CN111194166A - 植物中微生物病原体的光动力学抑制 - Google Patents
植物中微生物病原体的光动力学抑制 Download PDFInfo
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Abstract
提供了一种抑制植物的微生物病原体的生长的方法。该方法包括以下步骤:将包含含氮大环化合物和螯合剂的组合施用于植物,所述含氮大环化合物是选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组的单线态氧光敏剂,所述螯合剂增加微生物病原体对含氮大环化合物的通透性;以及使植物暴露于光以激活含氮大环化合物并产生活性单线态氧。
Description
技术领域
技术领域通常涉及使用包含光敏剂化合物的混合物和组合物对植物中的微生物病原体进行光动力学抑制。更特别地,技术领域涉及用于光动力学抑制植物中的微生物病原体例如真菌病原体或细菌病原体的含氮大环化合物及其组合物。含氮大环化合物可以是卟啉化合物或还原卟啉化合物。
背景技术
微生物病原体的光动力学抑制包括将光敏剂暴露于光,以产生活性氧(ROS),例如单线态氧,这会对微生物病原体产生有害影响。现有的光动力学抑制技术和应用具有各种缺点。
发明内容
本文描述了用于光动力学抑制植物上的微生物病原体的多种组合物和方法。细菌病原体或真菌病原体的光动力学抑制可以通过向植物施用光敏剂化合物和增强剂化合物来进行,所述增强剂化合物可以是螯合剂。可以将光敏剂化合物和螯合剂与其他任选的组分例如递送流体、溶剂、表面活性剂和粘着剂组合,以形成用于施用于植物的抗微生物组合物。与单独使用的每种化合物相比,通过光敏剂化合物和增强剂化合物的组合可以改善对植物上的微生物病原体的光动力学抑制。增强剂化合物的非限制性实例可以例如包括乙二胺四乙酸(EDTA)、聚天冬氨酸、乙二胺-N,N'-二琥珀酸(EDDS)、亚氨基二琥珀酸(IDS,也称为(N-1,2-二羧乙基)-D,L-天冬氨酸)、N,N-二羧甲基谷氨酸(GLDA)、或其农业上可接受的盐。
一方面,提供了一种用于抑制植物的微生物病原体的生长的方法,包括:将包含含氮大环化合物和螯合剂的组合施用于植物,所述含氮大环化合物是选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组的单线态氧光敏剂,所述螯合剂增加微生物病原体对含氮大环化合物的通透性;以及使植物暴露于光,以激活含氮大环化合物并产生活性单线态氧。
在另一方面,提供了一种用于抑制植物的微生物病原体的生长的组合物,所述组合物包含:含氮大环化合物,其是选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组的单线态氧光敏剂;螯合剂,其增加微生物病原体对含氮大环化合物的通透性;和载液,其中在将组合物施用于植物并使植物暴露于光之后,含氮大环化合物被激活并产生活性单线态氧。
在另一方面,提供了一种用于抑制植物的真菌病原体的生长的方法,包括:将含氮大环化合物施用于植物,所述含氮大环化合物是选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组的单线态氧光敏剂;以及使植物暴露于光,以激活含氮大环化合物并产生活性单线态氧。
在另一方面,提供了一种用于抑制植物的微生物病原体的生长的方法,包括:将包含光敏的二芳基庚烷化合物和螯合剂的组合施用于植物,所述光敏的二芳基庚烷化合物是单线态氧光敏剂,所述螯合剂增加微生物病原体对光敏的二芳基庚烷化合物的通透性;以及使植物暴露于光,以激活光敏的二芳基庚烷化合物并产生活性单线态氧。
光敏剂化合物可以是含氮大环化合物,例如卟啉或还原卟啉化合物,其可以是金属化的或未被金属化。提供金属化的光敏化合物,例如叶绿酸镁,以便响应于光暴露而产生可用于抑制微生物生长的活性氧(ROS)。光敏剂化合物可以包括其他化合物,例如二芳基庚烷化合物。
另外,可以通过以下步骤进行真菌病原体的光动力学抑制:将卟啉或还原卟啉光敏剂化合物施用于植物,并使植物暴露于光,以激活光敏剂化合物并产生可用于抑制真菌生长的活性氧(ROS)。
可以处理感染了多种微生物病原体的植物。可以向其施用抗微生物组合物的真菌病原体包括茄链格孢菌(Alternaria solani)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、核盘菌(Sclerotinia homoeocarpa)等。可以向其施用抗微生物组合物的细菌病原体包括革兰氏阴性细菌,例如解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovara)。
本说明书提供了用于光动力学抑制/对抗植物上的微生物生长例如真菌病原体生长和/或细菌病原体生长的方法。该方法可以包括向植物施用:卟啉或还原卟啉光敏剂化合物;和乙二胺四乙酸(EDTA)或其农业上可接受的盐、聚天冬氨酸或其农业上可接受的盐、乙二胺-N,N'-二琥珀酸(EDDS)或其农业上可接受的盐、亚氨基二琥珀酸(IDS)或其农业上可接受的盐、以及L-谷氨酸N,N-二乙酸(GLDA)或其农业上可接受的盐中的至少一种;以及使植物暴露于光以激活卟啉或还原卟啉光敏剂化合物。
还提供了一种用于植物上的抗微生物组合物,例如抗真菌组合物和/或抗细菌组合物。在一些实施方案中,所述组合物可以包含:卟啉或还原卟啉光敏剂化合物;和乙二胺四乙酸(EDTA)或其农业上可接受的盐、聚天冬氨酸或其农业上可接受的盐、乙二胺-N,N'-二琥珀酸(EDDS)或其农业上可接受的盐、亚氨基二琥珀酸(IDS)或其农业上可接受的盐、以及L-谷氨酸N,N-二乙酸(GLDA)或其农业上可接受的盐中的至少一种。在一些实施方案中,该组合物可以包含光敏的含氮大环化合物和增强剂。在一些实施方案中,组合物可以包含卟啉或还原卟啉光敏剂化合物,其响应于光暴露而产生可用于抑制真菌生长的活性氧(ROS)。在一些实施方案中,该组合物可以包含光敏的姜黄素化合物和螯合剂,用于光动力学抑制植物上的微生物病原体。
本文还描述了卟啉或还原卟啉光敏剂化合物与乙二胺四乙酸(EDTA)或其农业上可接受的盐、聚天冬氨酸或其农业上可接受的盐、乙二胺-N,N'-二琥珀酸(EDDS)或其农业上可接受的盐、亚氨基二琥珀酸(IDS)或其农业上可接受的盐、以及L-谷氨酸N,N-二乙酸(GLDA)或其农业上可接受的盐中的至少一种组合用于在植物上光动力学抑制微生物病原体例如光动力学抑制真菌病原体和/或光动力学抑制细菌病原体的用途。
在一个方面,用于光动力学抑制植物上的真菌生长的方法可以包括:将光敏的含氮大环化合物和增强剂化合物施用于所述植物;以及使所述植物暴露于光,以激活光敏的含氮大环化合物并产生活性单线态氧;其中,所述增强剂化合物以与单独的光敏的含氮大环化合物相比足以增强对真菌的抑制的量提供。
在另一方面,用于光动力学抑制植物上的微生物病原体生长的方法可以包括:将光敏剂化合物和螯合剂施用于所述植物;以及使所述植物暴露于光,以激活光敏剂化合物并产生活性氧(ROS);其中,螯合剂以与单独的光敏剂化合物相比足以增强对微生物的抑制的量提供。
在又一方面,用于光动力学抑制植物上的真菌生长的方法可以包括将卟啉或还原卟啉光敏剂化合物施用于该植物;以及使植物暴露于光,以激活光敏剂化合物并产生可用于抑制真菌生长的活性氧(ROS)。
还提供了光动力学抑制植物上的葡萄孢属(Botrytis)、链格孢属(Alternaria)或核盘霉属(Sclerotinia)的真菌病原体的真菌生长的方法。该方法可以包括:将光敏剂化合物施用于植物;以及使植物暴露于光,以激活光敏剂化合物并产生抑制真菌活性的活性氧(ROS)。
在另一方面,提供了一种用于光动力学抑制植物上的微生物病原体生长的方法。该方法可以包括将光敏剂化合物和螯合剂施用于植物,该光敏剂化合物包括二芳基庚烷化合物;以及使植物暴露于光,以激活光敏剂化合物并产生活性氧(ROS);其中,螯合剂以与单独的光敏剂化合物相比足以增强对微生物的抑制的量提供。
光动力学抑制技术可以用于可受微生物病原体影响的多种类型的植物。例如,可以处理被微生物病原体感染的作物、草坪植物,树木和其他植物。
具体实施方式
一些微生物病原体,例如革兰氏阴性细菌和某些类型的真菌,具有难以通透的细胞膜。更特别地,这些微生物病原体有时具有不可通透的外细胞膜,该膜含有内毒素并且可以阻断小分子例如抗生素、染料和清洁剂,从而保护敏感的内膜和细胞壁。因此,使用光动力学疗法来抑制植物中某些微生物病原体的生长可能具有挑战性,因为光敏剂化合物往往无法很好的通透至细胞壁内。
可以通过施用光敏剂化合物和增强剂化合物来实现光动力学抑制植物上存在的微生物病原体。光敏剂化合物通过产生活性氧(ROS)与光发生反应,而增强剂化合物则通过例如增加微生物病原体的外膜对光敏剂化合物的通透性来增加对微生物病原体生长的抑制的总体作用。
在一个实施方案中,光敏剂化合物是卟啉或还原卟啉化合物,例如二氢卟酚化合物,而增强剂是螯合剂。实例性的卟啉化合物是叶绿酸镁,实例性的二氢卟酚化合物是二氢卟酚e6,以及实例性的螯合剂是乙二胺四乙酸(EDTA)或其农业上可接受的盐。
在一些情况下,发现与单独使用光敏剂化合物和螯合剂相比,光敏剂化合物和螯合剂的组合使用在光动力学处理后提供了对微生物病原体生长的增强的抑制。在本说明书中提供了有关光敏剂化合物、螯合剂和其他添加剂的更多细节。
应当理解的是,当在整个说明书和权利要求书中描述光敏剂化合物、螯合剂和任何其他任选的其他添加剂或助剂的组合时,可以使用农业上有效量的组合中的每一种组分,以便提供抗微生物活性,同时对寄主植物产生最小的植物毒性或无植物毒性。
光敏剂化合物
如上所述,光敏剂化合物可以用于实现光动力学抑制植物上存在的微生物病原体。光敏剂化合物通过产生活性氧(ROS)与光发生反应。
根据产生的ROS的类型,光敏剂可以分为两类,即I型光敏剂和II型光敏剂。一方面,I型光敏剂当在氧气存在下以适当的波长被激发时通过从底物吸取或转移电子而形成短寿命的自由基。另一方面,II型光敏剂形成称为“单线态氧”的高活性氧态,在本文中也称为“活性单线态氧”。单线态氧通常寿命较长,并且作用半径较大。
应该理解,光敏剂化合物可以是金属化的或非金属化的。当金属化时(例如与金属络合的多种含氮大环化合物可能就是这种情况),可以根据响应于光暴露的相应的ROS类型和可用性(I型或II型)来选择金属。例如,当将二氢卟酚光敏剂化合物用铜金属化时,例如由于半衰期非常短,所产生的ROS(I型)往往具有较低的用于微生物的抑制的可用性。相反,当将相同的光敏剂化合物用其他金属(例如镁)金属化时,所产生的ROS具有较高的用于微生物的抑制的可用性。因此,当使用金属化的光敏剂化合物时,可以选择金属以获得II型光敏剂,从而提供增强的ROS可用性,进而可以促进对微生物生长的抑制。
应当理解,如本文所用,术语“单线态氧光敏剂”是指当被光激发时产生活性单线态氧的化合物。换句话说,该术语是指其中以上定义的II型过程与I型过程相比占优势的光敏剂。
在一些实施方案中,光敏剂化合物为光敏的含氮大环化合物,其可以包含连接在一起的四个含氮杂环。在一些实施方案中,含氮杂环选自由吡咯和吡咯啉组成的组,并且通过次甲基(即,=CH-基团)连接在一起以形成四吡咯。含氮大环化合物可以包括例如卟啉化合物(通过次甲基连接在一起的四个吡咯基团)、二氢卟酚化合物(通过次甲基连接在一起的三个吡咯基团和一个吡咯啉基团)、细菌卟吩(bacteriochlorin)化合物或异菌卟吩(isobacteriochlorin)化合物(通过次甲基连接在一起的两个吡咯基团和两个吡咯啉基团)、或异卟啉(例如特沙弗林(texaphrin)或亚卟啉)、或其具有杂环芳环核或部分芳环核(即,在环的整个圆周上并非都是芳族的环核)的功能等同物,或多吡咯化合物(例如硼-二吡咯亚甲基)。还应该理解,术语“含氮大环化合物”可以是本文列出的化合物之一,或者可以是本文列出的化合物的组合。因此,含氮大环化合物可以包括卟啉、还原卟啉或其混合物。这种含氮大环化合物也可以称为“多吡咯大环化合物”(例如四吡咯大环化合物)。
应该理解的是,如本文所用,术语“还原卟啉”是指由二氢卟酚、细菌卟吩、异菌卟吩、以及其他类型的还原卟啉如咕啉和可吩(corphin)组成的组。应该理解的是,含氮大环化合物可以是金属大环复合体(例如镁-卟啉)或非金属大环(例如二氢卟酚E6、原卟啉IX或四苯基卟啉)。含氮大环化合物可以是提取的天然存在的化合物或合成的化合物。
在其中卟啉或还原卟啉化合物被金属化的实施方案中,可以选择金属,使得金属化的含氮大环化合物是产生活性单线态氧的II型光敏剂(或单线态氧光敏剂)。例如,在二氢卟酚的情况下,能够通过形成II型光敏剂产生活性单线态氧的金属的非限制性实例是Mg、Zn、Pd、Al、Pt、Sn或Si。
应当理解,选择不能形成II型光敏剂的金属通常会导致对微生物病原体生长的抑制大大降低,这至少是因为不产生或产生较少的活性单线态氧,已知当与二氢卟酚络合时不形成II型光敏剂的金属的非限制性实例是Cu、Co、Fe、Ni和Mn。
还应该理解,可以导致形成II型光敏剂的具体金属相比于不能形成II型光敏剂的金属可以根据其结合的含氮大环化合物的类型而变化。还应该理解,非金属化的含氮大环化合物可以是II型光敏剂。例如,二氢卟酚e6是II型光敏剂。
应该理解的是,在本说明书的方法和组合物中使用的含氮大环化合物也可以基于其对人类的毒性或其对环境的影响来选择。例如,与其他类型的含氮大环化合物如酞菁相比,卟啉和还原卟啉往往对人类具有较低的毒性以及增强的环境生物降解性。
下式示出了本文所述的几种示例性的含氮大环化合物:
含氮大环化合物(例如Zn-TPP和叶绿酸镁)可以从各种化学品供应商如OrganicHerb Inc.、Sigma Aldrich或Frontier Scientific获得。在某些情况下,含氮大环化合物并非100%纯的,可能包含其他组分,例如有机酸和胡萝卜素。在其他情况下,含氮大环化合物可以具有高纯度。
在一些实施方案中,光敏剂化合物可以包括多吡咯线性化合物,例如胆红素、硼-二吡咯亚甲基、或类似化合物。在一些实施方式中,光敏剂化合物可以包括其他类型的化合物(线性的或大环的)。光敏剂化合物的非限制性实例包括二芳基庚烷化合物,例如姜黄素。
增强剂化合物
增强剂化合物,在本文中也称为透化化合物,可以增加光敏剂化合物对微生物病原体生长的抑制的总体影响。例如,增强剂化合物可以增加微生物病原体的外膜对光敏剂化合物的通透性。
在一些实施方案中,增强剂化合物或透化化合物包括螯合剂。应当理解,如本文所用,术语“螯合剂”通常是指可以与单一金属或离子形成数个键的化合物。
在一些实施方案中,螯合剂可以包含至少一个羧基、至少一个羟基、至少一个酚基和/或至少一个氨基,或其农业上可接受的盐。在一些实施方案中,螯合剂可以包括氨基羧酸化合物或其农业上可接受的盐。氨基羧酸或其农业上可接受的盐可以包括氨基多元羧酸或其农业上可接受的盐。例如,氨基多元羧酸可以包含两个氨基和与每个氨基结合的两个烷基羧基。烷基羧基可以是甲基羧基。
在一些实施方案中,所述螯合剂选自由以下组成的组:氨基多元羧酸、芳族或脂肪族羧酸、氨基酸、膦酸、以及羟基羧酸、或其农业上可接受的盐。
在一些实施方案中,本文所述的方法和组合物包含一种或多种氨基多元羧酸螯合剂。氨基多元羧酸螯合剂的实例包括但不限于:乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、羟基乙二胺三乙酸(HEDTA)、和乙二胺二琥珀酸酯(EDDS)、环己二胺四乙酸(CDTA)、N-(2-羟乙基)乙二胺三乙酸(EDTA-OH)、乙二醇醚二胺四乙酸(GEDTA)、丙氨酸二乙酸(ADA)、烷酰基(alkoyl)乙二胺三乙酸(例如,月桂酰乙二胺三乙酸(LED3 A))、天冬氨酸二乙酸(ASDA)、天冬氨酸单乙酸、二氨基环己烷四乙酸(CDTA)、1,2-二氨基丙烷四乙酸(DPTA-OH)、1,3-二氨基-2-丙醇四乙酸(DTP A)、二亚乙基三胺五亚乙基膦酸(DTPMP)、二甘醇酸、吡啶二羧酸(DP A)、乙醇胺二乙酸、羟乙基亚氨基二乙酸(EDG)、乙二胺二戊二酸(EDDG)、乙二胺二(羟苯基乙酸(EDDHA)、乙二胺二丙酸(EDDP)、乙二胺二琥珀酸酯(EDDS)、乙二胺单琥珀酸(EDMS)、乙二胺四乙酸(EDTA)、乙二胺四丙酸(EDTP)、以及乙二醇氨基乙基酯四乙酸(EGTA)、以及其农业上可接受的盐(例如,钠盐、钙盐和/或钾盐)。
螯合剂的一个非限制性实例是乙二胺四乙酸(EDTA)或其农业上可接受的盐。氨基羧酸盐可以例如是钠盐或钙盐。EDTA可以表示如下:
螯合剂的另一个非限制性实例是聚天冬氨酸或其农业上可接受的盐(即聚天冬氨酸盐),例如聚天冬氨酸钠,其通常可以如下表示。聚天冬氨酸盐的分子量可以为例如2,000至3,000。
螯合剂因此可以是聚合物化合物,其可以包含天冬氨酸单元、羧基、以及在聚天冬氨酸盐中出现的其他特征。聚天冬氨酸盐可以是具有α键和β键的共聚物,其可以以各种比例(例如,30%α、70%β,沿着聚合物链随机分布)。聚天冬氨酸钠的一个非限制性实例是 DS100,其可以表示如下。
螯合剂的其他非限制性实例包括EDDS(乙二胺-N,N'-二琥珀酸)、IDS(亚氨基二琥珀酸(N-1,2-二羧乙基)-D,L-天冬氨酸)、异丙胺、三乙醇胺、三乙胺、氢氧化铵、四丁基氢氧化铵、六胺、GLDA(L-谷氨酸N,N-二乙酸)、或其农业上可接受的盐。螯合剂可以是金属化的或非金属化的。
EDDS可以作为EDDS的三钠盐使用,如下所示:
GLDA可以作为GLDA的四钠盐使用,如下所示:
在一些实施方案中,本文描述的方法和组合物包含一种或多种氨基酸螯合剂。氨基酸螯合剂的实例包括但不限于丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、以及盐(例如,钠盐、钙盐和/或钾盐)、及其组合。
在一些实施方案中,本文所述的方法和组合物包含一种或多种芳族或脂肪族羧酸螯合剂。芳族或脂肪族羧酸螯合剂的实例包括但不限于草酸、琥珀酸、丙酮酸、苹果酸、丙二酸、水杨酸、以及邻氨基苯甲酸、及其盐(例如,钠盐、钙盐和/或钾盐)。在一些实施方案中,本文所述的方法和组合物包含一种或多种多酚螯合剂。多酚螯合剂的一个非限制性实例是鞣酸类,例如鞣酸。
在一些实施方案中,本文描述的方法和组合包含一种或多种羟基羧酸螯合剂。羟基羧酸类型的螯合剂的实例包括但不限于苹果酸、柠檬酸、乙醇酸、庚酸、酒石酸及其盐(例如,钠盐、钙盐和/或钾盐)。
在一些实施方案中,一种或多种螯合剂可以以游离酸、农业上可接受的盐、或其组合的形式施用。
在一些实施方案中,一种或多种螯合剂中的每一种以游离酸的形式施用。在其他实施方案中,一种或多种螯合剂可以盐的形式施用。示例性的盐包括钠盐、钾盐、钙盐、铵盐、胺盐、酰胺盐、及其组合。在其他实施方案中,当存在不止一种螯合剂时,至少一种螯合剂以游离酸的形式施用,并且至少一种螯合剂以盐的形式施用。
当组分作为单一组合物的一部分提供时,可以提供具有一定浓度和相对比例的组分的组合物。例如,该组合物可以具有约100nM至约50mM、约5微摩尔至约10mM、约1微摩尔至约1000微摩尔、约5微摩尔至约200微摩尔的含氮大环化合物、约10微摩尔至约150微摩尔的含氮大环化合物、约25微摩尔至约100微摩尔的含氮大环化合物、或约50微摩尔至约75微摩尔的含氮大环化合物。
该组合物还可以具有例如约2微摩尔至约10,000微摩尔的螯合剂、约5微摩尔至约5,000微摩尔的螯合剂、约10微摩尔至约1,000微摩尔的螯合剂、约25微摩尔至约500微摩尔的螯合剂、约50微摩尔至约100微摩尔的螯合剂。
按重量计含氮大环化合物和螯合剂在组合物中的相对比例可以为例如约50:1至约1:1000、约20:1至约1:500、约10:1至约1:100、或约1:1至约1:10。
添加剂和助剂
在一些实施方案中,本文所述的方法和组合物包含一种或多种农业上合适的助剂。
在一些实施方案中,一种或多种农业上合适的助剂各自独立地选自由以下组成的组:一种或多种激活剂助剂(例如,一种或多种表面活性剂;一种或多种油助剂,例如,一种或多种穿透剂)和一种或多种功能助剂(例如,一种或多种润湿剂或分散剂;一种或多种保湿剂;一种或多种乳化剂;一种或多种漂移控制(drift control)剂;一种或多种增稠剂;一种或多种沉积剂;一种或多种水调节剂;一种或多种缓冲剂;一种或多种消泡剂;一种或多种UV阻断剂;一种或多种抗氧化剂;一种或多种肥料、营养素和/或微量营养素;和/或一种或多种除草剂安全剂)。示例性助剂在Hazen,J.L.Weed Technology 14:773-784(2000)中提供,其通过引用整体并入本文。
在一些实施方案中,油可以与含氮大环化合物组合。该油可以选自由矿物油、植物油及其混合物组成的组。
植物油的非限制性实例包括含中链甘油三酸酯(MCT)的油,从坚果中提取的油。植物油的其他非限制性实例包括椰子油、芥花油、大豆油、菜籽油、葵花油、红花油、花生油、棉籽油、棕榈油、米糠油、或其混合物。矿物油的非限制性实例包括石蜡油、带支链的石蜡油、环烷油、芳族油、或其混合物。
石蜡油的非限制性实例包括各种等级的聚-α-烯烃(PAO)。例如,石蜡油可以包括HT60TM、HT100TM、High Flash Jet、LSRDTM和N65DWTM。石蜡油可以包括碳原子数范围为约12至约50、或约16至35的链烷烃。在一些情况下,链烷烃的平均碳原子数可以为23。在一些实施方案中,油可以具有至少80重量%、或至少90重量%、或至少99重量%的链烷烃含量。
按重量计含氮大环化合物和油可以以相对比例为例如约50:1至约1:1000、约20:1至约1:500、约10:1至约1:100、或约1:1至约1:10施用。
含氮大环化合物和油可以顺序或同时添加。当同时添加时,含氮大环化合物和油可以作为同一组合物的一部分或作为两种不同的组合物的一部分添加。在一些实施方案中,含氮大环化合物和油可以在水包油乳液中组合。即,该组合可以包含与油和水组合的含氮大环化合物,从而将该组合配制成水包油乳液。水包油乳液还可以包括其他添加剂,例如螯合剂、表面活性剂或其组合。
如本文所用,术语“水包油乳液”是指其中油(例如,石蜡油)和水中的一种以液滴形式分散在另一种(例如,水)中的混合物。在一些实施方案中,通过以下方法制备水包油乳液,该方法包括将石蜡油、水和任何其他组分与石蜡油组合,并施加剪切直至获得乳液。在其他实施方案中,通过以下方法制备水包油乳液,该方法包括在混合罐中混合石蜡油、水和任何其他组分,并通过喷枪的喷嘴进行喷洒。
在一些实施方案中,含氮大环化合物和螯合剂是包含载液的组合物的一部分。合适的载液允许在载液中获得组合物的组分的稳定溶液、悬浮液和/或乳液。在一些实施方案中,载液是水。在其他实施方案中,载液是水和不可混溶或仅部分溶于水的其他溶剂或油的混合物。
还应当理解,本说明书的组合物和组合可以分开地提供或者在同一组合物中一起提供。在一些实施方案中,本说明书的组合物的组分可以以浓缩形式包装,而没有载液,并且载液(例如水)可以由将组合物施用于植物的操作者添加以直接形成进而形成待施用的组合物。
在一些实施方案中,含氮大环化合物和油的组合可以用于抑制植物中微生物病原体的生长。该组合可以是水包油乳液,其中选择表面活性剂使得含氮大环化合物保持分散在水包油乳液中以递送至植物。
该组合可以包含表面活性剂(也称为乳化剂)。表面活性剂可以选自由以下组成的组:乙氧基化醇、聚合物表面活性剂、脂肪酸酯、聚乙二醇、乙氧基化烷基醇、单甘油酯、烷基单甘油酯、两亲性糖苷、及其混合物。例如,脂肪酸酯可以是失水山梨糖醇脂肪酸酯。表面活性剂可以包括植物来源的糖苷,例如皂苷。表面活性剂可以作为助剂存在,以帮助覆盖植物叶子。表面活性剂可以是可接受的聚山梨醇酯型表面活性剂(例如,Tween 80)、非离子型表面活性剂混合物(例如,AltoxTM 3273)、或其他合适的表面活性剂。在一些实施方案中,聚乙二醇可以包括下式的聚乙二醇:
R1-O-(CH2CH2O)f-R2,
其中,R1=H、CH2=CH-CH2或COCH3;R2=H、CH2=CH-CH2或COCH3;并且f≥1。
光敏剂和增强剂化合物的组合
光敏剂化合物和增强剂化合物可以作为抗微生物组合物的一部分提供。所述抗微生物组合物还可以包含递送流体(例如,水)和其他添加剂。
可以提供具有一定浓度和相对比例的组分的抗微生物组合物。例如,抗微生物组合物可以具有约100nM至约50mM、1微摩尔至约1000微摩尔、5微摩尔至约200微摩尔的光敏剂化合物,约10微摩尔至约150微摩尔的光敏剂化合物,约25微摩尔至约100微摩尔的光敏剂化合物,或约50微摩尔至约75微摩尔的光敏剂化合物。
该抗微生物组合物还可以具有例如约2微摩尔至约10,000微摩尔的增强剂化合物、约5微摩尔至约5,000微摩尔的增强剂化合物、约10微摩尔至约1,000微摩尔的增强剂化合物、约25微摩尔至约500微摩尔的增强剂化合物、约50微摩尔至约100微摩尔的增强剂化合物。
按重量计光敏剂化合物和增强剂化合物在抗微生物组合物中的相对比例可以为例如约50:1至约1:1000、约20:1至约1:500、约10:1至约1:100、或约1:1至约1:10。
至于抗微生物组合物中可以存在的其他添加剂,表面活性剂可以作为助剂存在以帮助覆盖植物叶子。表面活性剂可以是可接受的聚山梨醇酯型表面活性剂(例如,Tween80)、非离子型表面活性剂混合物(例如,AltoxTM 3273)、或其他合适的表面活性剂。
光敏剂和增强剂化合物的施用
光敏剂化合物和增强剂化合物可以施用于植物以光动力学抑制微生物病原体。可以将光敏剂化合物和增强剂化合物同时施用于植物。例如,可以制备抗微生物组合物以包含光敏剂和增强剂化合物以及递送流体,例如水或水油乳液。该抗微生物组合物可以通过喷洒、雾化、喷雾、浇灌、或任何其他合适的方法施用于植物。可以将抗微生物组合物施用于植物的叶子、根和/或茎。其他添加剂也可以包含在抗微生物组合物中,并且也可以实施其他施用方法。
其上施用抗微生物组合物的植物可以在暴露于自然光下的室外或室内(例如温室),或者也可以在暴露于人造光的室内位置。提供暴露于入射光,使得光敏剂化合物可以产生ROS,ROS继而促进对微生物生长的破坏。
在操作中,使光敏剂化合物和增强剂化合物与感染植物的微生物病原体接触。光敏剂化合物和增强剂化合物都与病原微生物的细胞壁和细胞间物质接触。
光敏剂和增强剂化合物的组合可以促进各种作用机理。例如,增强剂化合物可以与光敏剂化合物和/或与微生物病原体的细胞壁上存在的物质相互作用,以破坏细胞壁或增强光敏剂化合物的进入或穿透,从而使得光处理和由此产生的ROS可以增加对微生物病原体的抑制作用。增强剂化合物的相互作用可以取决于光敏剂化合物和增强剂化合物的结构。例如,螯合剂如EDTA可以与存在于某些光敏剂化合物的大环内的金属和/或与存在于微生物病原体的细胞壁上的反离子络合。
微生物病原体和植物
可以向其施用抗微生物组合物的微生物病原体包括真菌病原体和细菌病原体。
可以向其施用抗微生物组合物的真菌病原体包括可以感染植物诸如番茄和土豆的茄链格孢菌(Alternaria solani);可以感染葡萄、浆果类和鳞茎作物的灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea);或通常可以感染草坪草的核盘菌(Sclerotinia homoeocarpa)。链格孢属、葡萄孢属或核盘菌属中的其他真菌病原体也可以接受抗微生物组合物的施用。所述抗微生物组合物可以施用于受到引起各种植物病害的病原体的影响的植物或易感于引起各种植物病害的病原体的植物,所述病原体为例如炭疽菌(Colletotrichum)、镰胞菌(Fusarium)、柄锈菌(Puccinia)、白粉菌科(Erysiphaceae)、尾孢菌(Cercospora)、丝核菌(Rhizoctonia)、蠕孢霉(Bipolaris)、微座孢属(Microdochium)、苹果黑星菌(Venturiainaequalis)、褐腐病菌(Monilinia fructicola)、桧胶锈菌(Gymnosporangium juniperi-virginianae)、芸薹根肿菌(Plasmodiophora braceicae)、玉米瘤黑粉菌(Ustilagozeae)、疫病菌(Phytophthora)、腐霉菌(Pythium)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、致病疫霉(Phytophthora infestans)、畸形外囊菌(Taphrina deformans)、白粉菌(PowderyMildew)、多胞锈菌属(Phragmidium spp.)、或其他真菌病原体。
可以向其施用抗微生物组合物的细菌病原体包括革兰氏阴性细菌(例如,解淀粉欧文氏菌)或欧文氏菌属中可以感染木本植物的其他细菌病原体。解淀粉欧文氏菌对包括梨、苹果和其他蔷薇科(Rosaceae)作物在内的多种植物造成火疫病。该抗微生物组合物可以施用于受到引起各种植物病害的病原体的影响的植物或易感于引起各种植物病害的病原体的植物,所述病原体例如是假单胞菌(Pseudomonas)、黄单胞菌(Xanthomonas)、农杆菌(Agrobacterium)、短小杆菌(Curtobacterium)、链霉菌(Streptomyces)、大肠杆菌(E.Coli)、苛养木杆菌(Xylella fastidiosa,引起橄榄快速衰退综合征(OQDS)的病害)、或其他细菌病原体。
该抗微生物组合物可以用于受微生物病原体影响的各种类型的植物。可以处理被微生物病原体感染的作物、草坪植物、树木和其他植物。
还应注意,本文所述的抗微生物组合物可以对微生物病原体具有多种抑制作用,这取决于植物和病原体的类型以及微生物感染的状态。尽管本文描述了抗微生物组合物可以抑制植物上的微生物病原体的生长,但是这种表达不应是限制性的,而应理解为包括抑制微生物病原体、预防微生物病原体、破坏微生物病原体、或普遍增加对微生物病原体的毒性。
植物的类型
化合物或组合物可以用于可能受微生物病原体影响的各种类型的植物。该植物可以是非木本作物、木本植物或草皮草。植物可以选自由以下组成的组:作物、水果植物、蔬菜植物、豆类植物、谷类植物、饲料植物、油料种子植物、田间植物、花园植物、温室植物、室内植物、花卉植物、草坪植物、草皮草、树(如果树)、以及其他可能受微生物病原体影响的植物。
在一些实施方案中,植物是草皮草。如本文所用,术语“草皮草”是指提供地面覆盖的栽培草,例如被周期性地切割或修剪以保持一致高度的草皮或草坪。草属于禾本科(Poaceae family),分为六个亚科,其中三个包括普通草皮草:冷季型草皮草的早熟禾亚科(Festucoideae subfamily);以及暖季型草皮草的黍亚科(Panicoideae subfamily)和画眉草亚科(Eragrostoideae subfamily)。有限的种类被广泛用作草皮草,其通常满足形成均匀的土壤覆盖和耐受修剪和运输的标准。通常,草皮草具有压缩的冠状结构,以利于修剪但不会切断生长点。在本文中,术语“草皮草”包括其中种植一种或多种草种以形成相对均匀的土壤覆盖的区域,包括作为同一物种不同品种组合的混合物,或不同物种和/或品种的组合的混合物。
组合的协同效应
在某些情况下,组合可以表现出抑制植物中微生物病原体生长的协同响应。应当理解,如本文所用,术语“协同”或“协同的”是指组合(或组合物)的两种或更多种组分的相互作用,使得它们的组合作用大于它们各自作用的总和,在本说明书的上下文中,这可以包括含氮大环化合物、油和螯合剂中的两种或更多种的作用。在一些情况下,含氮大环化合物和油可以以协同有效量存在。在一些情况下,含氮大环化合物和螯合剂可以以协同有效量存在。在一些情况下,油和螯合剂可以以协同有效量存在。在一些情况下,含氮大环化合物、油和螯合剂可以以协同有效量存在。
在一些情况下,S.R.Colby,“Calculating synergistic and antagonisticresponses of herbicide combinations”,Weeds 15,20-22(1967)中提出的方法可以用于评估协同作用。预期功效E可以表示为:E=X+Y(100-X)/100,其中X是组合的第一组分的功效,以未处理的对照的%表示,Y是组合的第二组分的功效,以未处理的对照的%表示。当观察到的功效高于预期功效时,说明这两种组分以协同有效量存在。
实施例&实验
在整个实施例中,应理解,组合物中提供的%值是指重量%值。此外,达到所列百分比值的100重量%的余量始终是相应量的水。例如:条目“0.1%MgChl+0.1%EDTA-Ca+0.04%Atlox3273”是指由0.1重量%MgChl、0.1重量%EDTA-Ca、0.04重量%Atlox3273和水组成以达到100重量%的组合物。
实施例1
在该实施例中,卟啉光敏剂化合物和螯合剂的施用通过使用光动力学抑制来抑制引起火疫病(Fire Blight)的细菌(解淀粉欧文氏菌)的生长。特别地,使用了叶绿酸镁和EDTA二钠,并且它们的组合显示出使解淀粉欧文氏菌的生长停滞。
解淀粉欧文氏菌在液体培养基中生长。将样品与100μM叶绿酸镁(与或不与5mMEDTA二钠)一起孵育30分钟,然后用395nm(能流为26.6J cm-2)照射30分钟。在板上计数细菌的CFU。下表总结了结果:
表1:PDI处理后细菌相对失活的结果
处理 | 相对失活,CFU |
未处理的对照-黑暗中 | 1 |
未处理的对照-光照下 | 0.9 |
叶绿酸镁(100μM),无EDTA(5mM),光照下 | 1.9 |
叶绿酸镁(100μM)和EDTA(5mM),光照下 | 2.1×10<sup>4</sup> |
仅EDTA(5mM),光照下 | 11.1 |
在测试浓度下,仅叶绿酸或EDTA的光处理对解淀粉欧文氏菌灭活几乎没有影响或完全没有影响。EDTA与叶绿酸的组合在测试浓度下使抗菌效果提高约1000倍。在测试条件下,两种化合物的组合几乎完全灭活解淀粉欧文氏菌。
实施例2
在该实施例中,卟啉光敏剂化合物和螯合剂的施用通过使用光动力学抑制来抑制真菌病原体茄链格孢菌的生长。特别地,使用了叶绿酸镁和EDTA二钠,并且它们的组合显示出使茄链格孢菌的生长停滞。
在实验中,茄链格孢菌菌丝体在液体培养基中生长24小时。将菌丝体的小球(平均直径2mm)与100μM的叶绿酸镁和0至5mM的EDTA二钠孵育100分钟。样品用395nm(能流为106.6J cm-2)照射120分钟,并测量琼脂培养基上7天后菌丝体斑的放射状生长。如果在琼脂板上7天后没有观察到生长,则认为样品已经死亡。下表总结了结果:
表2:死亡的茄链格孢菌菌丝体的百分比的结果
处理 | 死亡% |
叶绿酸镁(100μM),无EDTA(0M),光照下 | 11.5% |
叶绿酸镁(100μM)和EDTA(5μM),光照下 | 33.3% |
叶绿酸镁(100μM)和EDTA(50μM),光照下 | 66.7% |
叶绿酸镁(100μM)和EDTA(500μM),光照下 | 83.3% |
叶绿酸镁(100μM)和EDTA(5mM),光照下 | 94.1% |
仅EDTA(5mM),光照下 | 0% |
仅EDTA(50mM),光照下 | 0% |
仅EDTA(100mM),光照下 | 0% |
仅EDTA(500mM),光照下 | 0% |
仅EDTA(5mM),无光照 | 0% |
仅EDTA(50mM,无光照 | 0% |
仅EDTA(100mM),无光照 | 11.1% |
仅EDTA(500mM),无光照 | 11.1% |
仅叶绿酸或EDTA的光处理对真菌菌丝体几乎没有影响或完全没有影响。添加EDTA和100μM叶绿酸的组合增加了对真菌菌丝体的生长的抑制。100μm叶绿酸和5mM EDTA二钠的组合几乎完全灭活茄链格孢菌。
实施例3
在该实施例中,卟啉光敏剂化合物和螯合剂的施用通过使用光动力学抑制来抑制引起灰霉病(Gray Mold)的灰葡萄孢菌真菌的生长。特别地,使用了叶绿酸镁和EDTA二钠,并且它们的组合显示出使灰葡萄孢菌的生长停滞。
在实验中,灰葡萄孢菌菌丝体在液体培养基中生长48小时。将菌丝体的小球(平均直径2mm)与叶绿酸镁(与或不与5mM的EDTA二钠)孵育100分钟。样品用395nm(能流为106.6Jcm-2)照射120分钟,并测量琼脂培养基上7天后菌丝体斑的放射状生长。如果在琼脂板上7天后没有观察到生长,则认为样品已经死亡。下表总结了结果:
表3:死亡的灰葡萄孢菌菌丝体的百分比的结果
处理 | 死亡% |
未处理的对照,黑暗中 | 0 |
未处理的对照,有光照 | 0 |
仅EDTA(5mM),黑暗中 | 0 |
仅EDTA(5mM),光照下 | 0 |
叶绿酸镁(1μM)和EDTA(5mM),光照下 | 0 |
叶绿酸镁(10μM)和EDTA(5mM),光照下 | 33.3% |
叶绿酸镁(100μM)和EDTA(5mM),光照下 | 91.7% |
仅叶绿酸镁(10μM),光照下 | 0 |
仅叶绿酸镁(100μM),光照下 | 0 |
仅叶绿酸或EDTA的光处理对真菌菌丝体几乎没有影响或完全没有影响。在测试条件下,在叶绿酸中添加EDTA增加了对真菌菌丝体的生长的抑制,特别是叶绿酸浓度为10μM或更高时。当用100μM叶绿酸和5mM EDTA二钠的组合处理时,灭活了大部分的灰葡萄孢菌。
实施例4
在该实施例中,卟啉光敏剂化合物和螯合剂的施用通过使用光动力学抑制来抑制引起灰霉病(Gray Mold)的灰葡萄孢菌真菌的生长。特别地,使用了叶绿酸镁和EDTA二钠钙或EDTA二钠,并且卟啉光敏剂化合物和每种螯合剂的组合显示出使灰葡萄孢菌的生长停滞。
在实验中,灰葡萄孢菌菌丝体在液体培养基中生长48小时。将菌丝体的小球(平均直径2mm)与叶绿酸镁(与或不与5mM的EDTA(钙或二钠))孵育100分钟。样品用395nm(能流为106.6J cm-2)照射120分钟,并测量琼脂培养基上7天后菌丝体斑的放射状生长。如果在琼脂板上7天后没有观察到生长,则认为样品已经死亡。下表总结了结果:
表4:Na-EDTA或Ca-EDTA下死亡的灰葡萄孢菌菌丝体的百分比的结果
用Ca-EDTA处理 | 死亡% |
未处理的对照,黑暗中 | 0 |
未处理的对照,有光照 | 0 |
仅EDTA-Ca(5mM),有光照 | 0 |
叶绿酸镁(100μM)和EDTA-Ca(5mM),光照下 | 47.6% |
仅叶绿酸镁(100μM),光照下 | 0 |
用Na-EDTA处理 | 死亡% |
未处理的对照,黑暗中 | 0 |
未处理的对照,有光照 | 0 |
仅EDTA-Na(5mM),有光照 | 0 |
叶绿酸镁(100μM)和EDTA-Na(5mM),光照下 | 91.7% |
仅叶绿酸镁(100μM),光照下 | 0 |
仅叶绿酸或EDTA(包括EDTA钙和EDTA二钠)的光处理对真菌菌丝体的作用有限。在测试条件下,对于两种测试的螯合剂,在叶绿酸中添加EDTA增加了对真菌菌丝体的生长的抑制,特别是叶绿酸浓度为10μM或更高时。当用100μM叶绿酸和5mM Na-EDTA的组合测试时,灰葡萄孢菌被极大地灭活,当用100μM叶绿酸和5mM Ca-EDTA的组合处理时,灰葡萄孢菌也被灭活。效率低于用Na-EDTA。
实施例5
在该实施例中,卟啉光敏剂化合物和螯合剂的施用通过使用光动力学抑制来抑制早疫病(Early Blight)真菌(茄链格孢菌)的生长。特别地,使用了二氢卟酚E6和EDTA二钠,并且卟啉光敏剂化合物和螯合剂的组合显示出使茄链格孢菌的生长停滞。
在实验中,茄链格孢菌菌丝体在液体培养基中生长24小时。将菌丝体的小球(平均直径2mm)与二氢卟酚E6(与或不与5mM的EDTA二钠)孵育100分钟。样品用395nm(能流为106.6J cm-2)照射120分钟,并测量琼脂培养基上7天后菌丝体斑的放射状生长。如果在琼脂板上7天后没有观察到生长,则认为样品已经死亡。下表总结了结果:
表5:死亡的茄链格孢菌菌丝体的百分比的结果
处理 | 死亡% |
无光照,0μM二氢卟酚E6 | 0.0% |
无光照,100μM二氢卟酚E6 | 0.0% |
光照,0μM二氢卟酚E6 | 0.0% |
光照,1μM二氢卟酚E6 | 0.0% |
光照,10μM二氢卟酚E6 | 8.3% |
光照,100μM二氢卟酚E6 | 0% |
无光照,仅5mM Na-EDTA | 0% |
无光照,100μM二氢卟酚E6+5mM Na-EDTA | 0% |
光照,仅5mM Na-EDTA | 0% |
光照,1μM二氢卟酚E6+5mM Na-EDTA | 0% |
光照,10μM二氢卟酚E6+5mM Na-EDTA | 88.8% |
光照,100μM二氢卟酚E6+5mM Na-EDTA | 16.7% |
仅二氢卟酚E6或EDTA的光处理对真菌菌丝体几乎没有影响或完全没有影响。在测试条件下,在二氢卟酚E6中添加EDTA增加了对真菌菌丝体的生长的抑制,特别是叶绿酸浓度为10μM或更高时。当用10μM叶绿酸和5mM EDTA二钠的组合处理时,灭活了大部分的灰葡萄孢菌。
实施例6:对寄主植物匍匐翦股颖(Creeping bentgrass)的测试
在该实施例中,评估了对匍匐翦股颖中币斑病真菌(核盘菌)的控制。就方法学而言,翦股颖(L-93)在3.5英寸的盆中生长4-6周。用0.2g/盆的小麦种子接种物接种植物,该接种物包含5种不同的核盘菌(币斑病病原体)的分离株。24小时后,用不同的配方喷洒接种的植物。每种处理重复四次。在叶面施用后,将植物在黑暗中培育8小时,然后将其随机置于LED灯下(PAR为约300μM/m2/秒)。每种处理重复四次。LED灯的周期设置为从下午6点关闭到凌晨2点打开,以维持16小时:8小时的光照:黑暗周期。接种后七天(DPI),评估了匍匐翦股颖(A.stolonifera)的盆中叶片变黄百分比和具有核盘菌的叶片的菌丝体覆盖的百分比。
表6:对翦股颖上核盘菌的抑制的结果
Altox3273是可以在组合物中使用的表面活性剂的实例。例如,这种表面活性剂化合物可以用作辅助植物叶片的覆盖的助剂。
从以上结果可以看出,与单独使用的每种化合物相比,MgChl和EDTA的组合提供了对植物(匍匐翦股颖)的增强的光动力学抑制。在该实施例中,提供的组合为还包含表面活性剂的水性组合物。
实施例7
在该实施例中,评估了叶绿酸镁、聚天冬氨酸钠及其组合对币斑病真菌(核盘菌)的控制。将处理物以所需浓度改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到经改良的培养皿的中心,并在21℃在黑暗中孵育24小时。24小时后,将一组培养皿(一式三份)置于黑暗中,并将一组置于光照下,以进行后续实验(全部在21℃)。每天监测真菌的放射状生长,直到未改良的PDA上核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约180μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的荧光灯提供光照。
表7A:黑暗中抑制的结果
表7B:光照下抑制的结果
上表的注释:
1将处理物改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量);
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长;
4相对于未改良的对照计算出的抑制%。
5Baywure DS的分子量列为2,000-3,000。2500g/mol的分子量用于计算。
从以上结果可以看出,与单独使用的每种化合物相比,MgChl和聚天冬氨酸盐的组合提供了增强的光动力学抑制。
实施例8
地毯草黄单胞菌(Xanthomonas axonopodis)是引起柑橘溃疡病的细菌病原体。柑橘溃疡病是一种具有高度传染性的植物病,它可以破坏整个作物田。已经发现,在试验中,叶绿酸镁对控制细菌的作用很小(与实施例1的关于解淀粉欧文氏菌的方法相同)。然而,已经发现,将叶绿酸与EDTA(例如5mM EDTA钠)的组合在光照下可以增强对地毯草黄单胞菌的控制。在几个叶绿酸浓度和暴露时间下都获得了积极的结果。
黄单胞菌在液体培养基中生长。样品与叶绿酸镁和EDTA二钠一起孵育30分钟或5分钟,并且然后用395nm(能流26.6J cm-2)照射30分钟。在板上计数细菌的CFU。
表8:地毯草黄单胞菌的计数结果
实施例9(姜黄素–非含氮大环化合物)
实验表明,与单独使用每种组分相比,EDTA和姜黄素的组合增强了对真菌生长的光动力学抑制。该实施例表明,线性的和/或不具有大环核心结构的化合物,同卟啉一样,也可以与螯合剂组合从而用于光动力学抑制应用。
在该实施例中,评估了用姜黄素、EDTA和该组合对币斑病真菌(核盘菌)的控制。首先将姜黄素溶于DMSO,然后用0.25%的Tween溶液稀释。将处理物以所需浓度改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到经改良的培养皿的中心,并在21℃在黑暗中孵育24小时。24小时后,将一组培养皿(一式三份)置于黑暗中,并将一组置于光照下,用于后续的实验(全部在21℃)。每天监测真菌的放射状生长,直到未改良的PDA上核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约180μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的荧光灯提供光照。
表9A:黑暗中的结果
表9B:光照下抑制的结果
上表的注释:
1将处理物改良至马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
4相对于未改良的对照计算的抑制%
实施例10
实验表明,与单独使用每种组分相比,EDDS三钠盐和叶绿酸镁的组合增强了对细菌生长(大肠杆菌)的光动力学抑制。
表10:光照下(EDDS和MgChln)抑制的结果
处理 | CFU/mL | LogCFU/mL | 失活% |
50mM EDDS | 6.50E+05 | 5.81 | 88.1 |
10μM MgChln | 1.30E+05 | 5.11 | 97.6 |
1μM MgChln | 2.73E+05 | 5.44 | 95.0 |
10μM MgChln+50mM EDDS | <10000 | <4 | >99.8 |
1μM MgChln+50mM EDDS | <10000 | <4 | >99.8 |
未处理的对照 | 5.47E+06 | 6.74 |
实施例11
表11:光照下(IDS和MgChln)抑制的结果
处理 | CFU/mL | LogCFU/mL | 失活% |
5mM Baypure CX | 2.09E+06 | 6.32 | 67.8 |
1μM MgChln | 9.07E+05 | 5.96 | 86.1 |
1μM MgChln+5mM Baypure CX | 3.37E+05 | 5.53 | 94.8 |
培养对照 | 6.50E+06 | 6.81 |
实施例12
表12:光照下(聚天冬氨酸盐和MgChln)抑制的结果
处理 | CFU/mL | LogCFU/mL | 失活% |
Baypure DS(5%) | 4.20E+06 | 6.62 | 40.3 |
1μM MgChln | 6.13E+05 | 5.79 | 91.3 |
1μM MgChln+5%Baypure DS | 6.67E+03 | 3.82 | 99.9 |
未处理的对照 | 7.03E+06 | 6.85 |
实施例13(姜黄素–非含氮大环化合物)
实验表明,与单独使用每种组分相比,EDDS三钠盐和姜黄素的组合增强了对细菌(大肠杆菌)生长的光动力学抑制。姜黄素溶液是通过在Arlasolve溶剂中配制新鲜的100mM原液并在使用前在0.25%Tween溶液中稀释而制备的。
表13:光照下(EDDS和姜黄素)抑制的结果
实施例14
评估了叶绿酸镁、IDS( CX)及其组合对币斑病真菌(核盘菌)的控制。将处理物以所需浓度改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到经更改的培养皿的中心,并在21℃在黑暗中孵育24小时。24小时后,将一组培养皿(一式三份)置于黑暗中,并将一组置于光照下,用于后续的实验中(全部在21℃)。每天监测真菌的放射状生长,直到未改良的PDA上核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约180μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的荧光灯提供光照。
表14A:黑暗中抑制的结果
表14B:光照下抑制的结果
上表的注释:
1将处理物改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量);
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长;
4相对于未改良的对照计算出的抑制%。
实施例15
评估叶绿酸镁、L-谷氨酸N,N-二乙酸、四钠盐(GLDA-NA4,Dissolvine GL-47-S)及其组合对币斑病真菌(核盘菌)的控制。将处理物以所需浓度改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到经改良的培养皿的中心,并在21℃在黑暗中孵育24小时。24小时后,将一组培养皿(一式三份)置于黑暗中,并将一组置于光照下,用于后续的实验(全部在21℃)。每天监测真菌的放射状生长,直到未改良的PDA上核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约180μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的荧光灯提供光照。
表15A:黑暗中抑制的结果
表15B:光照下抑制的结果
上表的注释:
1将处理物改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量);
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长;
4相对于未改良的对照计算出的抑制%。
实施例16
在该实施例中,评估了用II型的金属化二氢卟酚对币斑病真菌(核盘菌)的控制。将处理物以所需浓度改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到经改良的培养皿的中心,并在21℃在黑暗中孵育24小时。24小时后,将一组培养皿(一式三份)置于黑暗中,并将一组置于光照下,用于后续的实验(全部在21℃)。每天监测真菌的放射状生长,直到未改良的PDA上核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约180μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的荧光灯提供光照。
表16A:黑暗中的结果
上表的注释:
1将处理物改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
表16B:光照下抑制的结果
上表的注释:
1将处理物改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
表16A和16B显示了在光照的存在下,多种II型的金属化叶绿酸抑制了币斑病真菌。
实施例17:比较例
在该实施例中,评估了二氢卟酚钴(不是II型光敏剂)对币斑病真菌(核盘菌)的控制。将处理物以所需浓度改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到经改良的培养皿的中心,并在21℃在黑暗中孵育24小时。24小时后,将一组培养皿(一式三份)置于黑暗中,并将一组置于光照下,用于后续的实验(全部在21℃)。每天监测真菌的放射状生长,直到未改良的PDA上核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约180μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的荧光灯提供光照。
表17A:黑暗中的结果
表17B:光照下抑制的结果
上表的注释:
1将处理物改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
在该实施例中,评估了叶绿酸铜对币斑病真菌(核盘菌)的控制。将处理物以所需浓度改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试5个分离株)接种到经改良的培养皿的中心,并在21℃在黑暗中孵育24小时。24小时后,将一组培养皿(一式三份)置于黑暗中,并将一组置于光照下,用于后续的实验(全部在21℃)。每天监测真菌的放射状生长,直到未改良的PDA上核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约180μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的荧光灯提供光照。
表17C:黑暗中的结果
表17D:光照下的抑制结果
上表的注释:
1将处理物改良到马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5计算出相对于未改良的对照的抑制%
表17A-17D表明,不是II型光敏剂的金属化的叶绿酸—换句话说,在有光照的情况下不产生单线态氧的金属化的叶绿酸—不管有无光照都不抑制币斑病真菌。
实施例18
在该实施例中,评估了二氢卟酚和螯合剂的组合对币斑病真菌(核盘菌)的控制。在24孔板中在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备所需浓度的处理物(一式两份,用于光照孵育与黑暗孵育)。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到该PBS,并在21℃在黑暗中孵育2小时。2小时后,将24孔板中的一个(具有一式三份的分离株)置于黑暗中,并将一个24孔板置于光照下1小时(均在21℃下)。照射后,从PBS中取出真菌塞,在无菌滤纸上吸干并转移至未改良的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。每天监测真菌的放射状生长,直到核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约1000μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的LED灯提供光照。
表18A:黑暗中的结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育
2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
表18B:光照下抑制的结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
实施例19
在该实施例中,评估了用原卟啉锌IX(Zn-PPIX)和EDTA的组合对币斑病真菌(核盘菌)的控制。在24孔板中在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备所需浓度的处理物(一式两份,用于光照孵育与黑暗孵育)。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到PBS,并在21℃在黑暗中孵育2小时。2小时后,将24孔板中的一个(具有一式三份的分离株)置于黑暗中,并将一个24孔板置于光照下1小时(均在21℃)。照射后,从该PBS中取出真菌塞,在无菌滤纸上吸干并转移至未改良的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。每天监测真菌的放射状生长,直到核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约1000μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的LED灯提供光照。
表19A:光照下抑制的结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理物,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
实施例20
在该实施例中,评估了细菌卟吩和EDTA的组合对币斑病真菌(核盘菌)的控制。在24孔板中在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备所需浓度的处理(一式两份,用于光照孵育与黑暗孵育)。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到PBS,并在21℃在黑暗中孵育2小时。2小时后,将24孔板中的一个(具有一式三份的分离株)置于黑暗中,并将一个24孔板置于光照下1小时(均在21℃)。照射后,从PBS中取出真菌塞,在无菌滤纸上吸干并转移至未改良的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。每天监测真菌的放射状生长,直到核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约1000μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的LED灯提供光照。
表20A:黑暗中的结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
表20B:光照下抑制的结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
实施例21
在该实施例中,评估了二氢卟酚e6铝和EDTA的组合对币斑病真菌(核盘菌)的控制。在24孔板中在磷酸盐缓冲盐水(PBS)制备所需浓度的处理液(一式两份,用于光照孵育与黑暗孵育)。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到PBS,并在21℃在黑暗中孵育2小时。2小时后,将24孔板中的一个(具有一式三份的分离株)置于黑暗中,并将一个24孔板置于光照下1小时(均在21℃)。照射后,从PBS中取出真菌塞,在无菌滤纸上吸干并转移至未改良的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。每天监测真菌的放射状生长,直到核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约1000μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的LED灯提供光照。
表21A:黑暗中的结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
表21B:光照下抑制的结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
实施例22
在该实施例中,评估了血卟啉IX二氯化物和螯合剂(EDTA二钠,二水合物)的组合对币斑病真菌(核盘菌)的控制。在24孔板中在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备所需浓度的处理(一式两份,用于光照孵育与黑暗孵育)。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到PBS,并在21℃在黑暗中孵育2小时。2小时后,将24孔板中的一个(具有一式三份的分离株)置于黑暗中,并将一个24孔板置于光照下1小时(均在21℃)。照射后,从PBS中取出真菌塞,在无菌滤纸上吸干并转移至未改良的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。每天监测真菌的放射状生长,直到核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约1000μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的LED灯提供光照。
表22A:黑暗中的结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育48至72小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
表22B:光照下的抑制结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育48至72小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
实施例23:对寄主植物本氏烟(nicotiana benthamiana)的测试
在该实施例中,评估了用叶绿酸镁与螯合剂和乳化剂的组合处理后对宿主植物本氏烟上的真菌植物病原体葫芦炭疽刺盘孢菌(Colletotrichum orbiculare,Cgm)的控制。在接种Cgm的孢子悬液前约2小时,对本氏烟植物施用处理物。然后将植物暴露于光照下24小时,然后黑暗孵育,直到在经水处理的对照植物上明显出现病害症状。一旦发现病害症状,就对病灶进行计数并测量叶面积,以确定病灶数/cm2叶面积。每种处理使用四株重复的植物,并且在光源下将植物随机化。通过发出约180μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的LED灯提供光照。
表23:光照下抑制的结果
1在接种Cgm前约2小时施用处理物。
2数字是4次重复的平均值。
3相对于未改良的对照计算出的抑制%。
4危害植物的毒性评级:0=健康植物,无损害;3=轻微损害;7=严重损害;10=死亡植物。小于3被认为是可接受的
实施例24
在该实施例中,评估了用Ce6三钠盐(Ce6Na3)与聚-α-烯烃(PAO)油的组合处理后对宿主植物本氏烟上的真菌植物病原体葫芦炭疽刺盘孢菌(Colletotrichum orbiculare,Cgm)的控制。在接种Cgm的孢子悬液前约2小时,对本氏烟植物施用处理液。然后将植物暴露于光照下24小时,然后黑暗孵育,直到在经水处理的对照植物上明显出现病害症状。一旦发现病害症状,就对病灶进行计数并测量叶面积,以确定病灶数/cm2叶面积。每种处理使用四株重复的植物,并且在光源下将植物随机化。通过发出约180μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的LED灯提供光照。
表24:光照下抑制的结果
1在接种Cgm前约2小时施用处理物。
2数字是4次重复的平均值。
3后面跟一个共同字母的病灶数/cm2叶面积没有统计学差异(p=0.05)
4相对于未改良的对照计算出的抑制%。
5.危害植物的毒性评级:0=健康植物,无损害;3=轻微损害;7=严重损害;10=死亡植物。小于3被认为是可接受的
实施例25
在该实施例中,评估了叶绿酸镁和螯合剂(丹宁酸)的组合对币斑病真菌(核盘菌)的控制。在24孔板中在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备所需浓度的处理物(一式两份,用于光照孵育与黑暗孵育)。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到PBS,并在21℃在黑暗中孵育2小时。2小时后,将24孔板中的一个(具有一式三份的分离株)置于黑暗中,并将一个24孔板置于光照下1小时(均在21℃)。照射后,从PBS中取出真菌塞,在无菌滤纸上吸干并转移至未改良的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。每天监测真菌的放射状生长,直到核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约1000μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的LED灯提供光照。
表25A:黑暗中的结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理物,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
表25B:光照下抑制的结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理物,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
与单独使用MgChln或丹宁酸相比,将MgChln与丹宁酸组合对真菌生长的抑制更大。
实施例26
在该实施例中,卟啉光敏剂化合物和螯合剂的施用通过使用光动力学抑制来抑制引起火疫病(Fire Blight)的细菌(解淀粉欧文氏菌)的生长。特别地,使用了叶绿酸镁和EDTA二钠和Baypre DS100,并且它们的组合显示出使解淀粉欧文氏菌的生长停滞。在实验中,解淀粉欧文氏菌在液体培养基中生长。将样品与100μM叶绿酸镁(与或不与螯合剂)一起孵育30分钟,然后用395nm(能流为26.6J cm-2)照射30分钟。在板上计数细菌的CFU。下表总结了结果:
表26:PDI处理后细菌相对失活的结果
EDTA和Baypure DS100与叶绿酸的组合显著提高了抗菌作用。在测试条件下,三种化合物的组合几乎可以完全灭活解淀粉欧文氏菌(E.amylovora)。
实施例27
在该实施例中,卟啉光敏剂化合物和螯合剂的施用通过使用光动力学抑制来抑制引起灰霉病(Gray Mold)的灰葡萄孢菌真菌的生长。特别地,使用了叶绿酸镁和聚天冬氨酸钠( DS 100),并且卟啉光敏剂化合物和每种螯合剂的组合显示出使灰葡萄孢菌的生长停滞。
在实验中,灰葡萄孢菌的菌丝体在液体培养基中生长48小时。将菌丝体的小球(平均直径2mm)与叶绿酸镁(与或不与Baypure DS100)孵育100分钟。样品用395nm(能流为106.6J cm-2)照射120分钟,并在琼脂培养基上测量7天后菌丝体斑的放射状生长。如果在琼脂板上7天后没有观察到生长,则认为样品已经死亡。下表总结了结果:
表27:死亡的灰葡萄孢菌菌丝体的百分比的结果
仅叶绿酸或Baypure的光处理对真菌菌丝体没有作用。在测试条件下,在叶绿酸中添加Baypure DS100增加了对真菌菌丝体的生长的抑制,特别是叶绿酸浓度为100μM时。当用100μM叶绿酸和1.2%Baypure DS100的组合处理时,灰葡萄孢菌被极大地灭活。
实施例28:在苹果树上的测试
在该实施例中,在田野中施用卟啉光敏剂化合物和螯合剂,以抑制苹果树(Gala)上引起火疫病(Fire Blight)的细菌(解淀粉欧文氏菌)的生长。特别地,使用叶绿酸镁和EDTA二钠(有和没有Baypure100DS),并且它们的组合显示出抑制在田野条件下的苹果火疫病。在苹果树上没有观察到来自处理的危害植物的毒性。
苹果树上80%的花上接种解淀粉欧文氏菌。将叶绿酸镁和螯合剂的组合以300加仑/英亩的喷洒量施用3次(接种前2小时,以及接种后24小时,接种后72小时)。接种后数周对火疫病(花腐病)的病害感染率进行了评估。下表显示了平均病害感染率(%)。
表28
1.危害植物的毒性评级:0=健康植物,无损害;3=轻微损害;7=严重损害;10=死亡植物。
小于3被认为是可接受的
实施例29:在番茄植株上的测试
在该实施例中,卟啉光敏剂化合物和螯合剂的施用抑制番茄植物上引起早疫病的真菌病原体茄链格孢菌的生长。特别地,使用叶绿酸镁和EDTA二钠(有和没有Baypure100DS),并且它们的组合显示出抑制在田野条件下的番茄上的早疫病。在番茄植株上没有观察到来自处理的危害植物的毒性。
在移栽后35天和42天,在番茄植株上接种了茄链格孢菌两次。叶绿酸镁和螯合剂的组合以50加仑/英亩的喷洒量共施用6次(第一次接种前2小时,第一次接种后24小时,然后以7天为间隔再施用3次)。第二次接种后11天对早疫病感染进行了评估。下表显示了平均病害感染率(%)和疾病进展曲线下标准面积(SAUDPC)。
表29
1.危害植物的毒性评级:0=健康植物,无损害;3=轻微损害;7=严重损害;10=死亡植物。
小于3被认为是可接受的
实施例30:在草莓植株上的测试
为了评估光敏剂与螯合剂危害植物的毒性,将MgChln和Na2EDTA的组合用于草莓植株(野草莓(Fragaria vesa)),以测试该处理是否引起叶片损害。
将处理物喷洒到由种子得到的种子草莓植株上,并让其在透明雨罩下的室外生长。以7天间隔进行总共3次施用。在第0天和第21天评估危害植物的毒性。没有观察到叶损害。
表30
1.危害植物的毒性评级:0=健康植物,无损害;3=轻微损害;7=严重损害;10=
死亡植物。小于3被认为是可接受的
实施例31
在该实施例中,评估了内消旋-四(N-甲基-4-吡啶基)卟啉四甲苯磺酸盐(阳离子卟啉)和螯合剂(EDTA,二钠,二水合物)的组合对币斑病真菌(核盘菌)的控制。在24孔板中在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备所需浓度的处理物(一式两份,用于光照孵育与黑暗孵育)。然后,将直径5mm的核盘菌分离株的塞(总共测试3个分离株)接种到PBS,并在21℃在黑暗中孵育2小时。2小时后,将24孔板中的一个(具有一式三份的分离株)置于黑暗中,并将一个24孔板置于光照下1小时(均在21℃)。照射后,从PBS中取出真菌塞,在无菌滤纸上吸干并转移至未改良的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)中。每天监测真菌的放射状生长,直到核盘菌的生长达到培养皿的边缘。通过发出约1000μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的LED灯提供光照。
表31A:黑暗中的结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理物,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
表31B:光照下抑制的结果
上表的注释:
1在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备处理,在黑暗中在振荡器(200rpm)上孵育2小时,然后暴露于光(Helios,1000PAR)或在黑暗中1小时。
2基于3个重复3次的真菌分离株计算平均值,其中每个重复2次测量(总共18次测量)
3平均值表示在21℃孵育24至48小时发生的生长
5相对于未改良的对照计算出的抑制%
实施例32
在该实施例中,评估了用叶绿酸镁和螯合剂的组合处理后对宿主植物本氏烟上的真菌植物病原体葫芦炭疽刺盘孢菌(Colletotrichum orbiculare,Cgm)的控制。在接种Cgm的孢子悬液前约2小时,对本氏烟植物施用处理物。然后将植物暴露于光下12小时,然后黑暗孵育,直到在经水处理的对照植物上明显出现病害症状。一旦发现病害症状,就对病灶进行计数并测量叶面积,以确定病灶数/cm2叶面积。每种处理使用四株重复的植物,并且在光源下将植物随机化。通过发出约180μmol/m2/s的光合有效辐射(PAR)的LED灯提供光照。
表32
1在接种Cgm前约2小时进行处理。
2数字是4次重复的平均值。
4相对于未改良的对照计算出的抑制%。
5.危害植物的毒性评级:0=健康植物,无损害;3=轻微损害;7=严重损害;10=
死亡植物。小于3被认为是可接受的
有关实验的其他信息
茄链格孢菌和灰葡萄孢菌的光动力学抑制(PDI)方案在菌丝体的球体生长方式上有所不同。PDI处理本身和评估以相同的方式执行。
茄链格孢菌的PDI的方案如下(针对实验2和5):
-使茄链格孢菌在番茄琼脂上生长数天。
-将生长中的菌丝体的一部分从茄链格孢菌(无分生孢子)的边缘转移到液态番茄培养基中。
-在恒定搅拌下于26℃孵育过夜。
-将生长好的菌丝体(菌丝体球,直径约2毫米)转移到24孔板中。
-将500微升的PS添加到孔中(PBS用于仅Co和光照的对照)。
-搅拌下孵育100分钟。
-在搅拌下光照120分钟。
-将处理过的菌丝体转移到番茄琼脂板上,并在室温下孵育1周。
-通过计数死亡样品进行评估。
用于灰葡萄孢菌的PDI的方案如下(对于上述实验3和4):
-使灰葡萄孢菌在麦芽蛋白胨琼脂上生长数天。
-将灰葡萄孢菌的孢子转移到液态麦芽蛋白胨培养基中。
-在恒定搅拌下于26℃孵育2-3天。
-将生长好的菌丝体(菌丝体球,直径约2毫米)转移到24孔板中。
-将500μl的PS添加到孔中
-在黑暗中、搅拌下孵育100分钟。
-在搅拌下光照120分钟。
-将处理过的菌丝体转移到麦芽蛋白胨琼脂板上,并在室温下孵育1周。
-通过计数死亡样品进行评估。
关于以上实施例中的大肠杆菌分析测试,使用了以下步骤:
1.将大肠杆菌K-12接种在5mL TSB中,并置于振荡培养箱中过夜。
2.在500mL PBS中稀释培养物(约10^8CFU/mL),并在37℃的振荡培养箱中放置30分钟。
3.使用12mL培养物以及PBS缓冲液和样品化合物的混合物制成15mL样品。
4.放置在LED灯下2个小时(40W/m2)。
5.通过系列稀释将样品稀释至10-4,并将培养对照稀释至10-5,以用于铺板。
6.0.1mL的每个样品一式三份地铺板于在TSA基质上(样品为10-3和10-4,对照为10-4和10-5)。
7.在37℃孵育过夜。
8.第二天早晨对菌落进行计数并记录下来。
Claims (167)
1.一种用于抑制植物的微生物病原体生长的方法,包括:
将包含以下的组合施用于所述植物:
含氮大环化合物,其是选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组的单线态氧光敏剂;和
螯合剂,其增加对所述微生物病原体对所述含氮大环化合物的通透性;以及
使所述植物暴露于光,以激活所述含氮大环化合物并产生活性单线态氧。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述螯合剂以与单独的所述单线态氧光敏剂相比足以增加对微生物病原体生长的抑制的量提供。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其中,以协同有效地抑制所述微生物病原体的生长的量提供所述螯合剂和所述含氮大环化合物。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法,其中,所述还原卟啉选自由二氢卟酚、细菌卟吩、异菌卟吩、咕啉、可吩、及其混合物组成的组。
5.根据权利要求4所述的方法,其中,所述还原卟啉是二氢卟酚。
6.根据权利要求5所述的方法,其中,所述二氢卟酚是叶绿酸。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物与金属络合以形成金属化的含氮大环化合物,选择所述金属使得所述金属化的含氮大环化合物响应于光暴露而产生活性单线态氧。
8.根据权利要求7所述的方法,其中,所述金属选自由Mg、Zn、Pd、Al、Pt、Sn、Si及其混合物组成的组。
9.根据权利要求1至6中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物是无金属的含氮大环化合物,其被选择为使得所述无金属的含氮大化合物响应于光暴露而产生活性单线态氧。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物是经提取的天然存在的化合物。
11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物是合成的化合物。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂包含至少一个羧酸基团或其农业上可接受的盐。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂包含至少两个羧酸基团或其农业上可接受的盐。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂包含至少一个氨基基团或其农业上可接受的盐。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂包含至少两个氨基基团或其农业上可接受的盐。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂包括氨基-羧酸化合物或其农业上可接受的盐。
17.根据权利要求16所述的方法,其中,所述氨基-羧酸化合物包括氨基多元羧酸化合物或其农业上可接受的盐。
18.根据权利要求17所述的方法,其中,所述氨基多元羧酸化合物选自由以下组成的组:乙二胺四乙酸(EDTA)或其农业上可接受的盐、乙二胺-N,N'-二琥珀酸(EDDS)或其农业上可接受的盐、亚氨基二琥珀酸(IDS)或其农业上可接受的盐、及其混合物。
19.根据权利要求17所述的方法,其中,所述氨基多元羧酸或其盐包括聚天冬氨酸或其农业上可接受的盐。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂是金属化的。
21.根据权利要求1至19中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂是无金属的。
22.根据权利要求1到21中任一项所述的方法,其中,所述组合还包含表面活性剂。
23.根据权利要求22所述的方法,其中,所述表面活性剂选自由以下组成的组:乙氧基化醇、聚合物表面活性剂、脂肪酸酯、聚乙二醇、乙氧基化烷基醇、单甘油酯、烷基单甘油酯、及其混合物。
24.根据权利要求22或23所述的方法,其中,所述表面活性剂包括下式的聚乙二醇:
R1-O-(CH2CH2O)f-R2,
其中,R1=H、CH2=CH-CH2或COCH3;R2=H、CH2=CH-CH2或COCH3;并且f≥1。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法,其中,所述组合还包含选自由矿物油、植物油及其混合物组成的组的油。
26.根据权利要求25所述的方法,其中,所述油包括植物油,其选自由以下组成的组:椰子油、芥花油、大豆油、菜籽油、葵花油、红花油、花生油、棉籽油、棕榈油、米糠油、及其混合物。
27.根据权利要求25或26所述的方法,其中,所述油包括矿物油,其选自由石蜡油、带支链的石蜡油、环烷油、芳族油、及其混合物组成的组。
28.根据权利要求25至27中任一项所述的方法,其中,所述油包括聚-α-烯烃(PAO)。
29.根据权利要求25至28中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物和所述油以按重量计约50:1至约1:5000的相对比例施用。
30.根据权利要求25至29中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物以约5μM至约10mM的浓度提供。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物和所述螯合剂以按重量计约50:1至约1:1000的相对比例施用。
32.根据权利要求1至30中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物和所述螯合剂以按重量计约20:1至约1:500的相对比例施用。
33.根据权利要求1至30中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物和所述螯合剂以按重量计约10:1至约1:100的相对比例施用。
34.根据权利要求1至30中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物和所述螯合剂以按重量计约10:1至约1:50的相对比例施用。
35.根据权利要求1至34中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂以约5μM至约5000μM的浓度提供。
36.根据权利要求1至35中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物和所述螯合剂同时施用于所述植物。
37.根据权利要求1至35中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物和所述螯合剂相继施用于所述植物。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的方法,其中,将所述组合施用至所述植物包括将包含所述组合的组分的组合物施用至所述植物。
39.根据权利要求1至38中任一项所述的方法,其中,使所述植物暴露于光包括使所述植物暴露于自然光。
40.根据权利要求1至38中任一项所述的方法,其中,使所述植物暴露于光包括使所述植物暴露于人造光。
41.根据权利要求1至40中任一项所述的方法,其中,通过土壤浸湿、吸液、灌溉、喷洒、雾化、喷雾、浇灌中的至少一种将所述组合施用于所述植物。
42.根据权利要求41所述的方法,其中,喷洒包括叶面喷洒和在所述植物的基部处喷洒中的至少一种。
43.根据权利要求1至42中任一项所述的方法,其中,所述微生物病原体包括真菌病原体。
44.根据权利要求43所述的方法,其中,所述真菌病原体包括灰葡萄孢菌(Botrytiscinereal)、茄链格孢菌(Alternaria solani)和核盘菌(Sclerotinia homoeocarpa)中的至少一种。
45.根据权利要求1至42中任一项所述的方法,其中,所述微生物病原体包括细菌病原体。
46.根据权利要求45所述的方法,其中,所述细菌病原体包括革兰氏阴性细菌。
47.根据权利要求45或46所述的方法,其中,所述细菌病原体包括解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora)、地毯草黄单胞菌(Xanthomonas axonopodis)和大肠杆菌(E.Coli)中的至少一种。
48.根据权利要求1至47中任一项所述的方法,其中,所述植物是非木本作物、木本植物或草皮草。
49.根据权利要求48所述的方法,其中,所述植物是木本植物。
50.根据权利要求49所述的方法,其中,所述木本植物是树木。
51.一种用于抑制植物的微生物病原体的生长的组合物,包含:
含氮大环化合物,其是选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组的单线态氧光敏剂;
螯合剂,其增加所述微生物病原体对所述含氮大环化合物的通透性;和
载液,
其中,在将所述组合物施用于所述植物并使所述植物暴露于光之后,所述含氮大环化合物被激活并产生活性单线态氧。
52.根据权利要求51的组合物,其中,所述螯合剂以与单独的所述单线态氧光敏剂相比足以增加对微生物病原体生长的抑制的量提供。
53.根据权利要求51或52所述的组合物,其中,以协同有效地抑制所述微生物病原体的生长的量提供所述螯合剂和所述含氮大环化合物。
54.根据权利要求51至53中任一项所述的组合物,其中,所述还原卟啉选自由二氢卟酚、细菌卟吩、异菌卟吩、咕啉、可吩、及其混合物组成的组。
55.根据权利要求54所述的组合物,其中,所述还原卟啉是二氢卟酚。
56.根据权利要求55所述的组合物,其中,所述二氢卟酚是叶绿酸。
57.根据权利要求51至56中任一项所述的组合物,其中,所述含氮大环化合物与金属络合以形成金属化的含氮大环化合物,选择所述金属使得所述金属化的含氮大环化合物响应于光暴露而产生活性单线态氧。
58.根据权利要求57所述的组合物,其中,所述金属选自由Mg、Zn、Pd、Al、Pt、Sn、Si及其混合物组成的组。
59.根据权利要求51至56中任一项所述的组合物,其中,所述含氮大环化合物是无金属的含氮大环化合物,其被选择为使得所述无金属的含氮大化合物响应于光暴露而产生活性单线态氧。
60.根据权利要求51至59中任一项所述的组合物,其中,所述含氮大环化合物是经提取的天然存在的化合物。
61.根据权利要求51至59中任一项所述的组合物,其中,所述含氮大环化合物是合成的化合物。
62.根据权利要求51至61中任一项所述的组合物,其中,所述螯合剂包含至少一个羧酸基团或其农业上可接受的盐。
63.根据权利要求51至62中任一项所述的组合物,其中,所述螯合剂包含至少两个羧酸基团或其农业上可接受的盐。
64.根据权利要求51至63中任一项所述的组合物,其中,所述螯合剂包含至少一个氨基基团或其农业上可接受的盐。
65.根据权利要求51至64中任一项所述的组合物,其中,所述螯合剂包含至少两个氨基基团或其农业上可接受的盐。
66.根据权利要求51至65中任一项所述的组合物,其中,所述螯合剂包括氨基-羧酸化合物或其农业上可接受的盐。
67.根据权利要求66所述的组合物,其中,所述氨基-羧酸化合物包括氨基多元羧酸化合物或其农业上可接受的盐。
68.根据权利要求67所述的组合物,其中,所述氨基多元羧酸化合物选自由以下组成的组:乙二胺四乙酸(EDTA)或其农业上可接受的盐、乙二胺-N,N'-二琥珀酸(EDDS)或其农业上可接受的盐、亚氨基二琥珀酸(IDS)或其农业上可接受的盐、及其混合物。
69.根据权利要求67所述的组合物,其中,所述氨基多元羧酸或其盐包括聚天冬氨酸或其农业上可接受的盐。
70.根据权利要求61至69中任一项所述的组合物,其中所述螯合剂是金属化的。
71.根据权利要求61至69中任一项所述的组合物,其中所述螯合剂是无金属的。
72.根据权利要求51至71中任一项所述的组合物,还包含表面活性剂。
73.根据权利要求72所述的组合物,其中,所述表面活性剂选自由以下组成的组:乙氧基化醇、聚合物表面活性剂、脂肪酸酯、聚乙二醇、乙氧基化烷基醇、单甘油酯、烷基单甘油酯、及其混合物。
74.根据权利要求72或73所述的组合物,其中,所述表面活性剂包括下式的聚乙二醇:
R1-O-(CH2CH2O)fR2,
其中,R1=H、CH2=CH-CH2或COCH3;R2=H、CH2=CH-CH2或COCH3;并且f≥1。
75.根据权利要求51至74中任一项所述的组合物,其还包含选自由矿物油、植物油及其混合物组成的组的油。
76.根据权利要求75所述的组合物,其中,所述油包括植物油,其选自由以下组成的组:椰子油、芥花油、大豆油、菜籽油、葵花油、红花油、花生油、棉籽油、棕榈油、米糠油、及其混合物。
77.根据权利要求75或76所述的组合物,其中,所述油包括矿物油,其选自由石蜡油、带支链的石蜡油、环烷油、芳族油、及其混合物组成的组。
78.根据权利要求75至77中任一项所述的组合物,其中,所述油包括聚-α-烯烃(PAO)。
79.根据权利要求75至78中任一项所述的组合物,其中,所述含氮大环化合物和所述油以按重量计约50:1至约1:5000的相对比例存在。
80.根据权利要求75至79中任一项所述的组合物,其中,所述含氮大环化合物的浓度为约5μM至约10mM。
81.根据权利要求51至80中任一项所述的组合物,其中,所述含氮大环化合物和所述螯合剂以按重量计约50:1至约1:1000的相对比例存在。
82.根据权利要求51至80中任一项所述的组合物,其中,所述含氮大环化合物和所述螯合剂以按重量计约20:1至约1:500的相对比例存在。
83.根据权利要求51至80中任一项所述的组合物,其中,所述含氮大环化合物和所述螯合剂以按重量计约10:1至约1:100的相对比例存在。
84.根据权利要求51至80中任一项所述的组合物,其中,所述含氮大环化合物和所述螯合剂以按重量计约10:1至约1:50的相对比例存在。
85.根据权利要求51至84中任一项所述的组合物,其中,所述螯合剂的浓度为约5μM至约5000μM。
86.根据权利要求51至85中任一项所述的组合物,其中,所述载液包括水。
87.根据权利要求51至86中任一项所述的组合物,其中,所述载液包括水包油乳液。
88.根据权利要求51至87中任一项所述的组合物,用于通过土壤浸湿、吸液、灌溉、喷洒、雾化、喷雾、浇灌中的至少一种施用于所述植物。
89.根据权利要求88所述的组合物,其中,喷洒包括叶面喷洒和在所述植物的基部处喷洒中的至少一种。
90.根据权利要求51至89中任一项所述的组合物,用于抑制真菌病原体的生长。
91.根据权利要求90所述的组合物,其中,所述真菌病原体包括灰葡萄孢菌、茄链格孢菌和核盘菌中的至少一种。
92.根据权利要求51至89中任一项所述的组合物,用于抑制细菌病原体的生长。
93.根据权利要求92所述的组合物,其中,所述细菌病原体包括革兰氏阴性细菌。
94.根据权利要求92或93所述的组合物,其中,所述细菌病原体包括解淀粉欧文氏菌、地毯草黄单胞菌和大肠杆菌中的至少一种。
95.根据权利要求51至94中任一项所述的组合物,其中,所述植物是非木本作物、木本植物或草皮草。
96.根据权利要求95所述的组合物,其中,所述植物是木本植物。
97.根据权利要求96所述的组合物,其中,所述木本植物是树木。
98.根据权利要求96所述的组合物,其中,所述木本植物是果树。
99.根据权利要求95所述的组合物,其中,所述植物是草皮草。
100.根据权利要求95所述的组合物,其中,所述植物是非木本作物。
101.一种用于抑制植物的真菌病原体的生长的方法,包括:
将含氮大环化合物施用于所述植物,所述含氮大环化合物是选自由卟啉、还原卟啉及其混合物组成的组的单线态氧光敏剂;以及
使所述植物暴露于光,以激活所述含氮大环化合物并产生活性单线态氧。
102.根据权利要求101所述的方法,其中,所述还原卟啉选自由卟啉、二氢卟酚、细菌卟吩、异菌卟吩、咕啉、可吩、及其混合物组成的组。
103.根据权利要求102所述的方法,其中,所述还原卟啉是二氢卟酚。
104.根据权利要求103所述的方法,其中,所述二氢卟酚是叶绿酸。
105.根据权利要求101至104中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物与金属络合以形成金属化的含氮大环化合物,选择所述金属使得所述金属化的含氮大环化合物响应于光暴露而产生活性单线态氧。
106.根据权利要求105所述的方法,其中,所述金属选自由Mg、Zn、Pd、Al、Pt、Sn、Si及其混合物组成的组。
107.根据权利要求101至104中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物是无金属的含氮大环化合物,其被选择为使得所述无金属的含氮大化合物响应于光暴露而产生活性单线态氧。
108.根据权利要求101至107中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物是经提取的天然存在的化合物。
109.根据权利要求101至107中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物是合成的化合物。
110.根据权利要求101至109中任一项所述的方法,还包括将表面活性剂施用于所述植物。
111.根据权利要求110所述的方法,其中,所述表面活性剂选自由以下组成的组:乙氧基化醇、聚合物表面活性剂、脂肪酸酯、聚乙二醇、乙氧基化烷基醇、单甘油酯、烷基单甘油酯、及其混合物。
112.根据权利要求110或111所述的方法,其中,所述表面活性剂包括下式的聚乙二醇:
R1-O-(CH2CH2O)f-R2,
其中,R1=H、CH2=CH-CH2或COCH3;R2=H、CH2=CH-CH2或COCH3;并且f≥1。
113.根据权利要求101至112中任一项所述的方法,还包括将选自由矿物油、植物油及其混合物组成的组的油施用于所述植物。
114.根据权利要求113所述的方法,其中,所述油包括植物油,其选自由以下组成的组:椰子油、芥花油、大豆油、菜籽油、葵花油、红花油、花生油、棉籽油、棕榈油、米糠油、及其混合物。
115.根据权利要求113或114所述的方法,其中,所述油包括矿物油,其选自由石蜡油、带支链的石蜡油、环烷油、芳族油、及其混合物组成的组。
116.根据权利要求113至115中任一项所述的方法,其中,所述油包括聚-α-烯烃(PAO)。
117.根据权利要求113至116中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物和所述油以按重量计约50:1至约1:5000的相对比例施用。
118.根据权利要求101至117中任一项所述的方法,其中,所述含氮大环化合物以约5μM至约10mM的浓度提供。
119.根据权利要求101至118中任一项所述的方法,其中,使所述植物暴露于光包括使所述植物暴露于自然光。
120.根据权利要求101至118中任一项所述的方法,其中,使所述植物暴露于光包括使所述植物暴露于人造光。
121.根据权利要求101至120中任一项所述的方法,其中,喷洒包括叶面喷洒和在所述植物的基部处喷洒中的至少一种。
122.根据权利要求101至121中任一项所述的方法,其中,所述真菌病原体包括灰葡萄孢菌、茄链格孢菌和核盘菌中的至少一种。
123.根据权利要求101至122中任一项所述的方法,其中,所述植物是非木本作物、木本植物或草皮草。
124.根据权利要求123所述的方法,其中,所述植物是木本植物。
125.根据权利要求124所述的方法,其中,所述木本植物是树木。
126.一种用于抑制植物的微生物病原体的生长的方法,包括:
将包含以下的组合施用于所述植物:
光敏的二芳基庚烷化合物,其是单线态氧光敏剂;和
螯合剂,其增加所述微生物病原体对所述光敏的二芳基庚烷化合物的通透性;以及
使所述植物暴露于光,以激活所述光敏的二芳基庚烷化合物并产生活性单线态氧。
127.根据权利要求126所述的方法,其中,所述光敏剂化合物为线性的二芳基庚烷化合物。
128.根据权利要求127所述的方法,其中,所述光敏的二芳基庚烷化合物包括姜黄素。
129.根据权利要求126至128中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂包含至少一个羧酸基团、或其农业上可接受的盐。
130.根据权利要求126至129中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂包含至少两个羧酸基团、或其农业上可接受的盐。
131.根据权利要求126至130中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂包含至少一个氨基基团、或其农业上可接受的盐。
132.根据权利要求126至131中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂包含至少两个氨基基团、或其农业上可接受的盐。
133.根据权利要求126至132中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂包含氨基-羧酸化合物、或其农业上可接受的盐。
134.根据权利要求133所述的方法,其中,所述氨基-羧酸化合物包括氨基多元羧酸化合物、或其农业上可接受的盐。
135.根据权利要求134所述的方法,其中,所述氨基多元羧酸化合物选自由以下组成的组:乙二胺四乙酸(EDTA)或其农业上可接受的盐、乙二胺-N,N'-二琥珀酸(EDDS)或其农业上可接受的盐、亚氨基二琥珀酸(IDS)或其农业上可接受的盐、及其混合物。
136.根据权利要求133所述的方法,其中,所述氨基多元羧酸或其盐包括聚天冬氨酸或其农业上可接受的盐。
137.根据权利要求126至136中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂是金属化的。
138.根据权利要求126至136中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂是无金属的。
139.根据权利要求126至138中任一项所述的方法,其中所述组合还包含表面活性剂。
140.根据权利要求139所述的方法,其中,所述表面活性剂选自由以下组成的组:乙氧基化醇、聚合物表面活性剂、脂肪酸酯、聚乙二醇、乙氧基化烷基醇、单甘油酯、烷基单甘油酯、及其混合物。
141.根据权利要求139或140所述的方法,其中,所述表面活性剂包括下式的聚乙二醇:
R1-O-(CH2CH2O)f-R2,
其中,R1=H、CH2=CH-CH2或COCH3;R2=H、CH2=CH-CH2或COCH3;并且f≥1。
142.根据权利要求126至174中任一项所述的方法,其中,所述组合还包含选自由矿物油、植物油及其混合物组成的组的油。
143.根据权利要求142所述的方法,其中,所述油包括植物油,其选自由以下组成的组:椰子油、芥花油、大豆油、菜籽油、葵花油、红花油、花生油、棉籽油、棕榈油、米糠油、及其混合物。
144.根据权利要求142或143所述的方法,其中,所述油包括矿物油,其选自由石蜡油、带支链的石蜡油、环烷油、芳族油、及其混合物组成的组。
145.根据权利要求142至144中任一项所述的方法,其中,所述油包括聚-α-烯烃(PAO)。
146.根据权利要求126至145中任一项所述的方法,其中,所述光敏的二芳基庚烷化合物和所述油以按重量计约50:1至约1:5000的相对比例施用。
147.根据权利要求126至146中任一项所述的方法,其中,所述光敏的二芳基庚烷化合物以约5μM至约10mM的浓度提供。
148.根据权利要求126至147中任一项所述的方法,其中,所述光敏的二芳基庚烷化合物和所述螯合剂以按重量计约50:1至约1:1000的相对比例施用。
149.根据权利要求126至147中任一项所述的方法,其中,所述光敏的二芳基庚烷化合物和所述螯合剂以按重量计约20:1至约1:500的相对比例施用。
150.根据权利要求126至147中任一项所述的方法,其中,所述光敏的二芳基庚烷化合物和所述螯合剂以按重量计约10:1至约1:100的相对比例施用。
151.根据权利要求126至147中任一项所述的方法,其中,所述光敏的二芳基庚烷化合物和所述螯合剂以按重量计约10:1至约1:50的相对比例施用。
152.根据权利要求126至151中任一项所述的方法,其中,所述螯合剂以约5μM至约5000μM的浓度提供。
153.根据权利要求126至152中任一项所述的方法,其中,所述光敏的二芳基庚烷化合物和所述螯合剂同时施用于所述植物。
154.根据权利要求126至152中任一项所述的方法,其中,所述光敏的二芳基庚烷化合物和所述螯合剂相继施用于所述植物。
155.根据权利要求126至154中任一项所述的方法,其中,将所述组合施用至所述植物包括将包含所述组合的组分的组合物施用至所述植物。
156.根据权利要求126至155中任一项所述的方法,其中,使所述植物暴露于光包括使所述植物暴露于自然光。
157.根据权利要求126至155中任一项所述的方法,其中,使所述植物暴露于光包括使所述植物暴露于人造光。
158.根据权利要求126至157中任一项所述的方法,其中,通过土壤浸湿、吸液、灌溉、喷洒、雾化、喷雾、浇灌中的至少一种将所述组合施用于所述植物。
159.根据权利要求158所述的方法,其中,喷洒包括叶面喷洒和在所述植物的基部处喷洒中的至少一种。
160.根据权利要求126至159所述的方法,其中,所述微生物病原体包括真菌病原体。
161.根据权利要求160所述的方法,其中,所述真菌病原体包括灰葡萄孢菌、茄链格孢菌和核盘菌中的至少一种。
162.根据权利要求126至159中任一项所述的方法,其中,所述微生物病原体包括细菌病原体。
163.根据权利要求162所述的方法,其中,所述细菌病原体包括革兰氏阴性细菌。
164.根据权利要求163所述的方法,其中,所述细菌病原体包括解淀粉欧文氏菌、地毯草黄单胞菌和大肠杆菌中的至少一种。
165.根据权利要求126至164中任一项所述的方法,其中,所述植物是非木本作物、木本植物或草皮草。
166.根据权利要求165所述的方法,其中,所述植物是木本植物。
167.根据权利要求165所述的方法,其中,所述木本植物是树木。
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