BR112020012201A2

BR112020012201A2 - composto inibidor de mtor e composição

Info

Publication number: BR112020012201A2
Application number: BR112020012201-7A
Authority: BR
Inventors: Laurence Clary; Jean-François Fournier; Gilles Ouvry; Yushma BHURRUTH-ALCOR; Etienne Thoreau; Loïc TOMAS
Original assignee: Galderma Research & Development
Priority date: 2017-12-21
Filing date: 2018-12-20
Publication date: 2020-11-24
Also published as: IL275531A; WO2019122065A1; AU2018392761B2; RU2020123899A3; MX2020006436A; AU2018392761A1; JP2021506917A; CA3086243A1; EP3727390A1; EP3727390B1; CL2020001686A1; SG11202005868XA; CN111918654A; FR3075795A1; IL275531B2; IL275531B1; KR20200103032A; RU2020123899A; US20200317683A1; SA520412289B1

Abstract

A invenção refere-se a novos compostos inibidores de mTOR. A invenção é caracterizada pelo fato dos compostos inibidores da mTOR serem de fórmula geral (I). A invenção também se refere a composições que compreendem os referidos compostos inibidores de mTOR, seus métodos de preparação e seus usos em composições como medicamento.

Description

“COMPOSTO INIBIDOR DE MTOR E COMPOSIÇÃO”

[001] A presente invenção refere-se a novos compostos inibidores de serina/ treonina quinase de mTOR (“alvo mecanístico da rapamicina” ou alvo funcional da rapamicina, também conhecido como FRAP, RAFT, RAPT, SEP).

Refere-se também a composições os compreendendo, seus processos de preparação e seus usos em composições como um medicamento.

[002] A proteína quinase de mTOR é o centro catalítico de dois complexos multiproteicos funcionalmente distintos, conservados em todos os eucariotos e denominados mTORC1 e mTORC2 (Dunlop et al., “Mammalian target of rapamycin complex 1: signalling inputs, substrates and feedback mechanisms”, 2009; Guertin et al., “The pharmacology of mTOR inhibition”, 2009). Quando combinada com Raptor (proteína reguladora associada de TOR) e mLST8 (mamífero letal com proteína sec13 8), a mTOR forma o complexo mTORC1. Este complexo interage com a Deptor (proteína que interage com mTOR que contém o domínio DEP), FKBP38 e PRAS40 (substrato Akt rico em prolina de 40 kDa), reguladores negativos de mTORC1. Para formar o mTORC2, a mTOR interage com as proteínas Rictor (companheira sensível a rapamicina de TOR), Sin1 (proteína 1 de interação com map quinase ativada por estresse) e mLST8. Além disso, o mTORC2 também se associa com a Deptor, que suprime sua atividade, bem como com a PPR5/ Protor, cuja função permanece desconhecida. Quando ligada ao FKBP12, a rapamicina inibe especificamente o mTORC1.

[003] A mTOR é notadamente conhecida por regular a proliferação celular, o crescimento celular, a mobilidade celular, a sobrevivência celular, a biossíntese de proteínas e a transcrição.

[004] Foi demonstrado que os distúrbios da via de sinalização da mTOR são responsáveis por muitas doenças, particularmente vários tipos de câncer e múltiplos hamartomas.

[005] Conhecemos, por exemplo, o documento de patente WO 2007/061737 que descreve compostos bicíclicos inibidores de mTOR. Eles são usados no tratamento de câncer, como câncer de mama, câncer de pulmão, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de rim, carcinoma renal, câncer de próstata, câncer de sangue, câncer de fígado, câncer de ovário, câncer de tireoide, câncer de endométrio, linfoma, carcinoma de células renais ou até linfoma do manto.

[006] Também conhecemos o documento de patente WO 2009/117482 que descreve mais particularmente sais e outros polimorfos de compostos bicíclicos inibidores de mTOR, também utilizados no tratamento de câncer, do mesmo tipo que os descritos em WO 2007/061737.

[007] A rapamicina, inibidora da mTOR, é conhecida há muito tempo por suas propriedades imunossupressoras. No entanto, demonstrou sucesso terapêutico limitado quando administrada sistemicamente em pacientes portadores de psoríase. Além disso, dados recentes têm mostrado que a via de sinalização da mTOR é hiperativada na pele psoriática lesional, o que poderia contribuir para a doença interferir na maturação de queratinócitos. O efeito do tratamento tópico da rapamicina em um modelo de camundongo com psoríase induzido pelo imiquimod foi estudado (Burger et al., Blocking mTOR Signalling with Rapamycin Ameliorates Imiquimod-induced Psoriasis in Mice”, 2017). A análise imuno-histoquímica revelou que a rapamicina não apenas impediu a ativação da via de sinalização da mTOR (níveis de P-mTOR e P-S6), mas quase normalizou a expressão de marcadores da diferenciação epidérmica. Além disso, o influxo de células imunes inatas para os gânglios linfáticos de drenagem foi parcialmente reduzido pelo tratamento com rapamicina. Esses dados ressaltam o papel da via de sinalização da mTOR na patogênese da psoríase e apoiam o estudo da inibição tópica da mTOR como uma nova estratégia anti- psoriática.

[008] Existe, portanto, uma necessidade real de desenvolver tratamentos, em particular tratamentos tópicos, para pacientes que sofrem de doenças como a psoríase.

[009] Considerando o acima exposto, um problema resolvido pela invenção é propor novos inibidores de mTOR para melhorar, em particular, o tratamento de doenças proliferativas ou inflamatórias por mediação imune da pele.

[0010] A Depositante desenvolveu novos compostos inibidores de mTOR.

[0011] Assim, a presente invenção tem como objeto um composto inibidor de mTOR de fórmula geral (I): (I), ou um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que cada variável é como definida e descrita abaixo.

[0012] A invenção também tem como objeto uma composição compreendendo, em um meio fisiologicamente aceitável, um composto inibidor de mTOR de fórmula (I) de acordo com a invenção ou um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Ela é destinada a ser utilizada como medicamento, em particular no tratamento de doenças que envolvem uma enzima mTOR com atividade serina-treonina quinase e, em particular, no tratamento de condições dermatológicas ligadas a um distúrbio de queratinização com um agente proliferativo, inflamatório e/ ou imuno- alérgico, como por exemplo psoríase, dermatite atópica, queratose actínica ou acne, preferencialmente dermatite atópica, mais preferencialmente o componente inflamatório da dermatite atópica e ainda mais preferencialmente o tratamento por via tópica do componente inflamatório da dermatite atópica.

[0013] A invenção será melhor compreendida com a leitura da seguinte descrição não limitativa, elaborada com referência aos desenhos anexos, nos quais: - A Figura 1 mostra uma rota de síntese dos compostos 5-(4-Amino- 7-isobutil-7-metil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-5-il)benzo[d]oxazol-2- amina (enantiômero 1 - e1) e 5-(4-Amino-7-isobutil-7-metil-6,7-dihidro-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-5-il)benzo[d]oxazol-2-amina (enantiômero 2 - e2); e - A Figura 2 mostra uma via de síntese dos compostos 1-Acetil-4’- amino-5’-(2-aminobenzo[d]oxazol-5-il)espiro[azetidina-3,7’- ciclopenta[d]pirimidin]-6’(5’H)-ona (exemplo 10), terc-butil-4’-amino-5’-(2- aminobenzo[d]oxazol-5-il)-6’-oxo-5’,6’-dihidrospiro[azetidina-3,7’-pirrolo[3,2- d]pirimidina]-1-carboxilato (exemplo 11) e terc-butil-4’-amino-5’-(2- aminobenzo[d]oxazol-5-il)-5’,6’-dihidrospiro[azetidina-3,7’-pirrolo[3,2- d]pirimidina]-1-carboxilato (exemplo 12).

[0014] A presente invenção refere-se a novos compostos inibidores de mTOR ou a um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

[0015] Por inibidor de mTOR entende-se compostos que regularão negativamente, isto é, reduzem, bloqueiam ou até suprimem a ativação da via de sinalização de mTOR, competindo, vantajosamente de forma seletiva, com os substratos no nível de mTORC1 e/ ou mTORC2 ou modificando o local ativo dessas enzimas que assim não podem mais catalisar um determinado substrato.

[0016] Os compostos de acordo com a invenção podem ser representados pela fórmula geral (I):

(I), ou um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, na qual:

- R1 representa um átomo de hidrogênio, um radical alquila C1-C3,

ciclopropila ou acila;

- R2 e R3 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio escolhido a partir de Cl ou F, um radical alquila C1-C6 linear ou ramificado, interrompido ou não por um heteroátomo O,

S, ou -NR7, e não substituído ou substituído por uma cicloalquila ou uma heterocicloalquila C3-C5 ou um anel aromático/ heterocíclico não substituído ou mono- ou polissubstituído por um átomo de halogênio escolhido a partir de Cl, F ou um radical -OH, metila (Me), -OMe, ou em conjunto formam um anel ou uma heterocicloalquila C3-C6;

- entendendo-se que R2 e R3 não representam ambos um átomo de halogênio;

- com R7 representando um átomo de hidrogênio, um radical alquila

C1-C3, acila, ou carboxialquila C1-C4;

- R4 representa um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio selecionado a partir de F, Cl, Br, um radical -OR8, alquila C1-C3, ciclopropila;

- com R8 representando um átomo de hidrogênio, um radical alquila

C1-C3, ciclopropila ou acila; - R5 e R6 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio, um radical alquila C1-C3, ciclopropila ou em conjunto formam uma carbonila ou um anel C3-C4; e - X representa um átomo de hidrogênio, ou um radical -NH2, -OH, metila.

[0017] De acordo com a presente invenção, por alquila entende-se um radical linear ou ramificado tendo por exemplo de 1 a 6 (C1-C6), ou de 1 a 3 (C1-C3), átomos de carbono, vantajosamente radicais metila, etila, propila, isopropila, butila, terc-butila, 2-metilbutila, pentila, 2-metilpentila, hexila.

[0018] Por acila entende-se um radical obtido por remoção do grupo hidroxila de um ácido carboxílico; o grupo acila corresponde a um ácido carboxílico de fórmula -RCOOH terá fórmula -RCO, em que o átomo de carbono e o seu oxigênio estão ligados por uma ligação dupla (grupo carbonila).

[0019] Por cicloalquila entende-se um radical cicloalquila com 3 a 6 átomos de carbono vantajosamente escolhido a partir de ciclopropila, ciclopentila, ciclohexila.

[0020] Por heterocicloalquila ou heterocíclico entende-se, por exemplo, um radical piperidina, morfolina, pirrolidina ou piperazina.

[0021] Por anel aromático entende-se um radical cíclico planar e possuindo (4n + 2) elétrons mudados, sendo n o número de anéis que constituem o radical; se o anel contiver outros elementos além de carbono e hidrogênio, falamos de um heterocíclico aromático.

[0022] Quando os compostos de acordo com a invenção estão na forma de um sal farmaceuticamente aceitável, é preferencialmente um sal obtido a partir de uma base ou ácido não tóxicos.

[0023] O termo “sal farmaceuticamente aceitável” refere-se a sais que são, dentro de um bom julgamento médico, adequados para uso em contato com tecidos humanos e animais inferiores sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica e similares e são proporcionais em uma relação benefício/ risco razoável. Os sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente invenção incluem aqueles derivados de ácidos e bases inorgânicos e orgânicos adequados.

[0024] Quando o composto da presente invenção é ácido, o seu sal correspondente pode ser preparado a partir de bases farmaceuticamente aceitáveis não tóxicas, compreendendo bases inorgânicas e bases orgânicas.

[0025] Os sais derivados dessas bases inorgânicas incluem alumínio, amônio, cálcio, cobre, ferro, lítio, magnésio, manganês, potássio, sódio e seus sais similares. Particularmente preferidos são os sais de amônio, de cálcio, de magnésio, de potássio e de sódio.

[0026] Os sais derivados de bases orgânicas não tóxicas farmaceuticamente aceitáveis compreendem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, bem como aminas cíclicas e aminas substituídas tais como aminas naturalmente substituídas e sintetizadas.

[0027] Outras bases orgânicas não tóxicas farmaceuticamente aceitáveis a partir das quais os sais podem ser formados compreendem resinas de troca iônica, tais como, por exemplo, arginina, betaína, cafeína, colina, N’,N’- dibenziletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, N,N-dietiletanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, N- etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina e similares.

[0028] Quando o composto da presente invenção é básico, o seu sal correspondente pode ser preparado a partir de ácidos farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos, incluindo ácidos inorgânicos e orgânicos.

[0029] Tais ácidos compreendem, por exemplo, ácido acético, benzenossulfônico, benzóico, camforsulfônico, cítrico, etanossulfônico, fumárico, glucônico, glutâmico, bromídrico, clorídrico, isetiônico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanossulfônico, mucico, nítrico, pamoico, pantotênico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p-toluenossulfônico e similares. Os ácidos cítrico, bromídrico, clorídrico, maleico, fosfórico, sulfúrico e tartárico são particularmente preferidos.

[0030] De acordo com uma forma de realização da invenção, o sal farmaceuticamente aceitável é escolhido a partir de trometamina, sódio, cálcio e L-arginina.

[0031] De acordo com outra forma de realização da invenção, o sal é escolhido a partir de magnésio, potássio, N,N-dietiletanolamina, N-metil-D- glucamina ou piperazina.

[0032] Em algumas formas de realização, o sal está na forma de um sal de hidrato ou solvato.

[0033] Em algumas formas de realização, o sal está substancialmente na forma amorfa.

[0034] Em algumas formas de realização, o sal está essencialmente na forma cristalina.

[0035] Em algumas formas de realização, o sal é de pelo menos cerca de 95% em peso cristalino.

[0036] Em algumas formas de realização, o sal está substancialmente em uma forma cristalina única.

[0037] De acordo com a presente invenção, os compostos de fórmula (I), ou um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, preferidos são aqueles em que: - R1 representa um átomo de hidrogênio;

- R2 e R3 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio, um radical alquila C1-C4 linear ou ramificado, interrompido ou não por um heteroátomo S ou -NR7, ou formam em conjunto uma heterocicloalquila C4; - com R7 representando um radical acila, carboxitercbutila e; - R4 representa um átomo de hidrogênio; - R5 e R6 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio, um grupo metila, ou formam em conjunto uma carbonila; e - X representa um átomo de hidrogênio.

[0038] Mais preferencialmente, os compostos de fórmula (I), ou um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, são aqueles em que: - R1 representa um átomo de hidrogênio; - R2 representa um grupo metila; - R3 representa um radical alquila C1-C4 linear ou ramificado, tais como, por exemplo, metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila ou terc-butila, interrompido ou não por um heteroátomo S; - R4 representa um átomo de hidrogênio; - R5 e R6 representam um átomo de hidrogênio; e - X representa um átomo de hidrogênio.

[0039] Ainda mais preferencialmente, os compostos de fórmula (I), ou um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, são aqueles em que: - R1 representa um átomo de hidrogênio; - R2 representa um grupo metila; - R3 representa um grupo isobutila, os dois enantiômeros R e S sendo representados, - R4 representa um átomo de hidrogênio; - R5 e R6 representam um átomo de hidrogênio; e - X representa um átomo de hidrogênio.

[0040] Entre os compostos de fórmula (I) que se enquadram no escopo da presente invenção, os seguintes compostos podem ser citados, em particular: - 5-(4-Amino-7-isobutil-7-metil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-5-il)benzo[d]oxazol-2-amina (enantiômero 1); - 5-(4-Amino-7-isobutil-7-metil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-5-il)benzo[d]oxazol-2-amina (enantiômero 2); - 5-(2-Amino-benzooxazol-5-il)-7-isobutil-6,7-dihidro-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina; - 5-(2-Amino-benzooxazol-5-il)-7-metil-7-metilsulfanilmetil- 6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina; - 5-(4-Amino-7,7-dietil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin- 5-il)benzo[d]oxazol-2-amina; - 5-(2-Amino-benzooxazol-5-il)-7,7-dimetil-6,7-dihidro-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina; - 5-(2-Amino-benzooxazol-5-il)-7-metil-7-propil-6,7-dihidro- 5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina; - 5-(2-Amino-benzooxazol-5-il)-7,7-dietil-6-metil-6,7-dihidro- 5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina; - 4-Amino-5-(2-amino-benzooxazol-5-il)-7,7-dimetil-5,7- dihidro-pirrolo[3,2-d]pirimidin-6-ona; - 1-Acetil-4’-amino-5’-(2-aminobenzo[d]oxazol-5- il)spiro[azetidina-3,7’-ciclopenta[d]pirimidin]-6’(5’H)-ona; - Tert-butil-4’-amino-5’-(2-aminobenzo[d]oxazol-5-il)-6’-oxo- 5’,6’-dihidrospiro[azetidina-3,7’-pirrolo[3,2-d]pirimidina]-1-carboxilato; e - Tert-butil-4’-amino-5’-(2-aminobenzo[d]oxazol-5-il)-5’,6’- dihidrospiro[azetidina-3,7’-pirrolo[3,2-d]pirimidina]-1-carboxilato.

[0041] A presente invenção também se refere a uma composição compreendendo, em um meio fisiologicamente aceitável, um composto de fórmula (I) de acordo com a invenção como definido acima ou um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

[0042] Um meio farmaceuticamente aceitável significa um meio compatível e adequado para uso em contato com células humanas e animais, em particular com a pele, as mucosas e/ ou os tegumentos, sem toxicidade, irritação, resposta alérgica indevida e similares, e proporcional em uma relação benefício/ risco razoável.

[0043] Um meio farmaceuticamente aceitável de acordo com a invenção pode compreender qualquer adjuvante conhecido e utilizado no campo farmacêutico, compatível com os compostos inibidores de mTOR de acordo com a invenção.

[0044] A título de exemplo não limitativo, pode-se mencionar solventes, tampões, aromatizantes, aglutinantes, agentes quelantes, tensoativos, espessantes, lubrificantes, gelificantes, umectantes, hidratantes, conservantes, antioxidantes, agentes calmantes, agentes pró-penetrantes, colorantes, perfumes e similares, ou uma mistura dos mesmos.

[0045] Obviamente, os técnicos no assunto tomarão o cuidado de escolher o(s) composto(s) opcional(ais) a ser(em) adicionado(s) a essas composições de tal maneira que as propriedades vantajosas intrinsecamente ligadas à presente invenção não sejam ou substancialmente não sejam alteradas pela adição prevista. A sua concentração é também escolhida de modo a não prejudicar as propriedades vantajosas dos compostos de acordo com a invenção.

[0046] O composto de acordo com a presente invenção, e a composição que o compreende, pode ser administrado por via oral, retal, tópica ou parentérica (subcutânea, intramuscular ou intravenosa). Eles são preferencialmente administrados por via oral ou tópica, mais preferencialmente topicamente.

[0047] As composições de acordo com a invenção podem estar na forma líquida, sólida ou mesmo gasosa.

[0048] Por via oral, a composição pode estar na forma de comprimidos, cápsulas, drágeas, xaropes, suspensões, soluções, pós, grânulos, emulsões, suspensões de microesferas ou nanoesferas ou vesículas lipídicas ou polímeros permitindo uma liberação controlada.

[0049] Por via parenteral, a composição pode estar na forma de soluções ou suspensões para infusão ou injeção.

[0050] De preferência, a composição farmacêutica é condicionada em uma forma adequada para aplicação por via tópica.

[0051] Por via tópica, as composições, que são, portanto, mais particularmente destinadas ao tratamento da pele e membranas mucosas, podem estar na forma líquida, pastosa ou sólida, e mais particularmente na forma de unguentos, cremes, leites, pomadas, pós, almofadas encharcadas, syndets, soluções, géis, sprays, mousses, loções, suspensões, bastão, xampus ou bases de lavagem. Também pode estar na forma de suspensões de microesferas ou nanoesferas, vesículas ou lipídicas ou poliméricas, emplastros poliméricos ou gelificados, ou hidrogéis permitindo uma libertação controlada dos compostos ativos. Além disso, estas composições tópicas podem ser apresentadas na forma anidra ou na forma aquosa.

[0052] A composição de acordo com a invenção compreende preferencialmente entre 0,001% e 5% do referido composto de fórmula (I) ou um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em peso do peso total da composição.

[0053] A quantidade realmente administrada a ser usada de acordo com a invenção depende do efeito terapêutico desejado e, portanto, pode variar em grande medida. Os técnicos no assunto, em particular o médico, podem facilmente, com base no seu conhecimento geral, determinar as quantidades apropriadas.

[0054] A composição de acordo com a invenção pode compreender pelo menos um outro ingrediente ativo.

[0055] O ingrediente ativo adicional é preferencialmente escolhido a partir do grupo que compreende, mas não se limita a, antibióticos, antibacterianos, antivirais, antiparasitários, antifúngicos, anestésicos, analgésicos, antialérgicos, retinoides, anti-radicais livres, antipruriginosos, anti- histamínicos, imunossupressores, corticosteroides, agentes queratolíticos, imunoglobulinas intravenosas, anti-angiogênicos, anti-inflamatórios e/ ou uma mistura dos mesmos.

[0056] Mais preferencialmente, o ingrediente ativo adicional é conhecido por sua eficácia no tratamento de condições dermatológicas ligadas a um distúrbio de queratinização com um componente proliferativo, inflamatório e/ ou imuno-alérgico, como psoríase, dermatite atópica, queratose actínica ou acne.

[0057] A título de exemplo não limitativo de ingrediente ativo adicional, podem ser citados ingredientes selecionados a partir de dipropionato de betametasona glicol, 17-propionato de clobetasol, propionato de halobetasol, amcinonida, desoximetasona, valerato de diflucortolona, fluocinonida, halcinonida, furoato de mometasona, acetonida de triamcinolona, valerato de betametasona, 17-butirato de clobetasona, desonida, 17-valerato de hidrocortisona, prednicarbato, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, calcipotriol, calcitriol, adaptaleno, peróxido de benzoila, clindamicina e eritromicina.

[0058] A presente invenção refere-se a novos compostos inibidores de mTOR de fórmula (I).

[0059] Assim, a presente invenção tem como objeto os compostos de fórmula (I) como descritos acima, destinados a serem utilizados como medicamento.

[0060] A invenção também tem como objeto uma composição de acordo com a invenção, para sua utilização como medicamento, em particular no tratamento de doenças envolvendo uma enzima mTOR com atividade de serina-treonina quinase em um paciente.

[0061] Os termos “tratar” ou “tratamento”, como utilizados na presente invenção, referem-se a inversão, atenuação, inibição da progressão, atraso no início, melhora e/ ou alívio parcial ou total de uma doença ou distúrbio, ou um ou mais sintomas da doença ou distúrbio, tais como os descritos abaixo.

Em algumas formas de realização, o tratamento pode ser administrado após o desenvolvimento de um ou mais sintomas. Em algumas formas de realização particulares, o tratamento pode ser administrado como uma medida preventiva, para prevenir ou interromper a progressão de uma doença ou distúrbio. Nesse contexto, a “prevenção” refere-se a uma redução no risco de adquirir uma doença ou distúrbio determinado. Em outras formas de realização, o tratamento pode ser administrado na ausência de sintomas. Por exemplo, o tratamento pode ser administrado a um indivíduo predisposto antes do início dos sintomas (por exemplo, à luz do histórico de sintomas e/ ou fatores genéticos ou outros fatores predisponentes). O tratamento também pode ser continuado após o desaparecimento dos sintomas, por exemplo, para prevenir ou retardar sua reincidência. Assim, em algumas formas de realização, o termo “tratamento” compreende a prevenção de uma recaída ou recorrência de uma doença ou distúrbio.

[0062] O termo “paciente”, como usado na presente invenção, refere-se a um mamífero e inclui sujeitos humanos e animais, preferencialmente um humano.

[0063] A composição de acordo com a invenção é mais particularmente destinada ao uso no tratamento de condições dermatológicas ligadas a um distúrbio de queratinização com um componente proliferativo, inflamatório e/ ou imuno-alérgico.

[0064] As condições dermatológicas ligadas a um distúrbio da queratinização com um componente proliferativo, inflamatório e/ ou imuno- alérgico compreendem problemas ou desordens de queratinização que envolvem a proliferação de células, em particular, acne vulgar, comedões, polimorfos, rosáceas, acnes nodulocísticas, conglobata, acnes senis, acnes secundárias, tais como acne solar, medicamentosa ou profissional, outros distúrbios da queratinização, em particular ictioses, estados semelhantes à ictiose, doença de Darier, queratodermias palmoplantares, leucoplasias e estados leucoplasiformes, líquen cutâneo ou mucoso (bucal), outras condições dermatológicas ligadas a um distúrbio de queratinização com um componente inflamatório e/ ou imuno-alérgico em particular, todas as formas de psoríase, seja cutânea, mucosa ou ungueal e até artrite psoriática ou ainda atopia cutânea, como dermatite atópica (ou eczema atópico) ou atopia respiratória ou ainda hipertrofia gengival, todas as proliferações dérmicas ou epidérmicas que são benignas ou malignas, de origem viral ou não, como verrugas comuns, verrugas planas e epidermodisplasia verruciforme, papilomatoses orais ou floridas e lesões ou proliferações que podem ser induzidas pela luz ultravioleta, em particular no caso de queratoses actínicas, epitelioma basal e espinocelulares.

[0065] Mais preferencialmente, a composição de acordo com a invenção se destina ao uso no tratamento de condições dermatológicas ligadas a um distúrbio de queratinização com um componente proliferativo, inflamatório e/ ou imuno-alérgico, como psoríase, dermatite atópica, queratose actínica ou acne, ainda mais preferencialmente dermatite atópica.

[0066] De um modo particularmente vantajoso, a composição de acordo com a invenção destina-se a ser utilizada no tratamento do componente inflamatório da dermatite atópica e, de preferência, no tratamento tópico do componente inflamatório da dermatite atópica.

[0067] Por “componente inflamatório da dermatite atópica” entende-se uma inflamação envolvendo linfócitos CD4+, eosinófilos, mastócitos e citocinas Th2.

[0068] A presente invenção também se refere aos processos para a preparação dos compostos de fórmula (I), em particular de acordo com os esquemas de reação apresentados nas Figuras 1 e 2.

[0069] Daremos agora, a título de ilustração e sem caráter limitativo, vários exemplos de obtenção de compostos ativos de fórmula (I) de acordo com a invenção e resultados de atividade inibitória.

EXEMPLOS 1 E 2: ROTA SINTÉTICA DOS COMPOSTOS 5-(4-AMINO-7-ISOBUTIL-7-METIL- 6,7-DIHIDRO-5H-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-5-IL)BENZO[D]OXAZOL-2-AMINA (ENANTIÔMERO 1 - E1) E 5-(4-AMINO-7-ISOBUTIL-7-METIL-6,7-DIHIDRO-5H- PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-5-IL)BENZO[D]OXAZOL-2-AMINA (ENANTIÔMERO 2 - E2), COMO MOSTRADO NA FIGURA 1 e1, e e2 A) ETIL-2-(6-METOXI-5-NITROPIRIMIDIN-4-IL)-2,4-DIMETILPENTANOATO

[0070] 1-iodo-2-metil-propano (13,12 mL; 0,11 mol;. 1,10 eq.) é adicionado a uma suspensão de éster etílico do ácido (6-metoxi-5-nitro-pirimidin- 4-il)-acético (25,00 g; 0,10 mol; 1,00 eq.) (1) e de carbonato de césio (37,15 g;

0,11 mol;. 1,10 eq.) em acetonitrila (250,00 ml). O meio de reação é aquecido a 70 °C por 12 horas. O carbonato de césio (37,15 g; 0,11 mol; 1,10 eq.) seguido por iodometano (7,74 ml; 0,12 mol; 1,20 eq.) é então adicionado e o meio de reação é aquecido a 70 °C por 5 horas. Depois de voltar à temperatura ambiente, o meio de reação é filtrado para remover o carbonato de césio e o filtrado é concentrado sob vácuo. O resíduo (33,8 g) é cromatografado em sílica gel com depósito sólido (coluna puriFlash IR-50SI/ 800G, puriFlash) eluído em heptano/ acetato de etila (98/2 a 90/10). O éster etílico do ácido 2-(6-metoxi-5-nitro- pirimidin-4-il)-2,4-dimetil-pentanoico (21,3 g; 66%) (2) é obtido sob a forma de um óleo amarelo claro.

B) ETIL-2-(6-AMINO-5-NITROPIRIMIDIN-4-IL)-2,4-DIMETILPENTANOATO

[0071] Em uma autoclave, a amônia a 7N em metanol (216,00 ml) foi adicionada a uma solução de éster etílico de ácido 2-(6-metoxi-5-nitro- pirimidin-4-il)-2,4-dimetil-pentanoico (21,26 g; 0,07 mol; 1,00 eq.) (2) em metanol (32 ml). O meio de reação é aquecido a 90 °C por pelo menos 7 horas, por exemplo 24 horas. Os solventes são concentrados sob vácuo. O éster etílico do ácido 2-(6-amino-5-nitro-pirimidin-4-il)-2,4-dimetil-pentanoico (19 g; 81%) (3) é obtido sob a forma de um sólido amarelo sem purificação adicional.

C) 7-ISOBUTIL-7-METIL-6,7-DIHIDRO-5H-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-4-AMINA

[0072] Uma suspensão de ditionito de sódio (46,78 g; 0,23 mol;.

5,00 eq.) em água (136 ml) foi adicionado em uma solução aquecida a 80 °C de éster etílico do ácido 2-(6-amino-5-nitro-pirimidin-4-il)-2,4-dimetil-pentanoico (15,74 g; 45,68 mmol; 1,00 eq.) (3) em etanol (271 ml). O meio de reação é aquecido a 80 °C por pelo menos 1 hora, por exemplo 5 horas. O meio de reação foi trazido até a temperatura ambiente durante a noite e depois filtrada em celita.

O filtrado é concentrado sob vácuo para fornecer o éster etílico do ácido 2-(6- amino-5-sulfoamino-pirimidin-4-il)-2,4-dimetil-pentanoico (16,00 g; 101%). O produto está diretamente envolvido na próxima etapa de ciclização.

[0073] Cloreto de hidrogênio 4M (80,00 ml; 4,00 M; 0,32 mol; 5,00 V) do 1,4-dioxano é adicionado a uma suspensão de éster etílico de ácido 2-(6- amino-5-sulfoamino-pirimidin-4-il)-2,4-dimetil-pentanoico (16,00 g; 45,68 mmol; 1,00 eq.) em 1,4-dioxano (320,00 ml). A suspensão branca é agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Parte do ácido clorídrico é removida sob uma corrente de nitrogênio e o meio de reação é diluído e depois vertido sobre uma mistura de gelo/ solução de amônia a 32% para neutralizá-lo. O produto é extraído com acetato de etila/ n-butanol (90/10). As fases orgânicas são combinadas, lavadas com solução saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas sob vácuo. Várias co-evaporações com heptano são realizadas para arrastar o n-butanol. O 4-amino-7-isobutil-7- metil-5,7-dihidro-6H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-6-ona (11,30 g; 105,07%) (4) é obtido como forma de um sólido amarelo pálido.

[0074] Uma solução de hidreto de alumínio e lítio no tetrahidrofurano e (106,76 ml; 1,00 M; 0,11 mol; 2,20 eq.) é adicionada a 0 °C, gota a gota, a uma solução de 4-amino-7-isobutil-7-metil-5,7-dihidro-6H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-6-ona (11,30 g; 45,68 mmol 1,00 eq.) (4) no tetrahidrofurano (267 ml). Após retornar à temperatura ambiente, o meio de reação é aquecido a 90 °C por 7 horas. O meio de reação é resfriado a 0 °C .

São adicionados gota a gota 4,2 ml de água, 4,2 ml de uma solução aquosa de hidróxido de sódio a 15% (3N) e 12,6 ml de água e a agitação foi deixada por 30 minutos à temperatura ambiente e depois 160 ml acetato de etila são adicionados. É adicionado sulfato de magnésio para secar a fase orgânica e o meio de reação é agitado por mais 40 minutos. O precipitado é filtrado através de celita e o filtrado é evaporado sob vácuo para fornecer a 7-isobutil-7-metil- 6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina (8,6 g; 91%) (5) sob a forma de um sólido bege.

D) 7-ISOBUTIL-7-METIL-5-(2-METILBENZO[D]OXAZOL-5-IL)-6,7-DIHIDRO-5H-

PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-4-AMINA

[0075] A 7-isobutil-7-metil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4- ilamina (1,00 g; 4,50 mmol; 1,00 eq.) (5) e o 5-bromo-2-metil-benzooxazol (1,14 g; 5,40 mmol; 1,20 eq.) são colocados em um balão na presença de tolueno e evaporados até a secura (2x) para remover todos os vestígios de água. Terc- butóxido de sódio (1,30 g; 13,50 mmol; 3,00 eq.) em seguida, a mistura de 2- diciclohexilfosfino-2’,6’-diisopropoxibifenil (RuPhos) (419,84 mg; 0,90 mmol; 0,20 eq.) e do aduto de éter de cloro-(2-diciclohexilfosfino-2’,6’-diisopropoxi-1,1’- bifenil)[2-(2-aminoetil)fenil]paládio(II)-metil-t-butil (aduto RuPhos Pd G1 metil t- butil éter) (734,89 mg; 0,90 mmol;. 0.20 eq.) são adicionados à mistura acima dissolvida em tolueno (37 ml). O meio de reação é aquecido a 100 °C por 4 horas. O meio de reação é hidrolisado e depois diluído com acetato de etila. O produto é extraído com acetato de etila. As fases orgânicas são combinadas, lavadas uma vez com água, uma vez com uma solução saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas sob vácuo. O produto bruto é obtido na forma de uma pasta vermelho-sangue e cromatografado em sílica gel com deposição sólida (coluna puriFlash IR-50SI/ 300G, CombiFlash) e eluição com diclorometano/ metanol (99/1 a 95/5). A 7- isobutil-7-metil-5-(2-metil-benzooxazol-5-il)-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-4-ilamina (1,1 g; 70%) (6) é obtida sob a forma de um merengue laranja escuro.

E) 5-(4-AMINO-7-ISOBUTIL-7-METIL-6,7-DIHIDRO-5H-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-5- IL)BENZO[D]OXAZOL-2-AMINA

[0076] Uma solução de ácido clorídrico a 35% (41,60 ml) é adicionada a uma solução de 7-isobutil-7-metil-5-(2-metil-benzoxazol-5-il)-6,7- dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina (2,08 g; 6,16 mmol; 1,00 eq.) (6) em uma mistura de etanol (41,60 ml)/ água (41,60 ml). O meio de reação foi aquecido a 40 °C por 4 horas. Os solventes são então removidos sob vácuo para recuperar o produto em água. O meio é vertido sobre uma mistura de 300 ml de gelo/ 30 ml de uma solução aquosa de amônia a 32%. O produto é extraído com uma mistura de acetato de etila/ n-butanol (90/10) (2x). As fases orgânicas são combinadas, lavadas uma vez com uma solução saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas sob vácuo. O 2-amino- 4-(4-amino-7-isobutil-7-metil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-5-il)-fenol (7) é obtido na forma de um merengue vermelho e é diretamente envolvido na próxima etapa.

[0077] O di(1H-imidazol-1-il)metanimina (2,09 g; 12,98 mmol; 1,80 eq.) É adicionado a uma solução de 2-amino-4-(4-amino-7-isobutil-7-metil-6,7- dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-5-il)-fenol em bruto (2,26 g; 6,16 mmol; 1,00 eq.) (7) no tetrahidrofurano (34 ml). O meio de reação é aquecido a 70 °C durante 8 horas. Depois de voltar à temperatura ambiente, o meio é vertido em água e acetato de etila. As duas fases são separadas e a fase aquosa é extraída com acetato de etila. As fases orgânicas são combinadas, lavadas com água, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas. O resíduo é cromatografado em sílica gel com depósito sólido (coluna puriFlash IR-50SI/ 120G, CombiFlash) eluído com diclorometano/ metanol (97/3). A 5-(4-amino-7-isobutil-7-metil-6,7- dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-5-il)benzo[d]oxazol-2-amina (1,9 g; 90%) (8) é obtida na forma de um sólido bege para separação por SFC dos dois enantiômeros. Os dois enantiômeros são obtidos com um rendimento de 36% por separação quiral de acordo com as seguintes condições: Coluna: ID (Chiral Technologies) 150 mm * 3 mm, 3 µm; temperatura: 35 °C ; Pressão de CO2: 104 bar; Co-solvente: 25% metanol; fluxo total: 1,5 ml/ min.

[0078] O enantiômero 1 (Exemplo 1) de 5-(4-Amino-7-isobutil-7- metil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-5-il)benzo[d]oxazol-2-amina corresponde ao tempo de retenção de 2,8 min.

[0079] 1H RMN (DMSO-d6) δ: 0,70 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,83 (d, J =

6,4 Hz, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,30 – 1,46 (m, 1H), 1,57 – 1,72 (m, 2H), 3,73 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 3,84 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 5,74 (s, 2H), 6,44 (dd, J = 8,5, 2,2 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,35 (s, 2H), 8,12 (s, 1H).

MS (ESI) m/ z = 339 [M + H]+

[0080] O enantiômero 2 (Exemplo 2) de 5-(4-Amino-7-isobutil-7- metil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-5-il)benzo[d]oxazol-2-amina corresponde ao tempo de retenção de 3,7 min.

[0081] 1H RMN (DMSO-d6) δ: 0,70 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,83 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,19 (s, 3H), 1,30 – 1,46 (m, 1H), 1,57 – 1,72 (m, 2H), 3,73 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 3,84 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 5,74 (s, 2H), 6,44 (dd, J = 8,5, 2,2 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,35 (s, 2H), 8,12 (s, 1H).

MS (ESI) m/ z = 339 [M + H]+ EXEMPLO 3: 5-(2-AMINO-BENZOOXAZOL-5-IL)-7-ISOBUTIL-6,7-DIHIDRO-5H- PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-4-ILAMINA

[0082] Este composto pode ser obtido de acordo com o processo apresentado na Figura 1.

[0083] 1H RMN (Metanol-d4) δ: 1,00 (d, J = 8,3 Hz, 6H), 1,34 (br s, 1H), 1,90 (dd, J = 13,8, 7,1 Hz, 1H), 2,37 (br s, 2H), 3,39 (m, 2H), 7,14 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,29 (br s, 2H), 7,39 (d, J = 8,8 Hz, 1H).

MS (ESI) m/ z = 325 [M + H]+ EXEMPLO 4: 5-(2-AMINO-BENZOOXAZOL-5-IL)-7-METIL-7-METILSULFANILMETIL-6,7-

DIHIDRO-5H-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-4-ILAMINA

[0084] Este composto pode ser obtido de acordo com o processo apresentado na Figura 1.

[0085] 1H RMN (Metanol-d4) δ: 1,39 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 2,76 – 2,93 (m, 2H), 3,78 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,09 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,82 (s, 1H), 7,23 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,12 (s, 1H).

MS (ESI) m/ z = 343 [M + H]+ EXEMPLO 5 VIA DE SÍNTESE DO COMPOSTO 5-(4-AMINO-7,7-DIETIL-6,7-DIHIDRO-5H- PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-5-IL)BENZO[D]OXAZOL-2-AMINA A) ETIL-2-ETIL-2-(6-METOXI-5-NITROPIRIMIDIN-4-IL) BUTANOATO

[0086] O iodoetano (399,97 µl; 4,98 mmol;. 1,20 eq.) é adicionado a uma suspensão de éster etílico de ácido (6-metoxi-5-nitro-pirimidin-4-il)-acético

(1,00 g; 4,15 mmol; 1,00 eq.) e de carbonato de césio (1,42 g; 4,35 mmol;. 1,05 eq.) em acetonitrila (15 ml). O meio de reação é aquecido a 70 °C por 12 horas.

O carbonato de césio (1,62 g; 4,98 mmol; 1,20 eq.) seguido por iodoetano (499,96 µl; 6,22 mmol; 1,50 eq.) foram adicionados e o meio de reação é aquecido a 70 °C por 5 horas. Depois de voltar à temperatura ambiente, o meio de reação é filtrado para remover o carbonato de césio e o filtrado é concentrado sob vácuo. O resíduo é cromatografado em sílica gel (40 g, depósito líquido, eluente heptano/ acetato de etila de 0 a 5% de acetato de etila, CCM: heptano/ acetato de etila 50/50 Rf = 0,8) para fornecer o etil-2-etil-2-(6-metoxi-5- nitropirimidin-4-il)butanoato (1,0 g; 81%) como um óleo transparente.

B) ETIL-2-(6-AMINO-5-NITROPIRIMIDIN-4-IL)-2,4-DIMETILPENTANOATO

[0087] Em um tubo de microondas selado, a amônia a 7N em metanol (3,0 ml) foi adicionado a uma solução de etil-2-etil-2-(6-metoxi-5- nitropirimidin-4-il)butanoato (1,00 g; 3,36 mmol; 1,00 eq.) em metanol (5,0 ml). O meio de reação é aquecido a 70 °C por 12 horas. Os solventes são concentrados sob vácuo. O 2-(6-amino-5-nitropirimidin-4-il)-2-etilbutanoato de etila (950 mg) foi obtido como um sólido amarelo, sem purificação adicional.

C) 4-AMINO-7,7-DIETIL-5,7-DIHIDRO-6H-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-6-ONA

[0088] Uma suspensão de 2-(6-amino-5-nitropirimidin-4-il)-2- etilbutanoato de etila (0,95 g; 3,37 mmol; 1,00 eq.) em etanol (38,00 mL) foi adicionada a uma solução aquecida a 80 °C de ditionito de sódio (2,93 g; 16,83 mmol; 5,00 eq.) em água (9,50 ml). O meio de reação é aquecido a 80 °C por 1 hora e 15 minutos. O meio de reação é levado à temperatura ambiente e depois filtrado para remover os insolúveis. O filtrado foi concentrado sob vácuo para dar o ácido 4-amino-6-(3-(etoxicarbonil)pentan-3-il)pirimidin-5-il)sulfâmico (1,12 g; 100,13%) sob a forma de um sólido branco (presença de sais). O produto é diretamente envolvido na etapa de ciclização, considerando um rendimento quantitativo.

[0089] O cloreto de hidrogênio a 4M em 1,4-dioxano (11,2 ml) foi adicionado a uma suspensão de ácido (4-amino-6-(3-(etoxicarbonil)pentan-3- il)pirimidin-5-il)sulfâmico (1,12 g; 3,37 mmol; 1,00 eq.) em 1,4-dioxano (34 ml). A suspensão branca é agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Uma parte do ácido clorídrico é removida sob uma corrente de nitrogênio e o meio de reação é diluído e depois vertido sobre uma mistura de gelo/ solução de amônia a 32% para neutralizá-lo. O produto é extraído com acetato de etila/ n-butanol (90/10). As fases orgânicas são combinadas, lavadas com uma solução saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas sob vácuo. Várias co-evaporações em heptano são realizadas para arrastar o n- butanol. A 4-amino-7,7-dietil-5,7-dihidro-6H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-6-ona (690 mg; 99%) foi obtida como um sólido amarelo claro.

D) 7,7-DIETIL-6,7-DIHIDRO-5H-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-4-AMINA

[0090] Uma solução de hidreto de alumínio e lítio no tetrahidrofurano (7,36 ml; 1,00 M; 7,36 mmol; 2,20 eq.) é adicionada a 0 °C, gota a gota, a uma solução de 4-amino-7,7-dietil-5,7-dihidro-6H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-6-ona (690,00 mg; 3,35 mmol; 1,00 eq.) em tetrahidrofurano (18 ml).

Após retornar à temperatura ambiente, o meio de reação é aquecido a 90 °C por 7 horas. O meio de reação é resfriado a 0 °C. 0,3 ml de água, 0,3 ml de uma solução aquosa de hidróxido de sódio a 15% (3N) e depois 0,9 ml de água são adicionados gota a gota e a agitação é deixada por 30 minutos à temperatura ambiente e depois 5 ml de acetato de etila são adicionados. É adicionado sulfato de magnésio para secar a fase orgânica e o meio de reação é agitado por mais 40 minutos. O precipitado é filtrado através de celita e o filtrado é evaporado sob vácuo. O produto reacional bruto é purificado por fase normal (25 g, depósito de líquido, eluente diclorometano/ metanol a 3-7% de metanol, CCM: diclorometano/ metanol 95/5 Rf = 0,2) para fornecer a 7,7-dietil-6,7-dihidro-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (480 mg; 75%) na forma de um sólido bege.

E) 7,7-DIETIL-5-(2-METILBENZO[D]OXAZOL-5-IL)-6,7-DIHIDRO-5H-PIRROLO[3,2- D]PIRIMIDIN-4-AMINA

[0091] A 7,7-dietil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (200,00 mg; 1,04 mmol; 1,00 eq.) e o 5-bromo-2-metil-benzooxazol (242,64 mg; 1,14 mmol; 1,10 eq.) são colocados em um balão na presença de tolueno e evaporado até a secura (2x) para remover todos os vestígios de água. O terc- butóxido de sódio (242,64 mg; 1,14 mmol; 1,10 eq.) em seguida, a mistura de 2- diciclohexilfosfino-2’,6’-diisopropoxibifenil (RuPhos) (127,45 mg; 0,16 mmol; 0,15 eq.) e o aduto de cloro-(2-diciclohexilfosfino-2’,6’-diisopropoxi-1,1’-bifenil)[2-(2- aminoetil)fenil]paládio(II)-metil-t-butil éter (aduto RuPhos Pd G1 metil t-butil éter) (127,45 mg; 0,16 mmol;. 0,15 eq.) são adicionados à mistura anterior em solução no tolueno (8 ml). A mistura de reação é aquecida a 100 °C por 4 horas. O meio de reação é hidrolisado e depois diluído com acetato de etila. O produto é extraído com acetato de etila. As fases orgânicas são combinadas, lavadas uma vez com água, uma vez com uma solução saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas sob vácuo. O produto bruto é obtido na forma de uma pasta e cromatografado em sílica gel com deposição sólida e eluição com diclorometano/ metanol (99/1 a 95/5). A 7,7-dietil-5-(2- metilbenzo[d]oxazol-5-il)-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-amina (28 mg; 8,32%) é obtida na forma de um sólido rosa.

F) 2-AMINO-4-(4-AMINO-7,7-DIETIL-6,7-DIHIDRO-5H-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-5- IL)FENOL

[0092] Uma solução de ácido clorídrico a 35% (0,56 ml) é adicionado na 7,7-dietil-5-(2-metil-benzoxazol-5-il)-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-4-ilamina (28,00 mg; 0,09 mmol; 1,00 eq.) em solução em etanol (1,12 ml) e água (1,12 ml). O meio de reação é aquecido a 70 °C durante 5 horas. Os solventes são removidos sob vácuo para recuperar o produto em água. O meio de reação é vertido sobre uma solução a 0 °C de NH3 aquoso a 15%, em seguida,

o pH é ajustado para pH = 8 com uma solução de NH3 aq. a 32%. O produto é extraído com a mistura de diclorometano/ n-butanol (80/20) (2x). As fases orgânicas são combinadas, lavadas uma vez com água e depois secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas sob vácuo. O 2-amino-4-(4-amino- 7,7-dietil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-5-il)fenol (26,00 mg; 100%) é obtido na forma de um sólido rosa e usado diretamente na próxima etapa.

G) 5-(4-AMINO-7,7-DIETIL-6,7-DIHIDRO-5H-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-5- IL)BENZO[D]OXAZOL-2-AMINA

[0093] É adicionada di(1H-imidazol-1-il)metanimina (35,0 mg; 0,22 mmol; 2,50 eq.) a uma solução de 2-amino-4-(4-amino-7,7-dietil-6,7-dihidro-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-5-il)fenol em bruto (26,0 mg; 0,09 mmol; 1,00 eq.) em tetrahidrofurano (1,6 ml). O meio de reação é aquecido a 70 °C durante 8 horas.

Depois de retornar à temperatura ambiente, o meio é vertido em água e acetato de etila. As duas fases são separadas e a fase aquosa é extraída com acetato de etila. As fases orgânicas são combinadas, lavadas com água, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas. O resíduo é cromatografado em sílica gel com depósito sólido e eluído com diclorometano/ metanol (99/1 a 94/6).

A 5-(4-amino-7,7-dietil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-5-il)benzo[d]oxazol- 2-amina (10 mg; 32%) é obtida na forma de um sólido branco.

[0094] 1H RMN (DMSO-d6) δ: 0,69 (t, J = 7,4 Hz, 7H), 1,49 – 1,67 (m, 5H), 3,75 (s, 1H), 5,70 (s, 2H), 6,42 (dd, J = 8,5, 2,3 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,34 (s, 2H), 8,12 (s, 1H).

MS (ESI) m/ z = 325 [M + H]+ EXEMPLO 6: 5-(2-AMINO-BENZOOXAZOL-5-IL)-7,7-DIMETIL-6,7-DIHIDRO-5H- PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-4-ILAMINA

[0095] Este composto pode ser obtido de acordo com o processo apresentado na Figura 1.

[0096] 1H RMN (DMSO-d6) δ: 1,18 (s, 6H), 3,71 (s, 2H), 5,79 (s, 2H), 6,43 (dd, J = 8,4, 2,3 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,36 (s, 2H), 8,13 (s, 1H).

MS (ESI) m/ z = 297 [M + H]+ EXEMPLO 7: 5-(2-AMINO-BENZOOXAZOL-5-IL)-7-METIL-7-PROPIL-6,7-DIHIDRO-5H- PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-4-ILAMINA

[0097] Este composto pode ser obtido de acordo com o processo apresentado na Figura 1.

[0098] 1H RMN (DMSO-d6) δ: 0,78 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,22 – 1,32 (m, 2H) 1,35 – 1,45 (m, 1H) 1,43 – 1,57 (m, 1H), 3,69 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 3,79 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 5,73 (s, 2H), 6,42 (dd, J = 8,6, 2,1 Hz, 1H), 6,61

(d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,35 (s, 2H), 8,12 (s, 1H).

MS (ESI) m/ z = 325 [M + H]+ EXEMPLO 8: 5-(2-AMINO-BENZOOXAZOL-5-IL)-7,7-DIETIL-6-METIL-6,7-DIHIDRO-5H- PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-4-ILAMINA

[0099] Este composto pode ser obtido de acordo com o processo apresentado na Figura 1.

[00100] 1H RMN (DMSO-d6) δ: 0,77 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 0,84 (t, J = 7,4 Hz, 3H), 1,21 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,49 (m, 2H), 1,73 (m, 2H), 3,61 (m, 1H), 5,36 (s, 2H), 6,53 – 6,64 (m, 1H), 6,76 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,42 (s, 2H), 8,09 (s, 1H). MS (ESI) m/ z = 339 [M + H]+ EXEMPLO 9: 4-AMINO-5-(2-AMINO-BENZOOXAZOL-5-IL)-7,7-DIMETIL-5,7-DIHIDRO- PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDIN-6-ONA

[00101] Este composto pode ser obtido de acordo com o processo apresentado na Figura 1.

[00102] 1H RMN (DMSO-d6) δ: 1,35 (s, 6H), 5,44 (s, 2H), 7,01 (dd, J = 8,3, 2,2 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,62 (s, 2H), 8,25 (s, 1H).

MS (ESI) m/ z = 311 [M + H]+ EXEMPLOS 10, 11 E 12: VIA DE SÍNTESE DOS COMPOSTOS 1-ACETIL-4’-AMINO-5’-(2- AMINOBENZO[D]OXAZOL-5-IL)SPIRO[AZETIDINA-3,7’-CICLOPENTA[D]PIRIMIDIN]- 6’(5’H)-ONA (15 – EXEMPLO 10), TERC-BUTIL-4’-AMINO-5’-(2- AMINOBENZO[D]OXAZOL-5-IL)-6’-OXO-5’,6’-DIHIDROSPIRO[AZETIDINA-3,7’- PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDINA]-1-CARBOXILATO (14 – EXEMPLO 11) E TERC-BUTIL-4’- AMINO-5’-(2-AMINOBENZO[D]OXAZOL-5-IL)-5’,6’-DIHIDROSPIRO[AZETIDINA-3,7’- PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDINA]-1-CARBOXILATO (16 – EXEMPLO 12) COMO ILUSTRADO NA FIGURA 2 ((15) – exemplo 10), ((14) – exemplo 11) e ((16) – exemplo 12) A) 5-IODO-1,3-BENZOXAZOL-2-AMINA

[00103] Em um tubo selado, 5-bromo-1,3-benzoxazol-2-

amina (1,0 g, 4,69 mmol), iodeto de sódio (1,77 g, 11,73 mmol), iodeto de cobre (I) (225 mg, 1,17 mmol) e N,N’-dimetiletilenodiamina (414 mg, 4,69 mmol) foram agitados em 30 ml de dioxano a 120 °C durante a noite. Iodeto de cobre (I) (224 mg) e N,N’-dimetiletilenodiamina (0,25 ml) foram adicionados e a agitação foi continuada durante 24 horas a 120 °C . Após arrefecimento, foram adicionados 100 ml de EtOAc e o meio é filtrado. O filtrado foi suplementado com 100 ml de água e transferido para um funil de separação. As fases são separadas e a fase aquosa é extraída duas vezes com EtOAc. As frações orgânicas combinadas são lavadas com água, com salmoura, secas sobre Na2SO4 e evaporadas até a secura. O resíduo sólido é purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com DCM para obter a 5-iodo-1,3-benzoxazol-2-amina (318 mg, 25%).

B) 4-CLORO-6-METOXI-2-METILSULFANIL-5-NITRO-PIRIMIDINA (9)

[00104] A 4,6-dicloro-2-metilsulfanil-5-nitro-pirimidina (10,0 g, 41,6 mmol) em 102 ml de metanol são adicionados lentamente (9,49 ml, 41,6 mmol) de metóxido de sódio a 30% em peso (um precipitado amarelo pálido é formado). O meio de reação é arrefecido a 0 °C, o precipitado é filtrado e, em seguida, enxaguado com metanol duas vezes e seco em forno de vácuo a 40 °C para se obter 4,62 g de um pó amarelo pálido. O filtrado é concentrado até a secura e depois ressuspenso em água, filtrado e seco em uma estufa a vácuo a 40 °C para obter 5,5 g adicionais de um pó amarelo pálido. As duas frações obtidas contêm 70% do produto esperado (4-cloro-6-metoxi-2-metilsulfanil-5- nitro-pirimidina – (9)) e 30% do análogo dimetoxi.

C) 1-(TERT-BUTIL)-3-METIL-3-(6-METOXI-2-(METILTIO)-5-NITROPIRIMIDIN-4- IL)AZETIDINA-1,3-DICARBOXILATO (10)

[00105] A uma solução de 4-cloro-6-metoxi-2-metilsulfanil-5- nitro-pirimidina (4,27 g, 17,2 mmol, 1,0 eq.) (9) em tetrahidrofurano (86 ml), são adicionados 1-(terc-butil)-3-metil azetidina-1,3-dicarboxilato (3,56 ml, 18,08 mmol, 1,1 eq.). A mistura heterogênea resultante foi arrefecida a -78 °C, em seguida, LiHMDS a 1M em THF (18,07 ml, 18,08 mmol, 1,1 eq.) foi adicionado gota a gota e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 22 horas. A mistura de reação foi vertida lentamente em água e acetato de etila. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi novamente submetida à extração com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel utilizando diclorometano em heptano de 50% a 100% para dar o composto desejado (1-(terc-butil)-3-metil-3-(6-metoxi-2-(metiltio)-5-nitropirimidin-4-il) azetidina-1,3-dicarboxilato (10)) como um pó amarelo (4. 73 g, rendimento de de 66%).

D) 1-(TERC-BUTIL)-3-METIL-3-(6-AMINO-2-(METILTIO)-5-NITROPIRIMIDIN-4-IL) AZETIDINA-1,3-DICARBOXILATO (11)

[00106] O 1-(terc-butil)-3-metil-3-(6-metoxi-2-(metiltio)-5- nitropirimidin-4-il)azetidina-1,3-dicarboxilato (4,71 g, 11,36 mmol, 1,0 eq.) (10) foi diluído em uma solução de amônia a 7N em metanol (38 ml, 266 mmol, 20,0 eq.).

A suspensão resultante foi agitada durante 3 h 30 min à temperatura ambiente.

Em seguida, o precipitado formado foi filtrado e lavado com metanol para dar o composto esperado (1-(tert-butil)-3-metil-3-(6-amino-2-(metiltio)-5-nitropirimidin- 4-il)azetidina-1,3-dicarboxilato (11)) na forma de um pó branco (3,75 g, rendimento de 78%).

E) TERC-BUTIL-4’-AMINO-2’-(METILTIO)-6’-OXO-5’,6’-DIHIDROSPIRO[AZETIDINA- 3,7’-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDINA]-1-CARBOXILATO (12)

[00107] A uma suspensão de 1-(terc-butil)-3-metil-3-(6- amino-2-(metiltio)-5-nitropirimidin-4-il)azetidina-1,3-dicarboxilato (3,53 g, 8,84 mmol, 1,0 eq.) (11) em metanol (44 ml), pó de ferro (2,47 g, 44.2mmol, 5,0 eq.) foi adicionado, seguido de cloreto de amônio (2,36 g 44,2 mmol, 5,0 eq.). A mistura heterogênea resultante foi aquecida ao refluxo por 3 h 30 min. A solução foi arrefecida até a temperatura ambiente e agitada a esta temperatura durante a noite. A mistura foi em seguida filtrada através de pó de talco e lavada várias vezes com metanol. O filtrado foi concentrado até a secura e precipitado em água para dar o composto esperado (Terc-butil-4’-amino-2’-(metiltio)-6’-oxo- 5’,6’-dihidrospiro[azetidina-3,7’-pirrolo[3,2-d]pirimidina]-1-carboxilato (12)) como um pó bege (2,35 g, 79% de rendimento).

F) TERC-BUTIL-4’-AMINO-5’-(2-AMINOBENZO[D]OXAZOL-5-IL)-2’-(METILTIO)-6’-OXO- 5’,6’-DIHIDROSPIRO[AZETIDINA-3,7’-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDINA]-1-CARBOXILATO (13)

[00108] A uma solução de terc-butil-4-amino-2-metilsulfanil- 6-oxo-espiro[5H-pirrolo[3,2-d]pirimidina-7,3’-azetidina]-1’-carboxilato (500,0 mg, 1,48 mmol, 1,0 eq.) em 10 ml de DMF seco (10 ml), terc-butóxido de potássio (532 mg, 4,74 mmol, 3,0 eq.) foi adicionado. Após 5 min de agitação, foram adicionados ao meio de reação a 5-iodo-1,3-benzoxazol-2-amina (1,16 g, 4,45 mmol, 3,0 e q.) e depois a N,N-dimetilglicina (519,9 mg, 4,89 mmol, 3,0 eq.) e o brometo de cobre (I) (235 mg, 1,63 mmol, 1,0 e q.). A meio de reação foi desgaseificada com argônio, depois o tubo foi selado e aquecido a 145 °C durante 7 horas. Em seguida, uma solução a 1 M de KHSO4 foi adicionada até pH = 5 e a mistura foi extraída com acetato de etila. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi então submetida à extração novamente com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel utilizando metanol em diclorometano entre 0% e 10% para obter o tert-butil-4’-amino-5’-(2- aminobenzo[d]oxazol-5-il)-2’-(metiltio)-6’-oxo-5’,6’-dihidrospiro[azetidina-3,7’- pirrolo[3,2-d]pirimidina]-1-carboxilato (148 mg, 21% de rendimento) (13).

G) TERC-BUTIL-4’-AMINO-5’-(2-AMINOBENZO[D]OXAZOL-5-IL)-6’-OXO-5’,6’- DIHIDROSPIRO[AZETIDINA-3,7’-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDINA]-1-CARBOXILATO (14 - EXEMPLO 11)

[00109] Uma solução de terc-butil-4’-amino-5’-(2- aminobenzo[d]oxazol-5-il)-2’-(metiltio)-6-oxo-5’,6’-dihidroespiro[azetidina-3,7’- pirrolo[3,2-d]pirimidina]-1-carboxilato (75,0 mg, 0,16 mmol, 1,00 eq.) (13) em 1,4- dioxano/ MeOH (1: 1, 10 ml) foi hidrogenado em um aparelho H-Cube PRO utilizando um cartucho de Ni-Raney (0,5 ml/ min, 7 bar, 50 °C). A mistura de reação foi evaporada para dar o composto esperado (terc-butil-4’-amino-5’-(2- aminobenzo[d]oxazol-5-il)-6’-oxo-5’,6’-dihidroespiro[azetidina-3,7’-pirrolo[3,2- d]pirimidina]-1-carboxilato (14 – exemplo 11)) (50 mg, rendimento de 74%).

[00110] 1H RMN (DMSO-d6) δ: 1,43 (s, 9H), 4,08 (b, 4H), 5,53 (b, 2H), 7,01 (dd, J = 2,05, 8,30 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 2,05 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 8,30 Hz, 1H), 7,60 (s, 2H), 8,33 (s, 1H).

MS (ESI) m/ z = 424 [M + H]+ H) 1-ACETIL-4’-AMINO-5’-(2-AMINOBENZO[D]OXAZOL-5-IL)SPIRO[AZETIDINA-3,7’- CICLOPENTA[D]PIRIMIDIN]-6’(5’H)-ONA (15 – EXEMPLO 10)

[00111] A uma solução de terc-butil-4’-amino-5’-(2- aminobenzo[d]oxazol-5-il)-6-oxo-5’,6’-dihidroespiro[azetidina-3,7’-pirrolo[3,2- d]pirimidina]-1-carboxilato (48,0 mg, 0,11 mmol, 1,0 eq.) (14 – exemplo 11) em DCM (1 ml) a 4 °C, sob N2, o ácido trifluoroacético (0,5 ml) foi adicionado gota a gota. Após 4 horas, a mistura de reação foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em DCM/ MeOH (9: 1) e passado através de uma lâmina de alumina básica usando uma mistura de DCM/ MeOH (9: 1) como eluente. As frações contendo o composto esperado foram evaporadas e o produto bruto foi usado diretamente na próxima etapa.

[00112] A uma solução de 4’-amino-5’-(2-amino-1,3- benzoxazol-5-il)spiro[azetidina-3,7’-pirrolo[3,2-d]pirimidina]-6’-ona (38,0 mg, 0,12 mmol, 1,0 eq.) em DCM (2 ml) arrefecida a -78 °C, sob N2, a trietilamina (18,2 μl, 0,13 mmol, 1,1 eq.) e cloreto de acetila (8,43 μl, 0,12 mmol, 1,0 eq.) foram respectivamente adicionados. A mistura de reação foi mantida a -78 °C por 2 horas, seguida por um retorno lento à temperatura ambiente. Uma solução de água fria (4 °C) foi então adicionada e a mistura de duas fases foi agitada por 5 minutos. Foi então transferido para um funil de separação, a camada orgânica foi coletada e a fase aquosa foi extraída duas vezes com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e secas sob vácuo. O resíduo sólido foi purificado por cromatografia em coluna de alumina básica usando um gradiente de DCM/ MeOH de 98: 2 a 9: 1. As frações puras foram combinadas para dar o composto esperado (1-acetil-4’-amino-5’-(2- aminobenzo[d]oxazol-5-il)spiro[azetidina-3,7’-ciclopenta[d]pirimidin]-6’(5’H)-ona (15 – exemplo 10)) na forma de um pó branco (2,2 mg, rendimento de 5%).

[00113] 1H RMN (DMSO-d6) δ: 1,86 (s, 3H), 4,09 (b, 2H), 4,38 (b, 2H), 5,51 (b, 2H), 7,03 (dd, J = 2,12, 8,20 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 2,12 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 8,20 Hz, 1H), 7,61 (s, 2H), 8,33 (s, 1H).

MS (ESI) m/ z = 366 [M + H]+ H’) TERC-BUTIL-4’-AMINO-5’-(2-AMINOBENZO[D]OXAZOL-5-IL)-2’-(METILTIO)- 5’,6’-DIHIDROSPIRO[AZETIDINA-3,7’-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDINA]-1-CARBOXILATO

[00114] A uma solução de terc-butil-4’-amino-5’-(2-amino- 1,3-benzoxazol-5-il)-2’-metilsulfanil-6’-oxo-espiro[azetidina-3,7’-pirrolo[3,2- d]pirimidina]-1-carboxilato (145,0 mg, 0,31 mmol, 1,0 eq.) em 3 ml de tetrahidrofurano e, uma solução do complexo borano-metilsulfureto a 2M em diclorometano (1,39 ml, 2,78 mmol, 1,0 eq.) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante uma noite e 1 hora a 60 °C . Em seguida, foram adicionados água e acetato de etila. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi então submetida a re-extracção com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, secas sobre Na2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel usando metanol em diclorometano de 2% a 15% para obter o composto desejado tert-butil-4’-amino-

5’-(2-aminobenzo[d]oxazol-5-il)-2’-(metiltio)-5’,6’-dihidrospiro[azetidina-3,7’- pirrolo[3,2-d]pirimidina]-1-carboxilato (26 mg, rendimento de 19%) I’) TERC-BUTIL-4’-AMINO-5’-(2-AMINOBENZO[D]OXAZOL-5-IL)-5’,6’- DIHIDROSPIRO[AZETIDINA-3,7’-PIRROLO[3,2-D]PIRIMIDINA]-1-CARBOXILATO (16 – EXEMPLO 12)

[00115] O terc-butil-4’-amino-5’-(2-aminobenzo[d]oxazol-5- il)-2’-(metiltio)-6-oxo-5’,6’-dihidroespiro[azetidina-3,7’-pirrolo[3,2-d]pirimidina]-1- carboxilato (10,0 mg, 0,022 mmol, 1,0 eq.) foi dissolvido em 4 ml de uma mistura de 1,4-dioxano e metanol 1: 1. A solução resultante foi filtrada através de um miliporo e hidrogenada na presença de níquel de Raney em um dispositivo H- CUBE PRO (0,5 ml/ min, 7 barras, 50 °C). O sistema foi lavado com 20 ml de DMSO para dar uma solução contendo o composto esperado. O volume foi reduzido sob pressão reduzida e o óleo assim obtido foi purificado por cromatografia em fase reversa RP18 usando um gradiente de metanol em água de 30% a 50%, para dar o composto desejado (terc-butil-4’-amino-5’-(2- aminobenzo[d]oxazol-5-il)-5’,6’-dihidrospiro[azetidina-3,7’-pirrolo[3,2- d]pirimidina]-1-carboxilato (16 – exemplo 12)) (0,8 mg, 10% de rendimento).

[00116] 1H RMN (DMSO-d6) δ: 1,46 (s, 9H), 4,04 (b, 2H), 4,20 (s, 2H), 4,26 (b, 2H), 6,71 (dd, J = 2,07, 8,41 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 2,07 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 8,41 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H).

MS (ESI) m/ z = 410 [M + H]+ EXEMPLO 13: ATIVIDADES ENZIMÁTICAS DE MTOR E CELULAR DE MTORC1/ MTORC2

13.1 ATIVIDADE INIBITÓRIA DA MTOR CINASE

[00117] O modelo para a triagem da atividade inibitória de moléculas na mTOR foi desenvolvido com a tecnologia LANTHASCREEN™ (Lifetechnologies). O substrato da reação (400 nM final), as diluições em série das moléculas (1% de DMSO final) e a enzima (< 1 nM) são adicionadas sucessivamente a uma placa de 384 poços (Corning 4514) em um volume final de 10 µL por poço. Após 1 hora de reação à temperatura ambiente, são adicionados 10 μL de uma solução contendo 10 mM final de EDTA e 2 nM final de anticorpos marcados com Terbium. Após pelo menos 30 minutos de incubação à temperatura ambiente, o sinal TR-FRET é medido com um leitor de microplacas adequado, de acordo com as recomendações do fornecedor.

Os dados são normalizados por controles positivos (‘POS’ contendo uma concentração saturante de inibidor de referência) e controles negativos (‘NEG’ contendo 1% de DMSO): % de inibição = ((X-NEG) * 100)/ (POS-NEG). Os IC50s são calculados a partir de um modelo de logística de 4 parâmetros usando o software XLFit (IDBS).

13.2 ATIVIDADE INIBIDORA DE MTORC1/ MTORC2

[00118] As células A431 são semeadas em meio completo (DMEM + 10% de SVF) a 25.000 células por poço de uma placa de 96 poços revestida com poli-L-lisina. 24 horas antes do experimento, o meio foi substituído por meio sem soro. As diluições em série das moléculas a serem testadas foram adicionadas (DMSO final a 0,1%). Após 3 horas de incubação a 37 °C, a fosforilação dos biomarcadores S6RP (mTORC1) e AKT (mTORC2) é medida usando a tecnologia HTRF (Cisbio), de acordo com as recomendações do fornecedor. Os dados são normalizados por controles positivos (‘POS’ contendo uma concentração saturante de inibidor de referência) e controles negativos (‘NEG’ contendo 1% de DMSO): % de inibição = ((X-NEG) * 100)/ (POS-NEG). Os IC50s são calculados a partir de um modelo de logística de 4 parâmetros usando o software XLFit (IDBS).

[00119] A tabela de resultados das atividades:

IC50 IC50 Ki mTOR Exemplo Nome químico mTORC1 mTORC2 (nM) (nM) (nM)

5-(2-amino-benzooxazol-5-il)-7- 1 isobutil-7-metil-6,7-dihidro-5H- 2,0 1,0 2,2 pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina

5-(2-amino-benzooxazol-5-il)-7- 2 isobutil-7-metil-6,7-dihidro-5H- 130,0 68,5 136,8 pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina

5-(2-amino-benzooxazol-5-il)-7- 3 isobutil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2- 11,7 1,8 11,4 d]pirimidin-4-ilamina

5-(2-amino-benzooxazol-5-il)-7-metil- 4 7-metilsulfanilmetil-6,7-dihidro-5H- 3,6 11,7 14,5 (racêmico) pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina

5-(2-amino-benzooxazol-5-il)-7,7- 5 dietil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2- 34,6 8,6 16,3 d]pirimidin-4-ilamina

5-(2-amino-benzooxazol-5-il)-7,7- 6 dimetil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2- 37,8 17,7 31,4 d]pirimidin-4-ilamina

5-(2-amino-benzooxazol-5-il)-7-metil- 7 7-propil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[3,2- 8,7 19,5 34,5 d]pirimidin-4-ilamina

5-(2-amino-benzooxazol-5-il)-7,7- 8 dietil-6-metil-6,7-dihidro-5H- 212,7 151,6 242,8 pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina

4-amino-5-(2-amino-benzooxazol-5- 9 il)-7,7-dimetil-5,7-dihidro-pirrolo[3,2- 55,8 38,4 176,4 d]pirimidin-6-ona

1-acetil-4’-amino-5’-(2- aminobenzo[d]oxazol-5- 10 228,9 > 9999 > 9999 il)spiro[azetidina-3,7’- ciclopenta[d]pirimidin]-6’(5’H)-ona terc-butil-4’-amino-5’-(2- aminobenzo[d]oxazol-5-il)-6’-oxo- 11 109,7 5’,6’-dihidrospiro[azetidina-3,7’- pirrolo[3,2-d]pirimidina]-1-carboxilato

IC50 IC50 Ki mTOR Exemplo Nome químico mTORC1 mTORC2 (nM) (nM) (nM) terc-butil-4’-amino-5’-(2- aminobenzo[d]oxazol-5-il)-5’,6’- 12 50,5 88,1 127,9 dihidrospiro[azetidina-3,7’-pirrolo[3,2- d]pirimidina]-1-carboxilato 5-(2-amino-benzooxazol-5-il)-7-metil- Enantiômero 7-metilsulfanilmetil-6,7-dihidro-5H- 51,6 82,1 158,6 Exemplo 4 pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina racêmico 5-(2-amino-benzooxazol-5-il)-7- (exemplos 1 e isobutil-7-metil-6,7-dihidro-5H- 2,4 4,2 6,3 2) pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina outro 5-(2-amino-benzooxazol-5-il)-7-metil- enantiômero 7-metilsulfanilmetil-6,7-dihidro-5H- 8,0 4,7 8,3 Exemplo 4 pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ilamina

[00120] IC50: concentração de inibidor causando 50% de inibição.

[00121] Se refere a um índice prático de eficácia.

[00122] Ki: constante de dissociação do complexo enzima – inibidor. Indica a afinidade entre a enzima e o inibidor (inversamente).

[00123] A afinidade de um inibidor para uma enzima é dada pela constante de inibição Ki, que representa a concentração de inibidor para a qual metade dos locais enzimáticos estão ocupados. Quanto menor o Ki, maior a afinidade de um inibidor. Esta constante de inibição, expressa em moles por litro, também corresponde à constante de dissociação do complexo enzima – inibidor.

[00124] Considerando os resultados acima, o composto de acordo com o Exemplo 1 parece ter a melhor atividade inibidora da mTOR quinase, tanto no mTORC1 quanto no mTORC2.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. COMPOSTO INIBIDOR DE MTOR, caracterizado por ser de fórmula geral (I): (I), ou um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, na qual: - R1 representa um átomo de hidrogênio, um radical alquila C1-C3, ciclopropila, ou acila; - R2 e R3 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio selecionado a partir de Cl ou F, um radical alquila C1-C6 linear ou ramificado, interrompido ou não por um heteroátomo O, S, ou -NR7, e não substituído ou substituído por uma cicloalquila ou uma heterocicloalquila C3-C5 ou um anel aromático/ heterocíclico não substituído ou mono- ou polissubstituído por um átomo de halogênio selecionado a partir de Cl, F, ou um radical -OH, metila (me), -OMe, ou formam em conjunto um anel ou uma heterocicloalquila C3-C6; - entendendo-se que R2 e R3 não representam ambos um átomo de halogênio; - com R7 representando um átomo de hidrogênio, um radical alquila C1-C3, acila, ou carboxialquila C1-C4; - R4 representa um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio selecionado a partir de F, Cl, Br, um radical -OR8, alquila C1-C3, ciclopropila; - com R8 representando um átomo de hidrogênio, um radical alquila C1-C3, ciclopropila, ou acila; - R5 e R6 representam, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio, um radical alquila C1-C3, ciclopropila, ou formam em conjunto uma carbonila ou um anel C3-C4; e - X representa um átomo de hidrogênio, ou um radical -NH2, -OH, metila.

2. COMPOSTO INIBIDOR DE MTOR de fórmula (I), de acordo com a reivindicação 1, ou um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, caracterizado por: - R1 representar um átomo de hidrogênio; - R2 e R3 representarem, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio, um radical alquila C1-C4 linear ou ramificado, interrompido ou não por um heteroátomo S ou -NR7, ou formam em conjunto uma heterocicloalquila C4; - com R7 representando um radical acila, carboxitercbutila; - R4 representar um átomo de hidrogênio; - R5 e R6 representarem, independentemente um do outro, um átomo de hidrogênio, um grupo metila, ou formam em conjunto uma carbonila; e - X representar um átomo de hidrogênio.

3. COMPOSTO INIBIDOR DE MTOR de fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, ou um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis, caracterizado por: - R1 representar um átomo de hidrogênio; - R2 representar um grupo metila; - R3 representar um radical alquila C1-C4 linear ou ramificado, interrompido ou não por um heteroátomo S;

- R4 representar um átomo de hidrogênio; - R5 e R6 representarem um átomo de hidrogênio; e - X representar um átomo de hidrogênio.

4. COMPOSIÇÃO, caracterizada por compreender, em um meio fisiologicamente aceitável, um composto inibidor de mTOR de fórmula (I), conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, ou um de seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

5. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por compreender entre 0,001% e 5% do referido composto em peso do peso total da composição.

6. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 5, caracterizada por ser em uma forma adequada para administração por via oral ou por via tópica.

7. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada por estar em uma forma adequada para administração por via tópica.

8. COMPOSIÇÃO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 7, caracterizada por sua utilização ser como medicamento.

9. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada por sua utilização ser no tratamento de doenças que envolvem uma enzima mTOR com atividade de serina-treonina quinase.

10. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada por sua utilização ser no tratamento de condições dermatológicas ligadas a um distúrbio de queratinização com um componente proliferativo, inflamatório e/ ou imuno-alérgico, tais como a psoríase, a dermatite atópica, a queratose actínica ou a acne.

11. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada por sua utilização ser no tratamento de dermatite atópica.

12. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 11,

caracterizada por sua utilização ser no tratamento do componente inflamatório da dermatite atópica.

Petição 870200075271, de 17/06/2020, pág. 101/103 2HCl/ dioxano

HCl conc.

RuPhos/ RuPhos Pd G1 1/2

EtOH/ Água, NaOtBu, Tolueno, 100 °C SFC quiral

Figura 1

Fe, NH4Cl, 78 °C à temperatura ambiente MeOH-Água

Petição 870200075271, de 17/06/2020, pág. 102/103 Dioxano/ MEOH (16 – exemplo 12) 2/2

N, N-dimetilglicina

(14 – exemplo 11)

(15 – exemplo 10)

Figura 2