BR112020009257A2

BR112020009257A2 - composições que compreendem pelo menos um oligossacarídeo n-acetilado e pelo menos um oligossacarídeo fucosilado para uso na promoção da capacidade digestiva em bebês e crianças pequenas

Info

Publication number: BR112020009257A2
Application number: BR112020009257-6A
Authority: BR
Inventors: Clara Lucia Garcia-Rodenas; José Manuel Ramos Nieves; Myriam Sandrine Steinmann
Original assignee: Société des Produits Nestlé S.A.
Priority date: 2017-12-21
Filing date: 2018-12-20
Publication date: 2020-10-20
Also published as: ZA202004246B; US20230084416A1; RU2020115491A; EP3727398A1; US20200360407A1; US11517579B2; PH12020550465A1; CL2020001195A1; WO2019122178A1; AU2018387279A1; MX2020007198A; CN111491638A

Abstract

A presente invenção refere-se a composições para uso na promoção do desenvolvimento e/ou do crescimento da área superficial do intestino delgado e na melhoria da capacidade digestiva associada em um bebê ou em uma criança pequena.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COM- POSIÇÕES QUE COMPREENDEM PELO MENOS UM OLIGOSSA- CARÍDEO N-ACETILADO E PELO MENOS UM OLIGOSSACARÍ- DEO FUCOSILADO PARA USO NA PROMOÇÃO DA CAPACIDA- DE DIGESTIVA EM BEBÊS E CRIANÇAS PEQUENAS".

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção refere-se a composições para uso na promoção do desenvolvimento e/ou do crescimento da área superfi- cial do intestino delgado e na melhoria da capacidade digestiva asso- ciada em um bebê ou em uma criança pequena.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] O desenvolvimento do intestino em bebês e crianças peque- nas é a chave para o desenvolvimento do bebê e da criança; em particu- lar, é muito importante que o bebê ou a criança pequena tenha uma óti- ma capacidade digestiva. É portanto desejável desenvolver composições que promovam o desenvolvimento da capacidade digestiva em bebês e crianças pequenas.

[003] No caso de proteínas e carboidratos, estes são primeiro digeridos para formar fragmentos menores no lúmen intestinal e de- pois eles são adicionalmente degradados quebrados em aminoáci- dos, dipeptídeos e tripetídeos e monossacarídeos por uma variedade de enzimas localizadas no lado apical dos enterócitos do intestino delgado antes de serem absorvidos pelo corpo.

[004] Como as proteínas e os carboidratos, lipídios dietários e vitaminas lipossolúveis são hidrolisados no lúmen intestinal por dife- rentes tipos de lipases. Depois de uma primeira etapa de digestão no estômago por lipase gástrica, grandes gotículas de gordura não dige- ridas e produtos da digestão de gordura entram no intestino, onde são misturados com sais biliares para formar uma emulsão fina de fácil acesso para as lipases pancreáticas.

[005] Os produtos da digestão de lipídios são então também incor- porados em micelas de sal biliar no lúmen e formam as assim chamadas micelas misturadas. Esse processo aumenta notavelmente a solubilidade dos produtos da digestão de lipídios, o que, por sua vez, facilita fortemen- te sua absorção pelos enterócitos. A concentração mínima de sais bilia- res, chamada de concentração crítica micelar, é necessária no lúmen para a formação de micelas de sal biliar. Em adultos saudáveis, a con- centração luminal de sais biliares durante o estado pós-prandial está acima da concentração crítica micelar, o que garante uma digestão e ab- sorção de lipídios altamente eficiente. Em bebês, especialmente bebês prematuros (consulte "Lindqvist et al., Lipid digestion and absorption in early life: an update, Current Opinion in Clinical Nutrition and Metabolic Care; 13 (2010): 314-320"), e em alguns estados doentios (por exemplo, fibrose cística), a concentração luminal de sais biliares é baixa, ficando abaixo da concentração crítica micelar, o que resulta em uma ineficiência da digestão e absorção de lipídios.

[006] Uma consequência primária dessa digestão ineficiente de lipídios é a perda de nutrientes nas fezes, isto é, perda de vitaminas lipossolúveis e gordura, como ácidos graxos essenciais e LC-PUFA, bem como perda de energia associada. Dessa forma, tais nutrientes e energia não estão disponíveis para o crescimento e desenvolvimento do bebê. Além disso, essa digestão ineficiente está associada a diar- reia, intolerância alimentar e alterações na microbiota intestinal, por exemplo. Dessa forma, é particularmente desejável encontrar soluções para melhorar a digestão em bebês e crianças pequenas, e, em parti- cular, em bebês prematuros ou com peso baixo no nascimento.

[007] Os sais biliares no lúmen intestinal transitam pelo intestino delgado e são absorvidos eficientemente (até 95%) no íleo de adultos saudáveis. Os sais biliares sobressalentes são recirculados pela veia porta até o fígado, onde são absorvidos para secreção novamente no lúmen intestinal. Portanto, a maior parte da concentração de sal biliar luminal é dependente dessa circulação entero-hepática, e apenas uma pequena proporção resulta da síntese de novo. O processo de circulação entero-hepática é, no entanto, defeituoso em bebês novos (consulte Belle et al.; /Intestinal absorption of bile salts: immature de- velopment in the neonate; J Pediatr 94 (1979): 472-476), particular- mente em bebês prematuros e em certos estados doentios como a síndrome do intestino curto. Em particular, o aumento de absorção na superfície ileal pode melhorar a circulação entero-hepática dos sais biliares, a reutilização pelo fígado e o aumento da concentração de sal biliar luminal, resultando em uma melhor digestão de gorduras e vitaminas lipossolúveis.

[008] O intestino delgado desempenha um papel de importância crítica em tal processo de digestão. Um parâmetro importante que influ- encia a capacidade digestiva é a morfologia do intestino delgado. À área superficial do epitélio do intestino delgado é um parâmetro chave (consulte Helander et al.; Surface area of the digestive tract — revisited; Scandinavian Journal of Gastroenterology; 49 (2014): 681-689). Quanto maior a área superficial do epitélio, maior a concentração de sais bilia- res e enzimas digestivas disponíveis para a digestão final de nutrientes como lipídios, vitaminas lipossolúveis, carboidratos e proteínas. Aumen- tar o comprimento das vilosidades no intestino delgado induz a um au- mento favorável da área superficial e melhora da digestão associada de macronutrientes, como lipídios, vitaminas lipossolúveis, proteínas e car- boidratos. Tal efeito do comprimento das vilosidades e aumento associ- ado da área superficial do intestino delgado sobre a capacidade digesti- va é bem documentado na literatura. Por exemplo, a revisão de L. Mon- tagne et al., A review of interactions between dietary fibre and the intes- tinal mucosa, and their consequences on digestive health in young non- ruminant animals, Animal Feed Science and Technology 108 (2003),

páginas 95 a 117, e, em particular, o parágrafo 4.3 da página 105, cita vários estudos destacando o impacto positivo do aumento do compri- mento das vilosidades na capacidade digestiva dos animais.

[009] É desejável melhorar a capacidade digestiva em todos os bebês e crianças pequenas. No entanto, algumas populações especí- ficas de bebês e crianças pequenas necessitam particularmente de composições capazes de promover seu desenvolvimento geral e, em particular, sua capacidade de absorção e/ou digestiva. Tais bebês e crianças pequenas são, por exemplo, bebês prematuros, bebês com peso baixo no nascimento, bebês e crianças pequenas que sofrem de síndrome do intestino curto e/ou bebês ou crianças pequenas com crescimento retardado e, em particular, bebês com restrição de cres- cimento intrauterino (RCIU).

[0010] Muitas tentativas têm sido feitas para desenvolver a capa- cidade digestiva em bebês e crianças pequenas, bem como em ani- mais jovens. Em particular, vários estudos têm avaliado o impacto de diferentes tipos de fibras sobre a morfologia intestinal e sobre a capa- cidade digestiva de animais jovens, bebês ou crianças pequenas. À revisão acima mencionada de L. Montagne et al. cita diversos estudos que mostram um efeito variável de diferentes tipos de fibras dietárias, alguns estando associados a efeitos positivos sobre a capacidade di- gestiva, enquanto outros parecem prejudiciais.

[0011] Um exemplo de um estudo em que a fibra dietária mostrou um efeito positivo é P. Liu and al, Effects of chito-oligosaccharide su- bplementation on the growth performance, nutrient digestibility, intestinal morphology, and fecal shedding of Escherichia coli and Lactobacillus in weaning pigs, J. Anim. Sci. 86 (2008), páginas 2609 a 2618. Neste estu- do, um aumento da altura das vilosidades e da razão vilosidade:cripta no ileo e no jejuno foi associado ao aumento da digestibilidade em porcos em desmame após a suplementação da dieta dos porcos com quito-

oligossacarídeos, em comparação com a dieta de controle. Pelo contrá- rio, o estudo de van Meer et al.; Prebiotic oligosaccharides and the ente- rohepatic circulation of bile salts in rats, Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 294 (2008): G540 a G547, mostrou que a suplementação da di- eta de filhotes de ratos com galacto-oligossacarídeos não contribuiu para um tamanho maior da concentração de sal biliar ou para uma cinética alterada da concentração de sal biliar e, portanto, não teve êxito na pro- moção da digestão de gordura.

[0012] Outros ingredientes foram avaliados quanto à sua capaci- dade de promoção da digestão. Por exemplo, o documento WO 2011/65552 descreve uma composição que compreende um hidrolisa- do de uma proteína do leite fermentado (por exemplo, do queijo), lipí- dios e isomaltulose que são eficazes para aumentar o comprimento das vilosidades no intestino delgado. Entretanto, tais composições não são adequadas para bebês e crianças pequenas, pois a isomaltulose não é desejável para ser usada em tais composições.

[0013] Seria particularmente vantajoso identificar ingredientes es- pecialmente adaptados para bebês e/ou crianças pequenas e capa- zes de melhorar a capacidade digestiva de tais bebês e/ou crianças pequenas.

[0014] O leite materno é recomendado para todos os bebês. Entre- tanto, em alguns casos, o aleitamento é inadequado ou malsucedido por razões médicas, ou a mãe decide não amamentar. Para essas situações, foram desenvolvidas fórmulas de alimentação infantil. Foram desenvolvi- dos fortificantes também para enriquecer o leite materno ou a fórmula para bebês com ingredientes específicos.

[0015] Existe claramente a necessidade do desenvolvimento de métodos adequados para aumentar a capacidade de digerir macronu- trientes como lipídios, vitaminas lipossolúveis, proteínas e/ou carboi- dratos em bebês e crianças pequenas.

[0016] Há ainda a necessidade de se fornecer esses benefícios de saúde de uma maneira que seja particularmente adequada aos indivíduos jovens (bebês e crianças pequenas), de uma maneira que não envolva uma intervenção farmacêutica clássica, uma vez que es- ses bebês ou crianças pequenas são especialmente frágeis.

[0017] É necessário fornecer esses benefícios de saúde a esses be- bês ou crianças pequenas de uma maneira que não cause efeitos colate- rais e/ou de uma maneira que seja de fácil aplicação, além de ser bem aceita pelos pais ou profissionais da área de saúde.

[0018] É ainda necessário fornecer tais benefícios de uma maneira que mantenha o custo desse fornecimento razoável e acessível à maio- ria.

[0019] Dessa forma, há claramente a necessidade de se desen- volver métodos alternativos à intervenção farmacêutica clássica, co- mo o uso de antibióticos, pelo menos por causa do risco associado do desenvolvimento de resistência a antibióticos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0020] Os presentes inventores descobriram que uma composi- ção que compreende pelo menos um oligossacarídeo fucosilado e pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado pode ser vantajosamente usada para promover a capacidade digestiva, de preferência, a capa- cidade de digerir gordura, vitaminas lipossolúveis, proteínas e carboi- dratos, em um bebê ou em uma criança pequena. Sem se ater à teo- ria, acredita-se que estes oligossacarídeos agem de modo sinérgico para estas condições de saúde específicas.

[0021] Consequentemente, a presente invenção fornece, portanto, uma composição nutricional que compreende pelo menos um oligos- sacarídeo fucosilado e pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado para uso em um método de promoção da capacidade digestiva em um bebê ou uma criança pequena.

[0022] A presente invenção também fornece um leite de cresci- mento que compreende pelo menos um oligossacarídeo fucosilado e pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado para uso em um método de promoção da capacidade digestiva em uma criança.

[0023] A composição nutricional, respectivamente o leite de cresci- mento da presente invenção, é particularmente vantajosa para uso em um método para: - melhorar a circulação entero-hepática, em particular, a circu- lação entero-hepática de sais biliares, e - promover um aumento da área superficial no intestino del- gado; e - promover um aumento do comprimento das vilosidades no intestino delgado de um bebê ou de uma criança pequena, respectiva- mente de uma criança.

[0024] Em uma modalidade particularmente vantajosa, a composi- ção nutricional, respectivamente o leite de crescimento, compreende 2'-fucosil-lactose (2-FL) e lacto-N-neotetraose (LNnT).

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0025] A Figura 1 representa o comprimento das vilosidades nos seguintes grupos de ratos jovens: - animais com crescimento in utero normal (grupo Normais; controle positivo) - animais que tenham experimentado retardo do crescimen- to no útero e foram alimentados com uma dieta normal (grupo RCIU; controle negativo), - animais com retardo de crescimento no útero que tiveram uma dieta suplementada com 2-FL (grupo de teste RCIU/2FL), - animais com retardo de crescimento no útero que tiveram uma dieta suplementada com LNnT (grupo de teste RCIU/LNnT), - animais com retardo do crescimento no útero que tiveram uma dieta suplementada com uma combinação de 2-FL e LNnT (gru- po de teste misto RCIU/HMOs).

[0026] A média do comprimento das vilosidades de cada grupo de ratos é representada por uma linha horizontal. Os grupos 2-FL e LNnNT não mostraram diferença significativa em relação ao grupo RCIU. Em contraste, o grupo 2-FL e LNnNT mostra vilosidades signifi- cativamente mais longas que os outros grupos. Uma sinergia pode, portanto, ser observada entre 2-FL e LNnT.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0027] Como usado aqui, os seguintes termos têm os significados a seguir.

[0028] O termo "bebê" significa uma criança de até 12 meses de idade. A expressão "criança pequena" significa uma criança com idade entre um e três anos. A expressão "criança" significa uma pes- soa com três a sete anos de idade.

[0029] Um "bebê ou criança pequeno nascido(a) de cesariana" significa um bebê ou criança pequena que nasceu por uma cesaria- na. Isso significa que o bebê ou a criança pequena não nasceu por parto normal.

[0030] Um "bebê ou uma criança pequena que nasceu por parto normal" significa um bebê ou uma criança pequena que nas- ceu por parto vaginal e não nasceu por cesariana.

[0031] Um pré-termo" ou "prematuro significa um bebê ou crian- ça pequena que não nasceu a termo. De modo geral, isto se refere a um bebê ou criança pequena que nasceu antes de 37 semanas de gestação.

[0032] Um "bebê com baixo peso ao nascer" significa um recém- nascido com peso corporal abaixo de 2,5 kg de (5,5 libras) seja por cau- sa de nascimento prematuro ou crescimento fetal limitado. Portanto, isto compreende:

- bebê ou criança pequena que tem/tinha um peso corporal de 1500 a 2500 g no nascimento (geralmente chamado de "baixo pe- So ao nascer" ou BPN) - bebê ou criança pequena que tem/tinha um peso corporal de 1000 a 1500 g no nascimento (chamado de "peso muito baixo ao nascer") - bebê ou criança pequena que tem/tinha um peso corporal menor que 1000 g no nascimento (chamado de "peso extremamente baixo ao nascer").

[0033] Um "bebê nascido pequeno para a idade gestacional (SGA - small for gestational age)" significa um bebê com peso no nascimento abaixo do 10º percentil para bebês com a mesma idade gestacional.

[0034] A expressão "composição nutricional" significa uma composição que alimenta um indivíduo. Essa composição nutricional geralmente se destina a ser tomada por via oral ou intravenosa e ge- ralmente inclui uma fonte de lipídio ou gordura e uma fonte de proteí- na.

[0035] Em uma modalidade específica, a composição da presente invenção é uma composição nutricional hipoalergênica. A expressão "composição nutricional hipoalergênica" significa uma composição nutricional que tem pouca probabilidade de causar reações alérgicas.

[0036] Em uma modalidade específica, a composição da presente invenção é uma "composição nutricional sintética". A expressão "composição nutricional sintética" significa uma mistura obtida por um meio químico e/ou biológico, que pode ser quimicamente idêntica à mistura de ocorrência natural em leites de mamíferos (isto é, a composição sintética não é leite materno).

[0037] A expressão "fórmula para bebês", como usada aqui, se refere a um produto alimentício que é destinado para uso nutricional específico por bebês durante os primeiros meses de vida e que satisfaz, por si só, as necessidades nutricionais dessa categoria de pessoa (Arti- go 2(c) da Diretiva 91/321/EEC 2006/141/EC da Comissão Europeia, de 22 de dezembro de 2006 sobre fórmulas para bebês e fórmulas de tran- sição). Ela também se refere a composições nutricionais destinadas a bebês segundo a definição do Codex Alimentarius (Codex STAN 72- 1981) e Infant Specialities (incluindo Food for Special Medical Purpose). A expressão "fórmula para bebês" abrange tanto a "fórmula de partida para bebês" quanto a "fórmula de seguimento" ou "fórmula de transi- ção".

[0038] Uma "fórmula de seguimento" ou "fórmula de transi- ção" é fornecida a partir do 6º mês em diante. Ela constitui o principal elemento líquido na dieta progressivamente diversificada dessa cate- goria de pessoa.

[0039] A expressão "alimentos para bebês" significa um produto alimentício destinado ao uso nutricional específico por bebês ou cri- anças pequenas durante os primeiros anos de vida.

[0040] A expressão "composição de cereais para bebês" signifi- ca um produto alimentício destinado ao uso nutricional específico por bebês ou crianças pequenas durante os primeiros anos de vida.

[0041] A expressão "leite de crescimento" (ou LC) se refere a uma bebida à base de leite geralmente com vitaminas e minerais adi- cionados que é destinada a crianças pequenas ou crianças.

[0042] A expressão "fortificante" refere-se a composições nutri- cionais líquidas ou sólidas adequadas para serem misturadas ao leite materno ou a fórmulas para bebês.

[0043] A expressão "período de desmame" significa o período durante o qual o leite materno é substituído por outro alimento na di- eta de um bebê ou de uma criança pequena.

[0044] As expressões "dias/semanas/meses/anos de vida" e "di-

as/semanas/meses/anos de nascimento" podem ser usadas de forma intercambiável.

[0045] A expressão "promover a capacidade digestiva" abrange um ou vários dentre os seguintes: - o aumento da área superficial do intestino delgado, e em particular, do fleo; - o aumento do comprimento das vilosidades no intestino delgado, em particular, no leo; e - a melhora da circulação entero-hepática, em particular, da circulação entero-hepática de sais biliares.

[0046] A expressão "leite materno" deve ser entendida como o leite produzido pelas mamas da mãe ou o colostro da mãe.

[0047] Um "oligossacarídeo" é um polímero de sacarídeo que con- tém um pequeno número (tipicamente de três a dez) de açúcares sim- ples (monossacarídeos).

[0048] O termo "HMO" ou "HMOSs" refere-se a oligossacarídeo(s) do leite humano. Esses carboidratos são altamente resistentes à hidrólise enzimática, indicando que eles podem exibir funções essenciais não dire- tamente relacionadas ao seu valor calórico. Tem sido especialmente ilus- trado que eles têm um papel vital no desenvolvimento inicial dos bebês e crianças, como a maturação do sistema imunológico. Muitos tipos dife- rentes de HMOs são encontrados no leite humano. Cada oligossacarídeo individual é baseado em uma combinação de glicose, galactose, ácido siálico (ácido N-acetilneuramínico), fucose e/ou N-acetilglicosamina com muitas e variadas ligações entre eles, constituindo, dessa forma, o enor- me número de oligossacarídeos diferentes no leite humano - mais de 130 de tais estruturas foram identificadas até agora. Quase todos eles têm uma porção de lactose em sua extremidade redutora enquanto que o ácido siálico e/ou a fucose (quando presente) ocupam posições terminais nas extremidades não redutoras. Os HMOs podem ser ácidos (por exemplo, oligossacarídeo contendo ácido siálico carregado) ou neutros (por exemplo, oligossacarídeo fucosilado).

[0049] Um "oligossacarídeo fucosilado" é um oligossacarídeo que tem um resíduo de fucose. Ele tem uma natureza neutra. Alguns exemplos são 2-FL (2'-fucosil-lactose), 3-FL (3'-fucosil-lactose), difuco- sil-lactose, lacto-N-fucopentaose (por exemplo, lacto-N-fucopentaose |, lacto-N-fucopentaose Il, lacto-N-fucopentaose III, lacto-N-fucopentaose V), lacto-N-fuco-hexaose, lacto-N-difuco-hexaose |, fucosil-lacto-N- hexaose, fucosil-lacto-N-neo-hexaose, difucosil-lacto-N-hexaose |, di- fucosil-lacto-N-neo-hexaose Il e qualquer combinação dos mesmos. Sem o desejo de se vincular à teoria, acredita-se que o fucosil-epítopo dos oligossacarídeos fucosilados pode agir como um chamariz na su- perfície mucosal. Por efeito de competição, ele pode evitar e/ou limitar a ação dos patógenos responsáveis por infecções (de origem viral ou bacteriana) ou de seus componentes segregados (por exemplo, toxi- nas), evitando especialmente sua ligação a ligantes naturais, reduzin- do assim o risco de infecções/inflamações e, particularmente, o risco de infecções e/ou inflamações do ouvido/TRI. Além disso, os oligossa- carídeos fucosilados são pensados para impulsionar o crescimento e atividade metabólica específica de micróbios comensais, reduzindo a resposta inflamatória e criando um ambiente desfavorável para pató- genos, levando assim à resistência a colonização.

[0050] As expressões "oligossacarídeos fucosilados que com- preendem um 2'-fucosil-epítopo" e "oligossacarídeos 2- fucosilados" abrangem oligossacarídeos fucosilados com uma certa homologia de forma, uma vez que eles contêm um 2'-fucosil-epítopo. Portanto, pode-se esperar uma certa homologia de função. Sem o desejo de se ater à teoria, acredita-se que o 2'-fucosil-epítopo desses oligossacarídeos fucosilados seja particularmente específico a pató- genos (ou seus componentes segregados) envolvidos nas infecções do LRT e/ou do ouvido.

[0051] A expressão "oligossacarídeos N-acetilados" abrange tanto "N-acetil-lactosamina" como "oligossacarídeos que contêm N- acetil-lactosamina". Eles são oligossacarídeos neutros que têm um resíduo de N-acetil-lactosamina. Alguns exemplos adequados são lacto-N-neotetraose (LNnT), lacto-N-tetraose (LNT), para-lacto-N-neo- hexaose (para-LNnH), disialil-lacto-N-tetraose (DSLNT) ou qualquer combinação dos mesmos. Outros exemplos são lacto-N-hexaose, lac- to-N-neo-hexaose, para-lacto-N-hexaose, para-lacto-N-neo-hexaose, lacto-N-octaose, lacto- N-neo-octaose, iso-lacto-N-octaose, para- lacto-N-octaose e lacto-N- decaose.

[0052] As expressões "pelo menos um oligossacarídeo fucosilado" e "pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado" significam "pelo menos um tipo de oligossacarídeo fucosilado" e "pelo menos um tipo de oligossaca- rídeo N-acetilado".

[0053] Um "precursor de HMO" é um composto-chave que intervém na fabricação de HMO, como ácido siálico e/ou fucose.

[0054] Um "oligossacarídeo sialilado" é um ácido siálico carre- gado que contém oligossacarídeo, isto é, um oligossacarídeo que tem um resíduo de ácido siálico. Ele tem uma natureza ácida. Alguns exemplos são 3-SL (3'-sialil-lactose) e 6-SL (6'-sialil-lactose).

[0055] A composição nutricional da presente invenção pode estar na forma sólida (por exemplo, em pó) ou na forma líquida. A quanti- dade dos vários ingredientes (por exemplo, os oligossacarídeos) po- de ser expressa em g/100 g da composição com base no peso seco quando estiver em uma forma sólida, por exemplo, um pó, ou como uma concentração em g/L da composição quando se referir a uma forma líquida (esta última também abrange a composição líquida que pode ser obtida a partir de um pó após a reconstituição em um líquido como leite, água, etc., por exemplo uma fórmula reconstituída para bebês ou fórmula de transição/seguimento ou um leite de crescimen- to ou cereal infantil ou qualquer outra formulação destinada à nutrição de bebês).

[0056] O termo "prebiótico" significa carboidratos não digestíveis que afetam de modo benéfico o hospedeiro por estimular seletivamente o crescimento e/ou a atividade de bactérias saudáveis, como bactérias bi- fidas no cólon de humanos (Gibson GR, Roberfroid MB. Dietary modula- tion of the human colonic microbiota: introducing the concept of prebio- tics. J. Nutr. 1995; 125:1.401-12).

[0057] O termo "probiótico" significa preparações de células mi- crobianas ou componentes de células microbianas com um efeito be- néfico na saúde ou no bem-estar do hospedeiro. (Salminen S, Ou- wehand A. Benno Y. et al. "Probiotics: how should they be defined" Trends Food Sci. Technol. 1999; 10:107-10). As células microbianas geralmente são bactérias ou leveduras.

[0058] O termo "ufc" deve ser entendido como unidade formadora de colônias.

[0059] Todas as porcentagens são porcentagens em peso, exceto onde especificado em contrário.

[0060] Além disso, no contexto da invenção, os termos "que com- preende" e "compreende" não excluem outros possíveis elementos. À composição da presente invenção, incluindo as muitas modalidades aqui descritas, pode compreender, consistir em ou consistir essenci- almente nos elementos e limitações essenciais da invenção aqui des- crita, além de quaisquer ingredientes, componentes ou limitações adicionais ou opcionais aqui descritos ou de outro modo dependentes das necessidades.

[0061] Qualquer referência a documentos da técnica anterior neste relatório descritivo não deve ser considerada como admissão de que tal técnica anterior é amplamente conhecida ou que faz parte do conheci-

mento comum e geral no campo da técnica.

[0062] A invenção será agora descrita com mais detalhes. Note- se que os vários aspectos, características, exemplos e modalidades descritos no presente pedido podem ser compatíveis e/ou combina- dos entre si.

[0063] Um primeiro objetivo da presente invenção é, portanto, uma composição nutricional compreendendo pelo menos um oligos- sacarídeo fucosilado e pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado para uso na promoção da capacidade digestiva em um bebê ou cri- ança pequena.

[0064] Um segundo objetivo da presente invenção é um leite de crescimento que compreende pelo menos um oligossacarídeo fucosi- lado e pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado para uso na pro- moção da capacidade digestiva em uma criança.

[0065] De preferência, a composição nutricional, respectivamente o leite de crescimento da presente invenção, é para uso na promoção da capacidade de digerir gordura, vitaminas lipossolúveis, proteínas e carboidratos em um bebê ou uma criança pequena, respectivamente em uma criança.

[0066] Para obter tais benefícios, a composição nutricional, respec- tivamente o leite de crescimento da invenção é, de preferência, para uso em um método de: - aumento da área superficial do intestino delgado, de pre- ferência, do íleo; - aumento do comprimento das vilosidades no intestino del- gado, de preferência, no ileo; e - melhora da circulação entero-hepática, em particular, da cir- culação entero-hepática de sais biliares; em um bebê ou em uma criança pequena, respectivamente em uma cri- ança.

[0067] A composição nutricional, respectivamente o leite de cres- cimento da presente invenção, compreende pelo menos um oligossa- carídeo fucosilado. Pode haver um ou vários tipos de oligossacarí- deos fucosilados. Os oligossacarídeos fucosilados podem, na verda- de, ser selecionados da lista que compreende 2'-fucosil-lactose, 3'- fucosil-lactose, difucosil-lactose, lacto-N-fucopentaose (como lacto-N- fucopentaose |, lacto-N-fucopentaose Il, lacto-N-fucopentaose III, lac- to-N-fucopentaose V), lacto-N-fuco-hexaose, lacto-N-difuco-hexaose |, fucosil-lacto-N-hexaose, fucosil-lacto-N-neo-hexaose (como fucosil- lacto-N-neo-hexaose |, fucosil-lacto-N-neo-hexaose Il), difucosil-lacto- N-hexaose |, difuco-lacto-N-neo-hexaose, difucosil-lacto-N-neo- hexaose |, difucosil-lacto-N-neo-hexaose, | difucosil-lacto-N-neo- hexaose |1l, fucosil-para-Lacto-N-hexaose, tri-fuco-para-Lacto-N- hexaose | e combinação dos mesmos.

[0068] Em algumas modalidades específicas, o oligossacarídeo fu- cosilado compreende um 2"'-fucosil-epítopo. Ele pode ser selecionado dentre a lista que compreende 2'-fucosil-lactose, difucosil-lactose, lacto- N-fucopentaose, lacto-N-fuco-hexaose, lacto-N-difuco-hexaose, fucosil- lacto-N-hexaose, fucosil-lacto-N-neo-hexaose, difucosil-lacto-N-hexaose difuco-lacto-N-neo-hexaose, difucosil-lacto-N-neo-hexaose, fucosil-para- Lacto-N-hexaose e qualquer combinação dos mesmos.

[0069] Em uma modalidade preferencial, a composição nutricio- nal, respectivamente o leite de crescimento de acordo com a inven- ção, compreende 2'-fucosil-lactose (ou 2FL, ou 2'FL, ou 2-FL ou 2'- FL). Em uma modalidade específica, não há outro tipo de oligossaca- rídeo fucosilado além de 2'-fucosil-lactose, ou seja, a composição nu- tricional da invenção, compreende somente 2"'-fucosil-lactose como oligossacarídeo fucosilado.

[0070] O(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) pode/podem ser isola- do(s) por tecnologia cromatográfica ou de filtração a partir de uma fonte natural, como leites de animais. Alternativamente, ele pode ser produzi- do por meios biotecnológicos usando fucosiltransferases e/ou fucosida- ses específicas, por meio do uso da tecnologia de fermentação à base de enzimas (recombinante ou enzimas naturais) ou tecnologia de fer- mentação microbiana. No último caso, os micróbios podem expressar Suas enzimas e seus substratos naturais ou podem ser projetados para produzir os respectivos substratos e enzimas. Podem ser usadas cultu- ras microbianas únicas e/ou culturas misturadas. A formação de oligos- sacarídeos fucosilados pode ser iniciada por substratos aceitadores ini- ciando a partir de qualquer grau de polimerização (DP), de DP = 1 em diante. Alternativamente, os oligossacarídeos fucosilados podem ser produzidos por síntese química a partir de lactose e fucose livre. Os oli- gossacarídeos fucosilados também estão disponíveis, por exemplo, jun- to à Kyowa Hakko Kogyo, do Japão.

[0071] A composição nutricional ou o leite de crescimento da pre- sente invenção compreendem também pelo menos um oligossacarí- deo N-acetilado. Pode haver um ou vários tipos de oligossacarídeos N- acetilados. O(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) pode/podem ser, por exemplo, lacto-N-tetraose (LNT), lacto-N-neotetraose (LNnT) e qual- quer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades específicas, o oligossacarídeo N-acetilado é lacto-N-neotetraose (LNnT), lacto-N- tetraose (LNT), para-lacto-N-neo-hexaose (para-LNnH), disialil-lacto-N- tetraose (DSLNT) ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades específicas, o oligossacarídeo N-acetilado é LNNT. Em algumas modalidades específicas, o oligossacarídeo N-acetilado é LNT. Em algumas outras modalidades específicas, o oligossacarídeo N-acetilado é uma mistura de LNT e LNnNT. Em algumas modalidades específicas, a composição nutricional ou leite de crescimento compre- ende LNT e LNnNT em uma razão de LNT:LNnT entre 5:1 e 1:2, ou de 2:1a1:1,oude 2:1,2a2:1,6.

[0072] Em uma modalidade preferencial, a composição nutricional ou leite de crescimento de acordo com a invenção compreende lacto- N-neotetraose (LNnNT). Em uma modalidade específica, não há outro tipo de oligossacarídeo N-acetilado que não seja lacto-N-neotetraose (LNnT), isto é, a composição nutricional ou leite de crescimento da in- venção compreende apenas lacto-N-neotetraose (LNnNT) como oligos- sacarídeo N-acetilado.

[0073] O(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) podem ser sintetiza- dos quimicamente por transferência enzimática de unidades sacarídicas de porções doadoras para porções aceptoras com o uso de glicosil- transferases conforme descrito, por exemplo, na patente US nº

5.288.637 e em WO 96/10086. Alternativamente, o LNT e o LNnNT po- dem ser preparados por conversão química de ceto-hexoses (por exemplo, frutose) livres ou ligadas a um oligossacarídeo (por exemplo, lactulose) em N-acetil-hexosamina ou um oligossacarídeo que contém N-acetil-hexosamina, conforme descrito em Wrodnigg, T.M.; Stutz, A.E. (1999) Angew. Chem. Int. Ed. 38:827-828. A N-acetil-lactosamina pro- duzida nesta maneira pode, então, ser transferida para a lactose como a porção aceptora.

[0074] Em uma modalidade particularmente vantajosa da presen- te invenção, a composição nutricional ou o leite de crescimento com- preende 2'-fucosil-lactose (2FL) e lacto-N-neotetraose (LNnT).

[0075] Em outra modalidade específica, a composição nutricional ou leite de crescimento da presente invenção compreende uma mistura de oligossacarídeos que consiste em 2"'-fucosil-lactose (2-FL) e lacto-N- neotetraose (LNnT). Em outras palavras, a composição nutricional ou leite de crescimento da invenção compreende apenas 2"-fucosil-lactose (2-FL) como oligossacarídeo fucosilado e apenas lacto-N-neotetraose (LNnT) como oligossacarídeo N-acetilado.

[0076] Em uma modalidade particularmente vantajosa da presente invenção, o(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) e o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está(ão) presente(s) na composição nutricional ou no leite de crescimento em algumas quantidades específicas. O termo "quanti- dade" refere-se à quantidade total de cada um desses dois componentes na composição nutricional ou no leite de crescimento, exceto onde espe- cificado em contrário. Portanto, não se refere a uma quantidade individu- al, exceto quando há um único tipo desses componentes (neste caso, tanto o total como as quantidades individuais são iguais). A título de exemplo ilustrativo, se houver apenas um (ou seja, apenas um tipo de) oligossacarídeo fucosilado na composição (por exemplo, 2FL), sua quan- tidade individual (e, portanto, a quantidade total de oligossacarídeos fu- cosilados) estará na faixa 0,75 a 1,65 g/L. Se houver vários (ou seja, vá- rios tipos de) oligossacarídeos fucosilados, sua quantidade individual se- rá menor (por exemplo, se houver 2 tipos diferentes de oligossacarídeo fucosilado, por exemplo, 2FL + 3FL, pode haver, por exemplo, cada um em uma quantidade individual de 0,5 g/L), mas a quantidade total de oli- gossacarídeos fucosilados estará na faixa 0,75 a 1,65 g/L.

[0077] O(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) pode(m) estar na com- posição nutricional ou no leite de crescimento de acordo com a presente invenção em uma quantidade total de 0,75 a 1,685 g/L da composição. Em algumas modalidades, o(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) pode(m) ser em uma quantidade total de 0,005 a 5 g/L da composição, como 0,01 a 3 g/L ou 0,02 a 2 g/L ou 0,1 a 2,5 g/L ou 0,15 a 2 g/L ou 0,25 a 1,9 ou g/L da composição. Em uma modalidade específica, o(s) oligossacaríi- deo(s) fucosilado(s) está(ão) em uma quantidade total de 1 g/L da com- posição. Em uma outra modalidade específica, o(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) está(ão) em uma quantidade total de 0,26 g/L da composi- ção.

[0078] O(s) oligossacarídeo(s) fucosilados(s) pode(m) estar pre- sente(s) na composição nutricional ou no leite de crescimento em uma quantidade total de 0,004 a 3,8 g/100 g da composição com ba- se no peso seco. O(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) pode(m) estar em uma quantidade total de 0,008 a 2,3 g/100 g da composição, co- mo 0,015 a 1,5 g/100 g, ou 0,08 a 1,9 g/100 g ou 0,12 a 1,5 g/100 g ou 0,15 a 1,5 g/100 g ou 0,19 a 1,5 g/100 g da composição. Em uma modalidade específica, o(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) está(ão) em uma quantidade total de 0,78 9g/100 g da composição. Em uma outra modalidade específica, o(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) es- tá(ão) em uma quantidade total de 0,2 g/100 g da composição.

[0079] O(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) pode(m) estar pre- sente(s) na composição nutricional ou no leite de crescimento de acor- do com a presente invenção em uma quantidade total de 0,1 a 3 g/L da composição. Em algumas modalidades, o(s) oligossacarídeo(s) N- acetilado(s) pode(m) estar em uma quantidade total de 0,01 a 2,5 g/L da composição, como 0,05 a 1,5 g/L ou 0,05 a 1 g/L ou 0,05 a 0,8 g/L ou 0,08 a 0,8 g/L ou 0,09 a 0,8 g/L da composição. Em uma modalida- de específica, o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está(ão) em uma quantidade total de 0,5 g/L da composição. Em outra modalidade es- pecífica, o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está(ão) em uma quan- tidade total de 0,13 g/L da composição.

[0080] O(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) pode(m) estar pre- sente(s) na composição nutricional ou no leite de crescimento em uma quantidade total de 0,008 a 2,3 g/100 g de composição com ba- se no peso seco. O(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) pode(m) es- tar em uma quantidade total de 0,008 a 1,9 g/100 g de composição, como 0,04 a 1,2 g/100 g ou 0,04 a 0,8 g/100 g ou 0,04 a 0,6 9g/100 g ou 0,06 a 0,6 g/100 g ou 0,07 a 0,6 g/100 g. Em uma modalidade es- pecífica, o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está(ão) em uma quantidade total de 0,38 g/100 g da composição. Em uma outra mo- dalidade específica, o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está(ão)

em uma quantidade total de 0,1 g/100 g da composição.

[0081] Portanto, em uma modalidade da presente invenção, a com- posição nutricional ou o leite de crescimento compreendem pelo menos um oligossacarídeo fucosilado e pelo menos um oligossacarídeo N- acetilado, em que: - O(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,005 a 5 g/L da composição e/ou em uma quan- tidade total de 0,004 a 3,8 g/100 g de composição com base no peso seco; e/ou - O(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,1 a 2,5 g/L da composição e/ou em uma quanti- dade total de 0,08 a 1,9 g/100 g de composição com base no peso se- co.

[0082] Em uma outra modalidade específica, a composição nutricio- nal ou o leite de crescimento da presente invenção compreendem pelo menos um oligossacarídeo fucosilado e pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado, em que: - O(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,005 a 5 g/L da composição e/ou em uma quan- tidade total de 0,004 a 3,8 g/100 g de composição com base no peso seco; e/ou - o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,05 a 1,5 g/L da composição e/ou em uma quan- tidade total de 0,04 a 1,2 g/100 g de composição com base no peso seco.

[0083] Em uma outra modalidade específica, a composição nutricio- nal ou o leite de crescimento da presente invenção compreendem pelo menos um oligossacarídeo fucosilado e pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado, em que: - O(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,02 a 2 g/L da composição e/ou em uma quanti- dade total de 0,015 a 1,5 g/100 g de composição com base no peso seco; e/ou - O(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,5 a 1 g/L da composição e/ou em uma quanti- dade total de 0,4 a 0,8 g/100 g de composição com base no peso se- co.

[0084] Em uma outra modalidade específica, a composição nutricio- nal ou o leite de crescimento da presente invenção compreendem pelo menos um oligossacarídeo fucosilado e pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado, em que: - O(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,1 a 2,5 g/L da composição e/ou em uma quanti- dade total de 0,08 a 1,9 g/100 g de composição com base no peso seco; e/ou - o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,5 a 0,8 g/L da composição e/ou em uma quanti- dade total de 0,4 a 0,6 g/100 g de composição com base no peso se- co.

[0085] Em uma modalidade específica, a composição nutricional ou o leite de crescimento de acordo com a invenção compreendem pelo menos um oligossacarídeo fucosilado e pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado, em que: - O(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) está/estão em uma quantidade total de 1 g/L da composição e/ou em uma quantidade total de 0,77 g/100 g de composição com base no peso seco; e/ou - o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,5 g/L da composição e/ou em uma quantidade total de 0,38 g/100 g da composição com base no peso seco.

[0086] Em uma outra modalidade específica, a composição nutricio-

nal ou o leite de crescimento de acordo com a invenção compreendem pelo menos um oligossacarídeo fucosilado e pelo menos um oligossaca- rídeo N-acetilado, em que: - o(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,26 g/L da composição e/ou em uma quantidade total de 0,2 g/100 g de composição com base no peso seco; e/ou - O(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,13 g/L da composição e/ou em uma quantidade total de 0,1 g/100 g da composição com base no peso seco.

[0087] O(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) e o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) compreendidos na composição nutricional ou no leite de crescimento de acordo com a invenção estão tipicamente presentes em uma razão de oligossacarídeo(s) N-acetilado(s):oligossacarídeo(s) fucosi- lado(s) de 1:20 a 2:1, de preferência, de 1:15 a 1:1, com a máxima prefe- rência, de 1:10 a 1:2. Em uma modalidade particularmente vantajosa, essa razão é 1:2 ou cerca de 1:2.

[0088] Em uma modalidade específica, o oligossacarídeo fucosila- do é fornecido na composição nutricional ou leite de crescimento da presente invenção em uma quantidade que o consumo normal da composição nutricional ou leite de crescimento forneceria ao bebê ou à criança pequena, respectivamente a criança, consumindo uma dose diária total de 0,003 a 6,5 g, de preferência 0,006 a 3,9 g, por exemplo 0,012 a 2,6 g por dia.

[0089] Para bebês prematuros, com peso baixo no nascimento e bebês pequenos para a idade gestacional, a dose diária de oligossaca- rídeos fucosilados é de preferência de 0,05 a 1 g/kg de peso corporal por dia, de preferência 0,06 a 0,9 g ou 0,07 a 0,8 g ou 0,08 a 0,7 g ou 0,09 a 0,6 g ou 0,1 a 0,5g ou 0,2 a 0,4 g/Kkg, com a máxima preferência 0,34 g por kg de peso corporal e por dia.

[0090] Em uma modalidade específica, o oligossacarídeo N-

acetilado é fornecido na composição nutricional ou leite de crescimento da presente invenção em uma quantidade que o consumo normal da composição nutricional ou leite de crescimento forneceria ao bebê ou à criança pequena, respectivamente a criança, consumindo uma dose diá- ria total de 0,003 a 3,9 g, de preferência, 0,006 a 3,25 g ou 0,03 a 1,959 ou 0,03 a 1,3 g ou 0,03 a 1 g, por exemplo, 0,05 a 1 g por dia.

[0091] Para bebês prematuros, com peso baixo no nascimento e bebês pequenos para a idade gestacional, a dose diária é de preferên- cia de 0,005 a 0,1 g de peso corporal por dia, de preferência 0,006 a 0,09 g ou 0,007 a 0,08 g ou 0,008 a 0,07 g ou 0,009 a 0,06 g ou 0,01 a 0,05 g ou 0,02 a 0,04 g, com a máxima preferência 0,034 g por kg de peso corporal e por dia.

[0092] A composição nutricional ou leite de crescimento de acordo com a presente invenção podem compreender também pelo menos um outro oligossacarídeo (isto é, além do(s) oligossacarídeo(s) fucosila- do(s) e oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) necessariamente presentes na composição) e/ou pelo menos uma ou mais fibras e/ou pelo menos um precursor(es) do mesmo. O outro oligossacarídeo e/ou fibra e/ou pre- cursor do mesmo pode ser selecionado da lista que compreende galac- to-oligossacarídeos (GOS), fruto-oligossacarídeos (FOS), inulina, xilo- oligossacarídeos (XKOS), polidextrose, oligossacarídeos sialilados, ácido Siálico, fucose e qualquer combinação dos mesmos. Eles podem estar em uma quantidade entre O e 10%, em peso, da composição. Em uma modalidade específica, a composição nutricional ou leite de crescimento também pode conter pelo menos um oligossacarídeo de leite bovino.

[0093] Produtos comerciais adequados que podem ser usados em adição aos oligossacarídeos compreendidos na mistura de oligossaca- rídeos para preparar as composições nutricionais ou leite de cresci- mento de acordo com a invenção incluem combinações de FOS com inulina, como o produto comercializado por BENEO sob a marca regis-

trada Orafti, ou polidextrose comercializada pela Tate & Lyle sob a marca registrada STA-LITEO.

[0094] Em uma modalidade específica, a composição nutricional ou leite de crescimento de acordo com a invenção podem compreen- der oligossacarídeo(s) sialilado(s). Pode haver um ou vários oligossa- carídeos sialilados. Os oligossacarídeo(s) sialilado(s) pode(m) ser selecionado(s) do grupo que compreende 3'-sialil-lactose (3-SL), 6'- sialil-lactose (6-SL) e qualquer combinação dos mesmos. Em algu- mas modalidades da invenção, a composição compreende 3-SL e 6- SL. Em algumas modalidades específicas, a razão entre 3'-sialil- lactose (3-SL) e 6'-sialil-lactose (6-SL) pode ficar na faixa entre 5:1 e 1:10, ou de 3:1 e 1:1, ou de 1:1 a 1:10. Em algumas modalidades es- pecíficas, o oligossacarídeo sialilado da composição é 6'-sialil-lactose (6-SL).

[0095] O(s) oligossacarídeo(s) sialilado(s) podem ser isolados por tecnologia cromatográfica ou de filtração, a partir de uma fonte natural como os leites animais. Alternativamente, elas podem ser produzidas por meios biotecnológicos usando sialiltransferases ou sialidases específicas, neuraminidases, por uma tecnologia de fermentação à base de enzimas (enzimas recombinantes ou naturais), por síntese química ou por uma tecnologia de fermentação microbiana. Neste último caso, os micróbios podem expressar suas enzimas e seus substratos naturais ou podem ser projetados para produzir os respectivos substratos e enzimas. Podem ser usadas culturas microbianas puras ou mistas. A formação de sialil- oligossacarídeos pode ser iniciada por substratos aceptores começando a partir de qualquer grau de polimerização (DP, "Degree of Polymerisa- tion"), de DP = 1 em diante. Alternativamente, as siali-lactoses podem ser produzidas por síntese química a partir de lactose e ácido N- acetilneuramínico (ácido siálico). As sialil-lactoses estão também dispo- níveis, por exemplo, junto à Kyowa Hakko Kogyo, do Japão.

[0096] Em uma outra modalidade preferencial da invenção, a composição nutricional ou leite de crescimento pode compreender de 0,005- a 5 g/L de oligossacarídeos sialilados, ou 0,008 a 2,5 g/L, ou 0,01 a 1 g/L, ou 0,02 a 0,7 g/L, por exemplo, 0,03 a 0,5 g/L.

[0097] A composição nutricional ou leite de crescimento de acordo com a invenção pode conter 0,004 a 3,8 g de oligossacarídeos sialila- dos por 100 g de composição com base no peso seco, por exemplo 0,006 a 1,9 g ou 0,008 a 0,8 g ou 0,015 a 0,5 g, por exemplo 0,023 a 0,4 de oligossacarídeos sialilados por 100 g de composição com base No peso seco.

[0098] Em algumas modalidades específicas da presente inven- ção, a composição nutricional ou leite de crescimento compreende oligossacarídeo(s) sialilado(s) em uma quantidade abaixo de 0,1 9/100 g de composição com base no peso seco.

[0099] Em uma modalidade específica, o oligossacarídeo sialilado é fornecido na composição nutricional ou leite de crescimento da presente invenção em uma quantidade que o consumo normal da composição nutricional ou leite de crescimento forneceria ao bebê ou à criança pe- quena, respectivamente a criança, consumindo uma dose diária total de 0,003 a 6,5 g de, de preferência 0,005 a 3,3 g ou 0,006 a 1,3 g ou 0,01 a 0,9 g de, por exemplo 0,018 a 0,65 g por dia.

[00100] Em algumas modalidades específicas da presente invenção, a composição nutricional ou leite de crescimento não contém oligossaca- rídeo(s) sialilado(s).

[00101] A composição nutricional ou leite de crescimento de acor- do com a presente invenção pode também compreender, opcional- mente, pelo menos um precursor de oligossacarídeo. Pode haver um ou vários precursores do oligossacarídeo. Por exemplo, o precursor de oligossacarídeo do leite humano é ácido siálico, fucose ou uma mistura dos mesmos. Em modalidades específicas, a composição compreende ácido siálico.

[00102] Em exemplos específicos, a composição nutricional ou leite de crescimento compreende de O a 3 g/L de precursor(es) de oligos- sacarídeo, ou de O a 2 g/L, ou de O a 1 g/L, ou de O a 0,7 g/L, ou de O a 0,5 g/L, ou de O g/L a 0,3 g/L, ou de O a 0,2 g/L de precursores de oligossacarídeo. A composição de acordo com a invenção pode conter de O a 2,1 g de precursor(es) de oligossacarídeo por 100 g de compo- sição com base no peso seco, por exemplo, de O a 1,5 g, ou de 0 a 0,8 g ou de O a 0,15 g de precursor(es) de oligossacarídeo por 100 g de composição com base no peso seco.

[00103] A composição nutricional ou leite de crescimento da pre- sente invenção pode compreender adicionalmente pelo menos um probiótico (ou cepa probiótica), como uma cepa bacteriana probiótica.

[00104] Os microrganismos probióticos mais comumente usados são principalmente bactérias e leveduras dos seguintes gêneros: Lac- tobacillus spp., Streptococcus spp., Enterococeus spp., Bifidobacte- rium spp. e Saccharomyces Spp.

[00105] Em algumas modalidades específicas, o probiótico é uma ce- pa bacteriana probiótica. Em algumas modalidades específicas, é parti- cularmente Bifidobacteria e/ou Lactobacilli.

[00106] Cepas bacterianas probióticas adequadas incluem Lactobaci- llus rhamnosus ATCC 53103, disponível junto à Valio Oy, da Finlândia, sob a marca registrada LGG; Lactobacillus rhamnosus CGMCC 1.3724; Lactobacillus paracasei CNCM 1-2116; Lactobacillus johnsonii CNCM |- 1225; Streptococcus salivarius DSM 13084, vendidas pela BLIS Techno- logies Limited, da Nova Zelândia, sob a designação KI2; Bifidobacterium lactis CNOCM 1-3446, vendido, entre outras coisas, pela empresa Christi- an Hansen, da Dinamarca, sob a marca registrada Bb 12; Bifidobacte- rium longum ATCC BAA-999, vendida pela Morinaga Milk Industry Co. Ltd., do Japão, sob a marca registrada BB536; Bifidobacterium breve,

vendida pela Danisco, sob a marca registrada Bb-03; Bifidobacterium breve, vendida pela Morinaga, sob a marca registrada M-16V; Bifidobac- terium infantis, vendida pela Procter & Gamble Co., sob a marca regis- trada Bifantis; e Bifidobacterium breve, vendida pelo Institut Rosell (Lal- lemand), sob a marca registrada ROO70.

[00107] A composição nutricional de acordo com a invenção pode conter de 10e3 a 10e12 ufc de cepas probióticas, com mais preferên- cia, entre 10e7 e 10e12 ufc, como entre 10e8 e 10e10 ufc de cepas probióticas por grama de composição com base no peso seco.

[00108] Em uma modalidade, os probióticos são viáveis. Em uma ou- tra modalidade, os probióticos são não replicantes ou inativados. Pode haver probióticos viáveis e probióticos inativados em algumas outras mo- dalidades. Componentes probióticos e metabólitos também podem ser adicionados.

[00109] A composição nutricional de acordo com a invenção pode ser, por exemplo, uma fórmula para bebês, uma fórmula de partida pa- ra bebês, uma fórmula de transição ou de seguimento, um leite de crescimento, um alimento para bebês, uma composição de cereais pa- ra bebês, um fortificante, como um fortificante do leite humano, ou um suplemento. Em algumas modalidades específicas, a composição da invenção é uma fórmula para bebês, um fortificante ou um suplemento que pode ser destinado aos primeiros 4 ou 6 meses de idade. Em uma modalidade preferencial, a composição nutricional da presente inven- ção é uma fórmula para bebês.

[00110] Em algumas outras modalidades, a composição nutricional da presente invenção é um fortificante. O fortificante pode ser um forti- ficante de leite materno (por exemplo, um fortificante do leite humano) ou um fortificante da fórmula, como um fortificante da fórmula para be- bês ou um fortificante da fórmula de transição/seguimento.

[00111] “Quando a composição nutricional é um suplemento, ela pode ser fornecida sob a forma de doses unitárias. Em tais casos, é particu- larmente útil definir a quantidade de oligossacarídeos N-acetilados e op- cionalmente outros oligossacarídeos em termos ou dose diária para ser administrada ao bebê ou criança pequena, como descrito acima.

[00112] A composição nutricional da presente invenção pode estar na forma sólida (por exemplo, em pó), líquida ou gelatinosa.

[00113] Em uma modalidade específica, a composição nutricional é um suplemento na forma de pó e fornecido em um saquinho, ou sob a forma de um xarope. Quando o suplemento está sob a forma de pó, ele pode compreender um veículo. É preferencial, entretanto, que o suplemento seja desprovido de um veículo. Quando o suple- mento está sob a forma de um xarope, os HMOs são de preferência dissolvidos ou suspensos em água acidificada com citrato.

[00114] A composição nutricional ou leite de crescimento de acordo com a invenção geralmente contém uma fonte de proteína. A proteína pode estar em uma quantidade de 1,6 a 3 g por 100 kcal. Em algumas modalidades, particularmente quando a composição é destinada a be- bês prematuros, a quantidade de proteína pode estar entre 24 ge 4 9/100 kcal ou mais que 3,6 9g/100 kcal. Em algumas outras modalida- des, a quantidade de proteína pode estar abaixo de 2,0 g por 100 kcal, por exemplo entre 1,8 a 2 9g/100 kcal, ou em uma quantidade abaixo de 1,8 g por 100 kcal.

[00115] Acredita-se que o tipo de proteína não seja de importância essencial para a presente invenção desde que os requisitos mínimos pa- ra o conteúdo de aminoácido essencial sejam atendidos e o crescimento satisfatório seja garantido. Dessa forma, podem ser usadas fontes de proteína à base de soro de leite, caseína e misturas dos mesmos, além de fontes de proteína à base de soja. No que se refere a proteínas de soro de leite, a fonte de proteína pode ser à base de soro de leite ácido ou soro de leite doce, ou suas misturas, e pode incluir alfa-lactalbumina e beta-lactoglobulina em quaisquer proporções desejadas.

[00116] Em algumas modalidades vantajosas, a fonte de proteína é predominantemente soro de leite (isto é, mais que 50% das proteí- nas provêm de proteínas de soro de leite, como 60% ou 70%).

[00117] As proteínas podem ser intactas ou hidrolisadas, ou podem ser uma mistura de proteínas intactas ou hidrolisadas. Com o termo "in- tacta" queremos dizer que a parte principal das proteínas é intacta, isto é, a estrutura molecular não é alterada; por exemplo, pelo menos 80% das proteínas não são alteradas, como pelo menos 85% das proteínas não são alteradas, de preferência, pelo menos 90% das proteínas não são alteradas, com ainda mais preferência, pelo menos 95% das proteínas não são alteradas, como pelo menos 98% das proteínas não são altera- das. Em uma modalidade específica, 100% das proteínas não são alte- radas.

[00118] O termo "hidrolisado(a)" significa, no contexto da presente invenção, uma proteína que foi hidrolisada ou decomposta em seus aminoácidos componentes. As proteínas podem ser total ou parcialmen- te hidrolisadas. Pode ser desejável suplementar com proteínas parcial- mente hidrolisadas (grau de hidrólise entre 2% e 20%), por exemplo, para lactentes ou crianças de pouca idade que, como se acredita, estão Sob risco para o desenvolvimento de alergia ao leite de vaca. Se houver necessidade de proteínas hidrolisadas, o processo de hidrólise pode ser executado conforme desejado e conforme é conhecido na técnica. Por exemplo, hidrolisados de proteína de soro de leite podem ser prepara- dos por hidrólise enzimática da fração de soro de leite em uma ou mais etapas. Descobriu-se que, no caso da fração de soro de leite usada como o material de partida ser substancialmente isenta de lactose, a proteína sofre menor bloqueio de lisina durante o processo de hidrólise. Isso possibilita que a extensão do bloqueio de lisina seja reduzida de cerca de 15%, em peso, do total de lisina para menos de cerca de 10%,

em peso, de lisina; por exemplo, cerca de 7%, em peso de lisina, o que melhora muito a qualidade nutricional da fonte de proteína.

[00119] Em uma modalidade da invenção, pelo menos 70% das proteínas são hidrolisadas, de preferência, pelo menos 80% das pro- teínas são hidrolisadas, como pelo menos 85% das proteínas são hi- drolisadas, com mais preferência, pelo menos 90% das proteínas são hidrolisadas, como pelo menos 95% das proteínas são hidrolisadas, particularmente pelo menos 98% das proteínas são hidrolisadas. Em uma modalidade específica, 100% das proteínas hidrolisadas.

[00120] Em uma modalidade específica, as proteínas da composi- ção nutricional são hidrolisadas, totalmente hidrolisadas ou parcial- mente hidrolisadas. O grau de hidrólise (DH) da proteína pode ficar entre 8 e 40, ou entre 20 e 60, ou entre 20 e 80, ou mais que 10, 20, 40, 60, 80 ou 90.

[00121] O componente de proteína pode ser alternativamente substituído por uma mistura ou aminoácido sintético, por exemplo, para bebês prematuros ou com peso baixo no nascimento.

[00122] Em uma modalidade particular, a composição nutricional ou leite de crescimento de acordo com a invenção é uma composição hi- poalergênica. Em uma outra modalidade específica, a composição de acordo com a invenção é uma composição nutricional hipoalergênica ou leite de crescimento.

[00123] A composição nutricional ou leite de crescimento de acor- do com a presente invenção geralmente contém uma fonte de carboi- dratos. Isso é particularmente preferencial quando a composição nu- tricional da invenção é uma fórmula para bebês. Nesse caso, qual- quer fonte de carboidrato encontrada convencionalmente nas fórmu- las de alimentação infantil, como lactose, sacarose, maltodextrina, amido e misturas dos mesmos, podem ser usadas, embora uma das fontes preferenciais de carboidrato seja a lactose.

[00124] A composição nutricional ou leite de crescimento de acordo com a presente invenção, geralmente, contém uma fonte de lipídios. Isso é particularmente relevante se a composição nutricional da inven- ção for uma fórmula para bebês. Nesse caso, a fonte de lipídio pode ser qualquer lipídio ou gordura que seja adequado(a) para uso nas fórmulas para bebês. Algumas fontes de gordura adequadas incluem óleo de palma, óleo de triglicerídeo estruturado, óleo de girassol com alto teor oleico e óleo de açafrão com alto teor oleico, óleo de triglicerídeo de ca- deia média. Ácidos graxos essenciais, como ácido linoleico e ácido a- linolênico, podem também ser adicionados, além de quantidades pe- quenas de óleos contendo altas quantidades de ácido araquidônico e ácido docosaexaenoico pré-formados, como óleos de peixe ou óleos microbianos. A fonte de gordura pode ter uma razão entre ácidos gra- xos n-6 e ácidos graxos n-3 de cerca de 5:1 a cerca de 15:1; por exem- plo, de cerca de 8:1 a cerca de 10:1.

[00125] A composição nutricional ou leite de crescimento da inven- ção pode também conter todas as vitaminas e os minerais considera- dos essenciais na dieta diária e em quantidades nutricionalmente sig- nificativas. As necessidades mínimas de certas vitaminas e minerais foram estabelecidas. Exemplos de minerais, vitaminas e outros micro- nutrientes opcionalmente presentes na composição da invenção inclu- em vitamina A, vitamina B1, vitamina B2, vitamina B6, vitamina B12, vitamina E, vitamina K, vitamina C, vitamina D, ácido fólico, inositol, niacina, biotina, ácido pantotênico, colina, cálcio, fósforo, iodo, ferro, magnésio, cobre, zinco, manganês, cloro, potássio, sódio, selênio, cromo, molibdênio, taurina e L-carnitina. Os minerais são normalmente adicionados na forma de sal. A presença e as quantidades de minerais específicos e de outras vitaminas específicas variarão dependendo da população intencionada.

[00126] Se necessário, a composição nutricional ou leite de cres-

cimento da invenção pode conter emulsificantes e estabilizantes, co- mo soja, lecitina, ésteres de ácidos cítricos de mono e diglicerídeos, e similares.

[00127] A composição nutricional ou leite de crescimento da invenção pode também conter outras substâncias que podem ter um efeito benéfi- co, como lactoferrina, nucleotídeos, nucleosídeos e similares.

[00128] A composição nutricional ou leite de crescimento da invenção pode conter, também, carotenoide(s). Em algumas modalidades especí- ficas da invenção, a composição nutricional da invenção não compreen- de qualquer carotenoide.

[00129] A composição nutricional ou leite de crescimento de acor- do com a invenção pode ser preparada de qualquer maneira adequa- da. Uma composição será agora descrita a título de exemplo.

[00130] Por exemplo, uma fórmula, como uma fórmula para bebês, pode ser preparada por misturação da fonte de proteína, fonte de car- boidrato e fonte de gordura em proporções adequadas. Se usados, os emulsificantes podem ser incluídos nesse ponto. As vitaminas e os mi- nerais podem ser adicionados nesse ponto, mas eles são geralmente adicionados posteriormente para evitar degradação térmica. Quaisquer vitaminas e emulsificantes lipofílicos, e similares, podem ser dissolvi- dos na fonte de gordura antes da mistura. Água, de preferência, água que foi submetida à osmose reversa, pode, então, ser misturada para formar uma mistura líquida. A temperatura da água fica conveniente- mente na faixa entre cerca de 50ºC e cerca de 80ºC para ajudar a dis- persar os ingredientes. Liquidificadores comercialmente disponíveis podem ser usados para formar a mistura líquida.

[00131] O(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) e o(s) oligossacaríi- deo(s) N-acetilado(s) podem ser adicionados neste estágio, especi- almente se o produto final precisar estar sob uma forma líquida. Se o produto final for um pó, eles podem ser igualmente adicionados nes-

se estágio, se desejado.

[00132] A mistura líquida é, então, homogeneizada, por exemplo, em dois estágios.

[00133] A mistura líquida pode, então, ser termicamente tratada para reduzir as cargas bacterianas, por aquecimento rápido da mistura líquida a uma temperatura na faixa entre cerca de 80 ºC e cerca e 150 ºC duran- te cerca de 5 segundos a cerca de 5 minutos, por exemplo. Isso pode ser realizado por meio de injeção de vapor, autoclave ou trocador de calor, por exemplo, um trocador de calor de placas.

[00134] Então, a mistura líquida pode ser resfriada até entre cerca de 60 ºC e cerca de 85 ºC, por exemplo, por resfriamento instantâneo. A mistura líquida pode, então, ser novamente homogeneizada, por exemplo, em dois estágios entre cerca de 10 MPa e cerca de 30 MPa no primeiro estágio, e entre cerca de 2 MPa e cerca de 10 MPa no se- gundo estágio. A mistura homogeneizada pode, então, ser resfriada adicionalmente para adicionar quaisquer componentes sensíveis ao calor, como vitaminas e minerais. O pH e o teor de sólidos da mistura homogeneizada são convenientemente ajustados nesse ponto.

[00135] Seo produto final for um pó, a mistura homogeneizada é transferida para um aparelho de secagem adequado, como um secador por atomização ou secador por congelamento, e convertida em pó. O pó dever ter um teor de umidade menor que cerca 5% em peso. O(s) oligos- sacarídeo(s) fucosilado(s) e o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) tam- bém pode(m) ser ou é(são) alternativamente adicionado(s) neste estágio por misturação a seco ou por misturação dos mesmos em uma forma de xarope de cristais, junto com a(s) cepa(s) probiótica(s) (se usadas), e a mistura ser seca por atomização ou por liofilização.

[00136] Se uma composição líquida for preferencial, a mistura ho- mogeneizada pode ser esterilizada e, então, preenchida asseptica- mente em recipientes adequados, ou ela pode ser primeiro preenchida nos recipientes e, então, submetida a retorta.

[00137] Em uma outra modalidade, a composição da invenção pode ser um suplemento. O suplemento pode estar sob a forma de compri- midos, cápsulas, pastilhas ou um líquido, por exemplo. O suplemento pode conter, ainda, hidrocoloides protetores (como gomas, proteínas, amidos modificados), ligantes, agentes formadores de filme, agen- tes/materiais de encapsulação, materiais da parede/carcaça, compos- tos de matriz, revestimentos, emulsificantes, agentes ativos de super- fície, agentes solubilizantes (óleos, gorduras, ceras, lecitinas, etc.), ad- sorventes, carreadores, cargas, cocompostos, agentes dispersantes, agentes de umedecimento, auxílios de processamento (solventes), agentes de fluxo, agentes mascaradores de sabor, agentes de peso, agentes gelificantes e agentes formadores de gel. O suplemento pode conter também aditivos farmacêuticos convencionais e compostos au- xiliares, excipientes e diluentes, incluindo, mas não se limitando a, água, gelatina de qualquer origem, gomas vegetais, lignina-sulfonato, talco, açúcares, amido, goma arábica, óleos vegetais, poli(glicois alqui- lênicos), agentes flavorizantes, conservantes, estabilizantes, agentes emulsificantes, agentes tamponantes, lubrificantes, corantes, agentes umectantes, cargas e similares.

[00138] Além disso, o suplemento pode conter um material carrea- dor orgânico ou inorgânico adequado para administração oral ou pa- renteral, além de vitaminas, elementos com traços minerais e outros nutrientes, de acordo com as recomendações de corpos governa- mentais, como o USRDA.

[00139] A composição nutricional de acordo com a invenção é para uso em bebês ou crianças pequenas. Os bebês ou crianças peque- nas podem ser nascidos a termo ou prematuros. Em uma modalidade específica, a composição nutricional da invenção é para uso em be- bês ou crianças pequenas que nasceram prematuros, que têm um baixo peso ao nascer e/ou nascidos pequenos para a idade gestacio- nal (SGA - small for gestational age). Em uma modalidade específica, a composição nutricional da invenção é para uso em bebês prematu- ros, bebês com baixo peso ao nascer e/ou bebês nascidos pequenos para a idade gestacional (SGA).

[00140] A composição nutricional da presente invenção pode tam- bém ser usada em um bebê ou uma criança pequena que nasceu por cesariana ou que nasceu de parto vaginal.

[00141] Em algumas modalidades, a composição de acordo com a invenção pode ser para uso antes e/ou durante o período de desmame.

[00142] A composição nutricional pode ser administrada (ou fornecida ou alimentada) em qualquer idade durante um período que depende das necessidades.

[00143] A composição nutricional pode ser, por exemplo, dada ime- diatamente após o nascimento dos bebês. A composição da invenção pode também ser fornecida durante a primeira semana de vida do be- bê, ou durante as 2 primeiras semanas de vida, ou durante as 3 pri- meiras semanas de vida, ou durante o primeiro mês de vida, ou duran- te os 2 primeiros meses de vida, ou durante os 3 primeiros meses de vida, ou durante os 4 primeiros meses de vida, ou durante os 6 primei- ros meses de vida, ou durante os 8 primeiros meses de vida, ou duran- te os 10 primeiros meses de vida, ou durante o primeiro ano de vida, ou durante os dois primeiros anos de vida, ou mesmo mais. Em algu- mas modalidades particularmente vantajosas da invenção, a composi- ção nutricional é dada (ou administrada) a um bebê nos primeiros 4, 6 ou 12 meses do nascimento do dito bebê. Em algumas modalidades, a composição da invenção é fornecida poucos dias (1, 2, 3, 10, 15,

20...), ou poucas semanas (1, 2, 3, 4, 5, 6...), ou poucos meses (1, 2,

3...), após o nascimento. Isso pode ser especialmente o caso quando o bebê é prematuro, mas não necessariamente.

[00144] Em uma modalidade, a composição da invenção é forneci- da ao bebê ou à criança como uma composição suplementar ao leite ou colostro da mãe. Em algumas modalidades, o bebê ou a criança recebe o leite materno durante pelo menos as primeiras 2 semanas, o primeiro mês ou os primeiros 2, 4 ou 6 meses. Em uma modalidade, a composição nutricional da invenção é fornecida ao bebê ou à criança depois do período de nutrição da mãe ou é fornecida junto com tal pe- ríodo de nutrição com o leite materno. Em uma outra modalidade, a composição é dada ao bebê ou criança pequena como a única ou principal composição nutricional durante pelo menos um período de tempo, por exemplo, depois do 1º, 2º ou 4º mês, durante pelo menos 1, 2,4 ou 6 meses.

[00145] Em uma modalidade, a composição nutricional da invenção é uma composição nutricional completa (que satisfaz a todas ou à maioria das necessidades nutricionais do indivíduo). Em uma outra modalidade, a composição de nutrição é um suplemento ou um fortifi- cante destinado, por exemplo, a suplementar o leite humano ou a su- plementar uma fórmula para bebês ou uma fórmula de transi- ção/acompanhamento. Exemplos

[00146] Os exemplos a seguir ilustram algumas modalidades es- pecíficas da composição para uso de acordo com a presente inven- ção. Os exemplos são fornecidos somente para fins de Ilustração e não devem ser interpretados como limitações à presente invenção. Exemplo 1

[00147] Um exemplo da composição de uma composição nutricional (por exemplo, fórmula para bebês) de acordo com a presente invenção é fornecido na Tabela 1 a seguir. Essa composição é fornecida apenas a título de ilustração.

CET E E [Se (no) Viamao) | 8 [| & | Ácido fólico (ua) os 1 Biotina (19) Fe (mo)

[Nutrientes — Tportookeai | porto | ema [o [o 2n (mo) Oligossacarídeos 2FL (9) | oB | qa Tabela 1: um exemplo da composição de uma composição nutricional (por exemplo, uma fórmula para bebês) de acordo com a presente inven- ção Exemplo 2 Descrição do estudo

[00148] Três grupos de ratas Sprague-Dawley fecundadas foram adquiridos junto aos laboratórios Charles River. Um grupo foi submeti- do a uma restrição alimentar de 60% durante os últimos 10 dias de gestação e seus descendentes foram cruzados com ratos normalmen- te alimentados. Um segundo grupo de fêmeas prenhes foi normalmen- te alimentado e seus descendentes foram cruzados entre o mesmo grupo. Imediatamente após o nascimento (d=2), os filhotes de rato nascidos - indivíduos do experimento - foram designados para um den- tre os seguintes grupos: e Grupo normal (controle positivo): Crias de peso normal nas- cidas de fêmeas sem restrições e alimentadas com uma dieta normal não suplementada; e Grupo RCIU (controle negativo; (n=20) Ratos RCIU sendo alimentados com uma dieta normal após o nascimento; e Ratos RCIU + HMO (grupos de teste): Durante o expe- rimento, os filhotes foram amamentados por suas mães por 21 dias e suplementados com HMOs (2FL, LNnNT ou a mistura de 2FL e LNnT). No desmame, eles foram alimentados com uma dieta suplementada com os mesmos HMOs, ver detalhes abaixo. Havia três grupos dife- rentes: - grupo de RCIU/2FL (n=10): suplementado apenas com 2-

FL; - grupo de RCIU/LNnNT (n=10): suplementado apenas com LNnT; e - grupo de mistura de RCIU/HMOs (n=10) grupo: suplemen- tado com LNnT e 2FL em uma razão de peso de 1:2.

[00149] Todos os filhotes de rato foram alimentados a partir do nas- cimento (d=1) até 57 dias (d=57) com base no seguinte protocolo: e dia 1 ao dia 6: todos os grupos de ratos foram amamen- tados pelas fêmeas (apenas leite materno); e dia 7 a dia 21: todos os ratos foram amamentados pela mãe (apenas leite materno). Mas nos grupos de teste, 3 g/kg de peso corporal de um HMO também foram administrados por gavagem: - 3 glkg de peso corporal de 2FL, para o grupo de RCIU/2FL; - 3 g/kg de peso corporal de LNnT, para o grupo de RCIU/LNnT; - 3 g/kg de peso corporal de uma mistura de LNnNT e 2FL em uma razão de peso de 1:2, para o grupo de mistura de RCIU/HMOs; e dia 22 a dia 57: todos os ratos foram alimentados com uma dieta conforme detalhada na Tabela 2 abaixo.

[00150] Os ratos foram sacrificados no dia 57 após um período de jejum de 6 horas as amostras do intestino delgado foram coletadas. O comprimento das vilosidades foi medido em uma amostra do íleo.

[00151] Foi coletada uma amostra de 1 cm do íleo (1 em craniano do ceco) foi coletado e lavado com STF (Sigma D8537). Esta seção foi fixada e em seguida processada para análise histológica e morfo- métrica.

[00152] Duas seções consecutivas de 4 um de espessura de teci- do fixo foram coloridas manualmente com hematoxilina e eosina para determinar a altura das vilosidades. A altura das vilosidades foi captu- rada por microscopia de luz com o uso de uma objetiva de 10x, com o uso de um sistema analisador de imagem computadorizado Axion Vision (versão 4.8.2.0, da ZeissO). Dez vilosidades selecionadas ale- atoriamente foram medidas em dois segmentos diferentes para de- terminar o comprimento médio das vilosidades.

Descobertas

[00153] O comprimento das vilosidades medido em cada rato é re- presentado na Figura 1. Para cada grupo, o comprimento das vilosida- des é representado por uma linha horizontal. Como pode ser visto, os comprimentos das vilosidades médios de todos os grupos foram seme- lhantes, exceto para o grupo que recebeu a combinação de 2FL e LNnT, que tinha vilosidades significativamente mais longas no íleo. Tal aumento no comprimento das vilosidades está associado a um aumen- to da área superficial do íleo, que fornece aos filhotes de rato uma me- lhor capacidade de digestão, em particular para digerir gorduras, prote- ínas e carboidratos. Essa digestão aprimorada, em particular a diges- tão de gordura, é favorecida por uma circulação entero-hepática me- lhorada, em particular a circulação entero-hepática de sais biliares, que está associada à área superficial aumentada do intestino delgado, em particular do íleo.

[00154] Esses resultados mostram que uma mistura de 2FL e LNnT foi bem-sucedida em aumentar o comprimento das vilosidades no íleo de ratos que têm um retardo do crescimento (devido à priva- ção de alimentos das mães). As vilosidades dos filhotes de cresci- mento retardado alimentados com a dieta com 2FL e LNnT foram ainda significativamente mais longas que as vilosidades dos filhotes que não tiveram crescimento intrauterino retardado e que foram ali- mentados com uma dieta normal.

[00155] Esses resultados também mostram uma sinergia entre 2FL e LNnT, levando em consideração que nem o 2FL nem o LNnT obteve um efeito estatisticamente significativo quando usado sozinho, enquanto um efeito estatisticamente significativo é observado quando ambos são usa- dos em combinação. Exemplo 3

[00156] É preparado um suplemento para bebês prematuros, de mo-

do a fornecer a seguinte dose diária: - 0,034 g/kg do peso corporal por dia de LNNT; e - 0,34 g/kg de peso corporal por dia de 2-FL.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composição nutricional para promoção da capacidade digestiva em um bebê ou criança pequena, ou leite de crescimento compreendendo pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado e pelo menos um oligossacarídeo fucosilado, ou para promoção da capaci- dade digestiva em uma criança, caracterizada por compreender pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado e pelo menos um oligossacarí- deo fucosilado.

2. Composição nutricional, respectivamente um leite de crescimento, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que é na promoção da capacidade de digerir gordura, vitaminas |li- possolúveis, proteínas e carboidratos em um bebê ou em uma criança pequena, respectivamente em uma criança.

3. Composição nutricional, respectivamente um leite de crescimento, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pe- lo fato de que é para melhorar a circulação entero-hepática, de prefe- rência, a circulação entero-hepática de sais biliares em um bebê ou uma criança pequena, respectivamente em uma criança.

4. Composição nutricional, respectivamente um leite de crescimento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que é para promoção do desenvolvimento e/ou crescimento da área superficial do intestino delgado de um bebê ou de uma criança pequena, respectivamente de uma criança.

5. Composição nutricional, respectivamente um leite de crescimento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que é para promoção do aumento do com- primento das vilosidades no intestino delgado de um bebê ou de uma criança pequena, respectivamente de uma criança.

6. Composição nutricional, respectivamente um leite de crescimento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5,

caracterizada pelo fato de que oligossacarídeo N-acetilado é lacto-N- neotetraose (LNnNT), lacto-N-tetraose (LNT), para-lacto-N-neo- hexaose (para-LNnH), disialil-lacto-N-tetraose (DSLNT) ou qualquer combinação dos mesmos.

7. Composição nutricional ou um leite de crescimento, de acordo com a reivindicação 6, caracterizados pelo fato de que o oligos- sacarídeo N-acetilado ser lacto-N-neotetraose (LNnT).

8. Composição nutricional ou um leite de crescimento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizados pelo fato de que o oligossacarídeo fucosilado é selecionado da lista que consiste em 2'-fucosil-lactose, 3'-fucosil-lactose, difucosil-lactose, lacto-N-fucopentaose |, lacto-N-fucopentaose Il, lacto-N-fucopentaose Ill, lacto-N-fucopentaose V, lacto-N-fuco-hexaose, lacto-N-difuco- hexaose |, fucosil-lacto-N-hexaose, fucosil-lacto-N-neo-hexaose |, fu- cosil-lacto-N-neo-hexaose 11, difucosil-lacto-N-hexaose |, difucosil- lacto-N-neo-hexaose |, difucosil-lacto-N-neo-hexaose |l, fucosil-para- lacto-N-hexaose e qualquer combinação dos mesmos.

9. Composição nutricional ou um leite de crescimento, de acordo com a reivindicação 8, caracterizados pelo fato de que o oli- gossacarídeo fucosilado compreende um 2'-fucosil-epítopo.

10. Composição nutricional ou um leite de crescimento, de acordo com a reivindicação 8 ou 9, caracterizados pelo fato de que o oligossacarídeo fucosilado é 2'-fucosil-lactose (2'FL).

11. Composição nutricional ou um leite de crescimento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizados pelo fato de que compreende 2'-fucosil-lactose e lacto-N-neotetraose (LNnT), ou que compreende uma mistura de oligossacarídeos, que consiste em 2'-fucosil-lactose (2'FL) e lacto-N-neotetraose (LNnT).

12. Composição nutricional ou um leite de crescimento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizados pelo fato de que o oligossacarídeo N-acetilado e o oligossacarídeo fucosilado estão presentes em uma razão de oligossacarídeo(s) N- acetilado(s):oligossacarídeo(s) fucosilado(s) de 1:20 a 2:1, de prefe- rência, de 1:15 a 1:1, com mais preferência, de 1:10 a 1:2, com a má- xima preferência, a razão é de 1:2.

13. Composição nutricional ou um leite de crescimento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizados pelo fato de que: a. o(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,005 a 5 g/L da composição e/ou em uma quanti- dade total de 0,004 a 3,8 g/100 g de composição com base no peso seco; e/ou b. o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,1 a 2,5 g/L da composição e/ou em uma quanti- dade total de 0,08 a 1,9 g/100 g da composição com base no peso se- co.

14. Composição nutricional ou leite de crescimento, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizados por: a. o(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,02 a 2 g/L da composição e/ou em uma quanti- dade total de 0,015 a 1,5 g/100 g de composição com base no peso seco; e/ou b. o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,5 a 1 g/L da composição e/ou em uma quantidade total de 0,4 a 0,8 g/100 g da composição com base no peso seco.

15. Composição nutricional ou um leite de crescimento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizados pelo fato de que: a. o(s) oligossacarídeo(s) fucosilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,1 a 2,5 g/L da composição e/ou em uma quanti- dade total de 0,08 a 1,9 g/100 g de composição com base no peso se- co; e/ou b. o(s) oligossacarídeo(s) N-acetilado(s) está/estão em uma quantidade total de 0,5 a 0,8 g/L da composição e/ou em uma quanti- dade total de 0,4 a 0,6 g/100 g de composição com base no peso se- co.

16. Composição nutricional ou um leite de crescimento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizados pelo fato de que compreende pelo menos outro(s) oligossacarídeo(s) e/ou fi- bra(s) e/ou precursor(es) dos mesmos selecionado(s) da lista que com- preende galacto-oligossacarídeos (GOS), fruto-oligossacarídeos (FOS), xilo-oligossacarídeos (XOS), inulina, polidextrose, oligossacarídeos siali- lados, ácido siálico, fucose e qualquer combinação dos mesmos.

17. Composição nutricional ou um leite de crescimento, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizados pelo fato de que compreende ainda pelo menos um probiótico em uma quantidade de 10º a 10º? ufc/g da dita composição (peso seco).

18. Composição nutricional, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizada pelo fato de que é uma fórmula para bebês, uma fórmula de partida para bebês, uma fórmula de transição ou de seguimento para bebês, um leite de crescimento, um alimento para bebês, uma composição de cereais para bebês, um fortificante ou um suplemento.

19. Composição nutricional, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizada pelo fato de que o bebê é um bebê prematuro, um bebê que tem um peso baixo ao nascer, um bebê nascido pequeno para a idade gestacional (SGA - small for ges- tational age) e/ou um bebê ou criança pequena com crescimento re- tardado.

20. Composição nutricional, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fato de que o bebê é um bebê com RCIU.

21. Uso de pelo menos um oligossacarídeo N-acetilado e de pelo menos um oligossacarídeo fucosilado, caracterizado pelo fato de que é para preparação de uma composição nutricional para promoção da capacidade digestiva em um bebê ou criança pequena, ou um leite de crescimento compreendendo pelo menos um oligossacarídeo N- acetilado e pelo menos um oligossacarídeo fucosilado, ou para promo- ção de uma capacidade digestiva em uma criança .

22. Invenção, caracterizada por quaisquer de suas concre- tizações ou categorias de reivindicação englobadas pela matéria inici- almente descrita no pedido de patente ou em seus exemplos aqui apresentados.

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