BR112020009444A2

BR112020009444A2 - método de exposição local para tecidos biológicos, aplicador substituto do tecido e utilização de politetrafluoretileno poroso

Info

Publication number: BR112020009444A2
Application number: BR112020009444-7A
Authority: BR
Inventors: Anatoli D. Dosta
Original assignee: Anatoli D. Dosta
Priority date: 2017-11-30
Filing date: 2017-11-30
Publication date: 2020-11-17
Also published as: EP3717035A1; IL274514B2; EA202000158A1; JP7105505B2; US20200289549A1; EP3717035C0; IL274514A; EP3717035B1; KR102436620B1; US11266682B2; CN111526897A; IL274514B1; KR20200091426A; JP2021511092A; CA3098243A1; WO2019104407A1

Abstract

A invenção refere-se a aplicações médicas e pode ser usada em oncologia, bem como em neurocirurgia, traumatologia, neurologia, reabilitação. O objetivo da invenção reivindicada é a criação de um novo método de exposição local em tecidos biológicos e um novo aplicador substituto do tecido que se beneficia tanto para destruição quanto substituição de tecido tumoral por tecido biológico restaurado sem exposição externa aplicada (campo magnético alternado, aquecimento, etc.). O objetivo estabelecido é resolvido pelo uso de politetrafluoretileno poroso como um material citostático. O objetivo é também obtido pelo uso de politetrafluoretileno poroso na produção de um aplicador substituto do tecido para o tratamento ou substituição dos tecidos tumorais. O objetivo estabelecido para o método de exposição local a tecidos biológicos, incluindo a colocação de um aplicador polimérico substituto do tecido em contato direto com o tecido biológico a ser exposto, é resolvido pelo uso de politetrafluoretileno poroso para o material polimérico constituinte.

Description

MÉTODO DE EXPOSIÇÃO LOCAL PARA TECIDOS BIOLÓGICOS, APLICADOR SUBSTITUTO DO TECIDO E UTILIZAÇÃO DE POLITETRAFLUORETILENO POROSO

[0001] A invenção refere-se a aplicações médicas e pode ser usada em oncologia, bem como em neurocirurgia, traumatologia, neurologia, reabilitação.

[0002] Métodos de tratamento de doenças oncológicas envolvendo a injeção intratumoral de nanopartículas são bem conhecidos. Por exemplo, a aplicação de membranas de bicamada de fosfolipídeo artificial com lipossomas cuja superfície pode ser modificada quimicamente para atingir a sua afinidade para os tecidos alvos. Assim, os lipossomas com carga de superfície positiva têm uma afinidade de 10 vezes maior para células de glioma de rato, em comparação com magnétolipossomas com carga neutra [Shinkai M, Yanase M, Honda H, Wababayashi T, Yoshida J, Kobayashi T. Hipertermia intracelular para câncer utilizando lipossoma catiônico magnético: estudo in vitro. //Jpn. J. câncer res 1996. v 87. p 1179 -1183].

A técnica de hipertermia usando lipossomas magnitocatiônicos injetados subcutaneamente em tecidos tumorais demonstrou ser eficiente em animais com vários tipos de tumores, tais como melanoma de B-16 em camundongos, glioma T-9 em ratos, Os 515 osteossarcoma em hamsters, carcinoma escamoso VX-7 de língua de coelho [Yanase M, Shinkai M, Honda H, Wababayashi T, Yoshida J, Kobayashi, T, Indução de imunidade antitumoral por hipertermia intracelular utilizando lipossomas catiônicos magnéticos //Jpn. J câncer res 1998. v 89. p 775-782; Matsune H, Tohnal I, Mitsudo K, Hayashi Y, Ito M, Shinkai M, Kobayashi T, Yoshida J, Ueda M., Hipertermia intersticial usando lipossomas catiônicos magnéticos inibidores do crescimento tumoral do tumor transplantado VX-7 na língua de coelho. //Jpn.

J Hiperthermal Oncol. 2001. V 17. p 141 -149; Suzuki M., Shinkai M, Honda H, Kobayashi, T., Efeito anticancerígeno e indução imune por hipertermia de melanoma maligno utilizando lipossomas catiônicos magnéticos. //Melanoma res 2003. v 13. p 129 -135; Matsuoka F., Shinkai M., Honda H., Kubo T., Sugta T., Kobayashi, T. Hipertermia usando lipossomas catiônicos de magnetita para osteossarcoma de hamster. Biobion. //Res technol. 2004, 192.

P 3.]. Para se conseguir a completa regressão de tumor, múltiplas exposições de animais para o campo magnético alternado são essenciais: este método foi testado com sucesso por Ito, e outros, para regressão completa de carcinoma mamário de 15 mm e mais em camundongos [Ito A, Shinkai M., Honda H., Wababayashi T., Yoshida J, Kobayashi, T. Aumento da apresentação de antígenos MHC classe I via expressão de proteína de choque térmico por hipertermia. //Cancro immmunol. Immunother. 2001. V. 50. P. 515 -5522].

[0003] Métodos diferentes estão sendo desenvolvidos para a introdução de partículas (de preferência nanodimensionadas) em tumores, seguido por aumento de temperatura localmente por aplicação externa de campos magnéticos ou eletromagnéticos para efetuar destruição hipertérmica precisa de tecidos malignos [Patente Russa No 2506971, Publ.

20/02/2014; Patente US n°. 67863, Publ. 14/02/2006; Patente US n° 8119165, Publ.

21/02/2012]. A área de pesquisa refere-se a mesomecânica e dissipação de energia em sistemas de micropartículas magnéticas de várias naturezas (partículas diamagnéticas e paramagnéticas, incluindo células vivas e ferropartículas), suspensas em fluidos simples e reologicamente complexos e excitadas por campos magnéticos de alta intensidade e alto gradiente (aquecimento eletromagnético volumétrico de materiais dielétricos devido à absorção de energia em micropartículas com histerese magnética, em particular, substanciação de hipertermia ferromagnética local de tumores malignos). A aplicação de nanopartículas de 9 nm Fe0.5ZN0,5FE2O4 não é acompanhada por um aumento de temperatura eficaz sob a influência de campo magnético externo no modelo de melanoma de camundongos [Heidari M., Slatarahmady N., Javadderm S., Azarpira N., Heli H., Mehdizadeh A., Berei A., Zare T., Efeito da Hipertermia de Fluido Magnético no Melanoma Implantado em Modelos de Camundongo //Iran J., Med Sei 2016 Jul; 41 (4): 314 -321.

PMCID: PMC4912650]. Assim, o efeito antitumoral depende do tamanho e da área de superfície específica das partículas (o número de moléculas aumenta com a diminuição de seu tamanho, enquanto a área superficial aumenta) [Choi KH., Nam KC., Malcinski L., Choi EH., Jung JS., Park BJ. Atividade Anticancerígena Fotodinâmica Dependente do Tamanho de Partículas Submicron Magnéticas Multifuncionais Biocompatíveis em Células de Câncer de Próstata // Moléculas. 6 de setembro de 2016; 21 (9). pii: E1187. doi: 10.3390 / moléculas21091187].

[0004] A biocompatibilidade de nanopartículas depende do tamanho, potencial-ζ em solução, hidrofobicidade. As partículas hidrofóbicas têm um tempo de vida muito curto na corrente sanguínea, uma vez que elas são rapidamente excretadas a partir do corpo pelo fígado e baço. Esquematicamente, os trajetos de extração de partículas podem ser representados como segue: partículas dimensionadas < 8 nm são excretadas pelos rins; aquelas dimensionadas > 200 nm - pelo fígado, baço; ~30 nm - pelos dutos biliares, mas se acumulando nos pulmões; partículas dimensionadas de 30 a 200 nm acumulam passivamente nos sítios de tumor, sob o mecanismo: efeito de permeação e retenção melhoradas (efeito EPR). Isto é devido ao fluxo sanguíneo aumentado e drenagem linfática diminuída em tumores. Na presença de partículas com carga de superfície positiva, as partículas catiônicas são tóxicas na maioria dos casos e causam a hemólise e a agregação de eritrócitos [(httpsringula.ru/arling/nevidimaiaens-gde-stalivavisia-nano-bio)].

[0005] O referido método de tratamento é bastante ineficaz também devido ao fluxo sanguíneo ativo na região do tumor, o que faz com que estas partículas sejam rapidamente removidas pela corrente sanguínea. Entretanto, uma vez que estas nanopartículas permanecem no corpo, a remoção de nanopartículas do organismo em geral é um problema de queima.

[0006] Nanomateriais provaram apresentar propriedades de auto-montagem e auto- organização. Os processos de ajuste durante a auto-montagem são regulados por efeitos competitivos de várias forças de interação de natureza molecular, isto é: interações hidrofílicas-hidrofóbicas, forças gravitacionais, van der Waals ou interações de Coulomb.

No processo de uma estrutura super-molecular ordenada ou formação de meio, somente os componentes da estrutura inicial que adicionam ou “coletam” a estrutura complexa resultante como suas partes integrantes podem participar como uma forma essencialmente inalterada. A auto-organização pode ser usada como um mecanismo para a criação de “templates” complexos, processos e estruturas em um nível de organização hierárquica mais elevado, em comparação com o sistema fonte original, devido a interações numerosas e multivariáveis dos componentes em baixos níveis envolvendo leis de interação locais, sendo diferentes das leis coletivas do comportamento da arquitetura resultante. As conformações de nanopartículas no corpo vivo resultam em numerosos deslocamentos funcionais, com o efeito tóxico sendo um fator dominante. Esta é a toxicidade das nanopartículas que limita a sua ampla aplicação nas áreas de diagnóstico e terapia, incidentalmente, com a supressão periódica deste fato indiscutível.

[0007] Devido às suas propriedades específicas, as nanopartículas tendem a unir e formar conglomerados de tamanhos de micrometro no sistema excretório (em vasos sanguíneos e/ou linfáticos).

[0008] A referência do Estado da Técnica mais próxima ao método reivindicado e ao aplicador substituto do tecido reivindicado é a Patente Russa No. 1297489, Data da Publ.

10/11/2013, onde o método de exposição local para tecidos biológicos incorpora a fase de localizar um aplicador substituto do tecido, feito de material polimérico com adição de partículas ferromagnéticas eletricamente condutoras dimensionadas de 200-1000 µm, em contato direto com o tecido biológico a ser exposto. Em seguida, o aquecimento por indução do aplicador substituto do tecido e tecidos biológicos adjacentes por aplicação de campo magnético de HF alternado é realizado para criar um efeito hipertérmico a fim de destruir o tecido tumoral.

[0009] As desvantagens destas soluções tecnológicas incluem, primeiramente, o efeito de possível espalhamento dos agentes indutores de tumor em tecidos adjacentes, quando do aquecimento e destruição das células tumorais.

[0010] Além disso, a desintegração de tecidos tumorais causa uma maior concentração de substâncias tóxicas, que são bastante difíceis de remover do corpo. Para minimizar a exposição tóxica, os operadores tentam minimizar a área da exposição, para calcular o volume de tecido a ser destruído, levando em consideração a capacidade de excrementos dos sistemas linfáticos e circulatórios, tanto no nível celular como no nível do órgão excretório (rins e fígado). Se possível, os tecidos destruídos são removidos, por exemplo, por lavagem.

[0011] Outra desvantagem do método refere-se à complexidade do equipamento necessário para a sua implementação.

[0012] O objetivo da presente invenção reivindicada é a criação de um novo método de exposição local em tecidos biológicos e um novo aplicador substituto do tecido que se beneficia tanto para destruição quanto substituição de tecido tumoral por tecido biológico restaurado sem exposição externa aplicada (campo magnético alternado, aquecimento, etc.).

[0013] O objetivo estabelecido para o método de exposição local para tecidos biológicos, incluindo a colocação de um aplicador polimérico substituto do tecido em contato direto com o tecido biológico a ser exposto, é resolvido pelo uso de politetrafluoretileno poroso para o material polimérico constituinte.

[0014] Dentro da estrutura deste método, é possível aplicar exposição tanto ao tecido biológico tumoral quanto ao tecido biológico circundante.

[0015] O objetivo estabelecido para o aplicador polimérico substituto do tecido para colocar o mesmo em contato direto com o tecido tumoral é resolvido pela aplicação de politetrafluoretileno poroso para o material constituinte.

[0016] Ao estudar os recursos para inibir que as nanopartículas escapem do tumor, os autores escolhem politetrafluoretileno poroso (“PTFE”) para o veículo polimérico constituinte de nanopartículas ferromagnéticas eletricamente condutoras, esperando os tecidos tumorais para germinar em poros de PTFE e manter estas partículas próximas, evitando assim a sua condução pelo fluxo sanguíneo. No entanto, no curso destes estudos, também foram detectadas propriedades citostáticas de PTFE poroso.

[0017] Assim, o objetivo foi resolvido pelo uso de politetrafluoretileno poroso como um material citostático.

[0018] O objetivo foi também obtido pelo uso de politetrafluoretileno poroso na produção de um aplicador substituto do tecido para o tratamento ou substituição dos tecidos tumorais.

[0019] Esta invenção é explicada em detalhes nos desenhos, de foma não restritiva, a seguir.

[0020] A Figura 1 mostra uma representação esquemática do aplicador substituto do tecido reivindicado.

[0021] As Figuras 2 e 3 mostram os resultados do estudo in vitro do efeito de PTFE poroso sobre a cultura de células tumorais (glioma, neste caso).

[0022] As Figuras 4 e 5 mostram os resultados do estudo in vitro dos efeitos de PTFE porosos sobre cultura celular saudável (fibroblastos, neste caso).

[0023] As figuras de 6 a 8 mostram imagens das seções do sensor do córtex cerebral de ratos Wistar machos em 30 dias pós-estudo: a) imagens das seções do sensor do córtex cerebral de ratos Wistar machos em 30 dias após xenotransplante de células glioma, b) imagens das seções do sensor do córtex cerebral de ratos machos Wistar 30 dias após o transplante de PTFE poroso em contato direto com células glioma xenotransplantadas, c)

imagens das seções do tórax do córtex cerebral de ratos Wistar machos em 30 dias após o transplante de PTFE poroso.

[0024] As Figuras 9 e 10 mostram imagens das seções do sensor do córtex cerebral de ratos Wistar machos em 4 meses pós-estudo: a) imagens das seções do sensor do córtex cerebral de Ratos Wistar machos a 4 meses após o transplante de PTFE poroso em contato direto com células glioma xenotransplantadas; b) imagens das seções do sensor do córtex cerebral de ratos Wistar Machos em 4 meses após o transplante de PTFE poroso.

[0025] O aplicador substituto do tecido reivindicado (1) (vide Figura 1) pode ser fabricado pelo método, conforme descrito, por exemplo, na patente de Bielorussa No. 10325, Publ.

28/02/2008. O aplicador de PTFE poroso substituto do tecido é feito misturando-se os grânulos do material fonte com grânulos de poróforo (cloreto de sódio), comprimindo a mistura resultante, lavando os resíduos de cloreto de sódio da pré-forma porosa resultante, seguido por processo de sinterização. A estrutura de poros complexa é obtida, neste caso, pelo uso de grânulos de poróforo de forma triturada. As dimensões dos poros de extremidade morta dependem dos tamanhos de grânulos finos, e as dimensões dos poros abertos são determinadas pelo tamanho dos grânulos de fração maior poróforo.

[0026] Para testar a possibilidade e eficácia do método reivindicado, aplicador substituto do tecido e desempenho de PTFE, testes de animais foram realizados, conforme mostrado nos exemplos abaixo.

[0027] Exemplo 1

[0028] Para determinar a citotoxicidade de PTFE poroso para células tumorais e saudáveis, duas séries de estudos in vitro foram realizadas.

[0029] PRIMEIRA SÉRIE:

[0030] Células tumorais foram introduzidas no meio de cultura (neste estudo, glioma C6); uma porção média foi deixada intacta para referência, a outra colocada num aplicador substituto do tecido de PTFE poroso.

[0031] Após 48 horas de acompanhamento, as seguintes imagens foram tomadas:

[0032] A distribuição de células intactas de glioma C6 (Figura 2a, 70 ± 3% de confluência) e distribuição de células de glioma C6 seguindo a colocação de aplicador substituto do tecido de PTFE Poroso (Figura 2b, 20 ± 4% de confluência);

[0033] As células intactas de glioma C6 monocamada, coloração com azul tripano (Figura 3a, viabilidade de células intactas de C6 Glioma-90 ± 3%), e células de glioma C6 monocamada com aplicador substituto do tecido de PTFE poroso (Figura 3b, células de glioma C6 com aplicador substituto do tecido de PTFE poroso-55 ± 3% ).

[0034] Assim, durante esta série de estudos, observou-se que PTFE poroso demonstra citotoxicidade in vitro contra cultura de células de glioma C6.

[0035] SEGUNDA SÉRIE:

[0036] Células saudáveis foram introduzidas no meio de cultura (neste estudo - fibroblastos); uma porção média foi deixada intacta para referência, a outra colocada em um aplicador substituto do tecido de PTFE poroso.

[0037] Após 48 horas de acompanhamento, as seguintes imagens foram tomadas: - distribuição de fibroblastas intactas (Figura 4a, 53 ± 3% de confluência) e distribuição de fibroblastos após a colocação do aplicador substituto do tecido de PTFE Poroso (Figura 4b, 35 ± 4% de confluência); - monocamada de fibroblastas intactas (Figura 5a, viabilidade de fibroblastos intactas - 99 ± 3%), e fibroblastos monocamada com aplicador substituto do tecido de PTFE poroso

(Figura 5b, fibroblastos de viabilidade com aplicador substituto do tecido de PTFE poroso -98 ± 3%).

[0038] Assim, durante esta série de estudos, relatou-se que o PTFE poroso não apresentou citotoxicidade in vitro contra células saudáveis, em particular fibroblastos.

[0039] Exemplo 2

[0040] O estudo in vivo focou no teste de córtex cerebral de ratos Wistar, divididos em 3 grupos: Grupo 1 - ratos com xenoenxertos de Glioma C6 implantados no córtex sensorial durante 1 mês (30 dias); Grupo 2 - ratos com xenoenxertos de glioma C6 e aplicadores substituto do tecido de PTFE poroso implantados no córtex sensório-motor durante 1 mês (30 dias); Grupo 3 - ratos com aplicadores substituto do tecido de PTFE poroso apenas implantados no córtex sensório-motor por 1 mês (30 dias).

[0041] O estudo aplicou métodos de investigação histológica (coloração com hematoxilina e eosina), neuro-histológica (coloração Nissl) e histoquímica (detecção da atividade da acetilcolinesterase (AChE)).

[0042] Secções de criostato de tecido cerebral de rato Wistar foram coradas com hematoxilina e eosina e azul de toluidina, seguidas de exame microscópico óptico de luz.

[0043] FIG. 6a mostra uma seção de criostato de tecido cerebral de rato Wistar 30 dias após a implantação do xenoenxerto de glioma C6.

[0044] Glioma C6 consiste em pequenas células não diferenciadas com núcleos polimórficos densos. O tecido glial representa vasos dentro. Coloração hematoxilina e eosina; ampliação x200.

[0045] Análise histológica de seções transversais de cérebro de rato com glioma C6 experimental aos 30 dias de acompanhamento revelou a presença de numerosas células tumorais com polimorfismo celular moderado. As células representaram uma forma alongada em forma de eixo, grandes núcleos hipercrômicos escuros de formato irregular,

camada citoplásmica fina e ligeiramente colorida e processos curtos. Houve múltiplas mitoses e focos de vacuolização. Dentro dos grupos de células, vasos de diferentes tamanhos foram detectados, bem como pequenos capilares formados.

[0046] A Figura 6b mostra uma seção criostato de tecido cerebral de rato de Wistar em 30 dias após a colocação de xenoenxerto de glioma C6 e aplicador substituto do tecido de PTFE poroso.

[0047] Aplicador substituto do tecido de PTFE poroso dentro do tecido tumoral. Existe um leve intumescimento reativo de glia em torno e acumulações de células tumorais mal diferenciadas. O aplicador substituto do tecido foi encerrado em uma cápsula glial.

Coloração hematoxilina e eosina; ampliação x200.

[0048] Análise histológica de seções transversais de cérebro de rato com glioma de C6 experimental e aplicador substituto do tecido em 30 dias pós-implantação revelou a formação de uma cápsula glioesdérmica em torno do material sintético, e campos transparentes nas áreas adjacentes, que podem ser considerados como focos de desintegração tumoral, cercados por grupos de células fracamente diferenciadas - "pseudopalisades”.

[0049] A figura 6c mostra uma seção criostato de tecido cerebral de rato de Wistar em 30 dias após a implantação do aplicador substituto do tecido de PTFE poroso.

[0050] Aplicador substituto do tecido de PTFE poroso implantado em matéria cinza do cérebro. Coloração hematoxilina e eosina; ampliação x200.

[0051] A área da implantação do aplicador substituto do tecido revelou a formação de uma cicatriz macia, consistindo em tecido glimeodérmico solto, cujas fibras germinam para dentro dos poros do material, e a cápsula glial que circunda o aplicador substituto do tecido.

Em algumas áreas da superfície do material implantado, as paredes da cápsula foram mais finas devido à formação de focos claros no córtex cerebral adjacente, que poderia ser considerado uma área de edema reativo. Aglomerados de fibroblastos e células gliais também foram detectados.

[0052] Seções de criostato de tecido de cérebro de rato de Wistar foram expostas ao manchamento Nissl, então estudadas para identificar elementos do tecido nervoso, ampliação x100.

[0053] A Figura 7a mostra uma seção criostato de tecido cerebral de rato de Wistar em 30 dias após implantação de xenoenxerto de glioma C6.

[0054] Glioma C6 em matéria cinza do cérebro

[0055] A Figura 7b mostra uma seção criostato de tecido cerebral de rato de Wistar em 30 dias após o xenoenxerto de glioma C6 e implantação do aplicador substituto do tecido de PTFE poroso.

[0056] Aplicador substituto do tecido de PTFE poroso dentro do tumor. Intumescimento reativo moderado de glia que circunda o aplicador substituto do tecido; acumulações de pequenas células de tumor polimórfica.

[0057] A Figura 7c mostra uma seção criostato de tecido do cérebro de rato Wistar em 30 dias após a implantação do aplicador substituto do tecido de PTFE poroso.

[0058] Material sintético de PTFE dentro da matéria cinza do cérebro. Ativação de células gliais na área do aplicador substituto do tecido. Intumescência reativa de glial moderada em torno do aplicador substituto do tecido.

[0059] A Figura 8a mostra uma seção criostato de tecido cerebral de rato de Wistar em 30 dias após implantação de xenoenxerto de glioma C6.

[0060] Fibras de nervo positivo-AChE dentro do tumor; ampliação x400.

[0061] Glioma C6 é representado por células não diferenciadas pequenas com núcleos polimórficos densos. O tecido glial representa vasos no interior. Este serve como evidência de ativação do processo tumoral. Fibras de nervo colinérgico, que formam conglomerados de laço, seguem ao longo da vasculatura.

[0062] A Figura 8b mostra uma seção criostato de tecido cerebral de rato de Wistar em 30 dias após o xenoenxerto de glioma C6 e implantação do aplicador substituto do tecido de PTFE poroso.

[0063] Fibras de nervo positivo-AChE na área de implantação de PTFE dentro do tumor; ampliação x200. O aplicador substituto de tecido de PTFE poroso tende a desenvolver um edema reativo moderado de células de glioma; um grupo de células tumorais não diferenciadas polimórficas pequenas é reportado para formar uma cápsula peculiar.

[0064] As fibras do nervo colinérgico são detectadas para seguir ao longo da vasculatura dentro do tumor.

[0065] A Figura 8c mostra uma seção criostato de tecido do cérebro de rato Wistar em 30 dias após o aplicador substituto do tecido de PTFE poroso.

[0066] Fibras de nervo positivo-AChE na área de implantação de PTFE dentro da matéria cinza do cérebro; ampliação x400.

[0067] Um mês após a colocação do aplicador de tecido de PTFE poroso, nenhuma necrose foi observada na área de implantação, mas o edema reativo persistiu. A ativação de células microgliais, bem como macrófagos do sistema nervoso central que migra de áreas cerebrais distantes para o aplicador substituto do tecido, foi reportada.

[0068] A área de matéria cinza que circunda o aplicador representa uma rede de fibras nervosas que se seguem ao longo dos vasos e penetram nos poros do aplicador substituto do tecido.

[0069] Conclusão: Depois de 1 mês (30 dias) após a implantação do aplicador substituto do tecido de PTFE poroso no córtex cerebral dos ratos com glioma C6 experimental, focos de desintegração tumoral são detectados nas áreas adjacentes que circundam o aplicador substituto do tecido. Próximo dos focos, são observadas acumulações de células de tumor mal diferenciadas, seguido de hipertrofia e formação. Os dados obtidos podem evidenciar que o material PTFE implantado no córtex cerebral se beneficia da desintegração do tecido tumoral circundante.

[0070] Exemplo 3

[0071] Análise histológica de tecido do cérebro de ratos nos 4 meses de acompanhamento, após a implantação de aplicadores substitutos do tecido de PTFE poroso ou Glioma C6 e aplicadores substituto do tecido de PTFE poroso no córtex sensório-rmotor.

[0072] O estudo in vivo se focalizou no teste de córtex cerebral de ratos Wistar, divididos em 2 grupos: Grupo 1 - ratos com xenoenxertos de Glioma C6 e aplicadores substituto do tecido de PTFE poroso implantados no córtex sensorial por 4 meses; Grupo 2 - ratos com aplicadores substituto do tecido de PTFE poroso apenas implantados no córtex sensorial por 4 meses.

[0073] O estudo aplicou métodos de investigação histológica (coloração com hematoxilina e eosina), neuro-histológica (coloração Nissl) e histoquímica (detecção da atividade da acetilcolinesterase (AChE)).

[0074] Seções de criostato de tecido de cérebro de rato de Wistar foram tingidas com hematoxilina e eosina e azul de toluidina, seguido por exame microscópico óptico de luz. A coloração hemotoxilina-eosina para a determinação da estrutura do tecido envolveu o uso de hematoxilina como a mancha principal, que cortou estruturas celulares basfílicas em azul brilhante, e solução alcoólica de Eosina Y, que tingiu a estrutura celular eosinofílica em cor vermelha-rosa. Estruturas basfílicas, como regra, são aquelas que contêm ácidos nucleicos (DNA e RNA): núcleo celular, ribossomas e partes ricas em RNA do citoplasma. Estruturas eosinofílicas contêm proteínas intra-e extracelulares, por exemplo, corpos Lewy. Citoplasma é um meio eosinofílico. Os eritrócitos sempre são tingidos em vermelho brilhante.

[0075] A Figura 9a mostra uma seção criostato de tecido do cérebro de rato Wistar em 4 meses após o xenoenxerto de glioma C6 e implantação do aplicador substituto do tecido de PTFE poroso.

[0076] Focos maciços de desintegração do tecido tumoral. Manchada com hematoxilina e eosina; ampliação x100.

[0077] A Figura 9b mostra uma seção criostato de tecido do cérebro de rato Wistar em 4 meses após a implantação do aplicador substituto do tecido de PTFE poroso.

[0078] Aplicador substituto do tecido de PTFE poroso implantado pós-trauma no córtex cerebral de ratos experimentais (4 meses). Substituição da área de defeito do cérebro com o tecido neural de regeneração (cor marrom escuro PTFE). Coloração com hematoxilina e eosina; ampliação x100.

[0079] Seções de criostato de tecido de cérebro de rato de Wistar foram coradas por método Nissl, então estudadas para identificar elementos do tecido nervoso; ampliação x100.

[0080] A Figura 10a mostra uma seção criostato de tecido do cérebro de rato Wistar em 4 meses após o xenoenxerto de glioma C6 e implantação do aplicador substituto do tecido de PTFE poroso.

[0081] Aplicador substituto do tecido de PTFE poroso implantado no tecido tumoral do cérebro de ratos experimentais (4 meses). Células de microglia na área de desintegração tumoral. Coloração de nis1; ampliação x100.

[0082] A Figura 10b mostra uma seção criostato de tecido do cérebro de rato Wistar em 4 meses após a implantação do aplicador substituto do tecido de PTFE poroso.

[0083] Aplicador substituto do tecido de PTFE poroso implantado pós-trauma no córtex cerebral de ratos experimentais (4 meses). Cachos de células microgliais migrem para a área de dano. Coloração Nissl, manchamento de aumento 100.

[0084] Conclusão:

[0085] Depois de 4 meses após a implantação no tecido do córtex cerebral tumoral de ratos experimentais, o aplicador substituto do tecido de PTFE poroso se beneficia para formação de múltiplos pequenos focos de necrose colliquada e focos centrais maciços de desintegração do tecido tumoral, resultando assim em redução tumoral.

[0086] Depois de 4 meses após a implantação do aplicador ubstituto do tecido de PTFE poroso dentro da área de dano do córtex cerebral em ratos experimentais, observa-se a substituição de defeito com o tecido neural em regeneração, acompanhada por vascularização e formação de fibras nervosas colinérgicas dentro do aplicador substituto do tecido.

[0087] Análise histológica de seções do cérebro de rato experimental com glioma de teste e aplicador substituto do tecido de PTFE poroso implantado no tecido tumoral revelou numerosos pequenos focos de necrose colliquada do tumor, bem como focos centrais maciços de deterioração do tecido tumoral na área do aplicador após 4 meses de acompanhamento. Células de Microglia migradas para a área de desintegração tumoral. Nas áreas restantes do tumor, o polimorfismo das estruturas celulares, numerosos células gigantes multinadas com sinais de lesão necrobiótica foram relatadas. As áreas de tumor com parênquima completamente destruída e estroma parcialmente preservado foram reveladas.

[0088] Na área de implantação do aplicador substituto do tecido de PTFE poroso, o tecido tumoral revelou fibras nervosas colinérgicas finas únicas que seguem os vasos recém- formados.

[0089] Análise histológica de seções de cérebro de ratos experimentais em 4 meses pós- trauma no córtex cerebral e após a implantação de aplicador substituto do tecido de PTFE poroso, foi demonstrado o desenvolvimento de processos de reparo na área de foco. No fundo do edema persistente do córtex cerebral, observou-se a proliferação de astrócitos na área porosa de PTFE, onde elas se acumularam no interior das fibras do aplicador substituto do tecido. Foram também detectados grupos de células microgliais que migraram para a área de dano e transformadas em macrófagos. Na área de regeneração do córtex cerebral adjacente ao aplicador substituto do tecido de PTFE poroso, foi observado um processo de vascularização. A área de defeito do cérebro foi completamente substituída por um tecido neural de regeneração.

[0090] As fibras do nervo colinérgico fino foram reveladas na área de regeneração do cérebro, dentro do aplicador substituto do tecido, que seguiu ao longo dos vasos entre os poros do material sintético de PTFE.

[0091] Conclusão Final

[0092] Depois de 4 meses após a implantação dentro do tecido do córtex cerebral tumoral de ratos experimentais, o aplicador substituto do tecido de PTFE poroso se beneficia para a formação de múltiplos pequenos focos de necrose colliquada e focos centrais maciços de desintegração do tecido tumoral, resultando assim em redução tumoral.

[0093] Depois de 4 meses após a implantação do aplicador substituto do tecido de PTFE poroso na área de dano do córtex cerebral em ratos experimentais, observa-se a substituição de defeito com o tecido neural de regeneração, acompanhada por vascularização e formação de fibras nervosas colinérgicas dentro do aplicador substituto do tecido.

[0094] Com base nos resultados obtidos, pode-se concluir que a tecnologia desenvolvida para a fabricação de materiais à base de PTFE permite a criação de aplicadores substitutos de tecidos que são promissores para pesquisa adicional para aplicações biomédicas possíveis.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método de exposição local para tecidos biológicos, que incluem a colocação de um aplicador polimérico substituto do tecido em contato direto com o tecido biológico a ser exposto, caracterizado pelo fato de que o politetrafluoretileno poroso é usado como o material polimérico constituinte.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é usado um tecido tumoral para o tecido biológico a ser exposto.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um tecido biológico circundante ao tumor é exposto.

4. Aplicador polimérico substituto do tecido colocado em contato direto com o tecido tumoral, caracterizado pelo fato de que tal aplicador é feito de PTFE.

5. Uma aplicação de politetrafluoretileno poroso caracterizado como um material citostático.

6. Politetrafluoretileno poroso caracterizado por ser utilizado na produção de um aplicador substituto do tecido para o tratamento ou substituição dos tecidos tumorais.