BR112020023926A2 - compostos de amino-pirazinocarboxamida, conjugados e usos dos mesmos - Google Patents

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Sean Wesley Smith
Craig Alan COBURN
Peter Robert Baum
Robert Finley Dubose
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Silverback Therapeutics, Inc.
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Abstract

“compostos de amino-pirazinocarboxamida, conjugados e usos dos mesmos”. compostos de amino-pirazinocarboxamida de fórmula (i), conjugados e composições farmacêuticas para uso no tratamento de doenças, tais como câncer, são divulgados aqui. os compostos divulgados são úteis, entre outras coisas, no tratamento de câncer e fibrose e modulação de tgfbr2. além disso, os compostos incorporados em um conjugado com um construto de anticorpo são descritos aqui.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para: “COMPOSTOS DE AMINO-PIRAZINOCARBOXAMIDA, CONJUGADOS E USOS DOS MESMOS” Referência
[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório dos EUA No. 62/676.832 depositado em 25 de maio de 2 18 e do Pedido Provisório dos EUA No. 62/778.812 depositado em 12 de dezembro de 2018, cada um dos quais é incorporado nesse documento por referência em sua totalidade.
Listagem de Sequências
[002] O pedido instantâneo contém uma Listagem de Sequências que foi enviada eletronicamente em formato ASCII e é incorporada nesse documento por referência em sua totalidade. A referida cópia ASCII, criada em 22 de maio de 2019, tem o nome 50358-733_60l_SL.txt e tem 161.275 bytes.
Fundamentos da Invenção
[003] Uma das principais causas de morte nos Estados Unidos é o câncer. Os métodos convencionais de tratamento do câncer, como quimioterapia, cirurgia ou radioterapia, tendem a ser altamente tóxicos ou inespecíficos para um câncer, ou ambos, resultando em eficácia limitada e efeitos colaterais prejudiciais. No entanto, o sistema imunológico tem o potencial de ser uma ferramenta poderosa e específica no combate ao câncer. Em muitos casos, os tumores podem expressar especificamente genes cujos produtos são necessários para induzir ou manter o estado maligno. Essas proteínas podem servir como marcadores de antígenos para o desenvolvimento e estabelecimento de uma resposta imune anticâncer mais específica. O aumento dessa resposta imune específica tem o potencial de ser um poderoso tratamento anticâncer que pode ser mais eficaz do que os métodos convencionais de tratamento do câncer e pode ter menos efeitos colaterais.
[004] A fibrose é a formação de tecido conjuntivo fibroso em excesso ou tecido cicatricial em um órgão ou tecido em um processo reparador ou reativo. A fibrose pode ocorrer em muitos tecidos do corpo, normalmente como resultado de inflamação ou danos, que incluem pulmões, fígado, coração e cérebro. O tecido cicatricial bloqueia as artérias, imobiliza as articulações e danifica os órgãos internos, causando estragos na capacidade do corpo de manter as funções vitais. Todos os anos, milhões de pessoas são hospitalizadas devido aos efeitos nocivos da fibrose. No entanto, a terapêutica atual para o tratamento de doenças fibróticas é pouca ou tem desvantagens. Assim, permanece uma necessidade considerável de tratamentos alternativos ou melhorados para doenças fibróticas.
Sumário da Invenção
[005] A presente divulgação geralmente se refere a compostos e composições farmacêuticas de amino-
pirazinocarboxamida substituída. Os compostos de amino- pirazinocarboxamida substituída podem ser usados para tratar ou prevenir câncer e/ou doenças fibróticas. Os compostos de amino-pirazinocarboxamida divulgados podem inibir TGFβl, TGFβRl, TGFβR2 ou combinações dos mesmos. Os compostos de amino-pirazinocarboxamida divulgados podem ser incorporados em conjugados, tais como conjugados de anticorpos.
[006] Em um aspecto da invenção, está um composto representado pela Fórmula (I): Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: o Anel A é cicloalquila não substituído ou substituído, heterocicloalquila não substituído ou substituído, arila não substituído ou substituído ou heteroarila não substituído ou substituído, em que quando o Anel A é substituído, os substituintes no Anel A são independentemente selecionados em cada ocorrência de R4; cada R4 é selecionado a partir de RL e R20, ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
RL é ou ;
cada Y é independentemente C1-C6alquileno substituído ou não substituído; em que quando Y é substituído, os substituintes em Y são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R5;
cada R5 é selecionado a partir de R20, ou dois R5 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído, ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
cada Z é independentemente -NR6S(=O)2-, -S(=O)2NR6-, -
OC(=O)-, -C(=O)O-, -C(=O)NR6-, ou -NR6C(=O)-; em que cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-
C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído e heterociclo não substituído ou substituído, ou um R5 e um R6 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
L é C1-C6alquila não substituído ou substituído, C2-
C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
-C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou -C1-
C6alquileno-heterocicla não substituído ou substituído; em que quando L é substituído, os substituintes em L são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R7;
cada R7 é selecionado a partir de -SSR50 e R20;
s é 1-10;
R1 é selecionado a partir de hidrogênio e R20;
cada R2 é independentemente selecionado a partir de R20,
ou dois R2 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
m é 0-3;
R3 é selecionado a partir de (i), (ii), (iii) e (iv):
(i) arila não substituído ou substituído, ou heteroarila não substituído ou substituído; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R10;
(ii) cicloalquila não substituído ou substituído, ou heterocicloalquila não substituído ou substituído; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R11;
(iii) heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído, heterocicloalquila monocíclico de 3 a 5 membros não substituído ou substituído, heterocicloalquila monocíclico de 6 a 8 membros não substituído ou substituído compreendendo 1 ou 2 átomos de N e 1 ou 2 outros heteroátomos selecionados de O ou S; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R11; e
(iv) ;
em que quando R3 está na posição 2-, 5- ou 6- da piridina, R3 é selecionado a partir de (i), (ii) e (iv), e quando R3 está na posição 4 da piridina, R3 é selecionado de
(i), (iii) e (iv); e cada R10 é selecionado a partir de R20, ou dois R10 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
cada R11 é selecionado a partir de =O, =S e R20;
R12 é hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-C6alquenila não substituído ou substituído,
C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, C1-C6alquenila-carbociclo não substituído ou substituído ou C1-C6alquileno-heterociclo substituído ou não substituído;
Q é -OR13, -NR13R13, -SR13, -CN, -C(=O)R14, -C(=O)NR13R13,
-S(=O)R14, ou -S(=O)2R14, ou -S(=O)2NR13R13;
R13 é hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-C6alquenila não substituído ou substituído,
C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, C1-C6alquenila-carbociclo não substituído ou substituído ou C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
R14 é C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-
C6alquenila não substituído ou substituído, C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou
-C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada U1 é -(CR15R16)-, em que cada R15 e R16 são selecionados independentemente a partir de hidrogênio e R20;
r é 1-5;
cada R20 é independentemente halogênio, -CN, -OH, -OR50,
-SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50,
-S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -OC(=O)OR51,
-C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50,
-NR51C(=O)OR51, C1-C6alquila não substituído ou substituído,
C2-C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
-C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído,
ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada R50 é independentemente selecionado dentre C1 -
C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada R51 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído,
carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
ou dois R51 no mesmo átomo de N são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N não substituído ou substituído;
em que quando qualquer um de R2, R4, R5, R6, R10, R12,
R13, R14, R20, R50 e R51 são substituídos, substituintes em R2,
R4, R5, R6, R10, R12, R13, R14, R20, R50 e R51 são selecionados independentemente em cada ocorrência de halogênio, -CN, - NO2, -OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, - NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, -SR52, -S(=O)R53, -SO2R53, - SO2NR52R52, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1- C6haloalquila, carbociclo monocíclico não substituído ou substituído, heterocíclico não substituído ou substituído, ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar um C=O ou C=S e em que substituintes no referido C1-C6alquila são independentemente selecionados a partir de R54 e substituintes no referido carbociclo e heterociclo são independentemente selecionados a partir de R55; cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros; ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N; e cada R53 é independentemente selecionado a partir de C1- C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros.
cada R54 é independentemente selecionado a partir de - OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52 e fenila;
cada R55 é independentemente selecionado a partir de - OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, e C1-C6alquila não substituído ou substituído em que os substituintes no referido C1-C6alquila são independentemente selecionados a partir de R54.
[007] Também estão incluídos os compostos de Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em que: o Anel A é cicloalquila não substituído ou substituído, heterocicloalquila não substituído ou substituído, aril não substituído ou substituído ou heteroaril não substituído ou substituído, em que quando o Anel A é substituído, os substituintes no Anel A são independentemente selecionados em cada ocorrência de R4; cada R4 é selecionado a partir de RL e R20, ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído; RL é ; cada Y é independentemente C1-C6alquileno substituído ou não substituído; em que quando Y é substituído, os substituintes em Y são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R5;
cada R5 é selecionado a partir de R20, ou dois R5 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído, ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
cada Z é independentemente -NR6S(=O)2-, -S(=O)2NR6-, -
OC(=O)-, -C(=O)O-, -C(=O)NR6-, ou -NR6C(=O)-; em que cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-
C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído e heterociclo não substituído ou substituído, ou um R5 e um R6 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
L é C1-C6alquila não substituído ou substituído, C2-
C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
-C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou -C1-
C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído; em que quando L é substituído, os substituintes em L são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R7;
cada R7 é selecionado a partir de -SSR50 e R20;
s é 1-10;
R1 é selecionado a partir de hidrogênio e R20;
cada R2 é independentemente selecionado a partir de R20,
ou dois R2 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
m é 0-3;
R3 é selecionado a partir de (i), (ii), (iii) e (iv):
(i) arila não substituído ou substituído, ou heteroarila não substituído ou substituído; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R10;
(ii) cicloalquila não substituído ou substituído, ou heterocicloalquila não substituído ou substituído; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R11;
(iii) heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído, heterocicloalquila monocíclico de 3 a 5 membros não substituído ou substituído, heterocicloalquila monocíclico de 6 a 8 membros não substituído ou substituído compreendendo 1 ou 2 átomos de N e 1 ou 2 outros heteroátomos selecionados de O ou S; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R11; e
(iv) ;
em que quando R3 está na posição 2-, 5- ou 6- da piridina, R3 é selecionado a partir de (i), (ii) e (iv), e quando R3 está na posição 4 da piridina, R3 é selecionado de
(i), (iii) e (iv); e cada R10 é selecionado a partir de R20, ou dois R10 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
cada R11 é selecionado a partir de =O, =S e R20;
R12 é hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-C6alquenila não substituído ou substituído,
C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, C1-C6alquenila-carbociclo não substituído ou substituído ou C1-C6alquileno-heterociclo substituído ou não substituído;
Q é -OR13, -NR13R13, -SR13, -CN, -C(=O)R14, -C(=O)NR13R13,
-S(=O)R14, ou -S(=O)2R14, ou -S(=O)2NR13R13;
R13 é hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-C6alquenila não substituído ou substituído,
C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, C1-C6alquenila-carbociclo não substituído ou substituído ou C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
R14 é C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-
C6alquenila não substituído ou substituído, C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou
-C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada U1 é -(CR15R16)-, em que cada R15 e R16 são selecionados independentemente a partir de hidrogênio e R20;
r é 1-5;
cada R20 é independentemente halogênio, -CN, -OH, -OR50,
-SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50,
-S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -OC(=O)OR51,
-C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50,
-NR51C(=O)OR51, C1-C6alquila não substituído ou substituído,
C2-C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
-C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído,
ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada R50 é independentemente selecionado a partir de C1-
C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada R51 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído,
carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
ou dois R51 no mesmo átomo de N são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N não substituído ou substituído;
em que quando qualquer um de R2, R4, R5, R6, R10, R12,
R13, R14, R20, R50 e R51 são substituídos, substituintes em R2,
R4, R5, R6, R10, R12, R13, R14, R20, R50 e R51 são selecionados independentemente em cada ocorrência de halogênio, -CN, -
NO2, -OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -
NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, -SR52, -S(=O)R53, -SO2R53, -
SO2NR52R52, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-
C6haloalquila, carbociclo monocíclico não substituído ou substituído, heterocíclico não substituído ou substituído,
ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar um C=O ou C=S; cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros; ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N; e cada R53 é independentemente selecionado a partir de C1- C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros.
[008] Em determinadas modalidades, o composto de Fórmula (I) é representado pela Fórmula (II): Fórmula (II) em que: o Anel B é arila ou heteroarila; e n é 0-5.
[009] Em algumas modalidades, os compostos divulgados nesse documento estão ligados a um ligante para formar ligantes de composto.
[0010] Em algumas modalidades, os compostos divulgados nesse documento são covalentemente ligados a um construto de anticorpo ou uma fração de alvejamento, opcionalmente por meio de um ligante.
[0011] Também são divulgadas nesse documento composições farmacêuticas dos compostos ou conjugados descritos nesse documento.
[0012] Em alguns aspectos, a presente divulgação fornece um método para o tratamento do câncer, compreendendo a administração de um composto, um conjugado ou uma composição farmacêutica, conforme descrito nesse documento, a um indivíduo em necessidade do mesmo.
[0013] Em alguns aspectos, a presente divulgação fornece um método para aumentar uma resposta imune (por exemplo, uma resposta imune anticâncer) em um indivíduo, compreendendo a administração de um composto, um conjugado ou uma composição farmacêutica, conforme descrito nesse documento, a um indivíduo em necessidade do mesmo.
[0014] Em alguns aspectos, a presente divulgação fornece um método para o tratamento de fibrose, compreendendo a administração de um composto, um conjugado ou uma composição farmacêutica, conforme descrito nesse documento, a um indivíduo em necessidade do mesmo. Em alguns aspectos, a fibrose está associada ao câncer. Em alguns aspectos, a fibrose não está associada ao câncer. Em um aspecto, a fibrose é esclerodermia. Em outro aspecto, a fibrose é fibrose sistêmica. Em um aspecto, a doença fibrótica é esteatohepatite, por exemplo, esteatohepatite não alcoólica (NASH).
Incorporação por Referência
[0015] Todas as publicações, patentes e pedidos de patentes mencionados nesse relatório descritivo são incorporados nesse documento por referência na mesma extensão como se cada publicação, patente ou pedido de patente individual fosse especificamente e individualmente indicado para ser incorporado por referência.
Breve Descrição das Figuras
[0016] As novas características da divulgação são apresentadas com particularidade nas reivindicações anexas.
Uma melhor compreensão das características e vantagens da presente divulgação será obtida por referência à seguinte descrição detalhada que estabelece aspectos ilustrativos, nos quais os princípios da divulgação são utilizados, e os desenhos anexos dos quais:
[0017] A Figura 1 ilustra que um inibidor de TGFβR2 exemplificativo conjugado a um anticorpo anti-LRRCl5 por ligantes cliváveis ou não cliváveis inibe a atividade do promotor SMAD2 induzida por TGFΒ em um ensaio repórter. Uma linha repórter promotor TGFβ/SMAD-luciferase transfectada de forma estável com LRRC15 humano foi tratada com conjugados e anticorpos de controle nas concentrações indicadas por 24 horas seguido por TGFβ por 18 horas. A atividade da luciferase em amostras tratadas foi determinada por um ensaio de quimioluminescência e a extensão da inibição determinada pela redução relativa da quimioluminescência em comparação com as amostras que receberam apenas tampão e de seguida TGFβ.
[0018] A Figura 2 mostra que, de uma forma dependente da concentração, os compostos selecionados inibem a indução de TGFβ da expressão do gene ⍺SMA em uma linha de células de fibroblastos de pulmão humano derivada de um paciente de IPF. As células LL97a foram tratadas com TGFβ e compostos selecionados ou veículo DMSO nas concentrações indicadas por 24 horas antes da implementação de qPCR para determinar os níveis de mRNA de ⍺SMA. As linhas tracejadas superiores e inferiores indicam níveis de 100% e 50% de indução de mRNA de ⍺SMA em células tratadas apenas com TGFβ.
[0019] A Figura 3 mostra que de uma forma dependente da concentração, o composto 250 inibe a indução de TGFβ da expressão do gene ⍺SMA em uma linha de células de fibroblastos de pulmão humano derivada de um paciente de IPF. As células LL97a foram tratadas com TGFβ e Composto 250 ou veículo de DMSO nas concentrações indicadas por 24 horas antes da implementação de qPCR para determinar os níveis de mRNA de ⍺SMA. As linhas tracejadas superiores e inferiores indicam níveis de 100% e 50% de indução de mRNA de ⍺SMA em células tratadas apenas com TGFβ.
[0020] A Figura 4 mostra que, de uma forma dependente da concentração, o composto 250 inibe a indução de TGFβ da expressão do gene da elastina em uma linha de células de fibroblastos de pulmão humano derivada de um paciente de IPF. As células LL97a foram tratadas com TGFβ e Composto 250 ou veículo de DMSO nas concentrações indicadas por 24 horas antes da implementação de qPCR para determinar os níveis de mRNA de elastina. As linhas tracejadas superiores e inferiores indicam níveis de 100% e 50% de indução de mRNA de elastina em células tratadas apenas com TGFβ.
[0021] A Figura 5 mostra que, de uma forma dependente da concentração, os compostos selecionados inibem a indução de TGFβ da expressão do gene ⍺SMA em uma linha de células de fibroblastos de pulmão humano derivada de um paciente de IPF. As células LL97a foram tratadas com TGFβ e compostos selecionados ou veículo de DMSO nas concentrações indicadas por 24 horas antes da implementação de qPCR para determinar os níveis de mRNA de ⍺SMA. As linhas tracejadas superiores e inferiores indicam níveis de 100% e 50% de indução de mRNA de ⍺SMA em células tratadas apenas com TGFΒ.
[0022] As Figuras 6A-B mostram que os conjugados de anticorpos de compostos selecionados ligados a cisteínas com ligantes cliváveis PABC em uma DAR média elevada têm alta potência na inibição da indução de TGFβ da expressão do gene ⍺SMA em células LL97a (A) ou da expressão do gene de elastina em células NHFL (B). As células foram tratadas com TGFβ e conjugados ou controles nas concentrações indicadas por 24 horas antes do RNA ser preparado e submetido a qPCR. As linhas tracejadas superiores e inferiores indicam níveis de 100% e 50% de indução de mRNA em células tratadas apenas com tampão e TGFβ.
[0023] As Figuras 7A-B mostram que conjugados com DAR médias semelhantes de LP1 para um anticorpo anti-LRRCl5 com um Fc de tipo selvagem (asterisco) ou para o anticorpo com um domínio Fc null têm potência semelhante na redução da expressão do gene ⍺SMA induzida por TGFβ em células LL97a (A) ou expressão do gene de elastina em células de fibroblasto de pulmão humano normal (ou normal human lung fibroblast - NHLF) (B). As células foram tratadas com conjugados e controles nas concentrações indicadas mais TGFβ por 24 horas (A) ou 48 horas (B) antes do RNA ser preparado e submetido a qPCR. As linhas tracejadas superiores e inferiores indicam níveis de 100% e 50% de indução de mRNA em células tratadas apenas com tampão e TGFβ.
[0024] As Figuras 8A-C mostram que as injeções intratumorais do composto 211 reduzem o nível de mRNA de genes induzíveis por TGFβ selecionados em camundongos inoculados com células tumorais PANC-1 (A), dos compostos 171 e 211 reduzem o nível de mRNA de genes induzíveis por TGFβ selecionados em camundongos inoculados com células tumorais BxPC3 (B) e do composto 211 reduz o nível de mRNA de genes induzíveis por TGFβ selecionados em camundongos inoculados com células tumorais BxPC3 (C). Os asteriscos denotam que foi observada uma redução estatisticamente significativa do gene mRNA após o tratamento com o composto em comparação com os animais tratados com o controle de veículo DMSO.
[0025] A Figura 9 mostra que a dosagem sistêmica de conjugados anti-LRRCl5, LP35 e LP36 reduzem o nível de mRNA de genes regulados por TGFβ selecionados em tumores de camundongos inoculados com células tumorais BxPC3. Os animais foram doseados por via intravenosa com o conjugado ou controles do anticorpo não conjugado ou um controle de isótipo de anticorpo irrelevante. Os asteriscos denotam que foi observada uma redução estatisticamente significativa do mRNA do gene selecionado dentro dos tumores após o tratamento com o conjugado em comparação com animais de controle que receberam doses do anticorpo não conjugado.
[0026] A Figura 10 mostra que a dosagem sistêmica do conjugado anti-LRRCl5 LP36 reduz o nível de mRNA de genes regulados por TGFβ selecionados em tumores de camundongos inoculados com células tumorais BxPC3 em doses de 5 mpk e 20 miligramas por quilograma. Os animais foram doseados por via intravenosa com o conjugado ou controles do anticorpo não conjugado ou um controle de isótipo de anticorpo irrelevante nos níveis de dosagem indicados. Os asteriscos denotam que foi observada uma redução estatisticamente significativa do mRNA do gene selecionado dentro dos tumores após o tratamento com o conjugado em comparação com os animais de controle que receberam doses de 20 mpk do anticorpo não conjugado.
[0027] A Figura 11 mostra que a administração sistêmica do conjugado anti-LRRCl5 LP1 diminui a fibrose histopatológica em um modelo de esclerodermia sistêmica. Os camundongos receberam injeções intradérmicas diárias de bleomicina por 22 dias. O tratamento dos animais com injeções ip de lOmpk de conjugado ou em PBS foi iniciado no dl4 após o início da fibrose. Após o sacrifício de animais no dia 23 fixde, o tecido dérmico foi classificado para fibrose após coloração de tricrômico de Masson por histopatologia.
Conforme mostrado, o tratamento com o conjugado reduziu significativamente a fibrose em esta medida em comparação com os animais de controle com PBS.
[0028] A Figura 12 mostra que a administração sistêmica do conjugado anti-LRRCl5 LP1 diminui a fibrose em um modelo de fibrose sistêmica. Os camundongos receberam injeções intradérmicas diárias de bleomicina por 22 dias. O tratamento dos animais com injeções ip de lOmpk de conjugado ou em PBS foi iniciado no dl4 após o início da fibrose. Após o sacrifício dos animais no d23, o tecido dérmico foi submetido a um ensaio de teor de colágeno Sircol Red. Conforme mostrado, o tratamento com o conjugado reduziu a fibrose em esta medida em comparação com os animais de controle com PBS.
Descrição Detalhada da Invenção
[0029] Embora as modalidades preferidas da presente invenção tenham sido mostradas e descritas nesse documento, será óbvio para os versados na técnica que as referidas modalidades são fornecidas apenas a título de exemplo.
Numerosas variações, mudanças e substituições ocorrerão aos versados na técnica sem que exista afastamento da invenção.
Deve ser entendido que várias alternativas às modalidades da invenção descritas nesse documento podem ser empregadas na prática da invenção. Pretende-se que as seguintes reivindicações definam o escopo da invenção e que métodos e estruturas dentro do escopo dessas reivindicações e seus equivalentes sejam cobertos pelas mesmas.
[0030] Os fatores de transformação de crescimento (ou transforming growth factors - TGFs) e receptores dos mesmos (ou transforming growth factor receptors - TGFRs) são moléculas conservadas evolutivamente que desempenham papéis pleiotrópicos importantes na regulação de numerosas vias de desenvolvimento e fisiológicas, tais como proliferação celular, diferenciação celular, desenvolvimento embrionário, formação de matriz extracelular, cicatrização de feridas, desenvolvimento ósseo, respostas imunes e respostas inflamatórias. Dada a amplitude de suas funções biológicas, os TGFs e TGFRs também estão envolvidos em muitos processos patológicos, como aqueles subjacentes ao desenvolvimento e progressão do câncer, doenças imunológicas e inflamatórias, fibrose, cicatrizes, aterosclerose, infecções virais e outros.
[0031] O fator de transformação de crescimento beta-1 (TGFβ1) é o membro prototípico da superfamília de ligantes TGF. O TGFβ1 é um fator de crescimento e citocina envolvido na sinalização em uma ampla gama de tipos de tecido. A superexpressão de TGFβl mostrou induzir patologia de doença fibrótica em vários sistemas de órgãos, incluindo o rim, fígado, coração, pulmão, medula óssea e pele.
[0032] O TGFβ1 desempenha vários papéis na progressão do tumor. O TGFβ1 pode induzir a transição de epitelial para mesenquimal, aumentar a capacidade de crescimento das células tumorais, influenciar o destino das células tumorais e modular a composição do microambiente tumoral para que seja mais permissivo ao crescimento tumoral.
[0033] O TGFβl desempenha um papel na manutenção da tolerância periférica nas células T e na prevenção da maturação das células dendríticas. Além disso, foi demonstrado que o TGFβ1 regula as funções de apresentação de antígeno das células dendríticas, pela regulação negativa da expressão do Complexo Principal de Histocompatibilidade de classe II (ou Major Histocompatibility Complex - MHC-II) e da secreção de Interleucina-12 (IL-12).
[0034] A sinalização de TGFβl por receptores dos mesmos em células mieloides demonstrou desempenhar papéis na promoção de tumores e na supressão imunológica de tumores, incluindo em células dendríticas, células supressoras derivadas de mieloides, macrófagos associados a tumores ou combinações dessas células.
[0035] O receptor do fator de transformação de crescimento beta 2 (TGFβR2) é um de dois receptores transmembrana serina/treonina quinase necessários para a transdução do sinal TGFβ1, sendo o outro receptor o TGFβRl.
O TGFβl liga-se primeiro ao TGFβR2 na membrana plasmática, induzindo a formação do complexo TGFβRl- TGFβR2, que leva à fosforilação das Smad2 (Mothers Against Decapentaplegic homolog 2) e das Smad3 (Mothers Against Decapentaplegic homolog 3 e a subsequente modulação de uma série de alvos de sinalização a jusante.
[0036] Dada a ampla gama de interações celulares e multicelulares patológicas nas quais o TGFβ1 desempenha um papel proeminente, a inibição farmacológica do TGFβ1 ou dos receptores do mesmo, TGFβRl ou TGFβR2, pode ser útil no tratamento de várias doenças.
[0037] Os desafios para desenvolver terapias direcionadas incluem alcançar alta seletividade para o alvo farmacológico primário e manter a inibição do alvo prolongada. Superando esses dois desafios, é possível desenvolver produtos farmacêuticos com maior eficácia terapêutica e reduzida toxicidade sistêmica. Uma abordagem para lidar com esses dois desafios é o desenvolvimento de fármacos covalentes, em que uma interação covalente ocorre entre a entidade farmacológica e uma cisteína específica no local ativo do alvo da proteína.
[0038] Existe uma necessidade atual de terapêuticas que possam inibir TGFβ1, TGFβRl, TGFβR2 ou combinações dos mesmos, tratar ou prevenir o câncer e tratar ou prevenir a fibrose. A fibrose pode ou não estar associada ao câncer. A presente divulgação fornece compostos, composições e métodos que atendem a esta necessidade e a necessidades relacionadas.
[0039] A presente divulgação fornece compostos, conjugados e composições farmacêuticas para uso no tratamento ou prevenção de doenças. Em determinadas modalidades, os compostos, conjugados e composições de amino-pirazinocarboxamida substituída, são usados no tratamento ou prevenção de doenças, como o câncer e doenças fibróticas. Os compostos de amino-pirazinocarboxamida substituídos e conjugados dos mesmos podem ser úteis, entre outras coisas, no tratamento e prevenção do câncer, tratamento e prevenção de doenças fibróticas e modulação de TGFβ1, TGFβRl, TGFβR2 ou combinações dos mesmos. Os compostos de amino-pirazinocarboxamida substituída podem ser úteis na inibição de TGFβ1, TGFβRl, TGFβR2 ou combinações dos mesmos.
Os compostos de amino-pirazinocarboxamida podem ser incorporados em conjugados, tais como conjugados de anticorpos.
[0040] Os compostos da presente divulgação, bem como conjugados dos mesmos, podem ser úteis para o tratamento e prevenção, por exemplo, vacinação, de câncer, doenças autoimunes, inflamação, sepse, alergia, asma, rejeição de enxertos, doença de enxerto contra hospedeiro, fibrose, imunodeficiências e doenças infecciosas.
[0041] Em determinadas modalidades, os compostos têm utilidade no tratamento do câncer como agentes únicos, como conjugados ou em terapia de combinação. Em determinadas modalidades, os compostos têm utilidade como imunomoduladores de agente único, adjuvantes de vacina e em combinação com terapias convencionais contra o câncer. Em determinadas modalidades, os compostos são ligados a um construto de anticorpo para formar um conjugado que pode ser utilizado, por exemplo, para aumentar uma resposta imune ou para o tratamento de fibrose. Em determinadas modalidades, a divulgação fornece conjugados de composto de construto de anticorpo-amino-pirazinocarboxamida (conjugados) e o uso dos mesmos para o tratamento de câncer ou fibrose.
Definições
[0042] A menos que seja definido em contrário, todos os termos técnicos e científicos usados nesse documento têm o mesmo significado que é comumente entendido por um versado na técnica à qual esta invenção pertence.
[0043] Conforme usado no relatório descritivo e nas reivindicações, a forma singular "um", "uma", "o" e “a”, inclui referências no plural, a menos que o contexto indique claramente o contrário.
[0044] Conforme usado nesse documento, o termo "anticorpo" se refere a uma molécula de imunoglobulina que se liga especificamente a, ou é imunologicamente reativa em relação a um antígeno específico. Anticorpo pode incluir, por exemplo, policlonal, monoclonal, geneticamente modificado e fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos.
Um anticorpo pode ser, por exemplo, murino, quimérico, humanizado, heteroconjugado, biespecífico, diacorpo,
triacorpo ou tetracorpo. O fragmento de ligação ao antígeno pode incluir, por exemplo, um Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rIgG e scFv.
[0045] Conforme usado nesse documento, um "domínio de ligação ao antígeno" se refere a uma região de uma molécula que se liga especificamente a um antígeno. Um domínio de ligação ao antígeno pode ser uma porção de ligação ao antígeno de um anticorpo ou fragmento de anticorpo. Um domínio de ligação ao antígeno pode ser um ou mais fragmentos de um anticorpo que pode reter a capacidade de se ligar especificamente a um antígeno. Um domínio de ligação ao antígeno pode ser um fragmento de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, um domínio de ligação ao antígeno pode reconhecer um único antígeno. Um domínio de ligação ao antígeno pode reconhecer, por exemplo, dois ou três antígenos.
[0046] Conforme usado nesse documento, um "construto de anticorpo" se refere a uma molécula, por exemplo, uma proteína, peptídeo, anticorpo ou porção do mesmo, que contém um domínio de ligação ao antígeno e um domínio Fc.
[0047] Conforme usadas nesse documento, as abreviaturas para os aminoácidos L-enantioméricos naturais são convencionais e podem ser as seguintes: alanina (A, Ala); arginina (R, Arg); asparagina (N, Asn); ácido aspártico (D, Asp); cisteína (C, Cys); ácido glutâmico (E, Glu); glutamina
(Q, Gln); glicina (G, Gly); histidina (H, His); isoleucina (I, Ile); leucina (L, Leu); lisina (K, Lys); metionina (M, Met); fenilalanina (F, Phe); prolina (P, Pro); serina (S, Ser); treonina (T, Thr); triptofano (W, Trp); tirosina (Y, Tyr); valina (V, Val).
[0048] Conforme usado nesse documento, "conjugado" se refere a um construto de anticorpo que está fixado (por exemplo, conjugado) diretamente ou por um grupo ligante a um composto descrito nesse documento, por exemplo, um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I- D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D) e da Tabela 14.
[0049] Conforme usado nesse documento, um "domínio Fc" pode ser um domínio Fc de um anticorpo ou de um não anticorpo que pode se ligar a um receptor Fc.
[0050] Conforme usado nesse documento, "reconhecer" no que diz respeito às interações de anticorpos se refere à associação ou ligação entre um domínio de ligação ao antígeno de um anticorpo ou porção do mesmo e um antígeno.
[0051] Conforme usado nesse documento, "identidade de sequência" se refere à identidade entre uma sequência de DNA, RNA, nucleotídeo, aminoácido ou proteína e outra sequência de DNA, RNA, nucleotídeo, aminoácido ou proteína, respectivamente, de acordo com o contexto. A identidade de sequência pode ser expressa em termos de uma porcentagem de identidade de sequência de uma primeira sequência para uma segunda sequência. A porcentagem (%) de identidade de sequência em relação a uma sequência de DNA de referência é a porcentagem de nucleotídeos de DNA em uma sequência candidata que são idênticos aos nucleotídeos de DNA na sequência de DNA de referência após o alinhamento das sequências e a introdução de espaços, conforme necessário.
A porcentagem (%) de identidade de sequência em relação a uma sequência de aminoácidos de referência é a porcentagem de resíduos de aminoácidos em uma sequência candidata que são idênticos aos resíduos de aminoácidos na sequência de aminoácidos de referência após o alinhamento das sequências e a introdução de espaços, se necessário, para atingir a porcentagem máxima de identidade de sequência, e não considerando quaisquer substituições conservativas como parte da identidade de sequência.
[0052] Conforme usado nesse documento, "se liga especificamente" e semelhantes se refere à associação específica ou ligação específica entre o domínio de ligação ao antígeno e o antígeno, em comparação com a interação do domínio de ligação ao antígeno com um antígeno diferente (ou seja, ligação não específica). Em algumas modalidades, um domínio de ligação ao antígeno que reconhece ou se liga especificamente a um antígeno tem uma constante de dissociação (KD) de <<100 nM, <10 nM, <1 nM, <0,1 nM, <0,01 nM ou <0,001 nM (por exemplo 10-8 M ou inferior, por exemplo de 10-8 M a 10-13 M, por exemplo, de 10-9 M a 10-13 M).
[0053] Conforme usado nesse documento, um "domínio de ligação ao alvo" se refere a um construto que contém um domínio de ligação ao antígeno de um anticorpo ou de um não anticorpo que pode se ligar ao antígeno.
[0054] O termo "fração de alvejamento" se refere a uma estrutura que tem uma afinidade seletiva para uma molécula alvo em relação a outras moléculas não alvo. A fração de alvejamento se liga a uma molécula alvo. Uma fração de alvejamento pode incluir, por exemplo, um anticorpo, um peptídeo, um ligante, um receptor ou uma porção de ligação do mesmo. A molécula alvo pode ser um antígeno, como um receptor biológico ou outra estrutura de uma célula, como um antígeno tumoral.
[0055] Conforme usado nesse documento, um "antígeno tumoral" pode ser uma substância antigênica associada a um tumor ou célula cancerosa e pode desencadear uma resposta imune em um hospedeiro.
[0056] O termo "Cx-y" ou "Cx-Cy" quando usado em conjunto com uma fração química, como alquila, alquenila ou alquinila, pretende incluir grupos que contêm de x a y carbonos na cadeia. Por exemplo, o termo "C1-6alquila" se refere a grupos de hidrocarbonetos saturados substituídos ou não substituídos, incluindo alquila de cadeia linear e grupos alquila de cadeia ramificada que contêm de 1 a 6 carbonos.
O termo -Cx-yalquileno- se refere a uma cadeia alquileno substituída ou não substituída com de x a y carbonos na cadeia alquileno. Por exemplo -Cx-yalquileno- pode ser selecionado de metileno, etileno, propileno, butileno, pentileno e hexileno, qualquer um dos quais é opcionalmente substituído.
[0057] Os termos "-Cx-yalquenila-" e "-Cx-yalquinila-" se referem a grupos alifáticos insaturados substituídos ou não substituídos, análogos em comprimento e possível substituição às alquilas descritas acima, mas que contêm pelo menos uma ligação dupla ou tripla, respectivamente. O termo -Cx-yalquenileno- se refere a uma cadeia alquenileno substituída ou não substituída com de x a y carbonos na cadeia alquenileno. Por exemplo, -C2-6alquenileno- pode ser selecionado a partir de etenileno, propenileno, butenileno, pentenileno e hexenileno, qualquer um dos quais é opcionalmente substituído. Uma cadeia alquenileno pode ter uma ligação dupla ou mais de uma ligação dupla na cadeia alquenileno. O termo -Cx-yalquinileno- se refere a uma cadeia de alquinileno substituída ou não substituída com de x a y carbonos na cadeia de alquenileno. Por exemplo, C2- 6alquenileno pode ser selecionado a partir de etinileno, propinileno, butinileno, pentinileno e hexinileno, qualquer um dos quais é opcionalmente substituído. Uma cadeia alquinileno pode ter uma ligação tripla ou mais de uma ligação tripla na cadeia de alquinileno.
[0058] "Alquileno" se refere a uma cadeia de hidrocarboneto divalente linear que liga o resto da molécula a um grupo radical, consistindo apenas em carbono e hidrogênio, não contendo insaturação e, preferivelmente, com um a doze átomos de carbono, por exemplo, metileno, etileno, propileno, butileno e semelhantes. A cadeia alquileno está ligada ao resto da molécula por meio de uma ligação simples e ao grupo radical por meio de uma ligação simples. Os pontos de ligação da cadeia alquileno ao resto da molécula e ao grupo radical são através dos carbonos terminais, respectivamente. Em outras modalidades, um alquileno compreende de um a cinco átomos de carbono (isto é, C1-C5 alquileno). Em outras modalidades, um alquileno compreende de um a quatro átomos de carbono (isto é, C1-C4 alquileno).
Em outras modalidades, um alquileno compreende de um a três átomos de carbono (isto é, C1-C3 alquileno). Em outras modalidades, um alquileno compreende um a dois átomos de carbono (isto é, C1-C2 alquileno). Em outras modalidades, um alquileno compreende um átomo de carbono (isto é, C1 alquileno). Em outras modalidades, um alquileno compreende cinco a oito átomos de carbono (isto é, C5-C8 alquileno). Em outras modalidades, um alquileno compreende dois a cinco átomos de carbono (isto é, C2-C5 alquileno). Em outras modalidades, um alquileno compreende três a cinco átomos de carbono (isto é, C3-C5 alquileno). A menos que seja especificamente indicado em contrário no relatório descritivo, uma cadeia de alquileno é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes, tais como aqueles substituintes descritos nesse documento.
[0059] "Alquenileno" se refere a uma cadeia de hidrocarbonetos divalente linear ligando o resto da molécula a um grupo radical, consistindo apenas em carbono e hidrogênio, contendo pelo menos uma ligação dupla carbono- carbono e, preferivelmente, tendo de dois a doze átomos de carbono. A cadeia alquenileno está ligada ao resto da molécula por meio de uma ligação simples e ao grupo radical por meio de uma ligação simples. Os pontos de ligação da cadeia alquenileno ao resto da molécula e ao grupo radical são através dos carbonos terminais, respectivamente. Em outras modalidades, um alquenileno compreende dois a cinco átomos de carbono (isto é, C2-C5 alquenileno). Em outras modalidades, um alquenileno compreende dois a quatro átomos de carbono (isto é, C2-C4 alquenileno). Em outras modalidades, um alquenileno compreende dois a três átomos de carbono (isto é, C2-C3 alquenileno). Em outras modalidades, um alquenileno compreende dois átomos de carbono (isto é, C2 alquenileno). Em outras modalidades, um alquenileno compreende cinco a oito átomos de carbono (isto é, C5-C8 alquenileno). Em outras modalidades, um alquenileno compreende três a cinco átomos de carbono (isto é, C3-C5 alquenileno). A menos que seja especificamente indicado em contrário no relatório descritivo, uma cadeia de alquenileno é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes, tais como os substituintes descritos nesse documento.
[0060] "Alquinileno" se refere a uma cadeia de hidrocarboneto divalente linear ligando o resto da molécula a um grupo radical, consistindo apenas em carbono e hidrogênio, contendo pelo menos uma ligação tripla carbono- carbono e, preferivelmente, tendo de dois a doze átomos de carbono. A cadeia de alquinileno está ligada ao resto da molécula por meio de uma ligação simples e ao grupo radical por meio de uma ligação simples. Os pontos de ligação da cadeia alquinileno ao resto da molécula e ao grupo radical são através dos carbonos terminais, respectivamente. Em outras modalidades, um alquinileno compreende dois a cinco átomos de carbono (isto é, C2-C5 alquinileno). Em outras modalidades, um alquinileno compreende dois a quatro átomos de carbono (isto é, C2-C4 alquinileno). Em outras modalidades, um alquinileno compreende dois a três átomos de carbono (isto é, C2-C3 alquinileno). Em outras modalidades, um alquinileno compreende dois átomos de carbono (isto é, C2 alquinileno). Em outras modalidades, um alquinileno compreende de cinco a oito átomos de carbono (isto é, C5-C8 alquinileno). Em outras modalidades, um alquinileno compreende três a cinco átomos de carbono (isto é, C3-C5 alquinileno). A menos que seja especificamente indicado em contrário no relatório descritivo, uma cadeia de alquinileno é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes, tais como aqueles substituintes descritos nesse documento.
[0061] "Heteroalquileno" se refere a uma cadeia de hidrocarboneto divalente linear incluindo pelo menos um heteroátomo na cadeia, não contendo insaturação e preferivelmente tendo de um a doze átomos de carbono e de um a 6 heteroátomos, por exemplo, -O-, -NH-, -S-. A cadeia heteroalquileno está ligada ao resto da molécula por meio de uma ligação simples e ao grupo radical por meio de uma ligação simples. Os pontos de ligação da cadeia de heteroalquileno ao resto da molécula e ao grupo radical são através dos átomos terminais da cadeia. Em outras modalidades, um heteroalquileno compreende um a cinco átomos de carbono e de um a três heteroátomos. Em outras modalidades, um heteroalquileno compreende um a quatro átomos de carbono e de um a três heteroátomos. Em outras modalidades, um heteroalquileno compreende um a três átomos de carbono e de um a dois heteroátomos. Em outras modalidades, um heteroalquileno compreende um a dois átomos de carbono e de um a dois heteroátomos. Em outras modalidades, um heteroalquileno compreende um átomo de carbono e de um a dois heteroátomos. Em outras modalidades, um heteroalquileno compreende cinco a oito átomos de carbono e de um a quatro heteroátomos. Em outras modalidades, um heteroalquileno compreende dois a cinco átomos de carbono e de um a três heteroátomos. Em outras modalidades, um heteroalquileno compreende três a cinco átomos de carbono e de um a três heteroátomos. A menos que seja especificamente indicado em contrário no relatório descritivo, uma cadeia de heteroalquileno é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes, tais como aqueles substituintes descritos nesse documento.
[0062] O termo "carbociclo", conforme utilizado nesse documento, se refere a um anel saturado, insaturado ou aromático no qual cada átomo do anel é carbono. Carbociclo inclui anéis monocíclicos de 3 a 10 membros, anéis bicíclicos de 6 a 12 membros e anéis em ponte de 6 a 12 membros. Cada anel de um carbociclo bicíclico pode ser selecionado a partir de anéis saturados, insaturados e aromáticos. Em uma modalidade exemplificativa, um anel aromático, por exemplo, fenila, pode ser fundido a um anel saturado ou insaturado, por exemplo, ciclohexano, ciclopentano ou ciclohexeno. Um carbociclo bicíclico inclui qualquer combinação de anéis bicíclicos saturados, insaturados e aromáticos, conforme a valência permitir. Um carbociclo bicíclico inclui qualquer combinação de tamanhos de anel, como sistemas de anéis fundidos 4-5, sistemas de anéis fundidos 5-5, sistemas de anéis fundidos 5-6, sistemas de anéis fundidos 6-6, sistemas de anéis fundidos 5-7, sistemas de anéis fundidos 6-7, sistemas de anéis fundidos 5-8 e sistemas de anéis fundidos 6-8. Carbociclos exemplificativos incluem ciclopentilo, ciclohexila, ciclohexenila, adamantila, fenila, indanila e naftila. O termo "carbociclo insaturado" se refere a carbociclos com pelo menos um grau de insaturação e excluindo carbociclos aromáticos. Exemplos de carbociclos insaturados incluem ciclohexadieno, ciclohexeno e ciclopenteno.
[0063] O termo "arila" se refere a um sistema de anel de hidrocarboneto monocíclico aromático ou multicíclico aromático. O sistema de anel de hidrocarboneto monocíclico aromático ou multicíclico aromático contém apenas hidrogênio e carbono e de cinco a dezoito átomos de carbono, onde pelo menos um dos anéis no sistema de anel é aromático, isto é, contém um sistema cíclico deslocado de (4n + 2) elétrons π de acordo com a teoria de Hückel. O sistema de anel a partir do qual os grupos arila são derivados incluem, mas não estão limitados a, grupos como benzeno, fluoreno, indano, indeno, tetralina e naftaleno. A menos que seja especificamente indicado em contrário no relatório descritivo, o termo "arila" ou o prefixo "ar" (tal como em "aralquila") pretende incluir radicais arila opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, tais como aqueles substituintes descritos nesse documento.
[0064] O termo "cicloalquila" se refere a um anel saturado no qual cada átomo do anel é carbono. Cicloalquila pode incluir anéis monocíclicos e policíclicos, tais como anéis monocíclicos de 3 a 10 membros, anéis bicíclicos de 6 a 12 membros e anéis em ponte de 6 a 12 membros. Em determinadas modalidades, uma cicloalquila compreende três a dez átomos de carbono. Em outras modalidades, uma cicloalquila compreende cinco a sete átomos de carbono. A cicloalquila pode estar ligada ao resto da molécula por uma ligação simples. Exemplos de cicloalquilas monocíclicos incluem, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila e ciclooctila. Os radicais cicloalquila policíclicos incluem, por exemplo, adamantila, norbornila (isto é, biciclo[2.2.1]heptanila), decalinila, 7,7 dimetil biciclo[2.2.1]heptanila e semelhantes. A menos que seja especificamente indicado em contrário no relatório descritivo, o termo "cicloalquila" pretende incluir radicais cicloalquila que são opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, tais como aqueles substituintes descritos nesse documento.
[0065] O termo "cicloalquenila" se refere a um anel saturado no qual cada átomo do anel é carbono e há pelo menos uma ligação dupla entre dois carbonos do anel. Cicloalquenila pode incluir anéis monocíclicos e policíclicos, tais como anéis monocíclicos de 3 a 10 membros, anéis bicíclicos de 6 a 12 membros e anéis em ponte de 6 a 12 membros. Em outras modalidades, uma cicloalquenila compreende cinco a sete átomos de carbono. A cicloalquenila pode estar ligada ao resto da molécula por uma ligação simples. Exemplos de cicloalquenilas monocíclicas incluem, por exemplo, ciclopentenila, ciclohexenila, cicloheptenila e ciclooctenila. A menos que seja especificamente indicado em contrário no relatório descritivo, o termo "cicloalquenila" pretende incluir radicais cicloalquenila que são opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, tais como os substituintes descritos nesse documento.
[0066] O termo "halo" ou, alternativamente, "halogênio" ou "haleto", significa fluoro, cloro, bromo ou iodo. Em algumas modalidades, halo é fluoro, cloro ou bromo.
[0067] O termo "haloalquila" se refere a um radical alquila, conforme definido acima, que é substituído com um ou mais radicais halo, por exemplo, trifluorometila, diclorometila, bromometila, 2,2,2-trifluoroetila, 1- clorometil-2-fluoroetila e semelhantes. Em algumas modalidades, a parte alquila do radical haloalquila é opcionalmente substituída conforme descrito nesse documento.
[0068] O termo "heterociclo", conforme utilizado nesse documento, se refere a um anel saturado, insaturado ou aromático compreendendo um ou mais heteroátomos.
Heteroátomos exemplificativos incluem átomos de N, O, Si, P, B e S. Os heterociclos incluem anéis monocíclicos de 3 a 10 membros, anéis bicíclicos de 6 a 12 membros e anéis em ponte de 6 a 12 membros. Um heterociclo bicíclico inclui qualquer combinação de anéis bicíclicos saturados, insaturados e aromáticos, conforme a valência permitir. Em uma modalidade exemplificativa, um anel aromático, por exemplo, piridil, pode ser fundido a um anel saturado ou insaturado, por exemplo, ciclohexano, ciclopentano, morfolina, piperidina ou ciclohexeno. Um heterociclo bicíclico inclui qualquer combinação de tamanhos de anel, como sistemas de anéis fundidos 4-5, sistemas de anéis fundidos 5-5, sistemas de anéis fundidos 5-6, sistemas de anéis fundidos 6-6, sistemas de anéis fundidos 5-7, sistemas de anéis fundidos 6-7, sistemas de anéis fundidos 5-8 e sistemas de anéis fundidos 6-8. O termo "heterociclo insaturado" se refere a heterociclos com pelo menos um grau de insaturação e excluindo heterociclos aromáticos. Exemplos de heterociclos insaturados incluem di-hidropirrol, di-hidrofurano, oxazolina, pirazolina e di-hidropiridina.
[0069] O termo "heteroarila" inclui estruturas de anel simples aromáticas, preferivelmente anéis de 5 a 7 membros, mais preferivelmente anéis de 5 a 6 membros, cujas estruturas de anel incluem pelo menos um heteroátomo, preferivelmente um a quatro heteroátomos, mais preferivelmente um ou dois heteroátomos. O termo "heteroarila" também inclui sistemas de anéis policíclicos com dois ou mais anéis nos quais dois ou mais carbonos são comuns a dois anéis adjacentes em que pelo menos um dos anéis é heteroaromático, por exemplo, os outros anéis podem ser carbocíclicos aromáticos ou não aromáticos ou heterocíclicos. Os grupos heteroarila incluem, por exemplo, pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, piridina, pirazina, piridazina e pirimidina e semelhantes.
[0070] O termo "heterocicloalquila" se refere a um anel saturado com átomos de carbono e pelo menos um heteroátomo.
Heteroátomos exemplificativos incluem átomos de N, O, Si, P, B e S. Heterocicloalquila pode incluir anéis monocíclicos e policíclicos, tais como anéis monocíclicos de 3 a 10 membros, anéis bicíclicos de 6 a 12 membros e anéis em ponte de 6 a 12 membros. Os heteroátomos no radical heterocicloalquila são opcionalmente oxidados. Um ou mais átomos de nitrogênio, se presentes, são opcionalmente quaternizados. A heterocicloalquila está ligada ao resto da molécula por qualquer átomo da heterocicloalquila, conforme a valência permitir, tal como qualquer átomo de carbono ou nitrogênio da heterocicloalquila. Exemplos de radicais heterocicloalquila incluem, mas não estão limitados a, dioxolanil, tienil[1,3]ditianil, decahidroisoquinolil,
imidazolinil, imidazolidinil, isotiazolidinil, isoxazolidinil, morfolinil, octa-hidroindolil, octa- hidroisoindolil, 2-oxopiperazinil, 2-oxopiperidinil, 2- oxopirrolidinil, oxazolidinil, piperidinil, piperazinil, 4- piperidonil, pirrolidinil, pirazolidinil, quinuclidinil, tiazolidinil, tetra-hidrofuril, tritianil, tetra- hidropiranil, tiomorfolinil, tiamorfolinil, l-oxo- tiomorfolinil, e l,l-dioxo-tiomorfolinil. A menos que seja especificamente indicado em contrário no relatório descritivo, o termo "heterocicloalquila" pretende incluir radicais heterocicloalquila conforme definido acima que são opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, tais como aqueles substituintes descritos nesse documento.
[0071] O termo "heterocicloalquenila" se refere a um anel insaturado com átomos de carbono e pelo menos um heteroátomo e existe pelo menos uma ligação dupla entre dois carbonos do anel. Heterocicloalquenila não inclui anéis heteroarila. Heteroátomos exemplificativos incluem átomos de N, O, Si, P, B e S. Heterocicloalquenila pode incluir anéis monocíclicos e policíclicos, tais como anéis monocíclicos de 3 a 10 membros, anéis bicíclicos de 6 a 12 membros e anéis em ponte de 6 a 12 membros. Em outras modalidades, uma heterocicloalquenila compreende cinco a sete átomos no anel.
A heterocicloalquenila pode estar ligada ao resto da molécula por uma ligação simples. Exemplos de cicloalquenilas monocíclicas incluem, por exemplo, pirrolina (di- hidropirrol), pirazolina (di-hidropirazol), imidazolina (di- hidroimidazol), triazolina (di-hidrotriazol), di- hidrofurano, di-hidrotiofeno, oxazolina (di-hidrooxazol), isoxazolina (di-hidroisoxazol), tiazolina (di-hidrotiazol), isotiazolina (di-hidroisotiazol), oxadiazolina (di- hidrooxadiazol), tiadiazolina (di-hidrotiadiazol), di- hidropiridina, tetra-hidropiridina, di-hidropiridazina, tetra-hidropiridazina, di-hidropirimidina, tetra- hidropirimidina, di-hidropirazina, tetra-hidropirazina, pirano, di-hidropirano, tiopirano, di-hidrotiopirano, dioxina, di-hidrodioxina, oxazina, di-hidrooxazina, tiazina e di-hidrotiazina. A menos que seja especificamente indicado em contrário no relatório descritivo, o termo "heterocicloalquenila" pretende incluir radicais heterocicloalquenila que são opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, tais como aqueles substituintes descritos nesse documento.
[0072] O termo "substituído" se refere a frações com substituintes substituindo um hidrogênio em um ou mais carbonos ou heteroátomos substituíveis, por exemplo, um NH ou NH2 de um composto. Será entendido que "substituição" ou "substituído com" inclui a condição implícita de que tal substituição está de acordo com a valência permitida do átomo substituído e do substituinte, e que a substituição resulta em um composto estável, isto é, um composto que não sofre transformações espontaneamente, como por rearranjo, ciclização, eliminação, etc. Em determinadas modalidades, substituído se refere a frações com substituintes que substituem dois átomos de hidrogênio no mesmo átomo de carbono, tal como substituir os dois átomos de hidrogênio em um único carbono por um grupo oxo, imino ou tioxo. Conforme usado nesse documento, o termo "substituído" é contemplado para incluir todos os substituintes permitidos de compostos orgânicos. Em um aspecto amplo, os substituintes permitidos incluem substituintes acíclicos e cíclicos, ramificados e não ramificados, carbocíclicos e heterocíclicos, aromáticos e não aromáticos de compostos orgânicos. Os substituintes permitidos podem ser um ou mais e iguais ou diferentes para compostos orgânicos apropriados.
[0073] Em algumas modalidades, os substituintes podem incluir quaisquer substituintes descritos nesse documento, por exemplo: halogênio, hidroxi, oxo (=O), tioxo (=S), ciano (-CN), nitro (-NO2), imino (=N-H), óximo (=N-OH), hidrazino (=N-NH2), -Rb-ORa, -Rb-OC(O)-Ra, -Rb-OC(O)-ORa, -Rb-OC(O)-N( Ra)2, -Rb-N(Ra)2, -Rb-C(O)Ra, -Rb-C(O)ORa, -Rb-C(O)N(Ra)2, -Rb- O-Rc-C(O)N(Ra)2, -Rb-N(Ra)C(O)ORa,-Rb-N(Ra)C(O)Ra,-Rb- N(Ra)S(O)tRa ( onde t é 1 ou 2), -Rb-S(O)tRa (onde t é 1 ou 2), -Rb-S(O)tORa (onde t é 1 ou 2), e -Rb-S(O)tN(Ra)2 (onde t é 1 ou 2); e alquila, alquenila, alquinila, arila, aralquila,
aralquenila, aralquinila, cicloalquila, cicloalquilalquila,
heterocicloalquila, heterocicloalquilalquila, heteroarila e heteroarilalquila, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído com alquila, alquenila, alquinila,
halogênio, haloalquila, haloalquenila, haloalquinila, oxo
(=O), tioxo (=S), ciano (-CN), nitro (-NO2), imino (=N-H),
óximo (=N-OH), hidrazina (=N-NH2), -Rb-ORa, -Rb-OC(O)-Ra, -
Rb-OC(O)-ORa, -Rb-OC(O)-N(Ra)2, -Rb-N(Ra)2, -Rb-C(O)Ra, -
Rb-C(O)ORa, -Rb-C(O)N(Ra)2, -Rb-O-Rc-C(O)N(Ra)2, -
Rb-N(Ra)C(O)ORa, -Rb-N(Ra)C(O)Ra, -Rb-N(Ra)S(O)tRa (onde t é 1 ou 2), -Rb-S(O)tRa (onde t é 1 ou 2), -Rb-S(O)tORa (onde t é
1 ou 2) e -Rb-S(O)tN(Ra)2 (onde t é 1 ou 2); em que cada Ra é independentemente selecionado de hidrogênio, alquila,
cicloalquila, cicloalquilalquila, aril, aralquila,
heterocicloalquila, heterocicloalquilalquila, heteroarila ou heteroarilalquila em que cada Ra, caso a valência permita,
pode ser opcionalmente substituído com alquila, alquenila,
alquinila, halogênio, haloalquila, haloalquenila,
haloalquinila, oxo (=O), tioxo (= S), ciano (-CN), nitro (-
NO2), imino (=N-H), óximo (=N-OH), hidrazina (=N-NH2), -
Rb-ORa, -Rb-OC(O)-Ra, -Rb-OC(O)-ORa, -Rb-OC(O)-N(Ra)2, -
Rb-N(Ra)2, -Rb-C(O)Ra, -Rb-C(O)ORa, -Rb-C(O)N(Ra)2, -
Rb-O-Rc-C(O)N(Ra)2, -Rb-N(Ra)C(O)ORa, -Rb-N(Ra)C(O)Ra, -
Rb-N(Ra)S(O)tRa (onde t é 1 ou 2), -Rb-S(O)tRa (onde t é 1 ou
2), -Rb-S(O)tORa (onde t é 1 ou 2) e -Rb-S(O)tN(Ra)2 (onde t é
1 ou 2); e em que cada Rb é independentemente selecionado a partir de uma ligação direta ou uma cadeia linear ou ramificada alquileno, alquenileno ou alquinileno, e cada Rc é uma cadeia linear ou ramificada de alquileno, alquenileno ou alquinileno.
[0074] Será entendido por aqueles versados na técnica que os próprios substituintes podem ser substituídos, se apropriado. A menos que especificamente declarado como "não substituído", as referências a frações químicas nesse documento são entendidas como incluindo variantes substituídas. Por exemplo, a referência a um grupo ou fração "heteroarila" inclui implicitamente variantes substituídas e não substituídas, a menos que especificado em contrário.
[0075] "Grupo de proteção" se refere a uma fração, exceto grupos alquila que quando ligada a um grupo reativo em uma molécula, filtra, reduz ou evita essa reatividade. Exemplos de grupos de proteção podem ser encontrados em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis,
3.sup.rd edition, John Wiley & Sons, New York, 1999, e Harrison e Harrison et al, Compendium of Synthetic Organic Methods, Vols. 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996), que são incorporados nesse documento por referência na sua totalidade. Os grupos de proteção representativos amino ou amina incluem formil, grupos acila (como acetila, trifluoroacetila e benzoila), benzila, alcoxicarbonila (como benziloxicarbonila (CBZ) e terc-butoxicarbonila (Boc)), trimetilsilil (TMS), 2-trimetilsilil-etanossulfonila (SES), grupos tritil e tritil substituído, aliloxicarbonil, 9- fluorenilmetiloxicarbonila (FMOC), nitro- veratriloxicarbonila (NVOC), sulfonila e semelhantes. Os compostos descritos nesse documento podem incluir grupos de proteção (por exemplo, um hidrogênio em um átomo de nitrogênio reativo de um composto descrito nesse documento pode ser substituído com um grupo de proteção amino).
[0076] As frases "administração parenteral" e "administrado parenteralmente", conforme usadas nesse documento, significam modos de administração diferentes da administração enteral e tópica, geralmente por injeção e incluem, sem limitação, injeção e infusão intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica , intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subaracnóide, intraespinhal e intraesternal.
[0077] A frase "farmaceuticamente aceitável" é empregada nesse documento para se referir a esses compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, dentro do escopo do bom julgamento médico, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem excessos de toxicidade, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação, proporcional a uma relação risco/benefício razoável.
[0078] A frase "excipiente farmaceuticamente aceitável" ou "veículo farmaceuticamente aceitável", conforme usado nesse documento, significa um material, composição ou veículo farmaceuticamente aceitável, tal como um enchimento, diluente, excipiente, solvente ou material encapsulante líquido ou sólido. Cada veículo deve ser “aceitável” no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não prejudicial ao paciente. Alguns exemplos de materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) açúcares, tais como lactose, glicose e sacarose;(2) amidos, tais como amido de milho e amido de batata; (3) celulose e derivados da mesma, tais como carboximetilcelulose de sódio, etilcelulose e acetato de celulose; (4) tragacanta em pó; (5) malte; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras para supositórios; (9) óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de cártamo, óleo de sésamo, azeite, óleo de milho e óleo de soja; (10) glicóis, tais como propilenoglicol; (11) polióis, tais como glicerina, sorbitol, manitol e polietilenoglicol; (12) ésteres, tais como oleato de etila e laurato de etila; (13) ágar; (14) agentes tamponantes, tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; (15) ácido algínico; (16) água apirogênica; (17) solução salina isotônica; (18) solução de Ringer; (19) álcool etílico; (20) soluções tampão fosfato; e (21) outras substâncias não tóxicas compatíveis empregadas em formulações farmacêuticas.
[0079] O termo "sal" ou "sal farmaceuticamente aceitável" se refere a sais derivados de uma variedade de contra-íons orgânicos e inorgânicos bem conhecidos na técnica. Os sais de adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com ácidos inorgânicos e ácidos orgânicos. Os ácidos inorgânicos dos quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e semelhantes. Os ácidos orgânicos a partir dos quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p- toluenossulfônico, ácido salicílico e semelhantes. Os sais de adição básicos farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com bases inorgânicas e orgânicas. As bases inorgânicas das quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, sódio, potássio, lítio, amônio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, cobre, manganês, alumínio e semelhantes. As bases orgânicas das quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas, resinas de troca iônica básicas e semelhantes, especificamente, tais como isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina e etanolamina. Em algumas modalidades, o sal de adição básico farmaceuticamente aceitável é escolhido a partir de sais de amônio, potássio, sódio, cálcio e magnésio.
Definições de Genes e Proteínas
[0080] O gene CTLA4 codifica a proteína CTLA4 (proteína 4 citotóxica associada a linfócitos T), também conhecida como CD 152 (cluster de diferenciação 152), que é um receptor de proteína que atua como um checkpoint imunológico e faz a regulação negativa das respostas imunes. CTLA4 é expresso constitutivamente em Tregs, mas apenas com regulação positiva em células T convencionais após a ativação. O CTLA4 atua como um "botão de desligar" quando está ligado ao CD80 ou CD86 na superfície das células apresentadoras de antígeno.
O anticorpo monoclonal Ipilimamab foi desenvolvido para ter como alvo CTLA4.
[0081] PDCD1 codifica a proteína de morte celular programada 1, também conhecida como PD-1 e CD279 (cluster de diferenciação 279), que é um receptor de superfície celular que desempenha um receptor de superfície celular que desempenha um papel importante na regulação negativa do sistema imunológico e na promoção de autotolerância ao suprimir a atividade inflamatória das células T. PD-1 é um receptor da superfície celular que pertence à superfamília das imunoglobulinas e é expresso nas células T e pro-B. PD- l é um checkpoint imunológico e protege contra a autoimunidade por meio de um mecanismo duplo de promoção da apoptose (morte celular programada) em células T específicas ao antígeno nos linfonodos, enquanto reduz a apoptose nas células T regulatórias (células T anti-inflamatórias e supressoras). O anticorpo monoclonal humano anti-PD-l IgG4 Opdivo® (nivolumab) e o anticorpo humanizado Keytruda® (pembrolizumab) foram desenvolvidos para ter como alvo o PD- l. Os anticorpos pidilizumab (CT-011, Cure Tech) e BMS-936559 estão em desenvolvimento clínico.
[0082] CD274 codifica PD-L1 (ligante de morte programada 1), também conhecido como CD274 (cluster de diferenciação 274). PD-L1 é uma proteína transmembrana do tipo 1 de 40 kDa que foi especulado que pode desempenhar um papel importante na supressão do sistema imunológico durante eventos específicos, como gravidez, aloenxertos de tecido, doença autoimune e outros estados de doença, como a hepatite. A ligação de PD-L1 a PD-1 ou B7.1 transmite um sinal inibitório que reduz a proliferação de células T CD8+ nos linfonodos e adicionalmente, PD-l também é capaz de controlar o acúmulo de células T específicas a antígenos estranhos nos linfonodos por apoptose, que é ainda mediada por uma regulação inferior do gene Bcl-2. Os anticorpos monoclonais Atezolizumab, Durvalumab, avelumab e MDX-l 106 foram desenvolvidos para ter como alvo PD-L1.
[0083] O TNFR2 (receptor de fator de necrose tumoral 2), também conhecido como TNFRSF1B (superfamília de receptor de fator de necrose tumoral 1B) e CDl20b, é uma proteína de membrana tipo I de passagem única e o membro da superfamília TNFR contendo 4 repetições de domínios ricos em cisteína (CRD). Além da forma ancorada à membrana de comprimento total, o TNFR2 solúvel pode ser gerado por meio de dois mecanismos distintos: (1) derramamento por via do processamento proteolítico da forma ancorada na membrana completa e (2) tradução de uma mensagem de splicing alternativa que codifica os domínios extracelulares de TNFR2.
TNFR2 é o receptor com alta afinidade para TNF-alfa e afinidade aproximadamente 5 vezes menor para linfotoxina- alfa homotrimérica. Os anticorpos monoclonais de camundongo contra TNFR2 descritos por SEQ ID Nº: 56 - SEQ ID Nº: 82, e SEQ ID Nº: 95 - SEQ ID Nº: 103, e anticorpos anti-TNFR2 descritos por SEQ ID Nº: 104 e SEQ ID Nº: 105 foram desenvolvidos para ter como alvo o TNFR2.
[0084] TNFRSF4 codifica OX40, também conhecido como TNFRSF4 (superfamília do receptor do fator de necrose tumoral, membro 4), um membro da superfamília de receptores TNFR que não é expresso constitutivamente em células T ingênuas em repouso, ao contrário de CD28. OX40 é uma molécula de checkpoint imunológico coestimulante secundária, expressa após 24 a 72 horas após a ativação; o seu ligante, OX40L, também não é expresso em células apresentadoras de antígeno em repouso, mas após a ativação, é expresso. A expressão de OX40 depende da ativação total da célula T; sem CD28, a expressão de OX40 é atrasada e de níveis quatro vezes menores. O anticorpo monoclonal vonlerolizumab foi desenvolvido para ter como alvo o OX40.
[0085] CD27 é um membro da superfamília de receptores do fator de necrose tumoral. A proteína codificada por este gene é membro da superfamília do receptor de TNF. Este receptor é necessário para a geração e manutenção a longo prazo da imunidade das células T. Ele se liga ao ligante CD70 e desempenha um papel fundamental na regulação da ativação das células B e na síntese de imunoglobulinas. Este receptor faz a transdução de sinais que levam à ativação de NF-κB e MAPK8/JNK. As proteínas adaptadoras TRAF2 e TRAF5 mostraram mediar o processo de sinalização deste receptor.
A proteína de ligação de CD27 (SIVA), uma proteína pró- apoptótica, pode se ligar a esse receptor e parece ter um papel importante na apoptose induzida por esse receptor. O anticorpo monoclonal Varlilumab foi desenvolvido para ter como alvo o CD27.
[0086] IL2RA codifica CD25, também conhecido como IL2RA (cadeia alfa do receptor de interleucina-2), que é uma proteína transmembrana do tipo I presente em células T ativadas, células B ativadas, alguns timócitos, precursores mieloides e oligodendrócitos. IL2RA é expresso na maioria das neoplasias de células B, algumas leucemias não linfocíticas agudas, neuroblastomas, mastocitose e linfócitos infiltrantes de tumor. Funciona como receptor do HTLV-l e, consequentemente, é expresso em células neoplásicas no linfoma/leucemia de células T do adulto. Sua forma solúvel, chamada sIL-2R, pode estar elevada nessas doenças e ocasionalmente é usada para monitorar a progressão da doença. O anticorpo monoclonal humanizado Zinbryta® (Daclizumab) foi desenvolvido para ter como alvo o CD25.
[0087] TNFRSF18 codifica GITR (proteína relacionada ao TNFR induzida por glicocorticóides), também conhecida como TNFRSF18 (membro 18 da superfamília do receptor do fator de necrose tumoral) e AITR (receptor da família TNFR induzível por ativação), que é uma proteína que é membro da superfamília do receptor de fator de necrose tumoral (TNF- R). O GITR (receptor do fator de necrose tumoral induzido por glicocorticóides) é uma molécula receptora de superfície que demonstrou estar envolvida na inibição da atividade supressora das células T reguladoras e no prolongamento da sobrevivência das células T efetoras. Os anticorpos anti- GITR descritos por SEQ ID Nº: 37 - SEQ ID Nº: 42 e SEQ ID Nº: 187 - SEQ ID Nº: 188 e o anticorpo TRX518 foram desenvolvidos para ter como alvo GITR.
[0088] LAG-3 (gene de ativação de linfócitos 3) codifica uma molécula de superfície celular com diversos efeitos biológicos na função das células T. LAG-3 é um receptor de checkpoint imunológico. A proteína LAG3, que pertence à superfamília das imunoglobulinas (Ig), compreende uma proteína transmembrana do tipo I com 503 aminoácidos, com quatro domínios extracelulares semelhantes a Ig, designados de Dl a D4. A LAG-3 é expressa em células T ativadas, células natural killer, células B e células dendríticas plasmocitóides. Os anticorpos anti-LAG-3 descritos por SEQ ID Nº: 43 - SEQ ID Nº: 48 e SEQ ID Nº: 111 - SEQ ID Nº: 112 foram desenvolvidos para ter como alvo LAG-3.
[0089] GARP (repetições predominantes de glicoproteína A) é uma proteína transmembrana contendo repetições ricas em leucina, que está presente na superfície de clones Treg estimulados, mas não nos clones Th. Os anticorpos anti-GARP descritos por SEQ ID Nº: 113 - SEQ ID Nº: 122 foram desenvolvidos para ter como alvo GARP.
[0090] 4-1BB é uma glicoproteína transmembrana tipo 2 pertencente à superfamília do TNF, expressa em linfócitos T ativados. 4-1BB pode ser expresso por células T ativadas. A expressão de 4-1BB pode ser encontrada em células dendríticas, células B, células dendríticas foliculares, células natural killer, granulócitos e células das paredes dos vasos sanguíneos em locais de inflamação. Os anticorpos anti-4-lBB descritos por SEQ ID Nº: 50 - SEQ ID Nº: 55 e SEQ ID Nº: 123 - SEQ ID Nº: 128 foram desenvolvidos para ter como alvo 4-1BB.
[0091] ICOS (COStimulator de células T induzíveis) codifica uma molécula coestimuladora da superfamília CD28 que é expressa em células T ativadas. A proteína codificada por este gene pertence à família de receptores de superfície celular CD28 e CTLA-4. ICOS forma homodímeros e desempenha um papel importante na sinalização célula-célula, respostas imunes e regulação da proliferação celular. Os anticorpos anti-ICOS descritos por SEQ ID Nº: 129 - SEQ ID Nº: 132 foram desenvolvidos para ter como alvo ICOS.
[0092] CD70 é expresso em linfócitos altamente ativados, como em linfomas de células T e células B. CD70 é uma citocina que pertence à família de ligantes do fator de necrose tumoral (TNF). Esta citocina é um ligante para TNFRSF27/CD27.
É um antígeno de superfície em linfócitos T e B ativados, mas não em repouso. O CD70 induz a proliferação de células
T coestimuladas, aumenta a geração de células T citolíticas e contribui para a ativação de células T. Esta citocina também desempenha um papel na regulação da ativação de células B, função citotóxica de células natural killer e síntese de imunoglobulina. O anticorpo monoclonal Vorsetuzumab foi desenvolvido para ter como alvo CD70.
[0093] PDGFRβ (receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas do tipo beta) codifica um receptor tirosina quinase típico, que é uma proteína transmembrana que consiste em um domínio de ligação de ligante extracelular, um domínio transmembrana e um domínio tirosina quinase intracelular. A massa molecular da proteína PDGFRβ madura e glicosilada é de aproximadamente 180 kDA. O anticorpo monoclonal Rinucumab foi desenvolvido para ter como alvo o PDGFRβ.
[0094] CD73 (cluster de diferenciação 73), conhecido como ecto-5'-nucleotidase (ecto-5'-NT, EC 3.1.3.5) é uma enzima de superfície celular de 70 kDa ligada por glicosil- fosfatidilinositol (GPI) encontrada na maioria dos tecidos.
O CD73 normalmente serve para converter AMP em adenosina. A ecto-5-prime-nucleotidase (ribonucleotídeo-5-prime fosfohidrolase; EC 3.1.3.5) catalisa a conversão em pH neutro de mononucleotídeos 5-prime de purina em nucleosídeos, sendo o substrato preferido AMP. A enzima consiste em um dímero de 2 subunidades idênticas de 70 kD ligadas por uma ligação de glicosil fosfatidil inositol à face externa da membrana plasmática. A enzima é usada como um marcador de diferenciação de linfócitos. O anticorpo monoclonal Oleclumab e os anticorpos anti-CD73 descritos em SEQ ID Nº: 139 - SEQ ID Nº: 140 foram desenvolvidos para ter como alvo CD73.
[0095] CD38 (cluster de diferenciação 38), também conhecido como ADP ribose cíclica hidrolase, é uma glicoproteína encontrada na superfície de muitas células imunitárias (leucócitos), incluindo CD4+, CD8+, linfócitos B e células natural killer. O CD38 também atua na adesão celular, transdução de sinal e sinalização de cálcio. A perda da função de CD38 está associada a respostas imunológicas prejudicadas, distúrbios metabólicos e modificações comportamentais, incluindo amnésia social, possivelmente relacionada ao autismo. A proteína CD38 é um marcador de ativação celular. Tem sido associada à infecção pelo HIV, leucemias, mielomas, tumores sólidos, diabetes mellitus tipo II e metabolismo ósseo, bem como algumas condições determinadas geneticamente. O CD38 produz uma enzima que regula a liberação de oxitocina no sistema nervoso central.
O anticorpo monoclonal Daratumumab foi desenvolvido para ter como alvo o CD38.
[0096] A Integrina αvβ3 é um tipo de integrina que é um receptor da vitronectina. A Integrina αvβ3 consiste em dois componentes, integrina alfa V e integrina beta 3 (CD61), e é expressa por plaquetas. A Integrina αvβ3 é um receptor de fagocitose em macrófagos ou células dendríticas. Os anticorpos monoclonais Etaracizumab e Intetumumab foram desenvolvidos para ter como alvo a Integrina anb3.
[0097] A integrina αvβ8, um receptor VN, é identificada como um potencial regulador negativo do crescimento celular.
O domínio citoplasmático de β8 é divergente na sequência, sem qualquer homologia de aminoácidos com os domínios citoplasmáticos altamente homólogos das outras subunidades de integrina β de associação αv (β1, β3, β5 e β6). O domínio citoplasmático β8 é divergente em função. αvβ8 tem uma distribuição restrita e é mais altamente expressa em tipos de células não proliferativas. Os anticorpos anti-Integrina αvβ8, conforme descritos em SEQ ID Nº: 147 - SEQ ID Nº: 148, foram desenvolvidos para ter como alvo a Integrina αvβ8.
[0098] CD248 codifica endosialina. A endosialina é membro do “Grupo XIV”, uma nova família de receptores transmembranares de lectina do tipo C que desempenham um papel não apenas nos processos de adesão célula-célula, mas também na defesa do hospedeiro. A endosialina tem sido associada à angiogênese no embrião, útero e no desenvolvimento e crescimento tumoral. O anticorpo monoclonal Ontuxizumab foi desenvolvido para ter como alvo a endosialina.
[0099] A FAP (proteína de ativação de fibroblastos alfa) é uma gelatinase ligada à membrana de melanoma de 170 kDa, proteína essa que em humanos é codificada pelo gene FAP. A proteína codificada por este gene é uma gelatinase de membrana homodimérica integral pertencente à família da serina protease. É expressa seletivamente em fibroblastos estromais reativos de cânceres epiteliais, tecido de granulação de lesões em cicatrização e células malignas de sarcomas ósseos e de tecidos moles. Acredita-se que essa proteína esteja envolvida no controle do crescimento de fibroblastos ou nas interações epitelial-mesenquimal durante o desenvolvimento, reparo de tecidos e carcinogênese epitelial. Os anticorpos anti-FAP conforme descritos em SEQ ID Nº: 151 - SEQ ID Nº: 168 foram desenvolvidos para ter como alvo FAP.
[00100] A subunidade integrina αv associa-se a uma das cinco subunidades de integrina β, β1, β3, β5, β6 ou β8, para formar cinco heterodímeros αvβ distintos. Os heterodímeros integrina αvβ na superfície celular interagem com proteínas de adesão celular, como colágeno, fibrinogênio, fibronectina e vitronectina. Essas interações desempenham um papel importante na adesão ou migração celular, especialmente na metástase tumoral. O anticorpo monoclonal intetumumab e os anticorpos anti-Integrina αv,
conforme descritos em SEQ ID Nº: 171 - SEQ ID Nº: 174, foram desenvolvidos para ter como alvo a Integrina αv.
[00101] A Integrina αvβ6 é uma integrina específica do epitélio que é um receptor para as proteínas da matriz extracelular (ECM) fibronectina, vitronectina, tenascina e o peptídeo associado à latência (LAP) de TGF-β. A Integrina αvβ6 não é expressa em epitélios de adultos saudáveis, mas apresenta uma regulação positiva durante a cicatrização de lesões e no câncer. A integrina αvβ6 demonstrou modular a invasão, inibir a apoptose, regular a expressão de metaloproteases de matriz (MMPs) e ativar TGF-β1. Os anticorpos anti-integrina αvβ6 conforme descritos em SEQ ID Nº: 175 - SEQ ID Nº: 182 foram desenvolvidos para ter como alvo a Integrina αvβ6.
Construtos de Anticorpos
[00102] São divulgados nesse documento construtos de anticorpos e frações de alvejamento que podem ser usados juntamente com os compostos da divulgação. Em determinadas modalidades, os compostos da divulgação são conjugados diretamente ou por meio de um grupo ligante a um construto de anticorpo ou uma fração de alvejamento para formar conjugados.
[00103] Em determinadas modalidades, os conjugados da divulgação são representados pela seguinte fórmula:
em que Anticorpo é um construto de anticorpo, L3 é um ligante, D é um composto ou sal divulgado nesse documento e n é de 1 a 20. Em determinadas modalidades, n é de 1 a 10, tal como de 1 a 9, tal como de 1 a 8, tal como de 2 a 8, tal como de 1 a 6, tal como de 3 a 5, ou tal como de 1 a 3. Em determinadas modalidades, n é 4. Em determinadas modalidades, cada D é independentemente selecionado a partir de Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D) e Tabela 14, respectivamente.
[00104] Em determinadas modalidades, os conjugados da divulgação são representados pela seguinte fórmula: em que L3 é um ligante, D é um composto ou sal divulgado nesse documento e n é de 1 a 20. Em determinadas modalidades, n é de 1 a 10, tal como de 1 a 9, tal como de 1 a 8, tal como de 2 a 8, tal como de 1 a 6, tal como de 3 a 5, ou tal como de 1 a 3. Em determinadas modalidades, n é 4. Em determinadas modalidades, cada D é independentemente selecionado a partir de Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D),
(I-E), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D), e Tabela 14, respectivamente.
[00105] Em determinadas modalidades, um composto ou sal da divulgação, por exemplo, um composto ou sal das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D) e Tabela 14, também podem ser referidos nesse documento como um inibidor de TGFβR2, um fármaco, D, um composto de amino-pirazinocarboxamida ou um payload, particularmente quando referido como parte de um conjugado.
"LP", "linker-payload", "L3-D" ou "ligante de composto" podem ser usados nesse documento para se referir a um composto ou sal da divulgação ligado a um ligante.
[00106] Um construto de anticorpo pode conter, por exemplo, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais domínios de ligação ao antígeno. Um construto de anticorpo pode conter dois domínios de ligação ao antígeno em que cada domínio de ligação ao antígeno pode reconhecer o mesmo antígeno. Um construto de anticorpo pode conter dois domínios de ligação ao antígeno em que cada domínio de ligação ao antígeno pode reconhecer diferentes antígenos. Um domínio de ligação ao antígeno pode estar em um scaffold, em que um scaffold é uma estrutura de suporte para o domínio de ligação ao antígeno. Um domínio de ligação ao antígeno pode estar em um scaffold não-anticorpo. Um domínio de ligação ao antígeno pode estar em um scaffold de anticorpo. Um construto de anticorpo pode compreender um domínio de ligação ao antígeno em um scaffold. Um construto de anticorpo pode compreender uma proteína de fusão Fc. Em algumas modalidades, o construto de anticorpo é uma proteína de fusão Fc. Um domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno tumoral. Um domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno com pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou 100% de identidade de sequência com um antígeno tumoral. Um domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno em uma célula de apresentação de antígeno (APC). Um domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno com pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 99% ou 100% de identidade de sequência com um antígeno em uma célula de apresentação de antígeno (APC).
[00107] Um domínio de ligação ao antígeno de um anticorpo pode compreender uma ou mais CDRs de cadeia leve (L) e uma ou mais CDRs de cadeia pesada (H). Por exemplo, um domínio de ligação ao antígeno de um anticorpo pode compreender um ou mais dos seguintes: uma região determinante complementar da cadeia leve 1 (LCDR1), uma região determinante complementar da cadeia leve 2 (LCDR2) ou uma região determinante complementar da cadeia leve 3 (LCDR3).
Para dar outro exemplo, um domínio de ligação ao antígeno pode compreender um ou mais dos seguintes: uma região determinante complementar da cadeia pesada 1 (HCDR1), uma região determinante complementar da cadeia pesada 2 (HCDR2) ou uma região determinante complementar da cadeia pesada 3 (HCDR3). Como um exemplo adicional, um domínio de ligação ao antígeno de um anticorpo pode compreender um ou mais dos seguintes: LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 e HCDR3. Em algumas modalidades, um domínio de ligação ao antígeno de um anticorpo inclui os seis CDRs, (isto é, LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2 e HCDR3).
[00108] O domínio de ligação ao antígeno de um construto de anticorpo pode ser selecionado a partir de qualquer domínio que se liga especificamente ao antígeno incluindo, mas não se limitando a, a partir de um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo recombinante ou fragmento funcional de ligação do mesmo, por exemplo, um domínio variável de cadeia pesada (VH) e um domínio variável de cadeia leve (VL), ou um DARPin, um afímero, um avímero, um knottin, um monocorpo, um clamp de afinidade, um ectodomínio, um ectodomínio de receptor, um receptor, uma citocina, um ligante, uma imunocitocina, um receptor de células T ou um receptor de células T recombinante.
[00109] O domínio de ligação ao antígeno de um construto de anticorpo pode ser pelo menos 80% idêntico a um domínio de ligação ao antígeno selecionado a partir, mas não se limitando a, um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo recombinante ou um fragmento funcional do mesmo, por exemplo, um domínio variável de cadeia pesada (VH) e um domínio variável de cadeia leve (VL), ou um DARPin, um afímero, um avímero, um knottin, um monocorpo, um clamp de afinidade, um ectodomínio, um ectodomínio de receptor, um receptor, uma citocina um ligante, uma imunocitocina, um receptor de células T ou um receptor de células T recombinante.
[00110] Em determinadas modalidades, um construto de anticorpo da divulgação compreende um domínio Fc que pode compreender uma região Fc, em que o domínio Fc pode ser a parte da região Fc que interage com os receptores Fc. O domínio Fc de um construto de anticorpo pode interagir com os receptores Fc (FcRs) encontrados nas células imunes. O domínio Fc também pode mediar a interação entre moléculas efetoras e células, o que pode levar à ativação do sistema imunológico. A região Fc pode ser derivada de isótipos de anticorpos IgG, IgA ou IgD e pode compreender dois fragmentos de proteína idênticos, que são derivados do segundo e terceiro domínios constantes das cadeias pesadas do anticorpo. Em um domínio ou região Fc derivada de um isótipo de anticorpo IgG, o domínio ou região Fc pode compreender um local de N-glicosilação altamente conservado, que pode ser essencial para efeitos a jusante mediados por FcR. O domínio ou região Fc pode ser derivado de isótipos de anticorpos IgM ou IgE, nos quais o domínio ou região Fc pode compreender três domínios constantes de cadeia pesada.
[00111] Um domínio Fc pode interagir com diferentes tipos de FcRs. Os diferentes tipos de FcRs podem incluir, por exemplo, FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIA, FcγRIIIB, FcαRI, FcµR, FcεRI, FcεRII e FcRn. Os FcRs podem estar localizados na membrana de certas células imunitárias, incluindo, por exemplo, linfócitos B, células natural killer, macrófagos, neutrófilos, células dendríticas foliculares, eosinófilos, basófilos, plaquetas e mastócitos.
Quando o FcR está envolvido no domínio Fc, o FcR pode iniciar funções incluindo, por exemplo, eliminação de um complexo antígeno-anticorpo via endocitose mediada por receptor, citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC), fagocitose mediada por células dependente de anticorpos (ADCP), e transmissão de sinais desencadeada por ligante através da membrana plasmática que pode resultar em alterações na secreção, exocitose e metabolismo celular. Os FcRs podem entregar sinais quando os FcRs são agregados por anticorpos e antígenos multivalentes na superfície celular.
A agregação de FcRs com motivos de ativação de imunorreceptores baseados em tirosina (ITAMs) pode ativar sequencialmente as tirosina quinases da família SRC e as tirosina quinases da família SYK. ITAM compreende uma sequência YxxL repetida duas vezes flanqueando sete resíduos variáveis. As quinases SRC e SYK podem conectar os sinais transduzidos com vias de ativação comuns.
[00112] Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc pode exibir afinidade de ligação reduzida para um ou mais receptores Fc. Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc pode exibir afinidade de ligação reduzida para um ou mais receptores Fcgamma. Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc pode exibir afinidade de ligação reduzida para receptores FcRn. Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc pode exibir afinidade de ligação reduzida para os receptores Fcgamm e FcRn. Em algumas modalidades, um domínio Fc é um domínio ou região Fc null. Conforme usado nesse documento, um "Fc null" se refere a um domínio que exibe uma ligação fraca a inexistente a qualquer um dos receptores Fcgamma. Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc null exibe uma redução na afinidade de ligação (por exemplo, aumento em Kd) com receptores Fc gamma de pelo menos 1000 vezes.
[00113] O domínio Fc pode ter uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, ou quatro ou mais substituições de aminoácidos que diminuem a ligação do domínio Fc a um receptor Fc. Em determinadas modalidades, um domínio Fc exibe ligação diminuída a FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32), FcγRIIIA
(CD16a), FcγRIIIB (CD16b) ou qualquer combinação dos mesmos.
A fim de diminuir a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc a um receptor Fc, o domínio ou região Fc pode compreender uma ou mais substituições de aminoácidos que têm o efeito de reduzir a afinidade do domínio ou região Fc a um receptor Fc. Em determinadas modalidades, uma ou mais substituições compreendem qualquer uma ou mais mutações de cadeia pesada de IgGl correspondentes a E233P, L234V, L234A, L235A, L235E, ∆G236, G237A, E318A, K320A, K322A, A327G, A330S ou P331S de acordo com o Índice UE de numeração de Kabat.
[00114] Em algumas modalidades, o domínio ou região Fc pode compreender uma sequência da isoforma IgGl que foi modificada a partir da sequência IgGl de tipo selvagem. Uma modificação pode compreender uma substituição em mais de um resíduo de aminoácido, tal como em 5 resíduos de aminoácido diferentes incluindo L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L (IgGlVLPLL) de acordo com o índice UE de numeração de Kabat.
Uma modificação pode compreender uma substituição em mais de um resíduo de aminoácido, tal como em 2 resíduos de aminoácido diferentes, incluindo S239D/I332E (IgGlDE) de acordo com o índice UE de numeração de Kabat. Uma modificação pode compreender uma substituição em mais de um resíduo de aminoácido, tal como em 3 resíduos de aminoácido diferentes, incluindo S298A/E333A/K334A (IgGlAAA) de acordo com o índice UE de numeração de Kabat.
[00115] Um construto de anticorpo pode consistir em duas cadeias de proteína leves idênticas e duas cadeias de proteína pesadas idênticas, todas mantidas juntas covalentemente por ligações dissulfeto. As regiões N- terminais das cadeias leve e pesada juntas podem formar o local de reconhecimento de antígeno de um anticorpo.
Estruturalmente, várias funções de um anticorpo podem ser confinadas a domínios de proteína discretos. Os locais que podem reconhecer e podem ligar o antígeno podem consistir em três regiões de determinação de complementaridades (CDRs) que podem estar dentro da região variável da cadeia pesada e região variável da cadeia leve na extremidade N-terminal da cadeia pesada e da cadeia leve. Os domínios constantes podem fornecer a estrutura geral do anticorpo e podem não estar envolvidos diretamente na ligação do anticorpo a um antígeno, mas podem estar envolvidos em várias funções efetoras, como a participação do anticorpo na citotoxicidade celular dependente do anticorpo, e podem ligar receptores Fc. Os domínios constantes podem incluir uma região Fc. Os domínios constantes podem incluir um domínio Fc. As regiões variáveis das cadeias leves e pesadas naturais podem ter as mesmas estruturas gerais, e cada domínio pode compreender quatro regiões estruturais, cujas sequências podem ser um tanto conservadas, ligadas por três regiões hiper-variáveis ou CDRs. As quatro regiões de estrutura (FR) podem adotar de forma geral uma conformação de folha β e os CDRs podem formar laços conectando-se e, em alguns aspectos, formando parte da estrutura de folha β. Os CDRs em cada cadeia podem ser mantidos em estreita proximidade por as regiões estruturais e, com os CDRs da outra cadeia, podem contribuir para a formação do local de ligação ao antígeno.
[00116] Um construto de anticorpo pode compreender uma cadeia leve de uma sequência de aminoácidos com pelo menos um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez modificações e, em determinadas modalidades, não mais do que 40, 35, 30, 25, 20, 15 ou 10 modificações da sequência de aminoácidos em relação à sequência de aminoácidos natural ou original. Um construto de anticorpo pode compreender uma cadeia pesada de uma sequência de aminoácidos com pelo menos um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez modificações e, em determinadas modalidades, não mais do que 40, 35, 30, 25, 20, 15 ou 10 modificações da sequência de aminoácidos em relação à sequência de aminoácidos natural ou original.
[00117] Um construto de anticorpo pode ser um anticorpo. Os anticorpos podem ser selecionados a partir de diferentes classes de imunoglobinas, por exemplo, IgA, IgD, IgE, IgG e IgM. As várias classes diferentes podem ainda ser divididas em isótipos, por exemplo, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl e IgA2. Um anticorpo pode ainda compreender uma cadeia leve e uma cadeia pesada, muitas vezes mais do que uma cadeia. As regiões constantes da cadeia pesada (Fc) que correspondem às diferentes classes de imunoglobulinas podem ser α, δ, ε, γ, e µ, respectivamente. As cadeias leves podem ser kappa (κ) ou lambda (λ), com base nas sequências de aminoácidos dos domínios constantes. O domínio Fc pode ainda compreender uma região Fc. Um receptor Fc pode ligar um domínio Fc. Os construtos de anticorpo também podem incluir qualquer fragmento ou forma recombinante do mesmo, incluindo, mas não se limitando a, fragmentos variáveis de cadeia simples (scFvs).
[00118] Um construto de anticorpo pode compreender um fragmento de anticorpo de ligação ao antígeno. Um fragmento de anticorpo pode incluir (i) um fragmento Fab, um fragmento monovalente que consiste nos domínios VL, VH, CL e CH1; (ii) um fragmento F(ab')2, um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfeto na região interdomínios; e (iii) um fragmento Fv que consiste nos domínios VL e VH de um único braço de um anticorpo. Embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH , possam ser codificados por genes separados, eles podem estar ligados por um ligante sintético para ser feito como uma cadeia de proteína simples na qual as regiões VL e VH emparelham para formar moléculas monovalentes.
[00119] As frações F(ab')2 e Fab' podem ser produzidas por engenharia genética ou por tratamento de imunoglobulina (por exemplo, anticorpo monoclonal) com uma protease, como a pepsina e papaína, e podem incluir um fragmento de anticorpo gerado por digestão de imunoglobulina perto das ligações dissulfeto existentes entre as regiões interdomínios em cada uma das duas cadeias H. O fragmento Fab também pode conter o domínio constante da cadeia leve e o primeiro domínio constante (CH1) da cadeia pesada. Os fragmentos Fab' podem diferir dos fragmentos Fab pela adição de alguns resíduos no terminal carboxila do domínio CH1 de cadeia pesada incluindo uma ou mais cisteína(s) da região interdomínios do anticorpo.
[00120] Um Fv pode ser o fragmento mínimo de anticorpo que contém um local completo de reconhecimento de antígeno e de ligação ao antígeno. Esta região pode consistir em um dímero de um domínio variável de cadeia pesada e um domínio variável de cadeia leve em associação estreita não covalente.
Em esta configuração, as três CDRs de cada domínio variável podem interagir para definir um local de ligação ao antígeno na superfície do dímero VH-VL. Um domínio variável único (ou metade de um Fv compreendendo apenas três CDRs específicos para um antígeno) pode reconhecer e se ligar ao antígeno, embora a ligação possa estar em uma afinidade menor do que a afinidade de todo o local de ligação.
[00121] Um construto de anticorpo pode incluir um domínio Fc compreendendo uma região Fc ou vários domínios Fc. O domínio Fc de um anticorpo pode interagir com os FcRs encontrados nas células imunitárias. O domínio Fc também pode mediar a interação entre moléculas efetoras e células, o que pode levar à ativação do sistema imunológico. Nos isótipos de anticorpos IgG, IgA e IgD, a região Fc pode compreender dois fragmentos de proteína idênticos, que podem ser derivados do segundo e terceiro domínios constantes das cadeias pesadas do anticorpo. Nos isótipos de anticorpos IgM e IgE, as regiões Fc podem compreender três domínios constantes de cadeia pesada. No isótipo do anticorpo IgG, as regiões Fc podem compreender um local de N-glicosilação altamente conservado, que pode ser importante para efeitos a jusante mediados por FcR.
[00122] Um construto de anticorpo usado nesse documento pode ser "quimérico" ou "humanizado”. Formas quiméricas e humanizadas de anticorpos não humanos (por exemplo, murinos) podem ser imunoglobulinas quiméricas, cadeias de imunoglobulina ou fragmentos das mesmas (tais como Fv, Fab, Fab', F(ab')2 ou outros subdomínios de ligação ao alvo de anticorpos), que podem conter sequências mínimas derivadas de imunoglobulina não humana. Em geral, o anticorpo humanizado pode compreender substancialmente todos de pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis, em que todos ou substancialmente todos os CDRs correspondem aos de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas as regiões estruturais são as de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado também pode compreender pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente a de uma sequência de consenso de imunoglobulina humana.
[00123] Um construto de anticorpo pode ser um anticorpo humano. Conforme usado nesse documento, "anticorpos humanos" podem incluir anticorpos tendo, por exemplo, a sequência de aminoácidos de uma imunoglobulina humana e podem incluir anticorpos isolados de bibliotecas de imunoglobulinas humanas ou de animais transgênicos para uma ou mais imunoglobulinas humanas que não expressam imunoglobulinas endógenas. Os anticorpos humanos podem ser produzidos usando camundongos transgênicos que são incapazes de expressar imunoglobulinas endógenas funcionais, mas que podem expressar genes de imunoglobulinas humanas. Anticorpos totalmente humanos que reconhecem um epítopo selecionado podem ser gerados usando a seleção guiada. Nesta abordagem, um anticorpo monoclonal não humano selecionado, por exemplo, um anticorpo de camundongo, pode ser usado para guiar a seleção de um anticorpo totalmente humano que reconhece o mesmo epítopo.
[00124] Um anticorpo pode ser um anticorpo biespecífico ou um anticorpo de domínio variável duplo (DVD).
Os anticorpos biespecíficos e os anticorpos DVD podem ser anticorpos monoclonais, frequentemente humanos ou humanizados, que podem ter especificidades de ligação para pelo menos dois antígenos diferentes.
[00125] Um anticorpo pode ser um anticorpo derivatizado. Por exemplo, os anticorpos derivatizados podem ser modificados por glicosilação, acetilação, peguilação, fosforilação, amidação, derivatização por grupos de proteção/bloqueio conhecidos, clivagem proteolítica, ligação a um ligante celular ou outra proteína.
[00126] Um anticorpo pode ter uma sequência que foi modificada para alterar pelo menos uma função efetora biológica mediada por região constante em relação à sequência de tipo selvagem correspondente. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo pode ser modificado para reduzir pelo menos uma função efetora biológica mediada por região constante em relação a um anticorpo não modificado, por exemplo, ligação reduzida ao receptor Fc (FcR). A ligação FcR pode ser reduzida, por exemplo, pela mutação do segmento da região constante de imunoglobulina do anticorpo em regiões específicas necessárias para interações FcR.
[00127] Um anticorpo ou domínio Fc pode ser modificado para adquirir ou melhorar pelo menos uma função efetora biológica mediada por região constante em relação a um anticorpo ou domínio Fc não modificado, por exemplo, para melhorar as interações FcγR. Por exemplo, um anticorpo com uma região constante que se liga a FcγRIIA, FcγRIIB e/ou FcγRIIIA com maior afinidade do que a região constante de tipo selvagem correspondente pode ser produzido de acordo com os métodos descritos nesse documento. Um domínio Fc que se liga a FcγRIIA, FcγRIIB e/ou FcγRIIIA com maior afinidade do que o domínio Fc de tipo selvagem correspondente pode ser produzido de acordo com os métodos descritos nesse documento ou conhecidos pelo especialista versado na técnica.
[00128] Em determinadas modalidades, um construto de anticorpo compreende um domínio Fc que pode compreender uma região Fc, em que o domínio Fc pode ser a parte da região Fc que interage com os receptores Fc. O domínio Fc de um construto de anticorpo pode interagir com os receptores Fc (FcRs) encontrados nas células imunitárias. O domínio Fc também pode mediar a interação entre moléculas efetoras e células, o que pode levar à ativação do sistema imunológico.
A região Fc pode ser derivada de isótipos de anticorpos IgG, IgA ou IgD e pode compreender dois fragmentos de proteína idênticos, que são derivados do segundo e terceiro domínios constantes das cadeias pesadas do anticorpo. Em um domínio ou região Fc derivada de um isótipo de anticorpo IgG, o domínio ou região Fc pode compreender um local de N-
glicosilação altamente conservado, que pode ser essencial para efeitos a jusante mediados por FcR. O domínio ou região Fc pode ser derivado de isótipos de anticorpos IgM ou IgE, em que o domínio ou região Fc pode compreender três domínios constantes de cadeia pesada.
[00129] Um domínio Fc pode interagir com diferentes tipos de FcRs. Os diferentes tipos de FcRs podem incluir, por exemplo, FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIA, FcγRIIIB, FcαRI, FcµR, FcεRI, FcεRII e FcRn. Os FcRs podem estar localizados na membrana de certas células imunitárias, incluindo, por exemplo, linfócitos B, células natural killer, macrófagos, neutrófilos, células dendríticas foliculares, eosinófilos, basófilos, plaquetas e mastócitos.
Quando o FcR é envolvido no domínio Fc, o FcR pode iniciar funções incluindo, por exemplo, eliminação de um complexo antígeno-anticorpo via endocitose mediada por receptor, citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC), fagocitose mediada por células dependente de anticorpos (ADCP), e transmissão de sinais desencadeada por ligante através da membrana plasmática que pode resultar em alterações na secreção, exocitose e metabolismo celular. Os FcRs podem entregar sinais quando os FcRs são agregados por anticorpos e antígenos multivalentes na superfície celular.
A agregação de FcRs com motivos de ativação de imunoreceptor baseados em tirosina (ITAMs) pode ativar sequencialmente as tirosina quinases da família SRC e as tirosina quinases da família SYK. ITAM compreende uma sequência YxxL repetida duas vezes flanqueando sete resíduos variáveis. As quinases SRC e SYK podem conectar os sinais transduzidos com vias de ativação comuns.
[00130] Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc da porção do construto de anticorpo de um conjugado pode exibir afinidade de ligação aumentada para um ou mais receptores Fc. Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc pode exibir afinidade de ligação aumentada para um ou mais receptores Fcgamma. Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc pode exibir afinidade de ligação aumentada para receptores FcRn. Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc pode exibir afinidade de ligação aumentada para receptores Fcgamma e FcRn.
[00131] Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc da porção do construto de anticorpo de um conjugado pode exibir afinidade de ligação reduzida para um ou mais receptores Fc. Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc pode exibir afinidade de ligação reduzida a um ou mais receptores Fcgamma. Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc pode exibir afinidade de ligação reduzida para receptores FcRn. Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc pode exibir afinidade de ligação reduzida para Fcgamma e receptores FcRn. Em algumas modalidades, um domínio Fc é um domínio ou região Fc null. Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc pode exibir afinidade de ligação reduzida para receptores FcRn, mas ter a mesma afinidade de ligação ou afinidade de ligação aumentada para um ou mais receptores Fcgamma em comparação com um IgG de tipo selvagem. Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc pode exibir afinidade de ligação aumentada para receptores FcRn, mas ter a mesma afinidade de ligação ou afinidade de ligação diminuída para um ou mais receptores Fcgamma.
[00132] Um domínio Fc pode ter uma ou mais, duas ou mais, três ou mais, ou quatro ou mais substituições de aminoácidos que diminuem a ligação do domínio Fc a um receptor Fc. Em determinadas modalidades, um domínio Fc tem afinidade de ligação diminuída para um ou mais de FcγRI (CD64), FcγRIIA (CD32), FcγRIIIA (CD16a), FcγRIIIB (CD16b), ou qualquer combinação dos mesmos. A fim de diminuir a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc a um receptor Fc, o domínio ou região Fc pode compreender uma ou mais substituições de aminoácidos que reduzem a afinidade de ligação do domínio ou região Fc a um receptor Fc.
[00133] Em determinadas modalidades, as uma ou mais substituições compreendem qualquer uma ou mais mutações de IgGl de cadeia pesada correspondentes a E233P, L234V, L234A, L235A, L235E, ∆G236, G237A, E318A, K320A, K322A, A327G,
A330S, ou P331S de acordo com o índice UE de numeração de Kabat.
[00134] Em algumas modalidades, o domínio ou região Fc pode compreender uma sequência de uma isoforma de IgG que foi modificada a partir da sequência de IgG de tipo selvagem.
Em algumas modalidades, o domínio ou região Fc pode compreender uma sequência da isoforma de IgGl que foi modificada a partir da sequência IgGl de tipo selvagem. Em algumas modalidades, a modificação compreende a substituição de um ou mais aminoácidos que reduzem a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc de IgG com todos os receptores Fcγ. Uma modificação pode ser a substituição de E233, L234 e L235, tal como E233P/L234V/L235A ou E233P/L234V/L235A/ΔG236, de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode ser uma substituição de P238, tal como P238A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de D265, tal como D265A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de N297, tal como N297A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de A327, tal como A327Q, de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode ser uma substituição de P329, tal como P239A, de acordo com o índice UE de Kabat.
[00135] Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc de IgG compreende pelo menos uma substituição de aminoácido que reduz sua afinidade de ligação para FcγR1, em comparação com um domínio Fc de IgG de tipo selvagem ou de referência. Uma modificação pode compreender uma substituição em F241, tal como F241A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode compreender uma substituição em F243, como F243A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode compreender uma substituição em V264, tal como V264A, de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode compreender uma substituição em D265, tal como D265A, de acordo com o índice UE de Kabat.
[00136] Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc de IgG compreende pelo menos uma substituição de aminoácido que aumenta sua afinidade de ligação para FcγR1, em comparação com um domínio Fc de IgG de tipo selvagem ou de referência. Uma modificação pode compreender uma substituição em A327 e P329, tal como A327Q/P329A, de acordo com o índice UE de Kabat.
[00137] Em algumas modalidades, a modificação compreende a substituição de um ou mais aminoácidos que reduzem a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc de IgG aos receptores FcγRII e FcγRIIIA. Uma modificação pode ser uma substituição de D270, tal como D270A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de Q295, tal como Q295A, de acordo com o índice
UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de A327, tal como A237S, de acordo com o índice UE de Kabat.
[00138] Em algumas modalidades, a modificação compreende a substituição de um ou mais aminoácidos que aumenta a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc de IgG para os receptores FcγRII e FcγRIIIA. Uma modificação pode ser uma substituição de T256, tal como T256A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de K290, tal como K290A, de acordo com o índice UE de Kabat.
[00139] Em algumas modalidades, a modificação compreende a substituição de um ou mais aminoácidos que aumenta a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc de IgG ao receptor FcγRII. Uma modificação pode ser uma substituição de R255, tal como R255A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de E258, tal como E258A, de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode ser uma substituição de S267, tal como S267A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de E272, tal como E272A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de N276, tal como N276A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de D280, tal como D280A, de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode ser uma substituição de H285, tal como
H285A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de N286, tal como N286A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de T307, tal como T307A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de L309, tal como L309A, de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode ser uma substituição de N315, tal como N315A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de K326, tal como K326A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de P331, tal como P331 A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de S337, tal como S337A, de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode ser uma substituição de A378, tal como A378A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de E430, tal como E430, de acordo com o índice UE de Kabat.
[00140] Em algumas modalidades, a modificação compreende a substituição de um ou mais aminoácidos que aumenta a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc de IgG ao receptor FcγRII e reduz a afinidade de ligação ao receptor FcγRIIIA. Uma modificação pode ser uma substituição de H268, tal como H268A, de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode ser uma substituição de R301, tal como R301A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de K322, tal como K322A, de acordo com o índice UE de Kabat.
[00141] Em algumas modalidades, a modificação compreende a substituição de um ou mais aminoácidos que diminui a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc de IgG ao receptor FcγRII, mas não afeta a afinidade de ligação ao receptor FcγRIIIA. Uma modificação pode ser uma substituição de R292, tal como R292A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de K414, tal como K414A, de acordo com o índice UE de Kabat.
[00142] Em algumas modalidades, a modificação compreende a substituição de um ou mais aminoácidos que diminui a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc de IgG ao receptor FcγRII e aumenta a afinidade de ligação ao receptor FcγRIIIA. Uma modificação pode ser uma substituição de S298, tal como S298A, de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode ser a substituição de S239, 1332 e A330, tal como S239D/I332E/A330L. Uma modificação pode ser a substituição de S239 e 1332, tal como S239D/I332E.
[00143] Em algumas modalidades, a modificação compreende a substituição de um ou mais aminoácidos que diminui a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc de IgG ao receptor FcγRIIIA. Uma modificação pode ser a substituição de F241 e F243, tal como F241S/F243S ou F241I/F243I, de acordo com o índice UE de Kabat.
[00144] Em algumas modalidades, a modificação compreende a substituição de um ou mais aminoácidos que diminui a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc de IgG ao receptor FcγRIIIA e não afeta a afinidade de ligação ao receptor FcγRII. Uma modificação pode ser uma substituição de S239, tal como S239A, de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode ser uma substituição de E269, tal como E269A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de E293, tal como E293A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de Y296, tal como Y296F, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de V303, tal como V303A, de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode ser uma substituição de A327, tal como A327G, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de K338, tal como K338A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de D376, tal como D376A, de acordo com o índice UE de Kabat.
[00145] Em algumas modalidades, a modificação compreende a substituição de um ou mais aminoácidos que aumenta a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc de IgG ao receptor FcγRIIIA e não afeta a afinidade de ligação ao receptor FcγRII. Uma modificação pode ser uma substituição de E333, tal como E333A, de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode ser uma substituição de K334, tal como K334A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de A339, tal como A339T, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser a substituição de S239 e 1332, tal como S239D/I332E.
[00146] Em algumas modalidades, a modificação compreende a substituição de um ou mais aminoácidos que aumenta a afinidade de ligação de um domínio ou região Fc de IgG ao receptor FcγRIIIA. Uma modificação pode ser a substituição de L235, F243, R292, Y300 e P396, tal como L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L (IgG1VLPLL) de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser a substituição de S298, E333 e K334, tal como S298A/E333A/K334A, de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser a substituição de K246, tal como K246F, de acordo com o índice UE de Kabat.
[00147] Outras substituições em um domínio Fc de IgG que afetam sua interação com um ou mais receptores Fcγ são divulgadas nas Patentes U.S. Nºs 7.317.091 e 8.969.526 (cujas divulgações estão incorporadas nesse documento por referência).
[00148] Em algumas modalidades, um domínio ou região Fc IgG compreende pelo menos uma substituição de aminoácido que diminui a afinidade de ligação a FcRn, em comparação com um domínio Fc de IgG de tipo selvagem ou de referência. Uma modificação pode compreender uma substituição em H435, tal como H435A de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode compreender uma substituição em I253, tal como I253A de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode compreender uma substituição em H310, tal como H310A de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode compreender substituições em I253, H310 e H435, tal como I253A/H310A/H435A de acordo com o índice UE de Kabat.
[00149] Uma modificação pode compreender uma substituição de um resíduo de aminoácido que aumenta a afinidade de ligação de um domínio Fc de IgG para FcRn, em relação a um domínio Fc de IgG de tipo selvagem ou de referência. Uma modificação pode compreender uma substituição em V308, tal como V308P de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode compreender uma substituição em M428, tal como M428L de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode compreender uma substituição em N434, tal como N434A de acordo com o índice UE de Kabat ou N434H de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode compreender substituições em T250 e M428, tal como T250Q e M428L de acordo com o índice UE de Kabat.
Uma modificação pode compreender substituições em M428 e N434, tal como M428L e N434S, N434A ou N434H de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode compreender substituições em M252, S254 e T256, tal como M252Y/S254T/T256E de acordo com o índice UE de Kabat. Uma modificação pode ser uma substituição de um ou mais aminoácidos selecionados de P257L, P257N, P257I, V279E, V279Q, V279Y, A281S, E283F, V284E, L306Y, T307V, V308F, Q311V, D376V e N434H. Outras substituições em um domínio Fc IgG que afetam sua interação com FcRn estão divulgadas na Patente U.S. Nº 9.803.023 (cuja divulgação está incorporada nesse documento por referência).
[00150] Em determinadas modalidades, o construto de anticorpo compreende um domínio de ligação ao antígeno e um domínio Fc.
[00151] Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno em uma célula T, uma célula B, uma célula estrelada, uma célula endotelial, uma célula tumoral, uma APC, uma célula de fibroblasto , uma célula de fibrócito ou uma célula associada à patogênese da fibrose. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno em uma célula T, uma APC e/ou uma célula B. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno em um hepatócito.
Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno que é pelo menos
80% idêntico a um antígeno selecionado do grupo que consiste em CLTA4, PD-l, OX40, LAG-3, GITR, GARP, CD25, CD27, PD-L1,
TNFR2, ICOS, 41BB, CD70, CD73, CD38 ou VTCN1. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno selecionado a partir do grupo que consiste em
ASGR1 e ASGR2 (receptor de asialoglicoproteína 1 e 2). Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80%
idêntico a um antígeno em uma célula estrelada, uma célula endotelial, uma célula de fibroblasto, uma célula de fibrócito ou uma célula associada à patogênese da fibrose ou câncer.
Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno selecionado do grupo que consiste em PDGFRβ, integrina αvβ1, integrina αvβ3,
integrina αvβ6, integrina αvβ8, Endosialina, FAP, ADAM12,
LRRC15, MMP14, PDPN, CDH11 e F2RL2. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno selecionado do grupo que consiste em FAP,
ADAM12, LRRC15, MMP14, PDPN , CDH11 e F2RL2, Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno em uma célula tumoral, um antígeno tumoral. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno selecionado do grupo que consiste em MUC16, UPK1B, VTCN1, TMPRSS3, TMEM238, Clorf186, TMPRSS4, CLDN6, CLDN8, STRA6, MSLN ou CD73.
[00152] Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno em uma célula T, uma célula B, uma célula estrelada, uma célula endotelial, uma célula tumoral, uma APC, uma célula de fibroblasto, uma célula de fibrócito ou uma célula associada com a patogênese da fibrose. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno em uma célula T, uma APC e/ou uma célula B. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno em um hepatócito. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno selecionado do grupo que consiste em CLTA4, PD-l, OX40, LAG-3, GITR, GARP, CD25, CD27, PD-L1, TNFR2, ICOS, 41BB, CD70, CD73, CD38 ou VTCN1. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno selecionado do grupo que consiste em ASGR1 e ASGR2. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno em uma célula estrelada, uma célula endotelial, uma célula de fibroblasto, uma célula de fibrócito ou uma célula associada à patogênese da fibrose ou câncer. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno selecionado do grupo que consiste em PDGFRβ, integrina αvβ1, integrina αvβ3, integrina αvβ6, integrina αvβ8, Endosialina, FAP, ADAM12, LRRC15, MMP14, PDPN, CDH11 e F2RL2. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno selecionado do grupo que consiste em FAP, ADAM12, LRRC15, MMP14, PDPN, CDH11 e F2RL2. Em determinadas modalidades, o antígeno é LRRC15. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno em uma célula tumoral, um antígeno tumoral. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno selecionado do grupo que consiste em MUC16, UPK1B, VTCN1, TMPRSS3, TMEM238, Clorf186, TMPRSS4, CLDN6, CLDN8, STRA6, MSLN ou CD73.
[00153] Um construto de anticorpo pode compreender um anticorpo com modificações de pelo menos um resíduo de aminoácido. As modificações podem ser substituições, adições, mutações, supressão ou semelhantes. Uma modificação de anticorpo pode ser uma inserção de um aminoácido não natural.
[00154] Um domínio de ligação ao antígeno pode compreender pelo menos 80% de identidade de sequência com qualquer sequência na Tabela 1. Um domínio de ligação ao antígeno pode compreender um conjunto de CDRs estabelecidos na Tabela 1. Um construto de anticorpo pode compreender um domínio de ligação ao antígeno que liga um antígeno, em que o domínio de ligação ao antígeno compreende pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com: a) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 1, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 2, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 3, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 4,
LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 5, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 6; b) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 7, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 8, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 9, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 10,
LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 11 e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 12; c) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 13, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 14, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 15,
LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 16, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 17 e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 18; d) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 19, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 20,
HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 21, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 22, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 23, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 24; e) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 25,
HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 26, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 27, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 28, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 29, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 30;
f) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ
ID Nº: 31, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 32, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 33, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 34, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 35,
e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 36; g) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 37, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 38, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 39, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 40,
LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 41, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 42; h) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 43, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 44, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 45,
LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 46, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 47, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 48; i) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 49, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 50,
HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 51, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 52, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 53 e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 54; j) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 55,
HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 56, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 57, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 58, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 59, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 60;
k) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ
ID Nº: 61, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 62, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 63, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 64, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 65,
e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 66; 1) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 67, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 68, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 69, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 70,
LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 71 e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 72; m) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 73, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 74, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 75,
LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 76, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 77, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 78; n) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 73, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 74,
HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID
Nº: 75, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 79, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 80, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 81; o) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
199, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ
ID Nº: 200, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 201, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 202, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 203, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
204; p) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 205, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 206, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 207, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
208, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ
ID Nº: 209, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 210 q) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 211, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
212, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ
ID Nº: 213, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 214, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 215, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 216 r) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
217, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ
ID Nº: 218, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 219, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 220, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 221, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
222; s) HCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 223, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 224, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 225, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
226, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ
ID Nº: 227, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 228; ou t) HCDRl compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 229, HCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
230, HCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ
ID Nº: 231, LCDR1 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 232, LCDR2 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 233, e LCDR3 compreendendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 234.
[00155] Um construto de anticorpo pode compreender um domínio de ligação ao antígeno compreendendo um ou mais domínios variáveis. Um construto de anticorpo pode compreender um domínio de ligação ao antígeno compreendendo um domínio variável de cadeia leve (domínio VL). Um domínio de ligação pode compreender pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com qualquer sequência VL na Tabela 2. Um construto de anticorpo pode compreender um domínio de ligação ao antígeno compreendendo um domínio variável de cadeia pesada (domínio VH). Um domínio de ligação ao antígeno pode compreender pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com qualquer sequência VH na Tabela
2. Um domínio de ligação ao antígeno pode compreender um par de sequências VH e VL na Tabela 2. Um domínio de ligação ao antígeno pode compreender pelo menos 80% de identidade de sequência com qualquer sequência na Tabela 2.
[00156] Um construto de anticorpo pode compreender um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno, em que o domínio de ligação ao antígeno compreende: a) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98 %,
pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 83 e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 84; b) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 85, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,
pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 86; c) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 87, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 88; d) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,
pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 89, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 90; e) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 91, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 92;
f) uma sequência de VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 93, e uma sequência
VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100%
de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 94; g) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 95,
e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%,
ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 96; h) uma sequência
VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100%
de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 97, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 98;
i) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 99, e uma sequência
VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos
100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 100; j) uma sequência de VH com pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 101, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,
pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 102; k) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 101, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 103; 1) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
104, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 105; m) uma sequência de VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%,
pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos
100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 106, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID NO: 107; n) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
109, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 108; o) uma sequência
VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100%
de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 110, e uma sequência de VL tendo pelo menos
80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº:
108; p) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 111, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 112; q) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 113, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,
pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 114; r) uma sequência de VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 115, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 116; s) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
117, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 118; t) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 117, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 119; u) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
117, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 120; v) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 117, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 121; w) uma sequência de VH com pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
117, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 122; x) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 123, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 124; y) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
125, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 126; z) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 127, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 128; aa) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 130 e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98% , pelo menos
99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 129; bb) uma sequência de VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%,
pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos
100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 131, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 132; cc) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
133, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 134; dd) uma sequência
VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100%
de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 135, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº:
136; ee) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 137, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 138; ff) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 140, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº:
139; gg) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 141, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 142; hh) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 143, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,
pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 144; ii) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 145, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 146; jj) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
147, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 148; kk) uma sequência
VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100%
de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 149, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº:
150; 11) uma sequência VH com pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 151, e uma sequência
VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos
100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 153; mm) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 152, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,
pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 153; nn) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 154, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 155; oo) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
156, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 157; pp) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 158, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 159; qq) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
160, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 161; rr) uma sequência
VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos
100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 162, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 163; ss) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
164, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 167; tt) uma sequência
VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100%
de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 164, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº:
168; uu) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 165, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 167; vv) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 165, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%,
pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 168; ww) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 166, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 167; xx) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
166, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 168; yy) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 169, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 170; zz) uma sequência de VH com pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
171, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 172; aaa) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 174, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de
SEQ ID Nº: 173; bbb) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
175, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 176; ccc) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 177, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 178; ddd) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
179, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 180; eee) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 181, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%,
pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 182; fff) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
183, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 184; ggg) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 185, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 186; hhh) uma sequência VH com pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
187, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 188; iii) uma sequência de VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 189, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 190; jjj) uma sequência VH tendo pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
191, e uma sequência VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%,
pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos
99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 192; kkk) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos
95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 193, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos
97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da
SEQ ID Nº: 194; 111) uma sequência de VH com pelo menos 80%,
pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos
98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº:
195, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos
90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 196; ou mmm) uma sequência VH tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 197, e uma sequência de VL tendo pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou pelo menos 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da SEQ ID Nº: 198.
[00157] Um construto de anticorpo pode compreender uma sequência da Tabela 1 e/ou Tabela 2. Um construto de anticorpo pode compreender um conjunto de sequências CDR da Tabela 1 e/ou um par de sequências VH e VL da Tabela 2.
Tabela 1: CDRs de anticorpos ANTICOPRO REGIÃO SEQ ID Nº: SEQUÊNCIA: HCDR1 1 GFTFSSYT HCDR2 2 ISYDGNNK HCDR3 3 ARTGWLGPFDY Ipilumumab LCDR1 4 QSVGSSY LCDR2 5 SSY LCDR3 6 QQYGSSPWT Opdivo® HCDR1 7 GITFSNSG (nivolumab) HCDR2 8 IWYDGSKR
ANTICOPRO REGIÃO SEQ ID Nº: SEQUÊNCIA:
HCDR3 9 ATNDDY
LCDR1 10 QSVSSYL
LCDR2 11 DAS
LCDR3 12 QQSSNWPRT
HCDR1 13 GYTFTNYY
HCDR2 14 INPSNGGT
Keytruda® HCDR3 15 ARRDYRFDMGFDY
(pembrolizumab) LCDR1 16 KGVSTSGYSY
LCDR2 17 LAS
LCDR3 18 QHSRDLPLT
HCDR1 19 GYTFTDSY
HCDR2 20 MYPDNGDS
HCDR3 21 VLAPRWYFSV Vonlerolizumab LCDR1 22 QDISNY
LCDR2 23 YTS
LCDR3 24 QQGHTLPPT
HCDR1 25 GFTFSSYD
HCDR2 26 IWYDGSNK
HCDR3 27 ARGSGNWGFFDY Varlilumab LCDR1 28 QGISRW
LCDR2 29 AAS
LCDR3 30 QQYNTYPRT
HCDR1 31 GYTFTSYR
HCDR2 32 INPSTGYT Zinbryta® HCDR3 33 ARGGGVFDY (Daclizumab) LCDR1 34 SSSISY
LCDR2 35 TTS
ANTICOPRO REGIÃO SEQ ID Nº: SEQUÊNCIA:
LCDR3 36 HQRSTYPLT
HCDR1 37 SYGMH
HCDR2 38 VIWYEGSNKYYADSVKG
Anticorpo para HCDR3 39 GGSMVRGDYYYGMDV
GITR LCDR1 40 RASQGISSALA
LCDR2 41 DASSLES
LCDR3 42 QQFNSYPYT
HCDR1 43 DYYWN
HCDR2 44 EINHRGSTNSNPSLKS
Anticorpo para HCDR3 45 GYSDYEYNWFDP
LAG-3 LCDR1 46 RASQSISSYLA
LCDR2 47 DASNRAT
LCDR3 48 QQRSNWPLT
HCDR1 50 GYSFSTYW
HCDR2 51 IYPGDSYT
HCDR3 52 ARGYGIFDY Utomilumab LCDR1 53 NIGDQY
LCDR2 54 QDK
LCDR3 55 ATYTGFGSLAV
HCDR1 56 GYTFTDYN
HCDR2 57 INPNYEST Anticorpo para HCDR3 58 RDKGWYFDV TNFR2 variante LCDR1 59 SSVKN 1 LCDR2 60 YTS
LCDR3 61 QQFTSSPYT
HCDR1 62 GFSLSTSGMG
HCDR2 63 IWWDDDK
ANTICOPRO REGIÃO SEQ ID Nº: SEQUÊNCIA:
HCDR3 64 ARLTGTRYFDY Anticorpo para LCDR1 65 QDINKF TNFR2 variante LCDR2 66 YTS 2 LCDR3 67 LQYGNLWT
HCDR1 68 GYTFTDYS
HCDR2 69 INTETGEP Anticorpo para HCDR3 70 ATYYGSSYVPDY TNFR2 variante LCDR1 71 QNVGTA 3 LCDR2 72 WTS
LCDR3 73 QYSDYPYT
HCDR1 74 GYTFTDY
HCDR2 75 WVDPEYGS Anticorpo para HCDR3 76 ARDDGSYSPFDY TNFR2 variante LCDR1(maior) 77 QNINKY 4 LCDR2(maior) 78 YTS
LCDR3(maior) 79 LQYVNLLT
LCDR1(menor) 80 ENVVTY
LCDR2(menor) 81 GAS
LCDR3(menor) 82 QGYSYPYT
Anticorpo huAD208.4.1 HCDR1 199 DYYIH para LRRC15
HCDR2 200 LVYPYIGGTNYNQKFKG
HCDR3 201 GDNKYDAMDY
LCDR1 202 RASQSVSTSSYSYMH
LCDR2 203 YASSLES
LCDR3 204 EQSWEIRT
ANTICOPRO REGIÃO SEQ ID Nº: SEQUÊNCIA:
Anticorpo huAD208.12.1 HCDR1 205 NYWMH para LRRC15
HCDR2 206 MIHPNSGSTKHNEKFRG
HCDR3 207 SDFGNYRWYFDV
LCDR1 208 RASQSSSNNLH
LCDR2 209 YVSQSIS
LCDR3 210 QQSNSWPFT
Anticorpo huAD208.14.1 HCDR1 211 DYYIH para LRRC15
HCDR2 212 LVYPYIGGSSYNQQFKG
HCDR3 213 GDNNYDAMDY
LCDR1 214 RASQSVSTSTYNYMH
LCDR2 215 YASNLES
LCDR3 216 HHTWEIRT
Anticorpo hu139.10 para HCDR1 217 SYGVH
LRRC15
HCDR2 218 VIWAGGSTNYNSALMS
HCDR3 219 HMITEDYYGMDY
LCDR1 220 KSSQSLLNSRTRKNYLA
LCDR2 221 WASTRES
LCDR3 222 KQSYNLPT
ANTICOPRO REGIÃO SEQ ID Nº: SEQUÊNCIA: Anticorpo muAD210.40.9 HCDR1 223 NYWLG para LRRC15 HCDR2 224 DIYPGGGNTYYNEKLKG HCDR3 225 WGDKKGNYFAY LCDR1 226 TASSSVYSSYLH LCDR2 227 STSNLAS LCDR3 228 HQYHRSPT Anticorpo muAD209.9.1 HCDR1 229 NFGMN para LRRC15 HCDR2 230 WINLYTGEPTFADDFKG HCDR3 231 KGETYYRYDGFAY LCDR1 232 RSSKSLLHSNGNTHLY LCDR2 233 RMSNLAS LCDR3 234 MQLLEYPYT Tabela 2: Sequências VH e VL de anticorpo
SEQ ID ANTICORPO REGIÃO SEQUÊNCIA: Nº:
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYT
MHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKG VH 83
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCART Ipilumumab GWLGPFDYWGQGTLVTVSS
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSY
LAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGS VL 84
GSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTF GQGTKVEIK QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSG
MHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKG VH 85 Opdivo® RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATN
DDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID ANTICORPO REGIÃO SEQUÊNCIA: Nº:
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYL (nivolumab) AWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSG VL 86
SGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFG QGTKVEIK QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYY
MYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKN VH 87
RVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDD Keytruda®
TAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSS
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSG (pembrolizum
YSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARF ab) VL 88
SGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLP LTFGGGTKVEIK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSW
IHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKG VH 89
RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARR
HWPGGFDYWGQGTLVTVSS Atezolizumab DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAV
AWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSG VL 90
SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFG QGTKVEIK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYW
MSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKG VH 91
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARE
GGWFGELAFDYWGQGTLVTVSS Durvalumab EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSY
LAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGS VL 92
GSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTF GQGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKTSGDTFSTYA
ISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGKAHYAQKFQG VH 93
RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARK
FHFVSGSPFGMDVWGQGTTVTVSS MDX-1106 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYL
AWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSG VL 94
SGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPTFGQ GTKVEIK EVQLQQSGAELVKPGASVKISCKASGYTFTDYN
MDWVKQSHGKSLEWIGDINPNYESTSYNQKFKG VH 95
KATLTVDKSSSTAYMEVRSLTSEDTAVFYCARD Anticorpo KGWYFDVWGAGTTVTVSS para TNFR2 ENVLTQSPAIMSASLGEKVTMSCRASSSVKNMY variante 1 WYQQKSDASPKLWIYYTSNLAPGVPARFSGSGS VL 96
GNSYSLTISSMEGEDAATYYCQQFTSSPYTFGG GTKLELK QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSG
MGVGWIRQPSGKGLEWLAHIWWDDDKFYNPSLK VH 97
SQLTISKDTSRNQVFLKLTSVVTADTATYYCAR Anticorpo LTGTRYFDYWGQGTTLTVSS para TNFR2 DVQMTQSPSSLSASLGGKVTITCKASQDINKFI variante 2 AWYQHKPGKGPRLLIHYTSTLQPGIPSKFSGSG VL 98
SGRDYSFSISNLEPEDIATYYCLQYGNLWTFGG GTKLEIT
QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYS VH 99
MHWVKQAPGKGLKWMGWINTETGEPTYADDFKG
SEQ ID ANTICORPO REGIÃO SEQUÊNCIA: Nº:
RFAFSSETSTSTAYLQINNLKNDDTTTYFCATY
YGSSYVPDYWGQGTSLTVSS Anticorpo DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQNVGTAV para TNFR2 VL 100
AWYQHKPGQSPKLLIYWTSSRHTGVPDRFTGSG variante 3 SGTEFTLTISNVQSEDLADYFCHQYSDYPYTFG
GGTKLEIK EVQLQQSGPEVGRPGSSVKISCKASGYTFTDYI
MHWVKQSPGQGLEWIGWVDPEYGSTDYAEKFKK VH 101
KATLTADTSSNTAYIQLSSLTSEDTATYFCARD DGSYSPFDYWGQGVMVTVSS
DIQMTQSPPSLSASLGDKVTITCQASQNINKYI Anticorpo VL AWYQQKPGKAPRLLIRYTSTLESGTPSRFSGSG 102 para TNFR2 (maior) SGRDYSFSISNVESEDIASYYCLQYVNLLTFGA variante 4 GTKLEIK
NIVMTQSPKSMSMSVGERVTLTCKASENVVTYV
VL SWYQQKPEQSPKLLIYGASNRYTGVPDRFTGSG 103 (menor) SATDFTLTISSVQAEDLADYHCGQGYSYPYTFG
GGTKLEIK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYA
MSWVRQAPGKGLEWVAVISENGSDTYYADSVKG VH 104
RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARD Anticorpo RGGAVSYFDVWGQGTLVTVSS para TNFR2 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSSYL variante 5 AWYQQKPGKAPKLLIYAASSLESGVPSRFSGSG VL 105
SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSLPYTFG QGTKVEIKRT EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDSY
MSWVRQAPGQGLEWIGDMYPDNGDSSYNQKFRE VH 106
RVTITRDTSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCVLA
PRWYFSVWGQGTLVTVSS Vonlerolizum
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYL ab
NWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLRSGVPSRFSGSG VL 107
SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGHTLPPTFG QGTKVEIK EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNVGTNV
AWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYSGIPARFSGSG VL 108
SGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNTDPLTFG GGTKVEIK QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSG
MGVGWIRQPPGKALEWLAHIWWDDDKYYNPSLK VH 109 TRX518 SRLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR
TRRYFPFAYWGQGTLVTVSS QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSG
MGVGWIRQPPGKALEWLAHIWWDDDKYYQPSLK VH 110
SRLTISKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR TRRYFPFAYWGQGTLVTVSS QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSDYY
WNWIRQPPGKGLEWIGEINHRGSTNSNPSLKSR VH 111
VTLSLDTSKNQFSLKLRSVTAADTAVYYCAFGY
SDYEYNWFDPWGQGTLVTVSS Anticorpo
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSYL para LAG-3
AWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSG VL 112
SGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFG QGTNLEIK
SEQ ID ANTICORPO REGIÃO SEQUÊNCIA: Nº:
MAVLALLFCLVTFPSCILSQVQLKESGPGLVAP
SQSLSITCTVSGFSLTGYGINWVRQPPGKGLEW VH 113 LGMIWSDGSTDYNSVLTSRLRISKDNSNSQVFL
KMNSLQVDDTARYYCARDRNYYDYDGAMDYWGQ Anticorpo
GTSVTVSS para GARP
QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTGYG variante 1
INWVRQPPGKGLEWLGMIWSDGSTDYNSVLTSR VL 114
LRISKDNSNSQVFLKMNSLQVDDTARYYCARDR NYYDYDGAMDYWGQGTSVTVSS MKFPSQLLLFLLFRITGIICDIQVTQSSSYLSV
SLGDRVTITCKASDHIKNWLAWYQQKPGIAPRL VH 115
LVSGATSLEAGVPSRFSGSGSGKNFTLSITSLQ Anticorpo TEDVATYYCQQYWSTPWTFGGGTTLEIR para GARP DIQVTQSSSYLSVSLGDRVTITCKASDHIKNWL variante 2 AWYQQKPGIAPRLLVSGATSLEAGVPSRFSGSG VL 116
SGKNFTLSITSLQTEDVATYYCQQYWSTPWTFG GGTTLEIR EVQLVQPGAELRNSGASVKVSCKASGYRFTSYY
IDWVRQAPGQGLEWMGRIDPEDGGTKYAQKFQG VH 117
RVTFTADTSTSTAYVELSSLRSEDTAVYYCARN EWETVVVGDLMYEYEYWGQGTQVTVSS DIQMTQSPTSLSASLGDRVTITCQASQSISSYL
AWYQQKPGQAPKLLIYGASRLQTGVPSRFSGSG VL 118
SGTSFTLTISGLEAEDAGTYYCQQYDSLPVTFG QGTKVELK DIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCQASQSIVSYL
AWYQQKPGQAPKLLIYGASRLQTGVPSRFSGSG VL 119
SGTSFTLTISGLEAEDAGTYYCQQYASAPVTFG Anticorpo QGTGVELK para GARP DIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCQASQSISSYL variante 3 AWYQQKPGQAPKLLIYGTSRLKTGVPSRFSGSG VL 120
SGTSFTLTISGLEAEDAGTYYCQQYYSAPVTFG QGTKVELK DIQMTQSPSSLSPSLGDRVTITCQASQTISSFL
AWYHQKPGQPPKLLIYRASIPQTGVPSRFSGSG VL 121
SGTSFTLTIGGLEAEDAGTYYCQQYVSAPPTFG QGTKVELK DIQMTQSPSSLSASLGDRVTITCQASQSISSYL
AWYQQKPGQAPNILIYGASRLKTGVPSRFSGSG VL 122
SGTSFTLTISGLEAEDAGTYYCQQYASVPVTFG QGTKVELK QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYY
WSWIRQSPEKGLEWIGEINHGGYVTYNPSLESR VH 123
VTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDY Anticorpo GPGNYDWYFDLWGRGTLVTVSS para 4-1BB EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYL variante 1 AWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSG VL 124
SGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPALT FGGGTKVEIK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYW
MSWVRQAPGKGLEWVADIKNDGSYTNYAPSLTN VH 125 Anticorpo RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARE para 4-1BB LTGTWGQGTMVTVSS variante 2 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLSSG VL 126
NQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYYASTRQSGVPD
SEQ ID ANTICORPO REGIÃO SEQUÊNCIA: Nº:
RFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCLQYDR YPFTFGQGTKLEIK EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFSTYW
ISWVRQMPGKGLEWMGKIYPGDSYTNYSPSFQG VH 127
QVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARG
YGIFDYWGQGTLVTVSS Utomilumab SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDNIGDQYAH
WYQQKPGQSPVLVIYQDKNRPSGIPERFSGSNS VL 128
GNTATLTISGTQAMDEADYYCATYTGFGSLAVF GGGTKLTVL DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISRLL
AWYQQKPGKAPKLLIYVASSLQSGVPSRFSGSG VL 129
SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPWTFG Anticorpo QGTKVEIK para ICOS QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYY variante 1 MHWVRQAPGQGLEWMGWINPHSGGTNYAQKFQG VH 130
RVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCART YYYDSSGYYHDAFDIWGQGTMVTVSS EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYW
MDWVRQAPGKGLVWVSNIDEDGSITEYSPFVKG VH 131
RFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRW Anticorpo GRFGFDSWGQGTLVTVSS para ICOS DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLSGS variante 2 FNYLTWYQQKPGQPPKLLIFYASTRHTGVPDRF VL 132
SGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHHHYNAP PTFGPGTKVDIK QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYG
MNWVRQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYADAFKG VH 133
RVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARD
YGDYGMDYWGQGTTVTVSS Vorsetuzumab DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASKSVSTSG
YSFMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPDRF VL 134
SGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQHSREVP WTFGQGTKVEIK QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSITSSS
YYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYRGSTNYNPSLK VH 135
SRVTISVDSSKNQFYLKVSSVTAVDTAVYYCAR
QNGAARPSWFDPWGQGTLVTVSS Rinucumab EIVLTQSPDTISLSPGERATLSCRASQSISSIY
LAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRVTGIPDRFSVS VL 136
GSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGISPFTF GPGTKVDIR EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYA
YSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGRTYYADSVKG VH 137
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARL
GYGRVDEWGRGTLVTVSS Oleclumab QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSLSNIGRNP
VNWYQQLPGTAPKLLIYLDNLRLSGVPDRFSGS VL 138
KSGTSASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSHPGW TFGGGTKLTVL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWL
AWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSG Anticorpo VL 139
SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPLTFG para CD73
GGTKVEIK
SEQ ID ANTICORPO REGIÃO SEQUÊNCIA: Nº:
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYG
MHWVRQAPGKGLEWVAVILYDGSNKYYPDSVKG VH 140
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARG GSSWYPDSFDIWGQGTMVTVSS EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFTFNSFA
MSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGGTYYADSVKG VH 141
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKD
KILWFGEPVFDYWGQGTLVTVSS Daratumumab EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYL
AWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSG VL 142
SGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPTFG QGTKVEIK QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYD
MSWVRQAPGKGLEWVAKVSSGGGSTYYLDTVQG VH 143
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARH
LHGSFASWGQGTTVTVSS Etaracizumab EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCQASQSISNFL
HWYQQRPGQAPRLLIRYRSQSISGIPARFSGSG VL 144
SGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSGSWPLTFG GGTKVEIK QVQLVESGGGVVQPGRSRRLSCAASGFTFSRYT
MHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGSNKYYVDSVKG VH 145
RFTISRDNSENTLYLQVNILRAEDTAVYYCARE
ARGSYAFDIWGQGTMVTVSS Intetumumab EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYL
AWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSG VL 146
SGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTF GPGTKVDIK EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFVFSRYW
MSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTSSLKD VH 147
RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASL Anticorpo
ITTEDYWGQGTTVTVSS para
EIVLTQSPSSLSLSPGERVTITCKASQDINSYL Integrina
SWYQQKPGKAPKLLIYYANRLVDGVPARFSGSG αvβ8 VL 148
SGQDYTLTISSLEPEDFAVYYCLQYDEFPYTFG GGTKLEIKR QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTASGYTFTDYV
IHWVKQPPGRGLEWIGYINPYDDDTTYNQKFKG VH 149
RVTMLVDTSSNTAYLRLSSVTAEDTAVYYCARR
GNSYDGYFDYSMDYWGSGTPVTVSS Ontuxizumab DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNVGTAV
AWLQQTPGKAPKLLIYSASNRYTGVPSRFSGSG VL 150
SGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQYTNYPMYTF GQGTKVQIK QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNS
VTWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVS VH 151
VKGRITINPDTSKNQFYLQLKSVTPEDAAVYYC
ARDSSILYGDYWGQGTLVTVSS Anticorpo QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNS para FAP VTWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVS VH 152 variante 1 VKGRITINPDTSKNQFYLQLKSVTPEDAAVYYC
ARDSSILYGDYWGQGTLVTVS
QAVLTQPSSLSASPGASASLTCTLPSGINVGTY VL 153
RIFWFQQKPGSPPQYLLSYKSDSDNHQGSGVPS
SEQ ID ANTICORPO REGIÃO SEQUÊNCIA: Nº:
RFSGSKDASANAGILLISGLQSEDEADYYCMIW HSSAWVFGGGTKLTVL QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFTDYY
IHWVRQAPGQGLEWMGWINPNRGGTNYAQKFQG VH 154
RVTMTRDTSIATAYMELSRLRSDDTAVYYCATA Anticorpo SLKIAAVGTFDCWGQGTLVTVSS para FAP SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALSKQYAF variante 2 WFQQKPGQAPILVIYQDTKRPSGIPGRFSGSSS VL 155
GTTVTLTISGAQADDEADYYCQSADSSGTYVFG TGTKVTVL EVQLVETGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSFSTHG
MYWVRQPPGKGLEWVAVISYDGSDKKYADSVKG VH 156
RFTISRDNSKNTVYLEMSSVRAEDTALYYCFCR Anticorpo RDAFDLWGQGTMVTVSS para FAP SYVLTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKKYAY variante 3 WYQQKSGQAPVLVIYEDTKRPSGIPERFSGSSS VL 157
GTMATLTISGAQVEDEADYYCYSTDSSGNYWVF GGGTEVTVL EVQLVESGGGLVEPGGSLRLSCAASGFTFSDAW
MNWVRQAPGKGLEWVGRIKTKSDGGTTDYAAPV VH 158
RGRFSISRDDSKNTLFLEMNSLKTEDTAIYYCF Anticorpo ITVIVVSSESPLDHWGQGTLVTVSS para FAP SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDELPKQYAY variante 4 WYQQKPGQAPVLVIYKDRQRPSGIPERFSGSSS VL 159
GTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSAYSINTYVIF GGGTKLTVL EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYY
MSWIRQAPGKGLEWISYISSGSSYTNYADSVKG VH 160
RFTISRDNAKKSVYLEVNGLTVEDTAVYYCARV Anticorpo RYGDREMATIGGFDFWGQGTLVTVSS para FAP SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGDALPKQYAY variante 5 WYQQSPGQAPVLVIYKDSERPSGIPERFSGSSS VL 161
GTTVTLTISGVQAEDEADYYCQSADSGGTSRIF GGGTKLTVL QVQLQESGPGLVRSTETLSLTCLVSGDSINSHY
WSWLRQSPGRGLEWIGYIYYTGPTNYNPSLKSR VH 162
VSISLGTSKDQFSLKLSSVTAADTARYYCARNK Anticorpo VFWRGSDFYYYMDVWGKGTTVTVSS para FAP EIVLTQSPGTLSLSLGERATLSCRASQSLANNY variante 6 LAWYQQKPGQAPRLLMYDASTRATGIPDRFSGS VL 163
GSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQFVTSHHMY IFGQGTKVEIK HVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSNN
YYWGWIRQTPGKGLEWIGSIYYSGSTNYNPSLK VH 164
SRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR GARWQARPATRIDGVAFDIWGQGTMVTVSS
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSNN Anticorpo YYWGWIRQTPGKGLEWIGSIYYSGSTNYNPSLK VH 165 para FAP SRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR variante 7 GARWQARPATRIDGVAFDIWGQGTMVTVSS
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYG
ISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQG VH 166
RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARD WSRSGYYLPDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID ANTICORPO REGIÃO SEQUÊNCIA: Nº:
ETTLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQTVTRNY
LAWYQQKPGQAPRLLMYGASNRAAGVPDRFSGS VL 167
GSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQFGSPYTFG QGTKVEIK DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLLHSN
GYNYLDWYLQRPGQSPHLLIFLGSNRASGVPDR VL 168
FSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCMQALQT PPTFGQGTKVEIK QVQLVESGGGVVQPGRSRRLSCAASGFTFSRYT
MHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGSNKYYVDSVKG VH 171
RFTISRDNSENTLYLQVNILRAEDTAVYYCARE Anticorpo
ARGSYAFDIWGQGTMVTVSS para
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYL Integrina αv
AWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSG variante 1 VL 172
SGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPFTF GPGTKVDIK DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYL
AWYQQKPGKAPKLLIYYTSKIHSGVPSRFSGSG VL 173
SGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQGNTFPYTFG Anticorpo
QGTKVEIK para
QVQLQQSGGELAKPGASVKVSCKASGYTFSSFW Integrina αv
MHWVRQAPGQGLEWIGYINPRSGYTEYNEIFRD variante 2 VH 174
KATMTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCASF LGRGAMDYWGQGTTVTVSS QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGV
YYWTWIRQHPGNGLEWIGYIYYSGSTSYNPSLK VH 175 Anticorpo SRVTISVDTSKKQFSLNLTSVTAADTAVYYCAR para EGPLRGDYYYGLDVWGQGTTVTVSS Integrina EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRAGQTISSRY αvβ6 LAWYQQKPGQAPRPLIYGASSRATGIPDRFSGS VL 176 variante 1 GSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPRTF
GQGTKVEIK QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGG
YYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLK VH 177 Anticorpo SRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAMYYCAR para YRGPAAGRGDFYYFGMDVWGQGTTVTVSS Integrina DIVMTQTPLSLSVTPGQPASIFCKSSQSLLNSD αvβ6 GKTYLCWYLQKPGQPPQLLIYEVSNRFSGVPDR VL 178 variante 2 FSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGIQL
PWAFFGQGTKVEIK QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYG
MHWVRQAPGKGLEWVAVIWYGGSNKYYADSVKG VH 179 Anticorpo RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARD para LAARRGDYYYYGMDVWGQGTTVTVSS Integrina SSELTQDPVVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYLS αvβ6 WYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSNS VL 180 variante 3 GNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNHLFG
GGTKLTVL
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGG Anticorpo YYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGRTYNNPSLK VH 181 para SRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR Integrina VATGRADYHFYAMDVWGQGTTVTVSS αvβ6 SYELTQPSSVSVSPGQTARITCSGDVLAKKSAR VL 182 variante 4 WFHQKPGQAPVLVIYKDSERPSGIPERFSGSSS
SEQ ID ANTICORPO REGIÃO SEQUÊNCIA: Nº:
GTTVTLTISGAQVEDEAAYYCYSAADNNLVFGG GTKLTVL QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYD
MHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKG VH 183
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARG
SGNWGFFDYWGQGTLVTVSS Varlilumab DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISRWL
AWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSG VL 184
SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNTYPRTFG QGTKVEIK QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYR
MHWVRQAPGQGLEWIGYINPSTGYTEYNQKFKD VH 185
KATITADESTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARG
GGVFDYWGQGTLVTVSS Zinbryta®
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCSASSSISYMH (Daclizumab)
WYQQKPGKAPKLLIYTTSNLASGVPARFSGSGS VL 186
GTEFTLTISSLQPDDFATYYCHQRSTYPLTFGQ GTKVEVK QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYG
MHWVRQAPGKGLEWVAVIWYEGSNKYYADSVKG VH 187
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARG
GSMVRGDYYYGMDVWGQGTTVTVSS Anticorpo
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSAL para GITR
AWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSG VL 188
SGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPYTFG
QGTKLEIK Anticorpo EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYKFSSYW
IEWVKQAPGQGLEWIGEILPGSDTTNYNEKFKD huM25 para VH 189 RATFTSDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARD
RGNYRAWFGYWGQGTLVTVSS LRRC15
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYL
NWYQQKPGGAVKFLIYYTSRLHSGVPSRFSGSG VL 190 SGTDYTLTISSLQPEDF
ATYFCQQGEALPWTFGGGTKVEIK Anticorpo VH 191 EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFTDYY
IHWVKQAPGQGLEWIGLVYPYIGGTNYNQKFKG huAD208.4.1 KATLTVDTSTTTAYMEMSSLRSEDTAVYYCARG
DNKYDAMDYWGQGTTVTVSS para LRRC15 VL 192 DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASQSVSTSS
YSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYASSLESGVPDRF SGSGSGTDFTLTISSLQ
AEDVAVYYCEQSWEIRTFGGGTKVEIK Anticorpo VH 193 EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTNYW
MHWVKQAPGQGLEWIGMIHPNSGSTKHNEKFRG huAD208.12.1 KATLTVDESTTTAYMELSSLRSEDTAVYYCARS
DFGNYRWYFDVWGQGTTVTVSS para LRRC15 VL 194 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSSSNNL
HWYQQKPGQAPRVLIKYVSQSISGIPARFSGSG SGTDFTLTISSLEPEDFA VYFCQQSNSWPFTFGQGTKLEIK
SEQ ID ANTICORPO REGIÃO SEQUÊNCIA: Nº: Anticorpo VH 195 EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGFTFTDYY
IHWVKQAPGQGLEWIGLVYPYIGGSSYNQQFKG huAD208.14.1 KATLTVDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARG
DNNYDAMDYWGQGTTVTVSS para LRRC15 VL 196 DIVLTQSPDSLAVSLGERATISCRASQSVSTST
YNYMHWYQQKPGQPPKLLVKYASNLESGVPDRF SGSGSGTDFTLTISSL
QAEDVAVYYCHHTWEIRTFGGGTKVEIK Anticorpo VH 197 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFSLTSYG
VHWVRQATGKGLEWLGVIWAGGSTNYNSALMSR hu139.10 LTISKENAKSSVYLQMNSLRAGDTAMYYCATHM
ITEDYYGMDYWGQGTTVTVSS para LRRC15 VL 198 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSR
TRKNYLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPD RFSGSGSGTDFTLTISS
LQAEDVAVYYCKQSYNLPTFGGGTKVEIK Domínio de Ligação ao Alvo
[00158] Um construto de anticorpo pode ainda compreender um domínio de ligação ao alvo. Um domínio de ligação ao alvo pode compreender um domínio que se liga a um alvo. Um alvo pode ser um antígeno. Um domínio de ligação ao alvo pode compreender um domínio de ligação ao antígeno. Um domínio de ligação ao alvo pode ser um domínio que pode se ligar especificamente a um antígeno. Um domínio de ligação ao alvo pode ser uma porção de ligação ao antígeno de um anticorpo ou fragmento de anticorpo. Um domínio de ligação ao alvo pode ser um ou mais fragmentos de um anticorpo que pode reter a capacidade de se ligar especificamente a um antígeno. Um domínio de ligação ao alvo pode ser qualquer fragmento de ligação ao antígeno. Um domínio de ligação ao alvo pode estar em um scaffold, em que um scaffold é uma estrutura de suporte para o domínio de ligação ao antígeno.
Um domínio de ligação ao alvo pode compreender um domínio de ligação ao antígeno em um scaffold.
[00159] Um domínio de ligação ao alvo pode compreender um domínio de ligação ao antígeno que se refere a uma porção de um anticorpo compreendendo a porção de reconhecimento do antígeno, isto é, uma região variável determinante antigênica de um anticorpo suficiente para conferir reconhecimento e ligação da porção de reconhecimento do antígeno a um alvo, tal como um antígeno, isto é, o epítopo. Um domínio de ligação ao alvo pode compreender um domínio de ligação ao antígeno de um anticorpo.
[00160] Um Fv pode ser o fragmento de anticorpo mínimo que contém um local completo de reconhecimento e ligação ao antígeno. Esta região pode consistir em um dímero de um domínio variável de cadeia pesada e um domínio variável de cadeia leve em associação estreita não covalente. Nesta configuração, as três CDRs de cada domínio variável podem interagir para definir um local de ligação ao antígeno na superfície do dímero VH-VL. Um domínio variável único (ou metade de um Fv compreendendo apenas três CDRs específicos para um antígeno) pode reconhecer e ligar o antígeno, embora com uma afinidade menor do que todo o local de ligação.
[00161] Um domínio de ligação ao alvo pode ser pelo menos 80% idêntico a um domínio de ligação ao antígeno selecionado a partir de, mas não se limitando a, um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo recombinante ou um fragmento funcional do mesmo, por exemplo, um domínio variável de cadeia pesada (VH) e um domínio variável de cadeia leve (VL), um fragmento variável de cadeia simples (scFv), ou um DARPin, um afímero, um avímero, um knottin, um monocorpo, um clamp de afinidade, um ectodomínio, um ectodomínio de receptor, um receptor, uma citocina, um ligante, uma imunocitocina, um receptor de células T ou um receptor de células T recombinante.
[00162] Um domínio de ligação ao alvo pode estar ligado a um construto de anticorpo. Por exemplo, um construto de anticorpo pode ser fundido com um domínio de ligação ao alvo para criar uma fusão de domínio de ligação ao alvo com construto de anticorpo. A fusão de construto de anticorpo- domínio de ligação ao alvo pode ser o resultado da sequência de ácidos nucleicos do domínio de ligação ao alvo ser expressa in frame com a sequência de ácidos nucleicos do construto de anticorpo. A fusão de construto de anticorpo- domínio de ligação ao alvo pode ser o resultado de uma sequência de nucleotídeos genéticos in-frame ou uma sequência de peptídeos contígua que codifica o construto de anticorpo com o domínio de ligação ao alvo. Como outro exemplo, um domínio de ligação ao alvo pode estar ligado a um construto de anticorpo. Um domínio de ligação ao alvo pode estar ligado a um construto de anticorpo por uma conjugação química. Um domínio de ligação ao alvo pode estar anexado a um terminal de uma região Fc. Um domínio de ligação ao alvo pode estar anexado a um terminal de um domínio Fc.
Um domínio de ligação ao alvo pode estar anexado a um terminal de um construto de anticorpo. Um domínio de ligação ao alvo pode estar anexado a um terminal de um anticorpo. Um domínio de ligação ao alvo pode estar anexado a uma cadeia leve de um anticorpo. Um domínio de ligação ao alvo pode estar anexado a um terminal de uma cadeia leve de um anticorpo. Um domínio de ligação ao alvo pode estar anexado a uma cadeia pesada de um anticorpo. Um domínio de ligação ao alvo pode estar anexado a um terminal de uma cadeia pesada de um anticorpo. O terminal pode ser um C-terminal. Um construto de anticorpo pode estar anexado a 1, 2, 3 e/ou 4 domínios de ligação ao alvo. O domínio de ligação ao alvo pode direcionar o construto de anticorpo para, por exemplo, uma célula ou tipo de célula em particular. Um domínio de ligação ao alvo de um construto de anticorpo pode ser selecionado a fim de reconhecer um antígeno, por exemplo, um antígeno expresso em uma célula imunitária. Um antígeno pode ser um peptídeo ou fragmento do mesmo. Um antígeno pode ser expresso em uma célula que apresenta um antígeno. Um antígeno pode ser expresso em uma célula dendrítica, um macrófago ou uma célula B. Como outro exemplo, um antígeno pode ser um antígeno tumoral. O antígeno tumoral pode ser qualquer antígeno tumoral descrito nesse documento. Quando vários domínios de ligação ao alvo estão anexados a um construto de anticorpo, os domínios de ligação ao alvo podem se ligar ao mesmo antígeno. Quando vários domínios de ligação ao alvo estão anexados a um construto de anticorpo, os domínios de ligação ao alvo podem ligar diferentes antígenos.
[00163] Em determinadas modalidades, um construto de anticorpo se liga especificamente a um segundo antígeno. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao alvo está ligado ao referido construto de anticorpo em uma extremidade C-terminal do referido domínio Fc.
[00164] Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao alvo se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno em uma célula T, uma célula B, uma célula estrelada, uma célula endotelial, uma célula tumoral, uma APC, uma célula de fibroblasto , uma célula de fibrócito ou uma célula associada à patogênese da fibrose. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao alvo se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno em uma célula T, uma APC e/ou uma célula B. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao alvo pode se ligar especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno selecionado do grupo que consiste em CLTA4, PD-1, OX40, LAG-3, GITR, GARP, CD25, CD27, PD-L1, TNFR2, ICOS, 41BB, CD70, CD73, CD38, ou VTCN1. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao alvo se liga especificamente a um antígeno que é um antígeno em uma célula T, uma célula B, uma célula estrelada, uma célula endotelial, uma célula tumoral, uma APC, uma célula de fibroblasto, uma célula de fibrócito ou uma célula associada à patogênese da fibrose. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao alvo se liga especificamente a um antígeno que é um antígeno em uma célula T, uma APC e/ou uma célula B. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao alvo pode se ligar especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno selecionado do grupo que consiste em CLTA4, PD-1, OX40, LAG- 3, GITR, GARP, CD25, CD27, PD-L1, TNFR2, ICOS, 41BB, CD70, CD73, CD38, ou VTCN1.
Ligação de Ligantes ao Construto de Anticorpo
[00165] Os conjugados descritos nesse documento podem compreender um ligante, por exemplo, um ligante peptídico.
Os ligantes dos conjugados e métodos podem não afetar a ligação das porções ativas de um conjugado (por exemplo, as porções ativas incluem domínios de ligação ao antígeno, domínios Fc, domínios de ligação ao alvo, anticorpos, compostos amino-pirazinocarboxamida, inibidores ou semelhantes) a um alvo, que pode ser um parceiro de ligação cognato, como um antígeno. Um ligante pode formar uma ligação entre diferentes partes de um conjugado, por exemplo, entre um construto de anticorpo ou fração de alvejamento e um composto da divulgação. Em determinadas modalidades, um conjugado compreende múltiplos ligantes. Em determinadas modalidades, em que um conjugado compreende vários ligantes, os ligantes podem ser os mesmos ligantes ou ligantes diferentes.
[00166] Um ligante pode estar ligado a um construto de anticorpo ou fração de alvejamento por uma ligação entre a fração de alvejamento do construto de anticorpo e o ligante. Um ligante pode estar ligado a um construto de anticorpo de antígeno antitumoral por uma ligação entre o construto de anticorpo de antígeno antitumoral e o ligante.
Um ligante pode estar ligado a um terminal de uma sequência de aminoácidos de um construto de anticorpo, ou poderá estar ligado a uma modificação da cadeia lateral do construto de anticorpo, tal como a cadeia lateral de uma lisina, serina, treonina, cisteína, tirosina, aspártico ácido, glutamina, um resíduo de aminoácido não natural ou resíduo de ácido glutâmico. Um ligante pode estar ligado a um terminal de uma sequência de aminoácidos de uma região Fc de um construto de anticorpo, ou pode estar ligado a uma modificação da cadeia lateral de uma região Fc de um construto de anticorpo, tal como a cadeia lateral de uma lisina, serina, treonina, cisteína, tirosina, ácido aspártico, glutamina, um resíduo de aminoácido não natural ou resíduo de ácido glutâmico. Um ligante pode estar ligado a um terminal de uma sequência de aminoácidos de um domínio Fc de um construto de anticorpo, ou pode estar ligado a uma modificação da cadeia lateral de um domínio Fc de um construto de anticorpo, tal como a cadeia lateral de uma lisina, serina, treonina, cisteína, tirosina, ácido aspártico, glutamina, um resíduo de aminoácido não natural ou resíduo de ácido glutâmico.
[00167] Um ligante pode estar ligado a um construto de anticorpo em uma cisteína interdomínios. Um ligante pode estar ligado a um construto de anticorpo em uma lisina de domínio constante de cadeia leve. Um ligante pode estar ligado a um construto de anticorpo em uma cisteína manipulada na cadeia leve. Um ligante pode estar ligado a um construto de anticorpo em uma lisina da região Fc. Um ligante pode estar ligado a um construto de anticorpo em uma lisina do domínio Fc. Um ligante pode estar ligado a um construto de anticorpo em uma cisteína da região Fc. Um ligante pode estar ligado a um construto de anticorpo em uma cisteína do domínio Fc. Um ligante pode estar ligado a um construto de anticorpo em uma glutamina de cadeia leve, como uma glutamina manipulada. Um ligante pode estar ligado a um construto de anticorpo em um aminoácido não natural manipulado em uma cadeia leve. Um ligante pode estar ligado a um construto de anticorpo em um aminoácido não natural manipulado em uma cadeia pesada. Os aminoácidos podem ser manipulados em uma sequência de aminoácidos de um construto de anticorpo, por exemplo, um ligante de um conjugado. Os aminoácidos manipulados podem ser adicionados a uma sequência de aminoácidos existentes. Os aminoácidos manipulados podem ser substituídos por um ou mais aminoácidos existentes de uma sequência de aminoácidos.
[00168] Um ligante pode ser conjugado a um construto de anticorpo por um grupo sulfidrila no construto de anticorpo. Um ligante pode ser conjugado a um construto de anticorpo por uma amina primária no construto de anticorpo.
Um ligante pode ser conjugado a um construto de anticorpo por resíduo de um aminoácido não natural em um construto de anticorpo, por exemplo, uma fração cetona.
[00169] Em determinadas modalidades, quando um ou mais ligantes estão ligados, por exemplo, covalentemente, a um construto de anticorpo em locais no construto, um domínio Fc do construto de anticorpo pode se ligar a receptores Fc.
Em determinadas modalidades, um construto de anticorpo ligado a um ligante ou um construto de anticorpo ligado a um ligante ligado a um composto de amino-pirazinocarboxamida retém a capacidade do domínio Fc do anticorpo de se ligar a receptores Fc. Em determinadas modalidades, quando um ligante está ligado a um construto de anticorpo, o domínio de ligação ao antígeno de um construto de anticorpo ligado a um ligante ou um construto de anticorpo ligado a um ligante ligado a um composto de amino-pirazinocarboxamida pode ligar o seu antígeno. Em determinadas modalidades, quando um ligante está ligado a um construto de anticorpo nos locais descritos nesse documento, um domínio de ligação ao alvo de um construto de anticorpo ligado a um ligante ou um construto de anticorpo ligado a um ligante ligado a um composto de amino-pirazinocarboxamida pode ligar o seu antígeno.
[00170] Em determinadas modalidades, um ligante ou ligante ligado a um composto de amino-pirazinocarboxamida pode estar anexado a um resíduo de aminoácido de um domínio Fc de IgG selecionado a partir de: 221, 222, 224, 227, 228, 230, 231, 223, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 246, 247, 249, 250, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 278, 280, 281, 283, 285, 286, 288, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 302, 305, 313, 317, 318, 320, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 396, 428 ou qualquer subconjunto dos mesmos, em que a numeração de resíduos de aminoácidos no domínio Fc está de acordo com o índice UE como em Kabat.
[00171] Em determinadas modalidades, um ligante ou ligante ligado a um composto de amino-pirazinocarboxamida não está anexado a um resíduo de aminoácido de um domínio Fc de IgG selecionado a partir de: 221, 222, 224, 227, 228, 230, 231, 223, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 246, 247, 249, 250, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 278, 280, 281, 283, 285, 286, 288, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 302, 305, 313, 317, 318, 320, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 396, 428 ou qualquer subconjunto dos mesmos, em que a numeração de resíduos de aminoácidos no domínio Fc está de acordo com o índice UE como em Kabat.
Bioconjugação à base de lisina
[00172] Um construto de anticorpo pode ser conjugado a um ligante por meio de bioconjugação à base de lisina. Um construto de anticorpo pode ser deslocado para um tampão apropriado, por exemplo, fosfato, borato, PBS, histidina, Tris-acetato a uma concentração de cerca de 2 mg/mL a cerca de 10 mg/mL. Um número apropriado de equivalentes de um construto de um composto de amino-pirazinocarboxamida e um ligante, o linker-payload, conforme descrito nesse documento, pode ser adicionado como uma solução com agitação.
Dependendo das propriedades físicas do linker-payload, um cosolvente pode ser introduzido antes da adição do linker- payload do ligante para facilitar a solubilidade. A reação pode ser agitada em temperatura ambiente por 2 horas a cerca de 12 horas dependendo da reatividade observada. A progressão da reação pode ser monitorada por LC-MS. Uma vez que a reação esteja completa, os linker-payloads restantes podem ser removidos por métodos aplicáveis e o conjugado de anticorpo pode ser deslocado para o tampão de formulação desejado. Os conjugados ligados por lisina podem ser sintetizados começando com anticorpo ab (mAb) e linker-payload, por exemplo, 10 equivalentes, seguindo o Esquema A abaixo (Conjugado = conjugado de anticorpo). O conteúdo de monômero e as razões de fármaco-construto de anticorpo (razões molares) podem ser determinadas por métodos descritos nesse documento.
Esquema A.
Bioconjugação à base de cisteína
[00173] Um construto de anticorpo pode ser conjugado a um ligante por bioconjugação à base de cisteína. Um construto de anticorpo pode ser deslocado para um tampão apropriado, por exemplo, fosfato, borato, PBS, histidina, Tris-acetato a uma concentração de cerca de 2 mg/mL a cerca de 10 mg/mL com um número apropriado de equivalentes de um agente redutor, por exemplo, ditiotreitol ou tris(2- carboxietil)fosfina. A solução resultante pode ser agitada por um período de tempo e a temperatura apropriados para efetuar a redução desejada. Um construto de um composto de amino-pirazinocarboxamida e um ligante podem ser adicionados como uma solução com agitação. Dependendo das propriedades físicas do linker-payload, um cosolvente pode ser introduzido antes da adição do linker-payload para facilitar a solubilidade. A reação pode ser agitada em temperatura ambiente por cerca de 1 hora a cerca de 12 horas dependendo da reatividade observada. A progressão da reação pode ser monitorada por cromatografia líquida-espectrometria de massa (LC-MS). Uma vez que a reação esteja completa, o linker- payload livre restante pode ser removido por métodos aplicáveis e o conjugado de anticorpo pode ser deslocado para o tampão de formulação desejado. Os referidos conjugados à base de cisteína podem ser sintetizados começando com um anticorpo (mAb) e linker-payload, por exemplo, 7 equivalentes, usando as condições descritas no Esquema B abaixo (Conjugado = conjugado de anticorpo). O conteúdo de monômero e as razões fármaco-anticorpo podem ser determinados por métodos descritos nesse documento.
Esquema B.
Compostos
[00174] O que se segue é uma discussão de compostos e sais dos mesmos que podem ser usados nos métodos da divulgação. Os compostos e sais descritos nas Fórmulas (I- A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E) (II-A), (II-B), (II-C) e (II- D) e na Tabela 14 podem ser covalentemente ligados, a ligantes, L3, que podem ainda ser covalentemente ligados a construtos de anticorpo ou frações de alvejamento.
[00175] Em um primeiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I): Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: O Anel A é cicloalquila não substituído ou substituído, heterocicloalquila não substituído ou substituído, arila não substituído ou substituído ou heteroarila não substituído ou substituído, em que quando o Anel A é substituído, os substituintes no Anel A são independentemente selecionados em cada ocorrência de R4; cada R4 é selecionado a partir de RL e R20, ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
RL é ;
cada Y é independentemente C1-C6alquileno substituído ou não substituído; em que quando Y é substituído, os substituintes em Y são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R5;
cada R5 é selecionado a partir de R20, ou dois R5 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído, ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
cada Z é independentemente -NR6S(=O)2-, -S(=O)2NR6-, -
OC(=O)-, -C(=O)O-, -C(=O)NR6-, ou -NR6C(=O)-; em que cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-
C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído e heterociclo não substituído ou substituído, ou um R5 e um R6 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
L é C1-C6alquila não substituído ou substituído, C2 -
C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
-C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou -C1-
C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído; em que quando L é substituído, os substituintes em L são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R7;
cada R7 é selecionado a partir de -SSR50 e R20;
s é 1-10;
R1 é selecionado a partir de hidrogênio e R20;
cada R2 é independentemente selecionado a partir de R20,
ou dois R2 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
m é 0-3;
R3 é selecionado a partir de (i), (ii), (iii) e (iv):
(i) arila não substituído ou substituído, ou heteroarila não substituído ou substituído; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R10;
(ii) cicloalquila não substituído ou substituído, ou heterocicloalquila não substituído ou substituído; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R11;
(iii) heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído, heterocicloalquila monocíclico de 3 a 5 membros não substituído ou substituído,
heterocicloalquila monocíclico de 6 a 8 membros não substituído ou substituído compreendendo 1 ou 2 átomos de N e 1 ou 2 outros heteroátomos selecionados de O ou
S; em que quando R3 é substituído, os substituintes em
R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R11; e
(iv) ;
em que quando R3 está na posição 2-, 5- ou 6- da piridina,
R3 é selecionado a partir de (i), (ii) e (iv), e quando R3 está na posição 4 da piridina, R3 é selecionado de (i), (iii)
e (iv); e cada R10 é selecionado a partir de R20, ou dois R10 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
cada R11 é selecionado a partir de =O, =S e R20;
R12 é hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-C6alquenila não substituído ou substituído,
C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, C1-C6alquenila-carbociclo não substituído ou substituído ou C1-C6alquileno-heterociclo substituído ou não substituído;
Q é -OR13, -NR13R13, -SR13, -CN, -C(=O)R14, -C(=O)NR13R13,
-S(=O)R14, ou -S(=O)2R14, ou -S(=O)2NR13R13;
R13 é hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-C6alquenila não substituído ou substituído,
C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, C1-C6alquenila-carbociclo não substituído ou substituído ou C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
R14 é C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-
C6alquenila não substituído ou substituído, C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou
-C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada U1 é -(CR15R16)-, em que cada R15 e R16 são selecionados independentemente a partir de hidrogênio e R20;
r é 1-5;
cada R20 é independentemente halogênio, -CN, -OH, -OR50,
-SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50,
-S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -OC(=O)OR51,
-C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50,
-NR51C(=O)OR51, C1-C6alquila não substituído ou substituído,
C2-C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
-C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído,
ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada R50 é independentemente selecionado a partir de C1-
C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada R51 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído,
carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
ou dois R51 no mesmo átomo de N são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N não substituído ou substituído;
em que quando qualquer um de R2, R4, R5, R6, R10, R12,
R13, R14, R20, R50 e R51 são substituídos, substituintes em R2,
R4, R5, R6, R10, R12, R13, R14, R20, R50 e R51 são selecionados independentemente em cada ocorrência de halogênio, -CN, - NO2, -OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, - NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, -SR52, -S(=O)R53, -SO2R53, - SO2NR52R52, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1- C6haloalquila, carbociclo monocíclico não substituído ou substituído, heterocíclico não substituído ou substituído, ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar um C=O ou C=S; cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros; ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N; e cada R53 é independentemente selecionado a partir de C1- C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros.
[00176] Em um segundo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é hidrogênio, halogênio, -CN, -OH, -OR50, -SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, - OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1 - C6alquila não substituído ou substituído, ou carbociclo substituído ou não substituído.
[00177] Em um terceiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é hidrogênio, halogênio, -CN, -OH, -OR50, -SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, ou C1-C6alquila.
[00178] Em um quarto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é hidrogênio, halogênio, -CN ou -NH2.
[00179] Em um quinto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é hidrogênio.
[00180] Em um sexto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é metila.
[00181] Em um sétimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-6 e cada R2 é, independentemente, halogênio, -CN, -OH, -OR50, - SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, - S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído, ou carbociclo não substituído ou substituído.
[00182] Em um oitavo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-6 e cada R2 é independentemente halogênio, -CN, -OH, -OR50, -NO2,
-NR51R51, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)2NR51R51, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído ou heterociclo não substituído ou substituído.
[00183] Em um nono aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-6 e cada R2 é, independentemente, -F, -Cl, -Br, -CN, -OH, -OR50, -NR51R51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, ou C1-C6alquila não substituído ou substituído.
[00184] Em um décimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-6 e cada R2 é, independentemente, -F, -Cl, -Br, -CN, -OH, -OMe, -NH2, -NMe2, ou C1-C6alquila.
[00185] Em um décimo primeiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-6 e cada R2 é independentemente -Cl ou -NH2.
[00186] Em um décimo segundo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-6 e R2 é halogênio.
[00187] Em um décimo terceiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-6 e R2 é metila.
[00188] Em um décimo quarto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-6 e dois R2 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, dois R2 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar fenila monocíclico não substituído ou substituído ou heteroarila monocíclico de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído.
[00189] Em um décimo quinto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 e R2 são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-14 e m é 0, 1, 2 ou 3.
[00190] Em um décimo sexto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 e R2 são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-14 e m é 1.
[00191] Em um décimo sétimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 e R2 são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-14 e m é 2.
[00192] Em um décimo oitavo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-6 e m é 0.
[00193] Em um décimo nono aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-18 e o Anel A é cicloalquila não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, o Anel A é cicloalquila monocíclico não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, o anel A é cicloalquila monocíclico saturado não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, o Anel A é C3-C8cicloalquila não substituído ou substituído.
Em algumas modalidades, o Anel A é ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila ou ciclooctila não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, o Anel A é cicloalquila insaturado não substituído ou substituído.
Em algumas modalidades, o Anel A é ciclobutenila, ciclopentenila, ciclohexenila, cicloheptenila ou ciclooctenila não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, o Anel A é cicloalquila policíclico não substituído ou substituído.
[00194] Em um vigésimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-18 e o Anel A é heterocicloalquila não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, o Anel A é heterocicloalquila saturado não substituído ou substituído.
Em algumas modalidades, o Anel A é heterocicloalquila monocíclico saturado não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, o Anel A é aziridinila, azetidinila, oxetanila, tietanila, pirrolidinila, pirazolidinila, imidazolidinila, tetra-hidrofuranila, dioxolanila, tetra- hidrotiofenila, oxatiolanila, piperidinila, piperazinila, tetra-hidropiranila, dioxanila, tianila, ditianila, morfolinila, tiomorfolinila, azepanila ou oxazepanila. Em algumas modalidades, o Anel A é piperidinila ou piperazinila não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, o Anel A é heterociclo insaturado não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, o Anel A é pirrolinila (di-hidropirrolila), pirazolinila (di-hidropirazolila), imidazolinila (di-hidroimidazolila), triazolinila (di- hidrotriazolila), di-hidrofuranila, di-hidrotiofenila, oxazolinila (di-hidrooxazolila), isoxazolinila (di- hidroisoxazolila), tiazolinila (di-hidrotiazolila), isotiazolinila (di-hidroisotiazolila), oxadiazolinila (di- hidrooxadiazolila), tiadiazolinila (di-hidrotiadiazolila),
di-hidropiridinila, tetra-hidropiridinila, di- hidropiridazinila, tetra-hidropiridazinila, di- hidropirimidinila, tetra-hidropirimidinila, di- hidropirazinila, tetra-hidropirazinila, piranila, di- hidropiranila, tiopiranila, di-hidrotiopiranila, dioxinila, di-hidrodioxinyila, oxazinila, di-hidrooxazineila, tiazinila, ou di-hidrotiazinila. Em algumas modalidades, o Anel A é heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, o Anel A é heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído que é um heterocicloalquila em ponte, fundido ou espiro. Em algumas modalidades, o Anel A é heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído que é um heterocicloalquila em ponte. Em algumas modalidades, o Anel A é heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído que é um heterocicloalquila fundido. Em algumas modalidades, o Anel A é heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído que é um espiro- heterocicloalquila.
[00195] Em um vigésimo primeiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-18 e o Anel A é:
em que:
W1 é N ou CR21;
R21 é hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-C6alquenila não substituído ou substituído,
C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquila (carbociclo) não substituído ou substituído ou C-C6alquila (heterociclo) não substituído ou substituído;
W2 é NR22, O, S ou S (=O)2;
R22 é hidrogênio, -S(=O)2R50, -S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, -
C(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-C6alquenila não substituído ou substituído, C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído,
heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquila
(carbociclo) não substituído ou substituído ou -C1-C6alquila
(heterociclo) substituído ou não substituído;
cada U2, U2', U3 e U3' é C(R23)2;
cada R23 é independentemente hidrogênio ou R20; e pl, p2, p3 e p4 são cada um independentemente 1-3.
[00196] Em um vigésimo segundo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-18 e o Anel A é conforme estabelecido no aspecto
21. Em algumas dessas modalidades, W1 é N. Em algumas dessas modalidades, W1 é CR21. Em algumas dessas modalidades, W1 é CR21; e R21 é hidrogênio ou C1-C6alquila. Em algumas dessas modalidades, W1 é CH. Em algumas dessas modalidades, W2 é O.
Em algumas dessas modalidades, W2 é S. Em algumas dessas modalidades, W2 é S(=O)2. Em algumas dessas modalidades, W2 é NR22. Em algumas dessas modalidades, W2 é NR22; e R22 é hidrogênio, -C(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, ou C1 - C6alquila não substituído ou substituído. Em algumas dessas modalidades, W2 é NR22; e R22 é hidrogênio, Boc, Fmoc ou Cbz.
Em algumas dessas modalidades, W2 é NH. Em algumas modalidades, W2 é NBoc. Em algumas modalidades, cada R23 é independentemente hidrogênio, halogênio, -CN, -OH, -OR50, - NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, - NR51C(=O)R50, ou C1-C6alquila não substituído ou substituído.
Em algumas modalidades, cada R23 é, independentemente, hidrogênio, halogênio, -OH, -OMe, -NH2 ou C1-C6alquila. Em algumas modalidades, cada R23 é hidrogênio. Em algumas modalidades, p1 é 1 a 3. Em algumas modalidades, p1 é 1 a 2, 1 a 3 ou 2 a 3. Em algumas modalidades, p1 é 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, p2 é 1 a 3. Em algumas modalidades, p2 é 1 a 2, 1 a 3 ou 2 a 3. Em algumas modalidades, p2 é 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, p3 é 1 a 3. Em algumas modalidades, p3 é 1 a 2, 1 a 3 ou 2 a 3. Em algumas modalidades, p3 é 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, p4 é 1 a 3. Em algumas modalidades, p4 é 1 a 2, 1 a 3 ou 2 a 3. Em algumas modalidades, p4 é 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades,
p1, p2, p3 e p4 são, cada um, independentemente 1 ou 2. Em algumas modalidades, W1 é N; W2 é NR22; R22 é hidrogênio, -
C(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, ou C1-C6alquila não substituído ou substituído; cada R23 é independentemente hidrogênio, halogênio, -CN, -OH, -OR50, -NR51R51, -C(=O)R50, -
OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, e C1 -
C6alquila não substituído ou substituído; e p1, p2, p3 e p4 são cada um independentemente 1-2. Em algumas dessas modalidades, o Anel A é . Em algumas modalidades, o Anel A é ,
ou
[00197] Em um vigésimo terceiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-18 e o Anel A é aril ou heteroaril.
[00198] Em um vigésimo quarto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-18 e o Anel A é fenila não substituído ou substituído.
[00199] Em um vigésimo quinto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-18 e o Anel A é fenila substituído.
[00200] Em um vigésimo sexto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-18 e o Anel A é piridinila substituído ou não substituído.
[00201] Em um vigésimo sétimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m e o Anel A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é aril não substituído ou substituído, ou heteroaril não substituído ou substituído.
[00202] Em um vigésimo oitavo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m e o Anel A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é fenila não substituído ou substituído.
[00203] Em um vigésimo nono aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m e o Anel A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é fenila não substituído.
[00204] Em um trigésimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m e o Anel A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é heteroaril de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído.
[00205] Em um trigésimo primeiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m e o Anel A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é pirrol não substituído ou substituído, furano, tiofeno, imidazol, pirazol, oxazol, isoxazol, tiazol, isotizol, triazol, oxadiazol, tiadiazol, tetrazol, piridina, piridazina, pirimidina, pirazina ou triazina. Em algumas modalidades, R3 é piridina substituída ou não substituída, piridazina, pirimidina, pirazina ou triazina. Em algumas modalidades, R3 é piridina não substituída ou substituída. Em algumas modalidades, R3 é piridazina substituída ou não substituída. Em algumas modalidades, R3 é pirimidina não substituída ou substituída.
Em algumas modalidades, R3 é pirazina não substituída ou substituída. Em algumas modalidades, R3 é pirrol não substituído ou substituído, furano, tiofeno, imidazol, pirazol, oxazol, isoxazol, tiazol, isotizol, triazol, oxadiazol, tiadiazol ou tetrazol.
[00206] Em um trigésimo segundo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m e o Anel A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é imidazol não substituído ou substituído, triazol ou piridina.
[00207] Em um trigésimo terceiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m e o Anel A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é aril policíclico ou heteroaril. Em algumas modalidades, R3 é aril bicíclico ou heteroaril. Em algumas modalidades, R3 é naftila. Em algumas modalidades, R3 é indol, isoindol, indolizina, indazol, benzimidazol, azaindol, azaindazol, purina, benzofurano, isobenzofurano, benzo[b]tiofeno, benzo[c]tiofeno, benzoxazol, benzisoxazol, benztiazol, benzisotiazol, quinolina, isoquinolina, quinoxalina, ftalizina, quinazolina, cinolina, naftiridina, piridopirimidina, piridopirazina ou pteridina.
[00208] Em um trigésimo quarto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, o Anel A e R3 são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-28 e 30-33 e cada R10 é independentemente halogênio -CN, -OH, -OR50, -NO2, -NR51R51, - S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1-C6 alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído.
[00209] Em um trigésimo quinto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, o Anel A e R3 são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-28 e 30-33 e cada R10 é independentemente -F, -Cl, -Br, -CN, -OH, -OR50, -NR51R51, - C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, ou C1-C6alquila não substituído ou substituído.
[00210] Em um trigésimo sexto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, o Anel A e R3 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-28 e 30-33 e cada R10 é independentemente -OR50 ou C1-C6alquila não substituído ou substituído.
[00211] Em um trigésimo sétimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, o Anel A e R3 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-28 e 30-33 e cada R10 é independentemente -OC1-C6alquila ou C1-C6alquila não substituído ou substituído.
[00212] Em um trigésimo oitavo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, o Anel A e R3 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-28 e 30-33 e cada R10 é independentemente metil ou metoxi.
[00213] Em um trigésimo nono aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, o Anel A e R3 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 1-28 e 30-33 e dois R10 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, dois R10 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído.
[00214] Em um quadragésimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é ou
[00215] Em um quadragésimo primeiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é cicloalquila não substituído ou substituído, ou heterocicloalquila não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila saturado não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila monocíclico não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila monocíclico saturado não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, R3 aziridinila não substituído ou substituído, azetidinila, oxetanila, tietanila, pirrolidinila, pirazolidinila, imidazolidinila, tetra-
hidrofuranila, dioxolanila, tetra-hidrotiofenila,
sulfolanila, oxatiolanila, piperidinila, piperazinila,
tetra-hidropiranila, dioxanila, tianila, ditianila,
morfolinila, tiomorfolinila, azepanila, dióxido de tiomorfolinila, oxazepanila, tiazepanila, oxazocanila e tiazocanila.
Em algumas modalidades, R3 é piperidinila ou piperazinila não substituído ou substituído.
Em algumas modalidades, R3 é heterociclo insaturado não substituído ou substituído.
Em algumas modalidades, R3 é pirrolinila não substituído ou substituído (di-hidropirrolila), pirazolinila
(di-hidropirazolila), imidazolinila (di-hidroimidazolila),
triazolinila (di-hidrotriazolila), di-hidrofuranila, di-
hidrotiofenila, oxazolinila (di-hidrooxazolila),
isoxazolinila (di-hidroisoxazolila), tiazolinila (di-
hidrotiazolila), isotiazolinila (di-hidroisotiazolila),
oxadiazolinila (di-hidrooxadiazolila), tiadiazolinila (di-
hidrotiadiazolila), di-hidropiridinila, tetra-
hidropiridinila, di-hidropiridazinila, tetra-
hidropiridazinila, di-hidropirimidinila, tetra-
hidropirimidinila, di-hidropirazinila, tetra-
hidropirazinila, piranila, di-hidropiranila, tiopiranila,
di-hidrotiopiranila, dioxinila, di-hidrodioxinila,
oxazinila, di-hidrooxazinila, tiazinila ou di-
hidrotiazinila.
[00216] Em um quadragésimo segundo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é morfolinila substituído ou não substituído, tiomorfolinila, azepanila, dióxido de tiomorfolinila ou oxazepanila.
[00217] Em um quadragésimo terceiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é cicloalquila não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, R3 é cicloalquila monocíclico não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, R3 é cicloalquila monocíclico saturado não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, R3 é C3-C8cicloalquila não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, R3 é ciclopropila não substituído ou substituído, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila ou ciclooctila. Em algumas modalidades, R3 é cicloalquila insaturado não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, R3 é ciclobutenila substituído ou não substituído, ciclopentenila, ciclohexenila, cicloheptenila ou ciclooctenila. Em algumas modalidades, R3 é cicloalquila policíclico não substituído ou substituído.
[00218] Em um quadragésimo quarto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela
Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído que é um heterocicloalquila em ponte, fundido ou espiro. Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído que é um heterocicloalquila em ponte ou espiro.
Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído que é um heterocicloalquila em ponte. Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído que é um heterocicloalquila fundido. Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído que é um espiro-heterocicloalquila.
[00219] Em um quadragésimo quinto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é heterocicloalquila monocíclico com 3 a 5 membros não substituído ou substituído.
Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila monocíclico de 3 a 5 membros não substituído ou substituído selecionado de aziridinila, azetidinila, oxetanila, tietanila, pirrolidinila, pirazolidinila, imidazolidinila, tetra- hidrofuranila, dioxolanila, tetra-hidrotiofenila, e sulfolanila. Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila monocíclico de 6 a 8 membros não substituído ou substituído compreendendo 1 ou 2 átomos de N e 1 ou 2 outros heteroátomos selecionados de O ou S. Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila monocíclico de 6 a 8 membros não substituído ou substituído compreendendo 1 átomo de N e 1 outro heteroátomo selecionado de O ou S. Em algumas modalidades, R3 é heterocicloalquila monocíclico de 6 a 8 membros não substituído ou substituído selecionado de morfolinila, tiomorfolinila, dióxido de tiomorfolinila, oxazepanila, tiazepanila, oxazocanila, e tiazocanila.
[00220] Em um quadragésimo sexto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é morfolinila não substituído ou substituído, tiomorfolinila não substituído ou substituído, ou oxazepanila não substituído ou substituído.
[00221] Em um quadragésimo sétimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é morfolinila não substituído.
[00222] Em um quadragésimo oitavo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é morfolinila não substituído ou substituído, tiomorfolinila não substituído ou substituído, ou oxazepanila não substituído ou substituído ligado por um átomo de N de R3.
[00223] Em um quadragésimo nono aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é morfolinila não substituído, tiomorfolinila não substituído ou substituído, ou oxazepanila não substituído ou substituído ligado por um átomo de N de R3.
[00224] Em um quinquagésimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é morfolinila não substituído ligado por um átomo de N de R3.
[00225] Em um quinquagésimo primeiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 41-46 e 48-49 em que cada R11 é independentemente halogênio, -CN, -OH, -OR50, -NR51R51, - S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, - C1-C6alquila (carbociclo) não substituído ou substituído ou -C1-C6alquila (heterociclo) não substituído ou substituído.
Em algumas modalidades, cada R11 é independentemente -F, - Cl, -OH, -OR50, -NR51R51, -S(=O)2R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído, - C1-C6alquila (carbociclo) não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, quando R11 é substituído, os substituintes em R11 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de halogênio, -CN, -OH, -O-C1- C6alquila, -O-benzila, -CO2H, -CO2-C1-C6alquila, -C(=O)-C1- C6alquila, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NHC(=O)-C1-C6alkyl, - NHC(=O)OBn, -NHC(=O)O-C1-C6alkyl, -SO2NR52R52, C1-C6alquila, ou C1-C6haloalquila; e cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio ou C1-C6alquila; ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N. Em algumas modalidades, cada R11 é independentemente -CH3, -OCH3, -CH2OH, -CH2NH2, -CH2OCH3, -S(=O)2CH3, -CH2Ph, -C(=O)NH2, ou - C(=O)OCH2CH3. Em algumas modalidades, dois R11 no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar um C=O.
[00226] Em um quinquagésimo segundo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é ou
[00227] Em um quinquagésimo terceiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é
[00228] Em um quinquagésimo quarto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é . Em algumas das referidas modalidades R12 é hidrogênio ou C1-C6alquila não substituído ou substituído. Em algumas das referidas modalidades, R12 é hidrogênio ou C1-C4alquila. Em algumas das referidas modalidades, R12 é hidrogênio ou metila. Em algumas dessas modalidades, R12 é hidrogênio. Em algumas das referidas modalidades, R12 é metila. Em algumas das referidas modalidades, cada R15 e R16 são independentemente hidrogênio, -F, -Cl, -CN, -OH, -OR50, -NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, - C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, - C1-C6alquila (carbociclo) não substituído ou substituído ou -C1-C6alquila (heterociclo) não substituído ou substituído.
Em algumas das referidas modalidades, cada R15 e R16 são independentemente hidrogênio, -CN, -OH, -OR50, -NR51R51, - C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquila (carbociclo) não substituído ou substituído. Em algumas das referidas modalidades, cada R15 é independentemente hidrogênio ou C1-C6alquila não substituído ou substituído; e cada R16 é independentemente hidrogênio, -CN, -OH, -OR50, -NR51R51, -C(=O)NR51R51, -
NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquila (carbociclo) não substituído ou substituído.
Em algumas das referidas modalidades, cada R15 é independentemente hidrogênio ou C1-C6alquila não substituído ou substituído; e cada R16 é independentemente -OR50, -NR51R51, -C(=O)NR51R51, C1-C6alquila não substituído ou substituído, - C1-C2alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou -C1-C2alquileno-heterociclo não substituído ou substituído.
Em algumas das referidas modalidades, cada R15 é independentemente hidrogênio ou C-C6alquila não substituído ou substituído; e cada R16 é independentemente -CH3, - CH(CH3)2, -CH(CH3)CH2CH3, -CH2CH(CH3)2, -CH2CH2SCH3, -CH2OH, - CH(OH)CH3, -CH2C(=O)NH2, -CH2CH2C(=O)NH2, -CH2SH, - CH2CH2CH2CH2NH2, -CH2C(=O)OH, -CH2CH2C(=O)OH, ou .
Em algumas das referidas modalidades r é de 1 a 5. Em algumas das referidas modalidades, r é 1 a 2, 1 a 3, 1 a 4, 1 a 5, 2 a 3, 2 a 4, 2 a 5, 3 a 4, 3 a 5 ou 4 a 5. Em algumas das referidas modalidades, r é 1, 2, 3, 4 ou 5. Em algumas das referidas modalidades, r é 1, 2 ou 3. Em algumas das referidas modalidades, Q é -OR13, -NR13R13, -SR13, -CN, - C(=O)NR13R13, ou -S(=O)2NR13R13; R13 é hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído; e R14 é C1-C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno- carbociclo não substituído ou substituído, ou -C1- C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído. Em algumas das referidas modalidades, Q é -OR13, -CN ou - C(=O)NR13R13; e R13 é hidrogênio ou C1-C6alquila não substituído ou substituído. Em algumas das referidas modalidades, Q é -OCH3, -CN ou -C(=O)NH2. Em algumas das referidas modalidades, Q é -OR13; e R13 é C1-C6alquila.
[00229] Em um quinquagésimo quinto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são apresentados em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é . Em algumas das referidas modalidades, R16 é hidrogênio, -F, -Cl, -CN, - OH, -OR50, -NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, - C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1- C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído,
heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquila (carbociclo) substituído ou não-substituído, ou -C1- C6alquila (heterociclo) não substituído ou substituído. Em algumas das referidas modalidades, R16 é hidrogênio, -CN, - OH, -OR50, -NR51R51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquila (carbociclo). Em algumas das referidas modalidades, R16 é hidrogênio, -CN, -OH, -OR50, -NR51R51, -C(=O)NR51R51, - NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído, ou -C1- C6alquila (carbociclo) não substituído ou substituído.
Em algumas das referidas modalidades, R16 é -OR50, -NR51R51, - C(=O)NR51R51, C1-C6 alquila não substituído ou substituído, - C1-C2alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou -C1-C2alquileno-heterociclo não substituído ou substituído.
Em algumas das referidas modalidades, R16 é --CH3, -CH(CH3)2, -CH(CH3)CH2CH3, -CH2CH(CH3)2, -CH2CH2SCH3, -CH2OH, -CH(OH)CH3, -CH2C(=O)NH2, -CH2CH2C(=O)NH2, -CH2SH, -CH2CH2CH2CH2NH2, - CH2C(=O)OH, -CH2CH2C(=O)OH, , , ou .
[00230] Em um quinquagésimo sexto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, m, Anel A, são estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-26 e R3 é ou
[00231] Em um quinquagésimo sétimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, m e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56 e cada R4 é independentemente RL ou R20.
[00232] Em um quinquagésimo oitavo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 , R2 , R3 , m, e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56 e dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído.
Em algumas modalidades, dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico de 6 membros não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar uma piperidina ou uma piperidina N-Boc.
[00233] Em um quinquagésimo nono aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, m, e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56 e cada R4 é independentemente RL, halogênio, -CN, -OH, -OR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, - NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, - C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído.
Em algumas modalidades, cada R4 é independentemente RL , halogênio, -CN, -OH, -OR50, -NR51R51, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, C1-C6alquila não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído ou -C1-C6alquileno-heterociclo substituído ou não substituído.
Em algumas modalidades, cada R4 é independentemente RL, -F, -Cl, -Br, -OR50, -NR51R51, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)NR51R51, C1- C6alquila não substituído ou substituído, heterocíclo não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquileno heterociclo substituído ou não substituído.
[00234] Em um sexagésimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, m, e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56 e pelo menos um R4 é RL. Em algumas modalidades, um R4 é RL.
[00235] Em um sexagésimo primeiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1 , R2 , R3 , m, e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56 e um R4 é RL, em que cada Y é independentemente C1-C2alquileno não substituído ou substituído; e cada R5 é independentemente halogênio, --CN, -OH, -OR50, -NR51R51, -C(=O)OR51, - C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno- carbociclo substituído ou não substituído, ou -C1- C6alquileno-heterociclo substituído ou não substituído.
[00236] Em um sexagésimo segundo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, m, e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56 e um R4 é RL , em que cada Y é independentemente C1-C2alquileno não substituído ou substituído; e cada R5 é independentemente -OR50, -NR51R51, - C(=O)NR51R51, C1-C6alquila não substituído ou substituído, -
C1-C2alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou -C1-C2alquileno-heterociclo não substituído ou substituído.
[00237] Em um sexagésimo terceiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, m e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56 e um R4 é RL, em que cada Y é independentemente C1-C2alquileno não substituído ou substituído; e cada R5 é independentemente -CH3, -CH(CH3)2, - CH(CH3)CH2CH3, -CH2CH(CH3)2, -CH2CH2SCH3, -CH2OH, -CH(OH)CH3, - CH2C(=O)NH2, -CH2CH2C(=O)NH2, -CH2SH, -CH2CH2CH2CH2NH2, - CH2C(=O)OH, -CH2CH2C(=O)OH, , , , ou .
[00238] Em um sexagésimo quarto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, m, e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56 e um R4 é RL , em que cada Y é independentemente C1-C2alquileno não substituído ou substituído; e cada R5 é -CH3. Em algumas modalidades, um R4 é RL, em que cada Y é independentemente C1- C2alquileno não substituído.
[00239] Em um sexagésimo quinto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, m, e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56, um R4 é RL, Y e R5 são estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-64; cada Z é independentemente - C(=O)NR6- ou -NR6C(=O)-; e cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio ou C1-C6alquila não substituído ou substituído. Em alguns dos referidos aspectos, cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio ou metila. Em alguns desses aspectos, cada Z é independentemente -C(=O)NH- ou -NHC(=O)-.
[00240] Em um sexagésimo sexto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, m, e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56, um R4 é RL, Y e R5 são estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-64, em que cada Z é independentemente -NR6S(=O)2-, -S(=O)2NR6-, -C(=O)NR6-, ou - NR6C(=O)-; e um R5 e um R6 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
Em alguns dos referidos aspectos, em que cada Z é independentemente -C(=O)NR6- ou - NR6C(=O)- R5 e um R6 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar uma pirrolidina não substituída ou substituída.
[00241] Em um sexagésimo sétimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, m e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56, um R4 é RL , Y, Z, R5 e R6 são estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-66, em que um R4 é RL, em que L é C1-C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído; e cada R7 é independentemente halogênio, -CN, -OH, -OR50, -SH, -SR50, -SSR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -OC(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, - OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, -NR51C(=O)OR51, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C2-C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, - C1-C6alquileno-carbociclo substituído ou não substituído, ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído.
Em algumas das referidas modalidades, um R4 é RL, em que L é C1-C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, ou heterociclo não substituído ou substituído; e cada R7 é independentemente -OR50, -SSR50, -NR51R51, -C(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído ou carbociclo não substituído ou substituído. Em algumas das referidas modalidades, um R4 é RL , em que L é C1-C6alquila não substituído ou substituído; e cada R7 é independentemente -
OR50, -SSR50, -NR51R51, -C(=O)R50, -C(=O)0R51, -C(=O)NR51R51, -
NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído ou carbociclo não substituído ou substituído.
Em algumas das referidas modalidades, um R4 é RL, em que L é C1-C6alquila não substituído ou substituído; e cada R7 é independentemente
-OH, -OMe, -OPh, -OBn, -OC6H4C(=O)Me, -SS-Ph, -SS-pyridin-2-
yl, -NH2, -NHMe, -NMe2, -NHBoc, -NHCbz, -NMeBoc, -NMeCBz, -
C(=O)Me, -C(=O)Ph, -C(=O)OH, -C(=O)OBn, -C(=O)NH2, -
NHC(=O)Me, C1-C6alquila ou carbociclo.
Em algumas das referidas modalidades, um R4 é RL, em que L é C1-C6alquila não substituído ou substituído; e cada R7 é independentemente
-OH, -OMe, -O-tBu, -OPh, -OBn, -OC6H4C(=O)Me, -SS-Ph, -SS-
pyridin-2-yl, -NH2, -NHMe, -NMe2, -NHBoc, -NHCbz, -NHFmoc, -
NMeFmoc, -NMeBoc, -NMeCBz, -C(=O)Me, -C(=O)Ph, -C(=O)OH, -
C(=O)OBn, -C(=O)OtBu, -C(=O)NH2, -NHC(=O)Me, C1-C6alquila ou carbociclo.
Em algumas das referidas modalidades, um R4 é
RL, em que L é C1-C6alquila não substituído ou substituído;
e cada R7 é independentemente -O-tBu, -OC6H4C(=O)Me, -SS-
piridin-2-ila, -NH2, -NHMe, -NHBoc, -NHCbz, -NHFmoc, -
C(=O)Me, -C(=O)Ph, -C(=O)OH, ou -C(=O)OBn.
Em algumas das referidas modalidades, um R4 é RL, em que L é carbociclo não substituído ou substituído; e cada R7 é independentemente -
OR50, -NR51R51, -C(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -
NR51C(=O)R50, C1-C6alquila não substituído ou substituído, ou carbociclo não substituído ou substituído. Em algumas das referidas modalidades, um R4 é RL, em que L é carbociclo não substituído ou substituído; e cada R7 é independentemente - OH, -OMe, -OPh, -OBn, -OC6H4C(=O)Me, -NH2, -NHMe, -NMe2, - NHBoc, -NHCbz, -NMeBoc, -NMeCBz, -C(=O)Me, -C(=O)Ph, - C(=O)OH, -C(=O)OBn, -C(=O)NH2, -NHC(=O)Me, C1-C6alquila ou carbociclo. Em algumas das referidas modalidades, um R4 é RL, em que L é carbociclo não substituído ou substituído; e cada R7 é independentemente -C(=O)Me.
[00242] Em um sexagésimo oitavo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, m, e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56, Y, Z, R5, R6, R7 e L são estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-67 e s é 1 a 10. Em algumas das referidas modalidades, s é pelo menos 1. Em algumas das referidas modalidades, s é no máximo 10. Em algumas modalidades, s é 1 a 2, 1 a 3, 1 a 4, 1 a 5, 1 a 6, 1 a 7, 1 a 8, 1 a 9, 1 a 10, 2 a 3, 2 a 4, 2 a 5, 2 a 6, 2 a 7, 2 a 8, 2 a 9, 2 a 10, 3 a 4, 3 a 5, 3 a 6, 3 a 7, 3 a 8, 3 a 9, 3 a 10, 4 a 5, 4 a 6, 4 a 7, 4 a 8, 4 a 9, 4 a 10, 5 a 6, 5 a 7, 5 a 8, 5 a 9, 5 a 10, 6 a 7, 6 a 8, 6 a 9, 6 a 10, 7 a 8, 7 a 9, 7 a 10, 8 a 9, 8 a 10, ou 9 a 10. Em algumas das referidas modalidades, s é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.
Em algumas modalidades, s é 1 a 2. Em algumas das referidas modalidades, s é 1. Em algumas das referidas modalidades, s é 2.
[00243] Em um sexagésimo nono aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, R4, m, e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-69 em que quando R4 é substituído, os substituintes em R4 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de halogênio, -CN, -OH, -O-C1- C6alquila, -O-benzila, -CO2H, -CO2-C1-C6alquila, -C(=O)-C1- C6alquila, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NHC(=O)-C1-C6alquila, - NHC(=O)OBn, -NHC(=O)O-C1-C6alquila, -SO2NR52R52, C1-C6alquila, ou C1-C6haloalquila; ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar um C=O; e cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e C1-C6alquila; ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N.
[00244] Em um septuagésimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, R4, m e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-69 em que quando R4 é substituído, os substituintes em R4 são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de halogênio, , -CN, -OH, -O-C1- C6alquila, -CO2H, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NHC(=O)-C1- C6alquila, C1-C6alquila, ou C1-C6haloalquila; e cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio ou C1- C6alquila; ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N.
[00245] Em um septuagésimo primeiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (I) em que R1, R2, R3, m e A são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-56 e cada R4 é independentemente , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,
, , , , , , , , , , , , , ou .
[00246] Em um septuagésimo segundo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1 , R2 , R3 , R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I): Fórmula (II) em que: o anel B é arila ou heteroarila; e n é 0-5.
[00247] Em um septuagésimo terceiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) e em que o Anel B é um arila monocíclico ou heteroarila.
[00248] Em um septuagésimo quarto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1 , R2 , R3 , R4 , e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o Anel B é fenila ou heteroarila de 5 ou 6 membros.
[00249] Em um septuagésimo quinto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1 , R2 , R3 , R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o Anel B é fenila.
[00250] Em um septuagésimo sexto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3, R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o Anel B é heteroarila de 5 ou 6 membros.
[00251] Em um septuagésimo sétimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1 , R2 , R3 , R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o Anel B é pirrolo, furano, tiofeno, imidazol, pirazol, oxazol, isoxazol, tiazol, isotizol, triazol, oxadiazol, tiadiazol, tetrazol, piridina, piridazina, pirimidina, pirazina ou triazina.
[00252] Em um septuagésimo oitavo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1 , R2 , R3 , R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o Anel B é piridina, piridazina, pirimidina, pirazina ou triazina.
[00253] Em um septuagésimo nono aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3, R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o Anel B é piridazina.
[00254] Em um octogésimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3, R4, e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o Anel B é pirimidina.
[00255] Em um octogésimo primeiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1 , R2 , R3 , R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o Anel B é pirazina.
[00256] Em um octogésimo segundo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3, R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o
Anel B é pirrolo, furano, tiofeno, imidazol, pirazol, oxazol, isoxazol, tiazol, isotizol, triazol, oxadiazol, tiadiazol ou tetrazol.
[00257] Em um octogésimo terceiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1 , R2 , R3 , R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o Anel B é arila ou heteroarila policíclico.
[00258] Em um octogésimo quarto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3, R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o Anel B é arila ou heteroarila bicíclico.
[00259] Em um octogésimo quinto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3, R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o Anel B é naftila.
[00260] Em um octogésimo sexto aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3, R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I) e em que o Anel B é indol, isoindol, indolizina, indazol, benzimidazol, azaindol, azaindazol, purina, benzofurano, isobenzofurano, benzo[b]tiofeno, benzo[c]tiofeno, benzoxazol, benzisoxazol,
benztiazol, benzisotiazol, quinolina, isoquinolina, quinoxalina, ftalizina, quinazolina, cinolina, naftiridina, piridopirimidina, piridopirazina ou pteridina.
[00261] Em um octogésimo sétimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3, R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I), o Anel B é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 72-86, e em que n é 0 a 5.
[00262] Em um octogésimo oitavo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3, R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I), o Anel B é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 72-86, e em que n é 0 a 1, 0 a 2, 0 a 3, 0 a 4, 0 a 5, 1 a 2, 1 a 3, 1 a 4, 1 a 5, 2 a 3, 2 a 4, 2 a 5, 3 a 4, 3 a 5 ou 4 a 5.
[00263] Em um octogésimo nono aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3, R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I), o Anel B é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 72-86, e em que n é 1 a 3.
[00264] Em um nonagésimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3, R4, e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I), o Anel B é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 72-86, e em que n é 1 a 5.
[00265] Em um nonagésimo primeiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1 , R2 , R3 , R4 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I), o Anel B é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 72-86, e em que n é 1.
[00266] Em um nonagésimo segundo aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3, e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I), o Anel B é arila ou heteroarila (incluindo fenila e qualquer um dos outros grupos arila e heteroarila descritos nesse documento para o Anel B) e em que dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico de 6 membros não substituído ou substituído. Em algumas modalidades, dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar uma piperidina ou uma piperidina N-Boc. Em algumas modalidades, é , , ou .
[00267] Em um nonagésimo terceiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto representado pela Fórmula (II) em que R1, R2, R3 e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para a Fórmula (I), e é ou
[00268] Em um nonagésimo quarto aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, R4, A, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-71 para as Fórmulas (I) e o composto de Fórmula (I ) é representado pela Fórmula (I-A), Fórmula (I-B), Fórmula (I- C) ou Fórmula (I-D):
[00269] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I), (I-A), (I-B), (I-C) ou (I-D), quando A é fenila e R3 é morfolina, R4 não é alquila substituído com -OR52. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I), (I-A), (I-B), (I-C) ou (I-D), quando A é fenila e R3 é morfolina, R4 não é alquila substituído com - OH. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I), (I-A), (I-B), (I-C) ou (I-D), quando A é fenila e R3 é morfolina, R4 não é hidroxialquila.
[00270] Em um nonagésimo quinto aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, R4, B, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-93 e o composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II ) é representado pela Fórmula (II-A), Fórmula (II-B), Fórmula (II-C) ou Fórmula (II-D):
[00271] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (II), (IIA), (IIB), (IIC) ou (IID), quando B é fenila e R3 é morfolina, R4 não é alquila substituído com -OR52. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (II), (IIA), (IIB), (IIC) ou (IID), quando B é fenila e R3 é morfolina, R4 não é alquila substituído com - OH. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (II), (IIA), (IIB), (IIC) ou (IID), quando B é fenila e R3 é morfolina, R4 não é hidroxialquila.
[00272] Em um nonagésimo sexto aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, A, B, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II) e cada R4 é selecionado independentemente a partir de halogênio, -OH, -OR50, -NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -OC(=O)OR51, -C(=O)NR51R51,
-OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, -NR51C(=O)OR51, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído e C1-C6alquila substituído, com a condição de que C1-C6alquila é substituído com -NR52R52 e pelo menos um de entre -OR52, -CO2R52, -(C1-C6alquila)-OR52, ou (C1- C6alquila)-CO2R52, ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído ou, alternativamente, cada R4 é independentemente selecionado a partir de halogênio, -OR50, -NR51R51, -C(=O)NR51R51, - NR51C(=O)R50, heterociclo não substituído ou substituído e C1- C6alquila substituído com a condição de que C1-C6alquila é substituído com -NR52R52 e pelo menos um de entre -OR52, - CO2R52, -(C1-C6alquila)-OR52, ou (C1-C6alquila)-CO2R52; ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
[00273] Em um nonagésimo sétimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, A, B, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II) e cada R4 é selecionado independentemente de halogênio, -OR50, -NR51R51, -C(=O)NR51R51, um heterociclo monocíclico saturado de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído contendo 1 ou 2 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de nitrogênio e oxigênio, e C1-C6alquila substituído com a condição de que C1-C6alquila é substituído com -NR52R52 e pelo menos um de entre - OR52, -CO2R52, -(C1-C6alquila)-OR52, ou (C1-C6alquila)- CO2R52; ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico de 6 membros não substituído ou substituído em que o referido heterociclo contém 1 ou 2 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de nitrogênio e oxigênio.
[00274] Em um nonagésimo oitavo aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, A, B, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II) e cada R4 é selecionado independentemente a partir de halogênio, -OR50, -NR51R51, um heterociclo monocíclico saturado de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído contendo 1 ou 2 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de nitrogênio e oxigênio, e C1-C6alquila substituído com a condição de que C1-C6alquila é substituído com -NR52R52 e pelo menos um de entre - OR52, -CO2R52, -(C1-C6alquila)-OR52, ou (C1-C6alquila)-
CO2R52; ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico de 6 membros não substituído ou substituído em que o referido heterociclo contém 1 ou 2 heteroátomos de anel independentemente selecionados a partir de nitrogênio e oxigênio.
[00275] Em um nonagésimo nono aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, A, B, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II) e R4 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 95-98 e pelo menos um R4 é selecionado a partir de C1-C6alquila substituído. Em alguns aspectos, cada R52 do referido substituinte de C1-C6alquila é independentemente selecionado a partir de H e Cl-3alquila. Em alguns aspectos, cada R52 do referido substituinte de C1- C6alquila é independentemente selecionado a partir de H e metila.
[00276] Em um centésimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, A, B, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II) e R4 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 95-99, pelo menos um R4 é OR50. Em alguns aspectos, R50 de -OR50 é independentemente selecionado de entre C1-C6alquila não substituído ou substituído,
heterociclo saturado de 4, 5 ou 6 membros não substituído ou substituído compreendendo um heteroátomo de anel selecionado a partir de nitrogênio, ou carbociclo saturado de 4, 5 ou 6 membros não substituído ou substituído.
Em alguns aspectos,
quando R50 de -OR50 é C1-C6alquila substituído, os substituintes no referido alquila são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de CO2R52, -OR52, -
NR52R52, -(C1-C6alquila)-OR52, (C1-C6alquila)-CO2R52, e -(C1-
C6alquila)-NR52R52. Em alguns aspectos, quando R50 de -OR50 é
C1-C6alquila substituído, os substituintes no referido C1-
C6alquila são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de -CO2R52, -OR52 e -NR52R52. Em alguns aspectos, quando R50 de -OR50 é C1-C6alquila substituído, o referido C1-C6alquila é substituído com -NR52R52 e opcionalmente um de entre CO2R52 e -OR52. Quando R50 de -OR50 é C1-C6alquila substituído, cada R52 do C1-C6alquila substituído pode ser, por exemplo, independentemente selecionado a partir de H e C1-3alquila (por exemplo, metila ou etila). Quando R50 de -OR50 é um heterociclo ou carbociclo,
R50 de -OR50 pode ser, por exemplo, uma pirrolidina não substituída ou substituída, piperidina não substituída ou substituída, azetidina não substituída ou substituída, ou ciclobutila não substituído ou substituído.
Em alguns aspectos, quando R50 de -OR50 é um heterociclo ou carbociclo,
os substituintes no referido heterociclo e carbociclo são independentemente selecionados a partir de CO2R52, -OR52, - NR52R52, ou C1-C6alquila não substituído ou substituído, em que os substituintes no referido C1-C6alquila são independentemente selecionados a partir de -OR52, -CO2R52 ou -NR52R52. Em alguns aspectos, quando R50 de -OR50 é um heterociclo ou carbociclo, os substituintes no referido heterociclo e carbociclo são independentemente selecionados a partir de CO2R52, -OR52, -NR52R52, ou C1-C6alquila não substituído. Em alguns aspectos, quando R50 de -OR50 é um heterociclo ou carbociclo, os substituintes no referido heterociclo e carbociclo são independentemente selecionados a partir de -NR52R52. Cada R52 dos substituintes no referido heterociclo ou carbociclo pode ser, por exemplo, independentemente selecionado a partir de H e Cl-3alquila (por exemplo, metila ou etila). Em alguns aspectos exemplificativos, quando R50 de -OR50 é um heterociclo, R50 está ligado ao átomo de oxigênio de -OR50 em um átomo de anel de carbono.
[00277] Em um centésimo primeiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, A, B, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II) e R4 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 95-100 e pelo menos um R4 é independentemente selecionado a partir de um heterociclo monocíclico saturado de 5 ou 6 membros substituído ou não substituído. Em alguns aspectos, quando R4 é um heterociclo substituído, os substituintes no referido heterociclo são independentemente selecionados a partir de CO2R52, -OR52, - NR52R52, ou C1-C6alquila não substituído ou substituído, em que os substituintes no referido C1-C6alquila são independentemente selecionados a partir de -OR52, -CO2R52, - NR52R52 e fenila. Em alguns aspectos, quando R4 é um heterociclo substituído, os substituintes no referido heterociclo são independentemente selecionados a partir de CO2R52, -OR52, -NR52R52, C1-C6alquila não substituído e fenila.
Cada R52 dos substituintes no referido heterociclo pode ser, por exemplo, selecionado independentemente a partir de H e Cl-3alquila.
[00278] Em um centésimo segundo aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, A, B, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II) e R4 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 95-101 e pelo menos um R4 é independentemente selecionado a partir de -NR51R51. Em alguns aspectos, cada R51 de -NR51R51 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído e heterociclo saturado contendo N não substituído ou substituído; ou dois R51 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N não substituído ou substituído. Em alguns aspectos, quando R51 de -NR51R51 é um heterociclo, é um heterociclo saturado de 5 ou 6 membros substituído ou não substituído contendo um heteroátomo de anel selecionado de nitrogênio.
Em alguns aspectos, quando R51 de -NR51R51 é C1-
C6alquila substituído, os substituintes no referido C1 -
C6alquila são independentemente selecionados a partir de
OR52, -NR52R52 e -CO2R52 ou dois substituintes do mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar C=O; e quando
R51 de -NR51R51 é um heterociclo, os substituintes no referido heterociclo são independentemente selecionados a partir de
OR52, -NR52R52, -CO2R52, C1-C6alquila não substituído ou C1-
C6alquila substituído com substituintes selecionados independentemente a partir de OR52, -NR52R52, -CO2R52. Em alguns aspectos, quando R51 de -NR51R51 é um heterociclo, é um heterociclo não substituído.
Em alguns aspectos, quando R51 de -NR51R51 é um C1-C6alquila substituído, os substituintes no
C1-C6alquila são selecionados independentemente a partir de
OR52, -NR52R52 e -CO2R52. CO2R52. Cada R51 de -NR51R51 pode ser,
por exemplo, selecionado independentemente a partir de hidrogênio e C1-C6alquila não substituído ou substituído, em que os substituintes são independentemente selecionados a partir de OR52, -NR52R52 e -CO2R52. Em alguns aspectos, R52 dos referidos substituintes de alquila e referidos substituintes de heterociclo são independentemente selecionados a partir de hidrogênio e Cl-3alquila.
Em alguns aspectos, R52 dos referidos substituintes de alquila e referidos substituintes de heterociclo são independentemente selecionados a partir de hidrogênio e metila.
Em alguns aspectos, quando dois R51 de -NR51R51 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, formam um heterociclo saturado contendo N de
5 ou 6 membros não substituído ou substituído.
Em alguns aspectos, quando dois R51 de -NR51R51 são tomados em conjunto com o átomo N ao qual estão ligados, formam um heterociclo saturado contendo N de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são independentemente selecionados a partir de -NR52R52, C1 -
C6alquila não substituído ou substituído e heterociclo monocíclico saturado contendo N não substituído ou substituído ou dois substituintes do mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar C=O.
Em alguns aspectos,
os substituintes no referido C1-C6alquila são independentemente selecionados a partir de OR52, NR52R52 e
CO2R52 e os substituintes no referido heterociclo monocíclico saturado contendo N são independentemente selecionados a partir de OR52, NR52R52, CO2R52 e C1-C6alquila não substituído ou substituído em que os referidos substituintes de C1-
C6alquila são independentemente selecionados a partir de
OR52, NR52R52 e CO2R52. Em alguns aspectos, quando dois R51 de
-NR51R51 são tomados em conjunto com o átomo N ao qual estão ligados, formam um heterocíclo saturado substituído de 6 membros contendo N em que os substituintes são meta ou para em relação ao anel B. Em alguns aspectos, quando dois R51 de -NR51R51 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um anel de 6 membros, formam uma piperazina substituída ou não substituída ou piperidina substituída ou não substituída. Cada R52 pode ser, por exemplo, independentemente selecionado a partir de hidrogênio e C1-3alquila (por exemplo, metila ou etila).
[00279] Em um centésimo terceiro aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, A, B, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II) e R4 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 95-102 e pelo menos um R4 é halogênio (por exemplo, cloro).
[00280] Em um centésimo quarto aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, B, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II) e R4 é conforme estabelecido em qualquer um dos aspectos 95-103 e em que quando o Anel B é substituído, é pelo menos substituído na posição para em relação à pirazina. Em alguns aspectos, quando o Anel B é substituído, ele é substituído na posição meta em relação à pirazina.
[00281] Em um centésimo quinto aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, A, B, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II) e dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico de 6 membros não substituído ou substituído com um ou dois heteroátomos de anel selecionados a partir de oxigênio e nitrogênio e substituintes no referido carbociclo e heterociclo são independentemente selecionados a partir de NR52R52, OR52 ou -CO2R52, C1-C6alquila não substituído e C1- C6alquila substituído com os substituintes no referido C1- C6alquila independentemente selecionados a partir de NR52R52, OR52 e - CO2R52.
[00282] Em um centésimo sexto aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II), A ou B é fenila e R4 é pelo menos um de entre:
; em que R51 e R52 são conforme estabelecidos nesse documento para a fórmula I ou II. Em alguns aspectos, cada R51 e R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e C1-3alquila (por exemplo, metila ou etila).
[00283] Em um centésimo sétimo aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II), A ou B é fenila e R4 é pelo menos um de entre:
[00284] Em um centésimo oitavo aspecto, é divulgado nesse documento um composto em que R1, R2, R3, n e m são conforme estabelecidos em qualquer um dos aspectos 1-94 para as Fórmulas (I) e (II), e é ,
, , , , , , , ou ; em que R52 é conforme estabelecido nesse documento para a fórmula I ou II. Em alguns aspectos, cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e Cl- 3alquila (por exemplo, metila ou etila).
[00285] Qualquer combinação dos grupos descritos acima para as várias variáveis é contemplada nesse documento.
Ao longo da especificação, grupos e substituintes dos mesmos podem ser escolhidos para fornecer frações e compostos estáveis.
[00286] Em determinadas modalidades, os compostos descritos nesse documento não contêm um eletrófilo. Em algumas modalidades, um eletrófilo é definido como um grupo funcional que pode reagir para formar uma ligação covalente com uma fração de um construto de anticorpo, tal como, por exemplo, uma lisina, serina, treonina, cisteína, tirosina, ácido aspártico, glutamina, um resíduo de aminoácido não natural ou resíduo de ácido glutâmico. Em algumas modalidades, o eletrófilo compreende um modificador covalente. Em algumas modalidades, o eletrófilo compreende uma acrilamida, uma carbonila ⍺,β-insaturado, uma cianopiridina ou um halo-nitrobenzeno.
[00287] Em algumas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D), R3 não compreende um modificador covalente. Em algumas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D), R3 não compreende uma acrilamida, uma carbonila ⍺,β-insaturada, uma cianopiridina, nem um halo-nitrobenzeno. Em algumas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D), R3 não compreende um grupo eletrofílico. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (II-A), (II-B), (II-C) e ( II-D), R3 não compreende: -CN, carbonila ⍺,β- insaturada opcionalmente substituído e C2-10alquileno opcionalmente substituído.
[00288] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-
D), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D), o Anel A não é substituído com -CH2CH2OH. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I- B), (I-C), (I-D), (II-A), (II-B), (II-C) e ( II-D), o Anel A não é hidroxialquila. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D), em que o Anel A é fenila, o Anel A não é substituído com -CH2CH2OH na posição para em relação à pirazina. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D), em que o Anel A é fenila, o Anel A não é substituído com -CH2CH2OH. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I- D), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D), em que o Anel A é fenila, o Anel A não é substituído com hidroxialquila. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (II-A), (II-B), (II-C) e ( II-D), o composto não é ou um sal do mesmo.
[00289] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I- D), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D), o Anel A não é substituído com um grupo selecionado a partir de –CH2CH2NH2,
-CH2NHBoc, -CH2NH2, , ,
, ou . Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (II-A), (II-B),
(II-C) e (II-D), o Anel A não é substituído com um grupo aminoalquila opcionalmente substituído.
Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das
Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (II-A), (II-B), (II-C),
e (II-D), em que o Anel A é fenila, o Anel A não é substituído com –CH2CH2NH2, -CH2NHBoc, -CH2NH2, ,
, ou qualquer um dos quais está na posição para em relação à pirazina.
Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das
Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (II-A), (II-B), (II-C)
e (II-D), em que o Anel A é fenila, o Anel A não é substituído com –CH2CH2NH2, -CH2NHBoc, -CH2NH2, , , , ou . Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D), em que o Anel A é fenila, o Anel A não é substituído com uma aminoalquila opcionalmente substituída.
[00290] Em determinadas modalidades para um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I- D), (II-A), (II-B), (II-C) , e (II-D), quando o Anel A é substituído com um grupo aminoalquila opcionalmente substituído, o Anel A é substituído com pelo menos um outro substituinte.
[00291] Em determinadas modalidades, a divulgação fornece um composto representado pela Fórmula (I-E):
(I-E);
ou um sal do mesmo, em que:
cada um de R40, R41, R42, R43 e R44 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, RL e R20; ou dois de R40,
R41, R42, R43 e R44 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído em que quando o referido carbociclo monocíclico ou o referido heterociclo monocíclico são substituídos, os substituintes são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de halogênio, -CN, -NO2, -OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -
C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, -SR52, -
S(=O)R53, -SO2R53, -SO2NR52R52, C1-C6alquila, C1-C6haloalquila,
aminoC1-C6alquila-, Boc-aminoC1-C6alquila-, Cbz-aminoC1-
C6alquila-, carbociclo monocíclico e heterociclo monocíclico; ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar =O ou =S;
cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros, e heteroarila de 6 membros; ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N; e cada R53 é independentemente selecionado a partir de C1- C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros, e heteroarila de 6 membros.
[00292] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), cada um de R40, R41, R42, R43 e R44 são selecionados independentemente a partir de hidrogênio, RL e R20; ou dois de R40, R41, R42, R43 e R44 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído em que quando o referido carbociclo monocíclico ou o referido heterociclo monocíclico são substituídos, os substituintes são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de halogênio, -CN, -NO2, -OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, -SR52, -S(=O)R53, -SO2R53, -SO2NR52R52, C1-C6alquila, C1 - C6haloalquila, carbociclo monocíclico, e heterociclo monocíclico; ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar =O ou =S; cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1- C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros; ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N; e cada R53 é independentemente selecionado a partir de C1-C6alquila C3- C6cicloalquila fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros.
[00293] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R42 não é -CH2CH2OH. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R42 não é -CH2CH2OH, –CH2CH2NH2, -CH2NHBoc, -CH2NH2, , , , ou .
[00294] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R42 não é hidroxialquila. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), cada um de R40, R41, R42, R43 e R44 não é -CH2CH2OH. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), cada um de R40, R41, R42, R43 e R44 não é hidroxialquila.
[00295] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), m é 0. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R1 é hidrogênio.
[00296] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), pelo menos dois de R40, R41, R42, R43 e R44 não são hidrogênio. Em determinadas modalidades, quando R42 é aminoalquila opcionalmente substituído, pelo menos um de R40, R41, R43 e R44 não é hidrogênio. Em determinadas modalidades, quando R42 é hidroxialquila pelo menos um de R40, R41, R43 e R44 não é hidrogênio.
[00297] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R42 é selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, -CN, -OH, -OR50, -SH, -SR50, -NO2, - NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, - C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -OC(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, - OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, -NR51C(=O)OR51, C3-C6alquila não substituído ou substituído, C2-C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, - C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído; ou R42 em conjunto com R41 são considerados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
[00298] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R42 é selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, -OH, -OR50, -S(=O)2R50, -C(=O)R50, C3- C6alquila não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído; ou R42 em conjunto com R41 são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
[00299] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R42 é selecionado a partir de hidrogênio, -OR50, -S(=O)2R50, -C(=O)R50, C3-C6alquila não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído; ou R42 em conjunto com R41 são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
[00300] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R42 não é alquila substituído com - OR52. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R42 não é alquila substituído com -OH. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R42 não é hidroxialquila. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), cada um de R40, R41, R42, R43 e R44 não é alquila substituído com -OR52. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), cada um de R40, R41, R42, R43 e R44 não é hidroxialquila.
[00301] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), pelo menos um de entre R40, R41, R42, R43 e R44 é (i) -OR50 quando R50 é C1-C6alquila substituído com -NR52R52, -NR52C(=O)R53, ou -NR52C(=O)OR52; (ii) C1-C6alquila substituído com -CO2R52 ou -OR52 e um de entre -NR52R52, - NR52C(=O)R53 e -NR52C(=O)OR52; ou (iii) R41 e R42 são tomados em conjunto com o anel fenila ao qual estão ligados para formar um sistema de anel substituído ou não substituído representado por: , , , , , , ,
, , , , , , ou .
[00302] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R40, R41, R43 e R44 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, halogênio, -OR50, -C(=O)OR51 e C1-C6alquila não substituído ou substituído; ou R41 em conjunto com R42 ou R41 em conjunto com R40 são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
[00303] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R40, R41, R43 e R44 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio e - OR50; ou R41 em conjunto com R42 são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído. Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), R40, R41, R43 e R44 são cada um hidrogênio.
[00304] Em determinadas modalidades, para um composto ou sal de Fórmula (I-E), o composto é selecionado a partir de: , , , , , , , , , , , , , , ,
, ,
, ,
, ,
, ,
, ,
, , ,
, e ; ou um sal de qualquer um dos mesmos.
[00305] Em determinadas modalidades, os compostos exemplificativos podem incluir, mas não estão limitados a,
um composto ou sal selecionado a partir de:
, ,
, ,
, ,
, ,
, ,
, ,
,
, , ,
, , ,
, , ,
, ,
, , ,
, , ,
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, ,
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, ,
, ,
, , , ,
, ,
, ,
, , ,
, ,
, ,
, , , , , , , , , , , , e ; ou um sal de qualquer um dos mesmos.
[00306] Também incluídos na presente invenção estão os compostos representados pela Fórmula (I):
Fórmula (I)
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
Anel A é cicloalquila não substituído ou substituído,
heterocicloalquila não substituído ou substituído, arila não substituído ou substituído ou heteroarila não substituído ou substituído, em que quando o Anel A é substituído, os substituintes no Anel A são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R4;
cada R4 é selecionado a partir de RL e R20, ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
RL é ou ;
cada Y é independentemente C1-C6alquileno substituído ou não substituído; em que quando Y é substituído, os substituintes em Y são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R5;
cada R5 é selecionado a partir de R20, ou dois R5 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído, ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
cada Z é independentemente -NR6S(=O)2-, -S(=O)2NR6-, -
OC(=O)-, -C(=O)O-, -C(=O)NR6-, ou -NR6C(=O)-; em que cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-
C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído e heterociclo não substituído ou substituído, ou um R5 e um R6 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
L é C1-C6alquila não substituído ou substituído, C2-
C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
-C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído ou
-C1-C6alquileno-heterociclo substituído; em que quando L é substituído, os substituintes em L são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R7;
cada R7 é selecionado a partir de -SSR50 e R20;
s é 1-10;
R1 é selecionado a partir de hidrogênio e R20; cada R2 é independentemente selecionado a partir de R20, ou dois R2 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
m é 0-3;
R3 é selecionado a partir de (i), (ii), (iii) e (iv):
(v) arila não substituído ou substituído, ou heteroarila não substituído ou substituído; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R10;
(vi) cicloalquila não substituído ou substituído, ou heterocicloalquila não substituído ou substituído; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R11;
(vii) heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído, heterocicloalquila monocíclico de 3 a 5 membros não substituído ou substituído, heterocicloalquila monocíclico de 6 a 8 membros não substituído ou substituído compreendendo 1 ou 2 átomos de N e 1 ou 2 outros heteroátomos selecionados a partir de O ou S; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R11; e
(viii) ;
em que quando R3 está na posição 2-, 5- ou 6 da piridina, R3 é selecionado a partir de (i), (ii) e (iv), e quando R3 está na posição 4 da piridina, R3 é selecionado a partir de (i),
(iii) e (iv); e cada R10 é selecionado a partir de R20, ou dois R10 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
cada R11 é selecionado a partir de =O, =S e R20;
R12 é hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-C6alquenila não substituído ou substituído,
C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído ou -C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
Q é -OR13, -NR13R13, -SR13, -CN, -C(=O)R14, -C(=O)NR13R13,
-S(=O)R14, ou -S(=O)2R14, ou -S(=O)2NR13R13;
R13 é hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-C6alquenila não substituído ou substituído,
C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
R14 é C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-
C6alquenila não substituído ou substituído, C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
-C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído,
ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada U1 é -(CR15R16)-, em que cada R15 e R16 são selecionados independentemente a partir de hidrogênio e R20;
r é 1-5;
cada R20 é independentemente halogênio, -CN, -OH, -OR50,
-SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50,
-S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -OC(=O)OR51,
-C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50,
-NR51C(=O)OR51, C1-C6alquila não substituído ou substituído,
C2-C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
-C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído,
ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada R50 é independentemente selecionado a partir de C1-
C6alquila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo substituído ou não substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo substituído ou não substituído;
cada R51 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-C6alquila não substituído ou substituído,
carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
ou dois R51 no mesmo átomo N são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N não substituído ou substituído;
em que quando qualquer um de R2, R4, R5, R6, R10, R12, R13, R14,
R20, R50 e R51 são substituídos, os substituintes em R2, R4,
R5, R6, R10, R12, R13, R14, R20, R50 , e R51 são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de halogênio, -CN,
-NO2, -OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -
NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52 , -SR52, -S(=O)R53, -SO2R53, -
SO2NR52R52, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1-
C6haloalquila, carbociclo monocíclico não substituído ou substituído, heterociclo monocíclico não substituído ou substituído, ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar um C=O ou C=S e em que os substituintes no referido C1-C6alquila são independentemente selecionados a partir de R54 e os substituintes no referido carbociclo e heterociclo são independentemente selecionados a partir de R55; cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio , C1- C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros; ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N; e cada R53 é independentemente selecionado a partir de C1- C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros.
cada R54 é independentemente selecionado a partir de - OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52 e fenila; cada R55 é selecionado independentemente a partir de - OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, e C-C6alquila não substituído ou substituído, em que os substituintes no referido C1-C6alquila são independentemente selecionados a partir de R54.
[00307] Os compostos de Fórmula (I) incluem aqueles em que qualquer um de R2, R4, R5, R6, R10, R12, R13, R14, R20, R50 e R51 são substituídos, os substituintes em R2, R4, R5, R6 , R10, R12, R13, R14, R20, R50 e R51 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de halogênio, -CN, -NO2, -OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, - NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52 , -SR52, -S(=O)R53, -SO2R53, - SO2NR52R52, C1-C6alquila não substituído ou substituído, C1- C6haloalquila, carbociclo monocíclico, heterociclo monocíclico, ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar um C=O ou C=S; e em que os substituintes no referido C1-C6alquila são independentemente selecionados a partir de R54.
[00308] Os compostos de Fórmula (I) incluem aqueles em que quando o Anel A é arila, o anel A é substituído e os substituintes no Anel A são independentemente selecionados em cada ocorrência de R4; e cada R4 é selecionado a partir de R20 e , ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído; e cada R20 é independentemente halogênio, -CN, -OH, -OR50, -SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, - NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -OC(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, - NR51C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, -NR51C(=O)OR51, C2-C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído , heterociclo não substituído ou substituído, - C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído ou C1-C6alquila substituído; com a condição de que quando C1- C6alquila é substituído com -C(=O)NR52R52, -NR52R52, - NR52C(=O)R53, ou -NR52C(=O)OR52, o referido C1-C6alquila é ainda substituído com pelo menos um de -OR52, -CO2R52, -(C1- C6alquila)-OR52, ou -(C1-C6alquila)-CO2R52.
[00309] Os compostos de Fórmula (I) incluem aqueles em que quando o Anel A é arila, o anel A é substituído e os substituintes no Anel A são independentemente selecionados em cada ocorrência de R4; e cada R4 é selecionado a partir de R20 e , ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído; e cada R20é independentemente halogênio, -CN, - OH, -OR50, -SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, - OC(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, - NR51C(=O)R50, -NR51C(=O)OR51, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, - C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído,
ou C1-C6alquila substituído; com a condição de que quando C1- C6alquila é substituído com -C(=O)NR52R52, -NR52R52, - NR52C(=O)R53, ou -NR52C(=O)OR52, o referido C1-C6alquila é ainda substituído com pelo menos um de entre -OR52, -CO2R52, -(C1- C6alquila)-OR52, ou -(C1-C6alquila)-CO2R52. Também estão incluídos aqueles compostos em que quando R20 é C1-C6alquila substituído com -OR52, o referido C1-C6alquila é ainda substituído com -pelo menos um de entre C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, ou -NR52C(=O)OR52. Também estão incluídos aqueles compostos em que R20 é C1-C6alquila substituído com - OR52, o referido C1-C6alquila é ainda substituído com -NR52R52.
Também estão incluídos aqueles compostos em que R20 é C1- C6alquila substituído com -NR52R52 e pelo menos um de entre - OR52, -CO2R52, -(C1-C6alquila)-OR52 ou (C1-C6alquila)-CO2R52.
[00310] Compostos exemplificativos da presente invenção incluem aqueles apresentados na Tabela 14 e sais dos mesmos (incluindo os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos).
[00311] As entidades químicas com ligações duplas carbono-carbono ou ligações duplas carbono-nitrogênio podem existir na forma Z- ou E- (ou na forma cis- ou trans-). Além disso, algumas entidades químicas podem existir em várias formas tautoméricas. A menos que seja indicado em contrário, os compostos descritos nesse documento pretendem incluir todas as formas Z-, E- e tautoméricas também.
[00312] Um "tautômero" se refere a uma molécula em que uma deslocação de próton de um átomo de uma molécula para outro átomo da mesma molécula é possível. Os compostos apresentados nesse documento, em determinadas modalidades, existem como tautômeros. Em circunstâncias onde a tautomerização é possível, existirá um equilíbrio químico dos tautômeros. A proporção exata dos tautômeros depende de vários fatores, incluindo estado físico, temperatura, solvente e pH. Alguns exemplos de equilíbrio tautomérico incluem: .
[00313] Os compostos divulgados nesse documento, em algumas modalidades, são usados em diferentes formas isotópicas enriquecidas, por exemplo, enriquecido no conteúdo de 2H, 3H, 11C, 13C e/ou 14C. Em uma modalidade em particular, o composto é deuterado em pelo menos uma posição.
Essas formas deuteradas podem ser feitas pelo procedimento descrito nas Patentes U.S. Nºs 5.846.514 e 6.334.997.
Conforme descrito nas Patentes U.S. Nºs 5.846.514 e
6.334.997, a deuteração pode melhorar a estabilidade metabólica e/ou eficácia, aumentando assim a duração da ação dos fármacos.
[00314] A menos que seja indicado em contrário, os compostos descritos nesse documento pretendem incluir compostos que diferem apenas na presença de um ou mais átomos isotopicamente enriquecidos. Por exemplo, compostos com as presentes estruturas, exceto a substituição de um hidrogênio por um deutério ou trítio, ou a substituição de um carbono por carbono enriquecido com 13C ou 14C estão dentro do escopo da presente divulgação.
[00315] Os compostos da presente divulgação contêm, opcionalmente, proporções não naturais de isótopos atômicos em um ou mais átomos que constituem os referidos compostos.
Por exemplo, os compostos podem ser marcados com isótopos, tais como, por exemplo, deutério (2H), trítio (3H), iodo-125 (125I) ou carbono-14 (14C). A substituição isotópica com 2H, 11C, 13C, 14C, 15C, 12N, 13N, 15N, 16N, 16O, 17O, 14F, 15F, 16F, 17F, 18F, 33S, 34S, 35S, 36S, 35Cl, 37Cl, 79Br, 81Br e 125I estão todas contempladas. Todas as variações isotópicas dos compostos da presente invenção, sejam radioativos ou não, estão incluídas no escopo da presente invenção.
[00316] Em determinadas modalidades, os compostos divulgados nesse documento têm alguns ou todos os átomos de 1H substituídos por átomos de 2H. Os métodos de síntese para compostos contendo deutério são conhecidos na técnica e incluem, a título de exemplo não limitativo apenas, os seguintes métodos de síntese.
[00317] Os compostos substituídos por deutério são sintetizados usando vários métodos, conforme descritos em: Dean, Dennis C.; Editor. Recent Advances in the Synthesis and Applications of Radiolabeled Compounds for Drug Discovery and Development. [In: Curr., Pharm. Des., 2000; 6(10)] 2000, 110 pp; George W.; Varma, Rajender S. The Synthesis of Radiolabeled Compounds via Organometallic Intermediates, Tetrahedron, 1989, 45(21), 6601-21; e Evans, E. Anthony. Synthesis of radiolabeled compounds, J.
Radioanal. Chem., 1981, 64(1-2), 9-32.
[00318] Os materiais de partida deuterados estão prontamente disponíveis e são submetidos aos métodos sintéticos descritos nesse documento para fornecer a síntese de compostos contendo deutério. Um grande número de reagentes contendo deutério e blocos de construção estão disponíveis comercialmente em fornecedores de produtos químicos, tal como Aldrich Chemical Co.
[00319] Os compostos da presente invenção também incluem formas cristalinas e amorfas desses compostos, sais farmaceuticamente aceitáveis e metabólitos ativos desses compostos com o mesmo tipo de atividade, incluindo, por exemplo, polimorfos, pseudopolimorfos, solvatos, hidratos, polimorfos não solvatados (incluindo anidratos), polimorfos conformacionais e formas amorfas dos compostos, bem como misturas dos mesmos.
[00320] Incluídos na presente divulgação estão os sais, particularmente os sais farmaceuticamente aceitáveis, dos compostos descritos nesse documento. Os compostos da presente divulgação que possuem um grupo suficientemente ácido, um grupo suficientemente básico, ou ambos os grupos funcionais, podem reagir com qualquer uma de uma série de bases inorgânicas e ácidos inorgânicos e orgânicos para formar um sal. Alternativamente, os compostos que são inerentemente carregados, como aqueles com um nitrogênio quaternário, podem formar um sal com um contra-íon apropriado, por exemplo, um haleto, tal como brometo, cloreto ou fluoreto, particularmente brometo.
[00321] Os compostos descritos nesse documento podem, em alguns casos, existir como diastereômeros, enantiômeros ou outras formas estereoisoméricas. Os compostos apresentados nesse documento incluem todas as formas diastereoméricas, enantioméricas e epiméricas, bem como as misturas apropriadas dos mesmos. A separação de estereoisômeros pode ser realizada por cromatografia ou formando diastereômeros e separando-os por recristalização ou cromatografia ou qualquer combinação das mesmas. (Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley And Sons, Inc., 1981, incorporado nesse documento por referência para esta divulgação). Os estereoisômeros também podem ser obtidos por síntese estereosseletiva.
[00322] Os métodos e composições descritos nesse documento incluem o uso de formas amorfas, bem como formas cristalinas (também conhecidas como polimorfas). Os compostos descritos nesse documento podem estar na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis. Da mesma forma, em algumas modalidades, metabólitos ativos desses compostos com o mesmo tipo de atividade estão incluídos no escopo da presente divulgação. Além disso, os compostos descritos nesse documento podem existir em formas não solvatadas bem como em formas solvatadas com solventes farmaceuticamente aceitáveis, tais como água, etanol e semelhantes. As formas solvatadas dos compostos apresentados nesse documento também são consideradas como divulgadas nesse documento.
[00323] Em determinadas modalidades, os compostos ou sais dos compostos podem ser pró-fármacos, por exemplo, em que uma hidroxila no composto de origem é apresentada como um éster ou um carbonato, ou ácido carboxílico presente no composto de origem é apresentado como um éster. O termo "pró- fármaco" se destina a abranger compostos que, sob condições fisiológicas, são convertidos em agentes farmacêuticos da presente divulgação. Um método para preparar um pró-fármaco é incluir uma ou mais frações selecionadas que são hidrolisadas sob condições fisiológicas para revelar a molécula desejada. Em outras modalidades, o pró-fármaco é convertido por uma atividade enzimática do animal hospedeiro, tais como células alvo específicas no animal hospedeiro. Por exemplo, ésteres ou carbonatos (por exemplo, ésteres ou carbonatos de álcoois ou ácidos carboxílicos e ésteres de ácidos fosfônicos) são pró-fármacos preferidos da presente divulgação.
[00324] As formas de pró-fármaco dos compostos descritos nesse documento, em que o pró-fármaco é metabolizado in vivo para produzir um composto conforme estabelecido nesse documento, estão incluídas no escopo das reivindicações. Em alguns casos, alguns dos compostos descritos nesse documento podem ser um pró-fármaco para outro derivado ou composto ativo.
[00325] Os pró-fármacos são muitas vezes úteis porque, em algumas situações, podem ser mais fáceis de administrar do que o fármaco de origem. Podem, por exemplo, estar biodisponíveis por administração oral, enquanto o original não está. Os pró-fármacos podem ajudar a melhorar a permeabilidade celular de um composto em relação ao fármaco de origem. O pró-fármaco também pode ter solubilidade melhorada em composições farmacêuticas em relação ao fármaco original. Os pró-fármacos podem ser concebidos como derivados do fármaco reversíveis, para uso como modificadores para melhorar o transporte do fármaco para tecidos específicos do local ou para aumentar a residência do fármaco no interior de uma célula.
[00326] Em determinadas modalidades, o pró-fármaco pode ser convertido, por exemplo, enzimaticamente ou quimicamente, no composto de origem sob as condições dentro de uma célula. Em determinadas modalidades, o composto de origem compreende uma fração ácida, por exemplo, resultante da hidrólise do pró-fármaco, que pode ser carregado sob as condições dentro da célula. Em modalidades em particular, o pró-fármaco é convertido no composto de origem, uma vez que tenha passado através da membrana celular para o interior de uma célula. Em determinadas modalidades, o composto de origem tem propriedades de permeabilidade da membrana celular diminuídas em relação ao pró-fármaco, tal como a diminuição da lipofilicidade e aumento da hidrofilicidade.
[00327] Em modalidades em particular, o composto de origem com a fração ácida é retido no interior de uma célula por um período mais longo do que o mesmo composto sem a fração ácida.
[00328] O composto de origem, com uma fração ácida, pode ser retido dentro da célula, isto é, a residência do fármaco, por 10% ou mais tempo, tal como 15% ou mais, tal como 20% ou mais, tal como 25% ou mais, tal como 30% ou mais, tal como 35% ou mais, tal como 40% ou mais, tal como 45% ou mais, tal como 50% ou mais, tal como 55% ou mais, tal como 60% ou mais, tal como 65 % ou mais, tal como 70% ou mais, tal como 75% ou mais, tal como 80% ou mais, tal como 85% ou mais, ou mesmo 90% ou mais em relação ao mesmo composto sem uma fração ácida.
[00329] Em algumas modalidades, o design de um pró- fármaco aumenta a lipofilicidade do agente farmacêutico. Em algumas modalidades, o design de um pró-fármaco aumenta a solubilidade em água efetiva. Ver, por exemplo, Fedorak et al., Am. J. Physiol., 269:G210-218 (1995); McLoed et al., Gastroenterol, 106:405-413 (1994); Hochhaus et al., Biomed.
Chrom., 6:283-286 (1992); J. Larsen and H. Bundgaard, Int.
J. Pharmaceutics, 37, 87 (1987); J. Larsen et al., Int. J.
Pharmaceutics, 47, 103 (1988); Sinkula et al., J. Pharm.
Sci., 64:181-210 (1975); T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series; and Edward B. Roche, Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon
Press, 1987, todos incorporados nesse documento para a referida divulgação). De acordo com outra modalidade, a presente divulgação fornece métodos de produção dos compostos definidos acima. Os compostos podem ser sintetizados usando técnicas convencionais. Vantajosamente, estes compostos são convenientemente sintetizados a partir de materiais de partida prontamente disponíveis.
[00330] As transformações e metodologias de química sintética úteis na síntese dos compostos descritos nesse documento são conhecidas na técnica e incluem, por exemplo, aquelas descritas em R. Larock, Comprehensive Organic Transformations (1989); T. W. Greene and P. G. M.
Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed.
(1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis (1994); and L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis (1995).
Ligantes
[00331] Os compostos e sais descritos nesse documento podem ser ligados a um ligante, por exemplo, um ligante peptídico ou um ligante não clivável. Em determinadas modalidades, o ligante também está ligado a um construto de anticorpo e pode ser referido como um conjugado de anticorpo ou conjugado. Os ligantes dos conjugados podem não afetar a ligação de porções ativas de um conjugado, por exemplo, os domínios de ligação ao antígeno, domínios Fc, domínios de ligação ao alvo, anticorpos, compostos amino- pirazinocarboxamida ou semelhantes, a um antígeno. Um conjugado pode compreender vários ligantes, cada um tendo um ou mais compostos fixados. Esses ligantes podem ser ligantes iguais ou ligantes diferentes.
[00332] Um ligante pode ser curto, flexível, rígido, clivável, não clivável, hidrofílico ou hidrofóbico. Um ligante pode conter segmentos que possuem características diferentes, tais como segmentos de flexibilidade ou segmentos de rigidez. O ligante pode ser quimicamente estável em ambientes extracelulares, por exemplo, quimicamente estável na corrente sanguínea, ou pode incluir ligações que não são estáveis ou que são seletivamente estáveis. O ligante pode incluir ligações que são concebidas para clivar e/ou imolar ou de outra forma degradar especificamente ou não especificamente dentro das células. Um ligante clivável pode ser sensível a enzimas. Um ligante clivável pode ser clivado por enzimas, tais como proteases. Um ligante clivável pode compreender um ligante valina-citrulina ou um peptídeo valina-alanina. Um ligante contendo valina-citrulina ou valina-alanina pode conter um grupo pentafluorofenila. Um ligante contendo valina-citrulina ou valina-alanina pode conter um grupo maleimida ou succinimida. Um ligante contendo valina-citrulina ou valina-alanina pode conter um grupo de ácido aminobenzóico para (PABA). Um ligante contendo valina-
citrulina ou valina-alanina pode conter um grupo PABA e um grupo pentafluorofenila. Um ligante contendo valina- citrulina ou valina-alanina pode conter um grupo PABA e um grupo maleimida ou succinimida.
[00333] Um ligante não clivável pode ser insensível à protease. Um ligante não clivável pode ser um ligante maleimidocaproílo. Um ligante maleimidocaproílo pode compreender N-maleimidometilciclohexano-1-carboxilato. Um ligante maleimidocaproílo pode conter um grupo succinimida.
Um ligante maleimidocaproílo pode conter o grupo pentafluorofenila. Um ligante pode ser uma combinação de um grupo maleimidocaproílo e uma ou mais moléculas de polietilenoglicol. Um ligante pode ser um ligante maleimida- PEG4. Um ligante pode ser uma combinação de um ligante maleimidocaproílo contendo um grupo succinimida e uma ou mais moléculas de polietilenoglicol. Um ligante pode ser uma combinação de um ligante maleimidocaproílo contendo um grupo pentafluorofenila e uma ou mais moléculas de polietilenoglicol. Um ligante pode conter maleimidas ligadas a moléculas de polietilenoglicol em que o polietilenoglicol pode permitir mais flexibilidade do ligante ou pode ser usado para alongar o ligante. Um ligante pode ser um ligante (maleimidocaproílo)-(valina-citrulina)-(para- aminobenziloxicarbonila). Um ligante pode ser um ligante adequado para ligação a uma cisteína manipulada (THIOMAB),
tal como um ligante (maleimidocaproílo)-(valina-citrulina)- (para-aminobenziloxicarbonila).
[00334] Um ligante também pode compreender alquileno, alquenileno, alquinileno, poliéter, poliéster, grupo(s) poliamida e também, poliaminoácidos, polipeptídeos, peptídeos cliváveis ou aminobenzilcarbamatos. Um ligante pode conter uma maleimida em uma extremidade e um éster N- hidroxisuccinimidil na outra extremidade. Um ligante pode conter uma lisina com uma amina N-terminal acetilada e um local de clivagem de valina-citrulina. Um ligante pode ser uma ligação criada por uma transglutaminase microbiana, em que a ligação pode ser criada entre uma fração contendo amina e uma fração manipulada para conter glutamina como resultado da enzima que catalisa uma formação de ligação entre o grupo acila de uma cadeia lateral de glutamina e a amina primária de uma cadeia de lisina. Um ligante pode conter uma amina primária reativa. Um ligante pode ser um ligante Sortase A.
Um ligante Sortase A pode ser criado por uma fusão de um motivo de reconhecimento LPXTG (SEQ ID Nº: 49) a um motivo GGG N-terminal pela enzima Sortase A para regenerar uma ligação de amida endógena. O ligante criado pode, portanto, ligar uma fração ligada ao motivo de reconhecimento LPXTG (SEQ ID Nº: 49) com uma fração ligada ao motivo GGG N- terminal.
[00335] Nos conjugados, um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D) e da Tabela 14 está ligado ao anticorpo por meio de um ligante(s), também referido nesse documento como L3. L3, conforme usado nesse documento, pode ser selecionado a partir de qualquer uma das frações de ligante discutidas nesse documento. O ligante que liga o composto ou sal ao construto de anticorpo de um conjugado pode ser curto, longo, hidrofóbico, hidrofílico, flexível ou rígido, ou pode ser composto de segmentos que cada um tem, independentemente, uma ou mais das propriedades mencionadas acima, de modo que o ligador pode incluir segmentos com propriedades diferentes. Os ligantes podem ser polivalentes, de modo que liguem covalentemente mais de um composto ou sal a um único local no construto de anticorpo, ou monovalentes, de modo que liguem covalentemente um único composto ou sal a um único local no construto de anticorpo.
[00336] Os ligantes da divulgação (L3) podem ter de cerca de 10 a cerca de 500 átomos em um ligante, tal como de cerca de 10 a cerca de 400 átomos, tal como cerca de 10 a cerca de 300 átomos em um ligante. Em determinadas modalidades, os ligantes da divulgação têm de cerca de 30 a cerca de 400 átomos, tal como de cerca de 30 a cerca de 300 átomos no ligante.
[00337] Conforme será apreciado por aqueles versados na técnica, os ligantes podem ligar um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E),
(II-A), ( II-B), (II-C) e (II-D) e Tabela 14 ao construto de anticorpo por ligações covalentes entre o ligante e o construto de anticorpo e composto.
Conforme usado nesse documento, a expressão "ligante" se destina a incluir (i)
formas não conjugadas do ligante que incluem um grupo funcional capaz de ligar covalentemente o ligante a um composto de amino-pirazinocarboxamida e um grupo funcional capaz de ligar covalentemente o ligante a um construto de anticorpo; (ii) formas parcialmente conjugadas do ligante que incluem um grupo funcional capaz de ligar covalentemente o ligante a um construto de anticorpo e que está covalentemente ligado a um composto(s) ou sal (ou sais) de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E),
(II-A), (II-B), (II-C) e (II-D) e Tabela 14, ou vice-versa;
e (iii) formas totalmente conjugadas do ligante que está covalentemente ligado tanto a um composto como um sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E),
(II- A), (II-B), (II-C) e (II-D) e Tabela 14 e um construto de anticorpo.
Uma modalidade se refere a um conjugado formado pelo contato de um construto de anticorpo que liga um receptor de superfície celular ou antígeno associado a tumor expresso em uma célula tumoral a um composto ligante descrito nesse documento sob condições em que o composto ligante se liga covalentemente ao construto de anticorpo. Uma modalidade se refere a um método de preparação de um conjugado formado pelo contato de um composto ligante sob condições em que o composto ligante se liga covalentemente ao construto de anticorpo.
[00338] Em determinadas modalidades, qualquer um dos compostos ou sais descritos na seção intitulada "Compostos" está ligado covalentemente a um ligante (L3). O ligante pode estar ligado covalentemente a qualquer posição, se a valência permitir. O ligante pode compreender uma fração reativa, por exemplo, um eletrófilo que pode reagir para formar uma ligação covalente com uma fração de um construto de anticorpo tal como, por exemplo, uma lisina, serina, treonina, cisteína, tirosina, ácido aspártico, glutamina, um resíduo de aminoácido não natural ou resíduo de ácido glutâmico. Em algumas modalidades, um composto ou sal de um composto na seção intitulada "Compostos" nesse documento está ligado covalentemente através do ligante a um construto de anticorpo.
[00339] Ligantes polivalentes exemplificativos que podem ser usados para ligar muitos compostos de amino- pirazinocarboxamida a um construto de anticorpo estão descritos. Por exemplo, a tecnologia de ligante Fleximer® tem o potencial de permitir conjugados de DAR elevada com boas propriedades físico-químicas. Conforme mostrado abaixo, a tecnologia de ligante Fleximer® é baseada na incorporação de moléculas de fármacos em uma espinha dorsal poliacetal solubilizante por meio de uma sequência de ligações éster.
A metodologia processa conjugados altamente carregados (DAR até 20) enquanto mantém boas propriedades físico-químicas.
Esta metodologia poderia ser utilizada com o composto de amino-pirazinocarboxamida conforme mostrado no Esquema abaixo.
[00340] Para utilizar a tecnologia de ligante Fleximer® descrita no esquema acima, um álcool alifático pode estar presente ou introduzido no composto de amino- pirazinocarboxamida. A fração de álcool é então conjugada a uma fração de alanina, que é então incorporada sinteticamente no ligante Fleximer®. O processamento lipossomal do conjugado in vitro libera o fármaco de origem contendo álcool.
[00341] A título de exemplo e não de limitação, alguns ligantes cliváveis e não cliváveis que podem ser incluídos nos conjugados estão descritos abaixo, além daqueles descritos anteriormente.
[00342] Os ligantes de sulfamida podem ser usados para ligar muitos compostos amino-pirazinocarboxamida a um construto de anticorpo. Os ligantes de sulfamida são conforme descritos nesse documento e, por exemplo, a Número de Publicação da Patente U.S. 2019/0038765, cujos ligantes são incorporados nesse documento por referência
[00343] Os ligantes cliváveis podem ser cliváveis in vitro e in vivo. Os ligantes cliváveis podem incluir ligações química ou enzimaticamente instáveis ou degradáveis. Os ligantes cliváveis podem contar com processos no interior da célula para liberar um composto de amino- pirazinocarboxamida, tal como a redução no citoplasma, exposição a condições ácidas no lisossomo ou clivagem por proteases específicas ou outras enzimas no interior da célula. Os ligantes cliváveis podem incorporar uma ou mais ligações químicas que são quimicamente ou enzimaticamente cliváveis, enquanto o restante do ligante pode ser não clivável.
[00344] Um ligante pode conter um grupo quimicamente lábil, tais como grupos hidrazona e/ou dissulfeto. Ligantes que compreendem grupos quimicamente lábeis podem explorar propriedades diferenciais entre o plasma e alguns compartimentos citoplasmáticos. As condições intracelulares que podem facilitar a liberação de um composto de amino- pirazinocarboxamida para ligantes contendo hidrazona podem ser o ambiente ácido de endossomos e lisossomos, enquanto os ligantes contendo dissulfeto podem ser reduzidos no citosol, que pode conter concentrações elevadas de tiol, por exemplo, glutationa. A estabilidade do plasma de um ligante contendo um grupo quimicamente lábil pode ser aumentada pela introdução de impedimento estérico usando substituintes próximos ao grupo quimicamente lábil.
[00345] Grupos ácido lábeis, como a hidrazona, podem permanecer intactos durante a circulação sistêmica no ambiente de pH neutro do sangue (pH 7,3-7,5) e podem sofrer hidrólise e podem liberar o composto de amino- pirazinocarboxamida uma vez que o conjugado de anticorpo seja internalizado em compartimentos endossomais levemente ácidos (pH 5,0-6,5) e lisossomais levemente ácidos (pH 4,5- 5,0) da célula. Esse mecanismo de liberação dependente do pH pode estar associado à liberação inespecífica do fármaco.
Para aumentar a estabilidade do grupo hidrazona do ligante, o ligante pode ser variado por modificação química, por exemplo, substituição, permitindo o ajuste para atingir uma liberação mais eficiente no lisossomo com uma perda minimizada na circulação.
[00346] Os ligantes contendo hidrazona podem conter locais de clivagem adicionais, tais como locais de clivagem ácido lábeis e/ou locais de clivagem enzimaticamente lábeis.
Os conjugados incluindo ligantes contendo hidrazona exemplificativos podem incluir, por exemplo, as seguintes estruturas: em que D é um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D), e Ab é um construto de anticorpo, respectivamente, e n representa o número de ligantes ligados por composto (LP) ligados ao construto de anticorpo. Em determinados ligantes, como o ligante (Ia), o ligante pode compreender dois grupos cliváveis, uma fração dissulfeto e uma fração hidrazona. Para os referidos ligantes, a liberação eficaz do composto de amino-pirazinocarboxamida livre não modificado pode necessitar de pH ácido ou redução de dissulfeto e pH ácido. Ligantes como (Ib) e (Ic) podem ser eficazes com um único local de clivagem de hidrazona.
[00347] Outros grupos ácido lábeis que podem ser incluídos em ligantes incluem ligantes contendo cis- aconitil. A química cis-aconitil pode usar um ácido carboxílico justaposto a uma ligação amida para acelerar a hidrólise da amida em condições ácidas.
[00348] Ligantes cliváveis também podem incluir um grupo dissulfeto. Os dissulfetos podem ser termodinamicamente estáveis em pH fisiológico e podem ser concebidos para liberar o composto de amino- pirazinocarboxamida aquando da internalização dentro das células, em que o citosol pode fornecer um ambiente significativamente mais redutor em comparação com o ambiente extracelular. A cisão de ligações dissulfeto pode exigir a presença de um cofator tiol citoplasmático, tal como glutationa (reduzida) (GSH), de modo que ligantes contendo dissulfeto possam ser razoavelmente estáveis em circulação, liberando seletivamente um composto de amino- pirazinocarboxamida no citosol. A enzima intracelular,
proteína dissulfeto isomerase, ou enzimas semelhantes capazes de clivar ligações dissulfeto, também podem contribuir para a clivagem preferencial de ligações dissulfeto dentro das células. GSH pode estar presente em células em um intervalo de concentração de 0,5-10 mM em comparação com uma concentração significativamente mais baixa de GSH ou cisteína, o tiol de baixo peso molecular mais abundante, em circulação a aproximadamente 5 µM. As células tumorais, onde o fluxo sanguíneo irregular pode levar a um estado de hipóxia, podem resultar em aumento da atividade de enzimas redutoras e, portanto, concentrações ainda mais elevadas de glutationa. A estabilidade in vivo de um ligante contendo dissulfeto pode ser melhorada por modificação química do ligante, por exemplo, uso de impedimento estérico adjacente à ligação dissulfeto.
[00349] Os conjugados de anticorpos contendo compostos de amino-pirazinocarboxamida que incluem ligantes contendo dissulfeto exemplificativos podem incluir as seguintes estruturas:
em que D é um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D), e Ab é um construto de anticorpo, respectivamente, n representa o número de compostos ligados a ligantes (L3) ligados ao construto de anticorpo e R é independentemente selecionado em cada ocorrência a partir de hidrogênio ou alquila por exemplo . O aumento do impedimento estérico adjacente à ligação dissulfeto pode aumentar a estabilidade do ligante. Estruturas tais como (IIa) e (IIc) podem mostrar estabilidade in vivo aumentada quando um ou mais grupos R são selecionados a partir de um alquila inferior, como metila.
[00350] Outro tipo de ligante que pode ser usado é um ligante que é clivado especificamente por uma enzima. Por exemplo, o ligante pode ser clivado por uma enzima lisossomal. Esses ligantes podem ser baseados em peptídeos ou podem incluir regiões peptídicas que podem atuar como substratos para enzimas. Os ligantes à base de peptídeos podem ser mais estáveis no plasma e no meio extracelular do que os ligantes quimicamente lábeis.
[00351] As ligações peptídicas podem ter boa estabilidade sérica, pois as enzimas proteolíticas lisossomais podem ter atividade muito baixa no sangue devido a inibidores endógenos e o valor de pH do sangue desfavoravelmente elevado em comparação com os lisossomos.
A liberação de um composto de amino-pirazinocarboxamida de um construto de anticorpo pode ocorrer devido à ação de proteases lisossomais, por exemplo, catepsina e plasmina.
Essas proteases podem estar presentes em níveis elevados em determinados tecidos tumorais. O ligante pode ser clivável por uma enzima lisossomal. A enzima lisossomal pode ser, por exemplo, catepsina B, β-glucuronidase ou β-galactosidase.
[00352] O peptídeo clivável pode ser selecionado a partir de tetrapeptídeos, tais como Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID Nº: 235), Ala-Leu-Ala-Leu (SEQ ID Nº: 236) ou dipeptídeos, tais como Val-Cit, Val-Ala e Phe-Lys. Os dipeptídeos podem ter menor hidrofobicidade em comparação com peptídeos mais longos.
[00353] Uma variedade de ligantes cliváveis à base de dipeptídeos pode ser usada nos construtos de anticorpo para formar conjugados de um composto de amino- pirazinocarboxamida descrito nesse documento.
[00354] Os ligantes enzimaticamente cliváveis podem incluir um espaçador autoimolativo para separar espacialmente o composto de amino-pirazinocarboxamida do local de clivagem enzimática. A ligação direta de um composto de amino-pirazinocarboxamida a um ligante de peptídeo pode resultar na liberação proteolítica de um aduto de aminoácido do composto de amino-pirazinocarboxamida, prejudicando assim sua atividade. O uso de um espaçador autoimolativo pode permitir a eliminação do composto de amino- pirazinocarboxamida totalmente ativo e quimicamente não modificado após a hidrólise da ligação amida.
[00355] Um espaçador autoimolativo pode ser um grupo álcool para-aminobenzílico bifuncional, que pode se ligar ao peptídeo através do grupo amino, formando uma ligação amida, enquanto compostos de amina contendo amino- pirazinocarboxamida podem ser ligados por meio de funcionalidades carbamato ao grupo hidroxila benzílico do ligante (para se obter um p-amidobenzilcarbamato, PABC). O composto de pró-amino-pirazinocarboxamida resultante pode ser ativado mediante clivagem mediada por protease, levando a uma reação de eliminação-1,6 liberando o composto de amino- pirazinocarboxamida não modificado, dióxido de carbono e remanescentes do grupo ligante. O esquema seguinte descreve a fragmentação de p-amidobenzilcarbamato e a liberação do composto de amino-pirazinocarboxamida: em que X-D representa o composto de amino- pirazinocarboxamida não modificado.
[00356] Variantes heterocíclicas desse grupo autoimolativo também foram descritas.
[00357] O ligante enzimaticamente clivável pode ser um ligante à base de ácido β-glucurônico. A liberação fácil do composto de amino-pirazinocarboxamida pode ser realizada por meio da clivagem da ligação glicosídica B-glucuronídeo pela enzima lisossomal β-glucuronidase. Esta enzima pode estar abundantemente presente nos lisossomos e pode ser superexpressada em alguns tipos de tumor, enquanto a atividade da enzima fora das células pode ser baixa. Os ligantes à base de ácido β-glucurônico podem ser usados para contornar a tendência de um conjugado de construto de anticorpo de um composto de amino-pirazinocarboxamida para sofrer agregação devido à natureza hidrofílica dos β- glucuronídeos. Em determinadas modalidades, os ligantes à base de ácido β-glucurônico podem ligar um construto de anticorpo a um composto de amino-pirazinocarboxamida hidrofóbico. O esquema a seguir descreve a liberação de um composto de amino-pirazinocarboxamida (D) a partir de um conjugado de construto de anticorpo de um composto de amino- pirazinocarboxamida contendo um ligante à base de ácido β- glucurônico: em que Ab indica o construto de anticorpo.
[00358] Têm sido descritos uma variedade de ligantes à base de ácido β-glucurônico cliváveis úteis para ligar fármacos tais como auristatinas, camptotecina e análogos de doxorrubicina, ligantes de sulco menor CBI e psimberina a anticorpos. Estes ligantes à base de ácido β-glucurônico podem ser usados nos conjugados. Em determinadas modalidades, o ligante enzimaticamente clivável é um ligante à base de β-galactosídeo. O β-galactosídeo está presente abundantemente nos lisossomos, enquanto a atividade enzimática fora das células é baixa.
[00359] Além disso, os compostos de amino- pirazinocarboxamida contendo um grupo fenol podem ser covalentemente ligados a um ligante através do oxigênio fenólico. Um desses ligantes depende de uma metodologia na qual um "Space Link" de diamino-etano é usado em conjunto com grupos autoimolativos baseados em "PABO" tradicionais para entregar fenóis.
[00360] Os ligantes cliváveis podem incluir porções ou segmentos não cliváveis e/ou segmentos ou porções cliváveis podem ser incluídos em um ligante que de outra forma não é clivável para torná-lo clivável. Apenas a título de exemplo, o polietilenoglicol (PEG) e polímeros relacionados podem incluir grupos cliváveis na espinha dorsal do polímero. Por exemplo, um polietilenoglicol ou ligante de polímero pode incluir um ou mais grupos cliváveis, tais como um dissulfeto, uma hidrazona ou um dipeptídeo.
[00361] Outras ligações degradáveis que podem ser incluídas em ligantes podem incluir ligações éster formadas pela reação de ácidos carboxílicos de PEG ou ácidos carboxílicos de PEG ativados com grupos de álcool em um composto de amino-pirazinocarboxamida, em que os referidos grupos de éster podem hidrolisar sob condições fisiológicas para liberar o composto de amino-pirazinocarboxamida. As ligações hidroliticamente degradáveis podem incluir, mas não estão limitadas a, ligações de carbonato; ligações de imina resultantes da reação de uma amina e um aldeído; ligações de éster de fosfato formadas pela reação de um álcool com um grupo fosfato; ligações acetal que são o produto da reação de um aldeído e um álcool; ligações ortoéster que são o produto da reação de um formato e um álcool; e ligações de oligonucleotídeo formadas por um grupo fosforamidita, incluindo mas não se limitando a, na extremidade de um polímero e um grupo hidroxila 5' de um oligonucleotídeo.
[00362] Um ligante pode conter um peptídeo enzimaticamente clivável, por exemplo, um ligante compreendendo a fórmula estrutural (IIIa), (IIIb), (IIIc) ou (IIId): ou um sal do mesmo, em que: "peptídeo" representa um peptídeo (ilustrado na orientação NàC, em que o peptídeo inclui os "terminais" amina e carboxi) que é clivável por uma enzima lisossomal; T representa um polímero compreendendo uma ou mais unidades de etilenoglicol ou uma cadeia de alquileno, ou combinações dos mesmos; Ra é selecionado a partir de hidrogênio, alquila, sulfonato e metilsulfonato; Ry é hidrogênio ou C1-4alquila-(O)r-(C1-4alquileno)s-G1 ou C1- 1] Rz é C1-4alquila-(O)r-(C1- 4alquila-(N)-[(C1-4alquileno)-G 2; 2; G1 é SO3H, CO2H, PEG 4-32, ou uma fração de 4alquileno)s-G açúcar; G2 é SO3H, CO2H, ou fração de PEG 4-32; r é 0 ou 1; s é 0 ou 1; p é um número inteiro variando de 0 a 5; q é 0 ou 1; x é 0 ou 1; y é 0 ou 1; representa o ponto de ligação do ligante a um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D); e * representa o ponto de ligação ao restante do ligante.
[00363] Em determinadas modalidades, o peptídeo pode ser selecionado a partir de aminoácidos naturais, aminoácidos não naturais ou combinações dos mesmos. Em determinadas modalidades, o peptídeo pode ser selecionado a partir de um tripeptídeo ou um dipeptídeo. Em modalidades em particular, o dipeptídeo pode compreender L-aminoácidos e ser selecionado a partir de: Val-Cit; Cit-Val; Ala-Ala; Ala- Cit; Cit-Ala; Asn-Cit; Cit-Asn; Cit-Cit; Val-Glu; Glu-Val; Ser-Cit; Cit-Ser; Lys-Cit; Cit-Lys; Asp-Cit; Cit-Asp; Ala- Val; Val-Ala; Phe-Lys; Lys-Phe; Val-Lys; Lys-Val; Ala-Lys; Lys-Ala; Phe-Cit; Cit-Phe; Leu-Cit; Cit-Leu; Ile-Cit; Cit-
Ile; Phe-Arg; Arg-Phe; Cit-Trp; e Trp-Cit, ou sais dos mesmos.
[00364] Modalidades exemplificativas de ligantes de acordo com a fórmula estrutural (IIIa) são ilustradas abaixo (conforme ilustrado, os ligantes incluem um grupo reativo adequado para ligar covalentemente o ligante a um construto de anticorpo):
em que indica um local de ligação de um ligante (L3) a um composto de amino-pirazinocarboxamida.
[00365] Modalidades exemplificativas de ligantes de acordo com a fórmula estrutural (IIIb), (IIIc) ou (IIId) que podem ser incluídos nos conjugados podem incluir os ligantes ilustrados abaixo (conforme ilustrado, os ligantes incluem um grupo reativo adequado para ligar covalentemente o ligante a um construto de anticorpo):
em que indica um local de ligação a um composto de amino-
pirazinocarboxamida.
[00366] O ligante pode conter uma fração de açúcar enzimaticamente clivável, por exemplo, um ligante compreendendo a fórmula estrutural (IVa), (IVb), (IVc),
(IVd) ou (IVe):
ou um sal do mesmo, em que: q é 0 ou 1; r é 0 ou 1; X1 é CH2, O ou NH; representa o ponto de ligação do ligante (L3) ao composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), ( II-B), (II-C) e (II-D); e * representa o ponto de ligação ao restante do ligante.
[00367] Modalidades exemplificativos de ligantes de acordo com a fórmula estrutural (IVa) que podem ser incluídos nos conjugados de construto de anticorpo descritos nesse documento podem incluir os ligantes ilustrados abaixo (conforme ilustrado, os ligantes incluem um grupo adequado para ligar covalentemente o ligante a um construto de anticorpo):
em que representa o ponto de ligação do ligante (L3) ao composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D).
[00368] Modalidades exemplificativas de ligantes de acordo com a fórmula estrutural (IVb) que podem ser incluídos nos conjugados incluem os ligantes ilustrados abaixo (conforme ilustrado, os ligantes incluem um grupo adequado para ligar covalentemente o ligante a um construto de anticorpo):
em que representa o ponto de ligação do ligante (L3) a um composto de amino-pirazinocarboxamida.
[00369] Modalidades exemplificativas de ligantes de acordo com a fórmula estrutural (IVc) que podem ser incluídos nos conjugados incluem os ligantes ilustrados abaixo (conforme ilustrado, os ligantes incluem um grupo adequado para ligar covalentemente o ligante a um construto de anticorpo):
em que representa o ponto de ligação do ligante (L3) a um composto de amino-pirazinocarboxamida.
[00370] Modalidades exemplificativas de ligantes de acordo com a fórmula estrutural (IVd) que podem ser incluídos nos conjugados incluem os ligantes ilustrados abaixo (conforme ilustrado, os ligantes incluem um grupo adequado para ligar covalentemente o ligante a um anticorpo):
em que representa o ponto de local de ligação do ligante (L3) a um composto de amino-pirazinocarboxamida.
[00371] Modalidades exemplificativas de ligantes de acordo com a fórmula estrutural (IVe) que podem ser incluídos nos conjugados incluem os ligantes ilustrados abaixo (conforme ilustrado, os ligantes incluem um grupo adequado para ligar covalentemente o ligante a um construto de anticorpo):
em que representa o ponto de ligação do ligante (L3) a um composto de amino-pirazinocarboxamida.
[00372] Embora os ligantes cliváveis possam fornecer certas vantagens, os ligantes que compreendem o conjugado não precisam ser cliváveis. Para ligantes não cliváveis, a liberação do composto de amino-pirazinocarboxamida pode não depender das propriedades diferenciais entre o plasma e alguns compartimentos citoplasmáticos. A liberação do composto de amino-pirazinocarboxamida pode ocorrer após a internalização do conjugado de anticorpo via endocitose mediada por antígeno e entrega ao compartimento lisossomal, onde o construto de anticorpo pode ser degradado ao nível de aminoácidos por meio de degradação proteolítica intracelular. Este processo pode liberar um derivado do composto de amino-pirazinocarboxamida (um metabólito do conjugado contendo um ligante não clivável-composto heterocíclico), que é formado pelo composto de amino- pirazinocarboxamida, o ligante e o resíduo ou resíduos de aminoácido aos quais o ligante foi covalentemente ligado. O composto de payload derivado de conjugados de compostos de amino-pirazinocarboxamida de construto de anticorpo com ligantes não cliváveis pode ser mais hidrofílico e menos permeável à membrana, o que pode levar a menos efeitos de bystander e menos toxicidades não-específicas em comparação com conjugados de anticorpos com um ligante clivável. Os conjugados de anticorpos com ligantes não cliváveis podem ter maior estabilidade em circulação do que os conjugados de anticorpos com ligantes cliváveis. Os ligantes não cliváveis podem incluir cadeias de alquileno ou podem ser poliméricos, tais como, por exemplo, com base em polímeros de polialquilenoglicol, polímeros de amida ou podem incluir segmentos de cadeias de alquileno, polialquilenoglicóis e/ou polímeros de amida. O ligante pode conter um segmento de polietilenoglicol com 1 a 6 unidades de etilenoglicol.
[00373] O ligante pode ser não clivável in vivo, por exemplo, um ligante de acordo com as formulações abaixo:
ou sais dos mesmos, em que: Ra é selecionado a partir de hidrogênio, alquila, sulfonato e metilsulfonato; Rx é uma fração reativa incluindo um grupo funcional capaz de ligar covalentemente o ligante a um construto de anticorpo; e representa o ponto de ligação do ligante (L3) ao composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D).
[00374] Modalidades exemplificativos de ligantes de acordo com a fórmula estrutural (Va)-(Ve) que podem ser incluídos nos conjugados incluem os ligantes ilustrados abaixo (conforme ilustrado, os ligantes incluem um grupo adequado para ligar covalentemente o ligante a um construto de anticorpo, e representa o ponto de ligação do ligante
(L3) ao composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D):
[00375] Os grupos de ligação que são usados para ligar os ligantes a um construto de anticorpo podem ser eletrofílicos e incluem, por exemplo, grupos maleimida, dissulfetos ativados, ésteres ativos, como ésteres NHS e ésteres HOBt, haloformatos, halogenetos de ácido, alquila e halogenetos de benzila tais como haloacetamidas. Existem também tecnologias emergentes relacionadas a maleimidas "autoestabilizadoras" e "dissulfetos de ponte" que podem ser usadas de acordo com a divulgação.
[00376] Os grupos maleimida são frequentemente usados na preparação de conjugados devido à sua especificidade para reagir com grupos tiol de, por exemplo, grupos cisteína do anticorpo de um conjugado. A reação entre um grupo tiol de um anticorpo e um fármaco com um ligante incluindo um grupo maleimida prossegue de acordo com o seguinte esquema:
[00377] A reação reversa que leva à eliminação da maleimida de uma succinimida tio-substituída também pode ocorrer. Esta reação reversa é indesejável porque o grupo maleimida pode subsequentemente reagir com outro grupo tiol disponível, tais como outras proteínas no corpo possuindo cisteínas disponíveis. Consequentemente, a reação reversa pode minar a especificidade de um conjugado. Um método para prevenir a reação reversa é incorporar um grupo básico no grupo de ligação mostrado no esquema acima. Sem desejar ser limitado pela teoria, a presença do grupo básico pode aumentar a nucleofilicidade das moléculas de água próximas para promover a hidrólise de abertura de anel do grupo succinimida. A forma hidrolisada do grupo de ligação é resistente à desconjugação na presença de proteínas plasmáticas. Os chamados ligantes "auto-estabilizantes" fornecem conjugados com estabilidade melhorada. Um esquema representativo está mostrado abaixo:
[00378] A reação de hidrólise esquematicamente representada acima pode ocorrer em qualquer grupo carbonila do grupo succinimida. Consequentemente, dois isômeros possíveis podem resultar, conforme mostrado abaixo:
[00379] A identidade da base, bem como a distância entre a base e o grupo maleimida podem ser modificados para ajustar a taxa de hidrólise do grupo succinimida tio- substituído e otimizar a entrega de um conjugado a um alvo, por exemplo, melhorando a especificidade e estabilidade do conjugado.
[00380] As bases adequadas para inclusão em um ligante, por exemplo, qualquer L3 com um grupo maleimida antes da conjugação a um construto de anticorpo pode facilitar a hidrólise de um grupo succinimida próximo formado após a conjugação do construto de anticorpo ao ligante. As bases podem incluir, por exemplo, aminas (por exemplo, - N(R26)(R27), onde R26 e R27 são independentemente selecionados a partir de H e C1-6alquila), heterociclos contendo nitrogênio (por exemplo, um heterociclo de 3 a 12 membros incluindo um ou mais átomos de nitrogênio e, opcionalmente, uma ou mais ligações duplas), amidinas, guanidinas e carbociclos ou heterociclos substituídos com um ou mais grupos amina (por exemplo, um ciclo aromático ou não aromático de 3 a 12 membros, opcionalmente incluindo um heteroátomo, tal como um átomo de nitrogênio e substituído com uma ou mais aminas do tipo -N(R26)(R27), onde R26 e R27 são independentemente selecionados a partir de H e C1-6alquila).
Uma unidade básica pode ser separada de um grupo maleimida por, por exemplo, uma cadeia de alquileno da forma - (CH2)m- , onde m é um número inteiro de 0 a 10. Uma cadeia de alquileno pode ser opcionalmente substituída com outros grupos funcionais, conforme descrito nesse documento.
[00381] Um ligante (L3) com um grupo maleimida pode incluir grupos de retirada de elétrons, tais como, mas não limitados a, -C(O)R, =O, -CN, -NO2, -CX3, -X, -COOR, -CONR2, -COR, -COX, -SO2R, -SO2OR, -SO2NHR, -SO2NR2, -PO3R2, - P(O)(CH3)NHR, -NO, -NR3+, -CR=CR2, e -C≡CR,, onde cada R é independentemente selecionado a partir de H e C1-6alquila e cada X é independentemente selecionado a partir de F, Br, Cl e I. Ligantes auto-estabilizantes também podem incluir arila, por exemplo, fenila ou heteroarila, por exemplo, piridina, grupos opcionalmente substituídos com grupos de retirada de elétrons, tais como aqueles descritos nesse documento.
[00382] Exemplos de ligantes auto-estabilizantes são fornecidos, por exemplo, na Publicação de Patente U.S. Número 2013/0309256, cujos ligantes são incorporados nesse documento por referência. Será entendido que um ligante auto- estabilizante útil em conjunto com os compostos da presente invenção pode ser descrito de forma equivalente como ligantes incluindo maleimida não substituídos, ligantes incluindo succinimida tio-substituídos, ou ligantes incluindo succinimida, tio-substituídos, hidrolisados, de anel aberto.
[00383] Em determinadas modalidades, um ligante da divulgação (L3) compreende um grupo estabilizador selecionado a partir de:
[00384] No esquema fornecido acima, a estrutura inferior pode ser referida como (maleimido)-DPR-Val-Cit-PAB, onde DPR se refere ao ácido diaminopropinóico, Val se refere a valina, Cit se refere a citrulina e PAB se refere a para- aminobenzilcarbonila. representa o ponto de ligação ao composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D).
[00385] Um método para criar uma ponte entre um par de grupos sulfidrila derivados da redução de uma ligação dissulfeto interdomínios endógena foi divulgado e está representado no esquema abaixo. Uma vantagem desta metodologia é a capacidade de sintetizar conjugados DAR4 homogêneos por redução total de IgGs (para dar 4 pares de sulfidrilas a partir de dissulfetos intercadeias) seguido da reação com 4 equivalentes do agente alquilante. Conjugados contendo "dissulfetos em ponte" também são reivindicados como tendo estabilidade aumentada.
[00386] Da mesma forma, conforme descrito abaixo, foi desenvolvido um derivado de maleimida que é capaz de formar uma ponte entre um par de grupos sulfidrila.
[00387] Um ligante da divulgação, L3, pode conter as seguintes fórmulas estruturais (VIa), (VIb) ou (VIc):
ou sais dos mesmos, em que: Rq é H ou –O-(CH2CH2O)11-CH3; x é 0 ou 1; y é 0 ou 1; G2 é -CH2CH2CH2SO3H ou –CH2CH2O-(CH2CH2O)11- CH3; Rw é –O-CH2CH2SO3H ou –NH(CO)-CH2CH2O-(CH2CH2O)12-CH3; e * representa o ponto de ligação ao restante do ligante.
[00388] Modalidades exemplificativas de ligantes de acordo com a fórmula estrutural (VIa) e (VIb) que podem ser incluídos nos conjugados podem incluir os ligantes ilustrados abaixo (conforme ilustrado, os ligantes incluem um grupo adequado para ligar covalentemente o ligante a um construto de anticorpo):
em que representa o ponto de ligação do ligante (L3) ao composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D).
[00389] Modalidades exemplificativas de ligantes de acordo com a fórmula estrutural (VIc) que podem ser incluídos nos conjugados de construto de anticorpo podem incluir os ligantes ilustrados abaixo (conforme ilustrado, os ligantes incluem um grupo adequado para ligar covalentemente o ligante a um construto de anticorpo):
em que representa o ponto de ligação do ligante (L3) ao composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D).
[00390] Alguns ligantes exemplificativos (L3) são descritos nos parágrafos seguintes. Em algumas modalidades para um composto ou sal de Fórmula (I-A), (I-B), (I-C), (I- D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D) e Tabela 14, em que a ligação do ligante é a um nitrogênio do composto e a conjugação é a um resíduo de cisteína de um anticorpo ou fração de alvejamento, -L3 é representado pelas fórmulas estabelecidas na Tabela 3 abaixo: Tabela 3
L4 representa o C-terminal do peptídeo e L5 é selecionado a partir de uma ligação, alquileno e heteroalquileno, em que L5 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos selecionados independentemente a partir de R30, e R30 é independentemente selecionado em cada ocorrência a partir de halogênio, -OH, -CN, -O-alquila, -SH, =O, =S, -NH2, -NO2; e C1-C10alquila, C2-C10alquenila, e C2-C10alquinila, cada um dos quais é independentemente opcionalmente substituído em cada ocorrência com uma ou mais substituintes selecionados a partir de halogênio, -OH, -CN, - O-alquila, -SH, =O, =S, -NH2, e -NO2.
em que representa a ligação a um nitrogênio de um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D) e a Tabela 14 e RX representam uma fração reativa. A fração reativa pode ser selecionada, por exemplo, a partir de um eletrófilo, por exemplo, uma carbonila ⍺,β-insaturada, tal como uma maleimida, e um grupo abandonador. Por exemplo, - L3 pode ser representado pelas fórmulas estabelecidas na Tabela 4 abaixo: Tabela 4 em que representa a ligação a um nitrogênio de um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B),
(I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), ( II-C), e (II-D) e Tabela 14.
[00391] Quando conjugados com o resíduo de cisteína do anticorpo ou fração de alvejamento, os referidos ligantes podem ser, por exemplo, representados pelas Fórmulas estabelecidas na Tabela 5 abaixo: Tabela 5 em que RX é uma ligação, uma fração de succinimida ou uma fração de succinimida hidrolisada ligada a um resíduo de cisteína do construto de anticorpo, em que em RX*
representa o ponto de ligação ao referido resíduo; L4 quando presente representa o C-terminal do peptídeo e L5 é selecionado a partir de uma ligação, alquileno e heteroalquileno, em que L5 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de
R30; e R30 quando presente é independentemente selecionado em cada ocorrência a partir de halogênio, -OH, -CN, -O-alquila -SH, =O, =S, -NH2, -NO2; e C1-Cl0alquila, C2-C10alquenila, e C2-C10alquinila, cada um dos quais é independentemente opcionalmente substituído em cada ocorrência com um ou mais substituintes selecionados a partir de halogênio, -OH, -CN, -O-alquila -SH, =O, =S, -NH2 e -NO2. Um peptídeo particularmente preferido é val-ala ou val-cit.
[00392] Em algumas modalidades para um composto ou sal de Fórmula (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C), e (II-D) e Tabela 14, em que a ligação do ligante é a um nitrogênio de um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D) e Tabela 14 e a conjugação é a um resíduo de lisina de um anticorpo ou outra fração de alvejamento, -L3 é representado pelas fórmulas estabelecidas na Tabela 6 abaixo: Tabela 6 em que representa a ligação a um nitrogênio de um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B ), (II-C) e (II-D) e Tabela 14 e RX representa uma fração reativa. A fração reativa pode ser selecionada a partir de ésteres ativados.
Por exemplo, -L3 pode ser representado pelas fórmulas estabelecidas na Tabela 7 abaixo: Tabela 7
[00393] Quando conjugados ao resíduo de lisina de um anticorpo ou outra fração de alvejamento, os referidos ligantes podem, por exemplo, ser representados pelas
Fórmulas estabelecidas na Tabela 8 abaixo em que RX* é uma ligação a um nitrogênio do resíduo de lisina do construto de anticorpo ou fração de alvejamento, em que em RX*
representa o ponto de ligação ao referido resíduo:
Tabela 8
[00394] Conforme observado, representa a ligação a um nitrogênio de um composto ou sal de qualquer uma das
Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B),
(II-C) e (II-D) e Tabela 14. Em modalidades exemplificativos,
os ligantes descritos nesse documento, incluindo aqueles nos parágrafos anteriores, estão ligados a um composto da presente invenção por R4 do Anel A ou Anel B.
Em algumas dessas modalidades exemplificativas, pelo menos um R4 é independentemente selecionado a partir de: (i) C1-C6alquila substituído com a condição de que C1-C6alquila é substituído com -NR52R52 e pelo menos um de entre -OR52, -CO2R52, -(C1-
C6alquila)-OR52, ou (C1-C6alquila)-CO2R52 e em que um R52 de -
NR52R52 é substituído com -L3; (ii) -OR50 em que R50 de -OR50 é
C1-C6alquila substituído, pelo menos um substituinte no referido alquila é -NR52R52 e em que um R52 de -NR52R52 é substituído com -L3; (iii) -OR50 em que R50 de -OR50 é um heterociclo ou carbociclo, pelo menos um substituinte no referido heterociclo e carbociclo é -NR52R52, ou C1-C6alquila substituído com pelo menos um substituinte selecionado a partir de -NR52R52, e em que um R52 de -NR52R52 é substituído com -L3; (iv) heterociclo substituído em que pelo menos um substituinte no referido heterociclo é -NR52R52, ou C1 -
C6alquila substituído com pelo menos um substituinte selecionado a partir de -NR52R52, e em que um R52 de -NR52R52 é substituído com -L3; (v) -NR51R51 em que um R51 de -NR51R15 é substituído com -L3; (vi) -NR51R51 em que um R51 de -NR51R51 é
C1-C6alquila substituído com pelo menos um -NR52R52 e em que um R52 de -NR52R52 é substituído com -L3; (vii) -NR51R51 em que um R51 de -NR51R51 é um heterociclo e pelo menos um substituinte no referido heterociclo é -NR52R52, ou C1 -
C6alquila substituído com pelo menos um substituinte selecionado a partir de -NR52R52, e em que um R52 de -NR52R52 é substituído com -L3; (viii) -NR51R51 em que dois R51 de -NR51R51 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, eles formam um heterociclo contendo N saturado com
5 ou 6 membros não substituído ou substituído, em que pelo menos um dos referidos substituintes é -NR52R52 ou C1-C6alquila substituído com pelo menos um substituinte selecionado a partir de -NR52R52 e em que um R52 de -NR52R52 é substituído com
-L3; ou (ix) dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico de 6 membros não substituído ou substituído com um ou dois heteroátomos de anel selecionados a partir de oxigênio e nitrogênio e pelo menos um substituinte no referido carbociclo e heterociclo é NR52R52 ou C1-C6alquila substituído com pelo menos um substituinte selecionado a partir de - NR52R52 e em que um R52 de -NR52R52 é substituído com -L3.
[00395] R4 pode ser, por exemplo, selecionado a partir de qualquer um dos grupos estabelecidos na Tabela 9A, em que R51 e R52 são conforme descritos nesse documento (incluindo hidrogênio ou Cl-3alquila (por exemplo, metila)) e a linha ondulada indica ligação ao anel A ou anel B: Tabela 9A
[00396] Em modalidades exemplificativas, os ligantes descritos nesse documento, incluindo aqueles nos parágrafos anteriores, são anexados a um composto da presente invenção em um átomo de nitrogênio conforme mostrado abaixo na Tabela
9B, em que L3 representa o ligante:
Tabela 9B
[00397] Em algumas modalidades para um composto ou sal de Fórmula (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A),
(II-B), (II-C), e (II-D) em que a ligação do ligante é a um enxofre de um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas
(I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II- A), (II-B), (II-C)
e (II-D) e Tabela 14 e a conjugação é a um resíduo de lisina de um anticorpo ou outra fração de alvejamento, -L3 é representado pela fórmula apresentada abaixo na Tabela 10:
Tabela 10 em que representa a ligação a um enxofre de um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-
D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D) e Tabela 14 e RX representa uma fração reativa.
A fração reativa pode ser selecionada a partir de um éster ativado. Por exemplo, -L3 pode ser representado pelas fórmulas: , e .
[00398] Quando conjugado ao resíduo de lisina de um anticorpo ou outra fração de alvejamento, os referidos ligantes podem ser representados pelas seguintes Fórmulas na Tabela 11: Tabela 11 em que RX * está ligado a um nitrogênio do resíduo de lisina do construto de anticorpo ou fração de alvejamento, em que em RX* representa o ponto de ligação ao referido resíduo:
[00399] Conforme observado, representa a ligação a um átomo de enxofre de um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II- B ), (II-C) e (II-D) e Tabela 14. Em modalidades exemplificativas, os ligantes descritos nesse documento, incluindo aqueles nos parágrafos anteriores, estão ligados em um átomo de enxofre a um composto ou sal conforme mostrado abaixo na Tabela 12, em que L3 representa o ligante: Tabela 12
[00400] Em outras modalidades exemplificativos, ligantes exemplificativos estão ligados a um átomo de oxigênio de um composto ou sal conforme mostrado abaixo na Tabela 13, em que L3 representa o ligante: Tabela 13
[00401] Tal como é conhecido pelos técnicos versados na técnica, o ligante selecionado para um conjugado em particular pode ser influenciado por uma variedade de fatores, incluindo, mas não se limitando a, o local de ligação ao construto de anticorpo (por exemplo, lys, cys ou outros resíduos de aminoácidos), restrições estruturais do farmacóforo do fármaco e a lipofilicidade do fármaco. O ligante específico selecionado para um conjugado deve procurar equilibrar esses diferentes fatores para a combinação específica de construto de anticorpo/fármaco.
[00402] As propriedades do ligante, ou composto de ligante, também podem impactar a agregação do conjugado sob condições de uso e/ou armazenamento. Normalmente, os conjugados relatados na literatura contêm não mais do que 3- 4 moléculas de fármaco por molécula de anticorpo. As tentativas de obter proporções mais altas de fármaco para anticorpo ("DAR") muitas vezes falharam, particularmente se o fármaco e o ligante eram hidrofóbicos, devido à agregação do conjugado. Em muitos casos, DARs superiores a 3-4 podem ser benéficas como meio de aumentar a potência. Em casos em que o composto payload é mais hidrofóbico por natureza, pode ser desejável selecionar ligantes que são relativamente hidrofílicos como um meio de reduzir a agregação de conjugado, especialmente em casos onde são desejadas DARs superiores a 3-4. Assim, em determinadas modalidades, o ligante incorpora frações químicas que reduzem a agregação dos conjugados durante o armazenamento e/ou uso. Um ligante pode incorporar grupos polares ou hidrofílicos, tais como grupos carregados ou grupos que se tornam carregados sob pH fisiológico para reduzir a agregação dos conjugados. Por exemplo, um ligante pode incorporar grupos carregados, tais como sais ou grupos que desprotonam, por exemplo, carboxilatos ou protonatos, por exemplo, aminas, em pH fisiológico.
[00403] Em modalidades em particular, a agregação dos conjugados durante o armazenamento ou uso é inferior a cerca de 40%, conforme determinado por cromatografia de exclusão de tamanho (SEC). Em modalidades em particular, a agregação dos conjugados durante o armazenamento ou uso é inferior a 35%, tal como inferior a cerca de 30%, tal como inferior a cerca de 25%, tal como inferior a cerca de 20%, tal como inferior a cerca de 15% , tal como inferior a cerca de 10%, tal como inferior a cerca de 5%, tal como inferior a cerca de 4%, ou mesmo inferior, conforme determinado por cromatografia de exclusão de tamanho (SEC).
[00404] Compostos ligantes exemplificativos da presente invenção incluem aqueles apresentados nas Tabelas 15, 16 e 17, e sais dos mesmos (incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
Conjugados de PROTACS
[00405] Em determinadas modalidades, um conjugado de um composto descrito nesse documento pode ser concebido para aumentar a destruição da proteína alvo mediada por ubiquitina através da via da ubiquitina. O processo de ligar moléculas de ubiquitina a uma proteína alvo normalmente envolve 3 enzimas e as etapas: 1) uma enzima El que pode ativar a ubiquitina, 2) uma enzima E2 que pode transferir a ubiquitina ativada e 3) uma enzima ligase E3 de múltiplas subunidades que pode receber a ubiquitina ativada e catalisar uma ligação da ubiquitina à proteína alvo.
[00406] Em algumas modalidades, um conjugado inclui um módulo de alvejamento de proteólise (PTM; também referido como quimera de alvejamento de proteólise ou PROTAC). Um PTM pode compreender uma pequena molécula que pode se ligar a uma subunidade de ubiquitina ligase E3 e uma fração de ligação ao alvo (um composto descrito nesse documento) que se liga a uma proteína alvo. A pequena molécula de ligação de ubiquitina ligase E3 é ligada, diretamente ou por um espaçador (S), à fração de ligação alvo.
Formulações Farmacêuticas
[00407] As composições e métodos descritos nesse documento podem ser considerados úteis como composições farmacêuticas para administração a um indivíduo com necessidade das mesmas. As composições farmacêuticas podem compreender pelo menos as composições descritas nesse documento e um ou mais veículos, diluentes, excipientes, estabilizadores, agentes dispersantes, agentes de suspensão e/ou agentes espessantes farmaceuticamente aceitáveis. A composição pode compreender o conjugado possuindo um construto de anticorpo e um composto de amino- pirazinocarboxamida. A composição pode compreender o conjugado possuindo um construto de anticorpo e um composto de amino-pirazinocarboxamida. A composição pode compreender o conjugado com um construto de anticorpo, um domínio de ligação ao alvo e um composto de amino-pirazinocarboxamida.
A composição pode compreender qualquer conjugado descrito nesse documento. Em algumas modalidades, o construto de anticorpo é um anticorpo anti-LRRC15. Um conjugado pode compreender um anticorpo anti-LRRCl5 e um composto de amino- pirazinocarboxamida. Em algumas modalidades, o construto de anticorpo é um anticorpo anti-ASGR1. Um conjugado pode compreender um anticorpo anti-ASGRl e um composto de amino- pirazinocarboxamida. Uma composição farmacêutica pode compreender pelo menos os compostos, sais ou conjugados descritos nesse documento e um ou mais de entre tampões, antibióticos, esteroides, carboidratos, fármacos (por exemplo, fármacos de quimioterapia), radiação, polipeptídeos, quelantes, adjuvantes e/ou conservantes.
[00408] As composições farmacêuticas podem ser formuladas usando um ou mais veículos fisiologicamente aceitáveis compreendendo excipientes e auxiliares. A formulação pode ser modificada dependendo da via de administração escolhida. As composições farmacêuticas compreendendo um composto, sal ou conjugado podem ser fabricadas, por exemplo, por liofilização do composto, sal ou conjugado, mistura, dissolução, emulsificação, encapsulamento ou envolvimento do conjugado. As composições farmacêuticas também podem incluir os compostos, sais ou conjugados em uma forma de base livre ou forma de sal farmaceuticamente aceitável.
[00409] Os métodos para formulação dos conjugados podem incluir a formulação de qualquer um dos compostos, sais ou conjugados com um ou mais excipientes ou veículos inertes farmaceuticamente aceitáveis para formar uma composição sólida, semissólida ou líquida. As composições sólidas podem incluir, por exemplo, pós, comprimidos, grânulos dispersíveis e cápsulas e, em alguns aspectos, as composições sólidas contêm ainda substâncias auxiliares não tóxicas, por exemplo, agentes molhantes ou emulsionantes, agentes tamponantes de pH e outros aditivos farmaceuticamente aceitáveis. Alternativamente, os compostos, sais ou conjugados podem ser liofilizados ou na forma de pó para reconstituição com um veículo adequado, por exemplo, água estéril apirogênica, antes do uso.
[00410] As composições farmacêuticas dos conjugados podem compreender pelo menos um ingrediente ativo (por exemplo, um composto, sal ou conjugado e outros agentes). Os ingredientes ativos podem ser envolvidos em microcápsulas preparadas, por exemplo, por técnicas de coacervação ou por polimerização interfacial (por exemplo, microcápsulas de hidroximetilcelulose ou gelatina e microcápsulas de poli- (metilmetacilato), respectivamente), em sistemas de entrega de fármacos coloidais (por exemplo, lipossomas, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões.
[00411] As composições farmacêuticas, muitas vezes, também podem compreender mais de um composto ativo (por exemplo, um composto, sal ou conjugado e outros agentes) conforme necessário para a indicação em particular a ser tratada. Os compostos ativos podem ter atividades complementares que não se afetam adversamente. Por exemplo, a composição pode compreender um agente quimioterapêutico, agente citotóxico, citocina, agente inibidor de crescimento, agente anti-hormonal, agente anti-angiogênico e/ou cardioprotetor. As referidas moléculas podem estar presentes em combinação em quantidades que são eficazes para o propósito pretendido.
[00412] As composições e formulações podem ser esterilizadas. A esterilização pode ser realizada por filtração por meio de filtração estéril.
[00413] As composições podem ser formuladas para administração na forma de uma injeção. Exemplos não limitativos de formulações para injeção podem incluir uma suspensão, solução ou emulsão estéril em veículos oleosos ou aquosos. Os veículos oleosos adequados podem incluir, mas não estão limitados a solventes ou veículos lipofílicos, tais como óleos graxos ou ésteres de ácidos graxos sintéticos, ou lipossomos. As suspensões aquosas para injeção podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão. A suspensão também pode conter estabilizadores adequados. As injeções podem ser formuladas para injeção em bolus ou infusão contínua. Alternativamente, as composições podem ser liofilizadas ou na forma de pó para reconstituição com um veículo adequado, por exemplo, água estéril apirogênica, antes do uso.
[00414] Para administração parenteral, os compostos, sais ou conjugados podem ser formulados em uma forma injetável de dosagem unitária (por exemplo, solução, suspensão, emulsão) em associação com um veículo parenteral farmaceuticamente aceitável. Os referidos veículos podem ser inerentemente não tóxicos e não terapêuticos. Os veículos podem ser água, solução salina, solução de Ringer, solução de dextrose e albumina de soro humano a 5%. Também podem ser utilizados veículos não aquosos, tais como óleos fixos e oleato de etila. Os lipossomos podem ser usados como veículos. O veículo pode conter pequenas quantidades de aditivos, como substâncias que melhoram a isotonicidade e a estabilidade química (por exemplo, tampões e conservantes).
[00415] Também podem ser preparadas preparações de liberação sustentada. Exemplos de preparações de liberação sustentada podem incluir matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos que podem conter o composto, sal ou conjugado, e essas matrizes podem estar na forma de artigos moldados (por exemplo, películas ou microcápsulas).
Exemplos de matrizes de liberação sustentada podem incluir poliésteres, hidrogéis (por exemplo, poli(2-hidroxietil- metacrilato) ou álcool polivinílico), polilactídeos, copolímeros de ácido L-glutâmico e 𝛄-etil-L-glutamato, etileno-acetato de vinila não degradável, copolímeros degradáveis de ácido láctico-ácido glicólico, tal como o LUPRON DEPO™ (isto é, microesferas injetáveis compostas de copolímero de ácido láctico-ácido glicólico e acetato de leuprolida) e ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico.
[00416] As formulações farmacêuticas podem ser preparadas para armazenamento misturando um composto, sal ou conjugado com um veículo, excipiente e/ou estabilizador farmaceuticamente aceitável. Esta formulação pode ser uma formulação liofilizada ou uma solução aquosa. Os veículos, excipientes e/ou estabilizadores aceitáveis podem ser não tóxicos para os destinatários nas dosagens e concentrações usadas. Os veículos, excipientes e/ou estabilizadores aceitáveis podem incluir tampões, tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes, polipeptídeos; proteínas, tais como albumina sérica ou gelatina; polímeros hidrofílicos; aminoácidos; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes tais como EDTA; açúcares como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons formadores de sal, tais como sódio; complexos metálicos; e/ou surfactantes não iônicos ou polietilenoglicol.
[00417] As formulações farmacêuticas dos conjugados podem ter uma proporção de construto de anticorpo-fármaco média ("DAR") selecionada de cerca de 1 a cerca de 20 ou de cerca de 1 a cerca de 10, em que o fármaco é um composto ou sal de qualquer uma das Fórmulas (I-A), (I-B), (I-C), (I-D), (I-E), (II-A), (II-B), (II-C) e (II-D). Em determinadas modalidades, a DAR média da formulação é de cerca de 2 a cerca de 8, tal como de cerca de 3 a cerca de 8, tal como de cerca de 3 a cerca de 7, tal como cerca de 3 a cerca de 5 ou tal como cerca de 2. Em determinadas modalidades, uma formulação farmacêutica tem uma DAR média de cerca de 3, cerca de 3,5, cerca de 4, cerca de 4,5 ou cerca de 5.
Aplicações Terapêuticas
[00418] As composições, conjugados e métodos da presente divulgação podem ser úteis para uma pluralidade de diferentes indivíduos, incluindo, mas não limitados a, um mamífero, humano, mamífero não humano, um animal domesticado (por exemplo, animais de laboratório, animais de estimação, ou gado), animal não domesticado (por exemplo, vida selvagem), cão, gato, roedor, camundongo, hamster, vaca, pássaro, galinha, peixe, porco, cavalo, cabra, ovelha, coelho e qualquer combinação dos mesmos.
[00419] As composições, conjugados e métodos podem ser úteis como um agente terapêutico, por exemplo, um tratamento que pode ser administrado a um sujeito em necessidade do mesmo. Um efeito terapêutico da presente divulgação pode ser obtido em um indivíduo por redução, supressão, remissão ou erradicação de um estado de doença, incluindo, mas não se limitando a um sintoma do mesmo. Um efeito terapêutico em um indivíduo com uma doença ou condição, ou com predisposição a ter ou está começando a ter a doença ou condição, pode ser obtido por uma redução, supressão, prevenção, remissão ou erradicação da condição ou doença, ou estado de pré-condição ou pré-doença.
[00420] Na prática dos métodos descritos nesse documento, quantidades terapeuticamente eficazes das composições e conjugados podem ser administradas a um indivíduo em necessidade dos mesmos, frequentemente para tratar e/ou prevenir uma condição ou progressão da mesma.
Uma composição farmacêutica pode afetar a fisiologia do indivíduo, tal como o sistema imunológico, uma resposta inflamatória ou outro efeito fisiológico. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode variar dependendo da gravidade da doença, da idade e saúde relativa do indivíduo, da potência dos compostos usados e de outros fatores.
[00421] Tratar e/ou tratamento se referem a quaisquer indícios de sucesso no tratamento ou melhora da doença ou condição. O tratamento pode incluir, por exemplo, reduzir, retardar ou aliviar a gravidade de um ou mais sintomas da doença ou condição, ou pode incluir reduzir a frequência com que os sintomas de uma doença, defeito, distúrbio ou condição adversa e semelhantes, são vivenciados por um paciente.
Tratar pode ser usado nesse documento para se referir a um método que resulta em algum nível de tratamento ou melhora da doença ou condição, e pode contemplar uma gama de resultados direcionados a esse fim, incluindo, mas não se restringindo à total prevenção da condição.
[00422] Prevenir, prevenção e semelhantes se referem à prevenção da doença ou condição, por exemplo, formação de tumor, no paciente. Por exemplo, se um indivíduo em risco de desenvolver um tumor ou outra forma de câncer é tratado com os métodos da presente divulgação e não desenvolve posteriormente o tumor ou outra forma de câncer, então a doença foi prevenida, pelo menos durante um período de tempo, naquele indivíduo. A prevenção também pode se referir à prevenção da recorrência de uma doença ou condição em um paciente que foi previamente tratado para a doença ou condição, por exemplo, evitando a recaída.
[00423] Uma quantidade terapeuticamente eficaz (também referida como uma quantidade eficaz) pode ser a quantidade de uma composição (por exemplo, conjugado ou composto) ou um componente ativo do mesmo suficiente para fornecer um efeito benéfico ou de outra forma reduzir um evento prejudicial não benéfico para o indivíduo a quem a composição é administrada. Uma dose terapeuticamente eficaz pode ser uma dose que produz um ou mais efeitos desejados ou desejáveis (por exemplo, benéficos) para os quais é administrada, a referida administração ocorrendo uma ou mais vezes ao longo de um determinado período de tempo. Uma dose exata pode depender da finalidade do tratamento e pode ser verificada por uma pessoa versada na técnica usando técnicas conhecidas e os ensinamentos fornecidos nesse documento.
[00424] Os conjugados que podem ser usados na terapia podem ser formulados e as dosagens estabelecidas de uma forma consistente com a boa prática médica, levando em consideração a doença ou condição a ser tratada, a condição do paciente individual, o local de entrega da composição, o método de administração e outros fatores conhecidos pelos médicos. As composições podem ser preparadas de acordo com a descrição da preparação descrita nesse documento.
[00425] As composições farmacêuticas podem ser usadas nos métodos descritos nesse documento e podem ser administradas a um indivíduo em necessidade das mesmas, usando uma técnica conhecida por uma pessoa versada na técnica, que pode ser adequada como uma terapia para a doença ou condição que afeta o indivíduo. Alguém versado na técnica entenderia que a quantidade, duração e frequência da administração de uma composição farmacêutica a um indivíduo em necessidade da mesma depende de vários fatores, incluindo, por exemplo, mas não se limitando a, a saúde do indivíduo, a doença ou condição específica do paciente, o grau ou nível de uma doença ou condição específica de o paciente, os tratamentos adicionais que o indivíduo está recebendo ou recebeu e semelhantes.
[00426] Os métodos e composições podem ser para administração a um indivíduo em necessidade das mesmas.
Frequentemente, a administração das composições pode incluir vias de administração, exemplos não limitativos de vias de administração incluem intravenosa, intra-arterial,
subcutânea, subdural, intramuscular, intracraniana, intraesternal, intratumoral ou intraperitoneal. Além disso, uma composição farmacêutica pode ser administrada a um indivíduo por vias adicionais de administração, por exemplo, por inalação, administração oral, dérmica, intranasal ou intratecal.
[00427] As composições e conjugados da presente divulgação podem ser administrados a um indivíduo em necessidade dos mesmos em uma primeira administração e em uma ou mais administrações adicionais. As uma ou mais administrações adicionais podem ser administradas ao indivíduo em necessidade das mesmas minutos, horas, dias, semanas ou meses após a primeira administração. Qualquer uma das administrações adicionais pode ser administrada ao indivíduo em necessidade das mesmas menos de 21 dias, ou menos de 14 dias, menos de 10 dias, menos de 7 dias, menos de 4 dias ou menos de 1 dia após a primeira administração.
As uma ou mais administrações podem ocorrer mais de uma vez por dia, mais de uma vez por semana ou mais de uma vez por mês. As administrações podem ser semanais, quinzenais, a cada três semanas, mensais ou bimestrais.
[00428] As composições, conjugados e métodos fornecidos nesse documento podem ser úteis para o tratamento de uma pluralidade de doenças, condições, prevenção de uma doença ou condição em um indivíduo ou outras aplicações terapêuticas para indivíduos em necessidade dos mesmos.
Frequentemente, as composições, conjugados e métodos fornecidos nesse documento podem ser úteis para o tratamento de condições hiperplásicas, incluindo, mas não se limitando a, neoplasias, cânceres, tumores e semelhantes. As composições, conjugados e métodos fornecidos nesse documento podem ser úteis no alvejamento específico de TGFβl, TGFβRl, TGFβR2 ou combinações dos mesmos. As composições e métodos fornecidos nesse documento podem ser úteis na inibição de TGFβ1, TGFβRl, TGFβR2 ou combinações dos mesmos. Em uma modalidade, os compostos da presente divulgação ativam ou aumentam uma resposta imune. Em outra modalidade, os conjugados da presente divulgação ativam ou melhoram uma resposta imune.
[00429] Uma condição, tal como um câncer, pode estar associada à expressão de uma molécula nas células cancerosas.
Frequentemente, a molécula expressa pelas células cancerosas pode compreender uma porção extracelular capaz de ser reconhecida pelo construto de anticorpo do conjugado. Uma molécula expressa pelas células cancerosas pode ser um antígeno tumoral. Um construto de anticorpo do conjugado pode reconhecer um antígeno tumoral.
[00430] Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno em uma célula T,
uma célula B, uma célula estrelada, uma célula endotelial,
uma célula tumoral, uma APC, uma célula de fibroblasto , uma célula de fibrócito ou uma célula associada à patogênese da fibrose.
Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno em uma célula T, APC e/ou uma célula B.
Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno selecionado a partir do grupo que consiste em CLTA4, PD-1,
OX40, LAG-3, GITR, GARP, CD25, CD27, PD-L1, TNFR2, ICOS,
41BB, CD70, CD73, CD38, ou VTCN1. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno em uma célula estrelada, uma célula endotelial,
uma célula de fibroblasto, uma célula de fibrócito ou uma célula associada à patogênese da fibrose ou câncer.
Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno que é pelo menos
80% idêntico a um antígeno selecionado do grupo que consiste em PDGFRβ, integrina αvβ1, integrina αvβ3, integrina αvβ6,
integrina αvβ8, Endosialina, FAP, ADAM12, LRRC15, MMP14,
PDPN, CDH11 e F2RL2, Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno selecionado a partir do grupo que consiste em FAP, ADAM12, LRRC15, MMP14, PDPN, CDH11 e F2RL2, Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno em uma célula tumoral, um antígeno tumoral. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno que é pelo menos 80% idêntico a um antígeno selecionado a partir do grupo que consiste em MUC16, UPK1B, VTCN1, TMPRSS3, TMEM238, Clorf186, TMPRSS4, CLDN6, CLDN8, STRA6, MSLN ou CD73.
[00431] Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno em uma célula T, uma célula B, uma célula estrelada, uma célula endotelial, uma célula tumoral, um APC, uma célula de fibroblasto, uma célula de fibrócito ou uma célula associada com a patogênese da fibrose. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno em uma célula T, uma APC e/ou uma célula B. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno selecionado a partir do grupo que consiste em CLTA4, PD-1, OX40, LAG-3, GITR, GARP, CD25, CD27, PD-L1, TNFR2, ICOS, 41BB, CD70, CD73, CD38 ou VTCN1. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno em uma célula estrelada, uma célula endotelial, uma célula de fibroblasto, uma célula de fibrócito ou uma célula associada à patogênese da fibrose ou câncer. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno selecionado a partir do grupo que consiste em PDGFRβ, integrina αvβ1, integrina αvβ3, integrina αvβ6, integrina αvβ8, Endosialina, FAP, ADAM12, LRRC15, MMP14, PDPN, CDH11 e F2RL2. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno pode se ligar especificamente a um antígeno selecionado a partir do grupo que consiste em FAP, ADAM12, LRRC15, MMP14, PDPN, CDH11 e F2RL2. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno em uma célula tumoral, um antígeno tumoral. Em determinadas modalidades, o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno selecionado do grupo que consiste em MUC16, UPK1B, VTCN1, TMPRSS3, TMEM238, Clorfl86, TMPRSS4, CLDN6, CLDN8, STRA6, MSLN ou CD73.
[00432] Além disso, os referidos antígenos podem ser derivados das seguintes condições específicas e/ou famílias de condições, incluindo, mas não se limitando a, cânceres, tais como câncer do cérebro, câncer de pele, linfomas, sarcomas, câncer de pulmão, câncer de fígado, leucemias, câncer uterino, câncer de mama, câncer de ovário, câncer cervical, câncer de bexiga, câncer de rim, hemangiossarcomas, cânceres ósseos, cânceres de sangue,
câncer testicular, câncer de próstata, câncer de estômago, cânceres intestinais, câncer pancreático e outros tipos de câncer, bem como condições pré-cancerosas, tal como hiperplasia ou semelhantes.
[00433] Exemplos não limitativos de cânceres podem incluir leucemia linfoblástica aguda (ALL); Leucemia mielóide aguda; Carcinoma adrenocortical; Astrocitoma, cerebelar ou cerebral infantil; Carcinoma basocelular; Câncer de bexiga; Tumor ósseo, osteossarcoma/histiocitoma fibroso maligno; Câncer cerebral; Tumores cerebrais, tais como astrocitoma cerebelar, glioma maligno, ependimoma, meduloblastoma, glioma de nervo ótico e glioma hipotalâmico; Glioma de tronco cerebral; Câncer de mama; Adenomas/carcinoides brônquicos; Linfoma de Burkitt; Astrocitoma cerebelar; Câncer cervical; Colangiocarcinoma; Condrossarcoma; Leucemia linfocítica crônica; Leucemia mielóide crônica; Doenças mieloproliferativas crônicas; Câncer de cólon; Linfoma cutâneo de células T; Câncer do endométrio; Ependimoma; Câncer de esôfago; Cânceres oculares, tais como melanoma intraocular e retinoblastoma; Câncer da vesícula biliar; Glioma; Leucemia de células pilosas; Câncer de cabeça e pescoço; Câncer de coração; Câncer hepatocelular (fígado); Linfoma de Hodgkin; Câncer de hipofaringe; Carcinoma de células da ilhota (pâncreas endócrino); Sarcoma de Kaposi; Câncer de rim (câncer de células renais); Câncer de laringe; Leucemia, tal como,
linfoblástica aguda, mieloide aguda, linfocítica crônica,
mielogena crônica e de células pilosas; Câncer de lábio e cavidade oral; Lipossarcoma; Câncer de pulmão, tais como de células não pequenas e de células pequenas; Linfoma, tais como, relacionado à AIDS, Burkitt; Linfoma, cutâneo de células T, Hodgkin e não-Hodgkin, Macroglobulinemia,
Histiocitoma fibroso maligno do osso/osteossarcoma;
Melanoma; Câncer de células de Merkel; Mesotelioma; Mieloma múltiplo/neoplasia de células plasmáticas; Micose fungoide;
Síndromes mielodisplásicas; Doenças mielodisplásicas/mieloproliferativas; Distúrbios mieloproliferativos crônicas; Câncer da cavidade nasal e câncer dos seios paranasais; Carcinoma nasofaringeal;
Neuroblastoma; Oligodendroglioma; Câncer orofaríngeo;
Osteossarcoma/histiocitoma fibroso maligno do osso; Câncer do ovário; Câncer de pâncreas; Câncer de paratireoide; Câncer faríngeo; Feocromocitoma; Adenoma hipofisário; Neoplasia de células plasmáticas; Blastoma pleuropulmonar; Câncer de próstata; Câncer retal; Carcinoma de células renais (câncer de rim); Pelve renal e ureter, câncer de células transicionais; Rabdomiossarcoma; Câncer de glândula salivar;
Sarcoma, família de tumores Ewing; Sarcoma, Kaposi; Sarcoma de tecido mole; Sarcoma uterino; Síndrome de Sézary; Câncer de pele (não melanoma); Carcinoma de pele; Câncer do intestino delgado; Sarcoma de tecidos moles; Carcinoma de células escamosas; Câncer de pescoço escamoso com oculto primário, metastático; Câncer de estômago; Câncer de testículo; Câncer de garganta; Carcinoma timoma e carcinoma tímico; Timoma,; Câncer de tireoide; Câncer de tireoide, infância; Câncer uterino; Câncer vaginal; Macroglobulinemia de Waldenstrom; Tumor de Wilms e qualquer combinação dos mesmos.
[00434] Exemplos não limitantes de fibrose ou doenças fibróticas incluem capsulite adesiva, rigidez arterial, artrofibrose, fibrose atrial, cirrose, doença de Crohn, fibroma colagenoso, fibrose cística, fibromatose do tipo desmóide, contratura de Dupuytren, elastofibroma, fibrose endomiocárdica, fibroma de cobertura de tendão, cicatriz glial, fibrose pulmonar idiopática, queloide, fibrose mediastinal, mielofibrose, fibroma nucal, fibrose sistêmica nefrogênica, infarto do miocárdio antigo, doença de Peyronie, fibrose pulmonar, fibrose maciça progressiva, esteato-hepatite não alcoólica (também conhecida como NASH), lesão de pulmão induzida por radiação, fibrose retroperitoneal, cicatriz, esclerodermia/esclerose sistêmica.
[00435] A invenção fornece qualquer composto terapêutico ou conjugado divulgado nesse documento para uso em um método de tratamento do corpo humano ou animal por terapia. A terapia pode ser por qualquer mecanismo divulgado nesse documento, como por estimulação do sistema imunológico. A invenção fornece qualquer composto terapêutico ou conjugado divulgado nesse documento para uso na estimulação do sistema imunológico, vacinação ou imunoterapia, incluindo, por exemplo, o melhoramento de uma resposta imunológica. A invenção fornece ainda qualquer composto terapêutico ou conjugado divulgado nesse documento para prevenção ou tratamento de qualquer condição divulgada nesse documento, por exemplo, câncer, doença autoimune, inflamação, sepse, alergia, asma, rejeição de enxerto, doença de enxerto contra hospedeiro, imunodeficiência ou doença infecciosa (normalmente causado por um patógeno infeccioso). A invenção também fornece qualquer composto terapêutico ou conjugado divulgado nesse documento para obter qualquer resultado clínico divulgado nesse documento para qualquer condição divulgada nesse documento, tal como a redução de células tumorais in vivo. A invenção também fornece o uso de qualquer composto terapêutico ou conjugado divulgado nesse documento na fabricação de um fármaco para prevenir ou tratar qualquer condição divulgada nesse documento.
EXEMPLOS Lista de abreviaturas
[00436] Conforme usado acima, e ao longo da descrição da invenção, as seguintes abreviaturas, a menos que indicado em contrário, devem ser entendidas como tendo os seguintes significados: ACN ou acetonitrila MeCN Bn benzila BOC ou terc-butil carbamato Boc CDI 1,1'-carbonildiimidazol Cy Ciclohexila DCE dicloroetano (ClCH2CH2Cl) DCM Diclorometano (CH2Cl2) DIPEA ou diisopropiletilamina
DIEA DMAP 4-(N,N-dimetilamino)piridina DMF dimetilformamida DMA N,N-dimetilacetamida DMSO dimetilsulfóxido equiv. equivalente(s) Et etila EtOH etanol EtOAc acetato de etila H Hora(s)
HATU l-[bi(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-
triazolo[4,5-b]piridínio 3-óxido hexafluorofosfato
HFIP 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-ol
HPLC cromatografia líquida de alto desempenho
LAH hidreto de lítio alumínio
LCMS cromatografia líquida-espectrometria de massa mc-Val- [4-[[(2S)-5-(carbamoilamino)-2-[[(2S)-2-[6-
Cit-PAB- (2,5-dioxopirrol-1-il)hexanoilamino]-3-
PNP metilbutanoil]amino]pentanoil]amino]fenil]meti l(4-nitrofenil)carbonato
Me metila
MeOH Metanol
MS Espectroscopia de massa
NMM N-metilmorfolina
NMR Ressonância magnética nuclear
PdCl2(dppf [1,1’-Bi(difenilfosfino)
) ferroceno]dicloropaládio(II)
Pd(OH)2 hidróxido de paládio
PMB para-metoxibenzila
Rt temperatura ambiente
TEA trietilamina
TFA Ácido trifluoroacético
THF tetra-hidrofurano TLC Cromatografia de camada fina Esquemas Sintéticos Gerais e Exemplos
[00437] Os seguintes esquemas sintéticos são fornecidos para fins de ilustração, não de limitação.
[00438] Os exemplos a seguir ilustram os vários métodos de preparação de compostos descritos nesse documento. É para ser entendido que uma pessoa versada na técnica pode ser capaz de preparar estes compostos por métodos semelhantes ou combinando outros métodos conhecidos por uma pessoa versada na técnica. É também para ser entendido que uma pessoa versada na técnica seria capaz de preparar, de uma forma semelhante à descrita abaixo, usando os materiais de partida apropriados e modificando a via sintética conforme necessário. Em geral, os materiais de partida e reagentes podem ser obtidos de vendedores comerciais ou sintetizados de acordo com fontes conhecidas das pessoas versadas na técnica ou preparados conforme descritos nesse documento.
[00439] A menos que exista indicação em contrário, os reagentes e solventes foram usados conforme recebidos de fornecedores comerciais. Solventes anidros e vidraria seca em forno foram usados para transformações sintéticas sensíveis à umidade e/ou oxigênio. Os rendimentos não foram otimizados. Os tempos de reação são aproximados e não foram otimizados. A cromatografia em coluna e a cromatografia de camada fina (TLC) foram realizadas em sílica gel, a menos que indicado em contrário. Os espectros são dados em ppm (d) e as constantes de acoplamento (J) são relatadas em Hertz.
Para espectros de prótons, o pico do solvente foi usado como o pico de referência.
Esquema C.
[00440] A preparação dos compostos está descrita na literatura (Tebben et al. Acta Cryst. (2016). D72, 658–674; and Berg et al. J. Med. Chem. (2012), 55(21), 9107-9119).
[00441] Ácidos 2-amino-5-bromopirazina carboxílicos são misturados com 3-aminopiridinas em um solvente polar (por exemplo, DMF) contendo uma base de amina terciária (por exemplo, N-metilmorfolina) para formar intermediários I-ii.
Os intermediários I-ii podem ser misturados com um ácido borônico ou éster boronato em um solvente, tal como dioxano e uma base (por exemplo, Na2CO3) com um catalisador de paládio, tal como PdCl2(dppf) a temperatura elevada para fornecer produtos finais (I-iii).
Esquema D.
[00442] Alternativamente, uma bromopirazina (I-iv) pode ser aquecida com um ácido borônico ou éster boronato em um solvente, tal como dioxano e uma base (por exemplo, Na2CO3) com um catalisador de paládio, tal como PdCl2(dppf) para fornecer intermediários (I-v). O éster carboxílico pode ser convertido no ácido carboxílico com tratamento com uma base de hidróxido, tal como NaOH. Os intermediários (I-vi) podem ser acoplados a aminopiridinas substituídas em um solvente polar (por exemplo DMF) contendo uma base de amina terciária (por exemplo, N-metilmorfolina) para formar intermediários I-iii.
Esquema E.
[00443] Alternativamente, uma bromopirazina (I-iv) pode ser condensada com metilamina sob condições aquosas para gerar um intermediário de amida secundária (I-vii). A amida secundária pode então ser tratada com ortoformato trietílico sob condições de refluxo para produzir 6-bromo- 3-metilpteridin-4(3H)-ona (I-viii). Um intermediário 6- bromo-3-metilpteridin-4(3H)-ona (I-viii) pode então ser reagido com uma amina secundária a temperatura elevada para produzir o intermediário I-x. A 3-metilpteridin-4(3H)-ona (Ix) pode ser hidrolisado a um intermediário de ácido aminopirazina-2-carboxílico (I-xi), que pode ser posteriormente elaborado por meio de um acoplamento a amino piridinas substituídas em um solvente polar (por exemplo: DMF) contendo para formar intermediários I-xii.
EXEMPLO I: Preparação de intermediários chave
Exemplo I.A: Preparação de 3-Amino-6-bromo-N-(4- morfolinopiridin-3-il)pirazina-2-carboxamida (Intermediário A)
[00444] A uma solução contendo 1,63 g (7,5 mmol) de ácido 2-amino-5-bromopirazina carboxílico em 25 mL de DMF foram adicionados 3,54 g (9,36 mmol) de HATU. A mistura reacional foi deixada a agitar por 15 minutos antes da adição de 1,68 g (9,36 mmol) de 3-amino-4-morfolinopiridina e 2,5 mL (22,5 mmol) de N-metilmorfolina. A reação foi agitada durante 16 h, em seguida extinta com 10 mL de uma solução saturada de NaHCO e extraída com EtOAc três vezes. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre Na2SO4. A evaporação do solvente e cromatografia em coluna (SiO2; 10% CH3OH /DCM) forneceram o Intermediário A como um sólido amarelo. 1H NMR (CD3OD) d 9,51 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,39 (d, J=5.4Hz, 1H), 7,94 (d, J=8.1Hz, 2H), 7,39- 7,27 (m, 8H), 5,10 (s, 2H), 3,81 (t, J=7.5Hz, 4H), 2,96 (t, J=7.5Hz, 4H). [M+H]+ = 568,1.
Exemplo I.B: Preparação de Benzil(3-(4-(5-amino-6-(pirazin- 2-il)fenil)etil)carbamato (Intermediário B)
[00445] A uma solução de metil 3-amino-6- bromopirazina-2-carboxilato (4,6 g, 20,0 mmol) e ácido 4- (2-(benziloxicarbonilamino)etil)fenilborônico (6,58 g, 22,0 mmol) em 50 mL de dioxano foi adicionada solução de Na2CO3 2M (20 mL, 40,0 mmol). A mistura reacional foi purgada com nitrogênio antes da adição de PdCl2(dppf) (1,5 g, 2,0 mmol).
A mistura reacional foi aquecida a 90°C por 1,5 h sob um balão de azoto. A mistura reacional foi arrefecida e diluída com acetato de etila e solução saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi separada e seca sobre sulfato de magnésio. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (ISCO; cartucho de 80 g: acetato de etila/diclorometano, 0-50%) para dar o composto do título como um sólido amarelo claro que foi dissolvido em 60 mL de EtOH e 10 mL de THF. 30 mL (60 mmol) de LiOH 2N foram adicionados e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi concentrada e em seguida, tratada com solução de HCl 2N a pH=5 para efetuar um precipitado amarelo claro que foi filtrado e seco ao ar para uso sem purificação adicional. [M+H]+ = 392,2.
Exemplo I.C: Preparação de Benzil(4-(5-amino-6-((4- bromopiridin-3-il)carbamoil)pirazin-2-il)fenetil)-carbamato (Intermediário C)
[00446] A uma solução contendo 392 mg (1,0 mmol) de Intermediário B em 5 mL de DMF foi adicionado 456 mg (1,2 mmol) de HATU. A mistura reacional foi deixada a agitar por 15 minutos antes da adição de 206 mg (1,2 mmol) de 3-amino- 4-bromopiridina e 0,26 mL (2,4 mmol) de N-metilmorfolina. A reação foi agitada por 16 h e em seguida, extinta com solução saturada de NaHCO3 e extraída com EtOAc. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre Na2SO4. A evaporação do solvente e cromatografia em coluna (SiO2; 10% CH3OH/DCM) forneceu o Intermediário C como um sólido amarelo. 1H NMR (DMSO-d6) d 10,6 (s, 1H), 9,25 (s, 1H), 9,01 (s, 1H), 8,29 (d, J=5,2Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,0Hz, 2H), 7,8 (s, 1H), 7,65 (s, 2H), 7,57-7,51 (m, 8H), 5,02 (s, 2H), 3,32 (t, J=7,2Hz, 2H), 2,79 (t, J=7,2Hz, 2H), 1,23 (m, 1H). [M+H]+ = 547,4.
Exemplo I.D: Preparação de terc-Butil4-(3-metil-4-oxo-3,4- di-hidropteridin-6-il)piperazina-1-carboxilato (Intermediário D)
[00447] A uma solução de 6-bromo-3-metil-pteridin-4- ona (CAS #146940-38-7, 0,5 g, 2,1 mmol) em 2-metoxietanol (10 mL/g) foi adicionado terc-butil piperazina-1-carboxilato (0,584 g, 3,1 mmol, 1,5 equiv) e a suspensão resultante aquecida a 100°C por 2 horas. A mistura reacional foi resfriada em um banho de gelo e o precipitado coletado foi purificado por RP-HPLC preparativa (10 -> 80% AcN (0,1% TFA) em H20 (0,1% de TFA)) para fornecer o Intermediário D (0,35 g, 49% rendimento) como um sólido amarelo. [M+Na]+: 369,2, M-Boc: 246,2.
Exemplo I.E: Preparação de ácido 3-amino-6- (4-(terc- butoxicarbonil)piperazin-1-il)pirazina-2-carboxílico (Intermediário E)
[00448] A uma solução de terc-butil 4-(3-metil-4-oxo- pteridin-6-il)piperazina-1-carboxilato (0,165 g, 0,48 mmol) em MeOH (5 mL) foi adicionado NaOH (10% p/p, 7,0 equiv) e a solução resultante foi agitada em temperatura ambiente por 17 horas. A solução foi então acidificada, extraída com CH2Cl2, e de seguida tratada com H20 básico (pH ~10) para precipitar o produto desejado que foi redissolvido em CH2Cl2, seco sobre Mg2SO4, filtrado e concentrado para render o Intermediário E (0,10 g, rendimento de 64%) como um sólido amarelo (90% de pureza). [M+Na]+: 346,2, M-Boc: 223,2.
EXEMPLOS 1-6: Preparação de compostos de amino- pirazinocarboxamida exemplificativos Exemplo 1.1: Preparação de benzil(4-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3-il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato (Composto 1.1)
[00449] A uma solução de Intermediário A (567 mg, 1,0 mmol) e ácido 4-(2-(benziloxicarbonilamino)etil) fenilborônico (329 mg, 1,1 mmol) em 5 mL de dioxano foi adicionada solução de Na2CO3 2M (1,0 mL, 2,0 mmol). A mistura reacional foi purgada com nitrogênio antes da adição de PdCl2 (dppf) (37 mg, 0,05 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 90°C por 4 h sob um balão de azoto. A mistura reacional foi arrefecida e diluída com acetato de etila e solução saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi separada e seca sobre sulfato de magnésio. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (acetato de etila/diclorometano, 0-50%) para o Composto 1.1 como um sólido amarelo claro.
Exemplo 2.1: Preparação de 3-Amino-6-(4-(3- aminopropil)fenil)-N-(4-morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- carboxamida (Composto 2.1)
[00450] A uma solução contendo 758 mg (2,0 mmol) do composto de amina protegida 1.2 em 10 mL de EtOH e 10 mL de THF foram adicionados 200 mg de Pd(OH)2 a 20% em carbono. A mistura reacional foi desgaseificada, depois tampada com um balão de H2 e em seguida, agitada em temperatura ambiente por 4 h. A mistura reacional foi filtrada por uma almofada de Celite e evaporada para proporcionar o produto em bruto que foi purificado por HPLC de fase reversa para fornecer 750 mg do sal de TFA do Composto 2.1 como um sólido amarelo.
1H NMR (CD3OD) d 9,49 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,27 (d, J=5,1Hz, 1H), 7,94 (d, J=8,1Hz, 2H), 7,35 (d, J=8,1Hz, 2H), 7,24 (d,
J=5,4Hz, 1H), 3,80 (t, J=4,2Hz, 4H), 3,00 (d, J=4,5Hz, 4H), 2,71 (m, 4H), 1,82 (m, 2H). [M+H]+ = 434,1.
Exemplo 3.1: Preparação de Benzil(4-(5-amino-6-((4-(2-metil- lH-imidazol-1-il)piridin-3-il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato (Composto 3.1)
[00451] A uma solução contendo 392 mg (1,0 mmol) de Intermediário B em 5 mL de DMF foi adicionado 456 mg (1,2 mmol) de HATU. A mistura reacional foi deixada a agitar por 15 minutos antes da adição de 209 mg (1,2 mmol) de 4-(2- metil-lH-imidazol-1-il)piridin-3-amina e 0,26 mL (2,4 mmol) de N-metilmorfolina. A reação foi agitada durante 16 h, e em seguida extinta com solução saturada de NaHCO3 e extraída com EtOAc. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre Na2SO4. A evaporação do solvente e HPLC preparativa forneceram o Composto 3.1 como um sólido amarelo. 1H NMR (CD3OD) d 9,81 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,53 (d, J=7,2Hz, 1H), 7,64 (d, J=8,4Hz, 2H), 7,54 (d, J=7,56 (s, 1H), 7,35-7,11 (m, 9H), 7,36-7,24 (m, 9H), 5,07 (s, 2H), 3,43 (t, J=7,5Hz, 2H), 2,86 (t, J=7,5Hz, 2H), 2,30 (s, 3H).
[M+H]+ = 449,2.
Exemplo 4.1: Preparação de 3-Amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- N-(4-(2-metil-lH-imidazol-1-il)piridin-3-il)pirazina-2- carboxamida (Composto 4.1)
[00452] 90 mg (0,20 mmol) de Composto 3.1 foi dissolvido em 2 mL de TFA e a mistura foi aquecida a 50 ° C por 4 h. A mistura reacional foi evaporada para proporcionar o produto em bruto que foi purificado por HPLC de fase reversa para fornecer 50 mg do sal de TFA do Composto 4.1 como um sólido amarelo. 1H NMR (CD3OD) d 9,83 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,54 (d, J=8,0Hz, 1H), 7,63 (d, J=8,0Hz, 2H), 7,44 (s, 1H), 7,40-7,29 (m, 3H), 7,217 (s, 1H), 3,06 (m, 2H), 2,90 (m, 2H), 2,35 (s, 3H). [M+H]+ = 415,2 Exemplo 5.1: Preparação de Benzil(4-(6-([4,4'-bipiridin]-3- ilcarbamoil)-5-aminopirazin-2-il)fenetil)carbamato (Composto 5.1)
[00453] A uma solução de Intermediário C (110 mg, 0,20 mmol) e ácido 4-piridinborônico (27 mg, 0,22 mmol) em
1 mL de dioxano foi adicionada solução de Na2CO3 2M (0,2 mL, 0,4 mmol). A mistura reacional foi purgada com nitrogênio antes da adição de PdCl2(dppf) (15 mg, 0,02 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 90°C por 2 h sob um balão de azoto.
A mistura reacional foi resfriada e diluída com acetato de etila e solução saturada de NaHCO3. A camada orgânica foi separada e seca sobre sulfato de magnésio. O filtrado foi concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de fase reversa para dar o Composto 5.1 como um sólido amarelo. 1H NMR (DMSO-d6) d 10,2 (s, 1H), 9,32 (s, 1H), 8,85 (s, 1H), 8,68 (d, J=6,8Hz, 2H), 8,5 (d, J=7,8Hz, 1H), 7,66- 7,22 (m, 15H), 4,99 (s, 2H), 3,28 (m, 2H), 2,74 (m, 2H).
Exemplo 6.1: Preparação de terc-Butil 4-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3-il)carbamoil)pirazin-2-il)piperazina-1- carboxilato (Composto 105)
[00454] A uma solução de ácido 3-amino-6-(4-(terc- butoxicarbonil)piperazin-1-il)pirazina-2-carboxílico (0,2 g, 0,62 mmol) em DMF (5,0 mL) foi adicionado HOAt (0,126 g, 0,93 mmol, 1,5 equiv) e EDCI (0,177 g, 0,93 mmol, 1,5 equiv)
após a solução ter sido deixada em agitação em temperatura ambiente por 15 minutos, 3-amino-4-bromopiridina (0,166 g, 0,93 mmol, 1,5 equiv) foi adicionado como um sólido e a solução resultante foi deixada a agitar em temperatura ambiente por 16 horas. A reação foi purificada diretamente por RP-HPLC preparativa (10 -> 80% AcN (0,1% TFA) em H2O (0,1% TFA)) para fornecer o Composto 105 (0,080 g, 27% de rendimento) como um sólido amarelo. [M+Na]+: 406,2, M-Boc: 384,3.
Exemplo 7.1: Preparação de 3-Amino-N-(4-morfolinopiridin-3- il)-6-(piperazin-1-il)pirazina-2-carboxamida (Composto 108)
[00455] A uma solução de terc-butil 4-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3-il)carbamoil)pirazin-2-il)piperazina-1- carboxilato (0,08 g, 0,165 mmol) em CH2Cl2 (1 mL) foi adicionado TFA (1 mL) em temperatura ambiente. A solução resultante foi deixada a agitar em temperatura ambiente por 2 horas, foi então concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por RP-HPLC preparativa (10 -> 65% AcN (0,1% TFA) em H2O (0,1% TFA)) para fornecer o Composto
108 (0,037 g, 45% rendimento) como um sólido amarelo. [M+H]+: 385,3.
[00456] Os seguintes compostos foram preparados usando as metodologias descritas nesse documento em combinação com o conhecimento dos versados na técnica: Tabela 14 Composto 1H Estrutura NMR/MS # 1H NMR (CD3OD) δ 9,51 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,29 (d, J=5,4Hz, 1H), 7,99
1.1 (d, J=8,1Hz, 2H), 7,39-7,27 (m, 8H), 5,09 (s, 2H), 3,88 Benzil (4-(5-amino-6-((4- (bt, 2H), 3,22 (t, morfolinopiridin-3- J=9,2Hz, 2H), 3,04 il)carbamoil)pirazin-2- (bt, 2H), 1,92 (t, il)fenetil)carbamato J=9,6Hz, 2H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,86- 1,94 (m, 2H), 2,74 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,03 (t, J = 4,2 Hz, 4H), 3,20 (t, J = 6,9
1.2 Hz, 2H), 3,81-3,83 benzil (3-(4-(5-amino-6-((4- (m, 4H), 5,10 (s, morfolinopiridin-3- 2H), 7,27-7,40 (m, il)carbamoil)pirazin-2- 8H), 7,99 (d, J = 8,1 il)fenil)propil)carbamato Hz, 2H), 8,29 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 8,77 (s, 1H), 9,51 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,80- 1,90 (m, 2H), 2,69- 2,77 (m, 4H), 2,98- 3,01 (m, 4H), 3,78- 3,81 (m, 4H), 7,25
2.1 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 3-amino-6-(4-(3- 7,35 (d, J = 8,1 Hz, aminopropil)fenil)-N-(4- 2H), 7,94 (d, J = 8,1 morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- Hz, 2H), 8,27 (d, J carboxamida = 5,4 Hz, 1H), 8,71 (s, 1H), 9,49 (s, 1H)
3.1 [M+H]+: 549,3 benzil (4-(5-amino-6-((4-(2- metil-1H-imidazol-1-il)piridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,29 (s, 3H), 2,90-2,93 (m, 2H), 3,06-3,08 (m, 2H), 7,21 (s,
4.1 1H), 7,31-7,39 (m, 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- 3H), 7,66 (s, 1H), N-(4-(2-metil-1H-imidazol-1- 7,67 (d, J = 8,4 Hz, il)piridin-3-il)pirazina-2- 2H), 8,53 (d, J = 5,2 carboxamida Hz, 1H), 8,76 (s, 1H), 9,83 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,61-2,75 (m, 2H), 3,14-3,28 (m, 2H), 4,99 (s, 2H),
5.1 7,04-7,67 (m, 15H), 8,51 (m, 1H), 8,69- benzil (4-(6-([4,4'-bipiridin]-3- 8,70 (m, 2H), 8,85 ilcarbamoil)-5-aminopirazin-2- (s, 1H), 9,32 (s, il)fenetil)carbamato 1H), 10,23 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO- d6+D2O) δ: 2,95-2,98 (m, 2H), 3,08-3,11 (m, 2H), 3,57 (s, 4H), 3,71 (s, 4H), 6 7,42 (d, J = 7,2 Hz, 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- 3H), 8,14-8,16 (m, N-(4-morfolinopiridin-3- 2H), 8,33 (s, 1H), il)pirazina-2-carboxamida 8,73 (s, 1H), 8,94 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 3,47 (s, 4H), 3,70 (s, 4H), 4,11-4,13 (m, 2H), 7,39 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 7 8,1 Hz, 2H), 7,77 3-amino-6-(4-(aminometil)fenil)- (s, 2H), 8,28-8,31 N-(4-morfolinopiridin-3- (m, 4H), 8,39 (d, J il)pirazina-2-carboxamida = 6,0 Hz, 1H), 8,84 (s, 1H), 9,04 (s, 1H), 10,48 (s, 1H)
8 [M+H]+: 450,3 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- N-(4-(3- (hidroximetil)morfolino)piridin- 3-il)pirazina-2-carboxamida 1H NMR (300 MHz, DMSO- d6+D2O) δ: 2,75-2,82 (m, 2H), 3,27-3,31 (m, 2H), 5,01 (s, 2H), 7,30-7,38 (m, 7H), 8,21 (d, J = 7,8 9 Hz, 2H), 8,78 (d, J benzil (4-(5-amino-6-((3'-ciano- = 5,4 Hz, 1H), 8,89 [4,4'-bipiridin]-3- (t, J = 5,7 Hz, 2H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,99 (s, 1H), 9,12 il)fenetil)carbamato (d, J = 5,7 Hz, 1H), 9,42 (s, 1H), 9,63 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6+D2O) δ: 2,80-2,84 (m, 2H), 3,28-3,33 (m, 2H), 5,02 (s, 10 2H), 7,33-7,39 (m, benzil (4-(5-amino-6-((3'-ciano- 7H), 8,20-8,25 (m, [4,4'-bipiridin]-3- 2H), 8,23-9,20 (m, il)carbamoil)pirazin-2- 5H), 9,63 (s, 1H), il)fenetil)carbamato 9,75 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,80- 2,31 (m, 4H), 2,87- 2,99 (m, 2H), 3,08 (s, 4H), 3,51-3,54 (m, 2H), 3,81 (s, 11 (S)-5-((4-(5-amino-6-((4- 4H), 4,07 (s, 1H), morfolinopiridin-3- 5,04 (s, 2H), 7,21- il)carbamoil)pirazin-2- 7,38 (m, 8H), 7,97- il)fenetil)amino)-4- 7,99 (m, 2H), 8,26- (((benziloxi)carbonil)amino)-5- 8,27 (m, 1H), 8,61- oxopentanoic acid 8,75 (m, 1H), 9,46 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,48- 1,54 (m, 15H), 2,61- 2,64 (m, 2H), 2,98- 2,93 (m, 2H), 3,03- 3,06 (m, 4H), 3,47- 3,55 (m, 2H), 3,83- 12 terc-butil (S)-(6-amino-1-((4-(5- 3,85 (m, 5H), 7,28 amino-6-((4-morfolinopiridin-3- (d, J = 5,2 Hz, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 7,40-7,42 (m, 2H), il)fenetil)amino)-1-oxohexan-2- 8,02 (d, J = 8,0 Hz, il)carbamato 2H), 8,29 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,77 (s, 1H), 9,49 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,84-2,86 (m, 2H), 3,38 (s, 2H), 5,03 (s, 2H), 7,33- 7,49 (m, 7H), 7,80- 7,90 (m, 1H), 8,26- 8,28 (m, 3H), 8,71- 13 8,75 (m, 2H), 9,10 benzil (4-(5-amino-6-((2-ciano- (s, 1H), 9,29 (s, [3,4'-bipiridin]-3'- 1H), 9,36 (s, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 9,48 (s, 1H), 13,19 il)fenetil)carbamato (s, 1H) (dois hidrogênios ativos não foram encontrados) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,78 (s, 2H), 3,28 (s, 2H), 3,79 (s, 3H), 5,03 (s, 2H), 7,12 (s, 2H), 14 7,21 (s, 2H), 7,35 (s, 7H), 7,58-7,91 benzil (4-(5-amino-6-((4-(4- (m, 6H), 8,44 (s, metoxifenil)piridin-3- 1H), 8,90 (s, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 9,54 (s, 1H), 10,25 il)fenetil)carbamato (s, 1H)
15 [M+H]+: 570,3 benzil (4-(5-amino-6-((4-(4- cianofenil)piridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato
1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,77-2,79 (m, 2H), 3,25-3,30 (m, 2H), 3,87 (s, 3H), 5,02 (s, 2H), 6,98 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8,0 Hz, 16 2H), 7,28-7,46 (m, 7H), 7,65-7,71 (m, benzil (4-(5-amino-6-((6-metoxi- 4H), 7,96-7,99 (m, [3,4'-bipiridin]-3'- 1H), 8,40 (s, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,49 (d, J = 4,8 Hz, il)fenetil)carbamato 1H), 8,90 (s, 1H), 9,35 (s, 1H), 10,28 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,41 (s, 3H), 2,76-2,81 (m, 2H), 3,27-3,33 (m, 2H), 5,03 (s, 2H), 7,24- 7,28 (m, 3H), 7,31- 17 7,39 (m, 4H), 7,44- benzil (4-(5-amino-6-((2'-metil- 7,49 (m, 4H), 7,63 [4,4'-bipiridin]-3- (d, J = 7,8 Hz, 4H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,52-8,61 (m, 2H), il)fenetil)carbamato 8,89 (s, 1H), 9,42 (s, 1H), 10,24 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,72-2,80 (m, 2H), 3,24-3,28 (m, 2H), 5,02 (s, 2H), 7,26-7,40 (m, 8H), 18 7,53-7,78 (m, 4H), benzil (4-(5-amino-6-((2'-cloro- 7,77-7,81 (m, 3H), [4,4'-bipiridin]-3- 8,52-8,59 (m, 2H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,90 (s, 1H), 9,23 il)fenetil)carbamato (s, 1H), 10,32 (s, 1H) 1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,70-2,79 (m, 2H), 3,29-3,31 (m, 2H), 5,06 (s, 2H), 7,06 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,21-7,69 (m, 19 15H), 8,20-8,25 (m, benzil (4-(5-amino-6-((4- 1H), 8,59 (d, J = 4,8 (quinolin-4-il)piridin-3- Hz, 1H), 8,77 (s, il)carbamoil)pirazin-2- 1H), 9,11 (d, J = 4,4 il)fenetil)carbamato Hz, 1H), 9,74 (d, J = 13,6 Hz, 2H)
1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 2,77-2,80 (m, 2H), 3,20-3,30 (m, 2H), 5,02 (s, 2H), 7,22-7,41 (m, 11H), 20 7,62-7,67 (m, 6H), benzil (4-(5-amino-6-((4-(4- 8,48 (d, J = 5,1 Hz, fluorofenil)piridin-3- 1H), 8,89 (s, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 9,45 (s, 1H), 10,19 il)fenetil)carbamato (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,77-2,80 (m, 2H), 3,25-3,33 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 5,02 (s, 2H), 7,06 (s, 1H), 7,22 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,23- 7,37 (m, 7H), 7,39- 21 7,40 (m, 1H), 7,47 benzil (4-(5-amino-6-((2'-metoxi- (d, J = 4,8 Hz, 1H), [4,4'-bipiridin]-3- 7,65-7,70 (m, 4H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,34 (d, J = 5,6 Hz, il)fenetil)carbamato 1H), 8,53 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,90 (s, 1H), 9,40 (s, 1H), 10,26 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,77-2,79 (m, 2H), 3,27-3,28 (m, 2H), 5,02 (s, 2H), 6,45 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,30-7,47 (m, 22 9H), 7,68-7,73 (m, 4H), 7,87 (d, J = 7,6 benzil (4-(5-amino-6-((6-oxo-1,6- Hz, 2H), 8,46-8,48 di-hidro-[3,4'-bipiridin]-3'- (m, 1H), 8,92 (s, il)carbamoil)pirazin-2- 1H), 9,25 (s, 1H), il)fenetil)carbamato 10,31 (s, 1H), 12,09 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,73-2,81 (m, 2H), 3,24-3,34 (m, 2H), 5,03 (s, 2H), 7,26-7,43 (m, 8H), 23 7,54-7,71 (m, 6H), benzil (4-(5-amino-6-((3'-fluoro- 8,57-8,60 (m, 2H), [4,4'-bipiridin]-3- 8,77 (s, 1H), 8,90 il)carbamoil)pirazin-2- (s, 1H), 9,33 (s, il)fenetil)carbamato 1H), 10,19 (s, 1H)
1HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 2,78-2,82 (m, 2H), 3,27-3,34 (m, 2H), 3,68 (s, 3H), 5,03 (s, 2H), 7,13- 24 7,63 (m, 17H), 8,47 benzil (4-(5-amino-6-((4-(3- (d, J = 5,1 Hz, 1H), metoxifenil)piridin-3- 8,90 (s, 1H), 9,52 il)carbamoil)pirazin-2- (s, 1H), 10,25 (s, il)fenetil)carbamato 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,82-2,86 (m, 2H), 3,34-3,37 (m, 2H), 5,02 (s, 2H), 7,26-7,44 (m, 8H), 7,49-7,53 (m, 1H), 7,73 (s, 2H), 7,83 25 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,99-8,07 (m, 4H), benzil (4-(6-([2,4'-bipiridin]- 8,50 (d, J = 5,1 Hz, 3'-ilcarbamoil)-5-aminopirazin-2- 1H), 8,59 (d, J = 4,8 il)fenetil)carbamato Hz, 1H), 8,92 (s, 1H), 9,69 (s, 1H), 12,93 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,76-2,81 (m, 2H), 3,25-3,34 (m, 2H), 5,03 (s, 2H), 5,99 (s, 2H), 7,06- 7,09 (m, 2H), 7,12 26 (s, 1H), 7,24-7,29 benzil (4-(5-amino-6-((4- (m, 2H), 7,31-7,40 (benzo[d][1,3]dioxol-5- (m, 7H), 7,64-7,67 il)piridin-3- (m, 4H), 8,44 (d, J il)carbamoil)pirazin-2- = 4,8 Hz, 1H), 8,91 il)fenetil)carbamato (s, 1H), 9,51 (s, 1H), 10,27 (s, 1H)
27 [M+H]+: 609,3 benzil (4-(5-amino-6-((4-(3- (azidometil)morfolino)piridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato
28 [M+H]+: 568,3 benzil (S)-(4-(5-amino-6-((4-(2- metilmorfolino)piridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato
29 [M+H]+: 588,2 benzil (4-(5-amino-6-((4-(4,4- difluoropiperidin-1-il)piridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato
30 [M+H]+: 583,3 benzil (4-(5-amino-6-((4-(2- (aminometil)morfolino)piridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato 1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 1,23 (s, 2H), 2,69-2,81 (m, 2H), 4,98 (s, 2H), 7,57- 7,99 (m, 13H), 8,08- 8,10 (m, 1H), 8,13- 31 8,22 (m, 1H), 8,25- 8,33 (m, 1H), 8,75 benzil (4-(5-amino-6-((4-(2- (d, J = 5,4 Hz, 1H), cianofenil)piridin-3- 8,81-8,83 (m, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 9,00 (d, J = 9,0 Hz, il)fenetil)carbamato 1H), 9,35 (s, 1H), 11,36 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,09 (d, J = 9,2 Hz, 3H), 2,79 (s, 2H), 3,29 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 5,04 (s, 2H), 7,28-7,44 (m, 32 12H), 7,66 (s, 2H), benzil (4-(5-amino-6-((3'-metil- 8,52 (d, J = 4,4 Hz, [4,4'-bipiridin]-3- 1H), 8,61 (s, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,68 (s, 1H), 8,89 il)fenetil)carbamato (s, 1H), 9,62 (s, 1H), 9,82 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,80 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,27- 3,31 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 5,03 (s, 2H), 7,27-7,46 (m, 10H), 7,54 (d, J = 33 8,0 Hz, 2H), 7,68 (s, benzil (4-(5-amino-6-((3'-metoxi- 2H), 8,44 (d, J = 4,4 [4,4'-bipiridin]-3- Hz, 1H), 8,49 (d, J il)carbamoil)pirazin-2- = 4,8 Hz, 1H), 8,62 il)fenetil)carbamato (s, 1H), 8,89 (s, 1H), 9,48 (s, 1H), 9,90 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,78 (t, J = 8,4 Hz, 2H), 3,25- 3,30 (m, 2H), 5,03 (s, 2H), 6,96 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,27- 34 7,36 (m, 8H), 7,40- 7,43 (m, 3H), 7,63- benzil (4-(5-amino-6-((4-(4- 7,70 (m, 4H), 8,41 hidroxifenil)piridin-3- (d, J = 4,8 Hz, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,90 (s, 1H), 9,53 il)fenetil)carbamato (s, 1H), 9,96 (s, 1H), 10,23 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,77-2,81 (m, 2H), 3,25-3,29 (m, 2H), 3,86 (s, 2H), 3,95-3,97 (m, 2H), 4,26 (s, 2H), 5,01 35 (s, 2H), 7,27-7,40 (m, 8H), 7,64-7,69 benzil (4-(5-amino-6-((4-(3- (m, 3H), 8,08-8,10 oxomorfolino)piridin-3- (m, 2H), 8,50 (s, il)carbamoil)pirazin-2- 1H), 8,97 (s, 1H), il)fenetil)carbamato 9,27 (s, 1H), 10,12 (s, 1H)
36 [M+H]+: 570,3 benzil (4-(5-amino-6-((4- tiomorfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato
[M+H]+: 583,2 (Sal de 37 TFA) benzil (4-(5-amino-6-((4-(3- (aminometil)morfolino)piridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato 1H NMR (400 MHz, Acetonitrila-d3) δ: 2,06-2,11 (m, 2H), 2,84-2,88 (m, 2H), 3,39-3,44 (m, 2H), 3,84 (s, 2H), 4,39- 4,41 (m, 2H), 5,05 (s, 2H), 5,72 (s, 1H), 7,28-7,38 (m, 38 7H), 7,44-7,45 (m, benzil (4-(5-amino-6-((4-(2-oxo- 1H), 8,00-8,02 (m, 1,3-oxazinan-3-il)piridin-3- 2H), 8,46 (s, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,81 (s, 1H), 9,36 il)fenetil)carbamato (s, 1H), 10,22 (s, 1H) (dois hidrogênios ativos não foram encontrados) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,78-2,81 (m, 2H), 3,27-3,36 (m, 2H), 5,02 (s, 2H), 6,34 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 6,52 (s, 1H), 7,29-7,37 (m, 7H), 7,43 (d, J = 4,8 Hz, 39 2H), 7,52 (d, J = 6,8 benzil (4-(5-amino-6-((2'-oxo- Hz, 1H), 7,67 (s, 1',2'-di-hidro-[4,4'-bipiridin]- 2H), 7,79 (d, J = 8,4 3-il)carbamoil)pirazin-2- Hz, 2H), 8,48 (d, J il)fenetil)carbamato = 4,8 Hz, 1H), 8,92 (s, 1H), 9,42 (s, 1H), 10,24 (s, 1H), 11,97 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,77-2,82 (m, 2H), 3,28-3,30 (m, 2H), 5,03 (s, 2H), 6,24 (s, 2H), 6,53 (s, 1H), 6,67 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,30- 40 7,44 (m, 9H), 7,68 benzil (4-(5-amino-6-((2'-amino- (d, J = 7,8 Hz, 4H), [4,4'-bipiridin]-3- 8,08 (d, J = 5,4 Hz, il)carbamoil)pirazin-2- 1H), 8,48 (d, J = 4,8 il)fenetil)carbamato Hz, 1H), 8,92 (s, 1H), 9,57 (s, 1H), 10,19 (s, 1H)
41 [M+H]+: 583,3 benzil (4-(5-amino-6-((4-(2- (aminometil)morfolino)piridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato
42 [M+H]+: 582,3 benzil (4-(5-amino-6-((4-(4- metoxipiperidin-1-il)piridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 2,74- 2,82 (m, 2H), 3,28- 3,32 (m, 2H), 5,03 (s, 2H), 6,40 (s, 2H), 6,55-6,58 (m, 1H), 7,30-7,43 (m, 43 9H), 7,64-7,67 (m, 3H), 7,79-7,82 (m, benzil (4-(5-amino-6-((6-amino- 2H), 8,16 (s, 1H), [3,4'-bipiridin]-3'- 8,44 (d, J = 4,8 Hz, il)carbamoil)pirazin-2- 1H), 8,92 (s, 1H), il)fenetil)carbamato 9,33 (s, 1H), 10,30 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Acetonitrile-d3) δ: 2,39 (s, 4H), 2,85 (s, 4H), 2,96-2,99 (m, 4H), 3,75-3,77 (m, 4H), 7,17 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 44 8,04 (d, J = 8,4 Hz, 3-amino-6-(4-(2- 2H), 8,33 (d, J = (metilamino)etil)fenil)-N-(4- 5,2 Hz, 1H), 8,80 morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- (s, 1H), 9,44 (s, carboxamida 1H), 10,50 (s, 1H) (dois hidrogênios ativos não foram encontrados)
1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,95-2,96 (m, 4H), 3,40-3,44 (m, 2H), 3,71 (s, 4H), 4,03-4,07 (m, 2H), 5,05 (s, 2H), 7,02- 7,08 (m, 2H), 7,24 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 45 7,28-7,34 (m, 5H), benzil (2-(4-(5-amino-6-((4- 7,51-7,54 (m, 1H), morfolinopiridin-3- 7,56 (s, 2H), 8,09 il)carbamoil)pirazin-2- (d, J = 8,4 Hz, 2H), il)fenoxi)etil)carbamato 8,32 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,92 (s, 1H), 9,34 (s, 1H), 9,35 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,81-2,86 (m, 2H), 2,99 (s, 4H), 3,26-3,28 (m, 2H), 3,73 (s, 4H), 5,02 46 (s, 2H), 7,25-7,57 benzil (4-(5-amino-6-((4- (m, 8H), 7,83-8,01 morfolinopiridin-3- (m, 4H), 8,34 (s, il)carbamoil)pirazin-2-il)-2- 1H), 8,99 (s, 1H), fluorofenetil)carbamato 9,28 (s, 1H), 10,38 (s, 1H) 1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,79-2,94 (m, 5H), 3,56-3,95 (m, 7H), 5,01 (s, 2H), 47 7,20-7,48 (m, 9H), benzil (4-(5-amino-6-((4-(5-oxo- 7,70-8,07 (m, 4H), 1,4-oxazepan-4-il)piridin-3- 8,47 (s, 1H), 8,97- il)carbamoil)pirazin-2- 9,10 (m, 2H), 10,05 il)fenetil)carbamato (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Acetonitrile-d3) δ: 2,84-2,87 (m, 2H), 3,39-3,44 (m, 2H), 5,07 (s, 2H), 5,82 (s, 1H), 7,28-7,37 (m, 7H), 7,39 (s, 1H), 7,45 (d, J = 4,8 48 Hz, 2H), 7,75-7,77 benzil (4-(5-amino-6-((4- (m, 1H), 8,58-8,71 (piridazin-4-il)piridin-3- (m, 1H), 8,74 (s, il)carbamoil)pirazin-2- 1H), 9,26-9,41 (m, il)fenetil)carbamato 3H), 9,98 (s, 1H) (dois hidrogênios ativos não foram encontrados)
1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 2,74-2,84 (m, 2H), 3,31 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 5,03 (s, 2H), 7,21-7,55 (m, 8H), 7,73 (s, 2H), 7,84-8,03 (m, 3H), 49 8,19 (d, J = 4,5 Hz, benzil (4-(5-amino-6-((4- 1H), 8,55 (s, 1H), (pirimidin-4-il)piridin-3- 8,93 (s, 1H), 9,05 il)carbamoil)pirazin-2- (d, J = 6,9 Hz, 1H), il)fenetil)carbamato 9,15 (s, 1H), 9,73 (s, 1H), 12,72 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,81-2,84 (m, 2H), 2,93-2,95 (m, 4H), 3,27-3,31 (m, 2H), 3,63-3,64 (m, 4H), 5,01 (s, 2H), 50 7,21-7,39 (m, 10H), benzil (4-(5-amino-6-((4- 7,83 (s, 1H), 7,95- morfolinopiridin-3- 7,99 (m, 1H), 8,31 il)carbamoil)pirazin-2-il)-3- (d, J = 5,6 Hz, 1H), fluorofenetil)carbamato 8,71 (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,37 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,39 (s, 1H), 2,17 (s, 3H), 2,41-2,43 (m, 2H), 2,87 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,01-3,05 (m, 5H), 3,44-3,47 51 (m, 2H), 3,80-3,81 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- (m, 4H), 7,28 (d, J il)-6-(4-(2-(4- = 5,5 Hz, 1H), 7,38- oxopentanamido)etil)fenil)pirazin 7,42 (m, 2H), 7,86- a-2-carboxamida 8,10 (m, 2H), 8,28 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,74-8,76 (m, 1H), 9,45 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Acetonitrila-d3) δ: 2,79-2,86 (m, 3H), 3,04 (s, 3H), 3,39- 3,47 (m, 6H), 5,03- 5,08 (m, 2H), 5,87 52 (s, 1H), 7,47-7,62 benzil (4-(5-amino-6-((4-(1,1- (m, 10H), 7,95-7,97 dioxidotiomorfolino)piridin-3- (m, 2H), 8,34-8,35 il)carbamoil)pirazin-2- (m, 1H), 8,75-8,78 il)fenetil)carbamato (m, 1H), 9,44 (s, 1H), 10,51 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,97-2,02 (m, 1H), 2,05-2,08 (m, 1H), 2,83-2,87 (m, 2H), 3,27-3,33 (m, 3H), 3,37-3,41 (m, 2H), 3,50-3,71 (m, 4H), 53 4,01 (s, 1H), 5,06 benzil (4-(5-amino-6-((4-(3- (s, 2H), 6,74 (d, J metoxipirrolidin-1-il)piridin-3- = 6,0 Hz, 1H), 7,22- il)carbamoil)pirazin-2- 7,34 (m, 7H), 8,00 il)fenetil)carbamato (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,06 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 8,76 (s, 1H) 1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,46-2,50 (m, 2H), 2,77-2,89 (m, 2H), 2,96 (s, 4H), 3,21-3,31 (m, 4H), 3,73 (s, 4H), 7,23 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,40-7,60 (m, 2H), 54 7,35 (d, J = 8 Hz, 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 2H), 7,62 (t, J = 7,2 il)-6-(4-(2-(4-oxo-4- Hz, 1H), 7,74 (s, fenilbutanamido)etil)fenil)pirazi 2H), 7,97 (d, J = 7,2 na-2-carboxamida Hz, 2H), 8,03-8,10 (m, 3H), 8,32 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,95 (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,43 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 2,93- 2,97 (m, 2H), 3,10- 3,15 (m, 2H), 3,42 (s, 4H), 3,65-3,67 (m, 4H), 7,25-7,38 55 (m, 3H), 7,70 (s, 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)-2- 2H), 7,88 (s, 2H), fluorofenil)-N-(4- 8,11-8,15 (m, 1H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,38 (d, J = 6,4 Hz, carboxamida 1H), 8,73 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 10,40 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 3,03- 3,09 (m, 2H), 3,24- 3,32 (m, 2H), 3,46 (s, 4H), 3,75-3,87 (m, 4H), 3,95 (s, 56 3H), 7,06-7,10 (m, 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)-2- 2H), 7,51 (d, J = 6,3 metoxifenil)-N-(4- Hz, 1H), 7,86 (d, J morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- = 7,5 Hz, 1H), 8,43 carboxamida (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 9,27 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 1,36 (s, 2H), 2,74-2,90 (m, 7H), 3,56 (s, 5H), 6,74 (s, 1H), 7,18 57 (t, J = 7,9 Hz, 3H), 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)-2,6- 7,88 (s, 2H), 8,29 difluorofenil)-N-(4- (d, J = 5,4 Hz, 1H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,52 (s, 1H), 9,38 carboxamida (s, 1H) 1HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 2,62 (s, 3H), 2,95 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 3,51-3,60 (m, 6H), 3,68-3,71 (m, 4H), 7,37-7,41 (m, 3H), 7,68 (s, 2H), 58 7,95 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,03 (d, J = 8,7 6-(4-(2-(4- Hz, 2H), 8,15 (d, J acetilbenzamido)etil)fenil)-3- = 8,4 Hz, 2H), 8,38 amino-N-(4-morfolinopiridin-3- (d, J = 6,6 Hz, 1H), il)pirazina-2-carboxamida 8,76-8,80 (m, 2H), 8,97 (s, 1H), 10,48 (s, 1H)
1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,44 (s, 3H), 2,85 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,96 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 3,40-3,42 (m, 2H), 3,72 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 4,58 (s, 2H), 7,01 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,24 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 59 7,34 (d, J = 8,4 Hz, 6-(4-(2-(2-(4- 2H), 7,73 (s, 2H), acetilfenoxi)acetamido)etil)fenil 7,89 (d, J = 8,8 Hz, )-3-amino-N-(4-morfolinopiridin- 2H), 8,07 (d, J = 8,4 3-il)pirazina-2-carboxamid Hz, 2H), 8,24 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 8,32 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,95 (s, 1H), 9,34 (s, 1H), 10,44 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 2,41 (s, 3H), 2,89 (s, 4H), 3,28 (s, 4H), 4,23 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 5,04 (s, 2H), 7,11-7,19 (m, 3H), 7,27-7,36 60 (m, 5H), 7,47 (d, J benzil (4-(5-amino-6-((4- = 8,4 Hz, 1H), 7,67 morfolinopiridin-3- (s, 2H), 7,74-7,85 il)carbamoil)pirazin-2-il)-3- (m, 1H), 8,27 (s, metilbenzil)carbamato 1H), 8,49 (s, 1H), 9,31 (s, 1H), 10,31 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,40-2,42 (m, 3H), 3,40 (s, 4H), 3,53-3,63 (m, 4H), 4,06-4,07 (m, 2H), 61 7,32-7,44 (m, 3H), 3-amino-6-(4-(aminometil)-2- 7,57-7,76 (m, 3H), metilfenil)-N-(4- 8,01-8,14 (m, 3H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,33 (s, 1H), 8,84 carboxamida (s, 1H), 10,28 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 3,18- 3,24 (m, 8H), 3,64- 3,72 (m, 8H), 7,45 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,88-7,92 (m, 3H), 62 8,42 (d, J = 6,9 Hz, 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 1H), 8,55 (d, J = il)-6-(4-(piperazin-1- 8,4 Hz, 2H), 8,68 ilsulfonil)fenil)pirazina-2- (s, 1H), 8,89 (s, carboxamida 2H), 9,12 (s, 1H), 10,63 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 2,93- 2,94 (m, 8H), 3,49 (s, 4H), 3,63 (s, 4H), 5,00 (s, 2H), 63 7,21-7,31 (m, 6H), benzil 4-((4-(5-amino-6-((4- 7,83-7,94 (m, 4H), morfolinopiridin-3- 8,31-8,38 (m, 3H), il)carbamoil)pirazin-2- 9,04 (s, 1H), 9,29 il)fenil)sulfonil)piperazine-1- (s, 1H), 10,45 (s, carboxilato 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 3,01- 3,23 (m, 6H), 3,81- 3,83 (m, 4H), 4,08- 4,10 (m, 2H), 7,10 64 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,26-7,34 (m, 1H), 3-amino-6-(4-(2- 7,98-8,01 (m, 2H), aminoetoxi)fenil)-N-(4- 8,27 (d, J = 5,4 Hz, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 1H), 8,72 (s, 1H), carboxamida 9,47 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 1,82-1,86 (m, 2H), 2,72-2,77 (m, 2H), 2,96 (s, 4H), 3,72 (s, 4H), 4,10- 4,16 (m, 2H), 7,04- 7,07 (m, 2H), 7,22- 65 7,24 (m, 1H), 7,66- 3-amino-6-(4-(3- 7,80 (m, 2H), 7,82- aminopropoxi)fenil)-N-(4- 7,83 (m, 1H), 8,04- morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,09 (m, 3H), 8,32 carboxamida (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,91 (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,50 (s, 1H)
H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 1,85-1,89 (m, 2H), 2,70-2,74 (m, 2H), 2,82-2,87 (m, 6H), 3,68-3,77 (m, 4H), 66 6,96-6,99 (m, 1H), 7,33-7,47 (m, 3H), 7,82 (s, 5H), 8,12 (d, 3-amino-6-(4-(3- J = 8,4 Hz, 1H), 8,28-8,31 (m, aminopropil)fenil)-N-(5-fluoro-2- 1H), 8,95 (s, 1H), 11,06 (s, morfolinofenil)pirazina-2- 1H) carboxamida 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 2,90- 2,92 (m, 2H), 2,94- 3,05 (m, 4H), 3,11- 3,18 (m, 2H), 3,76- 3,84 (m, 4H), 4,85 67 (s, 2H), 7,24-7,29 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- (m, 2H), 7,78 (s, il)-6-(1,2,3,4-tetra- 1H), 7,85-7,87 (m, hidroisoquinolin-7-il)pirazina-2- 1H), 8,27 (d, J = 5,4 carboxamida Hz, 1H), 8,73 (s, 1H), 9,45 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,53 (s, 9H), 2,92 (m, 2H), 3,02-3,32 (m, 4H), 3,69-3,71 (m, 2H), 3,80-3,82 (m, 4H), 4,85 (s, 2H), 68 7,24 (d, J = 5,6 Hz, terc-butil 7-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3- 1H), 7,30 (d, J = 8,0 il)carbamoil)pirazin- Hz, 1H), 7,78 (s, 2-il)-3,4-di-hidroisoquinoline- 1H), 7,86 (d, J = 8,0 2(1H)-carboxilato Hz, 1H), 8,27 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,73 (s, 1H), 9,45 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,98- 2,06 (m, 2H), 2,71- 2,82 (m, 2H), 2,97- 3,01 (m, 2H), 3,72- 69 3,81 (m, 8H), 7,40- 2-amino-5-(4-(3- 7,42 (m, 3H), 7,68- aminopropil)fenil)-N-(4- 7,73 (m, 2H), 8,25- morfolinopiridin-3- 8,28 (m, 1H), 8,45- il)nicotinamida 8,49 (m, 2H), 8,80 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,41- 3,50 (m, 4H), 3,52- 3,61 (m, 8H), 3,82- 3,84 (m, 4H), 7,19 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 70 7,52 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 8,8 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- Hz, 2H), 8,35-8,37 il)-6-(4-(piperazin-1- (m, 1H), 8,80 (s, il)fenil)pirazina-2-carboxamid 1H), 9,11 (d, J = 1,2 Hz, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,43 (s, 9H), 3,05 (s, 4H), 3,20-3,22 (m, 4H), 3,57 (s, 4H), 3,72- 3,73 (m, 4H), 7,07 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 71 7,26 (d, J = 5,6 Hz, terc-butil 4-(4-(5-amino-6-((4- 1H), 7,60 (s, 2H), morfolinopiridin-3- 8,03 (d, J = 8,8 Hz, il)carbamoil)pirazin- 2H), 8,32 (d, J = 2-il)fenil)piperazine-1- 5,6 Hz, 1H), 8,90 carboxilato (s, 1H), 9,25 (s, 1H), 10,44 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,55 (s, 4H), 2,45 (s, 4H), 2,84-2,89 (m, 2H), 3,37-3,42 (m, 2H), 3,77 (s, 2H), 72 5,08 (s, 2H), 7,28- benzil (4-(5-amino-6-((4- (pirrolidin-1-ilmetil)piridin-3- 7,35 (m, 8H), 7,82 il)carbamoil)pirazin-2- (d, J = 7,8 Hz, 2H), il)fenetil)carbamato 8,26 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,64 (s, 1H), 9,52 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,31- 1,51 (m, 2H), 1,53- 1,77 (m, 2H), 2,63- 2,77 (m, 4H), 2,93- 3,09 (m, 4H), 3,81- 73 3,87 (m, 4H), 7,26 3-amino-6-(4-(4- (d, J = 5,4 Hz, 1H), aminobutil)fenil)-N-(4- 7,36 (d, J = 8,1 Hz, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 2H), 7,99 (d, J = 7,8 carboxamida Hz, 2H), 8,29 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 8,76 (s, 1H), 9,54 (s, 1H)
1HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 1,24-1,45 (m, 2H), 1,48-1,61 (m, 2H), 2,63-2,68 (m, 2H), 2,97-3,08 (m, 6H), 3,73 (s, 4H), 5,01 (s, 2H), 7,24- 74 7,35 (m, 9H), 7,73 benzil (4-(4-(5-amino-6-((4- (s, 2H), 8,06 (d, J morfolinopiridin-3- = 8,1 Hz, 2H), 8,32 il)carbamoil)pirazin-2- (d, J = 5,4 Hz, 1H), il)fenil)butil)carbamato 8,95 (s, 1H), 9,34 (s, 1H), 10,46 (s, 1H) 1HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 3,02-3,06 (m, 2H), 3,47-3,69 (m, 6H), 3,70 (s, 4H), 7,43 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,82-7,93 (m, 75 4H), 8,02 (d, J = 8,4 3-amino-6-(4-((2- Hz, 2H), 8,33-8,38 aminoetil)carbamoil)fenil)-N-(4- (m, 3H), 8,75 (m, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 1H), 8,87 (s, 1H), carboxamida 9,08 (s, 1H), 10,50 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 3,04- 3,07 (m, 4H), 3,41- 3,43 (m, 2H), 3,53- 3,57 (m, 2H), 3,81- 3,84 (m, 4H), 5,10 76 (s, 2H), 7,27-7,34 (m, 6H), 8,00 (d, J benzil (2-(4-(5-amino-6-((4- = 8,4 Hz, 2H), 8,20 morfolinopiridin-3- (d, J = 8,4 Hz, 2H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,31 (d, J = 5,7 Hz, il)benzamido)etil)carbamato 1H), 8,87 (s, 1H), 9,46 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 3,10- 3,29 (m, 2H), 3,53- 3,57 (m, 6H), 3,81- 3,84 (m, 4H), 4,46 (s, 2H), 7,40 (d, J 77 = 8,7 Hz, 1H), 7,49 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- (d, J = 6,9 Hz, 1H), il)-6-(1,2,3,4-tetra- 7,99-8,04 (m, 2H), hidroisoquinolin-6-il)pirazina-2- 8,35-8,37 (m, 1H), carboxamida 8,87 (s, 1H), 9,11 (s, 1H)
1HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 1,45 (s, 9H), 2,88-2,98 (m, 6H), 3,61 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,71-3,74 (m, 4H), 4,57 (s, 2H), 7,23 (d, J = 5,4 Hz, 78 1H), 7,32 (d, J = 8,1 terc-butil 6-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3- Hz, 1H), 7,76 (s, il)carbamoil)pirazin-2-il)-3,4- 2H), 7,94-7,99 (m, di-hidroisoquinoline-2(1H)- 2H), 8,32 (d, J = 5,4 carboxilato Hz, 1H), 8,95 (s, 1H), 9,32 (s, 1H), 10,36 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Acetonitrila-d3) δ: 1,79-1,85 (m, 2H), 2,66-2,70 (m, 2H), 3,03-3,06 (m, 4H), 3,13-3,18 (m, 2H), 3,73-3,78 (m, 4H), 5,07 (s, 2H), 5,71 (s, 1H), 6,63 (s, 79 2H), 7,07 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,32- benzil (3-(4-(6-amino-5-((4- 7,41 (m, 7H), 7,57- morfolinopiridin-3- 7,59 (m, 2H), 8,17 il)carbamoil)piridin-3- (d, J = 2,4 Hz, 1H), il)fenil)propil)carbamato 8,32 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,95 (s, 1H)
1HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 2,84-2,90 (m, 2H), 3,30-3,35 (m, 2H), 3,44-3,68 (m, 6H), 3,70 (s, 4H), 7,40 (d, J = 7,2 Hz, 80 3H), 7,69-7,91 (m, 3-amino-6-(4-(2-((2- 4H), 8,12-8,15 (m, aminoetil)amino)-2- 2H), 8,27-8,29 (m, oxoetil)fenil)-N-(4- 1H), 8,39 (d, J = 6,3 morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- Hz, 1H), 8,87 (s, carboxamida 1H), 8,96 (s, 1H), 10,50 (s, 1H)
1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 1,42 (s, 9H), 2,98 (s, 4H), 3,53- 3,60 (m, 6H), 3,64- 3,69 (m, 2H), 3,70- 3,71 (m, 4H), 7,24 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 81 7,55 (d, J = 8,0 Hz, terc-butil 4-(4-(5-amino-6-((4- 2H), 7,83 (s, 2H), morfolinopiridin-3- 8,21 (d, J = 8,4 Hz, il)carbamoil)pirazin-2- 2H), 8,32 (d, J = 5,2 il)benzoil)piperazine-1- Hz, 1H), 9,01 (s, carboxilato 1H), 9,33 (s, 1H), 10,47 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 1,47 (s, 9H), 2,99 (s, 4H), 3,69- 3,81 (m, 8H), 4,11 (s, 2H), 7,24 (s, 82 1H), 7,52 (s, 2H), 7,79 (s, 2H), 8,20 terc-butil 4-(4-(5-amino-6-((4- (s, 2H), 8,33 (s, morfolinopiridin-3- 1H), 9,28 (s, 1H), il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- 9,37 (s, 1H), 10,41 3-oxopiperazine-1-carboxilato (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 1,24 (s, 1H), 2,68-2,72 (s, 4H), 2,97 (s, 4H), 3,41- 3,60 (m, 4H), 3,71 (s, 4H), 7,24 (d, J 83 = 4,2 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 7,82 (s, 2H), 8,19- il)-6-(4-(piperazine-1- 8,20 (m, 2H), 8,32- carbonil)fenil)pirazina-2- 8,33 (m, 1H), 9,00 carboxamida (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,49 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,72-3,74 (m, 4H), 3,80-3,82 (m, 2H), 3,88-3,97 (m, 4H), 4,04-4,06 (m, 4H), 84 7,46 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 8,18 (d, J = 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 8,4 Hz, 2H), 8,33 il)-6-(4-(2-oxopiperazin-1- (d, J = 6,8 Hz, 1H), il)fenil)pirazina-2-carboxamida 8,86 (s, 1H), 9,07 (s, 1H)
1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 1,41 (s, 9H), 2,96 (s, 4H), 3,28- 3,30 (m, 4H), 3,54 (s, 2H), 3,70 (s, 4H), 4,63 (s, 2H), 7,24 (d, J = 5,6 Hz, 85 1H), 7,40 (d, J = 7,2 terc-butil 4-(4-(5-amino-6-((4- Hz, 2H), 7,75 (s, morfolinopiridin-3- 2H), 8,11 (d, J = 8,0 il)carbamoil)pirazin-2- Hz, 2H), 8,32 (d, J il)benzil)-3-oxopiperazine-1- = 4,8 Hz, 1H), 8,95 carboxilato (s, 1H), 9,32 (s, 1H), 10,46 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,69-2,71 (m, 2H), 2,88-2,90 (m, 2H), 2,92-2,96 (m, 4H), 3,31-3,36 (m, 4H), 3,45-3,46 (m, 4H), 3,71-3,73 (m, 4H), 5,08 (s, 2H), 86 7,22 (d, J = 8,0 Hz, benzil 4-(3-(4-(6-amino-5-((4- morfolinopiridin-3- 1H), 7,30-7,40 (m, il)carbamoil)pirazin-2- 7H), 7,72 (s, 2H), il)fenil)propanoil)piperazine-1- 8,07 (d, J = 8,0 Hz, carboxilat 2H), 8,32 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,95 (s, 1H), 9,35 (s, 1H), 10,43 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 3,42- 3,62 (m, 8H), 3,69 (m, 4H), 3,85 (s, 2H), 4,65 (s, 2H), 7,42-7,51 (m, 3H), 87 7,71 (s, 2H), 8,18 (d, J = 8,0 Hz, 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 2H), 8,39 (d, J = il)-6-(4-((2-oxopiperazin-1- 6,8 Hz, 1H), 8,80 il)metil)fenil)pirazina-2- (s, 1H), 8,98 (s, carboxamida 1H), 9,32 (s, 1H), 10,47 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,69- 2,70 (m, 2H), 2,77- 2,99 (m, 4H), 3,04- 3,33 (m, 6H), 3,44- 3,47 (m, 2H), 3,56- 3,58 (m, 2H), 3,78- 88 3,89 (m, 4H), 7,27 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- (d, J = 5,6 Hz, 1H), il)-6-(4-(3-oxo-3-(piperazin-1- 7,41 (d, J = 8,4 Hz, il)propil)fenil)pirazina-2- 2H), 8,01 (d, J = 8,0 carboxamida Hz, 2H), 8,28 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,77 (s, 1H), 9,48 (s, 1H)
1HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 1,40 (s, 9H), 2,35 (s, 4H), 2,97 (s, 4H), 3,33 (s, 4H), 3,57 (s, 2H), 3,71 (s, 4H), 7,25 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 89 7,45 (d, J = 6,0 Hz, terc-butil 4-(4-(5-amino-6-((4- 2H), 7,75 (s, 2H), morfolinopiridin-3- 8,09 (d, J = 6,0 Hz, il)carbamoil)pirazin-2- 2H), 8,32 (d, J = 6,0 il)benzil)piperazine-1- Hz, 1H), 8,95 (s, carboxilato 1H), 9,36 (s, 1H), 10,49 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 3,00 (s, 4H), 3,30-3,37 (m, 4H), 3,51 (s, 4H), 3,70 (s, 4H), 3,83 (s, 2H), 5,07 (s, 2H), 7,24 (d, J = 90 2,7 Hz, 1H), 7,30- benzil 4-(2-(4-(5-amino-6-((4- 7,40 (m, 7H), 7,75 morfolinopiridin-3- (s, 2H), 8,10 (d, J il)carbamoil)pirazin-2- = 4,0 Hz, 2H), 8,32 il)fenil)acetil)piperazine-1- (d, J = 2,7 Hz, 1H), carboxilato 9,00 (s, 1H), 9,36 (s, 1H), 10,46 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 3,51- 3,57 (m, 12H), 3,78- 3,81 (m, 4H), 4,45 (s, 2H), 7,53 (d, J 91 = 6,9 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 8,19 (d, J = 8,1 Hz, il)-6-(4-(piperazin-1- 2H), 8,36-8,39 (m, ilmetil)fenil)pirazina-2- 1H), 8,89 (s, 1H), carboxamida 9,11 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 2,65 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 2,79 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 3,04 (t, J = 4,5 Hz, 4H), 3,54 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 3,64 (t, J = 5,0 Hz, 4H), 3,82 (t, J = 92 4,5 Hz, 2H), 3,90 (s, 2H), 7,29 (d, J 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- = 5,4 Hz, 1H), 7,46 il)-6-(4-(2-oxo-2-(piperazin-1- (d, J = 8,1 Hz, 2H), il)etil)fenil)pirazina-2- 8,07 (d, J = 8,1 Hz, carboxamida 2H), 8,29 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 8,80 (s, 1H), 9,49 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 2,10 (s, 4H), 3,02-3,07 (m, 2H), 3,21-3,26 (m, 2H), 3,62 (s, 93 4H), 4,45 (s, 2H), 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- 7,40-7,45 (m, 2H), N-(4-(pirrolidin-1- 7,80 (d, J = 6,9 Hz, ilmetil)piridin-3-il)pirazina-2- 1H), 8,15 (d, J = 8,1 carboxamida Hz, 2H), 8,66 (s, 1H), 8,84 (s, 2H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,99 (s, 4H), 3,27-3,32 (m, 4H), 3,58 (s, 2H), 3,72-3,73 (m, 4H), 5,03 (s, 2H), 94 7,23-7,34 (m, 6H), benzil (2-(2-(4-(5-amino-6-((4- 7,46 (d, J = 8,0 Hz, morfolinopiridin-3- 2H), 8,01 (d, J = 8,0 il)carbamoil)pirazin-2- Hz, 2H), 8,28 (d, J il)fenil)acetamido)etil)carbamato = 5,6 Hz, 1H), 8,74 (s, 1H), 9,46 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,85- 2,88 (m, 2H), 3,32- 3,49 (m, 2H), 4,30 (s, 4H), 4,69-4,74 95 (m, 4H), 5,07-5,14 (m, 2H), 6,54 (d, J benzil (4-(6-((4-(2-oxa-6- = 5,6 Hz, 1H), 7,27- azaspiro[3.3]heptan-6-il)piridin- 7,59 (m, 7H), 8,00- 3-il)carbamoil)-5-aminopirazin-2- 8,08 (m, 3H), 8,32 il)fenetil)carbamato (s, 1H), 8,78 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,85- 2,90 (m, 2H), 3,24 (s, 3H), 3,39-3,44 (m, 2H), 3,98-4,01 (m, 2H), 4,30-4,37 96 (m, 3H), 5,08 (s, benzil (4-(5-amino-6-((4-(3- 2H), 6,55 (d, J = 7,6 metoxiazetidin-1-il)piridin-3- Hz, 1H), 7,33-7,38 il)carbamoil)pirazin-2- (m, 7H), 8,00-8,09 il)fenetil)carbamato (m, 3H), 8,27 (s, 1H), 8,78 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,87- 1,89 (m, 2H), 2,79- 2,86 (m, 2H), 2,90- 2,97 (m, 2H), 3,15 (s, 3H), 3,22-3,34 97 (m, 2H), 3,36-3,52 (m, 2H), 6,75 (d, J 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- = 6,0 Hz, 1H), 7,29- N-(4-((3- 7,37 (m, 2H), 8,01- metoxipropil)amino)piridin-3- 8,08 (m, 3H), 8,14 il)pirazina-2-carboxamida (s, 1H), 8,77 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,91- 3,15 (m, 2H), 3,21- 3,33 (m, 2H), 3,45- 3,50 (m, 3H), 4,31- 4,38 (m, 3H), 4,62- 98 4,66 (m, 2H), 6,76 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- (d, J = 7,2 Hz, 1H), N-(4-(3-metoxiazetidin-1- 7,43 (d, J = 8,4 Hz, il)piridin-3-il)pirazina-2- 2H), 8,09-8,15 (m, carboxamida 3H), 8,32 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,83 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 2,84- 2,88 (m, 2H), 3,32- 3,42 (m, 5H), 3,63 (s, 4H), 5,10 (s, 2H), 7,22 (d, J = 7,2 99 Hz, 1H), 7,26-7,37 benzil (4-(5-amino-6-((4-((2- (m, 7H), 8,07 (d, J metoxietil)amino)piridin-3- = 8,1 Hz, 2H), 8,29 il)carbamoil)pirazin-2- (dd, J1 = 7,2 Hz, J2 il)fenetil)carbamato = 1,2 Hz, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,81 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 2,85- 2,87 (m, 2H), 2,90- 3,02 (m, 2H), 3,33- 3,35 (m, 3H), 3,44 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 100 3,61 (t, J = 5,7 Hz, 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- 2H), 6,82 (d, J = 5,7 N-(4-((2- Hz, 1H), 7,38 (d, J metoxietil)amino)piridin-3- = 8,4 Hz, 2H), 8,06- il)pirazina-2-carboxamida 8,10 (m, 3H), 8,16 (s, 1H), 8,77 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 2,77- 2,81 (m, 2H), 2,88 (s, 3H), 3,02 (s, 3H), 3,25-3,33 (m, 4H), 3,45-3,49 (m, 2H), 5,02 (s, 2H), 101 7,06 (d, J = 5,4 Hz, benzil (4-(5-amino-6-((4-((2- 1H), 7,29-7,57 (m, metoxietil)(metil)amino)piridin- 8H), 7,67 (s, 2H), 3-il)carbamoil)pirazin-2- 8,10 (d, J = 8,1 Hz, il)fenetil)carbamato 2H), 8,21 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 10,38 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Acetonitrila-d3+D2O) δ: 2,78-2,75 (m, 2H), 2,88-2,93 (m, 5H), 3,10 (s, 3H), 3,29-3,32 (m, 2H), 3,50-3,52 (m, 2H), 102 7,10 (d, J = 4,2 Hz, 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- 1H), 7,37 (d, J = 6,0 N-(4-((2- Hz, 2H), 7,97 (d, J metoxietil)(metil)amino)piridin- = 6,0 Hz, 2H), 8,25 3-il)pirazina-2-carboxamida (d, J = 4,2 Hz, 1H), 8,78 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 10,30 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,81- 1,88 (m, 2H), 2,85- 2,90 (m, 5H), 3,08- 3,09 (s, 2H), 3,25- 3,32 (m, 3H), 3,33- 103 3,43 (m, 4H), 7,17 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- 7,39 (d, J = 8,4 Hz, N-(4-((3- 2H), 8,00 (d, J = 8,0 metoxipropil)(metil)amino)piridin Hz, 2H), 8,21 (d, J -3-il)pirazina-2-carboxamida = 5,6 Hz, 1H), 8,79 (s, 1H), 9,14 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,01- 3,05 (m, 2H), 3,21- 3,23 (m, 2H), 4,16 (s, 2H), 7,00 (d, J 104 = 7,2 Hz, 1H), 7,41- 3-amino-N-(4-((2-amino-2- 7,49 (m, 2H), 8,14- oxoetil)amino)piridin-3-il)-6-(4- 8,17 (m, 2H), 8,22- (2-aminoetil)fenil)pirazina-2- 8,25 (m, 1H), 8,39 carboxamida (s, 1H), 8,82 (s, 1H)
105 [M+H]+: 699,4 (9H-fluoren-9-il)metil (S)-(1- ((4-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)benzil)amino)-1-oxopropan-2- il)carbamato
106 [M+H]+: 477,3
(S)-3-amino-6-(4-((2- aminopropanamido)metil)fenil)-N- (4-morfolinopiridin-3- il)pirazina-2-carboxamida
107 [M+H]+: 676,4 terc-butil ((S)-1-(((S)-1-((4-(5- amino-6-((4-morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)benzil)amino)-1-oxopropan-2- il)amino)-3-metil-1-oxobutan-2- il)carbamato
108 [M+H]+: 576,4 3-amino-6-(4-(((S)-2-((S)-2- amino-3- metilbutanamido)propanamido)metil )fenil)-N-(4-morfolinopiridin-3- il)pirazina-2-carboxamida
109 [M+H]+: 603,4 terc-butil (S)-2-((4-(5-amino-6- ((4-morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)benzil)carbamoil)pirrolidine- 1-carboxilato
110 [M+H]+: 503,3 (S)-3-amino-N-(4- morfolinopiridin-3-il)-6-(4- ((pirrolidine-2- carboxamido)metil)fenil)pirazina- 2-carboxamida
111 [M+H]+: 702,4 terc-butil ((S)-1-((S)-2-((4-(5- amino-6-((4-morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)benzil)carbamoil)pirrolidin-1- il)-3-metil-1-oxobutan-2- il)carbamato
112 [M+H]+: 602,4
6-(4-(((S)-1-(L- valil)pirrolidine-2- carboxamido)metil)fenil)-3-amino- N-(4-morfolinopiridin-3- il)pirazina-2-carboxamida 1H NMR (300 MHz, Clorofórmio-d1) δ: 2,64-2,90 (m, 5H), 3,37-3,47 (m, 2H), 4,75 (s, 2H), 4,97 (s, 1H), 5,23 (s, 2H), 6,34 (s, 1H), 113 7,50-7,54 (m, 8H), benzil (4-(5-amino-6-((4- 7,73 (d, J = 7,0 Hz, ((cianometil)(metil)amino)piridin 2H), 7,99-8,34 (m, -3-il)carbamoil)pirazin-2- 2H), 8,53 (s, 1H), il)fenetil)carbamato 10,13 (s, 1H) (um hidrogênio ativo não foi encontrado) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,41 (s, 4H), 2,00-2,03 (m, 2H), 2,82-2,96 (m, 4H), 3,02-3,07 (m, 4H), 3,49 (s, 114 2H), 3,63-3,67 (m, 2H), 3,90-3,92 (m, 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 4H), 7,24 (d, J = 5,6 il)-6-(2,8-diazaspiro[4.5]decan- Hz, 1H), 7,91 (s, 2-il)pirazina-2-carboxamida 1H), 8,26 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 9,31 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,52 (s, 9H), 3,05-3,08 (m, 4H), 3,50-3,59 (m, 4H), 3,64-3,67 115 (m, 4H), 3,89-3,92 (m, 4H), 7,26 (d, J terc-butil 4-(5-amino-6-((4- = 5,4 Hz, 1H), 8,20 morfolinopiridin-3- (s, 1H), 8,28 (d, J il)carbamoil)pirazin-2- = 5,4 Hz, 1H), 9,34 il)piperazine-1-carboxilato (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,91-2,94 (m, 2H), 3,14-3,15 (m, 4H), 3,50-3,57 (m, 2H), 3,77-3,85 (m, 4H), 116 5,06 (s, 2H), 7,20- 7,25 (m, 2H), 7,26- benzil (2-(6-(5-amino-6-((4- 7,32 (m, 4H), 7,84- morfolinopiridin-3- 7,86 (m, 1H), 8,21- il)carbamoil)pirazin-2- 8,31 (m, 2H), 8,53 il)piridin-3-il)etil)carbamato (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 9,37 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,21- 3,25 (m, 2H), 3,32- 3,38 (m, 2H), 3,69- 3,78 (m, 8H), 7,42 117 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,28 (d, J = 6,8 Hz, 3-amino-6-(5-(2- 1H), 8,45 (d, J = 8,4 aminoetil)piridin-2-il)-N-(4- Hz, 1H), 8,60-8,64 morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- (m, 2H), 9,03 (s, carboxamida 1H), 9,24 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 3,38- 3,51 (m, 4H), 3,59- 3,69 (m, 4H), 3,75- 118 3,85 (m, 8H), 7,41 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 8,26-8,28 (m, 2H), il)-6-(piperazin-1-il)pirazina-2- 8,71 (s, 1H) carboxamida
119 [M+H]+: 609,3 benzil (4-(6-((4-(1H-imidazol-1- il)piridin-3-il)carbamoil)-5- aminopirazin-2- il)fenetil)carbamato
120 [M+H]+: 536,3 benzil (4-(6-((4-(1H-1,2,3- triazol-1-il)piridin-3- il)carbamoil)-5-aminopirazin-2- il)fenetil)carbamato
121 [M+H]+: 545,3 vbenzil (4-(5-amino-6-((4- fenilpiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,47 (s, 9H), 1,56-1,64 (m, 2H), 2,03 (d, J = 11,2 Hz, 2H), 3,01-3,06 (m, 6H), 122 3,60 (s, 1H), 3,88- 3,90 (m, 4H), 4,18- terc-butil (1-(5-amino-6-((4- 4,22 (m, 2H), 7,24- morfolinopiridin-3- 7,32 (m, 1H), 8,17 il)carbamoil)pirazin-2- (s, 1H), 8,26 (d, J il)piperidin-4-il)carbamato = 6,8 Hz, 1H), 9,36 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,66- 1,79 (m, 2H), 2,15 (d, J = 9,9 Hz, 2H), 2,93-3,02 (m, 2H), 3,36-3,42 (m, 1H), 123 3,57-3,62 (m, 4H), 3,81-3,86 (m, 4H), 4,34 (d, J = 13,2 Hz, 3-amino-6-(4-aminopiperidin-1- 2H), 7,45 (d, J = 6,9 il)-N-(4-morfolinopiridin-3- Hz, 1H), 8,25-8,31 il)pirazina-2-carboxamida (m, 2H), 8,84 (d, J = 1,2 Hz, 1H) 1HNMR (300 MHz, DMSO- d6+D2O) δ: 2,84-2,92 (m, 6H), 3,38 (s, 2H), 3,62 (s, 4H), 124 5,01 (s, 2H), 7,11- benzil (2-(5-(5-amino-6-((4- 7,55 (m, 7H), 8,24- morfolinopiridin-3- 8,33 (m, 2H), 8,85 il)carbamoil)pirazin-2- (s, 1H), 9,13 (d, J il)piridin-2-il)etil)carbamato = 4,8 Hz, 2H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,32- 3,37 (m, 2H), 3,45- 3,48 (m, 2H), 3,63- 3,70 (m, 4H), 3,79- 3,81 (m, 4H), 7,47 125 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 3-amino-6-(6-(2- 7,72 (d, J = 8 Hz, aminoetil)piridin-3-il)-N-(4- 1H), 8,32-8,34 (m, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 1H), 8,75-8,78 (m, carboxamida 1H), 8,86 (s, 1H), 8,95 (s, 1H), 9,38 (d, J = 2,0 Hz, 1H) 1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,78-2,82 (m, 2H), 3,26-3,31 (m, 2H), 3,35-3,37 (m, 4H), 3,80 (s, 4H), 5,01 (s, 2H), 7,61- 126 7,64 (m, 8H), 7,70- benzil (4-(5-amino-6-((4- 7,81 (m, 4H), 7,99- morfolinoquinolin-3- 8,04 (m, 1H), 8,16- il)carbamoil)pirazin-2- 8,20 (m, 3H), 8,22- il)fenetil)carbamato 8,95 (m, 1H), 9,10- 9,25 (s, 1H), 10,68 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 3,02- 3,07 (m, 2H), 3,24- 3,29 (m, 2H), 7,35 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 127 7,52-7,67 (m, 4H), N-([3,4'-bipiridin]-3'-il)-3- 8,11 (d, J = 8,1 Hz, amino-6-(4-(2- 1H), 8,52 (d, J = 5,1 aminoetil)fenil)pirazina-2- Hz, 1H), 8,74- carboxamida 8,81(m, 3H), 9,60 (s, 1H) 1HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 2,77-2,82 (m, 2H), 3,26-3,28 (m, 2H), 5,03 (s, 2H), 7,25-7,41 (m, 8H), 7,50-7,74 (m, 6H), 128 8,05 (m, 1H), 8,56 (d, J = 4,8 Hz, 1H), benzil (4-(6-([3,4'-bipiridin]- 8,73 (d, J =3,3 Hz, 3'-ilcarbamoil)-5-aminopirazin-2- 1H), 8,80 (s, 1H), il)fenetil)carbamato 8,88 (s, 1H), 9,29 (s, 1H), 10,28 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,03- 3,07 (m, 2H), 3,22- 3,30 (m, 2H), 7,37- 7,39 (m, 2H), 7,63 129 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,96-8,01 (m, 3H), N-([4,4'-bipiridin]-3-il)-3- 8,73 (d, J = 5,2 Hz, amino-6-(4-(2- 1H), 8,79 (s, 1H), aminoetil)fenil)pirazina-2- 8,80-8,92 (m, 2H), carboxamida 9,83 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,83- 2,96 (m, 2H), 2,98- 2,99 (m, 2H), 3,49 (s, 4H), 3,88-3,90 130 (m, 4H), 7,38 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,60- 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- 7,72 (m, 2H), 7,94- N-(4-morfolinoquinolin-3- 8,03 (m, 3H), 8,26- il)pirazina-2-carboxamida 8,28 (m, 1H), 9,52 (s, 1H), 9,56 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 2,83-2,89 (m, 2H), 3,00-3,10 (m, 6H), 3,66-3,69 (m, 4H), 131 6,56 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 3-amino-N-(2-amino-4- 8,4 Hz, 2H), 7,87 morfolinopiridin-3-il)-6-(4-(2- (d, J = 7,5 Hz, 1H), aminoetil)fenil)pirazina-2- 8,06-8,08 (m, 2H), carboxamida 8,83 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,08- 3,28 (m, 4H), 7,47- 7,52 (m, 3H), 8,01- 132 8,19 (m, 5H), 8,56- N-([2,4'-bipiridin]-3'-il)-3- 8,64 (m, 2H), 8,77 amino-6-(4-(2- (s, 1H), 10,03 (s, aminoetil)fenil)pirazina-2- 1H) carboxamida 1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,49-2,51 (m, 2H), 3,31-3,36 (m, 2H), 5,02 (s, 2H), 7,25-7,35 (m, 9H), 7,71 (s, 2H), 7,84 133 (s, 1H), 8,00-8,07 (m, 4H), 8,49 (d, J benzil (4-(6-([2,4'-bipiridin]- = 5,2 Hz, 1H), 8,59 3'-ilcarbamoil)-5-aminopirazin-2- (d, J = 4,8 Hz, 1H), il)fenetil)carbamato 8,91 (s, 1H), 9,69 (s, 1H), 12,92 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,88- 2,96 (m, 2H), 3,13- 3,14 (m, 2H), 3,35 (s, 4H), 3,83-3,90 134 (m, 4H), 6,75 (s, 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- 1H), 7,30-7,34 (m, N-(4-morfolino-1H-pirrolo[2,3- 3H), 8,03 (d, J = 8,0 b]piridin-5-il)pirazina-2- Hz, 2H), 8,76 (s, carboxamida 1H), 9,12 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6+D2O) δ: 2,91-2,95 (m, 2H), 3,07-3,09 (m, 2H), 3,25-3,40 (m, 4H), 3,55-3,85 135 (m, 4H), 6,38 (s, 3-amino-N-(6-amino-4- 1H), 7,40 (d, J = 8,4 morfolinopiridin-3-il)-6-(4-(2- Hz, 2H), 8,15 (d, J aminoetil)fenil)pirazina-2- = 8,1 Hz, 2H), 8,21 carboxamida (s, 1H), 8,95 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,83- 2,94 (m, 2H), 3,07- 3,13 (m, 2H), 7,30- 7,32 (m, 1H), 7,55- 7,59 (m, 2H), 7,67- 136 7,69 (m, 2H), 7,75 N-(4-(1H-imidazol-1-il)piridin-3- (d, J = 8,0 Hz, 2H), il)-3-amino-6-(4-(2- 8,13 (s, 1H), 8,52 aminoetil)fenil)pirazina-2- (d, J = 5,2 Hz, 1H), carboxamida 8,75 (s, 1H), 9,63 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,84- 2,86 (m, 2H), 3,40- 3,42 (m, 2H), 5,06 (s, 2H), 7,25-7,31 137 (m, 8H), 7,53-7,59 benzil (4-(6-((4-(1H-imidazol-1- (m, 2H), 7,66-7,68 il)piridin-3-il)carbamoil)-5- (m, 2H), 8,09 (s, aminopirazin-2- 1H), 8,51 (d, J = 5,2 il)fenetil)carbamato Hz, 1H), 8,70 (s, 1H), 9,60 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,29 (s, 3H), 2,90-2,93 (m, 2H), 3,06-3,08 (m, 2H), 7,21 (s, 138 1H), 7,31-7,39 (m, 3H), 7,66 (s, 1H), benzil (4-(5-amino-6-((4-(2- 7,67 (d, J = 8,4 Hz, metil-1H-imidazol-1-il)piridin-3- 2H), 8,53 (d, J = 5,2 il)carbamoil)pirazin-2- Hz, 1H), 8,76 (s, il)fenetil)carbamato 1H), 9,83 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,84- 2,88 (m, 2H), 3,02-3,06 (m, 2H), 3,44-2,49 (m, 4H), 139 3,81-3,83 (m, 4H), 7,43 (d, J = 8,0 Hz, 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- 2H), 7,95 (d, J = N-(5-cloro-4-morfolinopiridin-3- 8,0 Hz, 2H), 8,29 il)pirazina-2-carboxamida (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 9,65 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 0,90- 1,17 (m, 3H), 2,60- 2,62 (m, 2H), 2,90- 2,92 (m, 2H), 3,04 140 (s, 2H), 7,27-7,40 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- (m, 4H), 7,61-7,63 N-(4-(2-etil-1H-imidazol-1- (m, 3H), 8,55 (s, il)piridin-3-il)pirazina-2- 1H), 8,75 (s, 1H), carboxamida 9,88 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,12- 1,17 (m, 3H), 2,55- 2,62 (m, 2H), 2,85- 2,89 (m, 2H), 3,40- 141 3,47 (m, 2H), 5,07 benzil (4-(5-amino-6-((4-(2-etil- (s, 2H), 7,24-7,37 1H-imidazol-1-il)piridin-3- (m, 9H), 7,51-7,60 il)carbamoil)pirazin-2- (m, 3H), 8,53 (d, J il)fenetil)carbamato = 5,1 Hz, 1H), 8,74 (s, 1H), 9,87 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,28 (s, 6H), 2,78-2,92 (m, 3H), 3,01-3,05 (m, 2H), 7,27-7,33 142 (m, 2H), 7,35-7,44 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- (m, 2H), 7,55-7,56 N-(4-(2-isopropil-1H-imidazol-1- (m, 1H), 7,62-7,66 il)piridin-3-il)pirazina-2- (m, 2H), 8,55 (d, J carboxamida = 5,2 Hz, 1H), 8,78 (s, 1H), 9,93 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,02 (s, 6H), 2,77-2,92 (m, 3H), 3,43-3,48 (m, 2H), 5,10 (s, 143 benzil (4-(5-amino-6-((4-(2- 2H), 7,26-7,39 (m, isopropil-1H-imidazol-1- 9H), 7,53-7,68 (m, il)piridin-3- 3H), 8,55 (d, J = 5,1 il)carbamoil)pirazin-2- Hz, 1H), 8,76 (s, il)fenetil)carbamato 1H), 9,92 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,78-2,81 (m, 2H), 3,26-3,30 (m, 2H), 5,01 (s, 2H), 7,28-7,37 (m, 8H), 7,62-7,64 (m, 3H), 144 benzil (4-(5-amino-6-((5-(2- 7,74-7,76 (m, 1H), nitrofenil)piridin-3- 7,84-7,88 (m, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,11-8,14 (m, 3H), il)fenetil)carbamato 8,29 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 10,67 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,00- 3,08 (m, 2H), 3,28- 3,33 (m, 2H), 7,31- 7,35 (m, 2H), 7,38- 7,53 (m, 5H), 7,59 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 145 7,74 (t, J = 2,0 Hz, 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- 1H), 7,83 (d, J = 1,2 N-(4-(2-fenil-1H-imidazol-1- Hz, 1H), 7,92 (d, J il)piridin-3-il)pirazina-2- = 8,0 Hz, 2H), 8,59 carboxamida (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,82 (s, 1H), 9,34 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 2,87- 2,92 (m, 2H), 3,43- 3,73 (m, 2H), 5,10 (s, 2H), 7,14-7,39 146 (m, 12H), 7,47 (s, benzil (4-(5-amino-6-((4-(2- 1H), 7,53-5,57 (m, fenil-1H-imidazol-1-il)piridin-3- 2H), 7,67-7,70 (m, il)carbamoil)pirazin-2- 2H), 8,50 (d, J = 5,4 il)fenetil)carbamato Hz, 1H), 8,72 (s, 1H), 9,49 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,68-2,82 (m, 4H), 3,13-3,32 (m, 2H), 7,32 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,72-7,76 (m, 3H), 7,85-7,88 147 (m, 1H), 7,93-7,96 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- (m, 1H), 8,12-8,20 N-(5-(2-nitrofenil)piridin-3- (m, 3H), 8,33-8,34 il)pirazina-2-carboxamida (m, 2H), 8,92 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 10,67 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,62-2,73 (m, 3H), 2,81-2,97 (m, 2H), 3,20-3,23 (m, 1H), 4,98 (s, 2H), 6,66-6,71 (m, 1H), 6,75-6,81 (m, 1H), 148 7,06-7,13 (m, 2H), 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- 7,33 (d, J = 8,0 Hz, N-(5-(2-aminofenil)piridin-3- 2H), 7,65 (s, 2H), il)pirazina-2-carboxamida 8,14 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 8,29 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 9,05 (s, 1H), 10,58 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 3,01- 3,06 (m, 2H), 3,21- 3,23 (m, 2H), 7,18- 7,19 (m, 1H), 7,42- 149 7,53 (m, 5H), 8,12 3-amino-6-(4-(2-aminoetil)fenil)- (d, J = 8,1 Hz, 2H), N-(5-(3-aminofenil)piridin-3- 8,68 (s, 1H), 8,01- il)pirazina-2-carboxamida 8,83 (m, 2H), 9,20 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,92 (s, 4H), 3,69 (s, 4H), 3,88 (s, 3H), 7,12-7,21 (m, 3H), 7,34-7,64 150 (m, 3H), 7,87 (s, 3-amino-6-(2-metoxifenil)-N-(4- 1H), 8,30 (s, 1H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,81 (s, 1H), 9,42 carboxamida (s, 1H), 10,43 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,88 (s, 4H), 3,51 (s, 4H), 7,19 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 151 7,51-7,83 (m, 6H), 8,29 (d, J = 4,0 Hz, 3-amino-6-(2-clorofenil)-N-(4- 1H), 8,64 (s, 1H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 9,41 (s, 1H), 10,38 carboxamida (s, 1H) 1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,98 (s, 4H), 3,71 (s, 4H), 7,21 (s, 1H), 7,52-7,65 (m, 2H), 7,96 (s, 152 2H), 8,00-8,31 (m, 3-amino-6-(3-clorofenil)-N-(4- 2H), 8,44 (d, J = 8,8 morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- Hz, 1H), 9,05 (s, carboxamida 1H), 9,35 (s, 1H), 10,38 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 2,74-2,96 (m, 4H), 3,52-3,66 (m, 4H), 7,18 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,58-7,78 153 (m, 1H), 7,78-8,03 (m, 4H), 8,29 (d, J 3-amino-6-(2,4-diclorofenil)-N- = 5,4 Hz, 1H), 8,65 (4-morfolinopiridin-3- (s, 1H), 9,39 (s, il)pirazina-2-carboxamida 1H), 10,34 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 2,30 (s, 4H), 3,71 (s, 4H), 7,19 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,75-8,23 (m, 154 4H), 8,31 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 8,43 3-amino-6-(3,4-diclorofenil)-N- (s, 1H), 9,02 (s, (4-morfolinopiridin-3- 1H), 9,20 (s, 1H), il)pirazina-2-carboxamida 10,30 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,96-2,98 (m, 4H), 3,70-3,73 (m, 4H), 3,85 (s, 3H), 7,02-7,05 (m, 1H), 7,23 (d, J = 6,0 Hz, 155 1H), 7,44 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,67-7,79 3-amino-6-(3-metoxifenil)-N-(4- (m, 4H), 8,32 (d, J morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- = 5,2 Hz, 1H), 8,98 carboxamida (s, 1H), 9,32 (s, 1H), 10,41 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 3,00 (s, 3H), 3,75-3,86 (m, 8H), 7,09-7,11 (m, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,59- 156 7,70 (m, 4H), 8,11- 8,20 (m, 1H), 8,32 3-amino-6-(4-metoxifenil)-N-(4- (s, 1H), 8,94 (s, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 1H), 9,36 (s, 1H), carboxamida 10,48 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,91-2,94 (m, 4H), 3,62-3,64 (m, 4H), 3,85 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 6,71- 6,75 (m, 2H), 7,22 157 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,60 (s, 2H), 7,81 3-amino-6-(2,4-dimetoxifenil)-N- (d, J = 8,7 Hz, 1H), (4-morfolinopiridin-3- 8,30 (d, J = 5,4 Hz, il)pirazina-2-carboxamida 1H), 8,77 (s, 1H), 9,41 (s, 1H), 10,43 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,97-3,00 (m, 4H), 3,67-3,69 (m, 4H), 3,83 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 7,08 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 158 7,20 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,64-7,71 (m, 3-amino-6-(3,4-dimetoxifenil)-N- 4H), 8,31 (d, J = 5,6 (4-morfolinopiridin-3- Hz, 1H), 8,94 (s, il)pirazina-2-carboxamida 1H), 9,22 (s, 1H), 10,35 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,93-2,94 (m, 4H), 3,62-3,65 (m, 4H), 3,85 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 6,68- 6,75 (m, 2H), 7,22 159 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,63 (s, 2H), 7,80- 7,83 (m, 1H), 8,30 3-amino-6-(2,5-dimetoxifenil)-N- (d, J = 5,1 Hz, 1H), (4-morfolinopiridin-3- 8,77 (s, 1H), 9,38 il)pirazina-2-carboxamida (s, 1H), 10,35 (s, 1H) 1HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 3,06 (s, 4H), 3,70 (s, 4H), 7,21 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,63-7,70 (m, 2H), 160 7,95 (s, 2H), 8,17- 8,33 (m, 2H), 8,44 3-amino-6-(4-clorofenil)-N-(4- (d, J = 8,7 Hz, 1H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,99 (s, 1H), 9,33 carboxamida (s, 1H), 10,50 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d1) δ: 2,30-3,03 (m, 4H), 3,67-3,74 (m, 4H), 7,04 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,39-7,44 (m, 1H), 7,66 (d, J = 161 5,6 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 8,39 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 9,70 3-amino-6-(2,5-diclorofenil)-N- (s, 1H), 9,73 (s, (4-morfolinopiridin-3- 1H), 10,36 (s, 1H), il)pirazina-2-carboxamida (dois hidrogênios ativos não foram encontrados)
162 [M+H]+: 596,3 benzil (R)-3-(4-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenoxi)pirrolidine-1- carboxilato
163 [M+H]+: 610,3 benzil (R)-3-(4-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenoxi)piperidine-1- carboxilato
164 [M+H]+: 596,3 benzil (S)-3-(4-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenoxi)pirrolidine-1- carboxilato
165 [M+H]+: 610,3 benzil (S)-3-(4-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenoxi)piperidine-1- carboxilato
166 [M+H]+: 610,3 benzil 4-(4-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenoxi)piperidine-1- carboxilato
167 [M+H]+: 476,3 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- il)-6-(4-(piperidin-4- iloxi)fenil)pirazina-2- carboxamida
168 [M+H]+: 476,3
(R)-3-amino-N-(4- morfolinopiridin-3-il)-6-(4- (piperidin-3- iloxi)fenil)pirazina-2- carboxamida
169 [M+H]+: 476,3
(S)-3-amino-N-(4- morfolinopiridin-3-il)-6-(4- (piperidin-3- iloxi)fenil)pirazina-2- carboxamida
170 [M+H]+: 596,3
(S)-3-amino-N-(4- morfolinopiridin-3-il)-6-(4- (pirrolidin-3- iloxi)fenil)pirazina-2- carboxamida
171 [M+H]+: 596,3
(R)-3-amino-N-(4- morfolinopiridin-3-il)-6-(4- (pirrolidin-3- iloxi)fenil)pirazina-2- carboxamida 1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,85 (s, 4H), 3,52 (s, 4H), 3,70 (s, 6H), 6,81 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,16 172 (s, 1H), 7,42 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,63 3-amino-6-(2,6-dimetoxifenil)-N- (s, 2H), 8,24-8,27 (4-morfolinopiridin-3- (m, 2H), 9,41 (s, il)pirazina-2-carboxamida 1H), 10,33 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 2,73- 2,87 (m, 4H), 3,34- 3,43 (m, 4H), 7,17 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 173 7,54-7,59 (m, 1H), 7,67-7,77 (m, 2H), 3-amino-6-(2,6-diclorofenil)-N- 7,79 (s, 2H), 7,90 (4-morfolinopiridin-3- (s, 1H), 8,48 (s, il)pirazina-2-carboxamida 1H), 9,45 (s, 1H), 10,30 (s, 1H)
1HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 1,98-2,00 (m, 2H), 2,83-2,88 (m, 2H), 2,97 (s, 4H), 3,73 (s, 4H), 4,19- 4,22 (m, 2H), 6,85 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 174 7,22 (d, J = 5,1 Hz, 3-amino-6-(croman-6-il)-N-(4- 1H), 7,66 (s, 2H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 7,84-7,87 (m, 2H), carboxamida 8,31 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,87 (s, 1H), 9,34 (s, 1H), 10,36 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,96-2,98 (m, 4H), 3,67-3,69 (m, 4H), 4,13 (s, 2H), 7,22 (d, J = 5,2 Hz, 175 1H), 7,52-7,60 (m, 2H), 7,83 (s, 2H), 3-amino-6-(3-(aminometil)fenil)- 8,18-8,32 (m, 5H), N-(4-morfolinopiridin-3- 8,94 (s, 1H), 9,26 il)pirazina-2-carboxamida (s, 1H), 10,39 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,96 (s, 4H), 3,69 (s, 4H), 4,33 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 5,05 (s, 2H), 7,21- 7,22 (m, 1H), 7,30- 7,35 (m, 5H), 7,36- 7,50 (m, 2H), 7,53- 176 7,57 (s, 2H), 7,78 benzil (3-(5-amino-6-((4- (s, 1H), 7,88-7,91 morfolinopiridin-3- (m, 1H), 8,03 (d, J il)carbamoil)pirazin-2- = 8,0 Hz, 1H), 8,32 il)benzil)carbamato (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,91 (s, 1H), 9,30 (s, 1H), 10,38 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,83-2,86 (m, 2H), 2,97 (s, 4H), 3,30-3,35 (m, 2H), 3,69 (s, 4H), 4,99 (s, 2H), 7,22-7,23 (m, 1H), 7,28-7,35 177 (m, 6H), 7,39-7,46 benzil (3-(5-amino-6-((4- (m, 2H), 7,77 (s, morfolinopiridin-3- 2H), 7,94 (s, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,00 (d, J = 8,0 Hz, il)fenetil)carbamato 1H), 8,32 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 8,95 (s, 1H), 9,31 (s, 1H), 10,37 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 1,76- 1,78 (m, 2H), 2,64- 2,77 (m, 2H), 2,93- 3,05 (m, 6H), 3,67 (s, 4H), 4,95 (s, 2H), 7,13-7,19 (m, 178 1H), 7,22-7,40 (m, benzil (3-(3-(5-amino-6-((4- 8H), 7,60-7,90 (m, morfolinopiridin-3- 2H), 7,91-7,95 (m, il)carbamoil)pirazin-2- 2H), 8,28 (d, J = il)fenil)propil)carbamato 5,7 Hz, 1H), 8,92 (s, 1H), 9,29 (s, 1H), 10,33 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, Clorofórmio-d1) δ: 1,97-2,22 (m, 2H), 2,97-3,04 (m, 6H), 3,16-3,21 (m, 2H), 3,69 (s, 4H), 7,00 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,20-7,46 (m, 2H), 179 7,55-7,70 (m, 1H), 8,37 (d, J = 6,0 Hz, 3-amino-6-(2,3-di-hidro-1H-inden- 1H), 8,55 (s, 1H), 4-il)-N-(4-morfolinopiridin-3- 9,61 (s, 1H), 10,48 il)pirazina-2-carboxamida (s, 1H), (dois hidrogênios ativos não foram encontrados) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,01- 3,08 (m, 4H), 3,82- 3,83 (m, 4H), 7,28 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 180 7,44-7,54 (m, 3H), 8,08 (d, J = 7,2 Hz, 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 2H), 8,29 (d, J = 5,2 il)-6-fenilpirazina-2-carboxamida Hz, 1H), 8,81 (s, 1H), 9,51 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,83 (s, 6H), 3,11-3,69 (m, 7H), 7,22 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,33-7,34 (m, 1H), 7,46-7,50 (m, 181 1H), 7,79 (s, 2H), 7,99-8,05 (m, 2H), 3-amino-6-(3-(2-aminoetil)fenil)- 8,59-8,63 (s, 2H), N-(4-morfolinopiridin-3- 8,97 (s, 1H), 9,48 il)pirazina-2-carboxamida (s, 1H), 10,55 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 2,07- 2,11 (m, 2H), 2,73- 2,87 (m, 2H), 2,93- 3,10 (m, 2H), 3,54- 3,57 (m, 4H), 3,69- 182 3,85 (m, 4H), 7,34 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 3-amino-6-(3-(3- 7,41-7,58 (m, 2H), aminopropil)fenil)-N-(4- 7,90-7,96 (m, 2H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,34 (d, J = 6,9 Hz, carboxamida 1H), 8,82 (s, 1H), 9,13 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d1) δ: 1,47 (s, 9H), 3,03- 3,04 (m, 4H), 3,59- 3,60 (m, 2H), 3,94- 3,96 (m, 4H), 4,12- 4,14 (m, 2H), 5,54 (s, 1H), 6,90 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 183 7,45 (d, J = 6,0 Hz, terc-butil (2-(3-(5-amino-6-((4- 1H), 7,53 (d, J = morfolinopiridin-3- 8,0 Hz, 1H), 7,60 il)carbamoil)pirazin-2- (d, J = 8,0 Hz, 1H), il)fenoxi)etil)carbamato 8,40 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,74 (s, 1H), 9,73 (s, 1H), 10,47 (s, 1H) (dois hidrogênios ativos não foram encontrados)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,91-3,10 (m, 4H), 3,21-3,41 (m, 2H), 3,81-3,92 (m, 4H), 4,33-4,41 (m, 2H), 184 7,24 (s, 1H), 7,41- 3-amino-6-(3-(2- 7,55 (m, 1H), 7,65 aminoetoxi)fenil)-N-(4- (s, 1H), 7,73 (d, J morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- = 5,2 Hz, 2H), 8,37 carboxamida (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 9,78 (s, 1H) 1HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 2,05-2,10 (m, 2H), 2,90-2,98 (m, 8H), 3,74-3,76 (m, 4H), 7,25 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,36 (d, J 185 = 7,8 Hz, 1H), 7,72 (s, 2H), 7,90-7,93 3-amino-6-(2,3-di-hidro-1H-inden- (m, 1H), 8,03 (s, 5-il)-N-(4-morfolinopiridin-3- 1H), 8,31 (d, J = 5,4 il)pirazina-2-carboxamida Hz, 1H), 8,94 (s, 1H), 9,39 (s, 1H), 10,42 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,98- 3,05 (m, 4H), 3,74- 3,81 (m, 4H), 4,16 186 (s, 2H), 7,18-7,37 (m, 6H), 8,17-8,18 3-amino-6-benzil-N-(4- (m, 1H), 8,18-8,28 morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- (m, 1H), 9,44 (s, 1H) carboxamida
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,02- 3,15 (m, 2H), 3,28- 3,31 (m, 2H), 7,51 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,92 (d, J = 5,6 Hz, 187 1H), 8,08-8,15 (m, N-(4-(1H-1,2,4-triazol-1- 2H), 8,36 (s, 1H), il)piridin-3-il)-3-amino-6-(4-(2- 8,53 (d, J = 5,6 Hz, aminoetil)fenil)pirazina-2- 1H), 8,81 (s, 1H), carboxamida 9,33 (s, 1H), 10,00 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d1) δ: 1,27 (s, 2H), 2,95 (s, 2H), 3,48-3,56 (m, 2H), 4,86-4,89 (s, 1H), 5,14 (s, 2H), 7,15-7,43 (m, 188 8H), 7,99 (d, J = 7,2 benzil (4-(6-((4-(1H-1,2,4- Hz, 2H), 8,27 (s, triazol-1-il)piridin-3- 1H), 8,57 (s, 1H), il)carbamoil)-5-aminopirazin-2- 8,66 (s, 1H), 8,71- il)fenetil)carbamato 8,76 (m, 1H), 10,05 (s, 1H), 12,08 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d1) δ: 1,32 (s, 3H), 1,44 (s, 9H), 3,11-3,13 (m, 4H), 3,89-3,90 (m, 4H), 4,03 (s, 2H), 4,10 (s, 1H), 5,01 (s, 1H), 7,50- 7,54 (m, 1H), 7,15 189 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,44 (t, J = 8,0 Hz, terc-butil (1-(3-(5-amino-6-((4- 1H), 7,50-7,54 (m, morfolinopiridin-3- 2H), 8,40 (s, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,73 (s, 1H), 9,68 il)fenoxi)propan-2-il)carbamato (s, 1H), 10,37 (s, 1H) (dois hidrogênios ativos não foram encontrados)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,46 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 3,20-3,23 (m, 1H), 3,31-3,35 (m, 2H), 3,51-3,59 (m, 4H), 3,79-3,86 (m, 4H), 190 7,12 (d, J = 6,8Hz, 3-amino-6-(3-((1-aminopropan-2- 1H), 7,48-7,54 (m, il)oxi)fenil)-N-(4- 2H), 7,67 (s, 1H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 7,74 (d, J = 8,0 Hz, carboxamida 1H), 8,36 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,83 (s, 1H), 9,14 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d1) δ: 1,34 (s, 3H), 1,45 (s, 9H), 3,04-3,06 (m, 4H), 3,30-3,31 (m, 1H), 3,52-3,53 (m, 1H), 3,94-3,96 (m, 4H), 4,65 (s, 1H), 5,39 (s, 1H), 7,00 (d, J = 9,2 Hz, 191 1H), 7,10 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,44 terc-butil (2-(3-(5-amino-6-((4- (t, J = 8,0 Hz, 1H), morfolinopiridin-3- 7,52 (d, J = 7,6 Hz, il)carbamoil)pirazin-2- 1H), 7,62 (s, 1H), il)fenoxi)propil)carbamato 8,40 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 9,73 (s, 1H), 10,46 (s, 1H) (dois hidrogênios ativos não foram encontrados)
1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,33 (s, 9H), 2,97-3,04 (m, 5H), 3,32 (s, 1H), 3,73-3,79 (m, 7H), 4,11-4,46 (m, 1H), 7,22-7,33 (m, 192 3H), 7,49-7,61 (m, metil (R)-3-(4-(5-amino-6-((4- 1H), 7,92 (d, J = 7,2 morfolinopiridin-3- Hz, 2H), 8,25-8,26 il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- (m, 1H), 8,66 (s, 2-((terc- 1H), 9,44 (s, 1H) (um butoxicarbonil)amino)propanoato hidrogênio ativo não foi trocado com Metanol-d4)
1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 1,83-1,84 (m, 2H), 2,75-2,78 (m, 2H), 2,95-2,97 (m, 4H), 3,24-3,32 (m, 2H), 3,75-3,77 (m, 4H), 6,06 (s, 1H), 6,54 (d, J = 7,6 Hz, 193 1H), 7,22 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,49 (s, 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 2H), 7,62 (s, 1H), il)-6-(1,2,3,4-tetra- 7,68 (d, J = 8,4 Hz, hidroquinolin-6-il)pirazina-2- 1H), 8,30 (d, J = 5,2 carboxamida Hz, 1H), 8,79 (s, 1H), 9,37 (s, 1H), 10,38 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,47 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 3,32-3,33 (m, 4H), 3,52-3,88 (m, 5H), 4,11-4,16 (m, 1H), 4,31-4,35 (m, 1H), 194 7,12 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,48-7,52 (m, 3-amino-6-(3-(2- 2H), 7,65 (s, 1H), aminopropoxi)fenil)-N-(4- 7,75 (d, J = 8,0 Hz, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 1H), 8,35 (d, J = carboxamida 6,8 Hz, 1H), 8,86 (s, 1H), 9,14 (s, 1H)
1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 3,11-3,20 (m, 2H), 3,52 (s, 4H), 3,68-3,71 (m, 7H), 4,40 (s, 1H), 7,35- 7,42 (m, 3H), 7,71 195 (s, 2H), 8,21 (d, J metil (R)-2-amino-3-(4-(5-amino- = 8,0 Hz, 2H), 8,39 6-((4-morfolinopiridin-3- (d, J = 6,8 Hz, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,50 (s, 2H), 8,81 il)fenil)propanoato (s, 1H), 9,00 (s, 1H), 10,48 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,33- 1,37 (m, 3H), 1,40 (s, 6H), 3,05 (s, 5H), 3,20-3,21 (m, 1H), 3,85 (s, 4H), 196 4,31 (s, 1H), 7,28 (R)-3-(4-(5-amino-6-((4- (d, J = 5,2 Hz, 1H), morfolinopiridin-3- 7,28-7,42 (m, 2H), il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- 7,92-7,98 (m, 2H), 2-((terc- 8,29 (d, J = 5,2 Hz, butoxicarbonil)amino)propanoic 1H), 8,77 (s, 1H), acid 9,47 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,26- 3,31 (m, 1H), 3,35- 3,40 (m, 1H), 3,55- 3,58 (m, 4H), 3,80- 3,87 (m, 4H), 4,26- 197 4,35 (m, 1H), 7,47- (R)-2-amino-3-(4-(5-amino-6-((4- 7,52 (m, 3H), 8,09 morfolinopiridin-3- (d, J = 8,0 Hz, 2H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,36 (d, J = 6,8 Hz, il)fenil)propanoic acid 1H), 8,84 (s, 1H), 9,06 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6+D2O) δ: 2,50-2,52 (m, 2H), 2,97-3,00 (m, 2H), 3,60 (s, 4H), 3,69-3,71 (m, 4H), 6,98 (d, J = 8,0 198 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,99- 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 8,01 (m, 1H), 8,04 il)-6-(2-oxo-1,2,3,4-tetra- (s, 1H), 8,38 (d, J hidroquinolin-6-il)pirazina-2- = 6,9 Hz, 1H), 8,75 carboxamida (s, 1H), 8,92 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,34 (s, 9H), 2,76-2,78 (m, 1H), 2,96-3,07 (m, 5H), 3,62 (s, 2H), 3,82-3,96 (m, 199 5H), 7,28 (d, J = 5,6 terc-butil (R)-(1-(4-(5-amino-6- Hz, 1H), 7,43 (d, J ((4-morfolinopiridin-3- = 8,0 Hz, 2H), 8,01 il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- (d, J = 8,0 Hz, 2H), 3-hidroxipropan-2-il)carbamato 8,29 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,78 (s, 1H), 9,49 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,41 (m, 9H), 2,99-3,04 (m, 1H), 3,17-3,22 (m, 1H), 3,52-3,54 (m, 4H), 3,73 (s, 3H), 3,81-3,84 (m, 200 4H), 4,43-4,46 (m, metil (S)-3-(4-(5-amino-6-((4- 1H), 7,39 (d, J = 8,0 morfolinopiridin-3- Hz, 2H), 7,50 (d, J il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- = 6,8 Hz, 1H), 8,02 2-((terc- (d, J = 8,0 Hz, 2H), butoxicarbonil)amino)propanoato 7,35 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,83 (s, 1H), 9,11 (s, 1H)
1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,99-3,02 (m, 2H), 3,43 (s, 6H), 3,77 (s, 4H), 7,37 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,82 (s, 2H), 7,94 201 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 8,13 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- (s, 1H), 8,19 (d, J il)-6-(1-oxo-1,2,3,4-tetra- = 7,6 Hz, 1H), 8,38 hidroisoquinolin-6-il)pirazina-2- (s, 1H), 8,90 (s, carboxamida 1H), 9,04 (s, 1H), 10,46 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,67- 2,75 (m, 1H), 2,83- 2,93 (m, 1H), 3,03 (s, 4H), 3,16-3,18 (m, 1H), 3,43-3,48 (m, 1H), 3,58-3,62 202 (m, 1H), 3,81 (s, 4H), 7,24 (d, J = 2,0 (R)-3-amino-6-(4-(2-amino-3- Hz, 1H), 7,43 (d, J hidroxipropil)fenil)-N-(4- = 8,0 Hz, 2H), 8,03 morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- (d, J = 8,0 Hz, 2H), carboxamida 8,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,78 (s, 1H), 9,50 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6+D2O) δ: 3,10-3,21 (m, 2H), 3,50-3,51 (m, 4H), 3,68-3,72 (m, 7H), 4,30-4,33 203 (m, 1H), 7,33-7,39 metil (S)-2-amino-3-(4-(5-amino- (m, 3H), 8,16 (d, J 6-((4- = 8,4 Hz, 2H), 8,33 morfolinopiridin-3- (d, J = 6,8 Hz, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,75 (s, 1H), 8,95 il)fenil)propanoato (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d1) δ: 1,35 (s, 3H), 1,49 (s, 9H), 3,03-3,05 (m, 4H), 3,86-3,88 (m, 4H), 4,03 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 4,12 (s, 1H), 4,82 (s, 204 1H), 7,05-7,08 (m, 3H), 7,93-7,95 (m, terc-butil (1-(4-(5-amino-6-((4- 2H), 8,40 (d, J = morfolinopiridin-3- 4,8 Hz, 1H), 8,69 il)carbamoil)pirazin-2- (s, 1H), 9,65 (s, il)fenoxi)propan-2-il)carbamato 1H), 10,47 (s, 1H) (dois hidrogênios ativos não foram encontrados)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,47 (s, 3H), 3,31-3,33 (m, 4H), 3,66-3,83 (m, 5H), 4,08-4,12 (m, 1H), 4,28-4,32 (m, 1H), 7,18 (d, J 205 = 8,8 Hz, 2H), 7,51 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 3-amino-6-(4-(2- 8,05 (d, J = 8,8 Hz, aminopropoxi)fenil)-N-(4- 2H), 8,35 (d, J = morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 6,8 Hz, 1H), 8,80 carboxamida (s, 1H), 9,11 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d1) δ: 1,36 (s, 3H), 1,47 (s, 9H), 3,03-3,06 (m, 4H), 3,33-3,49 (m, 2H), 3,85-3,88 (m, 4H), 4,61 (s, 1H), 4,99 (s, 1H), 206 7,05-7,10 (m, 3H), terc-butil (2-(4-(5-amino-6-((4- 7,93 (d, J = 8,4 Hz, morfolinopiridin-3- 2H), 8,40 (d, J = il)carbamoil)pirazin-2- 5,2 Hz, 1H), 8,70 il)fenoxi)propil)carbamato (s, 1H), 9,65 (s, 1H), 10,46 (s, 1H) (dois hidrogênios ativos não foram encontrados) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,45 (s, 9H), 3,01-3,09 (m, 5H), 3,23-3,24 (m, 1H), 3,83-3,85 (m, 4H), 4,40-4,41 207 (S)-3-(4-(5-amino-6-((4- (m, 1H), 7,29 (d, J morfolinopiridin-3- = 5,6 Hz, 1H), 7,41 il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2-((terc- 7,98 (d, J = 8,0 Hz, butoxicarbonil)amino)propanoic 2H), 8,29 (d, J = 5,6 acid Hz, 1H), 8,77 (s, 1H), 9,45 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,32- 3,38 (m, 1H), 3,40- 3,49 (m, 1H), 3,69- 3,75 (m, 4H), 3,81- 3,90 (m, 4H), 4,30- 208 4,33 (m, 1H), 7,47- (S)-2-amino-3-(4-(5-amino-6-((4- 7,52 (m, 3H), 8,10 morfolinopiridin-3- (d, J = 8,0 Hz, 2H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,36 (d, J = 6,4 Hz, il)fenil)propanoic acid 1H), 8,85 (s, 1H), 9,06 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,40 (s, 9H), 2,79-2,94 (m, 1H), 2,96-3,01 (m, 5H), 3,53-3,54 (m, 2H), 3,80-3,82 209 (m, 5H), 7,24 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,39 terc-butil (S)-(1-(4-(5-amino-6- (d, J = 8,0 Hz, 2H), ((4-morfolinopiridin-3- 7,95-7,97 (d, J = 8,0 il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- Hz, 2H), 8,26 (d, J 3-hidroxipropan-2-il)carbamato = 5,2 Hz, 1H), 8,71 (s, 1H), 9,46 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,01- 3,05 (m, 2H), 3,52- 3,60 (m, 6H), 3,72- 3,75 (m, 1H), 3,80- 210 3,82 (m, 4H), 7,46- 7,53 (m, 3H), 8,08 (S)-3-amino-6-(4-(2-amino-3- (d, J = 8,0 Hz, 2H), hidroxipropil)fenil)-N-(4- 8,36 (d, J = 6,8 Hz, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 1H), 8,85 (s, 1H), carboxamida 9,10 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,47 (s, 3H), 3,20-3,33 (m, 2H), 3,53-3,55 (m, 4H), 3,81-3,83 (m, 4H), 4,82-4,87 (m, 1H), 7,18 (d, J 211 = 6,8 Hz, 2H), 7,53 3-amino-6-(4-((1-aminopropan-2- (d, J = 6,8 Hz, 1H), il)oxi)fenil)-N-(4- 8,05 (d, J = 8,8 Hz, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 2H), 8,36 (d, J = carboxamida 6,8 Hz, 1H), 8,80 (s, 1H), 9,12 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d1) δ: 1,48 (s, 9H), 2,86- 2,94 (m, 2H), 3,00- 3,03 (m, 4H), 3,34- 3,42 (m, 2H), 3,84- 3,86 (m, 4H), 4,57 (s, 1H), 4,92 (s, 1H), 7,06 (d, J = 212 5,2 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 8,0 Hz, 1H), terc-butil (5-(5-amino-6-((4- 7,80 (d, J = 8,0 Hz, morfolinopiridin-3- 1H), 7,85 (s, 1H), il)carbamoil)pirazin-2-il)-2,3- 8,41 (s, 1H), 8,68 di-hidro-1H-inden-2-il)carbamato (s, 1H), 9,67 (s, 1H), 10,46 (s, 1H) (dois hidrogênios ativos não foram encontrados)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,13-3,19 (m, 2H), 3,47-3,64 (m, 6H), 3,82-3,84 (m, 4H), 4,16-4,22 (m, 1H), 213 7,46 (d, J = 7,6 Hz, 3-amino-6-(2-amino-2,3-di-hidro- 2H), 7,97-8,04 (m, 1H-inden-5-il)-N-(4- 2H), 8,37 (d, J = morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 6,8 Hz, 1H), 8,83 carboxamida (s, 1H), 9,14 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,34 (s, 6H), 1,75-1,78 (m, 2H), 3,03-3,05 (m, 4H), 3,35-3,37 (m, 2H), 3,83-3,85 214 (m, 4H), 6,66 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,24 3-amino-6-(4,4-dimetil-1,2,3,4- (d, J = 5,2 Hz, 1H), tetra-hidroquinolin-6-il)-N-(4- 7,71-7,77 (m, 2H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,27 (d, J = 5,6 Hz, carboxamida 1H), 8,65 (s, 1H), 9,43 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,44 (s, 9H), 1,75-1,81 (m, 1H), 2,43-2,49 (m, 2H), 2,83-2,86 (m, 1H), 2,98 (s, 4H), 3,75 (s, 4H), 4,96- 215 5,04 (m, 1H), 7,25- 7,40 (m, 3H), 7,68- terc-butil (5-(5-amino-6-((4- 7,75 (m, 2H), 7,99- morfolinopiridin-3- 8,11 (m, 2H), 8,32 il)carbamoil)pirazin-2-il)-2,3- (s, 1H), 8,95 (s, di-hidro-1H-inden-1-il)carbamato 1H), 9,38 (s, 1H), 10,39 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,36 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,71-1,76 (m, 1H), 1,94-2,07 (m, 1H), 3,03-3,05 (m, 5H), 3,33-3,44 (m, 2H), 216 3,82-3,85 (m, 4H), 3-amino-6-(4-metil-1,2,3,4-tetra- 6,64 (d, J = 8,4 Hz, hidroquinolin-6-il)-N-(4- 1H), 7,25 (d, J = 4,2 morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- Hz, 1H), 7,62-7,71 carboxamida (m, 2H), 8,27 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,65 (s, 1H), 9,46 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,01- 3,03 (m, 4H), 3,43- 3,49 (m, 2H), 3,88- 3,98 (m, 4H), 4,23- 4,26 (m, 2H), 6,72 217 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 5,6 Hz, 3-amino-6-(3,4-di-hidro-2H- 1H), 7,35-7,47 (m, benzo[b][1,4]oxazin-7-il)-N-(4- 1H), 7,55 (s, 1H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,27 (d, J = 5,6 Hz, carboxamida 1H), 8,61 (s, 1H), 9,51 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d1) δ: 1,47 (s, 9H), 3,00- 3,03 (m, 4H), 3,82- 3,85 (m, 4H), 4,06- 4,09 (m, 2H), 4,34- 4,38 (m, 2H), 4,98- 4,99 (m, 1H), 6,89 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 218 7,06 (d, J = 5,2 Hz, terc-butil 3-(4-(5-amino-6-((4- 1H), 7,93 (d, J = morfolinopiridin-3- 8,8 Hz, 2H), 8,40 il)carbamoil)pirazin-2- (d, J = 5,2 Hz, 1H), il)fenoxi)azetidine-1-carboxilato 8,68 (s, 1H), 9,64 (s, 1H), 10,46 (s, 1H) (dois hidrogênios ativos não foram encontrados) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,71-3,81 (m, 4H), 3,97-3,99 (m, 4H), 4,18-4,23 (m, 2H), 4,59-4,64 (m, 2H), 5,25-5,29 (m, 1H), 219 7,04 (d, J = 8,8 Hz, 3-amino-6-(4-(azetidin-3- 2H), 7,51 (d, J = iloxi)fenil)-N-(4- 8,0 Hz, 1H), 8,06 morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- (d, J = 8,8 Hz, 2H), carboxamida 8,36 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,80 (s, 1H), 9,09 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,14- 2,33 (m, 1H), 2,67- 2,75 (m, 1H), 3,13- 3,18 (m, 1H), 3,29- 3,31 (m, 2H), 3,58- 3,63 (m, 4H), 3,81- 220 3,85 (m, 4H), 7,53- 7,58 (m, 1H), 7,62- 3-amino-6-(1-amino-2,3-di-hidro- 7,70 (m, 1H), 8,02- 1H-inden-5-il)-N-(4- 8,10 (m, 1H), 8,15 morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- (s, 1H), 8,37 (d, J carboxamida = 6,8 Hz, 1H), 8,87 (s, 1H), 9,13 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 1,38 (s, 9H), 2,00-2,07 (m, 2H), 2,79-2,80 (m, 2H), 2,95 (s, 4H), 3,71 (s, 5H), 4,45-4,48 (m, 1H), 6,96-6,98 221 (m, 2H), 7,21-7,24 terc-butil ((1r,3r)-3-(4-(5- (m, 2H), 7,66 (s, amino-6-((4-morfolinopiridin-3- 2H), 8,06 (d, J = 8,8 il)carbamoil)pirazin-2- Hz, 2H), 8,31 (d, J il)fenoxi)ciclobutil)carbamato = 5,2 Hz, 1H), 8,90 (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,46 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6+D2O) δ: 2,18-2,20 (m, 2H), 2,87-2,89 (m, 2H), 3,42-3,46 (m, 1H), 3,53 (s, 4H), 3,77 (s, 4H), 4,59-4,62 (m, 1H), 222 6,96 (d, J = 8,8 Hz, 3-amino-6-(4-((1r,3r)-3- 2H), 7,40 (d, J = 7,2 aminociclobutoxi)fenil)-N-(4- Hz, 1H), 8,09 (d, J morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- = 8,4 Hz, 2H), 8,32 carboxamida (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,87 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 1,39 (s, 9H), 2,33-2,40 (m, 4H), 2,96 (s, 4H), 3,71 (s, 4H), 4,18 (s, 1H), 4,88 (s, 1H), 6,94 (d, J = 8,8 Hz, 223 2H), 7,24 (d, J = 4,8 terc-butil ((1s,3s)-3-(4-(5- Hz, 2H), 7,67 (s, amino-6-((4-morfolinopiridin-3- 2H), 8,07 (d, J = 8,8 il)carbamoil)pirazin-2- Hz, 2H), 8,31-8,32 il)fenoxi)ciclobutil)carbamato (m, 1H), 8,90 (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,47 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,70- 2,75 (m, 4H), 3,52- 3,54 (m, 4H), 3,84- 3,89 (m, 4H), 4,02- 4,06 (m, 1H), 5,06- 5,11 (m, 1H), 6,86- 224 6,88 (m, 1H), 7,54- 3-amino-6-(4-((1s,3s)-3- 7,56 (m, 1H), 7,59- aminociclobutoxi)fenil)-N-(4- 7,60 (m, 2H), 7,65- morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 7,67 (s, 1H), 8,38 carboxamida (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,82 (s, 1H), 9,23 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 1,38-1,43 (m, 12H), 2,86-2,98 (m, 6H), 3,15 (s, 1H), 3,68-3,70 (m, 4H), 4,28 (s, 1H), 5,12 (s, 1H), 7,10 (d, J 225 = 5,1 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 8,1 Hz, 1H), terc-butil 6-(5-amino-6-((4- 7,74 (s, 2H), 7,90- morfolinopiridin-3- 7,93 (m, 2H), 8,29 il)carbamoil)pirazin-2-il)-1- (d, J = 5,4 Hz, 1H), metil-3,4-di-hidroisoquinoline- 8,90 (s, 1H), 9,29 2(1H)-carboxilato (s, 1H), 10,33 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,20- 1,28 (m, 3H), 2,77- 2,79 (m, 1H), 3,00- 3,34 (m, 8H), 3,65- 3,81 (m, 7H), 4,11- 226 4,14 (m, 2H), 7,26- 7,50 (m, 8H), 8,02 etil (3S,4R)-4-(4-(5-amino-6-((4- (d, J = 8,0 Hz, 2H), morfolinopiridin-3- 8,27 (d, J = 5,6 Hz, il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- 1H), 8,78 (s, 1H), 1-benzilpirrolidine-3-carboxilato 9,47 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,13- 1,24 (m, 3H), 2,95 (s, 4H), 3,00-3,18 (m, 2H), 3,31-3,40 (m, 4H), 3,79 (s, 227 4H), 4,11-4,18 (m, etil (3S,4R)-4-(4-(5-amino-6-((4- 2H), 7,25-7,48 (m, morfolinopiridin-3- 3H), 8,01-8,03 (m, il)carbamoil)pirazin-2- 2H), 8,29 (s, 1H), il)fenil)pirrolidine-3- 8,75 (s, 1H), 9,43 carboxilato (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,42 (s, 9H), 1,84 (s, 2H), 3,04-3,10 (m, 4H), 3,14-3,17 (m, 2H), 3,77-3,83 (m, 6H), 4,51 (s, 2H), 228 7,26 (d, J = 5,4 Hz, terc-butil 7-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3- 1H), 7,37-7,43 (m, il)carbamoil)pirazin-2-il)- 1H), 7,78-7,87 (m, 1,3,4,5-tetra-hidro-2H- 2H), 8,28 (d, J = benzo[c]azepine-2-carboxilato 5,4 Hz, 1H), 8,78 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 9,49 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 2,10 (s, 2H), 3,15-3,33 (m, 2H), 3,68-3,74 (m, 6H), 3,81-3,91 (m, 4H), 4,48 (s, 229 2H), 7,51-7,64 (m, 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 2H), 7,99-8,11 (m, il)-6-(2,3,4,5-tetra-hidro-1H- 1H), 8,15 (s, 1H), benzo[c]azepin-7-il)pirazina-2- 8,37 (d, J = 7,2 Hz, carboxamida 1H), 8,90 (s, 1H), 9,14 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Acetonitrile-d3) δ: 1,49 (s, 9H), 2,14 (s, 2H), 2,85-3,00 (m, 8H), 3,34 (s, 1H), 3,71-3,75 (m, 4H), 4,09 (s, 1H), 5,07 (s, 1H), 7,12 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 230 7,35 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H), terc-butil 6-(5-amino-6-((4- 7,87 (d, J = 8,1 Hz, morfolinopiridin-3- 1H), 8,31 (d, J = 5,1 il)carbamoil)pirazin-2-il)-1- Hz, 1H), 8,74 (s, (aminometil)-3,4-di- 1H), 9,41 (s, 1H), hidroisoquinoline-2(1H)- 10,34 (s, 1H) (dois carboxilato hidrogênios ativos não foram encontrados)
1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 1,21 (s, 1H), 2,88 (s, 6H), 3,60- 3,98 (m, 8H), 7,21 (s, 1H), 7,46 (s, 2H), 7,73 (s, 2H), 231 8,07 (s, 2H), 8,31 (3S,4R)-4-(4-(5-amino-6-((4- (s, 1H), 8,93 (s, morfolinopiridin-3- 1H), 9,28 (s, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 10,38 (s, 1H) (um il)fenil)pirrolidine-3-carboxilic hidrogênio ativo não acid foi encontrado)
1H NMR (300 MHz, Acetonitrila-d3+D2O) δ: 3,18-3,27 (m, 2H), 3,44-3,49 (m, 5H), 3,63-3,77 (m, 5H), 4,11-4,34 (m, 232 2H), 4,92-4,94 (m, 1H), 7,30 (d, J = 6,6 3-amino-6-(1-((1,3- Hz, 1H), 7,59 (d, J dioxoisoindolin-2-il)metil)- = 8,7 Hz, 1H), 7,83- 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolin-6- 7,96 (m, 6H), 8,18- il)-N-(4-morfolinopiridin-3- 8,21 (m, 1H), 8,74- il)pirazina-2-carboxamida 8,81 (m, 2H)
1H NMR (400 MHz, Clorofórmio-d1) δ: 1,57 (s, 9H), 1,85- 2,10 (m, 3H), 2,87- 3,04 (m, 5H), 3,33- 3,39 (m, 1H), 3,59- 3,66 (m, 1H), 3,85- 3,86 (m, 4H), 4,18 (s, 1H), 5,10 (s, 1H), 6,96 (d, J = 233 8,8 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 5,2 Hz, 1H), terc-butil ((6-(5-amino-6-((4- 7,64 (s, 1H), 7,75- morfolinopiridin-3- 7,78 (m, 1H), 8,39 il)carbamoil)pirazin-2-il)croman- (d, J = 4,4 Hz, 1H), 2-il)metil)carbamato 8,66 (s, 1H), 9,64 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 10,40 (s, 1H) (dois hidrogênios ativos não foram encontrados)
1HNMR (300 MHz, DMSO- d6+D2O) δ: 1,61 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 3,09- 3,14 (m, 2H), 3,30- 3,40 (m, 1H), 3,51- 3,53 (m, 2H), 3,60- 234 3,63 (m, 7H), 4,62- 4,64 (m, 1H), 7,41- 3-amino-6-(1-metil-1,2,3,4-tetra- 7,44 (m, 2H), 8,08- hidroisoquinolin-6-il)-N-(4- 8,12 (m, 2H), 8,35- morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,38 (m, 1H), carboxamida 8,71(s, 1H), 8,98 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Acetonitrile-d3+D2O) δ: 3,18-3,19 (m, 2H), 3,48-3,73 (m, 12H), 4,97-5,01 (m, 235 1H), 7,32 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,89- 3-amino-6-(1-(aminometil)- 7,98 (m, 2H), 8,19- 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolin-6- 8,22 (m, 1H), 8,71- il)-N-(4-morfolinopiridin-3- 8,78 (m, 2H) il)pirazina-2-carboxamida
236 [M+H]+: 572,3 benzil (4-(5-amino-6-((6-fluoro- 4-morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2- il)fenetil)carbamato 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,05- 2,08 (m, 1H), 2,09- 2,10 (m, 1H), 2,87- 3,00 (m, 8H), 3,80- 3,82 (m, 4H), 4,05- 237 4,10 (m, 1H), 6,91 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 3-amino-6-(2-(aminometil)croman- 7,23 (d, J = 5,2 Hz, 6-il)-N-(4-morfolinopiridin-3- 1H), 7,75-7,78 (m, il)pirazina-2-carboxamida 2H), 8,27 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 9,47 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,38 (s, 9H), 2,74-2,78 (m, 1H), 2,93 (s, 5H), 3,01 (s, 1H), 3,36-3,42 (m, 1H), 238 3,78 (s, 4H), 3,94 terc-butil (6-(5-amino-6-((4- (s, 1H), 6,57-6,59 morfolinopiridin-3- (m, 1H), 7,18-7,19 il)carbamoil)pirazin-2-il)- (m, 1H), 7,40-7,61 1,2,3,4-tetra-hidroquinolin-3- (m, 2H), 8,23 (s, il)carbamato 1H), 8,43-8,49 (m, 1H), 9,42 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 1,23 (s, 2H), 2,67-2,73 (m, 1H), 2,97-3,06 (m, 7H), 3,71 (s, 7H), 6,22 (s, 1H), 6,62 (d, J 239 = 8,4 Hz, 1H), 7,23- 7,24 (m, 1H), 7,54 3-amino-6-(3-amino-1,2,3,4-tetra- (s, 2H), 7,57-7,78 hidroquinolin-6-il)-N-(4- (m, 2H), 8,31-8,33 morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- (m, 2H), 8,83 (s, carboxamida 1H), 9,35 (s, 1H), 10,38 (s, 1H)
240 [M+H]+: 638,3 metil 5-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2-il)-2-(3- (1,3-dioxoisoindolin-2- il)propoxi)benzoato
[M+Na]+: 630,3 241 [M-Boc]+: 506,2 metil 5-(5-amino-6-((4- morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2-il)-2-(3- ((terc- butoxicarbonil)amino)propoxi)benz oato
[M+Na]+: 730,3 242 metil 5-(5-((terc- [M-Boc]+: 606,2 butoxicarbonil)amino)-6-((4- morfolinopiridin-3- il)carbamoil)pirazin-2-il)-2-(3- ((terc- butoxicarbonil)amino)propoxi)benz oato 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,54 (s, 9H), 1,88 (s, 1H), 2,76 (s, 2H), 2,96 (s, 6H), 3,04 (s, 1H), 3,76 (s, 4H), 6,04 (s, 1H), 6,58 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 243 6,80 (s, 1H), 7,04 terc-butil ((6-(5-amino-6-((4- (s, 1H), 7,22 (s, morfolinopiridin-3- 1H), 7,23 (s, 1H), il)carbamoil)pirazin-2-il)- 7,51 (s, 1H), 7,64- 1,2,3,4-tetra-hidroquinolin-2- 7,72 (m, 2H), 8,32 il)metil)carbamato (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 9,37 (s, 1H), 10,38 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,75- 1,72 (m, 1H), 2,01- 2,05 (m, 1H), 2,76- 3,01 (m, 4H), 3,14- 3,15 (m, 4H), 3,49- 3,50 (m, 1H), 3,80- 244 3,88 (m, 4H), 6,69 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3-amino-6-(2-(aminometil)- 7,27 (d, J = 5,6 Hz, 1,2,3,4-tetra-hidroquinolin-6- 1H), 7,63-7,69 (m, il)-N-(4-morfolinopiridin-3- 2H), 8,29 (d, J = il)pirazina-2-carboxamida 4,4 Hz, 1H), 8,66 (s, 1H), 9,50 (s, 1H)
1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 1,70-1,73 (m, 2H), 1,93-1,96 (m, 2H), 2,78-2,83 (m, 2H), 2,97-2,99 (m, 4H), 3,74-3,76 (m, 4H), 4,60-4,63 (m, 1H), 5,21 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,23 (d, J 245 = 5,6 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3-amino-6-(5-hidroxi-5,6,7,8- 7,74 (s, 2H), 7,83 tetra-hidronaftalen-2-il)-N-(4- (s, 1H), 7,95 (d, J morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- = 8,0 Hz, 1H), 8,31 carboxamida (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,94 (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,33 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6+D2O) δ: 1,65 (s, 1H), 1,98 (s, 1H), 2,91-2,95 (m, 2H), 2,97-3,01 (m, 5H), 3,08 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,73 246 (s, 4H), 4,01 (s, 1H), 7,21-7,25 (m, 3-amino-6-(7-hidroxi-5,6,7,8- 2H), 7,68-7,81 (m, tetra-hidronaftalen-2-il)-N-(4- 2H), 8,30 (s, 1H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,91 (d, J = 4,0 Hz, carboxamida 1H), 9,28 (d, J = 3,6 Hz, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,96- 2,05 (m, 1H), 2,46- 2,54 (m, 1H), 2,78- 2,97 (m, 1H), 3,02- 3,11 (m, 4H), 3,12- 3,18 (m, 1H), 3,82- 247 3,85 (m, 4H), 5,21- 5,26 (m, 1H), 7,27 3-amino-6-(1-hidroxi-2,3-di- (d, J = 5,7 Hz, 1H), hidro-1H-inden-5-il)-N-(4- 7,53 (d, J = 7,2 Hz morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 1H), 7,91-7,96 (m, carboxamida 2H), 8,28 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 8,78 (s, 1H), 9,56 (s, 1H)
1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 2,77-2,83 (m, 2H), 2,87-3,10 (m, 4H), 3,12-3,20 (m, 2H), 3,74-3,76 (m, 4H), 4,56 (s, 1H), 4,93 (s, 1H), 7,25 248 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 7,5 Hz, 3-amino-6-(2-hidroxi-2,3-di- 1H), 7,66 (s, 2H), hidro-1H-inden-5-il)-N-(4- 7,88-8,05 (m, 2H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,32 (d, J = 5,4 Hz, carboxamida 1H), 8,94 (s, 1H), 9,38 (s, 1H), 10,41 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 1,60-1,75 (m, 1H), 1,90-2,00 (m, 1H), 2,49-2,50 (m, 1H), 2,60-2,67 (m, 1H), 2,96-3,02 (m, 6H), 3,73-3,75 (m, 4H), 3,90-4,00 (m, 249 1H), 4,81-4,82 (s, 1H), 7,18-7,23 (m, 3-amino-6-(6-hidroxi-5,6,7,8- 2H), 7,70 (s, 2H), tetra-hidronaftalen-2-il)-N-(4- 7,83-7,88 (m, 2H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,31-8,32 (m, 1H), carboxamida 8,92 (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,39 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 1,81-1,91 (m, 1H), 2,28-2,35 (m, 1H), 2,73-2,79 (m, 1H), 2,81-3,03 (m, 5H), 3,72 (s, 4H), 5,10-5,14 (m, 1H), 5,16-5,30 (m, 1H), 250 7,23 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 7,8 3-amino-6-(3-hidroxi-2,3-di- Hz, 1H), 7,73 (s, hidro-1H-inden-5-il)-N-(4- 2H), 7,97-8,07 (m, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 2H), 8,31 (d, J = 5,4 carboxamida Hz, 1H), 8,94 (s, 1H), 9,35 (s, 1H), 10,39 (s, 1H)
1HNMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 1,72 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 1,93 (s, 2H), 2,70-2,82 (m, 2H), 2,94-3,32 (m, 4H), 3,72 (s, 4H), 4,67 (s, 1H), 5,16 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 251 7,20 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 7,53-7,72 (m, 3-amino-6-(8-hidroxi-5,6,7,8- 2H), 7,94 (d, J = 8,0 tetra-hidronaftalen-2-il)-N-(4- Hz, 1H), 8,10 (s, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 1H), 8,31 (d, J = 4,8 carboxamida Hz, 1H), 8,89 (s, 1H), 9,31 (s, 1H), 10,33 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,98-3,00 (m, 4H), 3,71-3,73 (m, 4H), 7,24 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,54-7,60 (m, 2H), 7,82 (s, 252 2H), 7,98-8,08 (m, 3H), 8,32-8,36 (m, 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- 2H), 8,67 (s, 1H), il)-6-(naftalen-2-il)pirazina-2- 9,13 (s, 1H), 9,33 carboxamida (s, 1H), 10,47 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,73-2,75 (m, 4H), 2,97-3,00 (m, 4H), 7,13 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,52-7,74 253 (m, 3H), 7,81 (s, 3H), 8,05-8,03 (m, 3H), 8,27 (d, J = 5,1 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- Hz, 1H), 8,65 (s, il)-6-(naftalen-1-il)pirazina-2- 1H), 9,47 (s, 1H), carboxamida 10,40 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,39 (s, 3H), 2,98-3,32 (m, 6H), 3,07 (s, 3H), 3,72-3,77 (m, 4H), 4,53-4,59 (m, 254 1H), 7,02 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,07 6-(4-((1-aminopropan-2- (s, 1H), 7,85 (d, J il)oxi)fenil)-3-(metilamino)-N- = 8,8 Hz, 2H), 7,81 (4-morfolinopiridin-3- (s, 1H), 8,86 (s, il)pirazina-2-carboxamida 1H), 9,44 (s, 1H)
1HNMR (300 MHz, DMSO- d6) δ: 2,50 (s, 3H), 2,86 (s, 4H), 3,42- 3,51 (m, 6H), 4,07 (s, 2H), 5,05 (s, 2H), 7,06 (d, J = 7,8 255 Hz, 2H), 7,17-7,18 benzil (2-(4-(5-amino-3-metil-6- (m, 1H), 7,35 (s, ((4-morfolinopiridin-3- 5H), 7,54-7,62 (m, il)carbamoil)pirazin-2- 5H), 8,27 (d, J = 4,2 il)fenoxi)etil)carbamato Hz, 1H), 9,41 (s, 1H), 10,33 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,28- 1,31 (m, 3H), 1,95- 2,01 (m, 2H), 2,90 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 3,31-3,38 (m, 4H), 3,71 (t, J = 6,0 Hz, 256 2H), 3,79-3,81 (m, 2H), 4,50-4,57 (m, N-(4-(1,4-oxazepan-4-il)piridin- 1H), 7,03-7,16 (m, 3-il)-3-amino-6-(4-((1- 3H), 7,90-7,94 (m, aminopropan-2- 2H), 8,17 (d, J = 5,6 il)oxi)fenil)pirazina-2- Hz, 1H), 8,56 (s, carboxamida 1H), 9,04 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6+D2O) δ: 1,09 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,69 (s, 4H), 3,10 (s, 2H), 3,16-3,17 (m, 2H), 3,63 (s, 2H), 3,72-3,74 (m, 2H), 257 4,72-4,74 (m, 3H), 7,15 (d, J = 9,2 Hz, N-(4-(1,4-oxazocan-4-il)piridin- 2H), 7,64 (d, J = 6,4 3-il)-3-amino-6-(4-((1- Hz, 1H), 8,08 (d, J aminopropan-2- = 8,8 Hz, 2H), 8,63 il)oxi)fenil)pirazina-2- (d, J = 6,4 Hz, 1H), carboxamida 8,93 (s, 1H), 9,35 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,96-3,03 (m, 4H), 3,21-3,22 (m, 4H), 3,70-3,78 (m, 8H), 7,06 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,24 (d, J 258 = 5,6 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 8,03 (d, J 3-amino-6-(4-morfolinofenil)-N- = 8,8 Hz, 2H), 8,29- (4-morfolinopiridin-3- 8,32 (s, 2H), 8,90 il)pirazina-2-carboxamida (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,45 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 2,50-2,51 (s, 1H), 2,95-2,98 (m, 9H), 3,73-3,75 (s, 4H), 6,81 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,23 (d, J 259 = 5,2 Hz, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,98 (d, J 3-amino-6-(4- = 8,8 Hz, 2H), 8,17 (dimetilamino)fenil)-N-(4- (s, 1H), 8,25 (d, J morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- = 4,4 Hz, 1H), 8,85 carboxamida (s, 1H), 9,35 (s, 1H), 10,45 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,67-2,74 (m, 3H), 2,90-3,01 (m, 4H), 3,75-3,77 (m, 4H), 6,05 (s, 1H), 6,65 (d, J = 8,8 Hz, 260 2H), 7,25 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,93 (d, J = 8,8 3-amino-6-(4-(metilamino)fenil)- Hz, 2H), 8,28-8,32 N-(4-morfolinopiridin-3- (m, 2H), 8,84 (s, il)pirazina-2-carboxamida 1H), 9,38 (s, 1H), 10,55 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,37 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,90-1,94 (m, 2H), 3,15-3,17 (m, 1H), 3,18-3,20 (m, 1H), 3,53-3,57 (m, 4H), 3,88-3,90 (m, 2H), 261 4,81-4,83 (m, 2H), N-(4-(1,5-oxazocan-5-il)piridin- 5,03-5,20 (m, 2H), 3-il)-3-amino-6-(4-((1- 5,76-5,81 (m, 1H), aminopropan-2- 7,10-7,14 (m, 3H), il)oxi)fenil)pirazina-2- 8,10 (d, J = 8,8 Hz, carboxamid 2H), 8,24 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,77 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 1,97-2,00 (m, 4H), 2,95-3,01 (m, 4H), 3,32-3,47 (s, 4H), 3,67-3,76 (m, 4H), 6,64 (d, J = 8,8 262 Hz, 2H), 7,24 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,45 (s, 2H), 7,98 (d, J 3-amino-N-(4-morfolinopiridin-3- = 8,8 Hz, 2H), 8,15- il)-6-(4-(pirrolidin-1- 8,32 (m, 1H), 8,85 il)fenil)pirazina-2-carboxamida (s, 1H), 9,36 (s, 1H), 10,47 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,05- 2,27 (m, 2H), 2,97- 3,02 (m, 4H), 3,71- 3,75 (m, 4H), 3,78- 3,86 (m, 4H), 4,15- 263 4,19 (m, 2H), 7,02 (d, J = 4,8 Hz, 2H), metil O-(4-(5-amino-6-((4- 7,22 (d, J = 5,6 Hz, morfolinopiridin-3- 1H), 7,93 (d, J = 4,8 il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- Hz, 2H), 8,25 (d, J L-homoserinato = 5,6 Hz, 1H), 8,66 (s, 1H), 9,46 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,12-2,20 (m, 1H), 2,22-2,23 (m, 1H), 2,96 (s, 4H), 3,61-3,71 (m, 7H), 4,06-4,16 (m, 2H), 4,30-4,35 (m, 1H), 5,04 (s, 2H), 7,05 264 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,22-7,38 (m, 6H), metil O-(4-(5-amino-6-((4- 7,66 (s, 2H), 7,89 morfolinopiridin-3- (d, J = 7,6 Hz, 1H), il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- 8,08 (d, J = 8,8 Hz, N-((benziloxi)carbonil)-L- 2H), 8,31 (d, J = 5,2 homoserinato Hz, 1H), 8,91 (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,44 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 1,89-2,16 (m, 1H), 2,22-2,32 (m, 1H), 2,95-2,97 (m, 4H), 3,71-3,73 (m, 4H), 4,09-4,22 (m, 3H), 5,03 (s, 2H), 7,05 (d, J = 8,8 Hz, 265 2H), 7,22-7,35 (m, O-(4-(5-amino-6-((4- 6H), 7,59-7,67 (m, morfolinopiridin-3- 3H), 8,08 (d, J = 8,4 il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- Hz, 2H), 8,31 (d, J N-((benziloxi)carbonil)-L- = 5,2 Hz, 1H), 8,91 homoserina (s, 1H), 9,34 (s, 1H), 10,85 (s, 1H), 12,83 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,46 (s, 9H), 2,91-2,93 (m, 4H), 3,22-3,31 (m, 4H), 3,77-3,79 (m, 4H), 6,67 (d, J 266 = 8,8 Hz, 2H), 7,17 (d, J = 5,2 Hz, 1H), terc-butil (2-((4-(5-amino-6-((4- 7,75 (d, J = 8,8 Hz, morfolinopiridin-3- 2H), 8,22 (d, J = 5,2 il)carbamoil)pirazin-2- Hz, 1H), 8,52 (s, il)fenil)amino)etil)carbamato 1H), 9,44 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,42 (s, 9H), 2,98-3,00 (m, 4H), 3,03 (s, 3H), 3,24-3,27 (m, 2H), 3,48-3,51 (m, 2H), 3,82-3,84 (m, 267 4H), 6,86 (d, J = 8,8 terc-butil (2-((4-(5-amino-6-((4- Hz, 2H), 7,23 (d, J morfolinopiridin-3- = 5,6 Hz, 1H), 7,86 il)carbamoil)pirazin-2- (d, J = 8,8 Hz, 2H), il)fenil)(metil)amino)etil)carbam 8,25 (d, J = 5,6 Hz, ato 1H), 8,62 (s, 1H), 9,46 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,30- 2,53 (m, 2H), 3,38- 3,40 (m, 4H), 3,74- 3,81 (m, 4H), 4,00- 4,03 (m, 1H), 4,26- 268 4,33 (m, 2H), 7,11 (d, J = 8,8 Hz, 2H), O-(4-(5-amino-6-((4- 7,44 (d, J = 6,4 Hz, morfolinopiridin-3- 1H), 8,00 (d, J = 8,8 il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- Hz, 2H), 8,32 (d, J L-homoserina = 6,4 Hz, 1H), 8,75 (s, 1H), 9,20 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,15- 2,27 (m, 2H), 2,99- 3,02 (m, 4H), 3,70- 3,74 (m, 4H), 3,79- 3,82 (m, 4H), 4,15- 269 4,20 (m, 2H), 7,04 (d, J = 8,8 Hz, 2H), metil O-(4-(5-amino-6-((4- 7,24 (d, J = 5,6 Hz, morfolinopiridin-3- 1H), 7,97 (d, J = 8,8 il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- Hz, 2H), 8,26 (d, J D-homoserinato = 5,6 Hz, 1H), 8,69 (s, 1H), 9,47 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6) δ: 2,08-2,23 (m, 2H), 2,96 (s, 4H), 3,60-3,71 (m, 7H), 4,08-4,16 (m, 2H), 4,29-4,35 (s, 1H), 5,04 (s, 2H), 7,05 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 270 7,23-7,36 (m, 6H), metil O-(4-(5-amino-6-((4- 7,67 (s, 2H), 7,89 morfolinopiridin-3- (d, J = 8,0 Hz, 1H), il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- 8,09 (d, J = 8,4 Hz, N-((benziloxi)carbonil)-D- 2H), 8,31 (d, J = 5,2 homoserinato Hz, 1H), 8,92 (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,44 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,81-2,98 (m, 4H), 3,02-3,06 (m, 2H), 3,35-3,40 (m, 2H), 3,64-3,82 (m, 4H), 6,77 (d, J = 9,0 271 Hz, 2H), 7,22 (d, J 3-amino-6-(4-((2- = 6,0 Hz, 1H), 7,83 aminoetil)amino)fenil)-N-(4- (d, J = 6,0 Hz, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 2H), 8,25 (d, J = carboxamida 6,0 Hz, 1H), 8,59 (s, 1H), 9,45 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 3,05 (s, 3H), 3,18-3,24 (m, 2H), 3,46-3,52 (m, 4H), 3,67-3,71 (m, 2H), 3,80-3,82 (m, 4H), 6,96 (d, J 272 = 8,0 Hz, 2H), 7,51 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 3-amino-6-(4-((2- 7,94 (d, J = 8,0 Hz, aminoetil)(metil)amino)fenil)-N- 2H), 8,36 (d, J = (4-morfolinopiridin-3- 4,0 Hz, 1H), 8,73 il)pirazina-2-carboxamida (s, 1H), 9,14 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,47 (s, 9H), 1,91-1,94 (m, 1H), 2,16-2,20 (m, 1H), 2,95-2,98 (m, 4H), 3,10-3,14 (m, 1H), 3,33 (s, 1H), 3,42-3,53 (m, 2H), 3,74-3,76 (m, 4H), 273 4,17 (d, J = 6,0 Hz, terc-butil (S)-(1-(4-(5-amino-6- 1H), 6,62 (d, J = ((4-morfolinopiridin-3- 8,8 Hz, 2H), 7,24 il)carbamoil)pirazin-2- (d, J = 5,6 Hz, 2H), il)fenil)pirrolidin-3- 7,53 (s, 2H), 7,99 il)carbamato (d, J = 7,6 Hz, 2H), 8,31 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,86 (s, 1H), 9,36 (s, 1H), 10,48 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,46 (s, 9H), 1,97-2,02 (m, 1H), 2,25-2,34 (m, 1H), 2,99-3,04 (m, 4H), 3,12-3,21 (m, 1H), 3,32-3,65 (m, 3H), 3,84-3,86 274 (m, 4H), 4,25-4,28 (m, 1H), 6,68 (d, J terc-butil (R)-(1-(4-(5-amino-6- = 8,4 Hz, 2H), 7,26 ((4-morfolinopiridin-3- (d, J = 5,6 Hz, 1H), il)carbamoil)pirazin-2- 7,91 (d, J = 8,4 Hz, il)fenil)pirrolidin-3- 2H), 8,27 (d, J = il)carbamato 5,2 Hz, 1H), 8,67 (s, 1H), 9,50 (s, 1H) 1H NMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 2,33- 2,40 (m, 1H), 2,48- 2,53 (m, 1H), 3,38- 3,40 (m, 4H), 3,75- 3,83 (m, 4H), 4,02- 4,08 (m, 1H), 4,25- 275 4,32 (m, 2H), 7,14 (d, J = 8,7 Hz, 2H), O-(4-(5-amino-6-((4- 7,44 (d, J = 5,7 Hz, morfolinopiridin-3- 1H), 8,02 (d, J = il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- 8,7 Hz, 2H), 8,34 D-homoserina (d, J = 6,3 Hz, 1H), 8,77 (s, 1H), 9,22 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 2,04- 2,33 (m, 2H), 2,86- 2,96 (s, 4H), 3,61- 3,72 (s, 4H), 4,10- 4,45 (m, 3H), 5,04 (s, 2H), 7,02 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,23- 276 7,24 (s, 1H), 7,28- 7,35 (m, 5H), 7,67- O-(4-(5-amino-6-((4- 7,72 (m, 3H), 8,09 morfolinopiridin-3- (d, J = 8,8 Hz, 2H), il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- 8,31 (d, J = 5,6 Hz, N-((benziloxi)carbonil)-D- 1H), 8,92 (s, 1H), homoserina 9,33 (s, 1H), 10,44 (s, 1H), 12,70 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,91- 1,95 (m, 1H), 2,28- 2,31 (m, 1H), 3,03- 3,06 (m, 4H), 3,13- 3,17 (m, 1H), 3,32- 3,34 (m, 1H), 3,54- 3,62 (m, 2H), 3,70- 277 3,73 (m, 1H), 3,85- 3,88 (m, 4H), 6,70 (d, J = 8,8 Hz, 2H), (S)-3-amino-6-(4-(3- 7,27 (d, J = 5,2 Hz, aminopirrolidin-1-il)fenil)-N-(4- 1H), 7,92 (d, J = morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,8 Hz, 2H), 8,28 carboxamida (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,69 (s, 1H), 9,51 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,21- 2,27 (m, 1H), 2,49- 2,57 (m, 1H), 3,46- 3,66 (m, 6H), 3,68- 3,73 (m, 2H), 3,83- 3,85 (m, 4H), 4,07- 278 4,12 (m, 1H), 6,81 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,52 (d, J = 6,8 Hz, (R)-3-amino-6-(4-(3- 1H), 7,97 (d, J = aminopirrolidin-1-il)fenil)-N-(4- 8,8 Hz, 2H), 8,37 morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- (d, J = 6,8 Hz, 1H), carboxamida 8,75 (s, 1H), 9,18 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,54- 1,69 (m, 2H), 1,90- 2,07 (m, 2H), 2,81- 2,98 (m, 7H), 3,79- 3,83 (m, 6H), 7,04 279 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 8,27 3-amino-6-(4-(4-aminopiperidin-1- (d, J = 5,2 Hz, 1H), il)fenil)-N-(4-morfolinopiridin- 8,62 (s, 1H), 9,47 3-il)pirazina-2-carboxamida (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,47- 1,54 (m, 11H), 1,80- 1,82 (m, 2H), 2,80- 2,83 (m, 2H), 2,97 (s, 4H), 3,45 (s, 1H), 3,75 (s, 6H), 280 6,87 (s, 1H), 7,04 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,24 (s, 1H), 7,60 terc-butil (1-(4-(5-amino-6-((4- (s, 2H), 8,00 (d, J morfolinopiridin-3- = 7,6 Hz, 2H), 8,83 il)carbamoil)pirazin-2- (s, 1H), 8,88 (s, il)fenil)piperidin-4-il)carbamato 1H), 9,33 (s, 1H), 10,44 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,05- 2,18 (m, 1H), 2,38- 2,47 (m, 1H), 3,43- 3,61 (m, 8H), 3,83- 3,85 (m, 4H), 4,31- 4,36 (m, 1H), 6,82 281 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,54 (d, J = 6,8 Hz, (R)-3-amino-N-(4-morfolinopiridin- 1H), 7,90 (d, J = 3-il)-6-(4-(pirrolidin-3- 8,4 Hz, 2H), 8,37 ilamino)fenil)pirazina-2- (d, J = 6,8 Hz, 1H), carboxamida 8,75 (s, 1H), 9,17 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,32- 1,35 (m, 1H), 1,48- 4,50 (m, 9H), 1,96- 1,99 (m, 1H), 2,25- 2,28 (m, 1H), 3,05- 3,07 (m, 4H), 3,15- 3,16 (m, 1H), 3,21- 3,29 (m, 2H), 3,48- 282 3,57 (m, 2H), 3,66- 3,73 (m, 1H), 3,86- terc-butil (R)-3-((4-(5-amino-6- 3,88 (m, 4H), 4,14 ((4-morfolinopiridin-3- (s, 1H), 6,80 (d, J il)carbamoil)pirazin-2- = 8,4 Hz, 2H), 7,29- il)fenil)amino)pirrolidine-1- 7,30 (m, 1H), 7,89 carboxilato (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,30 (s, 2H), 8,69 (s, 1H), 9,55 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,17- 1,40 (m, 1H), 1,51- 1,61 (m, 1H), 1,73- 1,87 (m, 2H), 2,61- 2,80 (m, 2H), 2,95- 2,96 (m, 4H), 3,33 (s, 1H), 3,46-3,47 (m, 1H), 3,62-3,74 283 (m, 7H), 7,02 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,23 (d, J = 5,2 Hz, 1H), (R)-3-amino-6-(4-(3- 7,58 (s, 2H), 7,99 aminopiperidin-1-il)fenil)-N-(4- (d, J = 8,8 Hz, 2H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,31 (d, J = 5,2 Hz, carboxamida 1H), 8,87 (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,44 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,54 (s, 10H), 1,57-1,60 (m, 1H), 1,74-1,86 (m, 2H), 2,63-2,80 (m, 2H), 2,96-2,98 (m, 4H), 3,30-3,47 (m, 1H), 3,73-3,74 (m, 6H), 6,89-6,91 (m, 284 1H), 7,04 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,24 terc-butil (R)-(1-(4-(5-amino-6- (d, J = 5,2 Hz, 1H), ((4-morfolinopiridin-3- 7,58 (s, 2H), 8,00 il)carbamoil)pirazin-2- (d, J = 8,4 Hz, 2H), il)fenil)piperidin-3-il)carbamato 8,31 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,88 (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,45 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,32- 1,41 (m, 1H), 1,68- 1,71 (m, 1H), 1,74- 1,76 (m, 1H), 1,86- 2,01 (m, 1H), 2,66- 2,71 (m, 1H), 2,84- 3,02 (m, 6H), 3,36- 285 3,59 (m, 1H), 3,61- 3,70 (m, 1H), 3,73- 3,84 (m, 4H), 7,07 (S)-3-amino-6-(4-(3- (d, J = 8,8 Hz, 2H), aminopiperidin-1-il)fenil)-N-(4- 7,25 (d, J = 4,8 Hz, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 1H), 7,91 (d, J = carboxamida 8,8 Hz, 2H), 8,28 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 9,48 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,41 (s, 10H), 1,50-1,60 (m, 1H), 1,70-1,90 (m, 2H), 2,60-2,70 (m, 2H), 2,95-2,98 (m, 4H), 3,31-3,50 (m, 1H), 3,73-3,75 (m, 6H), 6,80-6,90 (m, 286 1H), 7,03 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,23 terc-butil (S)-(1-(4-(5-amino-6- (d, J = 5,6 Hz, 1H), ((4-morfolinopiridin-3- 7,50 (s, 2H), 8,00 il)carbamoil)pirazin-2- (d, J = 8,8 Hz, 2H), il)fenil)piperidin-3-il)carbamato 8,31 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,87 (s, 1H), 9,32 (s, 1H), 10,45 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,20- 1,27 (m, 6H), 1,63- 1,68 (m, 1H), 1,76- 1,81 (m, 1H), 2,08- 2,27 (m, 2H), 2,39- 2,51 (m, 1H), 2,84- 2,89 (m, 1H), 3,00- 3,19 (m, 4H), 3,20- 3,24 (m, 1H), 3,40- 287 3,43 (m, 1H), 3,72- 3,74 (m, 4H), 4,54- 3-amino-6-(4-((1-(4- 4,58 (m, 1H), 7,12 mercaptopentanamido)propan-2- (d, J = 8,8 Hz, 2H), il)oxi)fenil)-N-(4- 7,24 (d, J = 5,2 Hz, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 1H), 7,66 (s, 2H), carboxamida 8,08-8,14 (m, 3H), 8,32 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,92 (s, 1H), 9,34 (s, 1H), 10,45 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,27- 1,29 (m, 9H), 1,75- 1,79 (m, 2H), 2,24- 2,28 (m, 2H), 2,58 (s, 1H), 2,98-2,99 (m, 4H), 3,34-3,37 (m, 1H), 3,40-3,42 (m, 1H), 3,72-3,74 288 (m, 4H), 4,30-4,40 (m, 1H), 7,12 (d, J 3-amino-6-(4-((1-(4-mercapto-4- = 8,8 Hz, 2H), 7,24 metilpentanamido)propan-2- (d, J = 5,2 Hz, 1H), il)oxi)fenil)-N-(4- 7,70 (s, 2H), 8,08- morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,10 (m, 3H), 8,32 carboxamida (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,92 (s, 1H), 9,34 (s, 1H), 10,46 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,60- 2,67 (m, 2H), 2,72- 2,74 (m, 4H), 3,03- 3,18 (m, 5H), 3,30- 3,31 (m, 3H), 3,73- 3,76 (m, 2H), 3,83- 289 3,85 (m, 4H), 7,10 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,20-7,27 (m, 1H), 3-amino-6-(4-(4-(2- 7,93-7,98 (m, 2H), hidroxietil)piperazin-1- 8,24-8,28 (m, 1H), il)fenil)-N-(4-morfolinopiridin- 8,72 (s, 1H), 9,38 3-il)pirazina-2-carboxamida (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,50- 1,51 (m, 2H), 1,84- 1,87 (m, 2H), 2,07- 2,21 (m, 7H), 2,74- 2,79 (m, 2H), 2,96- 2,98 (m, 4H), 3,73- 3,75 (m, 4H), 3,81- 290 3,84 (m, 2H), 7,05 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,24 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,58 (s, 2H), 3-amino-6-(4-(4- 8,00 (d, J = 8,8 Hz, (dimetilamino)piperidin-1- 2H), 8,31 (d, J = il)fenil)-N-(4-morfolinopiridin- 5,6 Hz, 1H), 8,88 3-il)pirazina-2-carboxamida (s, 1H), 9,34 (s, 1H), 10,45 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,54 (s, 9H), 1,56-1,67 (m, 4H), 2,78-2,96 (m, 9H), 3,74 (s, 4H), 3,90-3,96 (m, 1H), 4,05-4,08 (m, 2H), 291 6,93 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,25 (s, 1H), terc-butil 4-((4-(5-amino-6-((4- 7,55 (s, 2H), 7,97 morfolinopiridin-3- (d, J = 8,8 Hz, 2H), il)carbamoil)pirazin-2- 8,30 (s, 1H), 8,86 il)fenil)(metil)amino)piperidine- (s, 1H), 9,30 (s, 1-carboxilato 1H), 10,48 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,94- 2,96 (m, 2H), 3,04- 3,09 (m, 5H), 3,43- 3,46 (m, 2H), 3,74- 3,77 (m, 2H), 3,86- 3,88 (m, 3H), 4,82 292 (s, 2H), 6,82 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,28 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3-amino-6-(4-((2-aminoetil)(2- 7,90 (d, J = 8,8 Hz, hidroxietil)amino)fenil)-N-(4- 2H), 8,29 (d, J = morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 5,2 Hz, 1H), 8,69 carboxamida (s, 1H), 9,51 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 2,55- 2,58 (m, 2H), 2,69- 2,71 (m, 2H), 2,97- 3,00 (m, 4H), 3,52- 3,54 (m, 3H), 3,71- 3,81 (m, 6H), 4,48 (br, 1H), 5,13 (s, 2H), 7,24 (d, J = 293 5,2 Hz, 1H), 7,30- 7,34 (m, 5H), 7,56 benzil (2-((4-(5-amino-6-((4- (d, J = 8,4 Hz, 2H), morfolinopiridin-3- 7,71 (br, 2H), 8,16 il)carbamoil)pirazin-2- (d, J = 8,4 Hz, 2H), il)fenil)(2- 8,33 (d, J = 5,2 Hz, hidroxietil)amino)etil)carbamato 1H), 8,99 (s, 1H), 9,30 (s, 1H), 10,45 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,40- 1,44 (m, 3H), 2,87 (s, 3H), 2,90-3,01 (m, 4H), 3,65 (s, 3H), 3,71-3,80 (m, 4H), 4,76-4,83 (m, 294 1H), 6,89 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,21- 7,29 (m, 1H), 7,58 metil N-(4-(5-amino-6-((4- (s, 2H), 7,99 (d, J morfolinopiridin-3- = 8,8 Hz, 2H), 8,31 il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- (s, 1H), 8,87 (s, N-metil-D-alaninato 1H), 9,33 (s, 1H), 10,45 (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,41- 1,53 (m, 3H), 2,94- 3,08 (m, 7H), 3,79- 3,87 (m, 4H), 4,36- 4,45 (m, 1H), 6,87- 295 6,93 (m, 2H), 7,20- 7,23 (m, 1H), 7,79- N-(4-(5-amino-6-((4- 7,90 (m, 2H), 8,25 morfolinopiridin-3- (s, 1H), 8,60-8,63 il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- (m, 1H), 9,43 (s, N-metil-D-alanina 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,11 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 2,79 (s, 3H), 2,97 (s, 4H), 3,43-3,59 (m, 2H), 3,76 (s, 4H), 4,00-4,05 (m, 1H), 4,70-4,72 (m, 296 1H), 6,88 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,24 (d, J = 5,2 Hz, 1H), (R)-3-amino-6-(4-((1- 7,54 (s, 2H), 7,97 hidroxipropan-2- (d, J = 8,4 Hz, 2H), il)(metil)amino)fenil)-N-(4- 8,32 (d, J = 5,2 Hz, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 1H), 8,86 (s, 1H), carboxamida 9,35 (s, 1H), 10,46 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,40- 1,50 (m, 3H), 2,90 (s, 3H), 2,97-2,99 (m, 4H), 3,65 (s, 3H), 3,74-3,76 (m, 4H), 4,78-4,83 (m, 297 1H), 6,90 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,25 metil N-(4-(5-amino-6-((4- (d, J = 4,8 Hz, 1H), morfolinopiridin-3- 7,60 (s, 2H), 8,00 il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- (d, J = 8,8 Hz, 2H), N-metil-L-alaninato 8,33 (s, 1H), 8,90 (s, 1H), 9,34 (s, 1H), 10,47 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6+D2O) δ: 1,28 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 2,84-2,90 (m, 7H), 3,71 (s, 5H), 6,76 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 298 7,21 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,85 (d, J = N-(4-(5-amino-6-((4- 8,4 Hz, 2H), 8,23 morfolinopiridin-3- (d, J = 4,8 Hz, 1H), il)carbamoil)pirazin-2-il)fenil)- 8,69 (s, 1H), 9,18 N-metil-L-alanina (s, 1H)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1,11 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 2,79 (s, 3H), 2,98- 2,99 (m, 4H), 3,40- 3,60 (m, 2H), 3,75- 3,78 (m, 4H), 3,90- 4,10 (m, 1H), 4,70- 299 4,75 (m, 1H), 6,88 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,20-7,30 (m, 1H), (S)-3-amino-6-(4-((1- 7,50 (s, 2H), 7,98 hidroxipropan-2- (d, J = 8,4 Hz, 2H), il)(metil)amino)fenil)-N-(4- 8,32 (d, J = 5,2 Hz, morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 1H), 8,87 (s, 1H), carboxamida 9,35 (s, 1H), 10,47 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 1,50 (s, 9H), 2,13-2,16 (m, 2H), 2,90 (s, 3H), 2,97-3,00 (m, 4H), 3,36-3,41 (m, 2H), 3,52-3,65 (m, 2H), 3,80-3,82 (m, 300 4H), 4,53-4,57 (m, 1H), 6,97 (d, J = terc-butil (R)-3-((4-(5-amino-6- 8,8 Hz, 2H), 7,23- ((4-morfolinopiridin-3- 7,24 (m, 1H), 7,89 il)carbamoil)pirazin-2- (d, J = 8,4 Hz, 2H), il)fenil)(metil)amino)pirrolidine 8,26 (s, 1H), 8,64 -1-carboxilato (s, 1H), 9,47 (s, 1H) 1H NMR (400 MHz, Metanol-d4) δ: 2,04- 2,10 (m, 4H), 2,94 (s, 3H), 3,13-3,19 (m, 2H), 3,52-3,59 (m, 6H), 3,81-3,83 (m, 4H), 4,12-4,17 301 (m, 1H), 7,11 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,51- 3-amino-6-(4-(metil(piperidin-4- 7,53 (m, 1H), 7,97 il)amino)fenil)-N-(4- (d, J = 8,8 Hz, 2H), morfolinopiridin-3-il)pirazina-2- 8,35 (s, 1H), 8,78 carboxamida (s, 1H), 9,12 (s, 1H) Exemplo 6: Preparação de compostos-ligantes de amino-
pirazinocarboxamida
Exemplo 6.1: Preparação de 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-Dioxo-
2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3-metilbutanamido)-
5-ureidopentanamido)benzil (2-(4-(5-amino-6-((4-
morfolinopiridin-3-il)carbamoil)pirazin-2- il)fenil)ethil)carbamato (Composto 6.1)
[00457] Uma solução contendo 42,0 mg (0,10 mmol) do Composto 2.3 foi dissolvida em 2 mL de DMF, em seguida, tratada com 74 mg (0,10 mmol) de mc-Val-Cit-PAB-PNP e 0,035 mL (0,2 mmol) de base de Hunig. A reação foi aquecida a 25°C por 1 h e em seguida, purificada sem processamento usando RP-HPLC. As frações do produto foram identificadas por LCMS e reunidas e depois liofilizadas para fornecer 20 mg do sal de TFA do Composto 6.1 como um sólido branco. 1H NMR (CD3OD) d 9,49 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,27 (d, J=5,2Hz, 1H), 7,98 (J=8,0Hz, 2H), 7,53 (d, J=8,4Hz, 2H), 7,37 (d, J=7,6Hz, 1H), 7,27 (m, 3H), 6,77 (s, 2H), 5,02 (s, 2H), 4,51-4,48 (m, 1H), 4,15 (d, J=7,6Hz, 1H), 3,79 (m, 4H), 3,46-3,39 (m, 4H), 3,02 (m, 4H), 3,87 (t, J=6,8Hz, 2H), 2,26 (t, J=7,2Hz, 2H), 2,08- 2,03 (m, 1H), 1,90-1,69 (m, 2H), 1,65-1,51 (m, 6H), 1,33- 1,29 (m, 4H), 0,95 (d, J=6,8Hz, 6H). LCMS (M+H) = 1018.7.
[00458] Os compostos-ligantes nas Tabelas 15 e 16 foram preparados de uma forma semelhante à descrita no Exemplo 6.1.
Tabela 15
Composto- Estrutura/Nome 1H NMR/MS Ligante
(DMSO-d6) d 11,1 (s, 1H), 10,5 (s, 1H), 9,98 (s, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,38 (dd, J=0,8, 6,8Hz, 1H), 8,15-8,07 (m, 3H), 7,85 (t, J=6,4Hz, 1H), 7,68 (bs, 1H), 7,59 (d, J=8,4Hz, 2H), 7,41 (d, J=6,8Hz, 1H), 7,37 (d, J=8,4Hz, 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-Dioxo- 2H), 7,30 (d, J=8,4Hz, 2H), 2,5-di-hidro-1H-pirrol-1- 7,00 (s, 2H), LP1 6,93 (m, 1H), il)hexanamido)-3-metilbutanamido)-5- 5,98 (m, 1H), 5,41 (bs, 1H), ureidopentanamido)benzil (3-(4-(5- 4,94 (s, 2H), 4,44-4,35 (m, amino-6-((4-morfolinopiridin-3- 1H), 4,26 (t, J=7,2Hz, 2H), il)carbamoil)pirazin-2- 3,69 (m, 6H), 3,56-3,50 (m, il)fenil)propil)carbamato 6H), 3,36 (t, J=6,8Hz, 2H), 3,07-3,00 (m, 4H), 2,67 (m, 2H), 2,22-1,90 (m, 3H), 1,70- 1,29 (m, 12H), 1,22 (m, 2H), 0,85 (d, J=6,8Hz, 6H) [M+H]+: 1032,5
Composto- Estrutura/Nome 1H NMR/MS Ligante (DMSO-d6) d 10,5 (s, 1H), 9,98 (s, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,38 (dd, J=0,8, 6,8Hz, 1H), 8,16 (J=8,4Hz, 2H), 8,07 (d, J=7,6Hz, 1H), 7,85 (t, J=6,4Hz, 1H), 7,80 (d, J=8,4Hz, 1H), 7,68 (bs, 1H), 7,59 (d, J=8,4Hz, 2H), 7,41 (d, J=6,8Hz, 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-dioxo-2,5-di- 1H), 7,37 (d, J=8,4Hz, 2H), hidro-1H-pirrol-1-il)hexanamido)-3- 7,30 (d, J=8,4Hz, LP9 2H), 7,00 (s, metilbutanamido)-5- 2H), 5,98 (s, 1H), 5,41 (bs, ureidopentanamido)benzil (4-(5-amino- 1H), 4,98 (s, 2H), 4,44-4,40 6-((4-morfolinopiridin-3- (m, 1H), 4,26 (d, J=6,4Hz, 2H), il)carbamoil)pirazin-2- 4,18 (t, J=7,2Hz, 1H), 3,79 (m, il)benzil)carbamato 6H), 3,56-3,50 (m, 6H), 3,36 (t, J=6,8Hz, 2H), 3,07-3,00 (m, 2H), 2,22-1,90 (m, 3H), 1,70- 1,29 (m, 7H), 1,22 (m, 2H), 0,85 (d, J=6,8Hz, 6H). [M+H]+: 1004,5 Tabela 16 Comp osto
MS - Estrutura [M+H]+ Liga nte
LP10 627.4
LP11 766.5
LP12 1074.6
LP13 1060.5
LP14 1060.5
LP15 1076.6
LP16 1048.6
LP17 1048.6
LP18 1046.6
LP19 1030.6
LP20 1060.6
LP21 1004.6
LP22 1018.6
LP23 1032.6
LP24 1034.6
LP25 1048.6
LP26 1048.6
LP27 1010.6
LP28 1052.5
LP29 1027.6
LP30 1041.6
LP31 1075.6
LP32 1062.6 LP33 1076.6 LP34 1051.6 LP35 1079.6 LP36 1048.6
[00459] Os compostos de ligantes na Tabela 17 foram preparados usando os ensinamentos descritos nesse documento em combinação com os conhecimentos dos versados na técnica.
Tabela 17
Compos to- Estrutura MS Ligant e [ M+H]+ LP2 :
627.4 [ M+H]+ LP3 :
653.4 [ M+H]+ LP4 :
766.5 [ M+H]+ LP5 :
1051. 6 [ M+H]+ LP6 :
744.9 [ M+H]+ LP7 :
832.4 [ M+H]+ LP8 :
1149. 6
LP37 1HNMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,20-1,38 (m, 2H), 1,58- 1,76 (m, 4H), 2,40-2,53 (m, 4H), 2,70-2,87 (m, 2H), 3,01-3,10 (m, 6H), 3,45-3,52 (m, 4H), 3,79 (s, 4H), 6,75 (s, 2H), 7,27-7,38 (m, 6H), 7,84-7,96 (m, 2H), 7,99 (d, J = 1,5 Hz, 2H), 8,30 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 8,79 (s, 1H), 9,49 (s, 1H)
LP38 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: 1,21-1,39 (m, 3H), 1,41- 1,71 (m, 4H), 2,25-2,27 (m, 3H), 2,51-2,71 (m, 2H), 2,97 (s, 6H), 3,55 (s, 3H), 3,73 (s, 4H), 6,98 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,41 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,78 (s, 2H), 7,85 (d, J = 4,0 Hz, 4H), 8,15 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 8,29 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,97 (s, 1H), 9,33 (s, 1H), 10,37 (s, 1H), 10,45 (s, 1H)
LP39
1HNMR (300 MHz, Metanol-d4) δ: 1,33-1,35 (m, 2H), 1,59- 1,62 (m, 4H), 2,12-2,20 (m, 3H), 2,37-2,40 (m, 1H), 2,60-2,70 (m, 1H), 2,93-2,97 (m, 5H), 3,31-3,33 (m, 1H), 3,44-3,60 (m, 4H), 3,76-3,77 (m, 4H), 4,53 (s, 2H), 6,73 (s, 1H), 6,78 (s, 1H), 6,87-6,92 (m, 2H), 7,24 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,32-7,36 (m, 2H), 7,66 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,91-7,96 (m, 2H), 8,26 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 8,73 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 9,52 (s, 1H)
LP40 [ M+H]+ : 2371, 1 M/2:1 186,0 M/3: 791,0 LP41 [ M+H]+ : 1088, 5
LP42 [ M+H]+ : 2398, 2 M/2:1 199,6 M/3: 800,0
LP43 [ M+Na] +:
868,2
LP44 [ M+Na] +:
882,2
LP45 [ M+Na] +:
886,2
LP46 [ M+Na] +:
896,2
LP47 [ M+Na] +:
896,2
LP48 [ M+H]+ : 2730, 4 M/2:1 365,6 M/3: 910,8 LP49 [ M+H]+ : 1011, 4
LP50 [ M+H]+ : 1377, 6
LP51 [ M+H]+ : 1359, 6
LP52 [ M+H]+ : 1048, 6
LP53 [ M+H]+ : 1059, 6
LP54 [ M+H]+ : 1059, 6
LP55 [ M+H]+ : 1092, 6
LP56 [ M+H]+ : 1092, 6 LP57 [ M+H]+ : 1106, 6 LP58 [ M+H]+ : 1106, 6 EXEMPLO 7: Geração de Conjugados Anticorpo-Inibidor de TGFβ através da Redução Parcial de Ligações Dissulfeto Endógenas de Anticorpos Não Modificados
[00460] O mAb (3-8 mg/mL em PBS) foi trocado por HEPES (100 mM, f7,0, DTPA 1 mM) por meio de filtração centrífuga de corte de peso molecular (Millipore, 30 kDa). A solução de mAb resultante foi transferida para um tubo cônico de 50 mL com tara. A concentração de mAb foi determinada como sendo 3-8 mg/mL por A280. À solução de mAb foi adicionado TCEP (2,0- 4,0 equivalentes, caldo 1 mM) em temperatura ambiente e a mistura resultante foi incubada a 37°C por 30-90 minutos, com agitação suave. Depois de ser resfriado em temperatura ambiente, uma barra de agitação foi adicionada ao tubo de reação. Com agitação, um linker-payload (5-10 equivalentes, DMSO 10 mM) foi adicionado gota a gota. A mistura reacional resultante foi deixada a agitar em temperatura ambiente por 30-60 minutos, altura em que foi adicionada N-etil maleimida (3,0 equivalentes, DMA 100 mM). Após mais 15 minutos de agitação, foi adicionada N-acetilcisteína (6,0-11,0 equivalentes, HEPES 50 mM). ADC em bruto foi então trocado em PBS e purificado por SEC preparativa (por exemplo, HiLoad 26/600, Superdex 200pg) usando PBS como fase móvel. As frações puras foram concentradas por meio de filtração centrífuga de corte de peso molecular (Millipore, 30 kDa), filtradas de forma estéril e transferidas para tubos cônicos de 15 mL. As proporções de fármaco-construto de anticorpo (razões molares) foram determinadas por métodos descritos no Exemplo 8 abaixo.
EXEMPLO 8: Procedimento Geral para a Determinação das Proporções de Fármaco-Anticorpo Cromatografia de Interação Hidrofóbica
[00461] 10 µL de uma solução de 6 mg/mL de um conjugado é injetado em um sistema de HPLC configurado com uma coluna de cromatografia de interação hidrofóbica (HIC) TOSOH TSKgel Butyl-NPR™ (tamanho de partícula 2,5 mM, 4,6 mm x 35 mm) anexada. Então, ao longo de 18 minutos, um método é executado no qual o gradiente de fase móvel é executado de
100% da fase móvel A para 100% da fase móvel B ao longo de 12 minutos, seguido por um reequilíbrio de seis minutos em fase móvel A 100%. A taxa de fluxo é 0,8 mL/min e o detector é ajustado para 280 nM. A fase móvel A é sulfato de amônio 1,5 M, fosfato de sódio 25 mM (f7). A fase móvel B é 25% isopropanol em 25 mM fosfato de sódio (f7). Após a execução, o cromatograma é integrado e a razão molar é determinada somando a área do pico ponderado.
EXEMPLO 9: Ensaio TGFΒ Reporter Materiais e procedimentos gerais
[00462] A linha de células repórter SBE da via de sinalização TGFβ/SMAD foi obtida da BPS Bioscience. As células foram passadas, expandidas e armazenadas em nitrogênio líquido de acordo com as instruções do fornecedor, com a exceção de que o meio de crescimento é alterado para DMEM-C com Geneticina (DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino, 1X NEAA, piruvato 1mM, glutamina 2mM, 50 µg/mL de penicilina, 50 U/mL de estreptomicina e 400 µg/mL de Geneticina). O meio de ensaio foi MEM suplementado com 0,5% de soro fetal bovino, 1X NEAA, piruvato 1mM, 50 µg/mL de penicilina e 50 U/mL de estreptomicina.
Procedimento geral para triagem de moléculas pequenas in vitro
[00463] As amostras de teste (em concentrações desejadas diluídas em meio de ensaio) foram adicionadas a uma placa de ensaio de 96 poços, 20 µL por poço. As células repórter foram colhidas dos frascos de cultura de tecidos por incubação em pequena quantidade de PBS a 37°C por dois minutos depois o meio no frasco é removido e as células enxaguadas com PBS. As células foram contadas e diluídas no meio de ensaio em aproximadamente 0,5 x 106 células/mL e, em seguida, 80 µL/poço de células foram adicionados à placa de ensaio contendo os 20 µL/poço de amostras de teste (ou apenas meio) e incubados por aproximadamente 5-6 horas a 37°C em uma incubadora umidificada com CO2 a 5%. Após esse tempo, 15 µL de TGFβ diluído para 12 ng/mL no meio de ensaio foram adicionados à placa. Os controles incluíram titulação de TGFβ (de 50 a 0 ng/mL) sem inibidores, e apenas mídia (sem células, inibidor ou TGFβ). As placas foram incubadas a 37°C em uma incubadora umidificada com CO2 a 5% por 18 h. A solução de substrato de luciferase é subsequentemente adicionada a 100 µL por poço, incubada no escuro em temperatura ambiente por 15 min, e a luminescência é medida usando um luminômetro.
Os valores EC50 e os ajustes de curva foram obtidos usando Prism (GraphPad Software).
[00464] A Tabela 18 inclui valores EC50 para compostos selecionados; com compostos tendo um valor EC50 <50 nM como AA, 50 nM a 100 nM como A, 100 nM a 1000 nM como B e superior a 1000 nM como C.
[00465] Os compostos da divulgação também foram testados por Reaction Biology Corp. usando o ensaio TGFβR2 RBC (ensaio de inibição enzimática). A Tabela 18 também inclui valores de IC50 para compostos selecionados; com compostos tendo um valor de IC50 <50 nM como AA, 50 nM a 100 nM como A, 100 nM a 1000 nM como B e superior a 1000 nM como C. NT se refere a não testado.
Tabela 18 EC50 IC50 EC50 IC50 Composto (ensaio (ensaio de Composto (ensaio (ensaio de repórter) inibição repórter) inibição enzimática) enzimática)
1.1 B AA B AA 152
1.2 B AA 153 C B
2.1 A AA 154 C B
3.1 B AA 155 B AA
4.1 B AA 156 B AA
5.1 B AA 157 B B 6 A AA 158 B AA 7 A AA 159 B B 8 B NA 160 B AA 9 B NT 161 B B 10 C NT 162 B AA 11 C NT 163 B B 12 B NT 164 B A 13 C NT 165 B B
14 C C 166 B B
15 B B 167 A AA
16 B AA 168 A AA
17 B B 169 A AA
18 B C 170 A AA
19 C C 171 A AA
20 C C 172 C C
21 B C 173 B C
22 A B 174 B AA
23 B AA 175 B B
24 B B 176 B AA
25 B AA 177 B A
26 B AA 178 B AA
27 C C 179 C A
28 B B 180 B A
29 B C 181 B AA
30 C B 182 B AA
31 C C 183 B AA
32 A B 184 B AA
33 B C 185 B AA
34 C B 186 C C
35 B B 187 B AA
36 A B 188 C AA
37 C C 189 C AA
38 B B 190 B A
39 C B 191 C AA
40 C AA 192 B AA
41 B B 193 A AA
42 B A 194 B AA
43 B AA 195 B AA
44 B B 196 B AA
45 NT AA 197 C B
46 B AA 198 B A
47 C C 199 C AA
48 C AA 200 C AA
49 C C 201 B B
50 B AA 202 B AA
51 A AA 203 C AA
52 B C 204 C AA
53 C C 205 B AA
54 A AA 206 B AA
55 AA AA 207 B AA
56 A A 208 C AA
57 B B 209 B AA
58 B NT 210 B AA
59 NT NT 211 AA AA
60 B NT 212 B AA
616 B NT 213 A AA
62 A B 214 B AA
63 A B 215 B AA
64 A AA 216 A AA
65 B AA 217 B AA
66 C B 218 A AA
67 A A 219 A AA
68 B AA 220 B AA
69 C C 221 AA AA
70 A AA 222 B AA
71 B AA 223 B AA
72 B A 224 C AA
73 A AA 225 B B
74 B A 226 B AA
75 B AA 227 A AA
76 B AA 228 B A
77 A A 229 B A
78 AA AA 230 A AA
79 B C 231 C NT
80 B A 232 C AA
81 A B 233 B AA
83 B A 234 B AA
83 A B 235 B AA
84 B B 236 C AA
85 AA AA 237 A AA
86 B AA 238 B A
87 A AA 239 B A
88 A AA 240 C A
89 A AA 241 C B
90 A AA 242 C A
91 A A 243 B B
92 B AA 244 B AA
93 B B 245 B AA
94 B AA 246 B AA
95 C C 247 A AA
96 C C 248 B AA
97 C C 249 B AA
98 C C 250 B AA
99 C NT 251 B AA
100 C NT 252 B AA
101 B A 253 C B
102 B B 254 C C
103 B AA 255 C C
104 C C 256 B A
105 B B 257 C AA
106 B A 258 AA AA
107 B AA 259 AA AA
108 A A 260 AA AA
109 B AA 261 C C
110 B AA 262 B AA
111 B AA 263 B AA
112 A AA 264 C AA
113 C C 265 C AA
114 C C 266 B AA
115 C C 267 B AA
116 B B 268 C AA
117 C B 269 B AA
118 C C 270 B AA
119 B AA 271 B AA
120 C AA 272 A AA
121 B AA 273 B AA
122 C C 274 B AA
123 C C 275 C A
124 B B 276 C AA
125 C B 277 A AA
126 B C 278 A AA
127 B AA 279 A AA
128 B AA 280 B AA
129 B A 281 B NT
130 C C 282 B NT
131 C C 283 B NT
132 B AA 284 B NT
133 C AA 285 A NT
134 B AA 286 B NT
135 C C 287 B NT
136 C AA 288 B NT
137 C AA 289 A NT
138 C AA 290 AA NT
139 B AA 291 B NT
140 C AA 292 B NT
141 C AA 293 B NT
142 B AA 294 B NT
143 C AA 295 B NT
144 C AA 296 AA NT
145 NT B 297 B NT
146 NT B 298 B NT
147 NT A 399 AA NT
148 C B 300 B NT
149 C A 301 A NT
150 C B
151 B A
EXEMPLO 10-21
[00466] Nos Exemplos 10-21, o anticorpo LRRC15 é o anticorpo M25 murino ou uma variante humanizada do mesmo (ver Pedido Internacional Nº WO2017/095805, incorporado nesse documento por referência na sua totalidade e para todos os efeitos). A conjugação com o linker-paylaod é feita por meio dos dissulfetos intercadeias. Os anticorpos têm um domínio Fc de tipo selvagem ou um domínio Fc null. As mutações Fc null para IgG1 humana são L234A, L236A, G237A e K322A e as mutações Fc null para IgG2a murina são L234A, L236A, G237A, K322A e P329G; numeração por índice da UE. Os linker-payloads são mostrados nas Tabelas 15-17.
EXEMPLO 10: Conjugados de anticorpos múltiplos-inibidor de TGFβ reduzem a atividade de SMAD2 induzida por TGFβ
[00467] Um conjunto de moléculas inibidoras de TGFβR2 conjugadas a um anticorpo anti-LRRCl5 por um ligante PABC clivável de catepsina B em uma DAR (carga de fármaco) média de 2,5-4 foi testada quanto à sua capacidade de diminuir a atividade promotora de SMAD2 induzida por TGFβl em células alvo que expressam o antígeno de anticorpo. Os linker- payloads de LP1 e LP10 foram conjugadas a um anticorpo IgGl M25 humanizado com um domínio Fc null, enquanto os outros linker-payloads foram conjugados ao anticorpo IgG2a M25 murino com um domínio Fc null. Células repórter de luciferase HEK293 SMAD2p (BPS Bioscience Inc.) transfectadas para expressar de forma estável LRRC15 humano de comprimento total foram semeadas em placas de 96 poços a 40.000 células/poço em um meio de ensaio de MEM +0,5% FBS, 1% NEAA, 1% NaPyr e 1% Pen/Strep. Conjugados e controles foram adicionados aos poços em uma titulação de dose variando de 500 nM a .03 nM.
Após 24 horas de cultura a 37°C em um ambiente de 5% CO2, TGFβ1 humano foi adicionado (PeproTech Inc.) para uma concentração final de 1,6 ng/mL seguido por mais 18 horas de cultura. O reagente Luciferase Steady Glo (Promega Corporation) foi adicionado conforme recomendado pelo fabricante. Após incubação de 10 minutos com agitação, a atividade SMAD2p foi determinada medindo a luminescência com um Envision Plate Reader (Perkin-Elmer Inc.) e um IC50 absoluto foi determinado usando Prism Software v8.1.0 GraphPad Inc.). Muitos conjugados de anticorpo anti-LRRCl5 de molécula pequena reduziram o sinal quimioluminescente, demonstrando assim a inibição do sinal induzido por TGFβ. A dependência da ligação ao antígeno para a inibição foi demonstrada pela falta de inibição por um conjugado de anticorpo anti-Digoxina irrelevante não ligado ao antígeno, bem como pela falta de inibição na linha repórter de HEK293 SMAD2-luciferase de origem por vários conjugados anti-LRRCl5 potentes (Dados não mostrados). As classes de potência estão mostradas na Tabela 19 abaixo.
Tabela 19
Conjugados LRRC15 < 10 nM IC50 > 10 nM < 100 nM > 100 nM IC50 mAb-LP1, mAb-LP10, mAb-LP21, mAb-LP22, mAb-LP27, mAb-LP28, mAb-LP11 mAb-LP12, mAb-LP23, mAb-LP24, mAb-LP29, mAb-LP30, mAb-LP13, mAb-LP14, mAb-LP25, mAb-LP26, mAb-LP31, mAb-LP32, mAb-LP15, mAb-LP16, mAb-LP33 mAb-LP17, mAb-LP18, mAb-LP19, mAb-LP20 Exemplo 11: Um inibidor de TGFβR2 exemplificativo conjugado a um anticorpo monoclonal com diferentes ligantes pode reduzir a atividade de SMAD2 induzida por TGFβ
[00468] Conjugados do composto 2.1 covalentemente ligados a um anticorpo anti-LRRCl5 com diferentes ligantes cliváveis ou não cliváveis foram testados quanto à sua capacidade de diminuir a atividade de promotor SMAD2 induzida por TGFβ usando a linha celular repórter HEK293 SMAD2- luciferase expressando LRRC15 humano. Os linker-payloads foram conjugados a um anticorpo IgGl M25 humanizado com um domínio Fc de tipo selvagem. Células repórter de HEK293 SMAD2p luciferase (BPS Bioscience Inc.) transfectadas para expressar de forma estável LRRC15 humano de comprimento total foram semeadas em placas de 96 poços a 40.000 células/poço em um meio de ensaio de MEM +0,5% FBS, 1% NEAA, 1% NaPyr e 1 % Pen/Strep. Conjugados e controles foram adicionados aos poços em uma titulação de dose variando de 500 nM a .03 nM.
Após 24 horas de cultura a 37°C em um ambiente de 5% CO2, TGFβ1 humano foi adicionado (PeproTech Inc.) para uma concentração final de 1,6 ng/mL seguido por mais 18 horas de cultura. O reagente Luciferase Steady Glo (Promega Corporation) foi adicionado conforme recomendado pelo fabricante. Após incubação de 10 minutos com agitação, a atividade SMAD2p foi determinada medindo a luminescência com um Envision Plate Reader (Perkin-Elmer Inc.) e um IC50 absoluto foi determinado usando Prism Software v8.0l (GraphPad Inc.). Todos os ligantes cliváveis exibiram potência com IC50 <1nM, enquanto os ligantes não cliváveis exibiram potência mais variável. A dependência da ligação de LRRC15 foi novamente demonstrada pela inibição mínima do aumento da atividade SMAD2p induzido por TGFβ pelo conjugado anti-digoxina (isótipo mAb-LPl). Ver a Figura 1.
Exemplo 12: Moléculas inibidoras de TGFβR2 exemplificativas reduzem um mRNA induzido por TGFβ em uma linha celular de fibroblastos derivada de paciente de IPF humana de forma dependente de concentração
[00469] A capacidade de selecionar moléculas pequenas para diminuir um mRNA induzido por TGFβl foi testada em ensaios com a linha celular LL97a (ATCC) conforme segue. As células LL97a foram semeadas em placas de 96 poços a 10.000 células/poço em DMEM +10% FBS +1% NaPyr, +1% L-glut, +1%
NEAA, +1% HEPES +0,5% Pen/Strep. No dia seguinte, artigos de teste e controles foram adicionados em concentrações variáveis em meio de ensaio de DMEM +0,5% BSA juntamente com 0,5 ng/mL de TGFβ1 (PeproTech Inc.) foi adicionado aos poços.
Após 24 horas ou 48 horas de incubação com TGFβ1 a 37°C em um ambiente de 5% CO2, o RNA foi preparado a partir de células e QPCR realizado para os genes ⍺SMA e elastina induzíveis por TGFβ, bem como o gene de controle não induzível RPLPO com um Taqman® Gene Expression Cells-to-CT l-Step Kit (Life Technologies Inc.) e com um termociclador One Step Plus (Applied Biosystems) de acordo com as recomendações dos fabricantes. Os conjuntos de sondas de primer foram obtidos na ThermoFisher Scientific. Conforme mostrado nas Figuras 2- 5, os inibidores de TGFβR2 inibiram potentemente os genes induzidos por TGFβ de uma forma dependente da concentração.
Exemplo 13: Inibidores de TGFβR2 conjugados a um anticorpo anti-LRRC15 mostram inibição potente da expressão gênica induzida por TGFβ
[00470] Os compostos 2.1 e 171 foram covalentemente ligados a um anticorpo anti-LRRCl5 usando diferentes ligantes PABC cliváveis por protease. Os linker-payloads foram conjugados a um anticorpo IgG2a M25 murino com domínio Fc null. Os conjugados foram purificados por cromatografia preparativa por exclusão de tamanho. O nível médio de DAR das espécies purificadas foi determinado por análise por cromatografia de interação hidrofóbica (HIC) usando TSK-gel butila NPR (Tosoh Bioscience LLC) e por LCMS (Waters Corp.) e foram testados quanto à sua capacidade de reduzir a indução de gene ⍺SMA e elastina por TGFβ nas linhas celulares de fibroblastos humanos LL97a e NHLF usando um ensaio qPCR.
Para o ensaio, 10.000 células de LL97a ou NHLF foram colocadas em poços de placas de 6 poços em seus meios de crescimento recomendados e incubados durante a noite. O meio de crescimento foi removido e substituído por meio de ensaio, DMEM +0,5%BSA (LL97a) ou FBM +0,1%BSA (NHLF), ao qual várias concentrações de artigos de teste e controles foram adicionadas aos poços juntamente com TGFβ1 (PeproTech Inc.) para uma concentração final de 0,5 ng/ml. Após incubação a 37°C em ambiente 5% CO2 por 24 horas ou 48 horas, o RNA foi preparado a partir dos poços e Taqman® qPCR foi realizada usando um Cells-to-CT l-Step Kit (Life Technologies Inc.) de acordo com a recomendação do fabricante usando conjuntos de sondas para ⍺SMA e elastina com um termociclador Step One Plus (Applied Biosystems). Conforme mostrado nas Figuras 6A e 6B, diferentes ligantes apoiaram a entrega eficaz de anticorpos dos inibidores em células para células LL97a (A) e fibroblastos normais (B) conforme evidenciado pela redução potente de mRNAs para ⍺SMA e elastina.
Exemplo 14: Conjugados de um inibidor de TGFbR2 a um anticorpo anti-LRRC15 com um domínio Fc sem ligação de FcγR ou um domínio Fc com ligação FcγR total têm equipotência
[00471] O composto 2.1 foi covalentemente ligado por meio de um ligante PABC a um anticorpo IgG2a M25 murino que transportava um domínio Fc de tipo selvagem ou um domínio Fc null. As mutações Fc null para IgG2a murino são L234A, L236A, G237A, K322A e P329G com base na numeração da UE, faltando assim ligação FcγR detectável por um ensaio de interferometria de biocamada (Octet; Forte Bio) (Fc null).
Para o ensaio, 10.000 células de LL97a ou NHLF foram colocadas em poços de placas de 6 poços em seus meios de crescimento recomendados e incubadas durante a noite. O meio de crescimento foi removido e substituído por meio de ensaio, DMEM +0,5%BSA (LL97a) ou FBM +0,1%BSA (NHLF), ao qual várias concentrações de artigos de teste e controles foram adicionadas aos poços juntamente com TGFβ1 (PeproTech Inc.) para uma concentração final de 0,5 ng/ml. Após incubação a 37 ºC em ambiente 5% CO2 por 24 horas ou 48 horas, o RNA foi preparado a partir dos poços e Taqman® qPCR foi realizada usando um Cells-to-CT l-Step Kit (Life Technologies Inc.) de acordo com a recomendação do fabricante usando conjuntos de sondas para ⍺SMA e elastina com um termociclador Step One Plus (Applied Biosystems). Conforme mostrado nas Figuras 7, em uma DAR média aproximadamente igual, os conjugados tinham capacidade comparativamente igual para reduzir o para ⍺SMA e elastina nas células LL97a Figura 7 (A) como também nos fibroblastos normais (B). O asterisco denota o anticorpo que possui um domínio Fc de tipo selvagem.
Exemplo 15: A injeção intratumoral de inibidores de TGFβR2 reduz a expressão gênica de genes induzíveis por TGFβ relevantes à doença em dois modelos de xenoenxerto de câncer pancreático humano
[00472] Os inibidores de TGFβR2 foram testados quanto à sua capacidade de alterar a expressão in vivo de um conjunto de genes relatados como sendo regulados por TGFβ, particularmente aqueles associados a CAFs tumorais. Dois milhões de células BXCP3 (ATTC) ou 5 milhões de células PANC- 1 (ATTC) em Matrigel (Corning Life Sciences) foram inoculadas nos flancos de camundongos nus (JAX Labs) e deixados a crescer até um tamanho de aproximadamente 100 mm3 antes de serem classificadas em coortes para tratamento. Os tumores BXPC3 foram tratados por injeção intratumoral (IT) de 2ug QD5 do composto 211, composto 171 ou volume igual de veículo DMSO, enquanto os tumores PANC-1 receberam injeções de 2ug QD5 do composto 211 ou veículo de controle. Quatro horas após a última injeção, os tumores foram removidos e processados para RT-qPCR por homogeneização em tubos M (Miltenyi Biotec) usando o Kit Purelink RNA (Ambion) para isolar RNA e Taqman® RNA to CT 1 Step Kit (Applied
Biosystems) com um termociclador One Step Plus.
Os primers específicos do gene foram obtidos na ThermoFisher
Scientific.
Alguns primers eram específicos para o gene alvo de camundongo (ms), enquanto outros mediam os níveis de mRNA do gene derivados de células tumorais humanas e células de camundongo no tumor (ms/hu). O mRNA de ALAS1 não foi afetado pelo tratamento e foi usado como o gene de referência.
Os dados foram analisados e foram realizados gráficos usando
GraphPad Prism v8.1.0. A diferença estatística para a expressão do mRNA do gene entre o inibidor de TGFβR2 e coortes tratadas com veículo foi determinada usando comparação de teste T múltiplo com descoberta (FDR) pelo procedimento linear de duas fases de Benjamini, Krieger e
Yekutieli, com Q=5%. Cada linha foi analisada individualmente, sem assumir um SD consistente.
Conforme mostrado na Figura 8, um tratamento com o composto 211 diminuiu muitos mRNAs de genes induzíveis por TGFβ nos valores de tumores PANC-1, incluindo aqueles com valores q que passaram no teste de FDR (** q<0,005; * q<0,05). Também,
conforme mostrado na Figura 8B e 8C, o tratamento com o composto 211 ou composto 171 (B) e ou composto 211 (C)
reduziu o nível de mRNA da maioria dos genes induzíveis por
TGFβ nos tumores BXPC3, incluindo alguns que passaram no teste de FDR (* q<0,05, ** q<0,005 *** q<0,0005, ****
q<0,00005).
Exemplo 16: A injeção intratumoral in vivo de conjugados de inibidores de TGFβR2 reduz a expressão gênica de genes induzíveis por TGFβ no tumor
[00473] Para demonstrar que um inibidor de TGFβR2 conjugado a um anticorpo anti-LRRCl5 com regiões constantes de IgG2a de camundongo reduz mRNAs de tumor para genes induzíveis por TGFβ in vivo, o composto 171 foi covalentemente ligado ao anticorpo em resíduos de cisteína reativos após redução parcial de cistina com um ligante de maleimida PABC clivável para produzir anti-LRRCl5-LP35 a uma DAR média de 3,9. Células tumorais PANC-1 foram injetadas no flanco de camundongos nus (5.000.000 em Matrigel) e deixadas a crescer até atingirem 100 mm3 antes de iniciar o tratamento por injeção intratumoral de veículo PBS, l57ug de anticorpo anti-LRRCl5 não conjugado ou 157ug do conjugado em dias alternados para um total de 3 doses. Os tumores foram colhidos oito horas após a última dose, processados e submetidos a RT-qPCR e analisados conforme descrito acima.
A diferença estatística para a expressão do mRNA do gene entre o inibidor de TGFβR2 e coortes tratadas com veículo foi determinada usando a comparação de teste T múltiplo com descoberta (FDR) pelo procedimento linear de duas fases de Benjamini, Krieger e Yekutieli, com Q=5%. Cada linha foi analisada individualmente, sem assumir um SD consistente. O conjugado reduziu a média de mRNA de todos os genes (ELN,
TAGLN, Fn1, TGFbl e Acta2) com um número passando no teste de FDR (dados não mostrados).
Exemplo 17: A entrega sistêmica de conjugados anti-LRRC15 reduz os genes regulados por TGFβ em um modelo de xenoenxerto de tumor humano em camundongo
[00474] Conjugados anti-LRRCl5-mIgG2a de dois inibidores de TGFβR2 covalentemente ligados ao anticorpo LRRC15 em resíduos de cisteína por diferentes ligantes foram testados quanto à sua capacidade de inibir a expressão de genes regulados por TGFβ após dosagem sistêmica. Camundongos nus (JAX Labs) tinham 1,75 milhão de células tumorais BXPC3 semeadas em um flanco e foram classificados em coortes de tratamento após os tumores atingirem aproximadamente 100mm3.
Os animais receberam uma dose intravenosa de 20mpk por 4 dias consecutivos de um anticorpo anti-LRRCl5-LP35 (tipo selvagem IgG2), um conjugado anti-LRRCl5-LP36 (IgG2 de Fc null) ou controles que consistem no anticorpo anti-LRRCl5 não conjugado ou um controle correspondente ao isótipo do anticorpo anti-LRRCl5. Os tumores foram colhidos 8 horas após a dose final, processados para isolamento de RNA e os RNAs foram submetidos a RT-qPCR conforme descrito acima. Os resultados, mostrados na Figura 9, foram analisados estatisticamente como no Exemplo 14, usando uma Q=1% comparando a expressão de genes em animais tratados com o anticorpo não conjugado com os conjugados. O teste FDR foi passado para comparações marcadas com asteriscos (* q<0,0l, ** q<0,00l, *** q<0.000l).
Exemplo 18: A entrega sistêmica de um conjugado inibidor de TGFβR2 anti-LRRC15 é eficaz na redução da expressão gênica regulada por TGFβ em tumores em dois níveis de dosagem
[00475] Um conjugado de inibidor de TGFβR2 com anticorpo anti-LRRCl5, anti-LRRCl5-LP36, foi administrado por via intravenosa em 2 níveis de dose diferentes em camundongos nus com um xenoenxerto da linha celular de tumor humano BXPC3. Dois milhões de células tumorais por camundongo foram injetadas no flanco e depois que os tumores atingiram um tamanho aproximado de 100 mm3 foram classificados em grupos de tratamento. O grupo recebeu 4 injeções intravenosas diárias de 20mpk anti-LRRCl5-LP36, 5mpk anti-LRRCl5-LP36, 20mpk de anticorpo LRRC15 não conjugado ou 20mpk de um anticorpo de controle de isótipo. Oito horas após a dose final, os tumores foram colhidos, o RNA foi isolado e RT- qPCR foi realizado conforme descrito no Exemplo 14. Os resultados estão mostrados na Figura 10. Quando analisados estatisticamente pelo teste T múltiplo para descoberta com um FDR de Q=5%, todos os genes foram descobertos (* q<0,05; ** q<0,005) em ambas as doses mostrando expressão gênica regulada por TGFβ reduzida efetiva em comparação com o anticorpo não conjugado.
Exemplo 19: Atividade de conjugado rastreou atividade de moléculas pequenas
[00476] Os conjugados anti-LRRCl5 ou anti-HER2 foram preparados compreendendo os compostos 55, 56, 57, 61, 62, 64, 65, 67, 70, 73, 75, 83, 87, 88, 91, 102, 108, 112, 127, 129, 132, 136, 138, 139, 140, 142, 145, 162, 168, 169, 170, 171, 175, 181, 182, 184, 190, 194, 195, 197, 202, 203, 205, 211, 213, 219, 220, 222, 224, e 256 ligado ao ligante Ll abaixo em um nitrogênio substituível, conforme mostrado na Tabela 9B. O Composto 171 foi conjugado aos Ligantes Ll, L2, L3 e L4 abaixo. A DAR média estava entre 2 e 5.
Tabela 20 Ligante L1 Ligante L2 Ligante L3
Ligante L4
[00477] A potência dos conjugados de fármaco- anticorpo TGFβR2 descritos, testados por meio do ensaio repórter baseado em células segue proporcionalmente com a atividade observada para a atividade de molécula pequena no ensaio repórter baseado em células de molécula pequena. Para exemplos em que a atividade observada de uma molécula pequena é baixa quando avaliada pelo ensaio repórter baseado em células de molécula pequena e alta por medida no ensaio de inibição enzimática livre de células de molécula pequena, acredita-se, sem estar limitado pela teoria, que na maioria das vezes isso pode ser atribuído ao facto de a molécula possuir baixa permeabilidade celular. Nestes casos, a ordem de classificação da potência do conjugado de fármaco com anticorpo TGFβR2 aplicável segue mais de perto com a atividade observada no ensaio de inibição enzimática livre de células de molécula pequena.
Exemplo 20: Inibidores de TGFβR2 conjugados a um anticorpo anti-LRRC15 diminuem a fibrose histopatológica em um modelo de esclerodermia sistêmica
[00478] A fibrose foi induzida na pele de camundongos C3H/HeJ fêmeas de 5 a 7 semanas de idade por injeção subcutânea diária de bleomicina (0,1ml de 1,2u/ml) por 23 dias. O composto 2.1 foi covalentemente ligado a um anticorpo anti-LRRCl5 (anticorpo M25 humanizado com domínio Fc IgG1 de tipo selvagem) usando um ligante PABC clivável por protease.
O conjugado foi administrado 3x por semana ip a uma dose de lOmpk a uma coorte de 10 animais começando no dia 14 e terminando no dia 22. Como controle, uma coorte combinada de camundongos recebeu apenas veículo PBS. No dia 23, os camundongos foram sacrificados e a pele do local da injeção foi fixada com paraformaldeído e corada com a coloração de tricrômico de Masson por procedimentos padrão para revelar o colágeno. A fibrose, conforme avaliada pelo colágeno, foi pontuada por um histopatologista usando o sistema de classificação estabelecido na Tabela 21. Conforme observado na Figura 11, o tratamento com o conjugado reduziu a fibrose avaliada por esta medida, alcançando significância estatística indicada usando o teste de Comparação Múltipla de Dunn.
Tabela 21 0= Normal Tecido considerado normal sob as condições do estudo e considerando a idade, sexo e estirpe do animal em questão. Podem estar presentes alterações que, em outras circunstâncias, seriam consideradas como desvios do normal. 1= Mínimo A quantia de alteração quase não excede aquela que é considerada dentro dos limites normais. 2= Leve Em geral, a lesão é facilmente identificável, mas com gravidade limitada. A lesão provavelmente não produz nenhuma deficiência funcional. 3= Moderado A lesão é proeminente, mas existe potencial significativo para gravidade aumentada. É possível uma disfunção limitada de tecidos ou órgãos.
4= Grave O grau é tão completo como possível, ou suficientemente elevado em intensidade ou extensão para que se possa esperar disfunção significativa de tecidos ou órgãos.
Exemplo 21: Inibidores de TGFβR2 conjugados a um anticorpo anti-LRRC15 diminuem a fibrose em um modelo de fibrose sistêmica
[00479] O composto 2.1 foi covalentemente ligado a um anticorpo anti-LRRCl5 (anticorpo M25 humanizado com domínio Fc IgGl de tipo selvagem) usando um ligante PABC clivável por protease. Uma avaliação independente da fibrose por deposição de colágeno nos animais tratados com conjugado foi testada bioquimicamente usando um ensaio de colágeno Sircol em um pedaço pesado de pele não fixada do local de injeção usando o protocolo do fabricante para determinar microgramas/mg de colágeno. Conforme observado na Figura 12, quando analisado por Anova unilateral, a coorte tratada teve fibrose significativamente reduzida por esta medida.

Claims (212)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto representado pela Fórmula (I): Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: Anel A é cicloalquila não substituído ou substituído, heterocicloalquila não substituído ou substituído, arila não substituído ou substituído ou heteroarila não substituído ou substituído, em que quando o Anel A é substituído, os substituintes no Anel A são independentemente selecionados em cada ocorrência de R4; cada R4 é selecionado a partir de RL e R20, ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído; RL é ou ; cada Y é independentemente C1-C6alquileno substituído ou não substituído; em que quando Y é substituído, os substituintes em Y são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R5;
cada R5 é selecionado a partir de R20, ou dois R5 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído, ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
cada Z é independentemente -NR6S(=O)2-, -S(=O)2NR6-, -
OC(=O)-, -C(=O)O-, -C(=O)NR6-, ou -NR6C(=O)-; em que cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio,
alquila C1-C6 não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído e heterociclo não substituído ou substituído, ou um R5 e um R6 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
L é alquila C1-C6 não substituído ou substituído, C2-
C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
-C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou -C1-
C6alquileno-heterocicla não substituído ou substituído; em que quando L é substituído, os substituintes em L são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R7;
cada R7 é selecionado a partir de -SSR50 e R20;
s é 1-10;
R1 é selecionado a partir de hidrogênio e R20;
cada R2 é independentemente selecionado a partir de
R20, ou dois R2 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
m é 0-3;
R3 é selecionado a partir de (i), (ii), (iii) e (iv):
(ix) arila não substituído ou substituído, ou heteroarila não substituído ou substituído; em que quando
R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R10;
(x) cicloalquila não substituído ou substituído, ou heterocicloalquila não substituído ou substituído; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R11;
(xi) heterocicloalquila policíclico não substituído ou substituído, heterocicloalquila monocíclico de 3 a 5 membros não substituído ou substituído, heterocicloalquila monocíclico de 6 a 8 membros não substituído ou substituído compreendendo 1 ou 2 átomos de N e 1 ou 2 outros heteroátomos selecionados de O ou S; em que quando R3 é substituído, os substituintes em R3 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de R11; e
(xii) ;
em que quando R3 está na posição 2-, 5- ou 6- da piridina, R3 é selecionado a partir de (i), (ii) e
(iv), e quando R3 está na posição 4 da piridina, R3 é selecionado de (i), (iii) e (iv); e cada R10 é selecionado a partir de R20, ou dois R10 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
cada R11 é selecionado a partir de =O, =S e R20;
R12 é hidrogênio, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, C1-C6alquenila não substituído ou substituído,
C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, C1-C6alquenila-carbociclo não substituído ou substituído ou C1-C6alquileno-heterociclo substituído ou não substituído;
Q é -OR13, -NR13R13, -SR13, -CN, -C(=O)R14, -C(=O)NR13R13,
-S(=O)R14, ou -S(=O)2R14, ou -S(=O)2NR13R13;
R13 é hidrogênio, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, C1-C6alquenila não substituído ou substituído,
C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, C1-C6alquenila-carbociclo não substituído ou substituído ou C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
R14 é alquila C1-C6 não substituído ou substituído, C1-
C6alquenila não substituído ou substituído, C1-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído,
ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada U1 é -(CR15R16)-, em que cada R15 e R16 são selecionados independentemente a partir de hidrogênio e
R20;
r é 1-5;
cada R20 é independentemente halogênio, -CN, -OH, -
OR50, -SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -
S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -
OC(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, -
NR51C(=O)R50, -NR51C(=O)OR51, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, C2-C6alquenila não substituído ou substituído,
C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada R50 é independentemente selecionado dentre alquila C1-C6 não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada R51 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila C1-C6 não substituído ou substituído,
carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
ou dois R51 no mesmo átomo de N são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N não substituído ou substituído;
em que quando qualquer um de R2, R4, R5, R6, R10, R12,
R13, R14, R20, R50 e R51 são substituídos, substituintes em
R2 , R4 , R5 , R6 , R10, R12, R13, R14, R20, R50 e R51 são selecionados independentemente em cada ocorrência de halogênio, -CN, -NO2, -OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52,
-NR52R52, -NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, -SR52, -S(=O)R53, -
SO2R53, -SO2NR52R52, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, C1-C6haloalquila, carbociclo monocíclico não substituído ou substituído, heterocíclico não substituído ou substituído, ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar um C=O ou C=S e em que substituintes no referido alquila C1-C6 são independentemente selecionados a partir de R54 e substituintes no referido carbocilo e heterociclo são independentemente selecionados a partir de R55; cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros; ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N; e cada R53 é independentemente selecionado a partir de C1-C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros.
cada R54 é independentemente selecionado a partir de - OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52 e fenila; cada R55 é independentemente selecionado a partir de - OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, e alquila C1-C6 não substituído ou substituído em que os substituintes no referido alquila C1- C6 são independentemente selecionados a partir de R54.
2. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: quando qualquer um de R2, R4, R5, R6, R10, R12, R13, R14, R20, R50 e R51 são substituídos, substituintes em R2, R4, R5, R6 , R10, R12, R13, R14, R20, R50, e R51 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de halogênio, -CN, -NO2, -OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, - NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, -SR52, -S(=O)R53, -SO2R53, - SO2NR52R52, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, C1- C6haloalquila, carbociclo monocíclico, heterociclo monocíclico ou dois substituintes no mesmo carbono átomos são tomados em conjunto para formar um C=O ou C=S; e em que os substituintes no referido alquila C1-C6 são independentemente selecionados a partir de R54.
3. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: RL é ; e em que quando qualquer um de R2, R4, R5, R6, R10, R12, R13, R14, R20, R50 e R51 são substituídos, substituintes em R2 , R4 , R5 , R6 , R10, R12, R13, R14, R20, R50 e R51 são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de halogênio, -CN, -NO2, -OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, - C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, -SR52, - S(=O)R53, -SO2R53, -SO2NR52R52, C1-C6alquila, C1-C6haloalquila,
carbociclo monocíclico, heterociclo monocíclico ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar um C=O ou C=S.
4. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que quando o Anel A é arila, o anel A é substituído e os substituintes no Anel A são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R4; cada R4 é selecionado de R20 e , ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído; e cada R20 é independentemente halogênio, -CN, -OH, - OR50, -SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, - S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, - OC(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, - NR51C(=O)R50, -NR51C(=O)OR51, C2-C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1- C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou - C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído ou alquila C1-C6 substituído; com a condição de que quando alquila C1-C6 é substituído por -C(=O)NR52R52, -NR52R52, - NR52C(=O)R53, ou -NR52C(=O)OR52, o referido alquila C1-C6 é ainda substituído por pelo menos um de -OR52, -CO2R52, - (alquila C1-C6)-OR52, ou -(alquila C1-C6)-CO2R52.
5. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que quando o Anel A é arila, o anel A é substituído e os substituintes no Anel A são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R4; cada R4 é selecionado de R20 e , ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído; e cada R20 é independentemente halogênio, -CN, -OH, - OR50, -SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, - S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, - OC(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, - NR51C(=O)R50, -NR51C(=O)OR51, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, - C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído ou alquila C1-C6 substituído; com a condição de que quando alquila C1-C6 é substituído por -C(=O)NR52R52, -
NR52R52, -NR52C(=O)R53, ou -NR52C(=O)OR52, o referido alquila C1-C6 é ainda substituído por pelo menos um de -OR52, - CO2R52, -(alquila C1-C6)-OR52, ou -(alquila C1-C6)-CO2R52.
6. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 ou 5, caracterizado pelo fato de que: quando o Anel A é arila, o anel A é substituído com substituintes independentemente selecionados em cada ocorrência de R4; e cada R4 é selecionado a partir de R20.
7. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que: quando R20 é alquila C1-C6 substituído com -OR52, o referido alquila C1-C6 é adicionalmente substituído com pelo menos um de C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53 ou - NR52C(=O)OR52.
8. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que: quando R20 é alquila C1-C6 substituído com -OR52, o referido alquila C1-C6 é adicionalmente substituído com - NR52R52.
9. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que: quando R20 é C1-C6alquila, o referido alquila C1-C6 é substituído por -NR52R52 e pelo menos um dentre -OR52, - CO2R52, -(alquila C1-C6)-OR52, ou -(alquila C1-C6)-CO2R52.
10. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que: R1 é hidrogênio
11. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que: cada R2 é independentemente -F ou -Cl e m é 1.
12. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que: m é 0.
13. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o anel A é fenila.
14. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é representado pela Fórmula (II): Fórmula (II) em que: o anel B é arila ou heteroarila; e n é 0-5.
15. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que n é 1-5.
16. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que: O anel B é fenila ou heteroarila de 5 ou 6 membros.
17. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que: O anel B é pirrola, furano, tiofeno, imidazola, pirazola, oxazola, isoxazola, tiazola, isotizola, triazola, oxadiazola, tiadiazola, tetrazola, piridina, piridazina, pirimidina, pirazina ou triazina.
18. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que: O anel B é fenila.
19. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 18, caracterizado pelo fato de que n é 1-3.
20. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que: cada R4 é independentemente RL, halogênio, -CN, -OH, - OR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50, - S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído.
21. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que: cada R4 é independentemente RL, halogênio, -CN, -OH, - OR50, -NR51R51, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -C(=O)OR51, - C(=O)NR51R51, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, ou heterociclo -C1-C6alquileno não substituído ou substituído.
22. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que: cada R4 é independentemente RL, -F, -Cl, -Br, -OR50, - NR51R51, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)NR51R51, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído.
23. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que: quando R4 é substituído, os substituintes em R4 são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de halogênio, -CN, -OH, -O-C1-C6alquila, -O-benzila, -CO2H, -CO2-C1-C6alquila, -C(=O)-C1-C6alquila, -C(=O)NR52R52, - NR52R52, -NHC(=O)-C1-C6alquila, -NHC(=O)OBn, -NHC(=O)O-C1- C6alquila, -SO2NR52R52, alquila C1-C6 ou C1-C6haloalquila; ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar um C=O; e cada R52 é independentemente selecionado dentre hidrogênio ou C1-C6alquila; ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N.
24. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 ou 10 a 23, caracterizado pelo fato de que: cada Y é C1-C2alquileno independentemente substituído ou não substituído; em que quando Y é substituído, os substituintes em Y são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R5; e cada R5 é -CH3.
25. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 ou 10 a 24, caracterizado pelo fato de que: cada Z é independentemente -C(=O)NR6- ou -NR6C(=O)-; e cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio ou alquila C1-C6 não substituído ou substituído.
26. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 ou 10 a 25, caracterizado pelo fato de que: L é alquila C1-C6 não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído; em que quando L é substituído, os substituintes em L são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R7; e cada R7 é independentemente halogênio, -CN, -OH, -OR50, -SH, -SR50, -SSR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, - OC(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, - NR51C(=O)R50, -NR51C(=O)OR51, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, C2-C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído.
27. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 ou 10 a 26, caracterizado pelo fato de que: L é alquila C1-C6 não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído ou heterociclo não substituído ou substituído; em que quando L é substituído, os substituintes em L são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R7; e cada R7 é independentemente -OR50, -SSR50, -SH, -SR50, - NR51R51, -C(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, ou carbociclo não substituído ou substituído.
28. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que: cada R7 é independentemente -OR50, -SSR50, -NR51R51, - C(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, alquila C1- C6 não substituído ou substituído, ou carbociclo não substituído ou substituído.
29. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 ou 10 a 28, caracterizado pelo fato de que: s é 1 ou 2.
30. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2 ou 4 a 29, caracterizado pelo fato de que: RL é
31. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 ou 10 a 19, caracterizado pelo fato de que cada R4 é independentemente
, , , , , ,
, , , , ,
, , , , , , ,
, , , , ,
, , , , ,
, , , , , ,
, , ,
, , ,
, , ,
, , , ,
, , , , , , ou .
32. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato de que: dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
33. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que: o heterociclo monocíclico não substituído ou substituído é um heterociclo monocíclico de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído.
34. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que é , , , ou , , , , , , , ,
, ,
, , ,
, , ,
, , ,
, , , ,
, , ,
, , , ,
, , , ,
, , ,
, , , ,
, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ou .
35. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 19, caracterizado pelo fato de que: cada R4 é independentemente selecionado a partir de halogênio, -OH, -OR50, -NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, - C(=O)OR51, -OC(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, - NR51C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, -NR51C(=O)OR51, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído e alquila C1-C6 substituído, com a condição de que alquila C1-C6 é substituído por -NR52R52 e pelo menos um de -OR52, -CO2R52, -(alquila C1-C6)-OR52, ou (alquila C1-C6)- CO2R52, ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
36. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 19, caracterizado pelo fato de que: cada R4 é independentemente selecionado a partir de halogênio, -OR50, -NR51R51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, heterociclo não substituído ou substituído e alquila C1-C6 substituído com a condição de que alquila C1-C6 é substituído com -NR52R52 e pelo menos um de -OR52, -CO2R52, - (alquila C1-C6)-OR52 ou (alquila C1-C6)-CO2R52; ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
37. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 19, caracterizado pelo fato de que:
cada R4 é independentemente selecionado de halogênio, -OR50, -NR51R51, -C(=O)NR51R51, um heterociclo monocíclico saturado de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído contendo 1 ou 2 heteroátomos de anel independentemente selecionados de nitrogênio e oxigênio, e alquila C1-C6 substituído com a condição de que alquila C1-C6 é substituído por -NR52R52 e pelo menos um dentre -OR52, - CO2R52, -(alquila C1-C6)-OR52, ou (alquila C1-C6)-CO2R52; ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico de 6 membros não substituído ou substituído em que o referido heterociclo contém 1 ou 2 heteroátomos no anel selecionado independentemente de nitrogênio e oxigênio.
38. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 37, caracterizado pelo fato de que: pelo menos um R4 é selecionado a partir de alquila C1- C6 substituído com -NR52R52 e pelo menos um de -OR52, -CO2R52, -(alquila C1-C6)-OR52 ou (alquila C1-C6)-CO2R52.
39. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 38, caracterizado pelo fato de que o alquila C1-C6 substituído é selecionado a partir de:
, , e .
40. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 39, caracterizado pelo fato de que cada R52 do referido substituinte alquila C1-C6 é independentemente selecionado a partir de H e alquila C1-3 (de preferência H e metila).
41. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 40, caracterizado pelo fato de que: pelo menos um R4 é OR50.
42. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 41, caracterizado pelo fato de que: R50 de -OR50 é independentemente selecionado a partir de alquila C1-C6 não substituído ou substituído, heterociclo saturado de 4, 5 ou 6 membros não substituído ou substituído, compreendendo um heteroátomo de anel selecionado a partir de nitrogênio e carbociclo saturado de 4, 5 ou 6 membros não substituído ou substituído.
43. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a 42, caracterizado pelo fato de que: quando R50 de -OR50 é alquila C1-C6 substituído, os substituintes no referido alquila são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de CO2R52, -OR52, -
NR52R52, -(alquila C1-C6)-OR52, (alquila C1-C6)-CO2R52 e - (alquila C1-C6)-NR52R52.
44. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que: quando R50 de -OR50 é alquila C1-C6 substituído, os substituintes no referido alquila C1-C6 são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de -CO2R52, -OR52 e -NR52R52.
45. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a 44, caracterizado pelo fato de que: quando R50 de -OR50 é alquila C1-C6 substituído, OR50 é: alquila alquila , , alquila alquila , , alquila alquila , , ou alquila .
46. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 41 a 45, caracterizado pelo fato de que quando R50 de -OR50 é alquila C1-C6 substituído, cada R52 do alquila C1-C6 substituído é independentemente selecionado a partir de H e alquila C1-3.
47. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 46, caracterizado pelo fato de que: quando R50 de -OR50 é um heterociclo ou carbociclo, R50 de -OR50 é uma pirrolidina não substituído ou substituído, piperidina não substituído ou substituído, azetidina não substituído ou substituído, ou ciclobutila não substituído ou substituído.
48. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 47, caracterizado pelo fato de que: quando R50 de -OR50 é um heterociclo ou carbociclo, substituintes no referido heterociclo ou carbociclo são independentemente selecionados a partir de CO2R52, -OR52, - NR52R52 e alquila C1-C6 não substituído ou substituído, em que substituintes no referido alquila C1-C6 são independentemente selecionados a partir de -OR52, -CO2R52 ou -NR52R52.
49. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que: quando R50 de -OR50 é um heterociclo ou carbociclo, substituintes no referido heterociclo e carbociclo são independentemente selecionados a partir de CO2R52, -OR52, - NR52R52 e alquila C1-C6 não substituído.
50. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 49, caracterizado pelo fato de que cada R52 dos substituintes no referido heterociclo ou carbociclo são independentemente selecionados a partir de H e alquila C1-3 (preferencialmente H e metila).
51. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 50, caracterizado pelo fato de que: quando R50 de -OR50 é um heterociclo, R50 está ligado ao átomo de oxigênio de -OR50 em um átomo do anel de carbono.
52. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 51, caracterizado pelo fato de que: pelo menos um R4 é um heterociclo monocíclico saturado não substituído ou substituído de 5 ou 6 membros.
53. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 52, caracterizado pelo fato de que: quando R4 é um heterociclo substituído, os substituintes no referido heterociclo são independentemente selecionados a partir de CO2R52, -OR52, -NR52R52 e alquila C1- C6 não substituído ou substituído, em que os substituintes no referido alquila C1-C6 são independentemente selecionados a partir de -OR52, -CO2R52, -NR52R52 e fenila.
54. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que:
quando R4 é um heterociclo substituído, os substituintes no referido heterociclo são independentemente selecionados a partir de CO2R52, -OR52, -NR52R52, alquila C1- C6 não substituído e alquila C1-C6 substituído com fenila.
55. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 54, caracterizado pelo fato de que cada R52 dos substituintes no referido heterociclo é independentemente selecionado a partir de H e C1-3 alquila.
56. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 55, caracterizado pelo fato de que: pelo menos um R4 é -NR51R51.
57. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 56, caracterizado pelo fato de que: cada R51 de -NR51R51 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila C1-C6 não substituído ou substituído e heterociclo contendo N saturado não substituído ou substituído; ou dois R51 de -NR51R51 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N não substituído ou substituído.
58. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 57, caracterizado pelo fato de que: quando um ou dois de R51 de -NR51R51 é um heterociclo, é um heterociclo saturado substituído ou não substituído de 5 ou 6 membros contendo um heteroátomo de anel selecionado de nitrogênio.
59. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 58, caracterizado pelo fato de que: quando um ou dois de R51 de -NR51R51 é alquila C1-C6 substituído, os substituintes no referido alquila C1-C6 são independentemente selecionados a partir de OR52, -NR52R52 e - CO2R52 ou dois substituintes do mesmo átomo de carbono são tomados juntos para formar C=O; e quando um ou dois de R51 de -NR51R51 é um heterociclo, os substituintes no referido heterociclo são independentemente selecionados a partir de OR52, -NR52R52, - CO2R52, alquila C1-C6 não substituído e alquila C1-C6 substituído com substituintes independentemente selecionados de -OR52, -NR52R52, e -CO2R52.
60. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 59, caracterizado pelo fato de que: quando um ou dois de R51 de -NR51R51 é um alquila C1-C6 substituído, os substituintes no alquila C1-C6 são independentemente selecionados a partir de OR52, -NR52R52 e - CO2R52.
61. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 60, caracterizado pelo fato de que: cada R51 de -NR51R51 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e alquila C1-C6 não substituído ou substituído, em que os substituintes no alquila C1-C6 são independentemente selecionados a partir de OR52, -NR52R52 e - CO2R52.
62. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 61, caracterizado pelo fato de que - NR51R51 é , , , ou .
63. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 59 a 62, caracterizado pelo fato de que: cada R52 dos referidos substituintes alquila e referidos substituintes heterociclo são independentemente selecionados a partir de hidrogênio e alquila C1-3 (preferencialmente H e metila).
64. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 63, caracterizado pelo fato de que: quando dois R51 de -NR51R51 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, eles formam um heterociclo contendo N saturado de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído.
65. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 64, caracterizado pelo fato de que:
quando dois R51 de -NR51R51 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual eles estão ligados, eles formam um heterociclo contendo N saturado de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído, em que os referidos substituintes são independentemente selecionados a partir de -NR52R52, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, e heterociclo monocíclico saturado contendo N não substituído ou substituído, ou dois substituintes do mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar C=O.
66. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que: substituintes no referido alquila C1-C6 são independentemente selecionados a partir de OR52, NR52R52 e CO2R52 e os substituintes no referido heterociclo monocíclico saturado contendo N são independentemente selecionados a partir de OR52, NR52R52, CO2R52, e alquila C1- C6 não substituído ou substituído em que os referidos substituintes de alquila C1-C6 são selecionado independentemente a partir de OR52, NR52R52 e CO2R52.
67. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 66, caracterizado pelo fato de que: quando dois R51 de -NR51R51 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, eles formam um heterociclo saturado contendo N de 6 membros substituído, em que os substituintes são meta ou para ao anel B.
68. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 67, caracterizado pelo fato de que: quando dois R51 de -NR51R51 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um anel de 6 membros, eles formam uma piperazina substituído ou não substituído ou piperidina substituído ou não substituído.
69. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 66, caracterizado pelo fato de que: quando dois R51 de -NR51R51 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um anel de 5 ou 6 membros, -NR51R51 é: , , , , , , , , , ,
, , , , ou .
70. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 65 a 69, caracterizado pelo fato de que cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e alquila C1-3 (de preferência H e metila).
71. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 70, caracterizado pelo fato de que pelo menos um de R4 é halogênio.
72. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 71, caracterizado pelo fato de que pelo menos um de R4 é cloro.
73. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 72, caracterizado pelo fato de que quando o Anel B é substituído, ele é substituído pelo menos na posição para em relação à pirazina.
74. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 73, caracterizado pelo fato de que n é 1 ou 2.
75. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 74, caracterizado pelo fato de que n é 1.
76. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 75, caracterizado pelo fato de que pelo menos um de R4 é:
, , , ,
, , , , ,
, , , ,
, , , , ,
, , , ,
, , , , ,
, , , , ,
, , ou .
77. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que: quando dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados, eles formam um carbociclo monocíclico de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico de 6 membros não substituído ou substituído com um ou dois heteroátomos de anel selecionados a partir de oxigênio e nitrogênio; em que os substituintes no referido carbociclo e heterociclo são independentemente selecionados a partir de -NR52R52, -OR52, -CO2R52, alquila C1-C6 não substituído e alquila C1-C6 substituído, em que os substituintes no referido alquila C1-C6 são independentemente selecionados a partir de -NR52R52, -OR52 e -CO2R52.
78. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que é: , , , , , , , , , ,
, , , , , , , , , , , , , ou .
79. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 78, caracterizado pelo fato de que cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e alquila C1-3 (de preferência hidrogênio e metila).
80. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 79, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é representado pela Fórmula (I-A), Fórmula (I-B) ou Fórmula (I-C):
Fórmula (I-A) Fórmula (I-B) Fórmula (I-C).
81. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 80, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é representado pela Fórmula (I-A).
82. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 79, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é representado pela Fórmula (I-D): Fórmula (I-D)
83. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 79, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é representado pela Fórmula (II-A), (II-B) ou (IIC).
, Fórmula (II-A) Fórmula (II-B) Fórmula (II-C).
84. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 79, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é representado pela Fórmula (II-D): Fórmula (II-D).
85. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 84, caracterizado pelo fato de que: R3 é arila não substituído ou substituído, ou heteroarila não substituído ou substituído.
86. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 85, caracterizado pelo fato de que: R3 é fenila não substituído ou substituído, ou heteroarila de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído.
87. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 86, caracterizado pelo fato de que: R3 é fenila não substituído.
88. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 86, caracterizado pelo fato de que: R3 é heteroarila não substituído ou substituído selecionado de pirrola, furano, tiofeno, imidazola, pirazola, oxazola, isoxazola, tiazola, isotizola, triazola, oxadiazola, tiadiazola, tetrazola, piridina, piridazina, pirimidina, pirazina e triazina.
89. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 88, caracterizado pelo fato de que: R3 é imidazola não substituído ou substituído, triazola não substituído ou substituído ou piridina não substituído ou substituído.
90. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 85 a 89, caracterizado pelo fato de que: cada R10 é independentemente halogênio, -CN, -OH, - OR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50, - S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51,
-NR51C(=O)R50, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído.
91. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 90, caracterizado pelo fato de que: cada R10 é independentemente -F, -Cl, -Br, -CN, -OH, - OR50, -NR51R51, -C(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, ou alquila C1-C6 não substituído ou substituído.
92. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 85 a 89, caracterizado pelo fato de que: dois R10 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído de - ou 6 membros.
93. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 85, caracterizado pelo fato de que R3 é , , , , , , , , , , , , ,
, , , , , , , , , , , , , , , , , ou .
94. Composto ou sal, de acordo com as reivindicações de 1 a 84, caracterizado pelo fato de que: R3 é heterocicloalquila monocíclico de 6 a 8 membros não substituído ou substituído compreendendo 1 ou 2 átomos de N no anel e 1 ou 2 outros heteroátomos de anel selecionados a partir de O ou S.
95. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 94, caracterizado pelo fato de que: R3 é heterocicloalquila monocíclico de 6 a 8 membros não substituído ou substituído compreendendo 1 átomo de N de anel e 1 outro heteroátomo de anel selecionado de O ou S.
96. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 95, caracterizado pelo fato de que: R3 é heterocicloalquila monocíclico de 6 a 8 membros não substituído ou substituído selecionado de morfolinila, tiomorfolinila, dióxido de tiomorfolinila, oxazepanila, tiazepanila, oxazocanila e tiazocanila.
97. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 96, caracterizado pelo fato de que: R3 é morfolinila não substituído.
98. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 94 a 97, caracterizado pelo fato de que: R3 está conectado através de um átomo de anel N de R3.
99. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 84, caracterizado pelo fato de que R3 é ou .
100. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 99, caracterizado pelo fato de que R3 é .
101. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 84, caracterizado pelo fato de que R3 é em que R12 e R16 são hidrogênio e R13 é metila.
102. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 84, caracterizado pelo fato de que R3 é
, , , , , , , , , , , ou .
103. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 102, caracterizado pelo fato de que o Anel A não é substituído por –CH2CH2OH.
104. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação de 1 a 103, caracterizado pelo fato de que o Anel A não é substituído por hidroxialquila.
105. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 102, caracterizado pelo fato de que quando o Anel A é fenila, o referido Anel não é substituído por –CH2CH2OH na posição para a pirazina.
106. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 102, caracterizado pelo fato de que quando o Anel A é fenila, o Anel A não é substituído por – CH2CH2OH.
107. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 102, caracterizado pelo fato de que quando o Anel A é fenila, o Anel A não é substituído por hidroxialquila.
108. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 107, caracterizado pelo fato de que o composto não é ou um sal deste.
109. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 108, caracterizado pelo fato de que o Anel A não é substituído por um grupo selecionado de – CH2CH2NH2, -CH2NHBoc, -CH2NH2, , , , ou .
110. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 109, caracterizado pelo fato de que o Anel A não é substituído por um grupo aminoalquila opcionalmente substituído.
111. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 108, caracterizado pelo fato de que quando o Anel A é fenila, o Anel A não é substituído na posição para com a pirazina com -CH2CH2NH2, -CH2NHBoc, -
CH2NH2, , , , ou .
112. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 108, caracterizado pelo fato de que quando o Anel A é fenila, o Anel A não é substituído por – CH2CH2NH2, -CH2NHBoc, -CH2NH2, , , , ou .
113. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 108, caracterizado pelo fato de que quando o Anel A é fenila, o Anel A não é substituído por um aminoalquila opcionalmente substituído.
114. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 113, caracterizado pelo fato de que o composto não é , , , , , , , ou um sal de qualquer um deles.
115. Composto representado pela Fórmula (I-E): Fórmula (I-E) ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que: cada um de R40, R41, R42, R43 e R44 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, RL e R20; ou dois de R40, R41, R42, R43 e R44 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído em que quando o referido carbociclo monocíclico ou o referido heterociclo monocíclico são substituídos, os substituintes são selecionados independentemente em cada ocorrência a partir de halogênio, -CN, -NO2, -OR52, -CO2R52,
-C(=O)R53, -C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, -
NR52C(=O)OR52, -SR52, -S(=O)R53, -SO2R53, -SO2NR52R52, C1-
C6alquila, C1-C6haloalquila, aminoC1-C6alquila-, Boc-aminoC1-
C6alquila-, Cbz-aminoC1-C6Alquila-, carbociclo monocíclico e heterociclo monocíclico; ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar =O ou
=S;
cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila,
benzila, heteroarila de 5 membros, e heteroarila de 6 membros;
ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N; e cada R53 é independentemente selecionado a partir de
C1-C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila,
heteroarila de 5 membros, e heteroarila de 6 membros;
RL é ;
cada Y é independentemente C1-C6alquileno substituído ou não substituído; em que quando Y é substituído, os substituintes em Y são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R5;
cada R5 é selecionado a partir de R20, ou dois R5 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído, ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
cada Z é independentemente -NR6S(=O)2-, -S(=O)2NR6-, -
OC(=O)-, -C(=O)O-, -C(=O)NR6-, ou -NR6C(=O)-; em que cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio,
alquila C1-C6 não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído e heterociclo não substituído ou substituído, ou um R5 e um R6 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
L é alquila C1-C6 não substituído ou substituído, C2-
C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído,
-C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído ou -C1-C6alquileno-heterociclo substituído; em que quando L é substituído, os substituintes em L são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de R7;
cada R7 é selecionado a partir de -SSR50 e R20;
s é 1-10;
R1 é selecionado a partir de hidrogênio e R20;
cada R2 é independentemente selecionado a partir de
R20, ou dois R2 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído;
m é 0-3;
cada R20 é independentemente halogênio, -CN, -OH, -
OR50, -SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, -NR51S(=O)2R50, -
S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -
OC(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, -NR51C(=O)NR51R51, -
NR51C(=O)R50, -NR51C(=O)OR51, alquila C1-C6 não substituído ou substituído, C2-C6alquenila não substituído ou substituído,
C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
cada R50 é independentemente selecionado dentre alquila C1-C6 não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído; e cada R51 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, alquila C1-C6 não substituído ou substituído,
carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído;
ou dois R51 no mesmo átomo de N são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N não substituído ou substituído;
em que quando qualquer um de R2, R5, R6, R20, R50 e R51 são substituídos, os substituintes de R2, R5, R6, R20, R50 e
R51 são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de halogênio, -CN, -NO2, -OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, -
C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, -SR52, -
S(=O)R53, -SO2R53, -SO2NR52R52, C1-C6alquila, C1-C6haloalquila,
carbociclo monocíclico e heterociclo monocíclico; ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar um C=O ou C=S; e em que R42 não é –CH2CH2OH, –CH2CH2NH2, -CH2NHBoc, - CH2NH2, , , , ou .
116. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 115, caracterizado pelo fato de que: cada um de R40, R41, R42, R43 e R44 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, RL e R20; ou dois de R40, R41, R42, R43 e R44 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído; em que quando o referido carbociclo monocíclico ou o referido heterociclo monocíclico são substituídos, os substituintes são independentemente selecionados em cada ocorrência a partir de halogênio, -CN, -NO2, -OR52, -CO2R52, -C(=O)R53, - C(=O)NR52R52, -NR52R52, -NR52C(=O)R53, -NR52C(=O)OR52, -SR52, - S(=O)R53, -SO2R53, -SO2NR52R52, C1-C6alquila, C1-C6haloalquila, carbociclo monocíclico e heterociclo monocíclico; ou dois substituintes no mesmo átomo de carbono são tomados em conjunto para formar =O ou =S;
cada R52 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, C1-C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros; ou dois grupos R52 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados para formar um heterociclo contendo N; e cada R53 é independentemente selecionado a partir de C1-C6alquila, C3-C6cicloalquila, fenila, benzila, heteroarila de 5 membros e heteroarila de 6 membros; em que R42 não é –CH2CH2OH, –CH2CH2NH2, -CH2NHBoc, - CH2NH2, , , , ou .
117. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 115 ou 116, caracterizado pelo fato de que R42 não é hidroxialquila.
118. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 117, caracterizado pelo fato de que cada um de R40, R41, R42, R43 e R44 não é –CH2CH2OH.
119. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação de 115 a 117, caracterizado pelo fato de que cada um de R40, R41, R42, R43 e R44 não é hidroxialquila.
120. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 119, caracterizado pelo fato de que m é 0.
121. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 120, caracterizado pelo fato de que R1 é hidrogênio.
122. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 121, caracterizado pelo fato de que: R42 é selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, - CN, -OH, -OR50, -SH, -SR50, -NO2, -NR51R51, -S(=O)2R50, - NR51S(=O)2R50, -S(=O)R50, -S(=O)2NR51R51, -C(=O)R50, -OC(=O)R50, -C(=O)OR51, -OC(=O)OR51, -C(=O)NR51R51, -OC(=O)NR51R51, - NR51C(=O)NR51R51, -NR51C(=O)R50, -NR51C(=O)OR51, C3-C6alquila não substituído ou substituído, C2-C6alquenila não substituído ou substituído, C2-C6alquinila não substituído ou substituído, carbociclo não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, -C1- C6alquileno-carbociclo não substituído ou substituído, ou - C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído; ou R42 juntamente com R41 são tomados juntamente com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
123. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 122, caracterizado pelo fato de que: R42 é selecionado a partir de hidrogênio, halogênio, - OH, -OR50, -S(=O)2R50, -C(=O)R50, C3-C6alquila não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído e -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído; ou R42 juntamente com R41 são tomados juntamente com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
124. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 122, caracterizado pelo fato de que: R42 é selecionado a partir de hidrogênio, -OR50, - S(=O)2R50, -C(=O)R50, C3-C6alquila não substituído ou substituído, -C1-C6alquileno-heterociclo não substituído ou substituído; ou R42 juntamente com R41 são tomados juntamente com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
125. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 124, caracterizado pelo fato de que:
pelo menos um de R40, R41, R42, R43 e R44 é: (i) -OR50 quando R50 é alquila C1-C6 substituído com - NR52R52, -NR52C(=O)R53, ou -NR52C(=O)OR52; (ii) alquila C1-C6 substituído com -CO2R52 ou -OR52 e um de -NR52R52, -NR52C(=O)R53, e -NR52C(=O)OR52; ou (iii) R41 e R42 são tomados em conjunto com o anel fenila ao qual estão ligados para formar um sistema de anel substituído ou não substituído representado por , , , , , , , , , , , , , ou .
126. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 115 a 124, caracterizado pelo fato de que:
R40, R41, R43 e R44 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, halogênio, -OR50, -C(=O)OR51, e alquila C1-C6 não substituído ou substituído; ou R41 juntamente com R42 ou R41 juntamente com R40 são tomados juntamente com os átomos aos quais estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
127. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 126, caracterizado pelo fato de que: R40, R41, R43 e R44 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, e -OR50; ou R41 juntamente com R42 são tomados juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico não substituído ou substituído ou um heterociclo monocíclico não substituído ou substituído.
128. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 127, caracterizado pelo fato de que R40, R41, R43 e R44 são cada um hidrogênio.
129. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 128, caracterizado pelo fato de que um hidrogênio em um átomo de nitrogênio reativo é substituído por um grupo protetor de amino.
130. Composto ou sal, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado a partir de qualquer um dos compostos na Tabela 14 (por exemplo, compostos 1.1, 1.2, 2.1, 3.1, 4.1, 5.1 ou 6 a 301) ou um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer um deles.
131. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 130, e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
132. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 130, caracterizado pelo fato de que o composto é covalentemente ligado a um ligante L3 para formar um composto-ligante (por exemplo, composto-L3).
133. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 132, caracterizado pelo fato de que -L3 está covalentemente ligado a um átomo de nitrogênio, átomo de oxigênio ou átomo de enxofre substituível do composto ou sal, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 130.
134. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 132, caracterizado pelo fato de que -L3 está covalentemente ligado a um átomo de nitrogênio ou átomo de enxofre substituível de um composto ou sal, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 130.
135. Composto-ligante, de acordo com qualquer uma das reivindicações 132 a 134, caracterizado pelo fato de que - L3 é um ligante clivável.
136. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 135, caracterizado pelo fato de que -L3 é clivável por uma enzima lisossomal.
137. Composto-ligante, de acordo com qualquer uma das reivindicações 132 a 136, caracterizado pelo fato de que - L3 está covalentemente ligado ao composto ou sal, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 130 através do Anel A ou Anel B.
138. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 137, caracterizado pelo fato de que pelo menos um R4 é independentemente selecionado a partir de: (1) alquila C1-C6 substituído que é substituído com - NR52R52 e pelo menos um de -OR52, -CO2R52, -(alquila C1-C6)- OR52 ou (alquila C1-C6)-CO2R52; e em que um R52 de -NR52R52 é substituído por -L3; (2) -OR50 em que R50 de -OR50 é alquila C1-C6 substituído, pelo menos um substituinte no referido alquila é -NR52R52; e em que um R52 de -NR52R52 é substituído por -L3; (3) -OR50 em que R50 de -OR50 é um heterociclo ou carbociclo, pelo menos um substituinte no referido heterociclo e carbociclo é -NR52R52 ou alquila C1-C6 substituído com pelo menos um substituinte selecionado de - NR52R52; e em que um R52 de -NR52R52 é substituído por -L3; (4) heterociclo substituído em que pelo menos um substituinte no referido heterociclo é -NR52R52 ou alquila
C1-C6 substituído com pelo menos um substituinte selecionado a partir de -NR52R52; e em que um R52 de -NR52R52 é substituído por -L3;
(5) -NR51R51; em que um R51 de -NR51R51 é substituído por
-L3;
(6) -NR51R51, em que um R51 de -NR51R51 é alquila C1-C6 substituído com pelo menos um -NR52R52; e em que um R52 de -
NR52R52 é substituído por -L3;
(7) -NR51R51 em que um R51 de -NR51R51 é um heterociclo e pelo menos um substituinte no referido heterociclo é -
NR52R52 ou alquila C1-C6 substituído com pelo menos um substituinte selecionado de -NR52R52; e em que um R52 de -
NR52R52 é substituído por -L3; ou
(8) -NR51R51 em que dois R51 de -NR51R51 são tomados em conjunto com o átomo de N ao qual estão ligados, eles formam um heterociclo contendo N saturado com 5 ou 6 membros não substituído ou substituído em que pelo menos um dos referidos substituintes é NR52R52 ou alquila C1-C6 substituído com pelo menos um substituinte selecionado de -
NR52R52, e em que um R52 de -NR52R52 está substituído com -L3;
ou dois R4 em átomos adjacentes são tomados em conjunto com os átomos aos quais eles estão ligados para formar um carbociclo monocíclico de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído ou heterociclo monocíclico de 6 membros não substituído ou substituído com um ou dois heteroátomos de anel selecionados de oxigênio e nitrogênio, e pelo menos um substituinte no referido carbociclo e heterociclo é -NR52R52 ou alquila C1-C6 substituído com pelo menos um substituinte selecionado de -NR52R52; e em que um R52 de -NR52R52 é substituído por -L3.
139. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 137, caracterizado pelo fato de que: pelo menos um R4 é selecionado a partir de qualquer um dos grupos R4 na Tabela 9A.
140. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 139, caracterizado pelo fato de que: pelo menos um R4 é selecionado a partir de qualquer um dos grupos R4 na Tabela 9A; e cada R51 e R52 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio e alquila C1-3.
141. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 137, caracterizado pelo fato de que o composto-ligante é selecionado a partir de qualquer um dos compostos-ligantes estabelecidos na Tabela 9B; ou um sal dos mesmos.
142. Composto-ligante, de acordo com qualquer uma das reivindicações 132 a 141, caracterizado pelo fato de que - L3 é selecionado a partir de qualquer um dos ligantes estabelecidos na Tabela 3, Tabela 4, Tabela 6 e Tabela 7; ou um sal dos mesmos.
143. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 142, caracterizado pelo fato de que -L3 é representado pela fórmula: em que: L4 representa o terminal C do peptídeo e L5 é selecionado a partir de uma ligação, alquileno e heteroalquileno, em que L5 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de R30, e RX é uma fração reativa; e R30 é independentemente selecionado em cada ocorrência de halogênio, -OH, -CN, -O-alquila, -SH, =O, =S, -NH2, - NO2; e C1-C10alquila, C2-C10alquenila e C2-C10alquinila, cada um dos quais é independentemente opcionalmente substituído em cada ocorrência com um ou mais substituintes selecionados de halogênio, -OH, -CN, -O-alquila, -SH, =O, =S, -NH2 e -NO2.
144. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 143, caracterizado pelo fato de que RX compreende um grupo de saída.
145. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 144, caracterizado pelo fato de que RX é uma maleimida ou um alfa-halo carbonila.
146. Composto-ligante, de acordo com qualquer uma das reivindicações 143 a 145, caracterizado pelo fato de que o peptídeo de -L3 compreende Val-Cit ou Val-Ala.
147. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 137, caracterizado pelo fato de que o composto ligado covalentemente a um ligante é selecionado a partir de qualquer um dos compostos-ligante estabelecidos na Tabela 12; ou um sal dos mesmos.
148. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 137 ou reivindicação 147, caracterizado pelo fato de que - L3 é selecionado a partir de qualquer um dos ligantes estabelecidos na Tabela 10.
149. Composto-ligante, de acordo com a reivindicação 137, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir de qualquer um dos ligantes compostos estabelecidos na Tabela 15, 16 ou 17.
150. Composto-ligante, de acordo com qualquer uma das reivindicações 132 a 149, caracterizado pelo fato de que - L3 é ainda covalentemente ligado a uma fração de direcionamento para formar um conjugado.
151. Conjugado representado pela fórmula: Fração Alvo caracterizado pelo fato de que:
n é 1-20; D é o composto ou sal farmaceuticamente aceitável conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 130; e L3 é uma fração de ligação.
152. Conjugado, de acordo com a reivindicação 151, caracterizado pelo fato de que -L3- é representado por qualquer um dos ligantes estabelecidos na Tabela 5, Tabela 8 ou Tabela 11.
153. Conjugado, de acordo com a reivindicação 151, caracterizado pelo fato de que D-L3 é um composto-ligante selecionado a partir de qualquer uma das reivindicações de 132 a 149.
154. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 151 a 153, caracterizado pelo fato de que n é de 1-8, 3-5 ou 2.
155. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 151 a 154, caracterizado pelo fato de que D- L3 é um composto-ligante selecionado a partir de qualquer um dos compostos-ligante da Tabela 15, 16 ou 17 ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
156. Composto-ligante, de acordo com qualquer uma das reivindicações 132 a 149, caracterizado pelo fato de que - L3 é ainda covalentemente ligado a um construto de anticorpo para formar um conjugado.
157. Conjugado representado pela fórmula: Anticorpo caracterizado pelo fato de que: O anticorpo é um construto de anticorpo; n é 1-20; D é o composto ou sal farmaceuticamente aceitável de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 130; e L3 é uma fração de ligação.
158. Conjugado, de acordo com a reivindicação 157, caracterizado pelo fato de que -L3- é representado por qualquer um dos ligantes estabelecidos na Tabela 5, Tabela 8 ou Tabela 11.
159. Conjugado, de acordo com a reivindicação 158, caracterizado pelo fato de que -L3- é representado pela fórmula: peptídeo em que: L4 representa o terminal C do peptídeo e L5 é selecionado a partir de uma ligação, alquileno e heteroalquileno, em que L5 é opcionalmente substituído com um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de R30; RX* é uma ligação, uma porção de succinimida ou uma porção de succinimida hidrolisada ligada a um resíduo de um construto de anticorpo, em que em RX* representa o ponto de ligação ao resíduo do construto de anticorpo; e R30 é independentemente selecionado em cada ocorrência de halogênio, -OH, -CN, -O-alquila, -SH, =O, =S, -NH2, - NO2; e C1-C10alquila, C2-C10alquenila e C2-C10alquinila, cada um dos quais é independentemente opcionalmente substituído em cada ocorrência com um ou mais substituintes selecionados a partir de halogênio, -OH, -CN, -O-alquila, - SH, =O, =S, -NH2 e -NO2.
160. Conjugado, de acordo com a reivindicação 159, caracterizado pelo fato de que RX* é uma fração succinamida, fração succinamida hidrolisada ou uma mistura das mesmas e está ligado a um resíduo de cisteína de um construto de anticorpo.
161. Conjugado, de acordo com a reivindicação 157, caracterizado pelo fato de que D-L3 é um composto-ligante selecionado de qualquer uma das reivindicações de 132 a
149.
162. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 157 a 161, caracterizado pelo fato de que n é de 1-8, 3-5 ou 2.
163. Conjugado, de acordo com a reivindicação 157 ou 162, caracterizado pelo fato de que D-L3 é um composto-
ligante selecionado a partir de qualquer um dos compostos- ligantes estabelecidos na Tabela 15, 16 ou 17 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
164. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 163, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno tumoral ou um antígeno associado à patogênese da fibrose.
165. Conjugado, de acordo com a reivindicação 164, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação ao antígeno se liga especificamente a um antígeno em uma célula T, uma célula B, uma célula estrelada, uma célula endotelial, uma célula tumoral, uma APC, uma célula de fibroblasto, uma célula de fibrócito ou uma célula associada à patogênese da fibrose.
166. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 165, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno selecionado do grupo que consiste em CLTA4, PD-1, OX40, LAG-3, GITR, GARP, CD25, CD27, PD-L1, TNFR2, ICOS, 41BB, CD70, CD73, CD38 e VTCN1.
167. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 165, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno selecionado do grupo que consiste em PDGFRβ, integrina αvβ1, integrina αvβ3, integrina αvβ6, integrina αvβ8, Endosialina, FAP, ADAM12, LRRC15, MMP14, PDPN, CDH11 e F2RL2.
168. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 165, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente ao antígeno LRRC15.
169. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 163, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno em um hepatócito.
170. Conjugado, de acordo com a reivindicação 169, caracterizado pelo fato de que o antígeno é selecionado a partir do grupo que consiste em ASGR1 e ASGR2.
171. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 170, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo é um anticorpo.
172. Conjugado, de acordo com a reivindicação 171, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
173. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 172, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo compreende um domínio Fc do tipo selvagem.
174. Conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 156 a 172, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo compreende um domínio Fc nulo.
175. Composição farmacêutica, caracterizado pelo fato de que compreende um conjugado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 150 a 155, e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
176. Composição farmacêutica, caracterizado pelo fato de que compreende um conjugado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 156 a 174, e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
177. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 175 ou 176, caracterizado pelo fato de que a razão média de fármaco para anticorpo (DAR) é 1-8, 3-5 ou 1-3.
178. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 175 ou 176, caracterizado pelo fato de que a proporção média de fármaco para anticorpo (DAR) é de 4 a 8.
179. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 175 ou 176, caracterizado pelo fato de que a proporção média de medicamento para anticorpo (DAR) é de 6 a 8.
180. Método para o tratamento de câncer, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz de (i) o composto ou sal conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 130, (ii) o conjugado conforme definido em qualquer uma das reivindicações 150 a 174, ou (iii) composição farmacêutica, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 131, ou 175 a 179, para um indivíduo em necessidade do mesmo.
181. Método, de acordo com a reivindicação 180, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz do composto ou sal, conforme definido em com qualquer uma das reivindicações 1 a 130, ou a composição farmacêutica, conforme definida em a reivindicação 131.
182. Método, de acordo com a reivindicação 180, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz do conjugado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 150 a 174, ou a composição farmacêutica, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 175 a 179, a um indivíduo em necessidade do mesmo.
183. Método, de acordo com a reivindicação 180, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz do conjugado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 156 a 174, ou a composição farmacêutica, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 176 a 179, a um indivíduo em necessidade do mesmo.
184. Método, de acordo com a reivindicação 183, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno tumoral.
185. Método, de acordo com a reivindicação 183 ou 184, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo é um anticorpo.
186. Método, de acordo com a reivindicação 185, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
187. Método para o tratamento de fibrose, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz de (i) o composto ou sal conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 130, (ii) o conjugado conforme definido em qualquer uma das reivindicações 150 a 174, ou (iii) a composição farmacêutica conforme definida em qualquer uma das reivindicações 131 ou 175 a 179 para um indivíduo em necessidade do mesmo.
188. Método, de acordo com a reivindicação 187, caracterizado pelo fato de que a fibrose está associada ao câncer.
189. Método, de acordo com a reivindicação 187, caracterizado pelo fato de que a fibrose é fibrose sistêmica.
190. Método, de acordo com a reivindicação 187, caracterizado pelo fato de que a fibrose é esclerodermia.
191. Método, de acordo com a reivindicação 187, caracterizado pelo fato de que a fibrose está associada a NASH.
192. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 187 a 191, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz do composto ou sal, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 130, ou a composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 131.
193. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 187 a 191, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz do conjugado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 150 a 174, ou a composição farmacêutica, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 175 a 179 a um indivíduo em necessidade do mesmo.
194. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 187 a 191, caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz do conjugado, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 156 a 174, ou a composição farmacêutica, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 176 a 179 a um indivíduo em necessidade do mesmo.
195. Método, de acordo com a reivindicação 194, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno tumoral ou um antígeno associado à patogênese da fibrose.
196. Método, de acordo com a reivindicação 195, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno associado à patogênese da fibrose.
197. Método, de acordo com a reivindicação 194, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo compreende um domínio de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um hepatócito.
198. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 195 a 197, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo é um anticorpo.
199. Método, de acordo com a reivindicação 198, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
200. Método para matar células tumorais in vivo, caracterizado pelo fato de que compreende o contato de uma população de células tumorais com (i) o composto ou sal conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 130, (ii) o conjugado conforme definido em qualquer uma das reivindicações 150 a 174, ou (iii) a composição farmacêutica, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 131 ou 175 a 179, para um indivíduo em necessidade do mesmo.
201. Método para intensificar uma resposta imune em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração a um indivíduo em necessidade do mesmo (i) do composto ou sal conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 130, (ii) do conjugado conforme definido em qualquer uma das reivindicações 150 a 174, ou (iii) a composição farmacêutica conforme definida em qualquer uma das reivindicações 131 ou 175 a 179.
202. Método para tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo (i) o composto ou sal conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 130, (ii) o conjugado conforme definido em qualquer uma das reivindicações 150 a 174, ou (iii) a composição farmacêutica, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 131 ou 175 a 179.
203. Método, de acordo com a reivindicação 201 ou 202, caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao indivíduo do conjugado conforme definido em qualquer uma das reivindicações 150 a 174, ou a composição farmacêutica conforme definida em qualquer uma das reivindicações 175 a
179.
204. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 201 a 203, caracterizado pelo fato de ser para o tratamento de fibrose ou câncer.
205. Método, de acordo com a reivindicação 204, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo é um anticorpo anti-LRRC15.
206. Método, de acordo com a reivindicação 203, para o tratamento de fibrose hepática, caracterizado pelo fato de que o construto de anticorpo é um anticorpo anti-ASGR1 ou anti-ASGR2.
207. Composto ou sal, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 130, conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 150 a 174, ou composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 131 ou 175 a 179, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método de tratamento do corpo de um indivíduo por terapia.
208. Composto, composição farmacêutica ou conjugado, de acordo com a reivindicação 207, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método de tratamento de câncer ou fibrose.
209. Método para o tratamento de câncer caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade eficaz de um conjugado de anticorpo, em que o conjugado de anticorpo compreende (i) um construto de anticorpo covalentemente ligado através de um grupo ligante a um antagonista de TGFbR2, e em que o conjugado de anticorpo compreende de 1 a 20 antagonistas de TGFbR2 por construto de anticorpo, de preferência de 1-8, 3-5, ou 1-3 ou (ii) um construto de anticorpo covalentemente ligado através de um grupo ligante a um antagonista de TGFbR2, em que o antagonista de TGFbR2 compreende uma amino- pirazinocarboxamida, e em que o conjugado de anticorpo compreende de 1 a 20 antagonistas de TGFbR2 por construto de anticorpo, preferencialmente de 1-8, 3-5 ou 1-3.
210. Método de preparação de um conjugado de anticorpo de fórmula: Anticorpo caracterizado pelo fato de que: O anticorpo é um construto de anticorpo; n é 1-20; e L3-D é selecionado a partir de um ligante composto conforme definido em qualquer uma das reivindicações 132 a 149, compreendendo o contato de L3-D com um construto de anticorpo.
211. Método de preparação de um conjugado de anticorpo de fórmula:
Anticorpo caracterizado pelo fato de que: O anticorpo é um construto de anticorpo; n é 1-20; L3 é um ligante; e D é selecionado a partir de um composto ou sal conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 130, compreendendo o contato de L3 com o construto de anticorpo para formar o anticorpo L3 e o contato do anticorpo L3 com D para formar o conjugado.
212. Método, de acordo com a reivindicação 210 ou 211, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a purificação do conjugado de anticorpo.
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