BR112020006009A2 - métodos terapêuticos relacionados a inibidores de hsp90 - Google Patents

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Neil Beeharry
Sean LANDRETTE
Sophia Gayle
Jeff Grotzke
Marylens Hernandez
Peter R. Young
Jonathan M. Rothberg
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Al Therapeutics, Inc.
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Abstract

A descrição refere-se a métodos para o tratamento de câncer, incluindo, entre outros, cânceres hematopoéticos e pulmonares, usando o inibidor de HSP90, MPC-0767, como monoterapia e em terapia de combinação com agentes ativos adicionais, incluindo, entre outros, inibidores de Bcl-2 , inibidores de EZH2, inibidores da via Ras/Raf/MEK/ERK, inibidores de ponto de verificação, inibidores de DNMT, ATO e agentes quimioterapêuticos. A descrição também refere-se a composições e métodos de uso relacionados.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MÉTODOS TERAPÊUTICOS RELACIONADOS A INIBIDORES DE HSP90".
CAMPO DE INVENÇÃO
[001] A invenção refere-se ao uso de inibidores de HSP90 para o tratamento de câncer.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] As proteínas de choque térmico (HSPs) são uma classe de proteínas acompanhantes envolvidas em diversos processos celulares, como elevação de temperatura, estresse externo e privação de nutrientes. Seu papel básico como proteínas acompanhantes é estabilizar proteínas sob tais estresses, porém, também facilitar a duplicação correta das proteínas clientes.
[003] A HSP90 é um acompanhante molecular altamente conservado, ubiquamente expresso, que desempenha um papel importante na regulação da duplicação pós-translacional, estabilidade e função das proteínas celulares (geralmente chamadas de "proteínas clientes"), particularmente em resposta ao estresse (Whitesell e Lindquist Nature Rev. Cancer 2005 5: 761). A duplicação das proteínas clientes depende da atividade ATPase da HSP90, e os inibidores da HSP90 que se ligam ao sítio ATP podem resultar na degradação das proteínas clientes através da via ubiquitina- proteassoma.
[004] A HSP90 está envolvida de maneira proeminente no câncer devido às proteínas clientes, que incluem vários oncogenes. (Veja, por exemplo, Shrestha et al., 2016). Algumas proteínas clientes são particularmente responsivas aos inibidores da HSP90 e sofrem degradação rápida. (Biamonte et al. J. Med. Chem 2010 53, 3-17). As proteínas clientes mais sensíveis incluem HER2, EGFR do tipo selvagem e EGFR mutante, RAF-1, AKT, BRAF mutante, FLT3 e FLT3 mutante.
[005] A expressão de HSP90 é frequentemente elevada em tumores (Valbuena et al., Mod. Pathology 2005 18: 1343; Guo et al., 2017) e tem sido associada a um mau prognóstico (Pick et al., Cancer Res. 2007; Wang, J. et al., PLoS One 2013 8: e62876). Muitas células tumorais também expressam formas mutadas ou alteradas de proteínas que são conhecidas por impulsionar o crescimento do tumor, e essas proteínas são estabilizadas através da associação com HSP90 e dependentes dessa associação para a função. Essa associação leva à formação de um grande complexo de proteínas dentro das células, que aumentou a afinidade pelos inibidores da HSP90 (Goldstein et al., J. Clin.Invest. 2015 125 (12): 4559-71; Rodina et al., Nature 2016 538 : 397). Consequentemente, as células tumorais retêm níveis mais altos de inibidor de HSP90 e a administração de inibidores de HSP90 resulta em degradação potente da proteína do cliente e diminuição da proliferação e sobrevivência com atividade mais limitada nas células normais (Barrott e Haystead, FEBS J. 2013 280: 1381).
[006] Os inibidores da HSP90 foram testados em estudos clínicos pré-clínicos e precoces relacionados a vários tipos de câncer, incluindo mama, colorretal, gastrointestinal, leucemia, linfomas, melanoma, mieloma múltiplo, ovário, pancreático, próstata e renal. Pelo menos 18 inibidores da HSP90 foram investigados em ensaios clínicos, incluindo BIIB021, IPI-493, MPC-3100, Debio0932, DS-2248, HSP990, XL888, SNX5422, TAS-116, BIIB028, IPI-504, KW-2478, alvespimicina, tanespimicina, AT13387, AUY922, PU-H71 e ganetespibe. Veja as revisões de Bhat et al., J. Med. Chem 2014 57: 8718-8728; Neckers e Workman Clin. Cancer Res. 2012, 18, 64. Até o momento, nenhum desses compostos foi aprovado para uso em seres humanos e nenhum inibidor de HSP90 foi testado em uma população geneticamente definida.
[007] Evidências emergentes sugerem que a HSP90 também pode afetar a imunidade do tumor. Alguns estudos não clínicos sugeriram que doses elevadas de inibidor de HSP90 podem inibir vários componentes do sistema imunológico que podem ser importantes para a depuração do tumor (Bae et al., J. Immunol. 2007 178: 7730; Bae et al., J. Immunol 2013 190: 1360; Tukaj et al., J. Inflammation 2014 11:10). Além disso, muitas células tumorais expressam o ligante 1 de morte da proteína inibidora do ponto de verificação (PD-L1) em sua superfície, o que pode suprimir a atividade das células T citotóxicas locais. Por exemplo, a expressão de PD-L1 é encontrada nas células AML dos pacientes, aumenta com a progressão da doença e durante a recaída (Salih et al., Exp. Hematol. 2006 34: 888; Chen et al., Cancer Biol. Ther. 2008 7: 622 ; Berthon et al., Cancer Immunol. Immunother 2010 59: 1839) e está associado a pior sobrevida global (Brodska et al., Blood 2016 128: 5229). A expressão da superfície celular PD-L1 em células tumorais AML pode ser induzida por IFN-γ, que é conhecido por ser expresso no microambiente tumoral imunologicamente ativo (Berthon et al., Cancer Immunol. Immunother. 2010 59: 1839; Kronig et al., Eur J. Hematol. 2013 92: 195).
[008] Há uma necessidade contínua de tratamentos e combinações de fármacos melhorados para o tratamento do câncer, particularmente no tratamento de cânceres refratários às terapias atuais ou daqueles que recidivaram após o tratamento, como os baseados em inibidores da proteína tirosina cinase. A presente invenção trata dessa necessidade com o uso de inibidores de HSP90.
SUMARIO DA INVENÇÃO
[009] A descrição fornece composições e métodos relacionados ao uso de um inibidor de HSP90 para o tratamento de câncer em um indivíduo, preferencialmente um indivíduo humano, necessitando desse tratamento. Os métodos geralmente se relacionam ao uso de MPC-0767 no tratamento de câncer e, mais particularmente, no tratamento de um câncer cujo crescimento e/ou sobrevivência celular é caracterizado como impulsionado por ou depende das vias de sinalização da proteína cinase ativada e/ou um câncer que é refratário ou que recaiu após o tratamento com um agente terapêutico. Conforme descrito em mais detalhes infra, o MPC-0767 demonstra uma atividade anticâncer potente contra certos tipos de câncer quando usado sozinho e também demonstra uma eficácia surpreendente em combinação com outros agentes terapêuticos.
[0010] A descrição fornece métodos para o tratamento de câncer em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de MPC- 0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Nas modalidades, a composição farmacêutica compreende um sal de mesilato de MPC-0767. Nas modalidades, a composição farmacêutica compreende um sal de MPC-0767 selecionado a partir de um sal de cloridrato, bromidrato, sulfato, fosfato, fumarato, succinato ou maleato. Nas modalidades, o indivíduo que precisa de tratamento é aquele cujo câncer é refratário ao tratamento com, ou recidivou após o tratamento com, pelo menos um agente terapêutico. Nas modalidades, o câncer é refratário ou recidivou após o tratamento com pelo menos um agente terapêutico. Nas modalidades, o agente terapêutico é um inibidor da proteína cinase. Nas modalidades, o agente terapêutico é um inibidor de Bcl-2 ou um inibidor da via de Bcl-2. Nas modalidades, o agente terapêutico é selecionado dentre erlotinibe, afatinibe, lapatinibe, dacomitinibe, gefitinibe, AP32788, poziotinibe, osimertinibe e EGF816.
Em outras modalidades, o agente terapêutico é selecionado a partir de gilteritinibe, tandutinibe, crenolanibe, sorafenibe, midostaurina e quizartinibe. Nas modalidades, o agente terapêutico é o gilteritinibe. Nas modalidades, o agente terapêutico é a midostaurina. Nas modalidades, o agente terapêutico é sorafenibe. Nas modalidades, o agente terapêutico é o tandutinibe.
[0011] Nas modalidades, o câncer é caracterizado por ter uma ou mais mutações ativadoras em pelo menos uma proteína cinase selecionada a partir do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), receptor 2 do fator de crescimento epidérmico humano (HER2) e tirosina cinase 3 do tipo fms (FLT3). Nas modalidades, as uma ou mais mutações ativadoras é uma mutação de inserção de EGFR ou HER2 éxon 20 (ins20). Nas modalidades, as uma ou mais mutações ativadoras é uma duplicação em tandem interna do FLT3 (ITD).
[0012] Nas modalidades, o câncer é uma neoplasia hematológica ou um tumor sólido.
[0013] Em modalidades, o câncer é selecionado a partir de câncer gástrico, câncer de cólon, câncer de próstata, câncer de pulmão de pequenas células, câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de ovário, linfoma, leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfocítica crônica (LLC), mieloma múltiplo, carcinoma de células renais, tumor estromal gastrointestinal, leucemia mieloide crônica, glioblastoma multiforme, astrocitomas, meduloblastomas, melanoma, câncer de mama e câncer de pâncreas. Nas modalidades, o câncer é NSCLC. Nas modalidades, o câncer é AML. Nas modalidades, o câncer é LLC. Nas modalidades, o câncer é caracterizado como tendo uma ou mais mutações ativadoras em pelo menos uma proteína cinase selecionada de EGFR e HER e o câncer é NSCLC. Nas modalidades, o câncer é caracterizado como tendo uma ou mais mutações ativadoras no FLT3 e o câncer é AML.
[0014] De acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, o indivíduo é humano.
[0015] De acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, a composição farmacêutica é adaptada para administração oral, bucal ou parentérica.
[0016] De acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, o método compreende ainda administrar ao indivíduo um ou mais ingredientes farmacêuticos ativos adicionais (APIs).
[0017] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são um inibidor de proteína cinase (PKI), um inibidor de FLT3, um inibidor de PD-1/PD-L1, um inibidor de CTLA-4, um inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK, um Inibidor da via Bcl-2 ou um inibidor de EZH2.
[0018] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são um PKI. Nas modalidades, o PKI é um PKI direcionado ao EGFR ou HER2. Nas modalidades, o PKI é selecionado a partir de erlotinibe, afatinibe, lapatinibe, dacomitinibe, gefitinibe, AP32788, poziotinibe, osimertinibe e EGF816. De acordo com qualquer uma das modalidades em que o API é um PKI, em outra forma de realização o câncer é NSCLC.
[0019] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são um inibidor de FLT3. Nas modalidades, o inibidor de FLT3 é selecionado dentre tandutinibe, crenolanibe, gilteritinibe, midostaurina, quizartinibe e sorafenibe. De acordo com qualquer uma das modalidades em que o API é um inibidor de FLT3, em outra forma de realização o câncer é AML.
[0020] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são um inibidor de PD-1/PD-L1. Nas modalidades, o inibidor de PD-1/PD-L1 é selecionado do grupo que consiste em AMP-224, AMP-514/MEDI- 0680, atezolizumabe, avelumabe, BGB-A317, BMS936559,
durvalumabe, JTX-4014, nivolumabe, pembrolizumabe e SHR-1210. De acordo com qualquer uma das modalidades em que o API é um inibidor de PD-1/PD-L1, em um Outra forma de realização do câncer é a LMA.
[0021] Nas modalidades, o inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK é trametinibe
[0022] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são um inibidor da via Bcl-2. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado a partir do grupo que consiste em ABT-737, AT-101 (Gossypol), APG-1252, A1155463, A1210477, navitoclax, obatoclax, sabutoclax, venetoclax, S 55746, WEHI-539, AMG-176, MIK665 e S641315. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é um inibidor de BCL2, BCLXL ou MCL1. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado a partir de ABT-737, navitoclax e venetoclax, preferencialmente venetoclax. De acordo com qualquer uma das modalidades em que o API é um inibidor da via Bcl-2, em outra forma de realização o câncer é AML ou CLL.
[0023] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são um inibidor de EZH2. Nas modalidades, o inibidor de EZH2 é selecionado entre EPZ6438, CPI-1205, GSK343, GSK2816126, MAK-683 e PF-
06821497.
[0024] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são um agente quimioterapêutico. Nas modalidades, o agente quimioterapêutico é selecionado a partir de trióxido arsênico ou azacitidina.
[0025] Nas modalidades, o agente quimioterapêutico é selecionado dentre docetaxel, carboplatina, cisplatina e pemetrexedo. Em uma forma de realização em que o API é um agente quimioterapêutico, o câncer é NSCLC.
[0026] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são selecionada entre daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, mitoxantrona, idarrubicina e citarabina. Nas modalidades em que o um ou mais APIs adicionais são selecionada dentre daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, mitoxantrona, idarrubicina e citarabina, o câncer é AML.
[0027] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são selecionada a partir de crenolanibe, citarabina, daunorrubicina, gilteritinibe, sorafenibe e venetoclax. Nas modalidades em que o um ou mais APIs adicionais são selecionada a partir de crenolanibe, citarabina, daunorrubicina, gilteritinibe, sorafenibe e venetoclax, o câncer é AML.
[0028] A descrição também fornece métodos para o tratamento de leucemia mieloide aguda (LMA) em um indivíduo em necessidade, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável. Nas modalidades, a composição farmacêutica compreende um sal de mesilato de MPC-0767. Nas modalidades, a composição farmacêutica compreende um sal de MPC-0767 selecionado a partir de um sal de cloridrato, bromidrato, sulfato, fosfato, fumarato, succinato ou maleato. Nas modalidades, a AML é refratária a, ou recidivou após o tratamento com pelo menos um inibidor de proteína cinase (PKI). Nas modalidades, a LMA é refratária ou recidivou após o tratamento com um ou mais de midostaurina, quizartinibe e sorafenibe. Nas modalidades, a LMA é refratária ou recidivou após o tratamento com um ou mais de gilteritinibe, crenolanibe, sorafenibe, midostaurina, daunorrubicina, doxorrubicina, epirubicina, mitoxantrona, idarrubicina e citarabina. Nas modalidades, a AML é caracterizada como tendo uma ou mais mutações ativadoras no FLT3. Nas modalidades, as uma ou mais mutações ativadoras em FLT3 são selecionadas a partir da mutação FLT3 ITD, uma mutação pontual em FLT3 D835, uma mutação pontual em FLT3 I836, a mutação pontual em FLT3 N676K e a mutação pontual F691L. Nas modalidades, as uma ou mais mutações ativadoras em FLT3 é a mutação em FLT3 ITD.
[0029] Em uma forma de realização, a AML é caracterizada como do tipo selvagem para FLT3 e sem uma mutação Ras ativadora.
[0030] Nas modalidades, os métodos para o tratamento de AML compreendem ainda uma etapa de administração de um ou mais agentes farmacêuticos ativos adicionais (APIs) ao indivíduo. Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são um inibidor de proteína cinase (PKI), um agente quimioterapêutico, um inibidor de FLT3, um inibidor de PD-1/PD-L1, um inibidor da via Bcl-2 ou um inibidor de EZH2. Nas modalidades, o inibidor de FLT3 é selecionado dentre tandutinibe, crenolanibe, gilteritinibe, midostaurina, quizartinibe e sorafenibe. Nas modalidades, o inibidor de PD-1/PD-L1 é selecionado entre AMP-224, AMP-514/MEDI-0680, atezolizumabe, avelumabe, BGB-A317, BMS936559, durvalumabe, JTX-4014, nivolumabe, pembrolizumabe e SHR- 1210 Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado dentre ABT-737, AT-101 (Gossypol), APG-1252, A1155463, A1210477, navitoclax, obatoclax, sabutoclax, venetoclax, S 55746, WEHI-539, AMG-176, MIK665 e S641315. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é um inibidor de BCL2, BCLXL ou MCL1. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado dentre ABT-737, navitoclax e venetoclax. Nas modalidades, o inibidor de EZH2 é selecionado de EPZ6438, CPI- 1205, GSK343, GSK2816126, MAK-683 ou PF-06821497.
[0031] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são selecionada entre daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina,
mitoxantrona, idarrubicina e citarabina.
[0032] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são selecionada a partir de crenolanibe, citarabina, daunorrubicina, gilteritinibe, sorafenibe e venetoclax.
[0033] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são venetoclax.
[0034] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são um inibidor da via Raf/Ras/MAPK.
[0035] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são um agente quimioterapêutico selecionado a partir de trióxido arsênico (ATO), azacitidina e decitabina.
[0036] A descrição também fornece uma composição farmacêutica compreendendo MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
[0037] A descrição também fornece uma composição farmacêutica compreendendo MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento da LMA de acordo com os métodos aqui descritos.
[0038] A descrição também fornece uma composição farmacêutica compreendendo MPC-0767 e um ou mais APIs adicionais. Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são selecionada a partir de crenolanibe, citarabina, daunorrubicina, gilteritinibe, sorafenibe e venetoclax. Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são selecionada entre ABT-737, navitoclax e venetoclax. Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são venetoclax.
[0039] Nas modalidades, a descrição fornece métodos para o tratamento de leucemia mieloide aguda (LMA) em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, preferencialmente um sal de mesilato , e opcionalmente um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, em que a LMA é refratária ou recidivou após o tratamento com um inibidor da via Bcl-2. Nas modalidades, a LMA recidivou após o tratamento com venetoclax.
Nas modalidades, o método compreende ainda a administração de um ou mais agentes farmacêuticos ativos (APIs) adicionais ao indivíduo.
Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são selecionados a partir de um inibidor de proteína cinase (PKI), um agente quimioterapêutico, um inibidor de FLT3, um inibidor de PD-1/PD-L1 e um inibidor da via Bcl-2. Nas modalidades, o inibidor de FLT3 é selecionado a partir de crenolanibe, gilteritinibe, midostaurina, quizartinibe e sorafenibe.
Nas modalidades, o inibidor de PD-1/PD-L1 é selecionado do grupo que consiste em AMP-224, AMP- 514/MEDI-0680, atezolizumabe, avelumabe, BGB-A317, BMS936559, durvalumabe, JTX-4014, nivolumabe, pembrolizumabe e SHR-1210. Nas modalidades, o Bcl- O inibidor de 2 vias é selecionado a partir do grupo que consiste em ABT-737, AT-101 (Gossypol), APG-1252, A1155463, A1210477, navitoclax, obatoclax, sabatoclax, sabutoclax, venetoclax, S 55746, WEHI-539, AMG-176, MIK665 e S641315. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é um inibidor de BCL2, BCLXL ou MCL1. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado dentre ABT-737, navitoclax e venetoclax.
Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são selecionada a partir do grupo que consiste em daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, mitoxantrona, idarrubicina e citarabina.
Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são selecionada a partir de crenolanibe, citarabina, daunorrubicina, gilteritinibe, sorafenibe e venetoclax.
Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais são venetoclax.
[0040] Nas modalidades, a descrição fornece métodos para o tratamento de leucemia mieloide aguda (LMA) em um indivíduo em necessidade do mesmo, os métodos compreendendo a administração ao indivíduo de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de preferência um sal de mesilato, e opcionalmente um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, em um regime de terapia de combinação que compreende ainda a administração de um inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK. Nas modalidades, o inibidor da via Ras é selecionado a partir de um inibidor de Raf, como vemurafenibe, sorafenibe ou dabrafenibe, um inibidor da MEK, como AZD6244 (Selumetinibe), PD0325901, GSK1120212 (Trametinibe), U0126- EtOH, PD184352, RDEA119 (Rafametinibe), PD98059, BIX 02189, MEK162 (Binimetinib) -327, BIX02188, AZD8330, TAK-733, cobimetinibe ou PD318088 e um inibidor de ERK, como LY3214996, BVD-523 ou GDC-0994.
[0041] Nas modalidades, a descrição fornece métodos para o tratamento de leucemia mieloide aguda (LMA) em um indivíduo em necessidade do mesmo, os métodos compreendendo a administração ao indivíduo de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de preferência um sal de mesilato e, opcionalmente, um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, em um regime de terapia de combinação compreendendo ainda administrar um inibidor de EZH2, como EPZ6438, CPI-1205, GSK343, GSK2816126, MAK-683 ou PF-
06821497.
[0042] Nas modalidades, a descrição fornece métodos para o tratamento de leucemia mieloide aguda (LMA) em um indivíduo em necessidade, os métodos compreendendo a administração ao indivíduo de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de MPC-7, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, preferencialmente um sal de mesilato, e opcionalmente um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, em um regime de terapia de combinação compreendendo ainda administrar um agente quimioterapêutico selecionado a partir de trióxido arsênico (ATO), azacitidina e decitabina.
[0043] Nas modalidades, a descrição fornece uma composição farmacêutica compreendendo MPC-0767, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, preferencialmente um sal de mesilato e, opcionalmente, um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento da LMA de acordo com qualquer um dos métodos da monoterapia ou MPC-0767 terapia de combinação aqui descrita.
[0044] A descrição também fornece métodos para prever a resposta terapêutica ao MPC-0767 em um indivíduo que necessita de tratamento para LMA, o método compreendendo a determinação do status de FLT3 e RAS em uma amostra de células cancerígenas LMA obtidas do indivíduo, em que um status normal de FLT3/mutante não FLT3-ITD e RAS indica que se prevê que as células cancerígenas sejam resistentes à monoterapia com MPC-0767 e respondam a uma terapia de combinação com MPC-0767 e um inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK; e um status de FLT3-ITD indica que se prevê que as células cancerígenas respondem à monoterapia por MPC-0767.
[0045] A descrição também fornece métodos para o tratamento de AML em um indivíduo necessitado de tal tratamento, o método compreendendo determinar o status de mutante FLT3 e RAS em uma amostra de células cancerígenas AML do indivíduo e tratar o indivíduo com uma terapia de combinação compreendendo MPC-0767 e um inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK, onde o status é normal FLT3 ou não-FLT3-ITD e mutante RAS.
[0046] De acordo com os métodos anteriores, um status de mutante Ras pode ser definido pela presença de uma ou mais mutações ativadoras em NRAS ou KRAS. Nas modalidades, as uma ou mais mutações ativadoras em NRAS ou KRAS é uma mutação na sequência polinucleotídica que codifica a proteína RAS que resulta em uma alteração de aminoácido selecionada do grupo que consiste em A146T e G13D de KRAS; ou selecionado entre Q61L, Q61H e G12D do NRAS.
[0047] A descrição também fornece métodos para prever a resposta terapêutica ao MPC-0767 em um indivíduo que necessita de tratamento para LMA, o método compreendendo determinar ou receber o status EZH2 em uma amostra de células cancerígenas LMA do indivíduo, em que uma mutação na perda de função EZH2 indica que se prevê que as células cancerígenas sejam responsivas à terapia por MPC-0767, enquanto que uma mutação no ganho de função EZH2 indica que se prevê que as células cancerígenas sejam resistentes à terapia por MPC-0767. Nas modalidades, a terapia por MPC-0767 é monoterapia ou terapia de combinação.
[0048] A descrição também fornece métodos para o tratamento de LMA em um indivíduo necessitado desse tratamento, o método compreendendo determinar ou receber o status EZH2 da LMA em uma amostra biológica da LMA do indivíduo e tratar o indivíduo com terapia por MPC-0767, em que a status é uma mutação da perda de função EZH2 ou tratamento do indivíduo com uma terapia de combinação compreendendo MPC-0767 e um inibidor de EZH2 em que o status EZH2 é normal ou um ganho da mutação EZH2 de função. Nas modalidades, a terapia por MPC-0767 é monoterapia ou terapia de combinação.
[0049] A descrição também fornece métodos para prever a resposta terapêutica ao MPC-0767 em um indivíduo que necessita de tratamento para AML, o método que compreende determinar ou receber o KDM6Astatus em uma amostra de células cancerígenas AML obtidas do indivíduo, em que uma perda de mutação de função de KDM6A indica que se prevê que as células cancerígenas sejam resistentes à terapia por MPC-0767. Nas modalidades, a terapia por MPC-0767 é monoterapia ou terapia de combinação.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0050] FIG. 1A-D: MPC-0767 inibe a viabilidade de linhagens celulares de câncer de pulmão de células não pequenas com mutações em EGFR ou HER2. Fig. 1A; HCC-827; Fig. 1B: H1975; Fig. 1C: PC-9; Fig.1D: H1781.
[0051] FIG. 2: MPC-0767 induz a morte celular em células H1975.
[0052] FIGURAS 3A-B: MPC-0767 reduz a expressão de EGFR da superfície celular em células H1975 (A) e células PC-9 (B). As células foram tratadas com MPC-0767 (1 µM) por 24 horas antes de serem colhidas e a expressão celular de EGFR determinada por citometria de fluxo.
[0053] FIGURAS 4A-B: MPC-0767 reduz de forma dependente da dose (A) a expressão da superfície celular do mutante EGFR WT e do EGFR Exon20 (V769_D770insASV) nas células BaF3 após 24 horas de tratamento e (B) viabilidade celular do BaF3 ou BaF3 parental que expressam o mutante EGFR Exon20 (V769_D770insASV) após 72 horas de tratamento.
[0054] FIGURAS 5A-C: MPC-0767 possui atividade citotóxica em células AML que hospedam FLT3-ITD. Viabilidade celular de (A) células do tipo selvagem FLT3, ME-1 e (B) células MV-4-11 que abrigam FLT3-ITD, (C) dados resumidos que mostram valores de EC 50 de linhagens celulares de AML e células AML primárias tratadas por 72 horas.
[0055] FIG. 6: MPC-0767 induz a morte celular dependente da dose em células AML primárias que abrigam FLT3-ITD após 72 horas de tratamento. A amostra Y1265 foi obtida de um paciente cuja LMA recidivou após o tratamento com gilteritinibe.
[0056] FIGURAS 7A-B: MPC-0767 demonstra atividade antitumoral em um modelo de xenoenxerto de camundongo de AML FLT3-IT D (células MV-4-11). Sete dias após a inoculação do tumor, os camundongos (n = 10 por grupo) foram administrados por via oral apenas com veículo, ou MPC-0767 200 mg/kg QD x 2 dias e depois reduzidos a 150 mg/kg QD x 15 dias. O tamanho do tumor (mm3) (A) e a alteração do peso corporal (B) são mostrados. Foram encontradas cinco regressões tumorais no grupo de tratamento MPC-0767 e foi encontrada significância com o tratamento, P <0,0001 (teste t de Student).
[0057] FIGURAS 8A-C: As células AML FLT3-ITD geradas para serem resistentes à citotoxicidade da midostaurina (MOLM-13-R- PKC412, linha preta em cada gráfico) são resistentes à midostaurina, 2-100 nM (A) e crenolanibe, 0,2-100 nM (B), porém, não para MPC- 0767, 20-10000 nM (C). A linha cinza em cada gráfico é MOLM-13- LUC. As células foram tratadas por 72 horas antes da avaliação da viabilidade.
[0058] FIGURAS 9A-C: MPC-0767 retém a atividade citotóxica sob condições estromais que conferem resistência aos inibidores de FLT3. As células MOLM-14 foram tratadas com gilteritinibe (A), crenolanibe (B) ou MPC-0767 (C) em meios não estromais (linhas pretas em cada gráfico) ou meios estromais (linhas cinza em cada gráfico). As células foram tratadas por 72 horas antes da avaliação da viabilidade.
[0059] FIGURAS 10A-D: MPC-0767 reduz a expressão da superfície celular de FLT3 (A, B) e subsequentemente reduz a fosforilação do alvo a jusante S6 (10C, 10D). As células MV-4-11 (A, C) ou células MOLM-13 (B, D) são tratadas com veículo ou MPC-0767 por 24 horas.
[0060] FIGURAS 11A-C: MPC-0767 elimina a expressão da superfície celular do tipo selvagem transfectado e FLT3 mutante nas células BaF3 (A). Em um ensaio de citotoxicidade, uma linhagem celular BaF3 modificada que expressa FLT3-ITD (linha cinza em cada gráfico) e com uma mutação F691L (linha preta em cada gráfico) é resistente ao crenolanibe (B), porém, permanece sensível ao MPC- 0767 (C).
[0061] FIG. 12: MPC-0767 reduz a expressão da superfície celular PD-L1 induzida por interferon gama em seis amostras primárias de pacientes com LBC. As células foram tratadas com IFN-γ humano (50 ng/ml) e/ou MPC-0767 (1 µM) durante 24 horas.
[0062] FIGURAS 13A-E: MPC-0767 mostra atividade citotóxica sinérgica em combinação com daunorrubicina (A), citarabina (B), crenolanibe (C), sorafenibe (D) e venetoclax (E) nas células MV-4-11.
[0063] FIG.14: MPC-0767 mostra atividade antitumoral potente em combinação com venetoclax. Foi realizado um estudo sistêmico de xenoenxerto de sobrevivência usando a linhagem celular AML MOLM- 13 FLT3-ITD. São mostradas curvas de sobrevivência para camundongos tratados com veículo (linha cinza), MPC-0767 (linha tracejada) 100-60 mg/kg QD, venetoclax (linha pontilhada) 45-33,84 mg/kg QD ou a combinação de MPC-0767 e venetoclax (linha sólida). Combinação vs MPC-0767 isolado, venetoclax isolado ou veículo isolado P < 0,001, teste de Log Rank (Mantel Cox).
[0064] FIG.15: valores de EC50 de MPC-0767 (quatro barras à esquerda) ou venetoclax (quatro barras à direita) em células MOLM-13 e MV-4-11 resistentes a venetoclax (Ven-R). As células foram tratadas com MPC-0767 ou venetoclax por 72 h e a viabilidade celular foi determinada usando um ensaio CTG. As experiências foram realizadas no mínimo 2 vezes independentes, em duplicata, e os dados médios ± DP são mostrados.
[0065] FIGURAS 16A-B: (A) Análise de transferência Western de células resistentes a venetoclax MV-4-11 tratadas com MPC-0767 (580 nM), venetoclax (2500 nM) ou a combinação por 24 horas. Os lisados foram sondados com anticorpos para PARP e a vinculina foi usada como controle de carregamento. As setas superior e inferior indicam PARP de comprimento total e PARP clivado, respectivamente. Dados representativos mostrados em 2 experiências independentes. (B) Isobolograma normalizado no ED75 de duas linhagens celulares resistentes a venetoclax tratadas com a combinação de MPC-0767 e venetoclax por 72 horas antes da análise de viabilidade usando CellTiter-Glo®. Cada ponto de dados é a média de 2 experimentos independentes, realizados em duplicata, para cada linhagem celular.
[0066] FIGURAS 17A-B: (A) Análise de transferência Western de células MOLM-14 tratadas com MPC-0767 (1 µM), venetoclax (20 nM) ou a combinação por 24 horas. Os lisados foram sondados com os anticorpos indicados. Vinculin foi usado como controle de carregamento. Transferência representativa mostrada a partir de 2 experiências independentes. (B) análise de Western blot de células resistentes a venetoclax MV-4-11 tratadas com MPC-0767 (580 nM), venetoclax (2500 nM) ou a combinação por 24 horas. Os lisados foram sondados com anticorpos para AKT e MCL-1. Vinculin foi usado como controle de carregamento. Dados representativos mostrados em 2 experiências independentes.
[0067] FIG.18: Sensibilidade a MPC-0767 de células AML que hospedam FLT3 de tipo selvagem. Gráfico de pontos de valores de
EC50 de linhagens celulares de AML e amostras primárias de AML tratadas com MPC-0767 por 72 h, seguido de determinação da viabilidade usando CellTiter-Glo®. As experiências utilizando linhagens celulares foram realizadas 2 vezes independentes, cada uma em duplicata, enquanto as explosões primárias de LMA foram testadas uma vez, em duplicata. A média geométrica é mostrada pela linha horizontal.
[0068] FIGURAS 19A-B: CRISPR identifica a regulação epigenética como um determinante principal da sensibilidade do MPC-
0767. (A) Análise de ontologia genética dos 20 principais sgRNAs. (B) Gráfico de dispersão mostrando o enriquecimento da contagem normal de leitura de sgRNA de KDM6A em pools CRISPR tratadas com veículo e MPC-0767 a partir das sub-bibliotecas A e B GeCKO combinadas. 6 sgRNAs individuais usados para atingir KDM6A são mostrados em círculos pretos.
[0069] FIGURAS 20A-B: direcionamento mediado por CRISPR de KDM6A com três sgRNAs independentes nas linhagens celulares MOLM-14 e MV-4-11 confere resistência a MPC-0767. Viabilidade de MOLM-14 (A) ou MV-4-11 (B) células com o sgRNA não alvo indicado ou sDR6 KDM6A tratado com MPC-0767 (1 µM). Após 72 horas de tratamento, a viabilidade celular foi avaliada usando CTG. Os dados apresentados são a média de sgRNAs individuais para cada linhagem celular ± DP, realizada duas vezes, em duplicata.
[0070] FIG. 21: Isobolograma normalizado na EC75 de uma linhagem celular FLT3-ITD (MV-4-11) tratada com os inibidores de EZH2 EPZ6438 ou CPI-1205 por 4 dias, seguido pela combinação de inibidores de EZH2 e MPC-0767 por 72 horas adicionais antes de a viabilidade ser testada usando CellTiter-Glo®. Cada ponto de dados é a média de três experimentos independentes, cada um realizado em duplicata, para cada linhagem celular.
[0071] FIG. 22: Gráfico de barras mostrando a viabilidade das células MOLM-14 tratadas com MPC-0767 (527 nM), trióxido arsênico (ATO) (1250 nM) ou a combinação por 72 horas. A determinação do valor de Cl confirmou que a combinação era sinérgica (isto é, <1).
[0072] Fig. 23: Quantificação dos níveis de FLT3, pERK, pS6 em células MOLM-13 tratadas com MPC-0767 (800 nM), ATO (625 nM) ou a combinação por 24 horas.
[0073] FIG. 24: Os valores de EC50 das células BaF3 que expressam FLT3-ITD suplementados ainda com ou sem IL-3 e tratados com os inibidores de FLT3 crenolanibe e gilteritinibe ou com MPC-0767 por 72 horas. Após este período, a viabilidade celular foi determinada usando os valores de CTG e EC50 determinados. O gráfico é a média ± DP de 2 estudos independentes, cada um realizado em duplicata.
[0074] FIG. 25: MPC-0767 exibe atividade antitumoral melhorada em combinação com 5’azacitidina. Foi realizado um estudo sistêmico de xenoenxerto de sobrevivência usando a linhagem celular AML MOLM-13 FLT3-ITD. São mostradas curvas de sobrevivência para camundongos tratados com veículo (linha cinza), MPC-0767 (linha tracejada) 75 mg/kg (QDx5; 1 dia de folga; QDx26), 5'azacitidina (linha pontilhada) 2 mg/kg (QDx4) ou a combinação de MPC-0767 e 5'azacitidina (linha sólida). Combinação vs MPC-0767 isolado, 5’azacitidina isolada ou veículo isolado P <0,001, teste de Log Rank (Mantel Cox).
[0075] FIG. 26: As células OCI-AML2 pré-tratadas com MPC-0767 são mais sensíveis à morte mediada por células T. O DMSO foi usado como controle de veículo. As barras representam a média +/- DP de 2 experiências independentes.
[0076] FIGURAS 27A-D: MPC-0767 demonstra atividade antitumoral em um modelo singênico de camundongo (células MC38).
Onze dias após a inoculação do tumor, os camundongos (n = 6 por grupo) foram administrados por via oral apenas com o veículo, ou 150 mg/kg MPC-0767 QD x 17. Tamanho do tumor (mm3), P = 0,01 (teste t de Student) (A ) e a porcentagem de alteração do peso corporal (B) são mostrados. (C) Níveis de PD-L1 medidos em leucócitos infiltrantes de tumor MC38 (CD45 +, CD3-) após 7 dias de 150 mg/kg de dosagem de MPC-0767, P <0,05 (teste t de Student). (D) Relação de CD4: TREG (esquerda) e CD8: TREG (direita) em tumores MC38 * P <0,05, ** P <0,01 (teste t de Student). Células T CD4 definidas como CD45+, CD3+, CD4 +; células T CD8 definidas como CD45 +, CD3+, CD4- e TREGs definidas como CD45+, CD3+, CD4+, FOXP3+.
[0077] FIG. 28: Gráfico de barras mostrando a viabilidade das células MOLM-13 tratadas com MPC-0767 (351 nM), trametinibe (25 nM) ou a combinação por 72 horas. A determinação do valor do CI confirmou que a combinação era sinérgica (isto é, <1).
[0078] FIGURAS 29A-D: A repressão de MPC-0767 da expressão de PD-L1 aumenta a ativação de células T. Os gráficos de barras mostram a ativação de células repórter Jurkat com inibição dependente de anti-CD3 (A) e PD-L1 da ativação de células T após o tratamento com IFNγ (B). As barras em A&B representam a média +/- DP das cavidades triplicadas e são representativas de três experiências independentes. Os gráficos de barra em C&D demonstram que o MPC-0767 reduz a expressão da superfície celular de PD-L1 (C, p = 0,0113 a 1 μM e <0,0001 a 2 μM em comparação com o IFNγ isolado) e também reduz a inibição da ativação das células T (D, p = 0,0198 a 1μM e 0,0323 a 2 μM em comparação com IFNγ isolado). As barras em C&D representam a média +/- DP de três experimentos independentes.
[0079] FIG. 30: MPC-0767 demonstra atividade antitumoral em um modelo sistêmico de LMA in vivo. Análise de sobrevivência de Kaplan-
Meier de um modelo sistêmico de MOLM-13 em que os camundongos foram dosados por via oral com veículo ou com MPC-0767 (75 ou 150 mg/kg por dia). A significância estatística foi calculada pelo teste de Log Rank (Mantel-Cox). P <0,01 para MPC-0767 75 mg/kg e 150 mg/kg vs veículo.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0080] A descrição fornece composições e métodos relacionados ao uso de MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o tratamento de câncer em um indivíduo, preferencialmente um indivíduo humano, necessitando desse tratamento.
[0081] O documento WO 2011/060253 descreve o composto original de MPC-0767, MPC-3100, incluindo sua biodisponibilidade oral em humanos. MPC-3100 pode ser identificado como (2S)-1-[4-(2-{6- Amino-8-[(6-bromo-1,3-benzodioxol-5-il)sulfanil]-9H-purin-9- il}etil)piperidin-1-il]-2-hidroxipropan-1-ona e é descrito em Kim et al., J. Med. Chem. 2012 55, 7480-7501. Conforme observado em uma revisão de 2014, o MPC-3100 não está mais em desenvolvimento ativo (Bhat et al. J. Med. Chem 2014 57: 8718- 8724). Embora o MPC- 3100 conclua com sucesso o estudo clínico I, seu desenvolvimento clínico adicional foi prejudicado por baixa solubilidade (Kim et al. Bioorg. Med. Chem. Let. 25: 5254-5257) (2015). O MPC-0767 é um pró-fármaco do MPC-3100 que foi desenvolvido para resolver esse problema com o composto original. MPC-0767 mostrou melhor solubilidade aquosa, estabilidade química adequada e rápida bioconversão. Id. MPC-0767 e compostos relacionados são descritos em WO 2012/148550, que é incorporado aqui por referência na sua totalidade. O MPC-0767 é convertido em seu composto original principalmente por um processo de clivagem mediada por enzima. Sua biodisponibilidade oral, quando formulada em 2 % de carboximetilcelulose, foi semelhante à do composto original (Captisol™ 40 %). O MPC-0767 também mostrou eficácia semelhante ao composto parental em um modelo de tumor xenoenxerto N-87. As células N-87 são células cancerígenas gástricas humanas positivas para HER2. A estrutura do MPC-0767 é mostrada abaixo.
[0082] Nas modalidades das composições e métodos descritos aqui, o sal farmaceuticamente aceitável de MPC-0767 é um sal de mesilato. Por conseguinte, nas modalidades, a descrição fornece métodos de tratamento de câncer em um indivíduo, preferencialmente um indivíduo humano, necessitando de tal tratamento, os métodos compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de um sal de mesilato de MPC-0767. Nas modalidades, o sal de mesilato de MPC-0767 está na forma de uma composição farmacêutica. Nas modalidades, a composição farmacêutica não compreende uma ciclodextrina. As composições e formulações farmacêuticas compreendendo MPC-0767, e seus sais, são descritas em mais detalhes infra.
[0083] Os métodos de monoterapia e terapia de combinação de tratamento de câncer com MPC-0767 são considerados pela presente descrição. As terapias de combinação são discutidas infra. No contexto da monoterapia por MPC-0767, em algumas modalidades, porém, não em todas, o indivíduo que precisa de tratamento é aquele que tem um câncer que não responde ou é refratário a, ou que recidivou após o tratamento com um 'padrão de tratamento' agente terapêutico de primeira linha. Nesse contexto, os termos "não responsivo" e "refratário" são usados de forma intercambiável aqui e se referem à resposta do indivíduo à terapia como inadequada clinicamente, por exemplo, para estabilizar ou reduzir o tamanho de um ou mais tumores sólidos, para retardar o tumor progressão, para prevenir, reduzir ou diminuir a incidência de novas metástases tumorais ou para aliviar um ou mais sintomas associados ao câncer. Um câncer refratário a uma terapia medicamentosa específica também pode ser descrito como um câncer resistente a fármacos. Em uma terapia padrão para o câncer, o câncer refratário inclui uma doença que progride apesar do tratamento ativo, enquanto o câncer "recidivante" inclui um câncer que progride na ausência de qualquer terapia atual, porém, após uma terapia inicial bem-sucedida.
[0084] Por conseguinte, em modalidades, o indivíduo é aquele que passou por um ou mais regimes anteriores de terapia com um ou mais agentes terapêuticos 'padrão de atendimento'. Nesses casos, o câncer do indivíduo pode ser considerado refratário ou recidivado. Nas modalidades, o câncer é refratário ou recidivou após o tratamento com um inibidor de proteína cinase (PKI). Nas modalidades, o câncer é refratário ao tratamento com um PKI direcionado contra uma ou mais das seguintes cinases: região de cluster de ponto de ruptura-Abelson (BCR-ABL), fibrossarcoma B-acelerado rapidamente (B-RAF), epiderme receptor de fator de crescimento (EGFR), receptor de fator de crescimento epidérmico humano 2 (HER2), tirosina-cinase 3 semelhante a fms (FLT3), Janus-cinase 2 (JAK2), fator de transição mesenquimal-epitelial (MET) e linfoma-cinase anaplásico (ALK) . Nas modalidades, o câncer é refratário ou recidivou após o tratamento com um PKI direcionado contra um ou mais de EGFR, HER2 e FLT3. Nas modalidades, o câncer é refratário ou recidivou após o tratamento com um PKI direcionado contra um ou mais BCR-ABL, B-RAF, JAK2, MET e ALK.
[0085] Nas modalidades, o câncer é refratário ou recidivou após o tratamento com um PKI direcionado contra FLT3. Nas modalidades, o câncer é refratário ou recidivou após o tratamento com um PKI direcionado contra EGFR ou HER2. Nas modalidades, o câncer é refratário ao tratamento com um agente terapêutico selecionado do grupo que consiste em erlotinibe, afatinibe, lapatinibe, dacomitinibe, gefitinibe, AP32788, poziotinibe, osimertinibe e EGF816. Nas modalidades, o câncer é refratário ao tratamento ou como recidivado após um tratamento com um agente terapêutico selecionado do grupo que consiste em gilteritinibe, tandutinibe, crenolanibe, sorafenibe, midostaurina e quizartinibe. Nas modalidades, o câncer é leucemia mieloide aguda (LMA) caracterizada por uma ou mais mutações ativadoras em FLT3. Nas modalidades, as uma ou mais mutações ativadoras em FLT3 são selecionadas a partir da mutação de duplicação em tandem interna (ITD) de FLT3 no éxon 14 ou éxon 15, a mutação pontual em FLT3 D835, a mutação pontual em I836, a mutação pontual em FLT3 N676K e a mutação pontual F691L no resíduo do gatekeeper. Nas modalidades, as uma ou mais mutações ativadoras em FLT3 é a mutação em FLT3 ITD. Nas modalidades, a LMA é refratária ou recidivou após o tratamento com uma ou mais citarabina, daunorrubicina e midostaurina. Modalidades adicionais relacionadas à AML são descritas infra.
[0086] Nas modalidades, o câncer é refratário ou recidivou após o tratamento com 5'azacitidina ou decitabina. Nas modalidades, o câncer é refratário ou recidivou após o tratamento com citarabina isolada ou citarabina em combinação com uma antraciclina.
[0087] Nas modalidades, o indivíduo que precisa de tratamento é um indivíduo cujo câncer é caracterizado como tendo uma ou mais mutações ativadoras em uma proteína cinase selecionada de EGFR e HER2. Nas modalidades, um câncer tratado pelos métodos aqui descritos é caracterizado pela superexpressão de EGFR ou HER2. Nas modalidades, o câncer é um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) caracterizado por uma ou mais mutações no EGFR ins20 ou uma ou mais mutações no HER2 ins20, ou ambas.
[0088] Nas modalidades, as uma ou mais mutações ativadoras no EGFR são selecionadas do grupo que consiste em L858R que pode ou não conter a mutação gatekeeper T790M. Nas modalidades, a mutação EGFR é selecionada a partir de uma mutação de inserção do éxon 20 (ins20). Nas modalidades, a mutação EGFR ins20 é selecionada de um ou mais de E746_A750del, D761_E762insEAFQ, A763_Y764insFQEA, Y764_V765insHH, M766_A767insAI, A767_V769dupASV, A767_S768insTLA, S768_D770dupSVD, S768_V769insVAS, S768_V769insAWT, V769_D770insASV, V769_D770insGV, V769_D770insCV, V769_D770insDNV, V769_D770insGSV, V769_D770insGVV, V769_D770insMASVD, D770_N771insSVD, D770_N771insNPG, D770_N771insAPW, D770_N771insD, D770_N771insDG, D770_N771insG, D770_N771insGL, D770_N771insN, D770_N771insDPH, D770_N771insSVP, D770_N771insSVG, D770_N771insMATP, delN770insGY, N771_PinsH, N771_P772insN, A771_H773dupNPH, delN771insGW, delN771insGF, P772_H773insPR, P772_H773insYNP, P772_H773insX, P772_H773insDPH, P772_H773insDNP, P772_H773insGV, P772_H773insN, P772_H773insV, H773_V774insNPH, H773_V774insH,
H773_V774insPH, H773_V774insGNPH, H773_V774insdupHV, H773_V774insG, H773_V774insGH, e V774_C775insHV.
[0089] Nas modalidades, as uma ou mais mutações ativadoras no HER2 são selecionadas a partir de uma mutação ins20. Nas modalidades, a mutação HER2 ins20 é selecionada entre A775_G776insYVMA, G776> VC, G776_V777insCG e P781_Y782insGSP.
[0090] Nas modalidades, o indivíduo é aquele que tem um câncer refratário ou recidivado selecionado do grupo que consiste em câncer gástrico, câncer de cólon, câncer de próstata, câncer de pulmão de pequenas células, câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de ovário, linfoma, leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfocítica crônica (LLC), mieloma múltiplo, carcinoma de células renais, tumor estromal gastrointestinal, leucemia mieloide crônica, glioblastoma multiforme, astrocitomas, meduloblastomas, melanoma, câncer de mama e câncer de pâncreas.
[0091] Nas modalidades, o indivíduo é aquele que tem um câncer refratário ou recidivado selecionado do grupo que consiste em leucemia granulocítica aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia mieloide aguda (LMA), carcinoma do córtex adrenal, tumor adrenal, câncer apendicular, linfoma de células B, carcinoma da bexiga, câncer cerebral, carcinoma de mama, carcinoma cervical, hiperplasia cervical, coriocarcinoma, leucemia granulocítica crônica, leucemia linfocítica crônica (LLC), leucemia mieloide crônica (LMC), carcinoma colorretal, carcinoma endometrial, carcinoma de esôfago, trombocitose essencial, câncer de vesícula biliar, câncer de vesícula biliar câncer gastrointestinal, carcinoma geniturinário, glioma, leucemia de células cabeludas, carcinoma de cabeça ou pescoço, carcinoma hepatocelular, linfoma de Hodgkin, sarcoma de Kaposi, leucemia, carcinoma de pulmão, carcinoma carcinoide maligno, hipercalcemia maligna, melanoma maligno, insulinoma pancreático maligno, linfoma de células de revestimento, mesotelioma, mieloma múltiplo, micose fungoide, neoplasmas mieloproliferativos, neuroblastoma, tumores neuroendócrinos, linfoma não-Hodgkin, carcinoma pulmonar de células não pequenas (NSCLC), sarcoma osteogênico, câncer de ovário, carcinoma ovariano, carcinoma pancreático, câncer de pênis, tumor de hipófise, policitemia vera, macroglobulinemia primária, macroglobulinemia primária carcinoma prostático, carcinoma de células renais, rabdomiossarcoma, sarcoma, câncer de pele, carcinoma de pequenas células do pulmão, sarcoma de tecidos moles, carcinoma de estômago, linfoma de células T, câncer testicular, carcinoma testicular, carcinoma de tireoide, tumor de tireoide e tumor de Wilms.
[0092] De acordo com os métodos aqui descritos, um "indivíduo" inclui um mamífero. O mamífero pode ser, por exemplo, qualquer mamífero, por exemplo, um ser humano, primata, camundongo, rato, cachorro, gato, vaca, cavalo, cabra, camelo, ovelha ou porco. De preferência, o indivíduo é humano. O termo "paciente" refere-se a um indivíduo humano. Terapia de Combinação
[0093] A presente descrição também fornece métodos que compreendem terapia de combinação. Quando aqui usado, "terapia de combinação" ou "coterapia" inclui a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, com pelo menos um agente ativo adicional, também referido aqui como um "ingrediente farmacêutico ativo" ("API"), como parte de um regime de tratamento destinado a fornecer um efeito benéfico da ação do MPC-0767 e do agente ativo adicional. De acordo com as modalidades descritas abaixo, "o API adicional" deve se referir a pelo menos um API adicional administrado em um regime de terapia de combinação com MPC-0767. Além disso, entende-se que mais de uma dos APIs adicionais descritas abaixo podem ser utilizadas no regime. Os termos "terapia de combinação" ou "regime de terapia de combinação" não se destinam a abranger a administração de dois ou mais compostos terapêuticos como parte de regimes de monoterapia separados que, acidental e arbitrariamente, resultam em um efeito benéfico que não foi intencional ou previsto.
[0094] De preferência, a administração de uma composição compreendendo MPC-0767 em combinação com um ou mais APIs adicionais, como discutido aqui, fornece uma resposta sinérgica no indivíduo a ser tratado. Nesse contexto, o termo "sinérgico" refere-se à eficácia da combinação ser mais eficaz do que os efeitos aditivos de qualquer terapia isolada.
[0095] Um efeito sinérgico é exemplificado pela combinação de MPC-0767 e venetoclax, tanto contra linhagens celulares tumorais in vitro quanto em um estudo sistêmico de xenoenxerto de sobrevivência, como discutido em mais detalhes abaixo. Outros exemplos incluem a atividade sinérgica de MPC-0767 em combinação com 5'azacitidina, trióxido arsênico (ATO), citarabina, antraciclinas (por exemplo, daunorubicina), inibidores de tirosina cinase FLT3 (por exemplo, crenolanibe e gilterinibe), inibidores de EZH2 e Ras/RAF/Inibidores da via MEK/ERK (por exemplo, trametinib), por exemplo, como mostrado na Tabela 1 do Exemplo 10 abaixo (daunorrubicina, citarabina, crenolanibe, sorafenibe, gilterinibe e venetoclax), no Exemplo 15 (trióxido arsênico), Exemplo 17 (5 ' azacitidina) e Exemplo 20 (trametinibe).
[0096] O efeito sinérgico de uma terapia de combinação de acordo com a descrição pode permitir o uso de doses mais baixas e/ou administração menos frequente de pelo menos um agente na combinação em comparação com a sua dose e/ou frequência fora da combinação. Efeitos benéficos adicionais da combinação podem ser manifestados na prevenção ou redução de efeitos colaterais adversos ou indesejados associados ao uso de qualquer terapia apenas na combinação (também chamada de monoterapia).
[0097] No contexto da terapia de combinação, a administração da composição MPC-0767 pode ser simultânea ou sequencial à administração de um ou mais agentes ativos ou APIs adicionais. Em outra forma de realização, a administração dos diferentes componentes de uma terapia de combinação pode estar em diferentes frequências.
[0098] Em alguns aspectos, a terapia de combinação abrange a administração da composição MPC-0767 em combinação com um agente terapêutico que melhora a atividade citotóxica antitumoral do sistema imunológico endógeno do paciente. Tais agentes podem atuar, por exemplo, aumentando a atividade antitumoral de células exterminadoras naturais e/ou células T citotóxicas. Sem estar vinculado a nenhuma teoria em particular, os dados apresentados infra indicam que o MPC-0767 reduz a expressão de PD-L1 na superfície celular tanto nas linhagens celulares cancerígenas quanto nas células primárias, levando ao aumento da ativação das células T contra as células cancerígenas. Além disso, o tratamento MPC-0767 sensibiliza as células cancerígenas à citotoxicidade mediada por células T. Por conseguinte, em modalidades, a descrição fornece métodos para o tratamento de câncer, administrando a composição MPC-0767 em combinação com um agente terapêutico que melhora a imunidade antitumoral, por exemplo, um inibidor de uma via de sinalização de ponto de verificação envolvendo uma morte programada 1 (PD-1) receptor e/ou seus ligantes (PD-L1/2) e pode incluir anticorpos terapêuticos ou seus fragmentos com múltiplas especificidades que envolvem células T ou células exterminadoras naturais. Nas modalidades, estes podem incluir anticorpos biespecíficos, BiTE (engajador de células T biespecífico), scBsTaFv (variável de fragmento em tandem biespecífico de cadeia única), bsscFv (Fv de cadeia única biespecífica), BiKE (engajador de célula exterminadora biespecífica), DART (Redirecionamento por Afinidade Dual), TandAb (Diacorpos em Tandem) sctb (Corpo triplo de Fv de cadeia única) BIf (Imunofusão biespecífica de scFv) e DVD-Ig (Imunoglobulina de Domínio Variável Dual).
[0099] Nas modalidades, a descrição fornece métodos para o tratamento de um câncer hematológico através da administração da composição MPC-0767 em combinação com um agente terapêutico que aumenta a imunidade antitumoral, por exemplo, um anticorpo terapêutico biespecífico ou seu fragmento contra CD3 e CD19 (Blincyto, MGD011), CD3 e BCMA (EM801) ou CD3 e CD20 (REGN1979). Nas modalidades em que o câncer é AML, o anticorpo terapêutico biespecífico ou seu fragmento pode abranger um que tem como alvo CD3 e CD33 (AMG-330, AMG-673, AMV-654), CD3 e CD123 (MGD006/S80880, JNJ-63709178), CD3 e CLL-1 ou CD3 e WT1. No contexto de tumores sólidos, incluindo câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) e câncer de mama, o anticorpo terapêutico biespecífico ou seu fragmento pode abranger um que tem como alvo CD3 e EGFR (EGFRBi-aATC), CD3 e HER2 (ertumaxomabe) ou CD3 e EpCAM (Catumaxomabe, MT110/AMG 110/Solitomabe).
[00100] Nas modalidades, o API adicional pode ser formulado para coadministração com uma composição MPC-0767 em uma forma de dosagem única. As APIs adicionais também podem ser administradas separadamente da forma de dosagem que compreende o MPC-0767. Quando o agente ativo adicional é administrado separadamente do MPC-0767, ele pode ser pela mesma ou por uma via de administração diferente e/ou ao mesmo ou em outro momento.
[00101] Nas modalidades, o API adicional para uso em terapia de combinação com MPC-0767 é selecionada a partir de um agente quimioterapêutico, um inibidor de proteína cinase (PKI), um inibidor de FLT3, um inibidor de PD-1/PD-L1, um inibidor de CTLA-4, um inibidor da via Bcl-2, um inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK, um inibidor da EZH2, trióxido arsênico (ATO) e um inibidor da DNA metiltransferase (DNMT).
[00102] Nas modalidades, o agente quimioterapêutico é um agente antineoplásico à base de platina, um inibidor da topoisomerase, um inibidor metabólico de nucleosídeo, um agente alquilante, um agente intercalante, um agente de ligação à tubulina, um inibidor da reparação do DNA e combinações dos mesmos. Nas modalidades, o agente quimioterapêutico é selecionado dentre docetaxel, carboplatina, cisplatina e pemetrexedo.
[00103] Nas modalidades, o PKI é um PKI direcionado ao EGFR ou HER2. Nas modalidades, o PKI é selecionado entre erlotinibe, afatinibe, lapatinibe, dacomitinibe, gefitinibe, AP32788, poziotinibe, osimertinibe e EGF816, e combinações dos mesmos.
[00104] Nas modalidades, o inibidor de FLT3 é selecionado a partir de crenolanibe, tandutinibe, gilteritinibe, midostaurina, quizartinibe e sorafenibe.
[00105] Nas modalidades, o inibidor de PD-1/PD-L1 é um agente que inibe a sinalização de PD-1 e seus ligantes PD-L1/2 e é selecionado entre AMP-224, AMP-514/MEDI-0680, atezolizumabe (Tenectriq ®, MPDL3280A), avelumabe (MSB0010718C), BGB-A317, BMS936559, cemiplimabe (REGN2810), durvalumabe (MEDI-4736), JTX-4014, nivolumabe (Opdivo®, BMS-936558), pembrolizumabe MK (3475) e SHR-120.
[00106] Nas modalidades, o inibidor de CTLA-4 é Ipilimumabe
(Yervoy®).
[00107] Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado entre ABT-737, AT-101 (Gossypol), APG-1252, A1155463, A1210477, navitoclax, obatoclax, sabutoclax, venetoclax, S 55746 e WEHI-539. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é um inibidor de BCL2, BCLXL ou MCL1. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado entre AMG-176, MIK665 e S641315. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado dentre ABT-737, navitoclax e venetoclax. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é venetoclax. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado a partir de TW-37 (Wang et al., J Med Chem. 19 de outubro de 2006; 49 (21): 6139-42) e HA14-1 (Wang et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 20 de junho de 2000; 97 (13): 7124-9).
[00108] Nas Modalidades, o inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK é selecionado a partir de um inibidor de Raf, como vemurafenibe, sorafenibe ou dabrafenibe, um inibidor de MEK, como AZD6244 (Selumetinibe), PD0325901, GSK1120212 (Trametinibe), U0126- EtOH, PD18435 , RDEA119 (Rafametinibe), PD98059, BIX 02189, MEK162 (Binimetinibe), AS-703026 (Pimasertibe), SL-327, BIX02188, AZD8330, TAK-733, cobimetinibe ou PD318088 e um inibidor de ERK como LY3214996, BV ou GDC-0994.
[00109] Nas modalidades, o inibidor de EZH2 é selecionado entre EPZ6438, CPI-1205, GSK343, GSK2816126, MAK-683 e PF-
06821497.
[00110] Nas modalidades, o API adicional para uso em terapia de combinação com MPC-0767 é trióxido arsênico (ATO).
[00111] Nas modalidades, o inibidor de DNA metiltransferase (DNMT) é 5'azacitidina.
[00112] Nas modalidades, o API adicional para uso em terapia de combinação com MPC-0767 é selecionado a partir de inibidor de
CTLA-4, um inibidor de HDAC, um ImiD, um inibidor de VEGF, como um anticorpo anti-VEGFR, um inibidor de mTOR como everolimo ou tensirolimo, um inibidor de metilação do DNA, um agonista ou antagonista de hormônio esteroide, um inibidor de enzima metabólica, um inibidor de proteassoma, um anticorpo anti-CD20, um antagonista do receptor de adenosina 2A, um agonista ou antagonista do receptor de pedágio e uma citocina imunoestimuladora.
[00113] Nas modalidades, o API adicional para uso em terapia de combinação com MPC-0767 é selecionado a partir de daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, mitoxantrona, idarrubicina e citarabina e combinações dos mesmos. Nas modalidades, o API adicional é selecionado a partir de crenolanibe, citarabina, daunorrubicina, gilteritinibe, sorafenibe e venetoclax. Nas modalidades, o API adicional é venetoclax.
[00114] Nas modalidades, o API adicional para uso em terapia de combinação com MPC-0767 é selecionado a partir de um inibidor da via mTOR, um inibidor de PI3K, um inibidor duplo de PI3K/mTOR, um inibidor de SRC, um inibidor de VEGF, uma Janus cinase (JAK) inibidor, um inibidor de Raf, um inibidor de Erk, um inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK, um inibidor de Akt, um inibidor de farnesiltransferase, um inibidor de c-MET, um inibidor de modulação da histona, um agente antititótico, uma tirosina cinase inibidor (TKI), um antibiótico poliéter, um inibidor de CTLA-4, um inibidor de efluxo de resistência a vários fármacos, um inibidor de efluxo de resistência a vários fármacos e uma citocina terapêutica, como a interleucina-2 (IL- 2).
[00115] Nas modalidades, o inibidor de mTOR é selecionado a partir do grupo que consiste em rapamicina (também chamado sirolimo), everolimo, tensirolimo, ridaforolimo, umirolimo, zotarolimo, AZD8055, INK128, WYE-132, Torin-1, pirazolopirimidina, análogos de
PP242, pirazolopirimidina PP242, análogos de PP242 PP487, PP121, KU0063794, KU-BMCL-200908069-1, Wyeth-BMCL-200910075-9b, INK-128, XL388, AZD8055, P2281 e P529. Veja, por exemplo, Liu et al. Drug Disc. Hoje Ther. Strateg., 6 (2): 47-55 (2009).
[00116] Nas modalidades, o inibidor de mTOR é ácido trans-4-[4- amino-5-(7-metóxi-1H-indol-2-il)imidazo[5,1-f] [1,2,4]triazin-7-il]ciclo- hexano carboxílico (também conhecido como OSI-027) e quaisquer sais, solvatos, hidratos e outras formas físicas, cristalinas ou amorfas. Veja US 2007/0112005. OSI-027 pode ser preparado de acordo com US 2007/0112005, aqui incorporado por referência. Em uma forma de realização, o inibidor de mTOR é OXA-01. Veja, por exemplo, WO 2013152342 A1.
[00117] Nas modalidades, o inibidor de PI3K é selecionado do grupo que consiste em GS-1101 (Idelalisibe), GDC0941 (Pictilisibe), LY294002, BKM120 (Buparlisibe), PI-103, TGX-221, IC-87114, XL 147, ZSTK474, BYL719, AS-605240, PIK-75, 3-metiladenina, A66, PIK-93, PIK-90, AZD6482, IPI-145 (Duvelisibe), TG100-115, AS- 252424, PIK294, AS-604850, GSK2636771, BAY 80- 6946 (Copanlisibe), CH5132799, CAY10505, PIK-293, TG100713, CZC24832 e HS-173.
[00118] Nas modalidades, o inibidor duplo de PI3K/mTOR é selecionado do grupo que consiste em, GDC-094, WAY-001, WYE- 354, WAY-600, WYE-687, Wyeth-BMCL-200910075-16b, Wyeth- BMCL-200910096 -27, KU0063794 e KUBMCL-200908069-5, NVP- BEZ235, XL-765, PF-04691502, GDC-0980 (Apitolisibe), GSK1059615, PF-05212384, BGT226, PKI-402, VS-558 e GSK2126458. Veja, por exemplo, Liu et al. Drug Disc. Today Ther. Strateg., 6 (2): 47-55 (2009), aqui incorporado por referência.
[00119] Nas modalidades, o inibidor da via mTOR é um polipeptídeo (por exemplo, um anticorpo ou seu fragmento) ou um ácido nucleico (por exemplo, um RNA interferente pequeno de fita dupla, um RNA em forma de grampo de cabelo curto, um micro-RNA, um oligonucleotídeo antissenso, um ácido nucleico bloqueado ou um aptâmero) que se liga e inibe o nível ou atividade de expressão ou uma proteína (ou ácido nucleico que codifica a proteína) na via mTOR. Por exemplo, o polipeptídeo ou ácido nucleico inibe o Complexo 1 de mTOR (mTORC1), proteína reguladora do mTOR (Raptor), proteína 8 letal ao mamífero com SEC13 (MLST8), substrato Akt rico em prolina de 40 kDa (PRAS40), proteína que interage com mTOR contendo domínio DEP (DEPTOR), Complexo mTOR 2 (mTORC2), companheiro de mTOR (RICTOR) insensível à rapamicina (RICTOR), subunidade beta da proteína G (GβL), proteína 1 de interação com proteína cinase ativada pelo estresse de mamífero (mSIN1), paxilina, RhoA, substrato 1 da toxina botulínica C3 relacionada com Ras (Rac1), homólogo da proteína 42 de controle da divisão celular (Cdc42), proteína cinase Cα (PKCα), proteína serina/treonina cinase Akt, fosfoinositida 3-cinase (PI3K), p70S6K, Ras e/ou proteínas de ligação ao fator de iniciação da translação eucariótica 4E (eIF4E) (4EBPs) ou o ácido nucleico que codifica uma dessas proteínas.
[00120] Nas modalidades, o inibidor de SRC é selecionado do grupo que consiste em bosutinibe, saracatinibe, dasatinibe, ponatinibe, KX2-391, XL-228, TG100435/TG100855 e DCC2036. Veja, por exemplo, Puls et al. Oncologist. Maio de 2011; 16 (5): 566-578. Em uma forma de realização, o inibidor de SRC é um polipeptídeo (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo) ou ácido nucleico (por exemplo, um RNA interferente pequeno de fita dupla, um RNA em forma de grampo de cabelo curto, um micro-RNA, um oligonucleotídeo antissenso, um ácido nucleico bloqueado, ou um aptâmero) que se liga e inibe o nível de expressão ou atividade da proteína SRC ou de um ácido nucleico que codifica a proteína SRC.
[00121] Nas modalidades, o inibidor de VEGF é selecionado dentre axitinibe, bevacizumabe, cabozantinbe, lenvatinibe, motesanibe, pazopanibe, regorafenibe, sorafenibe e sunitinibe. Nas modalidades, o inibidor de VEGF é um polipeptídeo (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo) ou ácido nucleico (por exemplo, um RNA interferente pequeno de fita dupla, um RNA em forma de grampo de cabelo curto, um micro-RNA, um oligonucleotídeo antissenso, um morfolino, um ácido nucleico bloqueado ou um aptâmero) que se liga e inibe o nível de expressão ou atividade de uma proteína VEGF, uma proteína receptora de VEGF ou um ácido nucleico que codifica uma dessas proteínas. Por exemplo, o inibidor de VEGF é um receptor solúvel de VEGF (por exemplo, um receptor solúvel de VEGF-C/D (sVEGFR-3)).
[00122] Nas modalidades, o inibidor de JAK é selecionado a partir de facitinibe, ruxolitinibe, baricitinibe, CYT387 (número CAS 1056634- 68-4), lestaurtinibe, pacritinibe e TG101348 (número CAS 936091-26- 8). Em uma forma de realização, o inibidor de JAK é um polipeptídeo (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo) ou ácido nucleico (por exemplo, um RNA interferente pequeno de fita dupla, um RNA em forma de grampo de cabelo curto, um micro-RNA, um oligonucleotídeo antissenso, um morfolino, um ácido nucleico bloqueado ou um aptâmero) que se liga e inibe o nível de expressão ou atividade de um JAK (por exemplo, JAK1, JAK2, JAK3 ou TYK2) ou um ácido nucleico que codifica a proteína JAK.
[00123] Nas modalidades, o inibidor de Raf é selecionado entre PLX4032 (vemurafenibe), sorafenibe, PLX-4720, GSK2118436 (dabrafenibe), GDC-0879, RAF265, AZ 628, NVP-BHG712, SB90885, ZM 336372, GW5074, TAK-632, CEP -32496 e LGX818 (Encorafenibe). Nas modalidades, o inibidor de Raf é um polipeptídeo (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo) ou ácido nucleico (por exemplo, um RNA interferente pequeno de fita dupla, um RNA em forma de grampo de cabelo curto, um micro-RNA, um oligonucleotídeo antissenso, um morfolino, um ácido nucleico bloqueado ou um aptâmero) que se liga e inibe o nível de expressão ou atividade de um Raf (por exemplo, A-Raf, B-Raf, C-Raf) ou um ácido nucleico que codifica o Raf proteína.
[00124] Nas modalidades, o inibidor de ERK é selecionado dentre LY3214996, BVD-523 e GDC-0994.
[00125] Nas modalidades, o inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK é um inibidor de Raf ou um inibidor de Erk, como descrito acima. Nas modalidades, o inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK é um inibidor da MEK selecionado entre AZD6244 (Selumetinibe), PD0325901, GSK1120212 (Trametinibe), U0126-EtOH, PD184352, RDEA119 (Rafametinibe), PD98059, BIX 02189, MEK162 (Binimetinibe), AS- 703026 (Pimasertibe), SL-327, BIX02188, AZD8330, TAK-733, cobimetinibe e PD318088. Nas modalidades, o inibidor de MEK é um polipeptídeo (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo) ou ácido nucleico (por exemplo, um RNA interferente pequeno de fita dupla, um RNA em forma de grampo de cabelo curto, um micro-RNA, um oligonucleotídeo antissenso, um morfolino, um ácido nucleico bloqueado ou um aptâmero) que se liga e inibe o nível de expressão ou a atividade de uma MEK (por exemplo, MEK-1, MEK-2) ou um ácido nucleico que codifica a proteína MEK.
[00126] Nas modalidades, o inibidor de Akt é selecionado entre MK- 2206, KRX-0401 (perifosina), GSK690693, GDC-0068 (Ipatasertibe), AZD5363, CCT128930, A-674563, PHT-427. Nas modalidades, o inibidor de Akt é um polipeptídeo (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo) ou ácido nucleico (por exemplo, um RNA interferente pequeno de fita dupla, um RNA em forma de grampo de cabelo curto, um micro-RNA, um oligonucleotídeo antissenso, um morfolino, um ácido nucleico bloqueado ou um aptâmero) que se liga e inibe o nível de expressão ou atividade de um Akt (por exemplo, Akt-1, Akt-2, Akt-3) ou um ácido nucleico que codifica uma proteína Akt.
[00127] Nas modalidades, o inibidor de farnesiltransferase é selecionado a partir de LB42708 ou tipifarnibe. Em uma forma de realização, o inibidor da farnesiltransferase é um polipeptídeo (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo) ou ácido nucleico (por exemplo, um RNA interferente pequeno de fita dupla, um RNA em forma de grampo de cabelo curto, um micro-RNA, um oligonucleotídeo antissenso, um morfolino, um ácido nucleico bloqueado ou um aptâmero) que se liga e inibe o nível de expressão ou atividade da farnesiltransferase ou de um ácido nucleico que codifica a proteína farnesiltransferase.
[00128] Nas modalidades, o inibidor de c-MET é selecionado a partir de crizotinibe, tivantinibe, cabozantinibe, foretinibe. Em uma forma de realização, o inibidor de c-MET é um polipeptídeo (por exemplo, um anticorpo ou seu fragmento, exemplificado por onartuzumabe) ou ácido nucleico (por exemplo, um RNA interferente pequeno de fita dupla, um RNA em forma de grampo de cabelo curto, um micro-RNA, um oligonucleotídeo antissenso, um morfolino, um ácido nucleico bloqueado ou um aptâmero) que se liga e inibe o nível de expressão ou atividade de c-MET ou um ácido nucleico que codifica a proteína c-MET ou o ligante HGF, como ficlatuzumabe ou rilotumumabe.
[00129] Nas modalidades, o inibidor modulador de histona é selecionado a partir de ácido anacárdico, C646, MG149 (histona acetiltransferase), GSK J4 Hcl (histona desmetilase), MAK-683 (inibidor de PRC2), BIX 01294 (histona metiltransferase), MK0683 (Vorinostat), MS275 (Entinostat), LBH589 (Panobinostat), Tricostatina A, MGCD0103 (Mocetinostat), Tasquinimode, TMP269, Nexturastate
A, RG2833 e PDX101 (Belinostate) . Nas modalidades, o inibidor de modulação de histona é um inibidor da EZH64K3 de EZH64343. Tazemetostate), CPI-1205, GSK2816126 e PF-06821497.
[00130] Nas modalidades, o agente antimitótico é selecionado a partir de Griseofulvina, tartarato de vinorelbina, paclitaxel, docetaxel, vincristina, vimblastina, Epotilona A, Epotilona B, ABT-751, CYT997 (Lexibulina), tartarato de vinflunina, Fosbretabulina, GSK191364 Rigosertibe), Ro3280, BI2536, NMS-P937, BI 6727 (Volasertibe), HMN-214 e MLN0905.
[00131] Nas modalidades, o inibidor de tirosina-cinase (TKI) é selecionado entre Votriente, Axitinibe, Bortezomibe, Bosutinibe, Carfilzomibe, Crizotinibe, Dabrafenibe, Dasatinibe, Erlotinibe, Gefitinibe, Ibrutinibe, Imatinibe, Lapatinibe, Nilotinora, Regilotina, Sunitinibe, Trametinibe, Vandetanibe, Vemurafenibe e Vismodegibe.
[00132] Em uma forma de realização, o antibiótico poliéter é selecionado a partir de monensina de sódio, nigericina, valinomicina, salinomicina.
[00133] Nas modalidades, o inibidor de CTLA-4 é selecionado a partir de trenlimumabe e ipilimumabe.
[00134] Nas modalidades, o pelo menos um (s) API (s) adicional (ais) é um inibidor de ponto de verificação. O tratamento com esses compostos funciona direcionando moléculas que servem como freios e contrapesos nas respostas imunes. Ao bloquear essas moléculas inibidoras ou, alternativamente, ativar moléculas estimuladoras, esses tratamentos são projetados para desencadear ou melhorar respostas imunes anticâncer pré-existentes. Nas modalidades, o inibidor do ponto de verificação pode ser selecionado a partir de um anticorpo, como um anticorpo anti-CD27, um anticorpo anti-B7-H3, um anticorpo anti-KIR, um anticorpo anti-LAG-3, um anti-4-1BB/CD137 anticorpo, um anticorpo anti-GITR (por exemplo, TRX518, MK-4166),
pembrolizumabe (Keytruda™, um anticorpo PD-1), MPDL3280A (um anticorpo PD-L1), varlilumabe (CDX-1127, um anticorpo anti-CD27) , MGA217 (um anticorpo que direciona B7-H3), lirilumabe (um anticorpo KIR), BMS-986016 (um anticorpo LAG-3), urelumabe (um anticorpo 4- 1BB/CD137), um anticorpo anti-TIM3, MEDI-0562 (um anticorpo OX40), SEA-CD40 (um anticorpo anti-CD40), tremelimumabe (anticorpo anti-CTLA4), um anticorpo anti-OX40 e um anticorpo anti- CD73. Nas modalidades, o inibidor do ponto de verificação é selecionado a partir do inibidor de pequenas moléculas de CD73 (como descrito, por exemplo, em Cancer Immunol Res 2016; 4 (11 Supl): Resumo nº PR10). Nas modalidades, o inibidor do ponto de verificação é selecionado a partir de varlilumabe, MGA217 , lirilumabe, BMS-986016, urelumabe, MEDI-0562, SEA-CD40, TRX518 ou MK-
4166.
[00135] Nas modalidades, o API adicional é um inibidor de reparo de DNA selecionado de olaparibe, rucaparibe, niraparibe, talazoparibe veliparibe, CEP-9722 e CEP-8983.
[00136] Nas modalidades, o(s) API(s) adicionais é(são) selecionado(s) a partir de ddAC, panobinostate, exemestano, letrozol, esartinibe, merestinibe, mocetinostate, etinostate, motolimod, ibrutinibe, lenalidomida, idelalisibe, enzalutamida, prednisona, dexametazina, vinflunina, vinflunina, vinflunina, leucovorina, guadecitabina, trametinibe, vemurafenibe, dacarbazina, apatinibe, pomalidomida, carfilzomibe, sorafenibe, 5-fluorouracil, CB-839, CB- 1158, GDC-0919, LXH254, AZD4635, AZD9150, PLX3397, LCLH164, LXH254, AZD4635, AZD9150, 501 trastuzumabe, obinutuzumabe, B- 701, utomilumabe, rituximabe, NKTR-214, PEGInterferon 2A, RO7009789, MEDI9447, MK-1248, LY2510924, ARRY-382, MEDI0562, LAG525, NIS793, GWN323, TS922R REGN3767.
[00137] Nas modalidades, o API adicional é direcionado à terapia direcionada, em que o tratamento tem como alvo os genes, proteínas ou o ambiente tecidual específico do câncer que contribui para o crescimento e a sobrevivência do câncer. Este tipo de tratamento bloqueia o crescimento e a disseminação das células cancerígenas, limitando os danos às células saudáveis. Nas modalidades, o pelo menos um API adicional é direcionado para a terapia antiangiogênese, em que o tratamento se concentra em interromper a angiogênese, que é o processo de fabricação de novos vasos sanguíneos. Como um tumor precisa que os nutrientes fornecidos pelos vasos sanguíneos cresçam e se espalhem, o objetivo das terapias antiangiogênese é "matar de fome" o tumor. Um fármaco antiangiogênico, o bevacizumabe (Avastin), demonstrou retardar o crescimento do tumor em pessoas com carcinoma renal metastático. O bevacizumabe combinado com o interferon diminui o crescimento e a disseminação do tumor.
[00138] Nas modalidades, o API adicional é direcionado para a imunoterapia, também chamada de terapia biológica, que é projetada para aumentar as defesas naturais do corpo para combater o câncer. Utiliza materiais fabricados pelo organismo ou em laboratório para melhorar, direcionar ou restaurar a função do sistema imunológico. Por exemplo, a interleucina-2 (IL-2) é um fármaco usado para tratar o câncer de rim, bem como o AM0010 e a interleucina-15. São hormônios celulares chamados citocinas produzidas pelos glóbulos brancos e são importantes na função do sistema imunológico, incluindo a destruição das células tumorais. O interferon alfa é outro tipo de imunoterapia usada para tratar o câncer renal que se espalhou. O interferon parece alterar as proteínas na superfície das células cancerígenas e retardar o seu crescimento. Muitas terapias de combinação de IL-2 e alfa-interferon para pacientes com câncer renal avançado combinadas com quimioterapia são mais eficazes que IL-2 ou interferon isoladamente.
[00139] Nas modalidades, o API adicional é uma vacina contra o câncer, projetada para provocar uma resposta imune contra antígenos específicos ou associados a tumores, incentivando o sistema imunológico a atacar células cancerígenas portadoras desses antígenos. Nas modalidades, a vacina contra o câncer é AGS-003, DCVax, NY-ESO-1 ou uma vacina personalizada derivada das células cancerígenas do paciente.
[00140] Nas modalidades, o API adicional é um imunoestimulante, como uma proteína recombinante, usada para ativar o sistema imunológico para atacar células cancerígenas. Nas modalidades, o imunoestimulante é denenicocina (IL-21 recombinante).
[00141] Nas modalidades, o API adicional é uma molécula pequena que modula o sistema imunológico para incentivar a eliminação de células cancerígenas. Nas modalidades, a molécula pequena é o epacadostate ou navoximode (ambos inibidores de IDO) ou PLX3397 (um inibidor de CSF-1R).
[00142] Nas modalidades, o API adicional pode ser as células imunes do próprio paciente que foram removidas de um paciente, modificadas geneticamente ou tratadas com produtos químicos para melhorar sua atividade e, em seguida, reintroduzidas no paciente com o objetivo de melhorar a resposta anticâncer do sistema imunológico.
[00143] "Terapia de combinação" também abrange a administração de MPC-0767 em combinação adicional com terapias de não fármaco (por exemplo, cirurgia ou tratamento com radiação). Quando a terapia de combinação compreende ainda um tratamento de não fármaco, o tratamento de não fármaco pode ser realizado a qualquer momento adequado, desde que seja alcançado um efeito benéfico da ação da combinação dos compostos terapêuticos e tratamento de não fármaco. Por exemplo, em casos apropriados, o efeito benéfico ainda é alcançado quando o tratamento de não fármaco é removido temporariamente da administração dos compostos terapêuticos, talvez por dias ou até semanas.
[00144] O tratamento de não fármaco pode ser selecionado a partir de quimioterapia, radioterapia, terapia hormonal, terapia antiestrogênio, terapia gênica, cirurgia (por exemplo, nefrectomia radical, nefrectomia parcial, cirurgia laparoscópica e robótica), ablação por radiofrequência e crioablação. Por exemplo, uma terapia não farmacosa é a remoção de um ovário (por exemplo, para reduzir o nível de estrogênio no corpo), toracocentese (por exemplo, para remover líquido do peito), paracentese (por exemplo, para remover líquido do abdômen), cirurgia para remover ou reduzir angiomiolipomas, transplante de pulmão (e opcionalmente com um antibiótico para evitar infecções devido a transplante) ou oxigenoterapia (por exemplo, através de uma cânula nasal contendo dois pequenos tubos ou pinos plásticos que são colocados nas duas narinas, uma máscara facial que se encaixa sobre o nariz e a boca, ou através de um pequeno tubo inserido na traqueia pela frente do pescoço, também chamada oxigenoterapia transtraqueal). Ensaios de Biomarcadores para Diagnóstico e Tratamento
[00145] Nas modalidades, a descrição fornece biomarcadores que podem ser usados para prever a sensibilidade de um câncer ao tratamento com um inibidor de HSP90 e, em particular, sensibilidade ao MPC-0767. Nesse contexto, "sensibilidade" refere-se à resposta à terapia ou à resposta terapêutica associada ao tratamento do câncer, por exemplo, conforme descrito na seção abaixo, intitulada "Tratamento do câncer". Os termos "capacidade de resposta" no contexto de resposta a uma terapia anticâncer, como MPC-0767, e 'sensibilidade' no contexto de sensibilidade ao tratamento com uma terapia anticâncer, como MPC-0767, são usados de forma intercambiável aqui.
[00146] Nas modalidades, a descrição fornece métodos para o tratamento de um câncer ou previsão da capacidade de resposta de um câncer ao tratamento com um inibidor de HSP90 e, em particular, sensibilidade ao MPC-0767, os métodos compreendendo determinar ou receber o status de um ou mais biomarcadores de resistência ou sensibilidade ao MPC- 0767. Por exemplo, quando aqui descrito, as células cancerígenas da LMA que abrigam mutações ativadoras no FLT3, e particularmente as mutações do FLT3-ITD, são altamente sensíveis à atividade citotóxica do MPC-0767. Assim, a descrição fornece métodos para o tratamento da LMA e métodos para prever a responsividade ao tratamento com um inibidor de HSP90 e, em particular, sensibilidade ao MPC-0767, os métodos compreendendo determinar ou receber o status de FLT3 da AML.
[00147] Em outras modalidades, o um ou mais biomarcadores de resistência ou sensibilidade a MPC-0767 é uma mutação ativadora em NRAS ou KRAS em células AML com status de FLT3 normal ou do tipo selvagem. Nesse contexto, os termos 'normal' e 'tipo selvagem' são usados de forma intercambiável para se referir ao alelo do tipo selvagem do gene que produz uma proteína com atividade normal. Quando aqui descrita, uma mutação ativadora em NRAS ou KRAS em células AML com um status normal de FLT3 indica que as células cancerígenas provavelmente são resistentes ao tratamento com MPC- 0767, porém, provavelmente respondem ao tratamento com uma terapia de combinação compreendendo MPC- 0767 e um inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK.
[00148] Em outras modalidades, o um ou mais biomarcadores de resistência ou sensibilidade a MPC-0767 são uma mutação em FLT3- ITD ou uma mutação no domínio tirosina-cinase FLT3 (FLT3-TKD).
[00149] Em outras modalidades, o um ou mais biomarcadores de resistência ou sensibilidade a MPC-0767 são KDM6A ou EZH2. Quando aqui descrita, uma mutação de perda de função no KDM6A indica que as células cancerígenas provavelmente são resistentes ao tratamento com MPC-0767, porém, provavelmente respondem ao tratamento com uma terapia de combinação compreendendo MPC- 0767 e um inibidor de EZH2. Nas modalidades, prevê-se que uma mutação da perda de função EZH2 resulte em um câncer que seja responsiva à monoterapia com MPC-0767 e que se prevê que uma mutação de ganho de função EZH2 resulte em um câncer resistente à monoterapia com MPC-0767.
[00150] A descrição fornece biomarcadores que indicam alta sensibilidade das células cancerígenas aos efeitos citotóxicos do MPC-0767. Nas modalidades, a descrição fornece biomarcadores genéticos na forma de uma ou mais variantes em uma sequência polinucleotídica que codifica um gene, por exemplo FLT3, NRAS, KRAS, KDM6A e EZH2. Nas modalidades, a variante polinucleotídica pode resultar em uma alteração de aminoácido na proteína codificada. Nas modalidades, o biomarcador é um marcador de expressão gênica, por exemplo, abundância de mRNA ou proteína, por exemplo, níveis de expressão de KRAS ou NRAS.
[00151] Nas modalidades, as uma ou mais mutações ativadoras em NRAS ou KRAS é uma mutação na sequência polinucleotídica que codifica a proteína Ras que resulta em uma alteração de aminoácido selecionada do grupo que consiste em A146T e G13D de KRAS; ou Q61L, Q61H e G12D de NRAS. Nas modalidades, as uma ou mais mutações ativadoras no KRAS é selecionada entre KRAS G12 (V, C, S, R, D, N, A), G13 (D, C), Q22K, Q61 (H, L, R), e K117NA146 (T/V), onde as designações das letras se referem aos símbolos de aminoácidos de uma letra recomendados pela IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission.
[00152] Nas modalidades, a uma ou mais variantes é uma variante em uma sequência polinucleotídica de um gene que faz parte de uma via de sinalização molecular ou sintética, por exemplo, uma via Ras/Raf/MEK/ERK, uma via Bcl-2 ou uma via histona metiltransferase/desmetilase.
[00153] Nas modalidades, os métodos descritos aqui podem incluir a determinação da presença de um ou mais dos biomarcadores descritos aqui em uma amostra biológica de células cancerígenas de um indivíduo. Como observado acima, o biomarcador pode ser um biomarcador genético na forma de uma ou mais variantes em uma sequência polinucleotídica, o que pode resultar em uma alteração de aminoácido na proteína codificada. Por conseguinte, os métodos descritos aqui podem incluir uma etapa de detecção de uma ou mais variantes em uma sequência polinucleotídica. Onde a variante está no éxon de um gene que codifica uma proteína, a variante pode ser detectada no DNA genômico ou no RNA das células cancerígenas.
[00154] Nas modalidades, os métodos podem compreender determinar o genótipo do indivíduo para detectar a presença de um ou mais dos biomarcadores genéticos. O genótipo pode ser determinado por técnicas conhecidas na técnica, por exemplo, métodos baseados em PCR, sequenciamento de DNA, ensaio de fluorescência de 5'exonuclease, sequenciamento por hibridação de sonda, transferência de pontos e análise de hibridização de matriz de oligonucleotídeos, por exemplo, tecnologias de arranjo de alto rendimento ou baixa densidade (também conhecidas como microarranjos e chips de genes) e combinações dos mesmos. Outras técnicas específicas podem incluir hibridação dinâmica específica de alelo, balizas moleculares, métodos baseados em polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (RFLP), métodos baseados em endonucleases de retalho, extensão do iniciador, métodos baseados em 5'-nuclease, ensaios de oligonucleotídeo ligase, ensaios de polimorfismo de conformação de cadeia simples (SSCP), eletroforese em gel com gradiente de temperatura, desnaturação de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC), análise de fusão de alta resolução, métodos de ligação de incompatibilidade de DNA, eletroforese capilar e métodos de sequenciamento de próxima geração (NGS). Os métodos de PCR em tempo real que podem ser usados para detectar SNPs, incluem, por exemplo, ensaios baseados em Taqman ou em balizas moleculares (Patentes U.S. 5.210.015; 5.487.972; e PCT WO 95/13399). A tecnologia de genotipagem também está disponível comercialmente, por exemplo, de empresas como a Applied Biosystems, Inc (Foster City, CA).
[00155] Nas modalidades, o genótipo pode ser determinado por um método selecionado a partir do sequenciamento manual direto, sequenciamento fluorescente automatizado, ensaios de polimorfismo de conformação de cadeia simples (SSCPs), eletroforese em gel desnaturante fixa (CDGE), eletroforese em gel desnaturante em gradiente (DGGE), análise de deslocamento de mobilidade, análise enzimática de restrição, análise heterodúplex, clivagem por incompatibilidade química (CMC) e ensaios de proteção da RNase.
[00156] Nas modalidades, o método de detecção da presença de um biomarcador pode compreender uma etapa de contato com um conjunto de iniciadores específicos de SNP com DNA extraído de uma amostra de células cancerígenas do indivíduo, permitindo que os iniciadores se liguem ao DNA e amplificando o SNP contendo regiões do DNA usando uma reação em cadeia da polimerase.
[00157] Nas modalidades, os métodos descritos aqui podem compreender receber, em um sistema de computador, o genótipo do paciente para um ou mais dos biomarcadores descritos aqui. Em uma forma de realização, um usuário insere o genótipo do paciente no sistema de computador. Em uma forma de realização, o genótipo do paciente é recebido diretamente do equipamento usado na determinação do genótipo do paciente.
[00158] Em outras modalidades, o biomarcador pode ser um marcador de expressão gênica, por exemplo, mRNA ou abundância de proteínas. Os métodos adequados para detectar a expressão gênica de um biomarcador aqui descrito incluem métodos compreendendo análise de expressão de microarranjos, métodos baseados em PCR, hibridação in situ, Northern immunoblotting e técnicas de hibridização de sondas relacionadas, tecnologias de imagem de molécula única como o nCounter® ou métodos de sequenciamento de próxima geração, como RNA-seq™ (Life Technologies) e SAGE technologies™ e combinações dos itens anteriores. Nas modalidades, os métodos podem compreender a detecção da expressão de proteínas usando um método adequado que compreende uma ou mais imuno- histoquímica, espectrofotometria de massa, citometria de fluxo, um ensaio imunoabsorvente ligado à enzima, Western immunoblotting e técnicas de hibridização de sondas relacionadas, imunoensaio multiplex (por exemplo, Luminex® , MesoScale™ Discovery, SIMOA™), tecnologias de imagem de molécula única como o nCounter® e tecnologias proteômicas multiplex baseadas em aptâmeros, como o SOMAscan®.
[00159] Nas modalidades, os métodos podem ainda compreender a obtenção de uma amostra biológica de células cancerígenas do indivíduo que necessita de tratamento, por exemplo, por um procedimento de biópsia. Nesse contexto, um procedimento de biópsia compreende a extração de uma amostra de células ou tecidos cancerígenos compreendendo células cancerígenas do indivíduo. A biópsia pode ser realizada, por exemplo, como uma biópsia incisional, uma biópsia central ou uma biópsia de aspiração, por exemplo,
aspiração por agulha fina.
[00160] Nas modalidades, os métodos podem ainda compreender a obtenção de uma amostra biológica de células cancerígenas do sangue total. Leucemia mieloide aguda (LMA)
[00161] A LMA é um câncer hematopoético com significativa necessidade médica não atendida e opções limitadas de terapia. Foram identificadas múltiplas lesões genéticas que contribuem para a heterogeneidade da doença na LMA e provavelmente explicam a dificuldade histórica no desenvolvimento de novas terapias direcionadas. Veja, por exemplo, Cancer Genome Atlas Research Network, NEJM 2013 368: 2059; Grimwadeet al., Blood 2016 129: 29; Papaemmanuil et al., NEJM 2016; 374: 2209; Breitenbuecheret al., Blood 2009 113: 4074; Kindler et al., Blood 2005 105: 335. A mutação do receptor da superfície celular tirosina-cinase tipo fms (FLT3) é encontrada em ~ 30 % dos pacientes com LMA e está associada a um prognóstico significativamente pior (Papaemmanuil et al., NEJM 2016; 374: 2209). As mutações de FLT3 se enquadram em duas categorias gerais. A primeira são mutações pontuais que ocorrem dentro do loop de ativação do domínio tirosina cinase, levando à ativação constitutiva, por exemplo, em D835. Mutações pontuais específicas que levam a FLT3 constitutivamente ativo incluem mutações nos resíduos F691, D835, N676, I836 e Y842 (Kindler et al. Blood 2005). A segunda são as duplicações em tandem internas (FLT3 ITDs) que ocorrem no ou adjacente ao domínio justa-membrana do receptor. Essas mutações podem variar em tamanho variando de 3 a mais de 400 pares de bases. Como sempre ocorrem em múltiplos de 3, o quadro de leitura é mantido. Estas duplicações estão geralmente contidas no éxon 14, próximo aos resíduos 590-600 de FLT. Um ITD também foi observado dentro do n (Breitenbuecher et al., Blood 2009). Os receptores portadores das mutações de FLT3 ITD são constitutivamente autofosforilados e, portanto, constitutivamente ativos. A via FLT3 ativa cinases a jusante envolvidas na sobrevivência e proliferação celular, incluindo JAK2, STAT3, STAT5, PI3-K e AKT. A PKI midostaurina é aprovada pela FDA para o tratamento de LMA. FLT3 é uma proteína cliente de HSP90 e HSP90 estabiliza a proteína mutante FLT3 ITD. Níveis mais altos de HSP90 estão associados à pior sobrevida de pacientes com LMA após terapia de indução.
[00162] O tratamento padrão da LMA é uma combinação de terapia de indução inicial com citarabina e uma antraciclina, como daunorrubicina, seguida de terapia de consolidação com agentes citotóxicos adicionais, como citarabina, mitxantrona e/ou etoposídeo. Veja Ramos et al. J. Clin. Med. 2015 6: 665; Pratz e Levis, Blood 2017 129: 565. Recentemente, a midostaurina foi aprovada pela U.S. Food and Drug Administration como terapia de primeira linha em combinação com o "padrão de atendimento", indução de citarabina e antraciclina. Inibidores de FLT3 adicionais estão em desenvolvimento clínico (Stone et al. NEJM 2017 377: 454), mas, como ocorre com os inibidores de proteína tirosina cinase em geral, o desenvolvimento de resistência aos inibidores de FLT3 permanece uma preocupação. Veja, por exemplo, Weisberg et al., Oncogene 2010 19: 5120. Um mecanismo principal de resistência ao medicamento são mutações adquiridas no FLT3 que reduzem a ligação ao inibidor. Por exemplo, um paciente com ITD de FLT3 tratado com midostaurina desenvolveu resistência devido a uma mutação na posição N676K, dentro do domínio cinase (Heidel et al., Blood. 2006), e as mutações de FLT3 D835 e F691L guardião conferem resistência ao quizartinibe e sorafenibe. Além disso, os blastos de LMA de um paciente refratário ao crenolanibe continham a mutação F691L e a análise ex vivo desses blastos confirmou a resistência ao crenolanibe e ao gilteritinibe (Lee et al., Blood 2017). Esses achados confirmam a noção de que a mutação de F691L reduz a potência do crenolanibe e do gilteritinibe. Outro mecanismo para o desenvolvimento de resistência a fármacos é a ativação de outras vias de sinalização, como em resposta a fatores estromais no microambiente celular.
[00163] Conforme descrito em mais detalhes nos exemplos abaixo, as células AML com mutações no FLT3 ITD são inesperadamente sensíveis ao tratamento com o MPC-0767, tanto in vitro quanto in vivo. Notavelmente, as células AML que desenvolveram resistência a outros inibidores da proteína tirosina cinase por meio de múltiplos mecanismos diferentes (por exemplo, aquisição de mutações no FLT3 e via sinalização estromal) também permanecem sensíveis ao MPC-
0767. Além disso, MPC-0767 anula a expressão de PD-L1 induzida por interferon gama em células AML primárias. Além disso, o MPC- 0767 atua sinergicamente com vários outros agentes ativos usados no tratamento da LMA, incluindo daunorrubicina, venetoclax, citarabina, crenolanibe, gilteritinibe e sorafenibe. O MPC-0767 também mostrou uma surpreendente capacidade de sinergizar com venetoclax em um estudo sistêmico de xenoenxerto usando células FLT3-ITD AML e melhorou significativamente a sobrevivência dos animais. Tomados em conjunto, os resultados apresentados aqui apoiam o MPC-0767 como uma nova terapia atraente para o tratamento da LBC e outros cânceres, tanto em monoterapia quanto em combinação com outros APIs.
[00164] Por conseguinte, a descrição fornece métodos de tratamento de LMA em um indivíduo em necessidade, administrando ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de MPC-0767. Nas modalidades, o indivíduo em necessidade é aquele cuja AML é caracterizada por ter uma ou mais mutações ativadoras no FLT3 selecionadas da mutação em FLT3 ITD, FLT3 D835, FLT3 I836 e
FLT3 N676K ou no resíduo de F691 guardião. Nas modalidades, a AML é recidivada/refratária ao tratamento com um inibidor da proteína cinase. Nas modalidades, a AML é recidivada/refratária ao tratamento com um inibidor da proteína cinase FLT3. Nas modalidades, a LMA é recidivante/refratária ao tratamento com um ou mais de gilteritinibe, crenolanibe, tandutinibe, midostaurina, quizartinibe e sorafenibe.
[00165] Nas modalidades, a descrição também fornece métodos de terapia de combinação compreendendo MPC-0767 em combinação com o padrão de tratamento de cuidados para LMA. Nas modalidades, MPC-0767 é administrado após terapia de indução inicial com citarabina e uma antraciclina. Nas modalidades, o MPC-0767 é administrado isolado após a terapia de indução inicial ou em combinação com um ou mais de midostaurina, quizartinibe, gilteritinibe, crenolanibe, tandutinibe, venetoclax e sorafenibe. Nas modalidades, MPC-0767 é administrado com venetoclax.
[00166] Nas modalidades, MPC-0767 é administrado após uma terapia inicial que compreende um inibidor de DNA metiltransferase, como 5’azacitidina ou decitabina. Nas modalidades, o MPC-0767 é administrado isolado ou em combinação com o inibidor de DNA metiltransferase.
[00167] Nas modalidades, a descrição também fornece métodos de terapia de combinação compreendendo MPC-0767 em combinação com um ou mais APIs adicionais selecionados de antraciclinas, como daunorrubicina, doxorrubicina, epirubicina, mitoxantrona e idarrubicina; citarabina; inibidores de tirosina-cinase (TKI), como midostaurina, sorefenibe, crenolanibe, quizartinibe, tandutinibe, gilteritinibe, lestaurtinibe, dovitinibe, pacritinibe e XL999; etoposídeo, fludarabina, G-CSF, azacitidina, decitabina, venetoclax, ABT-737, navitoclax, obatoclax, sabutoclax, S 55746, AT-101 (Gossypol) e APG-1252 e combinações de qualquer um dos anteriores.
[00168] Nas modalidades, o um ou mais APIs adicionais para administração em terapia de combinação com MPC-0767 são selecionados a partir de trióxido arsênico (trisenox), cerubidina (cloridrato de daunorrubicina), clafen (ciclofosfamida), ciclofosfamida, citarabina (tarabina PFS), citosar -U (Citarabina), citoxano (ciclofosfamida), cloridrato de daunorrubicina (rubidomicina), cloridrato de doxorrubicina, mesilato de enasidenibe, mesilato de enasidenibe, idamicina (cloridrato de idarrubicina), cloridrato de idarrubicina idhifa (enasidenib mesamida), tioguanina (tabloide), sulfato de vincristina (vincasar PFS), azacitidina e decitabina e combinações de qualquer um dos anteriores.
[00169] Nas modalidades, o (s) API (s) adicional (is) é (são) um inibidor de PD-1/PD-L1 ou um inibidor da via Bcl-2. Nas modalidades, o inibidor de PD-1/PD-L1 é selecionado do grupo que consiste em AMP-224, AMP-514/MEDI-0680, atezolizumabe (MPDL3280A), avelumabe (MSB0010718C), BGB-A317, BMS936559, cemiplimabe (REGN2810), durvalumabe (MEDI-4736), JTX-4014, nivolumabe (BMS-936558), pembrolizumabe (Keytruda, MK-3475) e SHR-1210.
[00170] Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado do grupo que consiste em ABT-737, AT-101 (Gossypol), APG-1252, A1155463, A1210477, navitoclax, obatoclax, sabutoclax, venetoclax, S 55746 e WEHI-539 . Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é um inibidor de BCL2, BCLXL ou MCL1. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado dentre AMG-176, MIK665 e S641315. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado dentre ABT-737, navitoclax e venetoclax. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é venetoclax.
[00171] Nas modalidades, o inibidor de Raf é selecionado entre PLX4032 (vemurafenibe), sorafenibe, PLX-4720, GSK2118436 (dabrafenibe), GDC-0879, RAF265, AZ 628, NVP-BHG712, SB90885,
ZM 336372, GW5074, TAK-632, CEP -32496 e LGX818 (Encorafenibe). Nas modalidades, o inibidor de Raf é um polipeptídeo (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo) ou ácido nucleico (por exemplo, um RNA interferente pequeno de fita dupla, um RNA em forma de grampo de cabelo curto, um micro-RNA, um oligonucleotídeo antissenso, um morfolino, um ácido nucleico bloqueado ou um aptâmero) que se liga e inibe o nível de expressão ou atividade de um Raf (por exemplo, A-Raf, B-Raf, C-Raf) ou um ácido nucleico que codifica a proteína Raf.
[00172] Nas modalidades, o inibidor de EZH2 é selecionado entre GSK343, EPZ6438 (Tazemetostate), CPI-1205, GSK2816126 e PF-
06821497.
[00173] Nas modalidades, a AML é caracterizada por uma mutação em FLT3-ITD e o método compreende venetoclax como o API adicional.
[00174] Nas modalidades, o indivíduo que precisa de tratamento é aquele cujo câncer é refratário ou recidivou após o tratamento com gilteritinibe, midostaurina ou sorafenibe. Leucemia linfocítica crônica (LLC)
[00175] A LLC é um dos tipos mais comuns de leucemia em adultos. É caracterizada pelo acúmulo progressivo de linfócitos anormais. Cerca de 10 % dos pacientes com LLC não tratados apresentam uma deleção cromossômica 17p que remove a atividade supressora de tumor. Essa mutação ocorre em cerca de 20 % dos pacientes com LLC recidivada. O venetoclax oral foi aprovado pela U.S. Food and Drug Administration para o tratamento da LLC em pacientes com câncer recidivado ou refratário e portadores da mutação 17p.
[00176] Como discutido acima e mostrado com mais detalhes infra, o MPC-0767 em combinação com o venetoclax mostrou uma atividade sinérgica notável. Estes resultados sugerem que MPC-0767 pode ser particularmente eficaz quando administrado em combinação com um inibidor de Bcl-2. Como observado acima e descrito mais detalhadamente nos exemplos, o MPC-0767 também revoga a expressão de PD-1 induzida por interferon gama em células AML primárias, sugerindo que o MPC-0767 também pode ser particularmente eficaz em combinação com inibidores de PD-1/PD-L1. Por conseguinte, a descrição também fornece métodos de tratamento de CLL em um indivíduo em necessidade, administrando ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de MPC-0767 em combinação com um ou mais APIs adicionais. Nas modalidades, o (s) API (s) adicional (ais) é um inibidor de PD-1/PD-L1 ou um inibidor da via Bcl-2. Nas modalidades, o inibidor de PD-1/PD-L1 selecionado do grupo que consiste em AMP-224, AMP-514/MEDI-0680, atezolizumabe (MPDL3280A), avelumabe (MSB0010718C), BGB- A317, BMS936559, cemiplimabe (REGN2810) , durvalumabe (MEDI- 4736), JTX-4014, nivolumabe (BMS-936558), pembrolizumabe (Keytruda, MK-3475) e SHR-1210. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado a partir do grupo que consiste em ABT -737, AT- 101 (Gossypol), APG-1252, A1155463, A1210477, navitoclax, obatoclax, sabutoclax, venetoclax, S 55746 e WEHI-539. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é um inibidor de BCL2, BCLXL ou MCL1. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é selecionado dentre AMG-176, MIK665 e S641315. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl- 2 é selecionado dentre ABT-737, navitoclax e venetoclax. Nas modalidades, o inibidor da via Bcl-2 é venetoclax. Câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC)
[00177] EGFR e HER2 são receptores de proteínas cinase transmembranares que iniciam vias de transdução de sinal intracelular que regulam a diferenciação celular, proliferação, motilidade e sobrevivência. A ativação aberrante desses receptores pode surgir através de mutações pontuais, deleções ou inserções, resultando em sinalização constitutiva pelo receptor e ativação das vias auxiliares. A ativação aberrante desses receptores está diretamente ligada à oncogênese em vários tipos de câncer, incluindo o NSCLC.
[00178] Tanto o EGFR como o HER2 também são proteínas clientes da HSP90. Demonstrou-se que EGFR e HER2 estão degradados de uma maneira dependente de proteassoma após tratamento com inibidores de HSP90.
[00179] Cerca de 4-20 % do NSCLC são caracterizados por mutações no EGFR ins20. Os cânceres com essas mutações geralmente também são refratários às terapias direcionadas ao EGFR, ou recidivam após tais terapias, incluindo as PKIs direcionados ao EGFR.
[00180] Por conseguinte, a presente descrição fornece métodos que buscam explorar a dependência de certos cânceres NSCLC da HSP90 para estabilizar o EGFR mutante e o HER, através do uso de inibição farmacológica da HSP90. Em particular, os métodos exploram a suscetibilidade de tumores NSCLC portando mutações no exon20 de EGFR e/ou HER2.
[00181] Nas modalidades, a descrição fornece métodos para o tratamento de NSCLC em um indivíduo que necessita desse tratamento, os métodos compreendendo a administração de MPC- 0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao indivíduo. Nas modalidades, o indivíduo é um portador de um câncer que não responde ou é refratário ou recidivou após o tratamento com um 'padrão de atendimento' ou agente terapêutico de primeira linha contra o NSCLC.
[00182] Nas modalidades, a descrição também fornece métodos de tratamento de NSCLC com base na terapia de combinação com MPC-
0767 e um ou mais APIs adicionais, conforme discutido acima. Nas modalidades, os APIs adicionais são selecionadas de afatinibe, AP32788, poziotinibe, osimertinibe, erlotinibe, gefitinibe, bragatinibe, dacomitinibe, lapatinibe, AP32788, crizotinibe, brigatinibe, ceritinibe, alectinibe, AP26113, PF-064622, X-396, RXDX-101, dabrafenibe, tremetinibe, nintedanibe, abemaciclibe, ABP 215, bevacizumabe, ramucirumabe, necitumumabe, ipilimumabe, denosumabe, tremelimumabe, bavituximabe, nivulomabe, atezolizumabe, pembrolizumabe, paclitaxel (Taxol), pemetrexedo, vinorelbina, etoposido, aldoxorrubicina, topotecano, irinotecano e combinações de qualquer um dos anteriores. Quantidades Terapeuticamente Eficazes de MPC-0767
[00183] No contexto dos métodos aqui descritos, a quantidade de MPC-0767 administrada ao indivíduo é uma quantidade terapeuticamente eficaz. O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade suficiente para tratar, melhorar um sintoma, reduzir a gravidade ou reduzir a duração da doença ou distúrbio que está sendo tratado ou, no contexto de terapias de combinação, também pode incluir a quantidade capaz de melhorar o efeito terapêutico de outra terapia ou ingrediente farmacêutico ativo. No contexto da presente descrição, a quantidade terapeuticamente eficaz é a quantidade suficiente para tratar um câncer em um indivíduo necessitado de tal tratamento, como aqui descrito.
[00184] Nas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz de MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, está na faixa de 0,01 mg/kg a 100 mg/kg por dia com base no peso corporal total de um indivíduo humano, em doses únicas ou divididas. Nas modalidades, a faixa é de 10-1000 mg ou de 50-500 mg liberados uma, duas ou três vezes ao dia.
[00185] Nas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz é de cerca de 10 mg, cerca de 50 mg, cerca de 75 mg, cerca de 100 mg, cerca de 250 mg, cerca de 500 mg, cerca de 750 mg ou cerca de 1000 mg, liberados uma, duas ou três vezes ao dia.
[00186] Nas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz é de cerca de 50 mg, cerca de 75 mg, cerca de 100 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg ou cerca de 500 mg, liberados uma, duas ou três vezes ao dia.
[00187] Nas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz de MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, preferivelmente um sal de mesilato, é a quantidade suficiente para atingir uma Cmáx plasmática no indivíduo com dosagem diária variando de 1.500 ng/ml a 30.000 ng/ml, preferivelmente de 6.000 ng/ml a
30.000 ng/ml ou de 6.000 ng/ml a 15.000 ng/ml. Tratamento do Câncer
[00188] Quando aqui usado, "tratamento", "tratando" ou "tratar" descreve o gerenciamento e os cuidados de um paciente com o objetivo de combater uma doença, condição ou distúrbio e inclui a administração de MPC-0767 para aliviar os sintomas ou complicações de uma doença, condição ou distúrbio, ou para eliminar a doença, condição ou distúrbio.
[00189] Nas modalidades de quaisquer dos métodos descritos aqui, incluindo igualmente monoterapia com MPC-0767 e terapias combinadas com um ou mais APIs adicionais, a administração de MPC-0767 ou combinações dos mesmos leva à eliminação de um sintoma ou complicação do câncer a ser tratado, no entanto, a eliminação do câncer não é necessária. Em uma forma de realização, a gravidade do sintoma é diminuída. No contexto do câncer, tais sintomas podem incluir marcadores clínicos de gravidade ou progressão, incluindo o grau em que um tumor secreta fatores de crescimento, degrada a matriz extracelular, torna-se vascularizada,
perde adesão a tecidos justapostos ou metastatiza, bem como o número de metástases e redução no tamanho e/ou volume do tumor.
[00190] O tratamento do câncer de acordo com os métodos aqui descritos pode resultar em uma redução no tamanho de um tumor. Uma redução no tamanho de um tumor também pode ser referida de "regressão do tumor". Preferivelmente, após o tratamento, o tamanho do tumor é reduzido em 5% ou mais em relação ao seu tamanho antes do tratamento; mais preferivelmente, o tamanho do tumor é reduzido em 10% ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 20% ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 30% ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 40% ou mais; ainda mais preferivelmente, reduzido em 50% ou mais; e mais preferivelmente, reduzido em mais de 75% ou mais. O tamanho de um tumor pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição. O tamanho de um tumor pode ser medido como um diâmetro do tumor.
[00191] O tratamento do câncer de acordo com os métodos aqui descritos pode resultar em uma redução no volume do tumor. Preferivelmente, após o tratamento, o volume do tumor é reduzido em 5% ou mais em relação ao seu tamanho antes do tratamento; mais preferivelmente, o volume do tumor é reduzido em 10% ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 20% ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 30% ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 40% ou mais; ainda mais preferivelmente, reduzido em 50% ou mais; e mais preferivelmente, reduzido em mais de 75% ou mais. O volume do tumor pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição.
[00192] O tratamento do câncer de acordo com os métodos aqui descritos pode resultar em uma diminuição no número de tumores. Preferivelmente, após o tratamento, o número de tumores é reduzido em 5% ou mais em relação ao número anterior ao tratamento; mais preferivelmente, o número de tumores é reduzido em 10% ou mais;
mais preferivelmente, reduzido em 20% ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 30% ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 40% ou mais; ainda mais preferivelmente, reduzido em 50% ou mais; e mais preferivelmente, reduzido em mais de 75%. O número de tumores pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição. O número de tumores pode ser medido contando tumores visíveis a olho nu ou com uma ampliação especificada. Preferivelmente, a ampliação especificada é 2x, 3x, 4x, 5x, 10x ou 50x. Para cânceres hematológicos, a contagem pode ser o número de células relacionadas ao câncer (por exemplo, células de linfoma ou leucemia) em uma amostra de sangue.
[00193] O tratamento do câncer de acordo com os métodos aqui descritos pode resultar em uma diminuição no número de lesões metastáticas em outros tecidos ou órgãos distantes do local do tumor primário. Preferivelmente, após o tratamento, o número de lesões metastáticas é reduzido em 5% ou mais em relação ao número anterior ao tratamento; mais preferivelmente, o número de lesões metastáticas é reduzido em 10% ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 20% ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 30% ou mais; mais preferivelmente, reduzido em 40% ou mais; ainda mais preferivelmente, reduzido em 50% ou mais; e mais preferivelmente, reduzido em mais de 75%. O número de lesões metastáticas pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição. O número de lesões metastáticas pode ser medido contando lesões metastáticas visíveis a olho nu ou com uma ampliação especificada. Preferivelmente, a ampliação especificada é 2x, 3x, 4x, 5x, 10x ou 50x.
[00194] O tratamento do câncer de acordo com os métodos aqui descritos pode resultar em um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população de indivíduos tratados em comparação a uma população que recebe apenas veículo.
Preferivelmente, o tempo médio de sobrevivência é aumentado em mais de 30 dias; mais preferivelmente, por mais de 60 dias; mais preferivelmente, por mais de 90 dias; e mais preferivelmente, por mais de 120 dias. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode ser medido por qualquer meio reprodutível. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode ser medido, por exemplo, calculando para uma população o tempo médio de sobrevivência após o início do tratamento. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população também pode ser medido, por exemplo, calculando para uma população o tempo médio de sobrevivência após a conclusão de um primeiro ciclo de tratamento.
[00195] O tratamento do câncer de acordo com os métodos descritos aqui pode resultar em um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população de indivíduos tratados em comparação a uma população de indivíduos não tratados. Preferivelmente, o tempo médio de sobrevivência é aumentado em mais de 30 dias; mais preferivelmente, por mais de 60 dias; mais preferivelmente, por mais de 90 dias; e mais preferivelmente, por mais de 120 dias. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode ser medido por qualquer meio reprodutível. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode ser medido, por exemplo, calculando para uma população o tempo médio de sobrevivência após o início do tratamento. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população também pode ser medido, por exemplo, calculando para uma população o tempo médio de sobrevivência após a conclusão de um primeiro ciclo de tratamento.
[00196] O tratamento do câncer de acordo com os métodos aqui descritos pode resultar em um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população de indivíduos tratados em comparação a uma população recebendo monoterapia com um fármaco que não seja MPC-0767. Preferivelmente, o tempo médio de sobrevivência é aumentado em mais de 30 dias; mais preferivelmente, por mais de 60 dias; mais preferivelmente, por mais de 90 dias; e mais preferivelmente, por mais de 120 dias. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode ser medido por qualquer meio reprodutível. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população pode ser medido, por exemplo, calculando para uma população o tempo médio de sobrevivência após o início do tratamento. Um aumento no tempo médio de sobrevivência de uma população também pode ser medido, por exemplo, calculando para uma população o tempo médio de sobrevivência após a conclusão de um primeiro ciclo de tratamento.
[00197] O tratamento do câncer de acordo com os métodos aqui descritos pode resultar em uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de indivíduos tratados em comparação a uma população que recebe apenas veículo. O tratamento de um distúrbio, doença ou condição de acordo com os métodos aqui descritos pode resultar em uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de indivíduos tratados em comparação a uma população não tratada. O tratamento de um distúrbio, doença ou condição de acordo com os métodos descritos aqui pode resultar em uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de indivíduos tratados em comparação a uma população que recebe monoterapia com um fármaco que não seja MPC-0767. Preferivelmente, a taxa de mortalidade diminui em mais de 2%; mais preferivelmente, em mais de 5%; mais preferivelmente, em mais de 10%; e mais preferivelmente, em mais de 25%. Uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população de indivíduos tratados pode ser medida por qualquer meio reprodutível. Uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população pode ser medida, por exemplo, calculando para uma população o número médio de mortes relacionadas à doença por unidade de tempo após o início do tratamento. Uma diminuição na taxa de mortalidade de uma população também pode ser medida, por exemplo, calculando para uma população o número médio de mortes relacionadas à doença por unidade de tempo após a conclusão de um primeiro ciclo de tratamento.
[00198] O tratamento do câncer de acordo com os métodos aqui descritos pode resultar em uma diminuição na taxa de crescimento do tumor. Preferivelmente, após o tratamento, a taxa de crescimento do tumor é reduzida em pelo menos 5% em relação ao número anterior ao tratamento; mais preferivelmente, a taxa de crescimento de tumor é reduzida em pelo menos 10%; mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 20%; mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 30%; mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 40%; mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 50%; ainda mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 50%; e mais preferivelmente, reduzida em pelo menos 75%. A taxa de crescimento de tumor pode ser medida por qualquer meio reprodutível de medida. A taxa de crescimento de tumor pode ser medida de acordo com uma alteração no diâmetro do tumor por unidade de tempo. Em uma forma de realização, após o tratamento, a taxa de crescimento do tumor pode ser de cerca de zero e é determinada para manter o mesmo tamanho, por exemplo, o tumor parou de crescer.
[00199] O tratamento do câncer de acordo com os métodos aqui descritos pode resultar em uma diminuição no crescimento do tumor. Preferivelmente, após o tratamento, o crescimento do tumor é inferior a 5%; mais preferivelmente, o crescimento do tumor é inferior a 10%; mais preferivelmente, inferior a 20%; mais preferivelmente, inferior a 30%; mais preferivelmente, inferior a 40%; mais preferivelmente, inferior a 50%; ainda mais preferivelmente, inferior a 50%; e mais preferivelmente, inferior a 75%. O crescimento do tumor pode ser medido por qualquer meio reprodutível de medição. O crescimento do tumor é medido, por exemplo, medindo um aumento no diâmetro de um tumor após um encolhimento anterior do tumor que seguiu ao tratamento. Uma diminuição no rebrotamento do tumor é indicada pela falha de reincidência dos tumores após a interrupção do tratamento. Composições e Formulações Farmacêuticas
[00200] A presente descrição fornece composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade de MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, preferivelmente um sal de mesilato, sozinho ou em combinação com um API adicional. De acordo com qualquer uma das modalidades descritas aqui, a composição farmacêutica pode ser adaptado para administração oral, bucal ou parenteral. Nas modalidades, a composição farmacêutica pode ser adaptada para administração pulmonar, por exemplo, por inalação. Nas modalidades, a composição farmacêutica é adaptada para administração oral. Nas modalidades, a composição farmacêutica é adaptada para administração parentérica.
[00201] Nas modalidades, o MPC-0767 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, preferivelmente um sal de mesilato, é combinado com pelo menos um API adicional em uma forma de dosagem única. Nas modalidades, o pelo menos um API adicional é selecionado a partir de um agente supra descrito em conexão com métodos de tratamento usando terapia combinada.
[00202] Uma "composição farmacêutica" é uma formulação que contém os compostos descritos aqui em uma forma farmaceuticamente aceitável adequada para administração a um indivíduo. Quando aqui usado, a frase "farmaceuticamente aceitável" refere-se aos compostos, materiais, composições, veículos e/ou formas de dosagem que são, dentro do escopo do diagnóstico médico seguro, adequados para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação, proporcional a uma relação benefício/risco razoável.
[00203] "Excipiente farmaceuticamente aceitável" significa um excipiente que é útil na preparação de uma composição farmacêutica que geralmente é segura, não tóxica e nem biologicamente nem de outra maneira indesejável, e inclui excipiente aceitável para uso veterinário, bem como uso farmacêutico humano. Exemplos de excipientes farmaceuticamente aceitáveis incluem, sem limitação, líquidos estéreis, água, solução salina tamponada, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, polietileno glicol líquido e similares), óleos, detergentes, agentes de suspensão, carboidratos (por exemplo, glicose, lactose, sacarose ou dextrano), antioxidantes (por exemplo, ácido ascórbico ou glutationa), agentes de quelação, proteínas de baixo peso molecular ou suas misturas adequadas.
[00204] Uma composição farmacêutica pode ser fornecida a granel ou em forma unitária de dosagem. É especialmente vantajoso formular composições farmacêuticas na forma unitária de dosagem para facilidade da administração e uniformidade da dosagem. O termo "forma unitária de dosagem", quando aqui usado, refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para o indivíduo a ser tratado; cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veículo farmacêutico necessário. A especificação para as formas unitárias de dosagem da descrição é ditada e diretamente dependente das características únicas do composto ativo e do efeito terapêutico específico a ser alcançado. Uma forma unitária de dosagem pode ser uma ampola, um frasco, um supositório, uma drágea, um comprimido, uma cápsula,
uma bolsa IV ou uma única bomba em um inalador de aerossol.
[00205] Em aplicações terapêuticas, as dosagens variam dependendo do agente, idade, peso e condição clínica do paciente receptor e da experiência e julgamento do clínico ou praticante que administra a terapia, entre outros fatores que afetam a dosagem selecionada. Geralmente, a dose deve ser uma quantidade terapeuticamente eficaz. As doses podem ser fornecidas em unidades de medida em mg/kg/dia (cuja dose pode ser ajustada para o peso do paciente em kg, área da superfície corporal em m2 e idade em anos). Uma quantidade eficaz de uma composição farmacêutica é aquela que fornece uma melhoria objetivamente identificável, conforme observado pelo clínico ou outro observador qualificado. Por exemplo, aliviar um sintoma de um distúrbio, doença ou condição. Quando aqui usado, o termo "maneira eficaz de dosagem" refere-se a uma quantidade de uma composição farmacêutica para produzir o efeito biológico desejado em um indivíduo ou célula.
[00206] Por exemplo, a forma unitária de dosagem pode compreender 1 nanograma a 2 miligramas ou 0,1 miligramas a 2 gramas; ou de 10 miligramas a 1 grama, ou de 50 miligramas a 500 miligramas ou de 1 micrograma a 20 miligramas; ou de 1 micrograma a 10 miligramas; ou de 0,1 miligramas a 2 miligramas.
[00207] As composições farmacêuticas podem assumir qualquer forma adequada (por exemplo, líquidos, aerossois, soluções, inalantes, névoas, sprays; ou sólidos, pós, unguentos, pastas, cremes, loções, géis, adesivos e similares) para administração por qualquer rotina desejada (por exemplo, pulmonar, inalação, intranasal, oral, bucal, sublingual, parenteral, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intrapleural, intratecal, transdérmica, transmucosal, retal e similares). Por exemplo, uma composição farmacêutica da descrição pode estar na forma de uma solução aquosa ou pó para administração de aerossol por inalação ou insuflação (através da boca ou do nariz), na forma de um comprimido ou cápsula para administração oral; na forma de uma solução ou dispersão aquosa estéril adequada para administração por injeção direta ou por adição a fluidos de infusão estéreis para infusão intravenosa; ou na forma de uma loção, creme, espuma, emplastro, suspensão, solução ou supositório para administração transdérmica ou transmucosal.
[00208] Uma composição farmacêutica pode estar na forma de uma forma de dosagem oralmente aceitável, incluindo, porém, não se limitando a, cápsulas, comprimidos, formas bucais, trociscos, pastilhas e líquidos orais na forma de emulsões, suspensões, dispersões ou soluções aquosas. As cápsulas podem conter misturas de um composto da presente descrição com cargas inertes e/ou diluentes, como amidos farmaceuticamente aceitáveis (por exemplo, amido de milho, batata ou tapioca), açúcares, agentes adoçantes artificiais, celuloses em pó, como celuloses cristalinas e microcristalinas, farinhas, gelatinas, gomas, etc. No caso de comprimidos para uso oral, os veículos que são geralmente usados incluem lactose e amido de milho. Agentes lubrificantes, como estearato de magnésio, também podem ser adicionados. Para administração oral em uma forma de cápsula, diluentes úteis incluem lactose e amido de milho seco. Quando suspensões e/ou emulsões aquosas são administradas oralmente, o composto da presente descrição pode ser suspenso ou dissolvido em uma fase oleosa, é combinado com agentes emulsificantes e/ou de suspensão. Se desejado, certos agentes adoçantes e/ou aromatizantes e/ou corantes podem ser adicionados.
[00209] Uma composição farmacêutica pode estar na forma de um comprimido. O comprimido pode compreender uma dosagem unitária de um composto da presente descrição juntamente com um diluente ou veículo inerte, tal como um açúcar ou álcool de açúcar, por exemplo, lactose, sacarose, sorbitol ou manitol. O comprimido pode ainda compreender um diluente não derivado de açúcar, como carbonato de sódio, fosfato de cálcio, carbonato de cálcio ou uma celulose ou seu derivado, como metil celulose, etil celulose, hidroxipropil metil celulose e amidos, como amido de milho. O comprimido pode ainda compreender agentes de ligação e granulação, como polivinilpirrolidona, desintegrantes (por exemplo, polímeros reticuláveis dilatáveis, como carboximetilcelulose reticulada), agentes lubrificantes (por exemplo, estearatos), conservantes (por exemplo, parabenos), antioxidantes (por exemplo, BHT), agentes de tamponamento (por exemplo, fosfato tampões de citrato) e agentes efervescentes, como misturas de citrato/bicarbonato.
[00210] O comprimido pode ser um comprimido revestido. O revestimento pode ser um revestimento de película protetora (por exemplo, uma cera ou verniz) ou um revestimento projetado para controlar a liberação do agente ativo, por exemplo, uma liberação retardada (liberação do ativo após um tempo de atraso predeterminado após a ingestão) ou liberação em uma localização particular no trato gastrointestinal. O último pode ser alcançado, por exemplo, usando revestimentos de película entéricos, como os vendidos sob a marca Eudragit®.
[00211] As formulações de comprimido podem ser feitas por métodos convencionais de compressão, granulação úmida ou granulação a seco e utilizam diluentes farmaceuticamente aceitáveis, agentes ligantes, lubrificantes, desintegrantes, agentes de modificação de superfície (incluindo tensoativos), agentes de suspensão ou estabilização, incluindo, porém, não limitados a, estearato de magnésio, ácido esteárico, talco, lauril sulfato de sódio, celulose microcristalina, carboximetilcelulose de cálcio, polivinilpirrolidona, gelatina, ácido algínico, goma arábica, goma xantana, citrato de sódio,
silicatos complexos, carbonato de cálcio, glicina, dextrina, sacarose, sorbitol, fosfato de dicálcio, sulfato de cálcio, lactose, caulim, manitol, cloreto de sódio, talco, amidos secos e açúcar em pó. Os agentes modificadores de superfície preferidos incluem agentes modificadores de superfície não iônicos e aniônicos. Exemplos representativos de agentes modificadores de superfície incluem, porém, não estão limitados a, poloxâmero 188, cloreto de benzalcônio, estearato de cálcio, álcool cetoestearílico, cera emulsificante de cetomacrogol, ésteres de sorbitano, dióxido de silício coloidal, fosfatos, dodecilsulfato de sódio, aluminossilicato de magnésio e trietanolamina.
[00212] Uma composição farmacêutica pode estar na forma de uma cápsula de gelatina dura ou mole. De acordo com esta formulação, o composto da presente descrição pode estar em uma forma sólida, semissólida ou líquida.
[00213] Uma composição farmacêutica pode estar na forma de uma solução ou dispersão aquosa estéril adequada para administração parentérica. O termo parenteral, quando aqui usado, inclui técnicas de injeção ou infusão subcutânea, intracutânea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, intra-arterial, intrassinovial, intraesternal, intratecal, intralesional e intracraniana.
[00214] Uma composição farmacêutica pode estar na forma de uma solução ou dispersão aquosa estéril adequada para administração por injeção direta ou por adição a fluidos de infusão estéreis para infusão intravenosa e compreende um solvente ou meio de dispersão contendo água, etanol, um poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol e polietileno glicol líquido), suas misturas adequadas ou um ou mais óleos vegetais. Soluções ou suspensões do composto da presente descrição como uma base livre ou sal farmacologicamente aceitável podem ser preparadas em água adequadamente misturada com um tensoativo. Exemplos de tensoativos adequados são dados abaixo. As dispersões também podem ser preparadas, por exemplo, em glicerol, polietileno glicóis líquidos e misturas dos mesmos em óleos.
[00215] As composições farmacêuticas para uso nos métodos da presente descrição podem ainda compreender um ou mais aditivos, além de qualquer veículo ou diluente (como lactose ou manitol) que está presente na formulação. O um ou mais aditivos podem compreender ou consistir em um ou mais tensoativos. Os tensoativos têm tipicamente uma ou mais cadeias alifáticas longas, como ácidos graxos, o que lhes permite inserir diretamente nas estruturas lipídicas das células para realçar a penetração e absorção do fármaco. Um parâmetro empírico comumente usado para caracterizar a hidrofilicidade e hidrofobicidade relativas dos tensoativos é o equilíbrio hidrofílico-lipofílico (valor de "HLB"). Tensoativos com valores mais baixos de HLB são mais hidrofóbicos e têm maior solubilidade em óleos, enquanto tensoativos com valores mais altos de HLB são mais hidrofílicos e têm maior solubilidade em soluções aquosas. Assim, tensoativos hidrofílicos são geralmente considerados aqueles compostos tendo um valor de HLB maior que cerca de 10 e tensoativos hidrofóbicos são geralmente aqueles com um valor de HLB menor que cerca de 10. No entanto, estes valores de HLB são apenas um guia, pois para muitos tensoativos, os valores de HLB podem diferir em até cerca de 8 unidades de HLB, dependendo do método empírico escolhido para determinar o valor de HLB.
[00216] Entre os tensoativos para uso nas composições da descrição estão os ácidos graxos de polietileno glicol (PEG) e mono e diésteres de ácido graxo de PEG, ésteres de PEG glicerol, produtos de transesterificação de álcool-óleo, ácidos graxos de poliglicerila, ésteres de ácido graxo de propileno glicol, esterol e derivados de esterol, ésteres de ácido graxo de sorbitano de polietilenoglicol, éteres de alquila de polietileno glicol, açúcar e seus derivados, alquil fenóis de polietileno glicol, copolímeros em bloco de polioxietileno- polioxipropileno (POE-POP), ésteres de ácido graxo de sorbitano, tensoativos iônicos, vitaminas solúveis em gordura e seus sais, vitaminas solúveis em água e seus derivados anfifílicos, aminoácidos e seus sais e ácidos orgânicos e seus ésteres e anidridos.
[00217] A presente descrição também fornece embalagens e kits compreendendo composições farmacêuticas para uso nos métodos da presente descrição. O kit pode compreender um ou mais recipientes selecionados a partir do grupo que consiste em uma garrafa, um frasco, uma ampola, uma embalagem de bolhas e uma seringa. O kit pode ainda incluir uma ou mais instruções para uso no tratamento e/ou prevenção de uma doença, condição ou distúrbio da presente descrição, uma ou mais seringas, um ou mais aplicadores ou uma solução estéril adequada para reconstituir uma composição farmacêutica da presente descrição.
[00218] Todas as porcentagens e relações aqui utilizadas, a menos que de outra maneira indicado, são em peso. Outras características e vantagens da presente descrição são evidentes nos diferentes exemplos. Os exemplos fornecidos ilustram diferentes componentes e metodologia úteis na prática da presente descrição. Os exemplos não limitam a descrição reivindicada. Com base na presente descrição, o técnico versado pode identificar e empregar outros componentes e metodologia úteis para a prática da presente descrição.
EXEMPLOS
[00219] Como mostrado nos exemplos descritos abaixo, o tratamento de células de LMA ou células de câncer de pulmão com MPC-0767 leva à diminuição da viabilidade celular e desestabilização do principal receptor oncogênico. MPC-0767 demonstra citotoxicidade preferencial em relação a linhagens celulares de LMA e células primárias que expressam mutações ativadoras em FLT3, em comparação às células que não possuem mutações ativadoras, tanto in vitro quanto em modelo de xenoenxerto de camundongo.
Além disso, as experiências abaixo mostram que, embora as células de LMA cultivadas com meios condicionados a partir de células estromais se tornem resistentes a vários inibidores de FLT3, elas permanecem sensíveis ao MPC-0767. Uma vez que o desenvolvimento de resistência ao fármaco é uma limitação crítica da terapia inibidora de proteína cinase em geral e da terapia inibidora de FLT3 em particular, a sensibilidade das células de LMA resistentes ao MPC-0767 indica que o MPC-0767 é uma nova e interessante opção para o tratamento da LMA.
Os dados fornecidos aqui mostram que os inibidores da HSP90, como o MPC-0767, podem ter eficácia clínica em pacientes com LMA que abrigam mutações ativadoras no FLT3. Além disso, nas células de LMA que são resistentes aos inibidores de FLT3 devido a mutações secundárias no próprio FLT3 ou ativação de via(s) de sinalização diferente(s), o MPC-0767 mantém a atividade citotóxica.
Isto indica que inibidores da HSP90, como MPC-0767, podem ter eficácia clínica em pacientes com LMA que são recidivados após o tratamento com inibidores de FLT3 ou refratários aos inibidores da FLT3. O MPC-0767 também mostra sinergia com as terapias que já são estabelecidas, ou que ainda estão sendo investigadas para o tratamento da LMA.
O MPC-0767 também mostrou uma atividade altamente sinérgica surpreendente com venetoclax através de múltiplas linhagens celulares in vitro e potente atividade combinatorial em um estudo sistêmico de xenoenxerto de sobrevivência usando células de LMA de FLT3-ITD.
Empregados juntamente, estes resultados suportam MPC-0767 como uma nova terapia atraente para o tratamento de LMA e outros cânceres, tanto em monoterapia quanto em combinação com outros APIs.
Exemplo 1: MPC-0767 inibe a viabilidade celular em linhagens celulares de NSCLC portadoras de mutações em EGFR e HER2
[00220] As linhagens celulares de NSCLC HCC-827 (EGFR L858R), H1975 (EGFR L858R/T790M) PC-9 (EGFR Del E746_A750) e H1781 (HER2 G7776insV G/C) foram tratadas com MPC-0767 em uma faixa de concentração de 98 - 50000 nM por 3 dias, após os quais a viabilidade celular de tempo foi determinada usando o reagente CellTiter-Glo®. A Figura 1 mostra as curvas de dose-resposta das linhagens celulares HCC-827 (Fig. 1A), H1975 (Fig. 1B), PC-9 (Fig. 1C) e H1781 (Fig. 1D). Todos os valores de EC50 estavam dentro de concentrações clinicamente alcançáveis.
[00221] Para verificar o mecanismo da perda de viabilidade celular, as células H1975 foram tratadas com MPC-0767 (0,7 µM) por 72 horas. Após este período, as células foram coradas com 7-amino- actinomicina D (7-AAD) e anexina V, marcadores de integridade da membrana celular e de apoptose, respectivamente. Conforme mostrado na Figura 2, o tratamento de células H1975 com MPC-0767 (0,7 µM) resultou em uma diminuição na porcentagem de células viáveis (negativa para 7-AAD e negativa para anexina V) e um aumento na porcentagem de células que exibem marcadores de morte celular, especificamente morte (somente positivas para 7-AAD), apoptótica precoce (somente positiva para anexa V) ou fase tardia apoptótica/necrótica (positiva para 7-ADD e anexina V).
[00222] A Figura 3 mostra que MPC-0767 (1 µM) diminuiu o EGFR mutante na superfície celular das células H1975 (A) e PC-9 (B) quando tratadas por 24 horas. Estas descobertas confirmam que o MPC-0767 direciona e degrada o EGFR nas linhagens celulares de câncer de pulmão.
[00223] Para determinar se MPC-0767 também pode promover a degradação de um mutante EGFR exon20ins, a linhagem celular de murino BaF3 foi usada (Warmuth et al., Curr Opin Oncol., 200719: 55-
60). Esta linhagem celular é dependente da IL-3 exógena para sobrevivência/crescimento, porém, na introdução de um oncogene, as células não dependem mais da IL-3 exógena e, em vez disso, a sobrevivência é impulsionada pelo oncogene introduzido. Assim, fármacos que direcionam o ao oncogene introduzido reduzirão a viabilidade da célula BaF3, fornecendo um mecanismo para rastrear pequenas moléculas contra mutações oncogênicas relevantes que surgem na clínica.
[00224] As células BaF3 que abrigam o mutante EGFR do tipo selvagem (WT) ou EGFR exon20 V769_D770insASV foram tratadas com concentrações crescentes de MPC-0767 por 24 horas. Após este período, as células foram colhidas para citometria de fluxo para avaliar a expressão de EGFR da superfície celular (o anticorpo para detecção reconheceu igualmente proteínas WT e mutantes). Conforme mostrado na Figura 4A, o MPC-0767 foi capaz de reduzir o EGFR WT (EC50 = 1 µM), porém, foi mais potente em relação ao mutante EGFR exon20 V769_D770insASV (EC50 = 0,2 µM). Além disso, foi testado se esta descoberta foi transladada em sobrevivência reduzida em células BaF3 que expressam o mutante EGFR. As células BaF3 parentais (sem mutantes) ou as células que abrigam EGFR exon20 V769_D770insASV foram tratadas com concentrações crescentes de MPC-0767 por 72 horas após as quais a viabilidade celular foi determinada usando CellTiter-Glo®. A Figura 4B mostra que as células BaF3 que abrigam o mutante EGFR exon20 V769_D770insASV são mais dependentes da HSP90, uma vez que são aproximadamente três vezes mais sensíveis ao MPC-0767 do que as células origem (EC50 origem = 753 nM, EC50 de mutante EGFR exon20 V769_D770insAS = 236 nM).
[00225] Coletivamente, os dados sugerem que o MPC-0767 é eficaz contra NSCLC direcionada pela ativação aberrante de EGFR ou
HER2, por meio da degradação dos principais condutores oncogênicos. Além disso, dada a crescente dependência de proteínas mutantes em HSP90, o MPC-0767 é mais ativo no EGFR mutante, resultando em atividade degradativa e antitumoral realçada. Exemplo 2: MPC-0767 exibe atividade antileucêmica potente em células de LMA que abrigam FLT3-ITD
[00226] As linhagens celulares em crescimento exponencial foram contadas e semeadas em placas de microtítulo de poliestireno de base plana de 96 cavidades em um volume final de 90 µL por cavidade. Para amostras de LMA primárias, as células foram semeadas em placas de 384 cavidades em uma densidade de 2 x 104 células em um volume final de 27 µL por cavidade. Para tratar linhagens celulares ou amostras primárias, 10 µL ou 3 µL, respectivamente, de concentrações 10X de MPC-0767, foram então adicionados às células para produzir uma concentração final de 10000 nM, 5000 nM, 2500 nM, 1250 nM, 625 nM, 313 nM, 156 nM, 78 nM, 39 e 20 nM. Para comparação, as células foram tratadas com o inibidor de FLT3 gilteritinibe (de 100 nM, 50 nM, 25 nM, 12,5 nM, 6,3 nM, 3,1 nM, 1,6 nM, 0,8 nM, 0,4 e 0,2 nM). As células foram semeadas e tratadas em duplicado. Após a incubação por três dias, a viabilidade celular foi determinada medindo os níveis intracelulares de ATP usando o sistema de ensaio CellTiter- Glo® adicionando a cada cavidade 100 µL para placas de 96 cavidades, ou 30 µL para placas de 384 cavidades. A luminescência foi detectada usando um leitor de placas.
[00227] O efeito dos fármacos na viabilidade celular foi calculado comparando os níveis de ATP (contagens de luminescência por segundo) das células expostas ao composto teste com aqueles das células expostas apenas ao veículo (DMSO). A concentração efetiva quase-máxima (EC50) para cada linhagem celular foi determinada usando o pacote R DRC (R Core Team, 2017). Em resumo, as curvas de dose-resposta foram ajustadas com um modelo de regressão logística de quatro parâmetros (LL.4) de acordo com (Eq-1) e a EC50 absoluta foi estimada usando um intervalo de confiança de 0,95.
[00228] A Figura 5A mostra uma curva de dose-resposta representativa de uma linhagem celular (ME1), que expressa a proteína de tirosina cinase 3 semelhante a FMS (FLT3) do tipo selvagem (WT), enquanto a Figura 5B mostra uma curva de dose- resposta representativa de uma linhagem celular (MV-4-11) que abriga a duplicação em tandem interna de FLT3 (FLT3 ITD). Para ilustrar ainda mais que o MPC-0767 tem maior eficácia nas células de LMA que abriga FLT3-ITD do que no FLT3 WT, a atividade antileucêmica do MPC-0767 (valores de EC50) derivada de linhagens celulares (n = 10) e amostras primárias (n = 9) foi testada. A Figura 5C mostra o resultado desta análise onde o valor de EC50 da média geométrica foi 1525 nM para células FLT3 WT (n = 11) em comparação com 576 nM para células FLT3-ITD (n = 8). Estes dados sugerem que o MPC-0767 exibe atividade realçada em relação às células de LMA que abrigam FLT3-ITD e um subconjunto de células de LMA com WT FLT3. Exemplo 3: MPC-0767 é citotóxico em células de LMA primárias que abrigam FLT3-ITD
[00229] Para testar se o efeito antileucêmico do MPC-0767 é devido à indução da morte celular, quatro amostras primárias de LMA (todas abrigando FLT3-ITD) foram tratadas com concentrações crescentes de MPC-0767 por 72 horas. As amostras foram então processadas para quantificação por citometria de fluxo de células positivas para a anexina V e 7AAD. Estes marcadores permitem a detecção da morte celular, especificamente populações mortas (somente positivas para 7AAD), apoptóticas precoces (somente positivas para a anexina V) ou tardias apoptóticas/necróticas (positivas para 7AAD e anexas V) foram combinadas para fornecer uma leitura da morte celular.
[00230] Como mostrado na Figura 6, as amostras primárias de LMA tratadas com MPC-0767 mostram um aumento dependente da dose na morte celular. É importante notar que uma das amostras (Y1265) foi obtida de um paciente que recidivou com gilteritinibe.
[00231] Estas descobertas demonstram que o MPC-0767 induz a morte celular, através da indução da apoptose, em amostras primárias de LMA que abrigam FLT3-ITD. Além disso, o MPC-0767 é ativo nos casos em que o tumor do paciente recidivou o tratamento com gilteritinibe. Exemplo 4: MPC-0767 demonstra eficácia in vivo
[00232] Para demonstrar a eficácia do MPC-0767 in vivo, um estudo de xenoenxerto foi realizado usando a linhagem celular MV-4-
11. Cada camundongo foi inoculado subcutaneamente no flanco direito com 5 x 106 células de tumor em 0,1 ml de PBS/Matrigel (1:1). Quando o volume médio do tumor atingiu 91 mm3 no tamanho, os camundongos foram randomizados em 2 grupos de 10. Os camundongos foram dosados oralmente com veículo ou com MPC- 0767 200 mg/kg QD x 2 dias e depois reduzidos para 150 mg/kg QD x 15 dias. As medições do tumor (calibre) foram realizadas nos dias indicados. Como mostrado na Figura 7, MPC-0767 induziu uma regressão do tumor de 84% (Fig. 7A), com regressão completa do tumor em 5/10 animais, sem efeitos significativos no peso corporal (Fig. 7B). O teste t de Student foi utilizado para avaliar a significância estatística da diferença entre estes grupos P <0,0001.
[00233] Estes dados confirmam que MPC-0767 exibe potente atividade antitumoral in vivo. Exemplo 5: MPC-0767 é eficaz em uma linhagem celular resistente ao inibidor de FLT3 (midostaurina)
[00234] Na clínica, os inibidores de tirosina cinase que direcionam FLT3 inicialmente mostram respostas positivas, porém, os pacientes recaem inevitavelmente devido ao desenvolvimento da resistência ao fármaco através de vários mecanismos, como discutido acima. Para determinar se o MPC-0767 pode ser eficaz neste contexto de resistência ao fármaco, utilizou-se uma linhagem celular (MOLM-13) que foi tratada continuamente com midostaurina para gerar uma linhagem celular resistente à midostaurina, designada MOLM-13-R- PKC412, como descrito anteriormente (Weisberg et al., PLoS One, 2011). As células MOLM-13 origem transfectadas com o plasmídeo controle (MOLM-13-LUC) e as células MOLM-13-R-PKC412 foram tratadas com midostaurina (2 - 100 nM), que foi utilizada para verificar a resistência, crenolanibe (0,2 - 100 nM ), outro inibidor de FLT3 ou MPC-0767 (20 - 10000 nM) por 72 horas. A viabilidade celular foi avaliada usando CellTiter-Glo® e os valores de EC50 foram determinados para midostaurina, crenolanibe e MPC-0767, comparando a viabilidade celular na presença de concentrações variáveis do fármaco para viabilidade na presença do veículo (DMSO), definida em 100%, usando a equação 1 (como descrito acima). Como mostrado na Figura 8A, as células resistentes à midostaurina mostraram um aumento na resistência à midostaurina em comparação com a linhagem celular de controle (~ 2,5 vezes: EC 50 de MOLM-13- LUC = 44 nM versus EC 50 de MOLM-13-R-PKC412 = 112 nM ) Além disso, como mostrado na Figura 8B, as células resistentes à midostaurina também exibiram resistência cruzada a outro inibidor de FLT3, o crenolanibe (aproximadamente 3 vezes: EC50 de MOLM-13- LUC = 9 nM versus EC50 de MOLM-13-R-PKC412 = 25 nM). Por outro lado, como mostrado na Figura 8C, os valores de EC50 de MPC-0767 entre células de controle e células resistentes à midostaurina foram inferiores a 1,5 vezes (EC50 de MOLM-13-LUC = 496 nM versus EC50 de MOLM-13-R-PKC412 = 727 nM).
[00235] Empregados juntamente, estes dados demonstram que o
MPC-0767 mantém a atividade antileucêmica em células que adquirem resistência aos inibidores de FLT3. Exemplo 6: MPC-0767 é eficaz sob condições que conferem resistência aos inibidores de FLT3
[00236] Para determinar se MPC-0767 demonstrou eficácia contra células de LMA que adquiriram resistência através de outros mecanismos (não mutacional), como sinalização induzida por estroma, a linhagem celular MOLM-14 (abrigando FLT3-ITD) foi semeada em meio regular (RPMI; não estromal) ou em meio condicionado da linhagem celular HS-5. HS-5 é uma linhagem celular estromal da medula humana que secreta vários fatores de crescimento suficientes para apoiar o crescimento progenitor hematopoético (Roecklein et al., Blood, 1995) que imita condições estromais. As células foram, então, tratadas com o inibidor de FLT3 gilteritinibe (0,2 - 100 nM) ou crenolanibe (0,2 - 100 nM) ou com MPC-0767 (20 - 10000 nM) por 72 horas. A viabilidade celular foi avaliada usando CellTiter-Glo® e os valores de EC50 foram determinados para gilteritinibe, crenolanibe e MPC-0767 em meio não estromal ou meio de condição estromal, comparando a viabilidade celular na presença de concentrações variáveis do fármaco para a viabilidade na presença de veículo (DMSO), definido como 100%, usando a equação 1 (conforme descrito acima).
[00237] Como mostrado na Figura 9, as células MOLM-14 eram resistentes aos inibidores de FLT3, gilteritinibe (Fig. 9A) e crenolanibe (Fig. 9B), quando cultivadas em meios estromais em comparação ao meio não estromal (Gilteritinibe: EC50 de meios estromais > 100 nM versus EC50 de meio não estromal = 6 nM. Crenolanibe: EC50 de meio estromal > 100 nM versus EC50 de meio não estromal = 3 nM). Por outro lado, como mostrado na Fig. 9C, o MPC-0767 manteve a atividade antiproliferativa igualmente sob condições estromais e não estromais (EC50 de meios estromais = 627 nM versus EC50 de meios não estromais = 423 nM).
[00238] Estes dados demonstram que as células de LMA FLT3-ITD, quando cultivadas sob condições estromais que tornam os inibidores de FLT3 ineficazes, mantêm a sensibilidade ao MPC-0767. Exemplo 7: MPC-0767 degrada FLT3-ITD em linhagens celulares de LMA
[00239] Para determinar se o MPC-0767 pode promover a degradação do FLT3-ITD e abolir a sinalização a jusante, as células MV-4-11 e MOLM-13 foram tratadas com veículo ou MPC-0767 (1 µM) por 24 horas. As células foram colhidas para citometria de fluxo para avaliar a abundância de proteína FLT3 de superfície celular. Além disso, a medição de um sítio de fosforilação principal de S6 (fosfo-S6) foi usada como um marcador para sinalização de FLT3-ITD oncogênica (Zimmerman et al., Blood. 2013 122(22): 3607-3615). De fato, em ambas as células MV-4-11 e MOLM-13 tratadas com MPC- 0767 houve uma redução > 65% em FLT3 de superfície celular (Fig. 10A e 10B, respectivamente) e redução > 70% em fosfo-S6 (Fig. 10C e 10D, respectivamente).
[00240] Estas descobertas confirmam que o MPC-0767 degrada o FLT3-ITD, que posteriormente atenua a sinalização oncogênica, como evidenciado pelo sinal de fosfo-S6 reduzido. Exemplo 8: MPC-0767 induz a degradação de mutantes de FLT3
[00241] Em seguida, procuramos determinar se MPC-0767 também pode promover a degradação de outros mutantes de FLT3 que foram relatados para conferir resistência aos inibidores de FLT3. Para fazer isto, utilizamos novamente a linhagem celular de murino BaF3 na qual os seguintes mutantes de FLT3 foram transfectados: FLT3 tipo selvagem, FLT3-ITD, D835V, FLT3-ITD D835V, D835Y, FLT3-ITD D835Y, D835H, FLT3-ITD D835H, F691L ou FLT3-ITD F691L.
[00242] Após a seleção da puromicina, as células foram tratadas com concentrações crescentes de MPC-0767 (20 - 10000 nM) por 24 horas e depois coradas para expressão da superfície celular de FLT3 (e mutantes) e a expressão mediana do sinal foi quantificada por citometria de fluxo.
[00243] Como mostrado na Fig. 11A, MPC-0767 reduziu a expressão da superfície celular de FLT3 WT. Além disso, o MPC-0767 tinha maior potência contra os mutantes de FLT3 (aproximadamente 5x em comparação ao FLT3 WT), demonstrando a maior dependência destas proteínas mutantes no HSP90.
[00244] A próxima etapa foi determinar se o MPC-0767 induziu a degradação de várias proteínas FLT3 mutantes em células BaF3, tendo alguma relevância funcional. Foi demonstrado anteriormente que o crenolanibe inibe efetivamente o FLT3-ITD, porém, que a mutação do resíduo guardião F691L reduz a eficácia do crenolanibe (Zimmerman et al., Blood, 2013 122(22): 3607-3615). Assim, o MPC- 0767 foi testado quanto à eficácia contra o mutante FLT3-ITD F691L resistente a TKI. As células BaF3 que abrigam FLT3-ITD e FLT3-ITD F691L foram semeadas e tratadas com crenolanibe (0,2 - 100 nM) ou com MPC-0767 (20 - 10000 nM) por 72 horas antes da avaliação da viabilidade celular usando CellTiter-Glo®. Os valores de EC 50 foram calculados usando a equação 1 (como descrito acima). A Fig. 11B mostra que as células que abrigam o mutante FLT3-ITD-F691L conferiram resistência ao crenolanibe aproximadamente 23 vezes em comparação às células que abrigam FLT3-ITD (EC50 de FLT3-ITD = 4 nM versus EC50 de FLT3-ITD-F691L = 90 nM). Por outro lado, a Fig. 11C mostra que MPC-0767 tinha atividade antileucêmica semelhante contra as duas linhagens celulares de mutante FLT3-ITD (EC50 de FLT3-ITD = 497 nM versus EC50 de FLT3-ITD-F691L = 391 nM).
[00245] Empregados juntamente, estes dados demonstram que o
MPC-0767 é eficaz no direcionamento de mutantes resistentes à cinase de FLT3. Exemplo 9: MPC-0767 bloqueia a expressão de PD-L1 induzida por IFN- em amostras de LMA primárias
[00246] Demonstrou-se que o interferon gama (IFN-) induz a expressão de proteína do ligante de morte programada 1 (PD-L1) em uma variedade de tipos de células cancerígenas, proporcionando assim outro mecanismo pelo qual as células de tumor podem evitar o sistema imune.
[00247] Para estudar se o MPC-0767 bloqueia a expressão de PD- L1 induzida por IFN-, seis amostras de pacientes com LMA que abriga FLT3 WT (n = 2) ou FLT3-ITD (n = 4) foram tratadas com IFN- humano (50 ng/ml) sozinho, MPC-0767 (1 µM) sozinho ou a combinação dos dois por 24 horas. As células foram, então, colhidas para avaliar a expressão da superfície celular de PD-L1 por citometria de fluxo. As células também foram coradas com os marcadores de explosão de LMA CD34 ou CD45 (para bloquear a população da explosão) e uma mancha de viabilidade para bloquear as células viáveis. Como mostrado na Fig. 12, todas as amostras de pacientes responderam ao tratamento com IFN- aumentando a quantidade de PD-L1 em sua superfície celular (5 a 25 vezes). Enquanto o MPC-0767 sozinho não reduziu significativamente a expressão da superfície celular de PD-L1 basal, em combinação com o IFN-, o MPC-0767 reduziu significativamente a expressão da superfície celular de PD-L1 induzida pelo IFN- (P = 0,04).
[00248] Estes dados mostram que, além do MPC-0767 possuir atividade citotóxica contra o FLT3-ITD LMA (ver acima), o MPC-0767 também possui atividade imunomoduladora através da anulação da expressão de PD-L1 induzida por IFN- em amostras de LMA primárias. Exemplo 10: MPC-0767 exibe atividade citotóxica sinérgica
[00249] Para determinar se MPC-0767 exibe atividade antiproliferativa sinérgica com fármacos adicionais, testamos em combinação com fármacos que são aprovados ou estão sendo avaliados clinicamente para o tratamento da LMA.
[00250] Três linhagens celulares que abrigam FLT3-ITD foram usadas para os estudos de combinação de fármacos (MV-4-11, MOLM-13 e MOLM-14). As células foram tratadas com 8 concentrações de MPC-0767 (78 - 10000 nM) isoladamente, 8 concentrações do fármaco para LMA isoladamente (faixas de concentração abaixo) ou a combinação dos dois (8x8). Os fármacos de combinação contra LMA testados foram: daunorrubicina (0,8 - 100 nM); citarabina (78 - 10000 nM); gilteritinibe (0,8 - 100 nM); crenolanibe (0,8 - 100 nM); sorafenibe (0,8 - 100 nM); midostaurina (0,8 - 100 nM); ou venetoclax (0,8 - 100 nM).
[00251] As células foram tratadas com os fármacos (agente único ou combinação) por 72 horas. A atividade de combinação de fármaco foi determinada pela primeira medição da viabilidade celular com CellTiter-Glo®, seguida pelo cálculo da EC50 correspondente à atividade de um agente, usando o pacote R DRC (R Core Team, 2017). Os valores do índice de combinação (CI) foram calculados usando o método Chou-Talalay (Chou T, Cancer Research., 2010 70 (2): 440-6.), com base na viabilidade de cada fármaco isoladamente e em combinação, através de todas as concentrações testadas. Em resumo, o CI foi definido como: com: - D1 e D2, sendo as doses de Fármaco1 e Fármaco2 no tratamento combinado (respectivamente) que dão a viabilidade V. - D1sozinho e D2sozinho, sendo as doses de Fármaco1 e Fármaco2
(respectivamente) como um agente único que daria a mesma viabilidade V que a da combinação. D1sozinho e D2sozinho foram estimados a partir da equação de Hill: com EC50 e Hill sendo a EC50 e declividade de Hill correspondente à curva de viabilidade ajustada por Fármaco1 ou Fármaco2.
[00252] Combinações de fármaco com valores de CI >1 são consideradas antagônicas, valores de CI = 1 são considerados aditivos, enquanto valores de CI < 0,9 são considerados sinérgicos. Como critérios adicionais, apenas os valores de CI com viabilidade de 0,25 ou menor foram considerados. O melhor tratamento combinado que exibe sinergia foi, então, selecionado com base na diferença máxima da viabilidade esperada versus observada e nos valores mais baixos de CI.
[00253] A Fig. 13 mostra dados de sinergia representativos na linhagem celular MV-4-11 tratada com MPC-0767 em combinação com daunorrubicina (Fig. 13A), citarabina (Fig. 13B), crenolanibe (Fig. 13C), sorafenibe (Fig. 13D) e venetoclax (Fig. 13E). Cada gráfico mostra a viabilidade de células tratadas com veículo (DMSO, definido como 100%), MPC-0767 sozinho, fármaco para LMA sozinho e a combinação do fármaco MPC-0767 + LMA.
[00254] A Tabela 1 mostra a atividade sinérgica de MPC-0767 (valores médios de CI) nas linhagens celulares MV-4-11, MOLM-13 e MOLM-14 (n = 2 experiências independentes para cada linhagem celular, exceto onde indicado pelo asterisco n = 1). Nas células MV-4- 11, o MPC-0767 é altamente sinérgico com daunorrubicina (CI = 0,6) e venetoclax (CI = 0,7) e sinérgico com citarabina, crenolanibe e sorafenibe. Nas células MOLM-13, o MPC-0767 é altamente sinérgico com venetoclax (CI = 0,3) e menos sinérgico com daunorrubicina,
crenolanibe e gilteritinibe. MPC-0767 é sinérgico com venetoclax, daunorrubicina e citarabina em células MOLM-14. Tabela 1: Atividade sinérgica de MPC-0767 em combinação com fármacos para LMA em linhagens celulares de LMA FLT3-ITD. MV-4-11 MOLM-13 MOLM-14 Daunorrubicina CI = 0,6 CI = 0,9 CI = 0,8* Citarabina CI = 0,8 CI = 0,9* Crenolanibe CI = 0,7 CI = 0,9 Sorafenibe CI = 0,8 Gilterinibe CI = 0,9 Venetoclax CI = 0,7 CI = 0,3 CI = 0,6
[00255] Empregados juntamente, estes dados demonstram que o inibidor de HSP90 MPC-0767 exibe atividade citotóxica em células de LMA que abrigam mutações de FLT3 ITD. Além disso, MPC-0767 mostra atividade sinérgica com inibidores de FLT3 em células de LMA que abrigam mutações de FLT3 ITD. Portanto, inibidores de HSP90, como o MPC-0767 isoladamente, ou em combinação, podem ter eficácia clínica em pacientes com LMA que abrigam mutações ativadoras em FLT3. Exemplo 11: MPC-0767 exibe atividade antitumor potente em combinação com venetoclax
[00256] Para testar a atividade combinatória do MPC-0767 com venetoclax in vivo, um estudo sistêmico de xenoenxerto de sobrevivência sistêmico foi realizado usando MOLM-13 FLT3-ITD que abriga linhagem celular de LMA. Antes da inoculação das células de tumor, os camundongos NOD/SCID foram pré-tratados por 2 dias com uma injeção intraperitoneal diária de 100 mg/kg de ciclofosfamida para facilitar o enxerto das células de tumor MOLM-13 humanas. Após a injeção da ciclofosfamida, os animais foram permitidos se recuperarem por 24 horas antes da inoculação com células de tumor MOLM-13 humanas. Cada camundongo foi, então, inoculado com 1x107 células MOLM-13 em 100μL de PBS por injeção intravenosa na veia da cauda. Os camundongos foram, em seguida, randomizados em 4 grupos de 6. Três dias após a inoculação do tumor, os camundongos foram dosados com veículo, MPC-0767 100 - 60 mg/kg QD x 24 (100 mg/kg QD x 6, 87,5 mg/kg QD x 4, 75 mg/kg QD x 3, 67,5 mg/kg QD x 1, 60 mg/kg QD x 10), venetoclax 45-33,8 mg/kg QD x 24 (45 mg/kg QD x 6, 39,4 mg/kg QD x 4, 33,8 mg/kg QD x14) ou a combinação de MPC-0767 e venetoclax e monitorados quanto à sobrevivência. A viabilidade e a perda de peso corporal foram monitoradas diariamente. A perda média de peso corporal não excedeu 11% no grupo combo durante o curso do estudo. Como mostrado na Fig. 14, o MPC-0767 como um único agente aumentou significativamente a sobrevida média em 3,5 dias (P<0,01, Log Rank, teste (Mantel Cox)). É importante ressaltar que a combinação de MPC-0767 e venetoclax resultou em 100% de sobrevida, proporcionando assim uma sobrevida mediana significativamente maior em comparação ao veículo e ambas subdivisões do agente único (P<0,001, Log Rank, teste (Mantel Cox)). Juntamente, estes dados demonstram que o MPC-0767 combina de forma potente com o venetoclax in vivo. Exemplo 12: Resistência adquirida ao venetoclax em células de FLT3-ITD LMA não diminui a sensibilidade ao MPC-0767
[00257] A resistência ao inibidor específico de Bcl-2, venetoclax, pode ocorrer devido ao aumento da expressão da proteína MCL-1 (Pan et al., 2017 Cancer Cell 32 (6): p. 748-760 e6), limitando assim sua eficácia clínica. Para testar os efeitos da resistência adquirida ao venetoclax na sensibilidade do MPC-0767, testamos linhagens celulares resistentes ao venocloclax geradas a partir de duas linhagens celulares FLT3-ITD LMA origem, conforme descrito por Pan et al., 2017. As linhagens celulares origem foram MOLM-13 e MV-4-11 células. As linhagens celulares resistentes ao venetoclax são designadas MOLM-13 Ven-R e MV-4-11 Ven-R, respectivamente, na Fig. 15. Como mostrado na figura, as células MOLM-13 Ven-R e MV-4- 11 Ven-R eram altamente resistentes ao venetoclax em comparação às células origem, conforme evidenciado por seus valores aumentados de EC50 em um ensaio de viabilidade após 72 horas de tratamento. Por outro lado, ambas células resistentes ao venetoclax e origem apresentaram sensibilidade semelhante ao MPC-0767. Estes resultados indicaram que os fatores que conferem resistência ao venetoclax não diminuíram a sensibilidade das células à atividade citotóxica do MPC-0767.
[00258] Em seguida, examinamos um marcador molecular de apoptose, clivagem de PARP, nas células MV-4-11 Ven-R. As células foram tratadas com MPC-0767, venetoclax ou uma combinação de MPC-0767 e venetoclax por 24 horas e, em seguida, os lisados foram examinados por análise Western para PARP de tamanho natural e PARP clivado, um marcador de apoptose. Como mostrado na Fig. 16A, a análise de Western blot detectou a clivagem completa de PARP apenas em células tratadas com a combinação de MPC-0767 e venetoclax. Estes dados indicaram que a combinação foi eficaz para induzir a apoptose nestas células resistentes ao venetoclax.
[00259] Os efeitos sinérgicos da combinação foram confirmados usando análise de isobolograma (Tallarida, 2006 J Pharmacol Exp Ther, 319(1): 1-7). As linhagens celulares resistentes, MOLM-13 Ven- R e MV-4-11 Ven-R, foram tratadas com MPC-0767, venetoclax ou uma combinação de MPC-0767 e venetoclax por 72 horas e a viabilidade foi avaliada usando o ensaio CellTiter-Glo®. Isobologramas normalizados foram usados para representar a interação de fármaco através das diferentes linhagens celulares e condições, com um efeito de dose de 75% (EC75). Em resumo, a EC75 absoluta para cada combinação de agente único e fármaco foi calculada usando o pacote R DRC. (Ritz, C., et al. 2015 PLoS One 10(12):e0146021; e Team R. C. 2017 A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria, 2017). A EC75 da combinação de fármaco foi normalizada em relação aos valores correspondentes de EC75 de agente único. Nos casos em que os tratamentos com agente único não atingiram EC75, em seguida a EC75 relativo foi utilizada com base no valor projetado da curva de resposta ao fármaco ajustada. Quando a EC75 relativa foi maior que a concentração máxima testada, usamos a concentração máxima testada como o valor básico, para permitir a análise através de todos os fármacos e condições. Como mostrado na Fig. 16B, os pontos de dados para ambas as linhagens celulares resistentes ao venetoclax estavam abaixo da linha de aditividade (linha diagonal), indicando valores de índice de combinação < 1 e confirmando a sinergia do tratamento combinado.
[00260] Para explorar o mecanismo subjacente à sinergia de MPC- 0767 e venetoclax, focou-se em MCL-1, pois sua abundância aumentada confere resistência ao venetoclax. AKT regula a atividade de GSK3 β através da fosforilação em um resíduo designado serina 9 (S9). Quando este site é fosforilado por AKT, a atividade da GSK3 β é inibida. No entanto, a inibição de AKT impede a fosforilação do S9, levando à ativação de GSB3β e subsequente degradação de MCL-1 (Lu et al., 2015 Med Oncol, 2015. 32(7): p. 206). Estas proteínas e seu status de fosforilação foram examinados nas linhagens celulares MOLM-14 e MV-4-11 tratadas com MPC-0767, venetoclax ou uma combinação de MPC-0767 e venetoclax. A Fig. 17A mostra células MOLM-14 tratadas com MPC-0767 (1 µM), venetoclax (20 nM) ou a combinação por 24 horas. Apenas o tratamento combinado resultou em perda de pAKT(S473), degradação de AKT e subsequente perda de fosforilação de GSK3β(Ser 9). Estas descobertas são consistentes com a nossa proposta de que o direcionamento para BCL-2 (por exemplo, com venetoclax) e ao mesmo tempo o direcionamento para MCL-1 (com MPC-0767) resultam em morte celular sinérgica nas células de FLT3-ITD LMA. Além disso, nas linhagens celulares resistentes ao venetoclax MV-4-11 tratadas apenas com MPC-0767, apenas com venetoclax ou a combinação, também houve expressão reduzida em AKT e MCL-1 pela combinação de MPC-0767 e venetoclax (Fig. 17B), confirmando um mecanismo de ação consistente para a sinergia observada com MPC-0767 e venetoclax. Exemplo 13: Biomarcadores para Eficácia de MPC-0767 em LBC
[00261] Para determinar se MPC-0767 é eficaz contra células de LMA não FLT3-ITD, testou-se um painel de linhagens celulares de LMA tipo selvagem FLT3 (FLT3-WT) e blastos de LMA primários quanto à sensibilidade ao MPC-0767. As células foram tratadas com MPC-0767 por 72 horas antes de determinar a viabilidade celular usando o ensaio CellTiter-Glo®. Os valores de EC50 foram determinados para todas as amostras e mostrados na Fig. 18. Definiu- se um ponto de corte para sensibilidade a 1 µM, onde as linhagens celulares tendo valores de EC50 abaixo de 1 µM foram consideradas sensíveis, e valores de EC50 acima de 1 µM consideradas resistentes. De fato, 6/12 linhagens celulares e 2/4 linhagens celulares primárias exibiram sensibilidade (valor de EC50 menor que 1 µM).
[00262] Para explorar se quaisquer mutações se correlacionaram com a sensibilidade do MPC-0767, realizou-se uma análise estatística com base no teste exato de Fisher sobre todos os genes mutados nas linhagens celulares de FLT3-WT LMA. Os dados de sequenciamento de exoma processados foram extraídos do banco de dados COSMIC Cell Line Project e os genes mutados em pelo menos uma linhagem celular foram incluídos. O teste exato de Fisher foi aplicado à frequência de alelos mutantes e do tipo selvagem observados em linhagens celulares de FLT3-WT LMA sensíveis e resistentes. A frequência foi calculada com base no número de linhagens sensíveis ou resistentes contendo o alelo do tipo selvagem ou mutado para genes específicos. Isso rendeu uma tabela de contingência 4x4 que foi usada para testar a hipótese de um gene mutado estar associado à sensibilidade ao MPC-0767 nas linhagens celulares de FLT3-WT LMA.
[00263] Os resultados desta análise mostraram que as mutações de SRA foram associadas a linhagens celulares de FLT3-WT LMA resistentes, de maneira estatisticamente significativa (valor de p do teste de Fisher = 0,0019). As linhagens celulares de FLT3-WT LMA carregavam mutações ativadoras tanto em NRAS quanto em KRAS (Tabela 2), com mutações específicas previamente relatadas para estimular a sinalização de MAPK. Tabela 2: Sumário das linhagens celulares de LMA testadas quanto à sensibilidade ao MPC-0767 após tratamento por 72h e a viabilidade celular determinada usando CellTiter-Glo®. Detalhes das mutações NRAS ou KRAS nas linhagens celulares testadas são mostrados Linhagem EC50 Sensibilidade NRAS KRAS Celular Line (nM) ao MPC-0767 mutação? mutação? MOLM16 367 Sensível - - TUR 550 Sensível - - OCILMA2 633 Sensível - - ML2 1031 Resistente - p.A146T NOMO1 1449 Resistente - p.G13D OCILMA3 1809 Resistente p.Q61L - HL60 1957 Resistente p.Q61L - ME1 3425 Resistente p.Q61H - THP1 10000 Resistente p.G12D -
[00264] Estas descobertas sugerem que as mutações em proteínas principais, como RAS, afetam a sensibilidade ao MPC-0767 e indicam ainda que a combinação de MPC-0767 e inibidores da sinalização de RAS, por exemplo, inibidores de Raf, inibidores de MEK e inibidores de ERK, podem superar as vias de resistência adicionais em células de LMA. Estas descobertas sugerem combinações de fármaco racionais que podem superar as vias de resistência e restaurar a sensibilidade ao MPC-0767. Exemplo 14: Triagem de CRISPR em todo o genoma identifica a regulação epigenética como um determinante da sensibilidade ao MPC-0767
[00265] Para identificar genes que conferem resistência ao MPC- 0767 na deleção, realizou-se uma triagem da perda de função em todo o genoma mediada por CRISPR na linhagem celular MOLM-14 cultivada na presença de 1 µM de MPC-0767. Utilizou-se a biblioteca GeCKO V2 (Shalem, O., et al. 2014 Science 343 (6166):84-87) para realizar esta triagem genética. O DNA genômico colhido das células sobreviventes foi analisado para a identificação de RNAs de guia único enriquecidos (sgRNAs) através de ambas sub-bibliotecas de GeCKO. A análise da ontologia genética dos 20 hits enriquecidos superiores através de ambas as sub-bibliotecas do GeCKO identificou a regulação epigenética, organização da cromatina e enzimas modificadoras da cromatina como as vias mais altamente enriquecidas nos pools que sobrevivem ao tratamento com MPC-0767 (Fig. 19A).
[00266] O gene mais enriquecido da triagem foi KDM6A, uma histona H3K27 desmetilase (Lee et al., 2007 Science 318 (5849): 447- 50) (Fig. 19B). A perda das mutações de função de KDM6A são observadas em FLT3-ITD LMA (Garg et al., 2015 Blood 126 (22): 2491-501). O direcionamento mediado por CRISPR de KDM6A com três sgRNAs independentes conferiu resistência a MPC-0767 nas linhagens celulares MOLM-14 e MV-4-11 (Fig. 20A-B). Para explorar terapeuticamente esse achado, hipotetizou-se que a inibição da EZH2, a histona H3K27 metiltransferase que se opõe funcionalmente ao KDM6A, aumentaria a sensibilidade ao MPC-0767. Para testar esta hipótese, uma linhagem celular FLT3-ITD (MV-4-11) foi usada e tratada com qualquer um dos dois inibidores da EZH2 do estágio clínico, EPZ-6438 e CPI-1205, em 8 concentrações diferentes por 4 dias. Após esse período, as células foram contadas, reanimadas e tratadas com 8 concentrações de inibidor de EZH2 isoladamente, 8 concentrações de MPC-0767 isoladamente ou a combinação das duas (64 combinações totais). Após o tratamento combinado por 3 dias, a viabilidade celular foi determinada usando CellTiter-Glo®. Foi realizada análise isobologramática e os pontos de dados para a combinação de EPZ-6438 e MPC-0767 e CPI-1205 e MPC-0767 estavam abaixo da linha de aditividade (linha diagonal), indicando valores de índice de combinação <1 e confirmando sinergia da combinação tratamento (Fig. 21). Essas descobertas demonstram que os reguladores epigenéticos podem influenciar a sensibilidade do MPC-0767, que as mutações da perda de função nesses genes podem ser úteis como biomarcadores da atividade do MPC-0767, e que os compostos de estágios clínicos direcionados aos reguladores epigenéticos podem ser combinados com o MPC-0767 para uso terapêutico. Exemplo 15: Sinergia de MPC-0767 com trióxido arsênico em linhagens celulares de AML
[00267] A leucemia promielocítica aguda (APL) é um subtipo de leucemia mieloide aguda que possui uma translocação cromossômica característica t (15; 17) que gera uma fusão da leucemia promielocítica (PML) e do receptor retinoico do ácido alfa (RARα) (PML-RARα). A proteína de fusão resultante tem um perfil transcricional alterado, levando a um bloqueio na diferenciação celular. Os agentes que degradam a proteína de fusão aberrante, incluindo o ácido all-trans retinoico e o trióxido arsênico (ATO), provaram ser eficazes para a APL (revisado em McCulloch et al., 2017). Curiosamente, o ATO exibe atividade antiproliferativa em células que não abrigam PML-RARα, sugerindo que ele pode exercer atividades adicionais que levam à morte de células cancerígenas (Miller et al., 2002). Assim, o ATO foi avaliado em várias indicações de heme que não abrigam PML-RARα (Bonati et al., 2006). Estudos recentes demonstraram que a combinação de ATO e sorafenibe é sinérgica nas linhagens celulares de FLT3-ITD AML (Wang et al., 2018). Uma explicação mecanicista para a sinergia observada foi que o ATO reduziu a interação entre FLT3-ITD e HSP90. Como resultado, o FLT3-ITD sofre degradação que elimina a sinalização oncogênica do FLT3-ITD e as células tumorais morrem (Wang et al., 2018). Assim, a combinação com sorafenibe (inibidor de FLT3) deve resultar em uma revogação mais completa da sinalização de FLT3 via inibição direta (sorafenibe) e degradação (ATO). Além disso, usando um modelo farmacodinâmico semimecanicista que explorou a relação de concentração entre ATO e inibidores da HSP90 de 1ª geração, Wetzler e colegas (Wetzler et al., 2007) demonstraram sinergia nas linhagens celulares de LBC com STAT3 constitutivo.
[00268] Para testar se a combinação do MPC-0767 era sinérgica com o ATO, testou-se um painel de linhagens celulares de AML. As linhagens celulares incluem aquelas que abrigam FLT3-ITD (MOLM- 13, MOLM-14 e MV-4-11) ou FLT3 WT (ME-1, THP-1, OCI-AML-2, HL60, NOMO-1, TUR e ML-2). As linhagens celulares foram tratadas com 8 concentrações de MPC-0767 (234 - 4000 nM; diluições de 1,5 vezes) isolado, 8 concentrações de ATO (78 - 10000 nM; diluições de 2 vezes) isoladamente ou a combinação dos 2 (64 pontos de dados).
[00269] Após o tratamento combinado por 3 dias, a viabilidade celular foi determinada usando CellTiter-Glo®. Os valores do índice de combinação (IC) foram calculados para cada linhagem celular usando a equação de Chou-Talalay, onde valores de CI <1 denotam sinergia, CI = 1 indica aditividade e IC> 1 indica antagonismo. Um exemplo é mostrado na Fig. 22, onde células MOLM-14 foram tratadas com MPC- 0767 (527 nM), ATO (1250 nM) ou a combinação (combinação). É importante ressaltar que a combinação reduziu a viabilidade maior que o efeito aditivo de qualquer agente isolado e recuperou um valor de CI de 0,56, confirmando sinergia. A Tabela 3 mostra os valores de CI para todas as linhagens celulares testadas e a concentração específica de MPC-0767 e ATO. Foi observada sinergia em todas as linhagens celulares testadas. Essas descobertas estabelecem que a combinação de MPC-0767 é sinérgica com ATO em células AML. Além disso, foi observada sinergia em concentrações clinicamente relevantes de MPC-0767, tanto em linhagens celulares que abrigam a mutação em FLT3-ITD quanto naquelas que não o fizeram.
[00270] Em seguida, explorou-se se a atividade sinérgica do MPC- 0767 e do ATO era devido a uma revogação mais completa da sinalização oncogênica de FLT3-ITD. As células MOLM-13 foram tratadas com MPC-0767 (800 nM), ATO (625 nM) ou a combinação por 24 horas. Após este período, as células foram colhidas para a avaliação da expressão de FLT3 da superfície celular por citometria de fluxo. Para medir adicionalmente os efeitos da revogação do FLT3, avaliaram-se o fosfo-ERK (pERK) e o fosfo-S6 (pS6), pois esses são dois efetores conhecidos a jusante. Como mostrado na Fig. 23, MPC- 0767 e ATO como agentes únicos reduziram FLT3, pS6 e pERK levemente reduzido. No entanto, a combinação resultou em uma maior redução de cada proteína ou fosfoproteína em comparação com qualquer um dos agentes isoladamente. Esses achados sugerem que o efeito antiproliferativo sinérgico observado nas linhagens celulares de FLT3-ITD AML se manifesta pelo menos em parte por meio de uma inibição mais completa da sinalização oncogênica do FLT3. Tabela 3. Sumário dos valores do índice de combinação (IC) obtidos para a combinação de MPC-0767 e ATO em todas as linhagens celulares de AML testadas. Valores de CI < 1 denotam sinergia.
Combinação Linhagem FLT3- MPC-0767 conc, ATO conc, (nM) valor celular ITD? (nM) de CI MOLM-13 Sim 790 625 0,65 MOLM-14 Sim 527 1250 0,56 MV-4-11 Sim 790 625 0,71 OCI-AML-2 Não 790 1250 0,67 NOMO-1 Não 1185 2500 0,69 ML2 Não 790 1250 0,54 TUR Não 527 5000 0,66 HL-60 Não 790 5000 0,85 ME-1 Não 1185 10000 0,21 THP-1 Não 2667 10000 0,12 Exemplo 16: MPC-0767 supera a ativação da via alternativa que confere resistência aos inibidores de FLT3.
[00271] Condições que imitam a sinalização estromal na medula óssea podem conferir resistência aos inibidores da FLT3 através da ativação de receptores alternativos da superfície celular (Karjalainen et al., 2017). O sistema celular BaF3 foi usado para testar a eficácia do MPC-0767 sob condições que conferem resistência aos inibidores de FLT3. As células BaF3 requerem a suplementação de IL-3 para ativar o receptor de IL-3 para o crescimento. No entanto, nas células BaF3 transfectadas com FLT3-ITD, as células não precisam mais de IL3, pois a sobrevivência é conduzida exclusivamente pela sinalização oncogênica de FLT3. Como tal, as células que expressam FLT3-ITD na ausência de IL-3 são sensíveis à inibição de FLT3 pelos inibidores de FLT3, gilteritinibe ou crenolanibe (Fig. 24). No entanto, a adição de IL3 ativa uma via alternativa de sobrevivência não dependente de FLT3, de modo que as células se tornam resistentes aos inibidores de FLT3 (Sung et al., 2017). Em contraste, BaF3 que expressa FLT3-ITD e tratado com ou sem IL3 exógena é igualmente sensível ao MPC- 0767 (Fig. 24). Esses achados demonstram que o MPC-0767 pode inibir várias vias pró-sobrevivência. Exemplo 17: MPC-0767 exibe atividade antitumoral melhorada em combinação com 5’azacitadina.
[00272] Para testar o MPC-0767 em combinação com a 5'azacitadina in vivo, foi realizado um estudo sistêmico de xenoenxerto de sobrevivência usando a linhagem celular AML MOLM-13 FLT3-ITD. Antes da inoculação das células tumorais, os camundongos NOD/SCID foram pré-tratados por 2 dias com uma injeção intraperitoneal diária de 100 mg/kg de ciclofosfamida para facilitar o enxerto das células tumorais humanas MOLM-13. Após a injeção da ciclofosfamida, os animais foram recuperados por 24 horas antes da inoculação com células tumorais humanas MOLM-13. Cada rato foi inoculado com 1x107 células MOLM-13 em 100 μL de PBS por injeção intravenosa de veias da cauda. Os ratos foram randomizados em 4 grupos de 6 camundongos cada. Três dias após a inoculação do tumor, os camundongos foram dosados com veículo, MPC-0767 75 mg/kg (QD x 5; 1 dia de folga; QD x 26 p.o.); 5'azacitidina 2 mg/kg (QD x 4 i.p.) ou a combinação de MPC-0767 e 5’azacitidina (tratada como para agentes únicos) e monitorada quanto à sobrevivência. A viabilidade e a perda de peso corporal foram monitoradas diariamente. A perda média de peso corporal não excedeu 11% no grupo da combinação durante o curso do estudo. Como mostrado na Fig. 25, MPC-0767 e 5'azacitidina como agentes únicos aumentaram significativamente a sobrevida média dos camundongos em 5,5 dias e 8 dias, respectivamente (P <0,01 e P <0,001, respectivamente, Log Rank, (Mantel Cox)). É importante ressaltar que a combinação de MPC-0767 e 5’azacitidina resultou em um aumento significativo da sobrevida média em comparação com o veículo e as duas subdivisões de agente único (P <0,001, Log Rank, (Mantel Cox)). Essas descobertas demonstram que a combinação de MPC-0767 e 5’azacitidina possui atividade antileucêmica e pode ser uma terapia eficaz para pacientes com LMA FLT3-ITD. Exemplo 18: MPC-0767 aumenta a morte mediada por células T de células AML.
[00273] A capacidade do MPC-0767 para aumentar a morte de células T foi determinada em um ensaio de morte mediado por células T in vitro. A linhagem celular OCI-AML2 AML foi marcada com o CFSE corante celular e tratada durante a noite com MPC-0767 (2 μM) e peptídeo humano pp65495-503 do citomegalovírus humano. As células OCI-AML2 foram lavadas para remover MPC-0767 e peptídeo e depois cocultivadas com uma linhagem celular T enriquecida para células T CD8+ específicas para pp65 a uma proporção aproximada de 2,5:1 (células T : OCI-AML2). Após 4 horas de cocultura, as células foram colhidas, fixadas, permeabilizadas e coradas para a forma ativa da caspase-3 como uma leitura direta da morte celular apoptótica. A porcentagem de caspase-3+ ativa de todas as células CFSE+ (apenas células OCI-AML-2) é mostrada na Fig. 26. Um aumento sinérgico (Índice de Combinação (IC), de 0,53) em células apoptóticas foi observado com a combinação das células T CD8+ enriquecidas com MPC-0767 e pp65. Essas descobertas demonstram que o MPC-0767 pode alterar as células tumorais, tornando-as mais vulneráveis à morte mediada por células T.
[00274] O CI é uma medida quantitativa usada para determinar se o efeito combinado de um par de fármacos é sinérgico, aditivo ou antagônico. O CI é calculado como CI = (E1 + E2)/E12, onde E12 é uma resposta biológica normalizada (por exemplo, % de células Caspase-3+) para a combinação da fármaco A e da fármaco B, e E1 e E2 são a resposta medida para cada tratamento com fármaco isolado, respectivamente. Valores de CI menores que 1 indicam sinergia, com a magnitude do efeito indicado por quanto menor que 1 a pontuação da sinergia. Um tratamento matemático mais detalhado dessa relação é descrito em Shin et al. 2018. Exemplo 19: MPC-0767 demonstra eficácia in vivo no modelo singênico de MC38 imunocompetente.
[00275] Para demonstrar a eficácia do MPC-0767 em um modelo in vivo com um sistema imunológico intacto, foi realizado um estudo singênico usando a linhagem celular de câncer de cólon murino MC38. Cada camundongo C57BL/6 foi inoculado por via subcutânea no flanco direito com 2,5 x 105 células tumorais em 0,1 ml de PBS. Quando o volume médio do tumor atingiu 73 mm3, os camundongos foram randomizados em 2 grupos de 6. Os camundongos foram depois administrados por via oral com veículo ou 150 mg/kg MPC-0767 QD x
17. Medições de tumores (paquímetro) foram realizadas nos dias indicados. Como mostrado na Fig. 27, o MPC-0767 induziu uma inibição do crescimento do tumor de 69,5 % (Fig. 27A), sem efeitos significativos no peso corporal (Fig. 27B). O teste t de Student foi utilizado para avaliar a significância estatística da diferença entre esses grupos, P = 0,01. Estes dados confirmam que MPC-0767 exibe atividade antitumoral em um modelo singênico in vivo.
[00276] Para testar se MPC-0767 pode induzir uma resposta imune antitumoral, além da atividade citotóxica direta, a regulação negativa de PD-L1 e a relação efetora/célula T reguladora foram medidas no mesmo modelo singênico de MC38. No dia 21, quando o volume médio do tumor era de 372 mm3, um segundo grupo de camundongos (n = 6) foi tratado com 150 mg/kg MPC-0767 QD x 7. Um dia após a última dose (dia 28 após a inoculação) ) os tumores foram colhidos do veículo e 150 mg/kg do grupo MPC-0767 QD x7. Os leucócitos infiltrantes de tumor (CD45+, CD3-) nos tumores dissociados foram analisados quanto à expressão de PD-L1 por citometria de fluxo. Foi observada uma redução significativa de PD-L1 indicando que MPC- 0767 pode reprimir esse ligante imunossupressor in vivo (Fig. 27C). Para analisar os efeitos dessa repressão nas populações de células imunes nos tumores MC38, a proporção de células T CD4+ (CD45+, CD3+, CD4+) e CD8+ (CD45+, CD3+, CD4-) para células T reguladoras (CD45+, CD3+, CD4+, FOXP3+) também foi avaliada por citometria de fluxo. Foi observado um aumento significativo da razão CD4: TREG e CD8: TREG no grupo tratado com MPC-0767 (Fig. 27D), o que sugere uma resposta imune antitumoral. Juntos, esses dados sustentam que a atividade antitumoral MPC-0767 envolve indução da resposta imune antitumoral. Exemplo 20: Sinergia MPC-0767 com um inibidor da via MAPK em linhagens celulares de AML
[00277] A via da proteína cinase ativada por mitogênio (MAPK) é um ponto crítico de integração que liga estímulos externos à sobrevivência celular e os transduzem a sinais intracelulares que mediam a diferenciação, a sobrevivência e a proliferação. De fato, as células AML visadas por inibidores seletivos da MAPK resultam em sobrevivência celular reduzida (Milella et al., 2001). A combinação de MPC-0767 e trametinibe, um inibidor da MEK em estágio clínico que foi aprovado para o tratamento de pacientes com melanoma cujo tumor abriga o BRAF V600E, foi testada em um painel de linhagens celulares de AML. As linhagens celulares incluem aquelas que abrigam FLT3-ITD (MOLM-13, MOLM-14 e MV-4-11) ou FLT3 WT +
RAS WT (OCI-AML-2) ou FLT3 WT + RAS mutante (ML-2) as linhagens foram tratadas com 8 concentrações de MPC-0767 (234 - 4000 nM; diluições de 1,5 vezes) sozinhas, 8 concentrações de ATO (0,8 - 100 nM; diluições de 2 vezes) sozinhas ou a combinação dos 2 (64 pontos de dados).
[00278] Após o tratamento combinado por 3 dias, a viabilidade celular foi determinada usando CellTiter-Glo®. Os valores do índice de combinação (IC) foram calculados para cada linhagem celular usando a equação de Chou-Talalay, onde valores de CI <1 denotam sinergia, CI = 1 indica aditividade e IC> 1 indica antagonismo. Um exemplo é mostrado na Fig. 28, onde células MOLM-13 foram tratadas com MPC- 0767 (351 nM), trametinibe (25 nM) ou a combinação (combinação). É importante ressaltar que a combinação reduziu a viabilidade maior que o efeito aditivo de qualquer agente isolado e recuperou um valor de CI de 0,55, confirmando sinergia. A Tabela 4 mostra os valores de CI para todas as linhagens celulares testadas e a concentração específica de MPC-0767 e trametinibe. Além disso, foi observada sinergia em concentrações clinicamente relevantes de MPC-0767 em linhagens celulares que hospedavam FLT3-ITD ou não, ou em uma linhagem celular que abriga uma mutação RAS. Tabela 4. Sumário dos valores do índice de combinação (IC) obtidos para a combinação de MPC-0767 e trametinibe em todas as linhagens celulares de AML testadas. Valores de CI <1 denotam sinergia.
Combinação Linhagem status de FLT3 & MPC-0767 Trametinibe valor de celular RAS conc, (nM) conc, (nM) CI MOLM-13 FLT3-ITD; 351 25 0,55
RAS WT MOLM-14 FLT3-ITD; 790 6,3 0,62
RAS WT MV-4-11 FLT3-ITD; 527 6,3 0,67
RAS WT
OCI-AML- FLT3 WT; 790 0,78 0,64 2 RAS WT ML2 FLT3 WT; 790 100 0,32 mutante de RAS Exemplo 21: A inibição da expressão de PD-L1 MPC-0767 aumenta a ativação das células T
[00279] A adição de anticorpos que bloqueiam a via PD-1/PD-L1 estimula um aumento da resposta das células T in vitro, em modelos animais pré-clínicos e em pacientes com câncer. Isso pode levar a regressões tumorais ou depuração do tumor em pacientes. Para examinar os efeitos do MPC-0767 na ativação das células PD-L1 e T, usou-se um sistema modelo no qual as células T PD-1 + Jurkat expressam luciferase sob o controle do promotor NFAT (Promega, a seguir denominada células repórteres Jurkat). Quando as células T são estimuladas através do receptor de células T (TCR), a ativação da via NFAT direciona a expressão da luciferase. Portanto, neste sistema modelo, a luciferase é um marcador substituto da ativação das células T.
[00280] Como mostrado na Fig. 29A, uma incubação de 6 horas de células THP-1 AML com células repórter Jurkat e anti-CD3 em baixa dose (10 ng/ml) leva à expressão de luciferase devido à ativação de células repórter Jurkat conduzida por TCR. A Fig. 29B mostra que as células THP-1 tratadas por 24 horas com IFNy (50 ng/ml) têm capacidade reduzida de ativar células T (luciferase reduzida). Isso pode ser atribuído à regulação positiva de PD-L1 mediada por IFNγ, pois a adição de um anticorpo bloqueador de PD-L1 (atezolizulmabe, 5 μg/ml) restaura a ativação de células T para níveis não tratados.
[00281] Em seguida, foi determinado se a redução de PD-L1 em MPC-0767 poderia aumentar a estimulação de células T semelhante aos anticorpos bloqueadores anti-PD-L1. As células THP-1 foram tratadas durante a noite com IFNγ na presença ou ausência de MPC- 0767 (1μM ou 2uM). As células THP-1 foram lavadas e uma porção foi salva para análise por citometria de fluxo da expressão de PD-L1. As células restantes foram incubadas com células repórter Jurkat e anti- CD3 (10 ng/ml) por 6 horas. A MPC-0767 reduziu a expressão de PD- L1 dependente da dose nas células THP-1 (Fig. 29C). O MPC-0767 também foi capaz de reduzir a inibição dependente da dose da ativação das células T (Fig. 29D), demonstrando que a modulação da expressão de PD-L1 pelo MPC-0767 tem uma consequência funcional na atividade das células T. Exemplo 22: MPC-0767 demonstra atividade antitumoral em um modelo sistêmico de LMA in vivo.
[00282] Para testar ainda mais a atividade do MPC-0767 in vivo, foi realizado um estudo sistêmico de xenoenxerto de sobrevivência usando a MOLM-13 FLT3-ITD abrigando a linhagem celular de AML. Antes da inoculação das células tumorais, os camundongos NOD/SCID foram pré-tratados por 2 dias com uma injeção intraperitoneal diária de 100 mg/kg de ciclofosfamídeo para facilitar o enxerto das células tumorais humanas MOLM-13. Após a injeção da ciclofosfamida, os animais foram recuperados por 24 horas antes da inoculação com células tumorais humanas MOLM-13. Cada camundongo foi inoculado com 1x107 células MOLM-13 em 100 μL de PBS por injeção intravenosa de veia da cauda. Os camundongos foram randomizados em 3 grupos de 6. Três dias após a inoculação do tumor, os camundongos foram dosados com veículo, 75 mg/kg de MPC-0767 ou 150 mg/kg de MPC-0767 uma vez ao dia e monitorado quanto à sobrevivência. A viabilidade e a perda de peso corporal foram monitoradas diariamente. Perda significativa de peso corporal e/ou sintomas clínicos (paralisia, hipotermia ou taquipneia) foram observados apenas antes da morbidade nos três grupos. Como mostrado na Figura 30, o MPC-0767 aumentou significativamente a sobrevida média em 1,5 dias a 75 mg/kg e 10 dias a 150 mg/kg (P <0,01, teste de Log-Rank (Mantel Cox)). Em resumo, MPC-0767 demonstrou atividade antitumoral significativa dependente da dose.

Claims (85)

REIVINDICAÇÕES
1. Método para tratamento de câncer em um indivíduo em necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao indivíduo de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de MPC- 0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o câncer é refratário ao tratamento com, ou recidivou após o tratamento com, pelo menos um agente terapêutico.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreende um sal de mesilato de MPC-0767.
4. Método, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que pelo menos um agente terapêutico é selecionado do grupo que consiste em erlotinibe, afatinibe, lapatinibe, dacomitinibe, gefitinibe, AP32788, poziotinibe, osimertinibe e EGF816.
5. Método, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que pelo menos um agente terapêutico é selecionado do grupo que consiste em gilteritinibe, crenolanibe, tandutinibe, sorafenibe, midostaurina e quizartinibe.
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o câncer é caracterizado por ter uma ou mais mutações ativadoras em pelo menos uma proteína cinase selecionada a partir do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), receptor 2 do fator de crescimento epidérmico humano (HER2) e tirosina cinase 3 tipo fms (FLT3).
7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a uma ou mais mutações ativadoras são uma mutação de inserção no éxon 20 EGFR ou HER2 (ins20).
8. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a uma ou mais mutações ativadoras são uma duplicação em tandem interna (ITD) de FLT3.
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir de câncer gástrico, câncer de cólon, câncer de próstata, câncer de pulmão de pequenas células, câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer de ovário, linfoma, leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia promielocítica aguda, leucemia linfocítica crônica (LLC), mieloma múltiplo, carcinoma de células renais, tumor estromal gastrointestinal, leucemia mieloide crônica, glioblastoma multiforme, astrocitomas, meduloblastomas, melanoma, câncer de mama e câncer de pâncreas.
10. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o câncer é NSCLC.
11. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o câncer é AML.
12. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o câncer é CLL.
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é humano.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica é adaptada para administração oral, bucal ou parentérica.
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, o método caracterizado pelo fato de que compreende ainda administrar ao indivíduo um ou mais ingredientes farmacêuticos ativos adicionais (APIs).
16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o um ou mais APIs adicionais são um inibidor de proteína cinase (PKI), um agente quimioterapêutico, um inibidor de FLT3, um inibidor de PD-1/PD-L1, um inibidor da via Bcl-2, um Inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK, um inibidor de ponto de verificação, um agente terapêutico que aumenta a imunidade antitumoral ou um inibidor de EZH2.
17. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o PKI é um PKI direcionado a EGFR ou HER2.
18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o PKI é selecionado de erlotinibe, afatinibe, lapatinibe, dacomitinibe, gefitinibe, AP32788, poziotinibe, osimertinibe e EGF816.
19. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o agente quimioterapêutico é selecionado dentre docetaxel, carboplatina, cisplatina e pemetrexedo.
20. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o inibidor de FLT3 é selecionado dentre crenolanibe, tandutinibe, gilteritinibe, midostaurina, quizartinibe e sorafenibe.
21. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD-1/PD-L1 é selecionado a partir do grupo que consiste em AMP-224, AMP-514/MEDI-0680, atezolizumabe, avelumabe, BGB-A317, BMS936559, durvalumabe, JTX -4014, nivolumabe, pembrolizumabe e SHR-1210.
22. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o inibidor da via Bcl-2 é selecionado dentre o grupo que consiste em ABT-737, AT-101 (Gossypol), APG- 1252, A1155463, A1210477, navitoclax, obatoclax, sabutoclax,
venetoclax, S 55746, WEHI-539, AMG-176, MIK665 e S641315.
23. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o inibidor da via Bcl-2 é um inibidor de BCL2, BCLXL ou MCL1.
24. Método, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, caracterizado pelo fato de que o inibidor da via Bcl-2 é selecionado dentre ABT-737, navitoclax e venetoclax.
25. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que um ou mais APIs adicionais são selecionados do grupo que consiste em daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, mitoxantrona, mitoxantrona, idarrubicina e citarabina.
26. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que um ou mais APIs adicionais são selecionados a partir de crenolanibe, citarabina, daunorrubicina, gilteritinibe, sorafenibe e venetoclax.
27. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o um ou mais APIs adicionais são venetoclax.
28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 19, caracterizado pelo fato de que o câncer é NSCLC.
29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 27, caracterizado pelo fato de que o câncer é AML.
30. Método, de acordo com a reivindicação 24 ou 27, caracterizado pelo fato de que o câncer é LLC.
31. Método para tratamento de leucemia mieloide aguda (LMA) em um indivíduo em necessidade, o método caracterizado pelo fato de que compreende a administração ao indivíduo de uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e, opcionalmente, um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
32. Método, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica compreende um sal de mesilato de MPC-0767.
33. Método, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, caracterizado pelo fato de que a LMA é refratária ao tratamento ou recidivou após tratamento com pelo menos um inibidor da proteína cinase (PKI).
34. Método, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que a LMA é refratária ou recidivou após o tratamento com um ou mais de midostaurina, quizartinibe, tandutinibe e sorafenibe.
35. Método, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, caracterizado pelo fato de que a LMA é refratária ou recidivou após o tratamento com um ou mais gilteritinibe, crenolanibe, sorafenibe, midostaurina, daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, mitoxantrona, idarrubicina e citarabina.
36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 35, caracterizado pelo fato de que a LMA é constituída como tendo uma ou mais mutações ativadoras no FLT3.
37. Método, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado pelo fato de que a uma ou mais mutações ativadoras em FLT3 são selecionadas a partir da mutação em FLT3 ITD, uma mutação pontual em FLT3 D835, uma mutação pontual em FLT3 I836, a mutação pontual em FLT3 N676K e a mutação pontual F691L.
38. Método, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que a uma ou mais mutações ativadoras em FLT3 é a mutação em FLT3 ITD.
39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 38, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma etapa de administração de um ou mais agentes farmacêuticos ativos adicionais (APIs) ao indivíduo.
40. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o um ou mais APIs adicionais são um inibidor de proteína cinase (PKI), um agente quimioterapêutico, um inibidor de FLT3, um inibidor de PD-1/PD-L1, um inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK, um inibidor da via Bcl-2, um inibidor do ponto de verificação, um agente terapêutico que realça a imunidade antitumoral, ou um inibidor de EZH2.
41. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que o inibidor de FLT3 é selecionado a partir de crenolanibe, gilteritinibe, midostaurina, quizartinibe e sorafenibe.
42. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD-1/PD-L1 é selecionado do grupo que consiste em AMP-224, AMP-514/MEDI-0680, atezolizumabe, avelumabe, BGB-A317, BMS936559, durvalumabe, JTX -4014, nivolumabe, pembrolizumabe e SHR-1210.
43. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que o inibidor da via Bcl-2 é selecionado do grupo que consiste em ABT-737, AT-101 (Gossypol), APG-1252, A1155463, A1210477, navitoclax, obatoclax, sabutoclax, venetoclax, S 55746, WEHI-539, AMG-176, MIK665 e S641315.
44. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que o inibidor da via Bcl-2 é um inibidor de BCL2, BCLXL ou MCL1.
45. Método, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que o inibidor da via Bcl-2 é selecionado dentre ABT-737, navitoclax e venetoclax.
46. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que um ou mais APIs adicionais são selecionados do grupo que consiste em daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, mitoxantrona, mitoxantrona, idarrubicina e citarabina.
47. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o um ou mais APIs adicionais são selecionados a partir de crenolanibe, citarabina, daunorrubicina, gilteritinibe, sorafenibe e venetoclax.
48. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o um ou mais APIs adicionais são venetoclax.
49. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
50. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 49, caracterizada pelo fato de ser para uso no tratamento de LBC de acordo com o método como definido em qualquer uma das reivindicações 31-48.
51. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende MPC-0767 e um ou mais APIs adicionais.
52. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 51, caracterizada pelo fato de que um ou mais APIs adicionais são selecionados do grupo que consiste em crenolanibe, citarabina, daunorrubicina, gilteritinibe, sorafenibe e venetoclax.
53. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 51, caracterizada pelo fato de que um ou mais APIs adicionais são selecionados de ABT-737, navitoclax e venetoclax.
54. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 53, caracterizada pelo fato de que o um ou mais APIs adicionais são venetoclax.
55. Método, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, caracterizado pelo fato de que a LMA é refratária ou recidivou após o tratamento com um inibidor da via Bcl-2.
56. Método, de acordo com a reivindicação 55, caracterizado pelo fato de que o inibidor da via Bcl-2 é venetoclax.
57. Método, de acordo com a reivindicação 55 ou 56, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a administração de um ou mais agentes farmacêuticos ativos (APIs) adicionais ao indivíduo.
58. Método, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que o um ou mais APIs adicionais são um inibidor de proteína cinase (PKI), um agente quimioterapêutico, um inibidor de FLT3, um inibidor de PD-1/PD-L1 ou um inibidor da via Bcl-
2.
59. Método, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o inibidor de FLT3 é selecionado entre crenolanibe, gilteritinibe, midostaurina, quizartinibe e sorafenibe.
60. Método, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o inibidor de PD-1/PD-L1 é selecionado a partir do grupo que consiste em AMP-224, AMP-514/MEDI-0680, atezolizumabe, avelumabe, BGB-A317, BMS936559, durvalumabe, JTX -4014, nivolumabe, pembrolizumabe e SHR-1210.
61. Método, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o inibidor da via Bcl-2 é selecionado do grupo que consiste em ABT-737, AT-101 (Gossypol), APG-1252, A1155463, A1210477, navitoclax, obatoclax, sabutoclax, venetoclax, S 55746, WEHI-539, AMG-176, MIK665 e S641315.
62. Método, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o inibidor da via Bcl-2 é um inibidor de
BCL2, BCLXL ou MCL1.
63. Método, de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que o inibidor da via Bcl-2 é selecionado dentre ABT-737, navitoclax e venetoclax.
64. Método, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que um ou mais APIs adicionais são selecionados do grupo que consiste em daunorrubicina, doxorrubicina, epirrubicina, mitoxantrona, mitoxantrona, idarrubicina e citarabina.
65. Método, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que um ou mais APIs adicionais são selecionados a partir de crenolanibe, citarabina, daunorrubicina, gilteritinibe, sorafenibe e venetoclax.
66. Método, de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que o um ou mais APIs adicionais são venetoclax.
67. Método, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a administração de um inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK.
68. Método, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado pelo fato de que o inibidor da via RAS é selecionado a partir de um inibidor de Raf, como vemurafenibe, sorafenibe ou dabrafenibe, um inibidor de MEK, como AZD6244 (Selumetinibe), PD0325901, GSK1120212 (Trametinibe), U0126-EtOH, PD18435 , RDEA119 (Rafametinibe), PD98059, BIX 02189, MEK162 (Binimetinibe), AS-703026 (Pimasertibe), SL-327, BIX02188, AZD8330, TAK-733, cobimetinibe ou PD318088 e um inibidor de ERK como LY3214996, BV ou GDC-0994.
69. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 49, caracterizada pelo fato de ser para uso no tratamento de LBC de acordo com o método como definido em qualquer uma das reivindicações 55-68.
70. Método para prever a resposta terapêutica ao MPC- 0767 em um indivíduo que precisa de tratamento para LMA, caracterizado pelo fato de que compreende a determinação do status de FLT3 e RAS em uma amostra de células cancerígenas LMA obtidas do indivíduo, em que um status de mutante FLT3 normal/não FLT3- ITD e RAS indica que as células cancerígenas são resistentes à monoterapia com MPC-0767 e responsivos a uma terapia de combinação com MPC-0767 e um inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK; e um status de FLT3-ITD indica que se prevê que as células cancerígenas respondem à monoterapia por MPC-0767.
71. Método para o tratamento de AML em um indivíduo necessitado de tal tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende a determinação do status de mutante FLT3 e RAS em uma amostra de células cancerígenas AML do indivíduo e o tratamento com uma terapia de combinação compreendendo MPC- 0767 e um inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK em que o status é mutante FLT3 normal/não-FLT3-ITD e RAS.
72. Método, de acordo com a reivindicação 69 ou 70, caracterizado pelo fato de que um status de mutante RAS é definido pela presença de uma ou mais mutações ativadoras em NRAS ou KRAS.
73. Método, de acordo com a reivindicação 71, caracterizado pelo fato de que a uma ou mais mutações ativadoras em NRAS ou KRAS é uma mutação na sequência polinucleotídica que codifica a proteína RAS que resulta em uma alteração de aminoácido selecionada do grupo que consiste em A146T e G13D de KRAS; ou Q61L, Q61H e G12D de NRAS.
74. Método, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a administração de um inibidor de EZH2.
75. Método para prever a resposta terapêutica ao MPC- 0767 em um indivíduo que necessita de tratamento para LMA, caracterizado pelo fato de que compreende determinar ou receber o status EZH2 em uma amostra de células cancerígenas LMA do indivíduo, em que uma mutação na perda de função EZH2 indica que se prevê que as células cancerígenas respondem à terapia por MPC- 0767, enquanto um ganho de função mutante EZH2 indica que se prevê que as células cancerígenas sejam resistentes à terapia por MPC-0767.
76. Método para o tratamento da LMA em um indivíduo necessitado desse tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende determinar ou receber o status EZH2 da LMA em uma amostra biológica da LMA do indivíduo e tratar o indivíduo com terapia por MPC-0767, em que o status é uma mutação da perda de função EZH2 ou trata o indivíduo com uma terapia de combinação compreendendo MPC-0767 e um inibidor de EZH2 em que o status EZH2 é normal ou um ganho da mutação EZH2 de função.
77. Método para prever a resposta terapêutica ao MPC- 0767 em um indivíduo que precisa de tratamento para LMA, caracterizado pelo fato de que compreende determinar ou receber o status KDM6A em uma amostra de células cancerígenas LMA obtidas a partir do indivíduo, em que uma mutação na perda de função do KDM6A indica que se prevê que as células cancerígenas sejam resistentes à terapia por MPC-0767.
78. Método, de acordo com a reivindicação 31 ou 32, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a administração de um inibidor de EZH2.
79. Método, de acordo com a reivindicação 78, caracterizado pelo fato de que o inibidor de EZH2 é selecionado entre
GSK343, EPZ6438 (Tazemetostate), CPI-1205, GSK2816126 e PF-
06821497.
80. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende MPC-0767, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e opcionalmente um veículo ou excipiente farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento de câncer.
81. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 80, caracterizada pelo fato de que o câncer é uma malignidade hematológica ou um tumor sólido.
82. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 80 ou 81, caracterizada pelo fato de ser para uso em combinação com um agente terapêutico adicional selecionado a partir de um agente quimioterapêutico, um agente que realça a imunidade antitumoral, um inibidor de ponto de verificação, um inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK.
83. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 82, caracterizada pelo fato de que o agente quimioterapêutico é selecionado a partir de trióxido arsênico ou azacitidina.
84. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 82, caracterizada pelo fato de que o inibidor da via Ras/Raf/MEK/ERK é trametinibe.
85. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 82, caracterizada pelo fato de que o inibidor do ponto de verificação é um inibidor da sinalização de PD-1/PD-L1 ou um inibidor de CTLA-4.
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