BR112020026110A2 - Composições e métodos para o tratamento de hemoglobinopatias e talassemias - Google Patents

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Matthew Russell
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Axcella Health Inc.
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Abstract

a presente invenção refere-se a composições e métodos para melhorar a disfunção eritrocitária ou para tratar uma hemoglobinopatia ou uma talassemia (por exemplo, uma doença falciforme ou ß-talassemia).

Description

Relatório descritivo da patente de invenção para "COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA O TRATAMENTO DE HEMOGLOBINOPATIAS E TALASSEMIAS".
PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica prioridade ao pedido dos EUA com o N.º de Série 62/687721, depositado em 20 de junho de 2019, e ao pedido dos EUA com o N.º de Série 62/804879, depositado em 13 de fevereiro de 2019, cujo conteúdo é aqui incorporado por referência na sua totalidade.
ANTECEDENTES
[0002] As hemoglobinopatias, tal como a doença falciforme, são distúrbios eritrocitários genéticos de alta prevalência, que causam um impacto significativo na saúde em todo o mundo. As hemoglobinopatias englobam uma série de anemias de origem genética nas quais há uma diminuição da produção e/ou aumento da hemólise dos eritrócitos. Em particular, a doença falciforme é um grupo de doenças genéticas que se manifestam na produção de eritrócitos em forma de foice e são caracterizadas por anemia hemolítica e eventos de vaso-oclusão, além de períodos intensos de dor, falência de órgãos e mortalidade precoce. A anemia falciforme é a forma mais comum e grave de doença falciforme (SCD do inglês Sickle Cell Disease), afetando aproximadamente 100.000 pessoas nos Estados Unidos e 4,4 milhões em todo o mundo. Para muitos pacientes, a SCD é definida por falência crônica de órgãos pontuada por complicações agudas e mortalidade precoce. As terapias atuais para SCD são limitadas ao tratamento de suporte de complicações, transfusões de eritrócitos, hidroxiureia e transplante de células estaminais.
[0003] Dada a falta de terapias disponíveis, ainda há uma necessidade de agentes, por exemplo, composições dietéticas e terapêuticas, para o tratamento de hemoglobinopatias, tal como a SCD,
em um indivíduo.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0004] É aqui proporcionada uma composição (por exemplo uma Porção Ativa) que inclui entidades de aminoácidos que são úteis para melhorar a função, renovação e síntese de eritrócitos e/ou hemoglobina; função vascular; inflamação; e/ou estresse oxidativo em um indivíduo, por exemplo, um indivíduo com uma hemoglobinopatia (por exemplo, doença falciforme) ou uma talassemia (por exemplo, α-talassemia ou β- talassemia): A composição pode ser utilizada em um método para tratar (por exemplo, reverter, reduzir, melhorar ou prevenir) de um ou mais sintomas de uma hemoglobinopatia ou uma talassemia em um indivíduo em necessidades do mesmo (por exemplo, um humano). O método pode ainda incluir o monitoramento do indivíduo quanto a uma melhoria em um ou mais sintomas de uma hemoglobinopatia ou uma talassemia após a administração da composição.
[0005] Em um aspecto, a invenção apresenta um método para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; ou função vascular, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de uma composição, a um indivíduo em necessidade da mesma, compreendendo: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; e d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC); a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente em menos de: 10% em peso do peso total da composição (por exemplo, na forma seca); melhorando, dessa forma, um, dois, três, quatro, cinco, seis ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; ou função vascular no indivíduo.
[0006] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para melhorar a função de eritrócitos, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz da composição aqui descrita a um indivíduo em necessidade da mesma.
[0007] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para melhorar a renovação de eritrócitos, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz da composição aqui descrita a um indivíduo em necessidade da mesma.
[0008] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para melhorar a síntese de eritrócitos, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz da composição aqui descrita a um indivíduo em necessidade da mesma.
[0009] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para melhorar a função de hemoglobina compreendendo a administração de uma quantidade eficaz da composição aqui descrita a um indivíduo em necessidade da mesma.
[0010] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para melhorar a renovação de hemoglobina, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz da composição aqui descrita a um indivíduo em necessidade da mesma.
[0011] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para melhorar a síntese de hemoglobina, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz da composição aqui descrita a um indivíduo em necessidade da mesma.
[0012] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para melhorar a função vascular, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz da composição aqui descrita a um indivíduo em necessidade da mesma. Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para tratar uma hemoglobinopatia ou uma talassemia, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de uma composição (por exemplo, uma Porção Ativa), a um indivíduo em necessidade da mesma, compreendendo: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; e d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC); a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente a menos de: 10% em peso do peso total da composição (por exemplo, na forma seca); tratando, dessa forma, a hemoglobinopatia ou a talassemia no indivíduo.
[0013] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para diminuir o estresse oxidativo (por exemplo, um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo e sistêmico) ou inflamação, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de uma composição (por exemplo, uma Porção Ativa) de qualquer um dos aspectos ou modalidades aqui descritos, a um indivíduo em necessidade da mesma. Em algumas modalidades, o indivíduo está em risco de, ou foi diagnosticado com, uma hemoglobinopatia (por exemplo, uma β- hemoglobinopatia) ou uma talassemia. Em certas modalidades, a hemoglobinopatia é uma doença falciforme. Em outra modalidade, a α- talassemia é α-talassemia ou β-talassemia.
[0014] Em outro aspecto, a invenção apresenta uma composição para uso em um método para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; ou função vascular em um indivíduo em necessidade da mesma, em que a composição compreende uma quantidade eficaz de: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; e d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC), em que a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente em menos de: 10% em peso do peso total dos componentes totais da composição (por exemplo, na forma seca).
[0015] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para tratar uma hemoglobinopatia ou uma talassemia em um indivíduo em necessidade do mesmo, em que a composição compreende uma quantidade eficaz de: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; e d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC) em que a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente a menos de: 10% em peso dos componentes totais da composição (por exemplo, na forma seca). Em algumas modalidades, a doença falciforme é escolhida de: anemia falciforme (HbSS), doença de hemoglobina SC (HbSC), β+-talassemia falciforme (HbS/β+), β0-
talassemia falciforme (HbS/β0), doença de hemoglobina SE, doença de hemoglobina SD ou doença de hemoglobina SO.
[0016] Em algumas modalidades, a administração da composição resulta em um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de: uma diminuição na produção de espécies reativas de oxigênio; uma diminuição em um nível ou atividade de arginase plasmática; um aumento na síntese de glutationa; uma diminuição na adesão dos eritrócitos às células endoteliais e outras células; um aumento na resistência dos eritrócitos ao afoiçamento; um aumento no influxo de cálcio nos eritrócitos; um aumento do anabolismo; um aumento na síntese de óxido nítrico; ou um aumento na síntese de hemoglobina.
[0017] Em algumas modalidades, a administração da composição resulta em uma melhoria em um, dois, três, quatro ou mais (por exemplo, todos) de: anemia; hemólise; vaso-oclusão; isquemia; ou dor.
[0018] Em algumas modalidades, a composição compreende ainda: (e) um ou ambos de uma entidade de aminoácido de glicina ou uma entidade de carnitina.
[0019] Em outro aspecto, a invenção apresenta uma composição compreendendo, consistindo essencialmente em, ou consistindo em:: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) entidade de aminoácido de glutamina; d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC); e (e) um ou ambos de uma entidade de aminoácido de glicina ou uma entidade de carnitina.
[0020] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de carnitina é, pelo menos, 1% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0021] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de glicina é, pelo menos, 3% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0022] Em algumas modalidades, a isoleucina está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10% em peso, 1% em peso, 0,5% em peso, 0,1% em peso, 0,05% em peso, 0,01% em peso, 0,001% em peso ou menos, por exemplo, do peso total da composição (por exemplo, na forma seca).
[0023] Em algumas modalidades, a composição compreende ainda um, dois ou mais (por exemplo, todos) de (f) uma entidade de aminoácido de valina, (g) uma entidade de aminoácido de histidina ou (h) uma entidade de aminoácido de lisina.
[0024] Em algumas modalidades, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou mais (por exemplo, todos) de (a) - (h) são selecionados da Tabela 1.
[0025] Em algumas modalidades, a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente em menos de: 10% em peso, 1% em peso, 0,5% em peso, 0,1% em peso, 0,05% em peso, 0,01% em peso, 0,001% em peso ou menos, do peso total dos componentes totais da composição (por exemplo, na forma seca).
[0026] Em algumas modalidades, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(h) estão na forma de aminoácido livre na composição, por exemplo, pelo menos: 42% em peso, 75% em peso, 90% em peso ou mais do peso total da composição (por exemplo, na forma seca) é um, dois, três, quatro, cinco ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(f) na forma de aminoácido livre na composição.
[0027] Em algumas modalidades, a % total em peso total de (a)-(d), (a)-(e), (a)-(f) ou (a)-(h) é maior do que a % total em peso total de componentes de proteína de entidade não aminoácido (por exemplo, proteína de soro de leite) ou componentes não proteicos (ou ambos) na composição (por exemplo, na forma seca), por exemplo, (a)-(d), (a)-(e), (a)-(f), ou (a)-(h) é, pelo menos: 50% em peso, 75% em peso ou 90% em peso do peso total dos componentes totais da composição (por exemplo, na forma seca).
[0028] Em algumas modalidades, a composição compreende uma combinação de 18 ou menos, 15 ou menos ou 12 ou menos entidades de aminoácidos, por exemplo, a combinação compreendendo pelo menos: 42% em peso, 75% em peso ou 90% em peso do peso total dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0029] Em algumas modalidades, o triptofano está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10% em peso, 1% em peso, 0,5% em peso, 0,1% em peso, 0,05% em peso, 0,01% em peso, 0,001% em peso ou menos, por exemplo, do peso total da composição (por exemplo, na forma seca). Em algumas modalidades, o triptofano, se presente, está presente na forma livre. Em algumas modalidades, o triptofano, se presente, está presente na forma de sal. Em algumas modalidades, o triptofano, se presente, pode estar presente em um oligopeptídeo, polipeptídeo ou proteína, com a condição de que a proteína não seja de soro, caseína, lactalbumina ou qualquer outra proteína utilizada como suplemento nutricional, alimento médico ou produto similar, se presente como proteína intacta ou hidrolisado de proteína.
[0030] Em certas modalidades, a razão em peso entre a entidade de aminoácido de leucina, a entidade de aminoácido de arginina, a entidade de aminoácido de glutamina e a entidade de NAC é 3,6 +/- 20% : 4,5 +/- 20% : 11 +/- 20% : 1,2 +/- 20%. Em algumas modalidades, a razão em peso entre a entidade de aminoácido de leucina, a entidade de aminoácido de arginina, a entidade de aminoácido de glutamina, a entidade de NAC, a entidade de carnitina e a entidade de aminoácido de glicina é 3,6 +/- 20% : 4,5 +/- 20% : 11 +/- 20% : 1,2 +/- 20% : 1 +/- 20% : 2,7 +/- 20%.
[0031] Em algumas modalidades, a composição (por exemplo, a Porção Ativa) compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em: a) a entidade de aminoácido de leucina é escolhida de: i) L-leucina ou um sal do mesmo, ii) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-leucina, ou iii) β-hidróxi-β-metilbutirato (HMB) ou um sal do mesmo; b) a entidade de aminoácido de arginina é escolhida de: i) L-arginina ou um sal do mesmo, ii) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-arginina, iii) creatina ou um sal do mesmo, ou iv) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo creatina; c) a entidade de aminoácido de glutamina é L-glutamina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-glutamina; d) a entidade de NAC é NAC ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo NAC; e e) um ou ambos de: i) a entidade de aminoácido de glicina é L-glicina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-glicina; ou ii) a entidade de carnitina é L-carnitina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-carnitina.
[0032] Em algumas modalidades, a composição (por exemplo, uma Porção Ativa) compreende ainda um, dois ou mais (por exemplo, todos) de: (f) a entidade de aminoácido de valina é L-valina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-valina; (g) a entidade de aminoácido de histidina é L-histidina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-histidina; ou (h) a entidade de aminoácido de lisina é L-lisina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-lisina.
[0033] Em algumas modalidades, a composição (por exemplo, uma Porção Ativa) compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em: a) a entidade de aminoácido de leucina é L-leucina ou um sal do mesmo; b) a entidade de aminoácido de arginina é L-arginina ou um sal do mesmo; c) a entidade de aminoácido de glutamina é L-glutamina ou um sal do mesmo; d) a entidade de NAC é NAC ou um sal do mesmo; e e) um ou ambos da entidade de aminoácido de glicina é L-glicina, ou um sal do mesmo, ou a entidade de carnitina é L-carnitina ou um sal do mesmo.
[0034] Em algumas modalidades, a composição (por exemplo, uma Porção Ativa) compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em:
a) a entidade de aminoácido de leucina é L-leucina ou um sal do mesmo; b) a entidade de aminoácido de arginina é L-arginina ou um sal do mesmo; c) a entidade de aminoácido de glutamina é L-glutamina ou um sal do mesmo; d) a entidade de NAC é NAC ou um sal do mesmo; e) um ou ambos da entidade de aminoácido de glicina é L-glicina, ou um sal do mesmo, ou a entidade de carnitina é L-carnitina ou um sal do mesmo; f) a entidade de aminoácido de valina é L-valina ou um sal do mesmo; g) a entidade de aminoácido de histidina é L-histidina ou um sal do mesmo; e h) a entidade de aminoácido de lisina é L-lisina ou um sal do mesmo. Em outro aspecto, a invenção apresenta uma composição compreendendo, consistindo essencialmente em, ou consistindo em:: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC), e) uma entidade de aminoácido de citrulina, f) uma entidade de carnitina, g) uma entidade de aminoácido de serina, h) uma entidade de aminoácido de valina, i) uma entidade de aminoácido de histidina, e j) uma entidade de aminoácido de lisina.
[0035] Em algumas modalidades, a isoleucina está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10 em peso %, 9 em peso %, 8 em peso %, 7 em peso %, 6 em peso %, 5 em peso %, 4 em peso %, 3 em peso %, 2 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (por exemplo na forma seca);
[0036] Em algumas modalidades, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(j) é selecionado da Tabela 1.
[0037] Em algumas modalidades, a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente a menos de: 10 em peso %, 9 em peso %, 8 em peso %, 7 em peso %, 6 em peso %, 5 em peso %, 4 em peso %, 3 em peso %, 2 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, do peso total dos componentes totais da composição (por exemplo, na forma seca).
[0038] Em algumas modalidades, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(j) estão na forma de aminoácido livre na composição, por exemplo, pelo menos: 42 em peso %, 45 em peso %, 50 em peso %, 55 em peso %, 60 em peso %, 65 em peso %, 70 em peso %, 75 em peso %, 80 em peso %, 85 em peso %, 90 em peso %, 95 em peso %, 97 em peso %, 98 em peso % ou mais do peso total da composição (por exemplo, na forma seca) é um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(j) na forma de aminoácido livre na composição.
[0039] Em algumas modalidades, a % em peso total de (a)-(j) é maior do que a % em peso total de componentes de proteína de entidade não aminoácido (por exemplo, proteína de soro de leite) ou componentes não proteicos (ou ambos) na composição (por exemplo, na forma seca), por exemplo, (a)-(j) é, pelo menos: 50 em peso %, 55 em peso %, 60 em peso %, 65 em peso %, 70 em peso %, 75 em peso
%, 80 em peso %, 85 em peso %, 90 em peso %, 95 em peso %, 97 em peso %, 98 em peso % ou mais do peso total dos componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0040] Em algumas modalidades, a composição compreende a combinação de 18 ou menos, 17 ou menos, 16 ou menos, 15 ou menos, 14 ou menos, 13 ou menos, 12 ou menos, ou 11 ou menos entidades de aminoácidos.
[0041] Em algumas modalidades, a composição (por exemplo, a Porção Ativa) compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em: a) a entidade de aminoácido de leucina é escolhida de: i) L-leucina ou um sal do mesmo, ii) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-leucina, ou iii) β-hidróxi-β-metilbutirato (HMB) ou um sal do mesmo; b) a entidade de aminoácido de arginina é escolhida de: i) L-arginina ou um sal do mesmo, ii) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-arginina, iii) creatina ou um sal do mesmo, ou iv) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo creatina; c) a entidade de aminoácido de glutamina é L-glutamina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-glutamina; d) a entidade de NAC é NAC ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo NAC; e) a entidade de aminoácido de citrulina é L-citrulina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-citrulina;
f) a entidade de carnitina é L-carnitina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-carnitina; g) a entidade de aminoácido de serina é L-serina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-serina; h) a entidade de aminoácido de valina é L-valina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-valina; i) a entidade de aminoácido de histidina é L-histidina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-histidina; e j) a entidade de aminoácido de lisina é L-lisina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-lisina.
[0042] Em algumas modalidades, a composição (por exemplo, uma Porção Ativa) compreende, consiste essencialmente em, ou consiste em: a) L-leucina ou um sal do mesmo, b) L-arginina ou um sal do mesmo, c) L-glutamina ou um sal do mesmo, d) NAC ou um sal do mesmo, e) L-citrulina ou um sal do mesmo, f) L-carnitina ou um sal do mesmo, g) L-serina ou um sal do mesmo, h) L-valina ou um sal do mesmo, i) L-histidina ou um sal do mesmo, e j) L-lisina ou um sal do mesmo.
[0043] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função,
renovação ou síntese de hemoglobina; função vascular; estresse oxidativo (por exemplo, um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo ou sistêmico); ou inflamação, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de uma composição (por exemplo, uma Porção Ativa) de qualquer um dos aspectos ou modalidades aqui descritos a um indivíduo em necessidade da mesma, melhorando, dessa forma, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; função vascular, estresse oxidativo (por exemplo, um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo ou sistêmico); ou inflamação no indivíduo.
[0044] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para tratar uma hemoglobinopatia ou uma talassemia, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de uma composição (por exemplo, uma Porção Ativa) de qualquer um dos aspectos ou modalidades aqui descritos a um indivíduo em necessidade da mesma, tratando, dessa forma, a hemoglobinopatia ou a talassemia no indivíduo.
[0045] Em outro aspecto, a invenção apresenta uma composição para uso em um método para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; função vascular; estresse oxidativo (por exemplo, um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo ou sistêmico); ou inflamação, compreendendo uma quantidade eficaz de uma composição (por exemplo, uma Porção Ativa) de qualquer um dos aspectos ou modalidades aqui descritos.
[0046] Em outro aspecto, a invenção apresenta uma composição para uso em um método para tratar uma hemoglobinopatia ou talassemia, compreendendo uma quantidade eficaz de uma composição (por exemplo, uma Porção Ativa) de qualquer um dos aspectos ou modalidades aqui descritos.
[0047] Em algumas modalidades, o indivíduo está em risco de, ou foi diagnosticado com, uma hemoglobinopatia (por exemplo, uma β- hemoglobinopatia) ou uma talassemia. Em certas modalidades, a hemoglobinopatia é uma doença falciforme. Em outra modalidade, a α- talassemia é α-talassemia ou β-talassemia.
[0048] Em algumas modalidades, a doença falciforme é escolhida de: anemia falciforme (HbSS), doença de hemoglobina SC (HbSC), β +- talassemia falciforme (HbS/β+), β0-talassemia falciforme (HbS/β0), doença de hemoglobina SE, doença de hemoglobina SD ou doença de hemoglobina SO.
[0049] Em algumas modalidades, a administração da composição resulta em um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de: uma diminuição na produção de espécies reativas de oxigênio, uma diminuição em um nível ou atividade de arginase plasmática, um aumento na síntese de glutationa, uma diminuição na adesão dos eritrócitos às células endoteliais e outras células, um aumento na resistência dos eritrócitos ao afoiçamento, um aumento no influxo de cálcio nos eritrócitos, um aumento do anabolismo, um aumento na síntese de óxido nítrico, ou um aumento na síntese de hemoglobina.
[0050] Em algumas modalidades, a administração da composição resulta em uma melhoria em um, dois, três, quatro ou mais (por exemplo, todos) de: anemia, hemólise, vaso-oclusão, isquemia, ou dor.
[0051] Em algumas modalidades, a composição (uma Porção Ativa) é formulada com um veículo farmaceuticamente aceitável.
[0052] Em algumas modalidades, a composição (por exemplo, a Porção Ativa) é formulada como uma composição dietética. Em algumas modalidades, a composição dietética é escolhida de um alimento médico, um alimento funcional ou um suplemento.
[0053] Em algumas modalidades, a composição é uma preparação de mistura a seco, por exemplo, preparação de mistura a seco de grau farmacêutico (PGDBP).
[0054] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de fabricação de uma preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, compreendendo, pelo menos, 4 entidades de aminoácidos de grau farmacêutico, compreendendo o referido método: a formação de uma combinação de, pelo menos, 4 entidades de aminoácidos de grau farmacêutico e a mistura da combinação durante um tempo suficiente para obter uma preparação de mistura a seco, p. ex, PGDBP, em que a preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, compreende: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; e d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC).
[0055] Em algumas modalidades, a preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, compreende ainda um, dois, três, quatro, cinco ou mais (por exemplo, todos) de e) uma entidade de aminoácido de citrulina, f) uma entidade de carnitina, g) uma entidade de aminoácido de serina, h) uma entidade de aminoácido de valina, i) uma entidade de aminoácido de histidina e j) uma entidade de aminoácido de lisina.
[0056] Em algumas modalidades, um, dois ou três de: (i) a mistura ocorrer a uma temperatura inferior a 40°C; (ii) a mistura compreender a mistura ou combinação em um misturador ou agitador a uma velocidade inferior a 1000 rpm; ou (iii) o método compreender ainda um, dois ou três de mistura direta, compactação por rolo ou granulação úmida da preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP.
[0057] Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de fabricação de uma preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, compreendendo, pelo menos, 4 entidades de aminoácidos de grau farmacêutico, compreendendo o referido método: a formação de uma combinação de, pelo menos, 4 entidades de aminoácidos de grau farmacêutico e a mistura da combinação durante um tempo suficiente para obter uma preparação de mistura a seco, p. ex, PGDBP, em que a preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, compreende: a) uma entidade de aminoácido de arginina, b) uma entidade de aminoácido de citrulina, e c) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC).
[0058] Em algumas modalidades, a preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, compreende ainda um, dois, três, quatro, cinco, seis ou sete de a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de glutamina, c) uma entidade de carnitina, d) uma entidade de aminoácido de serina, e) uma entidade de aminoácido de valina, f) uma entidade de aminoácido de histidina e j) uma entidade de aminoácido de lisina.
[0059] Em outro aspecto, a invenção apresenta uma composição compreendendo: a) uma entidade de aminoácido de arginina, b) uma entidade de aminoácido de citrulina, e c) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC), em que um, dois ou três de: (i) a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente em menos de: 10% em peso do peso total da composição (por exemplo, na forma seca); (ii) pelo menos 50% em peso do peso total da composição (p. ex, na forma seca) é uma ou mais entidades de aminoácidos na forma livre; ou (iii) a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina é maior do que a % em peso da entidade de NAC.
[0060] Em algumas modalidades, a composição tem uma, duas ou três das seguintes características: (i) a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina na composição (por exemplo, na forma seca) é, pelo menos, 50% maior do que a % em peso da entidade de NAC, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina é, pelo menos, 60%, 65%, 70%, 75% ou 80% maior do que a % em peso da entidade de NAC; (ii) a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de citrulina e da entidade de NAC é, pelo menos: 20% em peso, 25% em peso, 30% em peso ou 35% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 80% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca); ou (iii) a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina é, pelo menos: 5% em peso, 10% em peso, 11% em peso, 12% em peso, 13% em peso ou mais dos componentes de entidade de aminoácido na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 60% em peso dos componentes de entidade de aminoácido na composição (por exemplo, na forma seca).
[0061] Em algumas modalidades, a composição compreende ainda um ou ambos de: (d) uma entidade de aminoácido de carnitina; ou (e) uma entidade de aminoácido de glutamina.
[0062] Em algumas modalidades, a composição compreende: a) a entidade de aminoácido de arginina é escolhida de: i) L-arginina ou um sal do mesmo, ii) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-arginina, iii) creatina ou um sal do mesmo, ou iv) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo creatina; b) a entidade de aminoácido de citrulina é L-citrulina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-citrulina; e c) a entidade de NAC é NAC ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo NAC;
[0063] Em outro aspecto, a invenção apresenta uma composição compreendendo: a) uma entidade de aminoácido de arginina, b) uma entidade de aminoácido de citrulina; c) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC); d) uma entidade de aminoácido de carnitina; e e) uma entidade de aminoácido de glutamina, em que um, dois ou três de: (i) a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente a menos de: 10% em peso do peso total da composição (por exemplo, na forma seca); (ii) pelo menos 50% em peso do peso total da composição (p. ex, na forma seca) é uma ou mais entidades de aminoácidos na forma livre; ou (iii) a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina é maior do que a % em peso da entidade de NAC.
[0064] Em algumas modalidades, a composição tem uma, duas, três ou quatro das seguintes características: (i) a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de citrulina, da entidade de NAC, da entidade de aminoácido de carnitina e da entidade de aminoácido de glutamina é, pelo menos: 40% em peso, 45% em peso, 50% em peso, 55% em peso ou 60% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 90% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca); (ii) a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina na composição (por exemplo, na forma seca) é maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de carnitina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina na composição (por exemplo, na forma seca) é, pelo menos, 50% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de carnitina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina é, pelo menos, 60%, 65%, 70%, 75% ou 80% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de carnitina; (iii) a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina na composição (por exemplo, na forma seca) é maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina na composição (por exemplo, na forma seca) é, pelo menos, 40% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina ser, pelo menos, 60%, 45%, 50%, 55%, 60% ou 65% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina; ou (iv) a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina e da entidade de aminoácido de arginina em combinação na composição (por exemplo, na forma seca) é maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina na composição (por exemplo, na forma seca) é,
pelo menos, 20% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de carnitina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina é, pelo menos, 30%, 35%, 40%, 45% ou 50% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de carnitina.
[0065] Em algumas modalidades, a composição compreende ainda um, dois ou três de: (f) uma entidade de aminoácido de leucina, (g) uma entidade de aminoácido de serina, (h) uma entidade de aminoácido de valina, (i) uma entidade de aminoácido de histidina ou (j) uma entidade de aminoácido de lisina.
[0066] Em algumas modalidades, a composição compreende: a) a entidade de aminoácido de arginina é escolhida de: i) L-arginina ou um sal do mesmo, ii) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-arginina, iii) creatina ou um sal do mesmo, ou iv) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo creatina; b) a entidade de aminoácido de citrulina é L-citrulina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-citrulina; e c) a entidade de NAC é NAC ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo NAC; d) a entidade de carnitina é L-carnitina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-carnitina; e e) a entidade de aminoácido de glutamina é L-glutamina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-glutamina.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0067] A FIG. 1 mostra um perfil de deformabilidade de RBC após oxidação ex vivo de sangue total (doador 1) com e sem hidroperóxido de terc-butila e pré-tratamento com veículo ou aminoácidos.
[0068] A FIG. 2A mostra alinhamentos de espectrogramas NIR obtidos em tempos de mistura crescentes (0, 4, 8, 12, 16 e 20 minutos) de uma PGDBP.
[0069] A FIG. 2B é um gráfico que mostra a quantidade média e o erro padrão de aminoácidos em 4 amostras aleatórias do tempo de mistura de 20 minutos de uma PGDBP (a PGDBP da FIG. 1A).
[0070] A FIG. 3 é um esquema que mostra a concepção de um estudo clínico apresentando a administração de uma composição de aminoácidos a indivíduos com doença falciforme.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0071] A disfunção física e metabólica dos glóbulos vermelhos (RBC) levam a complicações agudas e crônicas em quase todos os sistemas de órgãos, tais como em uma hemoglobinopatia (por exemplo, doença falciforme) ou uma talassemia (por exemplo, α-talassemia ou β- talassemia). A disfunção e lise dos RBC levam a inúmeras sequelas clínicas, tais como vaso-oclusão, falência de órgãos e infecções. A disfunção dos RBC pode ser caracterizada pelo afoiçamento celular, estresse oxidativo, desidratação e adesão ao endotélio, o que pode complicar a passagem dos RBC pelos microvasos. Complicações crônicas podem resultar de uma vida inteira de anemia e acréscimo de danos a órgãos até a idade adulta, e podem ser pontuadas por eventos agudos, tais como vaso-oclusão e falência súbita de órgãos.
[0072] A doença falciforme (SCD) descreve um grupo de doenças sanguíneas graves que afetam cerca de 85.000 adultos e 15.000 crianças nos Estados Unidos e 4,4 milhões de pessoas em todo o mundo. Os glóbulos vermelhos em forma de foice, que são a marca característica da SCD, revelam apenas uma pequena fração da fisiopatologia complexa e multifatorial resultante de perturbações na função normal do sangue e do sistema vascular. Os cuidados atuais são limitados em escopo e magnitude de efeito, deixando uma necessidade não atendida de agentes que ajudem a mitigar as complicações multifacetadas decorrentes da disfunção sanguínea e vascular.
[0073] As composições da invenção são concebidas para visar múltiplas vias (produção e integridade do sangue, função vascular e desequilíbrios de aminoácidos plasmáticos e RBC) que cruzam os sistemas principais (vascular, RBCs) para manter a saúde e função do sangue.
[0074] As entidades de aminoácidos e as quantidades relativas das entidades de aminoácidos nas composições aqui divulgadas foram otimizadas, por exemplo, para [1] reduzir a adesão vascular, [2] mitigar a apresentação de inflamação vascular, [3] defender contra insultos à deformabilidade e função de glóbulos vermelhos (RBC) e reduzir as complicações associadas à SCD (por exemplo, hemólise, adesão vascular, inflamação vascular, função vascular reduzida, falência de órgãos aguda e crônica) em um indivíduo, que requer a coordenação de muitos processos biológicos, celulares e moleculares . Sem estar limitado por qualquer teoria, entende-se que uma composição da invenção pode reprogramar a biologia multifatorial desordenada de [1] rigidez e fragilidade de RBC, [2] hemólise, [3] adesão vascular, [4] inflamação vascular e [5] disfunção vascular.
[0075] A composição aqui descrita proporciona uma abordagem multimodal e combinatória para melhorar a disfunção dos glóbulos vermelhos, hemólise (por exemplo, incluindo anemia, hipóxia crônica, estresse oxidativo, depleção de óxido nítrico e/ou disfunção vascular), vaso-oclusão (por exemplo, incluindo lesão isquêmica, inflamação, coagulação e/ou danos agudos de órgãos), hematopoiese alterada e/ou fisiopatologia da doença falciforme. Em algumas modalidades, a administração da composição resulta em tônus vascular, dilatação vascular e/ou vaso-oclusão melhorados (por exemplo, disponibilidade de NO, função endotelial dependente de NO e/ou pressão sanguínea melhoradas). Em algumas modalidades, a administração da composição resulta em deformabilidade de RBC melhorada, hemólise reduzida e/ou inflamação vascular reduzida (por exemplo, conforme determinado pelos níveis de glutationa (por exemplo, glutationa plasmática ou de RBC), marcadores de estresse oxidativo, marcadores hemolíticos, citocinas e/ou marcadores de adesão). Em algumas modalidades, a administração da composição resulta em aumento da síntese de proteínas e/ou aumento de substratos proteogênicos para hemoglobina para suportar a síntese do heme. Em algumas modalidades, a administração da composição resulta em hematopoiese melhorada e/ou uma população de glóbulos vermelhos melhorada (p. ex, reticulócitos, hemoglobina, hemoglobina fetal e/ou células falciformes densas ou irreversíveis melhorados). A composição aqui descrita é otimizada para visar um, dois ou três de: (i) restauração da arginina e do óxido nítrico no plasma para melhorar a lesão vascular; (ii) defesa antioxidante melhorada nos glóbulos vermelhos, plasma e em todo o sistema; ou (iii) suporte anabólico e energético para ao aumento da demanda hematopoiética em um indivíduo, por exemplo, um indivíduo com uma hemoglobinopatia (por exemplo, doença falciforme) ou uma talassemia (por exemplo, α-talassemia ou β-talassemia).
[0076] Em algumas modalidades, a composição (por exemplo, a Porção Ativa) é capaz de melhorar um, dois, três, quatro ou mais (por exemplo, todos) da função vascular mediada por NO, síntese de proteínas, energia celular, inflamação ou síntese do heme. Em algumas modalidades, a composição é capaz de restaurar a função endotelial dependente de NO, reduzindo o risco de eventos de vaso-oclusão, melhorando a saúde vascular, diminuindo a hemólise e/ou diminuindo o estresse oxidativo. Em algumas modalidades, a composição é capaz de proporcionar maior biodisponibilidade de arginina para a síntese de NO.
Em algumas modalidades, a composição é capaz de aumentar a renovação de RBC, síntese de proteínas (por exemplo, síntese de hemoglobina, por exemplo, em progenitores hematopoiéticos e/ou reticulócitos) e/ou a síntese do heme. Em algumas modalidades, a composição é capaz de proporcionar suporte energético para células altamente proliferativas (por exemplo, precursores hematopoiéticos e/ou células imunitárias).
[0077] É aqui descrito, em parte, uma composição (uma Porção Ativa) compreendendo entidades de aminoácidos e métodos para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; função vascular; estresse oxidativo (por exemplo, um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo e sistêmico); ou inflamação, pela administração de uma quantidade eficaz da composição. A composição pode ser administrada para tratar uma hemoglobinopatia (por exemplo, doença falciforme) ou uma talassemia (por exemplo, α-talassemia ou β-talassemia) em um indivíduo em necessidade da mesma. As entidades de aminoácidos e as quantidades relativas das entidades de aminoácidos na composição foram cuidadosamente selecionadas, por exemplo, para melhorar a função, renovação ou síntese de eritrócitos e/ou hemoglobina em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo com hemoglobinopatia (por exemplo, SCD) ou uma talassemia) que requer a coordenação de muitos processos biológicos, celulares e moleculares. A composição permite efeitos benéficos de múltiplas vias na patologia de nível de sistema de uma hemoglobinopatia ou talassemia. Em particular, a composição foi especificamente adaptada para tratar o estresse oxidativo, doença vascular, inflamação e o aumento da renovação, síntese e disfunção de eritrócitos e hemoglobina.
[0078] Doenças complexas, tais como hemoglobinopatia (por exemplo, doença falciforme) ou talassemia (por exemplo, α-talassemia ou β-talassemia), impactam múltiplas vias biológicas. A perda de saúde pode ser o resultado direto de vias metabólicas e funções que não estão sendo mantidas ou apoiadas. Consequentemente, restaurar a homeostase e manter a saúde requer abordagens multifatoriais. As composições aqui descritas são candidatas intervencionistas para abordar o impacto de todo o sistema do metabolismo desregulado para suportar e manter a homeostase, o que ajuda a suportar as estruturas e funções normais do corpo.
[0079] A composição aqui descrita foi otimizada para visar direta e simultaneamente múltiplas vias metabólicas implicadas em doenças complexas (por exemplo, um indivíduo com uma hemoglobinopatia (por exemplo, SCD) ou uma talassemia) e saúde geral. As razões distintas de cada uma das entidades de aminoácidos na composição são concebidas para visar e maximizar o papel fundamental da composição na regulação de múltiplas funções metabólicas (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; função vascular; estresse oxidativo (por exemplo, um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo e sistêmico). Em particular, a composição aqui descrita pode suportar e manter a saúde do sangue, o que é crítico para uma infinidade de funções metabólicas em todo o corpo. A composição aqui descrita foi concebida para visar múltiplas vias biológicas com o objetivo de suportar estruturas e funções normais do sangue. Em particular, a administração da composição aqui descrita pode melhorar e/ou tratar um, dois, três ou mais de produção de sangue reduzida, integridade sanguínea reduzida, desequilíbrio plasmático e/ou de aminoácidos de RBC, diminuição da saúde vascular ou inflamação, por exemplo, em um indivíduo com hemoglobinopatia (por exemplo, doença falciforme) ou talassemia (por exemplo, α-talassemia ou β-talassemia). Em algumas modalidades, a administração da composição a um indivíduo melhora ou mantém um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais dos seguintes: (a) proliferação e/ou maturação de células sanguíneas durante a demanda hematopoiética; (b) forma e/ou função de RBC contra a desidratação; (c) rigidez; (d) transporte de oxigênio; (e) equilíbrio de aminoácidos para suportar o metabolismo de RBC (por exemplo, substratos para a síntese de glutationa e óxido nítrico); (f) geração de ROS; (g) entrega de aminoácidos ao tecido periférico; (h) defesas contra a adesão vascular; (i) inflamação; ou (j) estase. Definições
[0080] Os termos utilizados nas reivindicações e relatório descritivo são definidos conforme apresentados abaixo a não ser que especificado de outro modo.
[0081] Deve-se observar que, conforme utilizadas relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares "um", "uma", "a" e "o" incluem referentes no plural, a não ser que o contexto afirme claramente de outro modo.
[0082] Conforme aqui utilizado, o termo "entidade de aminoácido" se refere a um aminoácido levo (L) na forma livre ou forma de sal (ou ambos), ao resíduo de aminoácido L em um peptídeo menor do que 20 resíduos de aminoácido (por exemplo, oligopeptídeo, por exemplo, um dipeptídeo ou tripeptídeo), um derivado do aminoácido, um precursor do aminoácido ou um metabólito do aminoácido (ver, por exemplo, Tabela 1). Uma entidade de aminoácido inclui um derivado do aminoácido, um precursor do aminoácido, um metabólito do aminoácido ou uma forma de sal do aminoácido que é capaz de efetuar a funcionalidade biológica do aminoácido L livre. Uma entidade de aminoácido não inclui um polipeptídeo ou proteína de ocorrência natural com mais de 20 resíduos de aminoácidos, seja na forma inteira ou modificada, por exemplo, forma hidrolisada.
[0083] Sais de aminoácidos incluem qualquer sal de ingestão. Para composições farmacêuticas, a forma de sal de um aminoácido presente na composição (por exemplo, a Porção Ativa) deve ser um sal farmaceuticamente aceitável. Em um exemplo específico, a forma de sal está na forma de sal de cloridrato (HCl) do aminoácido.
[0084] Em algumas modalidades, o derivado de uma entidade de aminoácido compreende um éster de aminoácido (por exemplo, um éster alquílico, por exemplo, um éster etílico ou um éster metílico de uma entidade de aminoácido) ou um cetoácido. Tabela 1. As entidades de aminoácidos incluem aminoácidos, precursores, metabólitos e derivados das composições aqui descritas. Aminoácido Precursores Metabólitos Derivados Exempli-ficativo Leucina L-Leucina Oxo-leucina HMB (beta- N-Acetil-leucina hidróxi-beta- metibutirato); Oxo- leucina; Isovaleril- CoA Arginina L-Arginina Argininos- Agmatina; N-Acetil- succinato; Creatina Arginina Aspartato; Glutamato Glutamina L-Glutamina Glutamato Glutamato N-Acetil- Glutamina NAC N-Acetilcisteína Serina; Glutationa; Cistina; Acetilserina; Cistationina; Cisteamina Cistationina Homocisteína; Metionina Citrulina L-Citrulina - Argininossuccina- N-hidroxil- to, arginina Óxido nítrico
Carnitina L-Carnitina 6-N-Trimetil- Acetil-L- lisina; N6- Carnitina Trimetil-3-OH- (ALCAR); lisina Propionil-L- Carnitina (PLCAR); L- Tartarato de L- Carnitina Serina L-Serina Fosfosserina, Glicina, Triptofano P- Acetilserina, hidroxipiruvato, Cistationa, L-Glicina Fosfatidilserina Valina L-Valina 2-Oxo-valerato Isobutiril-CoA N-acetil-Valina Histid-ina L-Histidina Histidinol; Carnosina; N-Acetil- Histidinal; Histamina; Histidina Ribose-5- Urocanato fosfato Lisina L-Lisina Diaminopi- Trimetil-lisina; N-Acetil-Lisina melato; Sacaropina Aspartato Glicina L-Glicina Serina, Glutationa, Serina Sarcosina, Creatina Betaína, Dimetilglicina,
[0085] "Cerca de" e "aproximadamente" devem, de modo geral, significar um grau aceitável de erro para a quantidade medida dada a natureza ou precisão das medições. Graus exemplificativos de erro estão dentro de 15 por cento (%), tipicamente, dentro de 10% e, mais tipicamente, dentro de 5% de um dado valor ou gama de valores.
[0086] Um "aminoácido" se refere a um composto orgânico com um grupo amino (-NH2), um grupo ácido carboxílico (-C(=O)OH) e uma cadeia lateral ligada através de um átomo de carbono central e inclui aminoácidos essenciais e não essenciais e aminoácidos naturais, não proteinogênicos e não naturais.
[0087] Conforme aqui utilizado, o termo "Porção Ativa" significa uma combinação de dois ou mais aminoácidos que, em agregado, têm a capacidade de ter um efeito biológico ou terapêutico, conforme aqui descrito, por exemplo, um efeito na função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; ou função vascular. Por exemplo, uma Porção Ativa pode reequilibrar uma disfunção metabólica em um indivíduo que sofre de uma doença ou distúrbio. Uma Porção Ativa da invenção pode conter outros ingredientes biologicamente ativos. Em alguns exemplos, a Porção Ativa compreende uma combinação definida de quatro ou mais entidades de aminoácidos, conforme descrita em detalhe abaixo. Em outras modalidades, a Porção Ativa consiste em uma combinação definida de entidades de aminoácidos, conforme descrita em detalhe abaixo.
[0088] As entidades de aminoácidos individuais estão presentes na composição, por exemplo, Porção Ativa, em várias quantidades ou razões, que podem ser apresentadas como quantidades em peso (por exemplo, em gramas), razão em peso das entidades de aminoácidos entre si, quantidade em moles, quantidade em porcentagem em peso da composição, conteúdo calórico, porcentagem de contribuição calórica para a composição, etc. Geralmente, esta descrição proporcionará gramas de entidade de aminoácido em uma forma de dosagem, porcentagem em peso de uma entidade de aminoácido em relação ao peso da composição, isto é, o peso de todas as entidades de aminoácidos e qualquer outro ingrediente biologicamente ativo presente na composição, ou em razões. Em algumas modalidades, a composição, por exemplo, Porção Ativa, é proporcionada como uma preparação farmaceuticamente aceitável (por exemplo, um produto farmacêutico).
[0089] O termo "quantidade eficaz", conforme aqui utilizado, significa uma quantidade de um ativo da invenção em uma composição da invenção, particularmente uma composição farmacêutica da invenção, que é suficiente para reduzir um sintoma e/ou melhorar uma afeção a ser tratada (por exemplo, proporcionar uma resposta clínica desejada). A quantidade eficaz de um ativo para uso em uma composição variará com a afeção particular que é tratada, a gravidade da afeção, a duração do tratamento, a natureza da terapia concomitante, o ativo particular que é empregue, o(s) excipiente(s) e/ou veículo(es) farmaceuticamente aceitável(is) particular(es) utilizado(s) e fatores semelhantes dentro do conhecimento e perícia do médico responsável.
[0090] Uma "composição farmacêutica" aqui descrita compreende pelo menos uma "Porção Ativa" e um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é utilizada como um terapêutico. Outras composições, que não precisam atender aos padrões farmacêuticos (GMP; componentes de grau farmacêutico), podem ser utilizadas como um nutracêutico, um alimento médico ou como um suplemento, sendo denominadas "composições de saúde do consumidor".
[0091] O termo "farmaceuticamente aceitável", conforme aqui utilizado, se refere a aminoácidos, materiais, excipientes, composições e/ou formas de dosagem que são, dentro do escopo do julgamento médico sensato, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação excessivos, compatível com uma razão risco/benefício razoável. Em uma modalidade específica, "farmaceuticamente aceitável" significa livre de endotoxina detectável ou os níveis de endotoxina estão abaixo dos níveis aceitáveis em produtos farmacêuticos.
[0092] Em uma modalidade específica, "farmaceuticamente aceitável" significa um padrão utilizado pela indústria farmacêutica ou por agências ou entidades (por exemplo, agências ou entidades governamentais ou comerciais), que regulam a indústria farmacêutica, para garantir que um ou mais parâmetros de qualidade do produto estejam dentro de gamas aceitáveis para um medicamento, composição farmacêutica, tratamento ou outro agente terapêutico. Um parâmetro de qualidade de produto pode ser qualquer parâmetro regulado pela indústria farmacêutica ou por agências ou entidades, por exemplo, agências ou entidades governamentais ou comerciais, incluindo, mas não se limitando a, composição; uniformidade da composição; dosagem; uniformidade da dosagem; presença, ausência e/ou nível de contaminantes ou impurezas; e nível de esterilidade (por exemplo, a presença, ausência e/ou nível de micróbios). Agências reguladoras governamentais exemplificativas incluem: Administração Federal de Medicamentos (FDA, do inglês Federal Drug Administration), Agência Europeia de Medicamentos (EMA, do inglês European Medicines Agency), SwissMedic, Administração de Alimentos e Fármacos da China (CFDA, do inglês China Food and Drug Administration) ou Agência de Produtos Farmacêuticos e Equipamentos Médicos do Japão (PMDA, do inglês Japanese Pharmaceuticals and Medical Devices Agency).
[0093] O termo "excipiente farmaceuticamente aceitável" se refere a um ingrediente em uma formulação farmacêutica, diferente de um ativo, que é fisiologicamente compatível. Um excipiente farmaceuticamente aceitável pode incluir, mas não se limita a, um tampão, um adoçante, um intensificador de dispersão, um agente saborizante, um agente mascarador do sabor amargo, um corante natural, um corante artificial, um estabilizador, um solvente ou um conservante. Em uma modalidade específica, um excipiente farmaceuticamente aceitável inclui um ou ambos de ácido cítrico ou lecitina.
[0094] O termo "componente de proteína de entidade não aminoácido", conforme aqui utilizado, se refere a um peptídeo (por exemplo, um polipeptídeo ou um oligopeptídeo), a um seu fragmento ou a um peptídeo degradado Componentes de proteína de entidade não aminoácido exemplificativos incluem, mas não se limitam a, um ou mais de proteína de soro de leite, proteína da clara de ovo, proteína de soja, caseína, proteína de cânhamo, proteína de ervilha, proteína de arroz integral, ou um fragmento ou peptídeo degradado destes.
[0095] O termo "componente não proteico", conforme aqui utilizado, se refere a qualquer componente de uma composição diferente de um componente proteico. Componentes não proteicos exemplificativos podem incluir, mas não se limitam a, um sacarídeo (por exemplo, um monossacarídeo (por exemplo, dextrose, glicose ou frutose), um dissacarídeo, um oligossacarídeo ou um polissacarídeo); um lipídio (por exemplo, um lipídio contendo enxofre (por exemplo, ácido alfalipoico), um triglicerídeo de cadeia longa, um ácido graxo ômega 3 (por exemplo, EPA, DHA, STA, DPA ou ALA), um ácido graxo ômega 6 ( GLA, DGLA ou LA), um triglicerídeo de cadeia média ou um ácido graxo de cadeia média); uma vitamina (por exemplo, vitamina A, vitamina E, vitamina C, vitamina D, vitamina B6, vitamina B12, biotina ou ácido pantotênico); um mineral (zinco, selênio, ferro, cobre, folato, fósforo, potássio, manganês, crômio, cálcio ou magnésio); ou um esterol (por exemplo, colesterol).
[0096] Uma composição, formulação ou produto é "terapêutico" se proporcionar um efeito clínico desejado. Um efeito clínico desejado pode ser mostrado diminuindo a progressão de uma doença e/ou aliviando um ou mais sintomas da doença.
[0097] Uma "dose unitária" ou "dosagem unitária" compreende o produto de fármaco ou produtos de fármacos na forma em que são comercializados para uso, com uma mistura específica dos componentes ativos e inativos (excipientes), em uma configuração particular (por exemplo invólucro de cápsula, por exemplo) e repartidos em uma dose particular (por exemplo, em embalagens de múltiplos sticks).
[0098] Conforme aqui utilizado, os termos "tratar", "tratando" ou "tratamento" de uma hemoglobinopatia (por exemplo, doença falciforme) ou uma talassemia referem-se a melhorar uma hemoglobinopatia ou talassemia (por exemplo, desacelerar, interromper ou reduzir o desenvolvimento de uma hemoglobinopatia ou talassemia ou, pelo menos, um dos seus sintomas clínicos); aliviar ou melhorar pelo menos um parâmetro físico, incluindo aqueles que podem não ser discerníveis pelo paciente; e/ou prevenir ou retardar o início ou desenvolvimento ou progressão de uma hemoglobinopatia (p, ex,, doença falciforme) ou talassemia.
[0099] Um "tempo suficiente" ou "suficiente tempo", conforme aqui utilizado no contexto de mistura, significa um tempo suficiente para obter uniformidade de mistura e de composição sem gerar impurezas ou induzir heterogeneidade.
[00100] Uma preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, aqui descrita pode ser formulada como uma "composição farmacêutica". Uma "composição farmacêutica", conforme aqui descrita, compreende pelo menos uma entidade de aminoácido, por exemplo, uma Porção Ativa, e um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é utilizada como um alimento terapêutico ou médico. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é utilizada como um nutracêutico ou como um suplemento.
[0100] O termo "grau farmacêutico", conforme aqui utilizado, se refere a aminoácidos, materiais, excipientes, composições e/ou formas de dosagem que são, dentro do escopo do julgamento médico sensato, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação excessivos, compatível com uma razão risco/benefício razoável. Em algumas modalidades, grau farmacêutico significa que os aminoácidos, materiais ou excipientes atendem às especificações de uma monografia, por exemplo, uma monografia da Farmacopeia dos Estados Unidos (USP), do Formulário Nacional (NF), da Farmacopeia Britânica (BP), da Farmacopeia Europeia (EP) ou da Farmacopeia Japonesa (JP) detalhando testes e critérios de aceitação. Em algumas modalidades, o significado de grau farmacêutico compreende que os aminoácidos, excipientes ou materiais são, pelo menos, 99% puros.
[0101] Uma preparação de mistura a seco, conforme aqui utilizada, significa uma combinação de uma pluralidade de entidades de aminoácidos que, substancialmente, carece de água. Em algumas modalidades, uma preparação de mistura a seco é um pó. Em algumas modalidades, uma preparação de mistura a seco compreende menos do que, ou igual a, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1% de água em peso. Em algumas modalidades, uma preparação de mistura a seco compreende, pelo menos, 4 entidades de aminoácidos, por exemplo, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ou 20 entidades de aminoácidos.
[0102] Uma preparação de mistura a seco de grau farmacêutico (PGDBP), conforme aqui utilizada, é uma preparação de mistura a seco que atende a um padrão de referência (por exemplo, um ou mais padrões de referência) e compreende uma pluralidade de entidades de aminoácidos de grau farmacêutico. Uma PGDBP pode ser formulada como uma composição farmacêutica, por exemplo, a PGDBP pode compreender ainda um ou mais excipientes e/ou componentes de administração oral. Em algumas modalidades, um padrão de referência atendido por uma PGDBP é a uniformidade de composição.
[0103] A uniformidade de composição, conforme aqui utilizada, é um padrão para a homogeneidade de um componente de uma combinação, por exemplo, uma preparação de mistura a seco, por exemplo, uma PGDBP, que compreende uniformidade de mistura,
uniformidade de fração ou ambas. Em algumas modalidades, uma combinação atende a um padrão para uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de mistura, se a quantidade de um componente (por exemplo, uma entidade de aminoácido, excipiente ou componente de administração oral de grau farmacêutico) em um ponto de amostragem na combinação diferir de um valor de referência em menos de uma quantidade predeterminada. Em algumas modalidades, o valor de referência é a quantidade do componente em um segundo ponto de amostragem na combinação. Em algumas modalidades, o valor de referência é a quantidade do componente (por exemplo, uma entidade de aminoácido, excipiente ou componente de administração oral de grau farmacêutico) presente na combinação (por exemplo, uma preparação de mistura a seco, por exemplo, uma PGDBP).
[0104] Em algumas modalidades, em que uma combinação (por exemplo, uma preparação de mistura a seco, por exemplo, uma PGDBP) é dividida em frações, as frações da combinação atendem a um padrão para uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de fração, se a quantidade de um componente (por exemplo, uma entidade de aminoácido, excipiente ou componente de administração oral de grau farmacêutico) em uma fração diferir de um valor de referência em menos de uma quantidade predeterminada. Em algumas modalidades, o valor de referência é a quantidade do componente em uma segunda fração. Em algumas modalidades, o valor de referência compreende a quantidade do componente em N frações adicionais, em que é, pelo menos, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, ou 100. Em algumas modalidades, o valor de referência é a quantidade do componente (por exemplo, uma entidade de aminoácido, excipiente ou componente de administração oral de grau farmacêutico) presente na combinação (por exemplo, uma preparação de mistura a seco, por exemplo, uma PGDBP). As quantidades podem ser absolutas (por exemplo, massa ou peso) ou relativas (por exemplo, porcentagem dos componentes totais). Em algumas modalidades, a quantidade predeterminada pode ser 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, ou 1%, por exemplo, do valor de referência. Em algumas modalidades, a quantidade predeterminada é 10% (por exemplo, a quantidade do componente difere do valor de referência em menos de 10%).
[0105] Fracionamento, conforme aqui utilizado, significa a divisão de toda ou parte da preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, em frações para administração a um paciente ou indivíduo. As frações criadas por fracionamento podem ser proporcionadas em sachês, frascos ou outros recipientes, por exemplo, embalagens stick. Em uma modalidade, as frações criadas por fracionamento são quantidades de dosagem unitária, por exemplo, uma dosagem unitária ou uma fração de uma dosagem unitária (por exemplo, uma embalagem stick pode compreender metade de uma dose unitária, de modo que duas embalagens stick seriam utilizadas em conjunto para proporcionar uma dose unitária única). Em algumas modalidades, apenas PGDBP (por exemplo, que atendem a um padrão de referência) são separadas em frações por meio de fracionamento. Em algumas modalidades, as frações geradas por fracionamento também atendem a um padrão de referência. Composições compreendendo Entidades de Aminoácidos (por exemplo, Porções Ativas)
[0106] A composição da invenção conforme aqui descrita (uma Porção Ativa) compreende entidades de aminoácidos, por exemplo, as entidades de aminoácidos mostradas na Tabela 1. Em algumas modalidades, a composição compreende: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; d) uma entidade de N-
acetilcisteína (NAC); e e) uma entidade de aminoácido de glicina. Em algumas modalidades, a composição compreende: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; d) uma entidade de NAC; e e) uma entidade de carnitina. Em algumas modalidades, a composição compreende: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; d) uma entidade de NAC; e e) uma entidade de aminoácido de glicina e uma entidade de carnitina. Em algumas modalidades, a composição compreende ainda um, dois ou mais (por exemplo, todos) de (f) uma entidade de aminoácido de valina, (g) uma entidade de aminoácido de histidina ou (h) uma entidade de aminoácido de lisina.
[0107] Em algumas modalidades, a composição compreende: (A) um ou ambos de uma entidade de aminoácido de citrulina ou uma entidade de aminoácido de arginina e (b) uma entidade de NAC. Em algumas modalidades, a composição compreende ainda um ou ambos de uma entidade de carnitina ou uma entidade de glutamina. Em algumas modalidades, a composição compreende ainda um, dois, três, quatro ou mais (por exemplo, todos) de uma entidade de aminoácido de leucina, uma entidade de aminoácido de histidina, uma entidade de aminoácido de lisina, uma entidade de aminoácido de valina ou uma entidade de aminoácido de serina.
[0108] Em certas modalidades, a entidade de aminoácido de leucina é escolhida de L-leucina, β-hidróxi-β-metilbutirato (HMB), oxo- leucina (α-cetoisocaproato (KIC)), isovaleril-CoA, n-acetil-leucina ou uma combinação destes.
[0109] Em certas modalidades, a entidade de aminoácido de arginina é escolhida de L-arginina, creatina, argininossuccinato, aspartato, glutamato, agmatina, N-acetil-arginina ou uma combinação destes.
[0110] Em certas modalidades, a entidade de aminoácido de glutamina é escolhida de L-glutamina, glutamato, carbamoil-P, n- acetilglutamina ou uma combinação destes.
[0111] Em certas modalidades, a entidade de aminoácido NAC é escolhida de NAC, serina, acetilserina, cistationina, homocisteína, glutationa ou uma combinação destes.
[0112] Em certas modalidades, a entidade de aminoácido de citrulina é escolhida de L-citrulina, ornitina, carbamoil-P, carbamoil-P e ornitina, N-hidroxil-arginina, argininossuccinato, óxido nítrico ou uma combinação destes.
[0113] Em certas modalidades, a entidade de carnitina é escolhida de L-carnitina, 6-N-trimetil-lisina, N6-trimetil-3-OH-lisina, acetil-L- carnitina, propionil-L-carnitina, L-tartarato de L-carnitina ou uma combinação destes.
[0114] Em certas modalidades, a entidade de aminoácido de serina é escolhida de L-serina, fosfosserina, p-hidroxipiruvato, L-glicina, acetilserina, cistationina, fosfatidilserina ou uma combinação destes.
[0115] Em certas modalidades, a entidade de aminoácido de glicina é escolhida de L-glicina, L-serina, sarcosina, betaína, dimetilglicina, glutationa, creatina ou uma combinação destes.
[0116] Em certas modalidades, a entidade de aminoácido de valina é escolhida de L-valina, 2-oxo-valerato, isobutril-CoA, N-acetil-valina ou uma combinação destes.
[0117] Em certas modalidades, a entidade de aminoácido de histidina é escolhida de L-histidina, histidinol, histidinal, ribose-5-fosfato, carnosina, histamina, urocanato, N-acetil-histidina ou uma combinação destes.
[0118] Em certas modalidades, a entidade de aminoácido de lisina é escolhida de L-lisina, diaminopimelato, aspartato, trimetil-lisina, sacaporina, N-acetil-lisina ou uma combinação destes.
[0119] Em algumas modalidades, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(h) estão na forma de aminoácido livre na composição, por exemplo, pelo menos: 42% em peso, 75% em peso ou 90% em peso do peso total dos componentes de entidade de aminoácido, ou componentes totais, é um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(h) na forma de aminoácido livre na composição (por exemplo, na forma seca).
[0120] Em algumas modalidades, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(h) estão na forma de sal na composição, por exemplo, pelo menos: 0,01% em peso, 0,1% em peso, 0,5% em peso, 1% em peso, 5% em peso ou 10% em peso ou mais do peso total dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais é um, dois, três, quatro, cinco ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(f) na forma de sal na composição.
[0121] Em algumas modalidades, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(h) são proporcionados como parte de um dipeptídeo ou tripeptídeo, por exemplo, em uma quantidade de, pelo menos: 0,01 em peso %, 0,1 em peso %, 0,5 em peso %, 1 em peso %, 5 em peso %, ou 10 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais da composição.
[0122] Em algumas modalidades, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(j) estão na forma de aminoácido livre na composição, por exemplo, pelo menos: 42 em peso %, 45 em peso %, 50 em peso %, 55 em peso %, 60 em peso %, 65 em peso %, 70 em peso %, 75 em peso %, 80 em peso %, 85 em peso %, 90 em peso %, 95 em peso %, 97 em peso %, 98 em peso % ou mais do peso total da composição (por exemplo, na forma seca) é um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(j) na forma de aminoácido livre na composição.
[0123] Em algumas modalidades, um, dois, três, quatro, cinco, seis,
sete, oito, nove ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(j) estão na forma de sal na composição, por exemplo, pelo menos: 0,01 em peso %, 0,1 em peso %, 0,5 em peso %, 1 em peso %, 2 em peso %, 3 em peso %, 4 em peso %, 5 em peso %, 6 em peso %, 7 em peso %, 8 em peso %, 9 em peso %, ou 10 em peso % ou mais do peso total da composição (por exemplo, na forma seca) é um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(j) na forma de sal na composição.
[0124] Em algumas modalidades, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(j) são proporcionados como parte de um dipeptídeo ou tripeptídeo, por exemplo, em uma quantidade de, pelo menos: .01 em peso %, 0,1 em peso %, 0,5 em peso %, 1 em peso %, 2 em peso %, 3 em peso %, 4 em peso %, 5 em peso %, 6 em peso %, 7 em peso %, 8 em peso %, 9 em peso %, ou 10 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais da composição.
[0125] Em certas modalidades, a composição (por exemplo, a Porção Ativa) tem a capacidade de diminuir, ou diminui, a inflamação em, pelo menos, 60%, 75% ou 90%, conforme detectado utilizando um ensaio de IL-6, por exemplo, em macrófagos, por exemplo, utilizando um ensaio de detecção à base de anticorpo, por exemplo, um ELISA, por exemplo, conforme descrito no Exemplo 1, por exemplo, relativo uma composição de referência (por exemplo, um controle de veículo; uma composição de aminoácido compreendendo L-leucina, L- isoleucina, L-valina; uma composição de aminoácido compreendendo L-leucina, L-isoleucina, L-valina, L-arginina e L-glutamina; L-arginina sozinha; L-glutamina sozinha; L-leucina sozinha; ou L-valina sozinha).
[0126] Em certas modalidades, a composição (por exemplo, a Porção Ativa) tem a capacidade de diminuir, ou diminui, a inflamação em, pelo menos, 60%, 75% ou 90%, conforme detectado utilizando um ensaio de TNFα, por exemplo, em macrófagos, por exemplo, utilizando um ensaio de detecção à base de anticorpo, por exemplo, um ELISA, por exemplo, conforme descrito no Exemplo 1, por exemplo, relativo a uma composição de referência (por exemplo, um controle de veículo; uma composição de aminoácido compreendendo L-leucina, L- isoleucina, L-valina; uma composição de aminoácido compreendendo L-arginina, L-glutamina e NAC; uma composição de aminoácido compreendendo L-leucina, L-isoleucina, L-valina, L-arginina e L- glutamina; valina; glutamina; arginina; isoleucina; leucina; ou NAC). i. Quantidades
[0127] Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção Ativa) pode incluir 1,2 g de uma entidade de aminoácido de leucina; 1,5 g de uma entidade de aminoácido de arginina; 3,67 g de uma entidade aminoácido de glutamina; 0,4 g de uma entidade de NAC; 0,33 g de uma entidade de carnitina; 0,9 g de uma entidade de aminoácido de glicina; 0,6 g de uma entidade de aminoácido de valina; 0,6 g de uma entidade de aminoácido de histidina; e 0,6 g de uma entidade de aminoácido de lisina (ver, por exemplo, g/dose na Tabela 2). Uma composição exemplificativa pode incluir 0,6 g de uma entidade de aminoácido de leucina; 0,75 g de uma entidade de aminoácido de arginina; 1,83 g de uma entidade de aminoácido de glutamina; 0,2 g de uma entidade de NAC; 0,17 g de uma entidade de carnitina; 0,45 g de uma entidade de aminoácido de glicina; 0,3 g de uma entidade de aminoácido de valina; 0,3 g de uma entidade de aminoácido de histidina; e 0,3 g de uma entidade de aminoácido de lisina. Tabela 2. Composição exemplificativa compreendendo aminoácidos (por exemplo, uma Porção Ativa) Total Razão em % em Aminoácido Dose (g) Diário Peso Peso L-leucina 3,6 7,2 3,6 12,24 L-arginina 4,5 9 4,5 15,31
L-glutamina 11 22 11 37,41 NAC 1,2 2,4 1,2 4,08 L-carnitina 1 2 1 3,40 L-glicina 2,7 5,4 2,7 9,18 L-valina 1,8 3,6 1,8 6,12 L-histidina 1,8 3,6 1,8 6,12 L-lisina 1,8 3,6 1,8 6,12 Aminoácidos totais 29,4 58,8
[0128] Em algumas modalidades, a composição inclui 1,2 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina; 1,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina; 3,67 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina; 0,4 g de uma entidade de NAC; 0,33 g +/- 20% de uma entidade de carnitina; 0,9 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glicina; 0,6 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina; 0,6 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina; e 0,6 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina. Em algumas modalidades, a composição inclui 1,2 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de leucina; 1,5 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de arginina; 3,67 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de glutamina; 0,4 g de uma entidade de NAC; 0,33 g +/- 15% de uma entidade de carnitina; 0,9 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de glicina; 0,6 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de valina; 0,6 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de histidina; e 0,6 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de lisina. Em algumas modalidades, a composição inclui 1,2 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de leucina; 1,5 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de arginina; 3,67 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de glutamina; 0,4 g de uma entidade de NAC; 0,33 g +/- 10% de uma entidade de carnitina; 0,9 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de glicina; 0,6 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de valina; 0,6 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de histidina; e 0,6 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de lisina. Em algumas modalidades, a composição inclui 1,2 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de leucina; 1,5 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de arginina; 3,67 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de glutamina; 0,4 g de uma entidade de NAC; 0,33 g +/- 5% de uma entidade de carnitina; 0,9 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de glicina; 0,6 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de valina; 0,6 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de histidina; e 0,6 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de lisina.
[0129] Em algumas modalidades, a composição inclui 0,6 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina; 0,75 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina; 1,83 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina; 0,2 g +/- 20% de uma entidade de NAC; 0,17 g +/- 20% de uma entidade de carnitina; 0,45 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glicina; 0,3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina; 0,3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina; e 0,3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina. Em algumas modalidades, a composição inclui 0,6 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de leucina; 0,75 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de arginina; 1,83 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de glutamina; 0,2 g +/- 15% de uma entidade de NAC; 0,17 g +/- 15% de uma entidade de carnitina; 0,45 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de glicina; 0,3 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de valina; 0,3 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de histidina; e 0,3 g +/- 15% de uma entidade de aminoácido de lisina. Em algumas modalidades, a composição inclui 0,6 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de leucina; 0,75 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de arginina; 1,83 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de glutamina; 0,2 g +/- 10% de uma entidade de NAC; 0,17 g +/- 10% de uma entidade de carnitina; 0,45 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de glicina; 0,3 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de valina; 0,3 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de histidina; e 0,3 g +/- 10% de uma entidade de aminoácido de lisina. Em algumas modalidades, a composição inclui 0,6 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de leucina; 0,75 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de arginina; 1,83 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de glutamina; 0,2 g +/- 5% de uma entidade de NAC; 0,17 g +/- 5% de uma entidade de carnitina; 0,45 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de glicina; 0,3 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de valina; 0,3 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de histidina; e 0,3 g +/- 5% de uma entidade de aminoácido de lisina. ii. Razões
[0130] Uma composição exemplificativa pode incluir uma razão em peso entre a entidade de aminoácido de leucina, a entidade de aminoácido de arginina, a entidade de aminoácido de glutamina e a entidade de NAC de 3,6 : 4,5 : 11: 1,2. Em algumas modalidades, a razão em peso entre a entidade de aminoácido de leucina, a entidade de aminoácido de arginina, a entidade de aminoácido de glutamina e a entidade de NAC é 3,6 +/-15% : 4,5 +/-15% : 11 +/-15% : 1,2 +/-15%. Em algumas modalidades, a razão em peso entre a entidade de aminoácido de leucina, a entidade de aminoácido de arginina, a entidade de aminoácido de glutamina e a entidade de NAC é 3,6 +/-10% : 4,5 +/-10% : 11 +/-10% : 1,2 +/-10%. Em algumas modalidades, a razão em peso entre a entidade de aminoácido de leucina, a entidade de aminoácido de arginina, a entidade de aminoácido de glutamina e a entidade de NAC é 3,6 +/-5% : 4,5 +/-5% : 11 +/-5% : 1,2 +/-5%.
[0131] Uma composição exemplificativa pode incluir uma razão em peso entre a entidade de aminoácido de leucina, a entidade de aminoácido de arginina, a entidade de aminoácido de glutamina, a entidade de NAC, a entidade de carnitina e a entidade de aminoácido de glicina de 3,6 : 4,5 : 11: 1,2: 1: 2,7. Em algumas modalidades, a razão em peso entre a entidade de aminoácido de leucina, a entidade de aminoácido de arginina, a entidade de aminoácido de glutamina, a entidade de NAC, a entidade de carnitina e a entidade de aminoácido de glicina é 3,6 +/-15% : 4,5 +/-15% : 11 +/-15% : 1,2 +/-15% : 1 +/-15% : 2,7 +/-15%. Em algumas modalidades, a razão em peso entre a entidade de aminoácido de leucina, a entidade de aminoácido de arginina, a entidade de aminoácido de glutamina, a entidade de NAC, a entidade de carnitina e a entidade de aminoácido de glicina é 3,6 +/- 10% : 4,5 +/-10% : 11 +/-10% : 1,2 +/-10% : 1 +/-10% : 2,7 +/-10%. Em algumas modalidades, a razão em peso entre a entidade de aminoácido de leucina, a entidade de aminoácido de arginina, a entidade de aminoácido de glutamina, a entidade de NAC, a entidade de carnitina e a entidade de aminoácido de glicina é 3,6 +/-5% : 4,5 +/-5% : 11 +/-5% : 1,2 +/-5% : 1 +/-5% : 2,7 +/-5%. iii. Relações de Entidades de Aminoácidos
[0132] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de arginina, da entidade de aminoácido de glutamina e da entidade de NAC é, pelo menos: 40% em peso, 50% em peso ou 60% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 80% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0133] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de arginina, da entidade de aminoácido de glutamina, da entidade de NAC, da entidade de carnitina e da entidade de aminoácido de glicina é, pelo menos: 50% em peso, 60% em peso ou 70% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 95% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0134] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de NAC é, pelo menos: 2% em peso, 3% em peso ou 4% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 10% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0135] Em algumas modalidades, a entidade de aminoácido glutamina está presente em uma % em peso maior do que um, dois ou mais (por exemplo, todos) de qualquer outra entidade de aminoácido, componente de proteína de entidade não aminoácido ou componente não proteico na composição (por exemplo, na forma seca). Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina é, pelo menos: 20% em peso, 30% em peso ou 35% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 70% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0136] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de carnitina é, pelo menos: 1% em peso, 2% em peso ou 3% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 10% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0137] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de glicina é, pelo menos: 3% em peso, 5% em peso ou 7% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 20% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0138] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido glutamina na composição (por exemplo, na forma seca) é maior do que a % em peso da entidade de aminoácido leucina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido glutamina na composição (por exemplo, na forma seca) é, pelo menos, 30% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido leucina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido glutamina é, pelo menos, 40%, 50% ou 60% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de leucina.
[0139] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina na composição (por exemplo, na forma seca) é maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de arginina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina na composição (por exemplo, na forma seca) é, pelo menos, 25% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de arginina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina é, pelo menos, 35%, 45% ou 55% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de arginina.
[0140] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de glicina na composição (por exemplo, na forma seca) é maior do que a % em peso da entidade de carnitina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de glicina na composição (por exemplo, na forma seca) é, pelo menos, 30% maior do que a % em peso da entidade de carnitina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de glicina é, pelo menos, 40%, 50% ou 60% maior do que a % em peso da entidade de carnitina. iv. Moléculas de Aminoácidos a Excluir ou Limitar da Composição
[0141] Em algumas modalidades, a composição não compreende um peptídeo com mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, suplemento de proteína) escolhido ou derivado de um,
dois, três, quatro, cinco ou mais (por exemplo, todos) de proteína da clara de ovo, proteína de soja, caseína, proteína de cânhamo, proteína de ervilha ou proteína de arroz integral ou, se o peptídeo estiver presente, o peptídeo está presente em menos de: 10% em peso, 5% em peso, 1% em peso, 0,1% em peso, 0,05% em peso, 0,01% em peso do peso total dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0142] Em algumas modalidades, a composição compreende uma combinação de 3 a 18, 3 a 16 ou 3 a 14 entidades de aminoácidos diferentes, por exemplo, a combinação compreende, pelo menos: 42% em peso, 75% em peso ou 90% em peso da % em peso total dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0143] Em algumas modalidades, dipeptídeos ou seus sais, ou tripeptídeos ou seus sais, estão presentes a menos de: 10% em peso, 0,5% em peso, 0,1% em peso, 0,05% em peso, 0,01% em peso, 0,001% em peso ou menos, do peso total dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0144] Em algumas modalidades, pelo menos 50%, 60%, 70% ou mais das gramas totais dos componentes de entidade de aminoácido na composição (por exemplo, na forma seca) são de um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(h).
[0145] Em algumas modalidades, pelo menos: 50%, 60%, 70% ou mais das calorias dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca) são de um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(h).
[0146] Em algumas modalidades, o triptofano está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10 em peso
%, 9 em peso %, 8 em peso %, 7 em peso %, 6 em peso %, 5 em peso %, 4 em peso %, 3 em peso %, 2 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (por exemplo na forma seca); Em algumas modalidades, o triptofano, se presente, está presente na forma livre. Em algumas modalidades, o triptofano, se presente, está presente na forma de sal. Em algumas modalidades, o triptofano, se presente, pode estar presente em um oligopeptídeo, polipeptídeo ou proteína, com a condição de que a proteína não é de soro, caseína, lactalbumina ou qualquer outra proteína utilizada como suplemento nutricional, alimento médico ou produto similar, se presente como proteína intacta ou hidrolisado de proteína. Em algumas modalidades, a metionina está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10 em peso %, 5 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (na forma seca). Em algumas modalidades, a prolina está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10 em peso %, 5 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (na forma seca). Em algumas modalidades, um, dois, ou três de metionina, prolina ou triptofano está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10 em peso %, 5 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (na forma seca).
[0147] Em algumas modalidades, um carboidrato (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou 18 de dextrose, maltodextrose, sacarose, dextrina, frutose,
galactose, glicose, glicogênio, xarope de milho com alto teor de frutose, mel, inositol, açúcar invertido, lactose, levulose, maltose, melaço, cana- de-açúcar ou xilose) está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de:: 10 em peso %, 5 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (na forma seca).
[0148] Em algumas modalidades, uma vitamina (por exemplo, um, dois, três, quatro, cinco, seis ou sete de vitamina B1, vitamina B2, vitamina B3, vitamina B6, vitamina B12, vitamina C ou vitamina D) está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10 em peso %, 5 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (na forma seca).
[0149] Em algumas modalidades, um ou ambos de nitrato ou nitrito está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10 em peso %, 5 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (na forma seca).
[0150] Em algumas modalidades, a 4-hidróxi-isoleucina está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10 em peso %, 5 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (na forma seca).
[0151] Em algumas modalidades, um probiótico (por exemplo, um probiótico de Bacillus) está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10 em peso %, 5 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (na forma seca).
[0152] Em algumas modalidades, o fenilacetato está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10 em peso %, 5 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (na forma seca).
[0153] Em algumas modalidades, a gelatina (por exemplo, uma cápsula de gelatina) está ausente da composição ou, se presente, está presente em menos de: 10 em peso %, 5 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (na forma seca).
[0154] Em algumas modalidades, um, dois ou três de S-alilcisteína, S-alilmercaptocisteína ou frutosil-arginina estão ausentes da composição ou, se presentes, estão presentes em menos de: 10 em peso %, 5 em peso %, 1 em peso %, 0,5 em peso %, 0,1 em peso %, 0,05 em peso %, 0,01 em peso %, 0,001 em peso % ou menos, por exemplo, do peso total da composição (na forma seca). v. Quantidades e Razões
[0155] Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção Ativa) pode incluir 0,6 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina, 1,4 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina, 1,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina, 0,26 g +/- 20% de uma entidade de NAC, 0,2 g +/- 20% de uma entidade de carnitina, 0,75 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de serina, 0,3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina, 0,3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina, 0,3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina e 0,9 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de citrulina (ver , por exemplo, g/embalagem stick para 5 embalagens stick administradas duas vezes ao dia na Tabela 3). Tabela 3. Composição exemplificativa compreendendo aminoácidos (por exemplo, uma Porção Ativa). Embalagem Embalagem Embalagem stick (g) (5 stick (g) (4 stick (g) (3 Total Razão % em Amino-ácido Dose (g) embalagens embalagens embalagens Diário em Peso Peso stick BID) stick BID) stick BID) L-leucina 0,6 0,75 1 3 6 3 9,22% L-arginina 1,4 1,75 2,33 7 14 7 21,51% L-glutamina 1,5 1,875 2,5 7,5 15 7,5 23,04% N-acetilcis- 0,26 0,325 0,43 1,3 2,6 1,3 3,99% teína L-carnitina 0,2 0,25 0,33 1 2 1 3,07% L-serina 0,75 0,9375 1,25 3,75 7,5 3,75 11,52% L-valina 0,3 0,375 0,5 1,5 3 1,5 4,61% L-histidina 0,3 0,375 0,5 1,5 3 1,5 4,61% L-lisina 0,3 0,375 0,5 1,5 3 1,5 4,61% L-citrulina 0,9 1,125 1,5 4,5 9 4,5 13,82% Aminoácidos 6,51 8,1375 10,85 32,55 65,1 100% totais
[0156] Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção Ativa) pode incluir 0,75 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina, 1,75 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina, 1,875 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina, 0,325 g +/- 20% de uma entidade de NAC, 0,25 g +/- 20% de uma entidade de carnitina, 0,9375 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de serina, 0,375 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina, 0,375 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina, 0,375 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina e 1,125 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de citrulina (ver , por exemplo, g/embalagem stick para 4 embalagens stick administradas duas vezes ao dia na Tabela 3).
[0157] Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção Ativa) pode incluir 1 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina, 2,33 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina, 2,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina, 0,43 g +/- 20% de uma entidade de NAC, 0,33 g +/- 20% de uma entidade de carnitina, 1,25 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de serina, 0,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina, 0,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina, 0,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina e 1,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de citrulina (ver , por exemplo, g/embalagem stick para 3 embalagens stick administradas duas vezes ao dia na Tabela 3).
[0158] Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção Ativa) pode incluir 3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina, 7 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina, 7,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina, 1,3 g +/- 20% de uma entidade de NAC, 1 g +/- 20% de uma entidade de carnitina, 3,75 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de serina, 1,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina, 1,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina, 1,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina e 4,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de citrulina (ver, por exemplo, g/dose administrada duas vezes ao dia na Tabela 3).
[0159] Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção Ativa) pode incluir 6 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina, 14 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina, 15 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina, 2,6 g +/- 20% de uma entidade de NAC, 2 g +/- 20% de uma entidade de carnitina, 7,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de serina, 3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina, 3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina, 3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina e 9 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de citrulina (ver, por exemplo, total diário na Tabela 3).
[0160] Uma composição exemplificativa pode incluir uma razão em peso entre uma entidade de aminoácido de leucina, uma entidade de aminoácido de arginina, uma entidade de aminoácido de glutamina, uma entidade de NAC, entidade de carnitina, uma entidade de aminoácido de serina, uma entidade de aminoácido de valina, uma entidade de aminoácido de histidina, uma entidade de aminoácido de lisina e uma entidade de aminoácido de citrulina de 3 +/-15% : 7 +/-15% : 7,5 +/-15% : 1,3 +/-15% : 1 +/-15% : 3,75 +/-15% : 1,5 +/-15% : 1,5 +/-15% : 1,5 +/- 15% : 4,5 +/-15% (ver, por exemplo, razão em peso na Tabela 3).
[0161] Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção Ativa) pode incluir 0,35 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina, 0,8 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina, 1 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina, 0,18 g +/- 20% de uma entidade de NAC, 0,2 g +/- 20% de uma entidade de carnitina, 0,43 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de serina, 0,18 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina, 0,18 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina, 0,18 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina e 0,52 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de citrulina (ver, por exemplo, g/embalagem stick para 5 embalagens stick administradas duas vezes ao dia na Tabela 4A). Tabela 4A. Composição exemplificativa compreendendo aminoácidos (por exemplo, uma Porção Ativa).
Embala-gem Embala-gem Embala-gem Razão stick (g) (5 stick (g) (4 stick (g) (3 Dose Total % em Aminoácido em embala-gens embala-gens embala-gens (g) Diário Peso Peso stick BID) stick BID) stick BID) L-leucina 0,35 0,44 0,58 1,75 3,5 1,94 8,71% L-arginina 0,8 1 1,33 4 8 4,44 19,90% L-glutamina 1 1,25 1,67 5 10 5,56 24,88% N-acetilcisteína 0,18 0,23 0,3 0,9 1,8 1 4,48% L-carnitina 0,2 0,25 0,33 1 2 1,11 4,98%
L-serina 0,43 0,54 0,72 2,15 4,3 2,39 10,70% L-valina 0,18 0,23 0,3 0,9 1,8 1 4,48% L-histidina 0,18 0,23 0,3 0,9 1,8 1 4,48% L-lisina 0,18 0,23 0,3 0,9 1,8 1 4,48% L-citrulina 0,52 0,65 0,87 2,6 5,2 2,89 12,94% Aminoácidos 4,02 5,025 6,7 20,1 40,2 100% totais
[0162] Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção Ativa) pode incluir 0,44 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina, 1 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina, 1,25 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina, 0,23 g +/- 20% de uma entidade de NAC, 0,25 g +/- 20% de uma entidade de carnitina, 0,54 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de serina, 0,23 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina, 0,23 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina, 0,23 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina e 0,65 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de citrulina (ver, por exemplo, g/embalagem stick para 4 embalagens stick administradas duas vezes ao dia na Tabela 4A).
[0163] Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção Ativa) pode incluir 0,58 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina, 1,33 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina, 1,67 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina, 0,3 g +/- 20% de uma entidade de NAC, 0,33 g +/- 20% de uma entidade de carnitina, 0,72 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de serina, 0,3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina, 0,3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina, 0,3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina e 0,87 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de citrulina (ver, por exemplo, g/embalagem stick para 3 embalagens stick administradas duas vezes ao dia na Tabela 4A).
[0164] Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção
Ativa) pode incluir 1,75 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina, 4 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina, 5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina, 0,9 g +/- 20% de uma entidade de NAC, 1 g +/- 20% de uma entidade de carnitina, 2,15 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de serina, 0,9 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina, 0,9 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina, 0,9 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina e 2,6 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de citrulina (ver, por exemplo, g/dose na Tabela 4A).
[0165] Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção Ativa) pode incluir 3,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina, 8 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina, 10 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina, 1,8 g +/- 20% de uma entidade de NAC, 2 g +/- 20% de uma entidade de carnitina, 4,3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de serina, 1,8 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina, 1,8 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina, 1,8 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina e 5,2 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de citrulina (ver, por exemplo, total diário na Tabela 4A).
[0166] Uma composição exemplificativa pode incluir uma razão em peso entre uma entidade de aminoácido de leucina, uma entidade de aminoácido de arginina, uma entidade de aminoácido de glutamina, uma entidade de NAC, uma entidade de carnitina, uma entidade de aminoácido de serina, uma entidade de aminoácido de valina, uma entidade de aminoácido de histidina, uma entidade de aminoácido de lisina e uma entidade de aminoácido de citrulina de 1,94 +/-15% : 4,44 +/-15% : 5,56+/-15% : 1 +/-15% : 1,11 +/-15% : 2,39 +/-15% : 1 +/-15% : 1 +/-15% : 1 +/-15% : 2,89 +/-15%. Tabela 4B. Composição exemplificativa compreendendo aminoácidos (por exemplo, uma Porção Ativa).
Embalagem Razão stick (g) ( Dose Total % em Aminoácido em 3 embalagens (g) Diário Peso Peso stick BID) L-leucina 1,0 3 6 3 11,41 L-arginina 2,0 6 12 6 22,81 L-glutamina 1,67 5 10 5 19,01 N-acetilcisteína 0,43 1,3 2,6 1,3 4,94 L-carnitina 0,333 1 2 1 3,80 L-serina 0,83 2,5 5 2,5 9,51 L-valina 0,333 1 2 1 3,80 L-histidina 0,333 1 2 1 3,80 L-lisina 0,5 1,5 3 1,5 5,70 L-citrulina 1,33 4 8 4 15,21 Aminoácidos totais 8,76 100% 26,3 52,6
[0167] Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção Ativa) pode incluir 3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina, 6 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina, 5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina, 1,3 g +/- 20% de uma entidade de NAC, 1 g +/- 20% de uma entidade de carnitina, 2,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de serina, 1 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina, 1 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de histidina, 1,5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina e 4 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de citrulina (ver, por exemplo, g/dose na Tabela 4B). Uma composição exemplificativa (por exemplo, uma Porção Ativa) pode incluir 6 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de leucina, 12 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de arginina, 10 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de glutamina, 2,6 g +/- 20% de uma entidade de NAC, 2 g +/- 20% de uma entidade de carnitina, 5 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de serina, 2 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de valina, 2 g +/-
20% de uma entidade de aminoácido de histidina, 3 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de lisina e 8 g +/- 20% de uma entidade de aminoácido de citrulina (ver, por exemplo, total diário na Tabela 4B).
[0168] Uma composição exemplificativa pode incluir uma razão em peso entre uma entidade de aminoácido de leucina, uma entidade de aminoácido de arginina, uma entidade de aminoácido de glutamina, uma entidade de NAC, uma entidade de carnitina, uma entidade de aminoácido de serina, uma entidade de aminoácido de valina, uma entidade de aminoácido de histidina, uma entidade de aminoácido de lisina e uma entidade de aminoácido de citrulina de 3 +/-15% : 6 +/-15% : 5 +/-15% : 1,3 +/-15% : 1 +/-15% : 2,5 +/-15% : 1 +/-15% : 1 +/-15% : 1,5 +/-15% : 4 +/-15%. v. Relações de Entidades de Aminoácidos
[0169] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de arginina, da entidade de aminoácido de glutamina, da entidade de NAC, da entidade de carnitina, da entidade de aminoácido de serina, da entidade de aminoácido de valina, da entidade de aminoácido de histidina, da entidade de aminoácido de lisina e da entidade de aminoácido de citrulina é, pelo menos: 70% em peso, 75% em peso, 80% em peso, 85 em peso, 90% em peso, 95% em peso, 97% em peso, 98% em peso ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0170] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de arginina, da entidade de aminoácido de glutamina, da entidade de aminoácido de serina e da entidade de aminoácido de citrulina é, pelo menos: 50 em peso %, 55 em peso %, 60 em peso %, 65 em peso %, 70 em peso %, 75 em peso %, 76 em peso %, 77 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0171] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de arginina, da entidade de aminoácido de glutamina e da entidade de aminoácido de serina é, pelo menos: 40 em peso %, 45 em peso %, 50 em peso %, 55 em peso %, 60 em peso %, 61 em peso %, 62 em peso %, 63 em peso %, 65 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0172] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de arginina, entidade de aminoácido de glutamina, da entidade de aminoácido serina, da entidade de aminoácido de citrulina e da entidade de carnitina é, pelo menos: 50 em peso %, 55 em peso %, 60 em peso %, 65 em peso %, 70 em peso %, 75 em peso %, 80 em peso %, 81 em peso %, 82 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0173] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de arginina, da entidade de aminoácido de citrulina e da entidade de aminoácido de glutamina é, pelo menos: 50 em peso %, 55 em peso %, 60 em peso %, 61 em peso %, 62 em peso %, 63 em peso %, 64 em peso %, 65 em peso %, 66 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0174] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de arginina e da entidade de aminoácido de glutamina e é, pelo menos: 30 em peso %, 35 em peso %, 40 em peso %, 45 em peso %, 50 em peso %, 51 em peso %, 52 em peso %, 53 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0175] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina é maior, por exemplo, pelo menos: 50 em peso %, 55 wt %., 60 em peso %, 65 wt %., 70 em peso %, 71 em peso %, 72 em peso %, 73 em peso %, 74 em peso %, 75 em peso %, ou superior à % em peso de um, dois, três, quatro ou cinco da entidade de NAC, da entidade de carnitina, da entidade de aminoácido de valina, da entidade de aminoácido de histidina ou da entidade de aminoácido de lisina na composição (por exemplo, na forma seca).
[0176] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de arginina ou da entidade de aminoácido de glutamina, isoladamente ou em combinação, é maior, por exemplo, pelo menos: 50% em peso, 55% em peso, 60% em peso, 65% em peso, 70% em peso, 75% em peso, 80% em peso, 85% em peso, 90% em peso, 95% em peso ou superior à % em peso de um, dois, três, quatro, cinco ou seis da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de NAC, da entidade de carnitina, da entidade de aminoácido de valina, da entidade de aminoácido de histidina ou da entidade de aminoácido de lisina na composição (por exemplo, na forma seca).
[0177] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de NAC é maior, por exemplo, pelo menos: 5 em peso %, 10 em peso %, 15 wt %., 20 em peso %, 25 wt %., 25 em peso %, 28 wt %., 29 em peso %, 30 wt %., ou superior à % em peso da entidade de carnitina na composição (por exemplo, na forma seca).
[0178] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de carnitina é maior, por exemplo, pelo menos: 2 em peso %,, 3 em peso %, 4 em peso %, 5 em peso %, 6 em peso %, 7 em peso %, 8 em peso %, 9 em peso %, 10 em peso %, 11 em peso %, ou superior à % em peso da entidade de NAC na composição (por exemplo, na forma seca).
[0179] Em algumas modalidades, a % em peso do aminoácido citrulina ou do aminoácido glutamina, isoladamente ou em combinação, é maior, por exemplo, pelo menos: 5 em peso %, 10 em peso %, 15 wt %., 16 em peso %, 17 em peso %, 18 em peso %, 19 em peso %, 20 em peso %, 21 wt %., 22 em peso %, ou superior à % em peso de um, dois, três, quatro, cinco ou seis da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de NAC, da entidade de carnitina, da entidade de aminoácido de valina, da entidade de aminoácido de histidina ou da entidade de aminoácido de lisina na composição (por exemplo, na forma seca).
[0180] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de valina, da entidade de aminoácido de histidina e da entidade de aminoácido de lisina, em combinação, é maior, por exemplo, pelo menos: 20 em peso %, 25 em peso %, 30 em peso %, 35 em peso %, 40 em peso %, 45 em peso %, 47 em peso %, 48 em peso %, 50 em peso %, ou superior à % em peso de um, dois ou três da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de NAC ou da entidade de carnitina na composição (por exemplo, na forma seca).
[0181] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de arginina e da entidade de aminoácido de glutamina, em combinação, é maior, por exemplo, pelo menos: 30 em peso %, 35 em peso %, 40 em peso %, 45 em peso %, 50 em peso %, 55 em peso %, 60 em peso %, 65 em peso %, ou superior à % em peso de um, dois, três, quatro, cinco, seis ou sete da entidade de NAC, da entidade de carnitina, da entidade de aminoácido de serina, da entidade de aminoácido de valina, da entidade de aminoácido de histidina, da entidade de aminoácido de lisina ou da entidade de aminoácido de citrulina.
[0182] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de arginina e da entidade de aminoácido de citrulina, em combinação, é maior, por exemplo, pelo menos: 5% em peso, 10% em peso, 15% em peso, 20% em peso, 25% em peso, 25% em peso, 28% em peso, 29% em peso, 30% em peso ou superior à % em peso de um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete ou oito da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de glutamina, da entidade de NAC, da entidade de carnitina, da entidade de aminoácido de serina, da entidade de aminoácido de valina, da entidade de aminoácido de histidina ou da entidade de aminoácido de lisina.
[0183] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina é, pelo menos: 3% em peso, 4% em peso, 5% em peso, 6% em peso, 7% em peso, 8% em peso ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 40% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca); Em certas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina é, pelo menos, 9% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0184] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de arginina é, pelo menos: 5 em peso %, 10 em peso %, 11 em peso %, 12 em peso %, 13 em peso %, 14 em peso %, 15 em peso %, 16 em peso %, 17 em peso %, 18 em peso %, 19 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 60% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca). Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de arginina é, pelo menos, 20% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0185] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina é, pelo menos: 5 em peso %, 10 em peso %, 15 em peso %, 20 em peso %, 21 em peso %, 22 em peso %, 23 em peso %, 24 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 60% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0186] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de NAC é, pelo menos: 1% em peso, 2% em peso, 3% em peso, 4% em peso ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 30% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0187] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de carnitina é, pelo menos: 1% em peso, 2% em peso, 3% em peso, 4% em peso ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 30% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0188] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de serina é, pelo menos: 5% em peso, 6% em peso, 7% em peso, 8% em peso, 9% em peso, 10% em peso ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 50% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca). Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de serina é, pelo menos, 11% em peso ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0189] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de valina é, pelo menos: 1% em peso, 2% em peso, 3% em peso, 4% em peso ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 35% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0190] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de histidina é, pelo menos: 1% em peso, 2% em peso, 3% em peso, 4% em peso ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 35% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0191] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de lisina é, pelo menos: 1% em peso, 2% em peso, 3% em peso, 4% em peso ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 35% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0192] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina é, pelo menos: 5 em peso %, 10 em peso %, 11 em peso %, 12 em peso %, 13 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 60% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0193] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de leucina é, pelo menos: 5 em peso %, 6 em peso %, 7 em peso %, 8 em peso %, 9 em peso %, 10 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 40% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0194] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de arginina é, pelo menos: 10 em peso %, 11 em peso %, 12 em peso %, 13 em peso %, 14 em peso %, 15 em peso %, 16 em peso %, 17 em peso %, 18 em peso %, 19 em peso %, 20 em peso %, 21 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 60% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0195] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina é, pelo menos: 5 em peso %, 10 em peso %, 15 em peso %, 16 em peso %, 17 em peso %, 18 em peso %, 19 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 50% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0196] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de lisina é, pelo menos: 1% em peso, 2% em peso, 3% em peso, 4% em peso, 5% em peso ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 35% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
[0197] Em algumas modalidades, a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina é, pelo menos: 5 em peso %, 10 em peso %, 11 em peso %, 12 em peso %, 13 em peso %, 14 em peso %, 15 em peso % ou mais dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 60% em peso dos componentes de entidade de aminoácido ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca). Utilizações, por exemplo, Métodos de Tratamento
[0198] A descrição proporciona um método para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; função vascular; estresse oxidativo (por exemplo um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo ou sistêmico); ou inflamação, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de uma composição aqui divulgada (por exemplo uma Porção Ativa), a um indivíduo em necessidade da mesma. A composição pode ser administrada de acordo com um regime de dosagem aqui descrito, para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; função vascular; estresse oxidativo (por exemplo, um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo e sistêmico); ou inflamação em um indivíduo (por exemplo, humano).
[0199] A descrição proporciona um método para um ou ambos de, tratar uma hemoglobinopatia ou talassemia, ou prevenir um ou mais sintomas de uma hemoglobinopatia ou uma talassemia, em um indivíduo, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de uma composição aqui divulgada (por exemplo, uma Porção Ativa), a um indivíduo em necessidade da mesma. A composição pode ser administrada de acordo com um regime de dosagem aqui descrito para tratar uma hemoglobinopatia ou uma talassemia e/ou prevenir um ou mais sintomas de uma hemoglobinopatia ou uma talassemia em um indivíduo (por exemplo, um humano).
[0200] Em algumas modalidades, o indivíduo foi diagnosticado com uma hemoglobinopatia ou uma talassemia. Em algumas modalidades, o indivíduo não foi diagnosticado com uma hemoglobinopatia ou uma talassemia. Em algumas modalidades, o indivíduo é um humano (por exemplo, um indivíduo pediátrico ou um indivíduo adulto).
[0201] Em algumas modalidades, o indivíduo é um bebê, criança, adolescente ou adulto. Em certas modalidades, o indivíduo é um adolescente, por exemplo, o indivíduo tem de 12 +/- 20% anos a 16 +/- 20% anos de idade. Em certas modalidades, o indivíduo tem um peso corporal de 40 kg +/- 20% a 60 kg +/- 20%. Em certas modalidades, o indivíduo tem um peso corporal superior a 60 kg +/- 20%.
[0202] Em algumas modalidades, o indivíduo não recebeu tratamento anterior com a composição aqui descrita (por exemplo, um indivíduo ingênuo).
[0203] Em algumas modalidades, a composição aqui descrita (uma Porção Ativa) é para uso como um medicamento para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; ou função vascular em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo com uma hemoglobinopatia ou uma talassemia). Em algumas modalidades, a composição é para uso como um medicamento para tratar (por exemplo, reverter, reduzir ou melhorar) uma hemoglobinopatia ou uma talassemia em um indivíduo. Em algumas modalidades, a composição é para uso como um medicamento para prevenir um ou mais sintomas de uma hemoglobinopatia ou uma talassemia em um indivíduo.
[0204] Em algumas modalidades, a composição aqui descrita (uma
Porção Ativa) é para uso na fabricação de um medicamento, suplemento, alimento médico ou alimento funcional para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; ou função vascular em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo com uma hemoglobinopatia ou uma talassemia). Em algumas modalidades, a composição (por exemplo, a Porção Ativa) é para uso na fabricação de um medicamento, suplemento, alimento médico ou alimento funcional para tratar (por exemplo, reverter, reduzir ou melhorar) uma hemoglobinopatia ou uma talassemia em um indivíduo. Em algumas modalidades, a composição (por exemplo a Porção Ativa) é para uso na fabricação de um medicamento para prevenir um ou mais sintomas de uma hemoglobinopatia ou uma talassemia em um indivíduo.
[0205] Em algumas modalidades, o indivíduo está em risco de uma hemoglobinopatia (por exemplo, uma doença falciforme) ou talassemia. Em certas modalidades, o indivíduo tem uma mutação no gene HBB.
[0206] Em uma modalidade, a hemoglobinopatia é uma β- hemoglobinopatia. Em outra modalidade, a hemoglobinopatia é uma α- hemoglobinopatia.
[0207] Em algumas modalidades, os indivíduos exibem um ou mais sintomas, associados a uma hemoglobinopatia, escolhidos de: anemia, hipóxia tecidual, disfunção de órgãos, crises vaso-oclusivas, valores anormais de hematócrito, eritropoiese ineficaz, contagem anormal de reticulócitos, carga anormal de ferro, presença de sideroblastos anelares, esplenomegalia, hepatomegalia, fluxo sanguíneo periférico comprometido, dispneia, aumento da hemólise, icterícia, crises de dor anêmica, síndrome torácica aguda, sequestro esplênico, priapismo, acidente vascular cerebral, síndrome mão-pé, dor (por exemplo, angina pectoris) ou uma combinação destes . A administração da composição aqui descrita pode ser eficaz para tratar um ou mais dos sintomas associados a uma hemoglobinopatia ou talassemia.
[0208] Em algumas modalidades, a hemoglobinopatia é uma doença falciforme, por exemplo, uma doença falciforme escolhida de anemia falciforme (HbSS), doença de hemoglobina SC (HbSC), β+- talassemia falciforme (HbS/β+), β0-talassemia falciforme (HbS/β0), doença de hemoglobina SE, doença de hemoglobina SD ou doença de hemoglobina SO. Em certas modalidades, o indivíduo tem anemia falciforme pediátrica. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma ou mais doenças ou distúrbios associados a uma hemoglobinopatia (por exemplo, uma doença falciforme) selecionados de disfunção neurocognitiva, meningite, acidente vascular cerebral, hiperbilirrubinemia indireta, hepatopatia falciforme, cálculos biliares, albuminúria, isostenúria, lesão renal substancial, necrose papilar, disfunção erétil tardia na puberdade, priapismo, necrose avascular, infarto da medula óssea, osteomielite, retinopatia, glaucoma pós- hifema, infarto retinal, hipertensão pulmonar, síndrome da dor torácica aguda, evento de dor aguda, cardiomegalia, insuficiência cardíaca diastólica, anemia, leucocitose, septicemia, asplenia funcional, infarte esplênico, sequestro esplênico, complicações da gravidez, úlceras cutâneas ou dor crônica. A administração da composição aqui descrita pode ser eficaz para tratar uma ou mais das doenças ou distúrbios associados a uma hemoglobinopatia (por exemplo, doença falciforme).
[0209] Em algumas modalidades, os indivíduos exibem um ou mais sintomas associados a uma doença falciforme escolhida de: hemólise, icterícia, colelitíase, crise aplástica, crise hemolítica, doença vaso- oclusiva, que causa dactilite, autoesplenectomia, síndrome torácica aguda, priapismo de acidente vascular cerebral, necrose papilar renal, crise de infarto, crise de sequestro, úlceras nas pernas ou uma combinação destes. A administração da composição aqui descrita pode ser eficaz para tratar um ou mais dos sintomas associados a uma doença falciforme.
[0210] Em algumas modalidades, a talassemia é α-talassemia, β- talassemia, uma doença de hemoglobina CC ou doença de hemoglobina EE. Em certas modalidades, a β-talassemia é escolhida de: β-talassemia menor/traço (β/β0 ou β/β+), β-talassemia intermediária (β0/β+) e β-talassemia maior (β0/β0 ou β+/β+) .
[0211] Em algumas modalidades, os indivíduos exibem um ou mais sintomas, associados a β-talassemia, escolhidos de: hemólise, anemia, esplenomegalia, eritropoiese ineficaz, hepato-esplenomegalia, ácido úrico elevado no sangue ou soro, úlceras nas pernas, infecção ou uma combinação destes. A administração da composição aqui descrita pode ser eficaz para tratar um ou mais dos sintomas associados a β- talassemia. Regimes de Dosagem
[0212] A composição (por exemplo, a Porção Ativa) pode ser administrada de acordo com um regime de dosagem aqui descrito, para melhorar a função, renovação e/ou síntese de eritrócitos e/ou hemoglobina; função vascular; inflamação; e/ou estresse oxidativo, em um indivíduo, por exemplo, para reduzir ou tratar uma hemoglobinopatia (por exemplo, doença falciforme) ou uma talassemia. Por exemplo, a composição pode ser administrada ao indivíduo por um período de tratamento de, por exemplo, duas semanas, três semanas, quatro semanas, cinco semanas, seis semanas, sete semanas, oito semanas, nove semanas, 10 semanas, 11 semanas, 12 semanas, 13 semanas, 14 semanas, 15 semanas, 16 semanas ou mais, a uma dose de 2 g +/- 20% g diariamente a 90 g +/- 20% g diariamente. Em certas modalidades, a composição é administrada em uma dose de 40 g +/- 20% a 80 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, três vezes ao dia, por exemplo, 59 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais diariamente.
[0213] Em certas modalidades, a composição é administrada em uma dose de 30 g +/- 20% a 80 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais diariamente, por exemplo, 65,1 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais diariamente, a um indivíduo (por exemplo, para um indivíduo adulto). Em certas modalidades, a composição é administrada em uma dose de 15 g +/- 20% a 60 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, duas vezes ao dia, por exemplo, 32,55 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, duas vezes ao dia, a um indivíduo (por exemplo, a um indivíduo adulto).
[0214] Em certas modalidades, a composição é administrada em uma dose de 20 g +/- 20% a 60 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais diariamente, por exemplo, 40,2 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais diariamente, a um indivíduo (por exemplo, um indivíduo pediátrico). Em certas modalidades, a composição é administrada em uma dose de 10 g +/- 20% a 30 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, duas vezes ao dia, por exemplo, 20,1 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, duas vezes ao dia, a um indivíduo (por exemplo, a um indivíduo adulto).
[0215] Em algumas modalidades, a composição pode ser proporcionada a um indivíduo com uma hemoglobinopatia (por exemplo, doença falciforme) em um regime de dosagem única ou múltipla. Em algumas modalidades, uma dose é administrada duas vezes ao dia, três vezes ao dia, quatro vezes ao dia, cinco vezes ao dia, seis vezes ao dia, sete vezes ao dia ou mais. Em certas modalidade, a composição é administrada uma, duas ou três vezes ao dia. Em algumas modalidades, a composição é administrada por, pelo menos, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias ou 2 semanas. Em algumas modalidades, a composição é administrada cronicamente (por exemplo, mais de 30 dias, por exemplo, 31 dias, 40 dias, 50 dias, 60 dias, 3 meses, 6 meses,
9 meses, um ano, dois anos ou três anos).
[0216] Em algumas modalidades, a composição é administrada antes de uma refeição (por exemplo, café-da-manhã, almoço ou jantar). Em algumas modalidades, a composição é administrada concomitantemente com uma refeição (por exemplo, café-da-manhã, almoço ou jantar). Em algumas modalidades, a composição é administrada a seguir a uma refeição (por exemplo, café-da-manhã, almoço ou jantar). Em certas modalidades, a composição é administrada com o café-da-manhã e jantar.
[0217] A composição pode ser administrada a cada 2 horas, a cada 3 horas, a cada 4 horas, a cada 5 horas, a cada 6 horas, a cada 7 horas, a cada 8 horas, a cada 9 horas, a cada 10 horas, a cada 11 horas ou a cada 12 horas para melhorar a função de eritrócitos em um indivíduo (por exemplo, um indivíduo com uma hemoglobinopatia, por exemplo, uma doença falciforme).
[0218] Em algumas modalidades, a composição compreende três embalagens stick, por exemplo, cada embalagem stick compreendendo 33,3% +/- 15% da quantidade de cada entidade de aminoácido incluída na composição aqui descrita. Em certas modalidades, três embalagens stick são administrados duas vezes ao dia.
[0219] Em algumas modalidades, a composição compreende cinco embalagens stick, por exemplo, cada embalagem stick compreendendo 20% +/- 15% da quantidade de cada entidade de aminoácido incluída na composição aqui descrita. Em certas modalidades, cinco embalagens stick são administrados duas vezes ao dia.
[0220] Em algumas modalidades, a composição compreende quatro embalagens stick, por exemplo, cada embalagem stick compreendendo 25% +/- 15% da quantidade de cada entidade de aminoácido incluída na composição aqui descrita. Em certas modalidades, quatro embalagens stick são administrados duas vezes ao dia.
[0221] Em algumas modalidades, a composição é administrada em uma dose de cerca de 2 g +/- 20% a 80 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, por exemplo, uma vez ao dia, duas vezes ao dia, três vezes ao dia, quatro vezes ao dia, cinco vezes ao dia ou seis vezes ao dia (por exemplo, duas vezes ao dia). Em algumas modalidades, a composição é administrada em uma dose de 2 g +/- 20% a 10 g +/- 20%, 20 g +/- 20% a 50 g +/- 20%, ou 50 g +/- 20% a 80 g +/- 20% entidades de aminoácidos totais, por exemplo, uma vez ao dia, duas vezes ao dia ou três vezes ao dia (por exemplo, duas vezes ao dia). Em certas modalidades, a composição é administrada em uma dose de 20 g +/- 20% a 50 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, duas vezes ao dia, por exemplo, 29 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, duas vezes ao dia. Em algumas modalidades, a composição é administrada em uma dose de cerca de 2 g +/- 20% a 80 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, por exemplo, uma vez ao dia, duas vezes ao dia, três vezes ao dia, quatro vezes ao dia, cinco vezes ao dia ou seis vezes ao dia (por exemplo, duas vezes ao dia). Em algumas modalidades, a composição é administrada em uma dose de 10 g +/- 20% a 30 g +/- 20%, 20 g +/- 20% a 60 g +/- 20%, ou 40 g +/- 20% a 80 g +/- 20% entidades de aminoácidos totais, por exemplo, uma vez ao dia, duas vezes ao dia ou três vezes ao dia (por exemplo, duas vezes ao dia). Em certas modalidades, a composição é administrada em uma dose de 20 g +/- 20% a 60 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, duas vezes ao dia, por exemplo, 32,55 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, duas vezes ao dia, a um indivíduo (por exemplo, a um indivíduo adulto). Em certas modalidades, a composição é administrada em uma dose de 10 g +/- 20% a 30 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, duas vezes ao dia, por exemplo, 20,1 g +/- 20% de entidades de aminoácidos totais, duas vezes ao dia, a um indivíduo
(por exemplo, a um indivíduo pediátrico).
[0222] Em algumas modalidades, a composição está presente em uma forma de dosagem unitária compreendendo 2 g +/- 20% a 15 g +/- 20% de entidades de aminoácidos (p. ex., 2 g +/- 20%, 3 g +/- 20%, 4 g +/- 20%, 5 g +/- 20%, 6 g +/- 20%, 7 g +/- 20%, 8 g +/- 20%, 9 g +/- 20%, 10 g +/- 20%, 11 g +/- 20%, 12 g +/- 20%, 13 g +/- 20%, 14 g +/- 20%, ou 15 g +/- 20% de entidades de aminoácidos). Em certas modalidades, a composição está presente em uma forma de dosagem unitária compreendendo 6,51 g +/- 20% de entidades de aminoácidos. Em certas modalidades, a composição está presente em uma forma de dosagem unitária compreendendo 8,14 g +/- 20% de entidades de aminoácidos. Em certas modalidades, a composição está presente em uma forma de dosagem unitária compreendendo 10,85 g +/- 20% de entidades de aminoácidos. Em certas modalidades, a composição está presente em uma forma de dosagem unitária compreendendo 4,02 g +/- 20% de entidades de aminoácidos. Em certas modalidades, a composição está presente em uma forma de dosagem unitária compreendendo 5,03 g +/- 20% de entidades de aminoácidos. Em certas modalidades, a composição está presente em uma forma de dosagem unitária compreendendo 6,7 g +/- 20% de entidades de aminoácidos. Produção da Porção Ativa e Composições Farmacêuticas
[0223] A presente invenção apresenta um método de fabricação ou produção de uma composição (p. ex., uma Porção Ativa) da invenção anterior. As entidades de aminoácidos utilizadas para produzir as composições podem ser aglomeradas e/ou instantanizadas para auxiliar na dispersão e/ou solubilização.
[0224] As composições podem ser produzidas utilizando entidades de aminoácidos das seguintes fontes, ou outras fontes podem ser utilizadas: por exemplo, FUSI-BCAA™ Instantized Blend (L-Leucina, L-
Isoleucina e L-Valina na razão em peso de 2:1:1), L-leucina instantânea e outros ácidos podem ser obtidos na Ajinomoto Co., Inc. Matérias- primas de entidades de aminoácidos de grau farmacêutico podem ser utilizadas na fabricação de produtos de entidade de aminoácido farmacêuticos. As matérias-primas de entidade de aminoácido de grau alimentar (ou de suplemento) podem ser utilizadas na fabricação de produtos de entidade de aminoácidos dietéticos.
[0225] Para produzir as composições de aminoácido da presente invenção, as seguintes etapas gerais podem ser utilizadas: os materiais de partida (entidades de aminoácidos e excipientes individuais) podem ser misturados em uma unidade misturadora, seguido por verificação da uniformidade da mistura e conteúdo de entidades de aminoácidos e enchimento das embalagens stick, ou outra forma de dosagem unitária, com a mistura em pó. O conteúdo das embalagens stick, ou de outras formas de dosagem unitárias, pode ser dispersado em água, no momento da uso, para administração oral.
[0226] Composições de suplementação alimentar ou nutrição médica da invenção estarão em uma forma adequada para administração oral.
[0227] Ao combinar matérias-primas, por exemplo, entidades de aminoácidos e/ou excipientes de grau farmacêutico, em uma composição, contaminantes podem estar presentes na composição. Uma composição atende a um padrão para o nível de contaminação quando a composição não compreende, substancialmente (por exemplo, compreende menos de 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0,15, 0,1, 0,05, 0,01, ou 0,001% (p / p)), um contaminante. Em algumas modalidades, uma composição aqui descrita em um método não compreende um contaminante. Os contaminantes incluem qualquer substância que não esteja deliberadamente presente na combinação (por exemplo, entidades de aminoácidos e excipientes de grau farmacêutico, por exemplo, componentes de administração oral, podem estar deliberadamente presentes) ou qualquer substância que tenha um efeito negativo em um parâmetro de qualidade da composição (por exemplo, efeitos colaterais em um indivíduo, diminuição da potência, diminuição da estabilidade/vida útil, descoloração, odor, gosto ruim, textura/sensação ruim na boca ou aumento da segregação de componentes da composição). Em algumas modalidades, os contaminantes incluem micróbios, endotoxinas, metais ou uma combinação destes. Em algumas modalidades, o nível de contaminação, por exemplo, por metais, lecitina, colina, endotoxina, micróbios ou outros contaminantes (por exemplo, contaminantes de matérias-primas) de cada fração de uma composição está abaixo do nível permitido em alimentos. Excipientes
[0228] As composições de aminoácidos da presente invenção podem ser compostas ou formuladas com um ou mais excipientes. Exemplos não limitativos de excipientes adequados incluem um elemento gustativo, um saborizante, um agente de tamponamento, um conservante, um estabilizante, um aglutinante, um agente de compactação, um lubrificante, um intensificador de dispersão, um agente de desintegração, um agente saborizante, um adoçante e um agente corante.
[0229] Em algumas modalidades, o excipiente compreende um agente de tamponamento. Exemplos não limitativos de agentes de tamponamento adequados incluem ácido cítrico, citrato de sódio, carbonato de magnésio, bicarbonato de magnésio, carbonato de cálcio e bicarbonato de cálcio.
[0230] Em algumas modalidades, o excipiente compreende um conservante. Exemplos não limitativos de conservantes adequados incluem antioxidantes, tais como alfatocoferol e ascorbato, e antimicrobianos, tais como parabenos, clorobutanol e fenol.
[0231] Em algumas modalidades, uma composição compreende um aglutinante como um excipiente. Exemplos não limitativos de aglutinantes adequados incluem amidos, amidos pré-gelatinizados, gelatina, polivinilpirrolidona, celulose, metilcelulose, carboximetilcelulose sódica, etilcelulose, poliacrilamidas, poliviniloxoazolidona, álcoois polivinílicos, álcool de ácido graxo C12- C18, polietilenoglicol, poliois, sacarídeos, oligossacarídeos e combinações destes.
[0232] Em algumas modalidades, a composição compreende um lubrificante como um excipiente. Exemplos não limitativos de lubrificantes adequados incluem estearato de magnésio, estearato de cálcio, estearato de zinco, óleos vegetais hidrogenados, Sterotex, monoestearato de polioxietileno, talco, polietilenoglicol, benzoato de sódio, lauril sulfato de sódio, lauril sulfato de magnésio e óleo mineral leve.
[0233] Em algumas modalidades, a composição compreende um intensificador de dispersão como um excipiente. Exemplos não limitativos de dispersantes adequados incluem amido, ácido algínico, polivinilpirrolidonas, goma guar, caulim, goma xantana, bentonita, celulose de madeira purificada, glicolato de amido de sódio, silicato isoamorfo e celulose microcristalina como tensoativos emulsificantes de alto HLB.
[0234] Em algumas modalidades, a composição compreende um desintegrante como um excipiente. Em algumas modalidades, o desintegrante é um desintegrante não efervescente. Exemplos não limitativos de desintegrantes não efervescentes adequados incluem amidos, tais como amido de milho, amido de batata, amidos pré- gelatinizados e modificados destes, adoçantes, argilas, tais como bentonita, celulose microcristalina, alginatos, glicolato de amido de sódio, gomas, tais como ágar, guar, alfarroba, karaya, pecitina e tragacanto. Em algumas modalidades, o desintegrante é um desintegrante efervescente. Exemplos não limitativos de desintegrantes efervescentes adequados incluem bicarbonato de sódio em combinação com ácido cítrico e bicarbonato de sódio em combinação com ácido tartárico.
[0235] Em algumas modalidades, o excipiente compreende um agente saborizante. Os agentes saborizantes podem ser escolhidos de óleos de sabores sintéticos e saborizantes aromáticos; óleos naturais; extratos de plantas, folhas, flores e frutas; e combinações destes. Em algumas modalidades, o agente saborizante é selecionado de óleos de canela; óleo de gaultéria; óleos de hortelã pimenta; óleo de cravo-da- índia; óleo de feno; óleo de anis; eucalipto; baunilha; óleo cítrico, tal como óleo de limão, óleo de laranja, óleo de uva e toronja; e essências de fruta, incluindo maçã, pêssego, pera, morango, framboesa, cereja, ameixa, abacaxi e damasco.
[0236] Em algumas modalidades, o excipiente compreende um adoçante. Exemplos não limitativos de adoçantes adequados incluem glicose (xarope de milho), dextrose, açúcar invertido, frutose e misturas destes (quando não utilizados como um veículo); sacarina e seus vários sais, tais como o sal de sódio; adoçantes dipeptídicos, tais como aspartame; compostos de di-hidrocalcona, glicirrizina; Stevia Rebaudiana (Esteviosídeo); derivados de cloro de sacarose, tais como sucralose; e álcoois de açúcar, tais como sorbitol, manitol, xilitol e semelhantes. São também contemplados hidrolisados de amido hidrogenado e o adoçante sintético 3,6-di-hidro-6-metil-1,2,3-oxatiazin- 4-ona-2,2-dióxido, particularmente o sal de potássio (acessulfame-K), e os seus sais de sódio e cálcio.
[0237] Em algumas modalidades, a composição compreende um agente corante. Exemplos não limitativos de agentes corantes adequados incluem os corantes de alimentos, fármacos e cosméticos (FD&C), corantes de fármacos e cosméticos (D&C) e corantes externos de fármacos e cosméticos (Ext. D&C). Os agentes corantes podem ser utilizados como tinturas ou suas lacas correspondentes.
[0238] Excipientes particulares podem incluir um ou mais de: ácido cítrico, lecitina, (por exemplo Alcolec F100), adoçantes (por exemplo, sucralose, NF micronizado por sucralose, acessulfame de potássio (por exemplo Ace-K)), um intensificador de dispersão (por exemplo, goma xantana (por exemplo, Ticaxan Rapid-3)), saborizantes (por exemplo, creme de baunilha #4306, Nat Orange WONF #1326, lima 865.0032U e limão 862.2169U), um agente mascarador do sabor amargo (por exemplo, 936.2160U) e corantes naturais ou artificiais (por exemplo, FD&C Yellow 6). Conteúdos de ingredientes exemplificativos para cada embalagem stick são mostrados na Tabela 5. Tabela 5. Conteúdos de ingredientes em cada embalagem stick. INGREDIENTE GRAU FUNÇÃO FONTE;
COMENTÁRIO Aminoácidos USP Ingrediente Várias fontes; Forma Farmacêutico Ativo não instantânea (API) (escala MFG) Ácido cítrico USP pH, sabor Spectrum Chems; f(volume) ≤ 1,0% p/v Acessulfame K NF Doçura (início Spectrum Chems; rápido) Alvo 1 Adoçante Sucralose NF Doçura (início lento) Spectrum Chems; WHO ADI ≤ 15 mg/kg Lecitina (Alecolec FCC Agente umectante American Lecithin F100) Company Goma xantana FCC Estabilizante/Espes Gomas TIC; sante f(volume) ≤ 0,5% p/v Creme de baunilha GRAS Sabor/Aroma David Michael; (Art) Mascara o enxofre Laranja (Natural e GRAS 1.o sabor David Michael; Perfil WONF) cítrico corresponde a pH baixo Lima (Natural e GRAS 2.o sabor FONA; Fornecedor WONF) de sabor único
Limão (Natural e GRAS 2.o sabor FONA; Fornecedor artificial) de sabor único Modificador de GRAS Mascarador de FONA; Útil a volume gosto sabor amargo baixo FD&C Yellow No.6 USP Cor Sensient; Perfil de sabor correspondente
[0239] Em outra modalidade, os excipientes estão limitados a ácido cítrico, um adoçante (por exemplo, sucralose), goma xantana, um agente de aroma (por exemplo, creme de baunilha #4036), um agente saborizante (por exemplo, laranja nat WONF #1362) e um agente corante (por exemplo, FD&C Yellow 6), por exemplo, o excipiente exclui especificamente a lecitina (Tabela 6). Tabela 6. Conteúdos exemplificativos em cada embalagem stick.
INGREDIENTE GRAU FUNÇÃO Aminoácidos USP Farmacêutico Ativo Ingrediente (API) Ácido cítrico USP pH, sabor Sucralose NF Doçura (início lento) Goma xantana FCC Estabilizante/Espessante Creme de baunilha (Art) GRAS Aroma Laranja (Nat+WONF) GRAS 1.o sabor FD&C Yellow No. 6 USP Cor Produção de Preparações de Mistura a Seco
[0240] Para produzir as preparações de mistura a seco da presente invenção, as seguintes etapas gerais podem ser utilizadas: entidades de aminoácidos de grau farmacêutico individuais (e, opcionalmente, um ou mais excipientes e/ou componentes de administração oral), podem ser combinados em uma combinação e submetidos a uma ou mais condições de mistura (por exemplo, mistura e combinação). Em algumas modalidades, as condições de mistura são continuadas até que a combinação atenda a um ou mais padrões de referência. Em algumas modalidades, a PGDBP resultante é dividida em uma pluralidade de frações. Em algumas modalidades, pelo menos uma porcentagem das frações da pluralidade de frações também atende a um ou mais padrões de referência, por exemplo, os padrões de referência que a PGDBP atendeu. Em algumas modalidades, pelo menos uma porcentagem das frações da pluralidade de frações atende a um ou mais padrões de referência.
[0241] Em algumas modalidades, a preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, também é uma preparação em grande escala. Em grande escala, conforme aqui utilizado, descreve uma preparação que é maior (por exemplo, em peso, massa ou volume) do que um valor de referência. Em algumas modalidades, o valor de referência é o tamanho de uma preparação experimental típica (por exemplo, de não fabricação). Em algumas modalidades, o valor de referência é 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 kg. Em algumas modalidades, preparações em grande escala compreendem, pelo menos, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, ou 10000 kg. Em algumas modalidades, preparações em grande escala compreendem não mais de 10000, 5000, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, ou 300 kg. Em algumas modalidades, preparações em grande escala compreendem 100-500 kg, 100-400 kg, 100-300, 100-200 kg, 200-300 kg, 200-400 kg, 200-500 kg, 300-400 kg, 300-500 kg, 400-500, ou 500-1000 kg.. Técnicas de mistura
[0242] Os métodos aqui divulgados compreendem etapas de mistura que misturam e combinam combinações de entidades de aminoácidos de grau farmacêutico para criar PGDBP que atendem a um padrão de referência. As condições de mistura utilizadas pelos métodos aqui descritos podem utilizar qualquer mecanismo de mistura ou combinação de mecanismos de mistura conhecidos. Os mecanismos de mistura incluem convecção, difusão e cisalhamento. A mistura convectiva utiliza o movimento bruto das partículas, por exemplo, por rotação suave dentro de um misturador/agitador. A difusão é a mistura lenta e passiva de partículas. A mistura por cisalhamento empurra parte de uma combinação de partículas em uma direção e outra parte da combinação de partículas em outra direção ao longo do mesmo plano paralelo. As condições de mistura utilizadas pelos métodos aqui descritos podem compreender ainda a uso de granuladores ou outro equipamento para modificar o tamanho e/ou a forma das partículas de componentes de combinação (por exemplo, entidades de aminoácidos de grau farmacêutico).
[0243] Em algumas modalidades, a mistura ou condição de mistura empregue por um método aqui divulgado compreende mistura convectiva. Em algumas modalidades, a mistura ou condição de mistura empregue por um método aqui divulgado compreende a mistura por difusão. Em algumas modalidades, a mistura ou condição de mistura empregue por um método aqui divulgado compreende a mistura por cisalhamento. Em algumas modalidades, a mistura ou condição de mistura empregue por um método aqui divulgado compreende a mistura convectiva e por difusão. Em algumas modalidades, a mistura ou condição de mistura empregue por um método aqui divulgado compreende a mistura convectiva e por cisalhamento. Em algumas modalidades, a mistura ou condição de mistura empregue por um método aqui divulgado compreende a mistura por difusão e cisalhamento. Em algumas modalidades, a mistura ou condição de mistura empregue por um método aqui divulgado compreende a mistura convectiva, por difusão e por cisalhamento.
[0244] As condições de mistura utilizadas pelos métodos aqui descritos podem utilizar qualquer equipamento de mistura ou combinação conhecido; o equipamento de mistura ou combinação pode operar com base em um ou mais mecanismos de mistura. Existem quatro tipos principais de equipamento de mistura ou combinação:
misturadores de convecção, misturadores de funil (isto é, misturadores gravimétricos), misturadores de tambor e misturadores de fluidização. Em algumas modalidades, uma condição de mistura ou etapa de mistura de um método aqui descrito pode utilizar um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) tipos de equipamento de mistura ou de combinação. Em algumas modalidades, as preparações de mistura a seco (por exemplo, PGDBP) são preparadas em lotes. Em algumas modalidades, as preparações de mistura a seco (por exemplo, PGDBP) são preparadas de maneira contínua, por exemplo, colhendo a preparação misturada/combinada sem interromper a mistura ou combinação.
[0245] As etapas de mistura ou combinação de métodos aqui divulgados têm duração suficiente para produzir uma preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, que atende a um padrão de referência. Em algumas modalidades, a duração da condição de mistura é, pelo menos, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 75, 90, 105, ou 120 minutos. Em algumas modalidades, a duração da condição de mistura não é mais do que 180, 165, 150, 135, 120, 105, 90, 75, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, ou 20 minutos. Em algumas modalidades, a duração da condição de mistura é 20-90, 20-60, 20-50, 20-40, 20-30, 30-90, 30-60, 30-50, 30-40, 40-90, 40-60, 40-50, 50-90, 50-60, ou 60-90 minutos. Em algumas modalidades, a duração da condição de mistura é 20-40 minutos, por exemplo, 20 minutos, 30 minutos ou 40 minutos. Em algumas modalidades, a duração da condição de mistura é suficiente para que a mistura e a combinação não introduzam heterogeneidade na combinação ou na preparação de mistura a seco, por exemplo, por combinação excessiva. Em algumas modalidades, a duração da condição de mistura é determinada pela avaliação para verificar se um padrão de referência foi atendido. Por exemplo, a condição de mistura pode continuar até que uma avaliação mostre que o padrão de referência foi atendido. Em algumas modalidades em que o padrão de referência é a uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de mistura, a avaliação para verificar se um padrão de referência foi atendido compreende a uso de espectroscopia de infravermelho próximo (NIR). Em uma modalidade, a condição de mistura é mantida até que o espectro NIR observado mostre que um padrão para a uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de mistura, foi atendido.
[0246] Em algumas modalidades, os métodos aqui divulgados compreendem etapas de mistura que misturam e combinam combinações de entidades de aminoácidos de grau farmacêutico para criar PGDBP, em que as etapas de mistura ocorrem à temperatura ambiente, por exemplo, entre 15 a 35°C, por exemplo, entre 20 a 30°C, por exemplo, a cerca de 25°C. Em algumas modalidades, as etapas de mistura ocorrem a uma temperatura inferior a 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, ou 40°C (e, opcionalmente, a uma temperatura de, pelo menos, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, ou 25°C). Em algumas modalidades, as etapas de mistura ocorrem a uma temperatura de cerca de 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ou 30°C.
[0247] Em algumas modalidades, os métodos aqui divulgados compreendem etapas de mistura que misturam e combinam combinações de entidades de aminoácidos de grau farmacêutico para criar PGDBP, em que as etapas de mistura compreendem a uso de uma velocidade de rotação do misturador ou agitador (por exemplo, uma velocidade de rotação do rotor do misturador ou agitador) de menos de 10,000, 9,000, 8,000, 7,000, 6,000, 5,000, 4,000, 3,000, 2,000, 1,000, 500, 250, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, ou 10 rotações por minuto (rpm) (e, opcionalmente, pelo menos 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, ou 100 rpm). Em algumas modalidades, as etapas de mistura compreendem a uso de uma velocidade de rotação do misturador ou agitador (por exemplo, uma velocidade de rotação do rotor do misturador ou agitador) de cerca de 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, ou 100 rpm. Em algumas modalidades, as etapas de mistura compreendem a uso de uma velocidade de rotação do misturador ou agitador (por exemplo, uma velocidade de rotação do rotor do misturador ou agitador) entre 5-50, 5-45, 5-40, 5-35, 5-30, 5-25, 5-20, 5- 15, 5-10, 10-50, 10-45, 10-40, 10-35, 10-30, 10-25, 10-20, 10-15, 15-50, 15-45, 15-40, 15-35, 15-30, 15-25, 15-20, 20-50, 20-45, 20-40, 20-35, 20-30, 20-25, 25-50, 25-45, 25-40, 25-35, 25-30, 30-50, 30-45, 30-40, 30-35, 35-50, 35-45, 35-40, 40-50, 40-45, ou 45-50 rpm.
[0248] Em algumas modalidades, o método compreende ainda compactação por rolo e/ou granulação úmida. Em algumas modalidades, um método compreende ainda uma etapa de enchimento automatizado, por exemplo, que incorpora mistura direta, compactação por rolo ou granulação úmida.
[0249] A segregação de diferentes espécies de partículas em uma combinação (por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP) durante a mistura ou combinação, divisão de frações ou processamento posterior é uma barreira para atender e manter padrões de referência, por exemplo, um padrão de uniformidade de composição. Qualquer mistura de dois ou mais tipos de partículas pode ser vulnerável à segregação. A segregação pode ocorrer por um ou mais de vários mecanismos, incluindo peneiração, fluidização e varredura (por exemplo, ver Purutyan, H, e Carson, J.W. Predicting, diagnosing, and solving mixture segregation problems. Jenike & Johnson, CSC Publishing, Powder and Bulk Engineering, 2013). Amostragem e medição
[0250] Os métodos aqui descritos para a fabricação de uma preparação de mistura a seco, por exemplo, uma PGDBP, que atende a um padrão de referência. podem compreender ainda a avaliação para verificar se o padrão de referência foi atendido. Em algumas modalidades, os métodos aqui descritos compreendem a aquisição de um valor, por exemplo, para a quantidade de uma entidade de aminoácido de grau farmacêutico, de um ou mais pontos de amostragem em uma preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP. Um ponto de amostragem é um local, por exemplo, espacialmente e temporalmente definido, dentro de uma preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP. Em algumas modalidades, para adquirir um valor, um ponto de amostragem pode ser acessado. O acesso a um ponto de amostragem pode compreender a uso de uma técnica de diagnóstico na preparação de mistura a seco do ponto de amostragem. Em algumas modalidades, o acesso, por exemplo, com a uso de uma técnica de diagnóstico, compreende parar ou pausar a mistura ou combinação ou condição de mistura para ter acesso ao ponto de amostragem. Em algumas modalidades, o acesso, por exemplo, utilizando uma técnica de diagnóstico, não compreende parar ou pausar a mistura ou combinação ou condição de mistura para ter acesso ao ponto de amostragem. Os pontos de amostragem podem ser designados e/ou acessados por métodos conhecidos na técnica.
[0251] Em algumas modalidades, as amostras adquiridas de um ponto de amostragem de uma combinação ou preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP) ou frações de uma preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP) podem ser analisadas utilizando espectroscopia de infravermelho próximo (NIR) para adquirir um valor (por exemplo, para uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de mistura). A espectroscopia NIR analisa os espectros de absorção de compostos na região do comprimento de onda de infravermelho próximo (780-2500 nm). Picos de absorção de compostos, por exemplo, entidades de aminoácidos de grau farmacêutico, são produzidos por vibrações moleculares classificadas em dois tipos: sobretons e combinações. Compostos compreendendo ligações CH, OH ou NH podem ser analisados utilizando NIR. Métodos de interpretação de espectros NIR são conhecidos na técnica. Em algumas modalidades, a espectroscopia NIR é utilizada para determinar se as quantidades de entidades de aminoácidos em uma pluralidade de pontos de amostragem são similares, por exemplo, se um padrão de homogeneidade (por exemplo, uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de mistura) foi atendido. Em algumas modalidades, os métodos compreendem ainda, em resposta à determinação, a seleção e/ou execução de uma etapa, por exemplo, a seleção e a uso de uma técnica de mistura ou combinação ou condição de mistura ou o término da mistura, da combinação ou de uma condição de mistura.
[0252] Em algumas modalidades, as amostras adquiridas de um ponto de amostragem de uma combinação ou preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP) ou frações de uma preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP) podem ser analisadas utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC, também chamada de cromatografia líquida de alta pressão) para adquirir um valor (por exemplo, para a quantidade de uma entidade de aminoácido de grau farmacêutico).
[0253] Em algumas modalidades, as amostras adquiridas de um ponto de amostragem de uma combinação ou preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP) ou frações de uma preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP) podem ser analisadas utilizando cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS). Em algumas modalidades, a LC-MS é utilizada para determinar a identidade e/ou as quantidades de entidades de aminoácidos de grau farmacêutico presentes em um ponto de amostragem ou em uma fração. Em algumas modalidades, a LC-MS é utilizada para determinar se uma preparação de mistura a seco atende a um padrão para uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de fração ou mistura. Em algumas modalidades, os métodos compreendem ainda, em resposta à(s) quantidade(s) de entidades de aminoácidos de grau farmacêutico presentes, a seleção e/ou execução de uma etapa, por exemplo, a seleção e a uso de uma técnica de mistura ou combinação ou condição de mistura ou o término da mistura, da combinação ou de uma condição de mistura. Padrões de referência
[0254] Os métodos aqui descritos produzem preparações de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, que atendem a um ou mais padrões de referência. Um padrão de referência, conforme aqui utilizado, significa: um padrão utilizado ou definido por: (1) um fabricante de uma combinação (por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP), por exemplo, um fabricante com aprovação de uma agência governamental para comercializar a PGDBP, ou (2) a indústria farmacêutica ou agências ou entidades (por exemplo, agências ou entidades governamentais ou comerciais) que regulam a indústria farmacêutica, para garantir que um ou mais parâmetros de qualidade do produto estejam dentro de gamas aceitáveis para um medicamento, composição farmacêutica, tratamento ou outro produto terapêutico. Um parâmetro de qualidade de produto pode ser qualquer parâmetro regulado pelo fabricante, pela indústria farmacêutica ou por agências ou entidades, por exemplo, agências ou entidades governamentais ou comerciais, incluindo, mas não se limitando a, composição; uniformidade de composição; dosagem; uniformidade de dosagem; presença, ausência e/ou nível de contaminantes ou impurezas; e nível de esterilidade (por exemplo, a presença, ausência e/ou nível de micróbios). Agências reguladoras governamentais exemplificativas incluem: Administração Federal de Medicamentos (FDA, do inglês Federal Drug Administration), Agência Europeia de Medicamentos (EMA, do inglês European Medicines Agency), SwissMedic, Administração de Alimentos e Fármacos da China (CFDA, do inglês China Food and Drug Administration) ou Agência de Produtos Farmacêuticos e Equipamentos Médicos do Japão (PMDA, do inglês Japanese Pharmaceuticals and Medical Devices Agency). Um parâmetro de qualidade do produto pode também ser um parâmetro especificado por uma farmacopeia ou formulário nacional ou regional, incluindo a Farmacopeia dos EUA (USP), Farmacopeia Britânica (BP), Formulário Nacional (NF), Farmacopeia Europeia (EP), Farmacopeia Japonesa (JP) ou o Conselho Internacional de Harmonização de Requisitos Técnicos para Produtos Farmacêuticos para Uso Humano (ICH).
[0255] Os um ou mais padrões de referência podem ser um padrão utilizado ou promulgado pela indústria farmacêutica ou por agências ou entidades, por exemplo, agências ou entidades governamentais ou comerciais, que regulam a indústria farmacêutica para garantir que um ou mais parâmetros de qualidade do produto estejam dentro de gamas aceitáveis para um medicamento, composição farmacêutica, tratamento ou outro agente terapêutico. Um ou mais padrões de referência podem ser um padrão utilizado ou definido por um fabricante de uma combinação (por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP), por exemplo, um fabricante com aprovação de uma agência governamental para comercializar a PGDBP, para garantir que um ou mais parâmetros de qualidade do produto estejam dentro de gamas aceitáveis para um suplemento, nutracêutico, medicamento, composição farmacêutica, tratamento ou outro agente terapêutico. Um parâmetro de qualidade do produto pode ser qualquer parâmetro regulado pelo fabricante, ou pela indústria farmacêutica ou por agências ou entidades, por exemplo, agências ou entidades governamentais ou comerciais, incluindo, mas não se limitando a, composição; uniformidade de composição; dosagem; uniformidade de dosagem; presença, ausência e/ou nível de contaminantes ou impurezas; nível de esterilidade (por exemplo, a presença, ausência e/ou nível de micróbios), cor ou morfologia das partículas (por exemplo, tamanho ou forma). Uniformidade de composição
[0256] Em algumas modalidades, um padrão de referência é a uniformidade de composição. A uniformidade de composição, em geral, é um padrão de homogeneidade. A uniformidade de composição pode ser classificada em dois tipos de uniformidade diferentes, mas relacionados: uniformidade de mistura e uniformidade de fração (uniformidade de fração é aqui utilizada de forma intercambiável com uniformidade de conteúdo e uniformidade de dosagem). A uniformidade de composição pode compreender um ou ambos os tipos, dependendo da uso e do contexto. A uniformidade de composição pode compreender um padrão da homogeneidade de uma combinação (por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP) com relação a um ou uma pluralidade de componentes. Em algumas modalidades, uma combinação que atende a um padrão para uniformidade de composição fá-lo em relação a um, dois, três, quatro ou mais (por exemplo, todos) componentes (por exemplo, entidades de aminoácidos de grau farmacêutico). Uniformidade de mistura
[0257] A uniformidade de mistura se refere ao nível de homogeneidade da distribuição dos componentes em uma combinação, por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP. Em algumas modalidades, um padrão para uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de mistura, é atendido quando a quantidade de um componente (por exemplo, uma entidade de aminoácido de grau farmacêutico) em um primeiro ponto de amostragem na combinação (por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP) difere em não mais do que uma quantidade predeterminada de um valor de referência. As quantidades podem ser absolutas, por exemplo gramas, ou relativas, por exemplo, peso/peso (por exemplo, X g do componente em Y g do ponto de amostragem). As quantidades podem ser valores arbitrários, como no caso de comparar valores de absorbância com valores de absorbância ou em comparações estatísticas de curvas, por exemplo, de espectros. Em algumas modalidades, a aquisição de um valor para uniformidade de mistura compreende a avaliação de um padrão para uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de mistura, pela aquisição de um valor para a quantidade de um componente em um primeiro ponto de amostragem na combinação e comparação do mesmo com o valor de referência.
[0258] Em algumas modalidades, o NIR é utilizado para determinar se a quantidade de um componente (por exemplo, uma entidade de aminoácido de grau farmacêutico) em um primeiro ponto de amostragem na combinação (por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP) difere em não mais do que uma quantidade predeterminada de uma segunda ou outra amostragem. Utilizando o NIR, o espectro infravermelho próximo de um ponto de amostragem pode ser adquirido e comparado ao espectro infravermelho próximo de um segundo ponto de amostragem ou outro ponto de amostragem (por exemplo, um terceiro, quarto, quinto, sexto, sétimo, oitavo, nono e/ou décimo ponto de amostragem) ou ao espectro infravermelho próximo de uma amostra conhecida por atender a um padrão de referência, por exemplo, um padrão para uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de mistura. Se a comparação mostrar que os espectros são similares o suficiente entre si, um padrão para uniformidade de mistura é atendido. A similaridade dos espectros NIR pode ser avaliada por comparação do índice de conformidade dos pontos de amostragem. O índice de conformidade é um valor gerado pelos espectros NIR obtidos, e os exemplos de índices de conformidade descritos não são uma lista exaustiva de todos os índices de conformidade possíveis. O índice de conformidade pode ser a absorbância em um determinado comprimento de onda ou comprimentos de onda na gama do infravermelho próximo. O índice de conformidade pode ser o desvio padrão da absorbância média em um determinado comprimento de onda ou comprimentos de onda na gama do infravermelho próximo em uma pluralidade de pontos de amostragem. A principal característica do índice de conformidade, seja qual for o valor selecionado, é que os índices de conformidade dos pontos de amostragem acessados convergem (no caso de absorbância em um comprimento de onda particular) ou reduzem (no caso de desvio padrão) conforme aumenta o tempo de mistura/combinação. Por exemplo, o índice de conformidade pode ser selecionado para ser um comprimento de onda de X nm na gama do infravermelho próximo. A absorbância em X nm será medida em uma pluralidade de pontos de amostragem em pontos de tempo durante a mistura. Conforme a mistura continua, a absorbância em X nm em cada ponto de amostragem ficará mais similar uma à outra.
[0259] Em algumas modalidades, o valor de referência é a quantidade do componente em um segundo ponto de amostragem ou outro ponto de amostragem (por exemplo, um terceiro, quarto, quinto, sexto, sétimo, oitavo, nono e/ou décimo ponto de amostragem) na combinação (por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP). O segundo ponto de amostragem ou outro ponto de amostragem (por exemplo, um terceiro, quarto, quinto, sexto, sétimo, oitavo, nono e/ou décimo ponto de amostragem) pode ser um local espacial diferente na combinação, por exemplo, as amostras podem ser coletadas de um conjunto de locais espaciais predeterminados e espalhados, por exemplo, um plano de amostragem estratificada com locais predeterminados a serem amostrados, por exemplo, para obter amostras que representam uma variedade de locais no misturador ou agitador.
[0260] Em algumas modalidades, o segundo ponto de amostragem é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais minutos após o primeiro ponto de amostragem. Em algumas modalidades, vários pontos de amostragem separados no tempo são coletados ao longo do processo de fabricação da preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP). Em algumas modalidades, os pontos de amostragem separados no tempo estão em intervalos ao longo do processo de fabricação da preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP), por exemplo, a cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 minutos. Em algumas modalidades, os vários pontos de amostragem são comparados entre si (por exemplo, os pontos de amostragem mais recentes são comparados entre si).
[0261] Em algumas modalidades, um padrão para uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de mistura, é atendido quando a quantidade do componente em um primeiro ponto de amostragem difere do valor de referência, por exemplo, da quantidade do componente em um segundo ponto de amostragem ou outro ponto de amostragem (por exemplo, um terceiro, quarto, quinto, sexto, sétimo, oitavo, nono e/ou décimo ponto de amostragem) em menos do que, ou igual a, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10%, por exemplo, 10%. Em algumas modalidades, um padrão para uniformidade de composição é atendido quando a quantidade de um componente em uma primeira amostragem difere em não mais do que 10% da quantidade do componente em um segundo ponto de amostragem ou outro ponto de amostragem (por exemplo, um terceiro, quarto, quinto, sexto, sétimo, oitavo, nono e/ou décimo ponto de amostragem). Em algumas modalidades, um padrão para uniformidade de composição é atendido quando a quantidade de um componente em uma primeira amostragem difere em não mais do que 10% da quantidade do componente presente na combinação (por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP). Em algumas modalidades, um padrão para uniformidade de composição é atendido quando a quantidade de um componente no ponto de amostragem mais recente difere em não mais do que 10% da quantidade do componente presente no próximo ponto de amostragem mais recente. Os valores para a quantidade de um componente presente em um ponto de amostragem podem compreender espectros NIR. As comparações de valores para a quantidade de um componente presente em um primeiro, segundo ou outro ponto de amostragem podem compreender a comparação de espectros NIR, por exemplo, a sobreposição de espectros NIR ou a comparação de índices de conformidade do primeiro, segundo ou outros pontos de amostragem. A uniformidade de mistura pode ser atendida quando os espectros NIR, por exemplo, os índices de conformidade, atingem um limite de similaridade ou se sobrepõem. Uniformidade de Fração
[0262] A uniformidade de fração se refere à homogeneidade das frações da preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, com relação às quantidades de componentes (por exemplo, entidades de aminoácidos de grau farmacêutico). Em algumas modalidades, os métodos aqui descritos compreendem a divisão de uma preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP) em uma pluralidade de frações. Em algumas modalidades, um padrão para uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de fração, é atendido quando a quantidade de um componente (por exemplo, uma entidade de aminoácido de grau farmacêutico) em uma primeira fração difere em não mais do que uma quantidade predeterminada de um valor de referência. As quantidades podem ser absolutas, por exemplo, gramas, ou relativas, por exemplo, peso/peso (por exemplo, X g do componente em Y g do ponto de amostragem). Em algumas modalidades, a quantidade de um componente (por exemplo, uma entidade de aminoácido de grau farmacêutico) em uma primeira fração, segunda fração ou outra fração (por exemplo, uma terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona ou décima fração) é determinada utilizando HPLC.
[0263] Em algumas modalidades, o valor de referência é a quantidade do componente em uma segunda fração. Em algumas modalidades, o valor de referência é a(s) quantidade(s) do componente em uma pluralidade de frações, por exemplo, uma pluralidade de frações de teste (por exemplo, a primeira fração é comparada a uma pluralidade de frações de teste). Em uma modalidade, o valor de referência é a quantidade média ou mediana do componente na pluralidade de frações de teste.
[0264] Em algumas modalidades, um padrão para uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de fração, é atendido quando as quantidades de um componente (por exemplo, uma entidade de aminoácido de grau farmacêutico) em uma pluralidade de frações de teste difere em não mais do que uma quantidade predeterminada de um valor de referência. As quantidades podem ser absolutas, por exemplo, gramas, ou relativas, por exemplo, peso/peso (por exemplo, X g do componente em Y g do ponto de amostragem). Em algumas modalidades, o valor de referência é a quantidade média ou mediana do componente na pluralidade de frações de teste.
[0265] Em algumas modalidades, o valor de referência é a quantidade do componente na combinação (por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP). Por exemplo, o valor de referência pode ser o peso total/peso do componente presente na combinação total. Em algumas modalidades, a avaliação para verificar se um padrão para uniformidade de composição é atendido compreende a comparação de uma quantidade relativa de um componente em um primeiro ponto de amostragem (por exemplo, X g do componente em Y g do ponto de amostragem) com a quantidade relativa do componente na combinação (por exemplo, W g do componente em Z g da combinação total); por outras palavras, a avaliação do padrão em relação à uniformidade de composição pode compreender a comparação de X/Y com W/Z.
[0266] Em uma modalidade, pelo menos X% das frações da pluralidade de frações da preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP) são frações de teste, em que X é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, ou 50. Em algumas modalidades, não mais do que X% das frações da pluralidade de frações da preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP) são frações de teste, em que X é 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, ou 1. Em uma modalidade, as frações de teste são frações comparadas a um valor de referência, por exemplo, um ao outro ou a quantidade de um componente presente na preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP), para determinar se um padrão de referência (por exemplo, para uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de fração) foi atendido. Em algumas modalidades, um padrão para uniformidade de composição, por exemplo, uniformidade de fração, é atendido quando a quantidade de um componente presente em, pelo menos, X% das frações de teste difere de um valor de referência em não mais do que 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10%, em que X é 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 99, ou 100% e em que o valor de referência é selecionado da quantidade média do componente presente nas frações de teste, a quantidade mediana do componente presente nas frações de teste ou a quantidade do componente presente na preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP).
[0267] Em algumas modalidades, as frações da preparação de mistura a seco (por exemplo, PGDBP) podem ser embalagens stick ou outras formas de dosagem unitária. Nível de contaminação
[0268] Em algumas modalidades, o padrão de referência é o nível de contaminação. Ao combinar matérias-primas, por exemplo, entidades de aminoácidos e/ou excipientes de grau farmacêutico, em uma combinação, por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, contaminantes podem estar presentes na combinação. Uma combinação, por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, atende a um padrão para o nível de contaminação quando a combinação não compreende substancialmente (por exemplo, compreende menos do que 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0,15, 0,1, 0,05, 0,01, ou 0,001% (p/p) de) um contaminante. Em algumas modalidades, uma combinação, por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, compreende menos do que 0,15% (p/p) de um contaminante. Em algumas modalidades, uma combinação, por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, compreende um nível mais baixo de um contaminante do que o nível permissível em alimentos (por exemplo, conforme definido por organizações reguladoras apropriadas conhecidas na técnica). Em algumas modalidades, uma combinação, por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, descrita aqui em um método, não compreende um contaminante. Os contaminantes incluem qualquer substância que não esteja deliberadamente presente na combinação, por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, (por exemplo, entidades de aminoácidos e excipientes de grau farmacêutico, por exemplo, componentes de administração oral, estão deliberadamente presentes) ou qualquer substância que tenha um efeito negativo não intencional em um parâmetro de qualidade do produto da PGDBP ou pluralidade de frações da PGDBP (por exemplo, efeitos colaterais em um indivíduo, diminuição da potência, diminuição da estabilidade/vida útil, descoloração, odor, gosto ruim, textura/sensação ruim na boca ou aumento da segregação de componentes da PGDBP). Em algumas modalidades, os contaminantes incluem micróbios, endotoxinas, metais (por exemplo, metais pesados), solventes residuais, impurezas de matérias-primas, extraíveis e/ou lixiviáveis. Em algumas modalidades, uma combinação, por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, compreende um nível de contaminantes (por exemplo, não compreende substancialmente um contaminante) que é compatível com um padrão de referência, p. ex, um padrão promulgado por uma agência conhecida pelos especialistas na técnica ou aqui descrita. Em algumas modalidades, uma combinação, por exemplo, preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, compreende um nível de contaminantes (por exemplo, não compreende substancialmente um contaminante) que é compatível com um padrão do ICH, por exemplo, o padrão Q3A do ICH de Impurezas em Novas Substâncias Medicamentosas.
[0269] Em algumas modalidades, os métodos aqui descritos compreendem ainda a aquisição de um valor para o nível de um contaminante em um ponto de amostragem em uma ou ambas de combinação ou PGDBP. Em algumas modalidades, os métodos aqui descritos compreendem ainda a aquisição de um valor para o nível de um contaminante em cada uma de uma pluralidade de pontos em uma ou ambas de combinação ou PGDBP, ou em uma fração de teste (por exemplo, da combinação ou PGDBP). Em algumas modalidades, os métodos aqui descritos compreendem ainda a aquisição de um valor para o nível de um contaminante em uma fração, por exemplo, uma fração de teste da pluralidade de frações. Em algumas modalidades, em resposta ao valor para o nível do contaminante, por exemplo, e a determinação de que um padrão para o nível de contaminação foi atendido, os métodos aqui descritos compreendem ainda a seleção e execução de uma etapa de processamento posterior, por exemplo, divisão da PGDBP em frações (por exemplo, fracionamento) e enchimento e acabamento (por exemplo, formulação (por exemplo, com excipientes), embalagem e rotulagem) e distribuição. Em algumas modalidades, em resposta ao valor para o nível do contaminante, por exemplo, e a determinação de que um padrão para o nível de contaminação não foi atendido, os métodos aqui descritos compreendem ainda a seleção e execução de uma etapa de processamento posterior diferente, por exemplo, a purificação e/ou remoção do contaminante ou descarte da fração, pluralidade de frações ou PGDBP. Composições dietéticas
[0270] A composição (por exemplo, Porção Ativa) incluindo entidades de aminoácidos pode ser formulada e utilizada como uma composição dietética, por exemplo, escolhida de um alimento médico, um alimento funcional ou um suplemento. Em tal modalidade, as matérias-primas e produto final devem atender aos padrões de um produto alimentar.
[0271] A composição de qualquer um dos aspectos e modalidades aqui divulgados pode ser para uso como uma composição dietética, por exemplo, escolhida de um alimento médico, um alimento funcional ou um suplemento. Em algumas modalidades, a composição dietética é para uso em um método compreendendo a administração da composição a um indivíduo. A composição pode ser para uso em uma composição dietética com a finalidade de melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; função vascular; estresse oxidativo (por exemplo, um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo e sistêmico); ou inflamação.
[0272] Em algumas modalidades, a composição dietética é escolhida de um alimento médico, um alimento funcional ou um suplemento. Em algumas modalidades, a composição está a forma de um suplemento nutricional, uma formulação dietética, um alimento funcional, um alimento médico, um alimento ou uma bebida, compreendendo uma composição aqui descrita. Em algumas modalidades, o suplemento nutricional, a formulação dietética, o alimento funcional, o alimento médico, o alimento ou a bebida compreendendo uma composição aqui descrita para uso no gerenciamento de uma hemoglobinopatia (por exemplo, um indivíduo com doença falciforme) ou uma talassemia.
[0273] A presente invenção apresenta um método para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; função vascular; estresse oxidativo (por exemplo um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo ou sistêmico); ou inflamação, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de uma composição dietética aqui descrita a um indivíduo.
[0274] A presente invenção apresenta um método para proporcionar suporte ou suplementação nutricional a um indivíduo com uma hemoglobinopatia (p. ex, um indivíduo com doença falciforme) ou uma talassemia, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de uma composição aqui descrita ao indivíduo.
[0275] A presente invenção apresenta um método para proporcionar suporte ou suplementação nutricional que auxilia no gerenciamento de uma hemoglobinopatia (por exemplo, doença falciforme) ou uma talassemia, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de uma composição aqui descrita a um indivíduo em necessidade da mesma.
[0276] Em algumas modalidades, o método é um método não terapêutico. Em algumas modalidades, as composições compreendendo as porções ativas aqui descritas são utilizadas de maneiras não terapêuticas, tais como para proporcionar nutrição, manter a saúde ou melhorar a aparência cosmética em indivíduos saudáveis. Exemplos incluem, mas não se limitam a, uso das composições aqui descritas como suplementos dietéticos ou como alimentos. As composições da aplicação instantânea podem ser utilizadas para nutrir ou manter a saúde de vários elementos do sistema circulatório, tais como vasos sanguíneos, sangue, eritrócitos, hemoglobina e/ou sistema vascular.
[0277] As composições podem ser utilizadas em métodos de gerenciamento dietético de um indivíduo (por exemplo, um indivíduo sem uma hemoglobinopatia ou uma talassemia). Em algumas modalidades, o indivíduo não tem uma hemoglobinopatia ou uma talassemia.
[0278] Em algumas modalidades, o indivíduo está em risco de, ou foi diagnosticado com, uma hemoglobinopatia (por exemplo, uma β- hemoglobinopatia) ou uma talassemia. Em certas modalidades, a hemoglobinopatia é uma doença falciforme. Em certas modalidades, a talassemia é β-talassemia.
[0279] Em algumas modalidades, a doença falciforme é escolhida de: anemia falciforme (HbSS), doença de hemoglobina SC (HbSC), β +- talassemia falciforme (HbS/β+), β0-talassemia falciforme (HbS/β0), doença de hemoglobina SE, doença de hemoglobina SD ou doença de hemoglobina SO.
EXEMPLOS
[0280] Os Exemplos abaixo são apresentados para auxiliar no entendimento das invenções, mas não se destinam a ser, e não devem ser interpretados como sendo, limitativos de seu escopo de qualquer forma. Introdução
[0281] As composições compreendendo entidades de aminoácidos foram testadas em modelos de células primárias humanas normais e específicas da doença. Os sistemas modelo foram conduzidos em ambientes que visam simular níveis fisiológicos de biofluidos e nutrientes. Estes modelos incluem condições de doença (por exemplo, inflamação) para isolar e compreender melhor os efeitos das composições em subconjuntos de vias metabólicas. A natureza de alto rendimento destes modelos possibilitou a descoberta de combinações específicas de entidades de aminoácidos que podem ter efeitos benéficos para múltiplas vias em indivíduos com hemoglobinopatia (por exemplo, doença falciforme) ou talassemia (por exemplo, α-talassemia ou β-talassemia) Exemplo 1. Secreção de Citocina em Macrófagos Humanos Primários. Isolamento de Células Mononucleares do Sangue Periférico (PBMC)
[0282] Buffy coats não purificados (Research Blood Components) foram cuidadosamente vertidos em tubos de centrifugação de 50 mL e diluídos com Solução Salina Tamponada com Fosfato de Dulbecco (dPBS) com Cálcio e Magnésio (Gibco), à temperatura ambiente. Os buffy coats diluídos foram adicionalmente divididos em quatro tubos de centrifugação totais de 50 mL a 20 mL por tubo. Meio de Separação de Linfócito (Corning) foi cuidadosamente pipetado para o fundo do tubo de centrifugação. As misturas foram centrifugadas a 850 X g por 32 minutos a 20 °C com 0 desaceleração e aceleração.
[0283] A camada de PBMC foi separada de outros componentes após centrifugação e adicionada a um novo tubo de centrifugação de 50 mL contendo 25 mL de dPBS. O volume total foi completado até 50 mL com dPBS e centrifugado a 600 X g por 10 minutos a 20 °C com aceleração de 9, desaceleração de 5. O sobrenadante foi cuidadosamente removido dos péletes celulares. Os péletes celulares foram ressuspendidos utilizando 10 mL de dPBS. O volume total foi, em seguida, completado até 50 mL utilizando dPBS e centrifugado a 450 X g por 5 minutos a 20 °C com aceleração de 9, desaceleração de 9. A remoção de sobrenadante e a ressuspensão de pélete celular foram repetidas novamente.
[0284] O sobrenadante foi, em seguida, cuidadosamente removido dos péletes celulares. Os péletes celulares foram ressuspendidos em 10 mL de dPBS sem cálcio ou magnésio e filtrados através de um coador de células de 70 uM. O número total de PBMC foi determinado utilizando um contador de células automatizado Cellometer K2. Um total de células de 5E6 foi guardado para análise por citometria de fluxo. As células remanescentes foram centrifugadas a 490 X g por 5 minutos a 20 °C com aceleração de 9, desaceleração de 9. Seleção de Células CD14+
[0285] As células CD14+ foram selecionadas utilizando o EasySepTM Human CD14 Positive Selection Kit II (STEMCELL Technologies). As células foram ressuspendidas em Tampão EasySepTM frio (STEMCELL Technologies) a 1X108 células/mL. Um total de 100 uL/mL de EasySepTM Human CD14 Positive Selection Cocktail II foi adicionado à suspensão de células, misturado e incubado à temperatura ambiente por 10 minutos. Um total de 100 uL/mL de RapidSpheres foi adicionado à mistura e incubado à temperatura ambiente por 3 minutos após mistura, em seguida, tampão RoboSep foi adicionado até completar o volume total de 10 mL. A mistura em um tubo de 15 mL foi colocada em ímã e incubada à temperatura ambiente por 3 minutos. O sobrenadante foi descartado e 10 mL de tampão EasySepTM fresco foi adicionado ao tubo de 15 mL. A adição de tampão RoboSep, mistura e descarte de sobrenadante foram repetidas mais duas vezes.
[0286] As parcelas negativas e positivas foram centrifugadas a 490 X g por 5 minutos a 20 °C com aceleração de 9, desaceleração de 9 e ressuspendidas em DMEM (Gibco) e 10% de Soro Bovino Fetal Inativado por Calor (Atlanta Bio) e Penicilina/Estreptomicina. As células foram contadas e centrifugadas novamente a 490 X g por 5 minutos a 20 °C com aceleração de 9, desaceleração de 9. Após centrifugação, as células foram ressuspendidas em DMEM (Gibco) e 10% de Soro Fetal Bovino Inativado por Calor (Atlanta Bio) e Penicilina/Estreptomicina contendo 500 U/mL da GM- e colocadas em placas a 1-2 X 106 células/mL em placas de cultura de tecido de 10 cm. As células foram mantidas a 37 oC, 5% de CO2 entre alimentações/coleta. Alimentação de Células CD14+
[0287] As células foram alimentadas a cada 3-4 dias removendo-se o meio e as células não fixadas, centrifugando-se a 490 X g por 5 minutos a 20C com aceleração de 9, desaceleração de 9 e ressuspendendo-se em DMEM fresco (Gibco) e 10% Soro Fetal Bovino Inativado por Calor (Atlanta Bio) e Penicilina/Estreptomicina contendo GM-CSF. As células ressuspendidas foram inoculadas de volta em placas de cultura de tecido de 10 cm e incubadas a 37 oC, 5% de CO2. Macrófagos diferenciados foram utilizados para experimentos subsequentes. Rastreio
[0288] PMBC humanas primárias derivadas de macrófagos foram inoculadas no dia 0 a 3,0E4 células por poço em microplacas de 96 poços (ThermoFisher) em meio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) (Gibco) suplementado com penicilina-estreptomicina (Hyclone) e 10% de Soro Fetal Bovino Inativado por Calor (HI-FBS) (Atlanta Bio) e incubadas a 37 oC, 5% de CO2. No dia 1, as células foram lavadas uma vez com 150 uL por poço DPBS (Gibco) e tratadas com 75 uL de: a. DMEM sem aminoácidos (US Biologicals) contendo uma concentração de aminoácidos personalizada definida com base nas concentrações fisiológicas médias no sangue com base em valores publicados no Banco de Dados de Metaboloma Humano (HMDB), com glicose 6 mM, piruvato de sódio 1 mM, HEPES 10 mM, 0,2% de primocina (InVivoGen); ou b. O mesmo meio descrito acima com um aminoácido em várias concentrações, incluindo completamente sem.
[0289] Do dia 2, as células foram tratadas com 75 uL dos mesmos meios descritos acima suplementados com 0,30 ng/mL de lipopolissacarídeo (LPS) (Sigma) para uma concentração final de 0,15 ng/mL de LPS. Os poços de controle foram tratados com BX-795 1 uM (Tocis), TAK242 1 uM (Sigma), 0,15 ng/mL de LPS ou solução salina tamponada com fosfato (PBS).
[0290] No dia 3, o sobrenadante foi coletado e imediatamente congelado em um congelador a -80 oC. As células foram lavadas uma vez com 150 uL de DPBS e a viabilidade foi avaliada utilizando o Ensaio de Citotoxicidade de Proliferação de Células WST-8 (Dojindo). Após o ensaio, as células foram lavadas duas vezes com 150 uL de PBS e fixadas com 4% de paraformaldeído por 5 min seguidos por duas lavagens adicionais com 150 uL de PBS. Os níveis de proteína em amostras de sobrenadante foram analisados por ELISA para IL-6 e TNFa utilizando kits comercialmente disponíveis (R&D Systems) de acordo com protocolos fornecidos pelo fabricante. Os resultados são mostrados nas Tabelas -7-12 abaixo.
Tabela 7. Medições de IL-6: Doador 1 Medições de IL-6 do Doador 1 Suplemento de Conc.
Desvio Número Aminoácido (X) Média valor P* Significância Padrão de valores LIVRQNAC 40 -619,787 114,1592 3 0,0001 **** LIVRQNAC 30 -525,849 63,87122 3 0,0001 **** LIVRQNAC 20 -290,199 33,5584 3 0,0092 ** LIVRQNAC 10 51,81434 183,3933 3 0,9479 ns LIVRQNAC 1 0 148,7761 3 na na LIVRQNAC+G 40 -1099,11 44,1139 3 0,0001 **** LIVRQNAC+G 30 -903,836 107,7113 3 0,0001 **** LIVRQNAC+G 20 -616,626 114,7826 3 0,0001 **** LIVRQNAC+G 10 -367,918 98,44611 3 0,0007 *** LIVRQNAC+G 1 0 172,9553 3 na na LIVRQNAC+S 40 -968,997 90,53282 3 0,0001 **** LIVRQNAC+S 30 -798,326 52,89122 3 0,0001 **** LIVRQNAC+S 20 -506,804 63,85224 3 0,0001 **** LIVRQNAC+S 10 -243,259 114,742 3 0,0365 * LIVRQNAC+S 1 0 259,8506 3 na na LIV 40 4,918642 62,7077 3 0,9999 ns LIV 30 86,01907 128,1151 3 0,7604 ns LIV 20 112,1501 83,62436 3 0,564 ns LIV 10 54,22668 63,10515 3 0,9392 ns LIV 1 0 75,98804 3 na na LIVRQ 40 322,0706 73,87715 3 0,0033 ** LIVRQ 30 297,8004 34,60168 3 0,0072 ** LIVRQ 20 604,021 203,8836 3 0,0001 **** LIVRQ 10 289,1798 57,78952 3 0,0095 ** LIVRQ 1 0 93,58494 3 na na RQNAC 40 -911,011 12,65475 3 0,0001 **** RQNAC 30 -766,912 26,23659 3 0,0001 **** RQNAC 20 -511,403 32,15983 3 0,0001 **** RQNAC 10 -201,63 6,477522 3 0,1054 ns
RQNAC 1 0 174,9658 3 na na N-Acetil 40 -914,194 56,77271 3 0,0001 **** Cisteína N-Acetil 20 -553,802 85,27013 3 0,0001 **** Cisteína N-Acetil 10 -121,142 53,05191 3 0,4973 ns Cisteína N-Acetil 5 308,1772 263,4651 3 0,0052 ** Cisteína N-Acetil 0 0 45,08485 3 na na Cisteína
Medições de IL-6 do Doador 1 Suplemento de Conc.
Desvio Número Aminoácido (µM) Média valor P* Significância Padrão de valores Valina 23420 -106,268 155,3559 3 0,7885 ns Valina 11710 -97,25 77,26313 3 0,8339 ns Valina 4684 -85,9843 74,99317 3 0,8841 ns Valina 234 0 124,8497 3 na na Arginina 5440 357,4394 154,8508 3 0,0159 * Arginina 2720 -186,57 85,86105 3 0,3477 ns Arginina 1088 -181,36 131,6475 3 0,3722 ns Arginina 109 0 282,0306 3 na na Glutamina 22484 440,1437 114,443 3 0,0022 ** Glutamina 11242 397,1745 23,36272 3 0,0064 ** Glutamina 3747 291,5443 81,30853 3 0,0623 ns Glutamina 749 0 73,06692 3 na na Isoleucina 6639 -218,332 146,5098 3 0,221 ns Isoleucina 3320 -15,8843 89,88616 3 0,9998 ns Isoleucina 1328 25,98372 323,6109 3 0,9984 ns Isoleucina 66 0 48,21125 3 na na Leucina 15270 84,46122 68,15253 3 0,8902 ns Leucina 7635 -69,9873 99,00843 3 0,9398 ns Leucina 3054 244,9743 355,6551 3 0,1442 ns Leucina 153 0 61,85589 3 na na
[0291] O tratamento com LIVRQNAC, LIVRQNAC + G, LIVRQNAC + S, RQNAC e NAC reduziu significativamente a secreção de IL-6 induzida por LPS em macrófagos derivados por monócitos humanos primários.
O tratamento com LIVRQ aumentou significativamente a secreção de IL-6, enquanto LIV não teve efeito.
Arginina e glutamina administradas sozinhas aumentaram a secreção de IL-6 enquanto outros aminoácidos sozinhos não afetaram a secreção de IL-6. Comparações Múltiplas de Dunnett por ANOVA de duas vias foram realizadas para análise estatística.
Valores médios representados como valores subtraídos aos basais.
Tabela 8. Medições de IL-6: Doador 2 Medições de IL-6 do Doador 2 Suplemento de Conc. (X) Desvio Número de valor Signi- Aminoácido Média Padrão valores P* ficância LIVRQNAC 40 -27,1916 1,853569 3 0,0003 *** LIVRQNAC 30 -21,5766 1,709414 3 0,0045 ** LIVRQNAC 20 -8,20655 8,458638 3 0,5143 ns LIVRQNAC 10 -1,71581 6,104437 3 0,9965 ns LIVRQNAC 1 -2,4E-15 11,85079 3 LIVRQNAC+G 40 -33,2001 3,55425 3 0,0001 **** LIVRQNAC+G 30 -30,8468 0,854995 3 0,0001 **** LIVRQNAC+G 20 -18,4318 4,870421 3 0,0187 * LIVRQNAC+G 10 14,63551 21,82024 3 0,0824 ns LIVRQNAC+G 1 2,37E-15 8,607557 3 LIVRQNAC+S 40 -26,5993 2,963677 3 0,0004 *** LIVRQNAC+S 30 -14,2166 1,460268 3 0,0954 ns LIVRQNAC+S 20 -8,2522 2,917345 3 0,5095 ns LIVRQNAC+S 10 8,127841 1,783214 3 0,5227 ns LIVRQNAC+S 1 0 6,232673 3 LIV 40 34,10306 1,950493 3 0,0001 **** LIV 30 31,10835 9,757211 3 0,0001 **** LIV 20 20,32684 3,17293 3 0,0081 ** LIV 10 15,10204 9,179111 3 0,0697 ns
LIV 1 -7,1E-15 4,738966 3 LIVRQ 40 49,62156 17,37012 3 0,0001 **** LIVRQ 30 42,9625 7,798872 3 0,0001 **** LIVRQ 20 48,38603 13,08566 3 0,0001 **** LIVRQ 10 45,99191 15,19687 3 0,0001 **** LIVRQ 1 1,18E-15 6,324379 3 RQNAC 40 -36,5521 1,877658 3 0,0001 **** RQNAC 30 -26,3768 0,744676 3 0,0004 *** RQNAC 20 -18,7428 1,353649 3 0,0164 * RQNAC 10 -3,74427 4,74578 3 0,9393 ns RQNAC 1 2,37E-15 12,26314 3 N-Acetil Cisteína 40 -33,7585 0,895842 3 0,0001 **** N-Acetil Cisteína 20 -24,9999 1,083467 3 0,0008 *** N-Acetil Cisteína 10 -9,75111 2,381012 3 0,3617 ns N-Acetil Cisteína 5 -0,79458 5,988677 3 0,9998 ns N-Acetil Cisteína 0 -2,4E-15 1,900091 3
Medições de IL-6 do Doador 2 Suplemento de Conc.
Desvio Número de valor Signi- Aminoácido (µM) Média Padrão valores P* ficância Valina 23420 4,395899 10,35903 3 0,973 ns Valina 11710 -1,19605 7,303571 3 0,9998 ns Valina 4684 -4,52846 4,069907 3 0,97 ns Valina 234 -4,7E-15 9,361734 3 Arginina 5440 -12,4164 0,292618 3 0,5017 ns Arginina 2720 -13,6102 2,1177 3 0,4207 ns Arginina 1088 -9,70116 9,286942 3 0,6995 ns Arginina 109 2,37E-15 14,30728 3 Glutamina 22484 34,38845 7,467725 3 0,0026 ** Glutamina 11242 63,31441 35,02748 3 0,0001 **** Glutamina 3747 22,51543 9,686139 3 0,0721 ns Glutamina 749 2,37E-15 2,203881 3 Isoleucina 6639 -1,77438 10,22772 3 0,999 ns Isoleucina 3320 2,305485 1,328015 3 0,9975 ns Isoleucina 1328 -2,31776 9,121049 3 0,9974 ns
Isoleucina 66 0 12,3413 3 Leucina 15270 47,59735 16,64049 3 0,0001 **** Leucina 7635 30,46065 7,144005 3 0,0087 ** Leucina 3054 29,60609 13,39676 3 0,0111 * Leucina 153 7,11E-15 6,308577 3
[0292] O tratamento com LIVRQNAC, LIVRQNAC + G, LIVRQNAC + S, RQNAC e NAC reduziu significativamente a secreção de IL-6 induzida por LPS em macrófagos derivados por monócitos humanos primários. O tratamento com LIVRQ e LIV aumentou significativamente a secreção de IL-6. Glutamina e leucina administradas sozinhas aumentaram a secreção de IL-6, enquanto os outros aminoácidos sozinhos não tiveram efeito. Comparações Múltiplas de Dunnett por ANOVA de duas vias foram realizadas para análise estatística. Valores médios representados como valores subtraídos da linha de base. Tabela 9. Medições de IL-6: Doador 3 Suplemento Conc. Medições de IL-6 do Doador 3 de (X) Média Desvio Número de valor P* Signi- Aminoácido Padrão valores ficância LIVRQNAC 40 -18,2445 4,129349 3 0,7529 ns LIVRQNAC 30 -16,8219 1,366045 3 0,8001 ns LIVRQNAC 20 -13,4826 12,48206 3 0,8948 ns LIVRQNAC 10 -34,4539 37,38053 3 0,2356 ns LIVRQNAC 1 -1,4E-14 14,03982 3 LIVRQNAC+G 40 -54,4799 5,467815 3 0,0228 * LIVRQNAC+G 30 -48,3118 1,960574 3 0,0513 ns LIVRQNAC+G 20 -55,792 7,763897 3 0,019 * LIVRQNAC+G 10 -44,8309 14,34972 3 0,0783 ns LIVRQNAC+G 1 0 26,01471 3 LIVRQNAC+S 40 -14,5337 15,82418 3 0,868 ns LIVRQNAC+S 30 -25,9127 10,00119 3 0,479 ns LIVRQNAC+S 20 -25,8862 21,61536 3 0,48 ns LIVRQNAC+S 10 -11,9742 10,3333 3 0,9277 ns LIVRQNAC+S 1 -4,3E-14 15,34164 3
LIV 40 10,21257 37,58938 3 0,9576 ns LIV 30 -32,6891 24,862 3 0,2771 ns LIV 20 27,66715 39,40901 3 0,4207 ns LIV 10 9,44789 71,20002 3 0,9677 ns LIV 1 -4,7E-14 27,50075 3 LIVRQ 40 74,9145 12,55033 3 0,001 *** LIVRQ 30 120,1764 20,21514 3 0,0001 **** LIVRQ 20 77,12007 11,45452 3 0,0007 *** LIVRQ 10 67,95483 43,58345 3 0,003 ** LIVRQ 1 -2,4E-14 27,62048 3 RQNAC 40 -45,9765 5,740028 3 0,0683 ns RQNAC 30 -53,3845 16,45009 3 0,0265 * RQNAC 20 -65,6761 3,400465 3 0,0044 ** RQNAC 10 -32,8776 33,99103 3 0,2724 ns RQNAC 1 -2,8E-14 23,14404 3 N-Acetil 40 -140,851 4,662272 3 0,0001 **** Cisteína N-Acetil 20 -122,656 8,219985 3 0,0001 **** Cisteína N-Acetil 10 -103,586 28,4385 3 0,0001 **** Cisteína N-Acetil 5 -70,3269 8,563896 3 0,0021 ** Cisteína N-Acetil 0 -9,5E-15 11,75797 3 Cisteína
Suplemento Conc.
Medições de IL-6 do Doador 3 de (µM) Média Desvio Número de valor P* Signi- Aminoácido Padrão valores ficância Valina 23420 -29,2004 25,98066 3 0,4329 ns Valina 11710 -43,8022 8,331697 3 0,1239 ns Valina 4684 -30,0609 8,478329 3 0,4072 ns Valina 234 4,26E-14 17,2027 3 Arginina 5440 -6,80983 0,643932 3 0,9922 ns Arginina 2720 -7,50318 22,06663 3 0,9888 ns
Arginina 1088 31,5786 70,48311 3 0,3642 ns Arginina 109 0 17,26952 3 Glutamina 22484 108,5158 55,59202 3 0,0001 **** Glutamina 11242 98,4903 58,37 3 0,0001 **** Glutamina 3747 25,35457 16,40416 3 0,556 ns Glutamina 749 3,79E-14 16,54987 3 Isoleucina 6639 -16,3663 8,09174 3 0,9718 ns Isoleucina 3320 0 19,80362 3 0,9928 ns Isoleucina 1328 -28,9897 13,10903 3 0,6593 ns Isoleucina 66 -6,69039 13,72995 3 Leucina 15270 # # 3 # # Leucina 7635 # # 3 # # Leucina 3054 # # 3 # # Leucina 153 # # 3 # # # A leucina não foi medida em Exp3 devido a erro técnico.
[0293] O tratamento com LIVRQNAC + G, LIVRQNAC + S, RQNAC e NAC reduziu significativamente a secreção de IL-6 induzida por LPS em macrófagos derivados por monócitos humanos primários. O tratamento com LIVRQ aumentou a secreção de IL-6, enquanto LIV e LIVRQNAC não tiveram efeitos estatisticamente significativos sobre a secreção de IL-6. Glutamina administrada sozinha aumentou significativamente a secreção de IL-6, enquanto outros aminoácidos sozinhos não tiveram efeito. Comparações Múltiplas de Dunnett por ANOVA de duas vias foram realizadas para análise estatística. Valores médios representados como valores subtraídos da linha de base. Tabela 10. Medições de TNFalfa: Doador 1 Suplemento de Conc. Medições de TNFa do Doador 1 Aminoácido (X) Média Desvio Número valor P* Signi- Padrão de valores ficância LIVRQNAC 40 -422,74 4,347575 3 0,0001 **** LIVRQNAC 30 -389,74 1,004633 3 0,0001 **** LIVRQNAC 20 -336,69 3,007435 3 0,0001 **** LIVRQNAC 10 -246,04 27,61929 3 0,0001 ****
LIVRQNAC 1 0 36,31082 3 LIVRQNAC+G 40 -490,92 4,427614 3 0,0001 **** LIVRQNAC+G 30 -447,73 9,819865 3 0,0001 **** LIVRQNAC+G 20 -377,32 5,837159 3 0,0001 **** LIVRQNAC+G 10 -268,29 9,642365 3 0,0001 **** LIVRQNAC+G 1 0 37,44353 3 LIVRQNAC+S 40 -415,03 4,800449 3 0,0001 **** LIVRQNAC+S 30 -379,44 4,694868 3 0,0001 **** LIVRQNAC+S 20 -323,77 7,971135 3 0,0001 **** LIVRQNAC+S 10 -209,59 21,15676 3 0,0001 **** LIVRQNAC+S 1 0 30,0492 3 LIV 40 60,37 20,26331 3 0,0065 ** LIV 30 42,09 22,95664 3 0,0865 ns LIV 20 63,37 37,24144 3 0,004 ** LIV 10 45,61 44,71078 3 0,0556 ns LIV 1 0 10,49958 3 LIVRQ 40 6,38 17,1283 3 0,9909 ns LIVRQ 30 -6,72 18,9622 3 0,989 ns LIVRQ 20 38,38 39,85515 3 0,1333 ns LIVRQ 10 -18,95 10,84371 3 0,6982 ns LIVRQ 1 0 36,96184 3 RQNAC 40 -408,44 1,179877 3 0,0001 **** RQNAC 30 -390,41 1,341282 3 0,0001 **** RQNAC 20 -338,2 3,284307 3 0,0001 **** RQNAC 10 -251,35 4,121085 3 0,0001 **** RQNAC 1 0 51,06933 3 N-Acetil Cisteína 40 -644,49 2,42197 3 0,0001 **** N-Acetil Cisteína 20 -561,33 8,435064 3 0,0001 **** N-Acetil Cisteína 10 -446,88 12,22132 3 0,0001 **** N-Acetil Cisteína 5 -326,24 11,10173 3 0,0001 **** N-Acetil Cisteína 0 0 42,00516 3
Suplemento de Conc.
Medições de TNFa do Doador 1 Aminoácido (µM) Média Desvio Número valor P* Signi- Padrão de valores ficância Valina 23420 -14,98 20,86784 3 0,9928 ns Valina 11710 -41,77 36,61662 3 0,7784 ns Valina 4684 -40,37 32,31016 3 0,7974 ns Valina 234 0 24,8661 3 Arginina 5440 62,06 48,80326 3 0,4786 ns
Arginina 2720 5,12 15,47951 3 0,9998 ns Arginina 1088 -24,33 17,74317 3 0,9577 ns Arginina 109 0 18,5366 3 Glutamina 22484 -103,07 27,02483 3 0,0985 ns Glutamina 11242 -65,24 23,02631 3 0,4346 ns Glutamina 3747 -45,7 28,56445 3 0,7222 ns Glutamina 749 0 30,75138 3 Isoleucina 6639 -40,95 78,56369 3 0,7896 ns Isoleucina 3320 -96,3 45,66981 3 0,1339 ns Isoleucina 1328 -42,68 21,07739 3 0,7657 ns Isoleucina 66 0 115,9559 3 Leucina 15270 -46,21 29,00402 3 0,7148 ns Leucina 7635 -23,04 40,08864 3 0,965 ns Leucina 3054 42,04 77,19161 3 0,7746 ns Leucina 153 0 157,6578 3
[0294] O tratamento com LIVRQNAC, LIVRQNAC + G, LIVRQNAC + S, RQNAC e NAC reduziu significativamente a secreção de TNFa induzida por LPS em macrófagos derivados por monócitos humanos primários. O tratamento com LIV aumentou a secreção de TNFa, enquanto LIVRQ não teve efeitos significativos sobre a secreção de TNFa. Nenhum dos aminoácidos individualmente administrados teve um efeito sobre a secreção de TNFa. Comparações Múltiplas de Dunnett por ANOVA de duas vias foram realizadas para análise estatística. Valores médios representados como valores subtraídos da linha de base. Tabela 11. Medições de TNFalfa: Doador 2 Medições de TNFa do Doador 2 Suplemento de Conc. (X) Desvio Número Signi- Aminoácido Média valor P* Padrão de valores ficância LIVRQNAC 40 -98,1341 2,118962 3 0,0001 **** LIVRQNAC 30 -85,1019 1,385677 3 0,0001 **** LIVRQNAC 20 -64,3364 10,07525 3 0,0001 **** LIVRQNAC 10 -38,3512 5,120689 3 0,0001 **** LIVRQNAC 1 0 5,45587 3 LIVRQNAC+G 40 -91,3454 5,994009 3 0,0001 ****
LIVRQNAC+G 30 -82,4397 4,200763 3 0,0001 **** LIVRQNAC+G 20 -61,247 8,702492 3 0,0001 **** LIVRQNAC+G 10 -23,9913 7,471422 3 0,008 ** LIVRQNAC+G 1 -4,7E-15 4,578295 3 LIVRQNAC+S 40 -74,1572 4,163823 3 0,0001 **** LIVRQNAC+S 30 -64,0016 5,549308 3 0,0001 **** LIVRQNAC+S 20 -47,5673 3,970363 3 0,0001 **** LIVRQNAC+S 10 -28,635 7,390447 3 0,0012 ** LIVRQNAC+S 1 -4,7E-15 7,564883 3 LIV 40 49,84155 4,092799 3 **** 0,0001 LIV 30 29,1118 14,72509 3 *** 0,001 LIV 20 30,17595 5,797518 3 *** 0,0006 LIV 10 16,68974 10,85983 3 ns 0,0974 LIV 1 0 10,41523 3 LIVRQ 40 64,1705 27,82953 3 **** 0,0001 LIVRQ 30 50,92104 6,955429 3 **** 0,0001 LIVRQ 20 45,65882 19,0128 3 **** 0,0001 LIVRQ 10 32,37038 19,44425 3 *** 0,0002 LIVRQ 1 -4,7E-15 5,942707 3 RQNAC 40 -84,147 5,821583 3 **** 0,0001 RQNAC 30 -77,9626 1,626776 3 **** 0,0001 RQNAC 20 -63,3754 3,494595 3 **** 0,0001 RQNAC 10 -37,6072 1,88043 3 **** 0,0001 RQNAC 1 -9,5E-15 4,727924 3 N-Acetil 40 3 Cisteína -103,984 0,720962 0,0001 **** N-Acetil 20 3 Cisteína -88,6528 0,668195 0,0001 **** N-Acetil 10 3 Cisteína -70,8382 12,08717 0,0001 **** N-Acetil 5 3 Cisteína -54,1596 11,06287 0,0001 **** N-Acetil 0 3 Cisteína 9,47E-15 2,926881
Medições de TNFa do Doador 2 Suplemento de Conc. Desvio Número Signi- Aminoácido (µM) Média valor P* Padrão de valores ficância Valina 23420 -1,25079 12,85688 3 0,9991 ns Valina 11710 -0,83505 8,524018 3 0,9998 ns Valina 4684 -0,00221 5,127759 3 0,9999 ns Valina 234 -4,7E-15 8,717375 3 Arginina 5440 -0,57378 8,672536 3 0,9999 ns Arginina 2720 -3,76334 2,467885 3 0,9594 ns Arginina 1088 -12,7222 4,764842 3 0,2488 ns Arginina 109 1,42E-14 3,511446 3 Glutamina 22484 11,50181 6,216029 3 0,3311 ns Glutamina 11242 20,03996 11,90208 3 0,0279 * Glutamina 3747 9,338214 9,748253 3 0,5134 ns Glutamina 749 -9,5E-15 7,275868 3 Isoleucina 6639 19,25756 5,097831 3 0,0365 * Isoleucina 3320 10,26061 7,861148 3 0,4307 ns Isoleucina 1328 2,918887 1,921961 3 0,9836 ns Isoleucina 66 4,74E-15 6,264135 3 Leucina 15270 46,68507 11,63209 3 0,0001 **** Leucina 7635 41,97528 6,512087 3 0,0001 **** Leucina 3054 31,74019 11,56537 3 0,0002 *** Leucina 153 0 0,482598 3
[0295] O tratamento com LIVRQNAC, LIVRQNAC + G, LIVRQNAC + S, RQNAC e NAC reduziu significativamente a secreção de TNFa induzida por LPS em macrófagos derivados por monócitos humanos primários. O tratamento com LIV e LIVRQ aumentou a secreção de TNFa. Leucina, isoleucina e glutamina administradas individualmente aumentaram a secreção de TNFa, enquanto os outros aminoácidos não tiveram efeito. Comparações Múltiplas de Dunnett por ANOVA de duas vias foram realizadas para análise estatística. Valores médios representados como valores subtraídos da linha de base.
Tabela 12. Medições de TNFalfa: Doador 3 Suplemento de Conc. (X) Medições de TNFa do Doador 3 Aminoácido Média Desvio Número valor P* Signi- Padrão de valores ficância LIVRQNAC 40 -18,7507 2,487301 3 0,0001 **** LIVRQNAC 30 -15,5979 0,932399 3 0,0006 *** LIVRQNAC 20 -10,7042 3,013527 3 0,026 * LIVRQNAC 10 -8,49034 2,434812 3 0,1029 ns LIVRQNAC 1 0 4,067982 3 LIVRQNAC+G 40 -14,6552 3,149813 3 0,0013 ** LIVRQNAC+G 30 -11,6973 2,026588 3 0,0129 * LIVRQNAC+G 20 -8,0218 0,671662 3 0,1331 ns LIVRQNAC+G 10 -4,8035 1,658348 3 0,5453 ns LIVRQNAC+G 1 -2,4E-15 5,625453 3 LIVRQNAC+S 40 -14,247 1,800575 3 0,0018 ** LIVRQNAC+S 30 -15,1388 1,568817 3 0,0009 *** LIVRQNAC+S 20 -12,4722 3,334857 3 0,0073 ** LIVRQNAC+S 10 -6,72057 1,833554 3 0,2549 ns LIVRQNAC+S 1 0 4,171555 3 LIV 40 14,07984 11,14252 3 0,002 ** LIV 30 1,759786 1,102706 3 0,9748 ns LIV 20 14,51396 10,41503 3 0,0014 ** LIV 10 8,560957 12,86074 3 0,0989 ns LIV 1 2,37E-15 3,660423 3 LIVRQ 40 25,84453 0,659584 3 0,0001 **** LIVRQ 30 33,74883 5,974096 3 0,0001 **** LIVRQ 20 20,94481 2,163828 3 0,0001 **** LIVRQ 10 15,45187 3,942596 3 0,0007 *** LIVRQ 1 0 4,575346 3 RQNAC 40 -21,5102 1,191926 3 0,0001 **** RQNAC 30 -20,8898 2,622446 3 0,0001 **** RQNAC 20 -19,9558 3,302225 3 0,0001 **** RQNAC 10 -9,09425 5,483242 3 0,0725 ns RQNAC 1 0 6,189505 3
N-Acetil 40 -55,3093 0,809363 3 0,0001 **** Cisteína N-Acetil 20 -48,4373 1,563179 3 0,0001 **** Cisteína N-Acetil 10 -41,7266 3,533914 3 0,0001 **** Cisteína N-Acetil 5 -33,6246 0,253484 3 0,0001 **** Cisteína N-Acetil 0 4,74E-15 8,55997 3 Cisteína
Suplemento de Conc.
Medições de TNFa do Doador 3 Aminoácido (µM) Média Desvio Número valor P* Signi- Padrão de valores ficância Valina 23420 3,688279 7,532913 3 0,8962 ns Valina 11710 -2,59866 2,586099 3 0,9674 ns Valina 4684 0,126 0,903014 3 0,9999 ns Valina 234 -2,4E-15 2,731283 3 Arginina 5440 -1,76662 4,067694 3 0,992 ns Arginina 2720 -0,96691 4,86075 3 0,9991 ns Arginina 1088 3,131153 10,346 3 0,9384 ns Arginina 109 3,55E-15 4,325877 3 Glutamina 22484 29,14034 17,71417 3 0,0001 **** Glutamina 11242 18,00238 14,58602 3 0,0061 ** Glutamina 3747 1,935546 2,127977 3 0,9887 ns Glutamina 749 0 5,196592 3 Isoleucina 6639 -1,66019 4,262718 3 0,9938 ns Isoleucina 3320 3,308901 3,745411 3 0,9262 ns Isoleucina 1328 -6,22991 0,48195 3 0,5976 ns Isoleucina 66 -2,4E-15 3,844593 3 Leucina 15270 # # 3 # # Leucina 7635 # # 3 # # Leucina 3054 # # 3 # # Leucina 153 # # 3 # # # A leucina não foi medida em Exp3 devido a erro técnico.
[0296] O tratamento com LIVRQNAC, LIVRQNAC + G, LIVRQNAC + S, RQNAC e NAC reduziu significativamente a secreção de TNFa induzida por LPS em macrófagos derivados por monócitos humanos primários. O tratamento com LIV e LIVRQ aumentou a secreção de TNFa. Os aminoácidos individualmente administrados não tiveram efeito significativo sobre a secreção de TNFa, exceto pela glutamina que aumentou a secreção de TNFa. Comparações Múltiplas de Dunnett por ANOVA de duas vias foram realizadas para análise estatística. Valores médios representados como valores subtraídos aos basais.
[0297] Um desequilíbrio na produção de citocinas pró-inflamatórias e anti-inflamatórias foi proposto para se correlacionar com o desenvolvimento de crises vaso-oclusivas (VOC) e sua gravidade na doença falciforme (Sarray et al. 2015; aqui incorporado por referência na sua totalidade). VOC são uma complicação característica da doença falciforme, resultando em lesões isquêmicas e dor intensa. Sarray et al. (2015) demonstraram que as elevações da citocina pró-inflamatória IL- 6 se correlacionaram com a duração de VOC, conjuntamente com o enriquecimento do enriquecimento dos quartis elevados de IL-6 e TNFα no grupo de VOC, e que a redução da IL-10 pró-inflamatória se correlacionou com a frequência, tipo, gravidade e duração de VOC. Em conjunto, seus resultados destacam a importância do equilíbrio pró e anti-inflamatório na patologia da doença falciforme. Exemplo 2. Espécies Reativas de Oxigênio em Pacientes com Doença Falciforme
[0298] A desoxigenação da hemoglobina resulta na produção de superóxido, que é amplificado quando a retirada de oxigênio aumenta, tal como ocorre durante hipóxia, redução do fluxo sanguíneo ou anemia (Rogers et al. 2009). Como tal, os eritrócitos requerem sistemas de defesa antioxidantes robustos e servem como dissipadores para espécies reativas de oxigênio sistêmico (ROS, Rogers et al. 2009). ROS são relatadas como sendo geradas em uma taxa mais elevada no sangue total e eritrócitos de pacientes com doença falciforme do que em controles saudáveis e tanto a abundância de glutationa reduzida (GSH), bem como a capacidade de reciclar GSH são comprometidas, resultando na oxidação de proteínas de membrana, fragilidade da membrana e disfunção vascular (Amer et al. 2003, 2004, 2005, Rogers et al. 2013).
[0299] O peróxido de hidrogênio (H2O2) foi utilizado para induzir ROS em amostras de sangue total de controles saudáveis (Research Blood Components) e de pacientes com doença falciforme (aprovação do IRB, Boston Children’s Hospital) seguindo um protocolo adaptado de Amer et al. 2004. Amostras de sangue total foram adequadamente diluídas em solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco livre de Ca2+ e Mg2+ (DPBS, Life Technologies) e a concentração de eritrócitos (RBC/mL) foi medida em um Contador de Células Cellometer K2 de Viabilidade Fluorescente, de acordo com o protocolo RBC/AOPI do fabricante (Nexcelom Biosciences).
[0300] As células foram, em seguida, diluídas para 1*106 RBC/mL em DPBS pré-aquecido a 37°C ou solução fisiológica tamponada com HEPES (HPS) conforme adaptado de Wesseling et al. (2016) contendo (mM): NaCl 145, Kcl 7,5, Glicose 10, HEPES 10, CaCl2 2, pH 7,4, filtrado em 0,2 µ e suplementado com os 20 aminoácidos proteogênicos a 1x as concentrações basais presentes no HMDB (Wishart DS, Tzur D, Knox C, et al., HMDB: the Human Metabolome Database. Nucleic Acids Res. janeiro de 2007;35(Database issue):D521-6. 17202168)) (Millipore Sigma). Diacetato de 2'-7'-diclorofluorescina (DCF, Millipore Sigma), 20 mM em dimetilsulfóxido (DMSO, Fisher) foram adicionados a uma concentração de trabalho de 100 µM. As células foram incubadas com corante por 15 minutos a 37°C, 5% de CO2 em uma incubadora de cultura de tecidos, lavadas uma vez e ressuspendidas nos 0,9 volumes do mesmo tampão pré-aquecido a 37 °C com rotações de 5 minutos a 500 xg, acel/desacel = 5 em uma centrífuga de braço oscilante (Beckman Coulter). As células foram distribuídas em microplacas pretas de fundo transparente de 96 poços, 90 µL/poço (Corning) e, em seguida, 10 µL do mesmo tampão foram adicionados por poço contendo, opcionalmente, aminoácidos individuais ou em combinação concebidos para aumentar sua concentração em 1x, 5x, 10x, ou 20x concentrações basais presentes no HMDB (Banco de Dados de Metaboloma Humano (Wishart DS, Tzur D, Knox C, et al., HMDB: the Human Metabolome Database. Nucleic Acids Res. janeiro de 2007;35(Database issue):D521-6. 17202168)) ou aminoácidos não proteogênicos para uma concentração final de 0,1, 1, 2 ou 5 mM. Sempre que possível, devido a restrições de solubilidade, foram utilizadas soluções estoque de aminoácidos com pH ajustado a7,4. Os poços foram misturados por pipetagem e as placas incubadas a 37 °C, 5% de CO2 em uma incubadora de cultura de tecidos por 30 minutos. Opcionalmente, H2O2 40 mM (Millipore Sigma), recém-preparado no mesmo tampão, foi adicionado para trazer a concentração para 2 mM, poços misturados por pipetagem e as placas foram incubadas mais 30, 60, 120 ou 240 minutos antes da medição de fluorescência do sial de ROS em um leitor de microplacas Synergy H4 (BioTek), com excitação=488 nm e emissão=530 nm, e ganho definido como autogain, 75 ou 100.
[0301] A N-acetilcisteína (Spectrum) e a cisteína reduziram as ROS medidas no sangue total de doadores de controle saudáveis tratados com H2O2, de uma forma responsiva à dose, e em amostras de sangue de pacientes com doença falciforme, ambos tratados com H 2O2 e não tratados em DPBS. Adicionalmente, o triptofano 10x aumentou o sinal de ROS tanto no sangue de um doador saudável quanto no sangue de paciente com doença falciforme, proporcionando evidências para sua exclusão da composição. Todos os outros aminoácidos testados não afetaram a medição de ROS, tanto sozinhos como em combinação com NAC ou cisteína, mostrando que sua inclusão na composição não foi prejudicial para o combate ao estresse oxidativo patológico na doença falciforme. Exemplo 3. Perfil de Aminoácidos de Eritrócitos.
[0302] Diferenças de concentração nos aminoácidos plasmáticos e eritrocitários na doença falciforme foram descritas e acredita-se que contribuam para a disfunção endotelial. Por exemplo, a liberação de arginase eritrocitária através de hemólise foi descrita como contribuindo para reduzir a arginina plasmática, contribuindo para a biodisponibilidade limitada deste aminoácido e um estado patológico de resistência ao óxido nítrico (NO) (Morris et al. 2005). Os estudos metabolômicos também identificaram o nível de aminoácidos e a desregulação da via, supostamente contribuindo para a patologia da doença (Darghouth et al. 2011).
[0303] Os aminoácidos plasmáticos e eritrocitários, bem como a glutationa oxidada e reduzida, serão analisados em amostras de sangue total de pacientes com doença falciforme (aprovação do IRB, Boston Children’s Hospital), bem como em sangue total de controles saudáveis equiparados. Embora não seja possível controlar o estado de alimentação ou jejum no momento em que as amostras são coletadas, as diferenças estatísticas entre as concentrações de aminoácidos eritrocitários e plasmáticos em pacientes e controles saudáveis são pensadas para representar diferenças robustas no metabolismo no estado de doença e podem contribuir para patologia da doença. Os aminoácidos para os quais são observadas diferenças entre controles saudáveis e pacientes com doença falciforme, em qualquer nível de tendência ou significância estatística, serão priorizados para rastreio em outros ensaios, como resistência ao afoiçamento sob hipóxia e exposição de marcadores de adesão, tais como fosfatidilserina.
Exemplo 4. Biomarcadores de Adesão.
[0304] A marca característica da doença falciforme é a "crise falciforme", causada pela vaso-oclusão de pequenos vasos sanguíneos que levam a lesões isquêmicas e dor intensa. Vários fatores conspiram para a vaso-oclusão: aumento da rigidez e da adesão dos eritrócitos falciformes torna-os mais propensos a aderir aos leucócitos circulantes e ao endotélio vascular; o aumento da arginase da hemólise esgota a arginina livre do plasma necessária para gerar óxido nítrico (NO), prejudicando a vasodilatação. A crise falciforme é a principal razão pela qual os pacientes procuram atendimento médico e pode ser fatal, pois pode ocorrer em qualquer órgão e durar vários dias. Crises na vasculatura pulmonar se manifestam como "síndrome torácica aguda"; aqueles no cérebro podem causar acidente vascular cerebral ou infartos cerebrais "silenciosos"; aqueles no osso podem levar à osteonecrose; e crises em outros lugares podem levar a danos e falência em quase todos os órgãos. O afoiçamento leva à ruptura física e aumento da renovação da membrana eritrocitária, aumento da rigidez celular, desidratação celular por perda de potássio e aumento da adesão de RC por meio da externalização da fosfatidilserina. A adesão de glóbulos vermelhos aos leucócitos e às células endoteliais vasculares, mediada pelo aumento da exposição de fosfatidilserina, está entre os mecanismos de vaso-oclusão na doença falciforme e a medição da exposição à fosfatidilserina se correlaciona bem com outros ensaios de adesão, tais como a adesão de eritrócitos às células epiteliais da veia umbilical humana.
[0305] A exposição à fosfatidilserina será medida pela ligação de Anexina V conjugada à sonda fluorescente Alexa 488 (Life Technologies), tanto em sangue de pacientes com doença falciforme não tratada (aprovação IRB, Boston Children’s Hospital), sangue de doador de controle saudável (Research Blood Components) sob condições não tratadas ou quando tratados com um estímulo relevante para a patologia da doença conhecido por provocar a exposição à fosfatidilserina, tal como hipóxia ou o ionóforo de cálcio 4-br A23187 (Millipore Sigma). A capacidade de tratamentos com aminoácidos em múltiplos dos níveis basais encontrados no HMDB (Banco de Dados de Metaboloma Humano (Wishart DS, Tzur D, Knox C, et al., HMDB: the Human Metabolome Database. Nucleic Acids Res. janeiro de 2007;35(Database issue):D521-6. 17202168)) para modificar a exposição à fosfatidilserina será observada sob estas condições. Aminoácidos, individuais ou em combinação, capazes de reduzir a exposição do marcador de adesão fosfatidilserina serão potenciais terapêuticos para redução da vaso-oclusão. Exemplo 5. Resistência dos Eritrócitos ao Afoiçamento
[0306] Sob condições de hipóxia, tais como nos tecidos periféricos, ou durante a anemia, os eritrócitos de doença falciforme mudam sua morfologia para a forma característica de "foice" devido à polimerização da hemoglobina falciforme (HbS). Isto aumenta a rigidez celular e contribui para a vaso-oclusão (Du et al. 2015). Os tratamentos potenciais que fornecem resistência ao afoiçamento, tanto pela diminuição da proporção de células que adquirem a forma de "foice" sob hipóxia, como foi demonstrado para a hidroxiureia, como pelo aumento do tempo que as células levam para a adquirir a forma de "foice", podem reduzir a patologia da vaso-oclusão.
[0307] Aminoácidos únicos e combinações em múltiplos dos níveis basais encontrados no HMDB (Banco de Dados de Metaboloma Humano (Wishart DS, Tzur D, Knox C, et al., HMDB: the Human Metabolome Database. Nucleic Acids Res. janeiro de 2007;35(Database issue):D521-6. 17202168)) serão testados quanto à sua capacidade de fornecer amostras de sangue total do paciente com doença falciforme, diluídas em tampão apropriado, com resistência ao afoiçamento sob incubação em uma mistura de gás hipóxico (2% O 2, 5% CO2, equilíbrio N2, Middlesex Gasses & Technologies) . As amostras serão fotografadas em uma microplaca de fluorescência preta de 96 poços com fundo óptico (Thermo Fisher) ao longo do tempo em um microscópio ImageExpress Micro Confocal (Molecular Devices) e a porcentagem de células falciformes será identificada em cada ponto de tempo. Os aminoácidos ou combinações que conferem resistência ao afoiçamento serão considerados para inclusão na composição contra um corpo de evidências para estes aminoácidos. Exemplo 6. Influxo de Cálcio de Eritrócitos.
[0308] Os eritrócitos falciformes são descritos como tendo um vazamento persistente de cálcio, exacerbado sob hipóxia e afoiçamento, resultando na exposição de marcadores de adesão como a fosfatidilserina e contribuindo para a patologia da doença.
[0309] O influxo de cálcio para as células falciformes será medido por pré-carregamento do sangue total de pacientes com doença falciforme com a sonda de cálcio intracelular Fluo-4 AM (Life Technologies), de acordo com as instruções do fabricante. Aminoácidos únicos e combinações em múltiplos dos níveis basais encontrados no HMDB (Banco de Dados de Metaboloma Humano (Wishart DS, Tzur D, Knox C, et al., HMDB: the Human Metabolome Database. Nucleic Acids Res. janeiro de 2007;35(Database issue):D521-6. 17202168)) serão testados quanto à sua capacidade de fornecer amostras de sangue total de pacientes com doença falciforme, diluídas em tampão apropriado, com resistência ao influxo de cálcio sob incubação em uma mistura de gás hipóxico (2% O2, 5% CO2, equilíbrio N2, Middlesex Gasses & Technologies) . As amostras serão fotografadas em uma microplaca de fluorescência preta de 96 poços com fundo óptico (Thermo Fisher) ao longo do tempo em um microscópio ImageExpress Micro Confocal (Molecular Devices) e o influxo de cálcio será medido pela observação da intensidade de fluorescência com excitação=488 nm emissão=530 nm tanto de eritrócitos com fenótipo falciforme ou de todas as células. Exemplo 7. Modelo de camundongo Berkeley de anemia falciforme
[0310] Vários modelos de camundongos transgênicos foram desenvolvidos para examinar a patologia da natureza dos sistemas e o tratamento da doença falciforme. Um desses modelos, denominado de camundongo Berkeley (BERK), foi desenvolvido para expressar exclusivamente as cadeias de hemoglobina humana, incluindo a variante da hemoglobina falciforme (HbS), que leva à anemia falciforme nesses camundongos (Paszty C et al., 1997. Science). O modelo BERK se aproxima bem de muitas facetas diferentes da doença, incluindo: anemia, reticulocitose, células irreversivelmente falciformes, aumento da renovação dos glóbulos vermelhos e patologia de múltiplos órgãos (de Jong K et al., 2001. Blood).
[0311] Combinações de aminoácidos em múltiplos dos níveis basais encontrados no HMDB (Banco de Dados de Metaboloma Humano (Wishart DS, Tzur D, Knox C, et al., HMDB: the Human Metabolome Database. Nucleic Acids Res. janeiro de 2007;35(Database issue):D521-6. 17202168)) serão testados contra placebo e múltiplos níveis de L-glutamina para seu efeito terapêutico nos sistemas do modelo de camundongo BERK. Os animais serão administrados por gavagem BID por 4 semanas em um dos seis braços de tratamento: (1) veículo, (2) L-glutamina de dose baixa, (3) L- glutamina de dose elevada, (4) composição de dose baixa consistindo em L R Q NAC G Car H K V, (5) composição de dose elevada consistindo em L R Q NAC G Car H K V, ou (6) composição de dose elevada consistindo em L R Q NAC. Colheitas de sangue semanais de punção da veia da cauda serão analisadas para parâmetros hematológicos (hemograma completo), incluindo, mas não se limitando a, hematócrito, hemoglobina, volume de eritrócitos, contagem de reticulócitos, contagem de células brancas e contagem de plaquetas. Colheitas de sangue serão também analisadas para perfis de aminoácidos plasmáticos e de RBC, painéis de citocinas, ROS, exposição de PS e outros marcadores celulares ou moleculares relevantes. A biotinilação dos glóbulos vermelhos antes da colheita de sangue e da análise por citometria de fluxo permitirá a quantificação da renovação dos glóbulos vermelhos. A histopatologia permitirá a comparação de danos a órgãos em grupos de controle e de tratamento. Combinações de aminoácidos que melhoram os parâmetros hematológicos, a saúde e a renovação dos eritrócitos e limitam os danos aos órgãos fornecerão suporte para a terapia na anemia falciforme. Exemplo 8. Estudos de deformabilidade de RBC em um modelo induzido ex vivo de hemólise com pré-tratamento de aminoácidos
[0312] O sangue total de doadores afro-americanos e/ou hispânicos saudáveis foi obtido da Research Blood Components, LLC com base nos seguintes critérios de seleção de doadores: Idade adulta (entre 18 e 50 anos), IMC normal (<30) e ausência de outras condições clínicas confusas. O sangue total de doadores SCD foi obtido da BioIVT com base nos seguintes critérios de seleção de doadores: Pacientes com genótipos HbSS, HbSC, HbS/β0 e pelo menos 1-2 meses de intervalo desde a última transfusão de sangue. O sangue total foi enviado em gelo no mesmo dia da recolha de sangue. Após o recebimento, a amostra de sangue foi aliquotada e armazenada na geladeira até a uso para estudos.
[0313] As medições de deformabilidade de RBC foram realizadas com o Analisador Rotacional a Laser de Células Vermelhas (LORRCA) da RR Mechatronics em um ambiente com temperatura controlada (37 ºC). Resumidamente, uma camada uniforme de RBCs suspensos em polivinilpirrolidona (PVP) é submetida a gradiente de tensão de cisalhamento (0,3 a 30 Pa) através de dois cilindros concêntricos e as alterações resultantes na forma dos RBC ou deformabilidade são medidas por um padrão de difração de feixe de laser. As imagens capturadas da forma dos RBC em resposta ao aumento da tensão de cisalhamento são então analisadas pelo programa LORRCA para calcular o Índice de Alongamento (IA).
[0314] RBCs saudáveis têm maior deformabilidade >0,5 IA e RBCs SCD têm menor deformabilidade ou valores de IA conforme estudados pela ectacitometria LORRCA no campo. Foi sugerido em literatura anterior que as alterações na tensão de cisalhamento em ½ IAmax <1,69 Pa indicam mudança na flexibilidade da membrana de RBC e à tensão de cisalhamento >3,0 Pa indica impacto na razão superfície/volume das células de RBC, viscosidade intracelular juntamente com a flexibilidade da membrana (Renoux C, et al., Sci Rep., 1 de maio de 2019;9(1):6771). O modelo de hemólise induzida nesta descrição envolve a uso de hidroperóxido de terc-butila (TBHP) para diminuir o IA de RBCs. Foi demonstrado que o TBHP permeabiliza a membrana, oxida as células, induz a proteólise, inibe as atividades enzimáticas e induz a hemólise, simulando assim a patologia da SCD (Roy A, et al., Pathophysiology. Abril de 2012;19(2):137-48 e Runge-Morris M, et al., Chem Res Toxicol. 1989 março-abril; 2(2):76-83).
[0315] O estudo de hemólise ex vivo aqui divulgado envolve o tratamento de sangue total, durante a noite, com veículo como controle e aminoácidos específicos seguido por oxidação rápida (5 min) com TBHP. O método para oxidação de sangue total com hidroperóxido de terc-butila foi utilizado em literatura anterior (Diederich L, et al., Front Physiol. 11 de maio de 2018;9:332). A deformabilidade de RBC ou alterações de forma são então medidas com a ectacitometria LORRCA.
[0316] Alíquotas de sangue total armazenadas no refrigerador foram levadas à temperatura ambiente, agitando suavemente em uma placa agitadora a baixa velocidade por uma hora, para garantir a suspensão gradual e uniforme de glóbulos vermelhos antes das medições de deformabilidade. O controle de veículo utilizado no estudo foi o veículo de Fosfato de Dulbecco 1X e os aminoácidos aqui divulgados foram adicionados (tanto na concentração final de 10X ou 2,5 mM, conforme indicado) para as condições de tratamento de veículo e aminoácidos correspondentes. As amostras foram depois incubadas durante a noite a 37ºC. No dia seguinte, 25 µL de sangue total foram retirados de cada condição de tratamento e adicionados a 5 mL de solução viscosa Elon ISO da RR Mechatronis. A amostra foi invertida 15-20 vezes para garantir a mistura adequada dos RBCs tratados com a solução Elon ISO seguido pelo carregamento da amostra no LORRCA e captura das medições de deformabilidade ou forma dos RBC ao longo do gradiente de cisalhamento aplicado. Os demais tratamentos com sangue total foram devolvidos à incubadora (37 ºC) até que as medições de deformabilidade fossem concluídas para todos os tratamentos. Para as amostras de tratamento de sangue total restantes, solução de TBHP (5,0-6,0 M em Decano, Sigma) foi adicionada na concentração final de 2,5 mM de um estoque 100 mM recém-preparado e incubadas por mais 5 min a 37 ºC. 25 µL desta amostra tratada com TBHP foram imediatamente removidos no final da incubação de 5 min e adicionados à solução Elon ISO para medição de deformabilidade de RBC após oxidação. Incluídas nas Tabelas 13-15 estão as medições de IA a ½ IAmax da tensão de cisalhamento de 1,69 Pa e o IAmax da tensão de cisalhamento de 30 Pa destes estudos e a Fig. 1 captura as medições de IA de todos os pontos de tensão de cisalhamento para as condições de tratamento indicadas. Resultados Medição da deformabilidade ou alongamento de RBC o modelo de hemólise ex vivo
[0317] A Fig. 1 mostra as alterações na deformabilidade de RBC saudáveis do doador 1 saudável com e sem oxidação por TBHP de sangue total para os pré-tratamentos indicados com aminoácidos específicos aqui divulgados ou veículo DPBS. As medições de deformabilidade de RBC são mostradas no eixo Y em termos de IA e a tensão de cisalhamento aplicada (Pa) é mostrada no eixo X. A medição de IA para cada tensão de cisalhamento é uma média de 50 medições. As linhas sólidas representam pré-tratamentos durante a noite de sangue total sem oxidação por TBHP e as linhas pontilhadas representam o após oxidação por TBHP.
[0318] A Tabela 13 captura as medições de deformabilidade de RBC (IA) a metade da tensão de cisalhamento máxima (1,69 Pa) e da tensão de cisalhamento máxima (30 Pa) da Fig. 1. Duas alterações diferentes são mostradas na Tabela 13. A alteração do IA com hidroperóxido de terc-butila mostra diferença no IA com e sem oxidação por TBHP para cada grupo de pré-tratamento. A deformabilidade de RBC do controle de veículo a ½ IAmax da tensão de cisalhamento (1,69 Pa) é reduzida em 4,7 vezes quando tratada com TBHP e a IAmax (30 Pa) é reduzida em 2,0 vezes. A alteração no grupo de pré-tratamento com RNacCitQCar teve, respectivamente, diminuições de 2,9 vezes e 1,5 vezes o IA de RBC com oxidação por TBHP para ambos os pontos de tensão de cisalhamento. O grupo de pré-tratamento RNacCitQCarLHKVS teve a menor alteração com a oxidação por TBHP de 1,8 vezes e 1,2 vezes para os dois pontos de tensão de cisalhamento. Alteração de IA em Relação ao Veículo mostra a diferença no IA em relação ao grupo de controle de veículo. O grupo de pré-tratamento RNacCitQCarLHKVS tem a maior melhoria em ½ IAmax e IAmax em relação ao grupo de veículo para oxidação por TBHP em 2,6 e 1,9 vezes, respectivamente, seguido pelo grupo RNacCitQCar. Os resultados da Fig. 1 e Tabela 13 sugerem menor IA com oxidação por TBHP para todas as condições de pré-tratamento com menor IA para o veículo, maior IA para RNacCitQCar e maior IA para RNacCitQCarLHKVS, sugerindo o benefício destas composições de aminoácidos na minimização da perda de deformabilidade ou IA após dano oxidativo e hemolítico aos eritrócitos.
[0319] Os resultados da Tabela 14 mostram deformabilidade para tratamentos com aminoácidos únicos após a oxidação por TBHP em sangue total saudável de doador saudável 2. O IA para tratamentos com aminoácidos únicos R, Cit, Nac, Q, Car, em relação ao controle de veículo, é maior do que o veículo para as medições de ½ IAmax e IAmax. O grupo de tratamento Q foi o menos eficaz e RNacCitQCarLHKVS foi o mais eficaz entre todos os grupos de tratamento, conforme mostrado por ambas as medições de IA individuais para ½ IAmax, IAmax e a alteração ou melhoria do IA em relação ao controle de veículo. Adicionalmente, os doadores saudáveis 1 e 2 mostram o maior IA com oxidação por TBHP para grupos de pré-tratamento RNacCitQCarLHKVS com base nas Tabelas 13 e 14. Os resultados da Tabela 16 mostram, adicionalmente, o efeito de RNacCit no sangue total do doador saudável 2. O IA de RBCs pré-tratados com RNacCit mostra deformabilidade 1,8 vezes melhor do que o veículo a ½ IAmax de tensão de cisalhamento e cerca de 1,5 vezes melhor em IAmax em resposta à oxidação por TBHP.
[0320] Os resultados da Tabela 15 mostram aumento linear na deformabilidade ou IA em RBCs de um doador de SCD quando pré- tratado ex vivo com doses crescentes de aminoácidos RNacCitQCarLHKVS, seguido por rápida oxidação por TBHP. A alteração na deformabilidade de RBC ou IA mostra resposta à dose para pré-tratamentos com RNacCitQCarLHKVS 5X, 10X e 20X, em relação ao controle de veículo com a maior alteração de 5,3 vezes observada para pré-tratamento 20X.
[0321] Os resultados combinados das Tabelas 13-15 e Fig. 1 demonstram o benefício de composições de aminoácidos específicas aqui divulgadas na redução da perda de deformabilidade ou forma de RBC, conforme medido por IA em resposta a danos por oxidação, proteólise e hemólise.
A redução da hemólise pode, potencialmente, minimizar as crises de dor vaso-oclusiva e danos a órgãos em pacientes falciformes.
Tabela 13. Índice de alongamento (IA) de RBC e alteração com oxidação por THP de sangue total saudável (doador saudável 1) pré-tratado com aminoácidos em relação ao veículo Pré-tratamento Índice de Alteração do IA Alteração do IA em Adição (Aminoácidos Alongamento (IA) com TBHP Relação ao Veículo de TBHP 10X / Nac, Cit, ½ IAmax IAmax ½ IAmax IAmax ½ IAmax IAmax (2,5 mM) Car 2,5 mM) (1,69 Pa) (30 Pa) (1,69 Pa) (30 Pa) (1,69 Pa) (30 Pa) - 0,336 0,520 1,00 1,00 Veículo 4,67 2,03 + 0,072 0,255 1,00 1,00
- 0,306 0,545 0,91 1,04 RNacCitQCar 2,85 1,47 + 0,107 0,370 1,48 1,45
RNacCitQCarL - 0,336 0,561 1,00 1,07 1,76 1,16 HKVS + 0,190 0,482 2,63 1,89
Tabela 14. Índice de alongamento (IA) de RBC e alteração com oxidação por THP de sangue total saudável (doador saudável 2) pré-tratado com aminoácidos em relação ao veículo
Pré-tratamento Índice de Alongamento Alteração do IA em Relação ao (Aminoácidos 10X / Nac, (IA) Veículo Cit, Car 2,5 mM) + TBHP ½ IA IAmax ½ IAmax IAmax max 2,5 mM (1,69 Pa) (30 Pa) (1,69 Pa) (30 Pa) R 0,057 0,251 1,35 2,14
Nac (2,5 mM) 0,056 0,245 1,33 2,09
Cit (2,5 mM) 0,053 0,255 1,26 2,17
Q 0,033 0,181 0,78 1,54
Car (2,5 mM) 0,048 0,210 1,14 1,79
RNacCitQCar 0,047 0,222 1,12 1,89
RNacCitQCarLHKVS 0,066 0,302 1,57 2,58
Veículo 0,042 0,117 1,00 1,00
Tabela 15. Índice de alongamento (IA) de RBC com oxidação por TBHP de sangue total falciforme pré-tratado com doses diferentes de aminoácidos RNacCitQCarLHKVS Pré-tratamento com RNacCitQCarLHKVS Índice de Alteração do IA em (Aminoácidos 10X / Nac, Cit e Alongamento Relação ao Veículo Car correspondendo a 2,5 mM) IAmax (30 Pa) + TBHP 2,5 mM Veículo ou 0X 0,014 1,00 5X 0,024 1,71 10X 0,061 4,35 20X 0,074 5,28
Tabela 16. Índice de alongamento (IA) de RBC e alteração com oxidação por THP de sangue total saudável (doador saudável 2) pré-tratado com aminoácidos em relação ao veículo Pré-tratamento Índice de Alongamento Alteração do IA em (Aminoácidos 10X / (IA) Relação ao Veículo Nac, Cit, Car 2,5 mM) + ½ IAmax IAmax ½ IAmax IAmax TBHP 2,5 mM (1,69 Pa) (30 Pa) (1,69 Pa) (30 Pa) R 0,087 0,308 1,02 1,00 Nac (2,5 mM) 0,096 0,337 1,13 1,10 Cit (2,5 mM) 0,095 0,327 1,11 1,06 RNacCit 0,154 0,452 1,81 1,47 Veículo 0,085 0,306 1,00 1,00
Exemplo 9. Rastreio de Células Endoteliais
[0322] A disfunção vascular na SCD pode se manifestar na expressão de marcadores de adesão das células endoteliais vasculares (VEC, do inglês vascular endothelial cell), citocinas inflamatórias e síntese reduzida de óxido nítrico (NO) e função endotelial dependente de NO. Esta patologia multifacetada pode contribuir para a diminuição da perfusão sanguínea e uma maior probabilidade de eventos vaso- oclusivos agudos ou danos progressivos a órgãos.
[0323] Um modelo VEC foi empregue para avaliar a capacidade dos aminoácidos de influenciar aspectos da disfunção vascular na SCD. O tratamento com TNFa de HLMVEC de doadores saudáveis imita o estado da doença SCD e induz a expressão dos marcadores de adesão ICAM-1 e VCAM-1 e a secreção de citocina pró-inflamatória IL-6. Está estabelecido que os níveis de ICAM-1, VCAM-1 e IL-6 podem contribuir para a patologia da SCD e se correlacionar com a incidência e gravidade das complicações em pacientes com SCD. O modelo VEC buscou testar a capacidade dos aminoácidos de reduzir o fenótipo da doença induzida por TNFa, diminuindo a expressão de marcadores de adesão (ICAM-1 e VCAM-1) e citocinas inflamatórias (IL-6), enquanto promove a saúde e a viabilidade das VEC.
[0324] Células endoteliais microvasculares de pulmão humano primárias (HLMVEC; Lonza) foram semeadas a 6.000 células por poço em Meio-2 de Crescimento de Células Endoteliais (Lonza) suplementado com Soro Bovino Fetal (FBS; Lonza), EGF humano (Lonza), VEGF humano (Lonza) ), Fator-1 de crescimento semelhante à insulina R3 (Lonza), ácido ascórbico (Lonza), hidrocortisona (Lonza), FGF-beta humano (Lonza) e gentamicina/anfotericina-b (Lonza) em uma placa de 96 poços ( Thermo Fisher). As células foram incubadas por 45 minutos à temperatura ambiente, em seguida incubadas durante a noite a 37°C/5% CO2.
[0325] Após a incubação durante a noite, as células foram lavadas uma vez com 150 µL de solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco (DPBS; Gibco) e, em seguida, tratadas com Meio Basal Endotelial MCB-131 (aminoácido, glicose, piruvato de sódio e vermelho de fenol livre; US Biologicals) contendo uma concentração de aminoácidos personalizada definida com base nas concentrações fisiológicas no sangue de pacientes com SCD (recapitulando assim desequilíbrios metabólicos observados, como a depleção de certos aminoácidos essenciais, incluindo arginina e aspartato e enriquecimento de certos aminoácidos não essenciais, incluindo glutamato e asparagina), FBS dialisado (Hyclone), EGF humano (Lonza), VEGF humano (Lonza), Fator-1 de crescimento semelhante à insulina R3 (Lonza), ácido ascórbico (Lonza), hidrocortisona (Lonza), FGF-beta humano (Lonza), e gentamicina/anfotericina-b (Lonza), glicose, HEPES 10 mM, piruvato de sódio e bicarbonato de sódio suplementado com um dos seguintes: a. PBS (controle de veículo), b. 0,5 ng/mL do Fator de Necrose Tumoral alfa (TNFα) e PBS, ou; c. TNFα 0,5 ng/mL e tratamentos com aminoácidos em concentrações fisiológicas médias de 20X no plasma com base nos valores publicados no Banco de Dados de Metaboloma Humano (HMDB) em PBS.
[0326] Após 24 horas de tratamento, as células foram lavadas uma vez com 150 µL de DPBS (Gibco), em seguida fixadas com paraformaldeído a 4%. Após a fixação, as células foram coradas com anticorpos primários anti-ICAM-1 [MEM-111] (IgG2a de camundongo anti-humano; abcam) e anti-VCAM1 [1.4C3] (IgG1 de camundongo, κ anti-humano; abcam) em diluições de 1000X e 100X, respectivamente. As células foram então coradas com Anticorpo IgG2a anti-Camundongo Secundário Cruzadamente Adsorvido de Cabra , Alexa Fluor 594
(Invitrogen) e Anticorpo IgG1 anti-Camundongo Secundário Cruzadamente Adsorvido de Cabra , anticorpos secundários Alexa Fluor 647 (Invitrogen). Os núcleos foram corados com Hoechst 3342 (Life Technologies).
[0327] A ligação do anticorpo foi detectada por microscopia de fluorescência utilizando um gerador de imagens de conteúdo elevado (Molecular Devices). As imagens foram analisadas utilizado o software MetaXpress 6 para determinar a intensidade integrada por célula para cada comprimento de onda correspondente a ICAM-1 ou VCAM-1.
[0328] Os sobrenadantes foram analisados quanto às concentrações de IL-6 utilizado um kit Human Cytokines FirePlex-HT Panel 1 (abcam), de acordo com as instruções fornecidas pelo fabricante. As partículas foram fotografadas em um gerador de imagens de conteúdo elevado (Molecular Devices) e os resultados foram interpolados a partir de uma curva padrão com o software FirePlex Analysis Workbench (abcam), de acordo com as recomendações do fabricante. Tabela 17. Composições de aminoácidos específicos reduziram os níveis de IL6 secretada em HLMVEC tratados com TNFa IL6 secretado Suplemento de aminoácidos [Conc.] * Classificação Mediana Valor p Meta Arg [20x] -0,224 0,0569 19 Car [5mM] -0,022 0,3751 24 Cit [5mM] -0,270 0,0754 16 CitNac [5mM] -0,321 0,1961 15 Gln [20x] 0,043 0,7304 28 Gly [20x] -0,010 0,9533 26 His [20x] -0,198 0,6232 22 LIV [20x] -0,227 0,2337 17 LRQNac [20x/5mM] -0,346 0,0301 13 LRQNacCit [20x/5mM] -0,332 0,0758 14
Leu [20x] -0,491 0,0072 7 Lys [20x] 0,132 0,6119 29 Nac [5mM] -0,497 0,0090 6 Orn [20x] -0,378 0,4054 11 RCit [20x] 0,029 0,6405 27 RCitNac [20x/5mM] -0,870 0,0313 1 RCitNacQCar [20x/5mM] -0,831 0,0531 3 RCitNacQCarLHKVS [20x/5mM] -0,465 0,0461 9 RNac [20x/5mM] -0,445 0,0911 10 RQNac [20x/5mM] -0,770 0,0339 4 Ser [20x] -0,153 0,4493 23 Trp [20x] -0,357 0,0723 12 Val [20x] -0,224 0,0553 18
[0329] HLMVEC tratadas com composições de aminoácidos compreendendo RCitNac ou RCitNacQCar reduziu bastante a secreção de IL-6 de células tratadas com TNF-α. RQNac também reduziu a secreção de IL-6. RCitNacQLHKVS reduziu moderadamente os níveis secretados de IL-6. Tabela 18. Composições de aminoácidos específicos reduziram os níveis de Intensidade Integrada Celular de ICAM-1 e VCAM-1 em HLMVEC tratadas com TNFa Intensidade Intensidade Suplemento de Classificação Integrada Celular Integrada Celular aminoácidos Meta de ICAM-1 de VCAM-1 [Conc.] * Mediana Valor p Mediana Valor p Arg [20x] -0,046 0,9977 -0,001 0,7376 12,5 Car [5mM] -0,013 0,5476 -0,017 0,5354 12,5 Cit [5mM] -0,118 0,0150 -0,157 0,0018 8 CitNac [5mM] -0,249 0,1532 -0,275 0,3477 4 Gln [20x] 0,237 0,0454 0,372 0,0159 29 Gly [20x] -0,261 0,0375 -0,298 0,0434 3 His [20x] 0,084 0,0366 0,109 0,0461 18,5
LIV [20x] 0,172 0,1098 0,172 0,0904 25 LRQNac [20x/5mM] 0,142 0,2944 0,084 0,4009 20 LRQNacCit [20x/5mM] 0,089 0,3654 0,114 0,2541 20 Leu [20x] 0,086 0,0682 0,125 0,0627 20 Lys [20x] 0,064 0,7900 0,025 0,8225 15,5 Nac [5mM] -0,222 0,1615 -0,315 0,1000 4 Orn [20x] -0,197 0,0419 -0,196 0,0809 6,5 RCit [20x] 0,089 0,2309 0,158 0,0854 22 RCitNac [20x/5mM] -0,337 0,0019 -0,422 <0,0001 1 RCitNacQCar [20x/5mM] 0,056 0,3256 0,045 0,3334 15,5 RCitNacQCarLHKV S [20x/5mM] 0,002 0,5616 -0,036 0,9955 12 RNac [20x/5mM] -0,192 0,0461 -0,244 0,0664 6,5 RQNac [20x/5mM] 0,235 0,2581 0,228 0,2878 27 Ser [20x] 0,076 0,2756 0,139 0,0378 19 Trp [20x] 0,171 0,1249 0,162 0,2243 24 Val [20x] 0,167 0,2593 0,315 0,0118 25,5 * [20x] Corresponde a valores HMDB
[0330] RCitNac reduziu bastante os níveis de expressão de ICAM- 1 induzidos por TNF-α em células HLMVEC. Gly, CitNac e Nac também reduziram os níveis de expressão de ICAM-1 em uma menor extensão. As células HLMVEC tratadas com RCitNacQCarLHKVS e RCitNacQCar reduziram moderadamente os níveis de expressão de ICAM-1 induzidos por TNF-α. RCitNac, Nac, Gly e CitNac reduziram bastante a expressão de VCAM-1 em células HLMVEC. RCitNacQCarLHKVS teve um efeito moderado na expressão de VCAM-1 nestas células, assim como Cit e Car.
[0331] Sumário dos Resultados: Conforme descrito, um tratamento ideal é aquele que aborda a patologia multifatorial da SCD representada por HLMVEC, reduzindo os fenótipos da doença (VCAM1, ICAM1, IL6). A capacidade de aminoácidos únicos e combinações para impactar simultaneamente estes fenótipos foi medida por uma pontuação de classificação META (Tabelas 17 e 18). A pontuação de classificação META é uma medida composta que considera o impacto ótimo em todos os 3 fenótipos (por exemplo, diminuir VCAM1, ICAM1 e IL6) no modelo HLMVEC. Um tratamento com aminoácido ou combinação ótimo (isto é, o tratamento que tem o efeito desejado em todas as medidas) tem uma pontuação mais baixa do que um tratamento sub-ótimo (isto é, o tratamento tem um efeito indesejável em todas as medidas). Com base na classificação META, o RCitNac foi o tratamento ótimo e as combinações RCitNacQCar e RCitNacQCarLHKVS estavam entre as condições de tratamento ótimas. Exemplo 10. Avaliação da Farmacocinética de Compostos Múltiplos Após Administração de Dose Oral em Ratos Sprague- Dawley Machos
SUMÁRIO
[0332] Uma análise farmacocinética (FC) foi realizada nas concentrações plasmáticas de várias combinações de compostos de aminoácidos administrados por gavagem oral a ratos Sprague-Dawley machos. Quatro animais foram dosados com RCitNacQCarLHKVS, um artigo de teste compreendendo dez componentes de aminoácido: arginina, citrulina, N-acetilcisteína, glutamina, carnitina, leucina, histidina, lisina, valina e serina (Tabela 19). Os animais jejuaram por 2 horas antes da administração da dose. As amostras de plasma foram coletadas imediatamente antes da pré-dose e 0,5, 1, 2, 3, 4 e 5 horas após a dose.
[0333] A bioanálise das amostras de plasma coletadas para conteúdo em aminoácidos foi realizada na Axcella Health utilizado um método LC-MS (Seção 2.1). Os dados bioanalíticos foram analisados utilizado análise não compartimental com Phoenix® WinNonLin® (v8.1).
[0334] A maioria dos compostos administrados como parte do RCitNacQCarLHKVS aumentou de concentração após a administração, atingindo concentração máxima entre 0,5 e 3 horas após a administração, com carnitina e N-acetilcisteína como únicas exceções. A carnitina aumentou continuamente ao longo do curso de cinco horas, enquanto a N-acetilcisteína não foi detectada no plasma. Os parâmetros de FC, como Tmax, Cmax e AUC0-5h foram tabelados.
METODOLOGIA Sumário dos Procedimentos de Análise de Amostras
[0335] Um método LC/MS utilizando cromatografia HILIC e espectrometria de massa de alta resolução foi utilizado para quantificar os aminoácidos no plasma de rato. As amostras foram preparadas por precipitação de proteínas e enriquecidas com padrão interno de aminoácidos marcados de forma estável para cada analito. Os padrões de calibração foram utilizados para quantificação absoluta e a gama linear para cada analito foi geralmente de 10 a 2000 µM. CQs, adicionados ao plasma do rato, foram utilizados para avaliar a precisão do método. Análise Farmacocinética (FC)
[0336] Os parâmetros de FC dos componentes do artigo de teste foram determinados a partir de dados de concentração plasmática- tempo para cada rato individual, empregando uma abordagem não compartimental utilizado o software Phoenix WinNonlin® (Versão 8.1). Os tempos nominais foram utilizados para calcular os parâmetros toxicocinéticos. Os parâmetros farmacocinéticos plasmáticos, tais como Tmax, Cmax e AUC0-5h foram tabelados, conforme apropriado. Este programa analisou os dados utilizado os métodos padrão descritos por Gibaldi e Perrier (ver M. Gibaldi e D. Perrier, Pharmacokinetics, 2ª edição, Nova York: Marcel-Dekker, Inc.; 1982.).
Tabela 19. Composição de Artigo de Teste Componente de Dose (mg/kg) Aminoácido Arginina 617,3 Citrulina 411,6 N-Acetilcisteína 133,8 Glutamina 514,4 Carnitina 102,9 Leucina 308,7 Histidina 102,9 Lisina 154,3 Valina 102,9 Serina 257,2
RESULTADOS Arginina
[0337] As concentrações basais de arginina variaram de 74,9 a 112 µM em todos os animais. Após a dosagem, a concentração média máxima de arginina (Cmax) em animais tratados com RCitNacQCarLHKVS foi de 565 µM, ocorrendo 0,5 - 2,0 horas após a dose. A AUC0-5h da arginina para os animais foi de 2210 µM*h em média. Citrulina
[0338] As concentrações basais de citrulina variaram de 31,6 a 62,7 µM em todos os animais. Após a dosagem, a concentração média máxima de citrulina (Cmax) em animais tratados com RCitNacQCarLHKVS foi de 583 µM, ocorrendo 2,0 - 3,0 horas após a dose. A AUC0-5h da citrulina para os animais foi de 2090 µM*h em média. Glutamina
[0339] As concentrações basais de glutamina variaram de 401 a 615 µM em todos os animais. Após a dosagem, a concentração média máxima de glutamina (Cmax) em animais tratados com RCitNacQCarLHKVS foi de 605 µM, ocorrendo 0,5 horas após a dose.
A AUC0-5h da glutamina para os animais foi de 2370 µM*h em média.
CONCLUSÕES
[0340] Após a dosagem do artigo de teste RCitNacQCarLHKVS, as concentrações plasmáticas dos aminoácidos componentes tenderam a atingir o valor máximo 0,5 a 3,0 horas após a dose e diminuir com o tempo. Tabela 20.
Cmax AUC0-5h Composto Tmax (h) (μM) (μM*h) Arginina Média 1,38 565 2210 SD 0,750 42,7 191 Carnitina Média 5,00 83,8 237 SD 0,00 6,87 12,0 Citrulina Média 2,50 583 2090 SD 0,577 95,3 227 Glutamina Média 0,500 605 2370 SD 0,00 22,1 129 Histidina Média 1,25 41,9 157 SD 1,19 5,43 25,9 Leucina Média 0,500 170 586 SD 0,00 23,0 54,6 Lisina Média 1,00 337 1350 SD 0,707 26,9 72,5 Serina Média 2,25 285 1030 SD 1,50 58,3 141 Valina Média 1,00 126 463 SD 0,707 14,6 40,3 Exemplo 11. Monitoramento de Homogeneidade em Tempo Real utilizando NIR - Combinações Adicionais e Mistura em Misturador em V
[0341] A FIG. 2A mostra a abordagem dependente do tempo para a uniformidade de mistura durante o processamento de uma terceira combinação exemplificativa adicional de entidades de aminoácidos (a combinação exemplificativa da Tabela 3) utilizado um misturador em V. Amostras para a geração de espectros NIR foram coletadas a cada quatro minutos. O colapso dos espectros NIR em momentos tardios indica que a combinação alcançou uniformidade de mistura. A FIG. 2B representa a média de quatro embalagens stick independentes, selecionadas aleatoriamente, e os dados de recuperação de aminoácidos são expressos como uma porcentagem de 90-110 da reivindicação do rótulo. Os dados, quando considerados em conjunto, indicam que a uniformidade de mistura e a uniformidade de conteúdo foram alcançadas.
[0342] Estes experimentos demonstram que os métodos aqui descritos ser utilizados para alcançar uniformidade de mistura e de conteúdo para combinações adicionais de entidades de aminoácidos e que várias técnicas de mistura, incluindo mistura em misturador em V, são adequadas para alcançar a uniformidade. Exemplo 12. Tratamento de Pacientes com Doença Falciforme com uma Composição de Aminoácido
[0343] O estudo aqui descrito apresenta a administração de uma composição incluindo aminoácidos para tratar pacientes com Doença Falciforme (SCD). O objetivo deste estudo é avaliar a segurança e tolerabilidade alimentar da composição ao longo de 12 semanas em indivíduos com doença falciforme (SCD).
[0344] A segurança e a tolerabilidade serão avaliadas por: eventos adversos clínicos relatados; exames físicos, sinais vitais e ECG; e testes laboratoriais clínicos, incluindo alterações na hematologia, química, aminoácidos plasmáticos e outros marcadores inflamatórios e de adesão vascular/funcionais. As alterações estruturais e funcionais serão avaliadas por: imagiologia de ressonância magnética multiparamétrica para perfusão cerebral e renal; a métrica de caminhada de 6 minutos; e oximetria de pulso. Aproximadamente 48 do sexo masculino e feminino ≥ 12 anos de idade com um diagnóstico prévio confirmado de SCD serão avaliados.
[0345] O estudo está previsto para ser realizado em duas partes (FIG. 3). Parte I: O estudo será iniciado em, aproximadamente, 24 indivíduos adultos (≥18 anos de idade) com SCD, como um estudo randomizado controlado por placebo duplo cego (2:1 ativo:placebo) por até 12 semanas de administração da composição a 26,3 g BID (52,6 g/dia). Com base na tolerabilidade contínua e monitoramento de segurança, as quantidades e/ou regime da composição podem ser ajustados para baixo. Parte II: Enquanto se aguardam os resultados da análise intermediária após a Semana 4 e/ou os resultados do final do estudo da Semana 12 da Parte I, a Parte II pode posteriormente iniciar em uma coorte separada de aproximadamente oito adultos adicionais (≥ 18 anos de idade) e dezesseis (16) adolescentes (12-17 anos de idade). A quantidade prevista da composição para indivíduos adultos na Parte II é de 17,4 g BID (34,8 g/dia); para indivíduos adolescentes, os valores serão ajustados com base em seu peso corporal (PC): 26,3g BID se PC >50kg e 17,4g BID se PC ≤50 kg. As quantidades e/ou regime de composição podem ser ajustados posteriormente, dependendo dos resultados da Parte I. Não haverá um braço de placebo separado na Parte II.
[0346] Parte I & Parte II: Linha de base (Dia 1) à Semana 12: Na Parte I, a randomização deve ocorrer aproximadamente 3-5 dias antes da visita do Dia 1 e será baseada em uma razão de 2:1 de ativo:placebo. A composição do estudo atribuída [composição 26,3 g BID (52,6 g/dia) ou Placebo] será enviada ao centro clínico após a randomização de cada indivíduo. Uma vez que a randomização tenha ocorrido, os indivíduos se apresentarão no local do estudo no Dia 1 para suas avaliações basais. Na Parte II, como não há um braço de placebo separado, todos os indivíduos receberão a composição como uma quantidade fixa em adultos (por exemplo, 17,4g BID) ou quantidades ajustadas ao peso corporal em adolescentes (por exemplo, 26g BID se PC >50kg e 17,4g BID se BW ≤50 kg).
[0347] A composição é composta por aminoácidos. O produto placebo é um excipiente compatível com a composição. As composições do estudo são proporcionadas como pó seco em embalagens stick individuais. Cada embalagem stick contém ~ 8,76 g de aminoácidos por embalagem stick. O número prescrito de embalagens stick para cada administração [por exemplo, 2, 3 ou 4 embalagens stick BID] que são em seguida misturados em ~6 oz (~180 mL) de água e, em seguida, imediatamente consumidos duas vezes ao dia, aproximadamente 30 min (isto é, 30 ± 5 minutos) antes das refeições (por exemplo, antes do café-da-manhã e jantar ou antes do almoço e jantar, se o café-da-manhã não fizer parte da sua rotina diária), durante toda a duração do estudo.
SUMÁRIO DOS EXEMPLOS
[0348] A doença falciforme é complexa e acionada por uma multitude de mecanismos exclusivos. Manter a saúde e a função do sangue requer a coordenação de muitos processos biológicos, celulares e moleculares. Conforme mostrado nos exemplos aqui, as composições de aminoácidos divulgadas neste pedido (incluindo LRQNacHKVSCitCar, RCitNacQCar e RCitNac) foram capazes de [1] mitigar citocinas inflamatórias em células endoteliais vasculares humanas, [2] reduzir a expressão de moléculas de adesão celular em células endoteliais vasculares humanas e [3] proteger contra insultos à deformabilidade de RBC humano, enquanto composições como Q, RCit e NAC foram capazes de influenciar apenas alguns, mas não todos os processos importantes necessários para manter a saúde do sangue. De fato, a glutamina (Q) - que é aprovada pela FDA para o tratamento da doença falciforme - apresentou aqui efeitos negativos ou indesejáveis em ensaios específicos que são mitigados em combinações.
[0349] Embora a invenção tenha sido particularmente mostrada e descrita em referência a uma modalidade preferencial e várias modalidades alternativas, será entendido pelos especialistas na técnica que várias alterações na forma e detalhes podem ser feitas na mesma sem se afastar do espírito e escopo da invenção.
[0350] Todas as referências, patentes emitidas e pedidos de patente citados dentro do corpo do presente relatório descritivo são aqui incorporados por referência na sua totalidade, para todos os propósitos.

Claims (30)

REIVINDICAÇÕES
1. Método para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; ou função vascular, caracterizado por compreender a administração a um indivíduo em sua necessidade de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; e d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC), em que a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente a menos de: 10% em peso do peso total da composição (por exemplo, na forma seca); melhorando, dessa forma, um, dois, três, quatro, cinco, seis ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; ou função vascular no indivíduo.
2. Método para tratar uma hemoglobinopatia ou uma talassemia, caracterizado por compreender a administração a um indivíduo em sua necessidade de uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; e d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC) em que a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente a menos de: 10% em peso do peso total da composição (por exemplo, na forma seca); tratando, dessa forma, a hemoglobinopatia ou a talassemia no indivíduo.
3. Composição para uso em um método para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; ou função vascular em um indivíduo em necessidade da mesma, caracterizada por a composição compreender uma quantidade eficaz de: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; e d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC), em que a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente a menos de: 10% em peso do peso total dos componentes totais da composição (por exemplo, na forma seca).
4. Composição para uso em um método para tratar uma hemoglobinopatia ou uma talassemia em um indivíduo em sua necessidade, caracterizada por a composição compreender uma quantidade eficaz de: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; e d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC) em que a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente a menos de: 10% em peso do peso total dos componentes totais da composição (por exemplo, na forma seca).
5. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, ou a composição para uso, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, caracterizado por a composição compreender ainda: (e) um ou ambos de uma entidade de aminoácido de serina ou uma entidade de carnitina; e/ou um, dois, três ou mais (por exemplo, todos) de (f) uma entidade de aminoácido de valina, (g) uma entidade de aminoácido de histidina, (h) uma entidade de aminoácido de lisina ou (i) uma entidade de aminoácido de citrulina.
6. Composição caracterizada por compreender: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC), e) uma entidade de aminoácido de citrulina, f) uma entidade de carnitina, g) uma entidade de aminoácido de serina, h) uma entidade de aminoácido de valina, i) uma entidade de aminoácido de histidina, e j) uma entidade de aminoácido de lisina.
7. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, composição para uso, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, ou composição, de acordo com a reivindicação 6, caracterizados por a composição não compreender um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente a menos de: 10% em peso, 9% em peso, 8% em peso, 7% em peso, 6% em peso, 5% em peso, 4% em peso, 3% em peso, 2% em peso, 1% em peso, 0,5% em peso, 0,1% em peso, 0,05% em peso, 0,01% em peso, 0,001% em peso ou menos do peso total dos componentes totais da composição (por exemplo, na forma seca).
8. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, composição para uso, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, ou composição, de acordo com a reivindicação 6 ou 7, caracterizados por dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(j) ou (a)-(i) estarem na forma de aminoácido livre na composição, por exemplo, pelo menos: 42% em peso, 45% em peso, 50% em peso, 55% em peso, 60% em peso, 65% em peso, 70% em peso, 75% em peso, 80% em peso, 85% em peso, 90% em peso, 95% em peso, 97% em peso, 98% em peso ou mais do peso total da composição (por exemplo, na forma seca) serem um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou mais (por exemplo, todos) de (a)-(j) na forma de aminoácido livre na composição.
9. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, composição para uso, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, ou composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 8, caracterizados por a % em peso total de (a)-(j) ou (a)-(i) ser maior do que a % em peso total de um, dois ou três de outros componentes de entidades de aminoácidos, componentes de proteínas de entidades de não aminoácidos ou componentes de não proteínas na composição (por exemplo, na forma seca), por exemplo, (a)-(j) ou (a)-(i) ser pelo menos: 50% em peso, 55% em peso, 60% em peso, 65% em peso, 70% em peso, 75% em peso, 80% em peso, 85% em peso, 90% em peso, 95% em peso, 97% em peso, 98% em peso ou mais do peso total de um, dois ou três de outros componentes de entidades de aminoácidos, componentes de proteínas de entidades de não aminoácidos ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca).
10. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, composição para uso, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, ou composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 9, caracterizados por a composição compreender uma combinação de 18 ou menos, 17 ou menos, 16 ou menos, 15 ou menos, 14 ou menos, 13 ou menos, 12 ou menos, ou 11 ou menos entidades de aminoácidos.
11. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, composição para uso, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, ou composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 10, caracterizados por a composição (por exemplo, a Porção Ativa) compreender: a) a entidade de aminoácido de leucina é escolhida de: i) L-leucina ou um sal do mesmo, ii) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-leucina, ou iii) β-hidróxi-β-metilbutirato (HMB) ou um sal do mesmo; b) a entidade de aminoácido de arginina é escolhida de: i) L-arginina ou um sal do mesmo, ii) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-arginina, iii) creatina ou um sal do mesmo, ou iv) um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo creatina; c) a entidade de aminoácido de glutamina é L-glutamina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-glutamina; d) a entidade de NAC é NAC ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo NAC; e) a entidade de aminoácido de citrulina é L-citrulina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-citrulina; f) a entidade de carnitina é L-carnitina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-carnitina; g) a entidade de aminoácido de serina é L-serina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-serina; h) a entidade de aminoácido de valina é L-valina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-valina; i) a entidade de aminoácido de histidina é L-histidina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-histidina; e j) a entidade de aminoácido de lisina é L-lisina ou um sal do mesmo, ou um dipeptídeo ou sal do mesmo, ou tripeptídeo ou sal do mesmo, compreendendo L-lisina.
12. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, composição para uso, de acordo com a reivindicação 3 ou 4, ou composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 11, caracterizado por a composição (por exemplo, a Porção Ativa) compreender: a) L-leucina ou um sal do mesmo, b) L-arginina ou um sal do mesmo, c) L-glutamina ou um sal do mesmo, d) NAC ou um sal do mesmo, e) L-citrulina ou um sal do mesmo,
f) L-carnitina ou um sal do mesmo, g) L-serina ou um sal do mesmo, h) L-valina ou um sal do mesmo, i) L-histidina ou um sal do mesmo, e j) L-lisina ou um sal do mesmo.
13. Método para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; função vascular; estresse oxidativo (por exemplo, um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo ou sistêmico); ou inflamação, caracterizado por compreender a administração a um indivíduo em sua necessidade de uma quantidade eficaz de uma composição (por exemplo, uma Porção Ativa), como definida em qualquer uma das reivindicações 6 a 12, melhorando, dessa forma, um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; função vascular, estresse oxidativo (por exemplo, um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo ou sistêmico); ou inflamação no indivíduo.
14. Método para tratar uma hemoglobinopatia ou uma talassemia, caracterizado por compreender a administração a um indivíduo em sua necessidade de uma quantidade eficaz de uma composição (por exemplo, uma Porção Ativa), como definida em qualquer uma das reivindicações 6 a 12, tratando, dessa forma, a hemoglobinopatia ou a talassemia no indivíduo.
15. Composição para uso em um método para melhorar um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou mais (por exemplo, todos) de função, renovação ou síntese de eritrócitos; função, renovação ou síntese de hemoglobina; função vascular; estresse oxidativo (por exemplo, um ou ambos de estresse oxidativo sanguíneo ou sistêmico); ou inflamação, caracterizada por compreender uma quantidade eficaz de uma composição (por exemplo, uma Porção Ativa), como definida em qualquer uma das reivindicações 6 a 12.
16. Composição para uso em um método para tratar uma hemoglobinopatia ou uma talassemia, caracterizada por compreender uma quantidade eficaz de uma composição (por exemplo, uma Porção Ativa), como definida em qualquer uma das reivindicações 6 a 12.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 5 ou 7 a 14, ou composição para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3, 4, 5, 7 a 12, 15 ou 16, caracterizados por o indivíduo estar em risco de, ou ter sido diagnosticado com, uma hemoglobinopatia (por exemplo, β- hemoglobinopatia) ou uma talassemia, opcionalmente em que a hemoglobinopatia ou talassemia é escolhida de: uma doença falciforme (por exemplo, anemia falciforme (HbSS), doença de hemoglobina SC (HbSC), β+-talassemia falciforme (HbS/β+), β0-talassemia falciforme (HbS/β0), doença de hemoglobina SE, doença de hemoglobina SD ou doença de hemoglobina SO), α-talassemia ou β-talassemia.
18. Método ou composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado por a composição ser formulada com um veículo farmaceuticamente aceitável.
19. Método ou composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado por a composição ser formulada como uma composição dietética.
20. Método ou composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado por a composição ser uma preparação de mistura a seco, por exemplo, uma preparação de mistura a seco de grau farmacêutico (PGDBP).
21. Método de fabricação de uma preparação de mistura a seco, por exemplo, (PGDBP), compreendendo, pelo menos, 4 entidades de aminoácidos de grau farmacêutico, o referido método caracterizado por compreender: a formação de uma combinação de, pelo menos, 4 entidades de aminoácidos de grau farmacêutico e a mistura da combinação durante um tempo suficiente para obter uma preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, em que a preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, compreende: a) uma entidade de aminoácido de leucina, b) uma entidade de aminoácido de arginina, c) uma entidade de aminoácido de glutamina; e d) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC).
22. Método, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado por a preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP, compreender ainda um, dois, três, quatro, cinco ou mais (por exemplo, todos) de: e) uma entidade de aminoácido de citrulina, f) uma entidade de carnitina, g) uma entidade de aminoácido de serina, h) uma entidade de aminoácido de valina, i) uma entidade de aminoácido de histidina, e j) uma entidade de aminoácido de lisina.
23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 22, caracterizado por: (i) a mistura ocorrer a uma temperatura inferior a 40 °C; (ii) a mistura compreender mistura ou combinação em um misturador ou agitador a uma velocidade inferior a 1000 rpm; ou (iii) o método compreender ainda um, dois ou três de mistura direta, compactação por rolo ou granulação úmida da preparação de mistura a seco, por exemplo, PGDBP.
24. Composição caracterizada por compreender: a) uma entidade de aminoácido de arginina, b) uma entidade de aminoácido de citrulina, e c) uma entidade de N-acetilcisteína (NAC), em que: (i) a composição não compreende um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento (por exemplo, proteína de soro de leite) ou, se um peptídeo de mais de 20 resíduos de aminoácidos de comprimento estiver presente, o peptídeo está presente a menos de: 10% em peso do peso total da composição (por exemplo, na forma seca); (ii) pelo menos 50% em peso do peso total da composição (por exemplo, na forma seca) é uma ou mais entidades de aminoácidos na forma livre; e (iii) a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina é maior do que a % em peso da entidade NAC.
25. Composição, de acordo com a reivindicação 24, caracterizada por um, dois ou três dos seguintes: (i) a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina na composição (por exemplo, na forma seca) ser, pelo menos, 50% maior do que a % em peso da entidade de NAC, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina é, pelo menos, 60%, 65%, 70%, 75% ou 80% maior do que a % em peso da entidade de NAC; (ii) a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de citrulina e da entidade de NAC ser, pelo menos: 20% em peso, 25% em peso, 30% em peso ou 35% em peso dos componentes de entidades de aminoácidos ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 80% em peso dos componentes de entidades de aminoácidos ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca); ou
(iii) a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina ser, pelo menos: 5% em peso, 10% em peso, 11% em peso, 12% em peso, 13% em peso ou mais dos componentes de entidades de aminoácidos na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 60% em peso dos componentes de entidades de aminoácidos na composição (por exemplo, na forma seca).
26. Composição, de acordo com a reivindicação 24 ou 25, caracterizada por a composição compreender ainda um ou ambos de: (d) uma entidade de aminoácido de carnitina; ou (e) uma entidade de aminoácido de glutamina.
27. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 26, caracterizada por um, dois, três ou quatro dos seguintes: (i) a % em peso da entidade de aminoácido de leucina, da entidade de aminoácido de citrulina, da entidade de NAC, da entidade de aminoácido de carnitina e da entidade de aminoácido de glutamina ser, pelo menos: 40% em peso, 45% em peso, 50% em peso, 55% em peso ou 60% em peso dos componentes de entidades de aminoácidos ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca), mas não mais do que 90% em peso dos componentes de entidades de aminoácidos ou componentes totais na composição (por exemplo, na forma seca); (ii) a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina na composição (por exemplo, na forma seca) ser maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de carnitina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina na composição (por exemplo, na forma seca) ser, pelo menos, 50% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de carnitina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina ser, pelo menos, 60%, 65%, 70%, 75% ou 80% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de carnitina; (iii) a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina na composição (por exemplo, na forma seca) ser maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina na composição (por exemplo, na forma seca) ser, pelo menos, 40% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina ser, pelo menos, 60%, 45%, 50%, 55%, 60% ou 65% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina; (iv) a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina e da entidade de aminoácido de arginina em combinação na composição (por exemplo, na forma seca) ser maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de glutamina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina na composição (por exemplo, na forma seca) ser, pelo menos, 20% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de carnitina, por exemplo, a % em peso da entidade de aminoácido de citrulina ser, pelo menos, 30%, 35%, 40%, 45% ou 50% maior do que a % em peso da entidade de aminoácido de carnitina.
28. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 27, caracterizada por a composição compreender ainda um, dois ou três de: (f) uma entidade de aminoácido de leucina, (g) uma entidade de aminoácido de serina, (h) uma entidade de aminoácido de valina, (i) uma entidade de aminoácido de histidina ou (j) uma entidade de aminoácido de lisina.
29. Método para tratar uma hemoglobinopatia ou uma talassemia, caracterizado por compreender a administração a um indivíduo em sua necessidade de uma quantidade eficaz de uma composição (por exemplo, uma Porção Ativa), conforme definida em qualquer uma das reivindicações 24 a 29, tratando, dessa forma, a hemoglobinopatia ou a talassemia no indivíduo.
30. Composição para uso em um método para tratar uma hemoglobinopatia ou talassemia, caracterizada por compreender uma quantidade eficaz de uma composição (por exemplo, uma Porção Ativa), como definida em qualquer uma das reivindicações 24 a 29.
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