BR112019025223B1 - Composição médica e cosmética biodegradável reabsorvível compreendendo poli(carbonato de 1,3-trimetileno) - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se ao campo de composições médicas e cosméticas biodegradáveis reabsorvíveis.

Description

Campo da Invenção

[001] A presente invenção refere-se ao campo de composições médicas e cosméticas biodegradáveis reabsorvíveis.

Antecedentes da Técnica

[002] Com o aumento da idade e/ou como consequência de certas doenças, os tecidos moles do corpo, incluindo músculos, pele e gordura, podem diminuir, afetando a aparência e/ou reduzindo a função. Por exemplo, os músculos esfincterianos que controlam muitas das funções autonômicas do corpo, como o controle da função da bexiga e o refluxo gástrico, diminuem com a idade e doenças. Vários compostos de preenchimento médico e cosmético (também chamados de compostos de aumento de tecido ou compostos de correção de tecido) já foram desenvolvidos. Preenchimentos de origem animal, tal como o colágeno bovino injetável, têm várias desvantagens relacionadas principalmente ao risco de alergia e à ameaça de doenças, tais como a doença de Kreutzfeld Jacob. Como alternativa ao colágeno bovino injetável, outros implantes de preenchimento compreendendo uma suspensão ou emulsão de partículas feitas de unidades de repetição de ácido lático e/ou ácido glicólico poliméricas (US 2003/093157 e WO 98/56431) foram desenvolvidos. Outros preenchimentos são baseados em, por exemplo, poli-e- caprolactona (PCL) (WO2009/014441) ou ácido hialurônico (HA) (Wang et al, 2007).

[003] Uma característica chave de um preenchimento dérmico eficaz e de longa duração é que ele induz uma resposta de corpo estranho em uma extensão que resulta na síntese de novo de colágeno, preferencialmente colágeno tipo III e, além disso, de preferência no colágeno tipo I. De fato, mas sem estar limitado pela teoria, a resposta ideal do corpo estranho a um preenchimento dérmico de longa duração é limitada à síntese de novo de colágeno, de preferência, colágeno tipo III e mais preferencialmente também e, finalmente, colágeno tipo I, além da reabsorção do produto; a formação de colágeno deve ser resultado de uma resposta normal do corpo estranho e reorganização e cicatrização do tecido. Uma resposta de corpo estranho muito forte ao preenchimento e/ou a qualquer composto do mesmo pode resultar em inflamação grave, formação de nódulos e outros efeitos indesejados.

[004] Os preenchimentos da técnica anterior têm várias desvantagens. A reabsorção in vivo de HA linear não reticulado é bastante rápida, pois é ressorvida em poucos dias ou semanas. Para aumentar o tempo de reabsorção, a HA requer reticulação química. Um reticulador químico pode ser, no entanto, quantidades tóxicas e residuais de reticulador estão presentes no HA reticulado injetado que é usado para aumento de tecido. Adicionalmente, a degradação do HA resulta na formação de produtos ácidos que podem induzir e/ou intensificar a resposta inflamatória. É importante ressaltar que não há evidências de que os preenchimentos de HA estimulem a síntese de novo e a produção de quantidades significativas de qualquer tipo de colágeno que, após reabsorção completa do produto, substitua a perda de volume, provendo um efeito prolongado e de longa duração do preenchimento.

[005] Um estudo (Wang et al, 2007) confirmou que o próprio HA reticulado não induz a produção de colágeno. Embora pequenos depósitos de colágeno tenham sido observados ao redor do preenchimento de AH após a injeção na pele do antebraço fotodegradada, isso é considerado devido ao estiramento mecânico dos fibroblastos da pele, como resultado da injeção do produto e não devido ao produto de AH ou a qualquer componente do mesmo.

[006] Os preenchimentos dérmicos feitos com polímeros sintéticos como PCL, ácido poliglicólico (PGA), ácido poli(l-lático) (PLLA) também têm desvantagens. Antes de tudo, esses polímeros são essencialmente degradados por erosão em massa e, como o HA, sua degradação resulta na formação inevitável de produtos ácidos. Adicionalmente, estes polímeros são de estrutura semicristalina, isto é, contêm regiões amorfas e cristalinas, e as regiões amorfas dos polímeros são degradadas antes das áreas cristalinas. Como resultado, as partículas cristalinas que (por degradação) permanecem no tecido circundante podem alterar o perfil de biocompatibilidade do produto - sua morfologia e forma podem posteriormente irritar o tecido e causar inflamação. Por exemplo, verificou-se, para o PLLA, que perto do local original do implante se formam partículas estáveis de alta cristalinidade após a degradação, o que parece estar relacionado a um inchaço subcutâneo em pacientes três anos após a cirurgia. Um composto totalmente amorfo ou não cristalino para aumento de tecido é, portanto, preferido.

[007] Por conseguinte, existe uma necessidade de um preenchimento sintético melhorado que seja reabsorvido essencialmente através de um mecanismo de erosão da superfície; que não requer reticulação através de compostos químicos tóxicos; que é reabsorvido por um processo que não libera subprodutos ácidos; de preferência, tem um tempo de reabsorção ajustável e, o que é mais importante, induz uma resposta apropriada de corpo estranho com síntese de novo de colágeno, de preferência tipo III e mais preferencialmente também e, finalmente, tipo I sem efeitos colaterais indesejáveis.

Sumário da invenção

[008] A invenção provê uma composição reabsorvível in vivo compreendendo um polímero de poli(1,3-trimetileno carbonato) (PTMC) e um carreador de gel reabsorvível, em que o carreador de gel está na forma de um gel aquoso, e em que o PTMC está na forma micropartículas com um diâmetro que varia entre 1 e 200 μm.

[009] A invenção provê adicionalmente uma composição reabsorvível in vivo compreendendo um polímero de poli(1,3- trimetileno carbonato) (PTMC) e um carreador de gel reabsorvível, em que o carreador de gel é, de preferência, na forma de um gel aquoso.

[010] A invenção provê adicionalmente o uso de uma composição reabsorvível in vivo de acordo com a invenção para a preparação de um medicamento para o tratamento de uma anormalidade ou deformidade da pele, para o controle da função da bexiga, para o controle do refluxo gástrico, para o tratamento da disfunção erétil e/ou ejaculação precoce, para tratamento de cordas vocais e/ou para tratamento de doenças das articulações e cartilagens.

[011] A invenção provê adicionalmente o uso de uma composição reabsorvível in vivo de acordo com a invenção para o tratamento de uma anormalidade ou deformidade da pele, para controlar a função da bexiga, para controlar o refluxo gástrico, para tratar a disfunção erétil e/ou ejaculação precoce, para tratar as cordas vocais e/ou para tratamento de doenças das articulações e cartilagens.

[012] A invenção provê adicionalmente um método de tratamento de uma anormalidade ou deformidade da pele, controle da função da bexiga, controle do refluxo gástrico, tratamento da disfunção erétil e/ou ejaculação precoce, tratamento das cordas vocais e/ou tratamento de doenças das articulações e cartilagens que compreendem a administração de uma composição reabsorvível in vivo de acordo com a invenção.

[013] A invenção provê adicionalmente o uso de uma composição reabsorvível in vivo de acordo com a invenção em uma aplicação cosmética ou estética, de preferência uma aplicação para aumentar o tecido, mais preferencialmente uma aplicação como um implante dérmico ou preenchimento dérmico.

Descrição Detalhada da Invenção

[014] Os inventores chegaram a um complexo que, surpreendentemente, tem todas as características necessárias; o referido composto é poli(carbonato de 1,3- trimetileno) (PTMC). Quando comparado ao HA, o PTMC resulta em uma estimulação e uma síntese melhoradas de colágeno, como já observado após quatro semanas (ver exemplos abaixo na presente invenção), criando um efeito de duração mais longa. Em vista de outros preenchimentos sintéticos, o PTMC é um composto amorfo, não cristalino, que é degradado enzimaticamente durante a reabsorção. Consequentemente, a reabsorção do PTMC envolve um comportamento de degradação por erosão da superfície pelo qual nenhum produto ácido é formado.

[015] Os polímeros à base de PTMC e carbonato de trimetileno (TMC) têm sido extensivamente investigados quanto ao seu potencial uso em várias aplicações biomédicas. Por exemplo, o PTMC é usado na preparação de dispositivos ortopédicos bioreabsorvíveis e outros implantes de reforço de tecidos, barreiras antiaderência abdominais, andaimes para manipulação de tecidos ósseos ou regeneração guiada por nervos, revestimento e enxertos de stents para aplicações cardiovasculares. Nestas aplicações, o PTMC é frequentemente misturado com outros polímeros sintéticos bioreabsorvíveis, tais como, PGA e PEG ou PGA sozinho, ou o monômero TMC é copolimerizado com os monômeros correspondentes dos polímeros bioreabsorvíveis. Gui et al (2010), por exemplo, refere-se ao desenvolvimento de um andaime de polímero biodegradável para manipulação de tecidos vasculares compreendido principalmente de PGA, em que PTMC e PEG foram adicionados para modular o comportamento de degradação. A aplicação em Gui et al não é uma aplicação intradérmica, dérmica ou subcutânea e, importante, não há sugestão de que o PTMC possa induzir a síntese de novo de colágeno, muito menos já após quatro semanas. Adicionalmente, o copolímero em Gui et al. compreende o polímero PGA semicristalino, que durante a reabsorção resulta na produção de ácido. Mukherjee et al (2009) refere-se ao andaime biorreabsorvível para o crescimento de células condrogênicas na manipulação de tecidos de cartilagem, em que o PGA foi usado como polímero básico com PTMC adicionado ao mesmo. Esta não é uma aplicação intradérmica, dérmica ou subcutânea, e não há sugestão de que o PTMC possa induzir a síntese de novo de colágeno, muito menos já após quatro semanas. Adicionalmente, o copolímero em Mukherjee et al. compreende o PGA semicristalino, que durante a reabsorção resulta na produção de ácido. Bat et al (2010) refere-se à investigação dos filmes de degradação in vivo de PTMC, PCL e copolímero após implante subcutâneo. É importante ressaltar que não foram encontradas evidências de que o PTMC possa induzir a síntese de novo de colágeno, muito menos já após quatro semanas.

[016] Por conseguinte, a invenção provê uma composição reabsorvível in vivo compreendendo um polímero de poli(1,3- trimetileno carbonato) (PTMC) e um carreador de gel reabsorvível, em que o carreador de gel é, de preferência, na forma de um gel aquoso. O carreador de gel de acordo com a invenção pode ser qualquer carreador de gel adequado conhecido da pessoa habilitada na técnica e pode ser um carreador natural ou sintético. A referida composição é referida na presente invenção como uma composição de acordo com a invenção. O termo reabsorvível e seu sinônimo biodegradável tem na presente invenção seu significado como conhecido no campo e tipicamente significa que a composição de acordo com a invenção será degradada in vivo, isto é, dentro do corpo de um vertebrado, de preferência um mamífero. De preferência, os termos biodegradabilidade e capacidade de reabsorção da composição de acordo com a invenção são interpretados à vista do PTMC, uma vez que este tem tipicamente um tempo de biodegradabilidade e ressorssabilidade in vivo mais longo (tempo de reabsorção) sobre o carreador em gel.

[017] De preferência, o carreador em gel reabsorvível compreende a característica viscoelástica de pseudoplasticidade. Por conseguinte, a composição de acordo com a invenção compreende, de preferência, a característica viscoelástica de pseudoplasticidade. O termo reológico pseudoplasticidade aqui tem seu significado como conhecido no campo e normalmente significa o comportamento não newtoniano de fluidos cuja viscosidade diminui sob deformidade por cisalhamento. A deformidade por cisalhamento é aqui definida como uma tensão paralela a um elemento, em contraste com uma deformidade normal que é perpendicular a um elemento.

[018] De preferência, o carreador em gel é um carreador em gel de polissacarídeo e compreende ou é compreendido de um polissacarídeo (também conhecido como agente de aumento da viscosidade) selecionado do grupo que consiste em um polissacarídeo derivado de celulose, um amido, uma quitina, uma quitosana, um ácido hialurônico, um polissacarídeo hidrofobicamente modificado, um alginato, um carragenano, um ágar, uma agarose, um complexo intramolecular de um polissacarídeo, um oligossacarídeo, um polissacarídeo macrocíclico e uma mistura dos mesmos. Mais preferencialmente, o carreador em gel de polissacarídeo compreende ou é compreendido de um polissacarídeo derivado de celulose, de preferência selecionado do grupo que consiste em carboximetilcelulose, carboximetilcelulose sódica, agar metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, etilcelulose, celulose microcristalina, celulose oxidada e uma mistura dos mesmos; ainda mais preferencialmente, o carreador em gel de polissacarídeo reabsorvível compreende ou é compreendido de carboximetilcelulose sódica. A pessoa habilitada na técnica compreenderá que outros agentes podem estar presentes no carreador em gel, tais como, sem limitação, (i) um agente de aumento de densidade que pode, por exemplo, ser selecionado do grupo que consiste em sorbitol, manitol e frutose; outros agentes de densidade adequados também podem ser usados, (ii) um agente umectante de tonicidade, tal como um polissorbato (por exemplo, Tween 20, 40, 60 ou 80); outros agentes umectantes de tonicidade adequados também podem ser usados. Um carreador em gel reabsorvível de acordo com a invenção pode incluir quantidades variáveis de um agente intensificador de densidade e/ou um agente intensificador de umectação na tonicidade.

[019] A composição de acordo com a invenção pode ser armazenada em um recipiente na forma de uma suspensão estéril. De preferência, um recipiente é uma seringa preenchida pronta para uso. A composição pode em uma modalidade ser liofilizada e reconstituída extemporaneamente para preparações injetáveis. Alternativamente, um recipiente pode ser um frasco. Na presente invenção também como para uma seringa, um frasco para injetáveis pode conter a composição de acordo com a invenção pronta para ser usada. A água usada para reconstituir extemporaneamente o gel em uma seringa ou em um frasco pode ser água destilada, água destilada dupla, água estéril ou PBS (solução salina tamponada com fosfato). Por conseguinte, a invenção também provê um recipiente, de preferência uma seringa pronta para usar, compreendendo a composição de acordo com a invenção. Um carreador em gel reabsorvível de acordo com a invenção pode compreender adicionalmente um componente selecionado do grupo que consiste em um crioprotetor e um agente tamponante. Um agente crioprotetor é um produto químico que inibe ou reduz a formação de cristais de gelo prejudiciais nos tecidos biológicos durante o resfriamento. Os agentes crioprotetores adequados incluem, mas não estão limitados a, açúcares e carboidratos, tais como, d-manitol, lactose, sacarose, frutose, sorbitol e dextrano, com o d-manitol sendo preferido. A concentração de um crioprotetor no carreador do gel pode variar dependendo da aplicação pretendida e da identidade do crioprotetor escolhido. Um agente tamponante é um composto químico que é adicionado ou compostos que são adicionados a uma solução para permitir que a solução resista a mudanças no pH como um resultado de diluição ou pequenas adições de ácidos ou bases. Os sistemas de tampão eficazes empregam soluções que contêm concentrações grandes e aproximadamente iguais de um par ácido-base conjugado (ou agentes tamponantes). Um agente tamponante empregado na presente invenção pode ser qual(ais)quer composto(s) químico(s) farmaceuticamente aceitável(eis) incluindo, mas não limitado a, sais (ácidos e/ou bases conjugado(a)s) de fosfatos e citratos. De preferência, o carreador em gel de polissacarídeo reabsorvível compreende solução salina tamponada com fosfato (PBS).

[020] Na composição de acordo com a invenção, o PTMC pode ser qualquer PTMC conhecido pela pessoa habilitada na técnica. De preferência, o PTMC é um homopolímero, um polímero linear, um polímero ramificado, um copolímero, um terpolímero, uma mistura ou compósito de diferentes tipos de homo/co/ter-polímeros ou um polímero reticulado. Uma mistura de polímeros de acordo com a invenção compreendendo PTMC compreende adicionalmente de preferência um polímero selecionado do grupo que consiste em PCL, PGA, PLLA, PEG, PVA e PVP. A reticulação pode ser realizada usando qualquer método conhecido da pessoa habilitada na técnica, como, mas não limitada à, reticulação química, reticulação térmica e reticulação por radiação; é preferida a reticulação não química (por exemplo, reticulação por radiação ou calor sem adição de qualquer agente de reticulação químico), uma vez que os produtos químicos usados para reticulação podem ser tóxicos. De preferência, o PTMC tem um peso molecular médio numérico (Mn) de 500 a >500.000 g/mol, de preferência 500 a 600.000 g/mol, mais preferencialmente 500 a 500.000 g/mol, mais preferencialmente 100.000 a 350.000 g/mol ou 50.000 a 600.000 g/mol, como 50.000, 100.000, 125.000, 150.000, 165.000, 185.000 200.000, 225.000, 250.000, 265.000, 285.000, 300.000, 325.000, 350.000, 365.000, 38.000.000, 400.000, 425.00, 450.000, 465.000, 485.000, 490.000, 500.000, 525.000, 550.000, 565.000, 585.000 e 600.000 g/mol. Também são preferidas faixas de peso molecular médio numérico (Mn), tal como baixo peso molecular entre 100.000 e 200.000 g/mol, peso molecular médio de 200.000 a 300.000 g/mol, e alto peso molecular de 300.000 e 600.000 g/mol. A pessoa habilitada na técnica compreenderá que o peso molecular médio numérico (Mn) de um polímero não é exato como as figuras tipicamente listadas; assim, os números de Mn podem ser interpretados como ‘cerca de o peso molecular médio numérico (Mn), ou seja, o valor + 10%. Por conseguinte, de preferência, o PTMC tem um peso molecular médio numérico (Mn) de cerca de 500 a > cerca de 500.000 g/mol, de preferência cerca de 500 a cerca de 600.000 g/mol, mais preferencialmente cerca de 500 a cerca de 500.000 g/mol, mais preferencialmente cerca de 100.000 a cerca de 350.000 g/mol ou cerca de 50.000 a cerca de 600.000 g/mol, tal como cerca de 50.000, cerca de 100.000, cerca de 125.000, cerca de 150.000, cerca de 165.000, cerca de 185.000 , cerca de 200.000, cerca de 225.000, cerca de 225.000, cerca de 250.000, cerca de 265.000, cerca de 285.000, cerca de 300.000, cerca de 325.000, cerca de 350.000, cerca de 365.000, cerca de 385.000, cerca de 400.000, cerca de 425.000, cerca de 450.000, cerca de 465.000, cerca de 485.000, cerca de 490.000, cerca de 500.000, cerca de 525.000, cerca de 550.000, cerca de 565.000, cerca de 585.000, e cerca de 600.000 g/mol. Também são preferidas faixas de peso molecular médio numérico (Mn), tal como baixo peso molecular entre cerca de 100.000 e cerca de 200.0 00, peso molecular médio de cerca de 200. 000 a cerca de 300. 000 e alto peso molecular de cerca de 300.000 e 600.000. De preferência, a quantidade de PTMC em vista do polímero sintético total é de pelo menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 75%, 80%, 85%, 90% ou pelo menos pelo menos 95%. Mais preferencialmente, a quantidade de PTMC em vista do polímero sintético total é de 100%.

[021] Na composição de acordo com a invenção, o PTMC pode estar em qualquer forma conhecida da pessoa habilitada na técnica. De preferência, o PTMC está na forma de uma partícula, tais como, nanopartículas e micropartículas; de preferência, na forma de micropartículas (também denominada “microesfera”). Essa partícula d PTMC de preferência compreende pelo menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% ou pelo menos 95% de PTMC. Mais preferencialmente, a partícula de PTMC consiste essencialmente em PTMC ou consiste em 100% de PTMC.

[022] De preferência, as micropartículas de acordo com a invenção têm pelo menos uma das seguintes características: i) um diâmetro que varia entre 0,1 e 500 μm, preferencialmente entre 1 e 200 μm, mais preferencialmente entre 5 e 200 μm, mais preferencialmente entre 20 e 200 μm, ainda mais preferencialmente entre 20 e 150 μm, ainda mais preferencialmente entre 30 e 90 μm, ainda mais preferencialmente entre 25 e 75 μm, ainda mais preferencialmente entre 38 e 75 μm, ainda mais preferencialmente entre 25 e 50 μm. Uma faixa de diâ metro mais preferida é de 40 μm ± 10% ou ± 20%, tal como um diâmetro variando entre 32 e 48 μm. ii) densidade homogênea, forma e conteúdo, de preferência em toda a micropartícula, iii) forma esférica (essencialmente redonda) e suavidade da superfície e, iv) microesferas essencialmente esféricas.

[023] De preferência, essas micropartículas têm conteúdo e densidade homogêneas em toda a micropartícula, são essencialmente redondas e têm superfícies lisas.

[024] Em uma modalidade, que pode ser combinada com outras modalidades, a invenção provê uma composição reabsorvível in vivo compreendendo um polímero de poli(1,3- trimetileno carbonato) (PTMC) e um carreador em gel reabsorvível, em que o carreador em gel está na forma de um gel de polissacarídeo aquoso, em que o PTMC está na forma de micropartículas com um diâmetro variando entre 1 e 200 μm, e em que as micropartículas têm conteúdo e densidade homogêneas ao longo da micropartícula, são essencialmente redondas e têm superfícies lisas. Tais micropartículas podem ter um diâmetro variando entre 5 e 200 μm, mais preferencialmente entre 20 e 200 μm, mais preferencialmente entre 20 e 150 μm, ainda mais preferencialmente entre 25 e 150 μm, ainda mais preferencialmente entre 30 e 90 μm, ainda mais preferencialmente entre 25 e 75 μm, ainda mais preferencialmente entre 38 e 75 μm, ainda mais preferencialmente entre 25 e 50 μm. Uma faixa de diâmetro mais preferida é de 40 μm ± 10% ou ± 20%, tal como um diâmetro variando entre 32 e 48 μm.

[025] A morfologia das micropartículas pode ser avaliada usando métodos conhecidos na técnica, por exemplo, usando microscopia de luz ou microscopia eletrônica de varredura (Iooss et al., 2001, que é incorporado na presente invenção por referência).

[026] Em uma modalidade, que pode ser combinada com outras modalidades, a invenção provê uma composição reabsorvível in vivo compreendendo um polímero de poli(1,3- trimetileno carbonato) (PTMC) e um carreador em gel reabsorvível, em que o carreador em gel está na forma de um gel de polissacarídeo aquoso e o PTMC está na forma de um polímero líquido.

[027] As micropartículas podem ser produzidas usando métodos conhecidos na técnica, tais como, por exemplo, os métodos divulgados em Iooss et al (2001) e Chen et al (2000). O PTMC pode ser dissolvido em um solvente orgânico, tal como diclorometano (DCM). Após a formação das micropartículas, como por um método de Iooss et al, misturando o PTMC em um solvente orgânico com um líquido aquoso compreendendo um tensoativo, o solvente orgânico pode ser removido por evaporação por extração. PTMC e/ou micropartículas de acordo com a invenção podem ser reticuladas durante ou após a produção usando métodos conhecidos da pessoa habilitada na técnica, como descrito acima na presente invenção.

[028] A composição de acordo com a invenção pode compreender quantidades variáveis de PTMC, de preferência micropartículas, dependendo da aplicação pretendida. Na composição de acordo com a invenção, o PTMC (micropartículas) é/são preferencialmente presente(s) em uma concentração de cerca de 1 a cerca de 40 por cento em volume (v/v). Ainda mais preferencialmente, o PTMC (micropartículas) é/são presente(s) em uma concentração de cerca de 10 a cerca de 30 por cento em volume (v/v) ou 10 a 30 por cento em volume (v/v). Ainda mais preferencialmente, o PTMC (micropartículas) é/são presente(s) em uma concentração de cerca de 10 a cerca de 40 por cento em volume (v/v), cerca de 20 a cerca de 40 por cento em volume (v/v) ou cerca de 30 a cerca de 40 por cento em volume (v/v). Ainda mais preferencialmente, o PTMC (micropartículas) é/são presente(s) em uma concentração de cerca de 30 por cento em volume (v/v).

[029] Na composição de acordo com a invenção, o PTMC (micropartículas) é/são, de preferência, presente(s) em uma concentração de 1 a 40 por cento em volume (v/v). Ainda mais preferencialmente, o PTMC (micropartículas) é/são presente(s) em uma concentração de 10 a 30 por cento em volume (v/v) ou 10 a 30 por cento em volume (v/v). Ainda mais preferencialmente, o PTMC (micropartículas) é/são presente(s) em uma concentração de 10 a 40 por cento em volume (v/v), 20 a 40 por cento em volume (v/v) ou 30 a 40 por cento em volume (v/v). Ainda mais preferencialmente, o PTMC (micropartículas) é/são presente(s) em uma concentração de 30 por cento em volume (v/v).

[030] Na composição de acordo com a invenção, o material carreador em gel está presente em uma concentração de cerca de 0,2 a cerca de 20 por cento em peso (p/p). Mais preferencialmente, o material carreador em gel está presente em uma concentração de 0,2 a 20 por cento em peso. Ainda mais preferencialmente, o material carreador em gel está presente em uma concentração de cerca de 1 a cerca de 5 por cento em peso; ainda mais preferencialmente, o material carreador em gel está presente em uma concentração de 1 a 5 por cento em peso. De preferência, pelo menos cerca de 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,2; 1,4; 1,6; 1,8; 2,0; 2,2; 2,4; 2,6; 2,8; 3,0; 3,1; 3,2; 3,3; 3,4; 3,5; 3,6; 3,7; 3,8; 3,9; 4,0; 4,1; 4,2; 4,3; 4,4; 4,5; 4,6; 4,7; 4,8; 4,9 ou 5 por cento em peso do material carreador em gel está presente e, no máximo, cerca de 20; 19; 18; 17; 16; 15; 14; 13; 12; 11; 10; 9; 8; 7; 6; 5; 4,9; 4,8; 4,7; 4,6; 4,5; 4,4; 4,3; 4,2; 4,1; 4,0; 3,9; 3,8; 3,7; 3,6; 3,5; 3,4; 3,3; 3,2; 3,1; 3,0; 2,8; 2,6; 2,4; 2,2; 2,0; 1,8; 1,6; 1,4; 1,2; 1,0; 0,9; 0,8; 0,7; 0,6; 0,5; 0,4; ou 0,3 por cento em peso está presente. Mais preferencialmente, pelo menos 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,2; 1,4; 1,6; 1,8; 2,0; 2,2; 2,4; 2,6; 2,8; 3,0; 3,1; 3,2; 3,3; 3,4; 3,5; 3,6; 3,7; 3,8; 3,9; 4,0; 4,1; 4,2; 4,3; 4,4; 4,5; 4,6; 4,7; 4,8; 4,9 ou 5 por cento em peso do material carreador em gel está presente e no máximo 20; 19; 18; 17; 16; 15; 14; 13; 12; 11; 10; 9; 8; 7; 6; 5; 4,8; 4,6; 4,4; 4,2; 4,0; 3,8; 3,6; 3,4; 3,2; 3,0; 2,8; 2,6; 2,4; 2,2; 2,0; 1,8; 1,6; 1,4; 1,2; 1,0; 0,9; 0,8; 0,7; 0,6; 0,5; 0,4 ou 0,3 por cento em peso estão presentes. Uma faixa preferida de material carreador em gel é de cerca de 0,2 a cerca de 8 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de cerca de 0,4 a cerca de 7 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de cerca de 0,5 a cerca de 6 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de cerca de 0,6 a cerca de 5 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de cerca de 1 a cerca de 5 por cento em peso. Uma faixa preferida de polissacarídeo reabsorvível do carreador em gel é de 0,2 a 8 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de 0,4 a 7 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de 0,5 a 6 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de 0,6 a 5 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de 1 a 5 por cento em peso. Uma faixa preferida de carreador em gel é de 0,8 a 5 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de 1 a 4 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de 1,8 a 4 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de 2 a 4 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de 3 a 4 por cento em peso, uma faixa mais preferida é de 3,5 a 4 por cento em peso. De preferência, a composição de acordo com a invenção tem uma viscosidade de cerca de 5.000 a cerca de 5.000.000 mPa.s em temperatura ambiente. A viscosidade é, de preferência, medida sob condições atmosféricas e em temperatura ambiente, que é de 20 graus Celsius, e a medição é, de preferência, realizada com um viscosímetro rotacional (por exemplo, Viscosímetro Brookfield DV2T) equipado com um fuso adequado (por exemplo, séries LV ou T-Bar) para gerar um torque adequado (tipicamente 50-75%) quando uma velocidade de rotação de 1 RPM é aplicada.

[031] Na composição de acordo com a invenção, um outro composto pode estar presente, de preferência um composto ativo, de preferência, um anestésico. Anestésicos de exemplo incluem, mas não estão limitados a, lidocaína, novocaína, benzocaína, prilocaína, ripivacaína e propofol. Outros medicamentos que podem ser empregados em uma composição de acordo com a invenção incluem: um peptídeo, um agente de regeneração de tecidos, um antibiótico, um esteroide, fibronectina, uma citocina, um fator de crescimento, um analgésico, um antisséptico, alfa, beta ou gama interferon, eritropoietina, glucagon, calcitonina, heparina, interleucina-1, interleucina-2, filgrastim, cDNA, DNA, RNA, uma proteína, um peptídeo, um hormônio do crescimento humano (HGH), um hormônio luteinizante, fator natriurético atrial, Fator VIII, Fator IX, RNA, um anticorpo, um agente quimioterapêutico, hormônio estimulador de folículos e combinações dos mesmos. O composto adicional também pode ser um excipiente, esse excipiente é de preferência de grau farmacêutico. Um excipiente preferido é o glicerol. O glicerol tornará a composição mais lubrificante. De preferência, o glicerol é presente em uma concentração de cerca de 0,05 a cerca de 5 por cento em peso (p/p). Mais preferencialmente, o glicerol é presente em uma concentração de cerca de 0,1 a cerca de 4 por cento em peso, mais preferencialmente em uma concentração de cerca de 0,2 a cerca de 2 por cento em peso. De preferência, o glicerol é presente em uma concentração de 0,05 a 5 por cento em peso (p/p). Mais preferencialmente, o glicerol é presente em uma concentração de 0,1 a 4 por cento em peso, mais preferencialmente em uma concentração de 0,2 a 2 por cento em peso.

[032] De preferência, todos os compostos da composição de acordo com a invenção são biocompatíveis. De preferência, a composição de acordo com a invenção, que compreende um carreador em gel reabsorvível (de preferência um gel aquoso) e é uma composição aquosa, é tamponada para manter a composição em pH fisiológico, isto é, cerca de pH 7,4. A pessoa habilitada na técnica sabe como tamponar uma solução e selecionará o composto tamponante apropriado. O composto tampão pode ser, mas não está limitado a, um fosfato e/ou citrato.

[033] De preferência, a composição de acordo com a invenção é uma composição farmacêutica, o que significa que todos os compostos e toda a combinação (isto é, a composição) são de grau farmacêutico.

[034] Alternativamente, ou em combinação com o anterior, a composição de acordo com a invenção é uma composição cosmética ou estética. Isto não exclui a composição de grau farmacêutico, mas significa que é (também) adequada para uso cosmético ou estético.

[035] De preferência, a composição de acordo com a invenção é adequada para aumentar o tecido, de preferência tecidos moles, tais como, tecidos conjuntivos, como tendões, ligamentos, fáscia, pele, tecidos fibrosos, gordura e membranas sinoviais, de preferência, um implante ou preenchimento para uso intradérmico, dérmico profundo, subdérmico ou subcutâneo.

[036] A invenção provê adicionalmente o uso médico da composição de acordo com a invenção. Por conseguinte, a invenção provê uma composição de acordo com a invenção para uso como medicamento, de preferência para tratar uma anormalidade ou deformidade da pele, para controlar a função da bexiga (tratamento da deficiência do esfíncter urinário), para controlar o refluxo gástrico (tratamento da deficiência do esfíncter pilórico), para tratamento de disfunção erétil e/ou ejaculação precoce, para tratamento de anormalidades congênitas, para preenchimento de gengivas para tratamento dentário, para tratamento de cordas vocais e/ou para lubrificação de articulações e cartilagens (tratamento de osteoartrite). A invenção provê adicionalmente o uso de uma composição de acordo com a invenção para a preparação de um medicamento para tratar uma anormalidade ou deformidade da pele, para controlar a função da bexiga (tratamento da deficiência do esfíncter urinário), para controlar o refluxo gástrico (tratamento da deficiência do esfíncter pilórico), para tratamento de disfunção erétil e/ou ejaculação precoce, para tratamento de anormalidades congênitas, para preenchimento de gengivas para tratamento dentário, tratamento de cordas vocais e/ou para lubrificação de articulações e cartilagens (tratamento de osteoartrite). A invenção provê adicionalmente o uso de uma composição de acordo com a invenção para o tratamento de uma anormalidade ou deformidade da pele, para controlar a função da bexiga (tratamento da deficiência do esfíncter urinário), para controlar o refluxo gástrico (tratamento da deficiência do esfíncter pilórico), para o tratamento disfunção erétil e/ou disfunção erétil, para tratamento de anomalias congênitas, preenchimento de gengivas para tratamento dentário, tratamento de cordas vocais e/ou lubrificação de articulações e cartilagens (tratamento da osteoartrite). A invenção provê adicionalmente um método de tratamento de uma anormalidade ou deformidade da pele, para controle da função da bexiga (tratamento da deficiência do esfíncter urinário), controle do refluxo gástrico (tratamento da deficiência do esfíncter pilórico), para tratamento da disfunção erétil e/ou ejaculação precoce, para tratamento de anomalias congênitas, preenchimento de gengivas para tratamento dentário, tratamento de cordas vocais e/ou lubrificação de articulações e cartilagens (tratamento de osteoartrite) compreendendo a administração de uma composição de acordo com a invenção a um indivíduo, de preferência um mamífero, de preferência um humano. O uso médico adicional da composição de acordo com a invenção é a substituição, o reforço, a lubrificação e/ou a regeneração da cartilagem.

[037] Em uma modalidade, uma composição de acordo com a invenção é usada como implante ou preenchimento para tratar várias deficiências esfincterianas, tal como incontinência urinária (controle da função da bexiga). A perda do controle da bexiga pode ser causada por estresse causado por movimento físico (tosse, espirro, exercício) e/ou por estímulo ou vazamento de grandes quantidades em instantes inesperados, incluindo sono. Todos os tipos de incontinências podem ser tratados usando uma composição de acordo com a invenção, independentemente da idade do paciente. A continuidade depende de um reservatório compatível e da eficiência do esfíncter que tem dois componentes: (i) o músculo liso involuntário no colo da bexiga; e (ii) o músculo esquelético voluntário do esfíncter externo. Portanto, uma composição de acordo com a invenção pode ser adicionada para localizar a compressão no músculo esfincteriano ou na uretra, reduzindo assim o tamanho do lúmen através de uma ou mais injeções da composição de acordo com a invenção e, assim, reduzir ou eliminar substancialmente ou eliminar a incontinência urinária de esforço. Nestes casos, uma composição de acordo com a invenção pode ser inserida por injeção no tecido uretral ou periuretral. Assim, um procedimento típico envolve a injeção de uma composição de acordo com a invenção com a ajuda de um cistoscópio nos tecidos ao redor do colo da bexiga, criando aumento do volume de tecido e subsequente coaptação do lúmen da uretra. Uma composição de acordo com a invenção adiciona volume e ajuda a fechar a uretra para reduzir a incontinência de esforço. A injeção tipicamente pode ser repetida periodicamente para obter resultados ideais.

[038] Em uma modalidade, uma composição de acordo com a invenção é usada como preenchimento ou como implante para controlar o refluxo gástrico (para tratar uma deficiência do esfíncter pilórico). A doença do refluxo gastroesofágico (DRGE) envolve a regurgitação do ácido gástrico do estômago e outros conteúdos no esôfago ou diafragma. 70% dos episódios de refluxo ocorrem durante relaxamentos espontâneos do esfíncter esofágico inferior ou devido a um relaxamento prolongado após a deglutição. 30% ocorrem durante períodos de baixa pressão do esfíncter. O principal sintoma é azia (30 a 60 minutos após as refeições). Manifestações atípicas da DRGE incluem: asma; tosse crônica; laringite; dor de garganta; e dor no peito não cardíaca relacionada. A DRGE é uma doença ao longo da vida que requer modificações no estilo de vida e intervenção médica. Portanto, uma composição de acordo com a invenção pode ser injetada para adicionar volume e localizar a compressão no esfíncter esofágico inferior. Assim, um procedimento típico envolve a injeção de uma composição de acordo com a invenção com a ajuda de um endoscópio nos tecidos ao redor do esfíncter esofágico inferior, criando aumento do volume de tecido e subsequente coaptação, normalizando a pressão do esfíncter. Uma composição de acordo com a invenção adiciona volume e ajuda a fechar o esfíncter para reduzir o refluxo. A injeção pode ser repetida anualmente para obter melhores resultados. Uma composição de acordo com a invenção pode ser injetada usando anestesia local.

[039] Em uma modalidade, uma composição de acordo com a invenção é usada como preenchimento ou como implante para o tratamento da disfunção erétil (DE) que pode afetar homens de todas as idades. Uma composição de acordo com a invenção pode ser usada para o tratamento de. Um procedimento típico envolve a injeção de uma composição de acordo com a invenção diretamente na fáscia profunda ao longo de todo o comprimento do corpo cavernoso.

[040] Em uma modalidade, uma composição de acordo com a invenção é usada como preenchimento ou como implante para o tratamento de cordas vocais. Uma composição de acordo com a invenção pode ser usada para injeções intracordas do gerador de voz da laringe, alterando a forma dessa massa de tecido mole.

[041] A invenção provê adicionalmente o uso de uma composição de acordo com a invenção em uma aplicação cosmética, de preferência uma aplicação para aumentar o tecido, mais preferencialmente uma aplicação, como implante dérmico ou preenchimento dérmico.

[042] Neste relatório descritivo e em suas reivindicações, o verbo “compreender” e suas conjugações é usado em seu sentido não limitativo para significar que itens após a palavra são incluídos, mas itens não mencionados especificamente não são excluídos. Adicionalmente, a referência a um elemento pelo artigo indefinido “um” ou “uma” não exclui a possibilidade de mais de um elemento estar presente, a menos que o contexto exija claramente que exista um e apenas um dos elementos. O artigo indefinido “um” ou “uma” normalmente significa “pelo menos um”.

[043] A palavra “cerca de” ou “aproximadamente” quando usada em associação com um valor numérico (por exemplo, cerca de 10) significa de preferência que o valor pode ser o valor determinado (de 10) mais ou menos 10% do valor. Todas as referências de patentes e literatura citadas no presente relatório descritivo são aqui incorporadas por referência na sua totalidade.

[044] A presente invenção foi descrita acima com referência a várias modalidades de exemplo. Modificações e implementações alternativas de algumas partes ou elementos são possíveis e estão incluídas no escopo de proteção, como definido nas reivindicações.

[045] A presente invenção é adicionalmente descrita pelos exemplos a seguir que não devem ser interpretados como limitativos do escopo da invenção. Referências Wang et al (2007); Arch Dermatol Vol 143, 155-163; In Vivo Stimulation of De Novo Collagen Production Caused by Cross-linked Hyaluronic Acid Dermal Filler Injections in Photodamaged Human Skin. Gui et al (2010); Tissue Engineering: Parte A, Volume 17, Números 9 e 10, 1191-1200; Development of Novel Biodegradable Polymer Scaffolds for Vascular Tissue Engineering. Mukherjee et al (2010); Journal of Biomedical Materials Research Part B: Applied Biomaterials, 92-102 Effect of 3D-Microstructure of Bioabsorbable PGA:TMC Scaffolds on the Growth of Chondrogenic Cells. Bat et al (2010); Journal of Biomedical Materials Research A | 1 DEC 2010 VOL 95A, ISSUE 3, 940-949. Iooss et al (2001); Biomaterials 22, 2785-2794; A new injectable bone substitute combining polyts-caprolactone) microparticles with biphasic calcium phosphate granules. Chen et al (2000); Polymer degradation and Stability 67, 455-459; Polycaprolactone Microparticles and their Biodegradation. Suvarna KS et al (2018); Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques, 8th ed by Kim S Suvarna, Christopher Layton and John D. Bancroft. Junqueira LC at al (1979); Histochem J 1979, 11(4):447- 55; Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections. Alves A et al (2015); Microsc Res Tech 2015,78(10):900- 7; Computerized histomorphometric study of the splenic collagen polymorphism: A control-tissue for polarization microscopy. Lattouf R et al (2014); J Histochem Cytochem 2014, 62(10):751-758; Picrosirius Red Staining: A Useful Tool to Appraise Collagen Networks in Normal and Pathological Tissues. Whittaker P et al (2005); Braz J Morphol Sci 2005, 22(2):97-104; Collagen and Picrosirius Red Staining: A Polarized Light Assessment of Fibrillar Hue and Spatial Distribution.

Breve Descrição das Figuras

[046] A Figura 1 representa a avaliação histomorfométrica do colágeno; é fornecida uma fotomicrografia representativa da localização da região de interesse padronizada (seção corada com vermelho de Picrosirius).

[047] A Figura 2 representa a porcentagem do conteúdo total de colágeno na área implantada após 4 e 12 semanas de implantação subcutânea em coelhos. A quantificação em 12 semanas não foi realizada para o artigo do teste 1 e o comparador de HA 2 devido a razões técnicas.

[048] A Figura 3 representa fotomicrografias representativas do artigo de Teste após 4 semanas (A) e 12 semanas (B) de implantação subcutânea em coelhos e produto comparador à base de HA após 4 semanas (C) e 12 semanas (D) de implantação subcutânea em coelhos. Vermelho de Picrosirius foi usado para a coloração das seções histológicas. M: músculo cutâneo; T: Artigo de teste; HA: comparador baseado em HA.

[049] A Figura 4 representa a quantificação do índice de remodelação do colágeno na área implantada após 4 e 12 semanas de implantação subcutânea em coelhos. Valores baixos, próximos a 1, de IRC indicam aumento da maturidade e organização e remodelação contínuas das fibras de colágeno tipo III para tipo I.

[050] A Figura 5 representa fotomicrografias representativas da avaliação da maturidade do colágeno após 4 semanas (A) e 12 semanas (B) de implantação subcutânea em coelhos com o artigo de Teste. As seções coradas com vermelho de Picrosirius foram analisadas sob luz polarizada. A cor do colágeno indica aumento da maturidade e espessura da fibra, de verde a vermelho-laranja.

[051] A Figura 6 representa a degradação do artigo de Teste 4 (apenas carreador em gel) - Foi determinada a área total da superfície após 4 e 12 semanas de implantação subcutânea em coelhos.

[052] A Figura 7 representa fotomicrografias representativas do artigo de Teste 4 (carreador em gel) após 4 semanas (A) e 12 semanas (B) de implantação subcutânea em coelhos. Safranina-hematoxilina-eosina foi usado para a coloração das seções histológicas. A degradação completa do carreador em gel é observada após 4 semanas de implantação. M: músculo cutâneo.

Exemplos Exemplo 1 Estimulação da produção de colágeno natural de novo por uma composição de acordo com a invenção

[053] Objetivo: O objetivo deste estudo é avaliar o potencial de um preenchimento dérmico compreendendo microesferas de PTMC representativas de acordo com a invenção para estimular a produção natural de novo de colágeno após a injeção em um modelo animal.

[054] Medida principal do resultado: Análise histológica da síntese de novo de colágeno, por exemplo colágeno tipo I e III.

[055] Materiais: Um preenchimento dérmico de acordo com a invenção (produto de teste), um preenchimento dérmico de HA disponível no mercado, um carreador em gel de acordo com a invenção (controle 1) e solução salina (controle 2).

[056] Animais: O estudo é realizado em um total de três coelhos (Branco da Nova Zelândia). Os materiais de teste, comparador e controle são injetados no mesmo animal.

[057] Sítios de injeção: Injeções subdérmicas são investigadas. As injeções são realizadas nos dois lados da coluna vertebral do modelo animal. Os materiais de teste, comparador e controle são injetados no mesmo animal; duas injeções por material (uma de cada lado), 10 injeções por animal. As injeções são realizadas para criar um bolus de 0,2 mL.

[058] Instantes da avaliação: As avaliações são realizadas nas semanas 4, 12 e 36 após a injeção, nas quais um coelho por instante é sacrificado por injeção intravenosa de pentobarbital de sódio. Cada uma das áreas de injeção é explantada e imediatamente processada para análise histológica.

[059] Coloração e análise histológica: as seções histológicas são coradas com os corantes rotineiros de hematoxilina e eosina (1). A coloração com tricrômico (2) e/ou com vermelho de PicroSirius (3) são realizadas para detecção específica de colágeno.

[060] Resultados: O preenchimento dérmico de acordo com a invenção estimula a produção natural de colágeno significativamente melhor do que o produto comparador e controle. (1): Combinação de manchas de uso geral importante e mais amplamente usada. Pode ser usado após qualquer fixação, exceto fixação com tetróxido de ósmio. A hematoxilina, um produto de corante natural, atua como um corante básico que cora em azul ou preto. A heterocromatina nuclear cora em azul e o citoplasma de células ricas em ribonucleoproteína também coram em azul. O citoplasma de células com quantidades mínimas de ribonucleoproteína tende a ser de cor lavanda. O corante de anilina, eosina, é um corante ácido que cora o(s) citoplasma, músculo e tecidos conjuntivos em vários tons de rosa e laranja. (2): A coloração tricrômica (coloração de tecido conjuntivo) destina-se ao uso na visualização histológica de fibras colágenas do tecido conjuntivo nas seções de tecido. (3): A coloração de Vermelho de PicroSirius destina-se ao uso na visualização histológica das fibras de colágeno I e III, além do músculo nas seções de tecido. A coloração com PSR pode ser vista usando microscopia de luz padrão ou luz polarizada, resultando em birrefringência das fibras de colágeno para distinguir entre o tipo I e o tipo III.

Exemplo 2 Estimulação da produção de colágeno natural de novo por três composições de acordo com a invenção Objetivo

[061] O objetivo deste estudo foi demonstrar o potencial de um preenchimento dérmico de acordo com a invenção, compreendendo microesferas de poli(carbonato de trimetileno) (PTMC) para estimular a produção natural de novo de colágeno quando comparado com produtos à base de ácido hialurônico (HA) disponíveis no mercado, a seguir administração subcutânea das composições por injeção em coelhos.

Materiais e métodos

[062] Preenchimentos dérmicos Os artigos de teste 1-3 foram preparados misturando microesferas de PTMC com um carreador em gel aquoso feito de carboximetilcelulose (CMC) a uma concentração de 3,9% em solução salina tamponada com fosfato pH 7,4, para obter um gel translúcido com uma viscosidade mínima de 50.000 mPa.s. As microesferas de PTMC foram preparadas por um método de extração por solvente, tal como descrito em Iooss et al (2001). Tipicamente, polímeros de PTMC com peso molecular médio numérico de 100.000 g/mol (artigo de Teste 1), 250.000 g/mol (artigo de Teste 2) e 490.000 g/mol (artigo de Teste 3) foram dissolvidos em diclorometano em concentrações de 5,0%, 3,5% e 1,9%, respectivamente. Um total de 100 mL da solução de polímero foi então emulsionado em 1 L de água contendo 3% (p/p) de poli(álcool vinílico) sob agitação mecânica contínua a 750 rpm. Após extração do solvente, as microesferas formadas foram filtradas para coletar partículas com um diâmetro variando entre 20 e 200 μm para irradiação gama a 100 kGy. Após a irradiação, as microesferas de PTMC foram lavadas, misturadas no carreador em gel a uma concentração de 30% (v/v), e o produto resultante enchido em seringas. O artigo de Teste 4 consistia apenas no carreador em gel, isto é, sem as microesferas de PTMC.

[063] Dois preenchimentos dérmicos à base de HA disponíveis no mercado foram usados neste estudo: HA Comparator 1, Juvéderm® Ultra 3 (Allergan Laboratories, EUA) e HA Comparator 2, Restylane® Defyne (Galderma Laboratories, EUA). O Juvéderm® ULTRA 3 é um gel de HA não animal reticulado a uma concentração de 24 mg/mL em tampão fosfato pH 7,2 e 3 mg/mL de cloridrato de lidocaína. Restylane® Defyne contém hialuronato de sódio reticulado não animal na concentração de 20 mg/mL em solução salina tamponada com fosfato a pH 7 e 3 mg/mL de cloridrato de lidocaína.

Projeto de estudo

[064] Dois coelhos, um por instante, cada um recebeu dez injeções subcutâneas de 200 μl dos artigos de teste ou comparador, dois locais por artigo de Teste e um local por produto comparador. Após 4 e 12 semanas de implantação, a avaliação quantitativa do conteúdo total de colágeno (TCC) e do índice de remodelação do colágeno (CRI) foi realizada por análise histomorfométrica. Também foi relatada uma análise histopatológica qualitativa e semiquantitativa dos efeitos dos tecidos locais, incluindo resposta inflamatória nos locais de injeção. Este estudo foi realizado em adaptação à ISO 10993-6, Biological Evaluation of Medical Devices, Part 6 (2016): Tests for Local Effects after Implantation. No final de cada período de observação, o coelho designado foi anestesiado e uma injeção subcutânea de 200 μL de cada artigo foi administrada na pele dorsal do animal para obter uma referência para caracterização histológica e análise de degradação (locais T0). Os animais foram sacrificados por um barbitúrico injetável, e os locais implantados foram excisados (espécimes de aproximadamente 2 x 2 cm, abrangendo a pele e a camada intradérmica), fixados em formalina e embebidos em parafina e processados para histologia. Para todos os artigos e o T0 correspondente, quatro seções centrais foram cortadas com um micrótomo (espessura de 4-7 μm) e coradas com um tricrômico de Masson modificado, safranina-hematoxilina-eosina (SHE), azul alciano e vermelho de picrosirius, respectivamente. SHE e azul alciano proveram informações sobre a organização celular e a estrutura extracelular da matriz. As colorações vermelhas de tricrômio e picrosirius destacam o conteúdo de colágeno com as colorações azul e vermelha, respectivamente (Suvarna KS et al, 2018). As lâminas coradas com vermelho de Picrosirius foram posteriormente analisadas sob luz polarizada para determinar a remodelação do colágeno. Sob luz polarizada, a maturidade do colágeno e a espessura da fibra são indicadas por diferenças de cor: fibras imaturas/finas aparecem verdes/amarelas e fibras maduras/grossas aparecem alaranjadas/vermelhas (Junqueira LC et al, 1979, Alves A et al, 2015).

[065] Para a análise histomorfométrica, uma região de interesse padronizada (ROI) foi definida manualmente no centro do sítio injetado (acima de aproximadamente 10 mm) para abranger o material implantado (figura representativa na Figura 1). Todas as seções foram examinadas usando um microscópio escâner digital de lâminas (AxioScan.Z1, ZEISS, França) e o sistema analisador de imagens CALOPIX versão 3.2.0 (TRIBVN, França).

Resultados Análise histomorfométrica - Avaliação do colágeno

[066] A fase de cicatrização secundária ao implante protético ou à criação de feridas é associada à remodelação do colágeno: fibras de colágeno finas imaturas (tipo III) depositadas durante a fase inicial são progressivamente substituídas por fibras de colágeno grossas maduras (tipo I).

[067] O colágeno é especificamente colorido pela mancha vermelha de picrosirius, que permite a quantificação do conteúdo total de colágeno. Além disso, após a coloração com vermelho de picrosirius e o uso de microscopia de polarização cruzada, as fibras de colágeno são altamente birrefringentes e apresentam tonalidade variável com base na quantidade de colágeno tipo I e III, na espessura e no acondicionamento da fibra, e na organização molecular do colágeno (Junqueira LC et al, 1979). As fibras imaturas finas arranjadas de forma solta aparecem verde, enquanto as fibras maduras mais espessas e densamente compactadas aparecem vermelho-laranjas (Alves A et al, 2015). A razão de fibras verde para laranja avermelhada no nível do tecido de cicatrização pode ser quantificada e é considerada indicativa do processo de remodelação da matriz de colágeno (Lattouf R et al, 2014). Uma seção corada com vermelho de picrosirius de um órgão linfoide (baço de rato), preparada sob as mesmas condições, foi usada como controle positivo para definir o ângulo de polarização com base na rede de colágeno da cápsula esplênica e trabéculas, como descrito em outros locais (Whittaker P et al, 2005).

Teor total de colágeno (TCC)

[068] Seções coradas com vermelho de picrosirius digitalizadas foram examinadas com um microscópio de campo claro para calcular o TCC em 4 e 12 semanas de implantação. Os resultados foram expressados como a porcentagem da área superficial do colágeno medida na ROI selecionada e são resumidos na Figura 2. Fotomicrografias representativas das seções coradas histológicas usadas nesta avaliação são mostradas na Figura 3.

[069] Após 4 semanas de implantação, a porcentagem de colágeno determinada nos sítios do implante já foi aumentada em aproximadamente duas vezes para os artigos de teste 1 a 3, quando comparados aos preenchimentos dérmicos à base de HA. O artigo de Teste 4, apenas o carreador em gel, foi completamente degradado após 4 semanas de implantação, e o conteúdo de colágeno não foi quantificado (Figura 6). Estes resultados indicam que a estimulação para produzir colágeno nativo é, de fato, devido à presença das microesferas de PTMC.

[070] Após 12 semanas, a porcentagem de colágeno total permaneceu maior nos artigos de teste 2 a 3 em comparação aos preenchimentos dérmicos à base de HA implantados. O conteúdo total de colágeno para o produto 1 e o comparador de HA 2 não foi determinado devido a razões técnicas durante a preparação histológica.

Índice de remodelação do colágeno (IRC)

[071] Usando microscopia de polarização cruzada, foram examinadas seções coradas com vermelho de picrosirius digitalizadas dos artigos de teste para determinar a maturidade do colágeno presente na área implantada em 4 e 12 semanas de implantação. Sob luz polarizada, a cor da fibra de colágeno indica aumento da espessura e da maturidade da fibra, de verde para vermelho-laranja. Consequentemente, a razão entre as áreas superficiais verde (imatura, colágeno tipo III) e vermelho-laranja (madura, colágeno tipo I) dentro da ROI selecionada foi calculada e é apresentada como CRI. Os resultados estão resumidos na Figura 4, e fotomicrografias representativas são mostradas na Figura 5.

[072] Após 4 semanas, os valores de IRC dos artigos de teste 1, 2 e 3 foram de 0,86; 1,06 e 0,95; respectivamente, o que indica que fibras com uma birrefringência semelhante foram observadas, isto é, não houve diferença distinta na maturidade do colágeno e na espessura da fibra na área do implante. Após 12 semanas, pelo menos para o artigo de Teste 2, a análise de imagens de luz polarizada mostrou um aumento na quantidade de fibras de colágeno vermelho-laranja, sugerindo que foram iniciadas a remodelação, a organização e a deposição de fibras de colágeno tipo 1 maduras espessas.

Degradação do artigo de Teste 4 (carreador em gel)

[073] No final de cada instante, a quantidade de carreador em gel foi quantificada através da avaliação histomorfométrica da área superficial de uma determinada ROI nas seções de SHE em comparação com os sítios T0 correspondentes.

[074] Os resultados mostraram que após quatro semanas de implantação subcutânea nas costas dos coelhos, o carreador em gel já estava totalmente degradado. Consequentemente, nenhum produto foi detectado após 12 semanas de implantação (Figura 6, fotomicrografias representativas na Figura 7).

Avaliação Histopatológica - Efeitos locais no tecido:

[075] A avaliação histopatológica dos efeitos locais no tecido, incluindo a resposta inflamatória nos sítios de injeção, foi realizada em adaptação ao padrão (ISO 10993- 6) nas seções com SHE e azul alciano.

[076] Tempos após injeção subcutânea no coelho, os artigos de teste 1 a 3 mostraram sinais de degradação leves a moderados sem induzir efeitos colaterais locais. O grau de inflamação local observado nos artigos de teste 1 a 3 (moderado) foi associado à presença das microesferas de polímero, pois o material carreador (artigo de Teste 4), totalmente degradado, gerou apenas uma leve inflamação local residual. Quando comparados aos artigos de teste 1 a 3, os comparadores 1 e 2 provocaram sinais mais baixos de inflamação local.

[077] As observações macroscópicas dos sítios dos implantes não revelaram sinais de edema, eritema ou escara para artigos do dia 0 à semana 12.

Conclusão

[078] Este estudo teve como objetivo investigar o potencial de neocolagênese de microesferas de PTMC colocadas em suspensão em um carreador em gel de CMC em comparação com produtos de preenchimento dérmico à base de HA atualmente comercializados, após administração subcutânea em modelo animal.

[079] Os resultados demonstram que a composição da microesfera PTMC de acordo com a invenção desencadeia uma reação de corpo estranho no tecido local, caracterizada por maior estimulação da síntese de novo e deposição de colágeno nativo quando comparado aos produtos comparadores baseados em HA, resultando em até duas vezes maior quantidade de colágeno sintetizado já 4 semanas após o implante.

[080] Além disso, a razão de colágeno imaturo (tipo III) e colágeno maduro e estável (tipo I) demonstrou mudar ao longo do tempo em favor do colágeno tipo I maduro, indicativo de uma restauração estrutural da rede de matriz extracelular com a reconstituição de moléculas de colágeno em sua estrutura fibrilar nativa.

Claims (15)

1. Composição reabsorvível in vivo caracterizada pelo fato de que compreende um polímero de poli(1,3-trimetileno carbonato) (PTMC) não cristalino e um carreador em gel reabsorvível, em que o carreador em gel está na forma de um gel aquoso de polissacarídeo, em que o PTMC está na forma de micropartículas com um diâmetro variando entre 1 e 200 μm, e em que as micropartículas têm conteúdo e densidade homogêneos ao longo da micropartícula, e são redondas e têm superfícies lisas.

2. Composição reabsorvível in vivo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o carreador em gel compreende a característica viscoelástica de pseudoplasticidade.

3. Composição reabsorvível in vivo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o carreador em gel compreende um polissacarídeo selecionado do grupo que consiste em um polissacarídeo derivado de celulose, um amido, uma quitina, uma quitosana, um ácido hialurônico, um polissacarídeo hidrofobicamente modificado, um alginato, uma carragenano, um ágar, uma agarose, um complexo intramolecular de um polissacarídeo, um oligossacarídeo e um polissacarídeo macrocíclico.

4. Composição reabsorvível in vivo, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o carreador em gel de polissacarídeo compreende um polissacarídeo derivado de celulose, selecionado preferencialmente do grupo que consiste em carboximetilcelulose, carboximetilcelulose sódica, agar metilcelulose, hidroxipropil metilcelulose, etilcelulose, celulose microcristalina e celulose oxidada, mais preferencialmente, o carreador em gel de polissacarídeo reabsorvível compreende carboximetilcelulose sódica.

5. Composição reabsorvível in vivo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o PTMC é um homopolímero, um polímero linear, um polímero ramificado, um copolímero, um terpolímero, uma mistura ou um composto de diferentes tipos de homo/co/ter- polímeros ou um polímero reticulado.

6. Composição reabsorvível in vivo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que o PTMC tem um peso molecular médio (Mn) de 500 a 600.000 g/mol, mais preferencialmente de 100.000 a 600.000 g/mol.

7. Composição reabsorvível in vivo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que o PTMC está presente em uma concentração de 1 a 40 por cento em volume (v/v).

8. Composição reabsorvível in vivo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que o material carreador em gel está presente em uma concentração de 0,2 a 20 por cento em peso (p/p).

9. Composição reabsorvível in vivo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que a composição tem uma viscosidade de 5.000 a 5.000.000 mPa.s em temperatura ambiente.

10. Composição reabsorvível in vivo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que uma substância adicional está presente, de preferência um ingrediente ativo, de preferência um anestésico.

11. Composição reabsorvível in vivo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que a composição é uma composição farmacêutica.

12. Composição reabsorvível in vivo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada pelo fato de que a composição é uma composição cosmética ou estética.

13. Composição reabsorvível in vivo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que a composição é uma composição para aumentar tecido, de preferência tecido mole, de preferência, um implante ou preenchimento para uso intradérmico, dérmico profundo, subdérmico ou subcutâneo.

14. Uso de uma composição reabsorvível in vivo, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de um medicamento para tratar uma anormalidade ou deformidade da pele, para controlar a função da bexiga, para controlar o refluxo gástrico, para tratar a disfunção erétil e/ou ejaculação precoce, para tratamento de cordas vocais e/ou para tratamento de doenças das articulações e cartilagens.

15. Uso de uma composição reabsorvível in vivo, conforme definida na reivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que é para uma aplicação cosmética ou estética, de preferência uma aplicação para aumentar o tecido, mais preferencialmente uma aplicação como implante dérmico ou preenchimento dérmico.