BR112020019128A2

BR112020019128A2 - Formulação farmacêutica de liberação em trato gastrointestinal inferior; formulação farmacêutica de liberação no trato gastrointestinal inferior preparada por um processo; processo; formulação de liberação modificada; composição farmacêutica adequada para administração oral para tratamento de uma doença inflamatória intestinal; e método de tratamento de doença inflamatória intestinal (ibd) em um paciente humano com ibd

Info

Publication number: BR112020019128A2
Application number: BR112020019128-0A
Authority: BR
Inventors: John Harold Dodd; Stephen Kwaku Dordunoo
Original assignee: Palatin Technologies, Inc.
Priority date: 2018-03-23
Filing date: 2019-03-22
Publication date: 2021-01-12
Also published as: AU2019239300A1; EA202092275A1; IL277496B1; PH12020551596A1; EP3768245A4; IL277496A; EP3768245A1; CA3095036A1; MX2020009900A; KR20210003759A; JP2021523931A; CN112188888A; US20220088146A1; WO2019183472A1

Abstract

trata-se de formulações, composições e métodos para aplicação de peptídeos específicos a receptor de melanocortina, particularmente peptídeos cíclicos seletivos e específicos para o receptor de melanocortina 1, ao lúmen do trato gastrointestinal para tratamento de doenças, indicações, afecções e síndromes responsivas ou mediadas por melanocortina do trato gastrointestinal.

Description

FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA DE LIBERAÇÃO EM TRATO GASTROINTESTINAL INFERIOR; FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA DE LIBERAÇÃO NO TRATO GASTROINTESTINAL INFERIOR PREPARADA POR UM PROCESSO; PROCESSO; FORMULAÇÃO DE LIBERAÇÃO MODIFICADA; COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA ADEQUADA PARA ADMINISTRAÇÃO ORAL PARA TRATAMENTO DE UMA DOENÇA INFLAMATÓRIA INTESTINAL; E MÉTODO DE TRATAMENTO DE DOENÇA INFLAMATÓRIA INTESTINAL (IBD) EM UM PACIENTE HUMANO COM IBD REFERÊNCIA CRUZADA AO PEDIDO RELACIONADO

[001] Este pedido reivindica a prioridade e o benefício do depósito do Pedido de Patente Provisório sob o n° de série U.S. 62/647.000 intitulado “Melanocortin Receptor- Specific Peptide Formulations and Methods for Gastrointestinal Tract-Specific Delivery”, depositado em 23 de março de 2018, e o relatório descritivo e as reivindicações do mesmo estão incorporados ao presente documento a título de referência.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[002] O presente pedido contém uma Listagem de sequências que foi apresentada eletronicamente em formato ASCII e está incorporada ao presente documento em sua totalidade a título de referência. A dita cópia ASCII, criada em 18 de março de 2019, é nomeada 1903-187-Sequence_ST25.txt e tem 40 KB de tamanho.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO Campo da Invenção (Campo da Técnica):

[003] A presente invenção se refere a usos de peptídeos específicos a receptor de melanocortina, particularmente peptídeos cíclicos seletivos e específicos para o receptor de melanocortina-1, e métodos, composições e formulações que compreendem tais peptídeos, para aplicação específica do trato gastrointestinal, incluindo aplicação específica do cólon, para tratamento de indicações, condições, síndromes e doenças responsivas a ou mediadas por receptor de melanocortina, incluindo indicações, condições, síndromes e doenças responsivas a ou mediadas por receptor de melanocortina-1. Descrição da Técnica Relacionada

[004] Uma família de tipos e subtipos de receptores de melanocortina foi identificada. Os tipos de receptor incluem o receptor de melanocortina-1 (MC1r), comumente conhecido por ser expresso em melanócitos humanos normais e em células de melanoma, mas que também é relatado como expresso em várias outras células, incluindo aquelas envolvidas em respostas imunológicas, como monócitos, neutrófilos, linfócitos, células dendríticas, células exterminadoras naturais (NK) e células endoteliais. Consultar, de modo geral, Kang, L., et al., "A selective small molecule agonist of melanocortin-1 receptor inhibits lipopolysaccharide-induced cytokine accumulation and leukocyte infiltration in mice", J. Leuk. Biol. 80:897 a 904 (2006), e referências citadas no mesmo. Uma variedade de subtipos e variantes de MC1r humanos é conhecida, incluindo aqueles revelados nas Patentes nºs US 6.693.184 e 7.115.393. Além de MC1r, outros tipos de receptor de melanocortina incluem receptor de melanocortina-2 (MC2r) para ACTH (adrenocorticotropina), expresso em células da glândula adrenal, receptores de melanocortina-3 (MC3r) e receptores de melanocortina-4 (MC4r), expressos principalmente em células no hipotálamo, mesencéfalo e tronco encefálico, bem como em tecidos periféricos, e receptor de melanocortina-5 (MC5r),

expresso em uma ampla distribuição de tecidos periféricos.

[005] Peptídeos agonistas de MC1r altamente seletivos e específicos são conhecidos, incluindo os peptídeos cíclicos revelados nas Patentes n° US 9.447.148, 8.877.890 e

8.492.517 e os peptídeos lineares revelados nas Patentes n° US

9.580.466 e 8.933.194.

[006] Existem várias doenças inflamatórias intestinais (IBD) conhecidas, incluindo colite ulcerativa (UC) e doença de Crohn. Ambas as doenças são IBDs crônicas e recorrentes/remitentes do trato gastrointestinal (GI). As regiões do trato GI que são mais afetadas pela doença de Crohn são o intestino delgado e o intestino grosso, também chamado de cólon, e incluindo o reto, mas sabe-se que a doença de Crohn pode afetar todo o trato GI, da boca ao ânus. A UC comumente afeta o intestino grosso, que compreende o cólon. Os sintomas comuns das doenças incluem diarreia, dor abdominal, sangramento retal e perda de peso. Adicionalmente, a doença de Crohn pode incluir abcessos intestinais, fístula, uma passagem anormal que leva de uma porção do intestino para outra e permite a passagem de fluidos ou secreções e obstruções intestinais.

[007] É conhecido que MC1r são regulados de modo ascendente em certos modelos animais experimentais de colite e expressos sobre a superfície celular do epitélio intestinal. Maaser C., et al. Crucial role of the melanocortin receptor MC1R in experimental colitis. Gut. 2006;55(10):1.415 a 1.422. Entretanto, até agora, o uso de compostos específicos a MC1r para o tratamento de UC, doença de Crohn ou IBD tem sido limitado a vias de administração sistêmicas, como revelado na Publicação Internacional Número WO 2016/066702,

PCT/EP2015/075019.

[008] Apesar do interesse científico e farmacêutico intenso em peptídeos específicos a receptor de melanocortina, permanece uma necessidade por peptídeos agonistas de MC1r altamente seletivos e específicos para uso em aplicações farmacêuticas e formulações e métodos para aplicação de peptídeos agonistas de MC1r a um sítio alvo, como dentro do lúmen do cólon. É nessa perspectiva que a presente invenção foi feita.

BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[009] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação farmacêutica de liberação em trato gastrointestinal (GI) inferior que compreende um peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo disposto dentro de uma matriz de partícula, como uma matriz de micropartícula, que compreende pelo menos um polímero de liberação atrasada. Na formulação, o polímero de liberação atrasada pode ser um polímero de liberação dependente de pH. O peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser misturado por adição dentro da matriz de partícula, formando assim uma mistura por adição da matriz de partícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. A mistura por adição da matriz de partícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser disposta dentro de uma cápsula solúvel aquosa, que pode ser uma cápsula de gelatina, sendo que essa cápsula pode compreender adicionalmente pelo menos um dentre um revestimento de vedação e um revestimento entérico. Alternativamente, a mistura por adição da matriz de partícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser formada em um tablete, e o tablete pode compreender adicionalmente pelo menos um dentre um revestimento de vedação e um revestimento entérico.

[0010] O pelo menos um polímero de liberação atrasada pode incluir um polímero de liberação dependente de pH, opcionalmente que compreende copolímeros metacrílicos/metacrilato de metila sensíveis ao pH, como copolímeros selecionados do grupo que consiste em Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D. Os copolímeros Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D podem estar presentes em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75.

[0011] O peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na formulação pode ser um peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. O peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ter um valor de EC50 funcional no MC1r de menos que cerca de um nM, e pode ter adicionalmente um valor de EC50 funcional no MC4r, pelo menos cem vezes o valor de EC50 funcional em MC1r. Em um aspecto, o peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo tem um valor de EC50 funcional no MC4r de pelo menos cerca de 500 nM. Em outro aspecto, o peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser funcionalmente inativo no MC2r, no MC3r e no MC5r.

[0012] Em um aspecto, o polímero de liberação atrasada libera pelo menos uma porção do peptídeo específico a MC1r ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo no cólon e,

de preferência, libera uma quantidade terapeuticamente eficaz do peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo no cólon.

[0013] Em um outro aspecto, o peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp- NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Na formulação que inclui Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe- Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO: 6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, a matriz de partícula, que pode ser uma matriz de micropartícula, pode incluir uma mistura de polímero de liberação atrasada que compreende Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D presentes em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75. O Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D podem ser micropartículas com um tamanho de partícula máximo de no máximo 1.000 µm de diâmetro, de preferência, no máximo cerca de 600 µm de diâmetro e com um tamanho de partícula mínimo de pelo menos cerca de 250 µm de diâmetro. A porcentagem de Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de polímero de liberação atrasada pode ser de no máximo cerca de 2% com base em pesos ou, alternativamente, no máximo cerca de 1% com base em pesos ou, alternativamente, no máximo cerca de 10% com base em pesos. A formulação pode incluir adicionalmente pelo menos um excipiente selecionado do grupo que consiste em um tensoativo, um desintegrante, um lubrificante e um aglutinante.

[0014] Em um outro aspecto, a formulação que compreende um peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo disposto dentro de uma matriz de partícula que compreende pelo menos um polímero de liberação atrasada efetua, quando administrada a um paciente humano, a liberação máxima do peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo no cólon. Nesse aspecto, o pelo menos um polímero de liberação atrasada pode ser um polímero de liberação dependente de pH, incluindo uma mistura que compreende Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D presente em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, cerca de 6,2: 6,2:1 ou cerca de 23,25: 23: 3,75.

[0015] Em um outro aspecto da invenção, na formulação que compreende um peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo disposto dentro de uma matriz de partícula que compreende pelo menos um polímero de liberação atrasada, o peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é funcionalmente ativo no MC1r e pelo menos um receptor de melanocortina adicional selecionado do grupo que consiste em MC3r, MC4r e MC5r.

[0016] Em um outro aspecto, a invenção fornece uma formulação farmacêutica de liberação em trato GI inferior preparada por um processo que compreende as etapas de: a. fornecer uma mistura por adição de solução de Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1 ou cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75;

b. adicionar Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)- Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo à mistura por adição de solução; c. secar a mistura por adição de solução que compreende Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e d. converter uma mistura por adição seca em micropartículas em que o tamanho de partícula resultante é no máximo cerca de 1.000 µm de diâmetro e, de preferência, em que o tamanho de partícula resultante está entre cerca de 250 µm e cerca de 600 µm de diâmetro.

[0017] No processo anterior, em um aspecto, no máximo cerca de 2% com base em pesos de Ac-Nle-ciclo(Glu-His- D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH 2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é adicionado à mistura por adição de solução de Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D. No processo, a secagem pode compreender a secagem a vácuo. No processo, a conversão pode compreender pulverizar a mistura por adição seca e peneirar através de uma peneira.

[0018] Em um outro aspecto, a invenção fornece uma formulação de liberação modificada que compreende um peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como um único ingrediente farmacêutico ativo, e pelo menos um polímero de controle de liberação selecionado do grupo que consiste em polímeros dependentes de pH e polímeros não dependentes de pH; em que na administração oral a um paciente humano, o peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é aplicado substancialmente intacto ao lúmen do cólon do paciente humano.

[0019] Em um outro aspecto, a invenção fornece uma composição farmacêutica adequada para administração oral para tratamento de uma doença inflamatória intestinal, sendo que a composição farmacêutica compreende: um núcleo de tablete, sendo que o núcleo de tablete compreende um composto ativo selecionado por um peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como um único ingrediente farmacêutico ativo e um excipiente farmaceuticamente aceitável; e um revestimento entérico.

[0020] Em um outro aspecto, a invenção fornece uma composição farmacêutica adequada para administração oral para tratamento de uma doença inflamatória intestinal, sendo que a composição farmacêutica compreende: um peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo disposto em uma matriz de micropartícula encapsulada que compreende pelo menos um polímero de liberação atrasada; e um revestimento entérico que cobre a cápsula.

[0021] Na composição farmacêutica, o peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser Ac-Nle- ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um polímero de liberação atrasada pode compreender metacrilato copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH.

[0022] Em ainda outro aspecto, a invenção fornece um método para tratar IBD em um paciente humano com IBD, que compreende administrar um peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo disposto dentro de uma matriz de micropartícula que compreende pelo menos um polímero de liberação atrasada. Nesse método, o polímero de liberação atrasada pode ser um polímero de liberação dependente de pH. O peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser misturado por adição dentro da matriz de micropartícula, formando assim uma mistura da matriz de micropartícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. A mistura por adição da matriz de micropartícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser disposta dentro de uma cápsula solúvel aquosa, incluindo uma cápsula de gelatina, tal cápsula pode compreender adicionalmente um revestimento entérico, incluindo um polímero de liberação dependente de pH. Alternativamente, a mistura por adição da matriz de micropartícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser formada em um tablete, e o tablete pode compreender adicionalmente um revestimento entérico, incluindo um polímero de liberação dependente de pH.

[0023] No método de tratamento de IBD em um paciente humano, o polímero de liberação dependente de pH pode compreender copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH, incluindo copolímeros selecionados do grupo que consiste em Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D. O Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D pode estar presente em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75.

[0024] No método de tratamento de IBD em um paciente, o peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser um peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. O peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ter um valor de EC50 funcional no MC1r de menos do que cerca de um nM. O peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ter um valor de EC50 funcional no MC4r pelo menos uma centena de vezes menor que o valor de EC50 funcional no MC1r. Em um aspecto, no método, o peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo tem um valor de EC50 funcional no MC4r de pelo menos cerca de 500 nM. Em outro aspecto, o peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser funcionalmente inativo no MC2r, no MC3r e no MC5r.

[0025] Em um aspecto do método de tratamento de IBD em um paciente humano com IBD, o peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg- Dap)-Trp-NH 2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Nesse aspecto, a matriz de micropartícula pode ser adicionalmente uma mistura que compreende Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D presente em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, cerca de 6,2: 6,2:1 ou cerca de 23,25: 23: 3,75. O Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D podem ser micropartículas com um tamanho de partícula máximo de no máximo 1.000 µm de diâmetro ou, alternativamente, no máximo cerca de 600 µm de diâmetro. A porcentagem de Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-

Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de polímero de liberação atrasada é de no máximo cerca de 2% com base em pesos ou, alternativamente, no máximo cerca de 1% com base em pesos ou, alternativamente, no máximo cerca de 10% com base em pesos.

[0026] Em um aspecto do método de tratamento de IBD em um paciente humano com IBD, o pelo menos um polímero de liberação atrasada efetua, quando administrado ao paciente humano com IBD, a liberação máxima do peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo dentro do cólon. O pelo menos um polímero de liberação atrasada pode ser um polímero de liberação dependente de pH, opcionalmente uma mistura que compreende Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D presente em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, cerca de 6,2: 6,2:1 ou cerca de 23,25: 23: 3,75.

[0027] Em um outro aspecto do método de tratamento de IBD em um paciente humano com IBD, o peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é funcionalmente ativo no MC1r e pelo menos um receptor de melanocortina adicional selecionado do grupo que consiste no MC3r, no MC4r e no MC5r.

[0028] Em um outro aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica à base de peptídeo específico a receptor de melanocortina para uso no tratamento de indicações, condições, síndromes e doenças mediadas por receptor de melanocortina do trato GI.

[0029] Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um produto farmacêutico específico a receptor de melanocortina à base de peptídeo, em que o peptídeo é um ligante de MC1r seletivo disposto dentro de uma matriz de micropartícula polimérica dependente de pH, para uso no tratamento de distúrbios, doenças, indicações, condições e/ou síndromes de IBD associadas a MC1r.

[0030] Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um produto farmacêutico específico a receptor de melanocortina de peptídeo para uso no tratamento em que a administração do tratamento é via administração oral de uma matriz polimérica que fornece a liberação do peptídeo dentro do trato GI, incluindo o cólon.

[0031] Em um outro aspecto, a presente invenção fornece formulações e métodos para empregar peptídeos cíclicos de MC1r específicos que podem ser empregados para aplicação direcionada ao lúmen do trato GI inferior, incluindo o cólon, com o uso de uma matriz de liberação controlada polimérica dependente de pH.

[0032] Em um outro aspecto, a presente invenção fornece formulações e métodos para administração de peptídeos cíclicos de MC1r específicos a receptores dentro do lúmen do trato GI inferior, em que os peptídeos são aplicados sem qualquer, ou sem qualquer aplicação sistêmica substancial de tais peptídeos, incluindo sem qualquer aplicação sistêmica substancial de tais peptídeos à circulação cardiovascular.

[0033] Ainda outro aspecto da presente invenção fornece a aplicação específica de sítio de um peptídeo cíclico de MC1r específico a receptores dentro do lúmen do trato GI inferior, incluindo o cólon, de um paciente com IBD por meio de administração oral do peptídeo disposto dentro de uma matriz de micropartícula polimérica dependente de pH, em que o peptídeo é aplicado e liberado dentro do lúmen do trato GI inferior, incluindo o cólon, sem qualquer, ou sem qualquer presença resultante substancial do peptídeo na circulação do paciente.

[0034] Outros aspectos e recursos inovadores e o escopo adicional de aplicabilidade da presente invenção serão apresentados em parte na descrição detalhada a seguir e em parte ficarão evidentes para aqueles versados na técnica mediante o exame do seguinte, ou podem ser aprendidos pela prática da invenção. Os aspectos da invenção podem ser realizados e obtidos por meio das instrumentalidades e combinações particularmente apontadas nas reivindicações anexas.

BREVES DESCRIÇÕES DOS DESENHOS

[0035] Os desenhos anexos, que estão incorporados a e formam parte do relatório descritivo, ilustram uma ou mais modalidades da presente invenção e, juntamente com a descrição, servem para explicar os princípios da invenção. Os desenhos são apenas para o propósito de ilustrar uma ou mais modalidades preferenciais da invenção e não devem ser interpretados como limitadores da invenção.

[0036] A Figura 1A e 1B são gráficos dos efeitos do peptídeo do Exemplo 9.3 administrado via cânula colônica e sulfassalazina administrada por via oral na pontuação de inflamação (Figura 1A) e peso do cólon (Figura 1B) em ratos com inflamação intestinal induzida por DNBS, em que “*” indica um valor de p menor que 0,05, IC é intracolônico e PO é oral.

[0037] A Figura 2 é um gráfico da progressão do peptídeo do Exemplo 9.3 disposto dentro de uma matriz de micropartícula do Lote 41 administrada via uma cápsula oral da invenção através do trato intestinal do rato, em que o "cólon" compreende o reto e o cólon distal, o "intestino grosso” compreende o intestino distal e o “intestino delgado” compreende o intestino proximal.

[0038] A Figura 3A e 3B são gráficos dos efeitos do peptídeo do Exemplo 9.3 administrado via uma cápsula oral da invenção e sulfassalazina administrada por via oral nas pontuações de dano macroscópico corrigido por linha de base (Figura 3A) e pontuações de inflamação corrigidas por linha de base em ratos com inflamação intestinal induzida por DNBS, em que “*” indica um valor de p menor que 0,05, “**” indica um valor de p menor que 0,01 e "***" indica um valor de p menor que 0,001.

[0039] A Figura 4 é um gráfico da dissolução do peptídeo do Exemplo 9.3 a partir dos lotes de micropartículas de Eudragit® 23, 24 e 27 em tampão de fosfato a pH 6,8.

[0040] A Figura 5 é um gráfico da dissolução do peptídeo do Exemplo 9.3 ao longo do tempo a partir de vários lotes de micropartículas de Eudragit® em faixas de pH de pH 1,2 a pH 7,4.

[0041] A Figura 6 é um gráfico da dissolução do peptídeo de dissolução de Exemplo 9.3 a partir de lotes de micropartículas de Eudragit® 23, 24, 27 e 31, em faixas de pH de pH 1,2 a pH 7,4 ao longo do tempo com a concentração de peptídeo em 1% ou 2%.

[0042] A Figura 7 é um gráfico do perfil de dissolução do Lote 35, que compreende 40% do Lote 29 (60% de Eudragit® L-100-55/40% de FS) e 60% do Lote 31R (Eudragit® S100), ao longo do tempo.

[0043] A Figura 8 é um gráfico da dissolução do peptídeo do Exemplo 9.3 do Lote 40 em tampão, em que o tampão foi ajustado em pH ao longo do tempo, de pH 4,5 a 5,5 e pH 4,5 a 7,5.

[0044] A Figura 9 é um gráfico de liberação cumulativa do peptídeo do Exemplo 9.3 ao longo do tempo e pH crescente (pH 4,5 a 7,5) para os Lotes 29, 34 e 38.

[0045] A Figura 10 é um gráfico da liberação cumulativa do peptídeo do Exemplo 9.3 ao longo do tempo e pH crescente (pH 4,5 a 7,5) para os Lotes 38 e 41.

[0046] A Figura 11 é um gráfico de liberação cumulativa do peptídeo do Exemplo 9.3 ao longo do tempo e pH crescente (pH 4,5 a 7,5) com duas execuções do Lote 41.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

1.0 Definições.

[0047] Antes de prosseguir com a descrição da invenção, certos termos são definidos conforme apresentado no presente documento.

[0048] Nas sequências dadas para os peptídeos de acordo com a presente invenção, os resíduos de aminoácidos têm seu significado convencional como dado no Capítulo 2400 do Manual of Patent Examining Procedure, 9a Edição. Dessa forma, "Nle" é norleucina, "Asp" é ácido aspártico, "His" é histidina, "Phe" é fenilalanina, "Arg" é arginina, "Trp" é triptofano e "Lys" é lisina e assim por diante. Deve ser entendido que os isômeros D são designados por um “D-” antes do código de três letras ou nome de aminoácido, de modo que, por exemplo, D-Phe seja D-fenilalanina. Os resíduos de aminoácidos não abrangidos pelo anteriormente mencionado incluem os seguintes aminoácidos ou cadeias laterais de aminoácidos, sendo entendido que tais resíduos de aminoácidos podem ser L-isômeros ou D-isômeros:

Abreviação Nome comum Estrutura de aminoácido ou cadeia lateral Cit citrullina O N NH 2

H Dab ácido diaminobutírico NH 2 Dap ácido diaminopropriônico NH 2 hGlu ácido OH homoglutâmico

O Hyp hidroxiprolina OH

N OH H

O Hyp(Bzl) O-benzil- hidroxiprolina

O N OH H

O Nal 1 3-(1- naftil)alanina Nal 2 3-(2- naftil)alanina Nle norleucina CH3 Orn ornitina NH2

Abreviação Nome comum Estrutura de aminoácido ou cadeia lateral Pro(4-Bzl) 4-benzil-prolina

N OH H

O Pro(4-NH2) 4-amino-prolina NH 2

N OH H

O Sar sarcosina CH 3 O

HN OH

[0049] O termo “alfa aminoácido” inclui qualquer

R

OH H2N aminoácido da estrutura geral O (representado em sua forma não ionizada), em que R é qualquer grupo de cadeia lateral ou hidrogênio, incluindo, sem limitação, os resíduos de aminoácidos ou grupos de cadeia lateral descritos no parágrafo e na tabela anterior.

[0050] Um “aminoácido N-substituído” significa qualquer aminoácido em que uma porção química da cadeia lateral de aminoácido está covalentemente ligada ao grupo amino da cadeia principal, incluindo opcionalmente onde não há substituintes diferentes de H na posição α-carbono. A sarcosina é um exemplo de um aminoácido N-substituído. A título de exemplo, a sarcosina pode ser denominada como um derivado de aminoácido N-substituído de Ala, em que a porção química da cadeia lateral de aminoácido de sarcosina e Ala é a mesma, metila. Sempre que uma reivindicação ou descrição no presente documento se refere a um "aminoácido", tal designação inclui, porém sem limitação, um "aminoácido N-substituído”.

[0051] O termo "aminoácido L ou D-isômero" ou "aminoácidos L ou D-isômeros" significa qualquer resíduo de aminoácido conforme definido no presente documento, incluindo especificamente qualquer alfa-aminoácido, beta-aminoácido, gama-aminoácido ou delta-aminoácido, incluindo, sem limitação, um aminoácido que é diretamente codificado por DNA, um aminoácido modificado pós-tradução, um aminoácido expresso por meios biológicos diferentes de diretamente por DNA, um aminoácido proteinogênico ou não proteinogênico, ou qualquer aminoácido sintético ou artificial.

[0052] Aminoácidos, incluindo aminoácidos L- ou D-isômeros, são unidos por "ligação de amida" ou ligações de amida para formar uma ligação peptídica covalente que liga um grupo ácido carboxílico de cadeia principal de um aminoácido a um grupo amino de cadeia principal de um outro aminoácido, formando assim uma ligação peptídica (-C(=O)-NH-).

[0053] Em certos casos, os grupos podem ser substituídos por um aminoácido, como particularmente o uso de um ácido dicarboxílico no lugar de um aminoácido. Um ácido dicarboxílico particular usado na presente invenção é o ácido succínico, abreviado como "Suc", que tem a fórmula estrutural

O HO OH O .

[0054] O termo "alcano" inclui hidrocarbonetos saturados lineares ou ramificados. Os exemplos de grupos alcano lineares incluem metano, etano, propano e similares. Os exemplos de grupos alcano ramificados ou substituídos incluem metilbutano ou dimetilbutano, metilpentano, dimetilpentano ou trimetilpentano e similares. Em geral, qualquer grupo alquila pode ser um substituinte de um alcano.

[0055] O termo "alceno" inclui hidrocarbonetos insaturados que contêm uma ou mais ligações duplas carbono- carbono. Os exemplos de tais grupos alqueno incluem etileno, propeno e similares.

[0056] O termo "alquenila" inclui um radical hidrocarboneto monovalente linear de dois a seis átomos de carbono ou um radical hidrocarboneto monovalente ramificado de três a seis átomos de carbono que contém pelo menos uma ligação dupla; exemplos destes incluem etenila, 2-propenila e similares.

[0057] Os grupos "alquila" especificados aqui incluem aqueles radicais alquila do comprimento designado que são grupos hidrocarboneto alifático saturado de cadeia linear ou ramificada. Os exemplos não limitadores de tais radicais alquila incluem metila, etila, propila, isopropila, butila, sec-butila, butila terciária, pentila, isopentila, hexila, iso-hexila e similares.

[0058] O termo "alquina" inclui um radical hidrocarboneto monovalente linear de dois a seis átomos de carbono ou um radical hidrocarboneto monovalente ramificado de três a seis átomos de carbono que contém pelo menos uma ligação tripla; exemplos destes incluem etina, propina, butina e similares.

[0059] O termo "arila" inclui um radical de hidrocarboneto aromático monocíclico ou bicíclico de 6 a 12 átomos no anel e opcionalmente substituído independentemente por um ou mais substituintes selecionados dentre alquila, haloalquila, cicloalquila, alcóxi, alquiltio, halo, nitro, acila, ciano, amino , amino monossubstituído, amino dissubstituído, hidroxila, carbóxi ou alcóx-carbonila. Os exemplos de um grupo arila incluem fenila, bifenila, naftila, 1-naftila e 2-naftila, derivados dos mesmos e similares.

[0060] O termo "aralquila" inclui um radical –RaRb em que Ra é um grupo alquileno (uma alquila bivalente) e Rb é um grupo arila conforme definido acima. Os exemplos de grupos aralquila incluem benzila, feniletila, 3-(3-clorofenil)-2- metilpentila e similares.

[0061] O termo "alifático" inclui compostos com cadeias de hidrocarboneto, como, por exemplo, alcanos, alquenos, alquinos e derivados dos mesmos.

[0062] O termo "acila" inclui um grupo R(C=O) -, em que R é um grupo orgânico, como uma alquila, arila, heteroarila, carbociclila ou heterociclila. Um exemplo não limitador é o grupo acetila CH3 -C(=O)-, denominado no presente documento como "Ac". Como usado no presente documento, R pode compreender uma C 1 a C 17 alquila, cicloalquila, alquilcicloalquila, arila ou alquilarila linear ou ramificada.

[0063] Um peptídeo ou porção química alifática é "acilado" quando um grupo alquila ou alquila substituída, conforme definido acima, é ligado através de um ou mais grupos carbonila {-(C=O)-}. Um peptídeo é mais tipicamente acilado no N-terminal.

[0064] O termo "heteroarila" inclui anéis aromáticos mono- e bicíclicos que contêm de 1 a 4 heteroátomos selecionados dentre nitrogênio, oxigênio e enxofre. Heteroarila de 5 ou 6 membros são anéis heteroaromáticos monocíclicos; os exemplos da mesma incluem tiazol, oxazol, tiofeno, furano, pirrol, imidazol, isoxazol, pirazol, triazol, tiadiazol, tetrazol, oxadiazol, piridina, piridazina, pirimidina, pirazina e similares. Os anéis heteroaromáticos bicíclicos incluem, porém sem limitação, benzotiadiazol, indol, benzotiofeno, benzofurano, benzimidazol, benzisoxazol, benzotiazol, quinolina, benzotriazol, benzoxazol, isoquinolina, purina, furopiridina e tienopiridina.

[0065] Conforme usado no presente documento, o termo "amida" inclui compostos que têm um nitrogênio trivalente ligado a um grupo carbonila, isto é, -C(=O)-NH2 (isto é, amida primária), –C(=O)-NHRc e –C(=O)-NRcRd , em que cada um dentre Rc e Rd representa independentemente um grupo orgânico. Quando é feita referência no presente documento a um grupo amida substituída, significa que pelo menos um dentre os ditos grupos orgânicos (Rc e Rd) está substituído. Os exemplos de amidas incluem metilamida, etilamida, propilamida e similares.

[0066] Uma "imida" inclui compostos que contêm um grupo imido (-C(= O)-NH-C(=O)-).

[0067] Uma "amina" inclui compostos que contêm um grupo amino (-NH2), -NHRa e -NRaR b, em que cada um dentre Ra e Rb representa independentemente um grupo orgânico. Quando é feita referência no presente documento a um grupo amida substituída, significa que pelo menos um dentre os grupos orgânicos (Rc e Rd) está substituído.

[0068] Uma "nitrila" inclui compostos que são derivados de ácido carboxílico e contêm um grupo (-CN) ligado a um grupo orgânico.

[0069] O termo "halogênio" inclui os átomos de halogênio flúor, cloro, bromo e iodo, e grupos, incluindo um ou mais átomos de halogênio, como CF3 e similares.

[0070] O termo "composição", como na composição farmacêutica, abrange um produto que compreende o ingrediente ativo (ou ingredientes ativos) e o ingrediente inerte (ou ingredientes inertes) que constituem o carreador, bem como qualquer produto que resulte, direta ou indiretamente, da combinação, complexação ou agregação de quaisquer dois ou mais dos ingredientes, ou da dissociação de um ou mais dos ingredientes, ou de outros tipos de reações ou interações de um ou mais dos ingredientes. Consequentemente, as composições farmacêuticas abrangem qualquer composição feita pela mistura por adição de um ingrediente ativo e um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis.

[0071] O termo um "agonista" de receptor de melanocortina se refere a uma substância endógena, substância farmacêutica ou composto, incluindo certos compostos de peptídeo revelados no presente documento, que podem interagir com um receptor de melanocortina e iniciar uma resposta farmacológica, incluindo, porém sem limitação, a ativação do receptor, incluindo iniciar a transdução de sinal, como a ativação da adenil ciclase, característica do receptor de melanocortina. Um agonista de receptor de melanocortina pode ser um agonista em um ou mais dentre MC1r, MC2r, MC3r, MC4r e MC5r. Para a presente invenção, um agonista de receptor de melanocortina que é um agonista em MC1r é preferencial.

[0072] O termo "α-MSH" se refere ao peptídeo Ac- Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (SEQ

ID NO:2) e análogos e homólogos do mesmo, incluindo, sem limitação, NDP-α-MSH.

[0073] O termo "NDP-α-MSH" se refere ao peptídeo Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2 (SEQ ID NO:3) e análogos e homólogos do mesmo.

[0074] O termo "EC 50” se refere à concentração molar de um agonista, incluindo um agonista parcial, que produziu 50% da resposta máxima possível para esse agonista. A título de exemplo, um composto de teste que, a uma concentração de 72 nM, produz 50% da resposta máxima possível para esse composto, conforme determinado em um ensaio de cAMP em um sistema de expressão celular de MC1r, tem um EC50 de 72 nM. A menos que especificado de outra forma, a concentração molar associada a uma determinação de EC50 é em nanomoles por litro (nM).

[0075] O termo "Ki (nM)" se refere à constante de dissociação de inibidor de equilíbrio que representa a concentração molar de um composto competidor que se liga a metade dos sítios de ligação de um receptor em equilíbrio na ausência de competidores. Em geral, o valor numérico do Ki é inversamente correlacionado à afinidade do composto pelo receptor, de modo que se o Ki for baixo, a afinidade será alta. Ki pode ser determinado com o uso da equação de Cheng e Prusoff (Cheng Y., Prusoff W. H., Biochem. Pharmacol. 22: 3.099 a

3.108, 1973): onde "ligante" é a concentração do competidor e KD é uma medida inversa da afinidade de receptor para o competidor que produz 50% de ocupação de receptor pelo competidor. A menos que especificado de outra forma, a concentração molar associada a uma determinação de Ki é em nM. Ki pode ser expresso em termos de receptores específicos (por exemplo, MC1r, MC3r, MC4r ou MC5r), espécies específicas (por exemplo, humano ou murino) e ligantes específicos (por exemplo, α-MSH ou NDP-α- MSH).

[0076] O termo "inibição" se refere a atenuação percentual, ou diminuição na ligação ao receptor, em um ensaio de inibição competitiva em comparação com um padrão conhecido. Dessa forma, o termo "inibição a 1 µM (NDP-α-MSH)" se refere à diminuição percentual na ligação de NDP-α-MSH mediante a adição de uma determinada quantidade do composto a ser testado, como 1 µM de um composto de teste, como sob as condições de ensaio descritas doravante. A título de exemplo, um composto de teste que não inibe a ligação de NDP-α-MSH tem uma inibição de 0% e um composto de teste que inibe completamente a ligação de NDP-α-MSH tem uma inibição de 100%. Tipicamente, conforme descrito doravante, um ensaio marcado de forma detectável é usado para testes de inibição competitiva, como com NDP-α-MSH marcado com I125, ou um ensaio fluorescente de lantanídeo quelato, como com Eu-NDP-α-MSH. Entretanto, outros métodos de teste de inibição competitiva são conhecidos, incluindo o uso de marcadores ou sistemas de marcadores diferentes e, em geral, qualquer método conhecido na técnica para testar a inibição competitiva pode ser empregado nesta invenção. Dessa forma, pode ser observado que "inibição" é uma medida para determinar se um composto de teste atenua a ligação de α-MSH aos receptores de melanocortina.

[0077] O termo "afinidade de ligação" se refere à capacidade de um composto ou fármaco para se ligar ao seu alvo biológico, expresso no presente documento como Ki (nM).

[0078] O termo "Emax" se refere à atividade funcional máxima alcançável por um composto em um sistema de células que expressam receptor de melanocortina especificado, como a estimulação máxima de adenilil ciclase. A estimulação máxima alcançada por NDP-α-MSH é designada como um Emax de 100% e um composto com capacidade para estimular metade da atividade máxima de NDP-α-MSH é designado como tendo um Emax de 50%. Um composto desta invenção que sob as condições de ensaio aqui descritas tem um Emax de 70% ou maior pode ser classificado como um agonista, um composto com um Emax entre 10% e 70% pode ser classificado como um agonista parcial e um composto com um Emáx abaixo de 10% pode ser classificado como inativo.

[0079] Em geral, "atividade funcional" é uma medida da sinalização de um receptor, ou medida de uma alteração na sinalização associada ao receptor, como com um receptor de melanocortina, sob a ativação do receptor por um composto. Os receptores de melanocortina iniciam a transdução de sinal através da ativação de proteínas G heterotriméricas. Em um aspecto, os receptores de melanocortina sinalizam através de GαS, que catalisa a produção de cAMP por adenilil ciclase. Dessa forma, a determinação da estimulação de adenilil ciclase, como a determinação da estimulação máxima de adenilil ciclase, é uma medida da atividade funcional e é uma medida primária exemplificada no presente documento. Entretanto, deve ser entendido que medidas alternativas de atividade funcional podem ser empregadas na prática desta invenção, e são especificamente contempladas e incluídas no escopo desta invenção. Dessa forma, em um exemplo, o cálcio livre intracelular pode ser medido com o uso de moléculas fluorescentes específicas que se ligam ao cálcio, como Fura2, relatado por e com o uso dos métodos revelados em Mountjoy K.G. et al., Melanocortin receptor-medicated mobilization of intracellular free calcium in HEK293 cells.

Physiol Genomics 5:11 a 19, 2001, ou Newman et al., Activation of the melanocortin-4 receptor mobilizes intracellular free calcium in immortalized hypothalamic neurons.

J Surg Res:132:201 a 207, 2006. Fluo-4 é um corante de ligação de cálcio alternativo que também é comumente usado (Nohr et al., The orphan G protein-coupled receptor GPR139 is activated by the peptides: Adrenocorticotropic hormone (ACTH), hormônio estimulante α- e β-melanócito (α-MSH e β-MSH), e o motivo de núcleo conservado HFRW.

Neurochem Int 102: 105 a 113, 2017). Mais a montante do evento de liberação de Ca2+ e na mesma via, também é possível medir a ativação por meio da medição da produção de trifosfato de inositol ou diacilglicerol de fosfatidilinositol 4,5- bifosfato, como os ensaios de HTRF comercialmente disponíveis (Liu et al., Comparison on functional assays for Gq-coupled GPCRs by measuring inositol monophospate-1 and intracellular calcium in 1536-well plate format.

Curr Chem Genomics 1: 70 a 77, 2008). Ainda outra medida da atividade funcional é a internalização de receptor, resultante da ativação das vias regulatórias, como com o uso dos métodos revelados em Nickolls S.A. et al., Functional selectivity of melanocortin 4 receptor peptide and nonpeptide agonists: evidence for ligand specific conformational states.

J Pharm Exper Therapeutics 313:1.281 a 1.288, 2005. Ainda outra medida da atividade funcional é a troca e a taxa de troca de nucleotídeos associados à ativação de um receptor de proteína G, como a troca de GDP (difosfato de guanosina) por GTP (trifosfase de guanosina) na subunidade α de proteína G, que pode ser medida por inúmeros meios, incluindo um radioensaio com o uso de guanosina 5′-(ɣ- [35S]tio)-trifosfato, conforme revelado em Manning D.R., Measures of efficacy using G proteins as endpoints: differential engagement of G proteins through single receptors.

Mol Pharmacol 62:451 a 452, 2002. Uma plataforma de ensaio relativamente nova foi desenvolvida para medir a atividade/envolvimento das 14 espécies diferentes de Gα pertencentes às subfamílias Gi, Gq, Gs, Gi2/i3 à medida que se refere ao receptor com o uso de biossensores à base de BRET (transferência de energia de ressonância de bioluminescência) para medir o desengate das subunidades Gα e Gɣ sob a ligação de ligante (Zhao et al., Biased signaling of protease-activated receptors.

Front Endocrinol 5:67, 2014, van der Westhuizen et al., Quantification of ligand bias for clinically relevant β2- adrenergic receptor ligands: Implications for drug taxonomy.

Molecular Pharm 85:492 a 509, 2014). Vários ensaios baseados em genes foram desenvolvidos para medir a ativação de proteínas acopladas a G, como aqueles revelados em Chen W. et al., A colorimetric assay from measuring activation of Gs- and Gq- coupled signaling pathways.

Anal Biochem 226:349 a 354, 1995; Kent T.C. et al., Development of a generic dual-reporter gene assay for screening G-protein-coupled receptors.

Biomol Screening, 5:437 a 446, 2005; ou Kotarsky K. et al., Improved receptor gene assays used to identify ligands acting on orphan seven-transmembrane receptors.

Pharmacology & Toxicology 93:249 a 258, 2003. O ensaio colorimétrico de Chen et al. foi adaptado para uso na medição da ativação do receptor de melanocortina, conforme revelado em Hruby V.J. et al., Cyclic lactam α-melanocortin analogues of Ac-Nle4-cyclo[Asp5,D- Phe7,Lys10] α-melanocyte-stimulating hormone-(4-10)-NH2 with bulky aromatic amino acids at position 7 shows high antagonist potency and selectivity at specific melanocortin receptors. J Med Chem 38:3.454 a 3.461, 1995. Em geral, a atividade funcional pode ser medida por qualquer método, incluindo métodos para determinar a ativação e/ou sinalização de um receptor acoplado a G, e ainda incluindo métodos que podem ser desenvolvidos ou relatados doravante. Cada um dos artigos anteriores e os métodos revelados nos mesmos, estão incorporados ao presente documento a título de referência, como se apresentados na íntegra.

[0080] Um peptídeo é "funcionalmente inativo" quando o valor de EC50 para tal peptídeo, se determinável, é maior que cerca de 1.000 nM.

[0081] A abreviação “µm” é o símbolo de uma unidade de medida do SI conhecida como um micrômetro ou micrometro, e também comumente conhecida como um mícron.

[0082] O termo "partícula", como usado no presente documento, inclui, sem quaisquer limitações na natureza e no tamanho do mesmo, quaisquer partículas, micropartículas, esferas, microesferas, grânulos, péletes, particulados ou quaisquer unidades estruturais que podem ser incorporadas em uma forma de dosagem oral, e inclui uma "micropartícula", a qual, como usado no presente documento, inclui uma partícula com um diâmetro menor que cerca de 1.000 µm.

[0083] Os termos "tratar", "tratando" e "tratamento", conforme usados no presente documento, contemplam uma ação que ocorre enquanto um paciente está sofrendo da doença ou distúrbio especificado, o que reduz a gravidade da doença ou distúrbio.

[0084] Conforme usado no presente documento, o termo "quantidade farmacologicamente eficaz" (incluindo "quantidade terapeuticamente eficaz") significa uma quantidade de um peptídeo administrado de acordo com a invenção que é suficiente para induzir um efeito terapêutico ou biológico desejado.

[0085] Conforme usado no presente documento, o termo "profilaticamente eficaz" ou "preventivo" significa a quantidade de um composto que inclui um peptídeo da invenção que irá prevenir ou inibir a aflição ou mitigar a aflição de um mamífero com uma condição médica que um médico ou outro clínico está tentando prevenir, inibir ou mitigar antes que um paciente comece a sofrer da doença ou distúrbio especificado.

2.0 Formulações e Usos.

[0086] 2.1 Em uma modalidade preferencial, o peptídeo específico a receptor de melanocortina, de preferência um peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado em uma forma de liberação dependente de pH em que o peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo disposto dentro uma matriz de partícula ou micropartícula que compreende pelo menos um polímero de liberação atrasada. O peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser misturado por adição dentro da matriz de micropartícula, formando assim uma mistura por adição da matriz de micropartícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. A mistura por adição da matriz de micropartícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser disposta dentro de uma cápsula solúvel aquosa, que pode ser uma cápsula de gelatina. Alternativamente, a mistura por adição da matriz de micropartícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser formada em um tablete, e o tablete pode compreender adicionalmente pelo menos um dentre um revestimento de vedação e um revestimento entérico. O pelo menos um polímero de liberação atrasada pode incluir um polímero de liberação dependente de pH, opcionalmente que compreende copolímeros metacrílicos/metacrilato de metila sensíveis ao pH, como copolímeros selecionados do grupo que consiste em Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D. Os copolímeros Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D podem estar presentes em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75.

[0087] Em uma outra modalidade, o peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é Ac-Nle-ciclo(Glu-His- D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Na formulação que inclui Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO: 6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, a matriz de partícula ou micropartícula pode incluir uma mistura de polímero de liberação atrasada dependente de pH que compreende Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D presentes em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75. O Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D podem ser partículas, como micropartículas, com um tamanho de partícula máximo de no máximo 1.000 µm de diâmetro, de preferência, no máximo cerca de 600 µm de diâmetro e, adicionalmente de preferência, pelo menos cerca de 250 µm de diâmetro. Em um aspecto, o tamanho de partícula máximo pode compreender pelo menos cerca de 1.500 µm de diâmetro, 1.400 µm de diâmetro, 1.300 µm de diâmetro, 1.200 µm de diâmetro, 1.100 µm de diâmetro, 1.000 µm de diâmetro, 900 µm de diâmetro, 800 µm de diâmetro, 700 µm de diâmetro, 600 µm de diâmetro ou 500 µm de diâmetro. Em um outro aspecto, a partícula mínima pode ser de não menos que cerca de 2,5 µm de diâmetro, 5 µm de diâmetro, 10 µm de diâmetro, 15 µm de diâmetro, 20 µm de diâmetro, 25 µm de diâmetro, 50 µm de diâmetro, 75 µm de diâmetro, 100 µm de diâmetro, 125 µm de diâmetro, 150 µm de diâmetro, 175 µm de diâmetro, 200 µm de diâmetro, 225 µm de diâmetro, 250 µm de diâmetro, 300 µm de diâmetro, 350 µm de diâmetro ou 400 µm de diâmetro. Em ainda outro aspecto, os diâmetros mínimo e máximo são selecionados a partir dos grupos anteriores, e a diferença entre o diâmetro de partícula mínimo e o diâmetro de partícula máximo são de no máximo cerca de 100 µm, 125 µm, 150 µm, 200 µm, 250 µm, 300 µm, 350 µm, 400 µm, 450 µm, 500 µm, 550 µm ou 600 µm. Em parte, o diâmetro de partícula máximo, o diâmetro de partícula mínimo e a diferença entre os diâmetros de partícula mínimo e máximo podem ser otimizados para obter a aplicação máxima do peptídeo específico a receptor de melanocortina para a região do trato GI desejada a ser tratada.

[0088] Em algumas modalidades, o peptídeo específico a receptor de melanocortina, de preferência, um peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é formulado em uma forma de liberação dependente de pH. Alternativamente, tais peptídeos são formulados em uma forma que libera os peptídeos em uma região específica do trato GI, como duodeno, jejuno, íleo, íleo terminal, cólon ascendente, cólon transversal, cólon descendente, cólon sigmoide ou reto. Em um aspecto, a formulação pode conter um carreador inerte revestido com o peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um revestimento entérico que libera o peptídeo a um pH específico (como ρΗ 5 ou ρΗ 7). Em um aspecto, um pH preferencial para a liberação de duodeno ou jejuno é pH 4,5 a 5,5 ou pH 5,5 a 6,5. Em um outro aspecto, um pH preferencial para liberação de íleo, íleo terminal ou cólon é pH 5,5 a 6,5 ou pH 6,5 a 7,5. Se um carreador inerte for usado, o mesmo pode incluir, porém sem limitação, manitol, lactose, uma celulose microcristalina ou amido.

[0089] Para certas modalidades e indicações de IBD, como UC, é desejável usar um composto oral que comece a liberação do fármaco ativo, como o peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, a um pH de cerca de 5,5, mas não libera mais que menos de 20% da droga ativa em pH 5,5 e libera não menos de 80% do fármaco ativo em um pH maior que cerca de 6,0 ou, alternativamente, cerca de 6,5, durante um período maior que duas horas, mas menor que sete horas, de preferência, durante um período de cerca de quatro a cerca de sete horas.

[0090] Em uma outra modalidade, o peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é formulado em uma matriz de partícula ou micropartícula, como uma mistura de polímero de liberação atrasada ou uma mistura de polímero de liberação dependente de pH, disposta dentro de uma cápsula, tal cápsula pode incluir adicionalmente um revestimento de vedação ou um revestimento entérico, ou ambos. O polímero de liberação dependente de pH pode incluir uma mistura de polímero que compreende Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D presente em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, cerca de 6,2: 6,2:1 ou cerca de 23,25: 23: 3,75. O Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D podem ser micropartículas com um tamanho de partícula máximo de no máximo 1.000 µm de diâmetro, de preferência, no máximo cerca de 600 µm de diâmetro e, adicionalmente de preferência, pelo menos 25 µm de diâmetro, ou pelo menos cerca de 250 µm de diâmetro.

[0091] Uma outra modalidade, o peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é formulado na forma de tablete ou particulado que inclui um núcleo de tablete, um revestimento de vedação e um revestimento entérico, em que o núcleo de tablete inclui um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis e o peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. A título de exemplo e não como limitação, a formulação do núcleo de tablete pode incluir um álcool de açúcar, como arabitol, eritritol, glicerol, isomalte, lactitol, maltitol, manitol, sorbitol ou xilitol, ou uma celulose microcristalina com qualquer tamanho médio de partícula desejado, como cerca de 50 µm, cerca de 100 µm, cerca de 250 µm ou qualquer tamanho médio de partícula desejado, de preferência, menor que cerca de 1.000 µm. O tablete ou outra formulação pode incluir adicionalmente excipientes farmaceuticamente aceitáveis, como povidona, laurilsulfato de sódio, amido glicolato de sódio, um sal de citrato, como citrato de sódio ou estearato de magnésio. Tais excipientes compreendem agentes que podem servir como um tensoativo, um desintegrante, um lubrificante ou um aglutinante. Os aglutinantes farmacêuticos comuns como povidona, diluentes, agentes antiaderentes, cargas como celulose microcristalina, lubrificantes como estearato de magnésio, desintegrantes como croscarmelose de sódio, conservantes, corantes e similares podem ser assim empregados.

[0092] 2.2 As composições, formulações e métodos revelados no presente documento podem ser usados tanto para aplicações médicas como pecuárias ou aplicações veterinárias. Tipicamente, os métodos são usados em seres humanos, mas também podem ser usados em outros mamíferos. O termo "paciente" denota um indivíduo mamífero e é assim usado ao longo do relatório descritivo e nas reivindicações. As aplicações primárias da presente invenção envolvem pacientes humanos, mas a presente invenção pode ser aplicada a animais de laboratório, fazenda, zoológico, vida selvagem, animal de estimação, esporte ou outros animais. As indicações clínicas e utilidades específicas incluem o seguinte:

[0093] Peptídeos, composições, formulações e métodos da presente invenção são direcionados ao tratamento de IBD, incluindo, porém sem limitação, UC e doença de Crohn, em um sujeito. Em um outro aspecto, a doença inflamatória inclui uma forma de IBD, como doença de Crohn, UC, colite colagenosa, colite linfocítica, colite isquêmica, colite de desvio, síndrome de Behçet, colite infecciosa e colite indeterminada.

[0094] A expressão de várias citocinas é aumentada durante um processo inflamatório, incluindo um processo inflamatório secundário ou que acompanha certas formas de IBD. TNF-α é uma citocina pleiotrópica produzida principalmente por macrófagos e também por outros tipos de células. Outras citocinas que aumentam durante um processo inflamatório incluem IL-1 e IL-6. Embora as citocinas como TNF-α tenham efeitos benéficos em muitos casos, níveis significativamente aumentados ou níveis aumentados por um período de tempo substancial podem ter efeitos patológicos.

[0095] Em uma modalidade, a invenção é direcionada a métodos de uso de um ou mais dos peptídeos da presente invenção para diminuir a produção e expressão de citocinas pró-inflamatórias, incluindo a diminuição da produção e expressão de citocinas pró-inflamatórias secundárias a IBD. A diminuição na produção e expressão de citocinas pró- inflamatórias, incluindo, sem limitação, um ou mais de TNF-α, IL-1 e IL-6, ocorre, de preferência, dentro de um curto período de tempo após a liberação de um peptídeo de uma composição no sítio da doença, como IBD.

[0096] Em uma modalidade relacionada, a invenção é direcionada a métodos de uso de um ou mais dos peptídeos da presente invenção para aumentar a produção e expressão de citocinas anti-inflamatórias. O aumento na produção e expressão de citocinas anti-inflamatórias, incluindo, sem limitação, IL-10, ocorre, de preferência, dentro de um curto período de tempo após a liberação de um peptídeo de uma composição no sítio da doença, como IBD.

[0097] Em geral, a quantidade real de peptídeo cíclico específico a MC1r ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo administrado a um paciente irá variar entre faixas bastante amplas, dependendo do modo de administração,

da formulação usada e da resposta desejada. A dosagem para o tratamento é a administração, por qualquer um dos meios mencionados anteriormente ou qualquer outro meio conhecido na técnica, de uma quantidade suficiente para produzir o efeito terapêutico desejado. Dessa forma, uma quantidade terapeuticamente eficaz inclui uma quantidade de um peptídeo ou composição farmacêutica da presente invenção que é suficiente para aliviar terapeuticamente IBD em um paciente, ou para prevenir ou atrasar o início ou recorrência de IBD, incluindo UC e doença de Crohn, ou para ser profilaticamente eficaz ou preventiva na prevenção ou limitação de recorrências de exacerbações de IBD, incluindo UC e doença de Crohn.

[0098] Em geral, o peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo usado na prática da invenção é altamente ativo. Por exemplo, o peptídeo cíclico pode ser administrado ao lúmen do trato GI, como o lúmen do cólon ou intestino grosso, de preferência, próximo ao sítio de IBD ou outra doença, em cerca de 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,5, 50, 100, 500, 1.000 ou 5.000 μg/kg de peso corporal, dependendo do peptídeo específico selecionado, a formulação de aplicação, da resposta terapêutica desejada e outros fatores conhecidos pelos versados na técnica.

3.0 Terapia de combinação para certas indicações.

[0099] Os peptídeos, composições e métodos da presente invenção podem ser usados para o tratamento de IBD, UC ou doença de Crohn, ou qualquer doença, indicação, condição ou síndrome do trato GI que é responsiva ou mediada por MC1r, por meio da administração em combinação com um ou mais outros compostos farmaceuticamente ativos. Tal administração de combinação pode ser por meio de uma forma de dosagem única que inclui um peptídeo da presente invenção e um ou mais outros compostos farmaceuticamente ativos, tal forma de dosagem única que inclui um tablete ou cápsula. Alternativamente, a administração de combinação pode ser por meio da administração de duas formas de dosagem diferentes, com uma forma de dosagem que contém um peptídeo da presente invenção, e a outra forma de dosagem que inclui um outro composto farmaceuticamente ativo. Nesse caso, as formas de dosagem podem ser iguais ou diferentes. O termo "coadministrador" indica que cada um dentre pelo menos dois compostos na terapia de combinação são administrados durante um período de tempo em que os respectivos períodos de atividade biológica ou efeitos se sobrepõem. Dessa forma, o termo inclui a administração sequencial, bem como simultânea, de compostos em que um composto é um ou mais dos peptídeos da presente invenção. Se mais de um composto for coadministrado, as vias de administração dos dois ou mais compostos não precisam ser as mesmas. Sem pretender limitar as terapias de combinação, o seguinte exemplifica certas terapias de combinação que podem ser empregadas.

[00100] Para o tratamento de doenças, indicações, condições e síndromes relacionadas à inflamação do trato GI, os peptídeos da presente invenção podem ser usados em terapia de combinação, incluindo por meio de coadministração, com um ou mais agentes anti-inflamatórios. Uma classe de agente anti- inflamatório são os glicocorticoides, incluindo, porém sem limitação, cortisona, incluindo acetato de cortisona, hidrocortisona, prednisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, betametasona, triancinolona, beclometasona, prednisona, acetato de fludrocortisterona, acetado de desoxicorticosterona e aldosterona. Uma outra classe de agente anti-inflamatório são os aminossalicilatos, incluindo, porém sem limitação, ácido 5-aminossalicíclico, como mesalamina, balsalazida e olsalazina.

[00101] Outros agentes anti-inflamatórios que podem ser usados em terapia combinada, incluindo por meio de coadministração, incluem aspirina, fármacos anti-inflamatórios não esteroidais (NSAIDs) (como ibuprofeno e naproxina), inibidores TNF-α (como tenidap e rapamicina ou derivados do mesmo), ou antagonistas de TNF-α (por exemplo, infliximabe, OR1384), inibidores da ciclooxigenase (isto é, inibidores de COX-1 e/ou COX-2), agonistas/antagonistas de CTLA4-lg, antagonistas de ligante de CD40, inibidores de IMPDH, como micofenolato , antagonistas da integrina, antagonistas de alfa-4 beta-7 integrina, inibidores da adesão celular, antagonistas de interferon gama, ICAM-1, inibidores da síntese da prostaglandina, budesonida, clofazimina, inibidores da proteína quinase ativada por mitogênio p38, inibidores da proteína tirosina quinase (PTK), inibidores de IKK, outras terapias para o tratamento da síndrome do intestino irritável (por exemplo, como aquelas reveladas na Patente n° U.S.

6.184.231), ou outros inibidores de NF-κB, como corticosteroides, calfostina, CSAIDs, imidazo 4-substituído [1,2-A]quinoxalinas, conforme revelado na Patente n° U.S.

4.200.750; Interleucina-10, salicilatos, óxido nítrico e outros imunossupressores; e os inibidores da translocação nuclear, como fármacos imunossupressores de desoxiespergualina, que podem ser coadministrados incluem azatioprina, mercaptopurina, ciclosporina e metotrexato. A coadministração também pode ser empregada com inibidores do fator de necrose tumoral (TNF)-alfa, como infliximabe,

adalimumabe e golimumabe. Outras terapias biológicas que podem ser usadas incluem natalizumabe, vedolizumabe e ustekinumabe. A coadministração também pode ser empregada com inibidores da bomba de prótons (como omeprazol, pantoprazol, esomeprazol, lansoprazol, rabeprazol, dexlansoprazol, rabeprazol sódico, omeprazol magnésio, pantoprazol sódico, naproxeno/esomeprazol, esomeprazol magnésio, esomeprazol sódico ou íon de omeprazol/vicarbonato), ou com antibióticos para controlar o crescimento excessivo de bactérias no intestino delgado (como rifaximina ou neomicina).

4.0 Métodos de fabricação de formulações de aplicação de multiparticulado.

[00102] Em um aspecto, os peptídeos empregados na presente invenção, incluindo peptídeos específicos a MC1r, são formulados para aplicação oral de peptídeo intacto ao lúmen do trato GI, de preferência ao lúmen das regiões inferiores do trato GI, e ainda preferencialmente antes de, incluindo imediatamente antes de qualquer situação de doença, como IBD, no trato GI. Desviar do estômago e de regiões superiores do trato GI, como o intestino delgado, para aplicar fármacos às regiões inferiores do trato GI é desejado para muitas moléculas de fármaco, particularmente fármacos proteicos que compreendem proteínas ou peptídeos. A boca e o estômago incluem várias enzimas que podem quebrar as cadeias de aminoácidos. O intestino delgado produz uma variedade de peptidases que podem reduzir as cadeias de aminoácidos, incluindo peptídeos, a unidades pequenas, incluindo dipeptídeos e resíduos de aminoácidos únicos, que podem ser absorvidas e digeridas. Dessa forma, para a aplicação de peptídeos intactos ao lúmen do trato GI inferior, incluindo o cólon, precisa ser empregado um método e formulação que transitam pelo estômago e regiões superiores do trato GI sem degradação peptídica. Essa abordagem também pode ser usada se o peptídeo não for estável no meio ácido do estômago devido ao pH ou atividade enzimática.

[00103] Existem várias abordagens que podem ser usadas conceitualmente para atingir o direcionamento do trato GI inferior, incluindo o uso de pró-fármacos, revestimento com polímeros sensíveis a pH, projeto de formas de dosagem de liberação temporal ou utilização de polímeros biodegradáveis, como azopolímeros e polissacarídeos que degradam exclusivamente pelas bactérias do cólon. Cada sistema tem vantagens e desvantagens.

[00104] As formas de dosagem unitária única para aplicação no cólon podem sofrer da desvantagem de desintegração prematura da formulação devido à alta viabilidade inter e intra-sujeito e reprodutibilidade insatisfatória que pode levar à perda da ação terapêutica local no cólon. Os sistemas de aplicação de multiparticulado oferecem vantagens como melhor biodisponibilidade, menor risco de irritação local e esvaziamento gástrico previsível.

[00105] Dessa forma, em um aspecto, a invenção fornece formas de dosagem particulada que contêm um peptídeo específico a receptor de melanocortina, como um peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, cuja forma particulada protege o peptídeo específico a receptor de melanocortina ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo enquanto no ambiente ácido do estômago e previne ou limita a degradação de protease no intestino delgado ou trato GI superior, mas libera o peptídeo específico a receptor de melanocortina intacto ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo no trato GI inferior, como o intestino grosso ou cólon. Por este meio, o peptídeo específico a receptor de melanocortina ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo se liga a e agoniza um ou mais receptores MC, de preferência, MC1r, presentes sobre ou no lúmen do trato GI inferior, incluindo o intestino grosso ou cólon, ou próximo a o lúmen do trato GI inferior, incluindo o intestino grosso ou cólon, efetuando assim uma resposta terapêutica.

[00106] Essa abordagem pode ser empregada com o uso de micropartículas de liberação atrasada (entérica) com o uso de copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH. Uma forma de copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH que podem ser usados são os polímeros Eudragit® fabricados pela Evonik Industries, sendo entendido que o uso de outros e diferentes copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH e outros e diferentes copolímeros ou polímeros sensíveis a pH, podem ser empregados na invenção.

[00107] O peptídeo específico a receptor de melanocortina pode constituir de cerca de 0,1% a cerca de 30%, em uma base em pesos, das partículas de liberação atrasada sensíveis a pH. De preferência, o peptídeo específico a receptor de melanocortina constitui cerca de 1% a cerca de 10%, ou cerca de 2% a cerca de 5%, em uma base em pesos, das partículas de liberação atrasada sensíveis a pH.

[00108] As partículas ou micropartículas podem ser preenchidas em cápsulas, como cápsulas de gelatina dura, ou podem ser formuladas em tabletes, microesferas, grânulos, pós, comprimidos revestidos, trociscos, sachês, hóstias, bolsas, gomas, granulados e suspensões ou similares. Em um aspecto, se as partículas que compreendem um peptídeo específico a receptor de melanocortina, de preferência um peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH forem formulados em uma forma sólida, como uma cápsula ou um tablete, a cápsula ou tablete pode ser revestido com um revestimento de vedação ou um revestimento entérico, ou ambos. Em geral, quaisquer formas sólidas de aplicação de fármacos, incluindo tabletes, microesferas, grânulos, comprimidos revestidos ou similares, podem ser revestidas com um revestimento de vedação ou um revestimento entérico, ou ambos. Os revestimentos entéricos podem compreender copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH.

[00109] Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação, forma de dosagem e método em que menos de 10% do fármaco ativo, como um peptídeo específico a receptor de melanocortina, peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é liberado em um pH ácido de cerca de 1 a cerca de 3 em um período de duas horas, menos do que 10% adicionais do fármaco ativo são liberados em um pH ácido de cerca de 4,5 a 5,5 em um período de uma hora, e não menos que 80% do fármaco ativo é liberado a um pH maior que cerca de 6 em um período de quatro a sete horas.

[00110] De utilidade particular na invenção são os polimetacrilatos dependentes de pH, como Eudragit® L100-55, Eudragit® L100, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D. Esses polimetacrilatos compreendem:

[00111] Eudragit® L100-55: Substância sólida. O produto contém 0,7% de Laurilsulfato de sódio Ph. Eur. / NF e

2,3% de Polissorbato 80 Ph. Eur. / NF em substância sólida. Eudragit® L100-55 contém um copolímero aniônico com base em ácido metacrílico e acrilato de etila. A razão entre os grupos carboxila livres e os grupos éster é de aproximadamente 1:1. Os monômeros são distribuídos aleatoriamente ao longo da cadeia do copolímero. Com base no método SEC, a massa molar média ponderal (Mw) de Eudragit® L100-55 é de aproximadamente 320.000 g/mol.

[00112] Eudragit® L100: Substância sólida. O produto contém 0,3% de Laurilsulfato de sódio Ph. Eur. / NF em substância sólida. Eudragit® L100 contém um copolímero aniônico com base em ácido metacrílico e metacrilato de metila. A razão entre os grupos carboxila livres e os grupos éster é de aproximadamente 1:1 em Eudragit® L100. Com base no método SEC, a massa molar média ponderal (Mw) de Eudragit® L100 é de aproximadamente 125.000 g/mol.

[00113] Eudragit® S100: Substância sólida. O produto contém 0,3% de Laurilsulfato de sódio Ph. Eur. / NF em substância sólida. Eudragit® S100 contém um copolímero aniônico com base em ácido metacrílico e metacrilato de metila. A razão entre os grupos carboxila livres e os grupos éster é de aproximadamente 1:2 em Eudragit® S100. Com base no método SEC, a massa molar média ponderal (Mw) de Eudragit® S100 é de aproximadamente 125.000 g/mol.

[00114] Eudragit® FS30D: Fornecido como uma dispersão aquosa com 30% de substância seca. A água é testada de acordo com as especificações de "Purified Water in bulk” Ph. Eur. e de acordo com as especificações para condutividade de "Purified Water" USP. A dispersão contém 0,3% de Laurilsulfato de sódio Ph. Eur. / NF e 1,2 % de Polissorbato

80 Ph. Eur. / NF em substância sólida, como emulsificantes. Eudragit® FS30D é a dispersão aquosa de um copolímero aniônico com base em acrilato de metila, metacrilato de metila e ácido metacrílico. A razão entre os grupos carboxila livres e os grupos éster é de aproximadamente 1:10. Os monômeros são distribuídos aleatoriamente ao longo da cadeia do copolímero. Com base no método SEC, a massa molar média ponderal (Mw) de Eudragit® FS30D é de aproximadamente 280.000 g/mol.

[00115] 1 g de Eudragit® L100, Eudragit® L100-55 ou Eudragit® S100 se dissolve em 7 g de metanol, etanol, em álcool isopropílico aquoso e em acetona (contendo aproximadamente 3% de água), bem como em hidróxido de sódio 1 N, para gerar soluções claras a turvas. Essas preparações específicas de Eudragit® são praticamente insolúveis em acetato de etila, cloreto de metileno, éter de petróleo e água. Eudragit® L100-55 se dissolve acima de pH 5,5; Eudragit® L100 se dissolve acima de pH 6,0; Eudragit® S100 se dissolve acima de pH 7,0 e Eudragit® FS30D se dissolve acima de pH 7,0.

[00116] Várias técnicas estão disponíveis para o encapsulamento de fármaco. Em um aspecto, a formação de micropartículas através de dispersão sólida seguido de micronização pode ser usada, o que é simples e fornece alta eficiência de encapsulação e alto rendimento.

[00117] Para fazer o produto farmacêutico, o peptídeo específico a receptor de melanocortina, o peptídeo cíclico específico a MC1r ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo podem ser dispersos em um solvente adequado, como acetona, metanol ou água, ou combinações de alguns ou todos os anteriores. O copolímero ou copolímeros Eudragit® podem ser dissolvidos em metanol ou acetona. A dispersão de fármaco que compreende o peptídeo é adicionada à solução de copolímero com agitação. A mistura resultante é então seca a vácuo, pulverizada e peneirada através de uma peneira adequada. Em um aspecto, as peneiras de 30 mesh a 60 mesh são empregadas, em que o tamanho de partícula resultante coletado na peneira de 60 mesh está entre 250 e 600 µm de diâmetro. Em um outro aspecto, as partículas coletadas na peneira de 60 mesh são suspensas ou enxaguadas com solução de ácido clorídrico 0,1 M pH 1,2, para remover moléculas de fármaco de peptídeo MC1r de superfície e subsequentemente secas. As micropartículas resultantes podem ser encapsuladas ou comprimidas. As cápsulas ou tabletes preenchidos também podem ser revestidos entericamente para reduzir ainda mais a quantidade de fármaco liberado no trato gastrointestinal superior, permitindo assim que mais fármaco alcance o cólon.

[00118] Alternativamente, metanol, metanol-água (como uma mistura 2:1) e água podem ser empregados como um solvente/dispersante para o peptídeo específico a receptor de melanocortina ou sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo. Alternativamente, acetona ou acetona-água podem ser empregadas como solvente/dispersante. Em um aspecto, se a água for empregada, a mesma pode ser usada em uma quantidade que não seja maior que cerca de 3% da quantidade de acetona usada na dissolução do copolímero (ou copolímeros).

[00119] As formulações empregadas na invenção podem, em uma modalidade, incorporar polímeros Eudragit®, como, por exemplo, L100-55, que são solúveis e liberam um peptídeo associado a um pH mais baixo, combinado com polímeros que são solúveis e liberam um peptídeo associado em um pH mais alto, como Eudragit® S100 ou FS30D, ou ambos. Essa blenda assegura a liberação em uma faixa mais ampla de pH.

A liberação de faixa mais ampla de pH é superior às formulações da técnica anterior para liberação de cólon em um único pH específico, devido ao fato de que permite a liberação parcial mais acima no trato GI, onde a doença pode estar presente em alguns pacientes, e também devido ao fato de que fornece liberação em uma porção do trato GI de pacientes que têm um trato GI de pH mais baixo do que observado em sujeitos normais, sendo o valor de pH mais baixo devido ao estado de doença IBD.

Se desejado, como no caso de pH do trato GI inferior em certos estados de doença IBD, diferentes polímeros Eudragit® (por exemplo, Eudragit® L100-55) podem ser parcialmente neutralizados e/ou outros aditivos, como ácido algínico, sórbico ou succínico ou seus sais adicionados, para aumentar a liberação do fármaco em um pH mais baixo, como 4,5 a 5,5. A utilização de um perfil de liberação de pH de ampla faixa combinado com um peptídeo específico a receptor de melanocortina, cujo peptídeo específico a receptor de melanocortina se liga aos receptores presentes sobre ou na superfície luminal do trato GI, em vez de fornecer um benefício terapêutico através da absorção sistêmica, fornece um agente terapêutico adequado para o tratamento de uma ampla variedade de pacientes.

Dessa forma, devido ao fato de que há pouca ou nenhuma absorção sistêmica do peptídeo específico a receptor de melanocortina, e pouco ou nenhum benefício terapêutico de qualquer absorção sistêmica que possa ocorrer, a formulação é, de preferência, destinada a fornecer benefício através da faixa do trato GI em que a doença está ou pode estar presente, e para fornecer dosagem suficiente dentro de tal faixa a fim de efetuar uma remissão ou cura da IBD.

É particularmente importante notar que, devido ao fato de que há pouca ou nenhuma absorção sistêmica do peptídeo específico a receptor de melanocortina, há pouca ou toxicidade sistêmica ou efeitos colaterais sistêmicos ou efeitos adversos que limitam a quantidade de peptídeo específico a receptor de melanocortina que pode ser aplicado ao lúmen do trato gastrointestinal.

[00120] Em algumas modalidades, as combinações de copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH diferentes formulados como partículas ou micropartículas de liberação atrasada (entérica) são empregadas. Em algumas modalidades, as partículas ou micropartículas compreendem Eudragit® L100-55 e Eudragit® S100 em uma razão entre pesos de L100-55 para S-100 de cerca de 1:1, cerca de 2:3, cerca de 1:2, cerca de 3:2 ou cerca de 2:1. Em outras modalidades, as partículas ou micropartículas compreendem Eudragit® L100-55, Eudragit® L100 e Eudragit® S100 em razão entre pesos de L100- 55 para L100 para S-100 de cerca de 1:1:1, cerca de 4:3:3, cerca de 3:4:3, cerca de 1:1:1, cerca de 1:2:1, cerca de 1:2:2, cerca de 2:1:1, cerca de 2:2:1 ou cerca de 2:1:2. Em outras modalidades, as partículas ou micropartículas compreendem Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D de cerca de 6:6:1, cerca de 23,35:23,3.75, cerca de 5:5:1, cerca de 4:4:1, cerca de 6:5:1, cerca de 5:6:1, cerca de 3:3:1, cerca de 6:5:2 ou cerca de 5:6:2. Particularmente preferencial é uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D de cerca de 6:6:1 ou cerca de 23,25:23:3,75.

[00121] A quantidade de peptídeo específico a receptor de melanocortina, em uma base em pesos dos polímeros de liberação atrasada sensíveis a pH, pode constituir de cerca de 0,1% a cerca de 30%. De preferência, o peptídeo específico a receptor de melanocortina constitui cerca de 1% a cerca de 10%, ou cerca de 2% a cerca de 5%, em uma base em pesos, dos polímeros de liberação atrasada sensíveis a pH.

[00122] Em geral, as formas sólidas de peptídeo específico a receptor de melanocortina disposto dentro de uma matriz de polímero de liberação dependente de pH podem ser preparadas pelos métodos aqui descritos, ou por técnicas que incluem, porém sem limitação, aquecimento, resfriamento, secagem por congelamento, secagem por aspersão, liofilização, evaporação de solvente rápida, recristalização de solvente, precipitação induzida por micro-ondas, precipitação induzida por sonicação e similares. O tamanho de partícula das formas sólidas resultantes, que pode variar, por exemplo, de cerca de 25 µm ou mais dimensões mínimas a cerca de 1.000 µm de diâmetro ou dimensões máximas mais baixas, pode ser controlado, como por meio de técnicas de redução de tamanho de partícula, incluindo trituração, moagem , micronização ou sonicação, com ou sem peneiramento através de peneiras adequadas, ou outros métodos conhecidos na técnica para selecionar as faixas desejadas de tamanho de partícula de um mínimo definido a um máximo definido. Em um aspecto, o tamanho de partícula é menor que cerca de 1.000 µm de diâmetro, ou menor que cerca de 600 µm de diâmetro e maior que cerca de 25 µm de dano, ou maior que cerca de 250 µm de diâmetro.

5.0 Revestimentos entéricos.

[00123] Em um aspecto, o peptídeo específico a receptor de melanocortina, peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é formulado para aplicação oral, como na forma de cápsula ou tablete. O peptídeo pode ser formulado de modo que o peptídeo esteja na forma de cápsula ou tablete envolto em um protetor entérico, de preferência, de modo que o peptídeo não seja liberado até que o tablete ou cápsula tenha transitado pelo estômago e, opcionalmente, tenha transitado adicionalmente por todo ou uma parte do intestino delgado.

No contexto deste pedido, será entendido que o termo revestimento ou material entérico se refere a um revestimento ou material que passará através do estômago essencialmente intacto, mas se desintegrará rapidamente no intestino, de preferência, porém sem limitação, no intestino grosso, para liberar a substância farmacêutica de peptídeo ativa.

Uma solução de revestimento entérico que pode ser usada inclui ftalato acetato de celulose e, opcionalmente, outros ingredientes, como hidróxido de amônio, triacetina, álcool etílico, azul de metileno e água purificada.

O ftalato acetato de celulose é um polímero que pode ser usado para revestir entericamente formas de dosagem individuais, como tabletes e cápsulas, e não é solúvel em água a um pH de menos que cerca de 5,5 a cerca de 6,0. Os revestimentos entéricos, incluindo ftalato acetato de celulose, fornecem proteção contra o ambiente ácido do estômago, mas começam a se dissolver no ambiente do duodeno (pH de cerca de 6 a 6,5), e são completamente dissolvidos no momento em que a forma de dosagem atinge o íleo (pH de cerca de 7 a 8). Além do ftalato acetato de celulose, outros materiais de revestimento entérico são conhecidos e podem ser usados com a presente invenção, incluindo, sem limitação, succinato de hidroxipropilmetiletilcelulose, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose, ftalato acetato de polivinila e copolímero de ácido metacrílico-metacrilato de metila.

O revestimento entérico empregado promove a dissolução da forma de dosagem principalmente em um sítio fora do estômago, e pode ser selecionado de modo que o revestimento entérico se dissolva em um pH de aproximadamente pelo menos 6,0, mais preferencialmente em um pH de cerca de 6,0 a cerca de 8,0. Em um aspecto preferencial, o revestimento entérico se dissolve e se decompõe na proximidade do íleo.

[00124] Em algumas modalidades, o peptídeo específico a receptor de melanocortina, peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é formulado em cápsula preenchida com particulado ou forma de tablete com um revestimento externo, tal revestimento opcionalmente que compreende ou consiste em um polímero que é estável em pH baixo, como pH ≤ 6,0, mas que se dissolve a um pH maior que cerca de 6,0. O revestimento externo pode ainda compreender ou consistir em um polímero que é estável em condições ácidas, incluindo no estômago, mas que pode se dissolver em um pH mais alto, como o pH do lúmen do cólon. Também é vantajoso e contemplado que a taxa de dissolução do revestimento pode variar dependendo dos parâmetros de liberação desejados.

[00125] O revestimento externo pode, a título de exemplo e não como limitação, consistir em ou incluir um polímero responsivo a e solúvel em faixas de pH especificadas, incluindo polímeros, como um poli(met)acrilato. Em um aspecto, o revestimento externo consiste em ou inclui um ou mais polímeros ou copolímeros que contêm um grupo aniônico ou grupo que pode ser convertido em um grupo aniônico. Em um outro aspecto, o revestimento externo consiste em ou inclui um ou mais copolímeros de (met)acrilato que contêm um grupo catiônico ou um grupo que pode ser convertido em um grupo catiônico juntamente com um ou mais polímeros ou copolímeros que contêm um grupo aniônico ou grupo que pode ser convertido em um grupo aniônico. Certos tais polímeros, copolímeros e copolímeros de (met)acrilato são mostrados na Patente n° US 9.237.760, aqui incorporada por referência como se fosse apresentada na íntegra. Dessa forma, o revestimento entérico pode ser um polímero de acrilato, como Eudragit® S100 ou Eudragit® L100. Eudragit® S100 se dissolve em cerca de pH 7,0, enquanto Eudragit® L100 se dissolve em cerca de pH 6,0. Qualquer um dos revestimentos entéricos anteriormente mencionados pode ser empregado com as formulações anteriormente mencionadas, incluindo, sem limitações, formulações que compreendem uma formulação multiparticulada de Eudragit®.

[00126] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica que inclui uma cápsula ou um tablete pode compreender adicionalmente uma vedação ou revestimento de vedação. Esse revestimento pode impedir a penetração de umidade no tablete. Dessa forma, um revestimento de vedação pode incluir um polímero ou outro material que forneça uma barreira farmaceuticamente aceitável à umidade. Tais revestimentos de vedação podem incluir álcool polivinílico e várias combinações de polímeros e plastificantes, opcionalmente com um pigmento desejado.

[00127] Outros polímeros dependentes de pH que podem ser usados como revestimentos entéricos incluem, porém sem limitação, derivados de celulose entérica, como ftalato de hidroxipropilmetilcelulose, acetado succinato de hidroxipropilmetilcelulose, ftalato acetado de celulose; resinas naturais como goma-laca e zeína; derivados de acetato entérico, como ftalato acetato de polivinila, ftalato acetado de celulose, acetaldeído acetato de dimetilcelulose; e vários polímeros à base de polimetacrilato além daqueles revelados acima. O revestimento entérico dependente de pH também pode compreender combinações de dois ou mais polímeros dependentes de pH, incluindo qualquer um dos anteriores.

6.0 Peptídeos usados na presente invenção.

[00128] Em um aspecto, a invenção usa um peptídeo cíclico que contém uma sequência de núcleo derivada de His- Phe-Arg dentro da porção cíclica, mas não incluindo Trp dentro da porção de núcleo, e onde Trp, ou um derivado ou mimético do mesmo (definido como um resíduo de aminoácido com uma cadeia lateral incluindo pelo menos uma arila ou heteroarila, incluindo, porém sem limitação, Nal 1 ou Nal 2), é o resíduo de aminoácido imediatamente fora da porção cíclica no lado de C-terminal. Em um aspecto, a sequência His-Phe-Arg-Xaa6-Trp (SEQ ID NO: 1) é empregada, em que Xaa6 é um aminoácido em que a cadeia lateral do mesmo forma uma ponte cíclica com a cadeia lateral de um outro aminoácido do peptídeo.

[00129] A sequência de núcleo derivada de His-Phe- Arg-Xaa6-Trp (SEQ ID NO: 1) pode incluir uma série de substituições. A posição His pode ser His, ou pode ser um Pro substituído ou não substituído ou um aminoácido com uma cadeia lateral incluindo pelo menos uma amina primária, amina secundária, alquila, cicloalquila, ciclo-heteroalquila, arila, heteroarila, álcool, éter, sulfeto, sulfona, sufóxido, carbomila ou carboxila. Pro substituído inclui, porém sem limitação, aminoácidos como Hyp, Hyp(Bzl), Pro(4R-Bzl) ou Pro(4R-NH2). A posição Phe pode ser Phe, mas é mais tipicamente D-Phe, D-Nal 1, D-Nal 2 substituído ou não substituído ou um aminoácido com uma cadeia lateral incluindo piridila. A posição Arg pode ser Arg, Lys, Orn, Dab ou Dap, ou um Pro substituído ou não substituído, ou Cit, ou pode ser um aminoácido com uma cadeia lateral que inclui pelo menos uma amina primária, amina secundária, guanidina, ureia, alquila, cicloalquila, ciclo- heteroalquila, arila, heteroarila ou éter. Xaa6 pode ser um aminoácido com uma cadeia lateral que inclui uma amina primária, como Lys, Orn, Dab, Dap, um aminoácido com um grupo carboxila, como Asp, Glu ou hGlu, ou um aminoácido com um grupo dissulfeto, como Cys ou Pen, todos dependendo da natureza da ponte cíclica. A posição Trp pode ser um aminoácido com uma cadeia lateral incluindo pelo menos uma arila ou heteroarila substituída ou não substituída, como Trp, Nal 1 ou Nal 2.

[00130] Em um aspecto, a invenção usa uma formulação que compreende um peptídeo cíclico de fórmula (I):

O R1 R8 R2 R9

O

NH N R4 R7 R3 O

H O N N

O R6 R5 (I), incluindo todos os enantiômeros, estereoisômeros ou diastereoisômeros dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer um dos anteriores, em que: R1 é -H, -NH-R10, -NH-R10-R11 ou -NH-R11; R2 é -CH- ou -N-; R3 é -H, -CH3 ou -CH2-, e se for -CH2- forma com R4 z R12

N um anel da estrutura geral ; R4 é -H, -(CH2)z- se R3 for -CH2-, e se for -(CH2)z- forma o anel com R3, em que qualquer H em -(CH2)z- é opcionalmente substituído por R12, ou R4 é -(CH2)w-R13-(CH2)w- R14, em que qualquer H em qualquer (CH2)w é opcionalmente substituído por -(CH2)w-CH3; R5 é -(CH2)w-R15; R6 é -H, -CH3 ou -CH2-, e se for -CH2- forma com R7 z R12

N um anel da estrutura geral ; R7 é -(CH2)z- se R6 for -CH2-, e se for -(CH2)z- forma o anel com R6, ou R7 é -(CH2)w-R16; R8 é -R17-R18 ou -R18; R9 é -(CH2)x-C(=O)-NH-(CH2)y-, -(CH2)x-NH-C(=O)-(CH2)y-, -(CH2)x-C(=O)-(CH2)z-C(=O)-(CH2)y-, -(CH2)x-C(=O)-NH-C(=O)-(CH2)y-, -(CH2)x-NH-C(=O)-NH-(CH2)y-, -(CH2)x-NH-C(=O)-(CH2)z-C(=O)-NH-(CH2)y-, ou -(CH2)x-S-S-(CH2)y-; R10 é de um a três resíduos de aminoácidos; R11 é H ou um grupo C1 a C17 acila, em que o C1 a C17 compreende uma alquila, cicloalquila, alquilcicloalquila, arila ou arilarila linear ou ramificada; R12 está opcionalmente presente, e se estiver presente, é independentemente, em cada ocorrência, -R13-(CH2)w-

R14; R13 está opcionalmente presente, e se estiver presente, é independentemente, em cada ocorrência -O-, -S-, -NH-, -S(=O)2-, -S(=O)-, -S(=O)2-NH-, -NH-S(=O)2-, -C(=O)-, -C(=O)-O-, -O-C(=O)-, -NH-C(=O)-O-, -O-C(=O)-NH-, -NH-C(=O)-, ou -C(=O)-NH-; R14 é independentemente, em cada ocorrência, -H, - CH3, -N(R19a)(R19b), -NH-(CH2)z-N(R19a)(R19b), -NH-CH(=NH)- N(R19a)(R19b), -NH-CH(=O)-N(R19a)(R19b), -O(R19a), -(R19a)(R19b), - S(=O)2(R19a), -C(=O)-O(R19a),

em que qualquer anel em R14 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes de anel, e quando um ou mais substituintes estiverem presente, são iguais ou diferentes e independentemente hidroxila, halogênio, sulfonamida, alquila, -O-alquila, arila, -O-arila, C(=O)-OH ou C(=O)-N(R19a)(R19b); R15 é fenila, naftila ou piridila, opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados independentemente a partir de halo, (C1-C10)alquil-halo, (C1- C10)alquila, (C1-C10)alcóxi, (C1-C10)alquiltio, arila, arilóxi, nitro, nitrila, sulfonamida, amino, amino monossubstituído, amino dissubstituído, hidróxi, carbóxi e alcóxi-carbonila; R16 é -H, -N(R19a)(R19b), -NH-(CH2)z-N(R19a)(R19b), -NH- CH(=NH)-N(R19a)(R19b), -NH-CH(=O)-N(R19a)(R19b), -O(R19a), uma cadeia de C1 a C17 alquila linear ou ramificada, -C(=O)- N(R19a)(R19b), -S(=O)2(R19a),

em que qualquer anel é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes de anel opcionais, e quando um ou mais substituintes estiverem presentes, são iguais ou diferente e independentemente hidroxila, halogênio, sulfonamida, alquila, -O-alquila, arila, aralquila, O- aralquila ou -O-arila; R17 é de um a três resíduos de aminoácidos; R18 é -OH, -N(R19a)(R19b), - N(R19a)(CH2)w-(C1- C7)cicloalquila, ou -O-(CH2)w-(C1-C7)cicloalquila; R19a e R19b são cada um, independentemente H ou uma cadeia de C1 a C4 alquila linear ou ramificada; w é, em cada ocorrência, independentemente 0 a 5; x é 1 a 5; y é 1 a 5; e z é, em cada ocorrência, independentemente 1 a 5; No peptídeo cíclico de fórmula (I) R17 pode ser um único resíduo de aminoácidos da fórmula R20 (CH2)w

N

H O em que R20 é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes de anel, e quando um ou mais estão presentes, são iguais ou diferentes e independentemente hidroxila, halogênio, sulfonamida, alquila, -O-alquila, arila ou -O- arila.

[00131] Em um outro aspecto, a invenção usa um peptídeo cíclico de fórmula (II):

HN

O O R1 N

H R2 R9 R18

O

NH HN R4 R7

O H O N N

O H R5 (II), em que as variáveis são conforme atribuído para a fórmula (I).

[00132] Em um outro aspecto, a invenção usa um peptídeo cíclico de fórmula (III):

HN R1 O O

N

H R2 R9 R18

O

NH HN R4 R7

O H O N N

O H R21c R21b R21a (III), em que R21a, R21b e R21c são independentemente, em cada ocorrência, hidrogênio, halo, (C1-C10)alquil-halo, (C1- C10)alquila, (C1-C10)alcóxi, (C1-C10)alquiltio, arila, arilóxi, nitro, nitrila, sulfonamida, amino, amino monossubstituído, amino dissubstituído, hidróxi, carbóxi ou alcóxi-carbonila, e todas as outras variáveis são conforme atribuído para a fórmula

(I).

[00133] Em um outro aspecto, a invenção usa um peptídeo cíclico de fórmula (IV): R11

NH R22 HN

O O O HN N

H R9 R18

O

NH HN R4 R7

O H O N N

O H R21c R21b R21a (IV), em que R22 é H ou uma C1 a C9 alquila, cicloalquila, alquilcicloalquila, arila ou alquilarila linear ou ramificada; R21a, R21b e R21c são conforme definido para a fórmula (III); e todas as outras variáveis são conforme atribuído para a fórmula (I).

[00134] Em um outro aspecto, a invenção usa um peptídeo cíclico de fórmula (V): R11

NH R22 HN

O O O HN N

H R9 R18

O NH NH O N H O HN N N

O H H R21c N NH2 R21b HN R21a (V),

em que as variáveis são conforme atribuído para o peptídeo cíclico de fórmula (IV).

[00135] Em um outro aspecto, a invenção usa um peptídeo cíclico de fórmula (VI):

HN O O N

H R9 R18

O

NH HN R4 R7

O H O N N

O H R21c R21b R21a (VI), em que as variáveis são conforme atribuído para o peptídeo cíclico de fórmula (III).

[00136] No peptídeo cíclico de fórmula (I), R9 pode ser -(CH2)x-C(=O)-NH-(CH2)y- em que x é 4 e y é 3, em que x é 3 e y é 2, ou em que x é 2 e y é 1. Alternativamente, R9 pode ser -(CH2)x-NH-C(=O)-(CH2)y- em que x é 1 e y é 2, em que x é 2 e y é 3, ou em que x é 3 e y é 4.

[00137] No peptídeo cíclico de fórmula (I), R3 pode z R11

N formar com R4 um anel da estrutura geral em que z é

3.

[00138] No peptídeo cíclico de fórmula (I), R17 pode ser um único resíduo de aminoácidos da fórmula

R14 (CH2)w

N H O .

[00139] A invenção, portanto, em um aspecto, pode usar um peptídeo cíclico de fórmula (VII): Z-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Y (VII) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Z é H ou um grupo N-terminal; Xaa1 está opcionalmente presente, e se estiver presente, é de um a três resíduos de aminoácidos L- ou D- isômeros; Xaa2 e Xaa6 são aminoácidos L- ou D-isômeros em que as cadeias laterais dos mesmos compreendem uma ponte cíclica; Xaa3 é L- ou D-Pro, opcionalmente substituído por hidroxila, halogênio, sulfonamida, alquila, -O-alquila, arila, alquil-arila, alquil-O-arila, alquil-O-alquil-arila, ou -O- arila, ou Xaa3 é um L- ou D-isômero de um aminoácido com uma cadeia lateral que inclui pelo menos uma amina primária, amina secundária, alquila, cicloalquila, ciclo-heteroalquila, arila, heteroarila, éter, sulfeto ou carboxila; Xaa4 é um aminoácido L- ou D-isômero com uma cadeia lateral que inclui fenila, naftila ou piridila, opcionalmente em que o anel é substituído por um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir de halo, (C1- C10)alquil-halo, (C1-C10)alquila, (C1-C10)alcóxi, (C1- C10)alquiltio, arila, arilóxi, nitro, nitrila, sulfonamida, amino, amino monossubstituído, amino dissubstituído, hidróxi, carbóxi e alcóxi-carbonila;

Xaa5 é L- ou D-Pro ou Xaa5 é um aminoácido L- ou D- isômero com uma cadeia lateral que inclui pelo menos uma amina primária, amina secundária, guanidina, ureia, alquila, cicloalquila, ciclo-heteroalquila, arila, heteroarila ou éter; Xaa7 está opcionalmente presente, e se estiver presente, é de um a três resíduos de aminoácidos L- ou D- isômeros; e Y é um grupo C-terminal.

[00140] Em um aspecto, Xaa4 pode ser D-Phe, opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados independentemente a partir de halo, (C1- C10)alquil-halo, (C1-C10)alquila, (C1-C10)alcóxi, (C1- C10)alquiltio, arila, arilóxi, nitro, nitrila, sulfonamida, amino, amino monossubstituído, amino dissubstituído, hidróxi, carbóxi e alcóxi-carbonila.

[00141] Em um outro aspecto, um dentre Xaa2 e Xaa6 pode ser um L- ou D-isômero de Asp, hGlu ou Glu e o outro dentre Xaa2 e Xaa6 é um L- ou D-isômero de Lys, Orn, Dab ou Dap. Em um aspecto alternativo, cada um dentre Xaa2 e Xaa6 pode ser Cys, D-Cys, Pen ou D-Pen.

[00142] Em um outro aspecto, Xaa1 pode ser um aminoácido com uma cadeia lateral que inclui uma alquila, cicloalquila, ciclo-heteroalquila, arila ou heteroarila linear ou ramificada.

[00143] Em um outro aspecto, Xaa7 pode ser um aminoácido com uma cadeia lateral que inclui pelo menos uma arila ou heteroarila, opcionalmente substituída por um ou mais substituintes de anel, e quando um ou mais substituintes estão presentes, são iguais ou diferentes e independentemente hidroxila, halogênio, sulfonamida, alquila, -O-alquila, arila ou -O-arila.

[00144] Em um outro aspecto, o grupo N-terminal pode ser um grupo C1 a C17 acila, em que o C1 a C17 compreende uma alquila, cicloalquila, alquilcicloalquila, arila ou alquilarila linear ou ramificada, uma cadeia de C1 a C17 alquila, arila, heteroarila, alqueno, alquenila ou aralquila linear ou ramificada ou uma cadeia de C1 a C17 alquila, arila, heteroarila, alqueno, alquenila ou aralquila linear ou ramificada N-acilada.

[00145] Em um outro aspecto, Y pode ser uma hidroxila, uma amida ou uma amida substituída por uma ou duas cadeias de C1 a C17 alquila, cicloalquila, arila, alquil cicloalquila, aralquila, heteroarila, alqueno, alquenila ou aralquila linear ou ramificada.

[00146] A invenção fornece, portanto, em um outro aspecto, um peptídeo cíclico de fórmula (VII) definido conforme acima, mas em que Xaa4 é D-Phe, opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados independentemente a partir de halo, (C1-C10)alquil-halo, (C1-C10)alquila, (C1-C10)alcóxi, (C1- C10)alquiltio, arila, arilóxi, nitro, nitrila, sulfonamida, amino, amino monossubstituído, amino dissubstituído, hidróxi, carbóxi e alcóxi-carbonila, Xaa5 é um L- ou D-isômero de Arg, Lys, Orn, Dab ou Dap; e Xaa7 é um L- ou D-isômero de Trp, Nal 1 ou Nal 2.

[00147] No supracitado, em um aspecto, Xaa3 pode ser um L- ou D-isômero de His, e em um outro aspecto, Z pode ser um grupo C1 a C17 acila e Xaa1 pode ser um L- ou D-isômero de Nle.

[00148] No supracitado, e na fórmula (I), Pro substituído pode ser, por exemplo, Hyp, Hyp(Bzl), Pro(4-Bzl) e Pro(4-NH2).

[00149] Os peptídeos abrangidos pelas fórmulas (I) a (VII) contêm um ou mais elementos assimétricos, como centros estereogênicos, eixos estereogênicos e similares, de modo que os peptídeos abrangidos pela fórmula (I) possam existir em formas estereoisoméricas diferentes. Tanto para os peptídeos específicos como genericamente descritos, incluindo os peptídeos abrangidos pelas fórmulas (I) a (VII), todas as formas de isômeros em todos os centros quirais ou outros centros isoméricos, incluindo enantiômeros e diastereômeros, destinam-se a ser abrangidas no presente documento. Cada um dos peptídeos da invenção inclui múltiplos centros quirais e podem ser usados como uma mistura racêmica ou uma mistura enantiomericamente enriquecida, além do uso dos peptídeos da invenção em preparações enantiopuras. Tipicamente, os peptídeos da invenção serão sintetizados com o uso de reagentes quirais puros, como L- ou D-aminoácidos especificados, com o uso de reagentes, condições e métodos de modo que a pureza enantiomérica seja mantida, mas é possível e contemplado que misturas racêmicas podem ser feitas. Tais misturas racêmicas podem ser opcionalmente separadas com o uso de técnicas bem conhecidas e um enantiômero individual pode ser usado sozinho. Em casos e sob condições específicas de temperatura, solventes e pH em que os peptídeos podem existir em formas tautoméricas, cada forma tautomérica é contemplada como sendo incluída nesta invenção, quer existindo em equilíbrio ou predominantemente em uma forma. Dessa forma, um único enantiômero de um peptídeo de fórmula (I), que é uma forma opticamente ativa, pode ser obtido por síntese assimétrica, síntese a partir de precursores opticamente puros ou por resolução dos racematos.

[00150] A invenção é adicionalmente destinada a incluir pró-fármacos dos presentes peptídeos, os quais, por administração, sofrem conversão química por processos metabólicos antes de se tornarem peptídeos farmacológicos ativos. Em geral, tais pró-fármacos serão derivados funcionais dos presentes peptídeos, que são prontamente conversíveis in vivo em um peptídeo de fórmula (I) a (VII). Os pró-fármacos são quaisquer compostos ligados covalentemente, que liberam o fármaco de peptídeo parental ativo da fórmula (I) a (VII) in vivo. Os procedimentos convencionais para a seleção e preparação de derivados de pró-fármaco adequados são descritos, por exemplo, em "Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985. Os exemplos típicos de pró-fármacos têm grupos de proteção biologicamente lábeis em uma porção química funcional, como, por exemplo, por meio de esterificação de funções hidroxila, carboxila ou amino. Dessa forma, a título de exemplo e não de limitação, um pró-fármaco inclui peptídeos de fórmula (I) em que uma forma de pró-fármaco de éster é empregada, como, por exemplo, ésteres de alquila inferior de um grupo R de fórmula (I), como onde R é -OH, cujos ésteres de alquila inferior podem incluir de 1 a 8 carbonos em um radical alquila ou ésteres de aralquila que têm 6 a 12 carbonos em um radical aralquila. De um modo geral, os pró-fármacos incluem compostos que podem ser oxidados, reduzidos, aminados, desaminados, hidroxilados, desidroxilados, hidrolisados, desidrolisados, alquilados, desalquilados, acilados, desacilados, fosforilados ou desfosforilados para produzir um fármaco de peptídeo parental ativo de fórmula (I) in vivo.

[00151] A presente invenção também inclui peptídeos que são idênticos aos citados na fórmula (I) a (VI), mas pelo fato de que um ou mais átomos representados na fórmula (I) a (VI) são substituídos por um átomo que tem uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa normalmente encontrado na natureza. Os exemplos de isótopos que podem ser incorporados em compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio e oxigênio, como 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O e 17O, respectivamente. Os peptídeos da presente invenção e sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos ditos compostos que contêm os isótopos acima mencionados e/ou outros isótopos de outros átomos estão dentro do escopo desta invenção. Certos compostos marcados isotopicamente da presente invenção, por exemplo, aqueles nos quais isótopos radioativos como 3H e 14C são incorporados, podem ter uso em uma variedade de ensaios, como em ensaios de distribuição de fármaco e/ou substrato em tecidos. A substituição por isótopos mais pesados, como a substituição de um ou mais átomos de hidrogênio por deutério (2H), pode fornecer vantagens farmacológicas em alguns casos, incluindo estabilidade metabólica aumentada. Os peptídeos marcados isotopicamente de fórmula (I) a (VI) podem geralmente ser preparados mediante a substituição de um reagente marcado isotopicamente por um reagente não marcado isotopicamente.

7.0 Métodos de preparação de peptídeos usados na invenção.

[00152] Em geral, os peptídeos da presente invenção podem ser sintetizados por síntese em fase sólida e purificados de acordo com métodos conhecidos na técnica. Qualquer um dentre vários procedimentos bem conhecidos que usam uma variedade de resinas e reagentes pode ser usado para preparar os peptídeos da presente invenção.

[00153] Os peptídeos cíclicos da presente invenção podem ser prontamente sintetizados por procedimentos convencionais conhecidos para a formação de uma ligação peptídica entre aminoácidos. Tais procedimentos convencionais incluem, por exemplo, qualquer procedimento em fase de solução que permite uma condensação entre o grupo alfa amino livre de um aminoácido ou resíduo do mesmo que tem seu grupo carboxila e outros grupos reativos protegidos e o grupo carboxila primário livre de um outro aminoácido ou resíduo do mesmo que tem seu grupo amino ou outros grupos reativos protegidos. Em um procedimento convencional preferencial, os peptídeos cíclicos da presente invenção podem ser sintetizados por síntese em fase sólida e purificados de acordo com métodos conhecidos na técnica. Qualquer um dentre vários procedimentos bem conhecidos que usam uma variedade de resinas e reagentes pode ser usado para preparar os peptídeos da presente invenção.

[00154] O processo para sintetizar os peptídeos cíclicos pode ser realizado por um procedimento em que cada aminoácido na sequência desejada é adicionado um de cada vez em sucessão a um outro aminoácido ou resíduo do mesmo ou por um procedimento pelo qual fragmentos de peptídeo com a sequência de aminoácidos desejada são primeiro sintetizados convencionalmente e, então, condensados para fornecer o peptídeo desejado. O peptídeo resultante é então ciclizado para render um peptídeo cíclico da invenção.

[00155] Os métodos de síntese de peptídeos em fase sólida são bem conhecidos e praticados na técnica. Em tais métodos, a síntese de peptídeos da invenção pode ser realizada incorporando sequencialmente os resíduos de aminoácidos desejados, um de cada vez, na cadeia de peptídeo em crescimento, de acordo com os princípios gerais dos métodos de fase sólida. Esses métodos são revelados em inúmeras referências, incluindo Merrifield, R.B., "Solid phase synthesis (Nobel lecture)," Angew Chem 24:799 a 810 (1985) e Barany et al., The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, Vol. 2, Gross, E. e Meienhofer, J., Eds. Academic Press 1-284 (1980).

[00156] Na síntese química de peptídeos, os grupos reativos da cadeia lateral dos vários resíduos de aminoácidos são protegidos com grupos de proteção adequados, que evitam que uma reação química ocorra naquele sítio até que o grupo de proteção seja removido. Também é comum a proteção do grupo alfa amino de um resíduo ou fragmento de aminoácido enquanto essa entidade reage no grupo carboxila, seguido da remoção seletiva do grupo de proteção de alfa amino para permitir que uma reação subsequente ocorra naquele sítio. Os grupos de proteção específicos foram revelados e são conhecidos em métodos de síntese em fase sólida e métodos de síntese em fase de solução.

[00157] Os grupos alfa amino podem ser protegidos por um grupo de proteção adequado, incluindo um grupo de proteção do tipo uretano, como benziloxicarbonila (Z) e benziloxicarbonila substituída, como p- clorobenziloxicarbonila, p-nitrobenziloxicarbonila, p- bromobenziloxicarbonila, p-bifenil-isopropoxicarbonila, 9- fluorenilmetoxicarbonila (Fmoc) e p-metoxibenziloxicarbonila (Moz) e grupos de proteção do tipo uretano alifático, como t- butiloxicarbonila (Boc), diisopropilmetoxicarbonila,

isopropoxicarbonila e aliloxicarbonila (Alloc). Fmoc é preferencial para proteção de alfa amino.

[00158] Os grupos guanidino podem ser protegidos por um grupo de proteção adequado, como nitro, p- toluenossulfonila (Tos), Z, pentametilcromanossulfonila (Pmc), adamantiloxicarbonila, pentametildi-hidrobenzofuran-5- sulfonila (Pbf) e Boc. Pbf e Pmc são grupos de proteção preferenciais para Arg.

[00159] Os peptídeos da invenção descritos no presente documento foram preparados com o uso da síntese em fase sólida, como por meio de um sintetizador de peptídeo automatizado Symphony Multiplex Peptide Synthesizer (Rainin Instrument Company), com o uso de módulos de programação conforme fornecido pelo fabricante e seguindo os protocolos apresentados no manual do fabricante.

[00160] A síntese de fase sólida é iniciada a partir da extremidade C-terminal do peptídeo por meio do acoplamento de um alfa aminoácido protegido a uma resina adequada. Tal material de partida é preparado mediante a fixação de um aminoácido alfa-amino protegido por uma ligação de amida à resina 9-Fmoc-aminoxanten-3-iloxi-Merrifield (resina de amida Sieber) ou à resina de 4-(2',4'-Dimetoxifenil- Fmoc-aminometil)fenoxi (resina de amida Rink), por uma ligação de éster a uma resina de álcool p-benziloxibenzílico (Wang), uma resina de cloreto de 2-clorotritila ou uma resina de oxima, ou por outro meio bem conhecido na técnica. As resinas são conduzidas através de ciclos repetitivos conforme necessário para adicionar aminoácidos sequencialmente. Os grupos de proteção Fmoc de alfa amino são removidos sob condições básicas. Piperidina, piperazina, dietilamina ou morfolina (20 a 40% em v/v) em N, N-dimetilformamida (DMF) pode ser usada para esse propósito.

[00161] Após a remoção do grupo de proteção alfa- amino, os aminoácidos protegidos subsequentes são acoplados em etapas na ordem desejada para obter uma resina de peptídeo protegida intermediária. Os reagentes de ativação usados para o acoplamento dos aminoácidos na síntese de fase sólida dos peptídeos são bem conhecidos na técnica. Depois que o peptídeo é sintetizado, se for desejado, os grupos de proteção da cadeia lateral protegida ortogonalmente podem ser removidos com o uso de métodos bem conhecidos na técnica para derivatização adicional do peptídeo.

[00162] Tipicamente, os grupos de proteção ortogonais são usados conforme for adequado. Por exemplo, os peptídeos da invenção contêm múltiplos aminoácidos com uma cadeia lateral que contém grupo amino. Em um aspecto, um esquema de proteção Allyl-Alloc é empregado com os aminoácidos formando uma ponte de lactama através de suas cadeias laterais, e grupos de proteção ortogonais, cliváveis sob condições reativas diferentes, usados para outros aminoácidos com cadeias laterais que contêm grupos amino. Dessa forma, por exemplo, os aminoácidos Fmoc-Lys(Alloc)-OH, Fmoc-Orn(Alloc)- OH, Fmoc-Dap(Alloc)-OH, Fmoc-Dab(Alloc)-OH, Fmoc-Asp(OAll)-OH ou Fmoc-Glu(OAll)-OH podem ser empregados para as posições que formam uma ponte de lactama após a ciclização, enquanto outros aminoácidos com cadeias laterais que contêm grupo amino têm um grupo de proteção ortogonal diferente, como com Fmoc-Arg(Pbf )-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Dab(Boc)-OH ou similares. Outros grupos de proteção podem ser empregados de modo similar; a título de exemplo e não de limitação, Mtt/OPp (4-metiltritil/2-

fenilisopropil) pode ser empregado com as cadeias laterais formando uma ponte de lactama sob ciclização, com grupos de proteção ortogonais sendo usados para outras posições que não são cliváveis com o uso de condições adequadas para clivagem de Mtt/OPp.

[00163] Os grupos reativos em um peptídeo podem ser modificados seletivamente, durante a síntese em fase sólida ou após a remoção da resina. Por exemplo, os peptídeos podem ser modificados para obter modificações de N-terminal, como acetilação, enquanto na resina, ou podem ser removidos da resina com o uso de um reagente de clivagem e, então, modificados. De modo similar, os métodos para modificar as cadeias laterais de aminoácidos são bem conhecidos daqueles versados na técnica de síntese de peptídeos. A escolha das modificações feitas nos grupos reativos presentes no peptídeo será determinada, em parte, pelas características que são desejadas no peptídeo.

[00164] Nos peptídeos da presente invenção, em uma modalidade, o grupo N-terminal é modificado pela introdução de um grupo N-acetila. Em um aspecto, é empregado um método em que após a remoção do grupo de proteção no N-terminal, o peptídeo ligado à resina é reagido com anidrido acético em N,N-dimetilformamida (DMF) na presença de uma base orgânica, como piridina. Outros métodos de acetilação de N-terminal são conhecidos na técnica, incluindo acetilação em fase de solução, e podem ser empregados.

[00165] O peptídeo pode, em uma modalidade, ser ciclizado antes da clivagem da resina do peptídeo. Para a ciclização através de porções químicas de cadeia lateral reativas, as cadeias laterais desejadas são desprotegidas e o peptídeo suspenso em um solvente adequado e um agente de acoplamento cíclico adicionado. Os solventes adequados incluem, por exemplo, DMF, diclorometano (DCM) ou 1-metil-2- pirrolidona (NMP). Os reagentes de acoplamento cíclicos adequados incluem, por exemplo, tetrafluoroborato de 2-(1H- benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio (TBTU), 2-(1H- benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio (HBTU), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi- tris(dimetilamino)fosfônio (BOP), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi-tris(pirrolidino)fosfônio (PyBOP), tetrafluoroborato de 2-(7-aza-1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3- tetrametilurônio (TATU), tetrafluoroborato de 2-(2-oxo-1(2H)- piridil)-1,1,3,3-tetrametilurônio (TPTU) ou N,N'- diciclohexilcarbodiimida/1-hidroxibenzotriazol (DCCI/HOBt). O acoplamento é convencionalmente iniciado pelo uso de uma base adequada, como N,N-diisopropiletilamina (DIPEA), sim-colidina ou N-metilmorfolina (NMM).

[00166] Para peptídeos com uma ponte cíclica não lactama, como peptídeos que contêm a ponte: -(CH2)x-NH-C(=O)-(CH2)z-C(=O)-NH-(CH2)y-, em que x, y e z são, cada um, independentemente 1 a 5, os peptídeos podem ser feitos com o uso de síntese de fase sólida empregando-se um aminoácido diamina protegido de cadeia lateral para as posições a serem ciclizadas. Particularmente preferenciais em tais posições são Dap, Dab ou Lys, de preferência, com um grupo de proteção de amina, como Alloc, Mtt, Mmt (metoxitritila), Dde (1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclo- hex-1-ilideno))etil), ivDde (1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclo- hex-1-ilideno) -3-metilbutil) ou qualquer outro grupo de proteção clivável ortogonalmente. Tipicamente, um grupo de proteção de cadeia lateral é removido primeiro, como a remoção de Mtt com o uso de 2% de TFA em diclorometano. Após a lavagem da resina, a amina não protegida ligada à resina resultante é acilada, como com uma solução 0,5 M de um anidrido cíclico, como anidrido succínico ou anidrido glutárico em diclorometano/piridina 1:1. Após as etapas de lavagem adicionais, o grupo de proteção clivável ortogonalmente do segundo diamino aminoácido é clivado, como a remoção de Alloc com o uso de tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) e fenil silano em diclorometano. Após a lavagem com diclorometano e DMF, o peptídeo ligado à resina é ciclizado com o uso de reagentes de acoplamento padrão, como TBTU e uma base. Alternativamente, um diamino aminoácido ligado a resina protegido por ivDde pode ser desprotegido com o uso de uma solução de 5% de hidrazina em DMF e, após a lavagem com DMF, a amina ligada a resina resultante pode ser acilada com um anidrido cíclico ou pode ser ciclizada com um ácido carboxílico ligado à resina.

[00167] Os peptídeos ciclizados podem ser, então, clivados da fase sólida, com o uso de qualquer reagente adequado, como etilamina em DCM ou várias combinações de agentes, como ácido trifluoroacético (TFA), tri- isopropilsilano (TIS), dimetoxibenezeno (DMB), água e similares. O peptídeo bruto resultante é seco e os grupos de proteção da cadeia lateral de aminoácidos restantes, se houver, são clivados com o uso de qualquer reagente adequado, como (TFA) na presença de água, TIS, 2-mercaptopetano (ME) e/ou 1, 2-etanoditiol (EDT). O produto final é precipitado mediante a adição de éter frio e coletado por filtração. A purificação final é por cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa (RP-HPLC), com o uso de uma coluna adequada, como uma coluna C18, ou outros métodos de separação ou purificação, como métodos à base do tamanho ou carga do peptídeo, podem também ser empregados. Uma vez purificado, o peptídeo pode ser caracterizado por qualquer número de métodos, como cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), análise de aminoácidos, espectrometria de massa e similares.

[00168] Para os peptídeos da presente invenção que têm um derivado de amida substituída no C-terminal ou grupo N- alquila, a síntese pode prosseguir por síntese em fase sólida iniciada a partir da extremidade C-terminal do peptídeo mediante o acoplamento de um alfa-aminoácido protegido a uma resina adequada. Tais métodos para preparar derivados de amida substituídos em fase sólida foram descritos na técnica. Consulte, por exemplo, Barn, D. R., et al., "Synthesis of an array of amides by aluminum chloride assisted cleavage on resin bound esters," Tetrahedron Letters, 37:3.213 a 3.216 (1996); DeGrado, W. F. e Kaiser E. T., "Solid-phase synthesis of protected peptides on a polymer bound oxime: Preparation of segments comprising the sequences of a cytotoxic 26-peptide analogue," J. Org. Chem., 47:3.258 a 3.261 (1982). Tal material de partida pode ser preparado mediante a fixação de um aminoácido alfa-amino protegido por uma ligação de éster a uma resina de álcool p-benziloxibenzílico (Wang) ou uma resina de oxima por meios bem conhecidos. A cadeia peptídica é cultivada com a sequência desejada de aminoácidos, o peptídeo ciclizado e o peptídeo-resina tratado com uma solução de amina adequada (como metilamina, dimetilamina, etilamina e assim por diante). Os peptídeos que empregam uma resina de álcool p- benziloxibenzílico (Wang) podem ser clivados a partir da resina por cloreto de alumínio em DCM e os peptídeos que empregam uma resina de oxima podem ser clivados por DCM. Um outro método para preparar um peptídeo com uma amida substituída no C- terminal é fixar uma alquil amina por meio de aminação redutiva a uma resina de formila, como resina de 4-(4-Formil-3- metoxifenoxi)butiril-AM (resina FMPB AM) e, então, incorporando sequencialmente os resíduos de aminoácidos desejados com o uso de princípios gerais de síntese em fase sólida.

[00169] Embora a síntese tenha sido descrita principalmente com referência à química de Fmoc de fase sólida, deve ser entendido que outras químicas e métodos sintéticos podem ser empregados para fazer os peptídeos cíclicos da invenção, como a título de exemplo e não de limitação, métodos que empregam química de Boc, química de solução e outras químicas e métodos sintéticos.

8.0 Testes e Ensaios Empregados na Avaliação de Peptídeos usados na Presente Invenção.

[00170] Os peptídeos específicos a receptor de melanocortina usados na presente invenção podem ser testados por uma variedade de sistemas de ensaio e modelos animais para determinar a ligação, o estado funcional e a eficácia.

8.1 Ensaio de inibição competitiva com o uso de [I125]-NDP-α-MSH.

[00171] Um ensaio de ligação de inibição competitiva foi realizado com o uso de homogenatos de membrana preparados a partir de células HEK-293 que expressam hMC1r ou hMC4r recombinante (em cada caso, em que o prefixo h se refere a humano), ou alternativamente homogenatos de membrana de células a partir de células de melanoma de camundongo B16-F10 que contêm MC1r murino endógeno . Nos exemplos a seguir, todos os valores de MC1r e MC4r são para receptores recombinantes humanos, a menos que indicado de outra forma. Os ensaios foram realizados em placas de fundo redondo de polipropileno de 96 poços (número de catálogo VWR 12777030). Os homogenatos de membrana foram incubados com 0,1 nM [I125]-NDP-α-MSH (Perkin Elmer) e concentrações crescentes de peptídeos de teste da presente invenção em tampão que contém tampão HEPES 25 mM (pH 7,5) com NaCl 100 mM, CaCl2 2 mM, MgCl2 2 mM, 1,10-fenantrolina 0,3 mM e 0,2% de albumina sérica bovina. Após a incubação durante 90 minutos a 37 °C, a mistura de ensaio foi filtrada em placas Unifilter GF/B (número de catálogo Perkin-Elmer 6005177) e lavada com 3 ml de tampão gelado por poço. Os filtros foram secos ao ar e 35 µl de coquetel de cintilação adicionados a cada poço. As placas foram contadas em um contador Microbeta acerca da radioatividade ligada. A ligação não específica foi medida pela inibição da ligação de [I125]- NDP-α-MSH na presença de NDP-α-MSH 1 μM. A ligação específica máxima (100%) foi definida como a diferença na radioatividade (cpm) ligada às membranas celulares na ausência e presença de NDP-α-MSH 1 μM. Cada ensaio foi conduzido em duplicata e os valores médios reais são descritos, com resultados menores que 0% relatados como 0%. Os valores de Ki para os peptídeos da presente invenção foram determinados com o uso do software de ajuste de curva Graph-Pad Prism®.

8.2 Ensaio para Atividade Agonista.

[00172] A acumulação de cAMP intracelular foi examinada como uma medida da capacidade dos peptídeos da presente invenção para elicitar uma resposta funcional em uma linhagem de células de melanoma humano, HBL, que expressa hMC1r

(consultar Kang, L., et al., "A selective small molecule agonist of MC1r inhibits lipopolysaccharide-induced cytokine accumulation and leukocyte infiltration in mice," J. Leuk. Biol. 80:897 a 904 (2006)) ou células HEK-293 que expressam hMC4r. As células HBL confluentes que expressam hMC1r ou células HEK-293 que expressam hMC4r recombinante foram separadas das placas de cultura por meio de incubação em tampão de dissociação celular livre de enzimas. As células dispersas foram suspensas em solução salina balanceada de Earle que contém HEPES 10 mM (pH 7,5), MgCl2 1 mM, glutamina 1 mM, 0,5% de albumina e 3-isobutil-1-metil-xantina 0,3 mM (IBMX), um inibidor da fosfodiesterase. As células foram colocadas em placas de 96 poços a uma densidade de 0,4 x 105 células por poço para células HBL e 0,5 x 105 células por poço para células HEK-293 e pré-incubadas por 10 minutos. As células foram expostas durante 15 minutos a 37 °C a peptídeos da presente invenção dissolvidos em DMSO (concentração final de DMSO de 1%) em uma faixa de concentrações de 0,05 a 5.000 nM em um volume de ensaio total de 200 µl. NDP-α-MSH foi usado como o agonista de referência. os níveis de cAMP foram determinados por um sistema de ensaio à base de célula cAMP HTRF® da Cisbio Bioensaios com o uso de anti-cAMP marcado com criptato e cAMP marcado com d2, com placas lidas em um leitor de placas Perkin- Elmer Victor a 665 e 620 nM. A análise de dados foi realizada por análise de regressão não linear com o software Graph-Pad Prism® . Os valores de eficácia máxima (Emax) foram determinados para cada peptídeo de teste da presente invenção, em comparação com aqueles obtidos pelo agonista de melanocortina de referência NDP-α-MSH.

9.0 Exemplos de Peptídeos usados na Invenção.

[00173] Os peptídeos das seguintes estruturas foram sintetizados e os valores médios de Ki de MC1r e MC4r foram determinados conforme indicado. Os valores de Ki foram determinados com o uso de [I125]-NDP-α-MSH. Todos os resultados são expressos em nM, exceto para os valores de Emáx, que são valores percentuais. Os peptídeos com a sequência primária legendada foram sintetizados e purificados conforme descrito na Seção 7 acima, com o peptídeo resultante que tem a estrutura representada. Após a síntese e purificação, os peptídeos foram testados conforme descrito na Seção 8 acima, com os resultados conforme mostrado.

9.1 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Lys)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:4)

O N O N O O N N N N O N O N N N N O O O N N N

N Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 45 Ki de MC-1 (média) 0,01 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,007 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 97%

9.2 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:5)

O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 110 Ki de MC-1 (média) 0,012 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,006 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 95%

9.3 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) O CH3

NH H3C

O NH O NH O HN N N O NH H O H

H HN N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 510 Ki de MC-1 (média) 0,04 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,008

Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 91%

9.4 Ac-Nle-ciclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:7)

O

H N CH3

HN O O

N HN H CH3

O N N H O NH O H

H N N HN NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 1325 Ki de MC-1 (média) 2 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,195 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 88%

9.5 Ac-Nle-ciclo(Cys-His-D-Phe-Arg-Cys)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:8) O CH3

NH H3C

O NH O HN N S H S N O NH O H

H HN N N NH2

O O O NH NH

HN NH2

Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 540 Ki de MC-1 (média) 0,35 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,025 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 87%

9.6 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Orn)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:9) O CH3

NH H3C

O NH O O NH HN HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 295 Ki de MC-1 (média) 0,07 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,014 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 91%

9.7 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-D-Trp-NH2 (SEQ ID NO:10)

O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 33 Ki de MC-1 (média) 0,55 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,025 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 93%

9.8 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:11) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10000 Ki de MC-1 (média) 2

EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,052 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 88%

9.9 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-D-Nal 1- NH2 (SEQ ID NO:12) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 2 Ki de MC-1 (média) 0,1 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,008 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 73%

9.10 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-Nal 2-NH2 (SEQ ID NO:13)

O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 3 Ki de MC-1 (média) 0,01 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,004 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 83%

9.11 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-D-Nal 2- NH2 (SEQ ID NO:14) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 0,095 Ki de MC-1 (média) 0,02

EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,005 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 69%

9.12 Ac-D-Phe-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:15) O CH3

NH O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 535 Ki de MC-1 (média) 0,35 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,015 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 75%

9.13 Ac-Phe-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:16)

O CH3

NH O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 510 Ki de MC-1 (média) 0,195 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,01 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 75%

9.14 ciclo(Suc-His-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:17)

O O NH HN NH N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10.000 Ki de MC-1 (média) 310 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 31 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 80%

9.15 CH3-(CH2)2-C(=O)-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-

Trp-NH2 (SEQ ID NO:18)

O HN CH3

O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 890 Ki de MC-1 (média) 0,65 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,012 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 91%

9.16 CH3-(CH2)3-C(=O)-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)- Trp-NH2 (SEQ ID NO:19)

O CH3

HN O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 365 Ki de MC-1 (média) 0,12

EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,005 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 89%

9.17 CH3-(CH2)4-C(=O)-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)- Trp-NH2 (SEQ ID NO:20)

O HN CH3

O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 110 Ki de MC-1 (média) 0,025 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,004 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 90%

9.18 CH3-(CH2)5-C(=O)-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)- Trp-NH2 (SEQ ID NO:21)

O HN CH3

O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2

Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 100 Ki de MC-1 (média) 0,015 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,003 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 87%

9.19 ciclo-propanoil-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)- Trp-NH2 (SEQ ID NO:22)

O HN O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 640 Ki de MC-1 (média) 3 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,031 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 83%

9.20 ciclo-hexanoil-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)- Trp-NH2 (SEQ ID NO:23)

HN O O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2

Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 165 Ki de MC-1 (média) 0,025 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,004 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 79%

9.21 ciclopentil acetil-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg- Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:24)

O HN O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 93 Ki de MC-1 (média) 0,01 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,004 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 83%

9.22 ciclo-hexil acetil-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg- Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:25)

O HN O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 63 Ki de MC-1 (média) 0,01 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,004 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 85%

9.23 fenil acetil-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-Trp- NH2 (SEQ ID NO:26)

O HN O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 205 Ki de MC-1 (média) 0,04 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,007 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 82%

9.24 fenil propanoil-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)- Trp-NH2 (SEQ ID NO:27)

O HN O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 285 Ki de MC-1 (média) 0,03 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,006 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 83%

9.25 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-Ala-NH2 (SEQ ID NO:28) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2 O O CH3

O NH

HN NH2 Ensaio Resultado

Ki de MC-4 (média) 7.475 Ki de MC-1 (média) 2 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,08 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 97%

9.26 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-OH (SEQ ID NO:29) O CH3

NH H3C

O NH O NH O HN N N O NH H O H H HN N N OH O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 4.700 Ki de MC-1 (média) 1 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,107 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 81%

9.27 Ac-Nle-ciclo(Dab-His-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:30) └C(=O)-(CH2)2-C(=O)┘

O CH3

NH H3C

O O NH O N H NH O HN NH N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 380 Ki de MC-1 (média) 0,015 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,009 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 92%

9.28 Ac-Nle-ciclo(Dap-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:31) └C(=O)-(CH2)2-C(=O)┘ O CH3

NH H3C

O NH O H N O NH HN O N O NH NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 680 Ki de MC-1 (média) 0,03

EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,007 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 70%

9.29 Ac-Nle-ciclo(Dab-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:32) └C(=O)-(CH2)2-C(=O) ┘ O CH3

NH H3C

O O NH O N H NH O HN N NH O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 325 Ki de MC-1 (média) 0,025 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,006 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 78%

9.30 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-Nal 1-NH2 (SEQ ID NO:33)

O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 0,75 Ki de MC-1 (média) 0,005 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,002 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 72%

9.31 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-OH (SEQ ID NO:34) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H N N N OH O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10.000

Ki de MC-1 (média) 2 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,095 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 79%

9.32 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:35) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH

H H N N NH2

O O O NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10000 Ki de MC-1 (média) 7 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,32 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 85%

9.33 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Ala-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:36)

O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH

H H N N NH2

O O H3C O Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10000 Ki de MC-1 (média) 645 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 44 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 73%

9.34 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Gly-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:37) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O

NH Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10000 Ki de MC-1 (média) 9 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 4 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 59%

9.35 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Ala-Dab)-Trp-NH2

(SEQ ID NO:38) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O H3C O

NH Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10000 Ki de MC-1 (média) 0,8 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,115 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 72%

9.36 Ac-Nle-ciclo(Glu-Ala-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:39) O CH3

NH H3C

O NH O

O H3C NH NH

O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado

Ki de MC-4 (média) 455 Ki de MC-1 (média) 4 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,21 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 86%

9.37 Ac-Nle-ciclo(Glu-Arg-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:40) O CH3

NH H3C

O NH NH O

O H2N N NH NH

H O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 20 Ki de MC-1 (média) 0,014 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,003 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 100%

9.38 Ac-Nle-ciclo(Glu-Cit-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:41)

O CH3

NH H3C

O NH O O

O H2N N NH NH

H O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 98 Ki de MC-1 (média) 0,45 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,065 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 97%

9.39 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-Lys-NH2 (SEQ ID NO:42) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O

O NH NH2

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 7.375 Ki de MC-1 (média) 2

EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,175 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 91%

9.40 Ac-Nle-ciclo(Glu-Lys-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:43) O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 95 Ki de MC-1 (média) 0,04 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,006 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 108%

9.41 Ac-Nle-ciclo(Glu-Dab-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:44)

O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 98 Ki de MC-1 (média) 0,05 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,008 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 108%

9.42 Ac-Nle-ciclo(Glu-Orn-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:45) O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 45 Ki de MC-1 (média) 0,015 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,002

Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 109%

9.43 Ac-Nle-ciclo(Dap-His-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:46) └C(=O)-(CH2)2-C(=O)┘ O CH3

NH H3C

O NH H O N NH O HN HN O N O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 860 Ki de MC-1 (média) 0,065 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,016 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 85%

9.44 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:47)

O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH

H H N N NH2

O O O NH

9.45 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Ala-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:48) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH

H H N N NH2

9.46 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Dab)-NH2 (SEQ ID

NO:49) O CH3

NH H3C

O NH O NH O HN N O NH HN H N O

O NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10.000 Ki de MC-1 (média) 10.000 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) NA Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 51%

9.47 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Gly-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:50) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O O

9.48 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Ala-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:51) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O H3C O

9.49 Ac-Nle-ciclo(Glu-Ala-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:52) O CH3

NH H3C

O NH O

O H3C NH NH

O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2

Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 455 Ki de MC-1 (média) 4 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,21 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 86%

9.50 Ac-Nle-ciclo(Glu-Arg-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:53) O CH3

NH H3C

O NH NH O

O H2N N NH NH

H O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

9.51 Ac-Nle-ciclo(Glu-Cit-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:54)

O CH3

NH H3C

O NH O O

O H2N N NH NH

H O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

9.52 Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dab)-Lys-NH2 (SEQ ID NO:55) O CH3

NH H3C

O NH O O NH NH HN N O NH O H H H

N N N NH2

O O

O NH NH2

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 7.375

Ki de MC-1 (média) 2 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,175 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 91%

9.53 Ac-Nle-ciclo(Glu-Lys-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:56) O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

9.54 Ac-Nle-ciclo(Glu-Dab-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:57)

O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

9.55 Ac-Nle-ciclo(Glu-Orn-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:58) O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 45 Ki de MC-1 (média) 0,015

EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,002 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 109%

9.56 Ac-Nle-ciclo(Glu-Orn-D-Phe-Arg-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:59) O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH

H H N N NH2

O O O NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 3.625 Ki de MC-1 (média) 4 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,5 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 102%

9.57 Ac-Nle-ciclo(Glu-Orn-D-Phe(2-Cl)-Arg-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:60)

O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH

H H Cl N N NH2

O O O NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10.000 Ki de MC-1 (média) 30 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 1 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 88%

9.58 Ac-Nle-ciclo(Glu-Orn-D-Phe(3-Cl)-Arg-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:61) O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH

H H N N NH2

O O Cl O

NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10.000

Ki de MC-1 (média) 35 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 2 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 86%

9.59 Ac-Nle-ciclo(Glu-Orn-D-Phe(4-Cl)-Arg-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:62) O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH

H H N N NH2

O O

O Cl

NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 1.235 Ki de MC-1 (média) 2 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,1 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 100%

9.60 Ac-Nle-ciclo(Glu-Orn-D-Phe(2-F)-Arg-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:63)

O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH

H H F N N NH2

O O O NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10.000 Ki de MC-1 (média) 18 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,8 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 95%

9.61 Ac-Nle-ciclo(Glu-Orn-D-Phe(4-F)-Arg-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:64) O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH

H H N N NH2

O O O F NH

HN NH2 Ensaio Resultado

Ki de MC-4 (média) 10.000 Ki de MC-1 (média) 20 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 1 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 102%

9.62 Ac-Nle-ciclo(Glu-Orn-D-Phe(3,4-F)-Arg-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:65) O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH

H H N N NH2

O O F O F NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10.000 Ki de MC-1 (média) 40 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 1 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 97%

9.63 Ac-Nle-ciclo(Glu-Orn-D-Phe(4-Me)-Arg-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:66)

O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH

H H N N NH2

O O

O H3C

NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10.000 Ki de MC-1 (média) 3 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,076 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 96%

9.64 Ac-Nle-ciclo(Glu-Orn-D-Phe(4-OMe)-Arg-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:67) O CH3

NH H3C

O NH O

O H2N NH NH

O NH

H H N N NH2

O O

O H3C O

NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10.000 Ki de MC-1 (média) 2 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,12

Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 99%

9.65 Ac-Nle-ciclo(Glu-Pro-D-Phe-Arg-Dab)-NH2 (SEQ ID NO:68) O CH3

NH H3C

O NH O O N NH O NH

H H N N NH2

O O O NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 10.000 Ki de MC-1 (média) 2.250 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 332 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 102%

9.66 Ac-Nle-ciclo(Glu-Pro-D-Phe-Arg-Dab)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:69)

O CH3

NH H3C

O NH O O N NH O NH O H H H

N N N NH2

O O O NH NH

HN NH2 Ensaio Resultado Ki de MC-4 (média) 185 Ki de MC-1 (média) 3 EC50 de MC-1 (média; cAMP HBL) 0,18 Emax de MC-1 (média; cAMP HBL) 97%

10. Exemplos de formulações multiparticuladas usadas na invenção.

[00174] As formulações dos seguintes lotes descritos foram feitas: Quantidade (g) Ingrediente Lote Lote Lote Lote Lote Lote Lote Lote Lote 22 23 24 27 31 41 40 42 49 Eudragit - 49,5 35,5 - 23,25 19,00 19,8 23,25 L100-55 Eudragit - - 49,5 23,00 15,00 29,7 23,00 S100 Eudragit 9,9 49,5 - - - 15,00 - - L100 Eudragit - - - 12,0 - 3,75 - - 3,75 FS30D Peptídeo 9.3 0,1 0,5 0,5 0,5 0,5 0,6 1,00 0,5 - Acetona 70 350 350 350 350 350 350 350 350 Água - - - - 5 10 10 10 - Metanol 5 20 20 - 10 - - - - % de 97,7 98,1 96,9 96,8 98,9 95,6 97,2 97,6 97,4

Rendimento

[00175] Os vários lotes foram carregados com entre cerca de 1% e 2% (em p/p de peptídeo/polímero) do peptídeo cíclico do Exemplo 9.3. Os métodos de HPLC, que empregam uma coluna C-18, foram empregados para ensaios, incluindo estudos de liberação de peptídeo cíclico em várias faixas de pH e ácido. A carga de fármaco e a eficiência de encapsulação das micropartículas foram determinadas após o processo de fabricação. O desempenho das micropartículas foi caracterizado por um método de liberação in vitro.

[00176] O carregamento de fármaco foi determinado dissolvendo um peso conhecido das micropartículas em um volume adequado de tampão fosfato (1 l de tampão que contém 0,5 ml de ácido fosfórico com pH ajustado para 7,5 com hidróxido de sódio) pH 7,5 a 8,0. A solução resultante foi analisada quanto ao fármaco com o uso de HPLC. Para eficiência de encapsulação (EE), as micropartículas foram enxaguadas com HCl 0,1 M, secas e usadas conforme descrito para o carregamento de fármaco. O carregamento de fármaco e os valores de EE foram calculados com base nos pesos iniciais de fármaco e polímero. O carregamento de fármaco foi maior que 99% e a eficiência de encapsulação de todas as amostras preparadas foi maior que 95%. Eficiência de Carregamento de Carregamento encapsulação após fármaco teórico (g) real (g) enxágue (%) 1,0 0,994 96,4% 1,2 1,191 97,7% 2,0 1,993 95,9%

[00177] A dissolução de micropartículas de Eudragit® que contêm o peptídeo cíclico do Exemplo 9.3 foi conduzida com o uso do Aparelho USP 2 começando com 500 ml do ácido, que foi HCl 0,1 M pH 1,2, ou tampão acetato pH 4,5. Cerca de 1 g das micropartículas foi pesado com precisão e suspenso no ácido a 37 °C durante 2 horas. O pH do meio foi então ajustado sequencialmente para pH 5,5 durante 1 hora, pH 6,8 durante outra hora e finalmente para pH 7,4 durante 7 horas.

[00178] As Figuras 4 a 11 são perfis de liberação representativos do peptídeo cíclico do Exemplo 9.3 a partir de micropartículas preparadas com o uso de vários polímeros Eudragit® e suas blendas. Em geral, a liberação do fármaco foi dependente de pH com a taxa dependendo do tipo de polímero usado.

[00179] As Figuras 4 a 8 mostram perfis de liberação do peptídeo cíclico do Exemplo 9.3 a partir de micropartículas preparadas com o uso dos polímeros Eudragit® especificados e suas blendas. Conforme é mostrado na Figura 8, a liberação de peptídeo foi dependente de pH, sem liberação em pH 4,5 a 5,5, e liberação aproximadamente total em pH 4,5 a 7,5.

[00180] Um perfil de produto alvo foi a liberação de fármaco ao longo do trato GI começando com cerca de 20% em pH 5,5. As blendas de micropartículas preparadas com o uso de polímeros diferentes foram testadas. A Figura 9 mostra os perfis de liberação obtidos a partir de micropartículas mescladas. O Lote 38, que compreende 40% do Lote 29, 30% do Lote 27 e 30% do Lote 31, foi selecionado para desenvolvimento adicional. Para simplificar o processo de preparação e assegurar a uniformidade da blenda, um lote de micropartículas (Lote 41) foi preparado por codissolução dos tipos de polímeros na mesma razão que nas micropartículas mescladas Lote 38 e usado na preparação das micropartículas, de modo que a formulação compreendesse cerca de 46,5% de Eudragit® L100-55, 46% de Eudragit® S100 e 7,5% de Eudragit® FS30D em uma base em peso. A Figura 10 mostra os perfis de liberação do Lote 41 que foi preparado a partir de polímeros pré-mesclados e é a mesma razão que a blenda de micropartículas do Lote 38. Esse lote foi selecionado para avaliação no estudo pré-clínico de farmacocinética e eficácia. A Figura 11 mostra um perfil de dissolução de repetição para os Lotes 41 (n = 3).

[00181] As micropartículas de placebo (Lote 49) que contêm a blenda de polímero Eudragit® como no Lote 41 foram preparadas e usadas como diluente para o lote ativo 41 e preenchidas em cápsula pré-clínica de rato de tamanho 9. O placebo e as micropartículas ativas foram pesados e mesclados por meio de diluição geométrica. O teste de uniformidade de blenda foi conduzido e as micropartículas foram preenchidas em cápsulas pré-clínicas para conter 17 mg de peso de preenchimento. As cápsulas que contêm 100, 50, 20 ou 10 µg de peptídeo cíclico de concentrações do Exemplo 9.3 foram preparadas para teste em modelos animais. Todas as cápsulas preenchidas foram pesadas individualmente e os pesos registrados.

11. Modelos Experimentais.

[00182] 11.1 Uma avaliação da seletividade in vitro do peptídeo cíclico do Exemplo 9.3 em comparação com os agonistas de MC1r endógenos ACTH (hormônio adrenocorticotrópico) e α-MSH (hormônio estimulante de alfa- melanocortina) foi conduzida no Cerep na França. Os resultados foram conforme exposto a seguir: Funcional – CEREP (EC50; nM)

MC1r MC2r MC3r MC4r MC5r α-MSH 4,47 >10.000 9,8 10,8 560 ACTH 980 4,8 390 350 4.100 Exemplo

9.3 0,57 >10.000 >10.000 510 >10.000

[00183] 11.2 Foram conduzidos estudos de atividade e segurança in vitro. O peptídeo cíclico do Exemplo 9.3 demonstrou inibição de TNF-α induzida por lipopolissacarídeo comparável a α-MSH e ACTH. Separadamente, em um perfil de chumbo Eurofins, nenhuma atividade foi detectada em qualquer um dos 72 ensaios in vitro a 10 μM.

[00184] 11.3 O peptídeo cíclico do Exemplo 9.3 foi avaliado em um modelo de rato dotado de cânula de inflamação intestinal, no qual ácido dinitrobenzenossulfônico (DNBS) foi administrado por via retal como uma solução em ratos Wistar machos de 200 g para induzir a inflamação do lúmen intestinal. Os ratos foram implantados com um cateter na parte proximal do cólon ascendente, que saía da nuca para acesso de dosagem. Em grupos de 10, os ratos foram administrados em: 0,5 μg e 5,0 μg de peptídeo cíclico do Exemplo 9.3 e veículo (água estéril) via injeção intracolônica em 24 h, 12 h e 2 h antes e 6 h após a provocação de DNBS, seguido de dosagem duas vezes ao dia por 5 dias consecutivos até o dia 7 . Os ratos de controle sem cânula foram administrados com sulfassalazina (controles positivos) e veículo (controles não tratados). Conforme mostrado na Figura 1A e Figura 1B, no modelo de rato DNBS de inflamação intestinal, o peptídeo cíclico do Exemplo 9.3 aplicado ao lúmen do intestino foi tão ativo quanto a sulfassalazina (padrão de cuidado) e superior aos controles não tratados, na redução de parâmetros de inflamação intestinal (peso do cólon e pontuação de inflamação).

[00185] 11.4 A farmacocinética e a farmacodinâmica de uma formulação de cápsula oral do Lote 41 da Seção 10 acima que contém o peptídeo cíclico do Exemplo 9.3 para liberação de cólon foram avaliadas em ratos. 24 ratos Sprague-Dawley totais pesando entre 250 e 350 gramas, com 7 a 9 semanas de idade, foram usados e ficaram em jejum de um dia para o outro antes da dosagem oral com uma única cápsula que contém 0,1 mg de peptídeo cíclico do Exemplo 9.3, com comida e água ad libitum. O conteúdo intestinal e do cólon foi coletado em pontos no tempo específicos (n = 20) e após o teste (n = 4). Conforme mostrado na Figura 2, a formulação oral do peptídeo cíclico do Exemplo 9.3 do Lote 41 foi liberada no cólon e progrediu através do trato intestinal do rato em 9 horas.

[00186] 11.5 Em um modelo DNBS de colite em ratos, uma formulação de cápsula oral do Lote 41 que contém 10 μg, 20 μg e 50 μg de peptídeo cíclico do Exemplo 9.3 foi avaliada com administração duas vezes ao dia (bid), em comparação com o veículo de placebo do lote 49 e tratamento com sulfassalazina. Conforme mostrado na Figura 3A e Figura 3B, a pontuação de inflamação corrigida por linha de base e a pontuação de dano macroscópico foram ambos significativamente menores (melhorados) com cápsulas que contêm 50 μg de peptídeo cíclico do Exemplo 9.3 versus veículo de placebo, e a um grau similar à sulfassalazina. Os ensaios de plasma não detectaram nenhum peptídeo cíclico sistêmico do Exemplo 9.3.

12. Estudos clínicos humanos.

[00187] Uma formulação oral de peptídeo cíclico marcado com C14 do Exemplo 9.3 foi formulada conforme o Lote

41. A marcação C14 foi usada para avaliar a liberação e absorção do peptídeo do Exemplo 9.3 no trato GI distal após a administração de uma dose oral única. Uma combinação de polimetacrilatos Eudragit® L100-55, Eudragit® S-100 e Eudragit® FS30D foi selecionada e usada em uma razão entre pesos de 23,25: 23,0:12,5, em que o peso de L100-55 e S-100 foi peso seco de material sólido, e o peso de FS30D foi de uma formulação aquosa preparada comercialmente em que os 12,5 gramas de FS30D líquido continham 3,75 gramas de polímero, para uma razão entre pesos de polímero de 23,25:23:3,75. A combinação de polimetacrilatos foi colocada em acetona e agitada por um período prolongado. As quantidades adequadas de peptídeo marcado com C14 do Exemplo 9.3 foram dissolvidas em água e misturadas com a solução de acetona-polimetacrilatos preparada, agitadas durante um período prolongado, e secas sob vácuo. O material seco foi recuperado, diluído com mistura de polimetacrilato seco adicional que não contém peptídeo para obter a concentração alvo desejada em uma quantidade predeterminada de material, e moído até o diâmetro desejado e peneirado. O material peneirado foi colocado dentro de uma cápsula de gelatina de tamanho 2 para fornecer uma formulação oral.

[00188] A formulação oral foi administrada em um nível de microdose a 24 sujeitos, divididos em seis coortes de 4 sujeitos cada. Os sujeitos nas coortes 1 a 5 receberam um laxante em 5, 8, 11, 14 e 17 horas após a dose, e os sujeitos na coorte 6 não receberam um laxante. Foram conduzidas análises farmacocinéticas de amostras de sangue, urina e fezes para sujeitos em todas as coortes, incluindo análise acerca da presença do peptídeo do Exemplo 9.3 e um metabólito do peptídeo do Exemplo 9.3, o peptídeo do Exemplo 9.26, com um ácido livre N-terminal.

[00189] A presença do peptídeo do Exemplo 9.26 fornece evidência da liberação do peptídeo do Exemplo 9.3 da matriz de polímero, uma vez que a conversão da amida C-terminal do Exemplo 9.3 no ácido do Exemplo 9.26 pode ocorrer apenas subsequente à liberação do peptídeo da matriz de polímero. Os peptídeos tanto do Exemplo 9.3 como do Exemplo 9.26 foram encontrados em níveis significativos e aproximadamente iguais nas amostras fecais analisadas. Além disso, nenhum peptídeo intacto do Exemplo 9.3 ou do Exemplo 9.26 foi encontrado no plasma ou na urina. O único material radioativo identificado na urina foi a fenilalanina marcada com C14. Esses resultados indicam proteção significativa do produto farmacêutico através do GI superior e a aplicação com liberação subsequente do produto farmacêutico no cólon. Adicionalmente, não houve produto farmacêutico absorvido na circulação sistêmica conforme evidenciado pela falta de qualquer peptídeo detectável do Exemplo 9.3 ou Exemplo 9.26 em amostras de plasma ou urina.

[00190] Embora a invenção tenha sido descrita em detalhes com referência particular a essas modalidades preferenciais, outras modalidades podem alcançar os mesmos resultados. Variações e modificações da presente invenção serão óbvias para aqueles versados na técnica e se destina a abranger todas essas modificações e equivalentes. As revelações integrais de todas as referências, pedidos, patentes e publicações citadas acima estão aqui incorporadas a título de referência.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA DE LIBERAÇÃO EM TRATO GASTROINTESTINAL (GI) INFERIOR, caracterizada por compreender um peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo disposto em uma matriz de partícula que compreende pelo menos um polímero de liberação atrasada.

2. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo polímero de liberação atrasada ser um polímero de liberação dependente de pH.

3. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser misturado por adição na matriz de partícula formando, desse modo, uma mistura por adição da matriz de partícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

4. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pela mistura por adição da matriz de partícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser disposta em uma cápsula solúvel aquosa.

5. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pela cápsula solúvel aquosa ser uma cápsula de gelatina.

6. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pela mistura por adição da matriz de partícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser formada em um tablete.

7. FORMULAÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 ou 6, caracterizada pela cápsula ou tablete compreender adicionalmente pelo menos um dentre um revestimento de vedação e um revestimento entérico.

8. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por pelo menos um dentre um revestimento de vedação e um revestimento entérico compreender um revestimento entérico de polímero de liberação dependente de pH.

9. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo polímero de liberação dependente de pH compreender copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH.

10. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelos copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH serem selecionados a partir do grupo que consiste em Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D.

11. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D estarem presentes em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, ou cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75.

12. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser um peptídeo específico a receptor de melanocortina 1 (MC1r) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

13. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ter um valor de EC50 funcional no MC1r ou menor que um nM.

14. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ter um valor de EC50 funcional no receptor de melanocortina 4 (MC4r) de pelo menos cem vezes o valor de EC50 funcional em MC1r.

15. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ter um valor de EC50 funcional no MC4r de pelo menos cerca de 500 nM.

16. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser funcionalmente inativo no receptor de melanocortina 2 (MC2r), no receptor de melanocortina 3 (MC3r) e no receptor de melanocortina 5 (MC5r).

17. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo polímero de liberação atrasada liberar pelo menos uma porção do peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo no cólon.

18. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo polímero de liberação atrasada liberar uma quantidade terapeuticamente eficaz do peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo no cólon.

19. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

20. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pela matriz de partícula que compreender pelo menos um polímero de liberação atrasada é uma mistura que compreende Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D presentes em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1 ou cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75.

21. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pela Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D serem partículas com um tamanho de partícula máximo de no máximo 1.000 µm de diâmetro.

22. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelas partículas têrem um tamanho de partícula máximo de no máximo cerca de 600 µm de diâmetro e um tamanho de partícula mínimo de pelo menos cerca de 250 µm de diâmetro.

23. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pela porcentagem de Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe- Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de polímero de liberação atrasada ser no máximo cerca de 2% com base em pesos.

24. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 23, caracterizada pela porcentagem de Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe- Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de polímero de liberação atrasada ser no máximo cerca de 1% com base em pesos.

25. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pela porcentagem de Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe- Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de polímero de liberação atrasada ser no máximo cerca de 10% com base em pesos.

26. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 20, caracterizada por compreender adicionalmente pelo menos um excipiente selecionado a partir do grupo que consiste em um tensoativo, um desintegrante, um lubrificante e um aglutinante.

27. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por pelo menos um polímero de liberação atrasada afetar, quando administrado a um paciente humano, a liberação máxima do peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo no cólon.

28. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 27, caracterizada por pelo menos um polímero de liberação atrasada ser um polímero de liberação dependente de pH.

29. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 28, caracterizada por pelo menos um polímero de liberação atrasada ser uma mistura que compreende Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D presentes em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, ou cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75.

30. FORMULAÇÃO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser funcionalmente ativo no MC1r e pelo menos um receptor de melanocortina adicional é selecionado a partir do grupo que consiste no MC3r, no MC4r e no MC5r.

31. FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA DE LIBERAÇÃO NO TRATO GI INFERIOR PREPARADA POR UM PROCESSO, caracterizada por compreender as etapas de: a. fornecer uma mistura por adição de solução de Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1 ou cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75; b. adicionar Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)- Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo à mistura por adição de solução; c. secar a mistura por adição de solução que compreende Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e d. converter uma mistura por adição seca em partículas em que o tamanho de partícula resultante é no máximo cerca de 1.000 µm de diâmetro e no mínimo cerca de 25 µm de diâmetro.

32. PROCESSO, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado por no máximo cerca de 2% com base em pesos de Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser adicionado à mistura por adição de solução de Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D.

33. PROCESSO, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pela secagem compreender secagem a vácuo.

34. PROCESSO, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pela conversão compreender pulverizar a mistura por adição seca e peneirá-la através de uma peneira.

35. PROCESSO, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo tamanho de partícula resultante ser entre cerca de 250 µm e 600 µm de diâmetro.

36. FORMULAÇÃO DE LIBERAÇÃO MODIFICADA, caracterizada por compreender um peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como um único ingrediente farmacêutico ativo, e pelo menos um polímero de controle de liberação selecionado do grupo que consiste em polímeros dependentes de pH e polímeros não dependentes de pH; em que na administração oral a um paciente humano, o peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é aplicado substancialmente intacto ao lúmen do cólon do paciente humano.

37. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA ADEQUADA PARA

ADMINISTRAÇÃO ORAL PARA TRATAMENTO DE UMA DOENÇA INFLAMATÓRIA INTESTINAL, sendo que a composição farmacêutica é caracterizada por compreender: um núcleo de tablete, sendo que o núcleo de tablete compreende um composto ativo selecionado por um peptídeo cíclico específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como um único ingrediente farmacêutico ativo e um excipiente farmaceuticamente aceitável; e um revestimento entérico.

38. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA ADEQUADA PARA

ADMINISTRAÇÃO ORAL PARA TRATAMENTO DE UMA DOENÇA INFLAMATÓRIA INTESTINAL, sendo que a composição farmacêutica é caracterizada por compreender: um peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo disposto em uma matriz de partícula encapsulada que compreende pelo menos um polímero de liberação atrasada; e um revestimento entérico que cobre a cápsula.

39. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 38, caracterizada pelo peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)- Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

40. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com qualquer uma das reivindicações 38 ou 39, caracterizada por pelo menos um polímero de liberação atrasada compreende copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH.

41. MÉTODO DE TRATAMENTO DE DOENÇA INFLAMATÓRIA INTESTINAL (IBD) EM UM PACIENTE HUMANO COM IBD, caracterizado por compreender: administrar um peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo disposto em uma matriz de partícula que compreende pelo menos um polímero de liberação atrasada.

42. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo polímero de liberação atrasada ser um polímero de liberação dependente de pH.

43. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser misturado por adição na matriz de partícula formando, desse modo, uma mistura por adição da matriz de partícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

44. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pela mistura por adição da matriz de partícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser disposta em uma cápsula solúvel aquosa.

45. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pela cápsula solúvel aquosa ser uma cápsula de gelatina.

46. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pela mistura por adição da matriz de partícula e do peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser formada em um tablete.

47. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo tablete compreender adicionalmente um revestimento entérico.

48. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo revestimento entérico compreender um polímero de liberação dependente de pH.

49. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo polímero de liberação dependente de pH compreender copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH.

50. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelos copolímeros metacrílicos/de metacrilato de metila sensíveis a pH serem selecionados a partir do grupo que consiste em Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D.

51. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D estarem presentes em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, ou cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75.

52. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser um peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

53. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ter um valor de EC50 funcional no MC1r ou menor que um nM.

54. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ter um valor de EC50 funcional no MC4r de pelo menos cem vezes o valor de EC50 funcional em MC1r.

55. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ter um valor de EC50 funcional no MC4r de pelo menos cerca de 500 nM.

56. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo peptídeo específico a MC1r ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser funcionalmente inativo no MC2r, no MC3r e no MC5r.

57. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

58. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pela matriz de partícula que compreender pelo menos um polímero de liberação atrasada é uma mistura que compreende Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D presentes em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para

FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1 ou cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75.

59. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pela Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D serem partículas com um tamanho de partícula máximo de no máximo 1.000 µm de diâmetro.

60. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelas partículas terem um tamanho de partícula máximo de no máximo cerca de 600 µm de diâmetro e um tamanho de partícula mínimo de pelo menos cerca de 250 µm de diâmetro.

61. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pela porcentagem de Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe- Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de polímero de liberação atrasada ser no máximo cerca de 2% com base em pesos.

62. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pela porcentagem de Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe- Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de polímero de liberação atrasada ser no máximo cerca de 1% com base em pesos.

63. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pela porcentagem de Ac-Nle-ciclo(Glu-His-D-Phe- Arg-Dap)-Trp-NH2 (SEQ ID NO:6) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de polímero de liberação atrasada ser no máximo cerca de 10% com base em pesos.

64. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado por pelo menos um polímero de liberação atrasada afetar, quando administrado ao paciente humano com IBD, a liberação máxima do peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo no cólon.

65. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado por pelo menos um polímero de liberação atrasada ser um polímero de liberação dependente de pH.

66. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 65, caracterizado por pelo menos um polímero de liberação atrasada ser uma mistura que compreende Eudragit® L100-55, Eudragit® S100 e Eudragit® FS30D presentes em uma razão entre pesos de L100-55 para S100 para FS30D selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 6:6:1, ou cerca de 6,2:6,2:1 ou cerca de 23,25:23:3,75.

67. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado por peptídeo específico a receptor de melanocortina ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ser funcionalmente ativo no MC1r e pelo menos um peptídeo específico a receptor de melanocortina adicional é selecionado do grupo que consiste MC2r, MC3r e MC5r.