BR112020009765A2 - composições e métodos que usam uma combinação de indutor de autofagia e alto teor de proteína para indução de autofagia - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a composições e métodos que podem usar uma combinação de um indutor de autofagia, como espermidina, e alto teor de proteína para indução de autofagia em um indivíduo que precisa da mesma. De preferência, uma formulação contendo uma combinação de um indutor de autofagia e alto teor de proteína é administrada ao indivíduo em uma quantidade eficaz para induzir a autofagia, por exemplo no músculo. A formulação pode promover de modo concomitante a síntese de proteínas e a remoção de materiais celulares danificados. O receptor da administração pode ser um paciente gravemente doente, por exemplo, um paciente internado na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) e/ou um paciente em envelhecimento, por exemplo, um indivíduo idoso ou um indivíduo com sarcopenia.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPO-

SIÇÕES E MÉTODOS QUE USAM UMA COMBINAÇÃO DE INDUTOR DE AUTOFAGIA E ALTO TEOR DE PROTEÍNA PARA INDUÇÃO DE AUTOFAGIA". ANTECEDENTES

[001] A presente revelação refere-se genericamente a composi- ções e métodos que usam uma combinação de um indutor de autofa- gia (por exemplo, espermidina) e alto teor de proteína para indução de autofagia. Mais especificamente, a presente revelação se refere à administração de uma formulação que compreende uma combinação de indutor de autofagia e alto teor de proteína, em uma quantidade eficaz para induzir a autofagia, por exemplo, no músculo. A formula- ção pode promover de modo concomitante a síntese de proteínas e a remoção de materiais celulares danificados. O receptor da adminis- tração pode ser um paciente gravemente doente, por exemplo, um paciente internado na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) e/ou um paciente em envelhecimento, por exemplo, um indivíduo idoso ou um paciente com sarcopenia ou debilidade.

[002] Devido aos grandes avanços na medicina de cuidados in- tensivos, pacientes gravemente doentes frequentemente sobrevivem a condições agudas que anteriormente eram letais. No entanto, a morta- lidade permanece elevada nesses pacientes que sobrevivem a essa fase inicial e entram em uma fase crônica de doença crítica. A mortali- dade é frequentemente resultante de síndrome de falência de múltiplos órgãos não resolvida, miopatia do paciente crítico ou formas menos graves de fraqueza muscular. Tratamentos foram introduzidos para melhorar a miopatia e a fraqueza muscular, como hiperalimentação, hormônio do crescimento ou androgênios, mas falharam porque essas intervenções aumentaram inesperadamente o risco de falência de ór- gãos e morte. Além disso, o suporte nutricional a pacientes de trauma e cirúrgicos pode, na verdade, ter efeitos prejudiciais.

[003] Ainda não existem medidas eficazes para fornecer tratamen- tos e nutrição adequados a pacientes gravemente doentes.

[004] Além disso, a perda de massa muscular relacionada à ida- de é inevitável em todos os indivíduos; entretanto, a sua progressão depende em grande parte de fatores genéticos e ambientais, como atividade física e ingestão nutricional. A sarcopenia foi definida como o ponto no qual a perda de massa e função musculares relacionadas à idade enfraquecem e afetam a qualidade de vida. Em contrapartida, a fragilidade é outra classificação de declínio da função física relacio- nada à idade que apresenta baixa força e funcionalidade muscular, mas não massa muscular. A sarcopenia é definida clinicamente de acordo com a baixa massa e função musculares, com o uso de cortes que estratificam a população idosa para os indivíduos em um estado de mobilidade patológica. A sarcopenia prevê futuras deficiência e mortalidade, e recebeu um código de doença no CID-10 (ICD-10 - "International Classification of Diseases") oficial em 2016 (Anker et al., 2016).

SUMÁRIO

[005] A degradação de proteínas citoplasmáticas é mediada por um processo celular chamado de macroautofagia, também chamado sim- plesmente de autofagia. Os processos de autofagia também estão envol- vidos na resposta inflamatória e facilitam a destruição de bactérias pelo sistema imunológico. A autofagia constitui a principal via de degradação lisossômica que recicla material celular potencialmente nocivo e danifica- do, como mitocôndrias danificadas. Notavelmente, a autofagia neutraliza a morte celular e prolonga a longevidade em vários modelos de envelhe- cimento. Conforme detalhado nos dados experimentais apresentados posteriormente na presente invenção, os inventores descobriram surpre- endentemente que um indutor de autofagia (por exemplo, espermidina)

induz de modo sinérgico autofagia muscular em combinação com uma dieta isocalórica com alto teor de proteína, mas é inativo em uma dieta isocalórica com baixa proteína. Essa indução sinérgica no músculo pela combinação de alto teor de proteína e um indutor de autofagia contrasta com o que foi observado no fígado.

[006] Consequentemente, em uma modalidade genérica, a pre- sente revelação fornece um método de induzir autofagia em um indiví- duo que precise do mesmo. O método compreende administrar uma composição que compreende uma quantidade eficaz de uma combi- nação de indutor de autofagia e alto teor de proteína. A alta quantida- de de proteína pode ser uma quantidade da proteína que tem pelo menos cerca de 25% de energia da composição, e/ou a alta quantida- de de proteína pode ser uma quantidade da proteína que fornece uma razão entre proteína e energia maior que 6 g/100 kcal da composição.

[007] Em uma modalidade, o indutor de autofagia é selecionado do grupo que consiste em espermidina, urolitina (por exemplo, Urolitina A, B ou D), rapamicina, Torin1, ácido valproico, polifenóis (por exemplo, o resveratrol), cafeína, metformina, ativadores de proteína quinase ati- vada por AMP 5’ (AMPK), inibidores de canal de cálcio do tipo L, ceto- nas (por exemplo, beta-hidroxibutirato, sais de cetona ou derivados de éster de cetona) e misturas dos mesmos.

[008] Em uma modalidade, a autofagia é induzida no músculo esquelético.

[009] Em uma modalidade, o indivíduo é um indivíduo em enve- lhecimento.

[0010] Em uma modalidade, o indivíduo tem sarcopenia ou fragili- dade ou está em risco de desenvolver sarcopenia ou fragilidade.

[0011] Em uma modalidade, o indivíduo está gravemente doente.

[0012] Em uma modalidade, o indivíduo tem uma miopatia do pa- ciente crítico ou está em risco de desenvolver miopatia do paciente crítico.

[0013] Em uma modalidade, ao menos uma porção da proteína é selecionada do grupo que consiste em (i) proteína de uma fonte ani- mal, (ii) proteína de uma fonte vegetal e (iii) uma mistura das mesmas.

[0014] Em uma modalidade, ao menos uma porção da proteína é selecionada do grupo que consiste em (i) proteína do leite, (ii) proteína do soro do leite, (iii) caseinato, (iv) caseína micelar, (v) proteína de er- vilha, (vi) proteína de soja e (vii) misturas dos mesmos.

[0015] Em uma modalidade, a proteína tem uma formulação sele- cionada do grupo que consiste em (i) ao menos 50%, em peso, da proteína é caseína, (ii) ao menos 50%, em peso, da proteína é prote- ína do soro do leite, (iii) ao menos 50%, em peso, da proteína é prote- ína de ervilha e (iv) ao menos 50%, em peso, da proteína é proteína de soja.

[0016] Em uma modalidade, ao menos uma porção da proteína é selecionada do grupo que consiste em (i) aminoácidos na forma livre, (ii) proteína não hidrolisada, (iii) proteína parcialmente hidrolisada, (iv) proteína extensivamente hidrolisada e (v) misturas dos mesmos. A proteína pode compreender um ou mais aminoácidos selecionados do grupo que consiste em histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptofano, valina, arginina, cisteína, glutamina, glicina, prolina, ornitina, serina, tirosina e misturas dos mesmos. A pro- teína pode compreender peptídeos que têm um comprimento de 2 a 10 aminoácidos.

[0017] Em uma modalidade, a proteína compreende aminoácidos de cadeia ramificada em ao menos uma forma selecionada do grupo que consiste em (i) forma livre, (ii) ligada a pelo menos um aminoáci- do adicional e (iii) misturas das mesmas. Os aminoácidos de cadeia ramificada podem compreender leucina em uma quantidade eficaz para ativar o mTOR no indivíduo.

[0018] Em uma modalidade, ao menos uma porção da proteína é 5 a 95% hidrolisada.

[0019] Em uma modalidade, a proteína tem uma formulação sele- cionada do grupo que consiste em (i) ao menos 50% da proteína tem um peso molecular de 1 a 5 kDa, (ii) ao menos 50% da proteína tem um peso molecular de 5 a 10 kDa e (iii) ao menos 50% da proteína tem um peso molecular de 10 a 20 kDa.

[0020] Em uma modalidade, a composição compreende uma fonte de carboidrato. A composição pode ter uma razão de proteí- na:carboidrato elevada.

[0021] Em uma modalidade, a administração usa ao menos uma via selecionada do grupo dentre oral, enteral, parenteral e injeção intraveno- sa.

[0022] Em uma outra modalidade, a presente revelação fornece uma composição que compreende uma combinação de um indutor de autofagia (por exemplo, espermidina) e alto teor de proteína e a com- posição compreende uma quantidade da combinação por porção que é eficaz para induzir autofagia em um indivíduo que precisa da mes- ma. A composição pode ser selecionada do grupo que consiste em composições alimentícias, suplementos dietários, composições nutri- cionais, nutracêuticos, produtos nutricionais em pó a serem reconsti- tuídos em água ou leite antes do consumo, aditivos alimentares, me- dicamentos, bebidas e combinações dos mesmos.

[0023] Em uma outra modalidade, a presente revelação fornece um método para fabricação de uma composição terapêutica, o méto- do compreendendo a adição de uma combinação de indutor de auto- fagia (por exemplo, espermidina) e alto teor de proteína a uma com- posição-base para formar uma composição terapêutica, a composi- ção terapêutica compreendendo uma quantidade da combinação por porção que é eficaz para induzir autofagia em um indivíduo que pre-

cise da mesma. A composição-base pode ser formulada para admi- nistração através de ao menos uma via selecionada do grupo dentre oral, enteral, parenteral e injeção intravenosa.

[0024] Em uma outra modalidade, a presente revelação fornece um método que compreende a administração de uma composição que compreende uma quantidade de uma combinação de um indutor de autofagia e alto teor de proteína que promove de modo concomitante a síntese de proteína e remoção de materiais celulares danificados a um indivíduo que precise da mesma.

[0025] Em uma outra modalidade, a presente revelação fornece um método para alcançar pelo menos um resultado selecionado do grupo que consiste em (i) um nível aumentado de "turnover" ou expressão de proteína LC3-II, (ii) um nível aumentado da razão entre as proteínas LC3- II e LC3-I, (iii) um nível diminuído de proteína p62, (iv) um nível diminuído de uma proteína do autofagossoma, (v) um nível aumentado de expres- são de mRNA de um gene relacionado à autofagia, (vi) um número e/ou tamanho e/ou intensidade aumentada de puncta positiva para LC3 e (vii) degradação de proteína LC3 e/ou outra proteína de autofagossoma. O método compreende administrar uma quantidade terapeuticamente efi- caz de uma composição que compreende uma combinação de um indu- tor de autofagia e alto teor de proteína a um indivíduo que precise da mesma.

[0026] Uma vantagem de uma ou mais modalidades fornecidas pela presente revelação é melhorar a condição de animais gravemente doentes, seres humanos gravemente doentes, animais em envelheci- mento ou seres humanos em envelhecimento.

[0027] Uma outra vantagem de uma ou mais modalidades forne- cidas pela presente revelação é evitar ou tratar o catabolismo exces- sivo, por exemplo, em um paciente gravemente doente ou em um in- divíduo em envelhecimento.

[0028] Ainda uma outra vantagem de uma ou mais modalidades fornecidas pela presente revelação é reduzir ou evitar o risco de mor- bidade ou mortalidade devido ao catabolismo excessivo, por exem- plo, em um paciente gravemente doente ou um indivíduo em enve- lhecimento.

[0029] Uma vantagem adicional da presente revelação consiste em reverter, tratar ou curar a síndrome de disfunção de múltiplos ór- gãos em um paciente gravemente doente.

[0030] Uma vantagem adicional de uma ou mais modalidades fornecidas pela presente revelação é proteger um indivíduo em enve- lhecimento de doenças neurológicas, como comprometimento cogni- tivo leve, doença de Alzheimer, doença de Parkinson, esclerose late- ral amilóide, esclerose múltipla, doença de Huntington, demência e doenças neurológicas raras relacionadas.

[0031] Uma vantagem adicional de uma ou mais modalidades for- necidas pela presente revelação é proteger um indivíduo em envelhe- cimento da disfunção muscular, por exemplo, sarcopenia, fragilidade, miosite por corpos de inclusão, miopatia/miólise induzida por fármacos como corticosteroides ou estatinas, ou desgaste muscular induzido por imobilização ou hospitalização.

[0032] Uma vantagem adicional de uma ou mais modalidades forne- cidas pela presente revelação é proteger um paciente que sofre de uma doença genética, incluindo, mas não se limitando a, distrofias muscula- res, como Distrofia muscular de Duchenne ou distrofia muscular de colá- geno VI, encefalomiopatias mitocondriais, miopatias mitocondriais, doen- ças de armazenamento de glicogênio, doenças de armazenamento lisos- somal, doença de Pompe.

[0033] Uma outra vantagem de uma ou mais modalidades forne- cidas pela presente revelação é uma composição que pode ser admi- nistrada por via parenteral ou enteral, por exemplo, como uma com-

posição líquida aquosa, a um paciente gravemente doente para indu- zir a autofagia, por exemplo, para tratar a disfunção de múltiplos ór- gãos ou queimadura.

[0034] Ainda uma outra vantagem de uma ou mais modalidades fornecidas pela presente revelação é diminuir um intervalo de tempo em que um paciente gravemente doente passa em um respirador ou acelerar o tempo de desmame de um respirador.

[0035] Uma outra vantagem de uma ou mais modalidades forne- cidas pela presente revelação é proteger um paciente gravemente doente submetido à nutrição parenteral, por exemplo, contra a sín- drome de falência de múltiplos órgãos ou fraqueza muscular causada pela liberação de nutrientes por via parenteral, particularmente, so- brecarga nutricional desbalanceada ou relativa.

[0036] Uma vantagem adicional de uma ou mais modalidades for- necidas pela presente revelação é proteger um indivíduo em envelhe- cimento contra fraqueza muscular.

[0037] Ainda uma outra vantagem de uma ou mais modalidades fornecidas pela presente revelação é aumentar a sobrevivência de um paciente gravemente doente ou um indivíduo em envelhecimento.

[0038] Uma vantagem adicional de uma ou mais modalidades for- necidas pela presente revelação é acelerar a recuperação da mobili- dade ou encurtar o tempo de imobilidade, após alta da unidade de te- rapia intensiva.

[0039] Ainda outra vantagem de uma ou mais modalidades forneci- das pela presente revelação é um efeito benéfico mesmo quando um pa- ciente gravemente doente já está em um estágio muito avançado de uma condição de risco à vida.

[0040] Características e vantagens adicionais são descritas no presente documento e se tonarão evidentes a partir da descrição de- talhada a seguir e das figuras.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0041] A Figura 1 mostra imagens de Western blot do exemplo experimental aqui revelado.

[0042] A Figura 2 mostra a quantificação densitométrica da quan- tidade de proteína LC3-II normalizada para GAPDH do exemplo expe- rimental aqui revelado (U.A. : unidades arbitrárias). Os asteriscos re- presentam os níveis de significância calculados por ANOVA com teste post hoc de Fisher *** p < 0,001.

DESCRIÇÃO DETALHADA Definições

[0043] Algumas definições são fornecidas mais adiante neste do- cumento. No entanto, as definições podem estar situadas na seção "Modalidades", abaixo, e o cabeçalho "Definições", acima, não signi- fica que tais revelações na seção "Modalidades" não sejam defini- ções.

[0044] Todas as porcentagens se referem ao peso total da compo- sição, a não ser que seja expressamente indicado em contrário. De modo similar, todas as razões estão em peso, a não ser que seja indi- cado expressamente em contrário. Quando é feita referência ao pH, os valores correspondem ao pH medido a 25°C com equipamento pa- drão. Como usados aqui, os termos "cerca de", "aproximadamente" e "substancialmente" são entendidos como se referindo aos números em um intervalo de numerais, por exemplo, a faixa de -10% a +10% do número de referência, de preferência, de -5% a +5% do número de referência, com mais preferência, de -1% a +1% do número de refe- rência, com a máxima preferência, de -0,1% a +0,1% do número de referência.

[0045] Além disso, todas as faixas numéricas do presente docu- mento devem ser entendidas para incluir todos os números inteiros, fracionários ou não fracionários, dentro da faixa. Além disso, estas faixas numéricas devem ser interpretadas como respaldando uma reivindicação direcionada a qualquer número ou subconjunto de nú- meros que está naquela faixa. Por exemplo, uma revelação de 1 a 10 deve ser interpretada como abrangendo uma faixa de 1 a 8, de 3 a 7, de 1 a 9, de 3,6 a 4,6, de 3,5 a 9,9, e assim por diante.

[0046] Como usado aqui e nas reivindicações em anexo, a forma singular de uma palavra inclui o plural, a menos que o contexto de- termine claramente o contrário. Assim, as referências "um", "uma", "o" e "a" são, de modo geral, inclusivas dos plurais dos respectivos termos. Por exemplo, a referência a "um ingrediente" ou "um método" inclui uma pluralidade de tais "ingredientes" ou "métodos". O termo "e/ou" usado no contexto de "X e/ou Y" deve ser interpretado como "X" ou "Y" ou "X e Y". De modo similar, "ao menos um dentre X ou Y" deve ser interpretado como "X" ou "Y" ou "tanto X como Y".

[0047] De modo similar, as palavras "compreendem", "compreende" e "que compreende(m)" serão interpretadas inclusivamente em vez de exclusivamente. De modo semelhante, os termos "incluem", "que in- clui(em)" e "ou" devem todos ser interpretados como inclusivos, a menos que tal interpretação esteja claramente excluída pelo contexto. Entretan- to, as modalidades fornecidas pela presente revelação podem não ter nenhum elemento que não seja especificamente revelado na presente invenção. Dessa forma, uma revelação de uma modalidade definida usando o termo "compreendendo/que compreende(m)" também é uma revelação de modalidades "que consistem essencialmente em" e "consis- tem em" os componentes revelados. O termo "consistindo essencialmen- te em" significa que a modalidade compreende mais de 50%, em peso, dos componentes identificados, de preferência ao menos 75%, em peso, dos componentes identificados, com mais preferência ao menos 85%, em peso, dos componentes identificados, com a máxima preferência ao menos 95%, em peso, dos componentes identificados, por exemplo ao menos 99%, em peso, dos componentes identificados.

[0048] Quando usado aqui, o termo "exemplo", particularmente quando seguido por uma lista de termos, é meramente exemplificador e ilustrativo e não deve ser considerado exclusivo ou abrangente. Qualquer modalidade aqui revelada pode ser combinada com qual- quer outra modalidade aqui revelada, salvo indicação expressa em contrário.

[0049] O termo "animal" inclui, mas não se limita a, mamíferos, o que inclui, mas não se limita a, roedores, mamíferos aquáticos, animais do- mésticos como cães e gatos, animais de fazenda como ovelhas, porcos, vacas e cavalos, e seres humanos. Quando os termos "animal", "mamífe- ro" ou uma forma plural dos mesmos forem usados, esses termos tam- bém se aplicam a qualquer animal que seja capaz do efeito apresentado ou que se pretende apresentar pelo contexto da passagem, por exemplo um animal capaz de autofagia. Como usado aqui, o termo "paciente" é entendido como incluindo um animal, por exemplo um mamífero e, de preferência, um ser humano que está recebendo ou que está destinado a receber tratamento, como o tratamento aqui definido. Embora os termos "indivíduo" e "paciente" sejam frequentemente usados na presente in- venção para se referirem a um ser humano, a presente revelação não é assim limitada.

[0050] Consequentemente, os termos "indivíduo" e "paciente" se referem a qualquer animal, mamífero ou ser humano que possa se be- neficiar dos métodos e composições aqui revelados. De fato, animais não humanos sofrem de doença grave prolongada que imita a condi- ção humana. Esses animais gravemente doentes sofrem das mesmas perturbações metabólicas, imunológicas e endócrinas e desenvolvi- mento de falência de órgãos e debilitação muscular do ser humano. Além disso, animais também sentem os efeitos do envelhecimento.

[0051] O termo "idoso" no contexto de um ser humano significa uma idade desde o nascimento de pelo menos 55 anos, de preferência acima de 63 anos, com mais preferência acima de 65 anos e com a máxima preferência acima de 70 anos. O termo "adulto mais velho" ou "indivíduo em envelhecimento" no contexto de um ser humano significa uma idade desde o nascimento de pelo menos 45 anos, de preferência acima de 50 anos, com mais preferência acima de 55 anos e inclui in- divíduos idosos.

[0052] Para outros animais, um "adulto mais velho" ou "indivíduo em envelhecimento" já excedeu 50% da expectativa média de vida para sua espécie específica e/ou raça dentro de uma espécie. Um animal é considerado "idoso" se ultrapassou 66% da expectativa de vida média esperada, de preferência, se ultrapassou os 75% da ex- pectativa de vida média esperada, com mais preferência, se ultrapas- sou 80% da expectativa de vida média esperada. Um gato ou cão em envelhecimento tem uma idade desde o nascimento de ao menos cerca de 5 anos. Um gato ou cão idoso tem uma idade desde o nas- cimento de ao menos cerca de 7 anos.

[0053] A "sarcopenia" é definida como a perda de massa muscular e de funcionalidade associada à idade (incluindo força muscular e velo- cidade de marcha). Conforme utilizado aqui, "debilidade" é definida co- mo um estado clinicamente reconhecível de vulnerabilidade aumentada resultante do declínio associado ao envelhecimento em reserva e fun- ção entre múltiplos sistemas fisiológicos, de modo que a capacidade de lidar com estressores de todos os dias ou agudos é comprometida. Na ausência de um padrão quantitativo estabelecido, a debilidade foi defi- nida operacionalmente por Fried et al. como atendendo a três de cinco critérios fenotípicos indicando vigor comprometido: (1) fraqueza (força de preensão nos 20% mais baixos da população na linha de base, ajus- tada em função do gênero e do índice de massa corporal), (2) baixa re- sistência e energia (exaustão autorrelatada associada ao V̇O2 máx), (3)

lentidão (20% mais baixo da população na linha de base, com base no tempo para caminhar 15 pés (4 metros e meio), ajustada em função do gênero e altura em pé), (4) baixa atividade física (escore ponderado de quilocalorias gastas por semana na linha de base, quintil mais baixo de atividade física identificado para cada gênero; por exemplo, menor que 383 kcal/semana para homens e menor que 270 kcal/semana para mu- lheres) e/ou perda de peso não intencional (10 lbs. (4,54 kg) no ano passado). Fried LP, Tangen CM, Walston J, et al., "Frailty in older aduls: evidence for a phenotype." J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 56(3):M146–M156 (2001). Um estágio pré-debilidade, no qual um ou dois desses critérios estão presentes, identifica um alto risco de pro- gressão para debilidade.

[0054] Os termos "tratamento" e "tratar" incluem qualquer efeito que resulte na melhora da condição ou do distúrbio, por exemplo di- minuição, redução, modulação ou eliminação da condição ou do dis- túrbio. O termo não necessariamente sugere que um indivíduo seja tratado até a recuperação total. Exemplos não limitadores de "tratar" ou "tratamento de" uma condição ou um distúrbio incluem: (1) inibir a condição ou o distúrbio, isto é, interromper o desenvolvimento da condição ou do distúrbio ou de seus sintomas clínicos e (2) aliviar a condição ou o distúrbio, isto é, fazer com que haja regressão tempo- rária ou permanente da condição ou do distúrbio ou de seus sintomas clínicos. Um tratamento pode ser relacionado ao paciente ou ao mé- dico.

[0055] Os termos "prevenção" ou "prevenir" significam fazer com que os sintomas clínicos da condição ou do distúrbio em questão não se desenvolvam em um indivíduo que pode estar exposto ou predis- posto à condição ou ao distúrbio, mas que ainda não experimenta ou apresenta sintomas da condição ou do distúrbio. Os termos "condi- ção" e "distúrbio" significam qualquer doença, condição, sintoma ou indicação.

[0056] Os termos relativos "melhorado", "aumentado", "intensifica- do" e similares se referem aos efeitos da composição compreendendo uma combinação de indutor de autofagia (por exemplo, espermidina) e alto teor de proteína (aqui revelada) em relação a uma composição com menos proteína, mas, de outra forma, idêntica.

[0057] Os termos "alimento", "produto alimentício" e "composição alimentícia" significam um produto ou uma composição que é desti- nada à ingestão por um indivíduo, como um ser humano e que forne- ce ao menos um nutriente ao indivíduo. As composições da presente revelação, incluindo as muitas modalidades aqui descritas, podem compreender, consistir ou consistir essencialmente nos elementos e nas limitações essenciais aqui descritos, além de quaisquer ingredi- entes, componentes ou limitações adicionais ou opcionais aqui des- critos ou de outro modo úteis em uma dieta.

[0058] Como usado aqui, uma "nutrição completa" contém tipos e níveis suficientes de macronutrientes (proteína, gorduras e carboidratos) e micronutrientes para ser suficiente como uma única fonte de nutrição para o animal ao qual a composição é administrada. Os indivíduos po- dem receber 100% das suas necessidades nutricionais de tais compo- sições nutricionais completas.

[0059] Como usado aqui, o termo "paciente gravemente doente" é um indivíduo que apresenta um episódio agudo de risco à vida ou que é diagnosticado como estando em perigo iminente de tal episó- dio. Um paciente gravemente doente está clinicamente instável e, quando não tratado, está propenso a morrer (por exemplo, > 50% de chance de morte).

[0060] Exemplos não limitadores de pacientes gravemente doen- tes incluem um paciente que sofreu ou está em risco de sofrer sín- drome de falência aguda de um único ou de múltiplos sistemas de órgãos com risco à vida devido à doença ou lesão, um paciente que está sendo operado e em que há intercorrência de complicações e um paciente que tenha sido submetido à cirurgia de um órgão vital na última semana ou que tenha sido submetido a uma cirurgia de grande porte na última semana.

[0061] Exemplos não limitadores mais específicos de um paciente gravemente doente incluem um paciente que sofreu ou está em risco de sofrer síndrome de falência aguda de um único ou de múltiplos sistemas de órgãos aguda com risco à vida devido à doença ou lesão e um paciente que está sendo operado e em que há intercorrência de complicações. Exemplos não limitadores específicos adicionais de um paciente gravemente doente incluem um paciente que precise de um ou mais dentre cirurgia cardíaca, cirurgia cerebral, cirurgia toráci- ca, cirurgia abdominal, cirurgia vascular ou transplante; e um paciente que sofre de um ou mais dentre uma doença neurológica, um trauma cerebral, insuficiência respiratória, peritonite abdominal, múltiplos traumas, uma queimadura grave ou polineuropatia do paciente crítico.

[0062] O termo "unidade de terapia intensiva" (UTI) se refere à parte de um hospital onde pacientes gravemente doentes são tratados. O termo "unidade de terapia intensiva" também abrange uma casa de repouso; uma clínica, por exemplo, uma clínica privada; ou similares, se as atividades de tratamento ali realizadas forem iguais ou similares àquelas de uma UTI. Um "paciente de UTI" é abrangido pelo termo "paciente gravemente doente".

[0063] O termo "disfunção de múltiplos órgãos" se refere a uma con- dição resultante de infecção, hipoperfusão, hipermetabolismo ou lesão, como acidente ou cirurgia. A "falência de múltiplos órgãos" da qual mor- rem pacientes gravemente doentes é considerada uma síndrome clínica descritiva definida por uma disfunção ou falência de pelo menos dois sis- temas de órgãos vitais. Os sistemas de órgãos vitais que são uniforme-

mente e os mais especificamente afetados são fígado, rins, pulmões, bem como o sistema cardiovascular, o sistema nervoso e o sistema he- matológico. Exemplos não limitadores de disfunção de múltiplos órgãos incluem síndrome de desconforto respiratório agudo, insuficiência cardía- ca, insuficiência hepática, insuficiência renal, insuficiência respiratória, cuidados intensivos, choque, queimaduras extensas, sepse (por exem- plo, síndrome da resposta inflamatória sistêmica) e acidente vascular ce- rebral.

[0064] O termo "administração enteral" abrange a administração por via oral (incluindo administração por gavagem oral), bem como adminis- tração por via retal, embora a administração oral seja preferencial. O ter- mo "administração parenteral" se refere à liberação de substâncias feita por outras vias que não a do trato digestivo e inclui vias de administra- ção, como intravenosa, intra-arterial, intramuscular, intracerebroventricu- lar, intraóssea, intradérmica, intratecal e também administração intraperi- toneal, infusão intravesical e injeção intracavernosa.

[0065] A administração parenteral preferencial é a administração intravenosa. Uma forma específica de administração parenteral é a liberação por administração intravenosa de nutrição. A nutrição paren- teral é "nutrição parenteral total" quando nenhum alimento é fornecido por outras vias. "Nutrição parenteral" é, de preferência, uma solução aquosa isotônica ou hipertônica (ou composições sólidas a serem dis- solvidas, ou concentrados líquidos a serem diluídos para obter uma solução isotônica ou hipertônica) que compreende um sacarídeo como glicose e que compreende adicionalmente um ou mais dentre lipídios, aminoácidos e vitaminas. Modalidades

[0066] Um aspecto da presente revelação é um método para indu- zir autofagia em um indivíduo que precise disso. O método compreen- de administrar uma composição que compreende uma combinação de indutor de autofagia e alto teor de proteína (por exemplo, cerca de 25% da energia total da composição), e a composição é administrada para fornecer uma quantidade da combinação que seja eficaz para in- duzir a autofagia, por exemplo, no músculo. A composição pode ser administrada por via parenteral, enteral ou intravenosa.

[0067] O indutor de autofagia pode ser selecionado do grupo que consiste em espermidina, urolitina (por exemplo, urolitina A, B ou D), rapamicina, Torin1, ácido valproico, polifenóis (por exemplo, o resve- ratrol), cafeína, metformina, ativadores de proteína quinase ativada por AMP 5′ (AMPK), inibidores de canal de cálcio do tipo L e misturas dos mesmos. Exemplos não limitadores de indutores de autofagia adequa- dos são espermidina, ácido palmítico, 5 aminoimidazol-4-carboxamida ribosídeo (AICAR), verapamil, nifedipina, diltiazem, derivados de fenoti- azina piperazina (por exemplo, trifluoperazina), cetonas (por exemplo, beta-hidroxibutirato, sais de cetona ou derivados de éster de cetona) e misturas dos mesmos. Exemplos não limitadores de formas adequadas de espermidina incluem tricloridrato de espermidina, fosfato de esper- midina hexa-hidratada, fosfato de espermidina hexa-hidratada e L- arginil-3,4-espermidina.

[0068] Em uma modalidade, a composição tem uma razão entre proteína e energia maior que 6 g de proteína/100 kcal, de preferência maior que 9 g de proteína/100 kcal. Em uma modalidade, a proteína corresponde a pelo menos 24% da energia da composição e, com mais preferência, a pelo menos 36% da energia da composição.

[0069] Como exemplos não limitadores, a composição pode ser ad- ministrada em uma dose diária que fornece uma quantidade de proteína maior que 1,0 g de proteína/kg de peso corporal/dia, de preferência maior que 1,2 g de proteína/kg de peso corporal/dia; por exemplo até 2,5 g de proteína/kg de peso corporal/dia (por exemplo, 1,0 a 2,5 g de proteína/kg de peso corporal/dia; 1,2 a 2,5 g de proteína/kg de peso corporal/dia; ou

1,5 a 2,5 g de proteína/kg de peso corporal/dia), de preferência até 2,0 g de proteína/kg de peso corporal/dia (por exemplo, 1,0 a 2,0 g proteína/kg de peso corporal/dia; 1,2 a 2,0 g proteína/kg de peso corporal/dia; ou 1,5 a 2,0 g de proteína/kg de peso corporal/dia) e, com mais preferência, até 1,5 g de proteína/kg de peso corporal/dia (por exemplo, 1,0 a 1,5 g de proteína/kg de peso corporal/dia ou 1,2 a 1,5 g de proteína/kg de peso corporal/dia). A dose diária da proteína pode ser fornecida por uma ou mais porções da composição por dia.

[0070] Se a composição estiver sob a forma líquida, exemplos não limitadores de altas concentrações de proteína adequadas incluem 6 a 20 g de proteína/100 ml, por exemplo, 6 a 11 g de proteína/100 ml; 7 a 14 g de proteína/100 ml; 7 a 12 g de proteína/100 ml; 8 a 11 g de prote- ína/100 ml, 8 a 20 g de proteína/100 ml; 9 a 20 g de proteína/100 ml; e 11 a 20 g de proteína/100 ml.

[0071] A composição pode compreender uma quantidade farmaco- logicamente eficaz do indutor de autofagia (por exemplo, espermidina) em um veículo farmaceuticamente adequado. Em composições líquidas aquosas, a concentração do indutor de autofagia de preferência, fica na faixa de cerca de 0,05% em peso a cerca de 4% em peso, ou de cerca de 0,5% em peso a cerca de 2% em peso ou de cerca de 1,0% em peso a cerca de 1,5% em peso da composição líquida aquosa.

[0072] Em modalidades específicas, o método é um tratamento que aumenta o nível de espermidina no plasma em um paciente gra- vemente doente, por exemplo, a um nível na faixa de 50 a 6000 nmol/L de plasma, de preferência, 100 a 6000 nmol/L de plasma. O método pode compreender administrar diariamente o indutor de autofagia (por exemplo, espermidina) na faixa de peso de 0,05 mg a 1 g por kg de peso corporal, preferencialmente, 1 mg a 200 mg por kg de peso cor- poral, com mais preferência, 5 mg a 150 mg por kg de peso corporal, com mais preferência ainda 10 mg a 120 mg por kg de peso corporal,

ou com a máxima preferência 40 mg a 80 mg por kg de peso corporal.

[0073] Tipicamente entre 50 µg e 10 g do indutor de autofagia, de preferência, um composto de espermidina, por porção diária em uma ou mais porções é administrado a um paciente humano gravemente doente.

[0074] Germe de trigo é rico em espermidina. Portanto, algumas modalidades da composição compreendem germe de trigo e/ou extra- tos enriquecidos com germe de trigo que fornecem ao menos uma porção do indutor de autofagia na composição.

[0075] A composição pode induzir autofagia no músculo, por exemplo um músculo esquelético. Exemplos não limitadores de tais músculos incluem um ou mais dentre os seguintes: vasto lateral, gas- trocnêmio, tibial, sóleo, extensor, músculo extensor dos dedos ("EDL" - extensor digitorum longus), bíceps femoral, semitendinoso, semimem- branoso, glúteo máximo, músculos extraoculares, músculos faciais ou diafragma.

[0076] O indivíduo que precise de autofagia induzida pode ser um indivíduo em envelhecimento, como um animal em envelhecimento ou um ser humano em envelhecimento. Em algumas modalidades, o indiví- duo precise de autofagia induzida é um animal idoso ou um ser humano idoso.

[0077] O indivíduo que precise de autofagia induzida pode ser um paciente gravemente doente. Em várias modalidades, o método pode tratar ou prevenir a disfunção de múltiplos órgãos no paciente grave- mente doente, por exemplo se o paciente apresentar falha ou distúr- bio da homeostase por receber nutrição parenteral; pode proteger o paciente gravemente doente contra a disfunção de múltiplos órgãos; pode tratar ou evitar o desenvolvimento de acidose láctica, por exem- plo acidose láctica induzida por nutrição parenteral; pode tratar ou prevenir o enfraquecimento muscular no paciente gravemente doen-

te; pode diminuir ou evitar a morbidade ou mortalidade por nutrição agravada pela nutrição parenteral; e/ou pode evitar o colapso do sis- tema corporal.

[0078] Em algumas modalidades, o paciente gravemente doente tem ao menos uma condição de risco à vida selecionada do grupo que con- siste em acidose láctica, enfraquecimento muscular, hiperglicemia, falên- cia de múltiplos órgãos, falha da homeostase e distúrbio da homeostase. Em uma modalidade, o paciente gravemente doente tem uma doença não infecciosa. Em uma modalidade, o paciente gravemente doente tem disfunção de múltiplos órgãos que não é causada por ou associada à sepse. A disfunção de múltiplos órgãos e a fraqueza muscular são co- muns no ambiente de cuidados críticos e podem ser causadas ou agra- vadas pela liberação parenteral de nutrientes desbalanceados ou por uma sobrecarga de nutrientes absoluta ou relativa fornecida por via pa- renteral.

[0079] Em algumas modalidades, o paciente gravemente doente tem ao menos um distúrbio selecionado do grupo que consiste em trauma grave, múltiplos traumas, cirurgia de alto risco, cirurgia exten- sa, trauma cerebral, hemorragia cerebral, insuficiência respiratória, peritonite abdominal, lesão renal aguda, lesão hepática aguda, quei- maduras graves, polineuropatia de doença grave, miopatia de doença grave e fraqueza muscular adquirida na UTI.

[0080] Em algumas modalidades, o paciente gravemente doente está recebendo nutrição enteral ou parenteral. Em algumas modalida- des, a composição trata ou evita a disfunção mitocondrial, por exem- plo, a disfunção mitocondrial induzida por nutrição parenteral desba- lanceada ou inadequada a um paciente gravemente doente.

[0081] Em um outro aspecto da presente revelação, um método obtém ao menos um resultado selecionado do grupo que consiste em: um nível aumentado de "turnover" ou expressão de proteína

LC3-II (por exemplo, conforme medido por Western blot, espectrome- tria de massa, ELISA, proteômica à base de aptâmero ou nanocorpo); Um nível aumentado da razão entre as proteínas LC3-II e LC3-I (por exemplo, como pode ser medido por qualquer dos métodos acima); um nível reduzido de proteína p62 (por exemplo, como pode ser me- dido pelos métodos anteriormente mencionados); um nível reduzido de uma proteína do autofagossoma, por exemplo, mas não se limi- tando a Atg5, Beclin-1, Atg7, Atg12; um nível aumentado de expres- são de mRNA de genes relacionados à autofagia, por exemplo, mas não se limitando a MAP1LC3, GABARAP, Atg5, Beclin-1, Atg7, Atg12; e número e/ou tamanho e/ou intensidade aumentada de punc- ta positiva para LC3 (como pode ser avaliado por imunofluorescência ou por marcação de LC3 a um proteína repórter fluorescente como GFP ou por citometria de fluxo); a degradação de LC3 e/ou outra pro- teína de autofagossoma (como pode ser medido mediante avaliação de sua degradação lisossomal avaliada por microscopia ou citometria de fluxo, por exemplo pela fusão da proteína com um repórter fluo- rescente sensível a pH que mudará a cor ao atingir a lisossoma; ou pode ser medida comparando-se a intensidade fluorescente da prote- ína WT com uma proteína mutada que não pode ser inserida em au- tofagossomas, por exemplo, o mutante LC3∆G que não pode ser lipi- dado e inserido no autofagossoma). O método compreende a admi- nistração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma com- posição que compreende uma combinação de um indutor de autofa- gia e com alto teor de proteína a um indivíduo em necessidade da mesma.

[0082] O termo "proteína", como usado aqui, inclui aminoácidos na forma livre, moléculas entre 2 e 20 aminoácidos (aqui chamados de "pep- tídeos") e também inclui cadeias mais longas de aminoácidos. Peptídeos pequenos, ou seja, cadeias de 2 a 10 aminoácidos, são adequados para a composição sozinha ou em combinação com outras proteínas. A "for- ma livre" de um aminoácido é a forma monomérica do aminoácido. Ami- noácidos adequados incluem aminoácidos naturais e não naturais. A composição pode compreender uma mistura de um ou mais tipos de pro- teínas, por exemplo, um ou mais (i) peptídeos, (ii) cadeias mais longas de aminoácidos ou (iii) aminoácidos na forma livre; e a mistura é, de prefe- rência, formulada para atingir um nível desejado de perfil/teor de aminoá- cidos.

[0083] Pelo menos uma porção da proteína pode ser de origem ani- mal ou vegetal, por exemplo, proteína láctea como um ou mais dentre proteína do leite, por exemplo concentrado de proteína do leite ou isolado de proteína do leite; caseinatos ou caseína, por exemplo concentrado de caseína micelar ou isolado de caseína micelar; ou proteína do soro do leite, por exemplo, concentrado de proteína do soro do leite ou isolado de proteína do soro do leite. Adicional ou alternativamente, ao menos uma porção da proteína pode ser proteína vegetal como uma ou mais dentre proteína de soja ou proteína de ervilha.

[0084] Misturas dessas proteínas também são adequadas, por exemplo, misturas nas quais a caseína representa a maior parte da pro- teína, mas não a totalidade, misturas nas quais a proteína do soro do lei- te é a maior parte da proteína, mas não a totalidade, e misturas nas quais a proteína de soja é a maior parte da proteína, mas não a totalidade. Em uma modalidade, ao menos 10%, em peso, da proteína é proteína de soro do leite, de preferência ao menos 20%, em peso, e com mais prefe- rência ao menos 30%, em peso. Em uma modalidade, ao menos 10%, em peso, da proteína é caseína, de preferência ao menos 20%, em peso, e com mais preferência ao menos 30%, em peso. Em uma modalidade, ao menos 10%, em peso, da proteína é proteína vegetal, de preferência ao menos 20%, em peso, e com mais preferência ao menos 30%, em peso.

[0085] A proteína do soro do leite pode ser qualquer proteína do soro do leite, por exemplo, selecionada do grupo que consiste em con- centrados de proteína do soro do leite, isolados de proteína do soro do leite, micelas de proteína do soro do leite, hidrolisados de proteína do soro do leite, soro do leite ácido, soro do leite doce, soro do leite doce modificado (soro do leite doce do qual o caseíno-glicomacropeptídeo foi removido), uma fração de proteína do soro do leite e qualquer com- binação dos mesmos.

[0086] A caseína pode ser obtida a partir de qualquer mamífero, mas é, de preferência, obtida a partir de leite de vaca e, de preferência, como caseína micelar.

[0087] A proteína pode ser não hidrolisada, parcialmente hidrolisa- da (isto é, peptídeos de peso molecular de 3 kDa a 10 kDa com um pe- so molecular médio menor que 5 kDa) ou extensivamente hidrolisada (isto é, peptídeos dos quais 90% têm um peso molecular menor que 3 kDa), por exemplo, em uma faixa de 5% a 95% hidrolisado. Em algu- mas modalidades, o perfil de peptídeos da proteína hidrolisada pode estar dentro de uma faixa de pesos moleculares distintos. Por exemplo, a maioria dos peptídeos (> 50 percentual molar ou > 50% em peso) po- de ter um peso molecular entre 1 e 5 kDa, ou 5 e 10 kDa ou 10 e 20 kDa.

[0088] A proteína pode compreender aminoácidos essenciais e/ou aminoácidos condicionalmente essenciais, por exemplo, tais aminoácidos que podem ser insuficientemente liberados em um regi- me de restrição calórica. Por exemplo, a proteína pode compreender um ou mais aminoácidos essenciais selecionados do grupo que con- siste em histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina, triptofano e valina; e cada um desses aminoácidos (se pre- sentes) pode ser administrado na composição em uma dose diária de cerca de 0,0476 a cerca de 47,6 mg de aminoácido/kg de peso corpo-

ral. Notavelmente, a ingestão mais baixa de metionina leva a níveis mais baixos de translação de proteína e, por fim, de síntese muscu- lar. A proteína pode compreender um ou mais aminoácidos condicio- nalmente essenciais (por exemplo aminoácidos condicionalmente es- senciais na doença ou estresse) selecionados do grupo que consiste em arginina, cisteína, glutamina, glicina, prolina, ornitina, serina e ti- rosina; e cada um desses aminoácidos (se presentes) pode ser ad- ministrado na composição em uma dose diária de cerca de 0,0476 a cerca de 47,6 mg de aminoácido/kg de peso corporal.

[0089] A composição pode compreender um ou mais aminoácidos de cadeia ramificada ("branched chain amino acids", BCAAs). Por exemplo, a composição pode compreender leucina, isoleucina e/ou valina, na forma livre e/ou ligada como peptídeos e/ou proteínas co- mo proteínas lácteas, proteínas animais ou vegetais. Uma dose diária dos aminoácidos de cadeia ramificada pode incluir um ou mais de 0,35 a 142,85 mg/kg de peso corporal de leucina, de preferência, 0,175 a 71,425 mg/kg de peso corporal de leucina; 0,175 a 71,425 mg/kg de peso corporal de isoleucina; e 0,175 a 71,425 mg/kg de pe- so corporal de valina. A dose diária do um ou mais aminoácidos de cadeia ramificada pode ser fornecida por uma ou mais porções da composição por dia.

[0090] Proteína de soro de leite é rica em BCAA. Portanto, algu- mas modalidades da composição compreendem proteína de soro de leite que fornece ao menos uma porção dos BCAAs na composição.

[0091] Em uma modalidade, a composição inclui uma fonte de carboidratos. Qualquer carboidrato adequado pode ser usado na com- posição incluindo, mas não se limitando a, amido (por exemplo, amido modificado, amido de amilose, amido de tapioca, amido de milho), sa- carose, lactose, glicose, frutose, sólidos de xarope de milho, maltodex- trina, xilitol, sorbitol ou combinações dos mesmos.

[0092] A fonte de carboidratos é, de preferência, não maior que 50% da energia da composição, com mais preferência não maior que 36% da energia da composição e com a máxima preferência não mai- or que 30% da energia da composição. A composição pode ter uma razão de energia de alto teor de proteína:carboidrato, por exemplo maior que 0,66, de preferência maior que 0,9 e com mais preferência maior que 1,2.

[0093] Em uma modalidade, a composição inclui uma fonte de gordura. A fonte de gordura pode incluir qualquer gordura adequada ou mistura de gordura. Exemplos não limitadores de fontes de gordu- ra adequadas incluem gordura vegetal, como óleo de oliva, óleo de milho, óleo de girassol, óleo de girassol com alto teor de ácido oleico, óleo de semente de colza, óleo de canola, óleo de avelã, óleo de so- ja, óleo de palma, óleo de coco, óleo de semente de groselha negra, óleo de borragem, lecitinas e similares; gorduras animais, como gor- dura do leite; ou combinações dos mesmos.

[0094] A composição que compreende uma combinação de indutor de autofagia (por exemplo, espermidina) e alto teor de proteína pode ser administrada a um indivíduo como um ser humano, por exemplo um indi- víduo em envelhecimento ou um indivíduo gravemente doente, em uma dose terapeuticamente eficaz. A dose terapeuticamente eficaz pode ser determinada pelo versado na técnica e dependerá de vários fatores co- nhecidos pelos versados na técnica, como a gravidade da condição, e o peso e o estado geral do indivíduo.

[0095] A composição é, de preferência, administrada ao indivíduo ao menos dois dias por semana, com mais preferência ao menos três dias por semana, com a máxima preferência todos os sete dias da semana; durante ao menos uma semana, ao menos um mês, ao me- nos dois meses, ao menos três meses, ao menos seis meses, ou mesmo por períodos mais longos. Em algumas modalidades, a com-

posição é administrada ao indivíduo consecutivamente durante vários dias, por exemplo ao menos até que um efeito terapêutico seja obtido. Em uma modalidade, a composição pode ser administrada ao indiví- duo diariamente por ao menos 30, 60 ou 90 dias consecutivos.

[0096] Os exemplos de administração acima não necessitam de administração diária contínua sem interrupções. Em vez disso, pode haver algumas pequenas interrupções na administração, como uma pausa de dois a quatro dias durante o período de administração. A du- ração ideal da administração da composição pode ser determinada pelos versados na técnica.

[0097] Em uma modalidade preferencial, a composição é adminis- trada ao indivíduo por via oral ou enteral (por exemplo, tubo de alimen- tação). Por exemplo, a composição pode ser administrada ao indivíduo como uma bebida, uma cápsula, um comprimido, um pó ou uma sus- pensão.

[0098] A composição pode ser qualquer tipo de composição que seja adequada para o consumo humano e/ou animal. Por exemplo, a composição pode ser selecionada do grupo que consiste em composi- ções alimentícias, suplementos dietários, composições nutricionais, nutracêuticos, produtos nutricionais em pó a serem reconstituídos em água ou leite antes do consumo, aditivos alimentares, medicamentos, bebidas e drinques. Em uma modalidade, a composição é um suple- mento nutricional oral (SNO), uma fórmula nutricional completa, um produto farmacêutico, um produto médico ou um produto alimentício. Em uma modalidade preferencial, a composição é administrada ao in- divíduo como uma bebida. A composição pode ser armazenada em um saquinho como um pó e, então, suspensa em um líquido como água para o uso.

[0099] Em alguns casos em que a administração por via oral ou en- teral não é possível ou não é aconselhada, a composição também pode ser administrada parenteralmente.

[00100] Em algumas modalidades, a composição é administrada ao indivíduo em uma forma de dosagem única, isto é, todos os com- postos estão presentes em um produto a ser administrado a um indi- víduo em combinação com uma refeição. Em outras modalidades, a composição é coadministrada em formas de dosagem separadas, por exemplo, ao menos um componente separadamente de um ou mais dos outros componentes da composição. Exemplos

[00101] Os seguintes exemplos não limitadores apresentam dados científicos que desenvolvem e suportam o conceito de administração de uma composição que compreende uma combinação de indutor de autofagia (por exemplo, espermidina) e alto teor de proteína para in- duzir autofagia em um indivíduo que precisa da mesma. Material e métodos Camundongos

[00102] Camundongos C57bl6/J com 10 a 15 semanas de idade fo- ram alimentados ad libitum durante 4 semanas com uma dentre: uma dieta padrão, uma dieta rica em proteínas e pobre em carboidratos (alto teor de proteína isocalórica), ou uma dieta pobre em proteínas e rica em carboidratos (baixa proteína isocalórica). Cada grupo foi tratado ou não com 3 mM de indutor de autofagia (por exemplo, espermidina) na água potável. A dieta padrão foi composta por 16% de gorduras (óleo de so- ja), 20% de proteínas (caseína) e 64% de carboidratos (40% de amido de milho, 14% de amido de milho dextrinizado, 10% de sacarose). A dieta com baixo teor de proteína foi composta por 16% de gorduras (óleo de soja), 5% de proteínas (caseína) e 79% de carboidratos (62% de amido de milho, 10% de amido de milho dextrinizado, 7% de sacaro- se). A dieta com alto teor de proteína / baixo teor de carboidrato foi composta de 16% de gorduras (óleo de soja), 60% de proteínas (caseí-

na) e 24% de carboidratos (7% de amido de milho, 10% de amido de milho dextrinizado, 7% de sacarose). Essas quantidades são porcenta- gens de energia total da alimentação. Os camundongos foram sacrifica- dos por inalação de isofluorano seguida de sangria. Os músculos do quadríceps foram coletados e congelados em nitrogênio líquido. Western blots

[00103] Os lisados de proteína total foram extraídos de 30 a 50 mg de tecidos homogeneizados em 20 ml/g de tampão RIPA (150 mM de cloreto de sódio, 50 mM de Tris pH: 8, 1% de Triton X-100, 0,5% de desoxicolato, 0,1% de SDS, coquetel de inibidores de protease) com um dissociador de tecido (gentleMACS Miltenyi Biotec). A concentra- ção de proteína foi determinada por ensaio BCA e as amostras foram preparadas por adição de tampão de amostra LDS 4X (Invitrogen). 20 µg de proteínas foram separados por SDS-PAGE em géis de gradiente 4 a 12% e transferidos para membranas PVDF com o uso do sistema iBLOT seco (Invitrogen). As membranas foram incubadas com anticor- pos contra LC3 (Novus Biologicals 2220) e GAPDH (Cell Signaling 2118) e detectadas com substratos de ECL (Pierce). A quantificação de proteína foi realizada por análise densitométrica de imagens com o uso do software ImageJ. Resultados

[00104] As Figuras 1 e 2 mostram os resultados de camundongos jovens alimentados com uma dentre uma dieta padrão, uma dieta rica em proteínas/pobre em carboidratos (dieta com alto teor de proteína) ou uma dieta pobre em proteínas/rica em carboidratos (dieta com bai- xo teor de proteína), e tratados ou não com 3 mM de indutor de auto- fagia (por exemplo, espermidina) na água potável para atingir uma ex- posição de 105 +/ -35 mg/kg de peso corporal/dia. As quantidades de proteína LC3 I e LC3 II foram medidas no músculo esquelético (qua- dríceps) por western blot e normalizadas para GAPDH. A quantificação densitométrica da quantidade de proteína LC3-II normalizada para GAPDH (U.A.: unidades arbitrárias). Os asteriscos representam os ní- veis de significância calculados por ANOVA com teste de Fisher post hoc ***p < 0,001. Esses resultados demonstram surpreendentemente que o indutor de autofagia (por exemplo, espermidina) induz de modo sinérgico a autofagia muscular em combinação com uma dieta isocaló- rica com alto teor de proteína e é inativo em uma dieta isocalórica com baixo teor de proteína.

[00105] Deve-se entender que várias alterações e modificações às presentes modalidades preferenciais aqui descritas ficarão evidentes aos versados na técnica. Tais alterações e modificações podem ser feitas sem que se desvie do espírito e do âmbito do assunto em ques- tão e sem que se diminua suas vantagens pretendidas. Pretende-se, portanto, que tais alterações e modificações sejam abrangidas pelas reivindicações em anexo.

Claims (33)

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de uma quantidade eficaz de uma combinação de um indutor de autofagia e uma alta quantidade de proteína, caracteri- zado pelo fato de que é para fabricação de uma composição para in- duzir autofagia em um indivíduo que precisa da mesma.

2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indutor de autofagia é selecionado do grupo que consiste em espermidina, urolitina, rapamicina, Torin1, ácido valproico, polife- nóis, cafeína, metformina, ativadores de proteína quinase ativada por 5′ AMP (AMPK), inibidores de canal de cálcio do tipo L, cetonas e mis- turas dos mesmos.

3. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indutor de autofagia compreende espermidina.

4. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a alta quantidade de proteína é uma quantidade da proteína que representa pelo menos cerca de 25% da energia da composição.

5. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a alta quantidade de proteína é uma quantidade da proteína que fornece uma razão entre proteína e energia maior que 6 g/100 kcal da composição.

6. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a autofagia é induzida no músculo esquelético.

7. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um indivíduo em envelhecimento.

8. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo apresenta sarcopenia ou fragilidade ou está em risco de desenvolver sarcopenia ou fragilidade.

9. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo está gravemente doente.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o indivíduo apresenta uma miopatia do paciente crítico ou está em risco de desenvolver miopatia do paciente crítico.

11. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que ao menos uma porção da proteína é selecionada do grupo que consiste em (i) proteína de uma fonte animal, (ii) proteína de uma fonte vegetal e (iii) uma mistura das mesmas.

12. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que ao menos uma porção da proteína é selecionada do grupo que consiste em (i) proteína do leite, (ii) proteína do soro do lei- te, (iii) caseinato, (iv) caseína micelar, (v) proteína de ervilha, (vi) prote- ína de soja e (vii) misturas dos mesmos.

13. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a proteína apresenta uma formulação selecionada do grupo que consiste em (i) ao menos 50%, em peso, da proteína é ca- seína, (ii) ao menos 50%, em peso, da proteína é proteína do soro do leite, (iii) ao menos 50%, em peso, da proteína é proteína de ervilha e (iv) ao menos 50%, em peso, da proteína é proteína de soja.

14. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma porção da proteína é selecionada do grupo que consiste em (i) aminoácidos de forma livre, (ii) proteína não hidroli- sada, (iii) proteína parcialmente hidrolisada, (iv) proteína extensivamente hidrolisada e (v) misturas dos mesmos.

15. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pe- lo fato de que a proteína compreende peptídeos tendo um comprimento de 2 a 10 aminoácidos.

16. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a proteína compreende aminoácidos de cadeia rami- ficada em ao menos uma forma selecionada do grupo que consiste em (i) forma livre, (ii) ligada a pelo menos um aminoácido adicional e

(iii) misturas das mesmas.

17. Uso, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pe- lo fato de que os aminoácidos de cadeia ramificada compreendem leuci- na em uma quantidade eficaz para ativar o mTOR no indivíduo.

18. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que ao menos uma porção da proteína é de 5 a 95% hidrolisada.

19. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a proteína tem uma formulação selecionada do gru- po que consiste em (i) ao menos 50% da proteína tem um peso mo- lecular de 1 a 5 kDa, (ii) ao menos 50% da proteína tem um peso mo- lecular de 5 a 10 kDa e (iii) ao menos 50% da proteína tem um peso molecular de 10 a 20 kDa.

20. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição compreende uma fonte de carboidrato.

21. Uso, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pe- lo fato de que a composição tem uma alta razão entre proteína e carboi- drato.

22. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a administração usa ao menos uma via selecionada do grupo dentre oral, enteral, parenteral e injeção intravenosa.

23. Composição, caracterizada pelo fato de que compre- ende uma combinação de um indutor de autofagia e proteína em uma quantidade por porção que é eficaz na indução da autofagia em um indivíduo que precise da mesma.

24. Composição, de acordo com a reivindicação 23, carac- terizada pelo fato de que é selecionada do grupo que consiste em composições alimentícias, suplementos dietários, composições nutri- cionais, nutracêuticos, produtos nutricionais em pó a serem reconsti- tuídos em água ou leite antes do consumo, aditivos alimentares, me- dicamentos, bebidas e combinações dos mesmos.

25. Composição, de acordo com a reivindicação 23, carac- terizada pelo fato de que ao menos uma porção da proteína é selecio- nada do grupo que consiste em (i) proteína do leite, (ii) proteína do so- ro do leite, (iii) caseinato, (iv) caseína micelar, (v) proteína de ervilha, (vi) proteína de soja e (vii) misturas dos mesmos.

26. Composição, de acordo com a reivindicação 23, caracteri- zada pelo fato de que ao menos uma porção da proteína é selecionada do grupo que consiste em (i) aminoácidos na forma livre, (ii) proteína não hidrolisada, (iii) proteína parcialmente hidrolisada, (iv) proteína extensi- vamente hidrolisada e (v) misturas dos mesmos.

27. Método para fabricação de uma composição terapêuti- ca, caracterizado pelo fato de que compreende a adição de uma combinação de um indutor de autofagia e proteína a uma composi- ção-base para formar a composição terapêutica, a composição tera- pêutica compreendendo uma quantidade da combinação por porção que é eficaz na indução da autofagia em um indivíduo que precise da mesma.

28. Método, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a composição-base é formulada para administração por ao menos uma via selecionada do grupo de oral, enteral, parenteral e injeção intravenosa.

29. Método, de acordo com a reivindicação 27, caracteriza- do pelo fato de que ao menos uma porção da proteína é selecionada do grupo que consiste em (i) proteína do leite, (ii) proteína do soro do leite, (iii) caseinato, (iv) caseína micelar, (v) proteína de ervilha, (vi) proteína de soja e (vii) misturas dos mesmos.

30. Método, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que ao menos uma porção da proteína é selecionada do grupo que consiste em (i) aminoácidos de forma livre, (ii) proteína não hidrolisada, (iii) proteína parcialmente hidrolisada, (iv) proteína extensi-

vamente hidrolisada e (v) misturas dos mesmos.

31. Uso de uma combinação de um indutor de autofagia e alto teor em proteínas, caracterizado pelo fato de que é para fabricação de uma composição para fornecer uma quantidade da combinação que promove de modo concomitante a síntese de proteínas e remoção dos materiais celulares danificados em um indivíduo que precisa da mesma.

32. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma uma combinação de um indutor de autofagia e alto teor de prote- ína, caracterizado pelo fato de que é para fabricação de uma compo- sição para obter ao menos um resultado selecionado do grupo que consiste em (i) um nível aumentado de expressão ou "turnover" da proteína LC3-II, (ii) um nível aumentado da razão entre as proteínas LC3-II e LC3-I, (iii) um nível reduzido de proteína p62, (iv) um nível reduzido de uma proteína da autofagossoma, (v) um nível aumentado de expressão de mRNA de um gene relacionado à autofagia, (vi) um número e/ou tamanho e/ou intensidade aumentada de puncta positiva para LC3 e (vii) a degradação de LC3 e/ou outra proteína de autofa- gossoma, em um indivíduo que precisa da mesma.

33. Invenção, caracterizada por quaisquer de suas concre- tizações ou categorias de reivindicação englobadas pela matéria ini- cialmente revelada no pedido de patente ou em seus exemplos aqui apresentados.