BR112020003259A2 - inibição fotodinâmica de patógenos microbianos em plantas - Google Patents
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- A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
Abstract
Método para inibir o crescimento de um patógeno microbiano de uma planta. O método inclui a aplicação à planta de uma combinação que inclui um composto macrocíclico contendo nitrogênio que é um fotossensibilizador de oxigênio singlete, selecionado do grupo que consiste de uma porfirina, uma porfirina reduzida e uma mistura dos mesmos; e um agente quelante para aumentar a permeabilidade do patógeno microbiano ao composto macrocíclico contendo nitrogênio; e expor a planta à luz para ativar o composto macrocíclico contendo nitrogênio e gerar espécies reativas de oxigênio singlete.
Description
[0001] O campo técnico refere-se, de forma geral, à inibição fotodinâmica de patógenos microbianos em plantas com o uso de compostos e composições que incluem um composto fotossensibilizador. Mais particularmente, o campo técnico se refere a compostos macrocíclicos portadores de nitrogênio e composições dos mesmos para inibição fotodinâmica de patógenos microbianos, como patógenos fúngicos ou bacterianos, em plantas. Os compostos macrocíclicos portadores de nitrogênio podem ser compostos de porfirina ou compostos de porfirina reduzida.
[0002] A inibição fotodinâmica de patógenos microbianos envolve expor um agente fotossensível à luz a fim de gerar espécies reativas do oxigênio (ROS), como o oxigênio singleto, que pode ter efeitos prejudiciais sobre os patógenos microbianos. As técnicas e aplicações de inibição fotodinâmica existentes têm várias deficiências.
[0003] Várias composições e métodos são descritos no presente documento para inibição fotodinâmica de patógenos microbianos em plantas. A inibição fotodinâmica de patógenos bacterianos ou fúngicos pode ser realizada por meio da aplicação à planta de um composto fotossensibilizador e um composto intensificador, que pode ser um agente quelante. O composto fotossensibilizador e o agente quelante podem ser combinados, juntamente com outros componentes opcionais, como fluidos de entrega, solventes, tensoativos e adesivos para formar uma composição antimicrobiana para aplicação a plantas. A inibição fotodinâmica de patógenos microbianos em plantas pode ser melhorada pela combinação do composto fotossensibilizador e um composto intensificador, em comparação com cada composto tomado sozinho. Exemplos não limitadores de compostos intensificadores podem, por exemplo, incluir ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), ácido poliaspártico, ácido etilenodiamina- N,N’-dissuccínico (EDDS), ácido iminodisuccínico (IDS, também chamado (ácido
N-1,2-dicarboxietil)-D,L-aspártico), ácido N,N-dicarboximetil glutâmico (GLDA), ou sais agricolamente aceitáveis dos mesmos.
[0004] Em um aspecto, é fornecido um método para inibir o crescimento de um patógeno microbiano de uma planta, incluindo: aplicar à planta uma combinação incluindo: um composto macrocíclico portador de nitrogênio que é um fotossensibilizador de oxigênio singleto selecionado do grupo que consiste em uma porfirina, uma porfirina reduzida e uma mistura dos mesmos; e um agente quelante para aumentar a permeabilidade do patógeno microbiano ao composto macrocíclico portador de nitrogênio; e expor a planta à luz para ativar o composto macrocíclico portador de nitrogênio e gerar espécies reativas de oxigênio singleto.
[0005] Em outro aspecto, é fornecida uma composição para inibir o crescimento de um patógeno microbiano de uma planta, incluindo: um composto macrocíclico portador de nitrogênio que é um fotossensibilizador de oxigênio singleto selecionado do grupo que consiste em uma porfirina, uma porfirina reduzida e uma mistura dos mesmos; um agente quelante para aumentar a permeabilidade do patógeno microbiano ao composto macrocíclico portador de nitrogênio; e um fluido carreador, em que após a aplicação da composição à planta e expor a planta à luz, o composto macrocíclico portador de nitrogênio é ativado e gera espécies reativas de oxigênio singleto.
[0006] Em outro aspecto, é fornecido um método para inibir o crescimento de um patógeno fúngico de uma planta, incluindo: aplicar à planta um composto macrocíclico portador de nitrogênio que é um fotossensibilizador de oxigênio singleto selecionado do grupo que consiste em uma porfirina, uma porfirina reduzida e uma mistura dos mesmos; e expor a planta à luz para ativar o composto macrocíclico portador de nitrogênio e gerar espécies reativas de oxigênio singleto.
[0007] Em outro aspecto, é fornecido um método para inibir o crescimento de um patógeno microbiano de uma planta, incluindo: aplicar à planta uma combinação incluindo: um composto de diaril-heptanoide fotossensível que é um fotossensibilizador de oxigênio singleto; e um agente quelante para aumentar a permeabilidade do patógeno microbiano ao composto de diaril-heptanoide fotossensível; e expor a planta à luz para ativar o composto de diaril-heptanoide fotossensível e gerar oxigênio singleto reativo.
[0008] O composto fotossensibilizador pode ser um composto macrocíclico portador de nitrogênio, como uma porfirina ou um composto de porfirina reduzida, que pode ser metalizado ou não-metalizado. Compostos fotossensíveis metalizados, como Mg-clorofilina, são fornecidos assim para gerar, em resposta a luz de exposição, espécies reativas de oxigênio (ROS) disponíveis para inibir crescimento microbiano. O composto fotossensibilizador pode incluir outros compostos, como compostos de diaril-heptanoides.
[0009] Além disso, a inibição fotodinâmica da patógenos fúngicos pode ser realizada por meio da aplicação de uma porfirina ou composto fotossensibilizador de porfirina reduzida à planta e da exposição da planta à luz para ativar o composto fotossensibilizador e gerar espécies reativas de oxigênio (ROS) disponíveis para inibir crescimento fúngico.
[0010] Plantas infectadas com vários patógenos microbianos podem ser tratadas. Patógenos fúngicos aos quais as composições antimicrobianas podem ser aplicadas incluem Alternaria solani, Botrytis cinerea, Sclerotinia homoeocarpa, e muitos outros. Patógenos bacterianos aos quais a composição antimicrobiana pode ser aplicada incluem bactérias gram-negativas, como Erwinia amylovara, e outros.
[0011] A presente descrição fornece métodos para inibir fotodinamicamente o crescimento antimicrobiano, como crescimento fúngico e/ou crescimento de patógeno bacteriano em uma planta é fornecido. Os métodos podem incluir aplicar à planta: uma porfirina ou composto fotossensibilizador de porfirina reduzida; e pelo menos um dentre ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido poliaspártico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido etilenodiamina-N,N’-dissuccínico (EDDS) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido iminodisuccínico (IDS) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, e ácido L-glutâmico ácido N,N-diacético (GLDA) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo; e expor a planta à luz para ativar a porfirina ou o composto fotossensibilizador de porfirina reduzida.
[0012] Composições antimicrobianas, como composições antifúngicos e/ou antibacterianas para uso em plantas são também fornecidas. Em algumas modalidades, as composições podem incluir uma porfirina ou composto fotossensibilizador de porfirina reduzida; e pelo menos um dentre ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido poliaspártico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido etilenodiamina-N,N’-dissuccínico (EDDS) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido iminodisuccínico (IDS) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, e ácido L-glutâmico ácido N,N-diacético (GLDA) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, a composição pode incluir um composto macrocíclico portador de nitrogênio fotossensível e um intensificador. Em algumas modalidades, a composição pode incluir uma porfirina ou composto fotossensibilizador de porfirina reduzida que, em resposta à exposição à luz, gera espécies reativas de oxigênio (ROS) disponíveis para inibir crescimento fúngico. Em algumas modalidades, a composição pode incluir composto de curcumina fotossensível e um agente quelante, para inibição fotodinâmica de patógenos microbianos em plantas.
[0013] Também são descritos no presente documento o uso de uma porfirina ou composto fotossensibilizador de porfirina reduzida em combinação com pelo menos um dentre ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido poliaspártico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido etilenodiamina-N, N’-disuccínico (EDDS) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido iminodissuccínico (IDS) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, e ácido L-glutâmico ácido N,N-diacético (GLDA) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, para inibição fotodinâmica de patógenos microbianos, como inibição fotodinâmica de um patógeno fúngico e/ou inibição fotodinâmica de um patógeno bacteriano em plantas.
[0014] Em um aspecto, um método para inibir fotodinamicamente crescimento fúngico em uma planta pode incluir aplicar um composto macrocíclico portador de nitrogênio fotossensível e um composto intensificador à planta; e expor a planta à luz para ativar o composto macrocíclico portador de nitrogênio fotossensível e gerar espécies reativas de oxigênio (ROS); em que o composto intensificador é fornecido em uma quantidade suficiente para aumentar a inibição de fungos em comparação com o composto macrocíclico portador de nitrogênio fotossensível sozinho.
[0015] Em outro aspecto, um método para inibir fotodinamicamente crescimento de patógeno microbiano em uma planta pode incluir aplicar um composto fotossensibilizador e um agente quelante à planta; e expor a planta à luz para ativar o composto fotossensibilizador e gerar espécies reativas de oxigênio (ROS); em que o agente quelante é fornecido em uma quantidade suficiente para aumentar a inibição microbiana em comparação com o composto fotossensibilizador sozinho.
[0016] Em ainda outro aspecto, um método para inibir fotodinamicamente crescimento fúngico em uma planta pode incluir aplicar uma porfirina ou composto fotossensibilizador de porfirina reduzida à planta; e expor a planta à luz para ativar o composto fotossensibilizador e gerar espécies reativas de oxigênio (ROS) disponíveis para inibir crescimento fúngico.
[0017] Um método para inibir fotodinamicamente crescimento fúngico de um patógeno fúngico de géneros Botrytis, Alternaria ou Sclerotinia em uma planta é também fornecido. O método pode incluir: aplicar um composto fotossensibilizador à planta; e expor a planta à luz para ativar o composto fotossensibilizador e gerar espécies reativas de oxigênio (ROS) que inibem fúngica atividade.
[0018] Em ainda outro aspecto, um método para inibir fotodinamicamente crescimento de patógeno microbiano em uma planta é fornecido. O método pode incluir aplicar um composto fotossensibilizador e um agente quelante à planta, em que o composto fotossensibilizador inclui um composto de diaril-heptanoide; e expor a planta à luz para ativar o composto fotossensibilizador e gerar espécies reativas de oxigênio (ROS); em que o agente quelante é fornecido em uma quantidade suficiente para aumentar a inibição microbiana em comparação com o composto fotossensibilizador sozinho.
[0019] Podem ser usadas técnicas de inibição fotodinâmica para vários tipos de plantas que podem ser afetadas por patógenos microbianos. Por exemplo,
plantas de cultivo, plantas de gramado, árvores e outras plantas infectadas com patógenos microbianos podem ser tratadas.
[0020] Alguns patógenos microbianos, como bactérias Gram-negativas e certos tipos de fungos têm uma membrana celular que é difícil de penetrar. Mais especificamente, esses micro-organismos patogênicos, por vezes, têm uma membrana celular externa impermeável que contém as endotoxinas e pode bloquear as pequenas moléculas, como antibióticos, corantes e detergentes, desse modo protegendo a membrana interna sensível e parede celular. Pode, por conseguinte, ser um desafio usar terapia fotodinâmica para inibição do crescimento de determinados patógenos microbianos em plantas devido ao fato de que os compostos fotossensibilizadores tendem a não conseguir boa penetração no interior da parede celular.
[0021] A inibição fotodinâmica de patógenos microbianos que estão presentes em plantas pode ser conseguida por meio da aplicação de um composto fotossensibilizador e um composto intensificador. O composto fotossensibilizador reage à luz por meio da geração de espécies reativas de oxigênio (ROS), enquanto o composto intensificador aumenta o impacto total de supressão do crescimento dos patógenos microbianos, por exemplo, por meio do aumento da permeabilidade da membrana externa dos patógenos microbianos ao composto fotossensibilizador.
[0022] Em uma forma de realização, o composto fotossensibilizador é uma porfirina ou um composto de porfirina reduzida, como um composto de clorina, e o intensificador é um agente quelante. Um composto de porfirina exemplificador é Mg-clorofilina, um composto de clorina exemplificador é clorina e6, e um agente quelante exemplificador é ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) ou sais agricolamente aceitáveis dos mesmos.
[0023] Em alguns cenários, constatou-se que o uso combinado de um composto fotossensibilizador e um agente quelante fornece supressão melhorada de crescimento de patógeno microbiano após tratamento fotodinâmico comparado a cada usado individualmente. Mais detalhes sobre os compostos fotossensibilizadores, agentes quelantes e outros aditivos são fornecidos na presente descrição.
[0024] Deve ser entendido que, quando uma combinação de composto fotossensibilizador, um agente quelante e quaisquer outros opcionais, outros aditivos ou adjuvantes é descrita ao longo da presente descrição e reivindicações, uma quantidade agricolamente eficaz de cada um dos componentes da combinação pode ser usada de modo para fornecer a atividade antimicrobiana enquanto é minimamente ou não fitotóxica para o hospedeiro da planta.
[0025] Como discutido acima, os compostos fotossensibilizadores podem ser usados para permitir a inibição fotodinâmica de patógenos microbianos que estão presentes nas plantas. Os compostos fotossensibilizadores reagem à luz por meio da geração espécies reativas de oxigênio (ROS).
[0026] De acordo com o tipo de ROS gerada, fotossensibilizadores podem ser classificados em duas categorias, a saber, fotossensibilizadores do tipo I e fotossensibilizadores do tipo II. Por um lado, Os fotossensibilizadores do tipo I formam radicais livres de vida curta através de abstração de elétrons ou transferência de um substrato quando excitado em um comprimento de onda apropriado, na presença de oxigênio. Por outro lado, fotossensibilizadores do tipo II formam um estado de oxigênio altamente reativo conhecido como “oxigênio singleto”, também referido no presente documento como “espécies reativas de oxigênio singleto”. Oxigênios singletos geralmente têm vida relativamente longa e podem ter um grande raio de ação.
[0027] Deve ser entendido que o composto fotossensibilizador pode ser metalizado ou não-metalizado. Quando metalizado, como pode ser o caso para diferentes compostos macrocíclicos portadores de nitrogênio que são complexados com um metal, o metal de pode ser selecionado com base no tipo de ROS correspondente e disponibilidade (Tipo I ou Tipo II) em resposta à exposição à luz. Por exemplo, quando compostos fotossensibilizadores de clorina são metalizados com cobre, as ROS que são geradas (Tipo I) tendem a ter baixa disponibilidade para inibição microbiana, por exemplo, devido a uma meia-vida muito curta. Em contrapartida, quando os mesmos compostos fotossensibilizadores são metalizados com outros metais, como magnésio, as ROS que são geradas têm maior disponibilidade para inibição microbiana. Assim, quando são usados compostos fotossensibilizadores metalizados, o metal pode ser selecionado para obter um fotossensibilizador do tipo II e, assim, fornecer disponibilidade aprimorada de ERO que, por sua vez, pode facilitar a supressão do crescimento microbiano.
[0028] Deve ser entendido que o termo “fotossensibilizador de oxigênio singleto”, como usado no presente documento, se refere a um composto que produz espécies reativas de oxigênio singleto quando excitado por luz. Em outras palavras, o termo se refere a um fotosensibilizador no qual o processo do tipo II definido acima é dominante em comparação com o processo do tipo I.
[0029] Em algumas concretizações, o composto fotossensibilizador é um composto macrocíclico portador de nitrogênio fotossensível que pode incluir quatro anéis heterocíclicos contendo nitrogênio ligados entre si. Em algumas concretizações, os anéis heterocíclicos portadores de nitrogênio são selecionados do grupo que consiste em pirróis e pirrolinas, e são ligados em conjunto por grupos metina (isto é, grupos =CH-) para formar tetrapirróis. O composto macrocíclico portador de nitrogênio pode, por exemplo, incluir um composto de porfirina (quatro grupos pirrol ligados entre si por grupos metina), um composto clorina (três grupos pirrol e um grupo pirrolina ligado entre si por grupos metina), um composto bacterioclorina ou um composto isobacterioclorina (dois grupos pirrol e dois grupos pirrolina ligados em conjunto por grupos metina), ou porfirinoides (como texafrinas ou subporfirinas), ou um equivalente funcional dos mesmos que tem um núcleo de anel aromático heterocíclico ou um núcleo de anel parcialmente aromático (isto é, um núcleo de anel que é não aromático na totalidade da circunferência do anel), ou novamente compostos multi-pirróis (como boro-dipirrometeno). Deve ser também entendido que o termo “composto macrocíclico portador de nitrogênio” pode ser um dos compostos listados no presente documento, ou pode ser uma combinação dos compostos listados no presente documento. O composto macrocíclico portador de nitrogênio pode, portanto, incluir uma porfirina, uma porfirina reduzida, ou uma mistura dos mesmos. Tais compostos macrocíclicos portadores de nitrogênio podem também ser referidos para como “compostos macrocíclicos multi-pirróis” (por exemplo, compostos macrocíclicos tetra-pirróis).
[0030] Deve ser entendido que o termo “porfirina reduzida”, como usado no presente documento, se refere ao grupo que consiste em clorina, bacterioclorina, isobacterioclorina e outros tipos de porfirinas reduzidas como corrina e corfina. Deve ser entendido que o composto macrocíclico portador de nitrogênio pode ser um complexo macrocíclico de metal (por exemplo, uma Mg-porfirina) ou um macrociclo não-metálico (por exemplo, clorina E6, protoporfirina IX ou Tetra FenilPorfirina). O composto macrocíclico portador de nitrogênio pode ser um composto de ocorrência natural extraído ou um composto sintético.
[0031] Em concretizações em que a porfirina ou o composto de porfirina reduzida é metalizado, o metal pode ser escolhido de modo que o composto macrocíclico portador de nitrogênio metalizado seja um fotossensibilizador do tipo II (ou um fotossensibilizador de oxigênio singleto) que gera espécies reativas de oxigênio singleto. Por exemplo, no caso de clorinas, exemplos não limitadores de metais que podem permitir a geração de espécies reativas de oxigênio singleto através da formação de um fotossensibilizador do tipo II são Mg, Zn, Pd, Al, Pt, Sn ou Si.
[0032] Deve ser entendido que a seleção de metais que não permitem a formação de fotossensibilizadores do tipo II tipicamente resulta em uma inibição muito menor do crescimento de micro-organismos patogênicos, pelo menos devido ao fato de que não há espécies ou menos espécies reativas de oxigênio singleto são geradas. Exemplos não limitadores de metais que são conhecidos por não formar fotossensibilizadores do tipo II quando complexados com clorinas são Cu, Co, Fe, Ni e Mn.
[0033] Deve também ser entendido que os metais específicos que podem conduzir à formação de fotossensibilizadores do tipo II versus metais que não permitem a formação de fotossensibilizadores do tipo II podem variar dependendo do tipo de composto macrocíclico portador de nitrogênio ao qual o mesmo deve ser ligado. Também deve ser entendido que não compostos macrocíclicos portadores de nitrogênio não-metalizados podem ser fotossensibilizadores do tipo II. Por exemplo, a clorina e6 é um fotossensibilizador do tipo II.
[0034] Deve ser entendido que o composto macrocíclico portador de nitrogênio a ser usado nos métodos e composições da presente descrição pode também ser selecionado com base na sua toxicidade para os seres humanos ou com base no seu impacto sobre o ambiente. Por exemplo, as porfirinas e porfirinas reduzidas tendem a ter uma baixa toxicidade para os seres humanos bem como propriedades melhoradas de biodegradabilidade ambiental quando comparadas a outros tipos de compostos macrocíclicos portadores de nitrogênio como ftalocianinas.
[0035] As Fórmulas a seguir ilustram vários exemplos de compostos macrocíclicos contendo nitrogênio descritos no presente documento:
[0036] Os compostos macrocíclicos portadores de nitrogênio, como Zn-TPP e Mg-clorofilina, podem ser obtidos junto a vários fornecedores de produtos químicos, como Organic Herb Inc., Sigma Aldrich ou Frontier Scientific. Em alguns cenários, os compostos macrocíclicos contendo nitrogênio não são 100% puros e podem incluir outros componentes, como ácidos orgânicos e carotenos. Em outros cenários, os compostos macrocíclicos portadores de nitrogênio podem ter um alto nível de pureza.
[0037] Em algumas concretizações, o composto fotossensibilizador pode incluir compostos lineares multi-pirróis como a bilirrubina, dipirrimeteno de boro ou compostos similares. Em algumas concretizações, o composto fotossensibilizador pode incluir outros tipos de compostos (lineares ou macrocíclicos). Um exemplo não limitador de composto fotossensibilizador inclui compostos diarilheptanoides, como a curcumina.
[0038] O composto intensificador também referido no presente documento como um composto permeabilizante, pode aumentar o impacto total do composto fotossensibilizador sobre a inibição do crescimento dos patógenos microbianos. Por exemplo, o composto intensificador pode aumentar a permeabilidade da membrana externa dos patógenos microbianos ao composto fotossensibilizador.
[0039] Em algumas concretizações, o composto intensificador ou composto permeabilizante inclui um agente quelante. Deve ser entendido que o termo “agente quelante”, como usado no presente documento, se refere geralmente a um composto que pode formar várias ligações a um único metal ou íon.
[0040] Em algumas concretizações, o agente quelante pode incluir pelo menos um grupo carboxílico, pelo menos um grupo hidroxila, pelo menos um grupo fenol e/ou pelo menos um grupo amino ou um sal agricolamente aceitável do mesmo. Em algumas concretizações, o agente quelante pode incluir um composto de ácido aminocarboxílico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo. O ácido aminocarboxílico ou sal agricolamente aceitável do mesmo pode incluir um ácido amino policarboxílico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo. Por exemplo, o ácido amino policarboxílico pode incluir dois grupos amino e dois grupos alquilcarboxila ligados a cada grupo amino. Os grupos alquilcarboxila podem ser grupos metilcarboxila.
[0041] Em algumas concretizações, a agente quelante é selecionado do grupo que consiste em: um ácido aminopolicarboxílico, um ácido carboxílico aromático ou alifático, um aminoácido, um ácido fosfônico, e um ácido hidroxicarboxílico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
[0042] Em algumas concretizações, os métodos e composições descritos no presente documento incluem um ou mais agentes quelantes de ácido aminopolicarboxílico. Exemplos de agentes quelantes de ácido aminopolicarboxílico incluem, sem limitação, ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), ácido dietilenotriaminapentaacético (DTP A), ácido hidroxietilenodiaminatriacético (HEDTA), e etilenodiaminadisuccinato (EDDS), ácido ciclohexanodiaminatetraacético (CDTA), ácido N-(2-
hidroxietil)etilenodiaminatriacético (EDTA-OH) ácido glicol éter diaminotetraacético (GEDTA), ácido alanina diacético (ADA), ácidos alcoil etileno diamina triacéticos (por exemplo, ácidos lauroil etileno diamina triacéticos (LED3 A)), ácido asparticaciddiacético (ASDA), ácido asparticacidmonoacético, ácido diamino ciclo-hexano tetraacético (CDTA), ácido 1,2- diaminopropanetetraacético (DPTA-OH), ácido 1,3-diamino-2- propanoltetraacético (DTP A), ácido dietileno triamina pentam etileno fosfônico (DTPMP), ácido diglicólico, ácido dipicolínico (DP A), ácido etanolaminediacético, etanoldiglicina (EDG), ácido etilenodiaminodiglutárico (EDDG), ácido etilenodiaminaedi hidroxifenilacético (EDDHA), ácido etilenodiaminotipropiônico (EDDP), etilenodiaminadisuccinato (EDDS), ácido etilenodiaminamonosuccínico (GED), ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA), ácido etilenodiaminatetrapropiônico (EDTP), e ácido etilenoglicolaminoetilestertetraacético (EGTA) e sais agricolamente aceitáveis (por exemplo, os sais de sódio, sais de cálcio e/ou sais de potássio).
[0043] Um exemplo não limitador de agente quelante é o ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo. O sal de aminocarboxilato pode ser, por exemplo, um sal de sódio ou cálcio. EDTA pode ser representado como se segue:
[0044] Um outro exemplo não limitador de agente quelante é ácido poliaspártico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo (isto é, um poliaspartato), como poliaspartato de sódio, que pode ser geralmente representado como se segue. O peso molecular do sal de poliaspartato pode ser, por exemplo, entre 2.000 e 3.000.
[0045] O agente quelante pode, portanto, ser um composto polimérico, que pode incluir unidades de aspartato, grupos carboxílicos e outras características encontradas nos poliaspartatos. O poliaspartato pode ser um copolímero que tem ligações alfa e beta, que podem estar em várias proporções (por exemplo, 30% alfa, 70% beta, distribuídos aleatoriamente ao longo da cadeia polimérica). Um exemplo não limitador de um poliaspartato de sódio é Baypure® DS 100, que pode ser representado como se segue.
[0046] Outros exemplos não limitadores de agentes quelantes incluem EDDS (ácido etilenodiamina-N, N’-dissuccínico), IDS (ácido iminodisuccínico (ácido N- 1,2-dicarboxietil)-D,L-aspártico), isopropilamina, trietanolamina, trietilamina, hidróxido de amônio, hidróxido de tetrabutilamônio, hexamina, GLDA (ácido L- glutâmico ácido N,N-diacético) ou sais agricolamente aceitáveis do mesmo. O agente quelante pode ser metalizado ou não-metalizado.
[0047] IDS pode ser usado como um sal tetrassódico de IDS (por exemplo, iminodissuccinato tetrassódico), que pode ser Baypure® CX100, representado como se segue:
[0048] EDDS pode ser usado como um sal trissódico de EDDS, representado como se segue:
[0049] GLDA pode ser usado como um sal tetrassódico de GLDA, representado como se segue: Fórmula 13:
[0050] Em algumas concretizações, os métodos e composições descritos no presente documento incluir um ou mais agentes quelantes de aminoácido. Exemplos de agentes quelantes de aminoácido incluem, sem limitação, alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, ácido glutâmico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, prolina, serina, treonina, tirosina,
valina e sais (por exemplo, os sais de sódio, sais de cálcio e/ou sais de potássio) e combinações dos mesmos.
[0051] Em algumas concretizações, os métodos e composições descritos no presente documento incluem um ou mais agentes quelantes de ácidos carboxílicos aromáticos ou alifáticos. Exemplos de aromáticos ou alifáticos carboxílicos de ácido agentes quelantes incluem, sem limitação, ácido oxálico, ácido succínico, ácido pirúvico, ácido málico, ácido malônico, ácido salicílico e ácido antranílico, e sais dos mesmos (por exemplo, os sais de sódio, sais de cálcio e/ou sais de potássio). Em algumas concretizações, os métodos e composições descritos no presente documento incluem um ou mais agentes quelantes de polifenol. Um exemplo não limitador de um agente quelante de polifenol é tanina como ácido tânico.
[0052] Em algumas concretizações, os métodos e combinações descritos no presente documento incluem um ou mais agentes quelantes do ácido hidroxicarboxílico. Exemplos de agentes quelantes de ácido hidroxicarboxílico incluem, sem limitação, ácido málico, ácido cítrico, ácido glicólico, ácido heptônico, ácido tartárico e sais (por exemplo, os sais de sódio, sais de cálcio e/ou de potássio sais) dos mesmos.
[0053] Em algumas concretizações, pode ser aplicado um ou mais agentes quelantes como ácido livre, como um sal agricolamente aceitável, ou combinações dos mesmos.
[0054] Em algumas concretizações, cada um de um ou mais agentes quelante é aplicado como um ácido livre. Em outras concretizações, os agentes quelantes podem ser aplicados como um sal. Sais exemplificadores incluem sais de sódio, sais de potássio, sais de cálcio, sais de amônio, sais de amina, sais de amida e combinações dos mesmos. Em ainda outras concretizações, quando mais do que um agente quelante está presente, pelo menos um dos agentes quelantes é aplicado como um ácido livre, e pelo menos um dos agentes quelantes é aplicado como um sal.
[0055] Quando os componentes são fornecidos como parte de uma única composição, a composição pode ser fornecida para ter certas concentrações e proporções relativas de componentes. Por exemplo, a composição pode ter entre cerca de 100 nM e cerca de 50 mM, entre cerca de 5 micromolar e cerca de 10 mM, entre cerca de 1 micromolar e cerca de 1.000 micromolar, entre cerca de 5 micromolar e cerca de 200 micromolar do composto macrocíclico portador de nitrogênio, entre cerca de 10 micromolar e cerca de 150 micromolar do composto macrocíclico portador de nitrogênio, entre cerca de 25 micromolar e cerca de 100 micromolar do composto macrocíclico portador de nitrogênio, ou entre cerca de 50 micromolar e cerca de 75 micromolar do composto macrocíclico portador de nitrogênio.
[0056] A composição pode também ter entre cerca de 2 micromolar e cerca de 10.000 micromolar do agente quelante, entre cerca de 5 micromolar e cerca de 5.000 micromolar do agente quelante, entre cerca de 10 micromolar e cerca de 1.000 micromolar do agente quelante, entre cerca de 25 micromolar e cerca de 500 micromolar do agente quelante, entre cerca de 50 micromolar e cerca de 100 micromolar do agente quelante, por exemplo.
[0057] A proporção relativa, em peso, de um composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante na composição pode estar entre cerca de 50:1 e cerca de 1:1.000, entre cerca de 20:1 e cerca de 1:500, entre cerca de 10:1 e cerca de 1:100, ou entre cerca de 1:1 e cerca de 1:10, por exemplo.
[0058] Em algumas concretizações, os métodos e composições descritos no presente documento incluem um ou mais adjuvantes agricolamente adequados.
[0059] Em algumas concretizações, cada um do um ou mais adjuvantes agricolamente adequados é independentemente selecionado do grupo que consiste em um ou mais adjuvantes ativadores (por exemplo, um ou mais tensoativos; um ou mais de adjuvantes de óleo, por exemplo, um ou mais agentes de penetração) e um ou mais adjuvantes de utilidade (por exemplo, um ou mais agentes umectantes ou de espalhamento; um ou mais umectantes; um ou mais emulsificantes; um ou mais agentes de controle de deriva; um ou mais agentes espessantes; um ou mais agentes de deposição; um ou mais condicionadores de água; um ou mais tampões; um ou mais agentes antiespumantes; um ou mais bloqueadores de UV; um ou mais antioxidantes; um ou mais fertilizantes, nutrientes e/ou micronutrientes; e/ou um ou mais protetores de herbicidas). Exemplos de adjuvantes são fornecidos em Hazen, JL Weed Technology 14:773 a 784 (2000), que é incorporado a título de referência na sua totalidade.
[0060] Em algumas concretizações, o óleo pode ser combinado com o composto macrocíclico portador de nitrogênio. O óleo pode ser selecionado do grupo que consiste em um óleo mineral, um óleo vegetal e uma mistura dos mesmos.
[0061] Exemplos não limitadores de óleos vegetais incluem óleos que incluem triglicerídeos de cadeia média (TCM), óleo extraídos a partir de nozes. Outros exemplos não limitadores de óleos vegetais incluem óleo de coco, óleo de canola, óleo de soja, óleo de colza, óleo de girassol, óleo de açafrão, óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de palma, óleo de farelo de arroz ou misturas dos mesmos. Exemplos não limitativos de óleos minerais incluem óleos parafínicos, óleos parafínicos ramificados, óleos naftênicos, óleos aromáticos ou misturas dos mesmos.
[0062] Exemplos não limitadores de óleos parafínicos incluem vários tipos de poli-alfa-olefina (PAO). Por exemplo, o óleo parafínico pode incluir HT60™, HT100™, alta flash Jet, LSRD™ e N65DW™. O óleo parafínico pode incluir uma parafina que tem inúmeros átomos de carbono que variam a partir de cerca de 12 a cerca de 50, ou de cerca de 16 a 35. Em alguns cenários, a parafina pode ter um número médio de átomos de carbono de 23. Em algumas concretizações, o óleo pode ter um teor de parafina de pelo menos 80 % em peso, ou pelo menos 90 % em peso, ou pelo menos 99 % em peso.
[0063] O composto macrocíclico portador de nitrogênio e o óleo podem ser aplicados em uma proporção relativa, em peso, entre cerca de 50:1 e cerca de 1:1.000, entre cerca de 20:1 e cerca de 1:500, entre cerca de 10:1 e cerca de 1:100, ou entre cerca de 1:1 e cerca de 1:10, por exemplo.
[0064] O composto macrocíclico portador de nitrogênio e o óleo podem ser adicionados sequencial ou simultaneamente. Quando adicionado em simultâneo, o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o óleo pode ser adicionado como parte da mesma composição ou como parte de duas composições separadas. Em algumas concretizações, o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o óleo podem ser combinados em uma emulsão de óleo em água. Ou seja, a combinação pode incluir o composto macrocíclico portador de nitrogênio combinado com o óleo e a água, de modo que a combinação seja formulada como uma emulsão de óleo em água. A emulsão óleo em água também pode incluir outros aditivos, como um agente quelante, um tensoativo ou combinações dos mesmos.
[0065] Como usado no presente documento, o termo “emulsão de óleo em água” se refere a uma mistura em que um dentre o óleo (por exemplo, o óleo parafínico) e água é disperso como gotículas no outro (por exemplo, a água). Em algumas concretizações, uma emulsão de óleo em água é preparada por um processo que inclui a combinação do óleo parafínico, água, e quaisquer outros componentes e o óleo parafínico e aplicação de cisalhamento até a emulsão ser obtida. Em outras concretizações, uma emulsão de óleo em água é preparada por um processo que inclui a combinação das parafínico de petróleo, água, e quaisquer outros componentes no tanque de mistura e pulverização através do bocal de uma pistola aspersora.
[0066] Em algumas concretizações, o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante fazem parte de uma composição que inclui um fluido carreador. Um fluido carreador adequado permite a obtenção de uma solução estável, suspensão e/ou emulsão dos componentes da composição no fluido carreador. Em algumas concretizações, o fluido carreador é água. Em outras concretizações, o fluido carreador é uma mistura de água e outros solventes ou óleos que não são miscíveis ou são apenas parcialmente solúveis em água.
[0067] Deve também ser entendido que as composições e combinações da presente descrição podem ser fornecidas separadamente ou em conjunto na mesma composição. Em algumas concretizações, os componentes das composições da presente descrição podem ser empacotados em uma forma concentrada, sem o fluido carreador, e o fluido carreador (por exemplo, água) pode ser adicionado para formar diretamente pelo operador que se aplica a composição para plantas a fim de formar a composição a ser aplicada.
[0068] Em algumas concretizações, uma combinação de composto macrocíclico e óleo contendo nitrogênio pode ser usada para inibir o crescimento de um patógeno microbiano em uma planta. A combinação pode ser uma emulsão de óleo em água, em que o tensoativo é selecionado de modo que o composto macrocíclico portador de nitrogênio seja mantido em dispersão na emulsão de óleo em água para entrega à planta.
[0069] A combinação pode incluir um tensoativo (também referido como um emulsionante). O agente tensoativo pode ser selecionado do grupo que consiste em um álcool etoxilado, um tensoativo polimérico, um éster de ácido graxo, um polietileno glicol, um alquil álcool etoxilado, um monoglicerídeo, um alquil monoglicerídeo, um glicosídeo anfipático, e uma mistura dos mesmos. Por exemplo, o éster de ácido graxo pode ser um éster de ácido graxo sorbitano. O tensoativo pode incluir um glicosídeo derivado de planta, como uma saponina. O tensoativo pode estar presente como um adjuvante para ajudar na cobertura da folhagem das plantas. O tensoativo pode ser um tensoativo do tipo polissorbato aceitável (por exemplo, Tween 80), uma mistura de tensoativo não-iônico (por exemplo, Altox™ 3273) ou outro tensoativo adequado. Em algumas concretizações, o polietileno glicol pode incluir um polietileno glicol de Fórmula: R1 O (CH2CH2O)f R2 , em que R1 = H, CH2=CH-CH2 ou COCH3; R2=H, CH2=CH-CH2 ou COCH3; e f ≥ 1.
[0070] O composto fotossensibilizador e o composto intensificador podem ser fornecidos como parte de uma composição antimicrobiana. A composição antimicrobiana pode também incluir um fluido de entrega, como água, bem como outros aditivos.
[0071] A composição antimicrobiana pode ser fornecida para ter certas concentrações e proporções relativas de componentes. Por exemplo, a composição antimicrobiana pode ter entre cerca de 100 nM e cerca de 50 mM, entre 1 micromolar e cerca de 1.000 micromolar, entre 5 micromolar e cerca de 200 micromolar do composto fotossensibilizador, entre cerca de 10 micromolar e cerca de 150 micromolar do composto fotossensibilizador, entre cerca de 25 micromolar e cerca de 100 micromolar do composto fotossensibilizador, ou entre cerca de 50 micromolar e cerca de 75 micromolar do composto fotossensibilizador.
[0072] A composição antimicrobiana pode também ter entre cerca de 2 micromolar e cerca de 10.000 micromolar do composto intensificador, entre cerca de 5 micromolar e cerca de 5.000 micromolar do composto intensificador, entre cerca de 10 micromolar e cerca de 1.000 micromolar do composto intensificador, entre cerca de 25 micromolar e cerca de 500 micromolar do composto intensificador, entre cerca de 50 micromolar e cerca de 100 micromolar do composto intensificador, por exemplo.
[0073] A proporção relativa, em peso, do composto fotossensibilizador e o composto intensificador na composição antimicrobiana pode estar entre cerca de 50: 1 e cerca de 1:1.000, entre cerca de 20: 1 e cerca de 1: 500, entre cerca de 10: 1 e cerca de 1: 100, ou entre cerca de 1: 1 e cerca de 1:10, por exemplo.
[0074] Em termos de outros aditivos que podem estar presentes nos anti- microbianos composições, um tensoativo pode estar presente como um adjuvante para auxílio cobertura de planta folhagem. O tensoativo pode ser um tensoativo do tipo polissorbato aceitável (por exemplo, Tween 80), uma mistura de tensoativo não-iônico (por exemplo, Altox™ 3273) ou outro tensoativo adequado.
[0075] O composto fotossensibilizador e o composto intensificador podem ser aplicados às plantas para inibição fotodinâmica de patógenos microbianos. O composto fotossensibilizador e o composto intensificador podem ser aplicados simultaneamente às plantas. Por exemplo, uma composição antimicrobiana pode ser preparada para incluir os compostos fotossensibilizadores e intensificadoras bem como um fluido de entrega, como água ou uma emulsão de água-óleo, por exemplo. A composição antimicrobiana pode ser aplicada à planta por pulverização, nebulização, aspersão, vertedura, ou qualquer outro método adequado. A composição antimicrobiana pode ser aplicada à folhagem,
raízes e/ou tronco da planta. Outros aditivos podem também ser incluídos na composição antimicrobiana, e outros métodos de aplicação também podem ser executados.
[0076] As plantas nas quais a composição antimicrobiana é aplicada podem ser ao ar livre ou em ambientes fechados (por exemplo, estufa), onde as mesmas são expostas à luz solar natural, ou em um local interior onde as mesmas são expostas à luz artificial. A exposição à luz incidente é fornecida de modo que o composto fotossensibilizador possa gerar ROS que, na sua vez, facilita a interrupção do crescimento microbiano.
[0077] Em operação, o composto fotossensibilizador e o composto intensificador são colocados em contato com o patógeno microbiano que infectou uma planta. Tanto composto fotossensibilizador como o composto intensificador entram em contato com as paredes celulares e material intercelular dos micróbios patogênicos.
[0078] Vários mecanismos de ação podem ser facilitados pela combinação dos compostos fotossensibilizadores e intensificadores. Por exemplo, o composto intensificador pode interagir com o composto fotossensibilizador e/ou com espécies presentes nas paredes celulares dos patógenos microbianos, para romper as paredes celulares ou melhorar o acesso ou a penetração do composto fotossensibilizador, de modo que o fototratamento e geração consequente de ROS possam ter um impacto inibidor aumentado sobre as patógenos microbianos. As interações do composto intensificador podem depender das estruturas do composto fotossensibilizador e do composto intensificador. Por exemplo, agentes quelantes, como o EDTA, podem complexar com metais que estão presentes no macrociclo de certos compostos fotossensibilizadores e/ou com contra-íons que estão presentes nas paredes celulares dos patógenos microbianos.
[0079] Os patógenos microbianos para os quais a composição antimicrobiana pode ser aplicada incluem patógenos fúngicos e bacterianos.
[0080] Os patógenos fúngicos para os quais a composição antimicrobiana pode ser aplicada incluem Alternaria solani, que podem infectar plantas, como tomates e batatas; Botrytis cinerea, que podem infectar uvas, bem como frutas macias e culturas de bulbo; ou Sclerotinia homoeocarpa, que geralmente pode infectar gramados. Outros patógenos fúngicos nos gêneros Alternaria, Botrytis ou Sclerotinia podem também receber aplicação da composição antimicrobiana. A composição antimicrobiana pode ser aplicada a plantas que são afetadas ou susceptíveis a agentes patogênicos que provocam diversas doenças de plantas, por exemplo, Colletotrichum, Fusarium, Puccinia, Erysiphaceae, Cercospora, Rhizoctonia, Bipolaris, Microdochium, Venturia inaequalis, Monilinia fructicola, Gymnosporangium juniperi- virginianae, Plasmodiophora brassicae, Ustilago zeae, Phytophthora, Pythium, Fusarium oxysporum, Phytophthora infestans, Taphrina deformans, Powdery Mildew, Phragmidium spp., ou outros patógenos fúngicos.
[0081] Os patógenos bacterianos para os quais a composição antimicrobiana pode ser aplicada incluem bactérias gram-negativas, como Erwinia amylovara, ou outros patógenos bacterianos no gênero Erwinia que podem infectar plantas lenhosas. E. amylovara provoca fogo bacteriano em várias plantas, incluindo peras, maçãs, e outros culturas de Rosaceae. A composição antimicrobiana pode ser aplicada a plantas que são afetadas ou susceptíveis a agentes patogênicos que provocam diversas doenças de plantas, por exemplo, Pseudomonas, Xanthomonas, Agrobacterium, Curtobacterium, Streptomyces, E. Coli, Xylella fastidiosa (que provoca Sìndrome do Declínio Breve da Oliveira (OQDS)) ou outros patógenos bacterianos.
[0082] A composição antimicrobiana pode ser usada para vários tipos de plantas que são afetadas por patógenos microbianos. Plantas de colheita, plantas de relva, árvores e outras plantas infectadas com patógenos microbianos podem ser tratadas.
[0083] É também notado que as composições antimicrobianas descritas no presente documento podem ter vários efeitos inibidores nos patógenos microbianos dependendo do tipo de planta e patógeno bem como do estado de infecção microbiana. Enquanto é descrito no presente documento que a composição antimicrobiana pode inibir crescimento de patógeno microbiano em uma planta, tais expressões devem não ser limitantes, mas devem ser entendias para incluir a supressão de patógenos microbianos, prevenção contra micro- organismos patogênicos, a destruição de patógenos microbianos ou toxicidade geralmente aumentando para patógenos microbianos.
[0084] O composto ou composição pode ser usado para vários tipos de plantas que podem ser afetados por patógenos microbianos. A planta pode ser uma planta de colheita não-lenhosa, uma planta lenhosa ou um gramado. A planta pode ser selecionada do grupo que consiste em uma planta de colheita, uma planta frutífera, um planta vegetal, uma planta leguminosa, um planta cereal, um vegetal de forragem, um óleo de semente de planta, uma planta de campo, uma planta de jardim, uma planta de estufa, uma planta doméstica, uma planta florífera, uma planta de relvado, uma relva, uma árvore, como uma árvore produtora de frutos, e outras plantas que podem ser afetadas por patógenos microbianos.
[0085] Em algumas concretizações, a planta é um gramado. Conforme usado neste documento, o termo “grama” se refere a uma grama cultivada que fornece cobertura do solo, por exemplo, uma grama ou gramado que é periodicamente cortado ou aparado para manter uma altura consistente. Gramíneas pertencem à família Poaceae, que é subdividida em seis subfamílias, três das quais incluem gramados comuns: a subfamília Festucoideae de gramados de estação fria; e as subfamílias Panicoideae e Eragrostoideae de gramados de estação quente. Um número limitado de espécies está em uso generalizado como gramados, geralmente satisfazendo os critérios de formação de cobertura de solo uniforme e tolerando corte e tráfego. Em geral, os gramados têm uma coroa comprimida que facilita o corte sem cortar o ponto de crescimento. No presente contexto, o termo “relva” inclui áreas em que uma ou mais espécies de grama são cultivadas para formar cobertura de solo relativamente uniforme, incluindo as misturas que são uma combinação de diferentes cultivares das mesmas espécies, ou misturas que são uma combinação de diferentes espécies e/ou cultivares.
[0086] Em alguns cenários, as combinações podem exibir uma resposta sinérgica para inibir o crescimento de patógenos microbianos nas plantas. Deve ser entendido que os termos “sinergia” ou “sinérgico”, como usado no presente documento, se referem à interação de dois ou mais componentes de uma combinação (ou composição) de modo que o seu efeito combinado seja maior do que a soma de seus efeitos individuais, isso pode incluir, no contexto da presente descrição, a ação de dois ou mais dentre o composto macrocíclico portador de nitrogênio, o óleo e o agente quelante. Em alguns cenários, o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o óleo podem estar presentes em quantidades sinergicamente eficazes. Em alguns cenários, o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante podem estar presentes em quantidades sinergicamente eficazes. Em alguns cenários, o óleo e o agente quelante podem estar presentes em quantidades sinergicamente eficazes. Em alguns cenários, o composto macrocíclico portador de nitrogênio, o óleo e o agente quelante podem estar presentes em quantidades sinergicamente eficazes.
[0087] Em alguns cenários, a abordagem como definido em S. R. Colby, “Calculating synergistic and antagonistic responses of herbicide combinations”, Weeds 15, 20 a 22 (1967), pode ser usada para avaliar a sinergia. A eficácia esperada, E, pode ser expressa como: E=X+Y(100-x)/100, em que X é a eficácia, expressa em percentual do controle não tratado, de um primeiro componente de uma combinação, e Y é a eficácia, expressa em percentual do controle não tratado, de um segundo componente da combinação. Diz-se que os dois componentes devem estar presentes em quantidades sinergicamente eficazes quando a eficácia observada é maior do que a eficácia esperada.
[0088] Ao longo dos exemplos, deve ser entendido que os valores percentuais fornecidos em composições se referem a valores percentuais em peso. Além disso, o equilíbrio para 100% em peso dos valores percentuais listados é sempre uma quantidade correspondente de água. Por exemplo: a entrada “MgChl a 0,1%+ EDTA-Ca a 0,1%+Atlox3273 a 0,04%” significa uma composição que consiste em 0,1 % em peso de MgChl, 0,1 % em peso de EDTA- Ca, 0,04 % em peso de Atlox3273 e água para alcançar 100 % em peso. EXEMPLO 1
[0089] Nesse exemplo, a aplicação de um composto fotossensibilizador de porfirina e um agente quelante suprime o crescimento de bactérias (Erwinia amylovora) que causa a doença do fogo bacteriano com o uso de inibição fotodinâmica. Em especial, Mg-clorofilina e EDTA dissódico são usados e a sua combinação mostra inativação de crescimento de E. amilovora.
[0090] E. amylovora é cultivada em meio líquido. As amostras são incubadas por 30 min com Mg-clorofilina 100 µM com ou sem EDTA-Dissódico 5 mM e depois iluminadas com 395 nm (fluência 26,6 J cm-2) por 30 minutos. CFU das bactérias é contado nas placas. A Tabela a seguir resume os resultados: TABELA 1: RESULTADOS DA INATIVAÇÃO RELATIVA DE BACTÉRIAS APÓS
TRATAMENTO COM PDI Tratamento Inativação relativa, UFC controle não tratado-escuro 1 controle não tratada-iluminado 0,9 Mg-clorofilina (100 µM) sem EDTA (5 mM) 1,9 à luz Mg-clorofilina (100 µM) com EDTA (5 mM) 2,1x104 à luz EDTA (5 mM) sozinho à luz 11,1
[0091] O fototratamento com clorofilina ou EDTA sozinho tem pouco ou nenhum efeito sobre a inativação de E. amilovora na concentração testada. A combinação de EDTA com clorofilina aumenta o efeito antibacteriano em cerca de 1.000 vezes na concentração testada. E. amilovora é quase completamente inativada com a combinação dos dois compostos sob as condições de teste. EXEMPLO 2
[0092] Nesse exemplo, a aplicação de um composto fotossensibilizador de porfirina e um agente quelante suprimiu o crescimento de patógeno fúngico Alternaria solani com o uso de inibição fotodinâmica. Em especial, Mg-clorofilina e EDTA dissódico foram usados e mostrou-se que a sua combinação inativa crescimento de Alternaria solani.
[0093] Nos experimentos, micélios de Alternaria solani foram cultivados em meio líquido durante 24 horas. Pequenas esferas do micélio (diâmetro médio 2 mm) foram incubadas durante 100 minutos com 100 µM de Mg-Clorofilina com 0 a 5 mM de EDTA-dissódico. As amostras foram iluminadas com 395 nm (fluência 106,6 J cm-2) por 120 minutos e foi medido o crescimento radial dos emplastros miceliais após 7 dias em meio de ágar. Uma amostra foi considerada morta, se não houvesse nenhum crescimento observável após 7 dias em placas de agar. A Tabela a seguir resume os resultados: TABELA 2: RESULTADOS DO PERCENTUAL DE MICÉLIOS MORTOS DE
ALTERNARIA SOLANI Tratamento % morto Mg-clorofilina (100 µM) sem EDTA (0 M) à luz 11,5% Mg-clorofilina (100 µM) com EDTA (5 µM) em luz 33,3% Mg-clorofilina (100 µM) com EDTA (50 µM) em luz 66,7% Mg-clorofilina (100 µM) com EDTA (500 µM) em luz 83,3% Mg-clorofilina (100 µM) com EDTA (5 mM) em luz 94,1% EDTA (5 mM) sozinho à luz 0% EDTA (50 mM) sozinho à luz 0% EDTA (100 mM) sozinho à luz 0% EDTA (500 mM) sozinho à luz 0% EDTA (5 mM) sozinho, sem luz 0% EDTA (50 mM) sozinho, sem luz 0% EDTA (100 mM) sozinho, sem luz 11,1% EDTA (500 mM) sozinho, sem luz 11,1%
[0094] O fototratamento de clorofilina ou EDTA sozinho teve pouco ou nenhum efeito nos micélios fúngicos. Adicionando uma combinação de EDTA e 100 ^ M Clorofilina aumentou a supressão sobre o crescimento de micélios fúngicos. Alternaria solani foi quase completamente inativada com a combinação de clorofilina 100 µM e EDTA dissódico 5mM.
EXEMPLO 3
[0095] Nesse exemplo, a aplicação de um composto fotossensibilizador de porfirina e um agente quelante suprimiu o crescimento de fungos de Botrytis cinerea que causam doença do mofo cinzento com o uso de inibição fotodinâmica. Em especial, Mg-clorofilina e EDTA dissódico foram usados e mostrou-se que a sua combinação inativa crescimento de Botrytis cinerea.
[0096] Nos experimentos, micélios de Botrytis cinerea foram cultivados em meio líquido durante 48 horas. Pequenas esferas do micélio (diâmetro médio 2 mm) foram incubadas durante 100 minutos, com Mg-Clorofilina com ou sem 5 mM de EDTA-dissódico. As amostras foram iluminadas com 395 nm (fluência 106,6 J cm-2) por 120 minutos e o crescimento radial dos emplastros miceliais após 7 dias em meio de ágar foi medido. Uma amostra foi considerada morta, se não houve nenhum crescimento observável após 7 dias em placas de agar. A Tabela a seguir resume os resultados: TABELA 3: RESULTADOS DO PERCENTUAL DE MICÉLIOS MORTOS DE B.
CINEREA Tratamento % morto Controle não tratado no escuro 0 Controle não tratado com luz 0 EDTA sozinho no escuro (5mM) 0 EDTA sozinho com luz (5mM) 0 Mg-clorofilina (1 µM) com EDTA (5 mM) à luz 0 Mg-clorofilina (10 µM) com EDTA (5 mM) à luz 33,3% Mg-clorofilina (100 µM) com EDTA (5 mM) à luz 91,7% Mg-clorofilina (10 µM) sozinho à luz 0 Mg-clorofilina (100 µM) sozinho à luz 0
[0097] O fototratamento de clorofilina ou EDTA sozinho teve pouco ou nenhum efeito nos micélios fúngicos. A adição de EDTA em Clorofilina aumentou a supressão sobre o crescimento de micélios fúngicos, a saber, a concentrações de clorofilina de 10 uM ou acima nas condições de teste. Botrytis cinerea foi amplamente inativado quando tratado por combinação de clorofilina 100 µM e EDTA-dissódico 5 mM. EXEMPLO 4
[0098] Nesse exemplo, a aplicação de um composto fotossensibilizador de porfirina e um agente quelante suprimiu o crescimento de fungos de Botrytis cinerea que causam doença do mofo cinzento com o uso de inibição fotodinâmica. Em especial, Mg-clorofilina e cálcio EDTA dissódico ou EDTA dissódico foram usados, e mostrou-se que a combinação do composto fotossensibilizador de porfirina e cada agente quelante inativa Botrytis cinerea crescimento.
[0099] Nos experimentos, micélios de Botrytis cinerea foram cultivados em meio líquido durante 48 horas. Pequenas esferas do micélio (diâmetro médio 2 mm) foram incubadas durante 100 minutos, com Mg-Clorofilina com ou sem EDTA 5 mM (cálcio ou dissódico). As amostras foram iluminadas com 395 nm (fluência 106,6 J cm-2) por 120 min e o crescimento radial dos emplastros miceliais após 7 dias em meio de ágar foi medido. Uma amostra foi considerada morta, se não houve nenhum crescimento observável após 7 dias em placas de agar. A Tabela a seguir resume os resultados: TABELA 4: RESULTADOS DO PERCENTUAL DE MICÉLIOS MORTOS DE B.
CINEREA PARA EDTA DE NA OU CA Tratamento com Ca-EDTA % morto Controle não tratado no escuro 0 Controle não tratado com luz 0 EDTA-Ca sozinho com luz (5 mM) 0 Mg-clorofilina (100 μM) com EDTA-Ca (5 mM) à luz 47,6% Mg-clorofilina (100 µM) sozinho à luz 0 Tratamento com Na-EDTA % morto Controle não tratado no escuro 0 Controle não tratado com luz 0 EDTA-Na sozinho com luz (5mM) 0 Mg-clorofilina (100 µM) com EDTA-Na (5mM) à luz 91,7% Mg-clorofilina (100 µM) sozinho à luz 0
[0100] O fototratamento de clorofilina ou EDTA sozinho (incluindo EDTA cálcio e dissódico) teve efeito limitado nos micélios fúngicos. Para ambos testados agentes quelantes, a adição de EDTA em Clorofilina aumentou a supressão sobre o crescimento de micélios fúngicos, a saber, a concentrações de clorofilina de 10 uM ou acima nas condições de teste. Botrytis cinerea foi inativado em grandes proporções quando tratado pela combinação de clorofilina 100 µM e Na-EDTA 5 mM, e também foi inativado quando tratado pela combinação de clorofilina 100 µM e Ca-EDTA 5M. A eficiência foi menor do que com Na-EDTA. EXEMPLO 5
[0101] Nesse exemplo, a aplicação de um composto fotossensibilizador de porfirina e um agente quelante suprimiu o crescimento de fungos de pinta preta (Alternaria solani) com o uso de inibição fotodinâmica. Em particular, clorina E6 e EDTA dissódico foram usados, e mostrou-se que a combinação do composto fotossensibilizador de porfirina e o agente quelante inativa crescimento de Alternaria solani.
[0102] Nos experimentos, micélios de Alternaria solani foram cultivados em meio líquido durante 24 horas. Pequenas esferas do micélio (diâmetro médio 2 milímetros) foram incubadas durante 100 minutos com clorina E6 com ou sem 5 mM de EDTA-dissódico. As amostras foram iluminadas com 395 nm (fluência 106,6 J cm-2) por 120 minutos e o crescimento radial dos emplastros miceliais após 7 dias em meio de ágar foi medido. Uma amostra foi considerada morta, se não houve nenhum crescimento observável após 7 dias em placas de agar. A Tabela a seguir resume os resultados:
TABELA 5: RESULTADOS DO PERCENTUAL DE MICÉLIOS MORTOS DE
ALTERNARIA SOLANI Tratamento % morto sem luz, clorina E6 0 μM 0,0% sem luz, clorina E6 100 μM 0,0% luz, clorina E6 0 μM 0,0% luz, clorina E6 1 μM 0,0% luz, clorina E6 10 μM 8,3% luz, clorina E6 100 μM 0% sem luz, Na-EDTA 5 mM sozinho 0% sem luz, clorina E6 100 μM + Na-EDTA 5 mM 0% luz, Na-EDTA 5 mM sozinho 0% luz, clorina E6 1 μM + Na-EDTA 5 mM 0% luz, clorina E6 10 μM + Na-EDTA 5 mM 88,8% luz, clorina E6 100 μM + Na-EDTA 5 mM 16,7%
[0103] O fototratamento de Clorina E6 ou EDTA sozinho teve pouco ou nenhum efeito nos micélios fúngicos. A adição de EDTA em Clorina E6 aumentou a supressão sobre o crescimento de micélios fúngicos, a saber, a concentrações de clorofilina de 10 uM ou acima nas condições de teste. Alternaria solani foi amplamente inativado quando tratado por combinação de clorofilina 10 uM e EDTA-dissódico 5 mM. EXEMPLO 6 - TESTE NA PLANTA HOSPEDEIRA GRAMA RASTEIRA
[0104] Nesse exemplo, o controle de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) em grama rasteira foi avaliado. Em termos de metodologia, a grama (L-93) foi cultivada em vasos de 8,8 cm (3,5 polegadas) por 4 a 6 semanas. As plantas foram inoculadas com 0,2 g/vaso de inóculo de sementes de trigo contendo 5 isolados diferentes de Sclerotinia homoeocarpa (patógeno da esclerotínia). Após 24 horas, as plantas inoculadas foram pulverizadas com fórmula diferente. Quatro repetições de cada tratamento foram realizadas. Após a aplicação foliar, as plantas foram incubadas no escuro durante 8 horas, em seguida, colocadas aleatoriamente sob luzes de LED (PAR cerca de 300 umoles/m²/s). Quatro repetições de cada tratamento foram realizadas. Ciclo de luz de LED definido a partir das 18:00 DESLIGADO, 2:00 LIGADO, para manter ciclo de luz:escuro de 16 horas:8 horas. Sete dias após a inoculação (DPI), vasos de A. stolonifera foram avaliados quanto ao percentual de amarelamento das lâminas foliares e o percentual de cobertura micelial das lâminas foliares com S. homoeocarpa. TABELA 6: RESULTADOS DE INIBIÇÃO DE SCLEROTINIA HOMOEOCARPA
EM GRAMA % Médio de % Médio de micélio amarelamento % de % de Tratamento 7 DPI 7 DPI inibição inibição 0,1% MgChln + 1 0,04% 20 5,88% 27,5 24% Atlox3273 0,1% EDTA-Ca 2 + 0,04% 26,25 -23,53% 37,5 -3% Atlox3273 0,1% MgChl + 0,1% EDTA-Ca 3 13,75 35,29% 20 45% + 0,04% Atlox3273 controle Controle + p inoculado não 21,25 - 36,25 - tratado controle não Controle - p tratado, não 0 - 0 - inoculado
[0105] Altox3273 é um exemplo de um agente tensoativo que pode ser usado na composição. Tais compostos tensoativos podem ser usados como adjuvantes para ajudar a cobertura da folhagem das plantas, por exemplo.
[0106] A partir dos resultados acima, pode ser visto que a combinação de MgChl e EDTA forneceu inibição fotodinâmica aumentada em uma planta (grama rasteira) comparado para cada composto usado isoladamente. Nesse exemplo, a combinação foi fornecida como uma composição aquosa que ainda incluiu um tensoativo. EXEMPLO 7
[0107] Nesse exemplo, o controle de fungo de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) foi avaliado para Mg clorofilina, poliaspartato de sódio, e a combinação dos mesmos. Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA) nas concentrações desejadas. Em seguida, um bujão com 5 milimetros de diâmetro de um isolado de Sclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado no centro da placa de Petri alterada e incubou-se a 21 °C no escuro durante 24 horas.
Depois de 24 horas, um conjunto de placas de Petri (em triplicado) foi deixado no escuro e um conjunto foi colocado sob iluminação durante o restante do experimento (todos a 21 °C). O crescimento radial do fungo foi monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa em PDA não alterado atingisse a borda da placa de Petri.
A iluminação foi fornecida por luzes fluorescentes que emitem de cerca de 180 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 7A: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NO ESCURO Crescimento Radial Tratamento1 Taxa (µM)5 2,3 % de inibição4 Médio (mm) Não alterado (controle) 0 13,3 - Mg Clorofilina (Mg Cl) 31 11,2 24,1 Baypure DS (poliaspartato de 50. 13,7 7.1 sódio) Baypure DS (poliaspartato de 500 10,8 27,1 sódio) Baypure DS (poliaspartato de 1.000 9 39.1 sódio) Baypure DS (poliaspartato de 2.000 5.5 62,8 sódio) Mg Chln + Baypure DS 31+50 11,4 22,6 Mg Chln + Baypure DS 31+500 10,7 27,4 Mg Chln + Baypure DS 31+1.000 8,3 44,0 Mg Chln + Baypure DS 31+2.000 5,4 63,2
TABELA 7B: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM)5 % de inibição4 (mm)2,3 Não alterado (controle) 0 13,6 - Mg Clorofilina 31 6.6 51,0 Baypure DS 50 14,4 -7,0 (poliaspartato de sódio) Baypure DS 500 10. 7 21,0 (poliaspartato de sódio) Baypure DS 1000 7.6 43,6 (poliaspartato de sódio) Baypure DS 2.000
4.4. 67,5 (poliaspartato de sódio) (1,25%) Mg Chln + Baypure DS 31+50 5,9 56,0 Mg Chln + Baypure DS 31+500 5 63,0 Mg Chln + Baypure DS 31+1.000 3.4. 74,9 Mg Chln + Baypure DS 31+2.000 0,6 95,5 Notas nas tabelas acima: 1 Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA); 2 médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais); 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C; 4% de inibição calculado em relação ao controle não alterado. 5 Mw de Baypure DS listados como 2.000 a 3.000. Mw de 2.500 g/mol foi usado para os cálculos.
[0108] A partir dos resultados acima, pode ser visto que a combinação de MgChl e poliaspartato forneceu inibição fotodinâmica aumentada em comparação com cada composto usado isoladamente.
EXEMPLO 8
[0109] Xanthomonas axonopodis são patógenos bacterianos que causam câncer de citros. O câncer de citros é uma doença de planta altamente contagiosa que pode destruir toda um campo de colheita. Constatou-se que Mg- clorofilina tem pouco efeito para controlar as bactérias no ensaio (o mesmo protocolo como o Exemplo 1, em Erwinia Amylovora). No entanto, constatou-se que combinando Clorofilina com EDTA (por exemplo, EDTA sódico 5 mM) com iluminação de luz forneceu controle aumentado de Xanhomonas axonopodis. Resultados positivos foram obtidos em várias concentrações de clorofilina e tempos de exposição.
[0110] Xanthomonas foram cultivadas em meio líquido. As amostras foram incubadas por 30 minutos ou 5 minutos com Mg-clorofilina e com EDTA- Dissódico por 30 minutos e depois iluminadas com 395 nm (fluência 26,6 J cm- 2) por 30 minutos. CFU das bactérias foi contado nas placas. TABELA 8: RESULTADOS DA CONTAGEM DE XANTHOMONAS
AXONOPODIS Tratamento UFC/ml log UFC/ml Inibição% Controle não tratado no 3,04E+07 7,5 escuro Mg-Clorofilina 100 µM + 2,94E+06 6,5 90,3% EDTA 5 mM, no escuro Mg-clorofilina 100 µM + 4,09E+02 2,6 100,0% EDTA 5 mM, luz 30 min Mg-clorofilina 10 µM + 3,92E+03 3,6, 100,0% EDTA 5 mM, luz 30 min Mg-clorofilina 1 µM + EDTA 3,62E+05 5,6 98,8% 5 mM, luz 30 min Mg-clorofilina 100 µM + 3,33E+02 2,5 100,0% EDTA 5 mM, luz 5 min Mg-clorofilina 10 µM + 7,32E+04 4,9 99,8% EDTA 5 mM, luz 5 min Mg-clorofilina 1 µM + EDTA 5,69E+05 5,8 98,1% 5 mM, luz 5 min
EXEMPLO 9 (CURCUMINA - UM COMPOSTO MACROCÍCLICO NÃO PORTADOR DE NITROGÊNIO)
[0111] Os experimentos indicaram que a combinação de EDTA e curcumina fornece supressão fotodinâmica reforçada de crescimento fúngico em comparação com cada componente individualmente. Esse exemplo indica que os compostos que são lineares e/ou que não têm uma estrutura nuclear macrocíclica, como têm as porfirinas, podem também ser combinados com agentes quelantes para aplicações de inibição fotodinâmica.
[0112] Nesse exemplo, o controle de fungo de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) com curcumina, EDTA, e a combinação foi avaliado. A curcumina é dissolvida em DMSO primeiro e depois diluída com solução de Tween a 0,25%. Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA) nas concentrações desejadas. Em seguida, um bujão de 5 milímetros de diâmetro de um isolado de Sclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado no centro da placa de Petri alterada e incubou-se a 21 °C no escuro durante 24 horas. Depois de 24 horas, um conjunto de placas de Petri (em triplicado) é deixado no escuro e um conjunto é colocado sob iluminação durante o restante do experimento (todos a 21 °C). O crescimento radial do fungo é monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa em PDA não alterado atingisse a borda da placa de Petri. A iluminação é fornecida por luzes fluorescentes emitindo cerca de 180 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR).
TABELA 9A: RESULTADOS NO ESCURO Crescimento Radial Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição4 Médio (mm)2,3 Não alterado (controle) 0 14,2 - Curcumina (DMSO) disp, em
1.000 9,9 33,0 Tween 80 a 0,25% Curcumina (DMSO) disp, em 500 13,1 11,4 Tween 80 a 0,25% Curcumina (DMSO), T25 a 0,25%, Ca-EDTA 100 µM 1.000 2,3 84,4 (RD174) Curcumina (DMSO), T25 a 0,25%, Ca-EDTA 100 µM 500 3,4, 77,0 (RD174) Tween 80,25% 0 14,1 4,89 Ca-EDTA (RD174) 100 µM 0 2,8 80,8 Tween 80,25% + Ca-EDTA 0 3,06 79,3 (RD174) 100 µM DMSO (em água 0 13,5 8,6 desionizada) 0,0736% TABELA 9B: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Taxa de Crescimento Radial % de Tratamento1 curcumina Médio (mm)2,3 inibição4 (µM) Não alterado (controle) 0 12,7 - Curcurmina (DMSO) disp,
1.000 9,6 28,9 em Tween 80 a 0,25% Curcurmina (DMSO) disp, 500 12,4 8,1 em Tween 80 a 0,25% Curcurmina (DMSO), T80 a 0,25%, Ca-EDTA 100 uM 1.000 0,7 94,8 (RD174) Curcurmina (DMSO), T80 a 0,25%, Ca-EDTA 100 uM 500 1,9 85,9 (RD174) Interpolação 80, 0,25% 0 15,1 -11,9 Ca-EDTA (RD174), 100 µm 0 3,2 76,5 Tween 80,25% + Ca-EDTA 0 6,3 53,5 (RD174) 100 µm DMSO (em água 0 12,8 4,9 desionizada) 0,0736% Notas nas tabelas acima: 1 Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA)
2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 4% de inibição calculado em relação ao controle não alterado Mw de Baypure® DS listado como 2.000-3.000, então cálculos baseados em 2.500 g/mol. EXEMPLO 10
[0113] Os experimentos indicaram que a combinação de sal EDDS trissódico e Mg-Clorofilina fornece supressão fotodinâmica reforçada de crescimento de bactérias (E. coli) em comparação com cada componente individualmente. TABELA 10: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ (EDDS E MGCHLN) Tratamento UFC/ml LogCFU/ml % de inativação EDDS de 50 mM 6,50E + 05 5,81 88,1 MgChln 10 µM 1,30E + 05 5,11 97,6 MgChln 1 µM 2,73E + 05 5,44 95,0 MgChln 10 µM + EDDS 50 <10.000 <4 > 99,8 mM MgChln 1 µM + EDDS 50 <10.000 <4 > 99,8 mM controle não tratado 5,47E + 06 6,74 EXEMPLO 11
[0114] Os experimentos indicaram que a combinação de IDS (Baypure® CX) e Mg-Clorofilina fornece supressão fotodinâmica reforçada de crescimento de bactérias (E. coli) em comparação com cada componente individualmente. TABELA 11: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ (IDS E MGCHLN) Tratamento UFC/ml LogCFU/ml % de inativação 5mM Baypure CX 2,09E+06 6,32 67,8 MgChln 1 µM 9,07E+05 5,96 86,1 MgChln 1 µM + Baypure CX 3,37E+05 5,53 94,8 5 mM Controle de Cultura 6,50E+06 6,81 EXEMPLO 12
[0115] Os experimentos indicaram que a combinação de poliaspartato (Baypure® DS) e Mg-Clorofilina fornece supressão fotodinâmica reforçada de crescimento de bactérias (E. coli) em comparação com cada componente individualmente. TABELA 12: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ (POLIASPARTATO E MGCHLN) Tratamento UFC/ml LogCFU/ml % de inativação Baypure DS (5%) 4,20E+06 6,62 40,3 MgChln 1 µM 6,13E+05 5,79 91,3 MgChln 1 µM + 5% 6,67E+03 3,82 99,9 Baypure DS controle não tratado 7,03E+06 6,85 EXEMPLO 13 (CURCUMINA - UM COMPOSTO MACROCÍCLICO NÃO PORTADOR DE NITROGÊNIO)
[0116] Os experimentos indicaram que a combinação de sal EDDS trissódico e curcumina fornece supressão fotodinâmica reforçada de crescimento de bactérias (E. coli) em comparação com cada componente individualmente. A solução de curcumina foi preparada preparando estoque 100 mM fresco em solvente Arlasolve e diluindo em solução de Tween a 0,25% imediatamente antes do uso. TABELA 13: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ (EDDS E CURCUMINA) % de Tratamento UFC/ml LogCFU/ml inativação Curcumina 1 mM em solução 1,24E+06 6,09 86,0 Tween 80 a 0,25% 5,8% EDDS (50mM) 1,05E+06 6,02 88,2 Curcumina 1 mM em solução Tween 80 a 0,25% + EDDS 50 <10.000 <4 > 99,8 mM controle não tratado 8,87E+06 6,95 EXEMPLO 14
[0117] O controle do fungo da esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) foi avaliado quanto à Mg Clorofilina, IDS (Baypure® CX) e combinação dos mesmos. Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA) nas concentrações desejadas. Em seguida, um bujão de 5 milímetros de diâmetro de um isolado deSclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado no centro da placa de Petri alterada e incubou-se a 21 °C no escuro durante 24 horas. Depois de 24 horas, um conjunto de placas de Petri (em triplicado) foi deixado no escuro e um conjunto foi colocado sob iluminação durante o restante do experimento (todos a 21 °C). O crescimento radial do fungo foi monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa em PDA não alterado atingisse a borda da placa de Petri.
A iluminação foi fornecida por fluorescentes luzes emitindo cerca de 180 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 14A: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NO ESCURO Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição4 (mm) 2,3 Não alterado 0 13,5 - (controle) Mg Clorofilina (Mg Cl) 31 9,1 32,5 Baypure CX (IDS) 500 12,7 6,2 Baypure CX (IDS) 1.000 11,4 15,2 Baypure CX (IDS) 2.000 9,3 31,3 Mg Chl + Baypure CX 31+500 9,2 32,1 Mg Chl + Baypure CX 31+1.000 9,2 31,7 Mg Chl + Baypure CX 31+2.000 7,9 41,2
TABELA 14B: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição4 (mm)2,3 Não alterado 0 12,9 - (controle) Mg Clorofilina (Mg Cl) 31 5,3 59,2 Baypure CX (IDS) 500 11,8 8,6 Baypure CX (IDS) 1.000 10,6 18,0 Baypure CX (IDS) 2.000 8,9 30,9 Mg Chl + Baypure CX 31+500 4,5 65,2 Mg Chl + Baypure CX 31+1.000 3,7 71,2 Mg Chl + Baypure CX 31+2.000 3,1 76,0 Notas nas tabelas acima: 1 Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA); 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais); 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C;
4 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado. EXEMPLO 15
[0118] O controle do fungo da esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) foi avaliado quanto à clorofilina Mg, ácido L-glutâmico, ácido N,N-diacético, sal tetrassódico (GLDA-NA4, dissolvina GL-47-S) e combinação dos mesmos. Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA) nas concentrações desejadas. Em seguida, um bujão com 5 milimetros de diâmetro de um isolado de Sclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado no centro da placa de Petri alterada e incubou-se a 21 °C no escuro durante 24 horas. Depois de 24 horas, um conjunto de placas de Petri (em triplicado) foi deixado no escuro e um conjunto foi colocado sob iluminação durante o restante do experimento (todos a 21 °C). O crescimento radial do fungo foi monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa em PDA não alterado atingisse a borda da placa de Petri. A iluminação foi fornecida por fluorescentes luzes emitindo cerca de 180 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 15A: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NO ESCURO Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição4 (mm)2,3 Não alterado 00 13,5 - (controle) Mg Clorofilina (Mg Cl) 31 9,1 32,5 Dissolvina GL-47-S 500 13,2 2,1 (GLDA-Na4) Dissolvina GL-47-S
2.500 4,6 66,3 (GLDA-Na4) Mg Chl + dissolvina 31 + 500 10,1 25,5 GL-47-S (GLDA-Na4) Mg Chl + dissolvina 31 + 2.500 3,4 74,5 GL-47-S (GLDA-Na4)
TABELA 15B: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição4 (mm)2,3 Não alterado 00 12,9 - (controle) Mg Clorofilina (Mg Cl) 31 5,3 59,2 Dissolvina GL-47-S 500 12,1 6,4 (GLDA-Na4) Dissolvina GL-47-S
2.500 3,4 73,8 (GLDA-Na4) Mg Chl + dissolvina 31 + 500 4,4 66,1 GL-47-S (GLDA-Na4) Mg Chl + dissolvina 31 + 2.500 0,2 98,3 GL-47-S (GLDA-Na4) Notas nas tabelas acima: 1 Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA); 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais); 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C; 4 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado. EXEMPLO 16
[0119] Nesse exemplo, o controle de fungo de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) com metalizados clorinas de Tipo II foi avaliada. Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA) nas concentrações desejadas. Em seguida, um bujão de 5 milímetros de diâmetro de um isolado de Sclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado no centro da placa de Petri alterada e incubou-se a 21 °C no escuro durante 24 horas. Depois de 24 horas, um conjunto de placas de Petri (em triplicado) é deixado no escuro e um conjunto é colocado sob iluminação durante o restante do experimento (todos a 21 °C). O crescimento radial do fungo é monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa em PDA não alterado atingisse a borda da placa de Petri. A iluminação é fornecida por luzes fluorescentes emitindo cerca de 180 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR).
TABELA 16A: RESULTADOS NO ESCURO Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 (mm)2,3 Não alterado 0 13,5 - (controle) ZnCe6 5 13,2 2,47 ZnCe6 10 12,5 7,41 ZnCe6 31 10,3 23,46 AlCe6 5 13,8 1,85 AlCe6 10 13,0 3,70 AlCe6 31 13,1 3,09 SnCe6 5 13,2 2,47 SnCe6 10 13,0 3,70 SnCe6 31 10,8 19,75 PdCe6 5 11,5 18,82 PdCe6 10 9,0 36,47 PdCe6 31 8,1 42,75 Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA) 2 médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado
TABELA 16B: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Taxa de cloro Crescimento Radial Médio Tratamento1 % de inibição5 (µM) (mm)2,3 Não alterado 0 12,8 - (controle) ZnCe6 5 11,5 10,4 ZnCe6 10 10,1 21,4 ZnCe6 31 7,5 41,6 AlCe6 5 11,4 11,0 AlCe6 10 7,5 41,6 AlCe6 31 0,0 100,0 SnCe6 5 8,6 33,1 SnCe6 10 7,1 44,8 SnCe6 31 0,5 96,1 PdCe6 5 6,2 49,3 PdCe6 10 2,8 76,9 PdCe6 31 0 100,0 Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA) 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado
[0120] As Tabelas 16A e 16B mostram que várias clorofilinas metalizadas de tipo II inibiram fungo da pinta preta na presença de luz. EXEMPLO 17 - EXEMPLO COMPARATIVO
[0121] Nesse exemplo, o controle de fungo de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) com um cobalto clorinas (que é não um fotossensibilizador do tipo II) foi avaliada. Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA) nas concentrações desejadas. Em seguida, um bujão de 5 milímetros de diâmetro de um isolado deSclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado no centro da placa de Petri alterada e incubou-se a 21 °C no escuro durante 24 horas. Depois de 24 horas, um conjunto de placas de Petri (em triplicado) é deixado no escuro e um conjunto é colocado sob iluminação durante o restante do experimento (todos a 21 °C). O crescimento radial do fungo é monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa em PDA não alterado atingisse a borda da placa de Petri. A iluminação é fornecida por luzes fluorescentes emitindo cerca de 180 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 17A: RESULTADOS NO ESCURO Crescimento Radial Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 Médio (mm)2,3 Não alterado 0 13,6 - (controle) CoCe6 10 13,3 2,05 CoCe6 31 12,9 4,92 TABELA 17B: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 (mm)2,3 Não alterado 0 12,8 - (controle) CoCe6 10 12,4 3,0 CoCe6 31 12,3 3,9 Notas nas tabelas acima: 1 Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA) 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado
[0122] Nesse exemplo, o controle de fungo de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) com Cu clorofilina foi avaliada. Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA) nas concentrações desejadas. Em seguida, um bujão de 5 milímetros de diâmetro de um isolado deSclerotinia homoeocarpa (5 isolados testados no total) foi inoculado no centro da placa de Petri alterada e incubou-se a 21 °C no escuro durante 24 horas. Depois de 24 horas, um conjunto de placas de Petri (em triplicado) é deixado no escuro e um conjunto é colocado sob iluminação durante o restante do experimento (todos a 21 °C). O crescimento radial do fungo é monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa em PDA não alterado atingisse a borda da placa de Petri. A iluminação é fornecida por luzes fluorescentes emitindo cerca de 180 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 17C: RESULTADOS NO ESCURO Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 (mm)2,3 Não alterado 0 13,87 - (controle) Clorofilina Cu 31,62 14,30 -3,13 (CuChln) CuChln 100 14,33 -3,37 CuChln 316,2 14,60 -5,29 CuChln 1.000 14,40 -3,85 TABELA 17D: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Crescimento Radial Médio Tratamento 1 Taxa (µM) % de inibição 5 (mm) 2,3 Não alterado 0 11,80 - (controle) Clorofilina Cu 31,62 14,03 -18,93 (CuChln) CuChln 100 14,20 -20,34 CuChln 316,2 14,93 -26,55 CuChln 1000 15,20 -28,81 Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram alterados para Ágar de Dextrose de Batata (PDA) 2 médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado
[0123] As Tabelas 17A-17D mostram que clorofilinas metalizadas que não são fotossensibilizadores do tipo II - ou, em outras palavras, clorofilinas metalizadas que não geram singletos oxigênios na presença de luz - não inibem fungo de esclerotínia na presença ou ausência de luz. EXEMPLO 18
[0124] Nesse exemplo, o controle de fungo de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) com clorinas combinadas com um agente quelante foi avaliado. Os tratamentos foram preparados em solução salina tamponada com fosfato (PBS) em placas de 24 cavidades (em duplicatas para incubação clara versus escura) nas concentrações desejadas. Em seguida, um bujão de 5 milímetros de diâmetro de um isolado de Sclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado para PBS e incubou-se em 21 °C no escuro durante 2 horas. Depois de 2 horas, uma placa de 24 cavidades (com isolados em triplicado) é deixada no escuro e uma placa de 24 cavidades é colocada sob iluminação durante 1 hora (todas a 21 °C). Após a iluminação, tampões fúngicos são removidos de PBS, engarrafados secos em filtro de papel estéril e transferidos para Ágar de Dextrose de Batata não alterado (PDA). O crescimento radial do fungo é monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa atingisse a borda da placa de Petri. A iluminação é fornecida por luzes LED emitindo cerca de 1.000 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 18A: RESULTADOS NO ESCURO Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 (mm)2,3 PBS (controle) 0 11,17 - EDTA dissódico di- 500 6,72 39,80 hidratado (NaEDTA) Mg clorofilina (Mg 100 12,50 -11,94 Chln) Mg Chln 10 11,61 -3,98 Ce6 100 10,78 3,48 Ce6 10 11,33 -1,49 NaEDTA + MgChln 500+100 8,06 27,86 NaEDTA + MgChln 500+10 8,17 26,87 NaEDTA + Ce6 500+100 7,17 35,82 NaEDTA + Ce6 500+10 5,44 51,24 Notas na Tabela acima:
1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora. 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado TABELA 18B: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 (mm)2,3 PBS (controle) 0 11,06 - EDTA dissódico di- 500 9,22 16,58 hidratado (NaEDTA) Mg clorofilina (Mg 100 8,56 22,61 Chln) Mg Chln 10 7,56 31,66 Ce6 100 9,83 11,06 Ce6 10 8,39 24,12 NaEDTA + MgChln 500+100 2,50 77,39 NaEDTA + MgChln 500+10 1,06 90,45 NaEDTA + Ce6 500+100 2,61 76,38 NaEDTA + Ce6 500+10 0,94 91,46 Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora. 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado EXEMPLO 19
[0125] Nesse exemplo, o controle de fungo de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) com Protoporfirina de Zinco IX (Zn-PPIX) combinada com EDTA foi avaliado. Os tratamentos foram preparados em solução salina tamponada com fosfato (PBS) em placas de 24 cavidades (em duplicatas para incubação clara versus escura) nas concentrações desejadas. Em seguida, um bujão de 5 milímetros de diâmetro de um isolado de Sclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado em PBS e incubou-se em 21 °C no escuro durante 2 horas. Depois de 2 horas, uma placa de 24 cavidades (com isolados em triplicado) é deixada no escuro e uma placa de 24 cavidades é colocada sob iluminação durante 1 hora (todas a 21 °C). Após a iluminação, tampões fúngicos são removidos de PBS, engarrafados secos em filtro de papel estéril e transferidos para Ágar de Dextrose de Batata não alterado (PDA). O crescimento radial do fungo é monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa atingisse a borda da placa de Petri. A iluminação é fornecida por luzes LED emitindo cerca de 1.000 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 19A: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 (mm)2,3 PBS (controle) 0 11,11 - EDTA dissódico di- 500 7,11 36,00 hidratado (NaEDTA) Zn Protoporfirina IX 10 10,28 7,50 (PPIX) Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora. 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado EXEMPLO 20
[0126] Nesse exemplo, o controle de fungo de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) com bacterioclorina combinada com EDTA foi avaliado. Os tratamentos foram preparados em solução salina tamponada com fosfato (PBS)
em placas de 24 cavidades (em duplicatas para incubação clara versus escura) nas concentrações desejadas.
Em seguida, um bujão de 5 milímetros de diâmetro de um isolado de Sclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado em PBS e incubou-se em 21 °C no escuro durante 2 horas.
Depois de 2 horas, uma placa de 24 cavidades (com isolados em triplicado) é deixada no escuro e uma placa de 24 cavidades é colocada sob iluminação durante 1 hora (todas a 21 °C). Após a iluminação, tampões fúngicos são removidos de PBS, engarrafados secos em filtro de papel estéril e transferidos para Ágar de Dextrose de Batata não alterado (PDA). O crescimento radial do fungo é monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa atingisse a borda da placa de Petri.
A iluminação é fornecida por luzes LED emitindo cerca de 1.000 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 20A: RESULTADOS NO ESCURO Crescimento Radial % de Tratamento1 Taxa (µM) Médio (mm)2,3 inibição5 PBS (controle) 0 10,67 - Bacterioclorina (BchlNA) (em 1 10,94 -2,60 Pluronics + Arlasolve) BchlNa (em Pluronics + 10 11,39 -6,77 Arlasolve) NaEDTA + BchlNa 500+1 6,78 36,46 NaEDTA + BchlNa 500+10 5,06 52,60 NaEDTA 500 7,17 32,81 Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora. 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado
TABELA 20B: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Crescimento Radial % de Tratamento1 Taxa (µM) Médio (mm)2,3 inibição5 PBS (controle) 0 10,78 - Bacterioclorina (BchlNA) (em 1 10,44 3,09 Pluronics + Arlasolve) BchlNa (em Pluronics + 10 8,33 22,68 Arlasolve) NaEDTA + BchlNa 500+1 4,72 56,19 NaEDTA + BchlNa 500+10 0,67 93,81 NaEDTA 500 7,17 33,51 Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora. 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado EXEMPLO 21 Nesse exemplo, o controle de fungo de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) com clorina e6 de Alumínio combinada com EDTA foi avaliado.
Os tratamentos foram preparados em solução salina tamponada com fosfato (PBS) em placas de 24 cavidades (em duplicatas para incubação clara versus escura) nas concentrações desejadas.
Em seguida, um bujão de 5 milímetros de diâmetro de um isolado de Sclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado em PBS e incubou-se em 21 °C no escuro durante 2 horas.
Depois de 2 horas, uma placa de 24 cavidades (com isolados em triplicado) é deixada no escuro e uma placa de 24 cavidades é colocada sob iluminação durante 1 hora (todos a 21 °C). Após a iluminação, tampões fúngicos são removidos de PBS, engarrafados secos em filtro de papel estéril e transferidos para Ágar de Dextrose de Batata não alterado (PDA). O crescimento radial do fungo é monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa atingisse a borda da placa de Petri.
A iluminação é fornecida por luzes LED emitindo cerca de 1.000 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 21A: RESULTADOS NO ESCURO Crescimento Radial Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 Médio (mm)2,3 PBS (controle) 0 12,5 - Al Ce6 1 13 -4 Al Ce6 10 13,17 -5,33 EDTA dissódico di- 500 11.06 11,56 hidratado (NaEDTA) NaEDTA + Al Ce6 500+1 11,78 5,78 NaEDTA + Al Ce6 500+10 9,39 24,89 Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora. 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado TABELA 21B: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 (mm)2,3 PBS (controle) 0 12,72 - Al Ce6 1 13 -2,18 Al Ce6 10 4,78 62,45 EDTA dissódico di- 500 10,78 15,28 hidratado (NaEDTA) NaEDTA + Al Ce6 500+1 6,39 49,78 NaEDTA + Al Ce6 500+10 3 76,42 Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora. 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais)
3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado EXEMPLO 22
[0127] Nesse exemplo, o controle de fungo de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) com dicloreto de hematoporfirina IX combinado com um agente quelante (EDTA dissódico, di-hidratado) foi avaliado. Os tratamentos foram preparados em solução salina tamponada com fosfato (PBS) em placas de 24 cavidades (em duplicatas para incubação clara versus escura) nas concentrações desejadas. Em seguida, um bujão de 5 milímetros de diâmetro de um isolado de Sclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado em PBS e incubou-se em 21 °C no escuro durante 2 horas. Depois de 2 horas, uma placa de 24 cavidades (com isolados em triplicado) é deixada no escuro e uma placa de 24 cavidades é colocada sob iluminação durante 1 hora (todos a 21 °C). Após a iluminação, tampões fúngicos são removidos de PBS, engarrafados secos em filtro de papel estéril e transferidos para Ágar de Dextrose de Batata não alterado (PDA). O crescimento radial do fungo é monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa atingisse a borda da placa de Petri. A iluminação é fornecida por luzes LED emitindo cerca de 1.000 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 22A: RESULTADOS NO ESCURO Crescimento Radial Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 Médio (mm)2,3 PBS 0 14,28 - Dicloreto de hematoporfirina IX 10 15,06 -5,45 (HemIX) EDTA dissódico di- 500 14,83 -3,89 hidratado (NaEDTA) HemIX + NaEDTA 10+500 14,78 -3,50 Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora.
2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 48 e 72 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado TABELA 22B: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Crescimento Radial Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 Médio (mm)2,3 PBS 0 13,72 - Dicloreto de hematoporfirina IX 10 8,39 38,87 (HemIX) EDTA dissódico di- 500 8,89 35,22 hidratado (NaEDTA) HemIX + NaEDTA 10+500 0,56 95,95 Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora. 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 48 e 72 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado EXEMPLO 23 - TESTE NA PLANTA HOSPEDEIRA NICOTIANA
[0128] Nesse exemplo, o controle do patógeno de planta fúngico Colletotrichum orbiculare (Cgm) na planta hospedeira Nicotiana benthamiana após o tratamento com Mg Clorofilina combinada com um agente quelante e um emulsionante foi avaliado. Os tratamentos foram aplicados às plantas de N. benthamiana aproximadamente 2 horas antes da inoculação com uma suspensão de esporos de Cgm. As plantas foram em seguida expostas à luz por um período de 24 horas seguido por incubação no escuro até que os sintomas de doença nas plantas de controle tratadas com água. Uma vez que os sintomas de doença eram evidentes, as lesões foram contadas e a área de folha medida a fim de determinar o número de lesões/cm2 de área de folha. Foram usadas quatro plantas replicadas por tratamento e as plantas foram randomizadas sob a fonte de luz. A iluminação é fornecida por luzes LED emitindo cerca de 180 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 23: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Lesões/cm2 % de Tratamento1 Fitotoxicidade4 Área de Folha2 inibição3 Mg Clorofilina a 0,1% + Ca EDTA dissódico a 0,025%, + Atlox AL-3273 0,146 97,21 0 a 0,0175% Ca EDTA dissódico a 0,025% + Atlox 1,857 64,35 0 AL-3273 a 0,0175% controle de água 5,210 - 0 1 Os tratamentos foram aplicados ~ 2 horas antes da inoculação com Cgm. 2 Números são médias de 4 repetições. 3% de inibição calculada em relação ao controle não alterado. 4 Classificações de fitotoxicidade: 0 = planta saudável, sem danos; 3 = dano leve; 7 = dano grave; 10 = planta morta. Menos de 3 é considerado aceitável EXEMPLO 24
[0129] Nesse exemplo, o controle do patógeno de planta fúngico Colletotrichum orbiculare (Cgm) na planta hospedeira Nicotiana benthamiana após o tratamento com sal CE6 trissódico (Ce6Na3) combinado com um óleo de polialfaolefina (PAO) foi avaliado. Os tratamentos foram aplicados às plantas de N. benthamiana aproximadamente 2 horas antes da inoculação com uma suspensão de esporos de Cgm. As plantas foram em seguida expostas à luz por um período de 24 horas seguido por incubação no escuro até que os sintomas de doença ficassem evidentes nas plantas de controle tratadas com água. Uma vez que os sintomas de doença eram evidentes, lesões foram contadas e área de folha medida a fim de determinar o número de lesões/cm2 de área de folha. Foram usadas quatro plantas replicadas por tratamento e as plantas foram randomizadas sob a fonte de luz. A iluminação é fornecida por luzes LED emitindo cerca de 180 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 24: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Lesões/cm2 Área Tratamento1 % de inibição4 Fitotoxicidade Folha 2 Ce6Na3 a 0,1% + PAO 4 Cst a 0,25% 0,64 97,21 2 (contém Atlox AL- 3273 a 7%) PAO 4 Cst a 0,25% (contém Atlox AL- 2,06 64,35 0 3273 a 7%) controle de água 3,59 - 0 1 Os tratamentos foram aplicados ~ 2 horas antes da inoculação com Cgm. 2 Números são médias de 4 repetições. 3 Lesões/cm2 de Área Foliar seguido de uma letra em comum não são estatisticamente diferentes (p=0,05) 4 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado.
5. Classificações de fitotoxicidade: 0 = planta saudável, sem danos; 3 = dano leve; 7 = dano grave; 10 = planta morta. Menos de 3 é considerado aceitável EXEMPLO 25
[0130] Nesse exemplo, o controle de fungo de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) com Mg clorofilinas combinadas com um agente quelante (ácido tânico) foi avaliado. Os tratamentos foram preparados em solução salina tamponada com fosfato (PBS) em placas de 24 cavidades (em duplicatas para incubação clara versus escura) nas concentrações desejadas. Em seguida, um bujão de 5 milímetros de diâmetro de um isolado de Sclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado em PBS e incubou-se em 21 °C no escuro durante 2 horas. Depois de 2 horas, uma placa de 24 cavidades (com isolados em triplicado) é deixada no escuro e uma placa de 24 cavidades é colocada sob iluminação durante 1 hora (todos a 21 °C). Após a iluminação, tampões fúngicos são removidos de PBS, engarrafados secos em filtro de papel estéril e transferidos para Ágar de Dextrose de Batata não alterado (PDA). O crescimento radial do fungo é monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa atingisse a borda da placa de Petri.
A iluminação é fornecida por luzes LED emitindo cerca de 1.000 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR). TABELA 25A: RESULTADOS NO ESCURO Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 (mm)2,3 PBS 0 10,67 - Ácido tânico -500 500 11,33 -6,25 Ácido tânico -1500 1500 9,89 7,29 Mg Chl-5 5 10,56 1,04 MgChl + ácido 5 + 500 11,50 -7,81 tânico -5 + 500 MgChl + ácido 5 + 1500 9,50 10,94 tânico -5 + 1500 Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora. 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado TABELA25B: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 (mm)2,3 PBS 0 10,89 - Ácido tânico -500 500 11,94 -9,69 Ácido tânico -1500 1.500 9,11 16,33 Mg Chl-5 5 6,78 37,76 MgChl + ácido 5 + 500 6,39 41,33 tânico -5 + 500 MgChl + ácido 5 + 1.500 2,50 77,04 tânico -5 + 1.500 Notas na Tabela acima:
1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora. 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado
[0131] A combinação MgChln com ácido tânico forneceu uma maior inibição em crescimento fúngico do que com o uso de MgChln ou ácido tânico sozinho. EXEMPLO 26
[0132] Nesse exemplo, a aplicação de um composto fotossensibilizador de porfirina e agentes quelantes suprimiu o crescimento de bactérias (Erwinia amylovora) que causa a doença do fogo bacteriano com o uso de inibição fotodinâmica. Em especial, Mg-clorofilina e EDTA dissódico e Baypre DS100 foram usados e mostrou-se que a sua combinação inativa crescimento de E. amilovora. No experimento, E. amilovora foram cultivadas em meio líquido. As amostras foram incubadas por 30 minutos com 100 µM de Mg-clorofilina com ou sem quelantes e depois iluminadas com 395 nm (fluência 26,6 J cm-2) por 30 minutos. CFU das bactérias foi contado sobre as placas. A Tabela a seguir resume os resultados: TABELA 26: RESULTADOS DA INATIVAÇÃO RELATIVA DE BACTÉRIAS
APÓS TRATAMENTO COM PDI Inativação relativa do Inativação relativa [ Tratamento log [ amostra CFU Co -/- amostra de CFU Co -/-/UFC ] /CFU ] Controle não tratado, sem luz 1 00 sem luz, clorofilina 100 µM + 8,30E + 00 0,919078 BaypureDS100 a 1,2 % Com luz, 100 µM de clorofilina + 1,2 1,40E + 07 7,146128 % de BaypureDS100
Inativação relativa do Inativação relativa [ Tratamento log [ amostra CFU Co -/- amostra de CFU Co -/-/UFC ] /CFU ] sem luz, clorofilina 100 µM + BaypureDS100 a 1,2 %, Na2EDTA 5,30E + 04 4,724276 1 mM Com luz, 100 µM de clorofilina + 1,2 % de BaypureDS100, 1 mM de > 1,6E + 08 >8 Na2EDTA A combinação de EDTA e Baypure DS100 com clorofilina aumentou o efeito antibacteriano significativamente. E. amilovora foi quase completamente inativada com a combinação dos três compostos sob as condições de teste.
EXEMPLO 27
[0133] Nesse exemplo, a aplicação de um composto fotossensibilizador de porfirina e um agente quelante suprimiu o crescimento de fungos de Botrytis cinerea que causam doença do mofo cinzento com o uso de inibição fotodinâmica. Em especial, Mg-clorofilina e poliaspartato de sódio (Baypure® DS 100) foram usados, e mostrou-se que a combinação do composto fotossensibilizador de porfirina e cada agente quelante inativa crescimento de Botrytis cinerea.
[0134] Nos experimentos, micélios de Botrytis cinerea foram cultivados em meio líquido durante 48 horas. Pequenas esferas do micélio (diâmetro médio 2 mm) foram incubadas durante 100 minutos, com Mg-Clorofilina com ou sem Baypure DS100. As amostras foram iluminadas com 395 nm (fluência 106,6 J cm-2) para 120 minutos e o crescimento radial de emplastros de micélio após 7 dias foi medido em meio de ágar. Uma amostra foi considerada morta, se não houve nenhum crescimento observável após 7 dias em placas de agar. A Tabela a seguir resume os resultados:
TABELA 27: RESULTADOS DO PERCENTUAL DE MICÉLIOS MORTOS DE B.
CINEREAL Tratamento Porcentagem de amostras mortas [%] Controle não tratado no escuro 0 BaypureDS100 1,2%, sem luz 0 BaypureDS100 1,2%, com luz 0 MgChln 100 µM, com luz 0 MgChln 100 µM e BaypureDS100 a 44,4 1,2%, com luz
[0135] O fototratamento de clorofilina ou Baypure isoladamente não teve efeito nos micélios fúngicos. Adicionando Baypure DS100 em Clorofilina aumentou a supressão sobre o crescimento de micélios fúngicos, a saber, a concentrações de clorofilina de 100 uM nas condições de teste. Botrytis cinerea foi bastante inativado quando tratado por combinação de clorofilina 100 µM e Baypure DS100 a 1,2%. EXEMPLO 28 - TESTE DE MAÇÃ ÁRVORES
[0136] Nesse exemplo, um composto fotossensibilizador de porfirina e um agente quelante foram aplicados no campo para suprimir o crescimento de bactérias (Erwinia Amylovora) que faz com que doença do fogo bacteriano em maçã árvores (Gala). Em especial, Mg-clorofilina e EDTA dissódico com e sem Baypure100DS foram usados e a sua combinação foi mostrado para suprimir a maçã fogo ferrugem no campo de condição. Sem fitotoxicidade dos tratamentos foram observadas nos maçã árvores.
[0137] Erwinia Amylovora foi inoculado a 80% de floração das árvores de maçã. Mg-clorofilina e os quelantes diferentes foram aplicados três vezes (2 horas antes da inoculação, e 24 horas, 72 horas após a inoculação) na pulverização de volume de 300 gal por acre. Infecções da doença do fogo bacteriano (Blossom blight) foram avaliadas várias semanas após a inoculação. A infecção média da doença (%) é mostrada na tabela abaixo.
TABELA 28 Infecção por doença, Porcentagem de Tratamentos Fitotoxicidade 1 % controle, % Controle não tratado 37,1 0% 0 0,2% MgChln + 0,1% NaEDTA + 0,05% Atlox AL- 11,4 69% 0 3273 + 0,05% Saponina 0,2% MgChln + 1,2% Baypure + 0,05% NaEDTA + 15,3 59% 0 0,05% Atlox AL- 3273 + 0,05% Saponina
1. Classificações de fitotoxicidade: 0 = planta saudável, sem danos; 3 = dano leve; 7 = dano grave; 10 = planta morta. Menos de 3 é considerado aceitável EXEMPLO 29 - TESTE EM PLANTAS DE TOMATE
[0138] Nesse exemplo, a aplicação de um composto fotossensibilizador de porfirina e um agente quelante suprimiu o crescimento de patógeno fúngico Alternaria solani que causa ferrugem precoce em plantas de tomate. Em especial, Mg-clorofilina e EDTA dissódico com e sem Baypure100DS foram usados e mostrou-se que a sua combinação suprime ferrugem precoce em tomate na condição de campo. Não foi observada fitotoxicidade dos tratamentos nas plantas de tomate.
[0139] Alternaria solani foi inoculado duas vezes nas plantas de tomate em 35 dias e 42 dias após o transplante. Mg-clorofilina e combinações de quelantes foram aplicadas em um total de 6 vezes (2 horas antes de uma 1ª inoculação, 24 horas após uma 2a inoculação, seguido por três mais aplicações em intervalos de 7 dias) no volume de pulverização de 50 gal por acre. Infecções de doença de ferrugem precoce foram avaliadas 11 dias depois da 2a inoculação. A infecção média de doença (%) e a área padrão sob a curva de progresso de doença (SAUDPC) são mostrados na Tabela abaixo.
TABELA 29 Gravidade da Porcentagem de Fitotoxicidade ‘ SAUDPC 1 doença, % controle, % Controle não 0,93 0,350 0 0 tratado 0,2% MgChln + 0,1% NaEDTA + 0,05% Atlox AL- 0,84 0,219 39,6% 0 3273 + 0,05% Saponina 0,2% MgChln + 1,2% Baypure + 0,05% NaEDTA + 0,59 0,128 63,4% 0 0,05% Atlox AL- 3273 + 0,05% Saponina
1. Classificações de fitotoxicidade: 0 = planta saudável, sem danos; 3 = dano leve; 7 = dano grave; 10 = planta morta. Menos de 3 é considerado aceitável EXEMPLO 30 - TESTE EM PLANTAS DE MORANGO
[0140] Para avaliar a fitotoxicidade de fotosensibilizadores com quelantes em plantas, a combinação MgChln e Na2EDTA foi aplicada em plantas de morango (Fragaria vesa) para testar se o tratamento causa danos nas folhas.
[0141] Os tratamentos foram pulverizados sobre plantas de morango de semente derivadas de sementes e cultivadas sob uma cobertura transparente contra chuva. No total, foram feitas três aplicações no intervalo de 7 dias. A fitotoxicidade nas plantas foi avaliada no dia 0 e dia 21. Nenhum dano de folha foi observado.
TABELA 30 Fitotoxicidade Fitotoxicidade 1 Tratamentos Dia 0 Dia 21 Controle não tratado 0 0 Água sozinha 0 0 MgChln a 100 μM + de 0 0 Na2EDTA a 5 mM
1. Classificações de fitotoxicidade: 0 = planta saudável, sem danos; 3 = dano leve; 7 = dano grave; 10 = planta morta. Menos de 3 é considerado aceitável EXEMPLO 31
[0142] Nesse exemplo, o controle de fungo de esclerotínia (Sclerotinia homoeocarpa) com tetra tosilato de meso-Tetra (N-metil-4-piridil) porfina (porfirina catiônica) combinado com um agente quelante (EDTA, dissódico, di- hidratado) foi avaliado. Os tratamentos foram preparados em solução salina tamponada com fosfato (PBS) em placas de 24 cavidades (em duplicatas para incubação clara versus escura) nas concentrações desejadas. Em seguida, um bujão de 5 milímetros de diâmetro de um isolado de Sclerotinia homoeocarpa (3 isolados testados no total) foi inoculado em PBS e incubou-se em 21 °C no escuro durante 2 horas. Depois de 2 horas, uma placa de 24 cavidades (com isolados em triplicado) é deixada no escuro e uma placa de 24 cavidades é colocada sob iluminação durante 1 hora (todos a 21 °C). Após a iluminação, tampões fúngicos são removidos de PBS, engarrafados secos em filtro de papel estéril e transferidos para Ágar de Dextrose de Batata não alterado (PDA). O crescimento radial do fungo é monitorado diariamente até que o crescimento de S. homoeocarpa atingisse a borda da placa de Petri. A iluminação é fornecida por luzes LED emitindo cerca de 1.000 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR).
TABELA 31A: RESULTADOS NO ESCURO Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição5 (mm)2,3 PBS 0 14,67 - EDTA dissódico di- 500 12,67 13,64 hidratado (NaEDTA) tetra- tosilato de meso-Tetra (N-metil- 0,1 14,06 4,17 4-piridil) porfina tetra tosilato de meso- Tetra (N-metil-4-piridil) 0,1 + 500 13,61 7,20 porfina + NaEDTA Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora. 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado
TABELA 31B: RESULTADOS DA INIBIÇÃO NA LUZ Crescimento Radial Médio Tratamento1 Taxa (µM) % de inibição 5 (mm)2,3 PBS 0 12,83 - EDTA dissódico di- 500 8,17 36,36 hidratado (NaEDTA) tetra-tosilato de meso- Tetra (N-metil-4-piridil) 0,1 8,39 34,63 porfina Tetra-tosilato de meso-Tetra (N-metil- 0,1 + 500 2,89 77,49 4-piridil) porfina + NaEDTA Notas na Tabela acima: 1 Os tratamentos foram preparados em Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS), incubados em agitador (200 rpm) durante 2 horas no escuro, em seguida, expostos à luz (Helios, 1000 PAR) ou escuro por 1 hora. 2 Médias foram calculadas com base em 3 isolados fúngicos replicados 3 vezes, com 2 medições por réplica (18 medições totais) 3 Médias representam crescimento que ocorreu entre 24 e 48 horas de incubação a 21 °C 5 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado EXEMPLO 32
[0143] Nesse exemplo, o controle do patógeno de planta fúngico Colletotrichum orbiculare (Cgm) na planta hospedeira Nicotiana benthamiana após o tratamento com Mg Clorofilina combinada com um agente quelante foi avaliado. Os tratamentos foram aplicados às plantas de N. benthamiana aproximadamente 2 horas antes da inoculação com uma suspensão de esporos de Cgm. As plantas foram em seguida expostas à luz por um período de 12 horas seguido por incubação no escuro até que os sintomas de doença ficassem evidentes nas plantas de controle tratadas com água. Uma vez que os sintomas de doença eram evidentes, lesões foram contadas e área de folha medida a fim de determinar o número de lesões/cm2 de área de folha. Foram usadas quatro plantas replicadas por tratamento e as plantas foram randomizadas sob a fonte de luz. A iluminação é fornecida por luzes LED emitindo cerca de 180 µmol/m2/s de radiação fotossinteticamente ativa (PAR).
TABELA 32 Lesões/cm2 de Área Tratamento1 % de inibição4 Fitotoxicidade5 Folha 2 Mg de clorofilina a 0,01% + Atlox AL-3273 4,60 52,3 0 a 0,0175% 0,05% de Na2EDTA + 0,0175% de Atlox AL- 6,90 28,5 0 3273 Mg de clorofilina a 0,01% + Na2EDTA a 0,56 94,2 0 0,05%, + Atlox AL-3273 a 0,0175% controle de água 9,64 - 0 1 Os tratamentos foram aplicados ~ 2 horas antes da inoculação com Cgm. 2 Números são médias de 4 repetições. 4 % de inibição calculado em relação ao controle não alterado.
5. Classificações de fitotoxicidade: 0 = planta saudável, sem danos; 3 = dano leve; 7 = dano grave; 10 = planta morta. Menos de 3 é considerado aceitável
[0144] Os protocolos para a inibição fotodinâmica (PDI) de A. solani e B. cinerea diferem no modo em que as esferas de micélio foram cultivadas. O tratamento com PDI em si e a avaliação são realizados na mesma forma.
[0145] O protocolo para o PDI de A. solani foi o seguinte (para os experimentos 2 e 5): - Cultivar A. solani em tomate-ágar por alguns dias. – Transferir partes do micélio em crescimento da borda de A. solani (não conídios) para meio líquido de tomate. - Incubar de um dia para o outro a 26 °C sob agitação constante. - Transferir os micélios cultivados (esferas de micélio, aproximadamente 2 mm de diâmetro) para placas de 24 cavidades.
- Adicionar 500 µl de PS à cavidade (PBS para controles de Co e apenas luz). - Incubar com agitação por 100 minutos. - Iluminar sob agitação por 120 minutos. - Transferir os micélios tratados para placas de tomate-ágar e incubar por uma semana à temperatura ambiente. - Avaliar por contagem de amostras mortas.
[0146] O protocolo para PDI de B. cinerea foi o seguinte (para os experimentos 3 e 4 descritos acima): - Cultivar B. cinerea em malte-peptona-ágar por alguns dias. - Transferir esporos de B. cinerea para meio líquido de malte-peptona. - Incubar por 2 a 3 dias a 26 °C sob agitação constante. - Transferir os micélios cultivados (esferas de micélio, aproximadamente 2 mm de diâmetro) para placas de 24 cavidades. - Adicionar 500 µl de PS à cavidade. - Incubar sob agitação durante 100 minutos no escuro. - Iluminar sob agitação por 120 minutos. - Transferir os micélios tratados para placas de malte-peptona-ágar e incubar por uma semana à temperatura ambiente. - Avaliar pela contagem de amostras mortas.
[0147] No que diz respeito aos testes de ensaio de E. Coli nos exemplos anteriores, o seguinte procedimento foi usado:
1. E. Coli K-12 foi inoculado em 5 ml de TSB e colocado em uma incubadora com agitação de um dia para o outro.
2.Diluir cultura em 500 ml de PBS (~ 10^8 UFC/ml) e colocada em incubadora de agitação durante 30 minutos a 37 °C. 3,15 ml de amostras criadas com o uso de 12 ml de cultura e uma mistura de tampão PBS e compostos de amostra.
4.Colocado sob lâmpadas LED por 2 horas (40 W/m2).
5. Amostras diluídas para 10-4 e controles de cultura diluídos para 10- 5 para plaqueamento através de diluições em série.
6,0,1 ml plaqueados de cada amostra em triplicado na base TSA (10- 3e 10-4 para amostras. 10-4 e 10-5 para controles).
7.Incubado de um dia para o outro a 37 °C.
8. As colônias foram contadas na manhã seguinte e registradas.
Claims (167)
1. Método para inibir o crescimento de um patógeno microbiano de uma planta caracterizado pelo fato de que compreende: aplicar à planta de uma combinação que compreende: um composto macrocíclico portador de nitrogênio que é um fotossensibilizador de oxigênio singleto selecionado do grupo que consiste em uma porfirina, uma porfirina reduzida e uma mistura dos mesmos; e um agente quelante para aumentar a permeabilidade do patógeno microbiano ao composto macrocíclico portador de nitrogênio; e expor a planta à luz para ativar o composto macrocíclico portador de nitrogênio e gerar espécies reativas de oxigênio singleto.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente quelante é fornecido em uma quantidade suficiente para aumentar inibição de crescimento de patógeno microbiano em comparação com o fotossensibilizador de oxigênio singleto sozinho.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o agente quelante e o composto macrocíclico portador de nitrogênio são fornecidos em quantidades que são sinergicamente eficazes para inibir o crescimento do patógeno microbiano.
4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a porfirina reduzida é selecionada do grupo que consiste em uma clorina, uma bacterioclorina, uma isobacterioclorina, um corrina, uma corfina e uma mistura dos mesmos.
5. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a porfirina reduzida é uma clorina.
6. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a clorina é clorofilina.
7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é complexado com um metal para formar um composto macrocíclico portador de nitrogênio metalizado, em que o metal é selecionado de modo que, em resposta à exposição à luz, o composto portador de nitrogênio metalizado gere espécies reativas de oxigênio singleto.
8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o metal de é selecionado do grupo que consiste em Mg, Zn, Pd, Al, Pt, Sn, Si e misturas dos mesmos.
9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é um composto macrocíclico portador de nitrogênio livre de metais que é selecionado de modo que, em resposta à exposição à luz, um composto portador de nitrogênio livre de metais gere espécies reativas de oxigênio singleto.
10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é um composto de ocorrência natural extraído.
11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é um composto sintético.
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos um grupo ácido carboxílico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos dois grupos ácido carboxílico ou sais agricolamente aceitáveis dos mesmos.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos um grupo amino ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos dois grupos aminoácidos ou sais agricolamente aceitáveis dos mesmos.
16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o agente quelante compreende um composto de ácido amino carboxílico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
17. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o composto de ácido amino carboxílico compreende um composto de ácido amino policarboxílico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o composto de ácido amino policarboxílico é selecionado do grupo que consiste em ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido etilenodiamina-N,N’-disuccínico (EDDS) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido iminodissuccínico (IDS) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, e misturas dos mesmos.
19. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o ácido amino policarboxílico ou sal do mesmo compreende um ácido poliaspártico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que o agente quelante é metalizado.
21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que o agente quelante é isento de metais.
22. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que a combinação adicional compreende um agente tensoativo.
23. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que o tensoativo é selecionado do grupo que consiste em um álcool etoxilado, um tensoativo polimérico, um éster de ácido graxo, um polietileno glicol, um álcool alquílico etoxilado, um monoglicerídeo, um alquil monoglicerídeo e uma mistura dos mesmos.
24. Método, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, caracterizado pelo fato de que o tensoativo compreende um polietileno glicol de Fórmula: R1 O (CH2CH2O)f R2 , em que R1 = H, CH2=CH-CH2 ou COCH3; R2 = H, CH2=CH-CH2 ou COCH3; e f ≥
1.
25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que a combinação adicional compreende um óleo selecionado do grupo que consiste em um óleo mineral, um óleo vegetal e uma mistura dos mesmos.
26. Método, de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que o óleo compreende um óleo vegetal selecionado do grupo que consiste em óleo de coco, óleo de canola, óleo de soja, óleo de colza, óleo de girassol, óleo de cártamo, óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de palmeira, óleo de farelo de arroz e misturas dos mesmos.
27. Método, de acordo com a reivindicação 25 ou 26, caracterizado pelo fato de que o óleo compreende um óleo mineral selecionado do grupo que consiste em um óleo parafínico, um óleo parafínico ramificado, óleo naftênico, um óleo aromático e ‘misturas dos mesmos.
28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 27, caracterizado pelo fato de que o óleo compreende uma poli-alfa-olefina (PAO).
29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 28, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o óleo são aplicados em uma proporção relativa entre cerca de 50:1 e cerca de 1:5.000 em peso.
30. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 29, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é fornecido em uma concentração entre cerca de 5 µM e cerca de 10 mM.
31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante são aplicados em uma proporção relativa entre cerca de 50:1 e cerca de 1:1.000 em peso.
32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante são aplicados em uma proporção relativa entre cerca de 20:1 e cerca de 1:500 em peso.
33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante são aplicados em uma proporção relativa entre cerca de 10:1 e cerca de 1:100 em peso.
34. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante são aplicados em uma proporção relativa entre cerca de 10:1 e cerca de 1:50 em peso.
35. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 34, caracterizado pelo fato de que o agente quelante é fornecido em uma concentração entre cerca de 5 µM e cerca de 5.000 µM.
36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante são aplicados simultaneamente à planta.
37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 35, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante são aplicados sequencialmente à planta.
38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 37, caracterizado pelo fato de que a aplicação da combinação para as plantas compreende aplicar uma composição que compreende os componentes da combinação, à planta.
39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 38, caracterizado pelo fato de que a exposição da planta à luz compreende expor a planta à luz solar natural.
40. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 38, caracterizado pelo fato de que a exposição da planta à luz compreende expor a planta à luz artificial.
41. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 40, caracterizado pelo fato de que a combinação é aplicada à planta por pelo menos um dentre encharcamento de solo, pipetagem, rega, pulverização, nebulização, aspersão, derramamento.
42. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que a pulverização compreende pelo menos um dentre pulverização foliar e a pulverização na base da planta.
43. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 42, caracterizado pelo fato de que o patógeno microbiano compreende um patógeno fúngico.
44. Método, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que o patógeno fúngico compreende pelo menos um dentre Botrytis cinereal, Alternaria solani e Sclerotinia homoeocarpa.
45. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 42, caracterizado pelo fato de que o patógeno microbiano compreende um patógeno bacteriano.
46. Método, de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que o patógeno bacteriano compreende bactérias Gram negativas.
47. Método, de acordo com a reivindicação 45 ou 46, caracterizado pelo fato de que o patógeno bacteriano compreende pelo menos um dentre Erwinia amylovora, Xanthomonas axonopodis e E. coli.
48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 47, caracterizado pelo fato de que a planta é uma planta de colheita não lenhosa, uma planta lenhosa ou uma relva.
49. Método, de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que a planta é uma planta lenhosa.
50. Método, de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que a planta lenhosa é uma árvore.
51. Composição para inibição de crescimento de um patógeno microbiano de uma planta caracterizada pelo fato de que compreende: um composto macrocíclico portador de nitrogênio que é um fotossensibilizador de oxigênio singleto selecionado do grupo que consiste em uma porfirina, uma porfirina reduzida e uma mistura dos mesmos; um agente quelante para aumentar a permeabilidade do patógeno microbiano para o composto macrocíclico portador de nitrogênio; e um fluido carreador, em que após a aplicação da composição à planta e expor a planta à luz, o composto macrocíclico portador de nitrogênio é ativado e gera espécies reativas de oxigênio singleto.
52. Composição, de acordo com a reivindicação 51, caracterizada pelo fato de que o agente quelante é fornecido em uma quantidade suficiente para aumentar inibição de crescimento de patógeno microbiano em comparação com o fotossensibilizador de oxigênio singleto sozinho.
53. Composição, de acordo com a reivindicação 51 ou 52, caracterizada pelo fato de que o agente quelante e o composto macrocíclico portador de nitrogênio são fornecidos em quantidades que são sinergicamente eficazes para inibir o crescimento do patógeno microbiano.
54. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 53, caracterizada pelo fato de que a porfirina reduzida é selecionada do grupo que consiste em uma clorina, uma bacterioclorina, uma isobacterioclorina, um corrina, um corfina e uma mistura dos mesmos.
55. Composição, de acordo com a reivindicação 54, caracterizada pelo fato de que a porfirina reduzida é uma clorina.
56. Composição, de acordo com a reivindicação 55, caracterizada pelo fato de que a clorina é clorofilina.
57. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 56, caracterizada pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é complexado com um metal da formar um composto macrocíclico portador de nitrogênio metalizado, em que o metal é selecionado de modo que, em resposta à exposição à luz, o composto portador de nitrogênio metalizado gere espécies reativas de oxigênio singleto.
58. Composição, de acordo com a reivindicação 57, caracterizada pelo fato de que o metal é selecionado do grupo que consiste em Mg, Zn, Pd, Al, Pt, Sn, Si e misturas dos mesmos.
59. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 56, caracterizada pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é um composto macrocíclico portador de nitrogênio livre de metais que é selecionado de modo que, em resposta à exposição à luz, o composto portador de nitrogênio livre de metais gere espécies reativas de oxigênio singleto.
60. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 59, caracterizada pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é um composto de ocorrência natural extraído.
61. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 59, caracterizada pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é um composto sintético.
62. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 61, caracterizada pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos um grupo ácido carboxílico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
63. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 62, caracterizada pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos dois grupos ácido carboxílico ou sais agricolamente aceitáveis dos mesmos.
64. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 63, caracterizada pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos um grupo amino ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
65. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 64, caracterizada pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos dois grupos aminoácidos ou sais agricolamente aceitáveis dos mesmos.
66. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 65, caracterizada pelo fato de que o agente quelante compreende um composto de ácido amino carboxílico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
67. Composição, de acordo com a reivindicação 66, caracterizada pelo fato de que o composto de ácido amino carboxílico compreende um composto de ácido amino policarboxílico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
68. Composição, de acordo com a reivindicação 67, caracterizada pelo fato de que o composto de ácido amino policarboxílico é selecionado do grupo que consiste em ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido etilenodiamina-N,N’-disuccínico (EDDS) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido iminodissuccínico (IDS) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, e misturas dos mesmos.
69. Composição, de acordo com a reivindicação 67, caracterizada pelo fato de que o ácido amino policarboxílico ou sal do mesmo compreende um ácido poliaspártico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
70. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 61 a 69, caracterizada pelo fato de que o agente quelante é metalizado.
71. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 61 a 69, caracterizada pelo fato de que o agente quelante é isento de metais.
72. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 71, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um tensoativo.
73. Composição, de acordo com a reivindicação 72, caracterizada pelo fato de que o tensoativo é selecionado do grupo que consiste em um álcool etoxilado, um tensoativo polimérico, um éster de ácido graxo, um polietileno glicol, um álcool alquílico etoxilado, um monoglicerídeo, um alquil monoglicerídeo e uma mistura dos mesmos.
74. Composição, de acordo com a reivindicação 72 ou 73, caracterizada pelo fato de que o tensoativo compreende um polietileno glicol de Fórmula: R1 O (CH2CH2O)f R2 , em que R1 = H, CH2=CH-CH2 ou COCH3; R2 = H, CH2=CH-CH2 ou COCH3; e f ≥
1.
75. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 74, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um óleo selecionado do grupo que consiste em um óleo mineral, um óleo vegetal e uma mistura dos mesmos.
76. Composição, de acordo com a reivindicação 75, caracterizada pelo fato de que o óleo compreende um óleo vegetal selecionado do grupo que consiste em óleo de coco, óleo de canola, óleo de soja, óleo de colza, óleo de girassol, óleo de cártamo, óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de palmeira, óleo de farelo de arroz e misturas dos mesmos.
77. Composição, de acordo com a reivindicação 75 ou 76, caracterizada pelo fato de que o óleo compreende um óleo mineral selecionado do grupo que consiste em um óleo parafínico, um óleo parafínico ramificado, óleo naftênico, um óleo aromático e misturas dos mesmos.
78. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 77, caracterizada pelo fato de que o óleo compreende uma poli-alfa-olefina (PAO).
79. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 78, caracterizada pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o óleo estão presentes em uma proporção relativa entre cerca de 50:1 e cerca de 1:5.000 em peso.
80. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 75 a 79, caracterizada pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio tem uma concentração entre cerca de 5 µM e cerca de 10 mM.
81. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 80, caracterizada pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante estão presentes em uma proporção relativa entre cerca de 50:1 e cerca de 1:1.000 em peso.
82. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 80, caracterizada pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante estão presentes em uma proporção relativa entre cerca de 20:1 e cerca de 1:500 em peso.
83. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 80, caracterizada pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante estão presentes em uma proporção relativa entre cerca de 10:1 e cerca de 1:100 em peso.
84. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 80, caracterizada pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o agente quelante estão presentes em uma proporção relativa entre cerca de 10:1 e cerca de 1:50 em peso.
85. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 84, caracterizada pelo fato de que o agente quelante tem uma concentração entre cerca de 5 µM e cerca de 5.000 µM.
86. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 85, caracterizada pelo fato de que o fluido carreador compreende água.
87. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 86, caracterizada pelo fato de que o fluido carreador compreende uma emulsão de óleo em água.
88. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 87, caracterizada pelo fato de que para aplicação à planta por pelo menos um dentre encharcamento de solo, pipetagem, rega, pulverização, nebulização, aspersão, derramamento.
89. Composição, de acordo com a reivindicação 88, caracterizado pelo fato de que a pulverização compreende pelo menos uma dentre pulverização foliar e a pulverização na base da planta.
90. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 89, caracterizada pelo fato de que é para inibir o crescimento de um patógeno fúngico.
91. Composição, de acordo com a reivindicação 90, caracterizada pelo fato de que o patógeno fúngico compreende pelo menos um dentre Botrytis cinereal, Alternaria solani e Sclerotinia homoeocarpa.
92. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 89, caracterizada pelo fato de que é para inibir o crescimento de uma bactéria patógeno.
93. Composição, de acordo com a reivindicação 92, caracterizada pelo fato de que o patógeno bacteriano compreende bactérias Gram negativas.
94. Composição, de acordo com a reivindicação 92 ou 93, caracterizada pelo fato de que o patógeno bacteriano compreende pelo menos um dentre Erwinia amylovora, Xanthomonas axonopodis e E. coli.
95. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 51 a 94, caracterizada pelo fato de que a planta é uma planta de colheita não lenhosa, uma planta lenhosa ou uma relva.
96. Composição, de acordo com a reivindicação 95, caracterizada pelo fato de que a planta é uma planta lenhosa
97. Composição, de acordo com a reivindicação 96, caracterizada pelo fato de que a planta lenhosa é uma árvore.
98. Composição, de acordo com a reivindicação 96, caracterizada pelo fato de que a planta lenhosa é uma árvore frutífera.
99. Composição, de acordo com a reivindicação 95, caracterizada pelo fato de que a planta é uma relva.
100. Composição, de acordo com a reivindicação 95, caracterizada pelo fato de que a planta é uma planta de colheita não lenhosa.
101. Método para inibir o crescimento de um patógeno fúngico de uma planta caracterizado pelo fato de que compreende: aplicar à planta um composto macrocíclico portador de nitrogênio que é um fotossensibilizador de oxigênio singleto selecionado do grupo que consiste em uma porfirina, uma porfirina reduzida e uma mistura dos mesmos; e expor a planta à luz para ativar o composto macrocíclico portador de nitrogênio e gerar espécies reativas de oxigênio singleto.
102. Método, de acordo com a reivindicação 101, caracterizado pelo fato de que a porfirina reduzida é selecionada do grupo que consiste em uma porfirina, uma clorina, uma bacterioclorina, uma isobacterioclorina, um corrina, um corfina e uma mistura dos mesmos.
103. Método, de acordo com a reivindicação 102, caracterizado pelo fato de que a porfirina reduzida é uma clorina.
104. Método, de acordo com a reivindicação 103, caracterizado pelo fato de que a clorina é clorofilina.
105. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 104, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é complexado com um metal da formar um composto macrocíclico portador de nitrogênio metalizado, em que o metal de ser selecionado de modo que, em resposta à exposição à luz, o composto portador de nitrogênio metalizado gere espécies reativas de oxigênio singleto.
106. Método, de acordo com a reivindicação 105, caracterizado pelo fato de que o metal é selecionado do grupo que consiste em Mg, Zn, Pd, Al, Pt, Sn, Si e misturas dos mesmos.
107. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 104, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é um composto macrocíclico portador de nitrogênio livre de metais que é selecionado de modo que, em resposta à exposição à luz, o composto portador de nitrogênio livre de metais gere espécies reativas de oxigênio singleto.
108. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 107, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é um composto de ocorrência natural extraído.
109. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 107, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é um composto sintético.
110. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 109, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente aplicar à planta um tensoativo.
111. Método, de acordo com a reivindicação 110, caracterizado pelo fato de que o tensoativo é selecionado do grupo que consiste em um álcool etoxilado, um tensoativo polimérico, um éster de ácido graxo, um polietileno glicol, um álcool alquílico etoxilado, um monoglicerídeo, um alquil monoglicerídeo e uma mistura dos mesmos.
112. Método, de acordo com a reivindicação 110 ou 111, caracterizado pelo fato de que o tensoativo compreende um polietileno glicol de fórmula: R1 O (CH2CH2O)f R2 , em que R1 = H, CH2=CH-CH2 ou COCH3; R2 = H, CH2=CH-CH2 ou COCH3; e f ≥
1.
113. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 112, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente aplicar à planta um óleo selecionado do grupo que consiste em um óleo mineral, um óleo vegetal e uma mistura dos mesmos.
114. Método, de acordo com a reivindicação 113, caracterizado pelo fato de que em que o óleo compreende um óleo vegetal selecionado do grupo que consiste óleo de coco, óleo de canola, óleo de soja, óleo de colza, óleo de girassol, óleo de cártamo, óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de palmeira, óleo de farelo de arroz e misturas dos mesmos.
115. Método, de acordo com a reivindicação 113 ou 114, caracterizado pelo fato de que o óleo compreende um óleo mineral selecionado do grupo que consiste em um óleo parafínico, um óleo parafínico ramificado, óleo naftênico, um óleo aromático e misturas dos mesmos.
116. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 113 a 115, caracterizado pelo fato de que o óleo compreende uma poli-alfa-olefina (PAO).
117. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 113 a 116, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio e o óleo são aplicados em uma proporção relativa entre cerca de 50:1 e cerca de 1:5.000 em peso.
118. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 117, caracterizado pelo fato de que o composto macrocíclico portador de nitrogênio é fornecido em uma concentração entre cerca de 5 µM e cerca de 10 mM.
119. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 118, caracterizado pelo fato de que a exposição da planta de luz compreende expor a planta à luz solar natural.
120. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 118, caracterizado pelo fato de que a exposição da planta de luz compreende expor a planta à luz artificial.
121. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 120, caracterizado pelo fato de que a pulverização compreende pelo menos uma dentre pulverização foliar e a pulverização na base da planta.
122. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 121, caracterizado pelo fato de que o patógeno fúngico compreende pelo menos um dentre Botrytis cinereal, Alternaria solani e Sclerotinia homoeocarpa.
123. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 101 a 122, caracterizado pelo fato de que a planta é uma planta de colheita não lenhosa, uma planta lenhosa ou uma relva.
124. Método, de acordo com a reivindicação 123, caracterizado pelo fato de que a planta é uma planta lenhosa.
125. Método, de acordo com a reivindicação 124, caracterizado pelo fato de que a planta lenhosa é uma árvore.
126. Método para inibir o crescimento de um patógeno microbiano de uma planta caracterizado pelo fato de que compreende: aplicar à planta de uma combinação que compreende: um composto diaril-heptanoide fotossensível que é um fotosensibilizador de oxigênio singleto; e um agente quelante para aumentar a permeabilidade do patógeno microbiano para o composto de diaril-heptanoide fotossensível; e expor a planta à luz para ativar o composto de diaril-heptanoide fotossensível e gerar oxigênio singleto reativo.
127. Método, de acordo com a reivindicação 126, caracterizado pelo fato de que o composto fotossensibilizador é um composto de diaril-heptanoide linear.
128. Método, de acordo com a reivindicação 127, caracterizado pelo fato de que o composto de diaril-heptanoide fotossensível compreende curcumina.
129. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 128, caracterizado pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos um grupo ácido carboxílico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
130. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 129, caracterizado pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos dois grupos ácido carboxílico ou sais agricolamente aceitáveis dos mesmos.
131. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 130, caracterizado pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos um grupo amino ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
132. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 131, caracterizado pelo fato de que o agente quelante compreende pelo menos dois grupos aminoácidos ou sais agricolamente aceitáveis dos mesmos.
133. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 132, caracterizado pelo fato de que o agente quelante compreende um composto de ácido aminocarboxílico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
134. Método, de acordo com a reivindicação 133, caracterizado pelo fato de que o composto de ácido aminocarboxílico compreende um composto de ácido amino policarboxílico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
135. Método, de acordo com a reivindicação 134, caracterizado pelo fato de que o composto de ácido amino policarboxílico é selecionado do grupo que consiste em ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido etilenodiamina-N,N’-disuccínico (EDDS) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, ácido iminodissuccínico (IDS) ou um sal agricolamente aceitável do mesmo, e misturas dos mesmos.
136. Método, de acordo com a reivindicação 133, caracterizado pelo fato de que o ácido amino policarboxílico ou sal do mesmo compreende um ácido poliaspártico ou um sal agricolamente aceitável do mesmo.
137. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 136, caracterizado pelo fato de que o agente quelante é metalizado.
138. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 136, caracterizado pelo fato de que o agente quelante é isento de metais.
139. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 138, caracterizado pelo fato de que a combinação adicional compreende um agente tensoativo.
140. Método, de acordo com a reivindicação 139, caracterizado pelo fato de que o tensoativo é selecionado do grupo que consiste em um álcool etoxilado, um tensoativo polimérico, um éster de ácido graxo, um polietileno glicol, um álcool alquílico etoxilado, um monoglicerídeo, um alquil monoglicerídeo e uma mistura dos mesmos.
141. Método, de acordo com a reivindicação 139 ou 140, caracterizado pelo fato de que o tensoativo compreende um polietileno glicol de fórmula: R1 O (CH2CH2O)f R2 , em que R1 = H, CH2=CH-CH2 ou COCH3; R2=H, CH2=CH-CH2 ou COCH3; e f ≥ 1.
142. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 174, caracterizado pelo fato de que a combinação adicional compreende um óleo selecionado do grupo que consiste em um óleo mineral, um óleo vegetal e uma mistura dos mesmos.
143. Método, de acordo com a reivindicação 142, caracterizado pelo fato de que o óleo compreende um óleo vegetal selecionado do grupo que consiste em óleo de coco, óleo de canola, óleo de soja, óleo colza, óleo girassol, óleo cártamo, óleo amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de palmeira, óleo de farelo de arroz e misturas dos mesmos.
144. Método, de acordo com a reivindicação 142 ou 143, caracterizado pelo fato de que o óleo compreende um óleo mineral selecionado do grupo que consiste em um óleo parafínico, um óleo parafínico ramificado, óleo naftênico, um óleo aromático e misturas dos mesmos.
145. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 142 a 144, caracterizado pelo fato de que o óleo compreende uma poli-alfa-olefina (PAO).
146. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 145, caracterizado pelo fato de que o composto de diaril-heptanoide fotossensível e o óleo são aplicados em uma proporção relativa entre cerca de 50:1 e cerca de 1:5.000 em peso.
147. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 146, caracterizado pelo fato de que o composto de diaril-heptanoide fotossensível é fornecido em uma concentração entre cerca de 5 µM e cerca de 10 mM.
148. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 147, caracterizado pelo fato de que o composto de diaril-heptanoide fotossensível e o agente quelante são aplicados em uma proporção relativa entre cerca de 50: 1 e cerca de 1:1.000 em peso.
149. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 147, caracterizado pelo fato de que o composto de diaril-heptanoide fotossensível e o agente quelante são aplicados em uma proporção relativa entre cerca de 20:1 e cerca de 1:500 em peso.
150. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 147, caracterizado pelo fato de que o composto de diaril-heptanoide fotossensível e o agente quelante são aplicados em uma proporção relativa entre cerca de 10:1 e cerca de 1:100 em peso.
151. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 147, caracterizado pelo fato de que o composto de diaril-heptanoide fotossensível e o agente quelante são aplicados em uma proporção relativa entre cerca de 10:1 e cerca de 1:50 em peso.
152. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 151, caracterizado pelo fato de que o agente quelante é fornecido em uma concentração entre cerca de 5 µM e cerca de 5.000 µM.
153. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 152, caracterizado pelo fato de que o composto de diaril-heptanoide fotossensível e o agente quelante são aplicados simultaneamente à planta.
154. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 152, caracterizado pelo fato de que o composto de diaril-heptanoide fotossensível e o agente quelante são aplicados sequencialmente à planta.
155. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 154, caracterizado pelo fato de que a aplicação da combinação às plantas compreende aplicar uma composição que compreende os componentes da combinação, à planta.
156. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 155, caracterizado pelo fato de que a exposição da planta de luz compreende expor a planta à luz solar natural.
157. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 155, caracterizado pelo fato de que a exposição da planta de luz compreende expor a planta à luz artificial.
158. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 157, caracterizado pelo fato de que a combinação é aplicada à planta por pelo menos uma dentre encharcamento solo, pipetagem, rega, pulverização, nebulização, aspersão, derramamento.
159. Método, de acordo com a reivindicação 158, caracterizado pelo fato de que a pulverização compreende pelo menos uma dentre pulverização foliar e a pulverização na base da planta.
160. Método, de acordo com a reivindicação 126 a 159, caracterizado pelo fato de que o patógeno microbiano compreende um patógeno fúngico.
161. Método, de acordo com a reivindicação 160, caracterizado pelo fato de que o patógeno fúngico compreende pelo menos um dentre Botrytis cinereal, Alternaria solani e Sclerotinia homoeocarpa.
162. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 159, caracterizado pelo fato de que o patógeno microbiano compreende um patógeno bacteriano.
163. Método, de acordo com a reivindicação 162, caracterizado pelo fato de que o patógeno bacteriano compreende bactérias Gram negativas.
164. Método, de acordo com a reivindicação 163, caracterizado pelo fato de que o patógeno bacteriano compreende pelo menos um dentre Erwinia amylovora, Xanthomonas axonopodis e E. coli.
165. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 126 a 164, caracterizado pelo fato de que a planta é uma planta de colheita não lenhosa, uma planta lenhosa ou uma relva.
166. Método, de acordo com a reivindicação 165, caracterizado pelo fato de que a planta é uma planta lenhosa.
167. Método, de acordo com a reivindicação 165, caracterizado pelo fato de que a planta lenhosa é uma árvore.
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