquer de idade, peso, condição geral do indivíduo, a condição a ser tratada, o gravidade da condição a ser tratada e o julgamento do médico prescritor. Uma “quantidade eficaz” apropriada em qualquer caso individual pode ser determinada por um técnico no assunto usando experimentação de rotina.
[071] Conforme usado neste documento, o termo “alquila” refere- se a uma cadeia monovalente linear (isto é, linear) ou grupo hidrocarboneto saturado ramificado. Em um exemplo, um grupo alquila contém de 1 a 10 átomos de carbono ((isto é, alquila C1-10). Em um exemplo, um grupo alquila contém de 1 a 6 átomos de carbono (isto é, alquila C1-6). Exemplos de grupos alquila incluem grupos metila, etila, propila (por exemplo, n-propila, iso-propila), butila (por exemplo, n-butila, sec-butila, terc-butila), pentila e hexila.
[072] Conforme usado neste documento, o termo “alquileno” refere-se a uma cadeia linear divalente (isto é, linear) ou grupo hidrocarboneto saturado ramificado. Em um exemplo, um grupo alquileno contém de 2 a 10 átomos de carbono ((ou seja, alquileno C2-10). Em um exemplo, um grupo alquileno contém de 2 a 6 átomos de carbono (ou seja, alquileno C 2-6).
Exemplos de grupos alquileno incluem, por exemplo, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)-, -CH2CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2- e semelhantes.
[073] Os sais adequados dos dendrímeros incluem aqueles formados com ácidos ou bases orgânicos ou inorgânicos.
Conforme usado neste documento, a frase “sal farmaceuticamente aceitável” refere-se a sais orgânicos ou inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis.
Sais de adição de ácido exemplificativos incluem, mas não estão limitados a sais de sulfato,
citrato, acetato, oxalato, cloreto, brometo, iodeto, nitrato, bissulfato, fosfato,
fosfato ácido, isonicotinato, lactato, salicilato, citrato ácido, tartarato, oleato,
tanato, pantotenato, bitartarato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato,
fumarato, gluconato, glucuronato, sacarato, formato, benzoato, glutamato,
metanossulfonato, etanossulfonato, benzenossulfonato, p-toluenossulfonato e pamoato (ou seja, 1,1’-metileno(2-hidroxi-3-naftoato)). Sais de adição de base exemplificativos incluem, mas não estão limitados a sais de amônio, sais de metais alcalinos, por exemplo aqueles de potássio e de sódio, sais de metais alcalino-terrosos, por exemplo aqueles de cálcio e magnésio, e sais com bases orgânicas, por exemplo, diciclohexilamina, N-metil-D-glucomina, morfolina,
tiomorfolina, piperidina, pirrolidina, uma mono-, di- ou tri-alquilamina inferior,
por exemplo etil-, tert-butil-, dietil-, diisopropil-, trietil-, tributil- ou dimetil-
propilamina, ou uma mono-, di- ou tri-hidroxi alquilamina inferior, por exemplo mono-, di- ou trietanolamina.
Um sal farmaceuticamente aceitável pode envolver a inclusão de outra molécula, como um íon acetato, um íon succinato ou outro contra-íon.
O contra-íon pode ser qualquer fração orgânica ou inorgânica que estabiliza a carga no composto original.
Além disso, um sal farmaceuticamente aceitável pode ter mais de um átomo carregado em sua estrutura.
Os casos em que vários átomos carregados fazem parte do sal farmaceuticamente aceitável podem ter vários contra-íons.
Portanto, um sal farmaceuticamente aceitável pode ter um ou mais átomos carregados e/ou um ou mais contra-íons.
Também será apreciado que sais não farmaceuticamente aceitáveis são também abrangidos pelo escopo da presente divulgação uma vez que estes podem ser úteis como intermediários na preparação de sais farmaceuticamente aceitáveis ou podem ser úteis durante o armazenamento ou transporte.
[074] Aqueles técnicos no assunto de química orgânica e/ou medicinal apreciarão que muitos compostos orgânicos podem formar complexos com solventes nos quais eles reagem ou a partir dos quais são precipitados ou cristalizados. Esses complexos são conhecidos como “solvatos”. Por exemplo, um complexo com água é conhecido como “hidrato”.
Conforme usado neste documento, a frase “solvato farmaceuticamente aceitável” ou “solvato” se refere a uma associação de uma ou mais moléculas de solvente e um composto da presente divulgação. Exemplos de solventes que formam solvatos farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a água, isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etila, ácido acético e etanolamina.
[075] Conforme usado neste documento, o termo “dendrímero” se refere a uma molécula contendo um núcleo e dendrons ligados ao núcleo.
Cada dendron é composto por gerações de unidades de construção ramificadas, resultando em uma estrutura ramificada com número crescente de ramificações a cada geração de unidades de construção. Um “dendrímero”, pode incluir sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis, conforme definido supra.
[076] Conforme usado neste documento, o termo “unidade de construção” refere-se a uma molécula ramificada compreendendo grupos funcionais, pelo menos um grupo funcional para ligação ao núcleo ou uma geração anterior de unidades de construção e pelo menos dois grupos funcionais para ligação a próxima geração de unidades de construção ou formando a superfície da molécula de dendrímero.
[077] Conforme usado neste documento, o termo “anexado” se refere a uma conexão entre componentes químicos por meio de ligação covalente. O termo “ligação covalente” é usado de forma intercambiável com o termo “ligação covalente”.
DENDRÍMEROS
[078] Em um primeiro aspecto, é fornecido um dendrímero que compreende: i) uma unidade de núcleo (C); e ii) unidades de construção (BU), em que a unidade de núcleo está covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção; o dendrímero tendo de duas a seis gerações de unidades de construção; em que unidades de construção de diferentes gerações são covalentemente ligadas umas às outras; e o dendrímero compreendendo ainda: iii) um ou mais primeiros grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada primeiro grupo terminal compreende uma porção contendo radionuclídeo; e iv) um ou mais segundos grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada segundo grupo terminal compreende uma porção de modificação farmacocinética; ou um sal do mesmo.
[079] Os dendrímeros da presente invenção, contendo uma estrutura dendrimérica que incorpora grupos de modificação farmacocinética e frações contendo radionuclídeos, foram considerados excelentes agentes de imagem que se acumulam em tumores e fornecem excelentes propriedades de imagem, como com imagem PET. Além disso, os dendrímeros são eficazes na acumulação em tumores cerebrais, como o glioblastoma, e foi observado que cruzam a barreira hematoencefálica, o que confirma ainda que eles têm propriedades úteis de imagem, diagnóstico e terapêuticas.
UNIDADE DE NÚCLEO
[080] A unidade de núcleo (C) do dendrímero fornece um ponto de ligação para dendrons formados por unidades de construção. Qualquer unidade de núcleo adequada que contenha grupos funcionais que possam formar ligações covalentes com grupos funcionais presentes nas unidades de construção pode ser utilizada.
[081] Em algumas formas de realização, a unidade de núcleo é covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção por meio de ligações amida. Em algumas formas de realização, cada ligação amida é formada entre um átomo de nitrogênio presente na unidade de núcleo e o átomo de carbono de um grupo acila presente em uma unidade de construção.
Em outras formas de realização, cada ligação amida é formada entre o átomo de carbono de um grupo acila presente na unidade de núcleo e um átomo de nitrogênio presente em uma unidade de construção.
[082] Em algumas formas de realização, a unidade de núcleo é covalentemente ligada a 2, 3 ou 4 unidades de construção. Em uma forma de realização particular, a unidade de núcleo é covalentemente ligada a 2 unidades de construção. A unidade de núcleo pode, por exemplo, ser formada a partir de um precursor da unidade de núcleo compreendendo grupos amino.
Como outro exemplo, a unidade de núcleo pode ser formada a partir de um precursor da unidade de núcleo compreendendo grupos de ácido carboxílico.
No caso de uma unidade de núcleo que está ligada a 2 unidades de construção, a unidade de núcleo do dendrímero pode, por exemplo, ser formada a partir de um precursor da unidade de núcleo que compreende dois grupos amino. Em algumas formas de realização, a unidade de núcleo é: ,
isto é, em que a unidade de núcleo compreende um resíduo de lisina em que a porção de ácido foi tampada com uma benzidrilamina (BHA- Lys) para formar a amida correspondente e pode, por exemplo, ser formada a partir de um precursor da unidade de núcleo: tendo dois nitrogênios reativos (amino).
[083] Os presentes dendrímeros permitem que vários grupos terminais sejam apresentados na superfície dos dendrímeros de uma maneira controlada. Em particular, para unidades de construção de lisina, a colocação em átomos de nitrogênio alfa ou épsilon das unidades de construção pode ser predeterminada conforme descrito abaixo. Em algumas formas de realização preferidas, todos os grupos de complexação (porções contendo radionuclídeo e grupos de complexação contendo isótopos estáveis (material frio)), grupos de modificação farmacocinética e, quando presentes, resíduos de agentes farmaceuticamente ativos) são fornecidos na superfície do dendrímero via ligação através das unidades de construção Em outras palavras, nessas formas de realização, a unidade de núcleo não fornece um ponto de ligação para um grupo terminal que não seja através das unidades de construção. Será entendido que, em tais formas de realização, quaisquer grupos funcionais presentes na unidade de núcleo que não são usados para ligação covalente a uma unidade de construção não terão reagido ou terão sido tampados com um grupo de cobertura adequado para evitar uma reação posterior. Um exemplo de tal unidade de núcleo é o grupo BHA-Lys discutido acima.
UNIDADES DE CONSTRUÇÃO
[084] Qualquer unidade de construção adequada (BU) pode ser usada para produzir os dendrímeros, desde que contenha um primeiro grupo funcional que seja capaz de formar uma ligação com um grupo funcional presente em outra unidade de construção ou uma unidade de núcleo, e contenha pelo menos dois outros grupos funcionais que (por exemplo, após a desproteção) são capazes de formar uma ligação com um grupo funcional presente em outra unidade de construção.
Em algumas formas de realização preferidas, unidades de construção de diferentes gerações são covalentemente ligadas umas às outras por meio de ligações amida formadas entre um átomo de nitrogênio presente em uma unidade de construção e o átomo de carbono de um grupo acila presente em outra unidade de construção.
Por exemplo, em algumas formas de realização, as unidades de construção são resíduos de lisina ou análogos dos mesmos, e podem ser formadas a partir de precursores de unidades de construção adequados, por exemplo, lisina ou análogos de lisina contendo grupos de proteção apropriados.
Os análogos de lisina têm dois átomos de nitrogênio amino para ligação a uma geração subsequente de unidades de construção e um grupo acila para ligação a uma geração anterior de unidades de construção ou um núcleo.
Exemplos de unidades de construção adequadas incluem:
e em que o grupo acila de cada unidade de construção fornece um ponto de fixação covalente para fixação ao núcleo ou a uma unidade de construção de geração anterior; e em que cada átomo de nitrogênio fornece um ponto de ligação covalente que pode ser usado para ligação covalente a uma unidade de construção de geração subsequente ou a um grupo terminal.
[085] Em algumas formas de realização preferidas, as unidades de construção são cada uma: ; em que o grupo acila de cada unidade de construção fornece um ponto de fixação covalente para fixação ao núcleo ou a uma unidade de construção de geração anterior; e em que cada átomo de nitrogênio fornece um ponto de ligação covalente que pode ser usado para ligação covalente a uma unidade de construção de geração subsequente ou a um grupo terminal.
[086] Em algumas formas de realização preferidas, as unidades de construção são cada uma: .
[087] Em outras formas de realização, as unidades de construção são resíduos de ácido aspártico, resíduos de ácido glutâmico ou seus análogos, isto é, formados a partir de precursores adequados, por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico ou seus análogos, contendo grupos de proteção adequados. Em tais formas de realização, a unidade de núcleo pode ser formada a partir de um precursor da unidade de núcleo compreendendo grupos de ácido carboxílico (isto é, que podem reagir com grupos amino presentes no ácido aspártico/ácido glutâmico/análogos.
[088] A geração mais externa de unidades de construção (BUexterna) pode ser formada por lisina ou unidades de construção análogas à lisina, conforme usado nas outras gerações de unidades de construção (BU), conforme descrito acima, por exemplo, lisina ou unidades de construção análogas à lisina. A geração mais externa de unidades de construção (BUexterna) é a geração de unidades de construção que é mais externa do núcleo do dendrímero, ou seja, nenhuma outra geração de unidades de construção é anexada à geração mais externa de unidades de construção (BUexterna).
[089] Será apreciado que os dendrons do dendrímero podem, por exemplo, ser sintetizados para o número necessário de gerações através da fixação de unidades de construção (BU) em conformidade. Em algumas formas de realização, cada geração de unidades de construção (BU) pode ser formada da mesma unidade de construção, por exemplo, todas as gerações de unidades de construção podem ser unidades de construção de lisina. Em algumas outras formas de realização, uma ou mais gerações de unidades de construção podem ser formadas de unidades de construção diferentes de outras gerações de unidades de construção.
[090] O dendrímero tem de duas a seis gerações de unidades de construção, ou seja, 2, 3, 4, 5 ou 6 gerações de unidades de construção.
[091] Em algumas formas de realização, o dendrímero tem três gerações de unidades de construção. Um dendrímero de unidade de construção de três gerações é um dendrímero com uma estrutura que inclui três unidades de construção que estão covalentemente ligadas entre si, por exemplo, no caso em que as unidades de construção são lisinas, pode compreender a subestrutura: .
[092] Em algumas formas de realização, o dendrímero tem cinco gerações de unidades de construção. Um dendrímero de unidade de construção de cinco gerações é um dendrímero com uma estrutura que inclui cinco unidades de construção que estão covalentemente ligadas entre si, por exemplo, no caso em que as unidades de construção são lisinas, pode compreender a subestrutura: .
[093] Em algumas formas de realização, as gerações de unidades de construção são gerações completas. Por exemplo, em que o dendrímero tem três gerações de unidades de construção, em algumas formas de realização, o dendrímero tem três gerações completas de unidades de construção. Com um núcleo tendo dois grupos amina reativos, tal dendrímero compreenderá 14 unidades de construção (isto é, unidade de núcleo + 2 BU + 4 BU + 8 BU).
[094] Da mesma forma, por exemplo, em que o dendrímero tem cinco gerações de unidades de construção, em algumas formas de realização, o dendrímero tem cinco gerações completas de unidades de construção. Com um núcleo tendo dois grupos amina reativos, tal dendrímero compreenderá 62 unidades de construção (ou seja, unidade de núcleo + 2 BU+ 4 BU+ 8 BU+ 16 BU+ 32 BU).
[095] No entanto, será apreciado que, devido à natureza do processo sintético para produzir os dendrímeros, uma ou mais reações realizadas para produzir os dendrímeros podem não ir totalmente para a conclusão. Por conseguinte, em algumas formas de realização, o dendrímero pode compreender gerações incompletas de unidades de construção. Por exemplo, uma população de dendrímeros pode ser obtida, na qual os dendrímeros têm uma distribuição do número de unidades de construção por dendrímero.
[096] Em algumas formas de realização, em que o dendrímero tem três gerações de unidades de construção, é obtida uma população de dendrímeros que tem um número médio de unidades de construção por dendrímero de pelo menos 8, ou pelo menos 9, ou pelo menos 10, ou pelo menos 11, ou pelo menos 12 ou pelo menos 13. Em algumas formas de realização, é obtida uma população de dendrímeros em que pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% dos dendrímeros têm 10 ou mais unidades de construção. Em algumas formas de realização, é obtida uma população de dendrímeros em que pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% dos dendrímeros têm 12 ou mais unidades de construção.
[097] Em algumas formas de realização, em que o dendrímero tem cinco gerações de unidades de construção, é obtida uma população de dendrímeros que tem um número médio de unidades de construção por dendrímero de pelo menos 55, ou pelo menos 56, ou pelo menos 57, ou pelo menos 58, ou pelo menos 59, ou pelo menos 60. Em algumas formas de realização, é obtida uma população de dendrímeros em que pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% dos dendrímeros têm 55 ou mais unidades de construção. Em algumas formas de realização, é obtida uma população de dendrímeros em que pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% dos dendrímeros têm 60 ou mais unidades de construção.
[098] Em algumas formas de realização, cada grupo reativo (amino) do precursor da unidade de núcleo representa um local de conjugação para um dendron que compreende unidades de construção.
[099] Em algumas formas de realização, cada geração de unidades de construção em cada dendron (X) pode ser representada pela fórmula [BU]2(b-1), em que b é o número de geração. Um dendron (X) com três gerações completas de unidades de construção é representado como [BU]1- [BU]2-[BU]4.
[0100] Um dendron (X) com cinco gerações completas de unidades de construção é representado como [BU]1-[BU]2-[BU]4-[BU]8-[BU]16.
PRIMEIRO GRUPO TERMINAL
[0101] O primeiro grupo terminal (T1) compreende uma porção contendo radionuclídeo. Normalmente, a porção contendo radionuclídeo compreende um radionuclídeo e um grupo de complexação.
RADIONUCLÍDEO
[0102] Qualquer radionuclídeo adequado pode ser utilizado nos presentes dendrímeros. Um radionuclídeo, também conhecido como isótopo radioativo, é uma forma instável de um elemento químico que decai radioativamente, resultando na emissão de radiação nuclear.
[0103] Os radionuclídeos são usados nas áreas de diagnóstico médico e terapia. Técnicas como emissão de fóton único, imagem de tomografia por emissão de pósitrons (PET) e tomografia por emissão de pósitrons - imagem de ressonância magnética (PET-MRI) podem ser usadas para detectar um radionuclídeo dentro de um indivíduo administrado com uma substância contendo radionuclídeo adequada e produzir imagens que informam sobre a existência e/ou progressão de doenças como tumores. Os radionuclídeos também têm aplicação no tratamento de doenças, como câncer.
Em tais casos, a administração de uma substância contendo radionuclídeo a um paciente resulta na entrega de radionuclídeo ao tumor e, após decaimento radioativo e emissão de radiação, morte de células tumorais.
[0104] De preferência, o radionuclídeo é um radionuclídeo de metal, por exemplo, um íon de metal. Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um emissor alfa (emissor α). Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um emissor beta (emissor β). Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um emissor beta e gama.
[0105] Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um actínio (por exemplo, Ac225), astatina (por exemplo, As211), bismuto (por exemplo, Bi212, Bi213), chumbo (por exemplo, Pb212), tecnécio (por exemplo, Tc99m), tório (por exemplo, TH227), rádio (por exemplo, Ra223), lutécio (por exemplo, Lu177), ítrio (por exemplo, Y90), índio (por exemplo, In111, In114), gadolínio (por exemplo, Gd153), gálio (por exemplo, Ga68), zircônio (por exemplo, Zr89) ou radionuclídeo de cobre. Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um lutécio (por exemplo, Lu177), gadolínio, gálio (por exemplo, Ga68), zircônio (por exemplo, Zr89), actínio (por exemplo, Ac225), bismuto (por exemplo, Bi212, Bi213), astatina (por exemplo, As211), tecnécio (por exemplo, Tc99m), ou radionuclídeo de cobre (por exemplo, Cu60, Cu61, Cu62, Cu64, Cu67).
Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um radionuclídeo de lutécio (por exemplo, Lu177), gadolínio, gálio (por exemplo, Ga68), zircônio (por exemplo, Zr89) ou cobre (por exemplo, Cu60, Cu61, Cu62, Cu64, Cu67). Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um radionuclídeo de gálio (por exemplo, Ga68), zircônio (por exemplo, Zr89) ou lutécio (por exemplo, Lu177). Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um radionuclídeo de cobre (por exemplo, Cu64, Cu67), zircônio (por exemplo, Zr89), lutécio (por exemplo, Lu177), actínio (por exemplo, Ac225) ou astatina (por exemplo, As211).
[0106] Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é para diagnóstico ou imagem de uma condição (por exemplo, um câncer). Exemplos de tais radionuclídeos incluem gálio (por exemplo, Ga68), tecnécio (por exemplo, Tc99m), zircônio (por exemplo, Zr89) e cobre (por exemplo, Cu60, Cu61, Cu62, Cu64).
[0107] Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é para o tratamento de uma condição (por exemplo, um câncer). Exemplos de tais radionuclídeos incluem actínio (por exemplo, Ac225), astatina (por exemplo, As211), bismuto (por exemplo, Bi212, Bi213), chumbo (por exemplo, Pb212), tório (por exemplo, TH227), rádio (por exemplo, Ra223), lutécio (por exemplo, Lu177), ítrio (por exemplo, Y90), gadolínio (por exemplo, Gd153) e cobre (por exemplo, Cu60, Cu61, Cu62, Cu64).
[0108] Idealmente, as características de emissão de um radionuclídeo terapêutico devem levar em consideração o tamanho da lesão para focar a energia dentro do tumor e ter uma meia-vida adequada para se alinhar com a distribuição estendida do dendrímero. Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um emissor alfa com meia-vida inferior a 20 dias ou inferior a 12 dias. Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é um emissor beta com meia-vida de 2 a 20 dias ou 5 a 10 dias. 177Lu é um emissor β de média energia (490 keV) com uma energia máxima de 0,5 MeV e uma penetração máxima no tecido de < 2 mm. 177Lu também emite raios γ de baixa energia a 208 e 113 keV, o que permite imagens ex vivo e, consequentemente, a coleta de informações relativas à localização e dosimetria do tumor.
[0109] Como seria entendido pelo técnico no assunto, a radioatividade é medida em becquerel (Bq). Um becquerel é definido como a atividade de uma quantidade de material radioativo em que um núcleo decai por segundo.
[0110] Em algumas formas de realização, as doses injetadas de radionuclídeo terapêutico são de 1 a 50 GBq por injeção única. Em outras formas de realização, as doses injetadas são de 2 a 20 GBq por injeção/infusão única. Em outras formas de realização, as doses injetadas são de 2 a 10 GBq por injeção única. Os cálculos de dose para pacientes individuais podem ser determinados a partir de uma combinação de carga da doença, peso do paciente e função renal. A dosimetria com base em imagem em cada ciclo de tratamento é recomendada, por exemplo, com SPECT-CT.
[0111] Em algumas formas de realização, o dendrímero é fornecido em uma composição como uma forma de dosagem unitária, por exemplo, tendo um nível desejado de radioatividade.
[0112] Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é formulado em uma composição de dosagem unitária, de forma que cada dosagem unitária contenha uma quantidade de radionuclídeo que tem uma radioatividade na faixa de 0,1 a 10 MBq, de 0,1 a 5 MBq, de 0,1 a 2 MBq, de 0,1 a 1 MBq, de 0,5 a 10 MBq, de 1 a 10 MBq, de 1 a 5 MBq, de 5 a 10 MBq, ou cerca de 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9 ou cerca de 10 MBq.
[0113] Por exemplo, onde a dosagem unitária está na forma de uma injeção/infusão, a injeção/infusão será formulada de forma que a quantidade desejada de radiação seja distribuída ao local alvo (por exemplo, tumor). Em algumas formas de realização, o radionuclídeo é fornecido em uma composição de dosagem unitária para injeção, de forma que cada dosagem unitária contenha uma quantidade de radionuclídeo que tem uma radioatividade na faixa de 0,5 a 10 MBq, ou de 1 a 10 MBq, ou de 1 a 5 MBq, ou de 5 a 10 MBq, ou cerca de 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9 ou cerca de 10 MBq. Em algumas formas de realização, a radioatividade é medida no ponto de tempo imediatamente antes da administração do dendrímero, ou seja, imediatamente antes do uso.
GRUPO DE COMPLEXAÇÃO DE RADIONUCLÍDEOS
[0114] A porção contendo radionuclídeo contém tipicamente um grupo de complexação de radionuclídeo. Qualquer grupo de complexação adequado pode ser usado. O grupo de complexação fornece porções funcionais que podem complexar um radionuclídeo. Exemplos de tais frações funcionais incluem ácidos carboxílicos, aminas, amidas, grupos hidroxila, grupos tiol, ureias, tioureias, grupos -N-OH, fosfato e grupos fosfinato. Em algumas formas de realização, é usado um grupo de complexação que forma um quelato com o radionuclídeo. Exemplos de grupos de complexação adequados são fornecidos na tabela abaixo: Ligando Estrutura Nome químico (ácido 1,4,7,10-Tetraazaciclodecano-
DOTA N,N',N",N"'-tetraacético) (ácido 1,4,7-Triazaciclononano-N,N',N"- NOTA triacético) (Dietilenotriaminapentaacético anidrido)
DTPA Ácido [(R)-2-Amino-3-(4- CHX-A DTPA isotiocianatofenil)propil]-trans-(S,S)- ciclohexano-1,2-diamina-pentaacético (N'-[5-[[4-[[5-(Acetilhidroxiamino) pentil]amino]-1,4-dioxobutil] Deferoxamina hidroxiamino]pentil]-N-(5-aminopentil)-N- hidroxi-butanediamida) (Ácido 1,4,8,11-tetraazaciclotetradecano-
TETA 1,4,8,11-tetraacético)
Ácido 1,4,8,11- cb-TE2A tetraazabiciclo[6.6.2]hexadecano-4,11- diacético 1,4-Bis(carboximetil)-6- AAZTA [bis(carboximetil)]amino-6-metilperhidro-1,4- diazepina) TRAP (Ácido 1,4,7-triazaciclononano fosfínico) 1,4,7-Triazaciclononano-1,4-bis[ácido NOPO metileno(hidroximetil)fosfínico]-7-[ ácido metileno(2-carboxietil)fosfínico] 6-[(3-{[(1-Oxido-6-oxo-1,6-dihidro-2- piridinil)carbonila]amino}propil)(4-{[(1-oxido-6- oxo-1,6-dihidro-2-piridinil)carbonila](3-{[(1- HOPO oxido-6-oxo-1,6-dihidro-2- piridinil)carbonila]amino} propil)amino}butil) carbamoil]-2-oxo-1(2H)-piridinolato Ácido 2-[4,7-bis(carboximetil)-1,4,7-triazonan-
NOGADA 1-il]pentanodióico HYNIC Ácido 6-hidrazinonicotínico
MAG3 Mertiatida 9-Oxa-3,6,12,15,21- OPTT pentaazatriciclo[15,3,2,1]trieicos-1(21),17,19- trieno-2,7,11,16-tetradiona 3,6,9,15-Tetraazabiciclo[9.3.1]pentadeca-
TBPD 1(15),11,13-trieno-2,10-diona TAME-Hex 1,1,1-Tris(aminometil)etano (estrutura básica) Sal de ácido 1,4,7,10- DO3A Tetraazaciclododecano-1,4,7-triacético trissódico Ácido 1,4,7-triazaciclononano-1,4,7-tris[ (2-
TRAP carboxietil)metilenofosfínico] Ácido (2,2'-(6-((carboximetil)amino)-1,4-
DATA diazepano-1,4-diil)diacético))
Ácido 2-[4,7-bis(carboximetil)-1,4,7-triazonan-
NODAGA 1-il]pentanodióico Ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododececano,1-
DOTAGA (ácido glutárico)-4,7,10-triacético Ácido (2,2'-(6-(bis(carboximetil)amino)-6-((4- PhenA (2-carboxietil)fenoxi)metil)-1,4-diazepano-1,4- diil)diacético) Ácido 11-carboximetil-1,4,8,11- PCB-TE1A1P tetraazabiciclo[6.6.2]hexadecano-4- metanofosfônico
H3THP Tris(6-hidroxipiridin-2-ilmetil)amina Ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecano- DOTA-4AMP 1,4,7,10-tetrakis(acetamido- metilenofosfônico) Ácido 1,4,7-triazaciclononano-1,4,7-
NOTP tri(metileno fosfônico) CB-Cyclam 1,4,8,11-Tetraazabiciclo[6.6.2]hexadecano 1,8-Diamino-3,6,10,13,16,19- DiAmSar hexaazabiciclo[6,6,6]-eicosano Sal de ácido (1R,4R,7R,10R)-α,α’,α”,α’”- DOTMA Tetrametil-1,4,7,10-tetraazaciclododecano- 1,4,7,10-tetraacético tetrassódico
Ácido 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-
DOTP 1,4,7,10-tetra(metileno fosfônico) Ácido 2,2'-{1,2-etanodiilbis[(2-
HBED hidroxibenzil)imino]}diacético Ácido N,N'-bis(2,2-dimetil-2-mercaptoetil) 6SS etilenodiamina-N,N'-diacético (1-N-(4-Aminobenzil)-3,6,10,13,16,19- SarAr hexaazabiciclo[6.6.6]-eicosano-1,8-diamina) Ácido 5-(8-metil-3,6,10,13,16,19-hexaaza- MeCOSar biciclo[6.6.6]icosan-1-ilamino)-5- oxopentanóico
Sar 3,6,10,13,16,19-hexaazabiciclo(6,6,6)icosano (sarcofagina) 3-Etoxi-2-oxobutiraldeido-bis(N4- H2KTSM metiltiosemicarbazona) Diacetil-2-(N4-metil-3-tiosemicarbazona)-3- H2ATSM (N4-amino-3-tiosemicarbazona) 1,4,7,10-Tetraaza-1,4,7,10-tetra(2-
TCMC carbamoilmetil)ciclododecano
[0115] Em algumas formas de realização, o grupo de complexação é DOTA, NOTA, DTPA, sarcofagina ou DFO. Em algumas formas de realização, o grupo de complexação é DOTA, NOTA, DTPA ou DFO.
[0116] Em algumas formas de realização, o grupo de complexação é um grupo contendo DOTA tendo a estrutura: , e em que o grupo contendo DOTA é anexado ao conjugado.
[0117] Em algumas formas de realização, o grupo de complexação é um grupo contendo NOTA com a estrutura:
, e em que o grupo contendo NOTA é anexado ao conjugado.
[0118] Em algumas formas de realização, o grupo de complexação é um grupo contendo DTPA com a estrutura: , em que o grupo contendo DTPA é anexado ao conjugado.
[0119] Em algumas formas de realização, o grupo de complexação é um grupo contendo DFO com a estrutura: , em que o grupo contendo DFO é anexado ao conjugado.
[0120] Em algumas formas de realização, o grupo de complexação é um grupo contendo sarcofagina com a estrutura:
, em que o grupo contendo sarcofagina é anexado ao conjugado.
[0121] O primeiro grupo terminal está ligado a uma unidade de construção mais externa, por exemplo, através de um átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa, onde as unidades de construção são resíduos de lisina ou seus análogos. Em algumas formas de realização, onde um grupo de complexação compreende um grupo que é adequado para reação direta com uma unidade de construção mais externa, o grupo de complexação pode reagir diretamente com a unidade de construção. Em outras formas de realização, um grupo de carregamento pode ser utilizado para carregar o grupo de complexação no dendrímero, ou seja, um grupo que em uma primeira extremidade está covalentemente ligado ao grupo de complexação e que em uma segunda extremidade tem um grupo funcional adequado para reação com um grupo funcional presente em uma unidade de construção mais externa (por exemplo, onde o primeiro grupo terminal está ligado por meio de um átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa. Por exemplo, o grupo de carregamento pode ter um grupo funcional que é adequado para a reação com um grupo amino.
[0122] Para formar a ligação entre a unidade de construção mais externa e o primeiro grupo terminal, uma reação pode ser realizada entre grupos precursores de complexação adequados e um intermediário dendrimérico com grupos funcionais (por exemplo, grupos amina) disponíveis para a reação. Em algumas formas de realização, o precursor de complexação é um grupo contendo DOTA, NOTA, DTPA, sarcofagina ou DFO.
Exemplos de grupos precursores de complexação adequados incluem o seguinte:
p-SCN-Bn-DOTA p-SCN-Bn-CHX-A’’-DTPA p-SCN-Bn-DTPA p-SCN-Bn-DFO p-SCN-Bn-NOTA p-SCN-Bn-TCMC.
[0123] Os grupos acima podem reagir com um grupo amina presente em uma unidade de construção mais externa para formar um primeiro grupo terminal ligado à tioureia.
SEGUNDO GRUPO TERMINAL
[0124] O dendrímero compreende uma pluralidade de segundos grupos terminais (T2), cada um compreendendo uma porção de modificação farmacocinética, isto é, uma porção que pode modificar ou modular o perfil farmacocinético do dendrímero. A porção de modificação farmacocinética pode modular a absorção, distribuição, metabolismo, excreção e/ou toxicidade do dendrímero. A porção de modificação farmacocinética (T2) pode alterar o perfil de solubilidade do dendrímero, aumentando ou diminuindo a solubilidade do dendrímero em um transportador farmaceuticamente aceitável. A porção de modificação farmacocinética (T2) pode, por exemplo, reduzir a depuração do dendrímero.
[0125] Quando o dendrímero compreende um terceiro grupo terminal compreendendo um agente farmaceuticamente ativo, a porção de modificação farmacocinética (T2) pode influenciar a taxa de liberação do agente farmaceuticamente ativo, tanto diminuindo quanto aumentando a taxa na qual o agente ativo é liberado do dendrímero por vias químicas (por exemplo, hidrólise) ou de degradação enzimática. A porção de modificação farmacocinética (T2) pode auxiliar o dendrímero na entrega do agente farmaceuticamente ativo a tecidos específicos (por exemplo, tumores).
[0126] Em algumas formas de realização, a porção de modificação farmacocinética é um grupo de polietilenoglicol (PEG) ou um grupo de polietiloxazolina (PEOX).
[0127] Em uma forma de realização, o segundo grupo terminal compreende um grupo de PEG. Um grupo de PEG é um grupo polietileno glicol, ou seja, um grupo que compreende unidades repetidas da fórmula – CH2CH2O-. Os materiais de PEG usados para produzir o dendrímero da presente divulgação contêm tipicamente uma mistura de PEGs com alguma variação no peso molecular (ou seja, ± 10%) e, portanto, onde um peso molecular é especificado, é tipicamente uma aproximação do peso molecular médio da composição de PEG. Por exemplo, o termo “PEG~2100” refere-se ao polietileno glicol tendo um peso molecular médio de cerca de 2100 Daltons, ou seja, ± aproximadamente 10% (PEG1890 a PEG2310). O termo “PEG~2300” refere- se a polietileno glicol com um peso molar médio de aproximadamente 2300 Daltons, ou seja, ± aproximadamente 10% (PEG2070 a PEG2530). Três métodos são comumente usados para calcular médias de MW: média numérica, média ponderal e pesos moleculares médios z. Conforme usado neste documento, a frase “peso molecular” destina-se a referir-se ao peso molecular médio ponderal que pode ser medido usando técnicas bem conhecidas na técnica, incluindo, mas não se limitando a, NMR, espectrometria de massa, dessorção e ionização a laser assistida por matriz: tempo de voo (MALDI-TOF), cromatografia de permeação em gel ou outras técnicas de cromatografia líquida, técnicas de espalhamento de luz, ultracentrifugação e viscometria.
[0128] Em algumas formas de realização, os segundos grupos terminais compreendem grupos de PEG tendo um peso molecular médio entre cerca de 200 e 5000 Daltons. Em algumas formas de realização, os segundos grupos terminais compreendem grupos de PEG tendo um peso molecular médio de pelo menos 500 Daltons, ou pelo menos 750 Daltons. Em algumas formas de realização, os segundos grupos terminais compreendem grupos de
PEG com um peso molecular médio na faixa de 200 a 4000 Daltons, ou de 500 a 3000 Daltons, ou de 500 a 2500 Daltons, ou de 1500 a 2500 Daltons. Em algumas formas de realização, os segundos grupos terminais compreendem grupos de PEG com um peso molecular médio na faixa de 220 a 2500 Da, ou de 570 a 2500 Daltons, ou de 220 a 1100 Daltons, ou de 570 a 1100 Daltons, ou de 1000 a 5500 Daltons, ou de 1000 a 2500 Daltons, ou de 1000 a 2300 Daltons. Em algumas formas de realização, os segundos grupos terminais compreendem grupos de PEG com um peso molecular médio na faixa de 1900 a 2300 Daltons. Em algumas formas de realização, os segundos grupos terminais compreendem grupos de PEG com um peso molecular médio na faixa de 2100 a 2500 Daltons. Em algumas formas de realização, os segundos grupos terminais compreendem grupos de PEG com um peso molecular médio na faixa de 2.400 a 2.800 Daltons. Em algumas formas de realização, os segundos grupos terminais compreendem grupos de PEG com um peso molecular médio de cerca de 1900, cerca de 2000, cerca de 2100, cerca de 2200, cerca de 2300, cerca de 2400, cerca de 2500, cerca de 2600, cerca de 2700 ou cerca de 2800 Daltons.
[0129] Em algumas formas de realização, o grupo de PEG tem um índice de polidispersidade (PDI) entre cerca de 1,00 e cerca de 1,50, entre cerca de 1,00 e cerca de 1,25, ou entre cerca de 1,00 e cerca de 1,10. Em algumas formas de realização, o grupo de PEG tem um índice de polidispersidade (PDI) de cerca de 1,05. O termo “índice de polidispersidade” refere-se a uma medida da distribuição de massa molecular em uma determinada amostra de polímero. O índice de polidispersibilidade (PDI) é igual ao peso molecular médio ponderal (Mw), dividido pelo peso molecular médio numérico (Mn) e indica a distribuição de massas moleculares individuais em um lote de polímeros. O índice de polidispersidade (PDI) tem um valor igual ou superior a um, mas conforme o polímero se aproxima do comprimento de mudança uniforme e do peso molecular médio, o índice de polidispersidade (PDI) será mais próximo de um.
[0130] Onde os segundos grupos terminais compreendem um grupo de PEG, os grupos de PEG podem ser lineares ou ramificados. Se desejado, pode-se usar um grupo de PEG com extremidade protegida. Em algumas formas de realização, o grupo de PEG é um PEG terminado em metoxi.
[0131] Em algumas formas de realização, o segundo grupo terminal compreende um grupo de PEOX. Um grupo de PEOX é um grupo polietiloxazolina, ou seja, um grupo que compreende unidades de repetição da fórmula: .
[0132] Os grupos de PEOX têm esse nome porque podem ser produzidos pela polimerização da etiloxazolina. Os materiais PEOX usados para produzir o dendrímero da presente divulgação normalmente contêm uma mistura de PEOXs com alguma variação no peso molecular (ou seja, ± 10%) e, portanto, onde um peso molecular é especificado, é tipicamente uma aproximação do peso molecular médio da composição PEOX. Em algumas formas de realização, os segundos grupos terminais compreendem grupos de PEOX tendo um peso molecular médio de pelo menos 750 Daltons, pelo menos 1000 Daltons ou pelo menos 1500 Daltons. Em algumas formas de realização, os segundos grupos terminais compreendem grupos de PEOX tendo um peso molecular médio na faixa de 750 Daltons a 2500 Daltons, ou de 1000 Daltons a 2000 Daltons. Se desejado, um grupo de PEOX com extremidade protegida pode ser usado. Em algumas formas de realização, o grupo de PEOX é um PEOX terminado em metoxi.
[0133] O segundo grupo terminal pode ser conectado à unidade de construção mais externa por meio de qualquer meio adequado. Em algumas formas de realização, onde o segundo grupo terminal compreende um grupo de PEG ou grupo de PEOX, um grupo de ligação é utilizado para acoplar o grupo de PEG ou grupo de PEOX à unidade de construção externa.
[0134] Os segundos grupos terminais são tipicamente ligados através do uso de um segundo precursor de grupo terminal que contém um grupo reativo que é reativo com um grupo amina, como um grupo acila reativo (que pode formar uma ligação amida) ou um aldeído (que pode formar um grupo amina sob condições de aminação redutiva).
[0135] Em algumas formas de realização, os segundos grupos terminais compreendem, cada um, um grupo de PEG covalentemente ligado a um grupo de ligação de PEG (L1) através de uma ligação éter formada entre um átomo de carbono presente no grupo de PEG e um átomo de oxigênio presente no grupo de ligação de PEG, e cada segundo grupo terminal é covalentemente ligado a uma unidade de construção por meio de uma ligação amida formada entre um átomo de nitrogênio presente em uma unidade de construção e o átomo de carbono de um grupo acila presente no grupo de ligação de PEG. Em algumas formas de realização, os segundos grupos de terminais são, cada um: Grupo PEG e em que o grupo de PEG é um PEG terminado em metoxi tendo um peso molecular médio na faixa de cerca de 500 a 3000 Daltons, ou de 2000 a 2700 Daltons.
[0136] Em algumas formas de realização, o segundo grupos terminais compreendem, cada um grupo de PEOX ligado covalentemente a um grupo de ligação de PEOX (L1’) através de uma ligação formada entre um átomo de nitrogênio presente no grupo de PEOX e um átomo de carbono presente no grupo de ligação de PEOX, e cada segundo grupo terminal é covalentemente ligado a uma unidade de construção por meio de uma ligação amida formada entre um átomo de nitrogênio presente em uma unidade de construção e o átomo de carbono de um grupo acila presente no grupo de ligação de PEOX. Em algumas formas de realização, os segundos grupos de terminais são cada um: Grupo PEOX .
TERCEIRO GRUPO TERMINAL
[0137] Em algumas formas de realização, o dendrímero compreende um ou mais terceiros grupos terminais (T3) ligados a uma unidade de construção mais externa, o terceiro grupo terminal compreendendo um resíduo de um agente farmaceuticamente ativo. Quando as unidades de construção são resíduos de lisina ou seus análogos, o terceiro grupo terminal pode, por exemplo, ser ligado ao átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa. A incorporação de um agente farmaceuticamente ativo no dendrímero pode fornecer propriedades terapêuticas melhoradas e pode levar ao mesmo agente dendrimérico sendo capaz de utilização para imagiologia diagnóstica/teranóstica e para terapia de doença. Por exemplo, no caso de um indivíduo que é suspeito de ter ou que foi diagnosticado como tendo um câncer, o dendrímero da presente invenção pode ser inicialmente administrado e a imagem da (s) parte (s) relevante (s) do corpo do indivíduo pode ser realizada, a fim de diagnosticar a condição do paciente por imagem e/ou, onde o câncer está presente, para determinar a suscetibilidade provável do câncer a um curso de terapia com o dendrímero. No caso em que o tumor é provavelmente suscetível a tratamento com dendrímero, um curso adicional do mesmo dendrímero ou outro dendrímero da presente invenção, por exemplo, contendo um radionuclídeo diferente, pode, por exemplo, ser administrado ao indivíduo.
AGENTES FARMACEUTICAMENTE ATIVOS
[0138] Qualquer agente farmaceuticamente ativo adequado pode ser conjugado ao dendrímero como o terceiro grupo terminal, por exemplo, por meio de um grupo de ligação. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é um agente anticâncer. Em algumas formas de realização, o agente anticâncer é uma droga antineoplásica que se libera do dendrímero para exercer atividade biológica. Em algumas formas de realização, o agente anticâncer é um agente ultra tóxico. Em algumas formas de realização, o agente anticâncer é uma auristatina. Em algumas formas de realização, o agente anticâncer é um maitansinoide. Em algumas formas de realização, o agente anticâncer é um agente alquilante, um antimetabolito, alcaloide de vinca, antibiótico, taxano ou inibidor de topoisomerase. Em algumas formas de realização, em que o dendrímero compreende um agente farmaceuticamente ativo, o agente anticâncer é selecionado a partir do grupo que consiste em uma porção contendo platina, uma auristatina, um maitansinoide, um taxano, um inibidor de topoisomerase e um análogo de nucleosídeo. Em algumas formas de realização, em que o dendrímero compreende um agente farmaceuticamente ativo, o agente farmaceuticamente ativo é um agente anticâncer, por exemplo, um agente anticâncer selecionado a partir do grupo que consiste em cisplatina, carboplatina, oxaliplatina, temozolomida, docetaxel, cabazitaxel, paclitaxel, irinotecano, SN-38, camptotecina, topotecano, gencitabina, barasertibe, doxorrubicina, ciclofosfamida, bleomicina, cisplatina, 5-fluorouracila, capecitabina, vincristina,
dacarbazina, mitoxantrona, acetoxantrona, teniposido, acetoxantrona, teniposida, acetoxantrona, teniposida, acetoxantrona, teniposido e nilotinibe.
Em algumas formas de realização, em que o dendrímero compreende um agente farmaceuticamente ativo que é um agente anticâncer, o agente anticâncer é selecionado a partir do grupo que consiste em cabazitaxel, docetaxel, SN-38 e gencitabina.
[0139] Em algumas formas de realização, em que o dendrímero compreende um agente farmaceuticamente ativo que é um agente anticâncer, o agente anticâncer é um inibidor da topoisomerase. Os inibidores da topoisomerase incluem, mas não estão limitados a camptotecina ativa.
[0140] A camptotecina é um inibidor da topoisomerase com a estrutura:
[0141] Uma família de compostos estruturalmente relacionados também com atividade inibidora da topoisomerase também foi identificada. Em uma forma de realização, uma camptotecina ativa é um composto com a subestrutura:
[0142] Exemplos de ativos de camptotecina (cujo resíduo pode fazer parte do terceiro grupo terminal) incluem SN-38, irinotecano (CPT-11), topotecano, silatecano, cositecano, exatecano, lurtotecano, gimatecano, belotecano e rubitecano. Em algumas formas de realização, o resíduo de um ativo camptotecina é ligado ao ligante diacila através da posição C-10 ou C-20.
Em algumas formas de realização, o resíduo de um ativo camptotecina tem a subestrutura:
[0143] Em algumas formas de realização, o resíduo de um ativo camptotecina tem a subestrutura: em que R1 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila C1-6, -OR3 e -alquila C1-6 -N(R3)2; R2 é selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, alquila C1-6, -OR3 e -alquila C1-6-N (R3)2; cada R3 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e alquila C1-6.
Em algumas formas de realização, o terceiro grupo terminal compreende um resíduo de uma camptotecina ativa que é um resíduo de SN-38. SN-38 tem a estrutura:
[0144] Em algumas formas de realização, o resíduo de uma camptotecina ativa é um resíduo de SN-38 que está ligado ao ligante diacila através da posição C-10 ou C-20. Em algumas formas de realização preferidas, o resíduo de SN-38 é:
[0145] Em outras formas de realização, o resíduo de SN-38 é:
[0146] Após a administração in vivo, normalmente o dendrímero libera camptotecina ativa (por exemplo, SN-38).
[0147] Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é o irinotecano.
[0148] Em algumas formas de realização, em que o dendrímero compreende um agente farmaceuticamente ativo que é um agente anticâncer, o agente anticâncer é um taxano. Ativos de taxano incluem paclitaxel, cabazitaxel e docetaxel. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é paclitaxel. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é cabazitaxel. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é docetaxel. Em algumas formas de realização, o resíduo de um taxano ativo tem a subestrutura:
[0149] Em algumas formas de realização, o resíduo de um taxano ativo é um resíduo de cabazitaxel que é:
[0150] Em algumas formas de realização, o resíduo de um taxano ativo é um resíduo de docetaxel que é:
[0151] Em algumas formas de realização, o agente anticâncer é selecionado a partir do grupo que consiste em ativos de camptotecina e ativos de taxano.
[0152] Em algumas formas de realização, o agente anticâncer é selecionado a partir do grupo que consiste em cabazitaxel, docetaxel e SN-38.
[0153] Conforme usado neste documento, o termo “agente ultra tóxico” refere-se a agentes que exibem propriedades quimioterapêuticas altamente potentes, embora sejam eles próprios muito tóxicos para administrar sozinho como um agente anticâncer. Ou seja, um agente ultra tóxico, embora demonstre propriedades quimioterapêuticas, de forma geral não pode ser administrado com segurança a um indivíduo, pois os efeitos colaterais tóxicos e prejudiciais superam o benefício quimioterápico. Em algumas formas de realização, o ultra tóxico tem um IC50 in vitro contra uma linha de células cancerosas (por exemplo, células SKBR3 e/ou HEK293 e/ou células MCF7) que é inferior a 100 nM, ou inferior a 10 nM, ou inferior a 5 nM, ou menos do que 3 nM, ou menos do que 2 nM, ou menos do que 1 nM, ou menos do que 0,5 nM. Os agentes ultra tóxicos incluem, por exemplo, as dolastatinas (por exemplo, dolastatina-10, dolastatina-15), auristatinas (por exemplo, monometila auristatina-E, monometila auristatina-F), maitansinoides (por exemplo, maitansina, mertansina/emtansina (DM1, ravtansina DM4)), caliqueamicinas (por exemplo, caliqueamicina γ1), esperamicinas (por exemplo, esperamicina A1) e pirrolobenzodiazepinas (PDB), entre outros.
[0154] Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é uma auristatina. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é uma monometila auristatina. Em uma forma de realização, o agente farmaceuticamente ativo é monometila auristatina E (MMAE). Em uma forma de realização, o agente farmaceuticamente ativo é monometila auristatina F (MMAF). Tanto o MMAE como o MMAF inibem a divisão celular ao bloquear a polimerização da tubulina.
[0155] Em algumas formas de realização, o agente ultra tóxico é um maitansinoide. Em uma forma de realização, o agente ultra tóxico é a maitansina. Em uma forma de realização, o agente ultra tóxico é ansamitocina.
Em uma forma de realização, o agente ultra tóxico é emtansina/mertansina (DM1). Em uma forma de realização, o agente ultra tóxico é a ravtansina (DM4). Os maitansinóides são entendidos como inibindo a montagem de microtúbulos por ligação à tubulina.
[0156] Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo não é um ultra tóxico.
[0157] Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é um rádio sensibilizador.
[0158] Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo reduz o reparo de DNA. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que visa a proteína quinase dependente de DNA, posto de controle quinase 1, poli (ADP-ribose) polimerase, como olaparib, ataxia telangiectasia e/ou proteína relacionada com Rad3, como AZD6738.
[0159] Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é um agente de imunoterapia. Em algumas formas de realização, o agente de imunoterapia selecionado a partir do grupo que consiste em agentes que bloqueiam moléculas co-inibidoras, CTLA-4, proteína 4 associada a linfócitos T citotóxicos, PD-1, proteína de morte celular programada 1 e/ou que são inibidores de posto de controle.
[0160] Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é um inibidor de sinalização de sobrevivência (pró- apoptótico). Em algumas formas de realização, o agente é selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que tem como alvo: mTOR, alvo mecanístico da rapamicina; PI3K, fosfoinositido 3-quinase; e NF-κB, fator nuclear kappa-B;
[0161] Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é um anti-hipóxico. Em algumas formas de realização, o agente é selecionado a partir do grupo que consiste em um agente direcionado: CA9, anidrase carbônica 9, HIF-1-α, fator 1-alfa indutível por hipóxia e UPR, resposta de proteína não dobrada. Em algumas formas de realização, o agente é tirapazamina.
LIGANTES
[0162] Em algumas formas de realização, em que o dendrímero compreende um terceiro grupo terminal (T3) compreendendo um resíduo de um agente farmaceuticamente ativo, o resíduo de um agente farmaceuticamente ativo é anexado a uma unidade de construção mais externa por meio de um ligante, por exemplo, um ligante clivável. Grupos ligantes podem ser usados, por exemplo, para fornecer grupos adequados para anexar um agente farmaceuticamente ativo ao dendrímero, por exemplo, onde a funcionalidade disponível no agente farmaceuticamente ativo não é adequada para ligação direta a uma unidade de construção. Os grupos ligantes também podem ou, em vez disso, podem ser usados para facilitar a liberação controlada do agente farmaceuticamente ativo da estrutura dendrimérica, proporcionando uma concentração terapeuticamente eficaz e perfil farmacocinético desejável do agente farmaceuticamente ativo por um período de tempo adequado (por exemplo, prolongado).
[0163] Um técnico no assunto apreciará que qualquer um de uma variedade de ligantes adequados pode ser usado. O ligante deve fornecer estabilidade suficiente durante a circulação sistêmica, embora permita a liberação rápida e eficiente do agente farmaceuticamente ativo (por exemplo, droga citotóxica) em uma forma ativa no seu local de ação.
[0164] Em algumas formas de realização, o ligante é um ligante clivável que, por si só ou em conjunto com sua ligação ao agente farmaceuticamente ativo, compreende uma ou mais das seguintes frações cliváveis: um grupo éster, um grupo hidrazona, um grupo oxima, um grupo imina ou um grupo dissulfeto. Em algumas formas de realização, o ligante é clivável em ambiente tumoral, lábil em ácido, lábil em ambiente redutor, hidroliticamente lábil ou sensível a protease.
[0165] Os ligantes quimicamente lábeis incluem, mas não estão limitados a ligantes ácido-lábeis (isto é, hidrazonas) e ligantes dissulfeto. Os ligantes cliváveis enzimaticamente incluem, mas não estão limitados a ligantes peptídicos (por exemplo, aqueles que contêm Val-Cit ou grupos Phe-Lys) e ligantes β-glucuronídeo. Espera-se com vantagem que os ligantes peptídicos e as suas ligações peptídicas tenham boa estabilidade no soro, uma vez que as enzimas proteolíticas lisossomais têm atividades muito baixas no sangue.
Ambos os ligantes Val-Cit e Phe-Lys são rapidamente hidrolisados pela Catepsina B.
[0166] Em algumas formas de realização, o ligante é um ligante clivável enzimaticamente. Por exemplo, em algumas formas de realização, o ligante compreende resíduos de aminoácidos que são capazes de reconhecimento e clivagem por uma enzima.
[0167] Em algumas formas de realização, o ligante compreende um grupo peptídico. Em algumas formas de realização, o ligante compreende um grupo contendo álcool valina-citrulina-paraaminobenzílico (Val-Cit-PAB), por exemplo, tendo a estrutura: .
[0168] Por exemplo, o grupo PAB pode ser covalentemente ligado a um grupo amina presente em uma fração de agente terapêutico por meio do grupo carbonila, formando uma ligação carbamato, e pode ser ligado a um grupo amina presente em uma unidade de construção mais externa por meio de um ligante diacila que se forma a amida liga-se ao grupo valina amino e ao grupo amina presente na unidade de construção mais externa.
[0169] Em algumas formas de realização, o ligante compreende ou consiste em um grupo ácido glutárico-valina-citrulina-álcool paraaminobenzílico, por exemplo. tendo a estrutura:
[0170] Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo compreende um grupo hidroxila e o resíduo do agente farmaceuticamente ativo é ligado a um ligante por meio do átomo de oxigênio do grupo hidroxila. Esta abordagem permite a ligação ao ligante através de um grupo éster, e tais grupos éster foram considerados cliváveis in vivo para liberar o agente farmaceuticamente ativo a uma taxa desejável.
[0171] Em algumas formas de realização, a unidade de núcleo é formada a partir de um precursor da unidade de núcleo que compreende grupos amino, as unidades de construção são resíduos de lisina ou seus análogos, o agente farmaceuticamente ativo compreende um grupo hidroxila, o resíduo do agente farmaceuticamente ativo é ligado através do átomo de oxigênio do grupo hidroxila, e o ligante clivável é um ligante diacila, de forma que haja uma ligação éster entre o resíduo do agente farmaceuticamente ativo e o ligante e uma ligação amida entre o ligante e um átomo de nitrogênio presente em uma unidade de construção mais externa. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo compreende um grupo hidroxila, o resíduo do agente farmaceuticamente ativo é ligado através do átomo de oxigênio do grupo hidroxila e o ligante clivável é um grupo de ligação diacila de fórmula: , em que A é um grupo alquileno C2-C10 que é opcionalmente interrompido por O, S, S-S, NH ou N(Me), ou em que A é um heterociclo selecionado a partir do grupo que consiste em tetra-hidrofurano, tetra- hidrotiofeno, pirrolidina e N-metilpirrolidina.
[0172] Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo compreende um grupo hidroxila, o resíduo do agente farmaceuticamente ativo é ligado através do átomo de oxigênio do grupo hidroxila e o ligante clivável é um grupo de ligação diacila de fórmula: , em que A é um grupo C2-C10 alquileno que é interrompido por O, S, NH ou N(Me).
[0173] Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo compreende um grupo hidroxila, o resíduo do agente farmaceuticamente ativo é ligado através do átomo de oxigênio do grupo hidroxila e o ligante diacila é: ou .
[0174] Um tipo específico de ligante clivável é aquele que contém uma porção dissulfureto. Esses ligantes são suscetíveis à clivagem pela glutationa. Por exemplo, um ligante deste tipo pode compreender dois grupos acila ligados por meio de uma cadeia alquila interrompida por uma porção dissulfeto.
[0175] Em algumas formas de realização, o ligante compreende uma cadeia alquila interrompida por uma fração dissulfeto, na qual um ou ambos os átomos de carbono que estão próximos ao grupo dissulfeto são substituídos por um ou mais grupos metila. Por exemplo, um dos átomos de carbono próximos à porção dissulfeto pode ser substituído por um grupo gem- dimetila, por exemplo, o ligante pode compreender o grupo:
[0176] Em algumas formas de realização, o ligante é: .
[0177] Em algumas formas de realização, cada terceiro grupo terminal (T3) é:
[0178] Em algumas formas de realização, cada terceiro grupo terminal (T3) é: .
[0179] Em algumas formas de realização, cada terceiro grupo terminal (T3) é: .
[0180] Em algumas formas de realização, cada terceiro grupo terminal (T3) é: .
[0181] Em algumas formas de realização, o dendrímero compreende unidades de superfície que compreendem uma unidade de construção mais externa e um segundo grupo terminal de fórmula: 2º Grupo Terminal em que R representa um primeiro grupo terminal ou um terceiro grupo terminal.
[0182] Em algumas formas de realização, os dendrímeros da presente invenção têm um ou mais primeiros grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada primeiro grupo terminal compreende uma porção contendo radionuclídeo ou um grupo de complexação contendo isótopo estável (material frio); e um ou mais segundos grupos terminais ligados a um átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa, em que cada segundo grupo terminal compreende uma porção de modificação farmacocinética.
[0183] Em algumas formas de realização, o primeiro grupo terminal está ligado ao átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa e o segundo grupo terminal está ligado ao átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa. Em algumas formas de realização, em que o dendrímero compreende um terceiro grupo terminal que compreende um resíduo de um agente farmaceuticamente ativo, o terceiro grupo terminal está ligado ao átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa.
[0184] Os dendrímeros podem, portanto, ser considerados como tendo estequiometria e/ou topologia controlada. Por exemplo, os dendrímeros são normalmente produzidos usando processos sintéticos que permitem um alto grau de controle sobre o número e a disposição do primeiro e segundo (e terceiro) grupos terminais presentes nos dendrímeros. Os dendrímeros podem ser sintetizados usando grupos de proteção ortogonais para permitir a conjugação dos grupos terminais à unidade de construção mais externa de uma maneira predefinida ou controlada.
[0185] De forma vantajosa, os dendrímeros da presente invenção podem fornecer imagens eficazes e propriedades de diagnóstico, apesar de conter cargas relativamente baixas de fração de radionuclídeo. Isto é desejável tanto a partir de uma perspectiva de síntese, e uma vez que fornece locais adicionais nas unidades de construção de dendrímeros a serem disponibilizados para conjugação com outras frações úteis nas construções, tais como agentes farmaceuticamente ativos.
[0186] Por conseguinte, em algumas formas de realização em que a unidade de núcleo é formada a partir de um precursor da unidade de núcleo compreendendo grupos amino e as unidades de construção são resíduos de lisina ou seus análogos, menos de 20%, menos de 15%, menos de 10%, menos de 5%, ou menos de 1%, dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas estão ligados a um primeiro grupo terminal (isto é, um grupo que compreende uma porção contendo radionuclídeo). Em algumas formas de realização, por exemplo, em que o dendrímero tem cinco gerações de unidades de construção, de 1 a 5 (ou seja, 1, 2, 3, 4 ou 5) dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas estão ligados a um primeiro grupo terminal. Em uma forma de realização de uma composição de dendrímeros, os primeiros grupos terminais médios podem ser menores do que 1. Em algumas formas de realização, de 1 a 3 dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas estão ligados a um primeiro grupo terminal.
[0187] Em algumas formas de realização em que a unidade de núcleo é formada a partir de um precursor da unidade de núcleo que compreende grupos amino e as unidades de construção são resíduos de lisina ou análogos dos mesmos, pelo menos 40% dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas são, cada um, covalentemente ligados a um segundo grupo terminal. Em algumas formas de realização, pelo menos 45% dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas são, cada um, covalentemente ligados a um segundo grupo terminal. Em algumas formas de realização, cerca de 50% dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas são, cada um, covalentemente ligados a um segundo grupo terminal. Em algumas formas de realização, por exemplo, em que o dendrímero tem cinco gerações de unidades de construção, pelo menos 25, 26, 27, 27, 29, 30, 31 ou 32 dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas são, cada um, covalentemente ligados a uma segunda grupo terminal.
[0188] Como discutido acima, a capacidade de alcançar boas propriedades terapêuticas apesar da carga relativamente baixa de radionuclídeo, fornece locais adicionais nas unidades de construção mais externas do dendrímero para serem disponibilizados para conjugação com outras frações úteis nas construções, tais como agentes farmaceuticamente ativos. Por conseguinte, em algumas formas de realização em que a unidade de núcleo é formada a partir de um precursor da unidade de núcleo que compreende grupos amino e as unidades de construção são resíduos de lisina ou seus análogos, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos um terço, pelo menos 35%, ou pelo menos 45% dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas são, cada um, covalentemente ligados a um terceiro grupo terminal. Em algumas formas de realização, por exemplo, em que o dendrímero tem cinco gerações de unidades de construção, pelo menos
15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 ou 31 dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas são, cada um, covalentemente ligados a um terceiro grupo terminal.
[0189] Em algumas formas de realização em que a unidade de núcleo é formada a partir de um precursor da unidade de núcleo que compreende grupos amino e as unidades de construção são resíduos de lisina ou análogos dos mesmos, não mais do que um quarto dos átomos de nitrogênio presentes na geração mais externa de unidades de construção são não substituídos. Em algumas formas de realização, o número de átomos de nitrogênio presentes na geração mais externa de unidades de construção que são substituídas pode ser de pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90% ou 95%.
Em uma forma de realização, pelo menos 80% dos átomos de nitrogênio presentes na geração mais externa de unidades de construção são substituídos.
[0190] Em algumas formas de realização, o dendrímero compreende unidades de construção mais externas que contêm grupos –NH2, por exemplo, onde nem todos os átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas estão ligados a um primeiro ou segundo (ou terceiro) grupo terminal.
[0191] Em algumas formas de realização em que a unidade de núcleo é formada a partir de um precursor da unidade de núcleo que compreende grupos amino e as unidades de construção são resíduos de lisina ou análogos dos mesmos, por exemplo, em que o dendrímero tem cinco gerações de unidades de construção, não mais do que 20 átomos de nitrogênio presentes na geração mais externa de unidades de construção não são substituídos. Em algumas formas de realização, não mais do que 10 átomos de nitrogênio presentes na geração mais externa de unidades de construção não são substituídos. Em algumas formas de realização, não mais do que 5 átomos de nitrogênio presentes na geração mais externa de unidades de construção não são substituídos. Em algumas formas de realização, não mais do que 3 átomos de nitrogênio presentes na geração mais externa de unidades de construção não são substituídos. Em algumas formas de realização, não mais do que 2 átomos de nitrogênio presentes na geração mais externa de unidades de construção não são substituídos. Em algumas formas de realização, não mais do que 1 átomo de nitrogênio presente na geração mais externa de unidades de construção não é substituído. Em algumas formas de realização, substancialmente todos os átomos de nitrogênio presentes na geração mais externa de unidades de construção são substituídos.
[0192] O número do primeiro, segundo e, quando presente, terceiro grupo terminal que fazem parte do dendrímero pode ser variado, de modo a adaptar as propriedades do dendrímero conforme desejado. Por exemplo, a razão molar de primeiros grupos terminais compreendendo uma porção complexante de radionuclídeo para terceiros grupos terminais compreendendo um agente farmaceuticamente ativo pode ser variada. Em algumas formas de realização, o dendrímero tem uma razão molar de grupo de complexação para agente farmaceuticamente ativo na faixa de 1: 1 a 1: 100, ou de 1: 1 a 1:50, ou de 1: 1 a 1:40, ou de 1: 1 a 1:30, ou de 1: 1 a 1:20, ou de 1: 1 a 1:10, ou de 1: 2 a 1: 100, ou de 1: 2 a 1:50, ou de 1: 2 a 1:40, ou de 1: 2 a 1:30, ou de 1: 2 a 1:20, ou de 1: 2 a 1:10, ou de 1: 5 a 1: 100, ou de 1: 5 a 1:50, ou de 1: 5 a 1:40, ou de 1: 5 a 1:40, ou de 1: 5 a 1:30, ou de 1: 5 a 1:20, ou de 1: 5 a 1:10, ou de 1:10 a 1: 100, ou de 1:10 a 1:50, ou de 1:10 a 1:40, ou de 1:10 a 1:30, ou de 1:10 a 1:20.
[0193] Será apreciado que, além do primeiro, segundo e terceiro grupos terminais, outras porções podem ser ligadas ao dendrímero. Por exemplo, se desejado, alguns átomos de nitrogênio presentes na geração mais externa de unidades de construção podem ser tampados com um grupo de proteção adequado, por exemplo, que é substancialmente inerte à posterior reação nas condições típicas utilizadas. Um exemplo de um grupo de cobertura adequado é um grupo acetila.
[0194] Em algumas formas de realização, um átomo de nitrogênio alfa de uma unidade de construção mais externa está ligado a um primeiro grupo terminal (isto é, compreendendo uma porção contendo radionuclídeo).
[0195] Em algumas formas de realização, os átomos de nitrogênio épsilon das unidades de construção mais externas estão ligados a segundos grupos terminais (isto é, compreendendo uma porção de modificação farmacocinética).
[0196] Em algumas formas de realização, os átomos de nitrogênio alfa das unidades de construção mais externas são anexados a terceiros grupos terminais (isto é, compreendendo um resíduo de um agente farmaceuticamente ativo).
[0197] Em algumas formas de realização, um átomo de nitrogênio alfa de uma unidade de construção mais externa está ligado a um primeiro grupo terminal, os átomos de nitrogênio alfa de unidades de construção mais externas estão ligados a terceiros grupos terminais e os átomos de nitrogênio épsilon de unidades de construção mais externas estão ligados ao segundo grupo terminal.
[0198] Será apreciado que quando o primeiro grupo terminal compreende grupo de complexação e uma porção contendo radionuclídeo, outro.
[0199] Em algumas formas de realização, o dendrímero é qualquer um dos dendrímeros de exemplo, conforme descrito neste documento.
COMPOSIÇÕES DE DENDRÍMERO
[0200] Em algumas formas de realização, o dendrímero é apresentado como uma composição, de preferência uma composição farmacêutica. Por conseguinte, também é fornecida uma composição compreendendo uma pluralidade de conjugados, conforme descrito neste documento. Em algumas formas de realização, a composição é uma composição farmacêutica (ou seja, uma composição adequada para administração a um indivíduo para fins terapêuticos ou de diagnóstico) que compreende o dendrímero e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0201] Será apreciado que pode haver alguma variação na composição molecular entre os dendrímeros presentes em uma determinada composição, como resultado da natureza do processo de síntese para produzir os dendrímeros. Por exemplo, como discutido acima, uma ou mais etapas sintéticas usadas para produzir um dendrímero podem não prosseguir totalmente até a conclusão, o que pode resultar na presença de dendrímeros que não compreendem todos o mesmo número de primeiros grupos terminais ou segundos grupos terminais, ou que contêm gerações incompletas de unidades de construção.
[0202] Por conseguinte, em uma forma de realização, é fornecida uma composição que compreende uma pluralidade de dendrímeros ou sais dos mesmos, em que os dendrímeros são conforme definidos neste documento, e em que o número médio de primeiros grupos terminais por dendrímero na composição está na faixa de 0,2 a 8, o número médio de segundos grupos terminais por dendrímero na composição está na faixa de 10 a 32.
[0203] Por exemplo, o grau de marcação necessário para alcançar uma boa imagem ou eficácia terapêutica pode ser relativamente baixo, potencialmente exigindo menos do que um grupo radiomarcado por dendrímero em alguns casos. No entanto, em algumas formas de realização, o número médio de primeiros grupos terminais por dendrímero na composição está na faixa de 1 a 5, e o número médio de segundos grupos terminais por dendrímero na composição está na faixa de 10 a 32.
[0204] Em algumas formas de realização, a composição compreende dendrímeros com um terceiro grupo terminal compreendendo um resíduo de um agente farmaceuticamente ativo e o número médio do terceiro grupo terminal por dendrímero na composição está na faixa de 10 a 31.
[0205] Em algumas formas de realização, a composição é uma composição farmacêutica e a composição compreende um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0206] Em algumas formas de realização, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% dos dendrímeros contêm um primeiro grupo terminal.
[0207] Em algumas formas de realização, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% dos dendrímeros contêm um segundo grupo terminal.
[0208] Em algumas formas de realização, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95% dos dendrímeros contêm um terceiro grupo terminal.
[0209] Em algumas formas de realização, pelo menos 50% dos dendrímeros contêm pelo menos um primeiro grupo terminal.
[0210] Em algumas formas de realização, pelo menos 75% dos dendrímeros contêm pelo menos 26, pelo menos 28 ou pelo menos 30 segundos grupos terminais.
[0211] Em algumas formas de realização, pelo menos 75% dos dendrímeros contêm pelo menos 20, pelo menos 22, pelo menos 24, pelo menos 26 ou pelo menos 28 terceiros grupos terminais compreendendo um resíduo de um agente farmaceuticamente ativo.
[0212] Conforme discutido acima, a presente invenção fornece formulações ou composições farmacêuticas, tanto para uso veterinário quanto para uso médico humano, que compreendem os dendrímeros da presente divulgação ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis e, opcionalmente, quaisquer outros ingredientes terapêuticos, estabilizadores ou semelhante. O(s) veículo(s) devem ser farmaceuticamente aceitáveis no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da formulação e não indevidamente deletérios para o receptor dos mesmos.
[0213] As composições da presente divulgação também podem incluir excipientes/ aditivos poliméricos ou veículos, por exemplo, polivinilpirrolidonas, celuloses derivatizadas, como hidroximetilcelulose, hidroxietilcelulose e hidroxipropilmetilcelulose, Ficolls (um açúcar polimérico), hidroxietilamido (HES), dextratos (por exemplo, ciclodextrinas como 2- hidroxipropil-β-ciclodextrina e sulfobutiléter-β-ciclodextrina), polietileno glicóis e pectina. As composições podem incluir ainda diluentes, tampões, citrato, trealose, ligantes, desintegrantes, espessantes, lubrificantes, conservantes (incluindo antioxidantes), sais inorgânicos (por exemplo, cloreto de sódio), agentes antimicrobianos (por exemplo, cloreto de benzalcônio), adoçantes, agentes antiestáticos, ésteres de sorbitano, lipídios (por exemplo, fosfolipídios, como lecitina e outras fosfatidilcolinas, fosfatidiletanolaminas, ácidos graxos e ésteres graxos, esteróides (por exemplo, colesterol)) e agentes quelantes (por exemplo, EDTA, zinco e outros cátions adequados). Outros excipientes e/ou aditivos farmacêuticos adequados para uso nas composições de acordo com a presente divulgação estão listados em “Remington: The Science & Practice of Pharmacy”, 19.sup.th ed., Williams & Williams, (1995), e em “The Physician’s Desk Reference”, 52.sup.nd ed., Medical Economics, Montvale, NJ (1998), e em “Handbook of Pharmaceutical Excipients”, 3ª Ed., Ed. A. H. Kibbe, Pharmaceutical Press, 2000.
[0214] Os conjugados da presente invenção podem ser formulados em composições incluindo aquelas adequadas para administração por qualquer via adequada, incluindo, por exemplo, por administração parenteral (incluindo injeção intraperitoneal, intravenosa, subcutânea ou intramuscular).
[0215] Os dendrímeros da presente invenção podem ser formulados em uma composição adequada para administração para fins diagnósticos e/ou teranósticos.
[0216] As composições podem ser convenientemente apresentadas na forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica de farmácia. Todos os métodos incluem a etapa de trazer o dendrímero em associação com um veículo que constitui um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as composições são preparadas associando o dendrímero a um veículo líquido para formar uma solução ou suspensão ou, alternativamente, trazer o dendrímero em associação com componentes de formulação adequados para formar um sólido, opcionalmente um produto particulado e, então, se garantido, moldar o produto em uma forma de entrega desejada. As formulações sólidas da presente divulgação, quando particuladas, compreenderão tipicamente partículas com tamanhos que variam de cerca de 1 nanômetro a cerca de 500 mícrons. Em geral, para formulações sólidas destinadas à administração intravenosa, as partículas irão tipicamente variar de cerca de 1 nm a cerca de 10 microns de diâmetro. A composição pode conter dendrímeros da presente divulgação que são nanoparticulados com um diâmetro de particulado abaixo de 1000 nm, por exemplo, entre 5 e 1000 nm, especialmente 5 e 500 nm, mais especialmente 5 a 400 nm, tal como 5 a 50 nm e especialmente entre 5 e 20 nm. Em um exemplo, a composição contém dendrímeros com um tamanho médio entre 5 e 20 nm. Em algumas formas de realização, o dendrímero é polidisperso na composição, com PDI entre 1,01 e 1,8, especialmente entre 1,01 e 1,5, e mais especialmente entre 1,01 e 1,2. Em um exemplo, o dendrímero é monodisperso na composição.
[0217] Em algumas formas de realização preferidas, a composição é formulada para entrega parenteral. Por exemplo, em uma forma de realização, a formulação pode ser uma composição estéril liofilizada que é adequada para reconstituição em um veículo aquoso antes da injeção.
[0218] Em uma forma de realização, uma formulação adequada para administração parenteral compreende convenientemente uma preparação aquosa estéril do dendrímero, que pode, por exemplo, ser formulada para ser isotônica com o sangue do receptor.
[0219] Em algumas formas de realização, a composição é formulada para entrega intertumoral. Outros meios de entrega adequados também podem ser usados. Por exemplo, em algumas formas de realização, a entrega pode ser por lavagem ou aerossol. Em uma forma de realização a composição é formulada para entrega intraperitoneal, e é para o tratamento de cânceres na cavidade peritoneal, o qual inclui tumores malignos epiteliais (por exemplo, câncer de ovário), e carcinomatose peritoneal (por exemplo, gastrointestinais especialmente colorretais, de estômagos, cânceres ginecológicos, e neoplasias peritoneais primárias).
[0220] Também são fornecidas formulações farmacêuticas que são adequadas para administração como um aerossol, por inalação. Estas formulações compreendem uma solução ou suspensão do dendrímero desejado ou um sal do mesmo. A formulação desejada pode ser colocada em uma pequena câmara e nebulizada. A nebulização pode ser realizada por ar comprimido ou por energia ultrassônica para formar uma pluralidade de gotículas de líquido ou partículas sólidas compreendendo os dendrímeros ou seus sais.
[0221] Conforme discutido abaixo, os dendrímeros da presente divulgação podem, por exemplo, ser administrados em combinação com um ou mais agentes farmaceuticamente ativos adicionais. Em algumas formas de realização, o dendrímero é fornecido em combinação com um outro ativo. Em algumas formas de realização, é fornecida uma composição que compreende um dendrímero conforme definido neste documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis e um ou mais agentes farmaceuticamente ativos adicionais, por exemplo, um agente anticâncer/oncológico adicional, tal como uma pequena molécula citotóxica, um inibidor de ponto de controle ou uma terapia de anticorpos. Não apenas os dendrímeros da presente divulgação podem ser administrados com outros medicamentos de quimioterapia, mas também podem ser administrados em combinação com outros medicamentos, como corticosteroides, anti-histamínicos, analgésicos e medicamentos que auxiliam na recuperação ou protegem da hematotoxicidade, por exemplo, citocinas.
[0222] Em algumas formas de realização, a composição é formulada para infusão parenteral como parte de um regime de quimioterapia.
APLICAÇÕES DIAGNÓSTICAS E TERAPÊUTICAS DE DENDRÍMEROS
[0223] Os dendrímeros conforme descrito nestes documentos de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, podem ser usados em várias aplicações de diagnóstico e terapêuticas. Os dendrímeros conforme descrito nestes documentos podem ser usados como único agente de diagnóstico, tal como um agente de imagem, ou como um agente de diagnóstico e terapêutico duplo. Exemplos de aplicações diagnósticas e/ou terapêuticas incluem imagens, teranósticos, acompanhamento terapêutico-diagnóstico, monitoramento da progressão da doença, avaliação da eficácia da terapia, determinação de resultados de grupos de pacientes e desenvolvimento de regimes de tratamento para pacientes ou grupos de pacientes específicos.
[0224] Em uma forma de realização, é fornecido um método para determinar se um indivíduo tem um câncer. Uma primeira etapa do método pode compreender a administração a um indivíduo de um dendrímero ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos. Uma segunda etapa do método pode compreender a realização de imagens no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo. Uma terceira etapa do método pode compreender determinar se o indivíduo tem um câncer com base nos resultados de imagem.
[0225] Em outra forma de realização, é fornecido um método de imagiologia de um câncer em um indivíduo. Uma primeira etapa do método pode compreender a administração a um indivíduo com câncer de um dendrímero ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos. Uma segunda etapa do método pode compreender a realização de imagens no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo.
[0226] Em outra forma de realização, é fornecido um método para determinar a progressão de um câncer em um indivíduo. Uma primeira etapa pode compreender a administração a um indivíduo com câncer de uma primeira quantidade de um dendrímero ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos. Uma segunda etapa do método pode compreender a realização de uma etapa de imagem no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo. Uma terceira etapa do método pode compreender a administração subsequente ao indivíduo de uma segunda quantidade de um dendrímero ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos. Uma quarta etapa do método pode compreender a realização de uma segunda etapa de imagem no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo. Uma quinta etapa do método pode compreender determinar se o câncer progrediu com base no primeiro e no segundo resultados de imagem.
[0227] Em outra forma de realização, é fornecido um método para determinar uma terapia apropriada para um indivíduo com câncer. Uma primeira etapa do método pode compreender a administração ao indivíduo de um dendrímero ou uma composição farmacêutica conforme descrito neste documento de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos. Uma segunda etapa do método pode compreender a realização de imagens no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo. Uma terceira etapa do método pode compreender determinar se os resultados de imagem indicam suscetibilidade do câncer ao tratamento com uma terapia e, subsequentemente, como uma etapa adicional, administrar a terapia ao indivíduo.
[0228] Em outra forma de realização, é fornecido um método para determinar a eficácia de uma terapia contra o câncer administrada a um indivíduo com câncer. Uma primeira etapa do método pode compreender a administração ao indivíduo de uma primeira quantidade de um dendrímero ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos. Uma segunda etapa do método pode compreender a realização de uma primeira etapa de imagem no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo. Uma terceira etapa pode compreender a administração ao indivíduo de uma terapia contra o câncer. Uma quarta etapa pode compreender subsequentemente a administração ao indivíduo de uma segunda quantidade de um dendrímero ou uma composição farmacêutica, conforme descrita neste documento de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos. Uma quinta etapa pode compreender a realização de uma segunda etapa de imagem no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo. Uma sexta etapa pode compreender a determinação da eficácia da terapia contra o câncer com base no primeiro e no segundo resultados de imagem.
[0229] A imagem conforme descrita neste documento, incluindo para qualquer uma das formas de realização acima, pode ser imagem PET. Em outra forma de realização, a imagem é, pelo menos, uma de PET-MRI, SPECT, SPECT-CT, CT, cintografia e imagem de PET-CT.
[0230] A terapia pode envolver um dendrímero ou uma composição conforme descrita neste documento de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos.
[0231] Bem como tendo uso como agentes de diagnóstico de imagem e teranósticos, os dendrímeros da presente invenção podem ser úteis no tratamento de condições tais como cânceres. Consequentemente, também é fornecido um dendrímero ou composição farmacêutica, conforme descrito neste documento, para uso em terapia e, de forma mais específica, para uso em terapia contra o câncer. Em algumas formas de realização, o dendrímero é usado em um método de tratamento ou prevenção de câncer, por exemplo, para suprimir o crescimento de um tumor. Em algumas formas de realização, o dendrímero é para uso no tratamento de câncer. Também é fornecido um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um indivíduo em necessidade de uma quantidade terapeuticamente eficaz do dendrímero. Também é fornecido o uso de um dendrímero conforme aqui definido, ou de uma composição conforme aqui definido, na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.
[0232] Em algumas formas de realização, o câncer é um tumor sólido. O câncer pode ser um tumor primário ou metastático. Em algumas formas de realização, o câncer é um tumor primário. Em algumas formas de realização, o câncer é um tumor metastático.
[0233] Em algumas formas de realização, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer colorretal, câncer de pâncreas, câncer de mama, câncer de ovário, câncer de próstata, câncer de pulmão e câncer cervical. Em algumas formas de realização, o câncer é câncer de próstata, câncer de pâncreas, câncer gastrointestinal, câncer de estômago, câncer de pulmão, câncer de útero, câncer de mama, câncer cerebral ou câncer de ovário. Em algumas formas de realização, o câncer é câncer de próstata, câncer de pâncreas, câncer de mama ou câncer cerebral. Em algumas formas de realização, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de próstata, câncer cerebral, câncer de mama, câncer de testículo, câncer de ovário, câncer de estômago, adenocarcinoma do pulmão, câncer de estômago, câncer de pâncreas, carcinoma do ducto salivar, câncer esofágico e cânceres de útero (por exemplo, carcinoma endometrial grave do útero).
[0234] Em algumas formas de realização, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer colorretal, câncer de estômago, câncer de pâncreas, câncer de próstata e câncer de mama.
[0235] Em algumas formas de realização, o câncer é câncer cerebral. Os cânceres cerebrais incluem, mas não estão limitados a glioblastoma, meningioma, pituitária, bainha nervosa, astrocitoma, oligodendroglioma, ependimoma, meduloblastoma ou craniofaringioma. O câncer cerebral pode ser um glioblastoma, meningioma, pituitária, bainha nervosa, astrocitoma, oligodendroglioma, ependimoma, meduloblastoma ou craniofaringioma. Em uma forma de realização particular, o câncer cerebral é um glioblastoma. Em algumas formas de realização, o câncer cerebral é meningioma. Em algumas formas de realização, o câncer cerebral é pituitário.
Em algumas formas de realização, o câncer cerebral é uma bainha nervosa. Em algumas formas de realização, o câncer cerebral é astrocitoma. Em algumas formas de realização, o câncer cerebral é oligodendroglioma. Em algumas formas de realização, o câncer cerebral é ependimoma. Em algumas formas de realização, o câncer cerebral é meduloblastoma. Em algumas formas de realização, o câncer cerebral é craniofaringioma. Em algumas formas de realização, o câncer é câncer de próstata. Em algumas formas de realização, o câncer é câncer de mama. Em algumas formas de realização, o câncer é câncer de testículo. Em algumas formas de realização, o câncer é câncer de ovário. Em algumas formas de realização, o câncer é câncer de estômago. Em algumas formas de realização, o câncer é adenocarcinoma do pulmão. Em algumas formas de realização, o câncer é câncer de estômago.
Em algumas formas de realização, o câncer é câncer de pâncreas. Em algumas formas de realização, o câncer é carcinoma do ducto salivar. Em algumas formas de realização, o câncer é câncer esofágico. Em algumas formas de realização, o câncer é câncer de útero.
[0236] O dendrímero pode ser administrado por qualquer via adequada, incluindo, por exemplo, por via intravenosa. Em algumas formas de realização, o dendrímero é administrado como um bolus IV. Em algumas formas de realização, o dendrímero é administrado IV ao longo de um período de tempo na faixa de 0,5 a 60 minutos, ou na faixa de 0,5 a 30 minutos, ou na faixa de 0,5 a 15 minutos, ou na faixa de 0,5 a 5 minutos. Em outro exemplo, o dendrímero pode ser administrado por via intraperitoneal. A via de administração pode, por exemplo, ser direcionada para a doença ou distúrbio que o indivíduo tem. Por exemplo, em algumas formas de realização, a doença ou distúrbio pode ser uma malignidade intra-abdominal, como um câncer ginecológico ou gastrointestinal, e o conjugado pode ser administrado por via intraperitoneal. Em algumas formas de realização, o dendrímero pode ser para o tratamento de um câncer da cavidade peritoneal, como tumores epiteliais malignos (por exemplo, câncer de ovário) ou carcinomatose peritoneal (por exemplo, gastrointestinal especialmente câncer colorretal, de estômago,
ginecológico e neoplasias peritoneais primárias), e o dendrímero é administrado por via intraperitoneal.
[0237] Quando o dendrímero compreende um terceiro grupo terminal que é um outro agente farmaceuticamente ativo, em algumas formas de realização, a quantidade de dendrímero administrado é suficiente para entregar entre 2 e 100 mg de agente ativo/m 2, entre 2 e 50 mg de agente ativo/m2, entre 2 e 40 mg de agente ativo/m2, entre 2 e 30 mg de agente ativo/m2, entre 2 e 25 mg de agente ativo/m 2, entre 2 e 20 mg de agente ativo/m2, entre 5 e 50 mg de agente ativo/m 2, entre 10 a 40 mg de agente ativo/m2 entre 15 e 35 mg de agente ativo/m2, entre 10 e 20 mg/m2, entre 20 e 30 mg/m2, ou entre 25 e 35 mg de agente ativo/m 2. Uma dose do agente ativo de 10 mg/kg em um camundongo deve ser aproximadamente equivalente a uma dose humana de 30 mg/m2 (orientação da FDA 2005). (Para converter a dose humana de mg/kg em mg/m2, o valor pode ser multiplicado por 37, orientação da FDA de 2005).
[0238] Em algumas formas de realização, uma quantidade terapeuticamente eficaz do dendrímero é administrada a um indivíduo em necessidade do mesmo em uma frequência predeterminada. Em algumas formas de realização, o dendrímero é administrado a um indivíduo em necessidade do mesmo de acordo com um regime de dosagem no qual o dendrímero é administrado uma vez por uma a quatro semanas. Em algumas formas de realização, o dendrímero é administrado a um indivíduo em necessidade do mesmo de acordo com um regime de dosagem em que o dendrímero é administrado uma vez por três a quatro semanas.
[0239] Como discutido acima, uma quantidade terapeuticamente eficaz do dendrímero é administrada. Por exemplo, em algumas formas de realização, quando administrado, pode ser administrada uma dose de dendrímero que fornece uma quantidade de radioatividade na faixa de até 50
GBq, de 1 a 20 GBq, ou de 1 a 10 GBq. Em algumas formas de realização, quando administrada, é administrada uma dose de dendrímero que fornece uma quantidade de radioatividade na faixa de 0,1 a 10 MBq, de 0,1 a 5 MBq, de 0,1 a 2 MBq, de 0,1 a 1 MBq, de 0,5 a 10 MBq, de 1 a 10 MBq, de 1 a 5 MBq, de 5 a 10 MBq, ou cerca de 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9 ou cerca 10 MBq. Em algumas formas de realização, a radioatividade é medida no ponto de tempo imediatamente antes do uso do dendrímero.
COMBINAÇÕES
[0240] Os medicamentos são frequentemente administrados em combinação com outros medicamentos, especialmente durante a quimioterapia. Por conseguinte, em algumas formas de realização, o dendrímero é administrado em combinação com um ou mais outros agentes farmaceuticamente ativos, por exemplo, um ou mais outros agentes/drogas anticâncer. O dendrímero e o um ou mais outros agentes farmaceuticamente ativos podem ser administrados simultaneamente, subsequentemente ou separadamente. Por exemplo, eles podem ser administrados como parte da mesma composição ou por administração de composições separadas.
[0241] O um ou mais outros agentes farmaceuticamente ativos podem ser, por exemplo, agentes anticâncer para terapia contra o câncer de próstata, câncer cerebral, câncer de mama, câncer de testículo, câncer de ovário, câncer de estômago, adenocarcinoma do pulmão, câncer de estômago, câncer de pâncreas, carcinoma do ducto salivar, cânceres de esôfago ou cânceres de útero (por exemplo, carcinoma endometrial grave do útero).
[0242] O um ou mais outros agentes farmaceuticamente ativos podem ser, por exemplo, agentes anticâncer para terapia contra o câncer colorretal, câncer de estômago, câncer de pâncreas, câncer de próstata ou câncer de mama.
[0243] Exemplos de outros agentes farmaceuticamente ativos incluem agentes quimioterápicos e citotóxicos, pequenas moléculas citotóxicas, inibidores de tirosina quinase, inibidores de posto de controle, inibidores de EGFR, terapias de anticorpos, taxanos (por exemplo, paclitaxel, docetaxel, cabazitaxel, nab-paclitaxel), inibidores de topoisomerase (por exemplo, SN-38, irinotecano (CPT-11), topotecano, silatecano, cositecano, exatecano, lurtotecano, gimatecano, belotecano ou rubitecano), análogos de nucleosídeos e inibidores de aromatase.
[0244] Ainda outros exemplos de agentes farmaceuticamente ativos que podem ser usados em combinação com o dendrímero incluem radiossensibilizadores, agentes farmaceuticamente ativos que reduzem a reparação de DNA, agentes de imunoterapia, inibidores de sinalização de sobrevivência e anti-hipóxicos.
[0245] Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é um rádio sensibilizador. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo reduz o reparo de DNA. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é selecionado a partir do grupo que consiste em um direcionamento de agente; Proteína quinase dependente de DNA; ponto de verificação quinase 1; poli (ADP-ribose) polimerase, tal como olaparib; ataxia telangiectasia e/ou proteína relacionada com Rad3, como AZD6738. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é um agente de imunoterapia. Em algumas formas de realização, o agente de imunoterapia é selecionado a partir do grupo que consiste em agentes que bloqueiam moléculas co-inibidoras; CTLA-4, proteína 4 associada a linfócitos T citotóxicos; PD-1, proteína 1 de morte celular programada; inibidores de posto de controle. Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é um inibidor de sinalização de sobrevivência (pró-apoptótico). Em algumas formas de realização, o agente é selecionado a partir do grupo que consiste em um agente que tem como alvo: mTOR, alvo mecanístico da rapamicina; PI3K, fosfoinositido 3-quinase; e NF- κB, fator nuclear kappa-B; Em algumas formas de realização, o agente farmaceuticamente ativo é um anti-hipóxico. Em algumas formas de realização, o agente é selecionado a partir do grupo que consiste em um agente direcionado: CA9, anidrase carbônica 9, HIF-1-α, fator 1-alfa induzível por hipóxia e UPR, resposta de proteína não dobrada. Em algumas formas de realização, o agente é tirapazamina.
PREPARAÇÃO DE DENDRÍMERO
[0246] Os materiais radioativos são substâncias perigosas e as etapas de manuseio com esses materiais são minimizadas de maneira ideal. É desejável introduzir o componente radionuclídeo nos dendrímeros apenas em um estágio tardio, idealmente em um momento imediatamente antes do uso dos conjugados.
[0247] Os dendrímeros que compreendem um radionuclídeo conforme descrito neste documento podem ser preparados a partir de um intermediário e um radionuclídeo. O dendrímero intermediário pode conter pelo menos alguns grupos terminais que compreendem um grupo complexante para complexar um radionuclídeo.
[0248] Por conseguinte, é fornecido um intermediário para a produção de um dendrímero contendo radionuclídeo que compreende: i) uma unidade de núcleo (C); e ii) unidades de construção (BU); em que a unidade de núcleo está covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção; o dendrímero tendo de duas a seis gerações de unidades de construção; em que unidades de construção de diferentes gerações são covalentemente ligadas umas às outras; e o dendrímero compreendendo ainda: iii) um ou mais primeiros grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada primeiro grupo terminal compreende um grupo de complexação para complexar um radionuclídeo; e iv) um ou mais segundos grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada segundo grupo terminal compreende uma porção de modificação farmacocinética.
[0249] Será apreciado que qualquer uma ou mais várias formas de realização ou exemplos descritos neste documento para a unidade de núcleo (C), unidade de construção (BU), grupos terminais ou dendrímero, também podem ser fornecidos para o dendrímero intermediário.
[0250] Em outra forma de realização, é fornecido um kit para a produção de um dendrímero de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, conforme descrito neste documento, o kit compreendendo um dendrímero intermediário e um radionuclídeo, cada um fornecido independentemente de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, conforme descrito aqui em.
[0251] Um processo para produzir um dendrímero de acordo com pelo menos algumas formas de realização ou exemplos aqui descritos pode compreender o contato do dendrímero intermediário com o radionuclídeo para produzir o dendrímero. Qualquer meio adequado de produção do dendrímero pode ser usado. Por exemplo, intermediário e um sal radionuclídeo podem ser misturados em um solvente aquoso contendo um tampão apropriado de forma que ocorra complexação do radionuclídeo.
[0252] O kit e os processos descritos acima podem ser usados para fornecer uma preparação clínica eficaz de composições farmacêuticas por marcação radioativa dos dendrímeros na clínica antes da administração.
[0253] O dendrímero intermediário pode ser produzido, por exemplo, a partir de um dendrímero precursor fornecido com um grupo funcional, seja como parte de uma unidade de construção mais externa ou como parte de um primeiro grupo terminal ligado a uma unidade de construção mais externa, para reação com e introdução de um grupo de complexação. De forma alternativa, o dendrímero precursor pode estar na forma protegida, tendo um grupo de proteção que pode ser desprotegido e então reagido para introduzir um grupo de complexação e, assim, preparar um dendrímero intermediário.
[0254] Por exemplo, um grupo de complexação pode ser reagido com o dendrímero precursor para formar um dendrímero intermediário compreendendo pelo menos alguns grupos terminais compreendendo um grupo de complexação para complexar um radionuclídeo.
[0255] Um dendrímero precursor pode, por exemplo, compreender: i) uma unidade de núcleo (C); e ii) unidades de construção (BU); em que a unidade de núcleo está covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção; o dendrímero tendo de duas a seis gerações de unidades de construção; em que unidades de construção de diferentes gerações são covalentemente ligadas umas às outras; e o dendrímero compreendendo ainda: iii) um ou mais primeiros grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, o primeiro grupo terminal compreendendo um grupo funcional disponível para reação para introduzir um grupo de complexação, ou compreendendo uma versão protegida de tal grupo funcional; e iv) um ou mais segundos grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada segundo grupo terminal compreende uma porção de modificação farmacocinética.
[0256] De forma alternativa, um dendrímero precursor pode compreender: i) uma unidade de núcleo (C); e ii) unidades de construção (BU); em que a unidade de núcleo está covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção; o dendrímero tendo de duas a seis gerações de unidades de construção; em que unidades de construção de diferentes gerações são covalentemente ligadas umas às outras; e o dendrímero compreendendo ainda: iii) unidades de construção mais externas compreendendo um grupo funcional disponível para reação para introduzir um grupo de complexação, ou compreendendo uma versão protegida de tal grupo funcional; e iv) um ou mais segundos grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada segundo grupo terminal compreende uma porção de modificação farmacocinética.
[0257] Exemplos de grupos funcionais adequados disponíveis para a reação de introdução de um grupo de complexação incluem grupos funcionais amina presentes em uma unidade de construção de lisina mais externa. Os grupos de proteção adequados podem incluir, por exemplo, grupos de proteção Boc ou Cbz.
[0258] Um processo para produzir um dendrímero de acordo com pelo menos algumas formas de realização ou exemplos aqui descritos pode compreender opcionalmente desproteger quaisquer grupos de proteção se presentes no dendrímero precursor, contatar o dendrímero precursor com um grupo de complexação para produzir um dendrímero intermediário e contatar o dendrímero intermediário com o radionuclídeo para produzir o dendrímero.
[0259] Terceiros grupos terminais podem ser fornecidos no dendrímero intermediário por reação adicional com um resíduo de um agente farmaceuticamente ativo. Será apreciado que o grupo de complexação, radionuclídeo, terceiros grupos terminais, resíduo de um agente farmaceuticamente ativo e agente farmaceuticamente ativo podem ser fornecidos independentemente de acordo com quaisquer formas de realização ou exemplos dos mesmos, conforme descrito neste documento.
[0260] Também pode ser desejável introduzir o agente farmaceuticamente ativo em um estágio final do processo, por exemplo, dado que esse componente é muitas vezes um componente valioso do dendrímero.
[0261] Por conseguinte, em algumas formas de realização, um dendrímero precursor compreendendo: i) uma unidade de núcleo (C); e ii) unidades de construção (BU); em que a unidade de núcleo está covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção; o dendrímero tendo de duas a seis gerações de unidades de construção; em que unidades de construção de diferentes gerações são covalentemente ligadas umas às outras; e o dendrímero compreendendo ainda: iii) unidades de construção mais externas compreendendo grupos funcionais disponíveis para reação (por exemplo, grupos amino); e iv) um ou mais segundos grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada segundo grupo terminal compreende uma porção de modificação farmacocinética; pode reagir com uma porção compreendendo um grupo de complexação, de forma que alguns dos locais disponíveis nas unidades de construção mais externas contenham um grupo de complexação.
Subsequentemente, outros grupos funcionais disponíveis nas unidades de construção mais externas podem, por exemplo, reagir com um grupo de agente de ligação farmaceuticamente ativo, de forma que outros locais disponíveis contenham um agente farmaceuticamente ativo, produzindo assim um dendrímero intermediário. O dendrímero intermediário pode então reagir com um radionuclídeo (por exemplo, sal de radionuclídeo) de forma que o radionuclídeo seja complexado, produzindo o dendrímero final.
[0262] A título de exemplo, as reações de grupos funcionais com uma porção contendo grupos de complexação, e com grupos de agente de ligação farmaceuticamente ativos, podem envolver reações de formação de amida, por exemplo, entre grupos amino presentes na unidade de construção mais externa, e ácido carboxílico ou grupos carboxila ativados (por exemplo, ésteres ativos) presentes no outro parceiro.
[0263] Em tal processo, a proporção de locais na superfície do dendrímero final que contêm um primeiro grupo terminal versus um terceiro grupo terminal pode ser controlado, por exemplo, controlando a estequiometria dos reagentes usados nas reações.
[0264] Como discutido acima, o número do primeiro, segundo e, quando presente, terceiro grupo terminal que fazem parte do dendrímero pode ser variado de modo a adaptar as propriedades do dendrímero conforme desejado. Em algumas formas de realização, o dendrímero intermediário (ou seja, o material dendrimérico antes da complexação do radionuclídeo) tem uma razão molar de grupo de complexação para agente farmaceuticamente ativo na faixa de 1: 1 a 1: 100, ou de 1: 1 a 1: 50, ou de 1: 1 a 1:40, ou de 1: 1 a 1:30, ou de 1: 1 a 1:20, ou de 1: 1 a 1:10, ou de 1: 2 a 1: 100, ou de 1: 2 a 1:50, ou de 1: 2 a 1:40, ou de 1: 2 a 1:30, ou de 1: 2 a 1:20, ou de 1: 2 a 1: 10, ou de 1:
5 a 1: 100, ou de 1: 5 a 1:50, ou de 1: 5 a 1:40, ou de 1: 5 a 1:40, ou de 1: 5 a 1: 30, ou de 1: 5 a 1:20, ou de 1: 5 a 1:10, ou de 1:10 a 1: 100, ou de 1:10 a 1:50, ou de 1:10 a 1: 40, ou de 1:10 a 1:30 ou de 1:10 a 1:20.
[0265] Dendrímeros precursores compreendendo um núcleo, unidades de construção (por exemplo, unidades de construção de lisina) e segundos grupos terminais compreendendo grupos de modificação farmacocinética, tais como grupos de PEG, são descritos em, por exemplo, WO 2007/082331 e WO 2012/167309.
[0266] Os processos acima podem compreender várias formas de realização ou exemplos do dendrímero precursor, dendrímero intermediário e dendrímero, conforme descrito neste documento.
[0267] Também é fornecido um kit para a produção de um dendrímero de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos, conforme descrito neste documento, o kit compreendendo um dendrímero precursor, um grupo de complexação e um radionuclídeo, cada um fornecido independentemente de acordo com quaisquer aspectos, formas de realização ou exemplos dos mesmos conforme descrito aqui.
[0268] O kit pode fornecer uma quantidade suficiente de radionuclídeo para administrar uma dose adequada de radioatividade ao indivíduo e, tipicamente, também conterá uma quantidade adequada de dendrímero precursor para complexar essa quantidade de radionuclídeo. Em algumas formas de realização, o kit compreende radionuclídeo que fornece uma quantidade de radioatividade na faixa de até 50 GBq, de 1 a 20 GBq ou de 1 a 10 GBq. Em algumas formas de realização, o kit compreende radionuclídeo que fornece uma quantidade de radioatividade na faixa de 0,1 a 10 MBq, de 0,1 a 5 MBq, de 0,1 a 2 MBq, de 0,1 a 1 MBq, de 0,5 a 10 MBq, de 1 a 10 MBq, de 1 a 5 MBq, de 5 a 10 MBq, ou cerca de 1, cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4,
cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9 ou cerca de 10 MBq.
Em algumas formas de realização, a radioatividade é medida no ponto de tempo imediatamente antes da complexação do radionuclídeo pelo dendrímero, ou seja, imediatamente antes do uso.
EXEMPLOS UNIDADE DE NÚCLEO E SÍNTESE DA UNIDADE DE CONSTRUÇÃO
[0269] BHALys[Lys]32[α-NH2TFA]32[ε-PEGX]32, em que X se refere ao peso molecular aproximado dos grupos de PEG, foi produzido por métodos sintéticos análogos aos descritos em WO 2007/082331.
[0270] A terminologia BHALys[Lys]32 refere-se a um dendrímero com uma unidade de núcleo BHALys e cinco gerações de unidades de construção de lisina de forma que contenha 32 unidades de construção de lisina na camada mais externa, ou seja: BHALys [Lys]2 [Lys]4 [Lys]8 [Lys]16 [Lys]32.
EXEMPLO 1
[0271] (a) BHALys[Lys]32[(α-NH2)30(α-DFO)2(ε-PEG2000)32].
[0272] (b) BHALys[Lys]32[(α-TDA-DTX)30(α-DFO)2(ε- PEG2000)32].
[0273] Para uma solução agitada de BHALys[Lys]32[(α-NH2.TFA)(ε- PEG2000)32] (151 mg, 1,98 µmol)(preparado de uma maneira análoga à descrita no Exemplo 1) em DMF (4,0 mL) foi adicionado p-SCN-desferoxamina (p-SCN- DFO)(4,83 mg, 6,41 µmol, 3,24 eq) seguido pela adição de NMM (56 µL, 514 µmol). A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 3,5 h, metade (2,0 mL) da mistura de reação foi removida e agitada em um frasco separado (Reação A). À solução restante (Reação B) foi adicionada uma solução de TDA-DTX (ácido tiodiacético-docetaxel) (60 mg, 58,9 µmol) e PyBOP (35 mg, 67,8 µmol) em DMF (1,5 mL), seguido por mais adição de NMM (56 µL, 514 µmol). Ambas as misturas de reação foram então deixadas em agitação à temperatura ambiente durante a noite.
REAÇÃO A (CONTROLE):
[0274] Após 19 h, a mistura de reação foi concentrada in vacuo até secar, em seguida, dissolvida em MeOH (1,0 mL) e purificada por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas in vacuo, e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o composto 1a como um sólido floculante branco (65,8 mg).
[0275] HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt = 8.98 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 1.29-2.06 (m, 468H), 2.43-2.53 (m, 13H),
2.71-2.82 (m, 13H), 3.06-3.28 (m, 121H), 3.36 (s, 96H), 3.39-3.42 (m, 39H), 3.51-
4.06 (m, 5781H), 4.25-4.45 (m, 36H), 6.17 (s largo, 1H), 7.24-7.58 (m, 19H), 8.09 (s, 1H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 2,3 DFO/dendrímero; % (p/p) de DFO = 2,3%.
REAÇÃO B (TDA-DTX):
[0276] Após 24 h, a mistura de reação foi concentrada in vacuo até secar, em seguida, dissolvida em MeOH (1,0 mL) e purificada por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas in vacuo, e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o composto 1b como um sólido floculante branco (96,8 mg).
HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt = 8.43 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD- d4) δ (ppm): 1.29-1.99 (m, 371H), 3.19-3.26 (m, 77H), 3.36 (s, 96H), 3.38-3.49 (m, 149H), 3.50-3.77 (m, 5131), 3.84-3.90 (m, 35H), 4.01 (s largo, 59H), 4.27-
4.43 (m, 74H), 6.19 (s largo, 1H), 7.26-7.36 (m, 10H), 8.09 (s, 1H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 1,0 DFO/dendrímero; % (p/p) de DFO = 1,0%.
EXEMPLO 2
[0277] BHALys[Lys]32[(α-TDA)31(α-DFO)1(ε-PEG2000)32].
[0278] A uma solução agitada de BHALys[Lys]32[(α-NH2.TFA)(ε- PEG2000)32] (100 mg, 1,32 μmol) e p-SCN-deferoxamina (1,0 mg, 1,32 μmol, 1,0 equiv.) em DMF (2,5 mL) foi adicionado NMM (10 μL, 91 μmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h, tempo após o qual TDA (11 mg, 84,4 μmol) foi adicionado e o conteúdo agitado durante a noite. A mistura de reação foi concentrada in vacuo, em seguida, dissolvida em MeOH (1,0 mL) e purificada por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas in vacuo, e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o produto do título como um pó branco fofo (89,4 mg). HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt = 8.43 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 1.29-1.99 (m, 371H), 3.19-3.26 (m, 77H),
3.36 (s, 96H), 3.38-3.49 (m, 149H), 3.50-3.77 (m, 5131), 3.84-3.90 (m, 35H), 4.01 (s largo, 59H), 4.27-4.43 (m, 74H), 6.19 (s largo, 1H), 7.26-7.36 (m, 10H), 8.09 (s, 1H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 1,0 DFO/dendrímero; % (p/p) de DFO = 1,0%.
EXEMPLO 3
[0279] BHALys[Lys]32[(α-DGA-CTX)31(α-DFO)1(ε-PEG2000)32].
[0280] A uma solução agitada de BHALys[Lys]32[(α-NH2.TFA)(ε- PEG2000)32] (71,2 mg, 0,93 µmol) em DMF (1,0 mL) foi adicionado p-SCN- deferoxamina (1,0 mg, 1,33 μmol, 1,42 equiv.), Seguido pela adição de NMM (20 μL, 182 μmol). A mistura de reação turva resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h, após o que uma solução de DGA-CTX (ácido diglicólico-cabazitaxel) (56,1 mg, 58,9 μmol) e PyBOP (29,8 mg, 57,3 μmol) em DMF (2,0 mL) foi adicionado seguido por mais adição de NMM (20 μL, 182 μmol). Após 19 h, a mistura de reação foi concentrada in vacuo, em seguida, dissolvida em MeOH (1,0 mL) e purificada por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas in vacuo, e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o produto do título como um sólido floculante branco (84,6 mg). HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt = 9.19 min. 1H NMR (300 MHz,
CD3OD-d4) δ (ppm): 0.88-2.51 (m, 1283H), 2.65-2.80 (m, 55H), 3.36 (s, 96H),
3.37-3.41 (m, 103H), 3.50-4.57 (m, 5045H), 4.97-5.07 (m, 33H), 5.30-5.46 (m, 52H), 5.54-5.69 (m, 29H), 6.08-6.24 (m, 30H), 7.23-7.73 (m, 248H), 8.05-8.17 (m, 59H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 31 CTX/dendrímero e 1,0 DFO/dendrímero; % (p/p) de DFO = 0,74%.
EXEMPLO 4
[0281] (a) BHALys[Lys]32[(α-NH2)30(α-DOTA)2(ε-PEG2000)32].
[0282] (b) BHALys[Lys]32[(α-DGA-CTX)27(α-DOTA)2(ε- PEG2000)32].
[0283] A uma solução agitada de BHALys[Lys]32[(α-NH2.TFA)(ε- PEG2000)32] (301 mg, 3,97 µmol) em DMF (6,0 mL) foi adicionado p-SCN-Bn- DOTA (8,13 mg, 11,8 µmol, 2,98 eq), seguido pela adição de NMM (114 µL, 1,03 mmol). A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 4,5 h, em seguida, uma porção (2,0 mL) da solução foi removida para um frasco separado (Reação A). À solução restante (Reação B), foi adicionada uma solução de TDA-CTX (105 mg, 110,4 µmol) e PyBOP (57,0 mg, 109,5 µmol) em DMF (2 mL). Após 45 min NMM (56 µL, 514 µmol) foi adicionado e ambas as misturas de reação foram então deixadas a agitar à temperatura ambiente durante a noite.
REAÇÃO A (CONTROLE):
[0284] Após 24 h, a mistura de reação foi concentrada in vacuo até secar, depois dissolvida em MeOH (1,0 mL) e purificada por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas in vacuo, e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o composto 4a como um sólido branco (82,5 mg). 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 1.17-2.29 (m, 401H), 3.36 (s, 96H), 3.39-3.43 (m, 43H), 3.50-4.08 (m, 5564H), 4.21-4.67 (m, 84H), 6.17 (s largo, 1H), 7.18-
7.64 (m, 18H), 8.09 (s, 1H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 2,1
DOTA/dendrímero; % (p/p) de DOTA = 2,0%.
REAÇÃO B (TDA-CTX):
[0285] Após 19 h, a mistura de reação foi concentrada in vacuo até secar, dissolvida em MeOH (1,0 mL) e purificada por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas in vacuo, e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o composto 4b como um sólido branco (238 mg). LCMS (hidrofílico, TFA) Rt = 8.83 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 0.95-
2.76 (m, 1020H), 3.36 (s, 96H), 3.38-3.41 (m, 83H), 3.52-4.56 (m, 5081H), 4.99-
5.11 (m, 34H), 5.38-5.61 (m, 74H), 6.16 (s largo, 26H), 7.29-8.17 (m, 300H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 26,5 CTX/dendrímero e 2,1 DOTA/dendrímero; % (p/p) de DOTA = 1,5%.
EXEMPLO 5
[0286] BHALys[Lys]32[(α-NHAc)30(α-DOTA)2(ε-PEG2000)32].
[0287] A uma solução agitada de BHALys[Lys]32[(α-DOTA)2(α- NH2.TFA)30(ε-PEG2000)32] (63 mg, 860 µmol) em DMF (0,6 mL) foi adicionado TEA (25 µL, 228 µmol), seguido de anidrido acético (41 µL, 430 µmol). A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi concentrada in vacuo, dissolvida em MeOH (1,0 mL) e purificada por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas in vacuo, e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o composto 4c como um sólido branco (52,2 mg). O sólido foi dissolvido em água MQ (50 mL) e purificado por ultrafiltração (mínimo) em água. Após a coleta de 11 DV do permeado, o retentado foi concentrado, filtrado (filtro acrodisc de 0,22 µm) e depois liofilizado para dar o composto do título (52,2 mg). HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt = 8.56 min. 1H NMR (300 MHz, D2O) δ (ppm): 1.16-1.90 (m, 359H),
2.02 (s largo, 101H), 3.01-3.31 (m, 133H), 3.38 (s, 96H), 3.45-3.48 (m, 43H),
3.52-4.40 (m, 5267H), 6.09 (s largo, 1H), 7.13-7.54 (m, 17H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 1,8 DOTA/dendrímero; % (p/p) de DOTA = 1,7%.
EXEMPLO 6
[0288] BHALys[Lys]32[α-DGA-C20-SN38]28[α-DFO]2[ε-PEG2000]32.
[0289] A uma solução agitada de BHALys[Lys]32[α-NH2.TFA]32[ε- PEG2000]32 (455 mg, 6,00 μmol) e NMM (169 μL, 1,54 mmol) em DMF (3 mL) foi adicionado p-SCN-Bn-Deferoxamina (13,7 mg, 18,2 μmol). A suspensão foi deixada a agitar à temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio durante 4 h 40 min. Após este tempo, uma porção da mistura de reação turva (1,75 mL) foi adicionada a uma solução agitada de DGA-C20-SN-38 (82,4 mg, 162 μmol) e PyBOP (85,2 mg, 164 μmol) em DMF (0,5 mL) A mistura resultante foi diluída com DMF (1,0 mL) e agitada durante a noite sob uma atmosfera de nitrogênio. Após 16 horas, os voláteis foram removidos in vacuo, o resíduo dissolvido em MeOH (1,0 mL) e filtrado (filtro acrodisc de 0,7 μm, seguido por filtros acrodisc de 0,45 μm e 0,2 μm) antes da purificação por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas in vacuo, e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o composto do título como um sólido amarelo (243 mg).
HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt = 8.61 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 0.32-2.53 (m, 622H), 2.53-3.26 (m, 182H), 3.36 (s, 97H),
3.37-4.04 (m, 5,530H), 4.04-4.73 (m, 145H), 4.92-6.42 (m, 68H), 6.81-8.19 (m, 123H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 27,5 SN-38/dendrímero e 1,7 DFO/dendrímero; % (p/p) de DFO = 1,5%.
EXEMPLO 7
[0290] (a) BHALys[Lys]32[α-NH2]30[α-DOTA]2[ε-PEG2000]32.
[0291] (b) BHALys[Lys]32[α-DGA-C20-SN38]30[α-DOTA]2[ε- PEG2000]32.
[0292] A uma solução agitada de BHALys[Lys]32[α-NH2.TFA]32[ε- PEG2000]32 (456 mg, 6,00 μmol) e NMM (169 μL, 1,54 mmol) em DMF (9 mL) foi adicionado p-SCN-Bn-DOTA (12,6 mg, 18,3 μmol). A mistura foi deixada a agitar à temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio por 3,5 h, em seguida, uma porção (3,75 mL) da mistura de reação foi removida para um frasco separado (Reação A). A solução restante foi adicionada a uma solução agitada de DGA-C20-SN-38 (82,7 mg, 163 μmol) e PyBOP (85,3 mg, 164 μmol) em DMF (1,75 mL) (Reação B). Ambas as misturas de reação foram agitadas durante a noite.
REAÇÃO A:
[0293] Após 16 horas, a mistura de reação foi concentrada in vacuo até secar, depois dissolvida em MeOH (1,0 mL) e purificada por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas in vacuo, e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o composto 7a como um sólido esbranquiçado (175 mg).
HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt = 8.58 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 0.78-2.41 (m, 388H), 2.64-3.29 (m, 122H), 3.36 (s, 95H),
3.38-4.19 (m, 5,546H), 4.19-4.59 (m, 37H), 6.98-7.82 (m, 18H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 2,4 DOTA/dendrímero; % (p/p) de DOTA = 2,2%.
REAÇÃO B:
[0294] Após 16 horas, a mistura de reação foi concentrada in vacuo até secar, depois dissolvida em MeOH (1,0 mL) e purificada por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas in vacuo, e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o composto 7b como um sólido amarelo (269 mg). HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt = 8.59 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 0.28-2.51 (m, 580H), 2.53-3.25 (m, 178H), 3.36 (s, 98H), 3.37-4.06 (m,
5,546H), 4.07-4.69 (m, 128H), 4.91-6.10 (m, 66H), 6.71-8.26 (m, 167H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 35,3 SN-38/dendrímero e 2,4 DOTA/dendrímero; % (p/p) de DOTA = 1,8%.
EXEMPLO 8
[0295] (a) BHALys[Lys]32[(α-NOTA)2(α-NH2)30(ε-PEG1100)32].
[0296] (b) BHALys[Lys]32[(α-NOTA)2(α-NHAc)30(ε-PEG1100)32].
[0297] Para uma solução agitada de BHALys[Lys]32[(α- NH2.TFA)(ε-PEG2000)32] (60 mg, 807 nmol) e p-SCN-Bn-NOTA (1,0 mg, 1,61 µmol, 2,0 eq) em DMF (0,5 mL) foi adicionado NMM (10 µL, 91,0 µmol). A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h, então metade (0,25 mL) da mistura de reação foi removida e concentrada in vacuo (Reação A). A solução restante (Reação B) foi tratada com anidrido acético (24 µL, 258 µmol) e deixada em agitação durante a noite.
REAÇÃO A:
[0298] O material bruto foi absorvido em água MQ (5,0 mL), em seguida, dividido uniformemente em duas colunas de dessalinização PD-10. O filtrado recolhido foi combinado e liofilizado para dar o composto 8a como um pó branco fofo (28,1 mg). HPLC (hidrofílico, TFA) Rt = 8.18 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 1.17-2.04 (m, 392H), 3.12-3.28 (m, 97H), 3.36 (s, 96H), 3.39-3.42 (m, 39H), 3.51-3.80 (m, 5584H), 3.86-3.89 (m, 35H), 3.97-4.06 (m, 60H), 4.22-4.47 (m, 34H), 6.18 (s largo, 1H), 7.20-7.60 (m, 20H), 8.08 (s, 1H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 2,5 NOTA/dendrímero; % (p/p) de NOTA = 1,9%.
REAÇÃO B:
[0299] Após 17 h, a mistura de reação foi concentrada in vacuo, em seguida, retomada em água MQ (5,0 mL) e dividida uniformemente em duas colunas de dessalinização PD-10. O filtrado recolhido foi combinado e liofilizado para dar o composto 8b como um pó branco fofo (32,5 mg). HPLC
(hidrofílico, TFA) Rt = 8.32 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 1.17-
1.89 (m, 372H), 2.00 (s largo, 97H), 3.18-3.29 (m, 86H), 3.36 (s, 96H), 3.38-
3.42 (m, 38H), 3.51-3.77 (m, 5535H), 3.84-3.90 (m, 37H), 3.97-4.07 (m, 62H),
4.20-4.49 (m, 62H), 6.17 (s largo, 1H), 7.16-7.61 (m, 18H), 8.07 (s largo, 1H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 2,0 NOTA/dendrímero; % (p/p) de NOTA = 1,5%.
EXEMPLO 9
[0300] BHALys[Lys]32[(α-NOTA)3(α-TDA-CTX)28(ε-PEG2000)32].
[0301] Para uma solução agitada de BHALys[Lys]32[(α- NH2.TFA)(ε-PEG2000)32] (51 mg, 686 nmol) e p-SCN-Bn-NOTA (1,3 mg, 2,32 µmol, 3,4 eq) em DMF (0,5 mL) foi adicionado NMM (14 µL, 132 µmol). A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h, após o que uma solução de TDA-CTX (43 mg, 43,9 µmol) e PyBOP (23 mg, 43,9 µmol) em DMF (1,0 mL) foi adicionada. A mistura reacional resultante foi deixada a agitar durante a noite e depois concentrada in vacuo. O conteúdo foi então dissolvido em MeOH (1,0 mL) e purificado por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas in vacuo, e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o composto do título como um pó branco fofo (61,0 mg). HPLC (hidrofílico, TFA) Rt = 8.87 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 0.90-2.43 (m, 877H), 2.64-3.19 (m, 151H), 3.36 (s, 96H), 3.38-3.41 (m, 84H), 3.50-4.59 (m, 4808H), 4.96-5.13 (m, 29H), 5.31-5.61 (m, 64H), 6.16 (s largo, 24H), 7.29-8.13 (m, 296H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 28 CTX/dendrímero e 3,0 NOTA/dendrímero; % (p/p) de NOTA = 1,7%.
EXEMPLO 10
[0302] (a) BHALys[Lys]32[(α-NOTA)2(α-NH2)30(ε-PEG570)32].
[0303] (b) BHALys[Lys]32[(α-NOTA)2(α-NHAc)30(ε-PEG570)32].
[0304] Para uma solução agitada de BHALys[Lys(α-NH2.TFA)(ε-
PEG570)]32 (60 mg, 1,99 µmol) e p-SCN-Bn-NOTA (2,2 mg, 3,98 µmol, 2,0 eq) em DMF (0,5 mL) foi adicionado NMM (10 µL, 91,0 µmol). A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Após este tempo, metade (0,25 mL) da mistura de reação foi removida e concentrada in vacuo (Reação A). A solução restante (Reação B) foi tratada com anidrido acético (60 µL, 636 µmol) e deixada em agitação durante a noite.
REAÇÃO A:
[0305] O material bruto foi absorvido em água MQ (5,0 mL), em seguida, dividido uniformemente em duas colunas de dessalinização PD-10. O filtrado recolhido foi combinado e liofilizado para dar o composto 10a como um sólido pegajoso amarelo pálido (22,4 mg). HPLC (hidrofílico, TFA) Rt = 7.51 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 1.29-2.04 (m, 431H), 2.41-2.52 (m, 89H), 3.13-3.26 (m, 119H), 3.36 (s, 96H), 3.39-3.44 (m, 24H), 3.52-4.50 (m, 1651H), 6.18 (s largo, 1H), 7.18-7.63 (m, 19H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 2,3 NOTA/dendrímero; % (p/p) de NOTA = 4,6%.
REAÇÃO B:
[0306] A mistura de reação foi concentrada in vacuo, em seguida, retomada em água MQ (5,0 mL) e dividida uniformemente em duas colunas de dessalinização PD-10. O filtrado recolhido foi combinado e liofilizado para dar o composto 10b como um sólido pegajoso amarelo pálido (26,9 mg). HPLC (hidrofílico, TFA) Rt = 8.10 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 1.29-
2.05 (m, 546H), 2.40-2.52 (m, 85H), 3.12-3.26 (m, 137H), 3.36 (s, 96H), 3.39-
3.44 (m, 22H), 3.53-4.00 (m, 1621H), 4.16-4.47 (m, 103H), 6.18 (s largo, 1H),
7.22-7.56 (m, 21H), 7.82-8.14 (m, 27H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 2,3 NOTA/dendrímero; % (p/p) de NOTA = 4,4%.
EXEMPLO 11
[0307] BHALys[Lys]32[(α-CHX-A-DTPA)10(ε-PEG2000)32].
[0308] Uma mistura de BHALys[Lys(α-NH2.TFA)(ε-PEG2000)]32 (25 mg, 332 nmol) e CHX-A-DTPA (9,7 mg, 13,8 µmol, 41,5 eq) em tampão de formato de amônio (100 mM, pH 9, 1,0 mL) foi agitado durante a noite à temperatura ambiente. A mistura de reação foi então diluída com água MQ (1,5 mL) e passada através de uma coluna de dessalinização PD-10. O filtrado recolhido foi combinado e liofilizado para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (32,5 mg). HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt = 8.53 min. 1H NMR (300 MHz, D2O) δ (ppm): 0.92-2.50 (m, 420H), 3.01-3.34 (m, 136H),
3.40 (s, 96H), 3.54-4.45 (m, 4906H), 6.10 (s largo, 1H), 7.15-7.82 (m, 51H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 10 DTPA/dendrímero; % (p/p) de DTPA = 7,7%.
EXEMPLO 12
[0309] BHALys[Lys]32[(α-CHX-A-DTPA)3(α-TDA-DTX)26(ε- PEG2000)32].
[0310] A uma solução agitada de BHALys[Lys(α-NH2.TFA)(ε- PEG2000)]32 (109 mg, 1,45 μmol) em DMF (2,0 mL) foi adicionado DIPEA (33 µL, 189 µmol). Após 5 a 10 min, CHX-A-DTPA (3 mg, 4,26 µmol, 2,9 eq) foi adicionado e a mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Após este tempo, a mistura de reação foi então adicionada a uma solução agitada de TDA-DTX (67 mg, 70,8 µmol), PyBOP (31 mg, 60,2 µmol) em DMF (1,0 mL) e o conteúdo agitado durante a noite. A mistura reacional resultante foi deixada a agitar durante a noite e depois concentrada in vacuo. O material bruto foi dissolvido em MeOH (1,0 mL) e purificado por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas in vacuo, e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o composto do título como um sólido branco (123 mg).
HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt = 6.51 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 0.87-2.55 (m, 1380H), 3.06-3.25 (m, 89H), 3.36 (s, 96H),
3.39-3.42 (m, 49H), 3.51-4.05 (m, 4965H), 5.31-5.64 (m, 120H), 6.03-6.23 (m,
34H), 7.26-7.67 (m, 224H), 8.06-8.18 (m, 57H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 26 DTX/dendrímero e 3,0 CHX-A-DTPA/dendrímero; % (p/p) de CHX-A-DTPA = 1,8%.
EXEMPLO 13
[0311] BHALys[Lys]32[(α-CHX-A-DTPA)2(α-NH2)30(ε-PEG2600)32].
REAÇÃO A:
[0312] Uma mistura de BHALys[Lys(α-NH2.TFA)(ε-PEG2600)]32 (50 mg, 532 nmol) e CHX-A-DTPA (1,0 mg, 1,45 µmol, 2,7 eq) em tampão de formato de amônio (100 mM, pH 9, 1,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi então diluída com água MQ para 5 mL, em seguida, dividida uniformemente em duas colunas de dessalinização PD-10. O filtrado recolhido foi combinado e liofilizado para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (47,2 mg). HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt =
6.0 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 1.04-2.11 (m, 381H), 3.12-
3.28 (m, 79H), 3.36 (s, 96H), 3.38-3.42 (m, 57H), 3.47-4.46 (m, 6823H), 6.17 (s largo, 1H), 7.24-7.64 (m, 21H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 2,7 CHX-A-DTPA/dendrímero; % (p/p) de CHX-A-DTPA = 1,7%.
REAÇÃO B:
[0313] A uma solução agitada de BHALys[Lys(α-NH2.TFA)(ε- PEG2600)]32 (50 mg, 532 nmol) em DMF (0,5 mL) foi adicionado DIPEA (13 µL, 74,6 µmol). Após 5 a 10 min, CHX-A-DTPA (1,0 mg, 1,45 µmol, 2,7 eq) foi adicionado e a mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi concentrada in vacuo, diluída com água MQ (5 mL) e, em seguida, dividida uniformemente em duas colunas de dessalinização PD-10. O filtrado recolhido foi combinado e liofilizado para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (41,9 mg). HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt = 6.0 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 1.02-
2.25 (m, 369H), 3.12-3.28 (m, 63H), 3.36 (s, 96H), 3.38-3.42 (m, 53H), 3.51-
4.50 (m, 6736H), 6.17 (s largo, 1H), 7.22-7.57 (m, 18H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 2,0 CHX-A-DTPA/dendrímero; % (p/p) de CHX-A- DTPA = 1,3%.
EXEMPLO 14
[0314] BHALys[Lys]32[(α-CHX-A-DTPA)2(α-TDA-DTX)21(ε- PEG2600)32].
[0315] A uma solução agitada de BHALys[Lys]32[(α-CHX-A- DTPA)2(α-NH2)30(ε-PEG2600)]32 (69 mg, 723 nmol) em DMF (2,0 mL) foi adicionado DIPEA (15 µL, 86,1 µmol). Após 5 min, a mistura de reação foi adicionada a uma solução agitada de TDA-DTX (31 mg, 33,0 µmol), PyBOP (16 mg, 30,7 µmol) em DMF (1,0 mL) e o conteúdo agitado à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi concentrada in vacuo, dissolvida em MeOH (1,0 mL) e purificada por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas, concentradas in vacuo e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o composto do título como um sólido branco (60,4 mg). 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 0.89-2.65 (m, 1074H), 3.05-3.25 (m, 88H), 3.36 (s, 96H), 3.39-3.42 (m, 55H), 3.52-3.81 (m, 6451H), 3.86-3.90 (m, 60H), 3.94-4.06 (m, 56H), 5.29-5.78 (m, 90H), 5.99-6.30 (m, 20H), 7.26-7.70 (m, 188H), 8.11-8.13 (m, 45H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 21 DTX/dendrímero e 2,0 CHX-A- DTPA/dendrímero; % (p/p) de CHX-A-DTPA = 1,1%.
EXEMPLO 15
[0316] BHALys[Lys]32[(α-CHX-A-DTPA)2(α-NH2)30(ε-PEG2000)32].
[0317] Uma mistura de BHALys[Lys(α-NH2.TFA)(ε-PEG2000)]32 (109 mg, 1,45 µmol) e CHX-A-DTPA (2,0 mg, 2,90 µmol, 2,0 eq) em tampão de formato de amônio (100 mM, pH 9, 2,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi então diluída com água MQ para 10 mL, em seguida, dividida uniformemente em quatro colunas de dessalinização PD-
10. O filtrado recolhido foi combinado e liofilizado para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (112 mg). HPLC (hidrofílico, formato de amônio) Rt = 8.55 min. 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 1.15-2.12 (m, 419H), 3.17-3.28 (m, 84H), 3.36 (s, 96H), 3.38-3.42 (m, 43H), 3.47-3.80 (m, 5460H), 3.84-3.89 (m, 46H), 4.00-4.07 (m, 67H), 4.24-4.48 (m, 35H), 6.18 (s largo, 1H), 7.21-7.51 (m, 20H), 8.07 (s largo, 2H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 2,5 CHX-A-DTPA/dendrímero; % (p/p) de CHX-A-DTPA = 2,0%.
EXEMPLO 16
[0318] BHALys[Lys]32[(α-DTPA)2(α-NH2)30(ε-PEG2600)32].
[0319] A uma solução agitada de BHALys[Lys(α-NH2.TFA)(ε- PEG2600)]32 (50 mg, 532 nmol) em DMF (0,5 mL) foi adicionado DIPEA (13 µL, 74,6 µmol). Após 5 a 10 min, foi adicionado p-SCN-Bn-DTPA (1,0 mg, 1,54 µmol, 2,9 eq) e a mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. A mistura de reação foi concentrada in vacuo, diluída com água MQ (5 mL) e, em seguida, dividida uniformemente em duas colunas de dessalinização PD-10. O filtrado recolhido foi combinado e liofilizado para dar o composto em epígrafe como um sólido branco (27,0 mg). 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 1.08-2.23 (m, 351H), 3.17-3.28 (m, 72H), 3.36 (s, 96H), 3.38-3.42 (m, 55H), 3.50-3.80 (m, 7032H), 3.85-3.89 (m, 58H), 3.96-4.05 (m, 68H), 4.23-4.52 (m, 35H), 6.19 (s largo, 1H), 7.20-7.57 (m, 16H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 1,5 DTPA/dendrímero; % (p/p) de DTPA = 1,1%.
EXEMPLO 17
[0320] BHALys[Lys]32[(α-DTPA)2(α-TDA-DTX)26(ε-PEG2600)32].
[0321] A uma solução agitada de BHALys[Lys]32[(α-DTPA)2(α- NH2)30(ε-PEG2600)]32 (15,3 mg, 161 nmol) em DMF (0,5 mL) foi adicionado DIPEA (4 µL, 20,6 µmol). Após 5 min, a mistura de reação foi adicionada a uma solução agitada de TDA-DTX (1,3 mg, 1,38 µmol), PyBOP (3,5 mg, 6,69 µmol) em DMF (1,0 mL) e o conteúdo agitado à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi concentrada in vacuo, dissolvida em MeOH (1,0 mL) e purificada por SEC. As frações contendo o produto foram combinadas, concentradas in vacuo e o resíduo resultante dissolvido em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para dar o composto do título como um sólido branco fofo (8,3 mg). 1H NMR (300 MHz, CD3OD-d4) δ (ppm): 0.99-2.53 (m, 770H), 3.13-3.26 (m, 50H), 3.36 (s, 96H), 3.38-3.41 (m, 56H), 3.47-3.77 (m, 6440H), 3.84-3.88 (m, 72H), 3.95-4.07 (m, 65H), 4.13-4.49 (m, 102H), 5.22-
5.47 (m, 50H), 5.57-5.70 (m, 22H), 6.06-6.21 (m, 19H), 7.27-8.15 (m, 280H). A análise de 1H NMR sugere aproximadamente 26 DTX/dendrímero e 1,5 DTPA/dendrímero; % (p/p) de DTPA = 0,85%.
EXEMPLO 18
[0322] BHA-[Lys]8[(α-(MeTzPh-PEG4-PEG24)1(α-NH2)7(ε- NHPEG1100)8], G3, Composto18.
[0323] Uma solução agitada de BHA[Lys(NH2.TFA)(NHPEG1100)]8 (100 mg, 0,00786 mmol, 1,0 eq) em DMF (300 µL) foi preparada à temperatura ambiente. A isto foi adicionado MeTzPh-PEG4-PEG24-CO2H (16 mg, 0,01 mmol, 1,3 eq), PyBOP (8 mg, 0,013 mmol, 1,6 eq) e DMF (200 µL). A mistura de reação foi agitada durante 3 min antes da adição de NMM (40 mg, 50 µL, 0,38 mmol, 48 eq). O conteúdo foi protegido da luz e agitado durante a noite à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com água MQ e liofilizada durante a noite. O material liofilizado foi retomado em MeOH (1 mL) e purificado por SEC (400 gotas/tubo, MeOH sephadex LH20, 35 gotas/min). As frações contendo o produto foram verificadas por HPLC e coletadas em 2 frações diferentes. Cada fração foi concentrada sob pressão reduzida, em seguida, o resíduo resultante foi retomado em água MQ, filtrado (filtro acrodisc de 0,45 µm) e liofilizado para produzir o produto do título como um sólido rosa
(69 mg, 66%).
[0324] Gradiente de HPLC (C8 XBridge, 3 x 100 mm): 5% de ACN/H2O (0-1 min), 5-80% de ACN (1-7 min), 80% de ACN (7-12 min), 80-5% de ACN (12-13 min), 5% de ACN (13-15 min), 214 nm, 0.4 mL/min, Rf (min) =
8.4 (pico alto). 1HNMR (300 MHz, D2O) δ (ppm): 1.00-2.00 (m, 90H), 2.51 (t, 3H), 2.60 (s alto, 3H), 3.00-3.12 (m, 6H), 3.12-3.35 (s alto, 27H), 3.35-3.45 (m, 26H), 3.45-4.15 (m, 937H), 4.15-4.45 (m, 12H), 6.12 (s, 1H), 7.15-7.50 (m, 12H), 8.40-8.50 (m, 2H).
EXEMPLO 19
[0325] BHA-[Lys]8[(α-MeTzPh-PEG4PEG24)1(α-DFO)2(Glu-VC- PAB-MMAE)5(ε-NHPEG1100)8], Composto 19.
[0326] Uma solução agitada de p-SCN-Deferoxamina (2,0 mg, 2,66 μmol) em DMSO (100 μL) foi preparada à temperatura ambiente. A isto foi adicionado BHA-[Lys]8[(α-(MeTzPh-PEG4-PEG24)1(α-NH2)7(ε-NHPEG1100)8] (composto18) (17,0 mg, 1,27 μmol) em DMF (200 μL). A mistura de reação resultante foi agitada durante 3 min antes da adição de NMM (10 μL, 91,0 μmol). A solução resultante foi protegida da luz e agitada por 4 h à temperatura ambiente. PyBOP (7,0 mg, 13,5 µ mol) foi adicionado e após 5 min a mistura de reação foi adicionada a HO-Glu-VC-PAB-MMAE puro (9,17 mg, 7,41 μmol). A mistura de reação resultante foi deixada em repouso durante a noite. A mistura de reação foi diluída com PBS tampão (4,5 mL) e dividido em 4 filtros centrífugos Amicon Ultra (10K MWCO) e os filtros centrifugados (14K rcf, 15 min). O retentado foi diafiltrado contra PBS (400 μL, 14K rcf, 15 min x 10 vezes). O retido foi combinado para dar uma solução de cor rosa, concentração aproximada de 16 mg em 2 mL. Gradiente de HPLC (C8 XBridge, 3 x 100 mm): 5% de ACN/H2O (0-1 min), 5-80% de ACN (1-7 min), 80% de ACN (7-12 min), 80-5% de ACN (12-13 min), 5% de ACN (13-15 min), 214 nm, 0.4 mL/min, Rt (min) = 9.3-9.7 min (pico alto).
EXEMPLO 20
[0327] MeTzPh-PEG4PEG24-CO[N(PN)2][Lys]8[(α-DFO)2(α-Glu- VC-PAB-MMAE)6(ε-NHPEG1100)8], Composto 20.
[0328] Uma solução agitada de p-SCN-Deferoxamina (2,1 mg, 2,79 μmol) em DMSO (100 μL) foi preparada à temperatura ambiente. A isto foi adicionado MeTzPh-PEG4PEG24-CO[N(PN)2][Lys(α-NH2.HCl)(ε-NHPEG1100)]8 (conforme descrito em WO 2008/017125) (17,0 mg, 1,35 μmol) em DMF (200 μL). A mistura de reação resultante foi agitada durante 3 min antes da adição de NMM (10 μL, 91,0 μmol). A solução resultante foi protegida da luz e agitada durante 4 h à temperatura ambiente. PyBOP (7,0 mg, 13,5 mol) foi adicionado e após 5 min a mistura de reação foi adicionada a HO-Glu-VC-PAB-MMAE puro (9,76 mg, 7,89 μmol). A mistura de reação resultante foi deixada em repouso durante a noite. A mistura de reação foi diluída com tampão PBS (4,5 mL) e dividida em 4 filtros centrífugos Amicon Ultra (10K MWCO) e os filtros centrifugados (14K rcf, 15 min). O retentado foi diafiltrado contra PBS (400 μL, 14K rcf, 15 min x 10 vezes). O retentado foi combinado para dar uma solução de cor rosa, concentração aproximada de 16 mg em 2 mL. Gradiente de HPLC (C8 XBridge, 3 x 100 mm): 5% de ACN/H2O (0-1 min), 5-80% de ACN (1-7 min), 80% de ACN (7-12 min), 80-5% de ACN (12-13 min), 5% de ACN (13-15 min), 214 nm, 0.4 mL/min, Rt (min) = 8.7-9.8 min (pico alto).
TÉCNICAS DE PURIFICAÇÃO PARA DENDRÍMEROS ANTES DA INCORPORAÇÃO DE RADIONUCLÍDEO
[0329] A cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) foi realizada usando Sephadex LH-20 (altura da coluna = 370 mm, diâmetro = 25 mm), eluente = eluição por gravidade MeOH, taxa de gotejamento ~ 1 gota por segundo, 400 gotas por fração. As frações contendo o produto coraram positivamente com coloração BaCl2/I2.
[0330] Método de HPLC (hidrofílico, formato de amônio): coluna
XBridge C8 (3,5 µm, 3 x 100 mm). As amostras foram eluídas a um caudal de 0,4 mL/min (tampão de formato de amônio 100 mM) como se segue: 5 a 80% de ACN/água (1-7 min); 80% de ACN/água (7-12 min); 80 a 5% de ACN/água (12-13 min); 5% de ACN/água (13-15 min).
[0331] Método LCMS (hidrofílico, TFA): coluna XBridge C18 (3,5 µm, 3 x 100 mm). As amostras foram eluídas a uma taxa de fluxo de 0,4 mL/min (tampão de 0,1% de TFA) como se segue: 20 a 90% de ACN/água (1- 10 min); 90% de ACN/água (10-11 min); 90 a 20% de ACN/água (11-12 min); 20% de ACN/água (12-15 min).
PROCEDIMENTO GERAL PARA COMPLEXAR GD3+
[0332] A uma solução agitada do dendrímero (30 mg) em tampão de acetato de amônio pH 5,5 (500 µL) foi adicionada uma solução de GdCl 3 0,1 M (pH 7, 50 equivalentes de Gd3+). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16h e, em seguida, concentrada até um volume de ~ 100 µL por centrifugação à temperatura ambiente (6,5 min a 14k rcf) usando colunas Amicon Ultra spin (MWCO = 10 kDa). O concentrado foi diluído com água (400 µL) e novamente concentrado até um volume de 100 µL por centrifugação. Este procedimento foi repetido com água (x2), DTPA 50 mM (x2) e água (x3). O retentado foi então transferido para um frasco e liofilizado para dar o produto desejado.
LISTA DE CONJUGADOS DE DENDRÍMEROS SINTETIZADOS Comp. MW Grupo de Metal Medicamento Detalhes do Composto # (kDa) Complexação radioativo 1a 74,3 DFO N/D BHALys[Lys]32[(α-NH2)30(α- DFO)2(ε-PEG2000)32] 1b 101,6 DFO 89Zr DTX BHALys[Lys]32[(α-TDA- DTX)30(α-DFO)2(ε-PEG2000)32] 2 76,4 DFO N/D BHALys[Lys]32[(α-TDA)31(α-
DFO)1(ε-PEG2000)32]
3 102,2 DFO 89Zr CTX BHALys[Lys]32[(α-DGA-
CTX)31(α-DFO)1(ε-PEG2000)32]
4a 73,5 DOTA N/D BHALys[Lys]32[(α-NH2)30(α-
DOTA)2(ε-PEG2000)32]
4b 98,3 DOTA 177Lu, Gd3+ CTX BHALys[Lys]32[(α-DGA-
CTX)27(α-DOTA)2(ε-PEG2000)32]
5 74,7 DOTA 177Lu, Gd3+ N/D BHALys[Lys]32[(α-NHAc)30(α-
DOTA)2(ε-PEG2000)32]
6 86,9 DFO SN38 BHALys[Lys]32[α-DGA-C20-
SN38]28[α-DFO]2[ε-PEG2000]32
7a 73,8 DOTA N/D BHALys[Lys]32[α-NH2]30[α-
DOTA]2[ε-PEG2000]32
7b 91,1 DOTA Gd3+ SN38 BHALys[Lys]32[α-DGA-C20-
SN38]30[α-DOTA]2[ε-PEG2000]32
8a 72,1 NOTA N/D [BHALys][Lys]32[(α-NOTA)2(α-
NH2)30(ε-PEG1100)32]
8b 73,0 NOTA N/D [BHALys][Lys]32[(α-NOTA)2(α-
NHAc)30(ε-PEG1100)32]
9 98,9 NOTA CTX [BHALys][Lys]32[(α-NOTA)3(α-
TDA-CTX)28(ε-PEG2000)32]
10a 27,8 NOTA N/D [BHALys][Lys]32[(α-NOTA)2(α-
NH2)30(ε-PEG570)32]
10b 29,1 NOTA N/D [BHALys][Lys]32[(α-NOTA)2(α-
NHAc)30(ε-PEG570)32]
11 77,6 CHX-A-DTPA N/D [BHALys][Lys]32[(α-CHX-A-
DTPA)10(ε-PEG2000)32]
12 97,4 CHX-A-DTPA DTX BHALys[Lys]32[(α-CHX-A-
DTPA)3(α-TDA-DTX)26(ε-
PEG2000)32]
13 92,0 CHX-A-DTPA N/D BHALys[Lys]32[(α-CHX-A-
DTPA)2(α-NH2)30(ε-PEG2600)32]
14 110,9 CHX-A-DTPA DTX [BHALys][Lys]32[(α-(CHX-A-
DTPA)2(α-TDA-DTX)21(ε-
PEG2600)32]
15 73,2 CHX-A-DTPA N/D BHALys[Lys]32[(α-CHX-A-
DTPA)2(α-NH2)30(ε-PEG2000)32]
16 91,3 DTPA N/D [BHALys][Lys]32[(α-DTPA)2(α-
NH2)30(ε-PEG2600)32]
17 115,3 DTPA DTX [BHALys][Lys]32[(α-DTPA)2(α-
TDA-DTX)26 (ε-PEG2600)32]
18 N/D BHA-[Lys]8[(α-(MeTzPh-PEG4-
PEG24)1(α-NH2)7(ε-
NHPEG1100)8]
19 DFO MMAE BHA-[Lys]8 [(α-MeTzPh-
PEG4PEG24)1(α-DFO)2(α-Glu-
VC-PAB-MMAE)5 (ε-
NHPEG1100)8]
20 DFO MMAE MeTzPh-PEG4PEG24-
CO[N(PN)2][Lys]8 [(α-DFO)2(α-
Glu-VC-PAB-MMAE)6(ε-
NHPEG1100)8]
P ROCEDIMENTO G ERAL PARA RADIOMARCAÇÃO COM CU-64 E ANÁLISE
RADIOTLC DE DENDRÍMEROS
[0333] A uma solução de uma amostra de dendrímero contendo NOTA em tampão de acetato de amônio 0,1 M (pH 5,5), foi adicionada uma solução de 64 Cu(OAc) 2 (50 μL, 70 MBq) e a amostra foi agitada em temperatura ambiente por 1 h. As amostras foram então trocadas por tampão para solução salina tamponada com fosfato usando colunas de dessalinização Zeba Spin (7 kDa MWCO, Thermo Fisher Scientific). Uma alíquota da mistura de reação foi removida, adicionada a um grande excesso de EDTA (excesso molar de 1000: 1) e incubada por 15 min.
Amostras de 1 μL de cada solução foram retiradas e colocadas em papel de cromatografia em camada fina (papel de cromatografia de microfibra de vidro Agilent iTLC-SG impregnado com sílica gel) e corridas com ácido dietilenotriaminopentaacético (DTPA) 50 mM como eluente. Os experimentos de controle foram conduzidos para monitorar o comportamento de eluição de 64 Cu não ligado para controle de qualidade.
As placas foram então fotografadas em um sistema de imagem Bruker In vivo MS FX Pro usando uma tela de fósforo radioisotópica. Amostras com pureza radioquímica (RCP) superior a 95% foram usadas para experimentos de imagem.
E XEMPLO 19 E STUDO DE IMAGEM DE TUMOR COM DENDRÍMEROS CONTENDO RADIONUCLÍDEOS -
CÂNCER DE PRÓSTATA
[0334] A acumulação de dois construtos de dendrímero diferentes em dois modelos de xenoenxerto murino diferentes de câncer de próstata (linhas de células DU145 e PC3) foi investigada. Os dois construtos diferentes foram os compostos 1b e 3 que são pré-conjugados com DFO, que foram marcados com 89Zr para estudos de imagem subsequentes. A biodistribuição foi medida por PET-CT até 9 dias em dois xenoenxertos de tumor diferentes e, em seguida, validada por cintilação gama ex vivo de órgãos excisados no dia 9.
[0335] Os dendrímeros foram marcados e purificados, validados por radioTLC antes da injeção nos animais. A imagem foi conduzida em um grupo de n = 4 camundongos para cada linha celular e cada dendrímero. A saúde padrão dos camundongos foi monitorada por planilha de pontuação e peso do camundongo ao longo do período completo do estudo.
MARCAÇÃO RADIOATIVA COM ZR-89 E ANÁLISE DE RADIOTLC DE DENDRÍMEROS
[0336] 91 µL de oxalato de Zr-89 em ácido oxálico 1 M (Perkin Elmer) foram diluídos com 78 µL de Na 2CO 3 1 M para neutralizar o pH. Os dendrímeros 1b e 3 foram preparados em HEPES 0,5 M (pH 7,5). 33 µL de estoque de 89 Zr neutralizado (aproximadamente 15 MBq) foram adicionados a alíquotas de cada dendrímero (146 µg) para dar 100 vezes o excesso do dendrímero para Zr-89 e a marcação foi deixada prosseguir à temperatura ambiente por 1 h. As amostras foram então trocadas por tampão para solução salina tamponada com fosfato usando colunas de dessalinização Zeba Spin (7 kDa MWCO, Thermo Fisher Scientific).
Amostras de 1 µL de cada solução foram retiradas e colocadas em papel de cromatografia de camada fina (papel de cromatografia de microfibra de vidro Agilent iTLC-SG impregnado com sílica gel) e corridas com ácido dietilenotriaminopentaacético (DTPA) 50 mM como eluente. Os experimentos de controle foram conduzidos para monitorar o comportamento de eluição do Zr-89 não ligado para controle de qualidade.
As placas foram então fotografadas em um sistema de imagem Bruker In vivo MA FX Pro usando uma tela de fósforo radioisotópica.
[0337] Após a incubação com um excesso de 500 vezes de dendrímero, o dendrímero 1b foi deixado rotular por 1 hora e depois lavado com um excesso de 1000 vezes de DTPA. Após a purificação por centrifugação, uma pureza máxima de aproximadamente 90% foi alcançada (TLC mostrado na Figura 1).
ANIMAIS
[0338] Camundongos nus Balb/c machos saudáveis (~ 20 g) a partir de 8 semanas de idade foram obtidos do ARC e usados para este estudo. Os camundongos foram importados para a instalação de detenção de animais e monitorados por 1 semana antes do estudo, a fim de se aclimatar ao ambiente antes da injeção de células. Todos os animais tiveram acesso livre a comida e água antes e durante os experimentos de imagem que foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal.
I NICIAÇÃO E CRESCIMENTO DO TUMOR
[0339] Todos os camundongos foram adquiridos com 8 semanas de idade, mas foram injetados em momentos ligeiramente diferentes para dar tumores comparáveis no momento da imagem. I sso foi com base na experiência anterior com esses modelos e taxas de crescimento.
[0340] 5 x 106 células DU-145 (em 50 µL de solução salina) foram injetadas (agulha 27G) no flanco esquerdo de camundongos nus Balb/c machos de 9 semanas de idade. Os tumores foram deixados crescer por 4 semanas antes da injeção de compostos de imagem.
[0341] 1 x 10 6 células PC3 (em 50 µL de solução salina) foram injetadas (agulha 27G) no flanco esquerdo de camundongos nus Balb/c machos com 11 semanas de idade. Os tumores foram deixados crescer por 2 semanas antes da injeção de compostos de imagem. Todos os tumores eram palpáveis no momento da imagem, com tamanhos ~ 3-5 mm no momento do experimento de imagem.
DETALHES DO ESTUDO
[0342] A tabela a seguir descreve os detalhes da injeção para todos os camundongos usados no estudo. ID do Composto Volume de injeção (µL) Dose injetada (MBq) camundongo M566 DU145-Composto 1b 100 2,35 M567 DU145-Composto 1b 100 2,54 M568 DU145-Composto 1b 100 2,28 M569 DU145-Composto 1b 100 1,51 M570 PC3-Composto 1b 100 2,52 M571 PC3-Composto 1b 100 2,56 M572 PC3-Composto 1b 100 2,58 M573 PC3-Composto 1b 100 2,58 M574 DU145-Composto 3 100 2,81 M575 DU145- Composto 3 100 2,96 M576 DU145- Composto 3 100 2,95 M577 DU145- Composto 3 100 2,94 M578 PC3-Composto 3 100 3,33 M579 PC3- Composto 3 100 3,09 M580 PC3-Composto 3 100 2,97 M581 PC3- Composto 3 100 2,88
RESULTADOS
[0343] Sob condições otimizadas, dois dendrímeros (compostos 1b e 3) foram marcados com Zr-89 e usados para análises de biodistribuição.
Além do crescimento óbvio da lesão tumoral, nenhum efeito adverso à saúde foi registrado para qualquer um dos animais durante este estudo.
IMAGEM PET-CT
[0344] Os camundongos (n = 4 por grupo) com xenoenxertos DU- 145 ou PC3 foram injetados com dendrímeros marcados com Zr-89 (compostos 1b e 3) através da veia da cauda. As imagens foram tiradas 8 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 144 horas e 216 horas após a injeção. Às 216 horas após a injeção, os órgãos foram removidos e a intensidade do sinal quantificada por análise gama ex vivo. Pelotas fecais também foram medidas quanto à atividade neste ponto de tempo. As Figuras 2 e 3 mostram imagens representativas do composto 1b para os xenoenxertos DU-145 e PC3, respectivamente, 6 dias após a injeção do dendrímero. As Figuras 4 e 5 mostram imagens representativas do composto 3 para os xenoenxertos DU-145 e PC3, respectivamente, 6 dias após a injeção do dendrímero.
[0345] A fim de compreender melhor os perfis de biodistribuição dos diferentes grupos, gráficos de acumulação para os órgãos conforme determinado in vivo e ex vivo são fornecidos (ver Figuras 6, 7 e 19). Para avaliar ainda mais as tendências nos dados, as comparações entre a captação do tumor em diferentes pontos de tempo foram traçadas para mostrar o efeito temporal da acumulação em função do tipo de tumor. Esses dados foram extraídos das imagens in vivo, desenhando uma região de interesse em torno da massa tumoral em diferentes pontos de tempo (Figura 8).
CONCLUSÃO
[0346] Todos os camundongos mostraram bom crescimento tumoral e o acúmulo de tumor mostrou atingir aproximadamente 4% de ID/g para os tumores DU-145 e 2% de ID/g para os tumores PC3. Não houve diferença observável entre os dois dendrímeros diferentes. O acúmulo de diferença é provavelmente devido ao nível de vasculatura e heterogeneidade entre os tipos de tumor; no entanto, isso exigiria investigação adicional, incluindo análise de tecido.
[0347] Em termos de taxa de acumulação, a Figura 8 mostra que todos os dendrímeros mostram uma acumulação lenta até 6 dias, altura em que a absorção máxima é observada. Isso é indicativo de um mecanismo EPR contribuindo para o acúmulo devido à longa circulação dos dendrímeros.
[0348] Nenhum acúmulo incomum nos órgãos de depuração foi observado, com os sinais do fígado e baço mostrando os intervalos de concentração esperados, como tipicamente observado para sistemas semelhantes. A presença de sinal significativo nas fezes de todos os grupos de animais em 9 dias sugere que o dendrímero ainda está sendo eliminado por esta rota. Da mesma forma, imagens in vivo mostram que há intensidade de sinal estatisticamente significativa na bexiga em 9 dias para todos os animais, sugerindo provável depuração de produtos metabólicos por mecanismos renais. A intensidade do sinal medida na amostra de osso 9 dias após a injeção foi cerca ou ligeiramente superior ao de fundo, sugerindo que houve um acúmulo mínimo neste tecido.
EXEMPLO 20 ESTUDO DE IMAGEM DE TUMOR COM DENDRÍMEROS CONTENDO RADIONUCLÍDEOS -
CÂNCER DE PÂNCREAS E DE MAMA
[0349] O acúmulo de dois construtos de dendrímero diferentes em dois modelos de xenoenxerto murino diferentes de câncer de pâncreas e de mama (linhagens celulares PANC-1 e MDA-MB-468, respectivamente) foi investigado. Os dois construtos diferentes eram os compostos 1b e 3 que já estavam pré-conjugados com DFO e prontos para marcação com 89Zr para estudos de imagem subsequentes. A biodistribuição foi medida por PET-CT até 9 dias em dois xenoenxertos de tumor diferentes e, em seguida, validada por cintilação gama ex vivo de órgãos excisados no dia 9.
[0350] Os dendrímeros foram marcados e purificados, validados por radioTLC antes da injeção nos animais. Ambos os dendrímeros foram bem marcados e purificados até alta pureza, adequados para geração de imagens com uma única etapa de purificação. A saúde padrão dos camundongos foi monitorada por planilha de pontuação e peso do camundongo ao longo do período completo do estudo.
MARCAÇÃO RADIOATIVA COM ZR-89 E ANÁLISE RADIOTLC DE DENDRÍMEROS
[0351] 91 μL de oxalato 89Zr em ácido oxálico 1 M (Perkin Elmer) foi diluído com 78 μL de Na2CO3 1 M para neutralizar o pH. Os dendrímeros 1b e 3 foram preparados em HEPES 0,5 M (pH 7,5). 33 μL de estoque de 89Zr neutralizado (aproximadamente 15 MBq) foram adicionados a alíquotas de cada dendrímero (146 μg) para dar 100 vezes o excesso do dendrímero para 89Zr e a marcação foi deixada prosseguir em temperatura ambiente por 1 hora.
As amostras foram então trocadas por tampão para solução salina tamponada com fosfato usando colunas de dessalinização Zeba Spin (7 kDa MWCO, Thermo Fisher Scientific). Amostras de 1 μL de cada solução foram retiradas e colocadas em papel de cromatografia em camada fina (papel de cromatografia de microfibra de vidro Agilent iTLC-SG impregnado com sílica gel) e corridas com ácido dietilenotriaminopentaacético (DTPA) 50 mM como eluente. Os experimentos de controle foram conduzidos para monitorar o comportamento de eluição do 89Zr não ligado para controle de qualidade. As placas foram então fotografadas em um sistema de imagem Bruker In vivo MS FX Pro usando uma tela de fósforo radioisotópica (TLC mostrado na Figura 9).
ANIMAIS
[0352] Camundongos nus Balb/c fêmeas saudáveis (~ 20g) a partir de 8 semanas de idade foram obtidos do ARC e usados para este estudo.
Os camundongos foram importados para a instalação de detenção de animais e monitorados por 1 semana antes do estudo, a fim de se aclimatar ao ambiente antes da injeção de células. Todos os animais tiveram acesso livre a comida e água antes e durante os experimentos de imagem que foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal.
INICIAÇÃO E CRESCIMENTO DO TUMOR
[0353] Todos os camundongos foram adquiridos com 8 semanas de idade, mas foram injetados em momentos ligeiramente diferentes para dar tumores comparáveis no momento da imagem. Isso foi com base na experiência anterior com esses modelos e taxas de crescimento.
[0354] 5 x 106 células PANC-1 (em 50 uL de solução salina) foram injetadas (agulha 27G) no flanco esquerdo de camundongos nus Balb/c machos de 9 semanas de idade. Os tumores foram deixados crescer por 4 semanas antes da injeção de compostos de imagem.
[0355] 5 x 106 células MDA-MB-468 (em 50 uL de solução salina) foram injetadas (agulha 27G) no flanco esquerdo de camundongos nus Balb/c machos com 11 semanas de idade. Os tumores foram deixados crescer por 2 semanas antes da injeção de compostos de imagem.
[0356] Todos os tumores eram palpáveis no momento da imagem, com tamanhos ~ 3-5 mm no momento do experimento de imagem. Deve-se notar que esses tumores tiveram taxas de crescimento muito diferentes (MDA- MB-468 mais agressivo no crescimento do que PANC-1), e isso pode levar a diferenças observáveis nas imagens em pontos de tempo mais longos (ver % de ID/g). Os tumores PANC-1 tiveram um crescimento muito lento e tiveram uma taxa de pega muito menor do que o MDA-MB-468.
DETALHES DO ESTUDO
[0357] A tabela a seguir descreve os detalhes da injeção para todos os camundongos usados no estudo. ID do Composto Volume de injeção Dose injetada camundongo (µL) (MBq) F656 MDA-MB-468- Composto 1b 100 2,87 F657 MDA-MB-468- Composto 1b 100 2,84 F658 MDA-MB-468- Composto 1b 100 2,75 F659 MDA-MB-468- Composto 1b 100 2,89 F660 MDA-MB-468- Composto 3 100 3,05 F661 MDA-MB-468- Composto 3 100 3,01 F662 MDA-MB-468- Composto 3 100 3,02 F663 MDA-MB-468- Composto 3 100 3,21 F664 PANC-1- Composto 1b 100 2,77 F665 PANC-1- Composto 1b 100 2,68 F666 PANC-1- Composto 1b 100 2,78 F667 PANC-1- Composto 1b 100 Sem tumor F668 PANC-1- Composto 3 100 2,84 F669 PANC-1- Composto 3 100 3,03 F670 PANC-1- Composto 3 100 Sem tumor F671 PANC-1- Composto 3 100 Sem tumor
RESULTADOS
[0358] Sob condições otimizadas, os dois dendrímeros foram marcados com 89Zr e usados para análises de biodistribuição. Além do crescimento óbvio da lesão tumoral, nenhum efeito adverso à saúde foi registrado para qualquer um dos animais durante este estudo.
IMAGEM PET-CT
[0359] Camundongos (n = 4 por grupo para MDA-MB-468 e n = 3 ou 2 para PANC-1) com xenoenxertos de pâncreass ou de mama foram injetados com dendrímeros marcados com 89Zr através da veia da cauda. As imagens foram tiradas 8 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 144 horas e 216 horas após a injeção. Às 216 horas após a injeção, os órgãos foram removidos e a intensidade do sinal quantificada por análise gama ex vivo. Pelotas fecais também foram medidas quanto à atividade neste ponto de tempo. As Figuras 10 a 13 mostram imagens representativas para cada dendrímero e xenoenxerto 9 dias após a injeção do dendrímero.
[0360] Os gráficos de acumulação para os órgãos conforme determinado in vivo e ex vivo são fornecidos nas Figuras 14, 15 e 19 para destacar as tendências na biodistribuição e depuração.
[0361] Para avaliar ainda mais as tendências nos dados, as comparações entre a captação do tumor em diferentes pontos de tempo foram traçadas para mostrar o efeito temporal da acumulação em função do tipo de tumor. Esses dados foram extraídos das imagens in vivo, desenhando uma região de interesse em torno da massa tumoral em diferentes pontos de tempo, bem como das análises ex vivo para comparação. Os detalhes são mostrados na Figura 16.
CONCLUSÃO
[0362] A radioTLC mostrou que ambos os compostos 1b e 3 marcados com alta eficiência usando protocolos padrão, e uma única etapa de purificação era necessária para atingir pureza > 99%.
[0363] Todos os camundongos mostraram bom crescimento tumoral e o acúmulo de tumor mostrou atingir aproximadamente 4% de ID/g para ambos os tumores MDA-MB-468 e PANC-1 usando dados de imagem in vivo. Não houve diferença significativa no acúmulo de tumor para os dois dendrímeros diferentes. A variabilidade surgiu entre o tipo de tumor (em todos os quatro modelos de tumor) e isso é provavelmente devido ao nível de vasculatura e heterogeneidade entre os tipos de tumor, no entanto, isso exigiria uma investigação mais aprofundada, incluindo análise de tecido.
[0364] Em termos de taxa de acumulação, todos os dendrímeros mostram acumulação lenta até 3-6 dias, altura em que a absorção máxima é observada. Isso é indicativo de um mecanismo EPR contribuindo para o acúmulo devido à longa circulação dos dendrímeros. Em tempos mais longos, o sinal começa a diminuir e isso pode ser indicativo de processamento do dendrímero por células no tecido tumoral (células tumorais ou células imunes) e/ou perda lenta da sonda de imagem (por descomplexação ou degradação).
[0365] Nenhum acúmulo incomum nos órgãos de depuração foi observado, com os sinais do fígado e baço mostrando os intervalos de concentração esperados, como tipicamente observado para sistemas semelhantes. A presença de sinal significativo nas fezes de todos os grupos de animais em 6 dias sugere que ambos os dendrímeros ainda estão sendo eliminados por esta rota. Da mesma forma, imagens in vivo mostram que há intensidade de sinal estatisticamente significativa no sangue em 9 dias para todos os animais, indicando que os dendrímeros também têm uma proporção que ainda está circulando neste ponto. A intensidade do sinal medida na amostra de osso 9 dias após a injeção em todos os modelos de tumor mostrou sinais que estavam em torno ou apenas ligeiramente mais elevados do que o fundo, sugerindo que havia um acúmulo mínimo neste tecido.
EXEMPLO 21 ESTUDO DE IMAGEM DE TUMOR COM DENDRÍMEROS CONTENDO RADIONUCLÍDEOS -
GLIOBLASTOMA
[0366] O objetivo deste estudo foi avaliar o nível de acúmulo de exemplos de dendrímeros contendo radionuclídeos em camundongos com gliomas espontâneos. Este modelo fornece uma rota para avaliar com eficácia a capacidade de cruzar a barreira hematoencefálica (BBB) e também de se acumular no tecido tumoral.
MODELO DE CAMUNDONGO
[0367] Todos os cruzamentos e experimentos foram realizados de acordo com o Código Australiano de Práticas para o Cuidado e Uso de Animais para Fins Científicos e com a aprovação do Comitê de Ética Animal.
[0368] Gt(ROSA)26Sortm14(CAG-tdTomate)Hze 20023653 foi cruzado com Ptentm2MAK; Rb1tm2Brn; Trp53tm1Brn; Tg(GFAP-cre/Esr1*,-lacZ)BSbk31,44–47 (alelos) e retrocruzou seis gerações para os últimos camundongos para gerar Gt(ROSA)26Sortm14(CAG-tdTomate)Hze; Ptentm2MAK; Rb1tm2Brn; Trp53tm1Brn; Tg(GFAP- cre/Esr1*,-lacZ)BSbk (modelo de camundongo com glioma de alto grau; HGG).
Os camundongos foram mantidos em um fundo predominantemente FVB/NJ com contribuições de 129/SV e C57Bl6. Para induzir a Cre recombinase e, assim, as formações tumorais, 20 mg/ml de Tamoxifeno (Sigma-Aldrich) dissolvido em óleo de milho (Sigma-Aldrich) foi injetado intraperitonealmente.
Até 200 mg/kg de peso corporal foram administrados semanalmente por 3 semanas consecutivas após o dia pós-natal (P) 30 (variação P30–44). A saúde e o bem-estar dos animais foram monitorados até duas vezes ao dia e os animais foram sacrificados com base na exigência de morbidade.
MARCAÇÃO RADIOATIVA E ANÁLISE DE TLC DE DENDRÍMEROS
[0369] 91 µL de oxalato de Zr-89 em ácido oxálico 1 M (Perkin Elmer) foram diluídos com 78 µL de Na2CO3 1 M para neutralizar o pH. O dendrímero 1b foi dissolvido em HEPES 0,5 M (pH 7,5). 33 µL de estoque de Zr-89 neutralizado (aproximadamente 15 MBq) foram adicionados ao dendrímero (146 µg) para dar um excesso de 100 vezes do dendrímero ao Zr- 89 e a marcação foi deixada prosseguir à temperatura ambiente durante 1 hora. A amostra foi então trocada por tampão para solução salina tamponada com fosfato usando colunas de dessalinização Zeba Spin (7 kDa MWCO, Thermo Fisher Scientific). 1 µL de amostra da solução foi retirada e aplicada em papel de cromatografia em camada fina (papel de cromatografia de microfibra de vidro Agilent iTLC-SG impregnado com sílica gel) e corrido com ácido dietilenotriaminopentaacético (DTPA) 50 mM como eluente. Os experimentos de controle foram conduzidos para monitorar o comportamento de eluição do Zr-89 não ligado para controle de qualidade. As placas foram então fotografadas em um sistema de imagem Bruker In vivo MS FX Pro usando uma tela de fósforo radioisotópica. Foi observada quelação de ~ 100% do Zr-89 e, portanto, o dendrímero foi usado diretamente para os experimentos de imagem.
IMAGEM PET-MRI
[0370] Camundongos anestesiados, com veia da cauda canulada, foram colocados em um sistema combinado de MRI/PET, compreendendo um 7T ClinScan de 300 mm, executando Siemens VB17, e inserção de PET removível contendo 3 anéis de 16 blocos detectores com cristais LSO 15X15 (1,6 x 1,6 x 10 mm) por bloco, no centro do furo magnético operando no local de trabalho de aquisição Siemens Inveon (IAW)(Bruker, Alemanha). Uma bobina de RF de ressonância magnética de 23 mm de ID dentro do anel PET foi usada para adquirir imagens de cabeça de rato simultaneamente com a aquisição PET.
[0371] Os camundongos foram injetados com aproximadamente 5 MBq de dendrímero 1b marcado com Zr-89 e fotografados 40 horas e 5 dias após a injeção. Em cada ponto de imagem, uma dose de agente de contraste Gadovist® foi injetada para obter T1, T2 e dados de imagem dinâmicos pré e pós-contraste. A dose de injeção em cada ponto de tempo era composta por 50 µl de Gadovist® diluído com PBS (1X) para dar um volume total de 200 µl. Este volume foi injetado por meio de um cateter inserido na veia da cauda em uma injeção lenta em bolus. Quando coletados, a aquisição de dados PET dinâmica foi realizada por 60 min. Antes da injeção, imagens de localização rápida e uma sequência VIBE de exame de apneia interpolada volumétrica ponderada em 3D T1 foram adquiridas. Imagens dinâmicas de ressonância magnética foram adquiridas com uma sequência Gradient echo FLASH, com 3 cortes adquiridos a cada intervalo de 2 segundos. A aquisição de PET e a imagem dinâmica de ressonância magnética foram iniciadas simultaneamente, um período inicial de 2-3 minutos foi adquirido e a solução foi injetada. Após 15 min de varredura de ressonância magnética dinâmica, o T1 ponderado VIBE foi repetido, imagens estruturais T2 spin eco adquiridas e uma sequência 3T T1 ponderada VIBE_DIXON adquirida para gerar um mapa 3D T1.
[0372] Os dados PET foram reconstruídos usando software reconstruído PET dedicado desenvolvido pela Universidade de Tubingen para a inserção de PET. Imagens PET com uma matriz de 128 x 128 x 89 foram reconstruídas usando o algoritmo de maximização de expectativa de subconjunto ordenado (OSEM2D). Os conjuntos de dados de MRI e PET foram alinhados usando o software IRW (Siemens) usando uma matriz de transformação gerada usando um fantoma com características conhecidas.
PROCESSAMENTO DE IMAGEM
[0373] Todas as imagens de ressonância magnética foram adquiridas usando o software ClinScan mencionado acima, e as imagens de subtração foram calculadas usando a função integrada. Todas as imagens foram exportadas como DICOMS do software ClinScan e posteriormente processadas e analisadas com Osirix MD para a captação dinâmica, imagens ponderadas em T1 e T2 como apenas MRI (v 9.0.1). Dados PET e imagens de projeção de intensidade máxima de fusão PET-MRI geradas resultantes foram preparados usando o software Siemens Inveon Research Workplace.
ANÁLISE DE DADOS
[0374] Os dados foram agregados no Microsoft Excel (Mac 2016, v 16,9) e cálculos matemáticos básicos foram feitos nas planilhas. Todos os gráficos foram feitos com GraphPad Prism 7 e todas as análises estatísticas e medidas de área sob a curva foram feitas usando as funções integradas. Os cálculos para captação do radiotraçador são apresentados como porcentagem da dose injetada por grama (% de ID/g) e foram calculados a partir das imagens in vivo usando o Siemens Inveon Research Workplace.
[0375] As imagens de PET-MR foram adquiridas 40 horas e 5 dias após a injeção de SPL 9149 e são mostradas nas Figuras 17 e 18. A região do tumor é mostrada com setas brancas. Outra intensidade de sinal é proveniente do fluxo sanguíneo ao redor do crânio de camundongos em áreas altamente vascularizadas.
[0376] A captação e o acúmulo relativos do composto 1b marcado radioativamente com Zr-89 em comparação com o cérebro e a vasculatura (o acúmulo do cérebro é determinado medindo a intensidade do sinal em uma região do cérebro distante do tumor) em diferentes pontos de tempo é mostrado na tabela abaixo: Órgão % de ID/g em 40 horas % de ID/g em 5 dias Cérebro (sem tumor) 2,0 1,5 Vasculatura 2,3 2,0 Tumor 4,3 4,0
CONCLUSÕES
[0377] O acúmulo desse dendrímero no tumor cerebral foi considerado alto. As imagens indicam que o dendrímero atravessa a BBB e se acumula no tecido tumoral em uma extensão muito maior do que outras regiões, indicando potencial terapêutico para tumores cerebrais.
EXEMPLO 22
ESTUDO TERAPÊUTICO COM DENDRÍMEROS CONTENDO RADIONUCLÍDEOS MODELO ANIMAL
[0378] Ratos nus Balb/c machos saudáveis (~ 20g) a partir de 8 semanas de idade foram obtidos do ARC e usados para este estudo. Os camundongos foram importados para a instalação de detenção de animais e monitorados por 1 semana antes do estudo, a fim de se aclimatar ao ambiente antes da injeção de células. Todos os animais tiveram acesso livre a comida e água antes e durante os experimentos de imagem que foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal.
DENDRÍMEROS
[0379] Os seguintes compostos foram usados no estudo: - Exemplo 4b; - Exemplo 5; - Jevtana® (cabazitaxel); e - Exemplo comparativo A: um dendrímero não contendo radionuclídeo, que é BHALys[Lys]32[α-DGA-Cabazitaxel]32†[ε-PEG~2100]32‡.
[0380] Nota: 32‡ refere-se ao número teórico de grupos amino de superfície ε no dendrímero disponível para substituição com PEG~2100. O número médio real de grupos de PEG~2100 ligados ao BHALys[Lys]32 foi determinado experimentalmente por 1H NMR.
MARCAÇÃO RADIOATIVA E ANÁLISE DE TLC DE DENDRÍMEROS
[0381] Todos os dendrímeros foram incubados com Lu-177 a um excesso de 100 vezes de polímero em tampão de acetato de amônio 0,1 M, pH 5,5, por 60 minutos, a 37 ºC. Amostras de cada solução foram retiradas e misturadas 2: 1 com DTPA 50 mM. 5 uL de cada solução foram colocados em papel de TLC (papel de cromatografia de microfibra de vidro Agilent iTLC-SG impregnado com sílica gel) e corridos com 50:50 de água: etanol (v/v). As placas foram então fotografadas em um sistema de imagem Carestream MSFX usando uma tela de fósforo radioisotópica. Quando necessário, o cobre não ligado foi removido por purificação usando colunas de rotação Zeba 7 K MWCO (Thermo Scientific) de acordo com os protocolos do fabricante. Os dendrímeros exibiram uma marcação > 95% e foram usados para o estudo de regressão subsequente. Para cada uma das análises discutidas, os TLCs radioisotópicos foram obtidos misturando amostras com um excesso de DTPA (50 mM) para eliminar qualquer Lu-177 não ligado. Neste sistema de TLC, os dendrímeros permanecerão na linha de base (Rf = 0) enquanto o Lu-177 complexado com DTPA se moverá com o solvente da frente para o topo do papel (Rf = 1).
INICIAÇÃO E CRESCIMENTO DO TUMOR
[0382] 78 camundongos foram injetados com 4 x 106 células DU- 145 em Matrigel no flanco direito para induzir tumores subcutâneos. O volume do tumor e a massa corporal foram monitorados duas vezes por semana antes que os camundongos com crescimento tumoral evidente (aproximadamente 100 mm2 em volume, volume do tumor = ½ (comprimento x largura2)) fossem atribuídos aleatoriamente a grupos e injetados com compostos de acordo com o cronograma descrito na tabela abaixo, nos dias 0, 7 e 14. Após as injeções, os camundongos foram monitorados três vezes por semana quanto ao volume do tumor e massa corporal. Os camundongos foram abatidos se os tumores atingissem um tamanho significativo (> 1 cm3), ou de acordo com os requisitos éticos. Nenhum camundongo foi abatido devido ao regime de tratamento. Dia 0 Dia 7 Dia 14 Dose equivalente de Dose Dose Grupo Composto droga equivalente de equivalente de (Dose LU-177) droga droga 1 Controle (solução salina) 0 0 0 2 Jevtana® 8 mg/kg 8 mg/kg 8 mg/kg 3 Exemplo Comparativo A 8 mg/kg 8 mg/kg 8 mg/kg 4 4b (CTX/DOTA) 8 mg/kg (6 MBq) 0 0
Exemplo Comparativo A 0 8 mg/kg 8 mg/kg 5 Jevtana® 5 mg/kg 5 mg/kg 5 mg/kg 6 Exemplo Comparativo A 5 mg/kg 5 mg/kg 5 mg/kg 4b (CTX/DOTA) 5 mg/kg (6 MBq) 0 0 7 Exemplo Comparativo A 0 5 mg/kg 5 mg/kg 8 5 (DOTA) (6 MBq) 0 0
[0383] Como mostrado na Figura 20, o dendrímero de radionuclídeo (grupo 8) e o dendrímero com cabazitaxel e radionuclídeo (grupos 4 e 7) foram todos eficazes na supressão do crescimento do tumor, com a dose mais alta do composto 4b (grupo 4) sendo mais eficaz.

Claims (1)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. DENDRÍMERO, caracterizado por compreender: i) uma unidade de núcleo (C); e ii) unidades de construção (BU), em que a unidade de núcleo está covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção; o dendrímero tendo de duas a seis gerações de unidades de construção; em que unidades de construção de diferentes gerações são covalentemente ligadas umas às outras; e o dendrímero compreendendo ainda: iii) um ou mais primeiros grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada primeiro grupo terminal compreende uma porção contendo radionuclídeo; e iv) um ou mais segundos grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada segundo grupo terminal compreende uma porção de modificação farmacocinética; ou um sal do mesmo.
    2. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo primeiro grupo terminal compreender um grupo de complexação e um radionuclídeo.
    3. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo grupo de complexação ser um grupo DOTA, benzil-DOTA, NOTA, DTPA, sarcofagina ou DFO.
    4. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo grupo de complexação ser um grupo DOTA, benzil-DOTA, NOTA, DTPA ou DFO.
    5. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo radionuclídeo na porção contendo radionuclídeo ser um radionuclídeo de lutécio, gadolínio, gálio, zircônio, actínio, bismuto, astatina, tecnécio ou cobre.
    6. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo radionuclídeo ser um radionuclídeo de gadolínio, zircônio ou lutécio.
    7. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo radionuclídeo ser um radionuclídeo de cobre, zircônio, lutécio, actínio ou astatina.
    8. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo radionuclídeo ser um radionuclídeo de cobre-64, cobre-67, zircônio-89, lutécio-177, actínio-225 ou astatina-211.
    9. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo radionuclídeo ser um emissor α.
    10. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo radionuclídeo ser um emissor β.
    11. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pela porção de modificação farmacocinética ser um grupo de polietilenoglicol (PEG) ou um grupo de polietiloxazolina (PEOX).
    12. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pela porção de modificação farmacocinética ser um grupo de PEG com um peso molecular médio de pelo menos 500 Daltons.
    13. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pela porção de modificação farmacocinética ser um grupo de PEG com um peso molecular médio na faixa de 500 a 3000 Daltons.
    14. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 13, caracterizado pelo grupo de PEG ser um PEG terminado em metoxi.
    15. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo dendrímero compreender um terceiro grupo terminal ligado a uma unidade de construção mais externa, o terceiro grupo terminal compreendendo um resíduo de um agente farmaceuticamente ativo.
    16. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo agente farmaceuticamente ativo ser um agente anticâncer ou radiossensibilizador.
    17. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo agente anticâncer ser selecionado a partir do grupo que consiste em uma auristatina, um maitansinoide, um taxano, um inibidor de topoisomerase e um análogo de nucleosídeo.
    18. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo agente anticâncer ser selecionado a partir do grupo que consiste em auristatina A, monometila auristatina F, cabazitaxel, docetaxel, SN- 38 e gencitabina.
    19. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo agente anticâncer ser selecionado a partir do grupo que consiste em cabazitaxel, docetaxel e SN-38.
    20. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 15 a 19, caracterizado pelo resíduo de um agente farmaceuticamente ativo ser covalentemente ligado a uma unidade de construção mais externa por meio de um ligante.
    21. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo resíduo de um agente farmaceuticamente ativo ser covalentemente ligado a uma unidade de construção mais externa por meio de um ligante clivável.
    22. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 21,
    caracterizado pelo ligante ser: .
    23. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pela unidade de núcleo não fornecer um ponto de ligação para um grupo terminal que não seja através das unidades de construção.
    24. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelas gerações de unidades de construção serem gerações completas.
    25. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pela unidade de núcleo ser covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção por meio de ligações amida, cada ligação amida sendo formada entre um átomo de nitrogênio presente na unidade de núcleo e o átomo de carbono de um grupo acila presente em uma unidade de construção.
    26. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pela unidade de núcleo do dendrímero ser formada a partir de um precursor da unidade de núcleo que compreende dois grupos amino.
    27. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pela unidade de núcleo ser: .
    28. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 27, caracterizado pelas unidades de construção de diferentes gerações serem covalentemente ligadas umas às outras por meio de ligações amida formadas entre um átomo de nitrogênio presente em uma unidade de construção e o átomo de carbono de um grupo acila presente em outra unidade de construção.
    29. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelas unidades de construção serem resíduos de lisina ou análogos dos mesmos.
    30. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelas unidades de construção serem cada uma: .
    31. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 30, caracterizado pelo primeiro grupo terminal estar ligado ao átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa e o segundo grupo terminal está ligado ao átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa.
    32. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado por 1 a 3 dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas estarem ligados a um primeiro grupo terminal.
    33. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 32, caracterizado por, pelo menos, 40% dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas estarem ligados a um segundo grupo terminal.
    34. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 33, caracterizado pelo dendrímero compreender um terceiro grupo terminal ligado ao átomo de nitrogênio de uma unidade de construção mais externa, o terceiro grupo terminal compreendendo um resíduo de um agente farmaceuticamente ativo.
    35. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo agente farmaceuticamente ativo compreender um grupo hidroxila, em que o resíduo de um agente farmaceuticamente ativo é covalentemente ligado por meio do átomo de oxigênio do grupo hidroxila através de um ligante clivável a uma unidade de construção mais externa, e em que o ligante clivável é um grupo de ligação diacila de fórmula: , em que A é um grupo alquileno C2-C10 que é opcionalmente interrompido por O, S, S-S, NH ou N(Me), ou em que A é um heterociclo selecionado a partir do grupo que consiste em tetrahidrofurano, tetrahidrotiofeno, pirrolidina e N-metilpirrolidina.
    36. DENDRÍMERO, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo ligante diacila ser: ou .
    39. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 34 a 36, caracterizado por, pelo menos, um terço dos átomos de nitrogênio presentes nas unidades de construção mais externas estarem ligados a um terceiro grupo terminal.
    40. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 39, caracterizado pelo dendrímero compreender unidades de construção mais externas que contêm grupos –NH2 e/ou que contêm um átomo de nitrogênio que é coberto com um grupo acetila.
    41. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 28 a 40, caracterizado por, pelo menos, 80% dos átomos de nitrogênio presentes na geração mais externa de unidades de construção serem substituídos.
    42. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo dendrímero compreender unidades de superfície que compreendem uma unidade de construção mais externa e um segundo grupo terminal de fórmula: 2° grupo terminal em que R representa um primeiro grupo terminal ou um terceiro grupo terminal.
    43. DENDRÍMERO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 42, caracterizado pelo dendrímero ser qualquer um dos dendrímeros de exemplo.
    44. COMPOSIÇÃO, caracterizada por compreender uma pluralidade de dendrímeros ou sais dos mesmos, em que pelo menos alguns dos dendrímeros são conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, e em que o número médio de primeiros grupos terminais por dendrímero na composição está na faixa de 0,2 a 8, e o número médio de segundos grupos terminais por dendrímero na composição está na faixa de 10 a 32.
    45. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 44, caracterizada pelo número médio do terceiro grupo terminal por dendrímero na composição está na faixa de 10 a 31.
    46. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 45, caracterizada pela composição é uma composição farmacêutica que compreende um excipiente farmaceuticamente aceitável.
    47. MÉTODO PARA DETERMINAR SE UM INDIVÍDUO TEM UM CÂNCER, caracterizado por compreender: administrar a um indivíduo um dendrímero, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou uma composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46; realizar imagens no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo; e determinar se o indivíduo tem um câncer com base nos resultados de imagem.
    48. MÉTODO DE IMAGEM DE UM CÂNCER EM UM INDIVÍDUO, caracterizado por compreender: administrar a um indivíduo com câncer um dendrímero, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou uma composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46; realizar imagens no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo.
    49. MÉTODO PARA DETERMINAR A PROGRESSÃO DE UM CÂNCER em um indivíduo, caracterizado por compreender: administrar a um indivíduo com câncer uma primeira quantidade de um dendrímero, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou uma composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46; realizar uma primeira etapa de imagem no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo; administrar subsequentemente ao indivíduo uma segunda quantidade de um dendrímero, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou uma composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46;
    realizar uma segunda etapa de imagem no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo; e determinar se o câncer progrediu com base no primeiro e no segundo resultados de imagem.
    50. MÉTODO PARA DETERMINAR UMA TERAPIA APROPRIADA PARA UM INDIVÍDUO com um câncer, caracterizado por compreender: administrar ao indivíduo um dendrímero, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou uma composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46; realizar imagens no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo; e se os resultados de imagem indicarem suscetibilidade do câncer ao tratamento com uma terapia, administrar a terapia ao indivíduo.
    51. MÉTODO PARA DETERMINAR A EFICÁCIA DE UMA TERAPIA CONTRA O CÂNCER, administrada a um indivíduo com um câncer, caracterizado por compreender: administrar ao indivíduo uma primeira quantidade de um dendrímero, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou uma composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46; realizar uma primeira etapa de imagem no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo; administrar ao indivíduo uma terapia contra o câncer; administrar subsequentemente ao indivíduo uma segunda quantidade de um dendrímero, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou uma composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46; realizar uma segunda etapa de imagem no corpo do indivíduo ou em uma parte do mesmo; e determinar a eficácia da terapia contra o câncer com base no primeiro e no segundo resultados de imagem.
    52. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 50 a 51, caracterizado pela terapia ser um dendrímero, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou uma composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46.
    53. MÉTODO DE TRATAMENTO DE CÂNCER, caracterizado por compreender a administração a um indivíduo em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um dendrímero, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou uma composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46.
    54. DENDRÍMERO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46, caracterizados por ser para uso no diagnóstico de câncer em um indivíduo, para uso na determinação de uma terapia apropriada para um indivíduo com um câncer, para uso na determinação da eficácia de uma terapia contra o câncer administrada a um indivíduo, ou para uso na determinação da progressão de um câncer em um indivíduo.
    55. DENDRÍMERO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46, caracterizados por ser para uso no tratamento de câncer.
    56. USO DE UM DENDRÍMERO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou de uma composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para o diagnóstico de câncer, para determinar uma terapia apropriada para um indivíduo com um câncer, para determinar a eficácia de uma terapia contra o câncer administrada a um indivíduo, ou para determinar a progressão de um câncer em um indivíduo.
    57. USO DE UM DENDRÍMERO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, ou de uma composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 46, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para o tratamento do câncer.
    58. MÉTODO, uso, dendrímero ou composição para uso, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 47 a 57, caracterizado pelo câncer ser câncer de próstata, câncer de pâncreas, câncer gastrointestinal, câncer de estômago, câncer de pulmão, câncer de útero, câncer de mama, câncer cerebral ou câncer de ovário.
    59. MÉTODO, uso, dendrímero ou composição para uso, conforme definido na reivindicação 58, caracterizado pelo câncer ser câncer de próstata, câncer de pâncreas, câncer de mama ou câncer cerebral.
    60. MÉTODO, uso, dendrímero ou composição para uso, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 58 a 59, caracterizado pelo câncer ser um câncer cerebral de um glioblastoma, meningioma, pituitária, bainha nervosa, astrocitoma, oligodendroglioma, ependimoma, meduloblastoma ou craniofaringioma.
    61. MÉTODO, uso, dendrímero ou composição para uso, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 58 a 60, caracterizado pelo dendrímero ser administrado em combinação com uma outra droga anticâncer.
    62. INTERMEDIÁRIO PARA A PRODUÇÃO DE UM DENDRÍMERO contendo radionuclídeo, caracterizado por compreender: i) uma unidade de núcleo (C); e ii) unidades de construção (BU); em que a unidade de núcleo está covalentemente ligada a pelo menos duas unidades de construção;
    o dendrímero tendo de duas a seis gerações de unidades de construção; em que unidades de construção de diferentes gerações são covalentemente ligadas umas às outras; e o dendrímero compreendendo ainda: iii) um ou mais primeiros grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada primeiro grupo terminal compreende um grupo de complexação para complexar um radionuclídeo; e iv) um ou mais segundos grupos terminais ligados a uma unidade de construção mais externa, em que cada segundo grupo terminal compreende uma porção de modificação farmacocinética.
    63. KIT para a produção de um dendrímero, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, caracterizado por compreender: a) um intermediário, conforme definido na reivindicação 62; e b) um radionuclídeo.
    64. PROCESSO PARA A PRODUÇÃO DE UM DENDRÍMERO, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 43, caracterizado por compreender contatar um intermediário, conforme definido na reivindicação 62, com um radionuclídeo, produzindo assim o dendrímero.
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