BR112021004840A2

BR112021004840A2 - cor do soro como biomarcador da eficiência digestiva de aves domésticas

Info

Publication number: BR112021004840A2
Application number: BR112021004840-5A
Authority: BR
Inventors: Sandrine Grasteau; Elisabeth Duval; Stéphane Beauclercq
Original assignee: Institut National De Recherche Pour L'agriculture, L'alimentation Et L'environnement; Universite De Tours
Priority date: 2018-09-14
Filing date: 2019-09-13
Publication date: 2021-06-08
Also published as: CN113167789A; EP3850364A1; US11340211B2; EP3623810A1; WO2020053409A1; US20220026410A1

Abstract

A invenção se refere a um método in vitro para avaliação da eficiência digestiva (DE) de aves domésticas, em particular frangos, por meio da medição da cor de uma amostra de fração líquida do sangue das referidas aves domésticas.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para: “COR DO

SORO COMO BIOMARCADOR DA EFICIÊNCIA DIGESTIVA DE AVES DOMÉSTICAS” CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A invenção se refere a um método in vitro para avaliação da eficiência digestiva (DE) de aves domésticas, em particular frangos, por meio da medição da cor de uma amostra de fração líquida do sangue das referidas aves domésticas.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[002] Os alimentos usados nas dietas das aves estão se tornando cada vez mais diversificados, a fim de limitar a competição com a alimentação humana pelo uso de subprodutos de cereais, bem como a fim de incluir mais recursos locais nas dietas e, assim, limitar a dependência de importações, por exemplo, de soja na Europa. Esses alimentos alternativos são, no entanto, frequentemente de qualidade inferior e mais variável do que as dietas tradicionais de milho e soja. Consequentemente, a eficiência digestiva (DE) de frangos alimentados com estas dietas novas e menos do que ideais está se tornando um componente mais importante da eficiência alimentar do que antes. Melhorar a eficiência digestiva e, por sua vez, a eficiência alimentar é, portanto, um elemento crítico da lucratividade econômica e do impacto ambiental da produção de aves domésticas. Isso reforçou o interesse pela seleção genética visando à eficiência digestiva, componente da eficiência alimentar, avaliada por energia metabolizável aparente corrigida para retenção zero de nitrogênio (AMEn).

[003] Graças ao desenvolvimento da tecnologia de espectroscopia no infravermelho próximo (NIRS), a viabilidade de medições em grande escala da eficiência digestiva foi muito melhorada em comparação com as análises químicas anteriores. Isso possibilitou a realização de um experimento genético sobre esta característica, durante o qual mostramos que a eficiência digestiva era hereditária e poderia ser usada como critério de seleção (Mignon-Grasteau et al., 2004). No entanto, a preparação de amostras de fezes de um grande número de animais (aves) ainda é demorada. Além disso, a coleta total de fezes envolve a criação de animais (aves domésticas) em gaiolas individuais durante o ensaio de equilíbrio, o que é prejudicial ao seu bem-estar.

[004] Portanto, ainda há a necessidade de ter biomarcadores valiosos da eficiência digestiva que sejam rápidos de se medir e disponíveis em animais criados no chão (aves domésticas), para melhorar a eficiência da seleção em condições reais de criação e no que diz respeito ao bem-estar animal.

[005] O Requerente mostrou na presente invenção que a absorbância do soro a 492 nm pode ser usada como um critério indireto para selecionar a eficiência digestiva.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[006] A invenção se refere a um método in vitro para avaliação da eficiência digestiva (DE) de aves domésticas, em particular frangos, por meio da medição da cor de uma amostra de fração líquida do sangue das referidas aves domésticas.

[007] A invenção também se refere ao uso do em vitro método de acordo com a invenção para selecionar aves, em particular frangos, que têm uma eficiência digestiva (DE) melhorada.

[008] Outro objeto da invenção é o uso do método in vitro, de acordo com a invenção, para selecionar alimentos ou dietas e/ou produzir alimentos ou dietas adaptadas e/ou otimizadas para aves domésticas, em particular para frangos.

[009] Outro objeto da invenção é o uso da cor de uma amostra de fração líquida de sangue, em particular amostra de plasma ou amostra de soro, preferivelmente amostra de soro de aves domésticas, como critério indireto para selecionar a eficiência digestiva (DE) de aves domésticas,

em particular a eficiência digestiva (DE) de frangos.

[0010] A presente invenção é muito simples e rápida: - Ela realiza um único exame de sangue no animal, - A quantidade de amostra da fração líquida de sangue, em particular a amostra de soro necessária para análise, é baixa (200 μL), o que limita a quantidade de sangue a ser retirada de animais, e - Ela realiza uma medição colorimétrica em amostra de fração líquida de sangue, em particular amostra de soro.

[0011] E as principais vantagens desta nova técnica são: - as aves domésticas não precisam mais ser colocadas em gaiolas individuais e são manuseadas uma vez, - o tempo necessário para a coleta de sangue e medição colorimétrica é extremamente baixo, então várias centenas de animais podem ser medidos em um dia, - a equipe necessária para esta técnica é reduzida, - esta técnica dispensa a aquisição de consumíveis de laboratório ou marcadores indigestos e usa equipamentos de medição a um custo muito inferior ao usado nos métodos anteriores.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0012] Figura 1. Absorbância da amostra de soro entre 300 e 578 nm no experimento 1 para uma linhagem de frangos com alta eficiência digestiva D+ (linha sólida) e de uma linhagem de frangos com baixa eficiência digestiva D- (linha tracejada). A seta indica a zona para a qual a diferença entre as duas linhagens é significativa.

[0013] Figura 2 Razão da resposta esperada de AMEn à seleção indireta da cor do soro para a resposta esperada de AMEn à seleção direta.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0014] A invenção se refere a um método in vitro para avaliação da eficiência digestiva (DE) de aves domésticas, em particular frangos, por meio da medição da cor de uma amostra de fração líquida do sangue das referidas aves domésticas.

[0015] 'Fração líquida de sangue', de acordo com a invenção, significa a fração não celular do sangue. De fato, o sangue é um fluido corporal em humanos e em outros animais composto por células sanguíneas (glóbulos vermelhos, glóbulos brancos e plaquetas) suspensas em um meio líquido do sangue.

[0016] A presente invenção se concentra no meio líquido do sangue, isto é, na fração líquida do sangue.

[0017] Quando o sangue é fracionado por centrifugação,

podem ser vistas três camadas: Plasma (camada superior amarela), camada leucocitária (camada média, fina e branca) e camada de eritrócitos (camada inferior, vermelha).

[0018] O plasma sanguíneo representa cerca de 55% do sangue e é o meio líquido do sangue, que por si só tem cor amarelo-palha. É essencialmente uma solução aquosa contendo 92% de água, 8% de proteínas do plasma sanguíneo e quantidades-traço de outros materiais. Ele também contém fatores de coagulação do sangue (para facilitar a coagulação).

[0019] O termo 'soro' refere-se ao plasma do qual as proteínas de coagulação foram removidas.

[0020] Em uma modalidade particular da invenção, a amostra da fração líquida de sangue é uma amostra de plasma ou uma amostra de soro.

[0021] Em uma modalidade particular e preferida, a amostra de fração líquida de sangue é uma amostra de soro.

[0022] Em uma modalidade particular, as aves domésticas são selecionadas no grupo que consiste em frango, galinha, peru, ganso, pato, galinha d'angola, codorna e pombo.

[0023] Em uma forma de realização particular e preferida, a referida ave doméstica é frango.

[0024] Em uma modalidade particular e preferida da invenção, a amostra de fração líquida de sangue é uma amostra de soro de frango.

[0025] A 'eficiência digestiva' (DE), de acordo com a invenção, é um componente da eficiência alimentar, geralmente avaliada por energia metabolizável aparente corrigida para retenção zero de nitrogênio (AMEn).

[0026] A amostra da fração líquida do sangue, em particular a amostra de soro, pode ser coletada em diferentes momentos (idades das aves domésticas).

[0027] Em uma modalidade particular, a amostra da fração líquida de sangue, em particular amostra de soro de frango, é coletada entre 21 e 25 dias, preferivelmente entre 23 a 25 dias. De fato, espera-se que as diferenças ligadas à DE sejam máximas por volta desta idade, de acordo com estudos dos inventores em amostras de soro de frangos.

[0028] Em uma modalidade particular, as amostras de plasma são coletadas com as seguintes etapas: - A amostra de sangue é coletada, em particular às 3 semanas, no seio occipital das aves domésticas, em particular de frango e recolhida em tubo seco com agente anticoagulante; - A amostra coletada que contém agente anticoagulante é centrifugada por 10 minutos a 3000g; - O sobrenadante (isto é, a amostra de plasma) é coletado com uma pipeta.

[0029] Como exemplos não limitativos de agentes anticoagulantes, podem ser mencionados EDTA, sais de heparina e citrato de sódio.

[0030] Em uma outra modalidade particular, as amostras de soro são coletadas com as seguintes etapas: - A amostra de sangue é coletada, em particular às 3 semanas, no seio occipital das aves domésticas, em particular de frango e recolhida em tubo seco; - A amostra coletada é deixada em repouso à temperatura ambiente por 15 minutos até coagulação; - O sangue coagulado é centrifugado por 10 minutos a 3000g; - O sobrenadante (isto é, a amostra de soro) é coletado com uma pipeta.

[0031] A 'cor de uma amostra' de acordo com a invenção é uma característica específica de uma ave doméstica; no contexto da invenção, ela é influenciada pelos pigmentos contidos nos alimentos (dieta) e pela eficiência digestiva (DE) das aves.

[0032] Em particular, a cor está relacionada com a absorbância da referida amostra por espectrofotometria.

[0033] O princípio é o seguinte: uma amostra iluminada (solução) com luz branca parece colorida se absorver uma parte das radiações da luz branca. A cor da amostra (solução) é, então, a das radiações transmitidas, ou seja, a cor complementar à cor absorvida. O espectro de luz colorida tem bandas de absorção escuras que dependem da natureza da amostra (solução). Para cada radiação de comprimento de onda λ, a proporção de luz absorvida pela amostra (solução) é medida por sua absorbância A (λ).

Portanto, a absorbância é uma quantidade física que reflete a capacidade de uma amostra (solução) de absorver radiação.

[0034] A absorbância depende essencialmente de dois parâmetros: a concentração da amostra (solução) e o comprimento de onda da luz que atravessa a amostra (solução).

[0035] A absorbância é, portanto, uma quantidade relacionada à intensidade da luz de comprimento de onda λ absorvida na amostra (solução). E há um comprimento de onda para o qual a absorbância é máxima. A cor da amostra (solução) corresponde, então, à cor complementar.

[0036] Os comprimentos de onda do espectro visível estão entre 400 e 700 nm.

[0037] Em um método particular, a cor de uma amostra de fração líquida de sangue, em particular de uma amostra de soro, preferivelmente de uma amostra de soro de frango, de acordo com a invenção, é medida por espectro de absorção entre 400 e 520 nm, preferivelmente entre 430 e 516 nm, mais preferivelmente entre 460 e 500 nm e ainda mais preferivelmente em comprimento de onda de 492 nm.

[0038] O Requerente demonstrou que, em particular para amostras de soro de frangos, a diferença mais significativa foi observada em particular a 492 nm, que corresponde à região de absorção de carotenoides, especialmente luteína e zeaxantina, que são os principais carotenoides presentes nos grãos de cereais, particularmente de trigo. Além disso, como a luteína e a zeaxantina são mais bem absorvidas pelos frangos do que outros carotenoides presentes nesta zona espectral, como γ-caroteno, astaxantina ou criptoxantina, podemos esperar que este pico de absorbância em 492 nm provavelmente corresponda a luteína e zeaxantina.

[0039] Em uma modalidade particular, para avaliação ou triagem em larga escala, várias amostras de aves domésticas podem ser colocadas em placas de poços e sua absorbância é medida por um espectrofotômetro automático. Portanto, a presente invenção também está relacionada a método em vitro para avaliar e/ou triar DE medindo-se a cor de amostras de fração líquida de sangue, em que as referidas amostras de fração líquida de sangue, em particular as amostras de soro, preferivelmente amostras de soro de frangos, são colocadas em placas de poços (uma amostra por poço) e o espectro de absorção (de cada amostra) é medido com um espectrofotômetro.

[0040] Em uma modalidade particular, a medição da cor de uma amostra da fração líquida de sangue, em particular da cor da amostra de soro, é realizada pelas seguintes etapas: - Depósito de 200µL de amostra de fração líquida de sangue, em particular de amostra de soro, nas cavidades da placa (uma amostra por cavidade), de acordo com um plano de deposição pré-definido; - Aquisição de um espectro de absorção usando-se um espectrofotômetro entre 300 e 600 nm (a intervalos de 2 nm); - Medição da absorbância das referidas amostras (uma absorbância por amostra) entre 400 e 520nm, preferivelmente entre 430 e 516nm, mais preferivelmente entre 460 e 500nm e ainda preferivelmente no comprimento de onda de 492nm, de acordo com as instruções do espectrofotômetro, preferivelmente em triplicatas; e - Registro dos resultados de espectrometria para posterior análise de variância.

[0041] Em uma modalidade preferida, a placa é uma placa de 96 poços transparente.

[0042] Em uma modalidade particular e preferida, as amostras de fração líquida de sangue são amostras de soro, preferivelmente amostras de soro de frangos e o espectro de absorção é medido no comprimento de onda de 492 nm.

[0043] Suspeita-se que um pico de absorbância de uma amostra de fração líquida de sangue, em particular amostra de soro e preferivelmente amostra de soro de frango, em particular no comprimento de onda de 492 nm, corresponda a uma maior concentração de carotenoides absorvidos pelas aves.

[0044] A invenção também se refere ao uso do em vitro método de acordo com a invenção para selecionar aves, em particular frangos, que têm uma eficiência digestiva (DE) melhorada.

[0045] Isto significa que a reprodução seletiva de aves domésticas com maiores valores de absorbância em amostra da fração líquida do sangue, em particular em amostra de soro, em particular a 492 nm, levará a um maior valor de eficiência digestiva (avaliada por AMEn).

[0046] Em uma modalidade particular, o método in vitro da invenção compreende uma etapa de seleção de aves domésticas, em particular de frangos, com valores de absorbância mais elevados na amostra de plasma ou na amostra de soro, preferivelmente na amostra de soro, em comprimento de onda de 492 nm.

[0047] A invenção também diz respeito ao uso do método in vitro de acordo com a invenção para selecionar alimentos ou dietas e/ou produzir alimentos ou dietas adaptadas e/ou otimizadas para aves domésticas, em particular para frangos.

[0048] Em particular, o método in vitro de avaliação da eficiência digestiva (DE) de uma ave doméstica alimentada com alimentos ou dietas a serem testadas pode auxiliar na seleção de alimentos ou dietas adaptadas e/ou otimizadas para melhor eficiência digestiva (DE).

[0049] Por 'adaptado(s/a/as) e/ou otimizado(s/a/as)' para aves, entende-se alimentos ou dietas cuja composição é adaptada para nutrição de aves domésticas e/ou mesmo otimizada, ou seja, espera-se que sejam mais bem digeridos pelas aves domésticas.

[0050] Outro objeto da invenção é o uso da cor de uma amostra de fração líquida de sangue, em particular amostra de plasma ou amostra de soro, preferivelmente amostra de soro de aves domésticas, como critério indireto para selecionar a eficiência digestiva (DE) de aves domésticas, em particular a eficiência digestiva (DE) de frangos.

[0051] A invenção será agora ilustrada pelos seguintes exemplos não limitativos.

EXEMPLOS

[0052] Comparou-se a cor do soro de duas linhagens de frangos selecionados de maneira divergente para alta ou baixa eficiência digestiva quando alimentados com dieta à base de trigo. A cor foi avaliada pela absorbância do soro entre 300 e 578 nm. A cor diferiu entre as duas linhagens entre 430 e 516 nm, que correspondem à zona de absorção de carotenoide, tais como a luteína e a zeaxantina.

[0053] Em seguida, avaliaram-se a herdabilidade das medições da cor do soro, bem como suas correlações genéticas com a eficiência digestiva.

MATERIAIS E MÉTODOS Animais (Aves domésticas)

[0054] Os termos 'animal', 'ave doméstica', 'ave' ou 'frango' são usados indistintamente no restante da descrição dos exemplos.

[0055] Todos os cuidados com animais e procedimentos experimentais relatados neste artigo estiveram de acordo com os regulamentos franceses e europeus relativos à experimentação com animais. As unidades experimentais em que as aves (frangos) foram mantidas são registradas pelo Ministério da Agricultura com os números de licença C-37- 175-1 e A-17-661 para experimentação animal. Todos os procedimentos aplicados às aves (frangos) durante esses experimentos são cobertos pelos acordos 00885.02,

2015121516442084–3202 e 2015040111006849 entregues pelo Ministério da Pesquisa da França após a aprovação dos comitês de ética C2EA-19 e C2EA-84.

[0056] Os dados usados neste estudo provêm de dois experimentos sucessivos em linhagens divergentes de frangos selecionados para alta (D+) ou baixa (D-) eficiência digestiva. A população inicial é de frango comercial de médio porte, chegando a 2 kg com 7 semanas. Durante as primeiras 8 gerações, as aves foram alimentadas com uma dieta de difícil digestão que incluía 55% de trigo Rialto (Mignon-Grasteau et al., 2004), uma variedade de trigo duro e viscoso. Os procriadores foram selecionados para eficiência digestiva usando-se o AMEn medido durante um ensaio de equilíbrio às 3 semanas. As duas linhagens foram então reproduzidas sem seleção para AMEn durante as 9 gerações seguintes. Na geração 20, o processo seletivo foi reiniciado com o mesmo critério de seleção.

[0057] Experimento 1. Na geração 20, não foi mais possível obter o novo trigo Rialto. Um ensaio preliminar foi realizado para substituí-lo por outra dieta contendo outra variedade de trigo e centeio, para mimetizar os efeitos do Rialto. A composição das duas dietas é fornecida na Tabela 1.

Tabela 1. Composição de dietas e estatísticas elementares sobre AMEn às 3 semanas para as linhagens D+ e D- (média + desvio padrão) Dieta inicial Dieta alternativa Ingrediente incluindo trigo sem trigo Rialto Rialto Milho 4,31 Trigo 55,00 51,40 Centeio 5,00 Óleo de colza 8,00 Óleo de soja 3,00 Azeite de dendê 3,00 Bolo de Soja 48 33,24 28,87 Carbonato de cálcio 1,19 1,14 Fosfato Bicálcico 1,55 1,99 Sal 0,35 0,30 Vitaminas-Minerais 0,50 0,40 DL Metionina 0,12 0,26 Lisina HCL 0,21 Treonina 0,07 Anticoccidial 0,05 0,05 Proteínas Brutas (%) 21,0 20,0

[0058] As aves (frangos) foram criadas no chão por 16 dias e, então, transferidas para gaiolas individuais. Um ensaio de equilíbrio foi feito entre 23 e 25 dias em 20 aves por linhagem e por dieta. As aves foram pesadas aos 23 e 25 dias (23 e 25 d). Neste período, foi realizada a coleta total das fezes, conforme sugerido por Bourdillon et al. (1990). As fezes foram liofilizadas e analisadas com NIRS para a obtenção dos valores de AMEn como descrito por Bastianelli et al. (2010).

[0059] Ao final do ensaio de equilíbrio (25 dias), os animais alimentados com a dieta Rialto tiveram coleta de sangue em seio occipital para mensuração da coloração sérica. O soro foi preparado mantendo-se o sangue à temperatura ambiente por 15 min até a coagulação, sendo então centrifugado (3.000 g por 10 min). Amostras de 200 µL de soro das aves foram transferidas para uma placa transparente de 96 poços (Greiner Bio-One, Kremsmünster, Áustria) e seus espectros de absorção foram adquiridos usando-se um espectrofotômetro Infinite M200 (Tecan, Männedorf, Suíça) entre 300 e 572 nm (a intervalos de 2 nm).

[0060] Experimento 2. Aves (frangos) da geração 21 (N = 192 D +, 192 D-) foram produzidas em duas ninhadas sucessivas. As aves foram alimentadas com a dieta alternativa testada no experimento 1 (Tabela 1). Elas foram criadas no chão desde a eclosão até o 13º dia (13 dias) e, então, transferidas para gaiolas individuais para um ensaio de equilíbrio. O ensaio de equilíbrio foi realizado entre o 21º e o 23º dias (21 e 23 dias) e os animais foram submetidos à coleta de sangue aos 24 dias (24 dias). As aves foram pesadas ao 21º dia e ao 23º dia. Os procedimentos para o ensaio de equilíbrio, tratamento de fezes, tratamento de amostras de sangue e medições de cor do soro foram os mesmos que os do experimento 1. A absorbância do soro foi medida a cada 2 nm entre 342 e 572 nm.

Análises Fenotípicas e Genéticas

[0061] Para testar o efeito da nova dieta na eficiência digestiva, os dados de AMEn do experimento 1 foram analisados com o procedimento GLM do SAS©9.4 (SAS Institute, Cary NC), incluindo os efeitos fixos de linhagem, dieta e linhagem por interação de dieta.

[0062] As diferenças de absorbância entre D+ e D- foram testadas nos dados de cor do soro de animais alimentados com dieta Rialto do experimento 1 com um teste de Welch a cada 2 nm de 300 a 578 nm (Welch, 1947).

[0063] Para as análises genéticas, todos os dados disponíveis de cada geração de seleção das linhagens D+ e D- foram incluídos, ou seja, 4.626, 5.068 e 417 animais para AMEn, peso corporal ao 23º d e cor do soro, respectivamente. Em relação à cor do soro, usamos os dados de absorbância coletados a cada 2 nm entre 342 e 572 nm dos experimentos 1 e 2. As análises genéticas foram realizadas usando-se VCE6.0 (Neumaier e Groeneveld, 1998; Groeneveld et al., 2010). We applied an animal model including the fixed effects of hatch (N=28), célula de criação (N=8), and sex. Para a cor do soro, também foi incluído um efeito fixo de placa (N = 6). O arquivo de pedigree incluiu um total de

6.376 animais. Levando-se em consideração o grande número de características e a alta correlação entre as variáveis de absorbância em comprimentos de onda vizinhos, fizemos uma série de análises incluindo cada AMEn, peso corporal ao 23º d e absorbância de soro em 2 comprimentos de onda diferentes. Todas as combinações possíveis entre os dois comprimentos de onda diferentes foram testadas, o que levou a um total de 276 análises. Os resultados apresentados a seguir são os valores médios dos parâmetros genéticos e de seus erros padrão obtidos para cada análise separadamente.

RESULTADOS E DISCUSSÃO Resultados Fenotípicos no Experimento 1

[0064] A análise dos dados do experimento 1 mostrou que a diferença de AMEn entre as linhagens D+ e D- estava no mesmo intervalo com as duas dietas (424 e 501 kcal.kg- 1 DM com a dieta Rialto e a dieta alternativa, respectivamente). A nova dieta é tão difícil de digerir quanto a inicial, sendo os valores de AMEn 4,7% menores que os da dieta inicial (Tabela 2).

Tabela 2. Análise de variância da linhagem e do efeito da dieta sobre AMEn no experimento 1 D+ D- N 40 40 LSMEANS com dieta Rialto 3.478 3.054 LSMEANS com dieta alternativa 3.361 2.860 (kcal.kg-1 DM) SEM (kcal.kg-1 DM) 68 P (efeito de linhagem) <0,0001 P (efeito da dieta) 0,03 P (linhagem efeito) 0,58

[0065] Resumidamente, a cor do soro D+ e D- era significativamente diferente entre 430 e 516 nm e indicava um soro mais colorido da linhagem D+ (Figura 1) Por 'soro mais colorido', entenda-se um soro de coloração mais intensa (amarelo intenso). A diferença mais significativa foi encontrada em 492 nm, que corresponde à região de absorção de carotenoides, especialmente luteína e zeaxantina (Rodriguez-Amaya, 2001), que são os principais carotenoides presentes nos grãos de cereais, particularmente trigo (Abrar et al., 2015). Além disso, como a luteína e a zeaxantina são mais bem absorvidas pelos frangos do que outros carotenoides presentes nesta zona espectral, como γ-caroteno, astaxantina ou criptoxantina, podemos esperar que este pico de absorbância em 492 nm provavelmente corresponda a luteína e zeaxantina.

Parâmetros Genéticos da Cor do Soro

[0066] As estimativas de herdabilidade de AMEn e peso corporal (BW) foram de moderadas a altas (0,36+0,02 e 0,50+0,04, respectivamente). A correlação genética entre AMEn e BW não foi significativa (0,09+0,06). As estimativas são consistentes com estimativas anteriores obtidas a partir dessas linhagens (Mignon-Grasteau et al., 2004).

[0067] As estimativas de herdabilidade da cor do soro (Tabela 3) foram baixas e não significativas nos comprimentos de onda mais baixos (342 a 432 nm) e mais altos (512 a 572 nm). As estimativas entre 462 e 502 nm foram moderadas (entre 0,24 e 0,31) e significativamente diferentes de 0, com herdabilidade máxima em 492 nm.

Tabela 3. Parâmetros genéticos (+ erros padrão) para a cor do soro.

Absorbância no Correlação genética com comprimento de Herdabilidade AMEn BW onda 342 nm 0,08 + 0,07 0,52 + 0,61 0,75 + 0,26 352 nm 0,09 + 0,07 0,54 + 0,46 0,73 + 0,25 362 nm 0,10 + 0,09 0,58 + 0,45 0,69 + 0,28 372 nm 0,10 + 0,09 0,62 + 0,44 0,70 + 0,27 382 nm 0,10 + 0,14 0,68 + 0,46 0,66 + 0,45 392 nm 0,11 + 0,08 0,78 + 0,32 0,57 + 0,25 402 nm 0,13 + 0,07 0,92 + 0,16 0,43 + 0,27

412 nm 0,12 + 0,08 0,97 + 0,15 0,31 + 0,48 422 nm 0,13 + 0,07 0,97 + 0,10 0,25 + 0,28 432 nm 0,18 + 0,08 0,90 + 0,18 0,32 + 0,24 442 nm 0,20 + 0,16 0,83 + 0,48 0,36 + 0,37 452 nm 0,26 + 0,18 0,85 + 0,41 0,33 + 0,47 462 nm 0,28 + 0,10 0,81 + 0,23 0,30 + 0,24 472 nm 0,27 + 0,09 0,82 + 0,22 0,32 + 0,20 482 nm 0,28 + 0,09 0,82 + 0,23 0,32 + 0,22 492 nm 0,31 + 0,09 0,84 + 0,28 0,29 + 0,27 502 nm 0,24 + 0,12 0,76 + 0,30 0,37 + 0,24 512 nm 0,16 + 0,08 0,65 + 0,54 0,51 + 0,25 522 nm 0,13 + 0,16 0,55 + 0,44 0,58 + 0,36 532 nm 0,11 + 0,07 0,60 + 0,43 0,61 + 0,26 542 nm 0,11 + 0,09 0,71 + 0,72 0,60 + 0,30 552 nm 0,11 + 0,07 0,69 + 0,36 0,61 + 0,26 562 nm 0,11 + 0,07 0,61 + 0,41 0,62 + 0,26 572 nm 0,11 + 0,07 0,75 + 0,29 0,60 + 0,24

[0068] Estas estimativas estão próximas da herdabilidade da concentração de carotenoides em frangos de corte com 8 semanas (0,20 a 0,32) obtida em estudos anteriores (Stone et al., 1971; Washburn e Ruff, 1978). As correlações genéticas entre AMEn e cor do soro foram as maiores (0,76 a 0,97) para comprimentos de onda entre 392 e 502 nm. Em contraste, na mesma zona, as correlações genéticas entre a cor do soro e o peso corporal foram baixas e não significativas. Levando-se em consideração a herdabilidade e as estimativas de correlação genética, a absorbância sérica em 492 nm seria o critério indireto de seleção mais eficiente para AMEn e levaria a uma resposta indireta estimada em 78% da resposta de AMEn à seleção direta (Figura 2).

[0069] A concentração de carotenoides no soro é altamente dependente da capacidade de o animal os absorver da dieta. A absorção de carotenoides é afetada pelo pH intestinal e pelo conteúdo de fibra da dieta (Faure et al., 1999). No nosso caso, demonstrou-se que o pH intestinal difere entre as duas linhagens (de Verdal et al., 2010) e estamos usando uma dieta com alto teor de fibras, o que pode afetar a absorção de carotenoides. Além disso, a ligação entre a eficiência digestiva e o conteúdo de carotenoides também pode ser explicada pelas consequências indiretas da seleção sobre a eficiência digestiva.

[0070] Nossos experimentos nestas linhagens divergentes mostraram que esta seleção afetou não apenas a digestão, mas também a estrutura do intestino e do sistema imunológico. De fato, os carotenoides estão envolvidos na estrutura do intestino por meio de seu papel na operação de junções comunicantes entre as células epiteliais do intestino (Faure et al., 1999) e no sistema imunológico, pois aumentam as respostas imunológicas mediada por células e humoral (Chew e Park, 2004).

[0071] Levando-se em consideração sua facilidade de mensuração, seu nível de herdabilidade e sua correlação genética com a eficiência digestiva, a cor do soro parece ser um critério indireto promissor para a seleção da eficiência digestiva (DE) de aves domésticas a ser usado em esquemas de seleção para se melhorar a eficiência digestiva.

REFERÊNCIAS

[0072] Abrar, H., Larsson, H., Kuktaite, R., Olsson, M. E., and E. Johansson. 2015. Carotenoid content in organically produced wheat: relevance for human nutritional health on consumption. Int. J. Environ. Res. Public Health 12:14068-14083.

Bastianelli, D., Bonnal, L., Juin, H., Mignon- Grasteau, S., Davrieux, F., and B. Carré. 2010. Prediction of the chemical composition of poultry excreta by near infrared spectroscopy. Near Infrared Spectrosc. 18:69–77.

Beauclercq S., et al., 2018. Relationships between digestive efficiency and metabolomics profiles of serum and intestinal contents in chickens. Scientific Reports: 8:

6678. DOI:10.1038/s41598-018-24978-9.

Bourdillon, A., Carré, B., Conan, L., Duperray, J., Huyghebaert, G., Leclercq, B., Lessire, M., McNab, J., and

J. Wiseman. 1990. European reference method for the in vivo determination of metabolisable energy with adult cockerels: reproducibility, effect of food intake and comparison with individual laboratory methods. Br. Poult. Sci. 31:557-65.

De Verdal, H., Mignon-Grasteau, S., Bastianelli, D., Même, N., Le Bihan-Duval, E., and A. Narcy. 2013. Reducing the environmental impact of poultry breeding by genetic selection. J. Anim. Sci. 91:613-622.

Faure, H., Fayol, V., Galabert, C., Grolier, P., Le Moël, G., Steghens, J. P., van Kappel, A., and F. Nabel.

1999. Les caroténoïdes : 1. Métabolisme et physiologie.

Ann. Biol. Clin. 57 :169-183.

Garcia, V., Gomez, J., Mignon-Grasteau, S., Sellier, N., and B. Carré. 2007. Effects of xylanase and antibiotic supplementations on the nutritional utilisation of a wheat diet in growing chicks from genetic D+ and D- lines selected for divergent digestion efficiency. Animal 1:1435–

1442.

Groeneveld, E., Kovac, M., and N. Mielenz. 2010. VCE user’s guide and reference manual version 6.0.

ftp://ftp.tzv.fal.de/pub/vce6/doc/vce6-manual-3.1-A4.pdf.

Mignon-Grasteau, S., Muley, N., Bastianelli, D., Gomez, J., Péron, A., Sellier, N., Millet, N., Besnard, J., Hallouis, J. M., and B. Carré. 2004. Heritability of digestibilities and divergent selection for digestion ability in growing chicks fed a wheat diet. Poult Sci.

83:860-867.

Neumaier, A., and E. Groeneveld. 1998. Restricted maximum likelihood estimation of covariances in sparse linear models. Genet. Sel. Evol. 1:3–26.

Rodriguez-Amaya, D. B. 2001. A guide to carotenoid analysis in foods. ILSI Press, Washington D.C., U.S.A.

Stone, H. A., Urban, W. E., and W. M. Collins. 1971.

Blood carotenoid concentration, an estimate of its heritability and genetic relationship to body-weight in chicken. Poult. Sci. 6:1859-1862.

Surai, P. F., Speake, B. K., Sparks, N. H. C. 2001.

Carotenoids in avian nutrition and embryonic development.

1. Absorption, availability and levels in plasma and egg yolk. J. Poult. Sci. 38 :1-27.

Washburn, K.W., and M. D. Ruff. 1978. Genetic variability of carotenoid content in commercial broilers.

Arch. Geflugelkd. 42 :193-196.

Welch, B.L., 1947. The generalization of Student’s problem when several different population variances are involved. Biometrika 34: 28-35.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método in vitro para avaliação da eficiência digestiva (DE) de aves domésticas, caracterizado pelo fato de ser por meio da medição da cor de uma amostra de fração líquida do sangue das referidas aves domésticas.

2. Método in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a amostra de fração líquida de sangue é selecionada no grupo que consiste em amostra de plasma ou amostra de soro.

3. Método in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a amostra de fração líquida de sangue é uma amostra de soro.

4. Método in vitro, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que as aves domésticas são selecionadas no grupo que consiste em frango, galinha, peru, ganso, pato, galinha d'angola, codorna e pombo.

5. Método in vitro, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que aves domésticas são frangos.

6. Método in vitro, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a amostra de fração líquida de sangue é uma amostra de soro do frango.

7. Método in vitro, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a cor de uma amostra de fração líquida de sangue, em particular amostra de soro e preferivelmente amostra de soro de frango, é medida por espectro de absorção entre 400 e 520 nm, preferivelmente entre 430 e 516 nm, mais preferivelmente entre 460 e 500 nm e ainda mais preferivelmente em comprimento de onda de 492 nm.

8. Método in vitro, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que as amostras de fração líquida de sangue, em particular amostras de soro, preferivelmente amostras de soro de frangos, são colocadas em placas de poços e o espectro de absorção é medido com um espectrofotômetro.

9. Método in vitro, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que as amostras de fração líquida de sangue são amostras de soro, preferivelmente amostras de soro de frangos, e o espectro de absorção é medido no comprimento de onda de 492 nm.

10. Uso do método in vitro, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para selecionar aves domésticas, em particular frangos, com uma eficiência digestiva (DE) melhorada.

11. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que compreende uma etapa de seleção de aves domésticas, em particular frangos, possuindo valores de absorbância superiores em amostra de soro a 492 nm de comprimento de onda.

12. Uso do método in vitro, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para selecionar alimentos ou dietas e/ou produzir alimentos ou dietas adaptadas e/ou otimizadas para aves domésticas, em particular para frangos.

13. Uso da cor de uma amostra de fração líquida de sangue, em particular amostra de plasma ou amostra de soro, preferivelmente amostra de soro de aves domésticas, caracterizado pelo fato de ser como critério indireto para selecionar a eficiência digestiva (DE) de aves domésticas, em particular a eficiência digestiva (DE) de frangos.