BR112020013644A2 - produto de peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de síndrome de ovário policístico, um distúrbio renal ou um distúrbio hepático, e, kit. - Google Patents

produto de peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de síndrome de ovário policístico, um distúrbio renal ou um distúrbio hepático, e, kit. Download PDF

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Abstract

A descrição provê produtos de peptídeo que compreendem um peptídeo covalentemente ligado a uma porção química de tensoativo que têm propriedades melhoradas, incluindo duração aumentada da ação e biodisponibilidade. Os produtos de peptídeo são úteis para tratar resistência à insulina, diabetes, obesidade, síndrome metabólica e doenças cardiovasculares e afecções associadas às mesmas, tais como NASH e PCOS.

Description

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PRODUTO DE PEPTÍDEO OU SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITÁVEL DO MESMO PARA USO NO TRATAMENTO DE SÍNDROME DE OVÁRIO POLICÍSTICO, UM DISTÚRBIO RENAL OU UM DISTÚRBIO HEPÁTICO, E, KIT PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido de Patente Provisório dos EUA no 62/613.396, depositado em 3 de janeiro de 2018, que é incorporado ao presente documento em sua totalidade a título de referência.
CAMPO DA DESCRIÇÃO
[002] A prevalência crescente de diabetes mellitus é uma crise de saúde mundial de proporções epidêmicas que é um grande contribuidor para morbidade e mortalidade de pacientes e um grande fardo econômico. A obesidade é um fator de risco importante para diabetes tipo 2, e aproximadamente 90% dos pacientes com diabetes tipo 2 estão com sobrepeso ou são obesos. A obesidade é um problema que cresce rapidamente em todo o mundo, e mais do que 65% dos adultos nos EUA têm sobrepeso. A descrição provê produtos farmacêuticos de peptídeo melhorados para o tratamento de distúrbios associados à obesidade e/ou diabetes, tais como esteato-hepatite não alcoólica (NASH) e síndrome de ovário policístico (PCOS).
SUMÁRIO DA DESCRIÇÃO
[003] São descritos no presente documento produtos de peptídeo e seus usos no tratamento de distúrbios associados à resistência à insulina e/ou obesidade, tais como diabetes tipo 2, síndrome metabólica, doenças cardiovasculares (incluindo doenças da artéria coronária, tais como ateroesclerose e infarto do miocárdio), hipertensão, NASH e PCOS, e no tratamento de afecções associadas a tais distúrbios. Os produtos de peptídeo compreendem um peptídeo covalentemente ligado a uma porção química de tensoativo contendo um grupo de sacarídeo hidrofílico e um grupo
2 / 120 hidrofóbico. Em algumas modalidades, o peptídeo é um hormônio metabólico, tal como GLP-1, glucagon, oxintomodulina ou uma exendina (por exemplo, exendina-4) ou um análogo ou variante dos mesmos. Os produtos de peptídeo têm propriedades melhoradas, incluindo duração de ação e biodisponibilidade aumentadas.
INCORPORAÇÃO A TÍTULO DE REFERÊNCIA
[004] Todas as publicações patentes e pedidos de patente mencionados neste relatório descritivo são incorporados ao presente documento a título de referência na mesma extensão como se cada publicação, patente ou pedido de patente individual estivesse específica e individualmente indicado como incorporado a título de referência.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[005] A Figura 1 mostra produtos de peptídeo específicos, todos os quais estão incorporados à descrição.
[006] A Figura 2 mostra produtos de peptídeo específicos, todos os quais estão incorporados à descrição.
[007] A Figura 3 mostra produtos de peptídeo específicos, todos os quais estão incorporados à descrição.
[008] A Figura 4 mostra produtos de peptídeo específicos, todos os quais estão incorporados à descrição.
[009] A Figura 5 ilustra a estrutura de cristais de raios X do sítio de ligação da região N-terminal/domínio extracelular do receptor GLP-1 e mostra uma região de ligação de ligante hidrofóbica crítica (Val19*, Phe22*, Trp25* e Leu26* do ligante exendina-4, e a sequência de exendina-4 além de Glu15 interage como uma hélice anfifílica com essa região).
[0010] A Figura 6 ilustra a estrutura de três produtos de peptídeo representativos, EU-A992, EU-A1022 e EU-A1169, em que o grupo amino épsilon (cadeia lateral) do resíduo de lisina na posição 24 do peptídeo forma uma ligação de amida com ácido 1-O-octil beta-D-glicurônico, ácido 1-O-
3 / 120 octil beta-D-melibiourônico ou ácido 1-O-octil alfa-D-melibiourônico, respectivamente.
[0011] A Figura 7 é uma ilustração mais detalhada da estrutura de EU-A992.
[0012] A Figura 8 mostra as concentrações dos produtos de peptídeo EU-A993 e EU-A1023 e do hormônio nativo GLP-1(7-36) ao longo do tempo durante incubação em plasma humano a 37°C.
[0013] A Figura 9 mostra a resposta de glicose sanguínea de camundongos db/db após injeções subcutâneas de EU-A992, EU-A1167 e EU-A1168 (cada uma a 250 nmol/kg) a t = 0 e 7 h.
[0014] A Figura 10 mostra a perda de peso em camundongos com obesidade induzida por dieta (DIO) após a injeção subcutânea do produto de peptídeo EU-A1024 em duas doses diferentes nos dias 1 (a T = 0 e 7 h), 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21 e 24.
[0015] A Figura 11 mostra a alteração na massa de tecido magro e massa de tecido gorduroso do corpo inteiro nos camundongos DIO tratados conforme medido por RMN nos dias 1 (pré-dose) e 26.
[0016] As Figuras 12A e 12B mostram os efeitos de compostos de teste no peso corporal em um modelo de camundongo com obesidade induzida por dieta (DIO) de NASH.
[0017] As Figuras 13A a 13B mostram os efeitos dos compostos de teste na massa de tecido gorduroso do corpo inteiro em camundongos DIO- NASH.
[0018] As Figuras 14A a 14B mostram os efeitos de compostos de teste em triglicerídeos plasmáticos (TG) e níveis de colesterol total (TC) em camundongos DIO-NASH.
[0019] As Figuras 15A a 15B mostra os efeitos dos compostos de teste nos níveis de alanina transaminase plasmática (ALT) e aspartato transaminase (AST) em camundongos DIO-NASH.
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[0020] A Figura 16 mostra os efeitos dos compostos de teste no peso do fígado em camundongos DIO-NASH.
[0021] As Figuras 17A a 17E mostra os efeitos dos compostos de teste na esteatose hepática com o uso de mancha de hematoxilina e eosina em camundongos DIO-NASH (a estrutura elíptica grande na Figura 17C é uma veia).
[0022] As Figuras 18A e 18B mostram os efeitos dos compostos de teste na esteatose hepática pós-biópsia em termos de % de área afetada e teor de lipídios no fígado total conforme determinado pela medição quantitativa histológica em camundongos DIO-NASH.
[0023] As Figuras 19A e 19B mostram os efeitos de compostos de teste em triglicerídeos no fígado (TG) e níveis de colesterol total (TC) em camundongos DIO-NASH.
[0024] A Figura 20 mostra os efeito dos compostos de teste no teor de colágeno tipo 1 alfa 1 (col1a1) no fígado total conforme medido imunoistoquimicamente em camundongos DIO-NASH.
[0025] A Figura 21 mostra os efeitos dos compostos de teste no teor de galectina-3 no fígado total conforme medido imunoistoquimicamente em camundongos DIO-NASH.
[0026] As Figuras 22A a 22E mostram os efeitos dos compostos de teste na pontuação de esteatose hepática em camundongos DIO-NASH.
[0027] As Figuras 23A a 23E mostram os efeitos dos compostos de teste na pontuação de inflamação hepática em camundongos DIO-NASH.
[0028] As Figuras 24A a 24E mostram os efeitos dos compostos de teste na pontuação de baloneamento de hepatócito em camundongos DIO- NASH.
[0029] As Figuras 25A a 25E mostram os efeitos dos compostos de teste na pontuação de NAS (pontuação de atividade de doença hepática gordurosa não alcoólica) em camundongos DIO-NASH.
5 / 120
[0030] As Figuras 26A a 26E mostram os efeitos dos compostos de teste na pontuação de fibrose hepática em camundongos DIO-NASH, em que a fibrose hepática foi avaliada por manchamento com picrosirius red.
[0031] As Figuras 27A a 27F mostram os efeitos dos compostos de teste em camundongos DIO-NASH na expressão hepática de mRNAs envolvidos na fibrose, inflamação e recrutamento e diferenciação de monócitos.
[0032] As Figuras 28A a 28F mostram os efeitos dos compostos de teste em camundongos DIO-NASH na expressão hepática de mRNAs envolvidos no recrutamento e diferenciação de monócitos.
[0033] As Figuras 29A a 29I mostram os efeitos dos compostos de teste em camundongos DIO-NASH na expressão hepática de mRNAs envolvidos na formação de fibras fibróticas.
[0034] As Figuras 30A a 30F mostram os efeitos dos compostos de teste em camundongos DIO-NASH na expressão hepática de mRNAs envolvidos na ativação de células estreladas hepáticas e proliferação de miofibroblastos.
[0035] As Figuras 31A a 31F mostram os efeitos dos compostos de teste em camundongos DIO-NASH na expressão hepática de mRNAs envolvidos na piroptose.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO DEFINIÇÕES
[0036] A menos que definido de outro modo ou claramente indicado de outro modo pelo seu uso no presente documento, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado conforme comumente entendido por aqueles versados na técnica aos quais este pedido pertence.
[0037] Conforme usado no relatório descritivo e nas reivindicações anexas, a palavra “um” ou “uma” significa um ou mais. Conforme usado no
6 / 120 presente documento, a palavra “outro” significa um segundo ou mais.
[0038] O acrônimo “aka” significa também conhecido como.
[0039] A palavra “exemplificativa” conforme usado no presente documento significa “servir como um exemplo, caso ou ilustração”. Qualquer modalidade ou recurso caracterizado no presente documento como "exemplificativo" não deve ser necessariamente interpretado como preferencial ou vantajoso em relação às outras modalidades ou recursos.
[0040] Em algumas modalidades, o termo “cerca de” ou “aproximadamente” significa dentro de ± 10% ou 5% do valor especificado. Sempre que o termo “cerca de” ou “aproximadamente” preceder o primeiro valor numérico em uma série de dois ou mais valores numéricos ou em uma série de duas ou mais faixas de valores numéricos, o termo “cerca de” ou “aproximadamente” se aplica a cada um dos valores numéricos naquela série de valores numéricos ou naquela série de faixas de valores numéricos.
[0041] Um “peptídeo” compreende dois ou mais resíduos de aminoácidos naturais e/ou não naturais ligados tipicamente por meio de ligações peptídicas. Tais aminoácidos pode incluir variantes estruturais de ocorrência natural, aminoácidos não proteinogênicos de ocorrência natural e/ou análogos de ocorrência não natural sintéticos de aminoácidos naturais. Os termos “peptídeo” e “polipeptídeo” são usados de forma intercambiável no presente documento. Os peptídeos incluem peptídeos curtos (cerca de 2 a 20 aminoácidos), peptídeos de comprimento médio (cerca de 21 a 50 aminoácidos) e peptídeos longos (> cerca de 50 aminoácidos, que podem também ser chamados de “proteínas”). Em algumas modalidades, um produto de peptídeo compreende uma porção química de tensoativo covalentemente ligada a um peptídeo de no máximo cerca de 50, 40 ou 30 aminoácidos. Os peptídeos sintéticos podem ser sintetizados com o uso de um sintetizador de peptídeo automatizado, por exemplo. Os peptídeos podem também ser produzidos recombinantemente em células que expressam sequências de
7 / 120 ácidos nucleicos que codificam os peptídeos. A notação convencional é usada no presente documento para representar as sequências de peptídeos: a extremidade esquerda de uma sequência de peptídeos é a terminação amino (N), e a extremidade direita de uma sequência de peptídeos é a terminação carboxila (C).
[0042] Abreviações de uma letra e três letras padrão para os aminoácidos comuns são usadas no presente documento. Embora as abreviações usadas nas sequências de aminoácido descritas no presente documento representem L-aminoácidos a não ser que designadas de outro modo como D- ou DL- ou o aminoácido seja aquiral, o D-isômero de contraparte pode ser geralmente usado em qualquer posição (por exemplo, para resistir à degradação proteolítica). As abreviações para outros aminoácidos usadas no presente documento incluem: Ac3c = ácido 1- aminociclopropano-1-carboxílico; Ac4c = ácido 1-aminociclobutano-1- carboxílico; Ac5c = ácido 1-aminociclopentano-1-carboxílico; Ac6c = ácido 1-aminociclo-hexano-1-carboxílico; Aib = ácido α-aminoisobutírico (ou 2- metilalanina ou Cα-metilalanina); Bip = 3-(bifenil-4-il)alanina; Bip2Et = 3- (2’-etilbifenil-4-il)alanina; Bip2EtMeO = 3-(2’-etil-4’-metoxibifenil-4- il)alanina; Cit = citrulina; Deg = 2,2-dietilglicina; Dmt = (2,6-dimetil)tirosina; 2FPhe = (2-fluorofenil)alanina; 2FMePhe ou 2FαMePhe = Cα-metil-(2- fluorofenil)alanina; hArg = homoarginina; MeLis ou αMeLis = Cα-metil- lisina; MePhe ou αMePhe = Cα-metilfenilalanina; MePro ou αMePro = Cα- metilprolina; Nal1 ou Nal(1) = 3-(1-naftil)alanina; Nal2 ou Nal(2) = 3-(2- naftil)alanina; Nle = norleucina; Orn = ornitina; e Tmp = (2,4,6- trimetilfenil)alanina. Ácido 1,2,3,4-tetra-hidroisoquinolina-3-carboxílico (Tic) e uma porção química Tic-Phe dipeptídeo com uma ligação de amida reduzida entre os resíduos (designada como Tic-Ψ[CH2-NH]-Ψ-Phe) têm as seguintes estruturas:
8 / 120
O H N N OH
H Tic Tic-Ψ[CH2-NH]-Ψ-Phe
[0043] A não ser que especificamente determinado de outro modo ou que o contexto indique claramente de outro modo, a descrição abrange toda e qualquer forma de um peptídeo que pode ser produzida, se o peptídeo é produzido sinteticamente (por exemplo, com o uso de um sintetizador de peptídeo) ou por uma célula (por exemplo, por produção recombinante). Tais formas de um peptídeo podem incluir uma ou mais modificações que podem ser feitas durante o curso da produção sintética ou celular do peptídeo, tal tais como uma ou mais modificações pós-traducionais, se a uma ou mais modificações são deliberadas ou não. Um peptídeo pode ter o mesmo tipo de modificação em dois ou mais locais diferentes e/ou pode ter dois ou mais tipos diferentes de modificações. As modificações que podem ser feitas durante o curso de produção sintética ou celular de um peptídeo, incluindo modificações químicas e pós-traducionais, incluem, sem limitação, glicosilação (por exemplo, glicosilação N-ligada e glicosilação O-ligada), lipidação, fosforilação, sulfatação, acetilação (por exemplo, acetilação da terminação N), amidação (por exemplo, amidação da terminação C), hidroxilação, metilação, formação de uma ligação de dissulfeto intramolecular ou intermolecular, formação de uma lactama entre duas cadeias laterais, formação de piroglutamato e ubiquitinação. Um peptídeo pode ter uma ou mais modificações em qualquer local, tal como a terminação N, a terminação C, uma ou mais cadeias laterais de aminoácido ou a cadeia principal de peptídeo ou qualquer combinação das mesmas. Em algumas modalidades, um peptídeo é acetilado na terminação N e/ou tem um grupo carboxamida (- CONH2) na terminação C, o que pode aumentar a estabilidade do peptídeo.
9 / 120
[0044] As modificações potenciais de um peptídeo também incluem a deleção de um ou mais aminoácidos, adição/inserção de um ou mais aminoácidos naturais e/ou não naturais ou substituição por um ou mais aminoácidos naturais e/ou não naturais ou qualquer combinação ou todos os mesmos. Uma substituição pode ser conservativa ou não conservativa. Tais modificações podem ser deliberadas, tal como por meio da mutagênese sítio- dirigida ou na síntese química de um peptídeo, ou podem ser acidentais, tal como por meio de mutações que surgem na célula hospedeira que produz o peptídeo ou por meio de erros devido à amplificação por PCR. Um aminoácido não natural pode ter a mesma estrutura química como o aminoácido natural de contraparte, mas tem a estereoquímica D, ou o mesmo pode ter uma estrutura química diferente e a estereoquímica D ou L. Os aminoácidos não naturais podem ser utilizados, por exemplo, para promover a formação de α-hélice e/ou aumentar a estabilidade do peptídeo (por exemplo, resistir à degradação proteolítica).
[0045] Um peptídeo que tem uma ou mais modificações em relação a um peptídeo de referência pode ser chamado de um “análogo” ou “variante” do peptídeo de referência conforme apropriado. Um “análogo” retém tipicamente uma ou mais propriedades essenciais (por exemplo, ligação de receptor, ativação de um receptor ou enzima, inibição de um receptor ou enzima ou outra atividade biológica) do peptídeo de referência. Uma “variante” pode reter a atividade biológica do peptídeo de referência ou não e/ou pode ter uma atividade biológica diferente. Em algumas modalidades, um análogo ou variante de um peptídeo de referência tem uma sequência de aminoácidos diferente do peptídeo de referência.
[0046] O termo “substituição conservativa” refere-se à substituição de um aminoácido em um peptídeo por um aminoácido natural ou não natural funcional, estrutural ou quimicamente similar. Em determinadas modalidades, os grupos a seguir contêm, cada um, aminoácidos naturais que são
10 / 120 substituições conservativas um para o outro: 1) glicina (Gly/G), alanina (Ala/A); 2) Isoleucina (Ile/I), Leucina (Leu/L), Metionina (Met/M), Valina (Val/V); 3) Fenilalanina (Phe/F), Tirosina (Tyr/Y), Triptofano (Trp/W); 4) Serina (Ser/S), Treonina (Thr/T), Cisteína (Cys/C); 5) Asparagina (Asn/N), Glutamina (Gln/Q); 6) Ácido aspártico (Asp/D), Ácido glutâmico (Glu/E); e 7) Arginina (Arg/R), Lisina (Lys/K), Histidina (His/H).
[0047] Em modalidades adicionais, os grupos a seguir contêm, cada um, aminoácidos naturais que são substituições conservativas um para o outro: 1) não polares: Ala, Val, Leu, Ile, Met, Pro (prolina/P), Phe, Trp; 2) hidrofóbicos: Val, Leu, Ile, Phe, Trp; 3) alifáticos: Ala, Val, Leu, Ile; 4) aromáticos: Phe, Tyr, Trp, His; 5) hidrofílicos ou polares não carregados: Gly, Ala, Pro, Ser, Thr, Cys, Asn, Gln, Tyr; 6) alifáticos contendo hidroxila ou sulfidrila: Ser, Thr, Cys; 7) contendo amida: Asn, Gln; 8) ácidos: Asp, Glu; 9) básicos: Lys, Arg, His; e 10) pequenos: Gly, Ala, Ser, Cys.
[0048] Em outras modalidades, os aminoácidos podem ser agrupados conforme apresentado abaixo: 1) hidrofóbicos: Val, Leu, Ile, Met, Phe, Trp; 2) aromáticos: Phe, Tyr, Trp, His; 3) hidrofílicos neutros: Gly, Ala, Pro, Ser, Thr, Cys, Asn, Gln;
11 / 120 4) ácidos: Asp, Glu; 5) básicos: Lys, Arg, His; e 6) resíduos que influenciam a orientação da cadeia principal: Pro.
[0049] Os exemplos de aminoácidos não naturais ou não proteinogênicos incluem, sem limitação, análogos de alanina (por exemplo, α- etilGly [ácido α-aminobutírico ou Abu], α-n-propilGly [norvalina ou Nva], α- terc-butulGly [Tbg], α-vinilGly [Vg ou Vlg], α-alilGly [Alg], α-propargilGly [Prg], 3-ciclopropilAla [Cpa] e Aib), análogos de leucina (por exemplo, Nle), análogos de prolina (por exemplo, α-MePro), análogos de fenilalanina {por exemplo, Phe(2-F), Phe(2-Me), Tmp, Bip, Bip(2’-Et-4’-OMe), Nal1, Nal2, Tic, α-MePhe, α-MePhe(2-F) e α-MePhe(2-Me)}, análogos de tirosina (por exemplo, Dmt e α-MeTyr), análogos de serina (por exemplo, homosserina [isotreonina ou hSer]), análogos de glutamina (por exemplo, Cit), análogos de arginina (por exemplo, hArg), análogos de lisina (por exemplo, homolisina [hLys], Orn e α-MeLys), aminoácidos α,α-dissubstituídos (por exemplo, Aib, α,α-dietilGly [Deg], α-ciclo-hexilAla [2-Cha], Ac3c, Ac4c, Ac5c e Ac6c) e outros aminoácidos não naturais descritos em A. Santoprete et al., J. Pept. Sci., 17:270 a 280 (2011). Aminoácidos α,α-dissubstituídos podem prover restrição conformacional e/ou estabilização de α-hélice. Uma ligação de amida reduzida entre dois resíduos (como em, por exemplo, Tic-Ψ[CH2-NH]- Ψ-Phe) aumenta a resistência à protease e pode também, por exemplo, alterar a ligação de receptor.
[0050] A descrição abrange todos os sais farmaceuticamente aceitáveis de peptídeos, incluindo aqueles com carga líquida positiva, aqueles com carga líquida negativa e aqueles sem nenhuma carga líquida.
[0051] Os sacarídeos incluem monossacarídeos, dissacarídeos e oligossacarídeos (por exemplo, trissacarídeos, tetrassacarídeos e assim por diante). Um sacarídeo redutor existe em uma forma de anel e uma forma de
12 / 120 cadeia aberta em equilíbrio, que geralmente favorece a forma de anel. Um sacarídeo funcionalizado de uma porção química de tensoativo tem um grupo funcional adequado para formar uma ligação covalente com um aminoácido de um peptídeo.
[0052] Um grupo “alquila” refere-se a um grupo hidrocarboneto alifático. Um grupo alquila pode ser saturado ou insaturado e pode ser de cadeia reta (linear), ramificado ou cíclico. Em algumas modalidades, um grupo alquila é não cíclico. Em algumas modalidades, um grupo alquila contém 1 a 30, 6 a 30, 6 a 20 ou 8 a 20 átomos de carbono. Um grupo alquila “substituído” é substituído por um ou mais substituintes. Em algumas modalidades, o um ou mais substituintes são independentemente selecionados dentre halogênios, nitro, ciano, oxo, hidróxi, alcóxi, haloalcóxi, arilóxi, tiol, alquiltio, ariltio, alquilsulfóxido, arilsulfóxido, alquilsulfona, arilsulfona, amino, alquilamino, dialquilamino, arilamino, alcoíla, carboxila, carboxilato, ésteres, amidas, carbonatos, carbamatos, ureias, alquila, haloalquila, fluoroalquila, aralquila, cadeias de alquila contendo um grupo acila, heteroalquila, heteroalicíclico, arila, alcoxiarila, heteroarila, compostos naturais hidrofóbicos (por exemplo, esteroides) e similares.
[0053] Em algumas modalidades, um grupo alquila como um substituinte é C1-C6 alquila linear ou ramificada, que pode ser chamada de “alquila inferior”. Os exemplos não limitantes de grupos alquila inferiores incluem metila, etila, propila (incluindo n-propila e isopropila), butila (incluindo todas as formas isoméricas, tais como n-butila, isobutila, sec-butila e terc-butila), pentila (incluindo todas as formas isoméricas, tais como n- pentila) e hexila (incluindo todas as formas isoméricas, tais como n-hexila).
[0054] Em algumas modalidades, um grupo alquila é ligado ao átomo de Nα de um resíduo (por exemplo, Tyr ou Dmt) de um peptídeo. Em determinadas modalidades, um grupo N-alquila é C1-C10 alquila reta ou ramificada ou alquila substituída por arila, tal como benzila, feniletila ou
13 / 120 similares. Um ou dois grupos alquila podem ser ligados ao átomo de Nα do resíduo N-terminal.
[0055] Em algumas modalidades, um grupo alquila é um grupo 1- alquila que é ligado à posição C-1 de um sacarídeo (por exemplo, glicose) por meio de uma ligação glicosídica (por exemplo, uma ligação O-, S-, N- ou C- glicosídica). Em algumas modalidades, tal grupo 1-alquila é um grupo C1-C30, C6-C30, C6-C20 ou C8-C20 alquila não substituído ou substituído.
[0056] Em algumas modalidades, um grupo alquila (por exemplo, um grupo 1-alquila) é substituído por um ou mais (por exemplo, 2 ou 3) grupos independentemente selecionados dentre arila, -OH, -OR1, -SH, -SR1, -NH2, - NHR1, -N(R1)2, oxo (=O), -C(=O)R2, carboxila (-CO2H), carboxilato (-CO2–), -C(=O)OR1, -OC(=O)R3, -C(=O)N(R1)2, -NR4C(=O)R3, -OC(=O)OR5, - OC(=O)N(R1)2, -NR4C(=O)OR5 e -NR4C(=O)N(R1)2, em que: R1, em cada ocorrência independentemente, é hidrogênio, alquila ou arila, ou ambas as ocorrências de R1 e o átomo de nitrogênio ao qual as mesmas estão conectadas formam um anel de heterociclila ou heteroarila; R2 em cada ocorrência independentemente é alquila, heterociclila, arila ou heteroarila; R3 em cada ocorrência independentemente é hidrogênio, alquil, heterociclila, arila ou heteroarila; R4, em cada ocorrência independentemente, é hidrogênio ou alquila; e R5, em cada ocorrência independentemente, é alquila ou arila.
[0057] Em algumas modalidades, um grupo alquila (por exemplo, um grupo 1-alquila) é interna e/ou terminalmente substituído por um grupo carboxila/carboxilato, um grupo arila ou um grupo -O-arila. Em determinadas modalidades, um grupo alquila (por exemplo, um grupo 1-alquila) é substituído por um grupo carboxila ou carboxilato na extremidade distal do
14 / 120 grupo alquila. Em modalidades adicionais, um grupo alquila (por exemplo, um grupo 1-alquila) é substituído por um grupo arila na extremidade distal do grupo alquila. Em outras modalidades, um grupo alquila (por exemplo, um grupo 1-alquila) é substituído por um grupo -O-arila na extremidade distal do grupo alquila.
[0058] Os termos “halogênio”, “haleto” e “halo” referem-se a fluoreto, cloreto, brometo e iodeto.
[0059] O termo “acila” refere-se a -C(=O)R, em que R é um grupo alifático que pode ser saturado ou não saturado e pode ser linear, ramificado ou cíclico. Em determinadas modalidades, R contém 1 a 20, 1 a 10 ou 1 a 6 átomos de carbono. Um grupo acila pode ser opcionalmente substituído por um ou mais grupos, tais como halogênios, oxo, hidroxila, alcóxi, tiol, alquiltio, amino, alquilamino, dialquilamino, cicloalquila, arila, acila, carboxila, ésteres, amidas, compostos naturais hidrofóbicos (por exemplo, esteroides) e similares.
[0060] Os termos “heterociclila” e “heterocíclico” referem-se a um grupo não aromático monocíclico ou um grupo multicíclico que contém pelo menos um anel não aromático, em que pelo menos um anel não aromático contém um ou mais heteroátomos independentemente selecionados dentre O, N e S. O anel não aromático contendo um ou mais heteroátomos pode ser ligado ou fundido a um ou mais anéis saturados, parcialmente insaturados ou aromáticos. Em determinadas modalidades, um grupo heterociclila ou heterocíclico tem de 3 a 15, ou 3 a 12, ou 3 a 10, ou 3 a 8, ou 3 a 6 átomos de anel. Os grupos heterociclila ou heterocíclicos incluem, sem limitação, aziridinila, azetidinila, pirrolidinila, piperidinila, morfolinila, piperazinila, azepanila, azocanila, oxiranila, oxetanila, tetra-hidrofuranila (oxolanila), tetra- hidropiranila, oxepanila e oxocanila.
[0061] O termo “arila” refere-se a um grupo hidrocarboneto aromático monocíclico ou um grupo multicíclico que contém pelo menos um
15 / 120 anel de hidrocarboneto aromático. Em determinadas modalidades, um grupo arila tem de 6 a 15, ou 6 a 12, ou 6 a 10 átomos de anel. Os grupos arila incluem, sem limitação, fenila, naftalenila (naftila), fluorenila, azulenila, antrila, fenantrila, bifenila e terfenila. O anel de hidrocarboneto aromático de um grupo arila pode ser ligado ou fundido a um ou mais anéis saturados, parcialmente insaturados ou aromáticos – por exemplo, di-hidronaftila, indenila, indanila e tetra-hidronaftila (tetralinila). Um grupo arila pode ser opcionalmente substituído por um ou mais (por exemplo, 2 ou 3) substituintes independentemente selecionados dentre halogênios (incluindo -F e -Cl), ciano, nitro, hidroxila, alcóxi, tiol, alquiltio, alquilsulfóxido, alquilsulfono, amino, alquilamino, dialquilamino, alquila, haloalquila (incluindo fluoroalquila, tal como trifluorometila), acila, carboxila, ésteres, amidas e similares.
[0062] O termo “heteroarila” refere-se a um grupo aromático monocíclico ou um grupo multicíclico que contém pelo menos um anel aromático, em que pelo menos um anel aromático contém um ou mais heteroátomos independentemente selecionados dentre O, N e S. O anel heteroaromático pode ser ligado ou fundido a um ou mais anéis saturados, parcialmente insaturados ou aromáticos que podem conter apenas átomos de carbono ou que podem conter um ou mais heteroátomos. Em determinadas modalidades, um grupo heteroarila tem de 5 a 15, ou 5 a 12, ou 5 a 10 átomos de anel. Os grupos heteroarila monocíclicos incluem, sem limitação, pirrolila, pirazolila, pirazolinila, imidazolila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, tiadiazolila, isotiazolila, furanila, tienila (tiofenil), oxadiazolila, triazolila, tetrazolila, piridila, piridonila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, piridazinonila e triazinila. Os exemplos não limitantes de grupos heteroarila bicíclico incluem indolila, benzotiazolila, benzotiadiazolila, benzoxazolila, benzisoxazolila, benzotienila (benzotiofenila), quinolinila, tetra- hidroisoquinolinila, isoquinolinila, benzimidazolila, benzotriazolila,
16 / 120 indolizinila, benzofuranila, isobenzofuranila, chromonila, cumarinila, cinolinila, quinazolinila, quinoxalinila, indazolila, naftiridinila, ftalazinila, quinazolinila, purinila, pirrolopiridinila, furopiridinila, tienopiridinila, di- hidroisoindolila e tetra-hidroquinolinila.
[0063] O termo “núcleo de esteroide” refere-se ao núcleo de esteroides que compreende uma disposição de quatro anéis fundidos designados A, B, C e D conforme mostrado abaixo:
C D A B .
[0064] um núcleo de esteroide pode portar um ou mais grupos, tais como halogênios, hidroxila, oxo, alquila, acila, carboxila, ésteres, amidas e similares. As porções químicas contendo núcleo de esteroide incluem, porém sem limitação, colesterol e similares.
[0065] O termo “farmaceuticamente aceitável” refere-se a uma substância (por exemplo, um ingrediente ativo ou um excipiente) que é adequada para uso em contato com os tecidos e órgãos de um sujeito sem irritação excessiva, resposta alérgica, imunogenicidade e toxicidade, é proporcional a uma razão entre risco/benefício razoável e é eficaz para seu uso pretendido. Um excipiente ou carreador “farmaceuticamente aceitável” de uma composição farmacêutica é também compatível com os outros ingredientes da composição.
[0066] O termo “quantidade terapeuticamente eficaz” refere-se a uma quantidade de um composto que, quando administrado a um sujeito, é suficiente para prevenir, reduzir o risco de desenvolver, atrasar o início de, retardar a progressão de ou causar a regressão da afecção médica sendo tratada ou para aliviar a algum grau a afecção médica ou um ou mais sintomas ou complicações dessa afecção, pelo menos em alguma fração dos sujeitos que tomam esse composto. O termo “quantidade terapeuticamente eficaz” também se refere a uma quantidade de um composto que é suficiente para
17 / 120 produzir a resposta biológica ou médica de uma célula, tecido, órgão ou ser humano que é buscado por um doutor médico ou clínico.
[0067] Os termos “tratar”, “tratando” e “tratamento” incluem aliviar, atenuar, inibir o progresso de, reverter ou anular uma afecção médica ou um ou mais sintomas ou complicações associadas à afecção e aliviar, atenuar ou erradicar uma ou mais causas da afecção. A referência ao “tratamento” de uma afecção médica inclui a prevenção da afecção. Os termos “prevenir”, “que previne” e “prevenção” incluem evitar, reduzir o risco de desenvolver e atrasar o início de uma afecção médica ou um ou mais sintomas ou complicações associadas à afecção.
[0068] O termo “afecções médicas” (ou “afecções” para brevidade) inclui doenças e distúrbios. Os termos “doenças” e “distúrbios” são usados de forma intercambiável no presente documento.
OBESIDADE E RESISTÊNCIA À INSULINA
[0069] A obesidade leva à resistência à insulina, que é uma capacidade diminuída das células no corpo para responder ao estímulo com insulina através de um número diminuído de receptores de insulina e um acoplamento diminuído de receptores de insulina a sistemas de sinalização intracelular críticos. O estado obeso também leva à síndrome metabólica, que é um conjunto de distúrbios incluindo resistência à insulina, hipertensão, ateroesclerose, etc. A resistência à insulina frequentemente resulta em diabetes tipo 2. A hiperglicemia prolongada aumenta o risco de complicações micro e macrovasculares, neuropatia sensorial, infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral, mortalidade macrovascular e mortalidade por todas as causas. Diabetes tipo 2, síndrome metabólica e outras doenças associadas à obesidade e resistência à insulina são grandes ônus financeiros e de cuidados com a saúde no mundo.
HORMÔNIOS METABÓLICOS
[0070] Incretinas são hormônios metabólicos que induzem uma
18 / 120 diminuição nos níveis de glicose sanguínea. As incretinas são liberadas após refeição e estimulam a produção e secreção de insulina de células pancreáticas beta das ilhotas de Langerhans por um mecanismo dependente de glicose sanguínea. As incretinas também reduzem a taxa de absorção de nutrientes na corrente sanguínea retardando o esvaziamento gástrico, o que induz saciedade e suprime, assim, o apetite. Ademais, as incretinas inibem a liberação de glucagon das células alfa das ilhotas de Langerhans. As duas principais incretinas são peptídeo-1 semelhante a glucagon (GLP-1) e peptídeo inibidor gástrico (GIP, também conhecido como polipeptídeo insulinotrópico dependente de glicose), que são secretados por células L intestinais e são membros da superfamília de peptídeo de glucagon. GLP-1 e GIP são rapidamente degradados por dipeptidil peptidase 4 (DPP-4). As pessoas com diabetes tipo 2 têm secreção de insulina prejudicada de células pancreáticas beta em resposta a GLP-1.
[0071] GLP-1 tem outros efeitos benéficos. Por exemplo, GLP-1 estimula a proliferação de células pancreáticas beta, aumenta a sensibilidade à insulina periférica e absorção de glicose e produção de glicogênio no fígado e melhora a função cardíaca (por exemplo, função do ventrículo esquerdo).
[0072] Como GLP-1, oxintomodulina (OXM) é derivada de pré-pró- glucagon e é secretada de células L no intestino em resposta à refeição. OXM é essencialmente glucagon com uma extensão C-terminal de 8 resíduos de aminoácidos. OXM ativa tanto o receptor de glucagon (GCGR) quanto o receptor de GLP-1 (GLP1R), mas com uma potência 10 a 100 vezes menor do que glucagon e GLP-1. OXM induz saciedade e reduz gordura corporal (por exemplo, tecido adiposo branco). OXM causa perda de peso reduzindo a ingestão de alimentos e gordura corporal.
[0073] Glucagon é produzido a partir de pré-pró-glucagon em células pancreáticas alfa das ilhotas de Langerhans. Glucagon induz saciedade, induz lipólise em tecidos adiposos e aumenta o gasto de energia. Glucagon reduz o
19 / 120 peso corporal reduzindo a ingestão de alimentos e estimulando a queima de gordura.
[0074] As sequências de aminoácidos das formas biologicamente ativas de GLP-1 humano, glucagon e oxintomodulina são mostradas abaixo: GLP-1 (usando a numeração de glucagon): His1-Ala2-Glu3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Val10-Ser11- Ser12-Tyr13-Leu14-Glu15-Gly16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys20-Glu21-Phe22-Ile23- Ala24-Trp25-Leu26-Val27-Lys28-Gly29-Arg30 (SEQ. ID. NO. 1) Glucagon: His1-Ser2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Ser16-Arg17-Arg18-Ala19-Gln20-Asp21-Phe22-Val23- Gln24-Trp25-Leu26-Met27-Asn28-Thr29 (SEQ. ID. NO. 2) Oxintomodulina: His1-Ser2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Ser16-Arg17-Arg18-Ala19-Gln20-Asp21-Phe22-Val23- Gln24-Trp25-Leu26-Met27-Asn28-Thr29-Lys30-Arg31-Asn32-Arg33-Asn34-Asn35- Ile36-Ala37 (SEQ. ID. NO. 3).
[0075] Os resíduos de aminoácidos por toda as sequências de GLP-1 e glucagon podem ser substituídos enquanto retêm atividade biológica. Por exemplo, a substituição por Ala é bem aceita na região N-terminal de GLP-1, especialmente nas posições 2, 3, 5, 8, 11 e 12 (Adelhorst et al., J. Biol. Chem., 269:6.275 a 6.278 [1994]). Ademais, análogos N-terminais curtos de GLP-1 podem potencialmente se ligar a e ativar GLP1R (Mapelli et al., J. Med. Chem., 52:7.788-7.799 [2009]; e Haque et al., Peptides, 31:950 a 955 e 1.353 a 1.360 [2010]). Análogos quiméricos com capacidade para se ligarem tanto a GLP1R quanto a GCGR podem ser criados por enxertia de resíduos C- terminais de GLP-1 em resíduos N-terminais de glucagon (Hjorth et al., J. Biol. Chem., 269:30.121 a 30.124 [1994]).
[0076] A descrição provê produtos de peptídeo que compreendem um
20 / 120 hormônio de intestino de peptídeo (por exemplo, GLP-1, GIP, glucagon, oxintomodulina ou uma exendina [por exemplo, exendina-4]) ou um análogo ou variante do mesmo, que é covalentemente ligado a uma porção química de tensoativo. Os produtos de peptídeo são agonistas potentes do receptor (ou receptores) do peptídeo subjacente, promovem homeostase metabólica e têm uma longa duração de ação e biodisponibilidade melhorada. Em algumas modalidades, os produtos de peptídeo são agonistas do receptor de GLP-1 (GLP1R). Os agonistas de GLP1R estimulam a secreção de insulina dependente de glicose sanguínea e aumentam a sensibilidade à insulina com um risco reduzido de hipoglicemia e induzem saciedade que reduz a ingestão de alimentos e, portanto, reduz o ganho de peso e causa perda de peso. Em modalidades adicionais, os produtos de peptídeo são agonistas duplos de GLP1R e o receptor de glucagon (GCGR), que adiciona os benefícios da ativação de GCGR, incluindo a estimulação da queima de gordura, perda de massa de gordura corporal e prevenção de hipoglicemia.
PRODUTOS DE PEPTÍDEO
[0077] O peptídeos e as proteínas têm frequentemente deficiências em seu uso como medicamentos, incluindo instabilidade na formulação, agregação, curta duração de ação e pouca biodisponibilidade. São descritos no presente documento produtos de peptídeo que têm propriedades melhoradas como produtos farmacêuticos, incluindo estabilidade, meia-vida, duração de ação e biodisponibilidade aumentadas e imunogenicidade reduzida. Os produtos de peptídeo compreendem um peptídeo covalentemente ligado a uma porção química de tensoativo contendo um grupo de sacarídeo hidrofílico e um grupo hidrofóbico. Em algumas modalidades, o peptídeo é ligado ao grupo sacarídeo, que é, por sua vez, ligado ao grupo hidrofóbico. Em algumas modalidades, o peptídeo é um hormônio metabólico, tal como GLP-1, glucagon, oxintomodulina ou uma exendina (por exemplo, exendina- 4) ou um análogo ou variante dos mesmos. Os produtos de peptídeo são úteis
21 / 120 para tratar, por exemplo, resistência à insulina, diabetes, obesidade, síndrome metabólica e doenças cardiovasculares e afecções ligadas às mesmas, tais como NASH e PCOS.
[0078] Em algumas modalidades, um produto de peptídeo compreende GLP-1 ou um análogo ou variante do mesmo covalentemente ligada a uma porção química de tensoativo (por exemplo, um alquil glicosídeo, tal como um 1-alquil glicosídeo). O peptídeo GLP-1 pode ter uma estrutura ou sequência de aminoácidos nativa ou não nativa. O grupo alquila pode ser não substituído ou substituído (por exemplo, por um grupo carboxila/carboxilato, arila ou oxiarila). Em determinadas modalidades, o alquil glicosídeo é um ácido 1-O-alquil β-D-glicurônico.
[0079] Em modalidades adicionais, um produto de peptídeo compreende glucagon ou um análogo ou variante do mesmo covalentemente ligada a uma porção química de tensoativo (por exemplo, um alquil glicosídeo, tal como um 1-alquil glicosídeo). O peptídeo glucagon pode ter uma estrutura ou sequência de aminoácidos nativa ou não nativa. O grupo alquila pode ser não substituído ou substituído (por exemplo, por um grupo carboxila/carboxilato, arila ou oxiarila). Em determinadas modalidades, o alquil glicosídeo é um ácido 1-O-alquil β-D-glicurônico.
[0080] Em modalidades adicionais, um produto de peptídeo compreende oxintomodulina ou um análogo ou variante da mesma covalentemente ligada a uma porção química de tensoativo (por exemplo, um alquil glicosídeo, tal como um 1-alquil glicosídeo). O peptídeo oxintomodulina pode ter uma estrutura ou sequência de aminoácidos nativa ou não nativa. O grupo alquila pode ser não substituído ou substituído (por exemplo, por um grupo carboxila/carboxilato, arila ou oxiarila). Em determinadas modalidades, o alquil glicosídeo é um ácido 1-O-alquil β-D- glicurônico.
[0081] Em outras modalidades, um produto de peptídeo compreende
22 / 120 uma exendina (por exemplo, exendina-4) ou um análogo ou variante da mesma covalentemente ligada a uma porção química de tensoativo (por exemplo, um alquil glicosídeo, tal como um 1-alquil glicosídeo). O peptídeo exendina pode ter uma estrutura ou sequência de aminoácidos nativa ou não nativa. O grupo alquila pode ser não substituído ou substituído (por exemplo, por um grupo carboxila/carboxilato, arila ou oxiarila). Em determinadas modalidades, o alquil glicosídeo é um ácido 1-O-alquil β-D-glicurônico.
[0082] Algumas modalidades referem-se a produtos de peptídeo de Fórmula I-A que compreendem um tensoativo X covalentemente ligado a um peptídeo, sendo que o peptídeo compreende um aminoácido ligante U e pelo menos um outro aminoácido: Fórmula I-A em que o tensoativo X é uma porção química de Fórmula I: Fórmula I em que: R1a, em cada ocorrência independentemente, é uma ligação, H, um grupo protetor, um sacarídeo, um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído, um grupo aralquil (-alquilarila) não substituído ou substituído, um grupo alquiloxiarila não substituído ou substituído ou um grupo contendo núcleo esteroide; R1b, R1c e R1d, em cada ocorrência independentemente, são uma ligação, H, um grupo protetor, um sacarídeo, um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído, um grupo aralquila não substituído ou substituído, um grupo alquiloxiarila não substituído ou substituído ou um
23 / 120 grupo contendo núcleo esteroide; R2, em cada ocorrência independentemente, é uma ligação, uma ligação a U, H, um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído, um grupo aralquila não substituído ou substituído, um grupo alquiloxiarila não substituído ou substituído , um grupo contendo núcleo esteroide, -NH-, - S-, -O-NH-, um espaçador, -triazolo-, -NH(C=O)-CH2- ou -(CH2)m- maleimida-; W1, em cada ocorrência independentemente, é -CH2-, -CH2-O- , -CH2-S-, -CH2-NH-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -(C=S)- ou -(C=S)-NH-; W2, em cada ocorrência independentemente, é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-; pelo menos uma ocorrência de R1a, R1b, R1c, R1d ou R2 é uma C1-C30 alquila não substituída ou substituída, aralquila, alquiloxiarila ou grupo contendo núcleo esteroide; m é um número inteiro de 1 a 10; e n é 1, 2 ou 3; e o peptídeo tem Fórmula II: aa1-aa2-aa3-aa4-aa5-aa6-aa7-aa8-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13-aa14-aa15- aa16-aa17-aa18-aa19-aa20-aa21-aa22-aa23-aa24-aa25-aa26-aa27-aa28-aa29-aa30-aa31- aa32-aa33-aa34-aa35-aa36-aa37-Z Fórmula II (SEQ.
ID.
NO. 1108) em que: Z é -OH, -NHR3 ou -N(R4)His, em que: R3 é H, C1-C12 alquila não substituída ou substituída ou um grupo contendo PEG menor do que 10 Da; e R4 é H, C2-C10 acila (por exemplo, acetila) ou -C(=O)-arila (por exemplo, benzoíla); aa1 é His, N(R3)His, N(R4)His ou pGlu-His; aa2 é Ser, D-Ser, Ala, Gly, Pro, MePro, Aib, Ac4c ou Ac5c; aa3 é Gln ou Cit;
24 / 120 aa4 é Gly ou D-Ala; aa5 é Thr ou Ser; aa6 é Phe, Trp, 2FPhe, MePhe, 2FMePhe ou Nal2; aa7 é Thr ou Ser; aa8 é Ser ou Asp; aa9 é Asp ou Glu; aa10 é Tyr, Leu, Met, Nal2, Bip, Bip2EtMeO, Glu, Lys ou U; aa11 está ausente ou é Ser, Asn, Bip ou U; aa12 está ausente ou é Lys, Glu, Ser, Arg ou U; aa13 está ausente ou é Tyr, Gln, Cit ou U; aa14 está ausente ou é Leu, Met, Nle, Glu, Lys ou U; aa15 está ausente ou é Asp, Glu ou U; aa16 está ausente ou é Ser, Gly, Glu, Ala, Aib, Ac5c, Lys, Arg ou U; aa17 está ausente ou é Arg, hArg, Gln, Glu, Cit, Aib, Ac4c, Ac5c, Lys ou U; aa18 está ausente ou é Arg, hArg, Ala, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa19 está ausente ou é Ala, Val, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa20 está ausente ou é Gln, Lys, Arg, Cit, Glu, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa21 está ausente ou é Asp, Glu, Leu, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa22 está ausente ou é Phe, Trp, Nal2, Aib, Ac4c, Ac5c ou U aa23 está ausente ou é Val, Ile, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa24 está ausente ou é Ala, Gln, Glu, Cit ou U; aa25 está ausente ou é Trp, Nal2 ou U; aa26 está ausente ou é Leu ou U; aa27 está ausente ou é Met, Val, Leu, Nle, Lys ou U; aa28 está ausente ou é Asn, Lys, Glu, Gln, Cit ou U; aa29 está ausente ou é Thr, Gly, Aib, Ac4c, Ac5c ou U;
25 / 120 aa30 está ausente ou é Lys, Aib, Ac4c, Ac5c, Arg ou U; aa31 está ausente ou é Arg, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa32 está ausente ou é Asn, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa33 está ausente ou é Arg, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa34 está ausente ou é Asn, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa35 está ausente ou é Asn, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa36 está ausente ou é Ala, Ile, Aib, Ac4c, Ac5C ou U; aa37 está ausente ou é U; U é um aminoácido natural ou não natural é que compreende um grupo funcional usado para ligação covalente a um tensoativo X; quaisquer dois dentre aa1 a aa37 podem ser opcionalmente ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; e contanto que um, ou pelo menos um, dentre aa10 a aa37 seja um aminoácido ligante U covalentemente ligado a um tensoativo X.
[0083] Uma porção química de tensoativo pode também ser ligada a um aminoácido ligante U do peptídeo por meio de R1a, R1b, R1c ou R1d. Por exemplo, W2 pode ser -O-, e uma ocorrência de R1a pode ser ligada a um aminoácido natural ou não natural que porta hidroxila (por exemplo, serina, homosserina ou treonina), ou W2 pode ser -S-, e uma ocorrência de R1a pode ser ligada a um aminoácido natural ou não natural que porta tiol/sulfidrila (por exemplo, cisteína ou homocisteína), ou W2 pode ser -NH-, e uma ocorrência de R1a pode ser ligada a um aminoácido natural ou não natural que porta amino (por exemplo, lisina ou ornitina). Em determinadas modalidades, U ligado a uma porção química de tensoativo por meio de R1a é um aminoácido não natural. Um aminoácido ligante U ligado a uma porção química de tensoativo por meio de R1a pode ser o L- ou D-isômero. Em determinadas modalidades, U é o D-isômero.
[0084] Em algumas modalidades, n é 1. Em outras modalidades, n é 2, e um primeiro glicosídeo é ligado a um segundo glicosídeo por meio de uma
26 / 120 ligação entre W2 do primeiro glicosídeo e -OR1b, -OR1c ou -OR1d do segundo glicosídeo. Em ainda outras modalidades, n é 3, e um primeiro glicosídeo é ligado a um segundo glicosídeo por meio de uma ligação entre W2 do primeiro glicosídeo e -OR1b, -OR1c ou -OR1d do segundo glicosídeo, e o segundo glicosídeo é ligado a um terceiro glicosídeo por meio de uma ligação entre W2 do segundo glicosídeo e -OR1b, -OR1c ou OR1d do terceiro glicosídeo.
[0085] Em algumas modalidades dos produtos de peptídeo de Fórmula I-A, o tensoativo X é: Fórmula I em que: R1a é H, um grupo protetor, um sacarídeo, um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído ou um grupo contendo núcleo esteroide; R1b, R1c e R1d são, independentemente, H, um grupo protetor, um sacarídeo ou um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído; R2 é uma ligação a U, -NH-, -S-, -triazolo-, -NH(C=O)-CH2- ou -(CH2)m-maleimida-; W1 é -CH2-, -CH2-O-, -CH2-S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -(C=S)- ou -(C=S)-NH-; W2 é -O- ou -S-; m é 1 a 10; e pelo menos um dentre R1a, R1b, R1c e R1d é um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído ou um grupo contendo núcleo esteroide.
[0086] Em determinadas modalidades, o tensoativo X tem a estrutura
27 / 120 em que R2 é uma ligação a U. Em determinadas modalidades, W1 é -C(=O)NH-, e R2 é uma ligação entre W1 e um resíduo de aminoácido U (por exemplo, o grupo amino de cadeia lateral de um resíduo de lisina) do peptídeo.
[0087] Em outras modalidades, o tensoativo X é . Em determinadas modalidades, W1 é -CH2-O-, -CH2-S- ou -(C=O)-NH-, e R2 é um grupo -(CH2)m-maleimida- que forma uma ligação com um grupo funcional adequado de um resíduo de aminoácido U do peptídeo (por exemplo, um grupo tiol de um resíduo de cisteína forma uma ligação de tioéter com o grupo maleimida).
[0088] Em modalidades adicionais, o tensoativo X tem a estrutura: Fórmula I em que: R1a é H, um grupo protetor, um sacarídeo, um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído ou um grupo contendo núcleo esteroide; R1b, R1c e R1d são, independentemente, H, um grupo protetor ou um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído; R2 é uma ligação a U; W1 é -(C=O)-NH-; W2 é -O-; e pelo menos um dentre R1a, R1b, R1c e R1d é um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído ou um grupo contendo núcleo esteroide.
[0089] Em determinadas modalidades, o tensoativo X tem a estrutura:
28 / 120 Fórmula I em que: R1a é um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído; R1b, R1c e R1d são H; R2 é uma ligação a U; W1 é -(C=O)-NH-; e W2 é -O-.
[0090] Em algumas modalidades, o tensoativo X é uma porção química 1-O-alquil beta-D-glicuronila: em que R1a é um grupo C1-C30, C1-C20 ou C6-C20 alquila não substituído ou substituído, e R’ é um peptídeo que é ligado à porção química de tensoativo por meio do grupo alfa amino N-terminal ou um grupo amino de cadeia lateral de um aminoácido natural ou não natural (por exemplo, lisina ou ornitina). Em determinadas modalidades, R1a é um grupo C8-C20, C12-C20 ou C12-C16 alquila não substituído ou substituído.
[0091] Em algumas modalidades, um grupo alquila ligado a um sacarídeo é um grupo C1-C30, C1-C20, C6-C30 ou C6-C20 alquila não substituído ou substituído. Em determinadas modalidades, um grupo alquila ligado a um sacarídeo é um grupo C8-C20, C6-C18 ou C12-C18 alquila não substituído ou substituído.
[0092] Em algumas modalidades, pelo menos uma ocorrência de R1a, R1b, R1c, R1d ou R2 é um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído. Em determinadas modalidades, um grupo alquila é ligado a pelo menos uma
29 / 120 ocorrência de R1b, R1c ou R1d por meio de uma ligação de éter (-O-alquila). Em modalidades adicionais, um grupo alquila é ligado a pelo menos uma ocorrência de R2 por meio de uma ligação de éter (-O-alquila) ou uma ligação de amida [-C(=O)NH-alquila].
[0093] Em algumas modalidades, pelo menos uma ocorrência, ou a ocorrência exclusiva, de R1a é um grupo C1-C30, C6-C30, C6-C20 ou C8-C20 alquila não substituído ou substituído. Em determinadas modalidades, pelo menos uma ocorrência, ou a ocorrência exclusiva, de R1a é um grupo C12-C20 alquila não substituído ou substituído.
[0094] Em algumas modalidades, um grupo alquila (por exemplo, um grupo 1-alquila) é interna e/ou terminalmente substituído por um grupo carboxila ou carboxilato. Em determinadas modalidades, um grupo alquila (por exemplo, um grupo 1-alquila) é substituído por um grupo carboxila ou carboxilato na extremidade distal do grupo alquila.
[0095] Em modalidades adicionais, pelo menos uma ocorrência, ou a ocorrência exclusiva, de R1a é um sacarídeo. Em determinadas modalidades, o sacarídeo é uma galactose. A galactose pode ser alfa- ou beta-ligada. Em algumas modalidades, a galactose é galactopiranose alfa-ligada, galactopiranose beta-ligada, galactofuranose alfa-ligada ou galactofuranose beta-ligada.
[0096] Em algumas modalidades, o grupo sacarídeo da porção química de tensoativo é um monossacarídeo. Em determinadas modalidades, o monossacarídeo é uma glicose, galactose ou manose adequadamente funcionalizada, tal como ácido glicurônico, ácido galacturônico ou ácido manourônico. Em outras modalidades, o sacarídeo é um dissacarídeo. Em algumas modalidades, o dissacarídeo contém duas moléculas de glicose ou uma molécula de glicose e uma molécula de galactose. Em determinadas modalidades, o dissacarídeo é ácido diglicurônico ou uma melibiose, maltose, isomaltose, gentiobiose ou lactose adequadamente funcionalizada, tal como
30 / 120 ácido melibiourônico, ácido maltourônico, ácido isomaltourônico, ácido gentiobiourônico ou ácido lactourônico. Os termos “ácido -urônico” e “- uronila” são usados de forma intercambiável no presente documento em relação a um grupo sacarídeo de uma porção química de tensoativo.
[0097] Em algumas modalidades, o tensoativo X é um 1-alquil glicosídeo, em que um grupo alquila não substituído ou substituído é ligado à posição C-1 de um sacarídeo por meio de uma ligação glicosídica. A ligação glicosídica pode ser uma ligação O-, S-, N- ou C-glicosídica. Em determinadas modalidades, a ligação glicosídica é uma ligação O-glicosídica. O grupo 1-alquila pode ser o beta- ou alfa-anômero. Em determinadas modalidades, o grupo 1-alquila é o beta-anômero.
[0098] Em algumas modalidades, o tensoativo X é selecionado dentre ácido 1-eicosil beta-D-glicurônico, ácido 1-octadecil beta-D-glicurônico, ácido 1-hexadecil beta-D-glicurônico, ácido 1-tetradecil beta-D-glicurônico, ácido 1-dodecil beta-D-glicurônico, ácido 1-decil beta-D-glicurônico, ácido 1- octil beta-D-glicurônico, ácido 1-eicosil beta-D-diglicurônico, ácido 1- octadecil beta-D-diglicurônico, ácido 1-hexadecil beta-D-diglicurônico, ácido 1-tetradecil beta-D-diglicurônico, ácido 1-dodecil beta-D-diglicurônico, ácido 1-decil beta-D-diglicurônico, ácido 1-octil beta-D-diglicurônico, ácido 1- eicosil beta-D-isomaltourônico, ácido 1-octadecil beta-D-isomaltourônico, ácido 1-hexadecil beta-D-isomaltourônico, ácido 1-tetradecil beta-D- isomaltourônico, ácido 1-dodecil beta-D-isomaltourônico, ácido 1-decil beta- D-isomaltourônico, ácido 1-octil beta-D-isomaltourônico, ácido 1-eicosil beta-D-gentiobiourônico, ácido 1-octadecil beta-D-gentiobiourônico, ácido 1- hexadecil beta-D-gentiobiourônico, ácido 1-tetradecil beta-D- gentiobiourônico, ácido 1-dodecil beta-D-gentiobiourônico, ácido 1-decil beta-D-gentiobiourônico, ácido 1-octil beta-D-gentiobiourônico, ácido 1- eicosil beta-D-melibiourônico, ácido 1-octadecil beta-D-melibiourônico, ácido 1-hexadecil beta-D-melibiourônico, ácido 1-tetradecil beta-D-
31 / 120 melibiourônico, ácido 1-dodecil beta-D-melibiourônico, ácido 1-decil beta-D- melibiourônico, ácido 1-octil beta-D-melibiourônico, 1-eicosil beta-D-glicose funcionalizada, 1-octadecil beta-D-glicose, 1-hexadecil beta-D-glicose, 1- tetradecil beta-D-glicose, 1-dodecil beta-D-glicose, 1-decil beta-D-glicose, 1- octil beta-D-glicose, 1-eicosil beta-D-maltosídeo, 1-octadecil beta-D- maltosídeo, 1-hexadecil beta-D-maltosídeo, 1-tetradecil beta-D-maltosídeo, 1-dodecil beta-D-maltosídeo, 1-decil beta-D-maltosídeo, 1-octil beta-D- maltosídeo, 1-eicosil beta-D-melibiosídeo, 1-octadecil beta-D-melibiosídeo, 1-hexadecil beta-D-melibiosídeo, 1-tetradecil beta-D-melibiosídeo, 1-dodecil beta-D-melibiosídeo, 1-decil beta-D-melibiosídeo, 1-octil beta-D- melibiosídeo, os 1-alquil glicosídeos correspondentes com um grupo 6- carboxila ou grupos 6,6’-dicarboxila, os alfa-anômeros de 1-alquila correspondentes e similares. Em determinadas modalidades, o tensoativo X é um ácido 1-alquil beta-D-glicurônico.
[0099] Como exemplos ilustrativos, são mostrados abaixo uma porção química 1-O-octil beta-D-melibiouronila (esquerda superior), uma porção química 1-O-hexadecil beta-D-gentiobiouronila (direira superior), uma porção química 1-O-dodecil beta-D-maltouronila (esquerda inferior, um ou ambos os grupos carboxila podem ser ligados ao peptídeo) e uma porção química 1-O- tetradecil beta-D-isomaltouronila (direita inferior) ligada a um grupo amino de um peptídeo (por exemplo, o grupo amino de cadeia lateral de um resíduo de lisina).
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[00100] Em algumas modalidades, uma porção química de tensoativo é ligada a um aminoácido ligante U do peptídeo por meio de uma ligação de amida.
[00101] O peptídeo de um produto de peptídeo pode ser covalentemente ligado a uma ou mais porções químicas de tensoativo. Em determinadas modalidades, um produto de peptídeo tem uma porção química de tensoativo. Em modalidades adicionais, um produto de peptídeo tem duas porções químicas de tensoativo, que podem ser iguais ou diferentes. Em outras modalidades, um produto de peptídeo tem três porções químicas de tensoativo, que podem ser iguais ou diferentes.
[00102] Um aminoácido ligante U pode ser qualquer aminoácido natural ou não natural que tenha um grupo funcional adequado para ligação covalente a uma porção química de tensoativo. Em algumas modalidades, U é um aminoácido natural ou não natural dibásico (por exemplo, um que tem um grupo amino de cadeia lateral, tal como lisina ou ornitina), um aminoácido natural ou não natural diácido (por exemplo, um que tem um grupo hidroxila de cadeia lateral, tal como ácido glutâmico ou ácido aspártico), um
33 / 120 aminoácido natural ou não natural que tem um grupo tiol/sulfidrila (por exemplo, cisteína), um aminoácido natural ou não natural que tem um grupo hidroxila (por exemplo, serina ou treonina) ou um aminoácido não natural que tem um grupo -N3, um grupo acetilênico, um grupo haloacetila (por exemplo, -NHC(=O)CH2Br) ou um grupo -(CH2)m-maleimida, em que m é 1 a 10. Um grupo haloacetila ou um grupo maleimida de um aminoácido ligante pode se acoplar a, por exemplo, um grupo tiol de um grupo sacarídeo da porção química de tensoativo ou vice-versa. Um grupo azida ou um grupo alcino de um aminoácido ligante pode fazer uma cicloadição 1,3-dipolar com um grupo alcino ou um grupo azida, respectivamente, de um grupo sacarídeo da porção química de tensoativo com o uso de um catalisador de cobre, por exemplo, para formar um triazol. Em determinadas modalidades, U é um resíduo de lisina, ornitina (Orn), cisteína ou ácido glutâmico. Como qualquer resíduo de aminoácido do peptídeo, U pode ser um L- ou D-aminoácido.
[00103] Um aminoácido ligante U pode ser um resíduo de aminoácido interno e/ou terminal do peptídeo. O grupo funcional de U que formar uma ligação covalente com uma porção química de tensoativo pode ser um grupo funcional de cadeia lateral de um resíduo de aminoácido interno ou terminal ou pode ser o grupo alfa amino do resíduo de aminoácido N-terminal ou o grupo alfa carboxila do resíduo de aminoácido C-terminal.
[00104] Em algumas modalidades, os grupos funcionais de cadeia lateral de dois resíduos de aminoácidos (denotados com um asterisco), tais como um resíduo de lisina e um resíduo de ácido glutâmico, do peptídeo são ligados para formar uma estrutura cíclica, tal como uma lactama. Uma lactama formada entre os grupos funcionais de cadeia lateral de um resíduo de lisina e um resíduo de ácido glutâmico pode estabilizar a estrutura α- helicoidal de um peptídeo. Uma estrutura cíclica pode também ser formada por uma ligação de dissulfeto entre o grupo tiol de dois resíduos de cisteína, o que pode restringir a conformação e promover a formação de α-hélice. Uma
34 / 120 “reação de clique” entre os grupos de alcino e azida de cadeia lateral de dois resíduos de aminoácidos não naturais pode também formar uma estrutura heterocíclica (um triazol) que restringe a conformação e estabiliza uma α- hélice (Le Chevalier et al., J. Peptide Sci., 15:451 a 454 [2009]). Ademais, os grupos alceno de cadeia lateral de dois resíduos de aminoácidos não naturais podem ciclizar por metátese de olefina para formar uma ligação dupla de C=C, que pode, então, ser reduzida a uma ligação simples de C-C (Verdine e Hilinski, Meth. Enzymol., 503:3 a 33 [2011]).
[00105] Em algumas modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I-A compreendem pelo menos os resíduos de aminoácidos aa1-aa17, aa1-aa18, aa1-aa19 ou aa1-aa20 da SEQ. ID. NO. 1108. Em modalidades adicionais, os produtos de peptídeo de Fórmula I-A compreendem pelo menos os resíduos de aminoácidos aa1-aa27, aa1-aa28, aa1-aa29 ou aa1-aa30 da SEQ. ID. NO. 1108.
[00106] Em algumas modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I-A têm a Fórmula III-A: aa1-aa2-aa3-aa4-aa5-aa6-aa7-aa8-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13-aa14-aa15- aa16-aa17-aa18-aa19-aa20-aa21-aa22-aa23-aa24-aa25-aa26-aa27-aa28-aa29-Z Fórmula III-A (SEQ. ID. NO. 1109) em que: Z é -OH ou -NHR3, em que R3 é H, C1-C12 alquila não substituída ou substituída ou um grupo contendo PEG menor do que 10 Da; aa1 é His, N(R3)His, N(Ac)His ou pGlu-His; aa2 é Ser, Ala, Gly, MePro, Aib, Ac4c ou Ac5c; aa3 é Gln ou Cit; aa4 é Gly ou D-Ala; aa5 é Thr ou Ser; aa6 é Phe, Trp, 2FPhe, MePhe, 2FMePhe ou Nal2; aa7 é Thr ou Ser; aa8 é Ser ou Asp;
35 / 120 aa9 é Asp ou Glu; aa10 é Tyr, Leu, Met, Nal2, Bip, Bip2EtMeO, Glu, Lys ou U(X); aa11 está ausente ou é Ser, Asn, Bip ou U(X); aa12 está ausente ou é Lys, Glu, Ser, Arg ou U(X); aa13 está ausente ou é Tyr, Gln, Cit ou U(X); aa14 está ausente ou é Leu, Met, Nle, Glu, Lys ou U(X); aa15 está ausente ou é Asp, Glu ou U(X); aa16 está ausente ou é Ser, Gly, Glu, Ala, Aib, Ac5c, Lys, Arg ou U(X); aa17 está ausente ou é Arg, hArg, Gln, Glu, Lys, Cit, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa18 está ausente ou é Arg, hArg, Ala, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa19 está ausente ou é Ala, Val, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa20 está ausente ou é Gln, Lys, Arg, Cit, Glu, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa21 está ausente ou é Asp, Glu, Leu, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa22 está ausente ou é Phe, Trp, Nal2, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa23 está ausente ou é Val, Ile, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa24 está ausente ou é Ala, Gln, Glu, Cit ou U(X); aa25 está ausente ou é Trp, Nal2 ou U(X); aa26 está ausente ou é Leu ou U(X); aa27 está ausente ou é Met, Val, Leu, Nle, Lys ou U(X); aa28 está ausente ou é Asn, Lys, Glu, Gln ou U(X); aa29 está ausente ou é Thr, Gly, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); quaisquer dois dentre aa1 a aa29 podem ser opcionalmente
36 / 120 ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; e contanto que um, ou pelo menos um, dentre aa10 a aa12 e aa16– aa29 seja um aminoácido U natural ou não natural covalentemente ligado a um tensoativo X.
[00107] Em determinadas modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula III-A têm a estrutura: aa1-aa2-aa3-aa4-aa5-aa6-aa7-aa8-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13-aa14-aa15- aa16-aa17-aa18-aa19-aa20-aa21-aa22-aa23-aa24-aa25-aa26-aa27-aa28-aa29-Z Fórmula III-A (SEQ. ID. NO. 1110) em que: Z é -OH ou -NHR3, em que R3 é H, C1-C12 alquila não substituída ou substituída ou um grupo contendo PEG menor do que 10 Da; aa1 é His; aa2 é Aib; aa3 é Gln; aa4 é Gly; aa5 é Thr; aa6 é Phe; aa7 é Thr; aa8 é Ser; aa9 é Asp; aa10 é Tyr, Glu, Lys ou U(X); aa11 é Ser; aa12 é Lys ou Glu; aa13 é Tyr; aa14 é Leu, Glu ou Lys; aa15 é Asp; aa16 é Glu ou Lys; aa17 é Gln, Glu ou U(X);
37 / 120 aa18 é Ala; aa19 é Ala; aa20 é Glu, Lys ou U(X); aa21 é Glu; aa22 é Phe; aa23 é Ile; aa24 é Gln, Glu ou U(X); aa25 é Trp; aa26 é Leu; aa27 é Leu; aa28 é Glu ou Gln; aa29 é Thr; aa10 e aa14, ou aa12 e aa16, ou aa16 e aa20 podem ser opcionalmente ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; e contanto que um, ou pelo menos um, dentre aa10, aa17 e aa20 e aa24 seja um aminoácido U natural ou não natural covalentemente ligado a um tensoativo X.
[00108] Em modalidades adicionais, os produtos de peptídeo de Fórmula I-A têm a Fórmula III-B: His1-aa2-aa3-Gly4-Thr5-aa6-Thr7-Ser8-Asp9-aa10-aa11-aa12-aa13- aa14-aa15-aa16-aa17-aa18-aa19-aa20-aa21-aa22-aa23-aa24-aa25-aa26-aa27-aa28-aa29- aa30-Z Fórmula III-B (SEQ. ID. NO. 1111) em que: Z é -OH ou -NHR3, em que R3 é H, C1-C12 alquila não substituída ou substituída ou um grupo contendo PEG menor do que 10 Da; aa2 é Gly, MePro ou Aib; aa3 é Gln ou Cit; aa6 é Phe, 2FPhe, MePhe, 2FMePhe ou Nal2;
38 / 120 aa10 é Tyr, Nal2, Bip, Bip2EtMeO, Glu, Lys ou U(X); aa11 está ausente ou é Ser, Asn, Bip ou U(X); aa12 está ausente ou é Lys, Glu, Ser ou U(X); aa13 está ausente ou é Tyr, Gln, Cit ou U(X); aa14 está ausente ou é Leu, Nle, Glu, Lys ou U(X); aa15 está ausente ou é Asp, Glu ou U(X); aa16 está ausente ou é Ser, Gly, Glu, Ala, Aib, Lys, Arg ou U(X); aa17 está ausente ou é Arg, hArg, Gln, Glu, Lys, Cit, Aib ou U(X); aa18 está ausente ou é Arg, hArg, Ala, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa19 está ausente ou é Ala, Aib ou U(X); aa20 está ausente ou é Gln, Lys, Arg, Cit, Glu, Aib ou U(X); aa21 está ausente ou é Asp, Glu, Leu, Aib ou U(X); aa22 está ausente ou é Phe ou U(X) aa23 está ausente ou é Val, Ile, Aib ou U(X); aa24 está ausente ou é Ala, Glu, Gln ou U(X); aa25 está ausente ou é Trp ou U(X); aa26 está ausente ou é Leu ou U(X); aa27 está ausente ou é Met, Val, Leu, Nle, Lys ou U(X); aa28 está ausente ou é Asn, Glu, Gln, Cit ou U(X); aa29 está ausente ou é Thr, Aib ou U(X); aa30 está ausente ou é Arg ou U(X); quaisquer dois dentre aa1 a aa23 podem ser opcionalmente ciclizados por meio de suas cadeias laterais para formar uma lactama; e contanto que um, ou pelo menos um, dentre aa10– a aa12, aa16 a aa24 e aa28 seja um aminoácido U natural ou não natural covalentemente ligado a um tensoativo X.
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[00109] Em algumas modalidades dos produtos de peptídeo de Fórmula I-A, III-A ou III-B: aa2 é Gly, Aib ou Ac4c; ou aa12 é lisina; ou aa14 é leucina; ou aa17 é glicina ou homoarginina (hArg); ou aa17, aa18, aa20, aa24 ou aa28, ou qualquer combinação dos mesmos, é lisina ligada a um tensoativo X; ou aa16 e aa20 são ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; ou o tensoativo X compreende um grupo dodecil, tetradecil, hexadecil ou octadecil alquila não substituído ou substituído; ou qualquer combinação ou todos os anteriores.
[00110] Em algumas modalidades, o peptídeo dos produtos de peptídeo descritos no presente documento compreende um ou mais resíduos de Aib na ou próximo à terminação N, na ou próximo à terminação C ou internamente, ou qualquer combinação ou todos os mesmos. Um resíduo de Aib pode proteger o peptídeo da degradação por proteases, tais como dipeptidil peptidase 4 (DPP-4). Em determinadas modalidades, aa2 é Aib.
[00111] Em algumas modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I-A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-aa2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-aa16-aa17-Ala18-Ala19-aa20-Glu21-Phe22-aa23-aa24- Trp25-Leu26-aa27-aa28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 1126) em que: aa2 é Gly ou Aib; aa16 é Glu, Ser, Ala, Lys ou Aib; aa17 é Gln, Lys ou U(X);
40 / 120 aa20 é Lys, Glu ou Arg; aa23 é Ile ou Val; aa24 é Ala, Gln ou U(X); aa27 é Met, Val ou Leu; e aa28 é Asn, Gln ou U(X).
[00112] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-aa2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-aa16-aa17-Arg18-Ala19-aa20-Asp21-Phe22-aa23-aa24- Trp25-Leu26-aa27-aa28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 1127) em que: aa2 é Gly ou Aib; aa16 é Glu, Ala ou Aib; aa17 é Arg, hArg ou Gln; aa20 é U(X) [por exemplo, Lys(X)]; aa23 é Ile ou Val; aa24 é Gln ou Ala; aa27 é Leu ou Val; e aa28 é Asn ou Gln.
[00113] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-aa2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15- aa16-aa17-Ala18-Ala19-aa20-Glu21-Phe22-aa23-aa24- Trp25-Leu26-aa27-aa28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 774) em que: aa2 é Gly ou Aib; aa16 é Glu, Ser, Ala, Lys ou Aib;
41 / 120 aa17 é Gln, Glu, Lys ou U(X); aa20 é Lys, Glu ou Arg; aa23 é Ile ou Val; aa24 é Ala, Gln ou U(X); aa27 é Met, Val ou Leu; e aa28 é Asn, Gln ou U(X).
[00114] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-aa2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-aa16-aa17-Ala18-Ala19-Lys20-Glu21-Phe22-Ile23-Gln24- Trp25-Leu26-aa27-Asn28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 775) em que: aa2 é Gly ou Aib; aa16 é Glu, Ala ou Aib; aa17 é U(X) [por exemplo, Lys(X)]; e aa27 é Leu ou Val.
[00115] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-aa2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-aa16-aa17-Arg18-Ala19-aa20-Asp21-Phe22-aa23-aa24- Trp25-Leu26-aa27-aa28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 776) em que: aa2 é Gly ou Aib; aa16 é Glu, Ser, Ala ou Aib; aa17 é Arg, hArg ou Gln, aa20 é Lys ou U(X); aa23 é Ile ou Val; aa24 é Ala, Gln ou U(X);
42 / 120 aa27 é Leu ou Val; e aa28 é Asn, Gln ou U(X).
[00116] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-aa2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-aa16-aa17-Arg18-Ala19-aa20-Asp21-Phe22-aa23-aa24- Trp25-Leu26-aa27-aa28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 777) em que: aa2 é Gly ou Aib; aa16 é Glu, Ser, Ala ou Aib; aa17 é Arg, hArg ou Gln, aa20 é Lys ou U(X); aa23 é Ile ou Val; aa24 é Gln, Ala ou U(X); aa27 é Leu ou Val; e aa28 é Asn, Gln ou U(X).
[00117] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-aa2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-aa16*-aa17-Ala18-Ala19-aa20*-Glu21-Phe22-Ile23-Lys(N- ômega-X)24-Trp25-Leu26-aa27-aa28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 778) em que: aa2 é Aib ou Gly; aa16* e aa20* são, independentemente, Lys ou Glu e são ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; aa17 é Arg, hArg ou Gln; aa27 é Met, Val, Leu ou Nle; e aa28 é Asn ou Gln.
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[00118] Em algumas modalidades, o tensoativo X é 1’-alquil beta-D- glicuronila. Em determinadas modalidades, o grupo alquila é C8-C20 alquila linear.
[00119] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-aa2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-aa16-aa17-Ala18-Ala19-Lys20-Glu21-Phe22-Ile23-Ala24- Trp25-Leu26-Leu27-Asn28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 779) em que: aa2 é Aib ou Gly; aa16 é Glu, Ala ou Aib; e aa17 é Lys(N-ômega-X).
[00120] Em algumas modalidades, o tensoativo X é 1’-alquil beta-D- glicuronila. Em determinadas modalidades, o grupo alquila é C8-C20 alquila linear.
[00121] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-aa2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-aa16-aa17-Arg18-Ala19-aa20-Asp21-Phe22-aa23-aa24- Trp25-Leu26-aa27-aa28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 780) em que: aa2 é Gly ou Aib; aa16 é Glu, Ala ou Aib; aa17 é Arg ou hArg; aa20 é Lys(N-ômega-X); aa23 é Ile ou Val; aa24 é Gln ou Ala; aa27 é Leu ou Val; e aa28 é Asn ou Gln.
44 / 120
[00122] Em algumas modalidades, o tensoativo X é 1’-alquil beta-D- glicuronila. Em determinadas modalidades, o grupo alquila é C8-C20 alquila linear.
[00123] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-aa2-Gln3-Gly4-Thr5-aa6-Thr7-Ser8-Asp9-aa10-aa11-Z (SEQ. ID. NO. 781) em que: aa2 é Gly, Aib ou MePro; aa6 é Phe, 2FPhe, MePhe ou 2FMePhe; aa10 é Tyr, Nal2, Bip, Bip2Et ou Bip2EtMeO; e aa11 é Lys(N-ômega-X).
[00124] Em algumas modalidades, o tensoativo X é 1’-alquil beta-D- glicuronila. Em determinadas modalidades, o grupo alquila é C8-C20 alquila linear.
[00125] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-aa2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu16-U(X)17-Ala18-Ala19-Lys20-Glu21-Phe22-Ile23- Gln24-Trp25-Leu26-Leu27-aa28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 795) em que: aa2 é Gly ou Aib; e aa28 é Asn ou Gln.
[00126] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-aa16*-Gln17-Ala18-Ala19-aa20*-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega-X)24-Trp25-Leu26-Leu27-aa28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 796) em que:
45 / 120 aa16* e aa20* são, independentemente, Lys ou Glu e são ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; aa28 é Asn ou Gln; e o tensoativo X compreende um 1-alquil beta-D-glicosídeo, 1- alquil beta-D-maltosídeo, 1-alquil beta-D-melibiosídeo ou similares, ou o alfa anômero correspondente, em que alquila é C8-C20 alquila linear.
[00127] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu16*-Gln17-Ala18-Ala19-Lys20*-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega-X)24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 797) em que: Glu16* e Lys20* são ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; e o tensoativo X compreende um 1-alquil beta-D-glicosídeo, 1- alquil beta-D-maltosídeo, 1-alquil beta-D-melibiosídeo ou similares, ou o alfa anômero correspondente, em que alquila é C8-C20 alquila linear.
[00128] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-U(X)10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-aa16*-aa17-Ala18-Ala19-aa20*-Glu21-Phe22-Ile23-aa24- Trp25-Leu26-Leu27-aa28-Thr29-Z (SEQ. ID. NO. 1025) em que: Z é -OH ou -NHR3, em que R3 é H ou um grupo contendo PEG menor do que 10 Da; aa16* e aa20* são, independentemente, Lys ou Glu e são ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; aa17 é Glu ou Gln;
46 / 120 aa24 é Ala, Glu ou Gln; e aa28 é Asn ou Gln.
[00129] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-aa16*-U(X)17-Ala18-Ala19-aa20*-Glu21-Phe22-Ile23- aa24-Trp25-Leu26-Leu27-aa28-Thr29-Z (SEQ. ID. NO. 1026) em que: Z é -OH ou -NHR3, em que R3 é H ou um grupo contendo PEG menor do que 10 Da; aa16* e aa20* são, independentemente, Lys ou Glu e são ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; aa24 é Ala, Glu ou Gln; e aa28 é Asn ou Gln.
[00130] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-aa10*-Ser11- Lys12-Tyr13-aa14*-Asp15-Ser16-aa17-Ala18-Ala19-U(X)20-Glu21-Phe22-Ile23-aa24- Trp25-Leu26-Leu27-aa28-Thr29-Z (SEQ. ID. NO. 1027) em que: Z é -OH ou -NHR3, em que R3 é H ou um grupo contendo PEG menor do que 10 Da; aa10* e aa14* são, independentemente, Lys ou Glu e são ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; aa17 é Glu ou Gln; aa24 é Ala, Glu ou Gln; e aa28 é Asn ou Gln.
[00131] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I-
47 / 120 A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- aa12*-Tyr13-Gln14-Asp15-aa16*-aa17-Ala18-Ala19-U(X)20-Glu21-Phe22-Ile23-aa24- Trp25-Leu26-Leu27-aa28-Thr29-Z (SEQ. ID. NO. 1028) em que: Z é -OH ou -NHR3, em que R3 é H ou um grupo contendo PEG menor do que 10 Da; aa12* e aa16* são, independentemente, Lys ou Glu e são ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; aa17 é Glu ou Gln; aa24 é Ala, Glu ou Gln; e aa28 é Asn ou Gln.
[00132] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-aa16*-Gln17-Ala18-Ala19-aa20*-Glu21-Phe22-Ile23- U(X)24-Trp25-Leu26-Leu27-aa28-Thr29-Z (SEQ. ID. NO. 1029) em que: Z é -OH ou -NHR3, em que R3 é H ou um grupo contendo PEG menor do que 10 Da; aa16* e aa20* são, independentemente, Lys ou Glu e são ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; aa28 é Asn ou Gln; e o tensoativo X compreende um 1-alquil beta-D-glicosídeo, 1- alquil beta-D-maltosídeo, 1-alquil beta-D-melibiosídeo ou similares, ou o alfa anômero correspondente, em que alquila é C8-C20 alquila linear.
[00133] Em outras modalidades, os produtos de peptídeo de Fórmula I- A, III-A ou III-B têm a estrutura: His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11-
48 / 120 Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu16*-Gln17-Ala18-Ala19-Lys20*-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega-X)24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-Z (SEQ. ID. NO. 1113) em que: Z é -OH ou -NHR3; Glu16* e Lys20* são ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; e o tensoativo X compreende um 1-alquil beta-D-glicosídeo, 1- alquil beta-D-maltosídeo, 1-alquil beta-D-melibiosídeo ou similares, ou o alfa anômero correspondente, em que alquila é C8-C20 alquila linear.
[00134] Em algumas modalidades, um produto de peptídeo tem a estrutura: His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu16*-Gln17-Ala18-Ala19-Lys20*-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-dodecil beta-D-glicuronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28-Thr29- NH2 (SEQ. ID. NO. 601); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu16*-Gln17-Ala18-Ala19-Lys20*-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-tetradecil beta-D-glicuronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28- Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 602); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu16*- Gln17-Ala18-Ala19-Lys20*-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-hexadecil beta-D-glicuronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28- Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 603); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu16*- Gln17-Ala18-Ala19-Lys20*-Glu21-Phe22 -Ile23- Lys(N-ômega[1-octadecil beta-D-glicuronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28- Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 604); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-
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Lys(N-ômega[1-octil beta-D-melibiouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28-Thr29- NH2 (SEQ.
ID.
NO. 630); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-dodecil beta-D-melibiouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28- Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 631); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-tetradecil beta-D-melibiouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28- Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 632); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-hexadecil beta-D-melibiouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28- Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 633); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-octadecil beta-D-melibiouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28- Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 634); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-hexadecil alfa-D-melibiouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28- Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 805); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-tetradecil alfa-D- melibiouronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Gln24-Trp25-Leu26- Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 819); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-hexadecil alfa-D- melibiouronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Gln24-Trp25-Leu26-
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Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 820); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-octadecil alfa-D- melibiouronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Gln24-Trp25-Leu26- Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 821); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-dodecil alfa-D- melibiouronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Lys(N-ômega[1- dodecil beta-D-glicouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 1114); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-tetradecil alfa-D- melibiouronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Lys(N-ômega[1- tetradecil beta-D-glucouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 1115); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-hexadecil alfa-D- melibiouronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Lys(N-ômega[1- hexadecil beta-D-glucouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 1116); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-(13-carboxil-trideciloxi) beta-D-glicuronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Gln24-Trp25-Leu26- Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 1117); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-(15-carboxil-pentadeciloxi) beta-D-glicuronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Gln24-Trp25-Leu26- Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 1118); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11-
51 / 120
Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-(17-carboxil-heptadeciloxi) beta-D-glicuronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Gln24-Trp25-Leu26- Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 1119); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-(13-carboxil-trideciloxi) beta-D-glicuronil])24-Trp25-Leu26- Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 1120); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-(15-carboxil-pentadeciloxi) beta-D-glicuronil])24-Trp25- Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 1121); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-(17-carboxil-heptadeciloxi) beta-D-glicuronil])24-Trp25- Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 1122); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-(13-carboxil-trideciloxi) beta-D-melibiouronil])24-Trp25- Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 1123); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-(15-carboxil-pentadeciloxi) beta-D-melibiouronil])24-Trp25- Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 1124); ou His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-(17-carboxil-heptadeciloxi) beta-D-melibiouronil])24-Trp25- Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 1125); ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em que Glu16* e Lys20* denotam resíduos que são ciclizados através de suas cadeias
52 / 120 laterais para formar uma lactama.
[00135] Produtos de peptídeo adicionais são descritos na Tabela 1 na Figura 1, Tabela 2 na Figura 2, Tabela 3 na Figura 3 e Tabela 4 na Figura 4.
[00136] A Figura 5 ilustra a estrutura de cristais de raios X do sítio de ligação da região N-terminal/domínio extracelular do receptor GLP-1 e mostra uma região de ligação de ligante hidrofóbica crítica (Val19*, Phe22*, Trp25* e Leu26* do ligante exendina-4, e a sequência de exendina-4 além de Glu15 interage como uma hélice anfifílica com essa região). Um grupo 1- alquila da porção química de tensoativo de um produto de peptídeo pode engatar em tal interação hidrofóbica com o receptor de GLP-1.
[00137] Em algumas modalidades, uma porção química de tensoativo é conectada a um aminoácido ligante U de um peptídeo por meio de um espaçador. Um espaçador pode aumentar a solubilidade aquosa do produto de peptídeo e aumentar a flexibilidade do ponto de ligação de peptídeo- tensoativo. Em determinadas modalidades, o espaçador é um espaçador de aminoácido contendo um ou mais aminoácidos. Em algumas modalidades, uma ocorrência de R2 do tensoativo X é um espaçador de aminoácido usado para ligação ao peptídeo. Em determinadas modalidades, um espaçador de aminoácido é Glym, Glum ou Lysm, em que m é um número inteiro de 1 a 10. Por exemplo, W1 pode ser -(C=O)- e R2 pode ser um espaçador de Glym que é unido por meio do grupo carboxila do resíduo de glicina terminal, ou um espaçador de Glum que é unido por meio do grupo alfa ou gama carboxila do resíduo ácido glutâmico terminal, ao grupo amino de cadeia lateral de um resíduo de lisina, ou à terminação N, do peptídeo, ou R2 pode ser um espaçador de Lysm que é unido por meio do grupo carboxila do resíduo de lisina terminal ao grupo amino de cadeia lateral de um resíduo de lisina, ou à terminação N, do peptídeo.
[00138] Em outras modalidades, o espaçador é um espaçador hidrofílico que não contém um resíduo de aminoácido. Por exemplo, tal
53 / 120 espaçador pode ser , em que n é 1, 2 ou 3. O grupo amino de tal espaçador pode ser unido a, por exemplo, um grupo carboxila na posição C-6 de um sacarídeo da porção química de tensoativo, e o grupo carboxila de tal espaçador pode ser unido a, por exemplo, um grupo amino de cadeia lateral de um resíduo de aminoácido (por exemplo, uma lisina) ou à terminação N do peptídeo.
[00139] Três exemplos de ligação de uma porção química de tensoativo a um peptídeo por meio de um espaçador são mostrados abaixo. O peptídeo está no topo, o espaçador está no meio, e o tensoativo que compreende um grupo C12 alquila (denotado como “C12”) está na parte inferior. No exemplo na esquerda, o espaçador é um resíduo de ornitina, cujo grupo carboxila forma uma ligação de amida com o grupo amino de cadeia lateral de um resíduo de lisina do peptídeo. No exemplo no meio, o espaçador é um resíduo de ácido glutâmico, cujo grupo gama carboxila forma uma ligação de amida com o grupo amino de cadeia lateral de um resíduo de lisina do peptídeo. No exemplo na direita, o espaçador compreende um resíduo de ácido glutâmico.
[00140] Um produto de peptídeo pode ter opcionalmente uma ou mais modificações adicionais. Tais modificações incluem, sem limitação, acilação (por exemplo, acetilação) na terminação N, e ligação de um polímero natural ou sintético (por exemplo, um polímero sintético hidrofílico, tal como
54 / 120 polietilenoglicol [PEG], que pode aumentar a solubilidade aquosa do produto de peptídeo) e/ou lipidação (por exemplo, acilação com um C8-C20 ácido/diácido graxo saturado ou insaturado ou ligação a um grupo contendo núcleo de esteroide, tal como colesterol) na terminação N, terminação C e/ou uma ou mais cadeias laterais.
[00141] A descrição abrange análogos e variantes dos produtos de peptídeo descritos no presente documento. Tais análogos e variantes incluem, sem limitação, aqueles que tem uma substituição conservativa em uma ou mais posições da sequência de aminoácidos dos produtos de peptídeo específicos descritos no presente documento. A referência aos produtos de peptídeo descritos no presente documento inclui todos os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[00142] A ligação covalente de uma porção química de tensoativo a um peptídeo confere uma combinação exclusiva de propriedades benéficas nos produtos de peptídeo. A natureza hidrofóbica da porção química de tensoativo promove a ligação dos conjugados de peptídeo-tensoativo a proteínas carreadoras hidrofóbicas, tais como albumina sérica humana (HSA), aumentando, assim, a meia-vida e a duração de ação dos produtos de peptídeo por meio de múltiplos mecanismos, incluindo resistência aumentada a proteases e outros tipos de enzimas hidrolíticas, liberação renal reduzida e liberação lenta dos produtos de peptídeo das proteínas carreadoras. A ligação covalente forte, mas reversível do grupo hidrofóbico da porção química de tensoativo dos produtos de peptídeo a um bolso hidrofóbico de proteínas carreadoras, tais como HSA (MW de cerca de 67 kDa), protege os produtos de peptídeo de proteases (por exemplo, DPP-4) e outros tipos de enzimas degradativas que circulam no sangue e expressas na superfície das células, torna os produtos de peptídeo menos imunogênicos e aumenta o peso molecular dos produtos de peptídeo acima do limite de filtração de cerca de 60 a 70 kDa de modo que os produtos de peptídeo evitem liberação renal por
55 / 120 meio da filtração glomerular para a urina. Ademais, a ligação dos produtos de peptídeo a HSA aumenta sua meia-vida através da reciclagem de HSA dependente de pH mediada pelo receptor Fc neonatal (FcRn). Em algumas modalidades, os produtos de peptídeo têm uma meia-vida (por exemplo, meia-vida de circulação e/ou meia-vida de eliminação) de pelo menos cerca de 3 dias, 1 semana, 10 dias ou 2 semanas (por exemplo, pelo menos cerca de 1 semana).
[00143] Adicionalmente, a natureza anfifílica da porção química de tensoativo contendo um grupo hidrofílico sacarídeo e um grupo hidrofóbico aumenta a biodisponibilidade e a duração de ação dos produtos de peptídeo. A porção química de tensoativo pode interromper a junção justa entre células em membranas mucosas, facilitando, assim, a penetração dos produtos de peptídeo através de barreiras mucosas. A porção química de tensoativo pode também formar micelas, que podem facilitar a penetração dos produtos de peptídeo através de membranas. Além disso, o processo de quebra das micelas pode prolongar a duração de ação dos produtos de peptídeo. Um tensoativo forma micelas quando sua concentração é maior do que sua concentração crítica de micela (CMC), e alquil glicosídeos que têm o mesmo grupo sacarídeo tendem a ter uma CMC menor quanto mais longa for a cadeia de alquila.
[00144] Com uma meia-vida plasmática ou de eliminação significativamente aumentada em comparação aos peptídeos não ligados a uma porção química de tensoativo, os próprios produtos de peptídeo são agentes farmacológicos. Em outras palavras, a porção química de tensoativo estável permanece ligada ao peptídeo in vivo, e o conjugado de peptídeo- tensoativo intacto pode exercer atividade biológica ligando-se ao receptor (ou receptores) da classe subjacente de peptídeo. Por exemplo, os produtos de peptídeo descritos no presente documento podem exercer atividade biológica ligando-se ao e ativando o receptor de GLP-1 (GLP1R) e/ou o receptor de
56 / 120 glucagon (GCGR). Em algumas modalidades, os produtos de peptídeo são agonistas de GLP1R/GCGR duplos. A potência e/ou a seletividade da ligação ou ativação de receptor pode ser ajustada finamente variando-se o componente de tensoativo e/ou o componente de peptídeo.
COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS
[00145] A descrição também provê composições farmacêuticas que compreendem um produto de peptídeo descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais carreadores ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Uma composição farmacêutica contém uma quantidade terapeuticamente eficaz de um produto de peptídeo ou uma fração apropriada do mesmo. Uma composição pode conter opcionalmente um agente terapêutico adicional. Em algumas modalidades, um produto de peptídeo é pelo menos cerca de 90%, 95% ou 98% puro.
[00146] Excipientes e carreadores farmaceuticamente aceitáveis incluem substâncias, materiais e veículos farmaceuticamente aceitáveis. Os exemplos não limitantes de tipos de excipientes incluem cargas líquidas e sólidas, diluentes, ligantes, lubrificantes, deslizantes, tensoativos, agentes de dispersão, agentes de desintegração, agentes emulsificantes, agentes umectantes, agentes de suspensão, espessantes, solventes, agentes isotônicos, tampões, ajustadores de pH, agentes de atraso de absorção, estabilizadores, antioxidantes, conservantes, agentes antimicrobianos, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos, agentes quelantes, adjuvantes, agentes adoçantes, agentes saborizantes, agentes colorantes, materiais de encapsulação e materiais de revestimento. O uso de tais excipientes em formulações farmacêuticas é conhecido na técnica. Por exemplo, veículos e carreadores convencionais incluem, sem limitação, óleos (por exemplo, óleos vegetais, tais como azeite de oliva e óleo de gergelim), solventes aquosos {por exemplo, solução salina, solução salina tamponada (por exemplo, solução salina tamponada com fosfato [PBS]) e soluções isotônicas (por exemplo,
57 / 120 solução de Ringer)} e solventes orgânicos (por exemplo, sulfóxido de dimetila e álcoois [por exemplo, etanol, glicerol e propilenoglicol]). Exceto na medida em que qualquer excipiente ou carreador convencional é incompatível com um produto de peptídeo, a descrição abrange o uso de excipientes e carreadores convencionais em formulações que contêm um produto de peptídeo. Consultar, por exemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21ª Edição, Lippincott Williams & Wilkins (Philadelphia, Pennsylvania) (2005); Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5ª Edição, Rowe et al., Eds., The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association (2005); Handbook of Pharmaceutical Additives, 3ª Edição, Ash e Ash, Eds., Gower Publishing Co. (2007); e Pharmaceutical Pre-formulation and Formulation, Gibson, Ed., CRC Press (Boca Raton, Flórida) (2004).
[00147] A formulação apropriada pode depender de diversos fatores, tais como a via de administração escolhida. As vias de administração potenciais de uma composição farmacêutica que compreende um produto de peptídeo, incluem, sem limitação oral, parenteral (incluindo intradérmica, subcutânea, intramuscular, intravascular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, intracavitária e tópica) e tópica (incluindo transdérmica, transmucosal, intranasal [por exemplo, por aspersão ou gota nasal], ocular [por exemplo, por colírio], pulmonar [por exemplo, por inalação oral ou nasal], bucal, sublingual, retal [por exemplo, por supositório] e vaginal [por exemplo, por supositório]). Em determinadas modalidades, um produto de peptídeo é administrado por via parenteral (por exemplo, por via subcutânea, intravenosa ou intramuscular). Em outras modalidades, um produto de peptídeo é administrado por inalação oral ou inalação nasal ou insuflação.
[00148] Em algumas modalidades, o carreador é um carreador com base aquosa, tal como em uma formulação parenteral (por exemplo, subcutânea, intravenosa ou intramuscular). Em outras modalidades, o
58 / 120 carreador é um carreador com base não aquosa. Em determinadas modalidades, o carreador com base não aquosa é um hidrofluoroalcano (HFA) ou solvente do tipo HFA que pode compreender α-lactose anidra de submícron e/ou outros excipientes, tais como em uma formulação para a administração por inalação oral ou inalação nasal ou insuflação.
[00149] Em algumas modalidades, um produto de peptídeo é administrado por via parenteral (por exemplo, por via subcutânea, intravenosa ou intramuscular) por injeção. A administração parenteral contorna o ambiente fortemente ácido do estômago, absorção gastrointestinal (GI) e metabolismo de primeira passagem. Os excipientes e carreadores que podem ser usados para preparar formulações parenterais incluem, sem limitação, solventes (por exemplo, solventes aquosas, tais como água, solução salina, solução salina fisiológica, solução salina tamponada [por exemplo, PBS], soluções salinas equilibradas [por exemplo, BSS de Ringer] e soluções aquosas de dextrose), agentes isotônicos/iso-osmóticos (por exemplo, sais [por exemplo, NaCl, KCl e CaCl2] e açúcares [por exemplo, sacarose]), agentes de tamponamento e ajustadores de pH (por exemplo, di-hidrogênio fosfato de sódio [fosfato de sódio monobásico]/hidrogênio fosfato de dissódio [fosfato de sódio dibásico], ácido cítrico/citrato de sódio e L-histidinas/HCl de L-histidina) e emulsificantes (por exemplo, tensoativos não iônicos, tais como polissorbatos [por exemplo, polissorbato 20 e 80] e poloxâmeros [por exemplo, poloxâmero 188]). As formulações de peptídeo e os sistemas de entrega são discutidos em, por exemplo, A. J. Banga, Therapeutic Peptides and Proteins: Formulation, Processing, and Delivery Systems, 3ª Edição, CRC Press (Boca Raton, Flórida) (2015).
[00150] Os excipientes podem incluir opcionalmente uma ou mais substâncias que aumentam a estabilidade de peptídeo, aumentam a solubilidade de peptídeo, inibem a agregação de peptídeo ou reduzem a viscosidade da solução ou qualquer combinação ou todos os mesmos. Tais
59 / 120 substâncias incluem, sem limitação, aminoácidos hidrofílicos (por exemplo, arginina e histidina), polióis (por exemplo, myo-inositol, manitol e sorbitol), sacarídeos {por exemplo, glicose (incluindo D-glicose [dextrose]), lactose, sacarose e trealose}, osmólitos (por exemplo, trealose, taurina, aminoácidos [por exemplo, glicina, sarcosina, alanina, prolina, serina, β-alanina e ácido γ- aminobutírico] e betaínas [por exemplo, trimetilglicina e N-óxido de trimetilamina]) e tensoativos não iônicos {por exemplo, alquil poliglicosídeos, alquilsacarídeos ProTek® (por exemplo, um monossacarídeo [por exemplo, glicose] ou um dissacarídeo [por exemplo, maltose ou sacarose] acoplado a um ácido graxo de cadeia longa ou um álcool de cadeia longa correspondente) e copolímeros em bloco de polipropilenoglicol/polietileno glicol (por exemplo, poloxâmeros [por exemplo, PlurônicoTM F-68] e Genapol® PF-10 e variantes dos mesmos)}. Como tais substâncias aumentam a solubilidade de peptídeo, as mesmas podem ser usadas para aumentar a concentração de peptídeo em uma formulação. A concentração de peptídeo mais alta em uma formulação é particularmente vantajosa para administração subcutânea, que tem um volume limitado de administração de bolus (por exemplo, ≤ cerca de 1,5 ml). Adicionalmente, tais substâncias podem ser usadas para estabilizar os peptídeos durante a preparação, armazenamento e reconstituição de peptídeos liofilizados.
[00151] Os exemplos de excipientes de formulações aquosas, se pré- produzidos com um produto terapêutico de peptídeo ou preparados após a reconstituição de um produto terapêutico de peptídeo em forma liofilizada ou em pó, para administração parenteral (por exemplo, subcutânea ou intravenosa) incluem, sem limitação, aqueles mostrados na Tabela 5. Qualquer formulação na Tabela 5 para qual cloreto de sódio (NaCl) não é explicitamente listado pode conter opcionalmente NaCl. Uma formulação parenteral exemplificativa compreende um produto de peptídeo, manitol,
60 / 120 metionina, tioglicolato de sódio, polissorbato 20, um ajustador de pH (por exemplo, NaOH e/ou HCl) e água deionizada.
TABELA 5. EXCIPIENTES EXEMPLIFICATIVOS DE FORMULAÇÕES PARENTERAIS (POR EXEMPLO, INTRAVENOSAS E SUBCUTÂNEAS) NaCl, acetato de sódio e água NaCl, ácido acético, acetato de sódio e água NaCl, ácido cítrico, citrato de sódio e água Manitol, histidina, glicina e água NaCl, sacarose, manitol, glicina, di-hidrogênio fosfato de potássio, hidrogênio fosfato de dissódio e água NaCl, fosfato de sódio ou di-hidrogênio fosfato de sódio/hidrogênio fosfato de dissódio, polissorbato 80 e água NaCl, citrato de sódio, polissorbato 80 e água NaCl, ácido cítrico, citrato de sódio, polissorbato 80 e água NaCl, glicina, ácido cítrico, NaOH, polissorbato 80 e água NaCl, KCl, di-hidrogênio fosfato de potássio, hidrogênio fosfato de dissódio, polissorbato 80, edetato de dissódio e água Sacarose, ácido láctico, polissorbato e água NaCl, sacarose, di-hidrogênio fosfato de sódio, hidrogênio fosfato de dissódio, polissorbato 20 ou 80 e água NaCl, sacarose, ácido cítrico, citrato de sódio, polissorbato 80 e água NaCl, sacarose, glicina, ácido cítrico, citrato de sódio, polissorbato 80 e água NaCl, trealose, fosfato de sódio, polissorbato 20 e água NaCl, trealose, ácido cítrico, citrato de sódio, polissorbato 80 e água NaCl, manitol, di-hidrogênio fosfato de sódio/hidrogênio fosfato de dissódio e/ou ácido cítrico/citrato de sódio, polissorbato 80 e água e, opcionalmente, NaOH para ajustar o pH NaCl, manitol, citrato de sódio, polissorbato 80, ácido pentético e água e, opcionalmente, HCl e/ou NaOH para ajustar o pH NaCl, manitol, Tris HCl, polissorbato 80, ácido pentético e água manitol ou sorbitol, ácido acético, NaOH, polissorbato 20 e água NaCl, sacarose, L-histidina, polissorbato 80 e água e, opcionalmente, HCl e/ou NaOH para ajustar o pH NaCl, sacarose, L-histidina, ácido acético, polissorbato 20 e água sacarose, L-histidina, HCl de L-histidina, polissorbato 20 ou 80 e água Trealose, L-histidina, HCl de L-histidina, polissorbato 20 e água NaCl, trealose, L-histidina, HCl de L-histidina, poloxâmero 188 e água Trealose, L-histidina, HCl de L-histidina, polissorbato 20 e água e, opcionalmente, um bacteriostático (por exemplo, álcool benzílico) Trealose, L-histidina, L-histidina HCl, L-metionina, polissorbato 80 e água Sorbitol, L-histidina, HCl de L-histidina, polissorbato 80 e água NaCl, glicina, L-histidina, HCl de L-histidina, polissorbato 80 e água NaCl, sacarose, HCl de L-arginina, L-histidina, HCl de L-histidina, polissorbato 80 e água Sacarose, acetato de sódio, opcionalmente, ácido acético, HCl de L-arginina, L-histidina, polissorbato 80 e água L-arginina, HCl de L-arginina, L-histidina, HCl de L-histidina, L-metionina, polissorbato 80 e água Prolina, glutamato, polissorbato 20 e água Propilenoglicol, fenol, hidrogênio fosfato de dissódio e água e, opcionalmente, HCl e/ou NaOH para ajustar o pH NaCl, sacarose ou maltose, di-hidrogênio fosfato de sódio e água Sacarose, di-hidrogênio fosfato de sódio, hidrogênio fosfato de dissódio, poloxâmero 188 e água NaCl, sacarose, fosfato de sódio, HCl de L-arginina e água Sacarose, glicina, HCl de L-arginina, L-histidina, HCl de L-histidina, PEG 3350 e água Manitol, trealose, fosfato de sódio, polissorbato 80 e água Manitol, ácido cítrico, citrato de trissódio, polissorbato 80 e água NaCl, CaCl2, sacarose, L-histidina, polissorbato 20 e água
61 / 120 Sacarose, manitol, L-histidina, HCl, polissorbato 20 e água NaCl, sacarose, manitol, L-histidina, HCl, NaOH, polissorbato 20 e água
[00152] Para a administração parenteral (por exemplo, subcutânea, intravenosa ou intramuscular), uma solução ou suspensão estéril de um produto de peptídeo em um solvente aquoso contendo um ou mais excipientes pode ser preparada antecipadamente e pode ser provida em, por exemplo, uma seringa pré-carregada de uma caneta de uso único ou uma caneta com um contador de dose. Alternativamente, um produto de peptídeo pode ser dissolvido ou suspenso em um solvente aquoso que pode conter opcionalmente um ou mais excipientes antes da liofilização (secagem por congelamento). Pouco antes da administração parenteral, o produto de peptídeo liofilizado armazenado em um recipiente adequado (por exemplo, um frasco) pode ser reconstituído com, por exemplo, água estéril que pode conter opcionalmente um ou mais excipientes.
[00153] Em outras modalidades, um produto de peptídeo é administrado por via intranasal. A mucosa nasal provê uma grande área superficial, um endotélio poroso, uma camada subeptelial altamente vascular e uma alta taxa de absorção e, portanto, permite alta biodisponibilidade. Uma formulação intranasal pode compreender um produto de peptídeo juntamente com excipientes, tais como um intensificador de solubilidade (por exemplo, propilenoglicol), um umectante (por exemplo, manitol ou sorbitol), um tampão e água e, opcionalmente, um conservante (por exemplo, cloreto de benzalcônio), um agente mucoadesivo (por exemplo, hidroxietilcelulose) e/ou um intensificador de penetração. Uma solução ou suspensão intranasal pode ser administrada à cavidade nasal por quaisquer meios adequados, incluindo, porém sem limitação, um conta-gotas, uma pipeta ou aspersão com o uso, por exemplo, de uma bomba de aspersão de atomização de medição. A Tabela 6 mostra excipientes exemplificativos de formulações de aspersão nasal. TABELA 6. EXCIPIENTES E CARREADORES EXEMPLIFICATIVOS DE
FORMULAÇÕES NASAIS E PULMONARES
62 / 120 Forma de Ingredientes Adicionalmente a um Produto de Peptídeo Dosagem aspersão celulose microcristalina, carboximetilcelulose sódica, dextrose, água e, opcionalmente, um nasal ajustador de pH (por exemplo, HCl) celulose microcristalina, carboximetil celulose sódica, dextrose, polissorbato 80, edetato aspersão de dissódio, sorbato de potássio, um ajustador de pH (por exemplo, HCl), água e, nasal opcionalmente, um álcool (por exemplo, etanol) aspersão celulose microcristalina, carboximetil celulose sódica, dextrose, polissorbato 80, cloreto nasal de benzalcônio, álcool feniletílico, água e, opcionalmente, um álcool (por exemplo, etanol) aspersão hipromelose, cloreto de benzalcônio, NaCl, EDTA, ácido cítrico, fosfato de sódio nasal dibásico, água e, opcionalmente, um álcool (por exemplo, etanol) inalação manitol, glicina, citrato de sódio e NaOH (DPI) inalação lactose, amido, um derivado de amido (por exemplo, hidroxipropilmetil celulose) ou (DPI) polivinilpirrolidina e opcionalmente estearato de magnésio e/ou leucina inalação um propelente (por exemplo, 1,1,1,2-tetrafluoroetano), um tensoativo (por exemplo, (MDI) lecitina ou ácido oleico) e um cossolvente (por exemplo, etanol) inalação polissorbato 80, edetato dissódico, cloreto de sódio, agentes de tamponamento de pH (por (nebulizador) exemplo, ácido cítrico/citrato de sódio) e água
[00154] Em modalidades adicionais, um produto de peptídeo é administrado por via pulmonar, tal como por inalação oral ou inalação nasal. Um fármaco pulmonarmente administrado pode tratar um distúrbio de pulmão e/ou um distúrbio sistêmico, na medida em que os pulmões servem como um portal à circulação sistêmica. Vantagens da entrega de fármaco pulmonar incluem, por exemplo: 1) evitação do metabolismo de primeira passagem; 2) ação de fármaco rápida; 3) grande área superficial da região alveolar para a absorção, alta permeabilidade dos pulmões (barreia fina de ar-sangue) e vasculatura profusa das vias respiratórias; e 4) níveis enzimáticos extracelulares reduzidos em comparação ao trato GI devido à grande área superficial alveolar. Uma vantagem da inalação oral em relação à inalação nasal inclui penetração/deposição mais profunda do fármaco nos pulmões, embora a inalação nasal possa entregar o fármaco à circulação sistêmica por via transmucosal na cavidade nasal assim como nos pulmões.
[00155] A inalação oral ou nasal pode ser alcançada por meio de, por exemplo, um inalador de dosagem medida (MDI), um nebulizador ou um inalador de pó seco (DPI). Por exemplo, um produto de peptídeo pode ser formulado para a administração de aerossol ao trato respiratório por inalação oral ou nasal. O fármaco é entregue em um tamanho de partícula pequeno (por exemplo, entre cerca de 0,5 mícron e cerca de 5 mícrons), que pode ser
63 / 120 obtido por micronização, para melhorar, por exemplo, a deposição de fármaco nos pulmões e a estabilidade de suspensão de fármaco.
O fármaco pode ser provido em um pacote pressurizado com um propelente adequado, tal como um hidrofluoroalcano (HFA, por exemplo, 1,1,1,2-tetrafluoroetano [HFA- 134a]), um clorofluorocarbono (CFC, por exemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano ou diclorotetrafluoroetano) ou um gás adequado (por exemplo, oxigênio, ar comprimido ou dióxido de carbono). O fármaco na formulação de aerossol é dissolvido ou, mais frequentemente, suspenso no propelente para a entrega aos pulmões.
O aerossol pode conter excipientes, tais como um tensoativo (que intensifica a penetração nos pulmões reduzindo- se as altas forças de tensão superficial na interface de ar-água dentro dos alvéolos, pode também emulsificar, solubilizar e/ou estabilizar o fármaco e pode ser, por exemplo, um fosfolipídeo, tal como lecitina) e/ou um estabilizador, embora a porção química de tensoativo do produto de peptídeo possa realizar funções de um tensoativo.
Por exemplo, uma formulação de MDI pode compreender um produto de peptídeo, um propelente (por exemplo, um HFA, tal como 1,1,1,2-tetrafluoroetano) e um cossolvente (por exemplo, um álcool, tal como etanol) e, opcionalmente, um tensoativo (por exemplo, um ácido graxo, tal como ácido oleico). A formulação de MDI pode conter opcionalmente um gás dissolvido (por exemplo, CO2). Após a atuação de dispositivo, a ruptura de bolhas de CO2 dentro das gotículas de aerossol emitidas quebra as gotículas em gotículas menores, aumentando, assim, a fração respirável do fármaco.
Como outro exemplo, uma formulação de nebulizador pode compreender um produto de peptídeo, um quelador ou conservador (por exemplo, edetato dissódico), um agente de isotonicidade (por exemplo, NaCl), agentes de tamponamento de pH (por exemplo, ácido cítrico/citrato de sódio) e água e, opcionalmente, um tensoativo (por exemplo, um Tween®, tal como polissorbato 80). O fármaco pode ser entregue por meio de, por exemplo, um nebulizador ou um MDI com ou sem um
64 / 120 espaçador, e a dose de fármaco entregue pode ser controlada por uma câmara de medição (nebulizador) ou uma válvula de medição (MDI). A Tabela 6 mostra MDI, nebulizador e formulações de DPI exemplificativos.
[00156] Os inaladores de dosagem medida (também chamados de inaladores de dosagem medida pressurizados [pMDI]) são os dispositivos de inalação mais amplamente usados. Uma válvula de medição entrega uma quantidade precisa de aerossol (por exemplo, cerca de 20 a 100 µl) cada vez que o dispositivo é atuado. MDIs tipicamente geral aerossol mais rapidamente do que o usuário pode inalar, o que pode resultar na deposição de muito mais aerossol na boca e na garganta. O problema da coordenação ruim entre a atuação do dispositivo e inalação pode ser solucionado com o uso de, por exemplo, um MDI atuado por respiração ou um dispositivo de coordenação. Um MDI atuador por respiração (por exemplo, Easibreathe®) é ativado quando o dispositivo detecta a inspiração do usuário e descarrega uma dose de fármaco como resposta. A taxa de fluxo de inalação é coordenada através do atuador, e o usuário tem tempo para atuar o dispositivo confiavelmente durante a inalação. Em um dispositivo de coordenação, um espaçador (ou câmara de retenção com válvula), que é um tubo fixado à extremidade de boquilha do inalador, serve como um reservatório ou câmara que retém o fármaco que é aspergido pelo inalador e reduz a velocidade na qual o aerossol entra na boca, permitindo, assim, a evaporação do propelente de gotículas maiores. O espaçador simplifica o uso do inalador e aumenta a quantidade de fármaco depositado nos pulmões em vez de nas vias respiratórias superiores. O espaçador pode ser produzido a partir de um polímero antiestático para minimizar a aderência eletrostática das partículas de fármaco às paredes internas do espaçador.
[00157] Os nebulizadores geram gotículas de aerossol de cerca de 1 a 5 mícrons. Os mesmos não exigem coordenação de usuário entre a atuação do dispositivo e inalação, o que pode afetar significativamente a quantidade de
65 / 120 fármaco depositada nos pulmões. Em comparação aos MDIs e DPIs, os nebulizadores podem entregar doses maiores do fármaco, embora ao longo de um tempo de administração mais longo. Os exemplos de nebulizadores incluem, sem limitação, nebulizadores de acionamento humano, nebulizadores de jato (por exemplo, AeroEclipse® II BAN [atuador por respiração], CompAIRTM NE-C801 [válvula virtual], PARI LC® Plus [intensificado por respiração] e SideStream Plus [intensificado por respiração]), nebulizadores de ondas ultrassônicas e nebulizadores de malha vibratória (por exemplo, Akita2® Apixneb, I-neb AAD System com câmaras de medição, MicroAir® NE-U22, Omron U22 e PARI eFlow® rapid). Como um exemplo, um nebulizador ultrassônico pulsado pode aerossolizar uma quantidade fixa do fármaco por pulso e pode compreender um gatilho optoacústico que permite que o usuário sincronize cada respiração a cada pulso.
[00158] Para a inalação oral ou nasal com o uso de um inalador de pó seco (DPI), um produto de peptídeo pode ser provido na forma de um pó micronizado seco, em que as partículas de fármaco são de um determinado tamanho pequeno (por exemplo, entre cerca de 0,5 mícron e cerca de 5 mícrons) para melhorar, por exemplo, as propriedades aerodinâmicas do pó disperso e a deposição de fármaco nos pulmões. Partículas entre cerca de 0,5 mícron e cerca de 5 mícrons depositam-se por sedimentação nos bronquíolos terminais e nas regiões alveolares. Em contraste, a maioria das partículas maiores (> 5 mícrons) não segue a corrente de ar para as muitas bifurcações das vias respiratórias, mas, em vez disso, se deposita por impacto nas vias respiratórias superiores, incluindo a região da orofaringe da garganta. Uma formulação de DPI pode conter as partículas de fármaco sozinhas ou ser mesclada com um pó de uma base/carreador maior adequado, tal como lactose, amido, um derivado de amido (por exemplo, hidroxipropilmetil celulose) ou polivinilpirrolidina. As partículas carreadoras intensificam o
66 / 120 fluxo, reduzem a agregação, melhoram a uniformidade de dosagem e auxiliam na dispersão das partículas de fármaco.
Uma formulação de DPI pode conter opcionalmente um excipiente, tal como estearato de magnésio e/ou leucina que melhora o desempenho da formulação interferindo com a ligação entre partículas (por ação antiaderente). A formulação em pó pode ser provida em forma de dose unitária, tal como uma cápsula (por exemplo, uma cápsula de gelatina) ou um cartucho em uma embalagem blister, que pode ser manualmente carregada ou pré-carregada em um inalador.
As partículas de fármaco podem ser puxadas para os pulmões colocando-se a boquilha ou prendedor nasal do inalador na boca ou nariz, tomando uma inalação profunda e aguda para criar fluxo de ar turbulento e prendendo a respiração por um período de tempo (por exemplo, cerca de 5 a 10 segundos) para permitir que as partículas de fármaco se assentem nos bronquíolos e nas regiões alveolares.
Quando o usuário atua o DPI e inala, o fluxo de ar através do dispositivo cria cisalhamento e turbulência, o ar inspirado é introduzido no leito de pó, e a mescla em pó estática é fluidizada e entra nas vias respiratórias do usuário.
Ali, as partículas de fármaco se separam das partículas carreadoras devido à turbulência e são carregadas para dentro dos pulmões, ao mesmo tempo que as partículas carreadoras maiores atingem as superfícies da orofaringe e são eliminadas.
Assim, o fluxo de ar inspiratório do usuário alcança a desaglomeração de pó e aeroionização e determina a deposição de fármaco nos pulmões. (Embora um DPI passivo exige fluxo de ar inspiratório rápido para desaglomerar as partículas de fármaco, a inspiração rápida não é recomendada com um MDI ou nebulizador, já que a mesma cria fluxo de ar turbulento e velocidade rápida que aumentam a deposição de fármaco pelo impacto nas vias respiratórias superiores). Em comparação a um MDI, um DPI (incluindo um DPI ativado por respiração) pode ter a capacidade para entregar doses maiores de fármaco, e fármacos de maior tamanho (por exemplo, macromoléculas), aos pulmões.
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[00159] A lactose (por exemplo, mono-hidrato de alfa-lactose) é o carreador mais comumente usado nas formulações de DPI. Os exemplos de graus/tipos de mono-hidrato de lactose para formulações de DPI incluem, sem limitação, DCL 11, Flowlac® 100, Inhalac® 230, Lactohale® 300, Lactopress® SD 250 (lactose seca por aspersão), Respitose® SV003 e Sorbolac® 400. Uma formulação de DPI pode conter um único grau de lactose ou uma combinação de diferentes graus de lactose. Por exemplo, um grau de lactose fino como Lactohale® 300 ou Sorbolac® 400 pode não ser um carreador de DPI adequado e pode precisar ser mesclado com um grau de lactose grosso como DCL 11, Flowlac® 100, Inhalac® 230 ou Respitose® SV003 (por exemplo, uma razão de cerca de 1:9 entre lactose fina e lactose grossa) para melhorar o fluxo. As Tabelas 7 e 8 mostram exemplos não limitantes de graus/tipos de lactose que podem ser usados nas formulações de DPI. A distribuição dos tamanhos de partículas carreadoras afeta a fração/dose de partícula fina (FPF ou FPD) do fármaco, com uma alta FPF sendo desejada para a entrega de fármaco aos pulmões. FPF/FPD é a massa de fração/dose respirável do dispositivo DPI com um tamanho de partícula aerodinâmico ≤ 5 mícrons no ar de inspiração. Alta FPF e, portanto, bom desempenho de DPI podem ser obtidos a partir de, por exemplo, formulações de DPI que têm uma razão de aproximadamente 1:9 entre lactose fina (por exemplo, Lactohale® 300) e lactose grossa (por exemplo, Respitose® SV003) e cerca de 20% em p/p de excesso para evitar a deposição do fármaco no invólucro de cápsula ou dispositivo DPI e para entregar essencialmente todo o fármaco às vias respiratórias. TABELA 7 Faixa de Tamanhos de Partícula (µm) Produto Tipo 10% 50% 90% Lactohale® LH200 <9 <69 <141 InhaLac® 230 <35 <93 <138 ML001 <4 <43 <146 ML003 <4 <35 <106 Respitose® SV003 <30 <59 <90 SV004 <32 <61 <93
68 / 120 TABELA 8 Faixa de Tamanhos de Partícula Produto Tipo <45 µm <100 µm <150 µm <250 µm Respitose® ML003 65% 98% 100% AN Respitose® ML002 65% 98% AN 100%
[00160] Outros carreadores para formulações de DPI incluem, sem limitação, glicose, manitol (por exemplo, manitol cristalizado [Pearlitol 110 C] e manitol seco por aspersão [Pearlitol 100 SD]), maltitol (por exemplo, maltitol cristalizado [Maltisorb P90]), sorbitol e xilitol.
[00161] A maioria dos DPIs é ativado por respiração (“passivo”), dependendo da inalação do usuário para a geração de aerossol. Os exemplos de DPIs passivos incluem, sem limitação, Airmax®, Novolizer® e Otsuka DPI (torta compacta). A tecnologia classificadora de ar (ACT) é um mecanismo de dispersão de pó passivo eficiente empregado em DPIs. Em ACT, múltiplos canais de provimento geram um fluxo de ar tangencial que resulta em um ciclone dentro do dispositivo durante a inalação. Há também DPIs assistidos por potência (“ativos”) (com base em, por exemplo, pneumática, força de impacto ou vibração) que usam energia para auxiliar, por exemplo, a desaglomeração de partícula. Por exemplo, o mecanismo ativo de inaladores Exubera® utiliza energia mecânica armazenada em molas ou câmaras de ar comprimido. Os exemplos de DPIs ativos incluem, sem limitação, Actispire® (dose unitária única), Aspirair® (múltiplas doses), Exubera® (dose unitária única), MicroDose® (dose de múltiplas unidades e eletronicamente ativas), Omnihaler® (dose unitária única), Pfeiffer DPI (dose unitária única) e Spiros® (dose de múltiplas unidades).
[00162] Um produto de peptídeo pode também ser administrado por outras vias, tal como por via oral. Uma formulação oral pode conter um produto de peptídeo e excipientes convencionais conhecidos na técnica e opcionalmente um intensificador de absorção, tal como N-[8-(2- hidroxibenzoil)aminocaprilato] de sódio (SNAC). SNAC protege contra a degradação enzimática por meio da ação de tamponamento local e intensifica
69 / 120 a absorção GI. Uma forma de dosagem oral (por exemplo, um tablete, cápsula ou pílula) pode ter opcionalmente um revestimento entérico para proteger seu conteúdo dos ácidos fortes e enzimas proteolíticas do estômago.
[00163] Em algumas modalidades, um produto de peptídeo é entregue a partir de uma composição de liberação sustentada. Conforme usado no presente documento, o termo “composição de liberação sustentada” abrange composições, sistemas e dispositivos de liberação sustentada, liberação prolongada, liberação estendida, liberação atrasada, liberação lenta e liberação controlada. Em algumas modalidades, uma composição de liberação sustentada entrega um produto de peptídeo ao longo de um período de pelo menos cerca de 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 1 mês, 2 meses, 3 meses ou mais.
[00164] Em algumas modalidades, uma composição de liberação sustentada é formulada como nanopartículas ou micropartículas compostas de um polímero biodegradável e incorporando um produto de peptídeo. Em determinadas modalidades, o polímero biodegradável compreende ácido lático e/ou ácido glicólico [por exemplo, um copolímero á base de ácido L- láctico, tal como poli(L-lactídeo-co-glicolídeo) ou poli(ácido L-láctico-co- ácido D,L-2-hidroxioctanoico)].
[00165] Em modalidades adicionais, uma composição de liberação sustentada está na forma de um depósito que é gerado quando uma mistura de um produto de peptídeo e um polímero é injetada em um sujeito por via intramuscular ou subcutânea. Em determinadas modalidades, o polímero é ou compreende PEG, ácido poliláctico (PLA) ou ácido poliglicólico (PGA) ou um copolímero dos mesmos (por exemplo, PLGA ou PLA-PEG).
[00166] Uma composição farmacêutica pode ser apresentada em forma de dosagem unitária como uma dose única em que todos os ingredientes ativos e inativos são combinados em um sistema adequado, e os componentes não precisam ser misturados para formar a composição a ser administrada.
70 / 120 Uma forma de dosagem unitária geralmente contém uma dose terapeuticamente eficaz do fármaco, mas pode conter uma fração apropriada da mesma de modo que tomando múltiplas formas de dosagem unitária se alcance a dose terapeuticamente eficaz. Os exemplos de uma forma de dosagem unitária incluem um tablete, cápsula ou pílula para ingestão oral; uma solução em uma seringa pré-carregada de uma caneta de uso único ou uma caneta com um contador de dose para injeção parenteral (por exemplo, intravenosa, subcutânea ou intramuscular); e uma cápsula, cartucho ou embalagem blister pré-carregada ou manualmente carregada em um inalador.
[00167] Alternativamente, uma composição farmacêutica pode ser apresentada como um kit em que o ingrediente ativo, excipientes e carreadores (por exemplo, solventes) são providos em dois ou mais recipientes separados (por exemplo, ampolas, frascos, tubos, garrafas ou seringas) e precisam ser combinados para formar a composição a ser administrada. O kit pode conter instruções para armazenar, preparar e administrar a composição (por exemplo, uma solução a ser injetada por via parenteral).
[00168] Um kit pode conter todos os ingredientes ativos e inativos em forma de dosagem unitária ou o ingrediente ativo e os ingredientes inativos em dois ou mais recipientes separados e pode conter instruções para administrar ou usar a composição farmacêutica para tratar uma afecção médica descrita no presente documento. Um kit pode conter adicionalmente um dispositivo para entregar a composição, tal como uma caneta injetora ou um inalador.
[00169] Em algumas modalidades, um kit contém um produto de peptídeo ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica que compreende o mesmo, e instruções para administrar ou usar o produto de peptídeo ou a composição para tratar uma afecção médica descrita no presente documento, tal como resistência à
71 / 120 insulina, diabetes, obesidade, síndrome metabólica ou uma doença cardiovascular ou uma afecção associada às mesmas (por exemplo, NASH ou PCOS). Em determinadas modalidades, o kit contém adicionalmente um dispositivo para entregar o produto de peptídeo ou a composição, tal como uma caneta injetora ou um inalador.
USOS TERAPÊUTICOS DOS PRODUTOS DE PEPTÍDEO
[00170] A descrição provê adicionalmente usos dos produtos de peptídeo descritos no presente documento para tratar, por exemplo, resistência à insulina, diabetes, obesidade, síndrome metabólica e doenças cardiovasculares e afecções associadas às mesmas, tais como NASH e PCOS.
[00171] Em algumas modalidades, os produtos de peptídeo são usados para tratar hiperglicemia, resistência à insulina, hiperinsulinemia, pré- diabetes, diabetes (incluindo tipos 1 e 2, diabetes gestacional e juvenil), complicações diabéticas, neuropatia diabética, nefropatia diabética, retinopatia diabética, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, níveis sanguíneos elevados de ácidos graxos livres, obesidade, síndrome metabólica, síndrome X, doenças cardiovasculares (incluindo doença da artéria coronária), ateroesclerose, síndrome cardiovascular aguda, isquemia (incluindo isquemia miocárdica e isquemia cerebral/acidente vascular cerebral), lesão por isquemia-reperfusão (incluindo IRI miocárdica e cerebral), infarto (incluindo infarto do miocárdio e cerebral), angina, insuficiência cardíaca (por exemplo, insuficiência cardíaca congestiva), doença vascular periférica, trombose (por exemplo, trombose de veia profunda), embolia (por exemplo, embolia pulmonar), inflamação sistêmica (por exemplo, uma caracterizada por nível sanguíneo de proteína C- reativa elevado) e hipertensão. Os produtos de peptídeo podem alcançar seus efeitos terapêuticos através de diversos mecanismos, incluindo estimulação da secreção de insulina dependente de glicose sanguínea, aumento na sensibilidade à insulina, estimulação da queima de gordura e redução do peso
72 / 120 corporal. Os produtos de peptídeo podem também promover, por exemplo, proteção de células pancreáticas beta, cardioproteção e cicatrização de ferida.
[00172] Os produtos de peptídeo descritos no presente documento podem ser usados para tratar outras afecções associadas à resistência à insulina e/ou obesidade. Outras afecções associadas à resistência à insulina e/ou obesidade incluem, sem limitação, artrite (por exemplo, osteoartrite), dor lombar, distúrbios respiratórios (por exemplo, asma, síndrome de hipoventilação por obesidade [síndrome de Pickwickian] e apneia obstrutiva do sono), distúrbios dermatológicos (por exemplo, úlceras diabéticas, acantose nigricans, celulite, hirsutismo, intertrigo e linfedema) , distúrbios gastroenterológicos (por exemplo, colelitíase [cálculos biliares], doença do refluxo gastroesofágico [GERD] e gastroparesia), gota, hipercortisolismo (por exemplo, síndrome de Cushing), distúrbios renais (por exemplo, doença renal crônica), distúrbios hepáticos (por exemplo, doença hepática gordurosa [FLD], incluindo FLD alcoólica e não alcoólica), distúrbios neurológicos (por exemplo, síndrome do túnel do carpo, demências [por exemplo, doença de Alzheimer e demência vascular], meralgia parestésica, enxaquecas e esclerose múltipla), distúrbios urológicos (por exemplo, disfunção erétil, hipogonadismo e incontinência urinária), síndrome do ovário policístico, infertilidade, distúrbios menstruais, transtornos do humor (por exemplo, depressão) e cânceres (por exemplo, câncer do endométrio, do esôfago, colorretal, da vesícula biliar, do rim, do fígado [por exemplo, carcinoma hepatocelular], do pâncreas e da pele [por exemplo, melanoma] e leucemia).
[00173] Em determinadas modalidades, um produto de peptídeo descrito no presente documento é usado para tratar a síndrome de ovário policístico (PCOS). Em outras modalidades, um produto de peptídeo é usado para tratar doença renal crônica (CKD), também conhecida como insuficiência do rim/renal crônica (CKF/CRF). As causas mais comuns de CKD são diabetes e, a longo prazo, hipertensão não controlada.
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[00174] Em modalidades adicionais, um produto de peptídeo descrito no presente documento é usado para tratar doença hepática gordurosa (FLD). Em algumas modalidades, a FLD é uma doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD). Em determinadas modalidades, a NAFLD é esteato- hepatite não alcoólica (NASH). FLD, também conhecida como esteatose hepática, é caracterizada pelo acúmulo excessivo de gordura no fígado. FLD inclui doença hepática gordurosa alcoólica (AFLD) e NAFLD. O alcoolismo crônico causa fígado gorduroso devido à produção de metabólitos tóxicos, tais como aldeídos, durante o metabolismo do álcool no fígado. NAFLD é descrita abaixo. A FLD está associada à diabetes, obesidade e síndrome metabólica. O fígado gorduroso pode se desenvolver em cirrose ou um câncer de fígado (por exemplo, carcinoma hepatocelular [HCC]). Menos do que cerca de 10% das pessoas com AFLD cirrótica desenvolvem HCC, mas até cerca de 45% das pessoas com NASH sem cirrose pode desenvolver HCC. HCC é o tipo mais comum de câncer de fígado primário em adultos e ocorre no quadro de inflamação crônica do fígado.
[00175] A NAFLD é caracterizada pelo fígado gorduroso que ocorre quando gordura, em particular ácidos graxos livres e triglicerídeos, se acumula nas células do fígado (esteatose hepática) devido a causas diferentes do consumo excessivo de álcool, tal como sobrecarga de nutrientes, ingestão altamente calórica e disfunção metabólica (por exemplo, dislipidemia e controle da glicose prejudicado). Um fígado pode permanecer gorduroso sem perturbar a função do fígado, mas um fígado gorduroso pode progredir para se tornar NASH, uma afecção em que a esteatose é acompanhada por inflamação, baloneamento de hepatócito e lesão celular com ou sem fibrose do fígado. A fibrose é o preditor mais forte da mortalidade de NASH. A NAFLD pode ser caracterizada pela esteatose sozinha; esteatose com inflamação lobular ou portal, mas sem baloneamento; esteatose com baloneamento, mas sem inflamação; ou esteatose com inflamação e
74 / 120 baloneamento.
[00176] NASH é a forma mais extrema de NAFLD. A NASH é uma doença progressiva, com cerca de 20% dos pacientes desenvolvendo cirrose do fígado e cerca de 10% morrendo de uma doença hepática, tal como cirrose ou um câncer de fígado (por exemplo, HCC). A NAFLD é o distúrbio hepático mais comum em países desenvolvidos, e é projetado que NASH suplante a hepatite C como a maior causa de transplante de fígado nos EUA em 2020. Cerca de 12 a 25% das pessoas nos EUA têm NAFLD, com NASH afetando cerca de 2 a 5% das pessoas nos EUA.
[00177] NAFLD, incluindo NASH, está associada à resistência à insulina, obesidade e síndrome metabólica. Por exemplo, a resistência à insulina contribui para a progressão do fígado gorduroso para inflamação hepática e fibrose e, assim, NASH. Ademais, a obesidade aciona e exacerba NASH, e a perda de peso pode aliviar a NASH. Portanto, os produtos de peptídeo descritos no presente documento, incluindo agonistas de receptor de GLP-1 (GLP1R), agonistas de receptor de glucagon (GCGR) e agonistas de GLP1R/GCGR duplos, podem ser usados para tratar NAFLD, incluindo NASH.
[00178] Em algumas modalidades, os produtos de peptídeo usados para tratar uma afecção associada à resistência de insulina e/ou obesidade descrita no presente documento, tal como NAFLD (por exemplo, NASH) ou PCOS, são selecionados dentre os produtos de peptídeo de SEQ. ID. NOs. 601, 602, 603, 604, 630, 631, 632, 633, 634, 805, 819, 820, 821, 1114, 1115, 1116, 1117, 1118, 1119, 1120, 1121, 1122, 1123, 1124, 1125 e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[00179] Um produto de peptídeo pode ser administrado por qualquer via adequada para o tratamento de uma afecção descrita no presente documento. As vias de administração potenciais de um produto de peptídeo incluem, sem limitação oral, parenteral (incluindo intradérmica, subcutânea,
75 / 120 intramuscular, intravascular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, intracavitária e tópica) e tópica (incluindo transdérmica, transmucosal, intranasal [por exemplo, por aspersão ou gota nasal], ocular [por exemplo, por colírio], pulmonar [por exemplo, por inalação oral ou nasal], bucal, sublingual, retal [por exemplo, por supositório] e vaginal [por exemplo, por supositório]). Em algumas modalidades, um produto de peptídeo é administrado por via parenteral, tal como por via subcutânea, intravenosa ou intramuscular. Em outras modalidades, um produto de peptídeo é administrado por inalação oral ou inalação nasal ou insuflação.
[00180] A quantidade terapeuticamente eficaz e a frequência de administração de, e o comprimento do tratamento com, um produto de peptídeo para tratar uma afecção descrita no presente documento pode depender de diversos fatores, incluindo a natureza e a gravidade da afecção, a potência do composto, a via de administração, a idade, peso corporal, saúde geral, gênero e dieta do sujeito, e a resposta do sujeito ao tratamento, e pode ser determinada pelo médico responsável.
[00181] Em algumas modalidades, um produto de peptídeo é administrado parenteralmente (por exemplo, subcutaneamente [sc], intravenosamente [iv] ou intramuscularmente [im]) em uma dose de cerca de 0,1 mg a cerca de 1, 5 ou 10 mg, ou cerca de 0,1 a 1 mg ou 1 a 10 mg, ao longo de um período de cerca de uma semana para o tratamento de uma afecção descrita no presente documento (por exemplo, uma associada à resistência à insulina e/ou obesidade, tal como NASH ou PCOS). Em modalidades adicionais, um produto de peptídeo é administrado parenteralmente (por exemplo, sc, iv ou im) em uma dose de cerca de 0,1 a 0,5 mg, 0,5 a 1 mg, 1 a 5 mg ou 5 a 10 mg ao longo de um período de cerca de uma semana. Em determinadas modalidades, um produto de peptídeo é administrado parenteralmente (por exemplo, sc, iv ou im) em uma dose de cerca de 0,1 a 1 mg, ou cerca de 0,1 a 0,5 mg ou 0,5 a 1 mg, ao longo de um
76 / 120 período de cerca de uma semana.
[00182] Um produto de peptídeo pode ser administrado em qualquer frequência adequada para o tratamento de uma afecção descrita no presente documento (por exemplo, uma associada à resistência à insulina e/ou obesidade, tal como NASH ou PCOS). Em algumas modalidades, um produto de peptídeo é administrado, por exemplo, sc ou iv uma vez por dia, uma vez a cada dois dias, uma vez a cada três dias, duas vezes por semana, uma vez por semana ou uma vez a cada duas semanas. Em determinadas modalidades, um produto de peptídeo é administrado, por exemplo, sc ou iv uma vez por semana.
[00183] Um produto de peptídeo pode ser administrado a qualquer momento do dia conveniente ao paciente. Um produto de peptídeo pode ser tomado substancialmente com alimento (por exemplo, com uma refeição ou dentro de cerca de 1 hora ou 30 minutos antes ou depois de uma refeição) ou substancialmente sem alimento (por exemplo, pelo menos cerca de 1 ou 2 horas antes ou depois de uma refeição).
[00184] A extensão do tratamento de uma afecção médica com um produto de peptídeo pode ser baseada, por exemplo, na natureza ou gravidade da afecção e resposta do sujeito ao tratamento e pode ser determinada pelo médico responsável. Em algumas modalidades, um produto de peptídeo é administrado cronicamente para tratar uma afecção descrita no presente documento, tal como pelo menos cerca de 2 meses, 3meses, 6 meses, 1 ano, 1,5 ano, 2 anos, 3 anos, 5 anos, 10 anos ou mais. Um produto de peptídeo pode também ser tomado pro re nata (conforme necessário) até que as manifestações clínicas da afecção desapareçam ou os alvos clínicos sejam alcançados, tais como níveis de glicose sanguínea, pressão sanguínea, níveis sanguíneos de lipídios, índice de massa corporal ou peso corporal, razão entre cintura e quadril ou percentual de gordura corporal ou qualquer combinação dos mesmos. Se as manifestações clínicas da afecção reaparecerem ou os
77 / 120 alvos clínicos não forem mantidos, a administração do produto de peptídeo pode retornar.
[00185] A descrição provê um método para tratar uma afecção médica descrita no presente documento que compreende administrar a um sujeito que precisa de tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um produto de peptídeo descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica que compreende o mesmo. A descrição provê adicionalmente um produto de peptídeo descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição que compreende o mesmo, para uso como um medicamento. Adicionalmente, a descrição provê o uso de um produto de peptídeo descrito no presente documento ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo na preparação de um medicamento. O medicamento contendo o produto de peptídeo pode ser usado para tratar qualquer afecção médica descrita no presente documento. O produto de peptídeo pode ser opcionalmente usado em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais.
TERAPIAS DE COMBINAÇÃO
[00186] Um produto de peptídeo descrito no presente documento pode ser opcionalmente usado em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais para tratar qualquer distúrbio descrito no presente documento, tal como resistência à insulina, diabetes, obesidade, síndrome metabólica ou uma doença cardiovascular ou qualquer afecção associada às mesmas, tais como NASH ou PCOS. Em algumas modalidades, o um ou mais agentes terapêuticos adicionais são selecionados dentre agentes antidiabéticos, agentes antiobesidade (incluindo agentes de redução de lipídio e agentes pró- saciedade), agentes antiateroscleróticos, agentes anti-inflamatórios, antioxidantes, agentes antifibróticos, agentes anti-hipertensivos e combinações dos mesmos.
[00187] Os agentes antidiabéticos incluem, sem limitação:
78 / 120 agonistas da proteína quinase ativada por AMP (AMPK), incluindo biguanidas (por exemplo, buformina e metformina); agonistas de receptor gama ativado por proliferador de peroxissoma (PPAR-γ), incluindo tiazolidinedionas (por exemplo, balaglitazona, ciglitazona, darglitazona, englitazona, lobeglitazona, netoglitazona, pioglitazona, rivoglitazona, rosiglitazona e troglitazona) e saroglitazar (agonista de PPAR-α/γ duplo); agonistas de receptor de peptídeo-1 semelhante a glucagon (GLP-1), incluindo exendina-4, albiglutida, dulaglutida, exenatida, liraglutida, lixisenatida, semaglutida, taspoglutida, CNTO736, CNTO3649, HM11260C (LAPS-Exendin), NN9926 (OG9S7GT), TT401 e ZY0G1; inibdores de dipeptidila 4 (DPP-4), incluindo alogliptina, anagliptina, dutogliptina, evogliptina, gemigliptina, gosogliptina, linagliptina, omarigliptina, saxagliptina, septagliptina, sitagliptina, teneligliptina, trelagliptina e vildagliptina; inibidores de proteína de transporte de sódio-glicose 2 (SGLT2), incluindo canagliflozina (também inibe SGLT1), dapagliflozina, empagliflozina, ertugliflozina, ipragliflozina, luseogliflozina, etabonato de remogliflozina, sotagliflozina (também inibe SGLT1) e tofogliflozina; bloqueadores de canais de K+ dependentes de ATP (KATP) em células pancreáticas beta, incluindo meglitinidas (por exemplo, mitiglinida, nateglinida e repaglinida) e sulfonilureias {incluindo primeira geração (por exemplo, aceto-hexamida, carbutamida, clorpropamida, gliciclamida [tol- hexamida], meta-hexamida, tolazamida e tolbutamida) e segunda geração (por exemplo, glibenclamida [gliburida], glibornurida, gliclazida, glimepirida, glipizida, gliquidona, glisoxepida e gliclopiramida)}; insulina e análogos das mesmas, incluindo insulina de ação rápida (por exemplo, insulina aspártica, insulina glulisina e insulina lispro), insulina de ação intermediária (por exemplo, NPH insulina) e insulina de
79 / 120 longa ação (por exemplo, insulina degludec, insulina detemir e insulina glargina); e análogos, derivados e sais dos mesmos.
[00188] Em determinadas modalidades, o agente antidiabético é ou inclui uma biguanida (por exemplo, metformina), uma tiazolidinediona (por exemplo, pioglitazona ou rosiglitazona) ou um inibidor de SGLT2 (por exemplo, empagliflozina ou tofogliflozina) ou qualquer combinação dos mesmos.
[00189] Os agentes antiobesidade incluem, porém sem limitação: supressores de apetite (anorexígenos), incluindo anfetamina, dexanfetamina, anfepramona, clobenzorex, mazindol, fentermina (com ou sem topiramato) e lorcaserina; agentes pró-saciedade, incluindo fator neurotrófico ciliar (por exemplo, axoquina) e análogos de ação mais longa de amilina, calcitonina, colecistocinina (CCK), GLP-1, leptina, oxintomodulina, polipeptídeo pancreático (PP), peptídeo YY (PYY) e neuropeptídeo Y (NPY); inibidores de lipase, incluindo caulerpenina, cetilistat, ebelactona A e B, esterastina, lipstatina, orlistat, perciquinina, panclicina A-E, valilactona e vibralactona; agentes anti-hiperlipidêmicos; e análogos, derivados e sais dos mesmos.
[00190] Os agentes anti-hiperlipidêmicos incluem, sem limitação: inibidores de HMG-CoA redutase, incluindo estatinas {por exemplo, atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, mevastatina, monacolinas (por exemplo, monacolina K [lovastatina]), pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina e simvastatina} e flavanonas (por exemplo, naringenina); inibidores de esqualeno sintase, incluindo lapaquistat, ácido zaragózico e RPR-107393; inibidores de acetil-CoA carboxilase (ACC), incluindo
80 / 120 antocianinas, avenaciolidas, biotina cloroacetilada, ciclodim, diclofop, haloxifop, sorafenos (por exemplo, sorafeno A1α), ácido 5-(tetradeciloxi)-2- furancarboxílico (TOFA), CP-640186, GS-0976, NDI-010976; 7-(4- propiloxi-feniletinil)-3,3-dimetil-3,4 di-hidro-2H-benzo[b][1,4]dioxepina; N- etil-N’-(3-{[4-(3,3-dimetil-1-oxo-2-oxa-7-azaspiro[4,5]dec-7-il)piperidin-1- il]-carbonil}-1-benzotien-2-il)ureia; 5-(3-acetamidobut-1-inil)-2-(4- propiloxifenoxi)tiazol; e 1-(3-{[4-(3,3-dimetil-1-oxo-2-oxa-7- azaspiro[4,5]dec-7-il)piperidin-1-il]-carbonil}-5-(piridin-2-il)-2-tienil)-3- etilureia; agonistas de PPAR-α, incluindo fibratos (por exemplo, bezafibrato, ciprofibrato, clinofibrato, ácido clofíbrico, clofibrato, clofibrato de alumínio [alfibrato], clofibrido, etofibrato, ácido fenofíbrico, fenofibrato, gemfibrozila, ronifibrato e sinfibrato), isoflavonas (por exemplo, daidzeína e genisteína) e ácidos perfluoroalcanoicos (por exemplo, ácidos perfluoro- octanoico e ácido perfluorononanoico); agonistas de PPAR-δ, incluindo elafibranor (agonista de PPAR-α/δ duplo), GFT505 (agonista de PPAR-α/δ duplo), GW0742, GW501516 (agonista de PPAR-β/δ duplo), sodelglitazar (GW677954), MBX- 8025 e isoflavonas (por exemplo, daidzeína e genisteína); agonistas de PPAR-γ, incluindo tiazolidinedionas (supra), saroglitazar (agonista de PPAR-α/γ duplo), 4-oxo-2-tioxotiazolinas (por exemplo, rodanina), berberina, honoquiol, ácido perfluorononanoico, ciclopentenona prostaglandinas (por exemplo, ciclopentenona 15-deoxi-Δ- prostaglandina J2 [15d-PGJ2]) e isoflavonas (por exemplo, daidzeína e genisteína); agonistas de receptor X de fígado (LXR), incluindo ligantes endógenos (por exemplo, oxisteróis, tais como 22(R)-hidroxicolesterol, 24(S)- hidroxicolesterol, 27-hidroxicolesterol e ácido colestenoico) e agonistas sintéticos (por exemplo, dímero acetil-podocárpico, hipocolamida, N,N-
81 / 120 dimetil-3β-hidroxi-colenamida [DMHCA], GW3965 e T0901317); agonistas de receptor X retinoide (RXR), incluindo ligantes endógenos (por exemplo, ácido 9-cis-retinoico) e agonistas sintéticos (por exemplo, bexaroteno, AGN 191659, AGN 191701, AGN 192849, BMS649, LG100268, LG100754 e LGD346); inibidores de acil-CoA colesterol aciltransferase (ACAT, aka esterol O-aciltransferase [SOAT], incluindo ACAT1 [SOAT1] e ACAT2 [SOAT2]), incluindo avasimiba, pactimiba, pelitorina, terpendol C e flavanonas (por exemplo, naringenina); inibidores de atividade ou expressão de estearoil-CoA desaturase-1 (SCD-1, aka estearoil-CoA delta-9 desaturase), incluindo aramchol, CAY-10566, CVT-11127, SAR-224, SAR-707, XEN-103; 3-(2- hidroxietoxi)-4-metoxi-N-[5-(3-trifluorometilbenzil)tiazol-2-il]benzamida e 4-etilamino-3-(2-hidroxietoxi)-N-[5-(3-trifluorometilbenzil)tiazol-2- il]benzamida; 1’-{6-[5-(piridin-3-ilmetil)-1,3,4-oxadiazol-2-il]piridazin-3-il}- 5-(trifluorometil)-3,4-di-hidrospiro[cromeno-2,4’-piperidina]; 5-fluoro-1’-{6- [5-(piridin-3-ilmetil)-1,3,4-oxadiazol-2-il]piridazin-3-il}-3,4-di- hidrospiro[cromeno-2,4’-piperidina]; 6-[5-(ciclopropilmetil)-4,5-di-hidro- 1’H,3H-espiro[1,5-benzoxazepina-2,4’-piperidin]-1’-il]-N-(2-hidroxi-2- piridin-3-iletil)piridazina-3-carboxamida; ácido 6-[4-(2- metilbenzoil)piperidin-1-il]piridazina-3-carboxílico (2-hidroxi-2-piridin-3- iletil)amida; 4-(2-clorofenoxi)-N-[3-(metil carbamoil)fenil]piperidina-1- carboxamida; o isômero cis-9,trans-11 e o isômero trans-10,cis-12 isomer do ácido linoleico conjugado, compostos heteroaromáticos substituídos descritos no documento no WO 2009/129625 A1, polinucleotídeos antissenso e ácidos nucleicos peptídicos (PNAs) que têm como alvo mRNA para SCD-1 e siRNAs de alvejamento de SCD-1; inibidores de proteína de transferência de colesteriléster (CETP), incluindo anacetrapib, dalcetrapib, evacetrapib, torcetrapib e AMG
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899 (TA-8995); inibidores de atividade ou expressão da proteína de transferência de triglicerídeo microssômico (MTTP), incluindo implitapida, lomitapida, dirlotapida, mitratapida, CP-346086, JTT-130, SLx-4090, polinucleotídeos antissenso e PNAs que têm como alvo mRNA para MTTP, microRNAs de alvejamento de MTTP (por exemplo, miRNA-30c) e siRNAs de alvejamento de MTTP; agonistas de receptor de GLP-1 (supra); fator de crescimento de fibroblasto 21 (FGF21) e análogos e derivados dos mesmos, incluindo BMS-986036 (FGF21 peguilado); inibidores de atividade ou expressão da pró-proteína convertase subtilisina/quexina tipo 9 (PCSK9), incluindo berberina (reduz o nível de PCSK9), anexina A2 (inibe a atividade de PCSK9), anticorpos anti- PCSK9 (por exemplo, alirocumab, bococizumab, evolocumab, LGT-209, LY3015014 e RG7652), peptídeos que imitam o domínio de fator de crescimento epidérmico A (EGF-A) do receptor de LDL que se liga a PCSK9, adnectinas de ligação a PCSK9 (por exemplo, BMS-962476), polinucleotídeos antissenso e PNAs que têm como alvo mRNA para PCSK9 e siRNAs de sinalização de PCSK9 (por exemplo, inclisiran [ALN-PCS] e ALN-PCS02); peptídeos mimético de apolipoproteína, incluindo miméticos de apoA-I (por exemplo, 2F, 3F, 3F-1, 3F-2, 3F-14, 4F, 4F-P-4F, 4F-IHS-4F, 4F2, 5F, 6F, 7F, 18F, 5A, 5A-C1, 5A-CH1, 5A-CH2, 5A-H1, 18A, 37pA [18A-P-18A], ELK [nome], ELK-1A, ELK-1F, ELK-1K1A1E, ELK-1L1K, ELK-1W, ELK-2A, ELK-2A2K2E, ELK-2E2K, ELK-2F, ELK-3E3EK, ELK-3E3K3A, ELK-3E3LK, ELK-PA, ELK-P2A, ELKA [nome], ELKA- CH2, ATI-5261, CS-6253, ETC-642, FAMP [nome], FREL [nome] e KRES [nome]) e miméticos de apoE (por exemplo, Ac-hE18A-NH2 [AEM-28], Ac- [R]hE18A-NH2, AEM-28-14, EpK, hEp, mR18L, COG-112, COG-133 e
83 / 120 COG-1410); ácidos graxos ômega-3, incluindo ácido docosa-hexaenoico (DHA), ácido docosapentaenoico (DPA), ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido α-linolênico (ALA), óleos de peixe (que contêm, por exemplo, DHA e EPA) e ésteres (por exemplo, ésteres etílicos e glicerílicos) dos mesmos; e análogos, derivados e sais dos mesmos.
[00191] Em determinadas modalidades, o agente antiobesidade é ou inclui um inibidor de lipase (por exemplo, orlistat) e/ou um agente anti- hiperlipidêmico (por exemplo, uma estatina, tal como atorvastatina, e/ou um fibrato, tal como fenofibrato).
[00192] Os agentes anti-hipertensivos incluem, sem limitação: antagonistas do sistema de renina-angiotensina-aldosterona (RAAS), incluindo inibidores de renina (por exemplo, aliscireno), inibidores de enzima conversora da angiotensina (ACE) (por exemplo, benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, moexipril, perindopril, quinapril, ramipril e trandolapril), antagonistas de receptor angiotensina II tipo 1 (AT1) (por exemplo, azilsartana, candesartana, eprosartana, fimasartana, irbesartana, losartana, olmesartana medoxomila, olmesartana, telmisartana e valsartana) e antagonistas de receptor de aldosterona (por exemplo, eplerenona e espironolactona) ; diuréticos, incluindo diurético de laço (por exemplo, bumetanida, ácido etacrínico, furosemida e torsemida), diuréticos de tiazida (por exemplo, bendroflumetiazida, clorotiazida, hidroclorotiazida, epitizida, meticlotiazida e politiazida), diuréticos do tipo tiazida (por exemplo, clortalidona, indapamida e metolazona), cicletanina (um diurético tubular distal precoce), diuréticos poupadores de potássio (por exemplo, amilorida, eplerenona, espironolactona e triantereno) e teobromina; bloqueadores do canal de cálcio, incluindo di-hidropiridinas (por exemplo, anlodipina, levanlodipina, cilnidipina, clevidipina, felodipina,
84 / 120 isradipina, lercanidipina, nicardipina, nifedipina, nimodipina, nisoldipina e nitrendipina) e não di-hidropiridinas (por exemplo, diltiazem e verapamila); agonistas de α2-adrenorreceptor, incluindo clonidina, guanabenz, guanfacina, metildopa e moxonidina; antagonistas de α1-adrenorreceptor (alfabloqueadores), incluindo doxazosina, indoramina, nicergolina, fenoxibenzamina, fentolamina, prazosina, terazosina e tolazolina; antagonistas de β-adrenorreceptor (β1 e/ou β2) (betabloqueadores), incluindo atenolol, betaxolol, bisoprolol, carteolol, carvedilol, labetalol, metoprolol, nadolol, nebivolol, oxprenolol, penbutolol, pindolol, propranolol e timolol; alfa/betabloqueadores misturados, incluindo bucindolol, carvedilol e labetalol; antagonistas de receptor de endotelina, incluindo antagonistas de receptor de ETA seletivos (por exemplo, ambrisentana, atrasentana, edonentana, sitaxentana, zibotentana e BQ-123) e antagonistas de ETA/ETB duplos (por exemplo, bosentana, macitentana e tezosentana); outros vasodilatadores, incluindo hidralazina, minoxidila, teobromina, nitroprussiato de sódio, nitratos orgânicos (por exemplo, mononitrato de isossorbida, dinitrato de isossorbida e nitroglicerina, que são convertidos em óxido nítrico no corpo), estimuladores de óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) (por exemplo, cicletanina), ativadores de guanilato ciclase solúvel (por exemplo, cinaciguat e riociguat), inibidores de fosfodiesterase tipo 5 (PDE5) (por exemplo, avanafila, benzamidanafila, dasantafila, dinafila, lodenafila, mirodenafila, sildenafila, tadalafila, udenafila, vardenafila, dipiridamol, papaverina, propentofilina, zaprinast e T-1032), prostaglandina E1 (alprostadila) e análogos dos mesmos (por exemplo, limaprost e misoprostol), prostaciclina e análogos dos mesmos (por exemplo, ataprost, beraprost [por exemplo, esuberaprost], 5,6,7-trinor-4,8-inter-m-fenileno-9-
85 / 120 fluoro-PGI2, carbaciclina, isocarbaciclina, clinprost, ciprosteno, eptaloprost, cicaprost, iloprost, pimilprost, SM-10906 (des-metil pimilprost), naxaprosteno, taprosteno, treprostinila, CS-570, OP-2507 e TY-11223), agonistas de receptor de prostaciclina não prostanoides (por exemplo, 1- ftalazinol, ralinepag, selexipag, ACT-333679 [MRE-269, metabólito ativo de selexipag], e TRA-418), inibidores de fosfolipase C (PLC) e inibidores da proteína quinase C (PKC) (por exemplo, BIM-1, BIM-2, BIM-3, BIM-8, quelitrina, cicletanina, gossipol, miyabenol C, miricitrina, ruboxistaurina e verbascosídeo; minerais, incluindo magnésio e sulfato de magnésio; e análogos, derivados e sais dos mesmos.
[00193] Em determinadas modalidades, o agente anti-hipertensivo é ou inclui uma tiazida ou diurético do tipo tiazida (por exemplo, hidroclorotiazida ou clortalidona), um bloqueador do canal de cálcio (por exemplo, anlodipina ou nifedipina), um inibidor de ACE (por exemplo, benazeprila, captoprila ou perindoprila) ou um antagonista de receptor de angiotensina II (por exemplo, olmesartana medoxomila, olmesartana, telmisartana ou valsartana), ou qualquer combinação dos mesmos.
[00194] Em algumas modalidades, um produto de peptídeo descrito no presente documento é usado em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais para tratar NAFLD, tal como NASH. Em algumas modalidades, o um ou mais agentes terapêuticos adicionais são selecionados dentre agentes antidiabéticos, agentes antiobesidade, agentes anti- inflamatórios, agentes antifibróticos, antioxidantes, agentes anti-hipertensivos e combinações dos mesmos.
[00195] Os agentes terapêuticos que podem ser usados para tratar NAFLD (por exemplo, NASH) incluem, sem limitação: agonistas de PPAR, incluindo agonistas de PPAR-δ (por exemplo, MBX-8025, elafibranor [agonista de PPAR-α/δ duplo] e GW501516
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[agonista de PPAR-β/δ duplo]) e agonistas de PPAR-γ (por exemplo, tiazolidinedionas, tais como pioglitazona e saroglitazar [agonista de PPAR- α/γ duplo]) – o agonismo de PPAR-δ e -γ aumenta a sensibilidade à insulina, o agonismo de PPAR-α resus a esteatose de fígado, e o agonismo de PPAR-δ inibe a ativação de macrófagos e células Kupffer; agonistas de receptor X farnesoide (FXR), tais como ácido obeticólico e GS-9674 – os agonistas de FXR reduzem a gliconeogênese, lipogênese, esteatose e fibrose do fígado; fator de crescimento de fibroblasto 19 (FGF19) e análogos e derivados do mesmo, tais como NGM-282 – os análogos de FGF19 reduzem a gliconeogênese e esteatose do fígado; fator de crescimento de fibroblasto 21 (FGF21) e análogos e derivados do mesmo, tais como BMS-986036 (FGF21 peguilado) – os análogos de FGF21 reduzem a esteatose do fígado, lesão celular e fibrose; inibidores de HMG-CoA redutase, incluindo estatinas (por exemplo, rosuvastatina) – as estatinas reduzem a esteato-hepatite e fibrose; inibidores de ACC, tais como NDI-010976 (alvejado ao fígado) e GS-0976 – os inibidores de ACC reduzem a lipogênese de novo e esteatose do fígado; inibidores de SCD-1, tais como aramchol – os inibidores de SCD-1 reduzem a esteatose do fígado e aumentam a sensibilidade à insulina; inibidores de SGLT2, tais como canagliflozina, ipragliflozina e luseogliflozina – os inibidores de SGLT2 reduzem o peso corporal, nível de ALT do fígado e fibrose; antagonistas de CCR2 e/ou CCR5, tais como cenicriviroc – os antagonistas de CCR2 (se liga a CCL2 [MCP1]) e CCR5 (se liga a CCL5 [RANTES]) inibem a ativação e a migração de células inflamatórias (por exemplo, macrófagos) ao fígado e reduzir a fibrose do fígado; inibidores de apoptose, incluindo inibidores de quinase 1
87 / 120 reguladora de sinal de apoptose (ASK1) (por exemplo, selonsertib) e inibidores de caspase (por exemplo, enricasana [inibidor de pan-caspase]) – os inibidores de apoptose reduzem a esteatose e fibrose do fígado; inibidores de lisil oxidase tipo 2 (LOXL2), tais como simtuzumab – LOXL2 é uma enzima de matriz chave na formação de colágeno e é altamente expressa no fígado; inibidores de galectina-3, tais como GR-MD-02 e TD139 – galectina-3 é crítica para o desenvolvimento da fibrose do fígado; antioxidantes, incluindo vitamina E (por exemplo, α-tocoferol) e sequestrantes de espécies reativas de oxigênio (ROS) e radicais livres (por exemplo, cisteamina, glutationa, melatonina e pentoxifilina [também anti- inflamatória por meio da inibição de TNF-α e fosfodiesterases]) – vitamina E reduz a esteatose do fígado, baloneamento de hepatócito e inflamação lobular; e análogos, derivados e sais dos mesmos.
[00196] Em algumas modalidades, um produto de peptídeo descrito no presente documento é usado em conjunto com um agonista de PPAR (por exemplo, um agonista de PPAR-δ, tal como elafibranor e/ou um agonista de PPAR-γ, tal como pioglitazona), um inibidor de HMG-CoA redutase (por exemplo, uma estatina, tal como rosuvastatina), um agonista de FXR (por exemplo, ácido obeticólico) ou um antioxidante (por exemplo, vitamina E) ou qualquer combinação dos mesmos, para tratar NAFLD (por exemplo, NASH). Em determinadas modalidades, o um ou mais agentes terapêuticos adicionais para o tratamento de NAFLD (por exemplo, NASH) são ou incluem vitamina E e/ou pioglitazona.
PREPARAÇÃO DOS PRODUTOS DE PEPTÍDEO
[00197] O documento no WO 2015/184177 A1 descreve a síntese dos produtos de peptídeo. Os Exemplos abaixo também descrevem a síntese dos produtos de peptídeo representativos.
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EXEMPLOS
[00198] Os exemplos a seguir destinam-se apenas a ilustrar a descrição. Outros processos, ensaios, estudos, protocolos, procedimentos, metodologias, reagentes e condições podem ser alternativamente usados conforme apropriado. EXEMPLO 1. REAGENTES, TAIS COMO N-α-Fmoc, N-ε-(1-octil β-D- GLICURONÍDEO-6-il)-L-LISINA
[00199] Em um frasco Erlenmeyer de 250 ml seco em forno, são colocados ácido 1-octil β-D-glicurônico (3,06 g, 10 mmol, Carbosynth Ltd.), 50 ml de DMF anidro e 1-hidroxibenzotriazol anidro (1,62 g, 12 mmol). Uma solução resfriada (4°C) de N, N’-diciclo-hexilcarbodi-imida (2,48g, 12 mmol) em 50 ml de DMF é adicionada com agitação, e a reação é deixada proceder por 5 min. O precipitado branco copioso de N, N’-diciclo-hexilureia é filtrado em um funil de vidro sinterizado, e o filtrado é adicionado a uma solução de N-α-Fmoc-L-lisina (3,68g, 10 mmol) em 25 ml de DMF anidro. A reação é deixada proceder por 25 min com aquecimento até a temperatura ambiente ou até a cor de ninidrina for bem fraca. A mistura de reação é filtrada, removida por evaporação instantânea até secar e cristalizada a partir de MeOH/Et2O pela dissolução em MeOH e diluição lenta até o ponto de névoa com Et2O, seguido por refrigeração. A purificação adicional pode ser alcançada por cromatografia em gel de sílica com o uso de um gradiente de solvente de EtOAc a EtOAc/EtOH/AcOH.
[00200] Uma reação similar usando N-α-Boc-L-lisina rende N-α- Boc,N-ε-(1-octil β-D-glicuronídeo-6-il)-L-lisina, que ´é adequada para incorporação N-terminal e clivagem a uma terminação N livre. Uma reação similar usando N-α-Ac-L-lisina rende N-α-Ac,N-ε-(1-octil β-D-glicuronídeo- 6-il)-L-lisina, que é adequada para a incorporação na terminação N de um peptídeo com uma terminação N bloqueada. Uma reação similar usando uma quantidade apropriada de N-α-Fmoc-L-ornitina rende N-α-Fmoc,N-δ-(1-octil
89 / 120 β-D-glicuronídeo-6-il)-L-ornitina. Reações similares usando outros diaminoácidos N-monoprotegidos fornecem os reagentes correspondentes. Alternativamente, o uso de um grupo protetor éster de Me3Si temporário durante o acoplamento e sem pré-ativação do ácido 1-octil β-D-glicurônico provê uma via fácil para a formação dos reagentes. O éster de Me3Si temporário é produzido pela reação do Fmoc-Lys-OH com uma quantidade equimolar de N,O-bis(trimetilsilil)acetamida em diclorometano (CH2Cl2). A camada orgânica contém o reagente desejado como uma solução em CH2Cl2 pronta para o acoplamento com o 1-alquil glucoronídeo como acima. A mistura de reação filtrada é lavada com NaHSO4 aquoso para hidrolisar o éster de Me3Si e, então, é seca com MgSO4, e, então, o solvente é removido.
[00201] Similarmente, mas com o uso de ácido peracetil ou perbenzoil 1-octil β-D-glicurônico, obtém-se a forma Ac- ou Bz-protegida dos reagentes (por exemplo, ácido 2,3,4-trisacetil 1-octil β-D-glicurônico e similares, formados pelo tratamento com Ac2O). Tais reagentes têm estabilidade aumentada durante a clivagem de ácido da resina e são usados quando instabilidade durante a desproteção é detectada. A desproteção final de tais produtos é executada por transesterificação catalisada por base após a clivagem, pelo uso de MeOH/NH3, MeOH/NaOMe ou MeOH/NH2NH2, conforme descrito acima. EXEMPLO 2. PEPTÍDEOS SINTÉTICOS
[00202] Em geral, os métodos de síntese de peptídeo envolvem a adição sequencial de aminoácidos protegidos a uma cadeia de peptídeo crescente. Normalmente, o grupo amino ou carboxila do primeiro aminoácido e qualquer grupo de cadeia lateral reativo são protegidos. Esse aminoácido protegido é, então, ou ligado a um suporte sólido inerte ou utilizado em solução, e o aminoácido seguinte na sequência, também adequadamente protegido, é adicionado sob condições suscetíveis à formação da ligação de amida. Após todos os aminoácidos desejados terem sido ligados na sequência
90 / 120 apropriada, os grupos protetores e qualquer suporte sólido são removidos para proporcionar o peptídeo bruto. O peptídeo é dessalinizado e purificado cromatograficamente.
[00203] Um método para preparar peptídeos que têm menos de cerca de cinquenta aminoácidos envolve a síntese de peptídeo em fase sólida. Nesse método, o grupo α-amino (Nα) e quaisquer grupos funcionais de cadeia lateral reativos são protegidos pelos grupos sensíveis a ácido ou base. O grupo protetor deve ser estável às condições de formação de ligação de peptídeo, ao mesmo tempo que é prontamente removível sem afetar a cadeia de peptídeo existente. Os grupos protetores de α-amino adequados incluem, porém sem limitação, t-butiloxicarbonila (Boc), benziloxicarbonila (Cbz), o- clorobenziloxicarbonila, bifenilisopropiloxicarbonila, t-amiloxicarbonila (Amoc), isoborniloxicarbonila, α,α-dimetil-3,5-dimetoxibenziloxi-carbonila, o-nitrofenilsulfenila, 2-ciano-t-butoxicarbonila, 9-fluorenil-metoxicarbonila (Fmoc) e similares, de preferência, Boc ou Fmoc. Os grupos protetores de cadeia lateral adequados incluem, porém sem limitação, acetila, benzila (Bzl ou Bn), benziloximetila (Bom), Boc, t-butila, o-bromobenziloxicarbonila, t- butila, t-butildimetilsilila, 2-clorobenzila (Cl-z), 2,6-diclorobenzila, ciclo- hexila, ciclopentila, isopropila, pivalila, tetra-hidropiran-2-ila, tosila (Tos), 2,2,4,6,7-pentametildi-hidrobenzofuran-5-sulfonila (Pbf), trimetilsilila e tritila. Um grupo Nα-protetor preferencial para a síntese dos compostos é Fmoc. Os grupos protetores de cadeia lateral preferenciais incluem -O-t-butila para Glu, Tyr, Thr, Asp e Ser; Boc para cadeias laterais de Lys e Trp; Pbf para Arg; e Trt para Asn, Gln e His. Para a modificação seletiva de um resíduo de Lys, a proteção ortogonal com um grupo protetor não removido por reagentes que clivam grupos protetores à base de t-butila ou Fmoc é preferencial. Os exemplos preferenciais para a modificação da cadeia lateral de Lys incluem, porém sem limitação, aquelas removidas por hidrazina, mas não piperidina – por exemplo, 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclo-hex-1-ilideno)-3-
91 / 120 metilbutila (ivDde), 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclo-hex-1-ilideno)etila (Dde) e aliloxicarbonila (Alloc).
[00204] O esquema de grupo protetor de Fmoc-Lys(ivDde) ou Fmoc- Lys(Dde) é preferencial em casos em que a formação de lactama de cadeia lateral é desejada devido ao fato de que Fmoc-Glu(O-alil) e Fmoc-Lys(Alloc) podem ser incorporados e usados para prover proteção temporária e, então, desprotegidos para formação de lactama enquanto o grupo protetor de Lys(Dde) permanece para remoção posterior e reação com o tensoativo funcionalizado. A lactama de cadeia lateral entre resíduos ácidos e básicos (por exemplo, Glu e Lys) é executada após a remoção do grupo protetor à base de alila pela ativação da função de cadeia lateral de carboxila com N,N’- di-isopropilcarbodi-imida (DIC)/1-hidroxibenzotriazol (HOBt) ou hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilamínio (HBTU)/ N,N-di-isopropiletilamina (DIEA), usado protocolos padrão na técnica.
[00205] Na síntese de fase sólida, o aminoácido C-terminal é primeiramente ligado a um suporte de resina adequado. Os suportes de resina adequados são aqueles materiais que são inertes aos reagentes e condições de reação das reações de condensação e desproteção em etapas, assim como sendo insolúveis nos meios usados. Os exemplos de resinas comercialmente disponíveis incluem resinas de estireno/divinilbenzeno modificadas com um grupo reativo, por exemplo, co-poli-(estireno-divinilbenzeno) clorometilado, co-poli-(estireno-divinilbenzeno) hidroximetilado e similares. Resina de fenilacetamidometila (PAM) benzilada hidroximetilada e hidroximetilfenoxiacetilamidometila (HMPA) são preferenciais para a preparação de ácidos C-terminais de peptídeo. Quando a terminação C do composto é uma amida, as resinas preferenciais são resina de p- metilbenzidrilamino-co-poli(estireno-divinil-benzeno) e resina à base de 2,4- dimetoxibenzidrilamino (“amida de Rink”) e similares. Um suporte
92 / 120 preferencial para a síntese de peptídeos maiores são resinas comercialmente disponíveis contendo sequências de PEG exertadas em outras matrizes poliméricas, tais como as resinas de amida de Rink-PEG e PAL-PEG-PS (Applied Biosystems) e resinas similares projetadas para síntese de amida de peptídeo com o uso do protocolo de Fmoc. Addim, em certos casos, pode ser desejável ter uma ligação de amida a uma cadeia de PEG. Em tais casos, é conveniente ligar um ácido N-Fmoc-amino-PEG-carboxílico à resina de formação de amida acima (por exemplo, resina de amida de Rink e similares). O primeiro aminoácido da cadeia pode ser acoplado como um N-Fmoc- aminoácido à função de amino da cadeia de PEG. A desproteção final rende o produto de peptídeo-NH-PEG-CO-NH2 desejado.
[00206] A ligação à resina de PAM ou HMPA pode ser realizada pela reação do aminoácido Nα-protegido, tal como Boc-aminoácido, como seu amônio, césio, trietilamônio, 1,5-diazabiciclo-[5,4,0]undec-5-eno, tetrametilamônio ou sal similar em etanol, acetonitrila, N,N-dimetilformamida (DMF) e similares, de preferência, sal de césio em DMF, com a resina a uma temperatura elevada, tal como entre cerca de 40°C e cerca de 60°C, de preferência, cerca de 50°C, por cerca de 12 a 72 horas, de preferência, cerca de 48 horas. Isso eventualmente rende o produto de ácido de peptídeo após a clivagem de ácido ou uma amida após a aminólise.
[00207] O Nα-Boc-aminoácido pode ser ligado à resina de benzidrilamina por meio de, por exemplo, um acoplamento mediado por DIC/HOBt por cerca de 2 a 24 horas, de preferência, cerca de 2 horas, a uma temperatura entre cerca de 10° e cerca de 50°C, de preferência, cerca de 25°C, em um solvente, tal como CH2Cl2 ou DMF, de preferência, CH2Cl2.
[00208] Para protocolos baseados em Boc, o acoplamento sucessivo de aminoácidos protegidos pode ser executado pelos métodos conhecidos na técnica, tipicamente em um sintetizador de peptídeo automatizado. Após a neutralização com trietilamina, DIEA, N-metilmorfolina (NMM), colidina ou
93 / 120 base similar, cada aminoácido protegido é introduzido em excesso molar de aproximadamente cerca de 1,5 a 2,5 vezes e o acoplamento executado em um solvente inerte não aquoso polar, tal como CH2Cl2, DMF, N-metilpirrolidona (NMP), N,N-dimetilacetamida (DMA), ou uma mistura dos mesmos, de preferência, em diclorometano à temperatura ambiente. Para protocolos baseados em Fmoc, nenhum ácido é usado para a desproteção, mas uma base, de preferência, DIEA ou NMM, é usualmente incorporada à mistura de acoplamento. Os acoplamentos são tipicamente feitos em DMF, NMP, DMA ou solventes misturados, de preferência, DMF. Os agentes de acoplamento representativos são N,N’-diciclo-hexilcarbodi-imida (DCC), N,N’-di- isopropil-carbodi-imida (DIC) e outras carbodi-imidas, ou sozinhas ou na presença de HOBt, O-acil ureias, hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il- oxitris(pirrolidino)fosfônio (PyBop), N-hidroxissuccinimida, outras N- hidroxi-imidas ou oximas. Alternativamente, ésteres ativos de aminoácido protegido (por exemplo, p-nitrofenila, pentafluorofenila e similares) ou anidridos simétricos podem ser usados. Os agentes de acoplamento preferenciais são da classe de amínio/urônio, tal como HBTU, hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio (HATU), hexafluorofosfato de 2-(6-cloro-1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3- tetrametilamínio (HCTU) e similares.
[00209] Um método preferencial de ligação à resina de Fmoc-PAL- PEG-PS pode ser realizado pela desproteção do ligante de resina com 20% de piperidina em DMF, seguido pela reação do aminoácido protegido por N-α- Fmoc, um excesso molar de cerca de 5 vezes do N-α-Fmoc-aminoácido, com o uso de HBTU: di-isopropiletilamina (DIEA) (1:2) em DMF em um sintetizador de peptídeo assistido por micro-ondas com um ciclo de acoplamento máximo de 5 min, 75°C.
[00210] Os peptídeos da descrição podem conter um grupo PEG (dPEG) na terminação C. Tais grupos PEG podem ser cadeias curtas de
94 / 120 polietilenoglicol com uma terminação amino e uma terminação carboxila. Assim, os mesmos são essencialmente aminoácidos não naturais e são tratados similarmente aos outros aminoácidos para síntese. Por exemplo, Fmoc-amido-oxi-dPEG4-ácido está comercialmente disponível junto à Quanta Biodesign (no 10213) e é ligado à resina de Rink ou HMPA na primeira etapa da síntese de uma maneira similar a esta usada para os N-Fmoc ou N-Boc aminoácidos descritos acima. A desproteção com condições de ácido fortes padrão provê o peptídeo C-terminalmente modificado dPEG curto correspondente com a terminação C de amida ou ácido correspondente.
[00211] Para um protocolo com base em Fmoc em um sintetizador de peptídeo assistido por micro-ondas, o grupo protetor de N-α-Fmoc aminoácido é removido com 20% de piperidina em DMF contendo 1- hidroxibenzotriazol 0,1 M (HOBt), em um protocolo de desproteção dupla por 30 segundo e, então, por 3 min com um máximo de temperatura definido a 75°C. HOBt é adicionado à solução de desproteção para reduzir a formação de aspartimida. O acoplamento do aminoácido seguinte, então, emprega um excesso molar de 5 vezes com o uso de HBTU:DIEA (1:2) com um ciclo de acoplamento duplo máximo de 5 min, 75°C.
[00212] No final da síntese em fase sólida, o peptídeo completamente protegido é removido da resina. Quando a ligação ao suporte de resina é do tipo éster benzílico, a clivagem pode ser efetuada por meio de aminólise com uma alquilamina ou fluoroalquilamina para peptídeos com uma terminação C de alquilamida ou por amonólise com o uso de, por exemplo, amônia/metanol ou amônia/etanol para peptídeos com uma terminação C de amina não substituída, a uma temperatura entre cerca de -10°C e cerca de 50°C, de preferência, a cerca de 25°C, por cerca de 12 a 24 horas, de preferência, cerca de 18 horas. Os peptídeos com uma terminação C de hidróxi podem ser clivados por HF ou outro regime de desproteção fortemente ácida ou por saponificação. Alternativamente, o peptídeo pode ser removido da resina por
95 / 120 transesterificação com o uso de metanol, por exemplo, seguido por aminólise ou saponificação. O peptídeo protegido pode ser purificado por gel de sílica ou HPLC de fase reversa.
[00213] Os grupos protetores de cadeia lateral podem ser removidos do peptídeo tratando-se o produto de aminólise com, por exemplo, HF líquido anidro na presença de anisol ou outro sequestrante de íon de carbônio, tratamento com complexo de HF/piridina, tratamento com tris(trifluoroacetil)boro e ácido trifluoroacético, pela redução com hidrogênio e paládio em carbono ou polivinilpirrolidona ou pela redução com sódio em amônia líquida, de preferência, com HF líquido e anisol a uma temperatura entre cerca de -10°C e 10°C, de preferência, a cerca de 0°C, por cerca de 15 minutos a 2 horas, de preferência, cerca de 1,5 hora.
[00214] Para peptídeos nas resinas do tipo benzidrilamina, as etapas de desproteção e clivagem de resina podem ser combinadas em uma única etapa utilizando HF líquido e anisol conforme descrito acima ou, de preferência, através do uso de coquetéis de clivagem mais suaves. Por exemplo, para a resina de PAL-PEG-PS, um método preferencial é o suo de um protocolo de desproteção dupla em um sintetizador de peptídeo assistido por micro-ondas com o uso de um dos coquetéis de clivagem suaves conhecidos na técnica, tal como TFA/água/tri-iso-propilsilano/3,6-dioxa-1,8-octanoditiol (DODT) (92,5/2,5/2,5/2,5) por 18 min a 38°C cada vez. A clivagem de materiais contendo alquil glicosídeo mostrou sobrevivência da ligação de alquil glicosídeo com o uso de protocolos com razões entre TFA/água na faixa de 9/1 a 19/1. Um coquetel típico é 94% de TFA:2% de EDT; 2% de H2O; 2% de TIS. Tipicamente, o produto completamente desprotegido é precipitado e lavado com Et2O frio (-70°C a 4°C), dissolvido em água desionizada e liofilizado.
[00215] A solução de peptídeo pode ser dessalinizada (por exemplo com resina de troca aniônica BioRad AG-3®) e o peptídeo purificado por
96 / 120 uma sequência de etapas cromotográficas que empregam quaisquer e todos os seguintes tipos: troca iônica em uma resina fracamente básica na forma de acetato; cromatografia de adsorção hidrofóbica em co-poli(estireno- divinilbenzeno) não derivado, tal como Amberlite® XAD; cromatografia de adsorção em gel de sílica; cromatografia de troca iônica em carboximetilcelulose; cromatografia de divisão em Sephadex® G-25, por exemplo; distribuição de contracorrente; cromatografia de fluido supercrítico; e HPLC, especialmente HPLC de fase reversa em embalagem de coluna de fase ligada de octil- ou octadecilsililsílica (ODS).
[00216] São providos no presente documento processos para preparar peptídeos covalentemente modificados descritos no presente documento e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos que compreendem condensar sequencialmente aminoácidos protegidos em um suporte de resina adequado, remover os grupos protetores e o suporte de resina e purificar o produto, para produzir os peptídeos covalentemente modificados. Os processos podem empregar qualquer protocolo para a síntese de peptídeo conhecida na técnica, tal como síntese em fase sólida assistida por micro-ondas. Em algumas modalidades, os peptídeos são ligados a um alquil glicosídeo. EXEMPLO 3. MÉTODO DE OXIDAÇÃO PARA PRODUZIR ÁCIDOS
URÔNICOS
[00217] A uma solução de 1-dodecil β-D-glicopiranosídeo (2,0 g, 5,74 mmol, Carbosynth) em 20 ml de acetonitrila e 20 ml de água deionizada (DI), foi adicionado (diacetoxi-iodo)benzeno (4,4 g, 13,7 mmol, Fluka) e TEMPO (0,180 g, 1,15 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 20 h. A reação foi seguida por espectrometria de massa (por exemplo, LCQ ESI) e, mediante a conclusão, a mistura de reação foi diluída com água e liofilizada até secar para gerar 1,52 g (73% de rendimento bruto) do produto bruto, ácido 1-dodecil β-D-glicurônico, como um pó branco, que foi usado diretamente para a síntese em fase sólida sem purificação adicional. Para
97 / 120 grupos alquila mais longos, 1,4-dioxano foi usado em vez de acetonitrila, e a temperatura foi elevada a tanto quanto 30 ºC. De uma maneira similar, são preparados os ácidos alquil sacarídeo urônico desejados usados para produzir os produtos e reagentes descritos no presente documento.
[00218] De uma maneira similar, mas com o uso, por exemplo, dos 1- octil, 1-decil, 1-undecil, 1-tetradecil, 1-hexadecil e 1-octadecil glicosídeos correspondentes (Anatrace, Maumee, Ohio), foram preparados os ácidos 1- alquil sacarídeo urônico desejados que foram usados para produzir os produtos e reagentes descritos no presente documento. De uma maneira similar, mas com o uso, por exemplo, dos 1-octil, 1-decil, 1-undecil, 1- tetradecil, 1-hexadecil e 1-octadecil β-D-melibiosídeos ou β-D-maltosídeos correspondentes (Anatrace), foram preparados os ácidos 1-alquil dissacarídeo urônico desejados que foram usados para produzir os produtos e reagentes descritos no presente documento. EXEMPLO 4. PREPARAÇÃO DO PRODUTO DE PEPTÍDEO COM AMIDA C-TERMINAL (EU-A387)
[00219] Uma amostra de resina de Fmoc-His-Aib-Gln-Gly-Thr-Phe- Thr-Ser-Asp-Bip-Ser-Lys-Tyr-Leu-Glu-Ser-Lys(Alloc)-amida de Rink (SEQ ID NO: 782) foi preparada pela adição sequencial de aminoácidos Nα-Fmoc- protegidos conforme descrito no Exemplo 1 e desprotegidos na posição de Lys-N-épsilon pela incubação com Pd(PPh3)4 (0,5 equivalente) e DMBA (20 equivalentes) em DMF/CH2Cl2 (1:1) de um dia para o outro no escuro à temperatura ambiente. Após a lavagem por DMF/CH2Cl2, a cadeia lateral de Lys foi acilada com ácido 1’-dodecil β-D-glicurônico em DMF/CH2Cl2 com o uso de DIC/HOBt. A conclusão do acoplamento foi verificada por ninidrina, e o produto foi lavado extensivamente com CH2Cl2.
[00220] A resina de produto foi submetida à desproteção e final e clivagem da resina pelo tratamento com um coquetel de clivagem (94% de TFA, 2% de EDT, 2% de H2O, 2% de TIS) por um período de 240 min à
98 / 120 temperatura ambiente. A mistura foi tratada com Et2O para precipitar o produto e lavada extensivamente com Et2O para render o produto de peptídeo título bruto após a secagem a vácuo.
[00221] A purificação foi executada em duas bateladas por HPLC de fase reversa (C18). O peptídeo bruto foi carregado em uma coluna de HPLC de 4,1x25 cm a uma taxa de fluxo de 15 ml/min (15% de modificador orgânico, tampão de ácido acético) e eluído com um gradiente de 15 a 45% de tampão B em 60 min a 50°C. A fração de produto foi liofilizada para render o produto de peptídeo título com uma pureza de 98% por HPLC analítica (18,6 min; 30 a 60% de CH3CN em 0,1% de TFA)/espectrometria de massa (pico de M+1 = 2.382,14). De uma maneira similar, foram preparados outros produtos de peptídeo da descrição, a caracterização dos quais é mostrada abaixo.
[00222] Os análogos de 1-metila e 1-octila correspondentes do composto título são preparados de uma maneira similar, mas com o uso dos reagentes ácido 1’-metil β-D-glicurônico e ácido 1’-octil β-D-glicurônico (Carbosynth). Os análogos de 1-decila, 1-dodecila, 1-tetradecila, 1- hexadecila, 1-octadecila, 1-eicosila e superiores correspondentes são preparados com o uso dos ácidos monossacarídeo e dissacarídeo urônico correspondentes, preparados conforme descrito acima. Alternativamente, a 1- alquil glicuronila, ou outros análogos acilados urônicos, pode ser preparada por purificação inicial do peptídeo desprotegido ou parcialmente desprotegido seguido pela acilação pelo ácido urônico desejado. EXEMPLO 5. PREPARAÇÃO DOS PRODUTOS DE PEPTÍDEO COM ÁCIDO C-TERMINAL
[00223] Uma amostra de resina de Boc-His(Trt)-Aib-Gln(Trt)-Gly- Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)- Tyr(tBu)-Leu-Asp(OtBu)-Glu(O-Alil)-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(Alloc)-Glu(O- tBu)-Phe-Ile-Lys(Dde)-Trp(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Thr(tBu)-HMPA (SEQ
99 / 120 ID NO: 783) (iniciada a partir de resina de Fmoc-Thr(tBu)-HMPA, substituição 0,45 mmol/g) foi preparada pela adição sequencial de aminoácidos Nα-Fmoc-protegidos conforme descrito no Exemplo 1. As cadeias laterais alil-protegidas de resíduos de Glu e Lys foram desprotegidas por incubação com Pd(PPh3)4 (0,5 equivalente) e DMBA (20 equivalentes) em DMF/CH2Cl2 (1:1) de um dia para o outro no escuro à temperatura ambiente. A resina foi lavada com 0,5% de DIEA em DMF (duas vezes), 0,5% de dietilditiocarbamato de sódio em DMF (duas vezes) e DMF/CH2Cl2 até uma resina amarelo claro ter sido obtida. Uma lactama de cadeia lateral foi formada acoplando-se os resíduos de Glu e Lys a DIC/HOBT (5 equivalentes) em DMF. A reação foi verificada quanto à completeza com ninidrina e reacoplada se necessário. Após a lavagem com DMF/CH2Cl2, a cadeia lateral de Lys foi desprotegida pela incubação com 5% de hidrato de hidrazina em DMF (10 equivalentes) duas vezes, em cada caso, por 15 min. Após a lavagem com DMF/CH2Cl2, o grupo amino de cadeia lateral do resíduo de Lys desprotegido foi reagido com ácido 1’-tetradecil β-D-melibiourônico em DMF/CH2Cl2 com o uso de DIC/HOBt. A conclusão do acoplamento foi verificada por ninidrina, e o produto foi lavado extensivamente com CH2Cl2. Qualquer acoplamento que não foi concluído por ninidrina foi reexecutado. Em geral, 10 a 12 g da resina de produto de peptídeo foram obtidos a partir de uma síntese de 2 mmol.
[00224] A resina de produto foi submetida à desproteção e final e clivagem da resina pelo tratamento com um coquetel de clivagem (94% de TFA, 2% de EDT, 2% de H2O, 2% de TIS) por um período de 240 min à temperatura ambiente. A mistura foi tratada com Et2O para precipitar o produto e lavada extensivamente com Et2O para render o produto de peptídeo título bruto após a secagem a vácuo. Em geral, 5 a 8 g do produto de peptídeo bruto foram obtidos.
[00225] A purificação foi executada em duas bateladas por HPLC de
100 / 120 fase reversa (C18). O peptídeo bruto (1 a 1,5g) foi carregado em uma coluna de HPLC de 4,1x25 cm a uma taxa de fluxo de 15 ml/min (15% de modificador orgânico, 0,1% de tampão de TFA) e eluído com um gradiente de 35 a 55% de tampão B em 70 min à temperatura ambiente. A repurificação das frações menos puras foi feita para as frações com uma pureza de > 70%. A fração de produto foi liofilizado para render EU-A1077 com uma pureza de 98,7% por HPLC analítica (10,3 min, 45 a 75% de CH3CN em 0,1% de TFA)/espectrometria de massa (1.317,67, +3 carregados; 1.976,13, +2 carregados; peso molecular 3.950,44). De uma maneira similar, foram preparados outros produtos de peptídeo da descrição, cuja caracterização é mostrada abaixo.
[00226] Os análogos de 1-metila e 1-octila correspondentes do composto título são preparados de uma maneira similar, mas com o uso dos reagentes ácido 1’-metil β-D-glicurônico e ácido 1’-octil β-D-glicurônico (Carbosynth). De uma maneira similar, mas com o uso dos ácidos 1-octil, 1- decil, 1-undecil, 1-tetradecil, 1-hexadecil e 1-octadecil β-D-glucourônicos correspondentes (preparados conforme descrito acima), foram preparados os produtos de peptídeo da descrição. De uma maneira similar, mas com o uso dos ácidos 1-octil, 1-decil, 1-undecil, 1-tetradecil, 1-hexadecil e 1-octadecil β- D-melibiourônicos ou ácidos β-D-maltourônicos correspondentes (preparados conforme descrito acima), foram preparados os produtos de peptídeo da descrição. Alternativamente, a 1-alquil glicuronila, ou outros análogos acilados urônicos, pode ser preparada por purificação inicial do peptídeo desprotegido ou parcialmente desprotegido seguido pela acilação pelo reagente de ácido urônico desejado. Alternativamente, a amonólise do intermediário ligado à resina de HMPA rende a amida C-terminal correspondente.
[00227] A análise e caracterização foram feitas por HPLC/espectrometria de massa em modo de íon positivo com o uso dos
101 / 120 gradientes de eluente dados na tabela abaixo. Número do HPLC Peso Molecular Esperado Peso Molecular Encontrado composto (min; eluição) EU-A387 2.379,66 2.380,14 18,6[b] EU-A388 2.393,69 2.393,74 16,0 [a] EU-A391 2.317,62 2.318,26 11,2 [b] EU-A455 2.988,36 2.988,00 11,5 [b] EU-A474 2.570,86 2.570,54 11,3 [b] EU-A478 2459,75 2.459,74 11,1 [b] EU-A484 2.544,86 2.545,06 9,6 [b] EU-A501 2.904,2 2.903,34 7,9 [b] EU-A502 2.776,07 2.776,14 8,0 [b] EU-A503 2.704,98 2.704,40 8,0 [b] EU-A504 2.548,80 2.548,00 9,1 [b] EU-A505 2.392,61 2.392,40 10,5 [b] EU-A506 2.305,53 2.305,06 10,7 [b] EU-A507 3.763,23 3.762,66 9,0 [b] EU-A521 2.303,56 2.303,60 8,2 [c] EU-A522 2.315,60 2.315,60 14,2 [d] EU-A523 2.615,94 2.616,00 8,1 [b] EU-A524 2.459,75 2.459,74 12,7 [d] EU-A525 2.459,75 2.459,06 6,0 [c] EU-A526 2.473,75 2.473,60 12,7 [d] EU-A527 2.390,64 2.390,40 14,6 [d] EU-A529 2.546,83 2.546,80 9,5 [b] EU-A531 2.546,83 2.546,80 9,5 [b] EU-A532 2.559,00 2.558,66 9,6 [b] EU-A533 2.560,96 2.560,66 9,5 [b] EU-A534 2.544,99 2.544,94 9,7 [b] EU-A535 2.573,05 2.574,00 12,0 [b] EU-A536 2.602,96 2.603,46 14,3 [b] EU-A538 2.516,99 2.516,40 10,3 [b] EU-A539 2.657,20 2.656,80 10,8 [b] EU-A540 2.685,20 2.684,94 9,8 [c] EU-A541 2.713,20 2.712,80 13,0 [c] EU-A544 2.631,94 2.632,26 10,8 [b] EU-A546 2.687,94 2.688,80 9,1 [c] EU-A549 2.388,67 2.388,66 6,3 [e] EU-A551 2.444,67 2.445,20 11,4 [e] EU-A552 2.472,67 2.473,14 10,7 [f] EU-A554 2.560,86 2.560,40 10,3 [c] EU-A556 2.616,86 2.616,40 11,7 [e] EU-A557 2.644,86 2.645,74 10,4 [f] EU-A560 2.570,86 2.571,06 8,3 [c] EU-A562 2.62.6,86 2.62.6,66 9,9 [e] EU-A563 2.654,86 2.655,06 8,7 [f] EU-A565 2.542,80 2.542,54 9,5 [c] EU-A567 2.598,80 2.599,06 12,0 [e] EU-A568 2.626,80 2.626,54 10,1 [f]
[00228] Gradientes de HPLC em 0,1% de TFA: [a] 35 a 65% de CH3CN ao longo de 30 min [b] 30 a 60% de CH3CN ao longo de 20 min [c] 35 a 65% CH3CN ao longo de 20 min
102 / 120 [d] 25 a 55% CH3CN ao longo de 20 min [e] 40 a 70% CH3CN ao longo de 20 min [f] 45 a 75% CH3CN ao longo de 20 min HPLC foi executada em uma coluna analítica Phenomenex Luna C18 de 5 mícrons 250x4,6 mm.
[00229] A seguinte tabela lista outros compostos sintetizados e analisados conforme descrito acima: Número do Peso Molecular HPLC Peso Molecular Esperado composto Encontrado (min; eluição) EU-A570 2.656,16 2.656,00 10,4 [b] EU-A571 2.684,16 2.683,34 11,2 [c] EU-A575 2.670,16 2.670,94 11,8 [b] EU-A576 2.698,16 2.697,20 11,2 [c] EU-A580 2.668,20 2.667,20 12,3 [b] EU-A581 2.696,20 2.695,46 11,1 [c] EU-A592 2.724,20 2.724,58 9,9 [e] EU-A595 2.682,20 2.682,40 9,7 [c] EU-A596 2.710,20 2.710,46 10,4 [c] EU-A597 2.738,20 2.738,18 10,9 [e] EU-A721 2.461,85 2.461,74 10,3 [b] EU-A722 2.475,85 2.475,34 10,8 [b] EU-A723 2.459,88 2.459,86 7,7 [c] EU-A724 2.473,88 2.473,34 11,1 [b] EU-A725 2.471,92 2.472,00 10,8 [b] EU-A726 2.557,03 2.556,80 11,0 [b] EU-A727 2.485,92 2.485,74 10,9 [b] EU-A728 2.513,92 2.513,86 10,6 [c] EU-A729 2.541,92 2.541,86 9,7 [e] EU-A730 2.569,92 2.569,74 9,4 [f] EU-A731 2.425,88 2.425,32 10,6 [d] EU-A732 2.476,95 2.476,40 9,4 [c] EU-A733 2.381,83 2.382,02 11,4 [b] EU-A734 2.616,09 2.616,18 11,4 [b] EU-A750 1.611,89 1.611,56 9,4 [c] EU-A751 1.625,89 1.625,35 9,7 [c] EU-A752 1.709,93 1.709,41 11,7 [g] EU-A753 1.637,84 1.637,46 12,5 [b] EU-A754 1.651,84 1.651,18 9,9 [c] EU-A755 1.711,93 1.711,46 10,3 [h] EU-A756 1.671,98 1.671,37 9,8 [e] EU-A757 1.770,02 1.769,17 14,9 [g] EU-A770 3.333,61 3.334,65 9,5 [b] EU-A771 3.678,25 3.677,96 11,3 [c] EU-A772 3.762,25 3.763,35 14,9 [e] EU-A773 3.790,31 3.791,31 11,1 [f] EU-A774 3.475,74 3.477,15 10,5 [d] EU-A775 3.820,38 3.821,52 10,4 [c] EU-A776 3.904,38 3.905,76 10,2 [f] EU-A777 3.932,44 3.933,69 9,7 [f] EU-A792 3.793,43 3.793,52 8,9 [f] EU-A793 3.821,43 3.821,60 10,8 [f] EU-A794 3.849,43 3.848,78 10,5 [g]
103 / 120 Número do Peso Molecular HPLC Peso Molecular Esperado composto Encontrado (min; eluição) EU-A945 3.777,18 3.777,54 12,2 [e] EU-A948 3.861,18 3.862,14 13,0 [f] EU-A993 3.759,22 3.759,00 9,3 [f] EU-A994 3.787,22 3.787,44 11,4 [f] EU-A995 3.815,22 3.815,52 14,5 [g] EU-A996 3.843,22 3.843,12 12,3 [g] EU-A999 3.935,35 3.934,66 13,4 [e] EU-A1011 3.854,21 3.854,38 14,2 [c] EU-A1017 3.896,26 3.895,77 12,3 [c] EU-A1023 3.921,35 3.921,15 10,5 [e] EU-A1024 3.949,42 3.950,22 5,8 [g] EU-A1025 3.977,47 3.976,84 7,96 [g] EU-A1026 4.005,55 4.004,64 12,8 [g] EU-A1029 3.939,31 3.939,06 10,7 [e] EU-A1032 4.023,51 4.025,22 13,9 [f] EU-A1035 3.840,21 3.838,21 9,8 [e] EU-A1041 3.882,26 3.880,50 9,6 [e] EU-A1044 3.966,46 3.965,46 12,6 [f] EU-A1167 3.731,15 3.731,42 8,9 [f] EU-A1168 3.745,15 3.745,20 10,8 [i] EU-A1173 3.978,49 3.977,00 12,9 [f] EU-A1576 3.922,37 3.922,08 10,2 [e] EU-A1577 3.950,44 3.949,95 10,3 [f] EU-A1581 3.923,35 3.921,21 13,1 [j] EU-A1587 3.949,42 3.949,92 9,6 [f] EU-A1588 3.977,47 3.977,97 8,3 [f] EU-A1589 4.005,55 4.005,18 9,2 [g] EU-A1590 3.922,37 3.923,01 12,5 [j] EU-A1591 3.922,33 3.922,80 12,4 [j] EU-A1592 3.923,35 3.921,74 13,0 [j] EU-A1595 3.914,38 3.915,45 11,5 [e] EU-A1596 3.942,43 3.942,48 7,1 [g] EU-A1598 3.887,29 3.886,80 12,4 [j] EU-A1599 3.888,31 3.888,00 12,5 [j] EU-A1601 4.049,52 4.051,35 10,1[e] EU-A1602 4.077,59 4.075,41 12,4 [n] EU-A1606 4.050,46 4.051,77 10,4[e] EU-A1607 4.078,53 4.077,99 12,7 [n] EU-A1611 4.050,54 4.051,44 10,1[e] EU-A1612 4.078,61 4.078,86 12,3 [e] EU-A1617 4.079,55 4.079,55 13,0 [j] EU-A1620 4.180,59 4.181,49 11,0 [e] EU-A1622 4.208,66 4.208,31 12,9 [j] EU-A1627 4.207,64 4.208,28 12,8 [j] EU-A1634 4.035,78 4.037,34 13,9 [e] EU-A1635 4.063,78 4.065,54 9,5 [g] EU-A1639 4.169,54 4.167,99 7,7 [k] EU-A1645 4.183,76 4.182,60 13,2 [e] EU-A1646 4.211,99 4.213,32 23,5 [l] EU-A1647 4.239,74 4.239,21 12,2 [m] EU-A1651 4.345,89 4.345,41 10,8 [o] EU-A1679 3.704,17 3.704,85 9,0 [e] EU-A1680 3.732,17 3.732,45 7,0 [f] EU-A1681 3.760,24 3.761,31 8,8 [f] EU-A1682 3.788,24 3.788,52 11,9 [f] EU-A1710 3.859,32 3.859,71 6,4 [f] EU-A1711 3.887,39 3.888,12 8,0 [f]
104 / 120 Número do Peso Molecular HPLC Peso Molecular Esperado composto Encontrado (min; eluição) EU-A1712 3.915,39 3.915,72 12,1 [e] EU-A1713 3.943,39 3.943,32 11,2 [f] EU-A1716 3.860,26 3.860,49 9,8 [e] EU-A1717 3.888,33 3.889,23 8,4 [f] EU-A1718 3.916,33 3.916,98 12,6 [i] EU-A1719 3.944,33 3.944,31 9,0 [g] EU-A1722 3.989,37 3.990,03 6,1 [f] EU-A1723 4.017,44 4.017,54 7,8 [f] EU-A1730 3.916,35 3.917,76 7,8 [f] EU-A1734 3.726,10 3.726,63 14,0 [e] EU-A1735 3.754,10 3.754,26 12,9 [f] EU-A1739 3.949,38 3.950,31 13,0 [f] EU-A1740 3.977,43 3.978,30 8,9 [g] EU-A1745 3.815,18 3.815,10 13,8 [g] EU-A1784 3.915,35 3.917,31 11,0 [f] EU-A1785 3.943,35 3.944,40 14,6 [i] EU-A1787 3.916,25 3.917,46 9,1 [g] EU-A1788 3.944,29 3.945,45 10,8 [f] EU-A1841 3.788,20 3.789,36 6,6 [f] EU-A1842 3.816,20 3.817,80 11,3 [m] EU-A1847 3.727,08 3.728,46 10,9 [f] EU-A1848 3.755,08 3.756,96 10,2 [g]
[00230] Gradientes de HPLC em 0,1% de TFA: [a] 35 a 65% de CH3CN ao longo de 30 min [b] 30 a 60% de CH3CN ao longo de 20 min [c] 35 a 65% CH3CN ao longo de 20 min [d] 25 a 55% CH3CN ao longo de 20 min [e] 40 a 70% CH3CN ao longo de 20 min [f] 45 a 75% CH3CN ao longo de 20 min [g] 50 a 80% CH3CN ao longo de 20 min [h] 10 a 40% CH3CN ao longo de 20 min [i] 30 a 90% CH3CN ao longo de 20 min [j] 10 a 90% CH3CN ao longo de 20 min [k] 30 a 95% CH3CN ao longo de 20 min [l] 30 a 60% CH3CN ao longo de 30 min [m] 20 a 100% CH3CN ao longo de 20 min [n] 20 a 80% CH3CN ao longo de 20 min [o] 30 a 50% CH3CN ao longo de 20 min HPLC foi executada em uma coluna analítica Phenomenex
105 / 120 Luna C18 de 5 mícrons 250x4,6 mm. EXEMPLO 6. ESTABILIDADE IN VITRO DOS PRODUTOS DE
PEPTÍDEO EM PLASMA HUMANO
[00231] Um mg/ml de solução de estoque foi preparado em DMSO/CH3CN (1/1). Soluções de trabalho padrão em 50% de CH3CN foram preparadas com a solução de estoque. As concentrações das soluções de trabalho foram 20, 50, 100, 200, 500, 1.000, 2.000, 5.000, 10.000 e 20.000 ng/ml. Dez µl das soluções de trabalho foram adicionados a 90 µl de plasma em branco, e a mistura foi submetida a vórtice. 300 µl de solução padrão interna (verapamil, 20 ng/ml em 100% de CH3CN) foram adicionados, e a mistura foi submetido a vórtice e centrifugada. O sobrenadante foi transferido para uma placa de injeção de HPLC para carregamento na coluna de HPLC. As amostras padrão estavam a 2, 5, 10, 20, 50, 100, 200, 500, 1.000 e 2.000 ng/ml. As amostras QC estavam a 5 (LQC), 50 (MQC) e 500 (HQC) ng/ml. Para o estudo de estabilidade de plasma, as amostras de EU-A993, EU-A1023 e GLP-1(7-36) humano (Bachem) foram preparadas em plasma humano (cerca de 6 a 20 ng/ml ou concentrações similares acima do limite de quantificação) e amostradas nos pontos de tempo t = 0, 0,5, 1, 2, 4 e 8 h durante a incubação a 30°C. As amostras foram tratadas com solução padrão interna (100% de CH3CN) conforme descrito acima a fim de precipitar os peptídeos, e os sobrenadantes foram carregadas em uma placa de injeção para carregamento na coluna de HPLC para a quantificação por espectrometria de massa.
[00232] Os instrumentos usados foram: Espectrômetro de Massa API- 4000, ESI positivo, varredura MRM; e Autoamostrador Shimadzu HPLC/CTC com coluna ACE C8 (2,1x50 mm, 5 µm), fase móvel A: 0,1% de ácido fórmico e NH4OAc 5 mM em água, fase móvel B: 0,1% de ácido fórmico em CH3CN, 10 µl de amostra foram injetados.
[00233] Uma plotagem do sinal de composto (quantidade) versus
106 / 120 tempo mostra a clivagem essencialmente completa de GLP-1(7-36) em 4 horas, mas sem nenhuma alteração detectável na quantidade de produtos de peptídeo intactos no plasma humano ao longo de um período de pelo menos 8 horas (Figura 8). Ambos os produtos de peptídeo exibiram proteção contra proteólise e uma meia-vida plasmática longa no ensaio in vitro. EXEMPLO 7. ENSAIO DE CÉLULA DA ATIVIDADE DOS PRODUTOS DE PEPTÍDEO EM RECEPTORES DE GLP-1 E GLUCAGON
[00234] Os compostos foram pesados precisamente em uma quantidade de cerca de 1 mg e avaliados em ensaios celulares padrão (Cerep SA). A leitura foi a quantidade de cAMP gerada nas células tratadas com os compostos de teste, no modo de agonista ou antagonista. O ensaio usado foi a estimulação dos níveis de cAMP em ensaios celulares de glucagon (humano, clonado em células CHO) e GLP-1 (linhagem celular murina). Os ensaios são descritos em Chicchi et al., J. Biol. Chem., 272:7.765 a 7.769 (1997) e Runge et al., Br. J. Pharmacol., 138:787 a 794 (2003).
[00235] Para EU-A391, a resposta celular de GCGR não mudou, e a resposta celular de GLP1R se elevou abruptamente com uma EC50 de 420 nM. EC50 EC50 R de Glucagon Número do composto 1-Alquila R de GLP-1 (nM) (nM) EU-A391 1-dodecila 420 n.c. EU-A455 1-dodecila 59 770 EU-A474 1-dodecila 3.000 n.c. EU-A478 1-dodecila n.c. n.c. EU-A484 1-dodecila n.c. n.c. EU-A501 1-dodecila 20.000 12.000 EU-A502 1-dodecila 9.400 n.c. EU-A503 1-dodecila n.c. n.c. EU-A504 1-dodecila 3.100 1.100 EU-A505 1-dodecila 8.500 6.100 EU-A506 1-dodecila 4.600 1.300 EU-A507 1-dodecila 18 1 EU-A521 1-dodecila n.c. n.c. EU-A522 1-dodecila n.c. 9.000 EU-A523 1-dodecila n.c. n.c. EU-A524 1-dodecila n.c. n.c. EU-A525 1-dodecila n.c. n.c. EU-A526 1-dodecila n.c. n.c. EU-A527 1-dodecila n.c. 5.000 EU-A529 1-dodecila n.c. 7.000 EU-A531 1-dodecila 2.100 1.100 EU-A532 1-dodecila 5.000 2.600
107 / 120 EC50 EC50 R de Glucagon Número do composto 1-Alquila R de GLP-1 (nM) (nM) EU-A533 1-dodecila 770 780 EU-A534 1-dodecila 290 1.900 EU-A535 1-tetradecila §4.800 2.100 EU-A536 1-hexadecila >10.000 4.400 EU-A538 1-dodecila 270 n.c. EU-A539 1-dodecila 860 2.300 EU-A540 1-tetradecila n.c. 8.800 EU-A541 1-hexadecila 800 5.000 n.c. significa EC50 não calculável § significa superagonista
[00236] Uma série adicional de ensaios celulares foi executada com ensaios celulares padrão (ensaios DiscoveRx, LeadHunter) com o uso da leitura da estimulação de cAMP ou ativação de arrestina. Os compostos foram pesados precisamente em uma quantidade de cerca de 1 mg e enviados para DiscoveRx para diluição e ensaio. Os ensaios celulares usaram receptor de glucagon humano clonado em células CHO e receptor de GLP-1 humano clonado em células CHO. EC50 R de EC50 cAMP EC50 Arrestina EC50 cAMP Arrestina Número do composto R de GLP-1 R de GLP-1 R de Glucagon Glucagon (nM) (nM) (nM) (nM) EU-A507 0,01 9 0,02 100 EU-A534 87 1.100 EU-A538 55 3.500 EU-A750 >1.000 >1.000 EU-A751 >1.000 >1.000 EU-A752 146 >1000 EU-A753 >1000 >1000 EU-A754 360 >1000 EU-A755 486 471 EU-A756 611 >1000 EU-A757 6,7 >1000 EU-A770 0,01 2,3 0,5 >100 EU-A771 0,07 14,2 0,4 >100 EU-A772 0,07 8,4 5,4 >100 EU-A773 0,08 8,3 1,5 >100 EU-A774 0,009 6,8 0,15 22,7 EU-A775 0,16 17 0,3 33,6 EU-A776 1,2 >100 6,5 >100 EU-A777 0,1 34,5 0,6 73 EU-A792 < 0,05 27,9 <0,05 EU-A793 < 0,05 23,8 <0,05 EU-A794 0,05 59,4 0,18 EU-A945 < 0,05 9,4 0,06 EU-A948 0,08 25,6 9,1 EU-A992 0,009 0,019 EU-A993 < 0,05 12,3 <0,05 EU-A994 0,05 10,2 <0,05 EU-A995 0,035 59,5 0,15
108 / 120 EC50 R de EC50 cAMP EC50 Arrestina EC50 cAMP Arrestina Número do composto R de GLP-1 R de GLP-1 R de Glucagon Glucagon (nM) (nM) (nM) (nM) EU-A996 0,05 >100 0,87 EU-A999 0,05 0,015 EU-A1011 0,16 0,51 EU-A1017 0,44 0,10 EU-A1023 0,028 0,035 EU-A1024 0,005 0,035 EU-A1025 0,008 0,240 EU-A1026 0,034 0,486 EU-A1029 0,019 0,06 EU-A1032 0,03 5,4 EU-A1035 0,02 0,19 EU-A1041 0,02 0,13 EU-A1044 0,07 0,57 EU-A1167 0,013 0,019 EU-A1168 0,07 0,14 EU-A1173 0,021 0,463 EU-A1576 0,032 0,070 EU-A1577 0,007 0,069 EU-A1578 0,008 0,355 EU-A1581 0,086 1,032 EU-A1586 0,029 0,107 EU-A1587 0,081 0,253 EU-A1588 0,023 0,043 EU-A1589 0,236 0,655 EU-A1590 0,094 0,343 EU-A1591 0,073 0,286 EU-A1592 0,25 0,78 EU-A1594 0,011 0,068 EU-A1595 0,021 0,113 EU-A1596 0,493 1,230 EU-A1598 0,026 0,199 EU-A1599 0,061 0,317 EU-A1601 0,007 0,048 EU-A1602 0,035 0,162 EU-A1606 0,017 0,058 EU-A1607 0,022 0,126 EU-A1611 0,015 0,16 EU-A1612 0,011 0,059 EU-A1616 0,079 0,204 EU-A1617 0,119 0,598 EU-A1620 0,051 0,24 EU-A1622 0,774 2,08 EU-A1627 0,304 0,705 EU-A1633 0,008 0,053 EU-A1634 0,052 0,493 EU-A1635 0,071 1,983 EU-A1639 0,385 2,292 EU-A1645 0,029 0,091 EU-A1646 0,029 0,332 EU-A1647 0,113 1,895 EU-A1651 0,033 0,149 EU-A1679 0,009 0,14 EU-A1680 0,026 0,114 EU-A1681 0,009 0,132 EU-A1682 0,21 1,263
109 / 120 EC50 R de EC50 cAMP EC50 Arrestina EC50 cAMP Arrestina Número do composto R de GLP-1 R de GLP-1 R de Glucagon Glucagon (nM) (nM) (nM) (nM) EU-A1710 0,026 0,065 EU-A1711 0,009 0,026 EU-A1712 0,037 0,175 EU-A1713 0,308 2,509 EU-A1716 0,013 0,032 EU-A1717 0,011 0,035 EU-A1718 0,043 0,097 EU-A1719 0,095 0,746 EU-A1722 0,006 0,012 EU-A1723 0,028 0,062 EU-A1729 0,006 0,558 EU-A1730 0,008 1,172 EU-A1734 0,006 0,387 EU-A1735 0,008 0,931 EU-A1739 0,056 2,223 EU-A1740 0,077 3,825 EU-A1745 1,017 10. EU-A1784 0,048 1,907 EU-A1785 0,239 5,145 EU-A1787 0,246 10,0 EU-A1788 0,232 10,0 EU-A1841 0,316 0,475 EU-A1842 1,209 2,109 EU-A1847 0,032 1,95 EU-A1848 0,060 3,064 EXEMPLO 8. ATIVIDADE DE REDUÇÃO DE GLICOSE DOS PRODUTOS DE PEPTÍDEO EM CAMUNDONGOS DB/DB
[00237] Os 60 camundongos fêmeas db/db B6BKS (D) Leprdb/J (cepa 000697) para esse estudo tinham cerca de 8 a 9 semanas de idade na chegada (Jackson Laboratory, Bar Harbor, Maine). Os camundongos foram randomizados por peso, e dois grupos de tratamento de 8 camundongos fêmeas foram receberam o composto de teste EU-A994, EU-A995 ou EU- A1026 a um nível de dose de 100 ou 300 nmol/kg. Um grupo de 8 camundongos fêmeas serviu como o controle de veículo e receberam o veículo, 0,2% de BSA em solução salina, pH 7,4. Um grupo adicional de 8 camundongos fêmeas recebeu o composto de controle positivo, liraglutida, a um nível de dose de 50 nmol/kg. Os compostos de teste, veículo e composto de controle positivo foram subcutaneamente injetados a um volume de dose de 6 ml/kg no dia 1 a cerca de 0, 7 e 24 horas.
[00238] As observações clínicas foram conduzidas no recebimento,
110 / 120 antes da randomização, e diariamente dos dias 1 a 5. Os pesos corporais foram medidos e registrados no recebimento, antes da randomização, e diariamente dos dias 1 a 5. O consumo de alimento foi medido e registrado diariamente dos dias 1 a 5. As amostras de sangue para análise de glicose foram coletadas pré-estudo (dia -3) e em 0, 1, 2, 4, 8, 10, 24, 48, 72 e 96 horas após a primeira dose no dia 1. No término do estudo, todos os animais foram eutanizados, e as carcaças foram descartadas sem avaliação adicional.
[00239] Alterações de peso corporal significativas foram notadas para liraglutida e EU-A994 de alta dose e EU-A1026 de alta dose nos dias 2 e 3 e para EU-A1026 de baixa dose nos dias 3 e 4. Em relação ao consumo de alimentos, os animais tratados com liraglutida foram significativamente diferentes do veículo nos dias 1 e 2, e EU-A994 de alta dose no dia 1, EU- A995 de baixa dose nos dias 1 e 2, EU-A994 de alta dose no dia 1, e EU- A1026 de baixa e alta dose no dia 2 foram significativamente diferentes da liraglutida. Os níveis de glicose para liraglutida em 10 h e para EU-A994 de alta dose em 10 e 24 h foram significativamente diferentes do veículo. De uma maneira similar, outros produtos de peptídeo foram testados quanto aos seus efeitos na glicose sanguínea, peso corporal e consumo de alimentos. Dose Camundongos db/db - Glicose Sanguínea Média (mg/dl) Composto (nmol/kg) 0h 10 h 24 h 48 h liraglutida 50 595 265 347 377 EU-A994 300 554 242 209 385 EU-A995 300 503 471 493 527 EU-A1026 300 531 399 438 505 liraglutida 50 528 286 404 477 EU-A993 250 503 305 324 426 EU-A995 250 539 584 548 546 EU-A1023 50 507 310 355 375 EU-A1023 250 508 264 194 375 liraglutida 50 442 174 244 439 EU-A992 250 405 104 112 130 EU-A1167 250 379 171 117 113 EU-A1168 250 380 133 169 164
[00240] A Figura 9 mostra que EU-A992 (250 nmol/kg), EU-A1167 (250 nmol/kg) e EU-A1168 (250 nmol/kg) injetados subcutaneamente em t = 0 e 7 h reduziram o nível de glicose sanguínea elevado dos camundongos à
111 / 120 faixa normal por cerca de 72 h no modelo de camundongo diabético db/db. EXEMPLO 9. ATIVIDADE DOS PRODUTOS DE PEPTÍDEO EM
CAMUNDONGOS DIO
[00241] Cinquenta camundongos machos C57BL/6J com obesidade induzida por dieta (DIO) (JAX Labs) foram recebidos com 6 semanas de idade. Os camundongos tiveram as orelhas entalhadas para identificação e foram alojados individualmente em gaiolas de policarbonato positivamente ventiladas com ar filtrado por HEPA a uma densidade de 5 camundongos por gaiola. A sala do animal foi acendida inteiramente com iluminação fluorescente artificial, com um ciclo de luz/escuro de 12 h controlado. As faixas de temperatura e umidade relativa normais nas salas de animais foram 22 ± 4°C e 50 ± 15%, respectivamente. Água potável filtrada, acidificada a um pH de 2,8 a 3,1, e uma dieta com alto teor de gordura (Research Diets D12492, 60% em kcal) foram providas à vontade.
[00242] Após uma aclimatização de 2 semanas, os 50 camundongos foram randomizados em grupos (n = 10): Grupo 1: tratado com veículo; Grupo 2: EU-A994 de baixa dose; Grupo 3: EU-A594 de alta dose; Grupo 4: EU-A1024 de baixa dose; e Grupo 5: EU-A1024 de alta dose. Os camundongos foram dosados subcutaneamente nos dias 1 (em 0 e 7 h), 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21 e 24. As observações de peso corporal e lado da gaiola foram registradas diariamente. A ingestão de alimentos e água foi registrada semanalmente. Os camundongos passaram por medições de RMN para a determinação da gordura corporal total e composição magra nos dias 1 (pré- dose) e 26. No dia 26, os camundongos foram submetidos a jejum de um dia para o outro para um teste de tolerância à glicose. No dia seguinte, a primeiras amostra sanguínea foi coletada por meio de um corte na cauda (t = 0). Os camundongos receberam, então, um bolus de 1,0 g/kg de glicose. As amostras sanguíneas foram obtidas por meio de um corte na cauda em 0, 15, 30, 60, 90 e 120 min após a dosagem de glicose, e a glicose plasmática foi
112 / 120 imediatamente determinada com o uso de um glicosímetro.
[00243] Os camundongos foram sacrificados no dia 28. O sangue terminal foi processado a soro/plasma, e as alíquotas foram enviadas para análise do perfil de glicose, insulina e lipídio. A composição corporal foi determinada por RMN. EU-A1024 reduziu a excursão de glicose no teste de tolerância à glicose oral (OGTT), reduziu a secreção de insulina, mas aumentou a secreção de insulina dependente de glicose, reduziu o ganho de peso (Figura 10) e reduziu a massa gorda com pouco efeito na massa magra (Figura 11). EXEMPLO 10. EFICÁCIA DE SP-1373 EM UM MODELO DE
CAMUNDONGO DE NASH
[00244] Em um modelo de camundongo de DIO-NASH provado por biópsia, SP-1373, um conjugado de peptídeo-tensoativo e um agonista de receptor de GLP-1/receptor de glucagon duplo demonstraram medidas de resultado na histopatologia do fígado e parâmetros metabólicos superiores em comparação à semaglutida (um agonista de GLP-1) e elafibranor (um agonista de PPAR-α/δ). A esteato-hepatite não alcoólica (NASH) foi induzida em camundongos machos C57BL/6JRj (cerca de 20 g, 5 semanas de idade na chegada, 37 semanas de idade no início do estudo) alimentando os mesmos com uma dieta AMLN que compreende 40% de gordura (18% de gordura trans), 2% de colesterol e 40% de carboidratos (20% de frutose) por 32 semanas antes do início do estudo e durante o período do estudo.
[00245] Todos os camundongos que entram no estudo foram estratificados com base na pré-biópsia do fígado na semana -3. Apenas camundongos com uma pontuação de fibrose ≥ 1 e uma pontuação de esteatose ≥ 2 foram incluídos no estudo. Os camundongos estratificados foram randomizados em grupos de tratamento com base na quantificação de colágeno do fígado tipo 1 alfa 1 (col1α1) na semana -3. Os grupos do estudo de NASH foram: 1) veículo (0,05% de Tween 80, Na2HPO4 50 mM, pH 8)
113 / 120 dado subcutaneamente (SC) uma vez ao dia (QD) por 12 semanas (n = 12); 2) baixa dose (5 nmol/kg) de SP-1373 dada SC QD por 12 semanas (n = 11); 3) alta dose (10 nmol/kg) de SP-1373 dada SC QD por 12 semanas (n = 11); 4) 78 μmol/kg de elafibranor dado oralmente (PO) QD por 12 semanas (n = 12); e 5) 10 nmol/kg de semaglutida dados SC QD por 12 semanas (n = 12).
[00246] O peso corporal foi medido diariamente pelo período inteiro do estudo. A ingestão de alimento foi medida diariamente pelos primeiros 14 dias e, então, semanalmente até o final do estudo. A varredura do corpo inteiro EchoMRI foi realizada na semana 11. No final do estudo, foram medidos os níveis de plasma de alanina transaminase (ALT), aspartato transaminase (AST), γ-glutamiltransferase (GGT), triglicerídeos (TG) e colesterol total (TC), níveis hepáticos de TG, TC, col1α1 e galectina-3, os níveis de expressão de uma ampla variedade de mRNAs no fígado, e o peso do fígado, e foram realizadas a biópsia/necrópsia do fígado para avaliar a esteatose, inflamação, baloneamento e fibrose do fígado.
[00247] Para os ensaios de sangue e plasma, as amostras sanguíneas foram coletadas em tubos heparinizados e o plasma foi separado e armazenado a -80°C até a análise. Os níveis de ALT, AST, GGT, TG e TC foram medidos com o uso de kits comerciais (Roche Diagnostics, Alemanha) e do autoanalisador Cobas™ C-501 de acordo com as instruções do fabricante.
[00248] Para os ensaios de tecido hepático, o teor de triglicerídeos e colesterol no fígado foi medido com o uso dos reagentes de Triglicerídeo e Colesterol (nº de catálogo 22-045-795 e nº de catálogo 22-045-780, respectivamente, Roche Diagnostics, Alemanha) e o autoanalisador Cobas™ C-501. O tecido hepático homogeneizado foi aquecido até 80 a 100°C duas vezes e centrifugado em uma microcentrífuga, e o teor de triglicerídeos e colesterol no sobrenadante resultante foi medido.
[00249] A composição corporal dos camundongos foi avaliada por um
114 / 120 analisador de composição corporal EchoMRI 3-1 (EchoMRI, EUA). Os camundongos não anestesiados foram colocados em um tubo plástico dentro do digitalizador de IRM por cerca de 80 segundos. A composição corporal foi expressa como massa de tecido gorduroso, massa de tecido isenta de gordura (massa de tecido magro) e água.
[00250] Para a biópsia do fígado, os camundongos foram anestesiados por inalação de isoflurano (2 a 3%). Uma pequena incisão abdominal foi feita na linha média, e o lóbulo lateral esquerdo do fígado foi exposto. Uma cunha em formato de cone do tecido hepático (cerca de 50 mg) foi extirpada da porção distal do lóbulo e fixada em 10% de formalina tamponada neutra (4% de formaldeído) para histologia. A superfície de corte do fígado foi instantaneamente eletrocoagulada com o uso de coagulação bipolar (unidade eletrocirúrgica ERBE VIO 100). Após a pré-biópsia, o fígado foi retornado à cavidade abdominal, a parede abdominal foi suturada, e a pele foi fechada com grampos. Para a recuperação pós-operativa, os camundongos receberam carprofeno (5 mg/kg) subcutaneamente no dia da operação e nos dias 1 e 2 pós-operação.
[00251] Para o manchamento histológico, em resumo, lâminas com seções embebidas em parafina foram desparafinadas em xileno e, então, reidratadas em uma série de etanol graduado. Para manchamento com hematoxilina e eosina (H&E), as lâminas foram incubadas em Hematoxilina de Mayer (Dako), lavadas em água potável, manchadas em solução de Eosina Y (Sigma-Aldrich), hidratadas, montadas com Pertex e, então, deixadas secar antes da varredura. Para manchamento com picrosirius red (PSR), as lâminas foram incubadas em hematoxilina de ferro de Weigert (Sigma-Aldrich), lavadas em água potável, manchadas com picrosirius red (Sigma-Aldrich) e, então, lavadas duas vezes em água acidificada. O excesso de água foi removido agitando-se as lâminas, e as lâminas foram desidratadas em três alterações de 99% de etanol, limpas em xileno, montadas em Pertex e, então,
115 / 120 deixadas secar antes da varredura.
[00252] Para manchamento imunoistoquímico (IHC) com colágeno tipo 1 alfa 1 (col1α1) e galectina-3 (GAL3), após a recuperação de antígeno e bloqueio da atividade de peroxidase endógena, as lâminas foram incubadas com o anticorpo primário (no de catálogo 1310-01 da Southern Biotech para col1α1, ou no de catálogo 125402 da Biolegend para galectin-3). O anticorpo primário anti-col1α1 foi detectado com o uso de um conjugado de peroxidase de raiz-forte (HRP)-anticorpo ligante polimérico, e o anticorpo primário anti- GAL3 foi detectado com o uso de um anticorpo secundário ligante seguido pela amplificação com o uso de um conjugado de HRP-anticorpo ligante polimérico. Depois, o anticorpo primário foi visualizado com 3,3’- diaminobenzidina (DAB) como o cromogênio. Finalmente, as seções foram contramanchadas em hematoxilina e cobertas com uma lamínula.
[00253] Para avaliar a esteatose, inflamação, baloneamento e fibrose do fígado, as amostras do fígado foram fixadas em formalina e embebidas em parafina, e as seções foram manchadas com hematoxilina e eosina ou picrosirius red. As amostras foram pontuadas para esteatose, inflamação, baloneamento e fibrose conforme resumido na Tabela 9.
[00254] SP-1373 (alta dose) reduziu significativamente o peso corporal dos camundongos obesos à faixa normal, ao mesmo tempo que semaglutida e elafibranor causaram menos diminuição do peso corporal (Figuras 12A e 12B [SP-1373 de alta dose foi inadvertidamente administrado ao grupo de veículo no dia 62]). SP-1373 causou uma diminuição acentuada na massa de tecido gorduroso do corpo inteiro (Figuras 13A e 13B), com efeito mínimo na massa de tecido magro do corpo inteiro. Os níveis plasmáticos de colesterol total (TC, Figura 14B), alanina transaminase (ALT, Figura 15A) e aspartato transaminase (AST, Figura 15B) foram também marcadamente reduzidos em animais tratados com SP-1373. Os níveis de ALT e AST plasmáticos e a razão entre AST/ALT são biomarcadores clínicos para a saúde do fígado. Os
116 / 120 efeitos benéficos de SP-1373 demonstram as vantagens de agonismo de receptor de GLP-1/receptor de glucagon duplo. O agonismo de receptor de GLP-1 estimula a produção de insulina e a secreção de insulina dependente de glicose sanguínea, reduz os níveis de glicose sanguínea, suprime o apetite e causa perda de peso. O agonismo de receptor de glucagon tem efeitos anti- hiperlipidêmicos e saciantes, estimula a queima de gordura e o gasto de energia e reduz o peso corporal.
[00255] SP-1373 causou uma grande diminuição no peso do fígado, mais do que a semaglutida, enquanto elafibranor aumentou de fato o peso do fígado (Figura 16). A histologia do fígado com o uso de mancha de hematoxilina e eosina descreveu uma ausência quase completa de esteatose do fígado nos animais tratados com SP-1373 de alta dose (Figura 17C [a estrutura elíptica branca grande é uma veia]), em contraste aos animais tratados com semaglutida (Figura 17E), que mostraram uma diminuição moderada na hepatosteatose. As Figuras 18A e 18B mostram a esteatose do fígado pós-biópsia em termos de % de área afetada e teor de lipídios do fígado total nos diferentes grupos de animais conforme determinado pela avaliação quantitativa histológica, confirmando uma ausência quase completa de esteatose do fígado nos animais tratados com SP-1373 de alta dose. SP-1373 reduziu significativamente os níveis de triglicerídeos (TG) e colesterol total (TC) do fígado, mais do que a semaglutida, enquanto elafibranor teve pouco ou nenhum efeito nos níveis de TG e TC do fígado (Figuras 19A e 19B). SP- 1373 também reduziu significativamente o manchamento com colágeno tipo 1 alfa 1 do fígado total com um anticorpo anti-col1α1 (uma medição da fibrose do fígado), mais do que a semaglutida, enquanto elafibranor teve um efeito modesto (Figura 20). Igualmente, SP-1373 reduziu significativamente o manchamento com galectina-3 do fígado total com um anticorpo anti-GAL3 (um biomarcador para inflamação e fibrose do fígado), mais do que a semaglutida, enquanto elafibranor teve essencialmente nenhum efeito (Figura
117 / 120 21).
[00256] SP-1373 de alta dose reduziu significativamente ou eliminou a esteatose do fígado em todos os animais tratados (Figura 22C). Nas Figuras 22A a 22E, para cada animal, a alteração da biópsia pré-estudo para pós- estudo é indicada por uma linha, e a esteatose do fígado é pontuada de 0 a 3 em termos de área superficial com esteatose. A maioria dos animais tratados exibiu menos inflamação do fígado (Figuras 23A a 23E). Nas Figuras 23A a 23E, para cada animal, a alteração da biópsia pré-estudo para pós-estudo é indicada por uma linha, e a inflamação do fígado é pontuada de 0 a 3 em gravidade. Quase todos os animais que exibiram inicialmente baloneamento de hepatócito não mostraram nenhum baloneamento após o tratamento com SP-1373, elafibranor ou semaglutida (Figuras 24A a 24E). Nas Figuras 24A a 24E, para cada animal, a alteração da biópsia pré-estudo para pós-estudo é indicada por uma linha, e o baloneamento de hepatócito é pontuado de 0 a 2 em gravidade. As pontuações de esteatose, inflamação e baloneamento são explicadas na Tabela 9.
[00257] A pontuação de NAS (pontuação de atividade de doença hepática gordurosa não alcoólica [NAFLD]), uma medição clínica da atividade de NASH, melhorou na maioria dos animais tratados e foi reduzida ao maior grau por SP-1373 de alta dose (Figuras 25A a 25E). Nas Figuras 25A a 25E, para cada animal, a alteração da biópsia pré-estudo para pós- estudo é indicada por uma linha. A pontuação de NAS é a soma das pontuações para esteatose do fígado (0 a 3), inflamação (0 a 3) e baloneamento (0 a 2), com uma pontuação máxima de 8. Um ser humano com uma pontuação de NAS de 5 ou mais é diagnosticado como tendo NASH, ao mesmo tempo que um ser humano com uma pontuação de NAS de 3 ou menos é diagnosticado com não tendo NASH. Se traduzido para o modelo de camundongo de NASH, SP-1373 de alta dose reverteu NASH em todos os animais tratados (Figura 25C).
118 / 120
[00258] SP-1373 e elafibranor reduziram a fibrose do fígado na maioria dos animais (Figuras 26B a 26D). A fibrose do fígado foi avaliada com o uso de picrosirius red, que mancha colágeno tipos 1 e 3. Nas Figuras 26A a 26E, para cada animal, a alteração da biópsia pré-estudo para pós- estudo é indicada por uma linha, e a fibrose do fígado é pontuada de 0 a 4, conforme explicado na Tabela 9. TABELA 9. PONTUAÇÕES DE ESTEATOSE, INFLAMAÇÃO,
BALONEAMENTO E FIBROSE DO FÍGADO Característica Pontuação Grau 0 < 5% de área superficial afetada 1 5 a 33% Esteatose do fígado 2 > 33 a 66% 3 > 66% 0 Nenhum foco 1 < 2 focos/ampliação de 200x Inflamação lobular1 2 2 a 4 focos/200x 3 > 4 focos/200x 0 Nenhum Degeneração de 1 Alguns hepatócitos de balão baloneamento2 2 Muitas células de balão/baloneamento proeminente 0 Nenhum 1 Perissinusoidal ou periportal Fibrose do fígado 2 Perissinusoidal e portal/periportal 3 Fibrose em ponte 4 Cirrose 1
[00259] A inflamação lobular foi avaliada contando-se o número de focos inflamatórios por campo com o uso de ampliação de 200x (mínimo de 5 campos por animal). Um foco foi definido como um agrupamento, não uma fileira, de > 3 células inflamatórias. Os corpos acidófilos não foram incluídos na avaliação. 2
[00260] A degeneração de baloneamento foram hepatócitos degenerados com um citoplasma esvaziado, alargamento, expansão, arredondamento e citoplasma reticulado.
[00261] SP-1373 reduziu a expressão de mRNAs relacionados à NASH no fígado, incluindo mRNAs que codificam proteínas envolvidas na fibrose {por exemplo, colágeno tipo 1 alfa 1 (col1α1), fator de crescimento de transformação β1 (TGFβ1) e galectina-3 (GAL3, aka MAC2)}, inflamação {por exemplo, interleucina-1α (IL-1α), IL-1β, fator de necrose tumoral α
119 / 120 (TNF-α), GAL3, CD14, receptor do tipo toll 4 (TLR4), proteína ativada por mitogênio p38 (MAP) quinase 11 e NF-κB}, recrutamento de monócitos {por exemplo, ligante de quimiocina (motivo C-C) 5 (CCL5, aka RANTES), proteína quimioatraente de monócito 1 (MCP1, aka CCL2), receptor de quimiocina (motivo C-C) 1 (CCR1) e CCR2} e diferenciação de monócito em, por exemplo, macrófagos {por exemplo, GAL3, tipo receptor 1 de hormônio do tipo mucina contendo módulo do tipo EGF (EMR1, aka F4/80), CD14, CD68 e CD86} (Figuras 27A a 27F e Figuras 28A a 28F). Mais especificamente em relação à fibrose, SP-1373 reduziu a expressão hepática de mRNAs que codificam proteínas envolvidas na formação de fibras fibróticas (Figuras 29A a 29I) e ativação de células estreladas hepáticas (o principal tipo de célula envolvido na fibrose do fígado) e proliferação de miofibroblastos (Figuras 30A a 30F). Ademais, SP-1373 reduziu a expressão hepática de mRNAs que codificam proteínas envolvidas na piroptose, uma forma altamente inflamatória de morte celular programada (Figuras 31A a 31F). Para as Figuras referidas neste parágrafo, o nível de expressão de um mRNA particular é a média mais desvio padrão da média, e *P < 0,05, **P < 0,01 e ***P < 0,001 em comparação ao veículo após a correção para teste múltiplo por genes. SP-1373 também reduziu a expressão hepática de mRNAs que codificam proteínas envolvidas na síntese de lipídios (por exemplo, ácido graxo sintase [FAS], estearoil-CoA desaturase-1 [SCD1] e 3-hidroxi-3- metilglutaril-CoA sintase 1 [HMGCS1]) e absorção de lipídios (por exemplo, CD36). Além disso, SP-1373 aumentou a expressão hepática do mRNA de receptor X farnesoide (FXR). Adicionalmente, SP-1373 modulou a expressão de genes que codificam proteínas envolvidas, por exemplo, na sinalização de insulina e homeostase de glicose.
[00262] Em resumo, SP-1373 reverteu a esteatose do fígado, reduziu a inflamação e a fibrose do fígado e melhorou marcadamente a pontuação de NAS, ao mesmo tempo que também solucionou déficits metabólicos e
120 / 120 glicorreguladores, em um modelo de camundongo traducional bem reconhecido de NASH. SP-1373 é um agonista potente, equilibrado e total nos receptores de GLP-1 e glucagon e tem efeitos antidiabéticos e antiobesidade. Em comparação à semaglutida de agonista de GLP-1, SP-1373 tem um efeito anti-hiperglicêmico mais forte, reduz o peso corporal, massa de tecido gorduroso e ingestão de alimentos a um grau maior e tem uma duração de ação mais longa. No modelo de camundongo de DIO-NASH, em comparação ao tratamento com semaglutida ou elafibranor (um agonista de PPAR-α/δ duplo), o tratamento com SP-1373 resultou em uma maior redução no peso corporal, níveis de colesterol total (TC) e alanina transaminase (ALT) plasmáticos, pontuação de NAS, hepatosteatose, níveis de triglicerídeos (TG) e TC no fígado, peso do fígado, teor de colágeno tipo I alfa 1 no fígado (uma medição de fibrose do fígado) e teor de galectina-3 no fígado (uma medição de inflamação e fibrose do fígado). Portanto, SP-1373 é útil para tratar, por exemplo, resistência à insulina, diabetes (incluindo tipos 1 e 2), hiperlipidemia, obesidade, síndrome metabólica e doenças cardiovasculares e afecções associadas às mesmas, tais como NAFLD (incluindo NASH).
[00263] Embora diversas modalidades da presente descrição tenham sido descritas, tais modalidades são providas a título de ilustração e exemplo apenas. Inúmeras variações das mesmas e modificações das às mesmas serão evidentes aos versados na técnica e são abrangidas pela presente descrição. Entende-se que diversas alternativas às modalidades da descrição podem ser empregadas na prática da descrição e são abrangidas pela descrição.

Claims (23)

1 / 15 REIVINDICAÇÕES
1. Produto de peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de síndrome de ovário policístico, um distúrbio renal ou um distúrbio hepático, o produto de peptídeo caracterizado pelo fato de que tem Fórmula I-A e compreende um tensoativo X covalentemente fixado a um peptídeo, sendo que o peptídeo compreende um aminoácido ligante U e pelo menos um outro aminoácido: Fórmula I-A em que o tensoativo X é uma porção química de Fórmula I: Fórmula I em que: R1a, em cada ocorrência independentemente, é uma ligação, H, um grupo protetor, um sacarídeo, um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído, um grupo aralquil (-alquilarila) não substituído ou substituído, um grupo alquiloxiarila não substituído ou substituído ou um grupo contendo núcleo esteroide; R1b, R1c e R1d, em cada ocorrência independentemente, são uma ligação, H, um grupo protetor, um sacarídeo, um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído, um grupo aralquila não substituído ou substituído, um grupo alquiloxiarila não substituído ou substituído ou um grupo contendo núcleo esteroide; R2, em cada ocorrência independentemente, é uma ligação, uma ligação a U, H, um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído, um grupo aralquila não substituído ou substituído, um grupo alquiloxiarila
2 / 15 não substituído ou substituído , um grupo contendo núcleo esteroide, -NH-, - S-, -O-NH-, um espaçador, -triazolo-, -NH(C=O)-CH2- ou -(CH2)m- maleimida-; W1, em cada ocorrência independentemente, é -CH2-, -CH2-O- , -CH2-S-, -CH2-NH-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -(C=S)- ou -(C=S)-NH-; W2, em cada ocorrência independentemente, é -O-, -S-, -NH- ou -CH2-; pelo menos uma ocorrência de R1a, R1b, R1c, R1d ou R2 é uma C1-C30 alquila não substituída ou substituída, aralquila, alquiloxiarila ou grupo contendo núcleo esteroide; m é um número inteiro de 1 a 10; e n é 1, 2 ou 3; e o peptídeo tem Fórmula II: aa1-aa2-aa3-aa4-aa5-aa6-aa7-aa8-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13-aa14-aa15- aa16-aa17-aa18-aa19-aa20-aa21-aa22-aa23-aa24-aa25-aa26-aa27-aa28-aa29-aa30-aa31- aa32-aa33-aa34-aa35-aa36-aa37-Z Fórmula II (SEQ.
ID.
NO. 1108) em que: Z é -OH, -NHR3 ou -N(R4)His, em que: R3 é H, C1-C12 alquila não substituída ou substituída ou um grupo contendo PEG menor do que 10 Da; e R4 é H, C2-C10 acila ou -C(=O)-arila; aa1 é His, N(R3)His, N(R4)His ou pGlu-His; aa2 é Ser, D-Ser, Ala, Gly, Pro, MePro, Aib, Ac4c ou Ac5c; aa3 é Gln ou Cit; aa4 é Gly ou D-Ala; aa5 é Thr ou Ser; aa6 é Phe, Trp, 2FPhe, MePhe, 2FMePhe ou Nal2; aa7 é Thr ou Ser; aa8 é Ser ou Asp;
3 / 15 aa9 é Asp ou Glu; aa10 é Tyr, Leu, Met, Nal2, Bip, Bip2EtMeO, Glu, Lys ou U; aa11 está ausente ou é Ser, Asn, Bip ou U; aa12 está ausente ou é Lys, Glu, Ser, Arg ou U; aa13 está ausente ou é Tyr, Gln, Cit ou U; aa14 está ausente ou é Leu, Met, Nle, Glu, Lys ou U; aa15 está ausente ou é Asp, Glu ou U; aa16 está ausente ou é Ser, Gly, Glu, Ala, Aib, Ac5c, Lys, Arg ou U; aa17 está ausente ou é Arg, hArg, Gln, Glu, Cit, Aib, Ac4c, Ac5c, Lys ou U; aa18 está ausente ou é Arg, hArg, Ala, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa19 está ausente ou é Ala, Val, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa20 está ausente ou é Gln, Lys, Arg, Cit, Glu, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa21 está ausente ou é Asp, Glu, Leu, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa22 está ausente ou é Phe, Trp, Nal2, Aib, Ac4c, Ac5c ou U aa23 está ausente ou é Val, Ile, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa24 está ausente ou é Ala, Gln, Glu, Cit ou U; aa25 está ausente ou é Trp, Nal2 ou U; aa26 está ausente ou é Leu ou U; aa27 está ausente ou é Met, Val, Leu, Nle, Lys ou U; aa28 está ausente ou é Asn, Lys, Glu, Gln, Cit ou U; aa29 está ausente ou é Thr, Gly, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa30 está ausente ou é Lys, Aib, Ac4c, Ac5c, Arg ou U; aa31 está ausente ou é Arg, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa32 está ausente ou é Asn, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa33 está ausente ou é Arg, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa34 está ausente ou é Asn, Aib, Ac4c, Ac5c ou U;
4 / 15 aa35 está ausente ou é Asn, Aib, Ac4c, Ac5c ou U; aa36 está ausente ou é Ala, Ile, Aib, Ac4c, Ac5C ou U; aa37 está ausente ou é U; U é um aminoácido natural ou não natural é que compreende um grupo funcional usado para ligação covalente a um tensoativo X; quaisquer dois dentre aa1 a aa37 podem ser opcionalmente ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; e contanto que um, ou pelo menos um, dentre aa10 a aa37 seja um aminoácido ligante U covalentemente ligado a um tensoativo X.
2. Produto de peptídeo para uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o tensoativo X compreende um monossacarídeo, tal como uma glicose, galactose ou manose adequadamente funcionalizada (por exemplo, ácido glicurônico, ácido galacturônico ou ácido manurônico), ou um dissacarídeo, tal como uma melibiose, maltose, isomaltose, gentiobiose ou lactose adequadamente funcionalizada (por exemplo, ácido melibiourônico, ácido maltourônico, ácido isomaltourônico, ácido gentiobiourônico ou ácido lactourônico).
3. Produto de peptídeo para uso de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o tensoativo X tem a estrutura: Fórmula I em que: R1a é um grupo C1-C30 alquila não substituído ou substituído; R1b, R1c e R1d são H; R2 é uma ligação a U; W1 é -(C=O)-NH-; e W2 é -O-.
4. Produto de peptídeo para uso de acordo com qualquer uma
5 / 15 das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que: a) pelo menos uma ocorrência de R1a é um grupo C8-C20 alquila não substituído ou substituído; ou b) o tensoativo X é um 1-alquil glicosídeo, tal como ácido 1- eicosil beta-D-glicurônico, ácido 1-octadecil beta-D-glicurônico, ácido 1- hexadecil beta-D-glicurônico, ácido 1-tetradecil beta-D-glicurônico, ácido 1- dodecil beta-D-glicurônico, ácido 1-decil beta-D-glicurônico, ácido 1-octil beta-D-glicurônico, ácido 1-eicosil beta-D-diglicurônico, ácido 1-octadecil beta-D-diglicurônico, ácido 1-hexadecil beta-D-diglicurônico, ácido 1- tetradecil beta-D-diglicurônico, ácido 1-dodecil beta-D-diglicurônico, ácido 1-decil beta-D-diglicurônico, ácido 1-octil beta-D-diglicurônico, ácido 1- eicosil beta-D-isomaltourônico, ácido 1-octadecil beta-D-isomaltourônico, ácido 1-hexadecil beta-D-isomaltourônico, ácido 1-tetradecil beta-D- isomaltourônico, ácido 1-dodecil beta-D-isomaltourônico, ácido 1-decil beta- D-isomaltourônico, ácido 1-octil beta-D-isomaltourônico, ácido 1-eicosil beta-D-gentiobiourônico, ácido 1-octadecil beta-D-gentiobiourônico, ácido 1- hexadecil beta-D-gentiobiourônico, ácido 1-tetradecil beta-D- gentiobiourônico, ácido 1-dodecil beta-D-gentiobiourônico, ácido 1-decil beta-D-gentiobiourônico, ácido 1-octil beta-D-gentiobiourônico, ácido 1- eicosil beta-D-melibiourônico, ácido 1-octadecil beta-D-melibiourônico, ácido 1-hexadecil beta-D-melibiourônico, ácido 1-tetradecil beta-D- melibiourônico, ácido 1-dodecil beta-D-melibiourônico, ácido 1-decil beta-D- melibiourônico, ou ácido 1-octil beta-D-melibiourônico, ou uma 1-eicosil beta-D-glicose funcionalizada, 1-octadecil beta-D-glicose, 1-hexadecil beta- D-glicose, 1-tetradecil beta-D-glicose, 1-dodecil beta-D-glicose, 1-decil beta- D-glicose, 1-octil beta-D-glicose, 1-eicosil beta-D-maltosídeo, 1-octadecil beta-D-maltosídeo, 1-hexadecil beta-D-maltosídeo, 1-tetradecil beta-D- maltosídeo, 1-dodecil beta-D-maltosídeo, 1-decil beta-D-maltosídeo, 1-octil beta-D-maltosídeo, 1-eicosil beta-D-melibiosídeo, 1-octadecil beta-D-
6 / 15 melibiosídeo, 1-hexadecil beta-D-melibiosídeo, 1-tetradecil beta-D- melibiosídeo, 1-dodecil beta-D-melibiosídeo, 1-decil beta-D-melibiosídeo, ou 1-octil beta-D-melibiosídeo, ou o 1-alquil glicosídeo correspondente com um grupo 6-carboxila ou grupos 6,6’-dicarboxila, ou o alfa-anômero de 1-alquila correspondente.
5. Produto de peptídeo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o peptídeo compreende resíduos de aminoácidos aa1-aa27, aa1-aa28, aa1-aa29 ou aa1-aa30.
6. Produto de peptídeo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que tem a estrutura: a) aa1-aa2-aa3-aa4-aa5-aa6-aa7-aa8-aa9-aa10-aa11-aa12-aa13-aa14- aa15-aa16-aa17-aa18-aa19-aa20-aa21-aa22-aa23-aa24-aa25-aa26-aa27-aa28-aa29-Z Fórmula III-A (SEQ. ID. NO. 1109) em que: Z é -OH ou -NHR3, em que R3 é H, C1-C12 alquila não substituída ou substituída ou um grupo contendo PEG menor do que 10 Da; aa1 é His, N(R3)His, N(Ac)His ou pGlu-His; aa2 é Ser, Ala, Gly, MePro, Aib, Ac4c ou Ac5c; aa3 é Gln ou Cit; aa4 é Gly ou D-Ala; aa5 é Thr ou Ser; aa6 é Phe, Trp, 2FPhe, MePhe, 2FMePhe ou Nal2; aa7 é Thr ou Ser; aa8 é Ser ou Asp; aa9 é Asp ou Glu; aa10 é Tyr, Leu, Met, Nal2, Bip, Bip2EtMeO, Glu, Lys ou U(X); aa11 está ausente ou é Ser, Asn, Bip ou U(X); aa12 está ausente ou é Lys, Glu, Ser, Arg ou U(X);
7 / 15 aa13 está ausente ou é Tyr, Gln, Cit ou U(X); aa14 está ausente ou é Leu, Met, Nle, Glu, Lys ou U(X); aa15 está ausente ou é Asp, Glu ou U(X); aa16 está ausente ou é Ser, Gly, Glu, Ala, Aib, Ac5c, Lys, Arg ou U(X); aa17 está ausente ou é Arg, hArg, Gln, Glu, Lys, Cit, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa18 está ausente ou é Arg, hArg, Ala, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa19 está ausente ou é Ala, Val, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa20 está ausente ou é Gln, Lys, Arg, Cit, Glu, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa21 está ausente ou é Asp, Glu, Leu, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa22 está ausente ou é Phe, Trp, Nal2, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa23 está ausente ou é Val, Ile, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa24 está ausente ou é Ala, Gln, Glu, Cit ou U(X); aa25 está ausente ou é Trp, Nal2 ou U(X); aa26 está ausente ou é Leu ou U(X); aa27 está ausente ou é Met, Val, Leu, Nle, Lys ou U(X); aa28 está ausente ou é Asn, Lys, Glu, Gln ou U(X); aa29 está ausente ou é Thr, Gly, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); quaisquer dois dentre aa1 a aa29 podem ser opcionalmente ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; e contanto que um, ou pelo menos um, dentre aa10 a aa12 e aa16– aa29 seja um aminoácido U natural ou não natural covalentemente ligado a um tensoativo X; ou b) His1-aa2-aa3-Gly4-Thr5-aa6-Thr7-Ser8-Asp9-aa10-aa11-aa12-
8 / 15 aa13-aa14-aa15-aa16-aa17-aa18-aa19-aa20-aa21-aa22-aa23-aa24-aa25-aa26-aa27-aa28- aa29-aa30-Z Fórmula III-B (SEQ.
ID.
NO. 1111) em que: Z é -OH ou -NHR3, em que R3 é H, C1-C12 alquila não substituída ou substituída ou um grupo contendo PEG menor do que 10 Da; aa2 é Gly, MePro ou Aib; aa3 é Gln ou Cit; aa6 é Phe, 2FPhe, MePhe, 2FMePhe ou Nal2; aa10 é Tyr, Nal2, Bip, Bip2EtMeO, Glu, Lys ou U(X); aa11 está ausente ou é Ser, Asn, Bip ou U(X); aa12 está ausente ou é Lys, Glu, Ser ou U(X); aa13 está ausente ou é Tyr, Gln, Cit ou U(X); aa14 está ausente ou é Leu, Nle, Glu, Lys ou U(X); aa15 está ausente ou é Asp, Glu ou U(X); aa16 está ausente ou é Ser, Gly, Glu, Ala, Aib, Lys, Arg ou U(X); aa17 está ausente ou é Arg, hArg, Gln, Glu, Lys, Cit, Aib ou U(X); aa18 está ausente ou é Arg, hArg, Ala, Aib, Ac4c, Ac5c ou U(X); aa19 está ausente ou é Ala, Aib ou U(X); aa20 está ausente ou é Gln, Lys, Arg, Cit, Glu, Aib ou U(X); aa21 está ausente ou é Asp, Glu, Leu, Aib ou U(X); aa22 está ausente ou é Phe ou U(X) aa23 está ausente ou é Val, Ile, Aib ou U(X); aa24 está ausente ou é Ala, Glu, Gln ou U(X); aa25 está ausente ou é Trp ou U(X); aa26 está ausente ou é Leu ou U(X); aa27 está ausente ou é Met, Val, Leu, Nle, Lys ou U(X);
9 / 15 aa28 está ausente ou é Asn, Glu, Gln, Cit ou U(X); aa29 está ausente ou é Thr, Aib ou U(X); aa30 está ausente ou é Arg ou U(X); quaisquer dois dentre aa1 a aa23 podem ser opcionalmente ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; e contanto que um, ou pelo menos um, dentre aa10-aa12, aa16-aa24 e aa28 seja um aminoácido U natural ou não natural covalentemente ligado a um tensoativo X.
7. Produto de peptídeo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que: aa2 é Gly, Aib ou Ac4c; ou aa12 é lisina; ou aa14 é leucina; ou aa17 é glicina ou homoarginina (hArg); ou aa17, aa18, aa20, aa24 ou aa28, ou qualquer combinação dos mesmos, é lisina ligada a um tensoativo X; ou aa16 e aa20 são ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama; ou o peptídeo compreende um ou mais resíduos de Aib, tais como Aib em aa2; ou o tensoativo X compreende um grupo dodecil, tetradecil, hexadecil ou octadecil alquila não substituído ou substituído; ou qualquer combinação ou todos os anteriores.
8. Produto de peptídeo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de ser selecionado a partir de: His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu16*-Gln17-Ala18-Ala19-Lys20*-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-dodecil beta-D-glicuronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28-Thr29- NH2 (SEQ. ID. NO. 601);
10 / 15
His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu16*-Gln17-Ala18-Ala19-Lys20*-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-tetradecil beta-D-glicuronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28- Thr29-NH2 (SEQ.
ID.
NO. 602); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu16*- Gln17-Ala18-Ala19-Lys20*-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-hexadecil beta-D-glicuronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28- Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 603); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu16*- Gln17-Ala18-Ala19-Lys20*-Glu21-Phe22 -Ile23- Lys(N-ômega[1-octadecil beta-D-glicuronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28- Thr29-NH2 (SEQ.
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11 / 15
Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-octadecil beta-D-melibiouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28- Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 819); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-hexadecil alfa-D- melibiouronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Gln24-Trp25-Leu26- Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 820); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-octadecil alfa-D- melibiouronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Gln24-Trp25-Leu26- Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 821); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-dodecil alfa-D- melibiouronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Lys(N-ômega[1- dodecil beta-D-glicouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 1114); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-tetradecil alfa-D- melibiouronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Lys(N-ômega[1- tetradecil beta-D-glucouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 1115);
12 / 15
His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-hexadecil alfa-D- melibiouronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Lys(N-ômega[1- hexadecil beta-D-glucouronil])24-Trp25-Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 1116); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-(13-carboxil-trideciloxi) beta-D-glicuronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Gln24-Trp25-Leu26- Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 1117); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-(15-carboxil-pentadeciloxi) beta-D-glicuronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Gln24-Trp25-Leu26- Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 1118); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Lys(N-ômega[1-(17-carboxil-heptadeciloxi) beta-D-glicuronil])17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23-Gln24-Trp25-Leu26- Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 1119); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-(13-carboxil-trideciloxi) beta-D-glicuronil])24-Trp25-Leu26- Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 1120); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-(15-carboxil-pentadeciloxi) beta-D-glicuronil])24-Trp25- Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 1121); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-(17-carboxil-heptadeciloxi) beta-D-glicuronil])24-Trp25- Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ.
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NO. 1122);
13 / 15 His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-(13-carboxil-trideciloxi) beta-D-melibiouronil])24-Trp25- Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 1123); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-(15-carboxil-pentadeciloxi) beta-D-melibiouronil])24-Trp25- Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 1124); His1-Aib2-Gln3-Gly4-Thr5-Phe6-Thr7-Ser8-Asp9-Tyr10-Ser11- Lys12-Tyr13-Leu14-Asp15-Glu*16-Gln17-Ala18-Ala19-Lys*20-Glu21-Phe22-Ile23- Lys(N-ômega[1-(17-carboxil-heptadeciloxi) beta-D-melibiouronil])24-Trp25- Leu26-Leu27-Gln28-Thr29-NH2 (SEQ. ID. NO. 1125); e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que Glu16* e Lys20* denotam resíduos que são ciclizados através de suas cadeias laterais para formar uma lactama.
9. Produto de peptídeo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o distúrbio renal é doença renal crônica.
10. Produto de peptídeo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o distúrbio hepático é doença hepática gordurosa, tal como doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD).
11. Produto de peptídeo para uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a NAFLD é esteato-hepatite não alcoólica (NASH).
12. Produto de peptídeo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o tratamento compreende a administração parenteral (por exemplo, subcutânea, intravenosa ou intramuscular) do produto de peptídeo.
14 / 15
13. Produto de peptídeo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o tratamento compreende a administração do produto de peptídeo por inalação oral ou inalação nasal ou insuflação.
14. Produto de peptídeo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o tratamento compreende a administração parenteral (por exemplo, subcutânea [sc], intravenosa [iv] ou intramuscular [im]) do produto de peptídeo em uma dose de cerca de 0,1 mg a cerca de 1, 5 ou 10 mg, ou cerca de 0,1 a 1 mg ou 1 a 10 mg, ao longo de um período de cerca de uma semana.
15. Produto de peptídeo para uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o tratamento compreende a administração parenteral (por exemplo, sc, iv ou im) do produto de peptídeo em uma dose de cerca de 0,1 a 1 mg, ou cerca de 0,1 a 0,5 mg ou 0,5 a 1 mg, ao longo de um período de cerca de uma semana.
16. Produto de peptídeo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o tratamento compreende a administração parenteral (por exemplo, sc, iv ou im) do produto de peptídeo uma vez por semana.
17. Produto de peptídeo para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o tratamento compreende adicionalmente a administração de um ou mais agentes terapêuticos adicionais.
18. Produto de peptídeo para uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o um ou mais agentes terapêuticos adicionais são selecionados dentre agentes antidiabéticos, agentes antiobesidade, agentes anti-inflamatórios, agentes antifibróticos, antioxidantes, agentes anti-hipertensivos e combinações dos mesmos.
19. Produto de peptídeo para uso de acordo com a
15 / 15 reivindicação 17 ou 18, caracterizado pelo fato de que o distúrbio hepático é NAFLD (por exemplo, NASH), e o um ou mais agentes terapêuticos adicionais são ou incluem um agonista de receptor ativado por proliferador de peroxissoma (PPAR) (por exemplo, um agonista de PPAR-δ, tal como elafibranor e/ou um agonista de PPAR-γ, tal como pioglitazona), um inibidor de HMG-CoA redutase (por exemplo, uma estatina, tal como rosuvastatina), um agonista de receptor de farnesoide X (FXR) (por exemplo, ácido obeticólico) ou um antioxidante (por exemplo, vitamina E) ou qualquer combinação dos mesmos.
20. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende: um produto de peptídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 8, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou uma composição farmacêutica que compreende o mesmo; e instruções para administrar ou usar o produto de peptídeo ou a composição farmacêutica para tratar síndrome de ovário policístico, um distúrbio renal ou um distúrbio hepático.
21. Kit de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o distúrbio hepático é doença hepática gordurosa, tal como NAFLD (por exemplo, NASH).
22. Kit de acordo com a reivindicação 20 ou 21, caracterizado pelo fato de que o produto de peptídeo ou a composição farmacêutica é formulada para administração parenteral, tal como subcutaneamente, intravenosamente, intramuscularmente ou por inalação oral ou inalação nasal ou insuflação.
23. Kit de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 22, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente um dispositivo para administrar o produto de peptídeo ou a composição farmacêutica, tal como uma caneta injetora ou um inalador.
BR112020013644-1A 2018-01-03 2019-01-03 produto de peptídeo ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso no tratamento de síndrome de ovário policístico, um distúrbio renal ou um distúrbio hepático, e, kit. BR112020013644A2 (pt)

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